TW201946656A - ｃＭＥＴ單株抗體結合劑的藥物接合物及其用途 - Google Patents

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Abstract

本發明提供一種與吡咯并苯并二氮呯毒素接合之新穎單株cMET結合劑、其組成物、及其於治療癌症之用途。

Description

cMET單株抗體結合劑的藥物接合物及其用途
本發明具體例係有關一種與吡咯并苯并二氮呯毒素接合之cMET結合劑、其組成物及其用途。
蛋白質cMET(有時候稱為MET或肝細胞生長因子受體(HGFR))為在人體中由MET基因編碼之蛋白質(MET原致癌基因，受體酪胺酸激酶)。cMET為具有酪胺酸激酶活性之單次跨膜細胞表面受體(single-pass cell surface receptor)。MET轉譯產物之一級單鏈前體蛋白質在轉譯後裂解產生α與β亞單位，其等藉由二硫鍵連接形成成熟細胞表面cMET受體。cMET表現在上皮起源細胞、及幹細胞、前驅細胞與其他細胞型態(例如，各種不同癌細胞型態)。已判別出肝細胞生長因子/分散因子(Scatter Factor)(HGF/SF)與其剪接同功型(NK1,NK2)為cMET之配體。
cMET被認為是正常胚胎發育、器官形成及傷口癒合所必需。異常之cMET表現與/或活性與某些贅瘤疾病及癌症(例如，腎臟、肝臟、胃、乳房、與腦之癌症)有關，其中cMET涉及腫瘤生長、血管新生、與轉移。cMET之過度表現及被其配體之共表現之其自體分泌活化亦涉及致瘤性。
本文提供與細胞毒性負載藥物接合之新穎抗-cMET結合劑(例如，單株抗體)、其醫藥組成物、及其使用方法。
有些態樣中，本文提供一種結合劑-藥物接合物，其包含結合劑與負載藥物，其中該負載藥物包含吡咯并苯并二氮呯毒素，且該結合劑係與間質-上皮轉化因子(cMET)專一性結合。有些具體例中，負載藥物包含連接基，其中該吡咯并苯并二氮呯毒素係與連接基共價連接，及連接基係與結合劑共價連接。有些具體例中，結合劑為單株抗體或其抗原結合部份。
有些態樣中，本文提供一種結合劑-藥物接合物，其包含結合劑與負載藥物，其中該結合劑包含：(i)CDR-L1、CDR-L2、與CDR-L3之二者或更多者，其等係輕鏈互補決定區(CDR-L)之多肽序列，其中該CDR-L1係選自胺基酸序列SEQ ID NO：1-15；CDR-L2係選自胺基酸序列SEQ ID NO：16-25；與CDR-L3係選自胺基酸序列SEQ ID NO：26-36，及(ii)CDR-H1、CDR-H2、與CDR-H3之二者或更多者，其等係重鏈互補決定區(CDR-H)之多肽序列，其中該CDR-H1係選自胺基酸序列SEQ ID NO：50-61；CDR-H2係選自胺基酸序列SEQ ID NO：62-78；與CDR-H3係選自胺基酸序列SEQ ID NO：79-93；及負載藥物，其包含吡咯并苯并二氮呯毒素與連接基；其中吡咯并苯并二氮呯毒素係與連接基共價連接，該連接基係與結合劑共價連接，該結合劑係與間質-上皮轉化因子(cMET)之胞外域專一性結合。
某些具體例中，吡咯并苯并二氮呯毒素包含化學式I之結構：
Figure TW201946656A_D0001
 其中Z1與Z2二者均為N；Z3與Z4二者均為C；雙虛線
Figure TW201946656A_D0002
代表單鍵或雙鍵；n為1至12；各R3與R4獨立地為H、或C1-4烷氧基；及各R1與R2獨立地選自下列者所成群組：H、C1-5烷基、C3-6環烷基、C2-5烯基、及視需要經R5取代之苯基，其中R5係選自下列者所成群組：-NH2、-NHR6、及經具有以下結構之經R7取代之哌
Figure TW201946656A_D0003
基
Figure TW201946656A_D0004
R6包含連接基，及R7為H、或C1-5烷基；X1為空值、保護基、或包含連接基；X2為空值、保護基、或包含連接基； X1、X2、R1、與R2中僅有一者包含連接基；及各Y1與Y2獨立地為空值、OH、或SO3H；但其條件為：(i)當X1包含連接基時，Z1
Figure TW201946656A_D0005
Z3為N-C，(ii)當X2包含連接基時，Z2
Figure TW201946656A_D0006
Z4為N-C，(iii)當X1包含保護基時，Z1
Figure TW201946656A_D0007
Z3為N-C，及(iv)當X2包含保護基時，Z2
Figure TW201946656A_D0008
Z4為N-C，其中不存在表示該部份體不存在或存在一個或多個氫，以滿足所要求之價數。
化學式I結構之吡咯并苯并二氮呯毒素之有些具體例中，n為3或5。化學式I結構之吡咯并苯并二氮呯毒素之有些具體例中，R3與R4二者均為-O-CH3。化學式I結構之吡咯并苯并二氮呯毒素之某些具體例中，R1與R2二者均為甲基，或R1與R2二者均為-CH=CH-CH3。化學式I結構之吡咯并苯并二氮呯毒素之有些具體例中，R2為環丙基。化學式I結構之吡咯并苯并二氮呯毒素之某些具體例中，R2為經4-甲基哌
Figure TW201946656A_D0009
-1-基取代之苯基或經R5取代之苯基，其中R5為-NHR6，及R6包含連接基。
化學式I結構之吡咯并苯并二氮呯毒素之有些具體例中，X1為空值，Y1為空值，Z1
Figure TW201946656A_D0010
Z3為N=C，X2為空值，Y2為空值，及Z2
Figure TW201946656A_D0011
Z4為N=C。化學式I結構之吡咯并苯并二氮呯毒素之有些具體例中，X1包含連接基，Y1為OH，Z2
Figure TW201946656A_D0012
Z4為N=C，X2為空值，及Y2為空值。化學式I結構之吡咯并苯并二氮呯毒素之某些具體例中，X1包含連接基，Y1為OH，Z2
Figure TW201946656A_D0013
Z4為N-C，X2為保護基，及Y2為OH。
化學式I結構之吡咯并苯并二氮呯毒素之某些具體例中，連接基係藉由胺甲酸根或醯胺基附接至吡咯并苯并二氮呯毒素。
某些具體例中，連接基包含化學式A之結構：
Figure TW201946656A_D0014
 其中星號表示與吡咯并苯并二氮呯毒素之附接點；波浪線表示與結合劑之附接點；m為1至20；q為1至10；及E為連結基。化學式A連接基之某些具體例中，m為4或8，及q為0、1或2。有些具體例中，m為8及q為2。
某些具體例中，連接基包含化學式B之結構：
Figure TW201946656A_D0015
 其中星號表示與吡咯并苯并二氮呯毒素之附接點；波浪線表示與結合劑之附接點；E包含連結基；v為0至10；及u為0或1；其中當u為1時，t為1至10。化學式B連接基之某些具體例中，v為1。化學式B連接基之某些具體例中，u為1，及t為8。化學式B連接基之某些具體例中，u為0，及v為4。
化學式A與B連接基之某些具體例中，結合劑係藉由結合劑之半胱胺酸硫醇殘基與E之間所形成硫醚鍵來連結E。有些具體例中，E包含化學式C結構：
Figure TW201946656A_D0016
 其中波浪線表示與結合劑之附接點，及雙星號表示與連接基之附接點。
化學式I結構之吡咯并苯并二氮呯毒素之有些具體例中，保護基具有下列結構(D)：
Figure TW201946656A_D0017
 其中星號表示與吡咯并苯并二氮呯毒素之附接點；及w為1至5。有些具體例中，w為2。有些具體例中，保護基為可裂解之保護基。
某些態樣中，本文提供一種結合劑-藥物接合物，其包含結合劑與負載藥物，其中該結合劑係與間質-上皮轉化因子(cMET)之胞外域專一性結合，該負載藥物係與結合劑共價連接，且該負載藥物包含選自由化學式II、III、V、VI與VII所成群組之結構，其中化學式II包含如下結構：
Figure TW201946656A_D0018
 其中m為8，波浪線表示與結合劑之附接點； 化學式III包含如下結構：
Figure TW201946656A_D0019
 其中m為8，p為2或3，X2為保護基，波浪線表示與結合劑之附接點；化學式V包含如下結構：
Figure TW201946656A_D0020
其中m為8，波浪線表示與結合劑之附接點；化學式VI包含如下結構：
Figure TW201946656A_D0021
 其中t為8，v為1，波浪線表示與結合劑之附接點；及化學式VII包含如下結構：
Figure TW201946656A_D0022
 其中波浪線表示與結合劑之附接點。
某些具體例中，X2之保護基具有下列結構(D)：
Figure TW201946656A_D0023
 其中星號表示與負載藥物之附接點；及w為1至5。
某些態樣中，本文提供一種結合劑-藥物接合物，其包含單株抗體或其抗原結合部份、與負載藥物，其中該單株抗體或其抗原結合部份包含CDR-L1，其係選自胺基酸序列SEQ ID NO：2、4、6、8、10、12與14；CDR-L2，其係選自胺基酸序列SEQ ID NO：17、19、21、23與25；CDR-L3，其係選自胺基酸序列SEQ ID NO：27、29、31、33與35；CDR-H1，其係選自胺基酸序列SEQ ID NO：51、53、55、57與59；CDR-H2，其係選自胺基酸序列SEQ ID NO：63、65、67、69、73與75；與CDR-H3，其係選自胺基酸序列SEQ ID NO：80、82、84、86、88、91與93。
某些具體例中，本文所說明結合劑-藥物接合物中之結合劑包含CDR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：10或14；CDR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：25；CDR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：35；CDR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：59；CDR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：71；與CDR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：88。
某些具體例中，本文所說明結合劑-藥物接合物中之結合劑包含CDR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：9或15；CDR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：24；CDR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：34；CDR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：58；CDR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：70或78；與CDR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：87。
有些具體例中，結合劑包含可變輕鏈區，其包含選自胺基酸序列SEQ ID NO：37-44之胺基酸序列。有些具體例中，結合劑包含可變輕鏈序列，其與SEQ ID NO：45-49中任一胺基酸序列具有至少90%序列同一性、或100%序列同一性。有些具體例中，結合劑包含可變輕鏈序列，其與SEQ ID NO：37-49中任一者具有至少90%序列同一性，其中該可變輕鏈序列具有1至10個，或1至5個選自胺基酸加成、胺基酸缺失、與胺基酸取代之胺基酸修飾。
有些具體例中，結合劑包含可變重鏈區，其包含選自胺基酸序列SEQ ID NO：94-103之胺基酸序列。有些具體例中，結合劑包含可變重鏈區，其與SEQ ID NO：104-108中任一胺基酸序列具有至少90%序列同一性、或100%序列同一性。有些具體例中，結合劑包含可變重鏈區，其與SEQ ID NO：94-108中任一胺基酸序列具有至少90%序列同一性，其中該可變重鏈序列具有1至10個，或1至5個選自胺基酸加成、胺基酸缺失、與胺基酸取代之胺基酸修飾。
某些具體例中，結合劑包含與SEQ ID NO：37-49中任一者具有至少90%序列同一性之可變輕鏈序列，及與SEQ ID NO：94-108中任一胺基酸序列具有至少90%序列同一性之可變重鏈序列。
某些具體例中，結合劑、單株抗體或其抗原結合部份為嵌合性或人源化。例如，有些具體例中，結合劑包含一或多個人源化或人類框架區與/或一或多個小鼠框架區。
某些具體例中，結合劑、單株抗體或其抗原結合部份包含：重鏈與輕鏈，其分別具有之CDR係與於2019年3月20日寄存於ATCC之融合瘤細胞株F6B1P3D12所產生抗體之重鏈與輕鏈之各CDR相同。
有些具體例中，與cMET或其一部份專一性結合之結合劑包含抗體之抗原結合部份或單鏈抗體。例如，某些具體例中，結合劑-藥物接合物之結合劑包含抗體之Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv或scFV片段。
某些具體例中，結合劑係專一性結合哺乳動物cMET。某些具體例中，結合劑係專一性結合人類cMET、猴子cMET與/或大鼠cMET。有些具體例中，結合劑係專一性結合野生型或變體cMET之胞外域。有些具體例中，專一性結合cMET之結合劑為誘發人類癌細胞之cMET內化及/或降解之結合劑。有些具體例中，專一性結合cMET之結合劑為不為cMET促效劑之結合劑。因此，不為cMET促效劑之cMET結合劑為在與細胞表面cMET結合時不經由細胞表面cMET實質誘發訊號傳導之結合劑。
某些態樣中，本文提供一種醫藥組成物，其包含本文說明之結合劑-藥物接合物與醫藥上可接受之賦形劑、稀釋劑、添加劑或載劑。
某些態樣中，本文提供一種治療患有贅瘤疾病或癌症之個體之方法，該方法包括對患有或疑似患有贅瘤疾病或癌症之個體投與醫療有效量之本文所說明結合劑-藥物接合物。某些具體例中，結合劑-藥物接合物阻斷、抑制、緩解、消除、或壓制癌症之生長、活力、或轉移。某些具體例中，結合劑-藥物接合物誘發有些或所有癌症之死亡、壞死、或細胞凋亡。某些具體例中，贅瘤疾病或癌症包含癌瘤、肉瘤、神經母細胞瘤、膠質母細胞瘤、骨髓瘤、淋巴瘤、黑色素瘤或實體或軟組織腫瘤。某些具體例中，贅瘤疾病或癌症包含膀胱癌、乳癌、結腸直腸癌、胃癌、胰臟癌(例如，外分泌胰臟癌與胰臟神經內分泌癌)、食道癌、肝癌、肝細胞癌、下咽癌、肺癌、腺癌、卵巢癌或腎癌。某些具體例中，贅瘤疾病或癌症包含胰臟腺癌、結腸直腸腺癌、小腸惡性病、膽管癌瘤、非小細胞肺癌(NSCLC)、甲狀腺癌瘤、食道或食道胃接合部(EGJ)癌症、胃腺癌、肝臟肝細胞癌瘤、頭與頸鱗狀細胞癌瘤、女性生殖道惡性病、乳房癌瘤、肺小細胞癌瘤、卵巢上皮癌瘤、腹膜後腔或腹膜腔肉瘤、攝護腺腺癌、神經內分泌腫瘤、胃腸基底腫瘤、膠質母細胞瘤或非上皮卵巢癌。某些具體例中，可藉由本文所說明方法治療之癌症為包含表現cMET多肽(例如，表現在細胞表面之例如，cMET)之細胞(例如，惡性或贅瘤細胞)之癌症。
某些技術態樣進一步說明於下列說明文、實施例、申請專利範圍與圖式中。
圖式說明之技術具體例，沒有限制。為了清楚及方便說明，圖式並未按比例呈現，且有些例子中，不同態樣可能擴大或放大，以方便了解該特定具體例。
第1圖顯示用於產生與cMET專一性結合之單株抗體(例示性結合劑)之操作流程。該先導單株AbP3D12係由接受與人類Fc融合之cMET之重組完整胞外域免疫接種之小鼠產生。
第2圖顯示用於產生與cMET專一性結合之單株抗體(例示性結合劑)之免疫接種流程圖。小鼠起始藉由腹膜內注射(i.p.)含在弗氏完全佐劑(Freund’s Complete Adjuvant)(CFA)中之100μg人類cMET-Fc融合蛋白質(cMET-Fc)、或50至100μg與KLH接合之cMET肽，如指示。cMET-Fc包含與抗體之Fc部份融合之人類cMET之胞外域。cMET肽係依策略性需要選自一部份cMET胞外域。對經過免疫接種的小鼠追加接種一或多劑含在不完全弗氏佐劑(Incomplete Freund’s Adjuvant)(IFA)中之25或50μg cMET-Fc或肽，如指示。有些小鼠在多重部位重複接受免疫接種(RIMMS)。免疫法包括Met-Fc融合物、肽、傳統與RIMMS。取得經過免疫的小鼠的脾臟，與合適融合對象融合。得到超過20,000個融合瘤純系並篩選。
第3圖顯示與促效劑Met-mAb抗體之Fab(5D5Fab)及HGFβ亞單位(HGFβ或HGFb)結合之MET SEMA域之3D結構。底部箭頭表示用於設計肽3之部份cMET之位置。
第4圖顯示例示性融合物之特徵化結果(融合物6B1，第3盤)。選拔一部份抗-cMet融合瘤，藉由ELISA分析與cMET之專一結合性(參見標示「MET結合性ELISA OD450nm」一欄)及藉由流式細胞計測定其誘發人類癌細胞株之cMET內化之能力(參見標示「FACS幾何平均值」一欄)。FACS幾何平均值低於陰性對照組時，表示cMet的內化。箭頭表示先導融合瘤F6B1P3D12。
第5圖顯示MET降解分析法結果。從指定之孔中取得單離之抗-cMet抗體(x-軸)進行試驗，並藉由Mesoscale(MSD)cMet蛋白質定量法測定，依據其誘發人類癌細胞株之cMET降解之能力選拔。Met降解之相對值示於y-軸，以對照組%(對照組之百分比)表示。值低於100對照組%(陰性對照組值)時，表示cMet的內化及降解。降解表示不僅內化，而且出現溶小體轉運，其係抗體藥物接合物之重要性質。箭頭表示先導融合瘤F6B1P3D12之結果。
第6圖顯示藉由間接測定抗-cMET抗體與細胞表面cMET之結合所誘發ERK之磷酸化來測定抗-cMET抗體促效劑活性之磷-ERK分析法(P-ERK分析法)結果。其中顯示使用抗-cMET抗體處理活細胞後，在溶胞物中檢測到之磷酸化ERK量(以對照組之%表示，y-軸)。由各種不同抗-cMET融合瘤產生之抗-cMet抗體(x-軸)係在6ug/ml或30ug/ml測試(如x-軸所示)，並依據其誘發ERK顯著磷酸化之無能力(亦即其不誘發增生之能力，亦即沒有促效劑活性)來選拔。先導單株抗體(mAb)P3D12係以箭頭表示。
第7-1及7-2圖顯示六種cMet單株抗體(mAb)藉由ELISA分析其與人類、猴子(食蟹獼猴(Cynomolgus Macaque)，「Cyno」)、犬、大鼠、及小鼠cMet之結合性結果。所有單株抗體均與人類及猴子cMet結合。P3D12證實與大鼠cMet之顯著交叉反應性。各抗體之各種不同濃度示於x-軸。相對結合量示於y-軸(OD450nm)。第7-1圖提供三種單株抗體之結果。
第7-2圖提供另三種單株抗體之結果。
第8A圖顯示九種小鼠單株抗-cMET抗體之輕鏈可變區之胺基酸序列排比，其名稱分別指示於各序列左邊。SEQ ID NO指示在各序列右邊。LC F6B1P1E2與F6BP3E2之輕鏈可變區之胺基酸序列係100%同一性。此外，LC F6B1P3D12與F6B1P3E9之輕鏈可變區之胺基酸序列亦100%同一性。
第8B圖顯示九種小鼠單株抗-cMET抗體之重鏈可變區之胺基酸序列排比，其名稱分別指示於各序列左邊。SEQ ID NO指示在各序列右邊。F6B1P3D12H7913與F6B1P3E9之重鏈可變區之胺基酸序列係100%同一性。此外，F6B1P1E2H7819與F6BP3E2之重鏈可變區之胺基酸序列亦100%同一性。
第9A與9B圖顯示於活體內異種移植小鼠模式中之結果，其係採用MKN45腫瘤模式(cMet+胃癌模式)，於裸小鼠中分析所指定抗-cMET抗體藥物接合物(ADC)之效力。動物接受2.5mg/kg(9A)或5.0mg/kg(9B)之ADC處理一次。由各個與藥物接合之抗-cMET結合劑之效力與PBS或無關之非靶向性單株抗體(IgG-ADC)比較。在接種後不同時間點(x-軸，(接種後)天數)測定腫瘤體積(y-軸)。腫瘤生長受抑制表示陽性效應。由抗-cMET結合劑與非靶向性對照單株抗體(IgG)接合形成單甲基奥里斯他汀(monomethyl auristatin)F(MMAF)。
第10圖顯示磷-ERK分析法(P-ERK分析法)之結果，其係藉由間接測定抗-cMET抗體與細胞表面之cMET之結合性所誘發之ERK磷酸化，來測定抗-cMET抗體之促效劑活性。其中顯示採用抗-cMET抗體處理活細胞後所檢測溶胞物中之磷酸化ERK量(以對照組之%表示，y-軸)。名稱為P3D12之單離小鼠單株抗體之重鏈與輕鏈之恆定區被人類IgG1(P3D12(hIgG1))或人類IgG2(P3D12(hIgG2))之抗體恆定區置換，如x-軸所指示。各抗體之試驗濃度為0.00064μg/ml、0.0032μg/ml、0.016μg/ml、0.08μg/ml、0.4μg/ml、2μg/ml、10μg/ml與50μg/ml，如x-軸所示。「對照組」表示無處理之陰性對照組。HGF(EC90) 為陽性對照組，表示接受肝細胞生長因子(HGF)(係cMet受體之天然配體)處理之細胞。此數據指示人類IgG2同型沒有展現可檢測之促效劑活性。
第11圖顯示MET降解分析法之結果。所測定之降解係cMET受體與抗體結合時之內化結果。採用Mesoscale(MSD)cMet蛋白質定量法測試嵌合性抗-cMet抗體誘發人類癌細胞株之cMET降解之結果。y-軸指示Met降解之相對值，以對照組%(對照組之百分比)表示。數值低於100對照組%表示cMet已內化及降解。嵌合性抗體係由名稱為P3D12之單離小鼠單株抗體(P3D12(小鼠))之重鏈與輕鏈之恆定區被人類IgG1(P3D12(hIgG1))或人類IgG2(P3D12(hIgG2))之抗體恆定區置換而產生，如x-軸所示。各抗體之試驗濃度為0.00064μg/ml、0.0032μg/ml、0.016μg/ml、0.08μg/ml、0.4μg/ml、2μg/ml、10μg/ml與50μg/ml，如x-軸所示。P3D12之嵌合性cMet抗體顯示類似親代小鼠P3D12抗體之內化/降解活性。
第12圖顯示測試及選拔先導抗-cMET單株結合劑之發展過程流程圖。
第13圖顯示鼠類抗-cMET純系P3D12之人源化型之五個人源化輕鏈可變區之排比，其名稱與SEQ ID NO指示於各序列左邊。由鼠類抗-cMET mAb採用五種獨立方法進行人源化。其中兩種方法產生相同結果，因此顯示4種不同輕鏈。
第14圖顯示顯示鼠類純系P3D12之人源化型之五個人源化重鏈可變區之排比，其名稱與SEQ ID NO指示於各序列左邊。由鼠類抗-cMET mAb採用五種獨立方法進行人源化。其中兩種方法產生相同結果，因此顯示4種不同輕鏈(參見第13圖)與4種不同重鏈，其等可產生16種不同結合劑之組合。
第15圖顯示活體內異種移植小鼠模式之結果，其係採用MKN45腫瘤模式(cMet+胃癌模式)測試所指定人源化抗-cMET抗體藥物接合物(ADC)，證實其在2.5mg/kg(2.5mpk)或5mg飽(5mpk)之效力。動物接受指定之ADC，於2.5或5.0mg/kg處理一次。由各抗-cMET結合劑之效力與PBS或非靶向性單株抗體利妥昔單抗(Rituxima)(Retux)(其為靶向主要出現在免疫系統B細胞表面之CD20之抗癌單株抗體)比較。在接種後不同時間點(x-軸)測定腫瘤體積(y-軸)。腫瘤生長受抑制表示陽性效力。抗-cMET結合劑係與單甲基奥里斯他汀F(MMAF)接合。
第16圖顯示抗-cMET單株結合劑hD12(其具有SEQ ID NO：108與47之重鏈與輕鏈可變區及人類IgG2之恆定區)及不會與cMET結合之陰性對照抗體(登蘇單抗(Denosumab))，其等與cMET-Fc及突變cMET(E168D)Fc重組體融合蛋白質之結合性。E168D突變為出現在小細胞肺癌(SCLC)中之體突變。該突變位在Sema域，造成cMet受體持續性活化。cMet之體突變程度極低。E168D發生在0.8%至3% SCLC患者中。採用與人類IgG1 Fc融合之人類cMET或E168D cMET胞外域進行結合性ELISA。取cMET蛋白質塗佈在盤上一夜，滴定樣本，使用山羊抗-人類IgG(H+L)-HRP檢測。使用反曲線劑量效應擬合法測定EC50。
第17A圖顯示基於ELISA之cMET結合性分析法結果。簡言之，取五種代表性抗體-藥物接合物(亦即hD12-VI、hD12-II、hD12-VII、hD12-IV與hD12-XI(參見實例3說明之抗體命名法))，依漸增濃度(x-軸，抗體-藥物接合物濃度(μg/ml))檢測其與結合在盤上之人類cMET之結合能力。由發光度(y-軸)指示相對結合強度。由不與cMET結合之陰性對照抗體(登蘇單抗)分別接合五種不同負載藥物(亦即化學式VI、II、IV、VII與XI之負載藥物，分別稱為登蘇單抗 -VI、登蘇單抗-II、登蘇單抗-IV、登蘇單抗-VII、與登蘇單抗-XI)，並作為陰性對照組進行試驗。
第17B圖顯示第17A圖所測試各抗體之IC50值。
第18A-18D圖顯示五種代表性抗體-藥物接合物(hD12-VI、hD12-II、hD12-VII、hD12-IV與hD12-XI)對四種在其細胞表面表現不同量cMET之細胞株(SNU-1，不表現cMET(第18A圖)、SNU-16，中度表現cMET(第18B圖)、SNU-620，高表現cMET(第18C圖)與MKN-45，高表現cMET(第18D圖)之細胞毒性分析結果。存活百分比示於y-軸，抗體-藥物接合物之添加量則示於x-軸(pM)。
第18E圖係顯示結果之綜合說明，其顯示比較的IC50值。
第19A-19E圖顯示五種代表性抗體-藥物接合物(hD12-VI、hD12-II、hD12-VII、hD12-IV與hD12-XI)對五種在其細胞表面表現不同量cMET之細胞株(H441，中度表現cMET(第19A圖)、H1373，中度表現cMET(第19B圖)、H1975，中度表現cMET(第19C圖)、SNU-5，高表現cMET(第19D圖)、與H1573，中度表現cMET(第19E圖))之細胞毒性分析結果。第19-1圖提供第19A-19D圖。
第19E圖中，存活百分比示於y-軸，抗體-藥物接合物之添加量則示於x-軸(pM)。第19F圖顯示結果綜合說明，其顯示比較的IC50值。
第20A至20G圖顯示活體內異種移植物試驗結果。小鼠接受注射H1975腫瘤細胞(中度表現cMET)，並接受hD12-XI(第20A 20B與20C圖、)、hD12-VI(第20A、20B與20D圖)、hD12-II(第20A、20B與20E圖)、hD12-VII(第20A、20B與20F圖)、與hD12-IV(第20A、20B與20G圖)處理，隨時間(亦即天數，x-軸)測定腫瘤體積(y-軸，第20A與20C-20G圖)或體重(第20B圖)。測試已 分別接合五種不同負載藥物(亦即VI、II、IV、VII與XI)之陰性對照抗體(登蘇單抗)，作為陰性對照組。
第21A至21E圖顯示活體內異種移植物試驗結果。小鼠接受注射H1373腫瘤細胞(中度表現cMET)，並接受hD12-XI(第21A圖)、hD12-VI(第21B圖)、hD12-II(第21C圖)、hD12-VII(第21D圖)、或hD12-IV(第21E圖)處理，隨時間(亦即天數，x-軸)測定腫瘤體積(y-軸)。測試已與II接合之陰性對照抗體(登蘇單抗)，作為陰性對照組。
第22圖顯示第21圖之處理組小鼠體重(y-軸)隨時間(x-軸)之作圖。
第23圖顯示在小鼠中i.v.注射hD12-XI、hD12-VI、hD12-II、hD12-VII、hD12-IV與登蘇單抗-II後之血清濃度(y-軸)。注射後之時間(小時)示於x-軸。由ELISA測定各抗體-藥物接合物之濃度。
第24圖顯示基於ELISA之cMET結合性分析法之結果，其顯示hD12及已與負載藥物II共價連接之四種hD12變體(hD12-T289C、hD12-V442C與hD12-V282C)對已結合在盤之人類cMET之相對親和性。hD12-II係隨機連接負載藥物之隨機氫硫基。hD12-T289C-II、hD12-V442C-II與hD12-V282C-II則依位點專一性連接在負載藥物之變體半胱胺酸殘基位置(亦即分別為T289C、V442C與V282C)。依漸增濃度(x-軸，抗體-藥物接合物濃度(μg/ml))測試抗體-藥物接合物與已結合在盤之人類cMET之結合能力。由光度(y-軸)指示相對結合強度。測試陰性對照抗體(登蘇單抗-II)作為陰性對照組。第24B圖顯示第24A圖所測試各抗體之IC50值。
第25A至25E圖顯示第24圖之抗體接合物(亦即hD12-II、hD12-T289C-II、hD12-V442C-II與hD12-V282C-II)對四種在其細胞表面表現不同量cMET之細胞株(SNU-1，不表現cMET(第25圖A)、SNU-16，中度表現cMET(第25B圖)、SNU-620，高表現cMET(第25C圖)、MKN-45，高表現cMET(第25D圖)、與N87，低表現cMET(第25E圖))之細胞毒性分析法結果。存活百分比示於y-軸，抗體-藥物接合物之添加量則示於x-軸(pM)。結果綜合說明於第25F圖，其顯示對照IC50值。所測試之抗體-藥物接合物濃度示於第25G圖。
第26A圖顯示第24圖之抗體接合物(亦即hD12-II、hD12-T289C-II、hD12-V442C-II與hD12-V282C-II)對高表現cMET細胞株(亦即SNU-5)之細胞毒性分析法結果。存活百分比示於y-軸，抗體-藥物接合物之添加量則示於x-軸(pM)。結果綜合說明於第26B圖，其顯示對照IC50值。所測試抗體-藥物接合物濃度示於第26C圖。
第27A至27C圖顯示第24圖之抗體接合物(亦即hD12-II、hD12-T289C-II、hD12-V442C-II與hD12-V282C-II)對三種在其細胞表面呈中度表現量cMET之細胞株(H1373，第27A圖；H1573，第27B圖；與H1975，第27C圖)之細胞毒性分析法結果。存活百分比示於y-軸，抗體-藥物接合物之添加量則示於x-軸(pM)。所測試抗體-藥物接合物濃度示於第27D圖。結果綜合說明於第27E圖，其顯示對照IC50值。
第28A至28C圖顯示活體內異種移植物試驗結果。小鼠接受注射H1975腫瘤細胞(中度表現cMET)，並接受指定濃度之hD12-V442C-II(第28A圖)、hD12-T289C-II(第28B圖)與hD12-V282C-II(第28C圖)處理。以接受隨機接 合之hD12-II處理之小鼠作為陽性對照組。以接受媒劑(PBS)或登蘇單抗-II處理之小鼠作為陰性對照組。隨時間(亦即天數，x-軸)測定腫瘤體積(y-軸)。
第29圖顯示第28圖中處理組小鼠之體重(y-軸)隨時間(x-軸)之作圖。
第30圖顯示大鼠接受i.v.注射hD12-V442C-II(第28A圖)、hD12-T289C-II(第28B圖)與hD12-V282C-II(第28C圖)後之血清濃度(y-軸)。注射後之時間(小時)示於x-軸。由ELISA測定各抗體-藥物接合物濃度。
第31圖顯示綜合說明第30圖之實驗所得藥物動力學數據之列表。
第32圖顯示使用人類原發性胃癌組織(第32A圖)、人類原發性結腸直腸癌組織(第32B圖)與人類頭與頸癌症組織(第32C圖)之活體內患者所衍生異種移植物(PDX)試驗結果。腫瘤生長抑制性(TGI%)示於y-軸，抗體接合物(hD12-T289C-II)之投藥濃度示於x-軸。依實例12之說明，計算TGI%。
第33A圖顯示人類cMET蛋白質之胃癌PDX模式GA3121橫切面之免疫組織化學染色。第33B圖顯示第33A圖中白色部份所示區域之放大圖。
第33C圖顯示活體內患者所衍生異種移植物(PDX)模式GA3121之腫瘤生長抑制結果。每個數據點代表1組，由10隻小鼠組成。小鼠係接受媒劑(PBS)或蘇金單抗(sekukinumab)-II處理，作為陰性對照組。隨時間(亦即天數，x-軸)測定腫瘤體積(y-軸)。
有些具體例中，本文提供結合劑-藥物接合物，其包含結合劑(例如，單株抗體或其抗原結合部份)與負載藥物(例如，細胞毒性負載藥物)。有些具 體例中，結合劑為與cMET專一性結合之新穎單株抗體或其抗原結合部份。有些具體例中，負載藥物包含吡咯并苯并二氮呯(PBD)毒素與專一性連接基。本文所提供新穎結合劑-藥物接合物適用於治療癌症與/或贅瘤疾病。
本文所揭示結合劑為新穎者，不僅在其抗原結合區(例如，重鏈與輕鏈可變區)之胺基酸序列，而且亦在其功能特性。例如，本文所說明抗-cMET結合劑具有其他cMET抗體未觀察到之獨特特性組合。首先，本文所說明抗-cMET結合劑不在與cMET受體結合時誘發顯著訊號傳導(例如，受體酪胺酸激酶活性)。因此，當結合時，本文所說明cMET結合劑不在結合時誘發不期望之致癌活性(例如，生長、增生、轉移或血管新生)。第二，本文所說明抗-cMET結合劑可以誘發cMET降解，在結合後內化。此特徵之效益在於任何與抗-cMET結合劑附接之毒性負載藥物均進入靶細胞內部，藉以降低負載藥物之脫靶、非專一性毒性。此特性亦可以調控或調節毒性負載藥物之活性。例如，有些具體例中，本文所說明毒性負載藥物在直到與細胞內蛋白酶接觸之前，實質上未活化。第三，某些本文所說明抗-cMET結合劑與非人類靈長類、大鼠與/或小鼠交叉反應，因此可以利用非人類動物模式測試及優化抗體-藥物接合物。第四，本文所說明抗-cMET結合劑為可溶性，在活體內展現延長的半衰期，且適合儲存。
已知許多種細胞毒性負載藥物可以採用已知連接基附接抗體，以產生抗體-藥物接合物(ADC)(例如，參見US 2014/0120118、US 2014/0127239、US 2016/0250344、US 2016/0250345與Tiberghien等人(2016)ACS Medicinal Chemistry Letters 7(11)：983-987)。然而，抗體結合劑的生化功能性經常在與負載藥物接合後改變。同樣地，負載藥物的生化特性在與抗體接合後，亦總是無法預測。例如，已知負載藥物之活體內活性可能有顯著差異，從致死至無醫療效力， 端賴所使用之連接基型態及抗體附接連接基之位點而定。因此，藉由專一性cMET結合劑與理想之連接基、選定之毒性負載藥物及連接基與抗體之最佳接合位點組合產生抗體-藥物接合物，以提供最佳之毒素傳遞，同時實質上限制不良事件(例如，脫靶毒性)，並維持所需之結合劑之生物功能性質，此點極具挑戰性，耗費時間且需要大量創新努力。本文所提出之ADC係毒素、連接基、與新穎cMET結合劑之獨特組合，其造成高效力ADC，可提供最佳醫療效力，同時維持實質上降低或消除脫靶毒性。
cMET
MET在本文中係術語「cMET」之同義字。cMET亦稱為肝細胞生長因子受體(HGFR)。人類cMET(例如，SEQ ID NO：109)包含1390個胺基酸之不成熟多肽序列且包括胺基酸1-24之N-末端單一序列、約胺基酸24-932之人類cMET之胞外域、約胺基酸933至955之跨膜域、及約胺基酸956至1390之細胞質域，其編號係從N-末端至C-末端。判別cMET受體之先導序列、胞外域、跨膜域、與細胞質域之方法係已知者，且可採用任何合適方法來判別來自合適哺乳動物物種之cMET多肽序列內之此等域或區域。人類cMET多肽可包含數種已知變體(例如，參見URL：http：//www.uniprot.org/uniprot/P08581，已於2016年5月5日啟用，其中揭示之cMET變體與替代序列已以引用之併入本文中)。人類cMET之天然變體之無限制實例包括位在人類cMET(SEQ ID NO：109)之143、150、156、168、238、316、320、375、385、773、970、991、與/或992之胺基酸取代。有些具體例中，cMET或cMET胞外域包含在人類cMET位置168之E成為D 之取代，本文中稱為E168D。有些具體例中，cMET或cMET胞外域包含在人類cMET位置375之N成為S之取代，本文中稱為N375S。
有些具體例中，cMET為哺乳動物cMET。有些具體例中，cMET為靈長類cMET。有些具體例中，cMET為人類cMET。有些具體例中，cMET為猴子cMET。有些具體例中，cMET為囓齒類cMET(例如，大鼠與/或小鼠)。有些具體例中，cMET為犬cMET(例如，狗cMET)。哺乳動物cMET之無限制實例提供於實例5與/或本申請案之序列表中。某些具體例中，cMET之胞外域包含通常表現在完整哺乳動物細胞表面之cMET多肽之N-末端部份。cMET之胞外域可包含衍生自MET轉譯產物之兩個或更多個多肽鏈。某些具體例中，cMET之胞外域可呈缺少細胞質域與/或跨膜域之可溶解與/或非膜結合性型式表現。某些具體例中，cMET之胞外域係呈融合蛋白質表現、單離與/或純化。例如，哺乳動物cMET之胞外域可經過工程處理成包含免疫球蛋白之Fc部份之融合蛋白質(例如，cMET-Fc)型式表現。某些具體例中，cMET與/或cMET之胞外域包含一或多種胺基酸加成、缺失或取代。cMET多肽可與本文所揭示cMET多肽至少80%、至少85%、至少90%或至少95%。某些具體例中，cMET多肽包含cMET蛋白質之一部份(例如，子序列)。有些具體例中，cMET之一部份包含cMET之胞外域、或其一部份。
結合劑
某些具體例中，結合劑包含或其組成為與cMET或其一部份專一性結合之一或多種多肽或一或多種蛋白質。有些具體例中，結合劑包含或其組成為與cMET或其一部份專一性結合之蛋白質。結合劑經常包含至少一個抗原結合部份 (亦即結合部份)。結合劑之抗原結合部份係與抗原專一性結合之部份。某些具體例中，結合劑之結合部份包含或其組成為單一多肽(例如，單鏈抗體)。有些具體例中，結合劑之結合部份包含或其組成為兩個多肽。有些具體例中，結合劑之結合部份包含或其組成為2、3、4個或更多個多肽。有些具體例中，結合劑包含一或多個結構部份(例如，支架、結構多肽、恆定區與/或框架區)。有些具體例中，結合劑或其結合部份係附接基材(例如，聚合物、非有機材料、矽、小珠、與類似物)。
結合劑可包含一個抗原結合部份或多個抗原結合部份。例如，包含一個結合部份之結合劑有時候稱為單價。包含兩個結合部份之結合劑有時候稱為二價。有些具體例中，結合劑包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10個或更多個結合部份。某些具體例中，多價結合劑之所有結合部份係結合相同抗原。某些具體例中，多價結合劑之所有結合部份包含至少90%、至少95%、至少99%或100%同一性之一或多種多肽序列。
某些具體例中，結合劑之兩個或更多個結合部份結合不同抗原。此等結合劑有時候稱為雙專一性或多專一性結合劑(例如，抗體)。因此，某些具體例中，結合劑包含專一性結合cMET或其一部份之第一抗原結合部份，及專一性結合另一種抗原(例如，不為cMET之多肽，或其一部份)之第二抗原結合部份。有些具體例中，與cMET專一性結合之結合劑係共價或非共價附接不與cMET或其一部份專一性結合之另一結合劑。某些具體例中，該與cMET專一性結合之結合劑包含可與另一種抗原專一性結合之第二結合劑。
有些具體例中，結合劑包含抗體、或其一部份(例如，其結合部份)。某些具體例中，結合劑包含或其組成為合適之抗體、或抗體之抗原結合部份。有 些具體例中，結合劑為抗體(例如，單株抗體與/或重組抗體)。可藉由合適方法產生、製作或製造結合劑或抗體。有些具體例中，結合劑為單株。有些具體例中，結合劑為衍生自合適物種之單株抗體。結合劑之某些非限制實例包括單株抗體、嵌合抗體、抗體結合片段(例如，抗體之抗原結合部份)、CDR-接枝抗體、人源化抗體、人類抗體、或其一部份。人類抗體可藉由任何合適方法製得。例如，人類抗體可從轉染色體之動物經過工程化，製得全人類抗體。某些具體例中，結合劑不為多株，不為多株抗體，且術語「結合劑」不指多株抗體。
有些具體例中，結合劑係從合適之物種衍生、製造、取得、單離及/或純化。有些具體例中，結合劑係從例如，兔、山羊、馬、乳牛、大鼠、小鼠、魚、鳥、或羊駝衍生、製造、取得、單離及/或純化。有些具體例中，結合劑係從鳥(例如，雞或鳥蛋)衍生、製造、取得、單離及/或純化。有些具體例中，結合劑係從植物衍生、製造、取得、單離及/或純化(例如，由基因工程化植物產生之重組結合劑)。有些具體例中，結合劑由合適之哺乳動物衍生、製造、取得、單離及/或純化。某些具體例中，合適之哺乳動物為經過基因改造之哺乳動物(例如，轉染色體或基因轉殖哺乳動物)，其經工程化以製造包含人類重鏈與/或人類輕鏈或其一部份之抗體。有些具體例中，結合劑係由原核生物或真核生物細胞製造、取得、單離、或純化(例如，由經基因工程化之細胞製造之重組結合劑)。有些具體例中，結合劑係由病毒製造、取得、單離或純化(例如，由經基因工程化之病毒製造之重組結合劑)。結合劑可由合適之表現系統(其非限制實例包括合適之細菌、噬菌體、昆蟲、病毒、植物或哺乳動物表現系統)表現，從其中單離及/或純化。例如，可將編碼結合劑之核酸引入合適之哺乳動物細胞株中，該細胞株表現及分泌該結合劑至細胞培養基。
某些具體例中，結合劑未見於天然界且非天然發生的。例如，某些具體例中，結合劑係在動物體中人工產生，其係藉由投與包括外來重組抗原、強力之佐劑、與常用之礦物油與/或清潔劑之乳化混合液而產生，藉以針對外來重組抗原(例如，cMET、cMET-Fc)誘發人工免疫反應。
某些具體例中，單株抗體或單株結合劑為結合劑或其結合片段之實質上均質之族群，該族群中各單獨結合劑實質上相同及/或結合相同表位，但不包括在製造單株結合劑期間產生之可能變體。有些具體例中，此等變體通常不存在或可能存在少量。反之，多株抗體製劑通常包括一群針對不同決定基(表位)之不同抗體，單株結合劑族群中各結合劑經常結合抗原之單一決定基。單株結合劑通常不受其他免疫球蛋白污染。可依目的需要添加一或多種不同單株結合劑至組成物中，形成混合物。
修飾詞「單株」不限於需要藉由任何特定方法來製造結合劑。單株結合劑可採用任何合適方法製造。例如，某些具體例中，單株抗體係採用Kohler等人(1975)Nature,256：495說明之融合瘤方法或其變化法製造。有些具體例中，單株結合劑係藉由合適之重組DNA方法製成。例如，單株抗體可藉由美國專利案案號5,225,539與/或Daugherty等人(1991)Nucleic Acids Research 19(9)：2471-2476說明之方法或其變化法製成或改變。單株結合劑可藉由例如，使用合適表現系統(例如，噬菌體展現表現系統)篩選重組集合庫來製成。有些具體例中，單株結合劑係例如，藉由使用Clackson等人(1991)Nature 352：624-628與/或Marks等人(1991)J.Mol Biol,222：581-597說明之技術或其變化法，從結合劑之噬菌體集合庫中單離。
某些具體例中，結合劑包含一或多種結構或主幹部份，有時候稱為支架。結合劑可包含支架，其非限制實例包括衍生自抗體、蛋白質A之Z域、γ-B結晶、泛素、胱抑素(cystatin)、Sac7d、三螺旋卷曲螺旋、脂質運載蛋白(lipocalin)、錨蛋白(ankyrin)重複序列基元、Fyn之SH3域、合適蛋白酶抑制劑之Kunitz域、纖維網蛋白域、核酸聚合物，及類似物之支架、其一部份或其組合。有些具體例中，結合劑不包含支架。某些具體例中，結合劑包含哺乳動物抗體之一或多個結構部份。
某些具體例中，結合劑包含一或多個恆定區(例如，衍生自抗體，例如，哺乳動物抗體之恆定區)。某些具體例中，結合劑包含抗體輕鏈之恆定區與/或抗體重鏈之恆定區。哺乳動物抗體中存在至少兩種免疫球蛋白輕鏈，其等稱為λ與κ。結合劑可包含任何合適之抗體恆定區、或其一或多個部份。有些具體例中，結合劑包含λ輕鏈恆定區或其一部份。有些具體例中，結合劑包含κ輕鏈恆定區或其一部份。有些具體例中，結合劑包含與哺乳動物抗體輕鏈之恆定區或其一部份之多肽序列至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%同一性之多肽。有些具體例中，結合劑包含與人類抗體之抗體輕鏈恆定區之多肽序列至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%同一性之多肽。有些具體例中，結合劑不包括輕鏈恆定區。
某些具體例中，結合劑包含抗體重鏈之恆定區。哺乳動物中，抗體可具有至少五種/類Ig重鏈，稱為IgA、IgD、IgE、IgG、與IgM，其等係由所存在之不同重鏈恆定區、或其一部份(例如，CH1、CL、CH2、CH3域)所決定。結合劑可包括任何合適之重鏈恆定區、或其一部份。有些具體例中，結合劑包含 IgG1、IgG2、IgG3或IgG4之重鏈恆定區、或其一或多個部份。有些具體例中，結合劑包含一或多個IgM、IgD、IgA、或IgE同型之重鏈恆定區、或其一部份。
除非另有說明，否則抗體之恆定區中胺基酸編號係依據EU編號系統，其說明於Edelman,G.M.等人之Proc.Natl.Acad.USA,63,78-85(1969).PMID：5257969。
有些具體例中，結合劑包含與哺乳動物抗體重鏈之恆定區或其一部份之多肽序列至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少99%同一性、或100%同一性之多肽。有些具體例中，結合劑包含與人類抗體之抗體重鏈恆定區之多肽序列至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少99%同一性或100%同一性之多肽。有些具體例中，結合劑包含在恆定區之一或多種加成、缺失與/或修飾。結合劑有時候經過修飾，以改變抗體類型或結合劑之同型。有些具體例中，結合劑包含一或多種加成、缺失與/或修飾(一或多種胺基酸取代、缺失或加成)，來修飾結合劑的一或多種功能，例如，消除、加強或降低血清半衰期、Fc受體結合性、補體結合性(例如，C1q結合)、糖基化、唾液酸化、細胞毒性、抗體依賴性細胞介導之細胞吞噬作用(ADCP)、抗體依賴性細胞毒性(ADCC)、與類似物。有些具體例中，結合劑不包括重鏈恆定區或輕鏈恆定區之一或多個部份。有些具體例中，結合劑不包括重鏈恆定區。
有些具體例中，結合劑包含或其組成為抗體的一或多個可變區、或其一部份。有些具體例中，結合劑包含一或多個輕鏈可變區、或其一部份。有些具體例中，結合劑包含一或多個重鏈可變區、或其一部份。某些具體例中，結合劑包含至少一個輕鏈可變區與至少一個重鏈可變區。輕鏈可變區與重鏈可變區可在相同或不同多肽。某些具體例中，結合劑之抗原結合部份係由一或多個重 鏈可變區組成。某些具體例中，結合劑之抗原結合部份係由一或多個輕鏈可變區組成。某些具體例中，結合劑之抗原結合部份係由一或多個輕鏈可變區與一或多個重鏈可變區組成。
有些具體例中，結合劑包含或其組成為Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv片段、單鏈Fv(scFv)、雙價抗體(Dab)、合成抗體(synbody)、類似物與/或其組合或其一部份。有些具體例中，結合劑為Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv片段、單鏈Fv(scFv)、雙價抗體(Dab)、合成抗體、類似物與/或其組合或其一部份(參見例如，美國專利案案號6,099,842與5,990,296)。有些具體例中，結合劑包括包含一或多個抗原結合部份之單鏈多肽。例如，單鏈結合劑之構築可採用重組分子生物學製程，由重鏈可變區或其抗原結合部份利用連接基(例如，胺基酸、多肽連接基)，與輕鏈可變區或其抗原結合部份連結。此等單鏈結合劑經常對類似親代雙鏈單株結合劑之抗原具有專一性與親和性。結合劑經常包含工程化區，如：CDR-接枝或人源化部份。某些具體例中，結合劑為完整雙鏈免疫球蛋白，其他具體例中，結合劑為Fab單體或Fab二聚體。
編碼結合劑之多肽之核酸或其部份可經過選殖、次選殖、重排或修飾，以藉由合適之選殖程序重組表現，隨後使用合適之表現系統，採用彼等習此相關技藝之人士已知之方法表現(例如，參見Maniatis等人(1982)Molecular Cloning：A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press；Sambrook等人(1989)，Molecular Cloning：A Laboratory Manual，第2版，Cold Spring Harbor Laboratory Press；Sambrook等人(2001)Molecular Cloning：A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.；Ausubel等人，Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley & Sons(1987與年度更新版)； Methods in molecular biology，編輯：Benny K.C.Lo,Springer Science & Business Media,2004；Antibody Engineering,Vol.1,Roland E.Kontermann,Stefan Dübel，第2版，Publisher Springer Science & Business Media,2010；Antibody Phage Display：Methods and Protocols,Biomed Protocols,Vol.178 of Methods in molecular biology，編輯：Philippa M.O’Brien,Robert Aitken,Springer Science & Business Media,2004)。
哺乳動物中，抗體之重鏈可變區與輕鏈可變區分別構成三個CDR(互補決定區)，通稱為CDR1、CDR2與CDR3，其等藉由框架區(例如，FR1、FR2、FR3與FR4)分隔與/或側接。本文所採用術語「CDR」意指經判別為互補決定區之多肽之胺基酸序列。某些具體例中，藉由解析結合劑之結構及/或解析結合劑-抗原接合物之結構，來確認CDR多肽序列之輪廓及判别包含結合劑結合位點之殘基。某些具體例中，其可藉由任何合適方法完成，如X-射線結晶學與/或電腦模型。某些具體例中，可採用各種不同分析方法來判別或估測結合劑或抗體之CDR序列。例如，結合劑、抗體、其結合部份或其可變區之多肽序列中CDR之胺基酸序列與/或位置均可採用合適方法判別，其非限制實例包括Kabat系統(例如，參見Kabat,E.A.等人(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，NIH Publication No.91-3242，及Johnson,G.與Wu,T.T.(2000)Nucleic Acids Research 28(1)：214-8，及/或Chothia Numbering Scheme(例如，Chothia & Lesk,(1987)J.Mol.Biol,196：901-917；Chothia等人(1989)Nature 342：878-883；及Al-Lazikani等人(1997)JMB 273,927-948)。有些具體例中，可採用AbM方法與/或接觸法判別抗體之CDR之胺基酸序列與/或位置。「AbM」係採用建立抗體結構模型之Oxford Molecular Group所製作的全套電腦軟體定義(參見例如， Martin等人(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)86：9268-9272；「AbMTM,A Computer Program for Modeling Variable Regions of Antibodies」,Oxford,UK；Oxford Molecular,Ltd.)。AbM定義係利用已知數據庫與及從頭開始之方法之組合，由一級序列建立抗體之三級結構模型，如彼等由Samudrala等人(1999)Proteins,Structure,Function and Genetics,Suppl,3：194-198及Xia Y，等人(2000)J Mol Biol.300(1)：171-85說明之方法。某些具體例中，接觸定義係依據可取得之複合結晶結構分析(參見例如，MacCallum等人(1996)J.Mol.Biol 5：732-45)。
有些具體例中，結合劑與/或結合劑之抗原結合部份包含至少2個、至少3個、至少4個、至少5個或至少6個CDR。有些具體例中，結合劑包含3至60個CDR(例如，針對具有多重抗原結合部份之結合劑)。有些具體例中，結合劑包含3至12個CDR。有些具體例中，結合劑之抗原結合部份包含1至6個CDR多肽序列。
某些具體例中，結合劑與/或結合劑之抗原結合部份包含輕鏈可變區之一、二、或三個CDR。有些具體例中，結合劑之輕鏈可變區包含一或多個CDR(例如，一、二、三個或更多個CDR)。代表抗體或結合劑之輕鏈可變區中CDR之胺基酸序列稱為CDR-L1、CDR-L2、與CDR-L3，其等係依據輕鏈可變區之胺基末端(N-末端)至羧基末端(C-末端)之方向依序編號(亦即L1、L2與L3)。例如，代表結合劑之輕鏈可變區之多肽中，CDR-L1當存在時，為N-最末端輕鏈CDR；CDR-L3當存在時，為C-最末端輕鏈CDR；及CDR-L2當存在時，則位於結合劑輕鏈可變區或結合部份之(i)CDR-L1與CDR-L3之間，(ii)CDR-L3之N-末端側，或(iii)CDR-L1之C-末端側。術語「CDR-L1」、「CDR-L2」與「CDR-L3」係指經判別或本文揭示為結合劑之互補決定區之多肽之胺基酸序列之一部 份(例如，輕鏈可變區之CDR)。CDR-L1、CDR-L2與CDR-L3之胺基酸序列之非限制實例分別提供於表1-3。本文所說明結合劑之輕鏈可變區或抗原結合部份可包含本文所揭示CDR-L1、CDR-L2、與CDR-L3之任何組合，其中該結合劑保留與cMET或其一部份之專一結合性。某些具體例中，本文所說明結合劑之輕鏈可變區或抗原結合部份所包含之單一輕鏈CDR包含與選自表3之CDR-L3至少70%同一性之胺基酸序列。
某些具體例中，本文所說明結合劑之輕鏈可變區或抗原結合部份包含與選自表3之CDR-L3至少70%同一性之胺基酸序列，及任何其他合適之CDR-L2與/或CDR-L1多肽序列，其中該結合劑保留與cMET或其一部份之專一結合性。某些具體例中，結合劑之輕鏈可變區或抗原結合部份之輕鏈CDR係由CDR-L3與CDR-L2組成，其中該CDR-L3包含與選自表3之CDR-L3至少70%同一性之胺基酸序列，及該CDR-L2包含與選自表2之CDR-L2至少70%同一性之胺基酸序列。某些具體例中，本文所說明結合劑之輕鏈可變區或抗原結合部份包含與選自表3之CDR-L3至少70%同一性之胺基酸序列、及與選自表2之CDR-L2至少70%同一性之胺基酸序列、及任何其他合適之CDR-L1多肽序列，其中該結合劑保留與cMET或其一部份之專一結合性。某些具體例中，本文所說明結合劑之輕鏈可變區或抗原結合部份包含三個輕鏈CDR，其係由與選自表3之CDR-L3至少70%同一性之胺基酸序列、與選自表2之CDR-L2至少70%同一性之胺基酸序列、及與選自表1之CDR-L1至少70%同一性之胺基酸序列組成。某些具體例中，本文所說明結合劑之輕鏈可變區或抗原結合部份包含與選自表3之CDR-L3至少70%同一性之胺基酸序列、與選自表2之CDR-L2至少70% 同一性之胺基酸序列、及與選自表1之CDR-L1至少70%同一性之胺基酸序列，其中該結合劑保留與cMET或其一部份之專一結合性。
有些具體例中，結合劑包含與表1、2或3所列任一CDR序列至少70%、75%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或至少99%同一性之一或多個輕鏈CDR。有些具體例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含與表1所示任一序列具有至少70%、75%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或至少99%同一性之CDR-L1。有些具體例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含如表1所示任一序列之CDR-L1。
表1-10所提及之純系名稱係指純系衍生之96-孔盤之融合物編號(F)、盤編號(P)與孔編號(A1至H12)。因此例如，純系F6AP12F12係來自融合物6A、盤12、孔F12。各純系之融合物編號對應於第2圖所示融合物。
有些具體例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含與表2所示任一序列為至少70%、75%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、 93%、94%、95%、96%、97%、98%、或至少99%同一性之CDR-L2。有些具體例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含表2所示任一序列之CDR-L2。
有些具體例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含與表3所示任一序列為至少70%、75%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或至少99%同一性之CDR-L3。有些具體例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含表3所示任一序列之CDR-L3。
有些具體例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含與表4之胺基酸序列具有至少70%、75%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或至少99%同一性之輕鏈可變區。有些具體例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含表4之輕鏈可變區序列。
有些具體例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含與表5序列具有至少70%、75%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或至少99%同一性之人源化輕鏈可變區。有些具體例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含表5之人源化輕鏈可變區序列。
某些具體例中，結合劑與/或結合劑之抗原結合部份包含一、二、或三個重鏈可變區之CDR。有些具體例中，重鏈可變區包含一或多個CDR(例如，一、二、或三個或更多個CDR)。代表抗體或結合劑之重鏈可變區中CDR之胺基酸序列稱為CDR-H1、CDR-H2、與CDR-H3，其等係依重鏈可變區之胺基末端(N-末端)至羧基末端(C-末端)之方向依序編號(亦即H1、H2與H3)。例如，代表結合劑之重鏈可變區之多肽中，CDR-H1當存在時，為N-最末端CDR；CDR-H3當存在時，為C-最末端CDR；及CDR-H2當存在時，係位於重鏈可變區之(i)CDR-H1與CDR-H3之間，(ii)CDR-H3之N-末端側或(iii)CDR-H之C-末端側。術語「CDR-H1」、「CDR-H2」與「CDR-H3」係指經判別或本文揭示為結合劑之互補決定區之多肽之胺基酸序列之一部份(例如，結合劑之重鏈可變區之CDR)。CDR-H1、CDR-H2與CDR-H3之胺基酸序列之非限制實例分別提供於表6-8。本文所說明結合劑之重鏈可變區或抗原結合部份可包含本文所揭示CDR-H1、CDR-H2、與CDR-H3之任何組合，其中該結合劑保留與cMET或其一部份之專一結合性。某些具體例中，本文所說明結合劑之重鏈可變區或抗原結合部份包含由與選自表8之CDR-H3至少70%同一性之胺基酸序列組成之單一重鏈CDR。某些具體例中，本文所說明結合劑之重鏈可變區或抗原結合部份包含與選自表8之CDR-H3至少70%同一性之胺基酸序列，及任何其他合適之CDR-H2與/或CDR-H1多肽序列，其中該結合劑保留與cMET或其一部份之專一結合性。某些具體例中，結合劑之重鏈可變區或抗原結合部份之重鏈CDR係由CDR-H3與CDR-H2組成，其中該CDR-H3包含與選自表8之CDR-H3至少70%同一性之胺基酸序列，及CDR-H2包含與選自表7之CDR-H2至少70%同一性之胺基酸序列。某些具體例中，本文所說明結合劑之重鏈可變區或抗原結合部份包含與 選自表8之CDR-H3至少70%同一性之胺基酸序列及與選自表7之CDR-H2至少70%同一性之胺基酸序列，及任何其他合適之CDR-H1多肽序列，其中該結合劑保留與cMET或其一部份之專一結合性。某些具體例中，本文所說明結合劑之重鏈可變區或抗原結合部份包含三個重鏈CDR，其係由與選自表8之CDR-H3至少70%同一性之胺基酸序列、與選自表7之CDR-H2至少70%同一性之胺基酸序列、及與選自表6之CDR-H1至少70%同一性之胺基酸序列所組成。某些具體例中，本文所說明結合劑之重鏈可變區或抗原結合部份包含與選自表8之CDR-H3至少70%同一性之胺基酸序列、與選自表7之CDR-H2至少70%同一性之胺基酸序列、及與選自表6之CDR-H1至少70%同一性之胺基酸序列，其中該結合劑保留與cMET或其一部份之專一結合性。
有些具體例中，結合劑包含與表6、7或8之任一CDR具有至少70%、75%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或至少99%同一性之一或多個重鏈CDR。有些具體例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含與表6所示任一序列具有至少70%、75%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或至少99%同一性之CDR-H1。有些具體例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含如表6所示任一序列之CDR-H1。
有些具體例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含與表7所示任一序列為至少70%、75%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或至少99%同一性之CDR-H2。有些具體例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含表7所示任一序列之CDR-H2。
有些具體例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含與表8所示任一序列為至少70%、75%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或至少99%同一性之CDR-H3。有些具體例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含表8所示任一序列之CDR-H3。
有些具體例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含與表9序列具有至少70%、75%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或至少99%同一性之重鏈可變區。有些具體例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含表9之重鏈可變區序列。
有些具體例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含人源化重鏈可變區，其與表10序列具有至少70%、75%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或至少99%同一性。有些具體例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含表10之人源化重鏈可變區序列。
有些具體例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含CDR-L3，其包含與SEQ ID NO：26至36中任一胺基酸序列為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%同一性之胺基酸序列(例如，選自表3之CDR-L3序列)與CDR-H3，其包含與SEQ ID NO：79至93中任一胺基酸序列為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%同一性之胺基酸序列(例如，選自表8之CDR-H3序列)。有些具體例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含CDR-L3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：34或35為至少70%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%同一性之胺基酸序列，及CDR-H3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：87、88、92或93為至少70%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%同一性之胺基酸序列。
有些具體例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含CDR-L3，其包含與SEQ ID NO：26至36中任一胺基酸序列為至少70%、至少90%、或 100%同一性之胺基酸序列(例如，選自表3之CDR-L3序列)；CDR-L2，其包含與SEQ ID NO：16至25中任一胺基酸序列為至少70%、至少90%、或100%同一性之胺基酸序列(例如，選自表2之CDR-L2序列)；CDR-H3，其包含與SEQ ID NO：79至93中任一胺基酸序列為至少70%、至少90%、或100%同一性之胺基酸序列(例如，選自表8之CDR-H3序列)；及CDR-H2，其包含與SEQ ID NO：62至78中任一胺基酸序列為至少70%、至少90%、或100%同一性之胺基酸序列(例如，選自表7之CDR-H2序列)。有些具體例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含CDR-L3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：34或35為至少70%、至少90%、或100%同一性之胺基酸序列；CDR-L2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：24或25為至少70%、至少90%、或100%同一性之胺基酸序列；CDR-H3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：87、88、92或93為至少70%、至少90%、或100%同一性之胺基酸序列；及CDR-H2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：70、71或78為至少70%、至少90%、或100%同一性之.胺基酸序列。
有些具體例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含CDR-L3，其包含與SEQ ID NO：26至36中任一胺基酸序列為至少70%、至少90%、或100%同一性之胺基酸序列(例如，選自表3之CDR-L3序列)；CDR-L2，其包含與SEQ ID NO：16至25中任一胺基酸序列為至少70%、至少90%、或100%同一性之胺基酸序列(例如，選自表2之CDR-L2序列)；CDR-L1，其包含與SEQ ID NO：1至15中任一胺基酸序列為至少70%、至少90%、或100%同一性之胺基酸序列(例如，選自表1之CDR-L1序列)；CDR-H3，其包含與SEQ ID NO：79至93中任一胺基酸序列為至少70%、至少90%、或100%同一性之胺基酸序列(例如，選自表8之CDR-H3序列)；CDR-H2，其包含與SEQ ID NO：62至78 中任一胺基酸序列為至少70%、至少90%、或100%同一性之胺基酸序列(例如，選自表7之CDR-H2序列)；與CDR-H1，其包含與SEQ ID NO：50至61中任一胺基酸序列為至少70%、至少90%、或100%同一性之胺基酸序列(例如，選自表6之CDR-H1序列)。有些具體例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含CDR-L3，其與胺基酸序列SEQ ID NO：34或35為至少70%、至少90%、或100%同一性之胺基酸序列；CDR-L2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：24或25為至少70%、至少90%、或100%同一性之胺基酸序列；CDR-L1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：9、10或15為至少70%、至少90%、或100%同一性之胺基酸序列；CDR-H3，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：87或88為至少70%、至少90%、或100%同一性之胺基酸序列；CDR-H2，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：70、71或78為至少70%、至少90%、或100%同一性之胺基酸序列；與CDR-H1，其包含與胺基酸序列SEQ ID NO：58或59為至少70%、至少90%、或100%同一性之胺基酸序列。
有些具體例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含重鏈可變區，其包含與SEQ ID NO：94至108中任一胺基酸序列為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%同一性之胺基酸序列(例如，選自表9與10之重鏈可變區)；及輕鏈可變區，其包含與SEQ ID NO：37至49中任一胺基酸序列為至少70%、至少75%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%同一性之胺基酸序列(例如，選自表4與5之輕鏈 可變區)。有些具體例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含重鏈可變區，其包含與SEQ ID NO：104至108中任一胺基酸序列為至少90%同一性之胺基酸序列(例如，選自表10之重鏈可變區)；及輕鏈可變區，其包含與SEQ ID NO：45至49中任一胺基酸序列為至少90%同一性之胺基酸序列(例如，選自表5之輕鏈可變區)。
本文所採用縮寫「abb」、「sdr」、「fra」、「ven.」與「cdr」將於下文說明。縮寫「cdr」或「CDR」係指互補決定區。縮寫「abb」係指縮寫之CDR，例如，其說明於Padlan等人(1995)FASEB J9：133-13。有些具體例中，縮寫之CDR為輕鏈中殘基27D-34、50-55、與89-96，及重鏈中殘基31-35B、50-58、與95-101，其等係接枝在適當人類支架。經常保留關鍵之框架殘基。縮寫「sdr」係指「專一性決定殘基」，例如，其說明於Padlan等人(1995)，其等係被認為涉及抗原結合性之殘基。縮寫「fra」係指「科學怪人方法(Frankenstein approach)」，其說明於例如，Wu與Kabat(1992)Mol Immunol 29：1141-1146。縮寫「ven」係指「鑲飾」，其說明於例如，Padlan(1991),Mol Immunol 28：489-498。
術語「同一性百分比」或「相同百分比」係指兩個胺基酸序列之間之序列同一性。以比對之目的排比各序列，由比對位置來決定同一性。當比對之序列中同一個位置被相同胺基酸佔據時，則該等分子在該位置具有同一性。當同一個位置被相同或類似胺基酸殘基(例如，類似立體性與/或電子性)佔據時，則該等分子可稱為在該位置具有同源(相似)性。同源性、相似性、或同一性之百分比係以比對之序列在相同位置有相同或類似胺基酸之數量為函數表示。同源性、相似性、或同一性之百分比係以比對之序列在相同位置有相同或類似胺基酸之數量為函數表示。可採用各種不同排比算法與/或程式，包括FASTA、BLAST、 或ENTREZ。FASTA與BLAST係來自GCG序列分析套裝軟體之一部份(University of Wisconsin,Madison,Wis.)，且可與例如，內定值併用。ENTREZ可透過國家衛生研究院國家醫學圖書館之國家生物技術資訊中心(the National Center for Biotechnology Information,National Library of Medicine,National Institutes of Health,Bethesda,Md.)取得。一項具體例中，兩個序列之間之同一性百分比可採用GCG程式決定，空位權重為1，例如，每個胺基酸空位係視同兩個序列之間之單一胺基酸或核苷酸錯配。
其他排比技術說明於：Methods in Enzymology,vol.266：Computer Methods for Macromolecular Sequence Analysis(1996)，Doolittle編輯，Academic Press,Inc.(Harcourt Brace & Co.,San Diego,Calif.,USA之分部)。有些具體例中，採用容許在序列中出現空位之排比程式來進行序列排比。Smith-Waterman即為其中一種算法，其容許在序列排比中出現空位。參見Meth.Mol.Biol.70：173-187(1997)。此外，可採用使用Needleman與Wunsch排比方法之GAP程式來排比序列。另一種搜尋法係採用在MASPAR電腦運作之MPSRCH軟體。MPSRCH採用Smith-Waterman算法，在大量平行電腦取得序列得分。此方法改良挑出遠親匹配之能力，特別能忍受小空位及核苷酸序列錯誤。可採用由核酸編碼之胺基酸序列來搜尋蛋白質與DNA資料庫。
有些具體例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含選自表4與5輕鏈可變區之一或多個CDR。有些具體例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含選自表9與10重鏈可變區之一或多個CDR。有些具體例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含選自表4與5輕鏈可變區之一或多個CDR及選自表9與10重鏈可變區之一或多個CDR。某些具體例中，結合劑或結合劑之抗原結合 部份包含CDR-L1、CDR-L2、與CDR-L3，其分別選自表4與5之任一輕鏈可變區，及CDR-H1、CDR-H2、與CDR-H3，其分別選自表9與10之任一重鏈可變區。可採用本文說明或習此相關技藝人士已知之任何合適方法，在本文所揭示之重鏈或輕鏈可變區中判別CDR之胺基酸序列(例如，CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2、與CDR-H3)。
某些具體例中，與cMET專一性結合之結合劑包含(i)CDR-L1、CDR-L2與CDR-L3，其等係輕鏈互補決定區(CDR-L)之多肽序列，其中CDR-L1係選自胺基酸序列SEQ ID NO：1-15，CDR-L2係選自胺基酸序列SEQ ID NO：16-25，與CDR-L3係選自胺基酸序列SEQ ID NO：26-36，及(ii)CDR-H1、CDR-H2與CDR-H3，其等係重鏈互補決定區(CDR-H)之多肽序列，其中CDR-H1係選自胺基酸序列SEQ ID NO：50-61，CDR-H2係選自胺基酸序列SEQ ID NO：62-78，與CDR-H3係選自以下胺基酸序列SEQ ID NO：79-93。
有些具體例中，結合劑包含選自表1-10之一或多種合適序列，其中選擇之多肽序列包含0至5、1至5、0至10、1至10、0至15、或1至15個胺基酸修飾，其中胺基酸修飾可為胺基酸加成、胺基酸缺失與/或胺基酸取代。有些具體例中，結合劑包含一或多個選自表4、5、9或10之合適序列，其中該選擇之多肽序列在框架區或恆定區中包含0至5、1至5、0至10、1至10、0至15、或1至15個胺基酸修飾，其中胺基酸修飾可為胺基酸加成、胺基酸缺失與/或胺基酸取代。有些具體例中，胺基酸修飾為保留性胺基酸取代。有些具體例中，本文所揭示結合劑包含一或多種胺基酸類似物、非天然胺基酸或胺基酸衍生物。
某些具體例中，結合劑或結合劑之抗原結合部份包含一或多個框架區(FR)。框架區經常位於CDR之間及/或側接抗體或結合劑之重鏈或輕鏈可變區之CDR序列。哺乳動物中，重鏈可變區經常包含四個框架區，及輕鏈可變區經常包含四個框架區。任何合適方法均可用於判別抗體、抗體之可變區、或結合劑中之一或多個框架區。結合劑可包含合成或天然框架區，其係未經修飾或如下文說明經過修飾(例如，優化)。
有些具體例中，結合劑或其抗原結合部份係嵌合、接枝及/或人源化。嵌合、接枝及/或人源化結合劑經常包含經修飾或或取代之恆定區與/或框架區，同時保留對cMET或其一部份之專一結合性。有些具體例中，結合劑或其抗原結合部份包含衍生自人類抗體之恆定區、框架區、或其一部份。有些具體例中，結合劑或其抗原結合部份包含不出現在天然抗體中之完全合成部份、一或多種胺基酸、或胺基酸之序列。
天然發生之框架區或其一部份可得自任何合適之物種。某些具體例中，結合劑或其抗原結合部份之輕鏈與重鏈可變區之互補決定區(CDR)係接枝在來自相同或另一種物種之框架區內。例如，結合劑之一或多個框架區可衍生自囓齒類物種(例如，小鼠或大鼠)或靈長類物種(例如，人類)。
某些具體例中，結合劑或其抗原結合部份之輕鏈與/或重鏈可變區之CDR可接枝在共有序列人類框架區。某些具體例中，為了建立共有序列人類框架區，來自數種人類重鏈或輕鏈胺基酸序列之框架區可以排比，以判別共有序列。某些具體例中，抗體或結合劑之重鏈或輕鏈框架區被來自不同重鏈或輕鏈可變區之一或多個框架區或其一部份置換。有些具體例中，結合劑或其抗原結合部份包含一或多個人類框架區。某些具體例中，結合劑或其抗原結合部份包含至少 1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個人類框架區。有些具體例中，結合劑或其抗原結合部份包含一或多個小鼠框架區。某些具體例中，結合劑或其抗原結合部份包含至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個小鼠框架區。某些具體例中，結合劑或其抗原結合部份包含一或多個人類框架區與一或多個小鼠框架區。
產生嵌合、人源化與/或優化抗體或結合劑之方法係已知者，例如，藉由修飾、取代或刪除框架區、或其一部份。CDR接枝法之非限制實例說明於例如，美國專利案案號6,180,370；美國專利案案號6,054,297；美國專利案案號5,693,762；美國專利案案號5,859,205；美國專利案案號5,693,761；美國專利案案號5,565,332；美國專利案案號5,585,089；與美國專利案案號5,530,101及Jones等人(1986)Nature 321：522-525；Verhoeyen等人(1988)Science 239：1534-1536；與Winter(1998)FEBS Letts.430：92-94。產生嵌合、接枝及/或人源化結合劑之其他非限制實例包括美國專利案案號5,530,101；美國專利案案號5,707,622；美國專利案案號5,994,524；美國專利案案號6,245,894；Queen等人(1988)PNAS 86：10029-10033；Riechmann等人(1988)Nature 332：323-327；Antibody Engineering：Methods and Protocols,Vol.248 of Methods in molecular biology，編輯Benny K.C.Lo,Springer Science & Business Media,(2004)；及Antibody Engineering,Vol.1,Roland E.Kontermann,Stefan Dübel，第2版，Publisher Springer Science & Business Media,(2010)。有些具體例中，結合劑之人源化法係由其中一或多個框架區或其一部份(例如，一或多個胺基酸)與來自人類抗體之一或多個框架區或其一部份交換。某些具體例中，抗體或結合劑之人源化法或接枝法為由來自供體結合劑(例如，小鼠單株抗體)之一或多個CDR(例如，1、2、3、4、5或所有6個CDR)轉移至接受體結合劑(例如，人類抗體)，同時保留該供體結合劑之結合專一性。某 些具體例中，製作該嵌合、接枝及/或人源化結合劑之方法包括在結合劑之恆定區或框架區製造一或多個胺基酸取代、加成或缺失。某些具體例中，可採用如：「重構」、「高嵌合」或「鑲飾/表面重修」等技術來製造人源化結合劑(例如，參見Vaswami等人(1998)Annals of Allergy,Asthma,& Immunol.81：105；Roguska等人(1996)Prot.Engin.9：895-904；及美國專利案案號6,072,035)。有些態樣中，結合劑採用如上討論之方法或另一種合適方法修飾，以降低免疫原性(例如，參見Gilliland等人(1999)J.Immunol.62(6)：3663-71)。
某些具體例中，結合劑之胺基酸序列經過修飾，以優化針對標靶(例如，cMET)之結合親和性、物種交叉反應性、溶解性與/或功能(例如，促效劑活性、或缺少促效劑活性)。有些具體例中，本文所揭示CDR之明確組合可優化其針對cMET之結合性，及/或優化本文所揭示結合劑之功能或特性。例如，本文所揭示已知特性之輕鏈可變區(例如，SEQ ID NO：48之輕鏈可變區)可使用合適之表現系統，與包含已知特性之重鏈可變區之CDR-H1與CDR-H2之重鏈可變區集合庫(例如，SEQ ID NO：107之重鏈可變區)共同表現，其中該CDR-H3已被例如，可包括一或多個表8之CDR-H3區之CDR-H3序列集合庫置換。可在所得輕鏈/重鏈結合劑中篩選其與cMET之結合與/或特定功能。可採用合適方法判別優化之結合劑及CDR-H3之胺基酸序列。上述篩選方法可用於判別包含CDR之特定組合或特定優化CDR序列(例如，包含胺基酸取代、加成或缺失之CDR序列)之結合劑，其所提供之結合劑具有改良之結合專一性、結合親和性與/或功能。此等篩選及優化結合劑之方法係已知者(例如，參見Portolano等人(1993)Journal of Immunology 150：880-887；與Clarkson等人(1991)Nature 352：624-628)。 此等參考文獻教示利用已知可變輕鏈、已知可變重鏈、或其一部份(例如，其CDR)，藉由篩選互補可變區集合庫，來製造可與專一性抗原結合之抗體之方法。
某些具體例中，結合劑係經過修飾而消除或添加糖基化位點，以優化結合劑之親和性與/或功能(例如，參見Co等人之Mol.Immunol,30：1361-1367(1993))。有些具體例中，結合劑中糖基化位點之數與/或型態已經過修飾或改變。N-連接之糖基化位點之特徵經常在於序列Asn-X-Ser或Asn-X-Thr，其中該稱為X之胺基酸殘基可為除了脯胺酸以外之任何胺基酸殘基。可創造之此序列之胺基酸殘基取代提供一個潛在新位點，供添加N-連接碳水化合物鏈。或者，消除此序列之取代則脫除現有之N-連接碳水化合物鏈。某些具體例中亦提供重排之N-連接碳水化合物鏈，其中消除一或多個N-連接糖基化位點(彼等通常為天然)及創造一或多個新的N-連接位點。有些具體例中，與未經修飾之結合劑比較，結合劑之修飾係刪除一或多個半胱胺酸殘基或以一或多個半胱胺酸殘基取代另一個胺基酸(例如，絲胺酸)。某些具體例中，半胱胺酸變體適用於優化表現、分泌與/或溶解性。
某些具體例中，結合劑係經過修飾，以便包括例如，某些設計或計畫之胺基酸添加、取代、或缺失，以便降低結合劑對蛋白質分解之感受性、降低結合劑對氧化之感受性、延長結合劑之血清半衰期及/或賦予或修飾其他生理化學、藥物動力學或功能性質。
有些具體例中，結合劑係專一性結合至哺乳動物cMET或其一部份。有些具體例中，結合劑係專一性結合至哺乳動物cMET或其一部份之胞外域或細胞外區。某些態樣中，結合劑係專一性結合至由可見於天然界之未改變(未經過遺傳修飾)哺乳動物產生之野生型cMET。某些態樣中，結合劑係專一性 結合至天然發生的cMET變體。某些態樣中，結合劑係專一性結合至包含一或多種胺基酸取代、加成、或缺失之cMET。某些具體例中，結合劑係專一性結合至於人類、非人類靈長類、狗、貓或囓齒類(例如，小鼠或大鼠)之細胞產生及/或表現之cMET。某些具體例中，結合劑係專一性結合至具有SEQ ID NO：109至113中任一胺基酸序列之一或多種cMET多肽或其一部份。某些具體例中，結合劑係專一性結合至人類cMET。某些具體例中，結合劑係專一性結合至人類cMET之胞外域。某些具體例中，結合劑係專一性結合至人類cMET與/或其胞外域，其中該人類cMET包含E168成為D168之取代(亦即cMET之E168D變體)。某些具體例中，結合劑係專一性結合至人類cMET與/或其胞外域，其中該人類cMET包含N375成為S375之取代(亦即人類cMET之N375S變體)。
術語「專一性結合」係指結合劑與目標肽之結合優先於與其他分子或其他肽之結合，其係由例如，合適之活體外分析法測定(例如，Elisa、免疫墨點法、流式細胞計，與類似物)。專一結合性交互作用與非專一結合性交互作用之區分可為約2倍或以上，經常約10倍或以上，及有時候約100倍或以上、1000倍或以上、10,000倍或以上、100,000倍或以上、或1,000,000倍或以上。
有些具體例中，與cMET或其一部份專一性結合之結合劑為以等於或小於100nM、等於或小於50nM、等於或小於25nM、等於或小於10nM、等於或小於5nM、等於或小於1nM、等於或小於900pM、等於或小於800pM、等於或小於750pM、等於或小於700pM、等於或小於600pM、等於或小於500pM、等於或小於400pM、等於或小於300pM、等於或小於200pM、或等於或小於100pM之結合親和性常數(KD)與cMET或其一部份(例如，cMET之胞外域)結合之結合劑。有些具體例中，與cMET或其一部份專一性結合之結合劑為 以等於或小於100nM、等於或小於50nM、等於或小於25nM、等於或小於10nM、等於或小於5nM、等於或小於1nM、等於或小於900pM、等於或小於800pM、等於或小於750pM、等於或小於700pM、等於或小於600pM、等於或小於500pM、等於或小於400pM、等於或小於300pM、等於或小於200pM、或等於或小於100pM之結合親和性常數(KD)與人類cMET或其一部份(例如，人類cMET之胞外域)結合之結合劑。有些具體例中，與cMET或其一部份專一性結合之結合劑為以等於或小於100nM、等於或小於50nM、等於或小於25nM、等於或小於10nM、等於或小於5nM、等於或小於1nM、等於或小於900pM、等於或小於800pM、等於或小於750pM、等於或小於700pM、等於或小於600pM、等於或小於500pM、等於或小於400pM、等於或小於300pM、等於或小於200pM、或等於或小於100pM之結合親和性常數(KD)與衍生自非人類物種(例如，非人類靈長類、或囓齒類；例如，小鼠或大鼠)之cMET或其一部份專一性結合之結合劑。某些具體例中，本文揭示之結合劑係專一性結合至人類cMET或其一部份，及專一性結合至衍生自非人類靈長類之cMET或其一部份。某些具體例中，本文揭示之結合劑係專一性結合至人類cMET或其一部份，及專一性結合至衍生自囓齒類(例如，小鼠或大鼠)之cMET或其一部份。某些具體例中，結合劑(i)專一性結合至人類cMET或其一部份(例如，人類cMET之胞外域)，其KD為10nM或以下、或1nM或以下，及(ii)專一性結合至大鼠或小鼠cMET或其一部份(例如，大鼠或小鼠cMET之胞外域)，其KD為100nM或以下、90nM或以下、80nM或以下、70nM或以下、60nM或以下、50nM或以下、40nM或以下、30nM或以下、20nM或以下或10nM或以下。
某些具體例中，結合劑包含一或多種功能特性。因此，結合劑可依結構性及功能性說明(例如，其作用或其可執行之功用)。本文揭示之結合劑可以專一性結合cMET之細胞外部份，例如，存在於細胞表面上之cMET之細胞外部份。有些具體例中，細胞為表現cMET之人類癌細胞或人類贅瘤細胞。某些具體例中，當本文揭示之結合劑與細胞表面之cMET結合時，誘發cMET內化。cMET結合劑誘發cMET內化及/或降解之能力比缺乏此能力之其他cMET結合劑更具有優勢。在結合後誘發cMET內化及/或降解之cMET結合劑-藥物接合物可以使細胞毒性藥物在細胞內局部傳遞。此外，有些具體例中，結合劑-藥物接合物之組態僅在內化後才從結合劑中釋出PBD毒素，例如，藉由胞溶體酵素裂解位點整合進入連接基。因此，本文說明之結合劑-藥物接合物可以專一性傳遞毒素至表現cMET之癌細胞內部，同時使非專一性細胞毒性在個體之健康細胞中最小化。因此，本文說明之抗-cMET結合劑-藥物接合物提供較高效力(例如，標靶專一性細胞毒性)與較低副作用(例如，較低非專一性細胞毒性)。因此，某些具體例中，結合劑-藥物接合物包含與細胞表面之cMET專一性結合且在結合後誘發cMET內化之結合劑。有些具體例中，結合劑係專一性結合cMET或其一部份，並誘發cMET降解。因此，某些具體例中，結合劑-藥物接合物包含與細胞表面之cMET專一性結合且在結合後誘發cMET內化與/或降解之結合劑。由配體或結合劑之結合而誘發與細胞表面結合之受體之內化與/或降解係一種已知知生物過程，其可採用相關技藝已知之合適分析法檢測、測定、及/或定量。因此，可採用合適之實驗分析法測定結合劑所誘發之cMET內化與/或降解，無需過度實驗。因此有些具體例中，本文說明之結合劑為與細胞表面之cMET或其一部份專一性結合且在結合後誘發cMET內化與/或降解之結合劑。
cMET藉由與其同源配體結合而活化，涉及腫瘤生長、血管新生、與轉移。促效性抗-cMET抗體經常藉由交叉連接cMET受體而擬似配體結合性，誘發cMET活化。因此，與細胞表面cMET結合但不活化cMET受體之結合劑更適合抗癌療法用途。有些具體例中，結合劑-藥物接合物之結合劑與細胞表面之cMET或其一部份專一性結合，且沒有可檢測之誘發或促進之訊號傳導(例如，酪胺酸激酶活性)。有些具體例中，結合劑-藥物接合物之結合劑與細胞表面之cMET或其一部份專一性結合，且沒有實質上活化cMET(例如，酪胺酸激酶活性)。某些具體例中，本文揭示之抗-cMET結合劑沒有可檢測之cMET促效劑活性。某些具體例中，抗-cMET結合劑當與細胞表面之cMET結合時，缺少促效活性，及/或當與細胞表面之cMET結合時，無法誘發或促進可檢測之酪胺酸激酶活性。有些具體例中，抗-cMET結合劑為cMET拮抗劑。某些具體例中，抗-cMET結合劑經由cMET受體來降低、抑制、減少、阻斷或防止訊號傳導及/或降低、抑制、減少、阻斷或防止cMET受體誘發或促進可檢測之酪胺酸激酶活性。有些具體例中，本文揭示之抗-cMET結合劑降低、抑制、減少、防止或阻斷cMET結合至其天然同源配體(例如，肝細胞生長因子、或其同功型)。
有些具體例中，結合劑包含標記物。本文所採用術語「標記物」或「標記」係指納入可檢測之標識物，例如，納入有標記之胺基酸或附接生物素部份體之多肽，其可利用有標記之抗生物素蛋白(例如，包含螢光標識物之鏈黴抗生物素蛋白或可利用光學或染色法檢測之酵素活性)檢測。某些具體例中，標記物或標識物可以附接結合劑，產生醫療劑或診斷劑。結合劑可以共價或非共價附接任何合適之標記物或標識物。習此相關技藝者已知且可使用各種不同標記多肽與醣蛋白之方法。多肽之標記物之非限制實例包括(但不限於)下列：放射性 同位素或放射性核種(例如，3H、14C、15N、35S、90Y、99Tc、125I、131I)、螢光標記物、酵素性標記物(例如，辣根過氧化酶、β-半乳糖苷酶、螢光素酶、鹼性磷酸酶)、化學發光標記物、金屬標記物、發色團、電化學發光標記物、磷光標記物、消光物(例如，螢光團消光物)、螢光共振能量轉移(FRET)對(例如，供體與接受體)、染劑、酵素受質、小分子、質量標籤、量子點、奈米粒子、生物素基團、被第二報導子辨識之預定多肽抗原表位(例如，白胺酸拉鍊成對序列、第二抗體之結合位點、金屬結合域、表位標籤)、其類似物或其組合。
有些具體例中，結合劑包含合適載劑。結合劑可以共價或非共價附接合適載劑。某些具體例中，載劑為可改變或延長結合劑之活體內半衰期，或改變其藥物動力學特性之製劑或分子。載劑之無限制實例包括聚乙二醇、糖原(例如，藉由結合劑之糖基化)、葡聚醣、美國專利案案號6,660,843說明之載劑或媒劑、其類似物或其組合。
負載藥物 PBD毒素
某些具體例中，結合劑-藥物接合物包含本文說明之結合劑(例如，與cMET專一性結合之結合劑)與負載藥物(例如，細胞毒性負載藥物)。結合劑-藥物接合物之負載藥物經常共價連接結合劑。有些具體例中，負載藥物包含吡咯并苯并二氮呯(PBD)毒素。有些具體例中，負載藥物包含連接基或合適之連接基。有些具體例中，負載藥物包含吡咯并苯并二氮呯(PBD)毒素與連接基。某些具體例中，負載藥物包含吡咯并苯并二氮呯(PBD)毒素與連接基，其中吡咯并苯并二氮呯毒素係與連接基共價連接，且該連接基係與本文說明之結合劑共價連接。
PBD毒素及製備PBD毒素之方法之非限制實例說明於下列專利申請公告案：US 2011/0256157、WO/2015/052322、US 2016/0106861、US 2007/0072846、US 2011/0201803、US 2010/0113425、US 2008/0167293、US 2014/0127239、US 2015/0158869、US 2015/0344482、US 2015/0111880、US 2015/0315196、US 2016/0015828、US 2014/0088089、US 2013/0035484、US 2011/0196148、US 2013/0028919、US 2013/0059800、US 2014/0274907、US 2014/0275522、US 2014/0234346、US 2013/0266595、US 2014/0302066、US 2014/0286970、US 2014/0294868、US 2016/0144052、US 2016/0031887、US 2014/0120118、US 2016/0250344、WO/2017/137553、WO/2017/137555與WO/2017/186894，其完整內容已以引用之方式完整併入本文中。
有些具體例中，吡咯并苯并二氮呯毒素包含化學式I之結構：
Figure TW201946656A_D0038
其中Z1與Z2二者均為N；Z3與Z4二者均為C；雙虛線
Figure TW201946656A_D0039
代表單鍵或雙鍵；n為1至12；各R3與R4獨立地為H、或C1-4烷氧基；及各R1與R2獨立地選自下列者所成群組：H、C1-5烷基、C3-6環烷基、C2-5烯基、與視需要經R5取代之苯基，其中R5係選自下列者所成群組：-NH2、-NHR6、與經如下結構之R7取代之哌
Figure TW201946656A_D0040
基，
Figure TW201946656A_D0041
 其中R6包含連接基，及R7為空值、或C1-5烷基；X1為空值、保護基、或包含連接基；X2為空值、保護基、或包含連接基；X1、X2、R1、與R2中僅一者包含連接基；及各Y1與Y2獨立地為空值、OH、或SO3；但其條件為：(i)當X1包含連接基時，Z1
Figure TW201946656A_D0042
Z3為N-C，(ii)當X2包含連接基時，Z2
Figure TW201946656A_D0043
Z4為N-C，(iii)當X1包含保護基時，Z1
Figure TW201946656A_D0044
Z3為N-C，及(iv)當X2包含保護基時，Z2
Figure TW201946656A_D0045
Z4為N-C，某些具體例中，PBD毒素僅包含一個連接基。例如，化學式I中，X1、X2、R1、與R2中僅一者可包含連接基。例如，當X1包含連接基時，X2、R1、與R2不包含連接基。
化學式I之PBD毒素之某些具體例中，n為1-12。化學式I之PBD毒素之某些具體例中，n為1-10、1-9、1-7、1-5、或1-3。化學式I之PBD毒素之某些具體例中，n為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12。有些具體例中，n為1、3或5。有些具體例中，n為3或5。
化學式I之PBD毒素之某些具體例中，R3與R4獨立地為C1-4烷氧基。化學式I之PBD毒素之某些具體例中，R3與R4獨立地選自：-O-CH2CH3或-O-CH3。化學式I之PBD毒素之某些具體例中，R3與R4二者均為-O-CH3。
化學式I之PBD毒素之某些具體例中，R1與R2獨立地選自下列者所成群組：H、C1-5烷基、C3-C6環烷基、與C2-5烯基。R1與R2可相同或相異。有些具體例中，R1與R2獨立地選自：C1-C3烷基與C2-C3烯基。某些具體例中， R1與R2獨立地選自：-CH2CH2CH3與-CH3。某些具體例中，R1與R2二者均為-CH2CH2CH3或-CH3。
化學式I之PBD毒素之某些具體例中，R1與R2獨立地選自：C3-C6環烷基、與視需要經R5取代之苯基，其中R5係選自下列者所成群組：-NH2、-NHR6、及經具有如下結構R7取代之哌
Figure TW201946656A_D0046
基
Figure TW201946656A_D0047
 其中R6包含連接基，及R7為空值、或C1-5烷基。某些具體例中，R1與R2相異且獨立地選自：(i)C3-C6環烷基，與(ii)視需要經R5取代之苯基，其中R5係選自：-NH2與-NHR6，其中R6包含連接基。某些具體例中，R1與R2相異且獨立地選自：(i)C3環烷基，與(ii)經-NH2或-NHR6取代之苯基，其中R6包含連接基。某些具體例中，R1與R2相異且獨立地選自：(i)視需要經R5取代之苯基，其中R5係選自：-NH2與-NHR6，其中R6包含連接基，與(ii)經具有如下結構式R7取代之哌
Figure TW201946656A_D0048
基，其中R7為空值、或C1-C2烷基。某些具體例中，R1與R2相異且獨立地選自：(i)經R5取代之苯基，其中R5為-NH2與-NHR6，其中R6包含連接基，與(ii)經具有如下結構R7取代之哌
Figure TW201946656A_D0049
基
Figure TW201946656A_D0050
 其中R7為-CH3。某些具體例中，R2為經4-甲基哌
Figure TW201946656A_D0051
-1-基取代之苯基。
化學式I之PBD毒素之某些具體例中，X1為空值，Y1為空值，Z1Z3為N=C，X2為空值，Y2為空值，及Z2Z4為N=C。化學式I之PBD毒素之某些具體例中，X1包含連接基，Y1為OH，Z2Z4為N=C，X2為空值，及Y2為空 值。化學式I之PBD毒素之某些具體例中，X1包含連接基，Y1為OH，Z2Z4為N-C，X2為保護基，及Y2為OH。
有些具體例中，PBD毒素包含如下化學式VII之結構：
Figure TW201946656A_D0052
 其中X1包含連接基。
有些具體例中，PBD毒素包含如下化學式VIII之結構：
Figure TW201946656A_D0053
 其中X1包含連接基。
有些具體例中，PBD毒素包含如下化學式IX之結構：
Figure TW201946656A_D0054
 其中R6包含連接基。
有些具體例中，PBD毒素包含如下化學式X之結構：
Figure TW201946656A_D0055
 其中R6包含連接基。
有些具體例中，PBD毒素係利用合適之鍵、部份體或基團附接(例如，共價連接)連接基。有些具體例中，PBD毒素係利用羰基連接體或醯胺連接體附接(例如，共價連接)連接基。有些具體例中，PBD毒素係利用胺甲酸根基團附接(例如，共價連接)連接基。有些具體例中，PBD毒素係利用醯胺基附接(例如，共價連接)連接基。附接PBD毒素與連接基之非限制實例說明於US 2017/0002096、US 2016/0331842、US 2015/0250896、US 2017/0080103、US 2016/0136300、US 2017/0152274、US 2015/0209444、US 2013/0274091、US 2017/0095570、US 2017/0157264、US 2015/0125474、US 2011/0256157、WO/2015/052322、US 2016/0106861、US 2007/0072846、US 2011/0201803、US 2010/0113425、US 2008/0167293、US 2014/0127239、US 2015/0158869、US 2015/0344482、US 2015/0111880、US 2015/0315196、US 2016/0015828、US 2014/0088089、US 2013/0035484、US 2011/0196148、US 2013/0028919、US 2013/0059800、US 2014/0274907、US 2014/0275522、US 2014/0234346、US 2013/0266595、US 2014/0302066、US 2014/0286970、US 2014/0294868、US 2016/0144052、US 2016/0031887、US 2014/0120118、US 2016/0250344、 WO/2017/137553、WO/2017/137555與WO/2017/186894，其完整內容已以引用之方式完整併入本文中。
本文所採用術語「空值」係指所指示之部份體不存在於該結構中，然而所指示之部份體可能被一個或多個氫置換或佔據，以滿足所要求之價數。此外，本文所示之任何結構中，可能存在一個或多個氫，以滿足結構中所示碳、氮、或氧原子所要求之價數。因此，若沒有明確指示時，其中可能存在一個或多個氫原子。
連接基
有些具體例中，負載藥物包含連接基，其部份地促進結合劑與PBD毒素之間之連接。某些具體例中，任何合適之連接基均可用於連接PBD毒素與結合劑。連接基與製造連接基之方法之非限制實例說明於WO/2015/052322、US 2015/0158869、US 2015/0344482、US 2014/0127239、US 2017/0002096、US 2016/0331842、US 2015/0250896、US 2017/0080103、US 2016/0136300、US 2017/0152274、US 2015/0209444、US 2013/0274091、US 2017/0095570、US 2017/0157264與US 2015/0125474，其完整內容已以引用之方式完整併入本文中。有些具體例中，連接基包含C1-C20烷基、C1-C20烯基、C1-C20烷氧基、一或多個胺基酸或胺基酸衍生物、包含1至20個胺基酸之肽、苯基、合適之聚合物(例如，聚乙二醇)、或其組合。
有些具體例中，連接基包含化學式A之結構：
Figure TW201946656A_D0056
 其中星號表示連接基與吡咯并苯并二氮呯毒素之附接點，波浪線表示連接基與結合劑之附接點，m為0至20，q為0至10，及E為連結基。化學式A連接基之有些具體例中，m為1至20、1至10、1至8、1至6、1至4、2至8或4或8。化學式A連接基之有些具體例中，m係選自：1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。化學式A連接基之有些具體例中，q為1至10、1至8、1至6、或1至4。化學式A連接基之有些具體例中，q係選自：0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。化學式A連接基之有些具體例中，q為0、1或2。18。化學式A連接基之有些具體例中，m為8，及q為2。
有些具體例中，連接基包含化學式B之結構：
Figure TW201946656A_D0057
 其中星號表示連接基與吡咯并苯并二氮呯毒素之附接點，波浪線表示連接基與結合劑之附接點，v為0至10，及u為0或1，其中當u為1時，t為1至10，及E為連結基。化學式B連接基之有些具體例中，v為1至10、1至8、1至4、或0至4。21。化學式B連接基之有些具體例中，v係選自：0、1、2、3、4、5、6、7或8。化學式B連接基之有些具體例中，當u為1時，t為1至8、1至5、1至4、或2至5。化學式B連接基之有些具體例中，當u為1時，t係選自：0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。化學式B連接基之有些具體例中，t為8，u為1，及v為2。化學式B連接基之有些具體例中，u為0，及v為4。
化學式A與B之連結基E可包含任何合適之鍵、連接基或部份體，其非限制實例包括二硫鍵、硫醚鍵、硫酯鍵、醯胺鍵、胺、酮、羧酸根醚、胺甲酸酯、酯、硫酯、類似物、或其組合。某些具體例中，E包含連接基與結合劑之間之共價連接體。有些具體例中，E包含共價鍵。有些具體例中，E包含在進行合適之接合反應後保留之反應部份體。相關技藝上已知許多種接合反應，其中任何一種均可用於共價連接本文所揭示之連接基與本文所揭示之結合劑。任何合適之接合化學均可用於讓連接基共價附接在結合劑，不論隨機反應或位點專一性反應，其非限制實例包括以下說明之接合反應：Shan S.Wong(1991年6月18日公開)Chemistry of Protein Conjugation and Cross-Linking,CRC Press；Greg T.Hermanson(2013版權)Bioconjugate Techniques，第3版，Elsevier Inc.；與Thiol-X Chemistries in Polymer and Materials Science,RSC Polymer Chemistry Series No.6(2013)，編輯：Andrew B.Lowe與Christopher N.Bowman,RCS Publishing；WO/2015/052322、US 2015/0158869、US 2015/0344482、US 2014/0127239、US 2017/0002096、US 2016/0331842、US 2015/0250896、US 2017/0080103、US 2016/0136300、US 2017/0152274、US 2015/0209444、US 2013/0274091、US 2017/0095570、US 2017/0157264與US 2015/0125474，其完整內容已以引用之方式完整併入本文中。使負載藥物或連接基與結合劑接合之其他非限制實例包括由胺或胺基與N-羥基琥珀醯亞胺(NHS)酯、琥珀酸琥珀醯亞胺基酯、琥珀醯亞胺基酯琥珀醯胺、丙酸琥珀醯亞胺基酯、碳酸琥珀醯亞胺基酯、氧羰基咪唑、碳酸硝基苯基酯、碳酸三氯苯基酯、三氟乙磺酸酯(tresylate)、馬來酸酐、甲基馬來酸酐、亞胺基酯、五氟苯基(PFP)酯、羥甲基膦、環氧乙烷或任何其他羰基部份體反應；由羧基部份體與碳化二亞胺反應；由氫硫基部份體與馬來醯亞胺、鹵乙醯 基、吡啶基二硫醚、鄰二硫吡啶及/或乙烯基碸反應；由醛部份體與肼或醯肼反應；由任何非選擇性基團與二氮雜環丙烯及/或芳基疊氮化物反應；由羥基部份體與異氰酸酯反應；由羥基胺部份體與羰基部份體反應；及其類似物與組合。
因此，E經常由用於接合連接基與結合劑之化學來定義。有些具體例中，E包含其組態在於附接至連接基與結合劑之合適部份體。有些具體例中，連接基係利用合適之氫硫基-氫硫基反應共價連接結合劑，例如，利用馬來醯亞胺或吡啶基二硫醇反應基，與還原之半胱胺酸反應，形成安定之硫醚鍵。反應性氫硫基反應性部份體之其他非限制實例包括鹵乙醯基、氮雜環丙烷、丙烯醯基化合物、芳基化劑、乙烯基碸、二硫吡啶、與TNB-硫醇。某些具體例中，結合劑係利用結合劑之半胱胺酸硫醇殘基(例如，硫醇)與E之間形成之硫醚鍵與E連結。因此，某些具體例中，E包含二硫鍵或硫醚鍵。有些具體例中，例如，若採用馬來醯亞胺反應來共價連接結合劑與連接基時，則E包含化學式C之結構：
Figure TW201946656A_D0058
 其中波浪線表示與結合劑之附接點，及雙星號(**)表示與連接基之附接點。某些具體例中，化學式C之雙星號代表硫醚鍵。
負載藥物、連接基或連結基可以隨機或依位點專一性，與結合劑之任何合適胺基酸接合。有些具體例中，負載藥物、連接基或連結基係接合結合劑之一或多個合適之半胱胺酸。有些具體例中，負載藥物、連接基或連結基係接合結合劑之一或多個合適之離胺酸殘基。某些具體例中，結合劑之一或多個胺基酸係經適合與負載藥物、連接基或連結基接合之胺基酸取代。可被包含硫醇之胺 基酸殘基或離胺酸殘基取代之胺基酸之非限制實例包括IgG2之A118、S119、S239、V282、T289、N361、與V422；IgG1之S115、S252、V289、T306、與N384；或IgG1、IgG2、IgG3或IgG4中之對應位置。採取致突變法將半胱胺酸引入抗體中，可以讓負載藥物、連接基或連結基直接接合在抗體的特定位點，例如，利用二硫鍵或硫醚鍵。例如，結合劑之一或多個胺基酸可被半胱胺酸取代，其中半胱胺酸可採用合適之化學反應，用於依位點專一性接合負載藥物、連接基或連結基。抗體恆定區之任何合適胺基酸均可突變成半胱胺酸或離胺酸，以供依位點專一性接合負載藥物、連接基或連結基。可採用相關技藝已知之方法分析由位點專一性接合法產生之抗體-藥物接合物之安定性。
有些具體例中，連接基包含合適之酵素裂解位點。某些具體例中，酵素裂解位點包含哺乳動物蛋白酶之酵素辨識位點。因此，有些具體例中，連接基或其一部份可被哺乳動物蛋白酶裂解。連接基可被存在或接近標靶位點(例如，存在或接近cMET蛋白質)之酵素裂解。存在或接近標靶位點之酵素可在細胞內、與膜結合、與膜相聯或在細胞外(例如，分泌)。例如，連接基之組態可以被細胞表面蛋白酶、分泌蛋白酶、或細胞內蛋白酶(例如，胞溶體蛋白酶)裂解。酵素裂解位點之非限制實例包括胞溶體半胱胺酸蛋白酶與/或胞溶體天冬胺酸蛋白酶之蛋白酶辨識位點。胞溶體蛋白酶之非限制實例包括細胞自溶酵素(cathepsin)B、C、H、I、J、K、L、M、N、O、P、S、T與X；及細胞自溶酵素D、E、F、G；及/或細胞自溶酵素A(羧基肽酶A)。
保護基
有些具體例中，PBD毒素包含合適之保護基。保護基及製造保護基之方法之無限制實例說明於下列專利申請公告案：US 2011/0256157、WO/2015/052322、US2011/0201803、US2008/0167293、US2014/0127239、US2015/0158869、US2015/0344482、US2015/0315196、US2015/0315196、US2014/0302066、US2006/0264622與US2015/0133435，其完整內容已以引用之方式完整併入本文中。
有些具體例中，保護基包含如下化學式D之結構：
Figure TW201946656A_D0059
 其中星號表示與吡咯并苯并二氮呯毒素之附接點；及w為0至10。有些具體例中，w為0至8、0至6、0至4、1至10、1至8、1至5、或1至4。某些具體例中，w係選自0、1、2、3、4、5、6、7、8、9與10。有些具體例中，w為2。
有些具體例中，保護基可以移除。某些具體例中，保護基可採用合適之化學法裂解。
有些具體例中，負載藥物包含化學式II之結構：
Figure TW201946656A_D0060
 其中m為8，波浪線表示與結合劑之附接點。
有些具體例中，負載藥物包含化學式III之結構：
Figure TW201946656A_D0061
 其中m為8，p為1或3，X2為空值，或為保護基，波浪線表示與結合劑之附接點。某些具體例中，負載藥物包含化學式IV之結構：
Figure TW201946656A_D0062
 其中波浪線表示與結合劑之附接點。
有些具體例中，負載藥物包含化學式V'之結構：
Figure TW201946656A_D0063
 其中m為8，E為合適之連結基，波浪線表示與結合劑之附接點。有些具體例中，E包含結構C之琥珀醯胺部份體：
Figure TW201946656A_D0064
 其中波浪線表示與結合劑之附接點，及雙星號表示與化學式V負載藥物之附接點。包含結構C連結基之化學式V負載藥物在本文中有時候稱為化學式XI。
有些具體例中，負載藥物包含化學式VI之結構：
Figure TW201946656A_D0065
 其中t為8，v為1，波浪線表示與結合劑之附接點。
有些具體例中，負載藥物包含化學式VII之結構：
Figure TW201946656A_D0066
 其中波浪線表示與結合劑之附接點。
有些具體例中，結合劑-藥物接合物包含負載藥物，其包含選自化學式II、III、IV、V、VI、VII與XI之結構式；與結合劑，其包含CDR-L1(其係選自胺基酸序列SEQ ID NO：2、4、6、8、10、12與14)、CDR-L2(其係選自胺基酸序列SEQ ID NO：17、19、21、23與25)、CDR-L3(其係選自胺基酸序列SEQ ID NO：27、29、31、33與35)、CDR-H1(其係選自胺基酸序列SEQ ID NO：51、53、55、57與59)、CDR-H2(其係選自胺基酸序列SEQ ID NO：63、65、67、69、71、73與75)、與CDR-H3(其係選自胺基酸序列SEQ ID NO：80、82、84、86、88、91與93)。
有些具體例中，結合劑-藥物接合物包含負載藥物，其包含選自化學式II、III、IV、V、VI、VII與XI之結構式；與結合劑，其包含CDR-L1(其包含胺基酸序列SEQ ID NO：10或14)、CDR-L2(其包含胺基酸序列SEQ ID NO：21)、CDR-L3(其包含胺基酸序列SEQ ID NO：35)、CDR-H1(其包含胺基酸序列SEQ ID NO：59)、CDR-H2(其包含胺基酸序列SEQ ID NO：71)、與CDR-H3(其包含胺基酸序列SEQ ID NO：88)。
有些具體例中，結合劑-藥物接合物包含負載藥物，其包含選自化學式II、III、IV、V、VI、VII與XI之結構式；與結合劑，其包含CDR-L1(其包含胺基酸序列SEQ ID NO：9)、CDR-L2(其包含胺基酸序列SEQ ID NO：24)、CDR-L3(其包含胺基酸序列SEQ ID NO：34)、CDR-H1(其包含胺基酸序列SEQ ID NO：58)、CDR-H2(其包含胺基酸序列SEQ ID NO：70)、與CDR-H3(其包含胺基酸序列SEQ ID NO：87)。
有些具體例中，結合劑-藥物接合物包含負載藥物，其包含選自化學式II、III、IV、V、VI、VII與XI之結構式；與結合劑，其包含與選自胺基酸序列SEQ ID NO：37-44之胺基酸序列具有至少90%序列同一性之可變輕鏈區，及與選自胺基酸序列SEQ ID NO：94-103之胺基酸序列具有至少90%序列同一性之可變重鏈區。
有些具體例中，結合劑-藥物接合物包含負載藥物，其包含選自化學式II、III、IV、V、VI、VII與XI之結構式；與結合劑，其包含具有選自胺基酸序列SEQ ID NO：37-44之胺基酸序列之可變輕鏈區，及具有選自胺基酸序列SEQ ID NO：94-103之胺基酸序列之可變重鏈區。
有些具體例中，結合劑-藥物接合物包含負載藥物，其包含選自化學式II、III、IV、V、VI、VII與XI之結構式；與結合劑，其包含與選自胺基酸序列SEQ ID NO：45-49之胺基酸序列具有至少90%序列同一性之可變輕鏈區，及與選自胺基酸序列SEQ ID NO：104-108之胺基酸序列具有至少90%序列同一性之可變重鏈區。
有些具體例中，結合劑-藥物接合物包含負載藥物，其包含選自化學式II、III、IV、V、VI、VII與XI之結構式；與結合劑，其包含含有選自胺基 酸序列SEQ ID NO：45-49之胺基酸序列之可變輕鏈區；與含有選自胺基酸序列SEQ ID NO：104-108之胺基酸序列之可變重鏈區。
醫藥組成物
有些具體例中，組成物或醫藥組成物包含本文說明之結合劑-藥物接合物。有些具體例中，醫藥組成物包含結合劑-藥物接合物與醫藥上可接受之賦形劑、稀釋劑、添加劑或載劑。
醫藥組成物可配合合適投藥途徑調配。有些具體例中，醫藥組成物係調配成供經皮下(s.c.)、皮內、肌內、腹膜內與/或靜脈內(i.v.)投藥。某些具體例中，醫藥組成物可包含用於修飾、維持或保存組成物之例如，pH、滲透性、黏度、澄清度、顏色、等滲性、氣味、無菌性、安定性、溶解或釋放速率、吸附或穿透性之調配材料。某些具體例中，合適之調配材料包括(但不限於)：胺基酸(如：甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、精胺酸、或離胺酸)；抗微生物劑；抗氧化劑(如：抗壞血酸、亞硫酸鈉或亞硫酸氫鈉)；緩衝劑(如：硼酸鹽、碳酸氫鹽、Tris-HCl、檸檬酸鹽、磷酸鹽(例如，磷酸鹽緩衝生理食鹽水)或合適之有機酸)；增積劑(如：甘露糖醇或甘胺酸)；螯合劑(如：乙二胺四乙酸(EDTA))；錯合劑(如：咖啡因、聚乙烯吡咯烷酮、β-環糊精或羥丙基-β-環糊精)；蛋白質(如：血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白)；著色劑、調味劑與稀釋劑；乳化劑；親水性聚合物(如：聚乙烯吡咯烷酮)；低分子量多肽；形成鹽之抗衡離子(如：鈉)；溶劑(如：甘油、丙二醇、或聚乙二醇)；稀釋劑；賦形劑與/或醫藥佐劑。特定言之，醫藥組成物可以包含任何合適載劑、調配物、或成份、類似物或其組合，如：列於「Remington：The Science and Practice Of Pharmacy」Mack Publishing Co.,Easton,PA，第19版 (1995)(下文稱為Remington’95)或「Remington：The Science and Practice Of Pharmacy」,Pharmaceutical Press,Easton,PA，第22版(2013)(下文稱為Remington 2013)，其完整內容已以引用之方式完整併入本文中。本文所列之各種不同材料可以單獨或組合納入Remington’95或Remington 2013說明之材料中或與其等併用。任何合適之技術、載劑、與賦形劑均可使用，包括彼等相關技藝習知者；例如，說明於Remington’95或Remington 2013中者。
某些具體例中，醫藥組成物包含合適之賦形劑，其無限制實例包括抗附著劑(例如，硬脂酸鎂)、黏合劑、填料、單糖、雙醣、其他碳水化合物(例如，葡萄糖、甘露糖或糊精)、糖醇類(例如，甘露糖醇或山梨糖醇)、包衣(例如，纖維素、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、微晶纖維素、合成性聚合物、蟲膠、明膠、玉米蛋白質(玉米蛋白)、腸衣或其他多醣)、澱粉(例如，馬鈴薯、玉米或小麥澱粉)、矽石、著色劑、崩解劑、調味劑、潤滑劑、防腐劑、吸附劑、甜味劑、媒劑、懸浮劑、界面活性劑與/或濕化劑(如：普朗尼克(pluronics)、PEG、山梨糖醇酐酯、聚山梨酸酯如：聚山梨酸酯20、聚山梨酸酯80、曲拉通(triton)、三羥基胺基甲烷(tromethamine)、卵磷脂、膽固醇、泰洛沙泊(tyloxapal))、安定性加強劑(如：蔗糖或山梨糖醇)、與渗性加強劑(如：鹼金屬鹵化物、氯化鈉或鉀、甘露糖醇、山梨糖醇)、與/或Remington’95或Remington 2013中揭示之任何賦形劑。本文所採用術語「黏合劑」係指有助於保持醫藥混合物組合在一起之化合物或成份。適合製造醫藥調配物且經常用於製備醫藥錠劑、膠囊、與粒劑之黏合劑係彼等習此相關技藝者已知。為了澄清，本文所採用術語「結合劑」不指用於某些醫藥調配物中之「黏合劑」。儘管如此，在某些具體例中，醫藥組成物可能包含會與cMET專一性結合之結合劑及黏合劑。
有些具體例中，醫藥組成物包含合適之醫藥上可接受之添加劑與/或載劑。合適添加劑之非限制實例包括合適之pH調整劑、緩和劑、緩衝劑、含硫還原劑、抗氧化劑與類似物。含硫還原劑之非限制實例包括彼等具有氫硫基(例如，硫醇)者，如N-乙醯基半胱胺酸、N-乙醯基高碳半胱胺酸、硫辛酸、硫二甘醇、硫乙醇胺、硫甘油、硫山梨糖醇、硫乙醇酸與其鹽、硫代硫酸鈉、穀胱甘肽、與C1-C7硫烷酸。抗氧化劑之非限制實例包括異抗壞血酸、二丁基羥基甲苯、丁基羥基苯甲醚、α-生育酚、乙酸生育酚、L-抗壞血酸與其鹽、L-抗壞血酸基棕櫚酸酯、L-抗壞血酸基硬脂酸酯、亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉、沒食子酸三戊酯與沒食子酸丙酯、及螯合劑，如乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)、焦磷酸鈉與偏磷酸鈉。此外，稀釋劑、添加劑與賦形劑可包含其他常用成份，例如，無機鹽類，如氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、磷酸鈉、磷酸鉀、與碳酸氫鈉，及有機鹽類，如檸檬酸鈉、檸檬酸鉀與乙酸鈉。
本文所採用醫藥組成物可以長期時間保持安定，例如，保持數月或數年。有些具體例中，醫藥組成物包含一或多種合適之防腐劑。防腐劑之無限制實例包括氯化苯二甲烴銨、苯甲酸、水楊酸、硫柳汞、苯乙醇、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、氯己定(chlorhexidine)、山梨酸、過氧化氫、其類似物與/或其組合。防腐劑可包含四級銨化合物，如氯化苯二甲烴銨、苯佐氯銨(benzoxonium chloride)、氯化芐乙氧銨(benzethonium chloride)、溴化十六烷基三甲銨(cetrimide)、氯司帕唑(sepazonium chloride)、十六烷基氯化吡啶、或度米芬溴(domiphen bromide)(BRADOSOL(註冊商標))。防腐劑可包含硫水楊酸之烷基-汞鹽，如硫柳汞、硝酸苯基汞、乙酸苯基汞、或硼酸苯基汞。防腐劑可包含對羥基苯甲酸酯，如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯。防腐劑可包含醇類，如 氯丁醇、苯甲醇或苯基乙基醇。防腐劑可包含雙胍衍生物，如氯己定或聚六亞甲基雙胍。防腐劑可包含過硼酸鈉、咪唑啶基脲、與/或山梨酸。防腐劑可包含安定化之氧氯複合物，如已知且可取得名稱為PURITE(註冊商標)之商品。防腐劑可包含聚二醇-聚胺縮合樹脂，如已知且可自Henkel KGaA取得名稱為POLYQUART(註冊商標)之商品。防腐劑可包含安定化之過氧化氫。防腐劑可為氯化苯二甲烴銨。有些具體例中，醫藥組成物不含防腐劑。
有些具體例中，組成物、醫藥組成物或結合劑-藥物接合物實質上不含雜質(例如，血球、血小板、多肽、礦物質、血源性化合物或化學物質、病毒、細菌、其他病原菌、毒素，與類似物)。有些具體例中，組成物、醫藥組成物或結合劑-藥物接合物實質上不含血清與血清雜質(例如，血清蛋白質、血清脂質、血清碳水化合物、血清抗原、與類似物)。有些具體例中，組成物、醫藥組成物或結合劑-藥物接合物實質上不含病原菌(例如，病毒、寄生蟲或細菌)。有些具體例中，組成物、醫藥組成物或結合劑-藥物接合物實質上不含內毒素。有些具體例中，組成物、醫藥組成物或結合劑-藥物接合物係無菌。某些具體例中，組成物或醫藥組成物包含專一性結合至cMET之胞外域之結合劑-藥物接合物與合適稀釋劑(例如，磷酸鹽緩衝生理食鹽水)。
本文說明之醫藥組成物之組態係依據所採用之療法，呈用於投與個體之任何合適型式及/或用量。例如，供非經腸式投藥(例如，注射或輸注)之醫藥組成物組態可含於油性或水性媒劑中，呈懸浮液、溶液或乳液型式，且其可包含調配劑、賦形劑、添加劑與/或稀釋劑，如水性或非水性溶劑、共溶劑、懸浮溶液、防腐劑、安定劑與/或分散劑。有些具體例中，適合非經腸式投藥之醫藥組成物可包含一或多種賦形劑。有些具體例中，醫藥組成物經凍乾成乾粉型式。 有些具體例中，醫藥組成物經凍乾成乾粉型式，其適合使用合適之醫藥溶劑(例如，水、生理食鹽水、等滲性緩衝液(例如，PBS)，與類似物)再組成。某些具體例中，凍乾醫藥組成物之再組成型式適合非經腸式投藥(例如，經靜脈內投藥)給哺乳動物。
某些具體例中，醫藥組成物係呈經口投藥之組態，並可調配成錠劑、微錠、迷你錠、微粒、粉劑、粒劑、膠囊(例如，填充微錠、微粒、粉劑、或粒劑之膠囊)、乳液或溶液。呈經口投藥組態之醫藥組成物可能包含合適之包衣，以延緩或持續釋放活性成份(例如，結合劑)，其無限制實例包括腸溶性包衣，如脂肪酸、蠟類、蟲膠、塑膠、丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸共聚物、纖維素乙酸酯酞酸酯(CAP)、纖維素乙酸酯琥珀酸酯、羥基丙基甲基纖維素酞酸酯、羥基丙基甲基纖維素乙酸酯琥珀酸酯(羥丙甲纖維素乙酸酯琥珀酸酯)、聚乙烯乙酸酯酞酸酯(PVAP)、甲基丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸共聚物、纖維素乙酸酯偏苯三酸酯、藻酸鈉、玉米蛋白、植物纖維，及類似物與其組合。
有些具體例中，本文說明之醫藥組成物可呈供局部投藥用之組態，且可包括一或多種結合劑與/或潤滑劑、聚合性二醇類、明膠、可可脂或其他合適蠟類或脂肪。有些具體例中，本文說明之醫藥組成物係納入包含局部用載劑之局部用調配物中，其通常適合局部投與藥物且包含彼等習此相關技藝者已知之任何合適材料。某些具體例中，醫藥組成物之局部用調配物係調配用於從局部用貼布投與該結合劑。
某些具體例中，最佳醫藥組成物將由習此相關技藝者依據例如，計畫採用之投藥途徑、傳遞方式與所需劑量決定(參見例如，如上述之Remington’95或Remington 2013)。某些具體例中，此等組成物可影響本發明抗 體-藥物接合物之物理狀態、安定性、活體內釋放速率及活體內清除速率。醫藥組成物可採用任何合適方式製造，包括例如，採用傳統混合、溶解、造粒、包覆糖衣、細磨、乳化、囊封、包埋或壓錠過程(例如，參見Remington’95或Remington 2013中說明之方法)。
第二醫藥用法
有些具體例中，本文提供一種以組成物或醫藥組成物作為醫藥之用途，其係用於治療個體之癌症或贅瘤疾病，其中該組成物或醫藥組成物包含本文說明之結合劑-藥物接合物。有些具體例中，本文提供一種包含本文所說明結合劑-藥物接合物之組成物或醫藥組成物，其用於治療癌症或贅瘤疾病。
治療方法
有些具體例中，本文說明之組成物、醫藥組成物或結合劑-藥物接合物係用於治療患有或疑似患有贅瘤疾病或癌症之個體。某些具體例中，本文說明之結合劑-藥物接合物或醫藥組成物係用於治療個體之贅瘤疾病或癌症，其中該結合劑-藥物接合物係專一性結合胞外域人類cMET。有些具體例中，本文提供一種治療患有或疑似患有贅瘤疾病或癌症之個體之方法。某些具體例中，一種治療患有或疑似患有贅瘤疾病或癌症之個體之方法包括對個體投與醫療有效量之本文所說明組成物、醫藥組成物或結合劑-藥物接合物。某些具體例中，一種方法包括由個體之細胞(例如，一或多個細胞)與醫療有效量之本文所說明組成物、醫藥組成物或結合劑-藥物接合物接觸。某些具體例中，一種方法包括由個體之癌細胞或贅瘤細胞與醫療有效量之本文所說明組成物、醫藥組成物或結合劑-藥物接合 物接觸。某些具體例中，一種方法包括由個體之細胞(例如，一或多個細胞)與醫療有效量之與人類cMET之胞外部份或其變體專一性結合之結合劑-藥物接合物接觸。某些具體例中，一種方法包括由癌細胞或贅瘤細胞與醫療有效量之與人類cMET之胞外部份或其變體專一性結合之結合劑-藥物接合物接觸，其中該細胞在其細胞表面上表現cMET。個體之細胞經常為表現cMET之胞外部份之細胞。與結合劑-藥物接合物接觸之細胞可能出現在個體內(例如，活體內)或個體外(例如，活體外或離體)。
某些具體例中，結合劑-藥物接合物阻斷、抑制、緩解、消除、或壓制癌症或癌細胞之生長、活力或轉移。某些具體例中，結合劑-藥物接合物誘發癌症或癌細胞之死亡、壞死或細胞凋亡。某些具體例中，由個體之細胞與本文揭示之結合劑-藥物接合物接觸，以誘發或促進細胞死亡、壞死或細胞凋亡。某些具體例中，由個體之細胞與本文揭示之結合劑-藥物接合物接觸，以藉由ADCC、ADCP或補體依賴性細胞毒性(CDCC)過程，來誘發或促進細胞死亡。某些具體例中，由個體之細胞與本文揭示之結合劑-藥物接合物接觸，以降低、抑制、或減少細胞有絲分裂。某些具體例中，由個體之癌症或癌細胞與本文揭示之結合劑-藥物接合物接觸，以降低、抑制、或減少癌症或癌細胞轉移。
個體
術語「個體」係指哺乳動物。任何合適之哺乳動物均可接受本文說明之方法或組成物治療。哺乳動物之無限制實例包括人類、非人類靈長類(例如，人猿、長臂猿、黑猩猩、紅毛猩猩、猴子、食蟹獼猴等等)、家庭動物(例如，狗與貓)、農場動物(例如，馬、牛、山羊、綿羊、豬)與實驗動物(例如，小鼠、大鼠、兔子、 天竺鼠)。有些具體例中，哺乳動物為人類。哺乳動物可為任何年齡或任何發育階段(例如，成人、青少年、幼兒、嬰兒、或胎內之哺乳動物)。哺乳動物可為雄性或雌性。
有些具體例中，個體需要本文說明之治療或組成物。某些具體例中，個體患有或疑似患有贅瘤疾病或癌症。有些具體例中，需要本文說明之治療或組成物之個體患有或疑似患有贅瘤疾病或癌症。某些具體例中，採用本文說明之結合劑-藥物接合物或組成物治療患有或疑似患有贅瘤疾病或癌症之個體。
癌症型態
本文所揭示組成物、醫藥組成物或結合劑-藥物接合物可用於治療贅瘤病變或癌症，其非限制實例包括癌瘤、肉瘤、神經贅瘤、淋巴瘤、骨髓瘤、白血病、黑色素瘤、間皮瘤、實體或軟組織腫瘤、與續發性癌症(例如，由原發位點衍生))。癌瘤之非限制實例包括呼吸系統癌瘤、胃腸系統癌瘤、泌尿生殖系統癌瘤、睪丸癌瘤、攝護腺癌瘤、內分泌系統癌瘤、皮膚之基底細胞癌瘤、未知之原發性癌瘤、膽管癌瘤、乳腺管原位癌(DCIS)、默克細胞癌瘤(Merkel cell carcinoma)、肺癌瘤、胸腺瘤與胸腺癌瘤、中線管癌瘤、肺小細胞癌瘤、甲狀腺癌瘤、肝臟肝細胞癌瘤、鱗狀細胞癌瘤、頭與頸鱗狀細胞癌瘤、乳房癌瘤、上皮癌瘤、腎上腺皮質癌瘤、卵巢表面上皮癌瘤等等，進一步包括子宮、子宮頸、結腸、胰臟、腎臟、食道、胃與卵巢之癌瘤。肉瘤之非限制實例包括：尤文氏肉瘤(Ewing sarcoma)、淋巴肉瘤、脂肉瘤、骨肉瘤、乳房肉瘤、軟組織肉瘤、卡波西肉瘤(Kaposi sarcoma)、橫紋肌肉瘤、子宮肉瘤、軟骨肉瘤、平滑肌肉瘤、纖維肉瘤等等。神經贅瘤之非限制實例包括膠質瘤、膠質母細胞瘤、腦膜瘤、神經母細胞瘤、視網膜母細胞瘤、 星細胞瘤、寡樹突細胞瘤等等。淋巴瘤、骨髓瘤、與白血病之無限制實例包括急性與慢性淋巴母細胞白血病、骨髓母細胞白血病、多重骨髓瘤、分化不良急性白血病(例如，紅血球母細胞白血病與急性巨核母細胞白血病)、急性前骨髓樣白血病(APML)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴母細胞白血病(ALL)，其包括B-細胞系ALL與T-細胞系ALL、慢性淋巴細胞白血病(CLL)、前淋巴細胞白血病(PLL)、毛細胞白血病(HLL)、華氏巨球蛋白血症(Waldenstrom’s macroglobulinemia)(WM)、非霍奇金氏(non-Hodgkin)淋巴瘤及變體、周邊T-細胞淋巴瘤、成人T-細胞白血病/淋巴瘤(ATL)、皮膚T-細胞淋巴瘤(CTCL)、大粒淋巴細胞白血病(LGF)、霍奇金氏症(Hodgkin’s disease)與李特-斯頓柏格症(Reed-Sternberg disease)。軟組織或實體組織腫瘤之無限制實例包括內臟腫瘤、精原細胞瘤、肝腫瘤，及乳房、肝臟、肺臟、胰臟、子宮、卵巢、睪丸、頭、頸、眼睛、腦、口、咽、聲帶、耳、鼻、食道、胃、腸、結腸、腎上腺、腎臟、骨、膀胱、尿道、癌瘤、肺臟、肌肉、皮膚、腳、手、與軟組織之其他腫瘤。有些具體例中，可以採用本文所揭示醫藥組成物或結合劑-藥物接合物治療之贅瘤疾病或癌症係選自：膀胱癌、乳癌、結腸直腸癌、子宮頸癌、胃癌、肝癌、肝細胞癌、下咽癌、肺癌、腺癌、卵巢癌與腎癌。有些具體例中，可以採用本文所揭示醫藥組成物或結合劑-藥物接合物治療之贅瘤疾病或癌症係選自：胰臟癌(例如，胰臟腺癌、外分泌胰臟癌或胰臟神經內分泌癌)、結腸直腸癌(例如，結腸直腸腺癌)、小腸惡性病、膽管癌瘤、非小細胞肺癌(NSCLC)、甲狀腺癌瘤、食道或食道胃接合部(EGJ)癌症、胃腺癌、肝臟肝細胞癌瘤、頭與頸鱗狀細胞癌瘤、女性生殖道惡性病、乳房癌瘤、肺小細胞癌瘤、卵巢表面上皮癌瘤、腹膜後腔或腹膜腔肉瘤、攝護腺腺癌、神經內分泌腫瘤、胃腸基底腫瘤、膠質母細胞瘤或非上 皮卵巢癌。有些具體例中，可以採用本文所揭示醫藥組成物或結合劑-藥物接合物治療之贅瘤疾病或癌症為乳癌，其非限制實例包括乳腺管原位癌(DCIS)、侵襲性管狀癌瘤(IDC)(例如，乳房之管狀癌瘤、乳房之髓質癌瘤、乳房之黏液性癌瘤、乳房之乳突狀癌瘤、及乳房之篩板型癌瘤)、侵襲性小葉癌瘤(ILC)、發炎性乳癌、原位葉狀癌瘤(LCIS)、男性乳癌、分子亞型乳癌(例如，乳管B型乳癌或激素-受體陽性乳癌、三陰性乳癌、HER2過度表現型乳癌、與類正常型乳癌)、佩吉特乳頭病(Paget’s disease of the nipple)、乳房之葉狀腫瘤、及轉移性乳癌。有些具體例中，可以採用本文所揭示醫藥組成物或結合劑-藥物接合物治療之贅瘤疾病或癌症為三陰性乳癌。
有些具體例中，本文所說明治療法之效力可一部份藉由癌症或贅瘤表現之cMET量來測定或預估。已知許多癌症與腫瘤型態可表現cMET，其無限制實例包括某些膀胱癌、乳癌、結腸直腸癌、胃癌、肝細胞癌、HNSCC、下咽癌、肺癌、腺癌、卵巢癌與腎癌(例如，參見Ariyawutyakorn等人(2016)Journal of Cancer 7(6)：633-649)且已知許多種癌症型態之cMET表現量(例如，參見Arguello等人(2013)Annual Meeting of Association for Molecular Pathology(AMP)Abstract No.294319)。此外，可以採用合適之抗-cMET結合劑(例如，抗體)，使用合適之方法(例如，全細胞ELISA、FAC、任何合適之免疫分析法等等)快速分析贅瘤細胞或癌細胞之cMET表現量。因此，有些具體例中，一種治療患有或疑似患有癌症之個體之方法包括對個體投與醫療有效量之本文說明之結合劑-藥物接合物、或包含本文說明之結合劑-藥物接合物之醫藥組成物，其中該癌症表現可檢測量之cMET。某些具體例中，該表現可檢測量cMET之癌症可為已知或已報告可表現cMET或疑似表現cMET(例如，具有類似已知表現cMET之另一種 癌症之基因型或表型)之癌症。有些具體例中，會表現cMET或疑似表現cMET之癌症為表現編碼cMET或其一部份之RNA轉錄物之癌症。有些具體例中，表現cMET或疑似表現cMET之癌症為在其細胞表面表現cMET之癌症。
投藥途徑
任何適合投與組成物、醫藥組成物或結合劑-藥物接合物給個體之方法均可採用。根據本文所說明本發明方法所採用投與組成物之正確調配物與途徑可由個別醫學專業人士(例如，醫師)依據患者條件選擇。(例如，參見Fingl等人1975，「The Pharmacological Basis of Therapeutics」；其內容已以引用之方式完整併入本文中)。任何合適之投藥途徑均可用於投與本文說明之醫藥組成物或結合劑-藥物接合物。投藥途徑之非限制實例包括局部表面或局部(例如，穿皮式或經皮膚(例如，皮膚上或表皮)、投藥至眼睛內或眼睛上、經鼻內、穿透黏膜、耳內、耳內部(例如，耳鼓後面))、腸內(例如，經由胃腸道傳遞，例如，經口(例如，呈錠劑、膠囊、粒劑、液體、乳化、口含錠、或其組合)、舌下、利用胃飼管、經直腸、與類似物)、非經腸式投藥(例如，非經腸式，例如，經靜脈內、經動脈內、肌內、腹膜內、皮內、皮下、腔內、顱內、關節內、投至關節腔內、心內(進心臟內)、海綿體內注射、病灶內(進皮膚病灶內)、骨內輸液(進骨髓內)、鞘內(進脊髓管內)、子宮內、陰道內、膀胱內輸液、玻璃體內)等等或其組合。
有些具體例中，提供本文之組成物給個體。提供給個體之組成物有時候係提供給個體用於自行投藥或由另一個人(例如，非醫事專業人員)投藥給個體。例如，本文說明之組成物呈醫事人員書寫的說明書提供，其授權給患者接 受提供本文說明之組成物或治療法(例如，處方)。另一項實例中，可提供組成物給個體，其中該個體例如，經口、經靜脈內、或利用吸藥器自行投與組成物。
或者，使用根據本發明方法時，可採用局部而非全身方式投與組成物，例如，直接施用至皮膚、黏膜、或所需治療區域，包括使用儲積式或持續釋放調配物。
有些具體例中，包含結合劑-藥物接合物之醫藥組成物可單獨投與(例如，呈單一活性成份(AI或例如，呈單一活性醫藥成份(API))。其他具體例中，包含結合劑-藥物接合物之醫藥組成物可與一或多種其他AI/API組合投與，例如，呈兩個分開組成物或呈單一組成物，其中該一或多種其他AI/API係與結合劑-藥物接合物於醫藥組成物中混合或共同調配。
某些具體例中，cMET結合劑-藥物接合物係傳遞至細胞(例如，哺乳動物細胞)。cMET結合劑-藥物接合物可採用任何合適方法傳遞至細胞。某些具體例中，將cMET結合劑-藥物接合物送至細胞之傳遞法包括由哺乳動物細胞於活體外或活體內，與包含cMET結合劑-藥物接合物之組成物，在可以讓結合劑-藥物接合物與細胞結合之條件下接觸。
劑量與醫療有效量
有些具體例中，組成物中之結合劑-藥物接合物量為醫療有效量。有些具體例中，對個體投與醫療有效量之結合劑-藥物接合物。有些具體例中，組成物中結合劑-藥物接合物之醫療有效量係得到有效醫療結果時之需要量。某些具體例中，組成物(例如，醫藥組成物)中結合劑-藥物接合物之量係足以為本文所涵括之 贅瘤疾病或癌症進行預防、治療、降低嚴重性、延緩發作、及/或減輕症狀時之用量。
「醫療有效量」意指足以得到有效醫療結果時之用量與/或足以為贅瘤疾病或癌症進行預防、治療、降低嚴重性、延緩發作與/或減輕症狀時之量。某些具體例中，「醫療有效量」意指足以終止贅瘤或癌症生長及/或減緩生長時之量。某些具體例中，「醫療有效量」意指足以抑制一或多種贅瘤或癌細胞複製與/或誘發其死亡時之量。醫療有效量之決定係彼等習此相關技藝者之能力範圍內，尤其可依據本文提供之詳細揭示內容決定。
某些具體例中，醫療有效量為高至足以提供有效之醫療效力且低至足以使不欲之副反應降至最低時之量。因此某些具體例中，結合劑-藥物接合物之醫療有效量可能隨個體之間，經常依個體之年齡、體重與一般健康條件、待治療病症之嚴重性、及所投與藥物之特定組合而定。因此有些具體例中，可以實驗決定醫療有效量。因此，可由習此相關技藝者依據例如，在動物或臨床試驗中發現有效之用量、醫師之經驗、及建議劑量範圍或投藥指南，決定用於治療個體之結合劑-藥物接合物之醫療有效量。
某些具體例中，結合劑-藥物接合物(例如，醫藥組成物中之結合劑-藥物接合物)係投與合適之醫療有效量或劑量(例如，依合適之體積與濃度，其有時候部分依特定投藥途徑而定)。某些具體例中，結合劑-藥物接合物之醫療有效量係選自以下一或多種劑量：約0.01mg/kg(例如，個體每公斤體重)至500mg/kg、0.1mg/kg至500mg/kg、0.1mg/kg至400mg/kg、0.01mg/kg至300mg/kg、0.1mg/kg至300mg/kg、0.1mg/kg至200mg/kg、0.1mg/kg至150mg/kg、0.1mg/kg至100mg/kg、0.1mg/kg至75mg/kg、0.1mg/kg至50mg/kg、0.1mg/kg 至25mg/kg、0.1mg/kg至10mg/kg、0.1mg/kg至5mg/kg、0.1mg/kg至1mg/kg、其間數量與其組合。結合劑-藥物接合物之醫療有效量之有些態樣包括一或多種下列劑量：約10mg/kg、9mg/kg、8mg/kg、7mg/kg、6mg/kg、5mg/kg、4mg/kg、3mg/kg、2mg/kg、1mg/kg、0.9mg/kg、0.8mg/kg、0.7mg/kg、0.6mg/kg、0.5mg/kg、0.4mg/kg、0.3mg/kg、0.2mg/kg，與0.1mg/kg、其間數量與其組合。有些具體例中，結合劑-藥物接合物之醫療有效量在約0.1mg/kg至100mg/kg之間，或約1mg/kg至約50mg/kg之間。
有些具體例中，結合劑-藥物接合物或包含結合劑-藥物接合物之醫藥組成物之醫療有效量之投藥法包括依可以得到有效醫療結果所需之頻率或間隔投與合適劑量。有些具體例中，結合劑-藥物接合物或包含結合劑-藥物接合物之醫藥組成物之醫療有效量之投藥法包括每小時、每2小時、每4小時、每6小時、一天三次、一天兩次、一天一次、一週6次、一週5次、一週4次、一週3次、一週2次、每週一次、依其組合、及/或依規律或不規律之頻率或間隔、及/或簡單依所需要或專業醫師建議之頻率或間隔投與合適劑量。某些具體例中，可以藉由追蹤個體中癌症、贅瘤生長、或癌細胞之數量、大小、活力、生長、有絲分裂或轉移，來決定醫療有效結果。因此某些具體例中，由個體中贅瘤或癌細胞之數量、活力、大小、生長、有絲分裂或轉移之下降或減少視為有效之醫療結果。
套組
包含結合劑-藥物接合物用量或劑量之醫藥組成物若需要時可以呈套組、包裝、或配送裝置提供，其可包含一或多個劑量之結合劑。有些具體例中，套組包 含包裝與/或配送裝置。該包裝之非限制實例包括包含本文所說明結合劑-藥物接合物或組成物之金屬、玻璃、或塑膠容器、或發泡包。某些具體例中，套組包含配送裝置，如：針筒或吸藥器。包裝或配送裝置可附有投藥說明書。該包裝或配送裝置亦可在容器中附有與由管理醫藥之製造、用法或出售之政府機關規定之型式有關之聲明書，該聲明書反映該藥物型式已由管理當局核准用於人類或獸醫投藥。此等聲明書可以例如，針對處方藥物標示美國食品藥物檢驗局(U.S.Food and Drug Administration)之核准、或核准之產品插頁。
有些具體例中，套組或包裝中之結合劑-藥物接合物含量足以治療患者歷時1天至1年、1天至180天、1天至120天、1天至90天、1天至60天、1天至30天、1-24小時、1-12小時、1-4小時、或其間之任何時間期。
套組可視需要包括產品標示或包裝插頁，其提供組份說明或其中組份於活體外、活體內、或離體之使用說明書。說明書實例包括診斷方法、治療方法或醫療療程之說明書。有些具體例中，套組包含包裝材料，其係指該容納套組組份之物理結構。該包裝材料可以維持組份無菌狀態，且可以由此等目的常用之材料製成(例如，紙、瓦楞紙、玻璃、塑膠、箔、安瓿、小瓶、管等等)。產品標示或插頁包括「印刷品」，例如，紙或卡紙板，或分離或固定在組份、套組或包裝材料(例如，箱子)上，或貼在含有套組組份之安瓿、管或小瓶上。標示或插頁亦可另外包括電腦可讀式媒體，如CD-或DVD-ROM/RAM、DVD、MP3、磁帶、或電子儲存媒體，如RAM與ROM或此等之混合物，如磁/光儲存媒體、FLASH媒體、或記憶型卡片。產品標示或插頁可包括說明其中一或多種組份、劑量、活性成份(群)之臨床藥理學，包括作用機轉、藥物動力學(PK)與藥效學(PD)之資訊。產品標示或插頁可包括說明製造商資訊、批號、製造商位置、日期、適 應症之資訊、可利用該套組組份之病變、疾病或症狀之資訊。產品標示或插頁包括指示醫師或個體使用其中一或多種套組組份之方法、治療法或療程之說明書。該說明書可包括劑量、頻率或持續時間，及說明本文所示任何操作方法、治療法或療程之說明書。因此本發明套組可另外包括指示操作本文所說明任何本發明方法與用途之標示或說明書。產品標示或插頁可包括有關可能副作用與/或警告之資訊。
[實例]
實例1-抗體製作
為了誘發針對cMET之抗體反應，依第1與2圖之說明，由小鼠接受cMET-Fc或cMET肽免疫接種。有些具體例中，選擇衍生自策略區之肽進行免疫接種。第3圖說明激發肽3設計靈感之MET結構環之實例。從免疫之小鼠取得脾臟，取脾細胞與合適之融合對象採用標準製程融合，產生融合瘤。單離出融合瘤純系，測試融合瘤培養基與MET之結合性及/或誘發人類癌細胞株之cMET內化之能力，其係由流式細胞計所測定(第4圖)。所選拔之融合瘤抗體係依其誘發MET降解之能力(第5圖)或其無法誘發ERK磷酸化之能力來選拔(第6圖)。先導融合瘤F6B1P3D12已於2019年3月20日寄存在美國菌種保存處(American Type Culture Collection)(Patent Depository of 10801 University Boulevard Manassas,Virginia 20110-2209 USA)。該寄存物係依據為專利申請程序的微生物備案取得國際承認的布達佩斯條約(Budapest Treaty on the International Recognition of the Deposit of Microorganisms for the Purpose of Patent Procedure)及其中之規定(布達佩斯條約(Budapest Treaty)進行。ATCC編號為PTA-125826。
進行其他分析法來選拔理想的抗-cMET抗體候選物。例如，測試抗-cMET抗體之物種交叉反應性，採用ELISA測定抗體與人類cMET、猴子cMET(例如，食蟹獼猴(Macaca fascicularis，亦即Cynomolgus Macaque))、大鼠cMET及小鼠cMET結合之能力(第7圖&表11)。亦分析活體內半衰期與其他藥物動力學特徵(未顯示數據)。亦使用與MMAF接合之抗-cMET抗體測定抗體-藥物接合物(ADC)對高度、中度與陰性cMET表現細胞株之效力與專一性(第9與15圖，表11與12)。採用MKN45異種移植模式測定ADC之活體內效力。
實例2-所選拔人源化單株結合劑之特徵綜合說明
產生包含小鼠單株抗體P3D12之重鏈CDR與輕鏈CDR之人源化與同型轉換單株結合劑。藉由表面電槳共振(SPR)測定法，測試16種不同重鏈(HC)與輕鏈 (LC)組合於PBS中之溶解度、與人類cMET之結合性、與大鼠cMET之結合性、與人類及大鼠cMET之結合親和性，促效活性及cMET降解性之存在與否係以「Meso Scale Discovery platform」(MSD)提示。其結果綜合說明於下表12。
本發明者選拔出IgG2同型之單株抗體人源化抗體，其包含SEQ ID NO：47之含人源化輕鏈可變區與SEQ ID NO：108之人源化重鏈可變區，作為代表性人源化抗-cMET抗體，稱為hD12，並用於下列實例中之抗體。
實例3-結合性分析法
由代表性人源化抗-cMET抗體：hD12(包含SEQ ID NO：108之人源化重鏈與SEQ ID NO：47之人源化輕鏈序列)隨機接合五種代表性負載藥物(亦即化學式II、IV、VI、VII與XI之負載藥物)，各負載藥物包含吡咯并苯并二氮呯毒素與連接基。本實例中，負載藥物之連接基係採用二硫醚化學，隨機連接hD12抗體。簡言之，hD12抗體先經過穀胱甘肽(GSH)還原，排除未反應之GSH，由包含反應性馬來醯亞胺基之連接基與抗體之一或多個游離氫硫基(亦即硫醇基)反應。採用此策略，可以由一或多種負載藥物共價連接hD12抗體，由半胱胺酸殘基佔據隨機位置。因此，此方法稱為隨機接合法(stochastic conjugation)。
採用ELISA分析所得之hD12抗體-藥物接合物(亦即hD12-II(抗體hD12附接化學式II負載藥物)；hD12-IV(抗體hD12附接化學式IV負載藥物)；hD12-VI(抗體hD12附接化學式VI負載藥物)；hD12-VII(抗體hD12附接化學式VII負載藥物)；及hD12-XI(抗體hD12附接化學式XI負載藥物))對已結合在盤之cMET之結合性。以接合各五種負載藥物之登蘇單抗作為陰性對照組，因為單株抗體登蘇單抗係專一性結合RANK配體(RANKL)，不會與cMET結合。ELISA結合性試驗結果示於第17A與17B圖。5種不同hD12藥物接合物與cMET之間之結合性沒有顯著差異。登蘇單抗之同型對照接合物係如所預期，未與cMET結合。
材料：高結合性384孔盤(Thermo Fisher #：8755)，阻斷緩衝液(SkyTek Lab #AAA500)，重組人類c-Met-10X His(1.04mg/ml，自製，批號# 140924TA)，抗-人類κ-輕鏈HRP接合物(1mg/ml，Brthyl #AP80-219P)，1x KPL洗滌緩衝液，含於水中(20x，200ml，KPL # 50-63-01)，TMB(100ml，KPL # 53-00-00)，與中止溶液(Cell Signaling #7002L).
實例4-細胞毒性分析法
測試實例3之五種hD12抗體-藥物接合物對抗表現不同程度之表面cMET之細胞之細胞毒性。以接合各五種負載藥物之登蘇單抗作為陰性對照組(未初示數據)。登蘇單抗接合物在cMET表現細胞株中對殺死細胞之影響很小或沒有影響。
細胞毒性分析結果示於第18A-18E圖與第19A-19F圖。所測試之細胞株為SNU-1(ATCC，不表現cMET，第18A圖)、SNU-16(ATCC，中度表現cMET，第18B圖)、SNU-620(KCLB，高表現cMET，第18C圖)、MKN-45(DSMZ，高表現cMET，第18D圖)、H441(ATCC，中度表現cMET，第19A圖)、H1373(ATCC，中度表現cMET，第19B圖)、H1975(ATCC，中度表現cMET，第19C圖)、SNU-5(ATCC，高表現cMET，第19D圖)、與H1573(ATCC，中度表現cMET，第19E圖)。hD12-II與hD12-VII在有些中度與高度cMET-表現細胞株中顯示稍高之效力。
實例5-異種移植物試驗
進行兩項活體內異種移植物試驗，分析實例3之五種hD12抗體-藥物接合物(亦即hD12-VI、hD12-II、hD12-VII與hD12-XI)之效力。應注意，第20-22圖所示之名詞hD12-vc-XI、hD12-vc-VI、hD12-vc-II、hD12-vc-VII與hD12-vc-IV 係分別與hD12-XI、hD12-VI、hD12-II、hD12-VII與hD12-IV為同義字。此外，登蘇單抗-*(例如，登蘇單抗-II)係與圖中所示之登蘇單抗-vc-*(例如，登蘇單抗-vc-II)為同義字。「vc」代號沒有任何重要意義。名詞「登蘇單抗-II」意指單株抗體「登蘇單抗」附接化學式II之負載藥物。
第一項H1975活體內異種移植物試驗係採用每組10隻小鼠(Nu/nu：(Charles River))。為每隻小鼠接種H1975細胞後，使用其中一種指定抗體-藥物接合物或使用PBS處理。抗體-藥物接合物係於第1天，經i.v.尾靜脈注射投藥一次。每種抗體-藥物接合物測試兩種不同劑量(0.5mg/kg與0.125mg/kg)。使用登蘇單抗-II作為陰性對照組。每週3次測量腫瘤體積與重量。H1975活體內異種移植物試驗結果示於第20A-20G圖。
所有動物均對抗體-藥物接合物有良好耐受性。任一組均未觀察到顯著之體重下降(例如，參見第20B圖)。hD12-VII顯示，所有測試之ADC，在兩種劑量濃度均顯示最高效力(第20A與20F圖)。hD12-II與hD12-VI在低劑量組(0.125mg/kg)中顯示低於hD12-VII之效力(第20E與20D圖)。hD12-3315與hD12-XI在低劑量組中之效力最低(第20G與20C圖)。同型對照登蘇單抗-II在0.5mg/kg劑量顯示一些效力。可能係因為H1975具有RANK-RANKL訊號傳導途徑，而讓登蘇單抗顯示腫瘤生長抑制性(Journal of Thoracic Oncol.,2014,9(3)345-54)。總言之，所有五種hD12藥物接合物均對H1975異種移植物顯示顯著效力。hD12-VII、hD12-II與hD12-VI顯示最高治療效力，而以VII之成效稍高於其他二者。
進行第二項H1373活體內異種移植物試驗，進一步分析實例3之五種hD12抗體-藥物接合物(亦即hD12-VI、hD12-II、hD12-VII與hD12-XI)之效 力。H1373活體內異種移植物試驗係每組採用10隻小鼠(Nu/nu：(Charles River))。為每隻小鼠接種H1373細胞後，使用其中一種指定抗體-藥物接合物或使用PBS處理。抗體-藥物接合物係於第7天，經i.v.尾靜脈注射投藥一次。每種抗體-藥物接合物測試兩種不同劑量(0.5mg/kg與0.125mg/kg)。使用登蘇單抗-II作為陰性對照組。每週3次測量腫瘤體積與重量。H1373於活體內異種移植物試驗中之結果示於第21A-21E圖與第22圖。
所有動物均對抗體-藥物接合物有良好耐受性。任一組均未觀察到顯著之體重下降(例如，參見第22圖)。如第一項H1975異種移植物模式所示，hD12-VII(第21D圖)在低劑量組(0.125mg/kg)中顯示稍優於hD12-II與hD12-VI之效力(第21C與21B圖)。如同之前之觀察，hD12-IV為效力最低之藥物(第21E圖)。
實例6-小鼠之PK試驗
在5組各3隻小鼠中，歷經72小時，分析實例3之hD12藥物接合物(亦即hD12-VI、hD12-II、hD12-VII與hD12-XI)之循環半衰期。每組小鼠接受一劑i.v.注射1mg/kg之hD12-II、hD12-IV、hD12-VI、hD12-XI或登蘇單抗-II其中之一。在0.5h、2h、6h、24h、48h、72h後抽血。製備血清樣本，分析各指定抗體-藥物接合物含量(第23圖)。使用抗Fc-專一性抗體捕捉血清抗體，並使用山羊抗-人類IgG(H+L)-HRP檢測。
實例7-負載藥物與hD12之位點專一性接合
由hD12之編碼區在各種不同位點突變，以引進半胱胺酸殘基進入IgG2抗體之重鏈恆定區，得到hD12變體抗體hD12-T289C(位置289之T突變成半胱胺酸)、hD12-V442C(位置442之V突變成半胱胺酸)、hD12-V282C(位置282之V 突變成半胱胺酸)、hD12-S119C(位置119之S突變成半胱胺酸)。點突變係在hD12之恆定區，且係依據Edelman,G.M.等人，Proc.Natl.Acad.USA,63,78-85(1969).PMID：5257969說明之EU編號系統定義。化學式II之負載藥物係採用馬來醯亞胺化學，依位點專一性接合各突變之半胱胺酸殘基。藉由測定總回收量、凝集物含量、單體含量及藥物-抗體比例(DAR)，來分析接合之品質與程度。在hD12接合物hD12-T289C-II、hD12-V442C-II與hD12-V282C-II中觀察到最佳接合性。依實例3之說明，採用cMET結合性ELISA，比較這三種位點專一性接合物與隨機接合之hD12-II對cMET之相對結合親和性。cMET結合性分析法之結果示於第24A與24B圖。所有位點專一性化合物均以類似之親和性，與人類cMET成功結合。相較於隨機偶聯之hD12-II，該位點專一性接合物具有類似或稍佳之結合親和性。
實例8-位點專一性接合物對cMET表現細胞株之細胞毒性分析。
本發明者分析位點專一性偶聯II接合物(亦即hD12-T289C-II、hD12-V442C-II與hD12-V282C-II)相較於作為標準物之隨機偶聯hD12-II，對抗8種cMET表現細胞株：SNU-16(第25B圖)、SNU-620(第25C圖)、MKN-45(第25D圖)、NCI-N87(第25E圖)、SNU-5(第26A圖)、H1373(第27A圖)、H1573(第27B圖)、H1975(第27C圖)及cMET陰性細胞株SNU-1(第25A圖)之細胞毒性效力。細胞毒性結果綜合示於第25F、26B與27E圖。投藥劑量示於第25G、26C與27D圖。
所有位點專一性接合抗體在對抗MKN-45、SNU-620、SNU-5、SNU-16、NCI-N87與H1975細胞株時，均顯示類似隨機偶聯之hD12-II對照組之細胞毒性。由於H1373與H1573細胞株之複雜消滅曲線與S形曲線顯著不同，因此無法測定位點專一性接合物之EC50。該消滅曲線之複雜形狀在位點專一性 接合物上更顯著，因此重覆兩次實驗。總言之，位點專一性hD12接合物之細胞毒性似乎優於隨機接合之hD12-II。
實例9-位點專一性接合物之活體內異種移植物分析
於H1975(中度cMET表現)異種移植物腫瘤模式中分析位點專一性接合物hD12-T289C-II、hD12-V442C-II與hD12-V282C-II及隨機偶聯之hD12-II。使用登蘇單抗-II作為陰性對照組。為每隻小鼠接種H1975細胞(第0天)後，使用其中一種指定抗體-藥物接合物或使用PBS處理。抗體-藥物接合物係於接種腫瘤細胞後第14天，經i.v.尾靜脈注射投藥一次。每種抗體-藥物接合物測試兩種不同劑量(0.5mg/kg與0.125mg/kg)。每種處理測定10隻小鼠。每週3次測量腫瘤體積與重量。H1975於活體內異種移植物試驗中之結果示於第28A-28C圖。
所有使用位點專一性ADC與隨機偶聯II之高劑量組(0.5mg/kg)均在H1975模式中顯示高效力。腫瘤完全消退(第28A-28C圖)。低劑量組(0.125mg/kg)顯示使用hD12-II(隨機)與hD12-T289C-II，使腫瘤消退，其中以hD12-V422C-II最有效。hD12-V282C-II之效力最低。登蘇單抗對照組在高劑量顯示中度效力，此結果亦出現在先前使用隨機接合之ADC進行之H1975模式中。所有投與之試驗物質均有良好耐受性，未觀察到顯著體重下降(第29圖)。
實例10-使用hD12位點專一性接合物之大鼠之藥物藥物動力學(總抗體檢測)
分析位點專一性hD12接合物：hD12-V422C-II、hD12-V282C-II與hD12-T289C-II在大鼠中之循環半衰期連續21天。每組大鼠(3隻大鼠/組)經i.v.注射接受一劑指定之抗體-藥物接合物1mg/kg(第30圖)。在注射後0.5hr、2hr、6hr、 24hr、48hr、72hr、168hr、312hr、與480hr抽血。於PK ELISA中，使用捕捉抗體(抗Fc-專一性)與山羊抗-人類IgG(H+L)-HRP檢測抗體，分析血清樣本中抗體含量。結果綜合說明於第31圖。採用WinNonlin軟體測定位點專一性接合物之藥物動力學(PK)參數。所有3種位點專一性接合物均顯示類似形狀之濃度-時間曲線。計算之半衰期在12至18天之間。無法僅依據總抗體藥物動力學數據來區分變體。依據此實驗結果，hD12-V422C-II、hD12-V282C-II與hD12-T289C-II之間沒有顯著藥物動力學差異。
實例11-非人類靈長類耐受性
於非人類靈長類中，測試至高1mg/kg之隨機偶聯hD12-II與位點專一性變體hD12-V282C-II與hD12-T289C-II之耐受性。通常，所有抗體-藥物接合物均可以良好耐受。試驗結束時(第21天)沒有觀察到嚴重的體重下降。
實例12-PDX模式、方法與結果
以患者衍生之異種移植物(PDX)為癌症模式，其中由來自患者腫瘤之組織或細胞植入免疫缺陷小鼠中。經常利用PDX模式來建立類似癌症自然生長之環境，供研究癌症之進程與治療。進行多種Crown Bio HuPrime(註冊商標)胃、結腸直腸與頭與頸(H&N)PDX模式，來評估hD12-T289C-II之效力。所選擇PDX模式係在其c-Met表現範圍內(低度至高度)。
簡言之，在14-15週齡之雌性BALB/c裸小鼠右腹側，經皮下接種原發性人類腫瘤片段(胃、結腸直腸或H&N癌症，尺寸為2-3mm)，供腫瘤發展。當腫瘤尺寸到達平均體積200mm3時，小鼠隨機分組(6個處理組)。每組由10隻小鼠組成。從第0天開始，在帶腫瘤之小鼠中，經i.v.投與一劑試驗物。若需要時，則投與第二劑。由連接化學式II負載藥物之非靶向性抗體(蘇金單抗)(蘇 金單抗-II)依1mg/kg之劑量投與。hD12-T289C-II係投與一劑1.0mg/kg、0.5mg/kg、0.25與0.125mg/kg，除非第34圖中另有說明。媒劑對照組係經i.v.投與一劑1x PBS。
經過隨機分組後，每週兩次，利用卡尺測量腫瘤的二維尺寸。由TV=0.5a x b2計算腫瘤體積(mm3)，其中a與b為腫瘤表面之長與短直徑。測量體重，並隨腫瘤測定值更新。
然後依據下列公式，採用腫瘤尺寸計算TGI%：TGI%=((平均值(C)-平均值(C0))-(平均值(T)-平均值(T0))/(平均值(C)-平均值(C0)) * 100%，其中T-目前組之數值；T0-目前組之初始值；C-對照組數值；C0-對照組初始值。
PDX試驗結果示於第32與33圖。每個數據點代表1組PDX模式，由10隻已接種單一PDX腫瘤之小鼠組成。如上述計算TGI%。小鼠接受媒劑(PBS)或蘇金單抗-II處理，作為陰性對照組。隨時間(亦即天數，x-軸)測定腫瘤體積(y-軸)(第33C圖)。第32與33圖之結果顯示hD12-T289C-II隨劑量變化之方式，有效抑制由胃、結腸直腸或H&N癌症衍生之人類腫瘤組織生長。
實例13
人類個體在肝臟與肺臟出現2cm或更大之多重轉移癌瘤。進行活體組織切片，以測定該癌瘤之細胞是否在其等細胞表面表現cMET。由活體組織切片結果證實存在細胞表面cMET表現。
對該人類個體投與會與人類cMET之胞外域專一性結合之本文說明之結合劑-藥物接合物。該結合劑可視需要包含人類κ與IgG2重鏈恆定區、輕鏈可變區SEQ ID NO：41與重鏈可變區SEQ ID NO：98。該結合劑-藥物接合物係經靜脈內投與劑量15mg/kg，體積100ml，歷經1小時，一天一次，連續6 週。藉由活體組織切片與超音波追蹤測定腫瘤之存在、尺寸與活力。經過2週處理後，腫瘤尺寸與數量已大幅下降。在處理6週後，測定個體已緩解。
實例14
人類個體患有結腸直腸腺癌，帶有直徑2cm之實體腫瘤。對該人類個體投與本文說明之結合劑-藥物接合物。該結合劑-藥物接合物之結合劑為IgG2同型之單株抗體人源化抗體，其包含輕鏈可變區SEQ ID NO：47與人源化重鏈可變區SEQ ID NO：108。該結合劑-藥物接合物之藥物為具有化學式II之結構式之負載藥物。該結合劑之投藥劑量為靜脈內投與1mg/kg，體積50ml，歷經30分鐘，一天一次，連續6週。經過2週處理後，腫瘤尺寸縮小50%以上。在處理6週後，測定個體已緩解。
實例15-cMET序列
SEQ ID NO：109(人類cMET-UniProtKB-P08581(MET_HUMAN))。*殘基E168與N375以粗字體及下加線表示。
Figure TW201946656A_D0069
Figure TW201946656A_D0070
SEQ ID NO：110(大鼠cMET-UniProtKB-P97523(MET_RAT))
Figure TW201946656A_D0071
Figure TW201946656A_D0072
SEQ ID NO：111(小鼠cMET-UniProtKB-P16056(MET_MOUSE))
Figure TW201946656A_D0073
Figure TW201946656A_D0074
SEQ ID NO：112(狗cMET)
Figure TW201946656A_D0075
Figure TW201946656A_D0076
SEQ ID NO：113(普通獼猴(Macaca mulatta)，恆河猴cMET_NCBI參考序列：NP_001162100.1)
Figure TW201946656A_D0077
Figure TW201946656A_D0078
實例16-人源化單株抗體hD12
SEQ ID NO：114 hD12之重鏈序列
Figure TW201946656A_D0079
Figure TW201946656A_D0080
SEQ ID：115 hD12之輕鏈序列
Figure TW201946656A_D0081
SEQ ID NO：116 hD12 T289C之重鏈序列(殘基C289係下加線)
Figure TW201946656A_D0082
所摘錄之各專利案、專利申請案、公開案或任何其他參考文獻或文件之完整內容已以引用之方式併入本文中。若有抵觸，將以說明書(包括定義)主導。
所摘錄之任何專利案、專利申請案、公開案或任何其他文件並不表示認可上述任一者為相關之先前技藝，亦不表示其構成任何認可此等公開案或文件之內容或日期。
除非另有說明，否則本文所採用所有技術與科學術語均具有熟悉本發明所屬相關領域之人士咸了解之相同定義。雖然本文說明合適之方法與材料，但仍可採用與彼等本文說明之類似或相同方法及材料來操作或試驗本發明。
本文揭示之所有特色均可依任何方式組合。說明書中揭示之各特色可改用可提供相同、同等、或類似目的之替代特色置換。因此除非另有說明，否則所揭示之特色(例如，抗體)係一類同等或類似特色之實例之一。
本文所採用所有數值或數字範圍包括此等範圍內之整數及範圍內數值或整數之分數，除非本文中另有明確說明。此外，當本文說明中列出數值(例如，約50%、60%、70%、80%、85%或86%)時，該表列包括所有中間值與其分數(例如，54%、85.4%)。因此，為了說明，提及80%或更高之同一性時，包括81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94% etc.,as well as 81.1%、81.2%、81.3%、81.4%、81.5%等等，82.1%、82.2%、82.3%、82.4%、82.5%等等，及依此類推。
所提及超過(大於)或小於某整數時，分別包括大於或小於該所提及數字之任何數字。因此例如，提及小於100時，包括99、98、97等等，一直到數字一(1)；及小於10時，則包括9、8、7等等，一直到數字一(1)。
本文所採用所有數值或範圍包括此等範圍內數值與整數之分數，及此等範圍內整數之分數，除非本文中另有明確說明。因此為了說明，所提及之數字範圍如：1-10，包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、及1.1、1.2、1.3、 1.4、1.5等等，依此類推。因此提及範圍1-50包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20等等，至高且包括50，及1.1、1.2、1.3、1.4、1.5等等，2.1、2.2、2.3、2.4、2.5等等，依此類推。
提及之一系列範圍包括該等系列內不同範圍之界限值之組合。因此為了說明所提及之一系列範圍，例如，1-10、10-20、20-30、30-40、40-50、50-60、60-75、75-100、100-150、150-200、200-250、250-300、300-400、400-500、500-750、750-1,000、1,000-1,500、1,500-2,000、2,000-2,500、2,500-3,000、3,000-3,500、3,500-4,000、4,000-4,500、4,500-5,000、5,500-6,000、6,000-7,000、7,000-8,000、或8,000-9,000，則包括範圍10-50、50-100、100-1,000、1,000-3,000、2,000-4,000等等。
上述內容可在不偏離技術之基本態樣下進行修飾。雖然已參照一或多項明確具體例詳細說明技術，但彼等習此相關技藝之人士咸了解，可在本申請書明確揭示之具體例中進行改變，同時此等修飾與改進均在該等技術之範圍與精神內。
本發明通常採用肯定式語言來說明數項具體例與態樣。本發明亦明確包括其中已完全或部分排除特定個別物資(如物質或材料)、方法步驟與條件、程序或製程之具體例。例如，本發明某些具體例或態樣中，已排除材料與/或方法步驟。因此雖然本發明通常不會以本發明未包括之術語來表示，但本文仍將揭示未表示排除在本發明以外之態樣。
本文說明之技術可在沒有本文所揭示任何元素(群)下操作。因此例如，本文各例中，任何術語「包括」、「基本上其組成為」與「其組成為」其中之一可改用任何其他兩種術語置換。本文所採用術語與表示法係供說明之術 語，並沒有限制，且此等術語與表示法不排除所顯示及所說明特色或其一部份之任何同等物，且此等不同修飾均在所主張技術範圍內。術語「一個」或「一種」可指其所形容元素之一或複數(例如，「一種試劑」可指一或多種試劑)，除非本文中另有明確說明其係一種元素或超過一種元素。本文所採用術語「約」係指在所指示參數之10%內之數值(亦即加或減10%)，及用在一連串數值開始前之術語「約」係形容各數值(亦即「約1、2與3」係指約1、約2與約3)。例如，重量「約100克」可包括在90克與110克之間之重量。本文所採用術語「實質上」係指該形容之數值意義為「至少95%」、「至少96%」、「至少97%」、「至少98%」、「至少99%」，且可包括100%。例如，一種實質上不含X之組成物可能包括小於5%、小於4%、小於3%、小於2%、或小於1%之X，且/或該組成物中之X可能不存在或無法檢測。
因此咸了解，雖然本技術已採用代表性具體例及選用之特色明確揭示，但彼等習此相關技藝者仍可在本文揭示之觀念下進行修飾與變化，且此等修飾與變化均被視為此技術範圍內。
【生物材料寄存】
【寄存國家】US美國
【寄存機構】ATCC美國菌種中心
【寄存日期】2019/03/20
【寄存號碼】PTA-125826
<110> 田邊三菱製藥股份有限公司
<120> cMET單株抗體結合劑的藥物接合物及其用途
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<400> 17 000
<210> 18
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 18
Figure TW201946656A_D0100
<210> 19
<400> 19 000
<210> 20
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 20
Figure TW201946656A_D0101
<210> 21
<400> 21 000
<210> 22
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 22
Figure TW201946656A_D0102
<210> 23
<400> 23 000
<210> 24
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 24
Figure TW201946656A_D0103
<210> 25
<400> 25 000
<210> 26
<211> 20
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 26
Figure TW201946656A_D0104
<210> 27
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 27
Figure TW201946656A_D0105
<210> 28
<211> 20
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 28
Figure TW201946656A_D0106
<210> 29
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 29
Figure TW201946656A_D0107
<210> 30
<211> 19
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 30
Figure TW201946656A_D0108
<210> 31
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 31
Figure TW201946656A_D0109
<210> 32
<211> 19
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 32
Figure TW201946656A_D0110
<210> 33
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 33
Figure TW201946656A_D0111
<210> 34
<211> 19
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 34
Figure TW201946656A_D0112
<210> 35
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 35
Figure TW201946656A_D0113
<210> 36
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> Xaa為His、Gln或Gly
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(3)
<223> Xaa為Trp、Ser或Tyr
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(4)
<223> Xaa為Ser或Tyr
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(5)
<223> Xaa為Ser或Thr
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(8)
<223> Xaa為Pro或Leu
<400> 36
Figure TW201946656A_D0114
<210> 37
<211> 113
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 37
Figure TW201946656A_D0115
Figure TW201946656A_D0116
<210> 38
<211> 108
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 38
Figure TW201946656A_D0117
<210> 39
<211> 114
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 39
Figure TW201946656A_D0118
Figure TW201946656A_D0119
<210> 40
<211> 110
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 40
Figure TW201946656A_D0120
<210> 41
<211> 109
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 41
Figure TW201946656A_D0121
<210> 42
<211> 109
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 42
Figure TW201946656A_D0122
Figure TW201946656A_D0123
<210> 43
<211> 109
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 43
Figure TW201946656A_D0124
<210> 44
<211> 108
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (38)..(38)
<223> Xaa為His或Gln
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (61)..(61)
<223> Xaa為Ala或Arg
<400> 44
Figure TW201946656A_D0125
<210> 45
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化輕鏈
<400> 45
Figure TW201946656A_D0126
Figure TW201946656A_D0127
<210> 46
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化輕鏈
<400> 46
Figure TW201946656A_D0128
<210> 47
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化輕鏈
<400> 47
Figure TW201946656A_D0129
Figure TW201946656A_D0130
<210> 48
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化輕鏈
<400> 48
Figure TW201946656A_D0131
Figure TW201946656A_D0132
<210> 49
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化輕鏈
<400> 49
Figure TW201946656A_D0133
<210> 50
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 50
Figure TW201946656A_D0134
<210> 51
<211> 8
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 51
Figure TW201946656A_D0135
<210> 52
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 52
Figure TW201946656A_D0136
<210> 53
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 53
Figure TW201946656A_D0137
<210> 54
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 54
Figure TW201946656A_D0138
<210> 55
<211> 8
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 55
Figure TW201946656A_D0139
<210> 56
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 56
Figure TW201946656A_D0140
<210> 57
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 57
Figure TW201946656A_D0141
<210> 58
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 58
Figure TW201946656A_D0142
<210> 59
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 59
Figure TW201946656A_D0143
<210> 60
<211> 8
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> Xaa為Asp或Ser
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (8)..(8)
<223> Xaa為Asn或Trp
<400> 60
Figure TW201946656A_D0144
<210> 61
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<220>
<221> misc_feature
<222> (2)..(2)
<223> Xaa為Tyr或Phe
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> Xaa為Asp或Ser
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(8)
<223> Xaa為Asn、Trp或Tyr
<220>
<221> misc_feature
<222> (10)..(10)
<223> Xaa為His或Ser
<400> 61
Figure TW201946656A_D0145
<210> 62
<211> 16
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 62
Figure TW201946656A_D0146
<210> 63
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 63
Figure TW201946656A_D0147
<210> 64
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 64
Figure TW201946656A_D0148
Figure TW201946656A_D0149
<210> 65
<211> 8
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 65
Figure TW201946656A_D0150
<210> 66
<211> 19
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 66
Figure TW201946656A_D0151
<210> 67
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 67
Figure TW201946656A_D0152
<210> 68
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 68
Figure TW201946656A_D0153
<210> 69
<211> 8
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 69
Figure TW201946656A_D0154
<210> 70
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 70
Figure TW201946656A_D0155
<210> 71
<211> 8
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 71
Figure TW201946656A_D0156
<210> 72
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 72
Figure TW201946656A_D0157
<210> 73
<211> 8
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 73
Figure TW201946656A_D0158
<210> 74
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 74
Figure TW201946656A_D0159
<210> 75
<211> 8
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 75
Figure TW201946656A_D0160
<210> 76
<211> 8
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(8)
<223> Xaa為Ile或Thr
<400> 76
Figure TW201946656A_D0161
<210> 77
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> Xaa為Tyr或Asp
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(3)
<223> Xaa為Lys或Asn
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(8)
<223> Xaa為Asn或Tyr
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> Xaa為Thr或Ile
<220>
<221> misc_feature
<222> (12)..(12)
<223> Xaa為Ala或Asn
<220>
<221> misc_feature
<222> (16)..(16)
<223> Xaa為Gln或Lys
<220>
<221> misc_feature
<222> (17)..(17)
<223> Xaa為Gly或Asp
<400> 77
Figure TW201946656A_D0162
<210> 78
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 78
Figure TW201946656A_D0163
<210> 79
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 79
Figure TW201946656A_D0164
<210> 80
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 80
Figure TW201946656A_D0165
<210> 81
<211> 18
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 81
Figure TW201946656A_D0166
<210> 82
<211> 16
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 82
Figure TW201946656A_D0167
<210> 83
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 83
Figure TW201946656A_D0168
<210> 84
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 84
Figure TW201946656A_D0169
<210> 85
<211> 18
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 85
Figure TW201946656A_D0170
<210> 86
<211> 16
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 86
Figure TW201946656A_D0171
<210> 87
<211> 13
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 87
Figure TW201946656A_D0172
<210> 88
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 88
Figure TW201946656A_D0173
<210> 89
<211> 13
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 89
Figure TW201946656A_D0174
<210> 90
<211> 13
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 90
Figure TW201946656A_D0175
<210> 91
<211> 11
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 91
Figure TW201946656A_D0176
<210> 92
<211> 13
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<220>
<221> misc_feature
<222> (2)..(2)
<223> Xaa為Ala或Val
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(8)
<223> Xaa為Phe或Tyr
<400> 92
Figure TW201946656A_D0177
<210> 93
<211> 11
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> Xaa為Phe或Tyr
<400> 93
Figure TW201946656A_D0178
<210> 94
<211> 117
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 94
Figure TW201946656A_D0179
<210> 95
<211> 118
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 95
Figure TW201946656A_D0180
Figure TW201946656A_D0181
<210> 96
<211> 127
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 96
Figure TW201946656A_D0182
Figure TW201946656A_D0183
<210> 97
<211> 127
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 97
Figure TW201946656A_D0184
<210> 98
<211> 119
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 98
Figure TW201946656A_D0185
Figure TW201946656A_D0186
<210> 99
<211> 119
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 99
Figure TW201946656A_D0187
Figure TW201946656A_D0188
<210> 100
<211> 119
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 100
Figure TW201946656A_D0189
<210> 101
<211> 119
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 101
Figure TW201946656A_D0190
Figure TW201946656A_D0191
<210> 102
<211> 119
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 102
Figure TW201946656A_D0192
Figure TW201946656A_D0193
<210> 103
<211> 119
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<220>
<221> misc_feature
<222> (23)..(23)
<223> Xaa為Lys或Arg
<220>
<221> misc_feature
<222> (46)..(46)
<223> Xaa為Glu或Asp
<220>
<221> misc_feature
<222> (52)..(52)
<223> Xaa為Lys或Asn
<220>
<221> misc_feature
<222> (57)..(57)
<223> Xaa為Tyr或Asn
<220>
<221> misc_feature
<222> (58)..(58)
<223> Xaa為Thr或Ile
<220>
<221> misc_feature
<222> (77)..(77)
<223> Xaa為Ser或Thr
<220>
<221> misc_feature
<222> (97)..(97)
<223> Xaa為Ala或Val
<220>
<221> misc_feature
<222> (103)..(103)
<223> Xaa為Tyr或Phe
<400> 103
Figure TW201946656A_D0194
Figure TW201946656A_D0195
<210> 104
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化重鏈
<400> 104
Figure TW201946656A_D0196
Figure TW201946656A_D0197
<210> 105
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化重鏈
<400> 105
Figure TW201946656A_D0198
<210> 106
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化重鏈
<400> 106
Figure TW201946656A_D0199
<210> 107
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化重鏈
<400> 107
Figure TW201946656A_D0200
Figure TW201946656A_D0201
<210> 108
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化重鏈
<400> 108
Figure TW201946656A_D0202
<210> 109
<211> 1390
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 109
Figure TW201946656A_D0203
Figure TW201946656A_D0204
Figure TW201946656A_D0205
Figure TW201946656A_D0206
Figure TW201946656A_D0207
Figure TW201946656A_D0208
Figure TW201946656A_D0209
<210> 110
<211> 1382
<212> PRT
<213> 大鼠(Rattus norvegicus)
<400> 110
Figure TW201946656A_D0210
Figure TW201946656A_D0211
Figure TW201946656A_D0212
Figure TW201946656A_D0213
Figure TW201946656A_D0214
Figure TW201946656A_D0215
Figure TW201946656A_D0216
<210> 111
<211> 1379
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 111
Figure TW201946656A_D0217
Figure TW201946656A_D0218
Figure TW201946656A_D0219
Figure TW201946656A_D0220
Figure TW201946656A_D0221
Figure TW201946656A_D0222
Figure TW201946656A_D0223
<210> 112
<211> 1382
<212> PRT
<213> 狼(Canis lupus)
<400> 112
Figure TW201946656A_D0224
Figure TW201946656A_D0225
Figure TW201946656A_D0226
Figure TW201946656A_D0227
Figure TW201946656A_D0228
Figure TW201946656A_D0229
Figure TW201946656A_D0230
<210> 113
<211> 1381
<212> PRT
<213> 恆河獼猴(Macaca mulatta)
<400> 113
Figure TW201946656A_D0231
Figure TW201946656A_D0232
Figure TW201946656A_D0233
Figure TW201946656A_D0234
Figure TW201946656A_D0235
Figure TW201946656A_D0236
Figure TW201946656A_D0237
<210> 114
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hD12的重鏈序列
<400> 114
Figure TW201946656A_D0238
Figure TW201946656A_D0239
Figure TW201946656A_D0240
<210> 115
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hD12的輕鏈序列
<400> 115
Figure TW201946656A_D0241
Figure TW201946656A_D0242
<210> 116
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hD12 T289C的重鏈序列
<400> 116
Figure TW201946656A_D0243
Figure TW201946656A_D0244
Figure TW201946656A_D0245

Claims (79)

  1. 一種結合劑-藥物接合物，其包含結合劑與負載藥物，其中該結合劑包含：(i)CDR-L1、CDR-L2與CDR-L3中二者或更多者，其等係輕鏈互補決定區(CDR-L)之多肽序列，其中該CDR-L1係選自胺基酸序列SEQ ID NO：1-15；CDR-L2係選自胺基酸序列SEQ ID NO：16-25；CDR-L3係選自胺基酸序列SEQ ID NO：26-36，及(ii)CDR-H1、CDR-H2、與CDR-H3中二者或更多者，其等係重鏈互補決定區(CDR-H)之多肽序列，其中CDR-H1係選自胺基酸序列SEQ ID NO：50-61；CDR-H2係選自胺基酸序列SEQ ID NO：62-78；CDR-H3係選自胺基酸序列SEQ ID NO：79-93；及負載藥物包含吡咯并苯并二氮呯毒素與連接基；其中吡咯并苯并二氮呯毒素係與連接基共價連接，連接基係與結合劑共價連接，而結合劑係與間質-上皮轉化因子(cMET)之胞外域專一性結合。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之結合劑-藥物接合物，其中該吡咯并苯并二氮呯毒素包含化學式I之結構：
    Figure TW201946656A_C0001
     其中 Z 1與Z 2二者均為N；Z 3與Z 4二者均為C；雙虛線
    Figure TW201946656A_C0002
    代表單鍵或雙鍵；n為1至10；各R 3與R 4獨立地為H、或C 1-4烷氧基；各R 1與R 2獨立地選自下列者所成群組：H、C 1-5烷基、C 3-6環烷基、C 2-5烯基、與視需要經R 5取代之苯基，其中R 5係選自下列者所成群組：-NH 2、-NHR 6、及經具有如下結構R 7取代之哌
    Figure TW201946656A_C0003
    基，
    Figure TW201946656A_C0004
     其中R 6包含連接基，R 7為H、或C 1-5烷基；X 1為空值、保護基、或包含連接基；X 2為空值、保護基、或包含連接基；X 1、X 2、R 1、與R 2中僅一者包含連接基；各Y 1與Y 2獨立地為空值、OH、或SO 3H；但其條件為：(i)當X 1包含連接基時，Z 1
    Figure TW201946656A_C0005
    Z 3為N-C，(ii)當X 2包含連接基時，Z 2
    Figure TW201946656A_C0006
    Z 4為N-C，(iii)當X 1包含保護基時，Z 1
    Figure TW201946656A_C0007
    Z 3為N-C，及(iv)當X 2包含保護基時，Z 2
    Figure TW201946656A_C0008
    Z 4為N-C，其中空值表示該部份體不存在或存在一個或多個氫，以滿足所要求之價數。
  3. 如申請專利範圍第2項所述之結合劑-藥物接合物，其中n為3、4或5。
  4. 如申請專利範圍第2或3項所述之結合劑-藥物接合物，其中R 3與R 4二者均為-O-CH 3。
  5. 如申請專利範圍第2至4項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中R 1與R 2二者均為甲基。
  6. 如申請專利範圍第2至4項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中R 1與R 2二者均為-CH=CH-CH 3。
  7. 如申請專利範圍第2至4項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中R 2為環丙基。
  8. 如申請專利範圍第2至4項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中R 2為經4-甲基哌
    Figure TW201946656A_C0009
    -1-基取代之苯基。
  9. 如申請專利範圍第7或8項所述之結合劑-藥物接合物，其中R 1為視需要經R 5取代之苯基，R 5為-NHR 6，R 6包含連接基。
  10. 如申請專利範圍第2至9項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中X 1為空值，Y 1為空值，Z 1
    Figure TW201946656A_C0010
    Z 3為N=C，X 2為空值，Y 2為空值，Z 2
    Figure TW201946656A_C0011
    Z 4為N=C。
  11. 如申請專利範圍第2至8項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中X 1包含連接基，Y 1為OH，Z 2
    Figure TW201946656A_C0012
    Z 4為N=C，X 2為空值，Y 2為空值。
  12. 如申請專利範圍第2至8項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中X 1包含連接基，Y 1為OH，Z 2
    Figure TW201946656A_C0013
    Z 4為N-C，X 2為保護基，Y 2為OH。
  13. 如申請專利範圍第1至12項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中該連接基係利用胺甲酸根基團附接至吡咯并苯并二氮呯毒素。
  14. 如申請專利範圍第1至12項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中該連接基係利用醯胺基附接至吡咯并苯并二氮呯毒素。
  15. 如申請專利範圍第1至14項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中該連接基包含化學式A之結構：
    Figure TW201946656A_C0014
     其中星號表示與吡咯并苯并二氮呯毒素之附接點；波浪線表示與結合劑之附接點；m為1至20；q為0至10；E為連結基。
  16. 如申請專利範圍第15項所述之結合劑-藥物接合物，其中m為4或8。
  17. 如申請專利範圍第15或16項所述之結合劑-藥物接合物，其中q為0、1或2。
  18. 如申請專利範圍第15項所述之結合劑-藥物接合物，其中m為8，q為2。
  19. 如申請專利範圍第1至14項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中該連接基包含化學式B之結構，
    Figure TW201946656A_C0015
     其中星號表示與吡咯并苯并二氮呯毒素之附接點；波浪線表示與結合劑之附接點；E為連結基；v為0至10；u為0或1；其中當u為1時，t為1至10。
  20. 如申請專利範圍第19項所述之結合劑-藥物接合物，其中v為1。
  21. 如申請專利範圍第19或20項所述之結合劑-藥物接合物，其中u為1，t為8。
  22. 如申請專利範圍第19項所述之結合劑-藥物接合物，其中u為0，v為4。
  23. 如申請專利範圍第15至22項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中該結合劑係藉由結合劑之半胱胺酸硫醇殘基與E之間形成之硫醚鍵與E連結。
  24. 如申請專利範圍第15至23項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中E包含化學式C之結構，
    Figure TW201946656A_C0016
     其中波浪線表示與結合劑之附接點，雙星號表示與連接基之附接點。
  25. 如申請專利範圍第2至24項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中該保護基具有下列結構(D)，
    Figure TW201946656A_C0017
     其中星號表示與吡咯并苯并二氮呯毒素之附接點；w為1至5。
  26. 如申請專利範圍第25項所述之結合劑-藥物接合物，其中w為2。
  27. 如申請專利範圍第2至26項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中該保護基為可裂解之保護基。
  28. 如申請專利範圍第1項所述之結合劑-藥物接合物，其中該負載藥物包含選自下列各者所成群組之結構：
    Figure TW201946656A_C0018
     其中m為8；
    Figure TW201946656A_C0019
     其中m為8，p為3，X 2為保護基；
    Figure TW201946656A_C0020
     其中m為8；
    Figure TW201946656A_C0021
     其中t為8，v為1；及
    Figure TW201946656A_C0022
     其中波浪線表示與結合劑之附接點。
  29. 如申請專利範圍第28項所述之結合劑-藥物接合物其中該X 2之保護基具有下列結構(D)，
    Figure TW201946656A_C0023
     其中星號表示與負載藥物之附接點；w為1至5。
  30. 如申請專利範圍第1至29項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中該CDR-L1係選自胺基酸序列SEQ ID NO：2、4、6、8、9、10、12、14與15。
  31. 如申請專利範圍第1至30項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中該CDR-L2係選自胺基酸序列SEQ ID NO：17、19、21、23、24與25。
  32. 如申請專利範圍第1至31項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中該CDR-L3係選自胺基酸序列SEQ ID NO：27、29、31、33、34與35。
  33. 如申請專利範圍第1至32項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中該CDR-H1係選自胺基酸序列SEQ ID NO：51、53、55、57、58與59。
  34. 如申請專利範圍第1至33項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中該CDR-H2係選自胺基酸序列SEQ ID NO：63、65、67、69、70、71、73、75與78。
  35. 如申請專利範圍第1至34項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中該CDR-H3係選自胺基酸序列SEQ ID NO：80、82、84、86、87、88、91與93。
  36. 如申請專利範圍第1至35項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中該結合劑為抗體、或其結合片段。
  37. 如申請專利範圍第36項所述之結合劑-藥物接合物，其中該結合劑為單株抗體、或其結合片段。
  38. 如申請專利範圍第1至37項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中該結合劑包含IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4之恆定區。
  39. 如申請專利範圍第38項所述之結合劑-藥物接合物，其中該結合劑包含IgG2之恆定區。
  40. 如申請專利範圍第1至37項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中該結合劑包含IgD、IgE、IgA或IgM之恆定區。
  41. 如申請專利範圍第1至40項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中該結合劑係經人源化。
  42. 如申請專利範圍第1至41項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中該結合劑包含至少一個人源化或人類框架區。
  43. 如申請專利範圍第42項所述之結合劑-藥物接合物，其中該結合劑包含至少三個人源化或人類框架區。
  44. 如申請專利範圍第1至43項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中該結合劑包含至少一個小鼠框架區。
  45. 如申請專利範圍第44項所述之結合劑-藥物接合物，其中該結合劑包含至少三個小鼠框架區。
  46. 如申請專利範圍第1至45項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中該結合劑為抗體之Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv或scFV片段。
  47. 如申請專利範圍第1至46項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中該結合劑係由單鏈多肽組成。
  48. 如申請專利範圍第1至47項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中該結合劑包含具有選自胺基酸序列SEQ ID NO：37-44之胺基酸序列之可變輕鏈區。
  49. 如申請專利範圍第1至48項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中該結合劑包含具有選自胺基酸序列SEQ ID NO：94-103之胺基酸序列之可變重鏈區。
  50. 如申請專利範圍第1至49項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中該結合劑包含輕鏈序列，該輕鏈序列與SEQ ID NO：46-49中任一胺基酸序列具有至少90%序列同一性、或100%序列同一性。
  51. 如申請專利範圍第1至50項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中該結合劑包含重鏈序列，該重鏈序列與SEQ ID NO：105-108中任一胺基酸序列具有至少90%序列同一性、或100%序列同一性。
  52. 如申請專利範圍第50或51項所述之結合劑-藥物接合物，其中該輕鏈序列或重鏈序列包含1至5個選自胺基酸加成、胺基酸缺失、與胺基酸取代之胺基酸修飾。
  53. 如申請專利範圍第1至52項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中該結合劑誘發人類癌細胞之cMET內化。
  54. 如申請專利範圍第1至53項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中該結合劑誘發人類癌細胞之cMET降解。
  55. 如申請專利範圍第1至54項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中該結合劑不為cMET促效劑。
  56. 如申請專利範圍第1至55項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中該結合劑係專一性結合哺乳動物cMET。
  57. 如申請專利範圍第56項所述之結合劑-藥物接合物，其中該哺乳動物cMET為人類cMET、猴子cMET或大鼠cMET。
  58. 如申請專利範圍第57項所述之結合劑-藥物接合物，其中該結合劑係專一性結合人類cMET。
  59. 如申請專利範圍第57或58項所述之結合劑-藥物接合物，其中該結合劑係專一性結合人類cMET、猴子cMET與大鼠cMET。
  60. 如申請專利範圍第1至59項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中該結合劑係專一性結合野生型cMET之胞外域。
  61. 如申請專利範圍第1至60項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中該結合劑係專一性結合cMET變體之胞外域。
  62. 如申請專利範圍第61項所述之結合劑-藥物接合物，其中該cMET變體包含cMET之E168D或N375S變體。
  63. 如申請專利範圍第1至62項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中結合劑中至少一個胺基酸突變成半胱胺酸，且半胱胺酸係利用硫醇醚鍵與連接基共價連接。
  64. 如申請專利範圍第1至63項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中該結合劑包含：CDR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：10或14；CDR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：25；CDR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：35；CDR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：59；CDR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：71；及CDR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：88。
  65. 如申請專利範圍第64項所述之結合劑-藥物接合物，其中結合劑包含：CDR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：9或15；CDR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：24；CDR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：34；CDR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：58；CDR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：70或78；及CDR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：87。
  66. 如申請專利範圍第1至63項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中該結合劑包含：CDR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：9或10；CDR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：24或25；CDR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：34或35；CDR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：58或59；CDR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：70或71；與CDR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：87或88。
  67. 如申請專利範圍第1至66項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其具有包含選自SEQ ID NO：105、106、107與108胺基酸序列之重鏈可變區，及包含選自SEQ ID NO：46、47、48與49胺基酸序列之輕鏈可變區。
  68. 如申請專利範圍第1至67項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其中該輕鏈序列包含SEQ ID NO：47及該重鏈序列包含SEQ ID NO：108。
  69. 如申請專利範圍第1至68項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，其包含具有化學式(II)之結構之負載藥物，
    Figure TW201946656A_C0024
     其中m為8，波浪線表示與結合劑之硫醇基之附接點。
  70. 如申請專利範圍第69項所述之結合劑-藥物接合物，其中該結合劑包含：CDR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：9或10；CDR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：24或25；CDR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：34或35；CDR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：58或59；CDR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：70或71；與CDR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：87或88。
  71. 如申請專利範圍第69項所述之結合劑-藥物接合物，其中該結合劑包含SEQ ID NO：114或SEQ ID NO：116之重鏈與SEQ ID NO：115之輕鏈。
  72. 一種醫藥組成物，其包含如申請專利範圍第1至71項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，與醫藥上可接受之賦形劑、稀釋劑、添加劑或載劑。
  73. 一種治療患有贅瘤疾病或癌症之個體之方法，其包括：a)提供患有或疑似患有贅瘤疾病或癌症之個體；及b)對該個體投與醫療有效量之如申請專利範圍第1至71項中任一項所述之結合劑-藥物接合物，或如申請專利範圍第72項所述之組成物。
  74. 如申請專利範圍第73項所述之方法，其中結合劑-藥物接合物在投藥後，阻斷、抑制、緩解、消除、或壓制癌之生長、存活或轉移。
  75. 如申請專利範圍第73或74項所述之方法，其中結合劑-藥物接合物在投藥後，誘發有些或所有癌之死亡、壞死、或細胞凋亡。
  76. 如申請專利範圍第73至75項中任一項所述之方法，其中該贅瘤疾病或癌症包含癌瘤、肉瘤、神經母細胞瘤、膠質母細胞瘤、骨髓瘤、淋巴瘤、黑色素瘤、或實體腫瘤或軟組織腫瘤。
  77. 如申請專利範圍第76項所述之方法，其中該贅瘤疾病或癌症包含膀胱癌、乳癌、結腸直腸癌、胃癌、胰臟癌、食道癌、肝癌、肝細胞癌、下咽癌、肺癌、腺癌、卵巢癌或腎癌。
  78. 如申請專利範圍第76或77項所述之方法，其中該贅瘤疾病或癌症包含胰臟腺癌、胰臟神經內分泌癌、結腸直腸腺癌、小腸惡性病、膽管癌瘤、非小細胞肺癌(NSCLC)、甲狀腺癌瘤、食道或食道胃接合部(EGJ)癌症、胃腺癌、肝臟肝細胞癌瘤、頭與頸鱗狀細胞癌瘤、女性生殖道惡性病、乳房癌瘤、三陰性乳癌、肺小細胞癌瘤、卵巢表面上皮癌瘤、腹膜後腔或腹膜腔肉瘤、攝護腺腺癌、神經內分泌腫瘤、胃腸基底腫瘤、膠質母細胞瘤或非上皮卵巢癌。
  79. 一種結合劑-藥物接合物，其包含結合劑與負載藥物，其中該結合劑包含：重鏈與輕鏈，其分別具有之CDR係與於2019年3月20日寄存於ATCC之融合瘤細胞株F6B1P3D12所產生抗體之重鏈與輕鏈之各CDR相同，及該負載藥物包含吡咯并苯并二氮呯毒素與連接基；其中吡咯并苯并二氮呯毒素係與連接基共價連接，連接基係與結合劑共價連接，結合劑係與間質上皮轉化因子(cMET)之胞外域專一性結合。
TW108110753A 2018-03-28 2019-03-27 ｃＭＥＴ單株抗體結合劑的藥物接合物及其用途 TWI841555B (zh)

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