TW201829776A - 糖化反應液、糖化酵素組成物、糖的製造方法及乙醇的製造方法 - Google Patents

糖化反應液、糖化酵素組成物、糖的製造方法及乙醇的製造方法 Download PDF

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Abstract

本發明係關於將糖化纖維素及半纖維素中至少一方進行糖化之糖化反應液,其為含有纖維素及半纖維素的至少一方、糖化酵素、矽石(silica)或含有矽石的物質,與選自由下述一般式(1)所示多元醇化合物及其衍生物,及下述一般式(2)所示乙炔甘醇及其環氧烷加成物所成群的至少1種化合物(A)。且,化學式中之記號定義如說明書中所記載。

Description

糖化反應液、糖化酵素組成物、糖的製造方法及乙醇的製造方法
[0001] 本發明係關於糖化反應液、糖化酵素組成物、糖的製造方法及乙醇的製造方法。
[0002] 過去已知將含有纖維素或半纖維素的纖維素系生物質作為原料,製造出乙醇的纖維素系生物乙醇。   [0003] 作為由含有纖維素或半纖維素的纖維素系生物質生成所謂葡萄糖的糖之方法(糖化技術),雖已知有於纖維素系生物質中加入硫酸並使其水解的方法,但有著反應器之腐蝕或廢液處理的問題。又,例如已有提出使用於碳或沸石等載持磺酸基的固體酸觸媒使纖維素系生物質進行糖化的方法,但因有著固體彼此間的反應,其反應速度極慢,且有著難以將未反應殘渣與固體酸觸媒進行分離之問題。且,上述的任一方法皆難以控制水解,使反應過度進行,其結果糖自身會因分解而有降低糖之產率的問題。   [0004] 另一方面,亦已知有使用酵素進行糖化之方法(參照專利文獻1)。該方法為含有將原料以加壓熱水處理之熱水處理步驟、將該熱水處理物經機械式粉碎處理的機械式粉碎處理步驟及將該機械式粉碎物以酵素進行糖化處理的糖化處理步驟。然而,該方法中,以酵素進行糖化時的反應速度帷慢,亦有著所得之糖化液的濃度並非充分的問題。   [0005] 其中,亦有提出藉由將酵素載持於矽石系介孔體後使用,比溶解酵素之狀態,更可在高濃度下存在於反應系中,可更有效率地進行酵素反應之方法(參照專利文獻2)。然而,該方法中,有著將酵素於載體進行吸附固定化的步驟為必要之問題,又經固定化的酵素與未經固定化者相比較,有著反應效率降低40%~50%程度的顧慮之問題。且,因有著固體彼此間的反應,亦有著未反應殘渣與酵素被固定的載體之分離成為困難之問題。   [0006] 又,已知有混合矽石溶膠與酵素,作為矽膠後,經粉末化的固定化酵素(參照專利文獻3、4)。在如此固定化酵素下雖可進行酵素的回收,但反應效率本身為低。其他亦已知混合0.5μm~100μm的矽石粉末與酵素,將含有纖維素的植物纖維進行水解的方法,但混合矽石粉末之效果並不明確,有著未反應殘渣與懸浮的矽石粉末之分離變的困難之問題(參考專利文獻5)。   [0007] 且,亦有提出使用含有酵素與聚乙二醇或其衍生物等糖化反應促進劑,使纖維素系生物質進行糖化的方法(參照專利文獻6)。然而,該糖化反應促進劑有著所得之糖化液的濃度並未充分的問題。 [先前技術文獻] [專利文獻]   [0008]   [專利文獻1]日本特開2006-136263號公報   [專利文獻2]日本特開2009-125006號公報   [專利文獻3]日本特公昭63-2595號公報   [專利文獻4]日本特公昭63-21475號公報   [專利文獻5]日本特開平10-66594號公報   [專利文獻6]日本特公昭58-58078號公報
[發明所解決的問題]   [0009] 本發明係有鑑於上述事項者,以提供可藉由簡便步驟提高以酵素進行糖化反應之效率的糖化反應液、糖化酵素組成物、糖的製造方法及乙醇的製造方法作為目的。 [解決課題的手段]   [0010] 欲達成上述目的之本發明的第1態樣為,一種糖化反應液,其為將纖維素及半纖維素中至少一方進行糖化者,其特徵為含有前述纖維素及前述半纖維素中至少一方、糖化酵素、矽石或含有矽石的物質,與選自由下述一般式(1)所示多元醇化合物及其衍生物,及下述一般式(2)所示乙炔甘醇及其環氧烷加成物所成群的至少1種化合物(A)者;   [0011][0012] [一般式(1)中的R1 表示碳數1以上9以下的直鏈烷基,R2 及R3 各獨立表示氫原子、鹵素原子、醯基、乙醯基、醯胺基、胺基、烯丙基、芳基、醛基、碳數1以上6以下的直鏈或支鏈的烷基、碳數1以上6以下的伸烷基、碳數1以上6以下的烯基、碳數1以上6以下的烷氧基、胺基甲醯基、羧基、氰基、磺酸基、磺醯基、甲苯磺醯基、硝基、羥基、苯基、苯甲基、磷醯基或巰基,這些基可進一步具有取代基;R4 及R5 各獨立表示氫原子、醯基、乙醯基、醯胺基、烯丙基、芳基、醛基、碳數1以上6以下的直鏈或支鏈的烷基、碳數1以上6以下的伸烷基、碳數1以上6以下的烯基、胺基甲醯基、羧基、氰基、磺酸基、磺醯基、甲苯磺醯基、苯基、苯甲基或磷醯基,這些基可進一步具有取代基;又重複單位n為符合1以上500以下]。   [0013][0014] [一般式(2)中的R1 、R2 、R3 、及R4 各獨立表示主鏈的碳數為1以上10以下的飽和或不飽和之直鏈或支鏈的烷基或烯基,前述烷基或烯基可進一步具有取代基;又,A1 及A2 各獨立表示主鏈的碳數為2以上4以下的直鏈或支鏈的環氧烷基(但,環氧烷基的單末端之氧原子鍵結於氫原子,單末端的碳原子鍵結於氧原子者),環氧烷單位的加成莫耳數m及n的總和為符合0以上50以下]。   [0015] 欲達成上述目的的本發明之第2態樣為,如態樣1之糖化反應液,其中前述含有矽石的物質為矽藻土或矽砂。   [0016] 欲達成上述目的的本發明之第3態樣為,如態樣1或態樣2之糖化反應液,其中前述矽石或前述含有矽石的物質中之矽石與前述化合物(A)之質量比率(化合物(A)/矽石)為0.0001以上,1以下。   [0017] 欲達成上述目的的本發明之第4態樣為,如態樣1至態樣3之中任一態樣的糖化反應液,其中前述多元醇化合物為含有選自由2元醇、3元醇及4元醇的單體、二聚物、三聚物及低聚物以及聚烷二醇所成群的至少1種者。   [0018] 欲達成上述目的的本發明之第5態樣為,如態樣1至態樣4中任一態樣的糖化反應液,其中前述多元醇化合物的衍生物為含有選自由多元醇醚類及聚烷二醇醚類所成群的至少1種者。   [0019] 欲達成上述目的的本發明之第6態樣為,如態樣1至態樣5中任一態樣的糖化反應液,其中前述化合物(A)為含有選自由乙二醇、丙二醇、二丙二醇、三丙二醇、1,3-丁二醇、甘油、季戊四醇、聚乙二醇、聚丙二醇、丙二醇1-單甲基醚、2,4,7,9-四甲基-5-癸炔-4,7-二醇的環氧乙烷加成物(環氧乙烷加成莫耳數m+n=10)、2,4,7,9-四甲基-5-癸炔-4,7-二醇的環氧乙烷加成物(環氧乙烷加成莫耳數m+n=30)所成群的至少1種者。   [0020] 欲達成上述目的的本發明之第7態樣為,一種糖化酵素組成物,其為將纖維素及半纖維素的至少一方進行糖化者,其特徵為含有糖化酵素、矽石或含有矽石的物質,與選自下述一般式(1)所示多元醇化合物及其衍生物及下述一般式(2)所示乙炔甘醇及其環氧烷加成物所成群的至少1種化合物(A),前述矽石或前述含有矽石的物質中之矽石與前述化合物(A)之質量比率(化合物(A)/矽石)為0.0001以上,1以下;   [0021][0022] [一般式(1)中之R1 表示碳數1以上9以下的直鏈烷基,R2 及R3 各獨立表示氫原子、鹵素原子、醯基、乙醯基、醯胺基、胺基、烯丙基、芳基、醛基、碳數1以上6以下的直鏈或支鏈的烷基、碳數1以上6以下的伸烷基、碳數1以上6以下的烯基、碳數1以上6以下的烷氧基、胺基甲醯基、羧基、氰基、磺酸基、磺醯基、甲苯磺醯基、硝基、羥基、苯基、苯甲基、磷醯基或巰基,這些基可進一步具有取代基;R4 及R5 各獨立表示氫原子、醯基、乙醯基、醯胺基、烯丙基、芳基、醛基、碳數1以上6以下的直鏈或支鏈的烷基、碳數1以上6以下的伸烷基、碳數1以上6以下的烯基、胺基甲醯基、羧基、氰基、磺酸基、磺醯基、甲苯磺醯基、苯基、苯甲基或磷醯基,這些基可進一步具有取代基;又重複單位n為符合1以上500以下]。   [0023][0024] [一般式(2)中之R1 、R2 、R3 及R4 各獨立表示主鏈的碳數為1以上10以下的飽和或不飽和之直鏈或支鏈的烷基或烯基,前述烷基或烯基可進一步具有取代基;又,A1 及A2 各獨立表示主鏈的碳數為2以上4以下的直鏈或支鏈的環氧烷基(但,環氧烷基的單末端之氧原子鍵結於氫原子,單末端的碳原子鍵結於氧原子者),環氧烷單位的加成莫耳數m及n的總和為符合0以上50以下]。   [0025] 欲達成上述目的的本發明之第8態樣為,如態樣7所記載的糖化酵素組成物,其中前述含有矽石的物質為矽藻土或矽砂。   [0026] 欲達成上述目的的本發明之第9態樣為,如態樣7或態樣8之糖化酵素組成物,其中前述多元醇化合物為含有選自由2元醇、3元醇及4元醇之單體、二聚物、三聚物及低聚物以及聚烷二醇所成群的至少1種者。   [0027] 欲達成上述目的的本發明之第10態樣為,如態樣7至態樣9中任一態樣的糖化酵素組成物,其中前述多元醇化合物之衍生物為含有選自由多元醇醚類及聚烷二醇醚類所成群的至少1種者。   [0028] 欲達成上述目的的本發明之第11態樣為,如態樣7至態樣10中任一態樣的糖化酵素組成物,其中前述化合物(A)為含有選自由乙二醇、丙二醇、二丙二醇、三丙二醇、1,3-丁二醇、甘油、季戊四醇、聚乙二醇、聚丙二醇、丙二醇1-單甲基醚、2,4,7,9-四甲基-5-癸炔-4,7-二醇之環氧乙烷加成物(環氧乙烷加成莫耳數m+n=10)、2,4,7,9-四甲基-5-癸炔-4,7-二醇之環氧乙烷加成物(環氧乙烷加成莫耳數m+n=30)所成群的至少1種者。   [0029] 欲達成上述目的的本發明之第12態樣為,一種糖的製造方法,其為使用將纖維素及半纖維素的至少一方進行糖化的糖化反應液而製造糖者,其特徵為使用含有前述纖維素及前述半纖維素的至少一方、糖化酵素、矽石或含有矽石的物質,與選自由下述一般式(1)所示多元醇化合物及其衍生物,及下述一般式(2)所示乙炔甘醇及其環氧烷加成物所成群的至少1種化合物(A)之糖化反應液而製造糖者;   [0030][0031] [一般式(1)中之R1 表示碳數1以上9以下的直鏈烷基,R2 及R3 各獨立表示氫原子、鹵素原子、醯基、乙醯基、醯胺基、胺基、烯丙基、芳基、醛基、碳數1以上6以下的直鏈或支鏈的烷基、碳數1以上6以下的伸烷基、碳數1以上6以下的烯基、碳數1以上6以下的烷氧基、胺基甲醯基、羧基、氰基、磺酸基、磺醯基、甲苯磺醯基、硝基、羥基、苯基、苯甲基、磷醯基或巰基,這些基可進一步具有取代基。R4 及R5 各獨立表示氫原子、醯基、乙醯基、醯胺基、烯丙基、芳基、醛基、碳數1以上6以下的直鏈或支鏈的烷基、碳數1以上6以下的伸烷基、碳數1以上6以下的烯基、胺基甲醯基、羧基、氰基、磺酸基、磺醯基、甲苯磺醯基、苯基、苯甲基或磷醯基,這些基可進一步具有取代基;又重複單位n為符合1以上500以下]。   [0032][0033] [一般式(2)中之R1 、R2 、R3 、及R4 各獨立表示主鏈的碳數為1以上10以下的飽和或不飽和之直鏈或支鏈的烷基或烯基,前述烷基或烯基可進一步具有取代基;又,A1 及A2 各獨立表示主鏈的碳數為2以上4以下的直鏈或支鏈之環氧烷基(但,環氧烷基的單末端之氧原子鍵結於氫原子,單末端的碳原子鍵結於氧原子者),環氧烷單位的加成莫耳數m及n的總和為符合0以上50以下]。   [0034] 欲達成上述目的的本發明之第13態樣為,如態樣12之糖的製造方法,其中前述含有矽石的物質為矽藻土或矽砂。   [0035] 欲達成上述目的的本發明之第14態樣為,如態樣12或態樣13之糖的製造方法,其中前述矽石或前述含有矽石的物質中之矽石與前述化合物(A)的質量比率(化合物(A)/矽石)為0.0001以上,1以下者。   [0036] 欲達成上述目的的本發明之第15態樣為,如態樣12至態樣14中任一態樣的糖的製造方法,其中前述多元醇化合物為含有選自由2元醇、3元醇及4元醇的單體、二聚物、三聚物及低聚物,以及聚烷二醇所成群的至少1種者。   [0037] 欲達成上述目的的本發明之第16態樣為,如態樣12至態樣15中任一態樣的糖的製造方法,其中前述多元醇化合物的衍生物為含有選自由多元醇醚類及聚烷二醇醚類所成群的至少1種者。   [0038] 欲達成上述目的的本發明之第17態樣為,如態樣12至態樣16中任一態樣的糖的製造方法,其中前述化合物(A)為含有選自由乙二醇、丙二醇、二丙二醇、三丙二醇、1,3-丁二醇、甘油、季戊四醇、聚乙二醇、聚丙二醇、丙二醇1-單甲基醚、2,4,7,9-四甲基-5-癸炔-4,7-二醇之環氧乙烷加成物(環氧乙烷加成莫耳數m+n=10)、2,4,7,9-四甲基-5-癸炔-4,7-二醇之環氧乙烷加成物(環氧乙烷加成莫耳數m+n=30)所成群的至少1種者。   [0039] 欲達成上述目的的本發明之第18態樣為,一種乙醇之製造方法,其特徵為使用藉由如態樣12至態樣17中任一態樣的糖之製造方法所得之糖,藉由發酵微生物進行乙醇發酵而製造出乙醇者。   [0040] 欲達成上述目的的本發明之第19態樣為,如態樣18之乙醇的製造方法,其中於製造糖的步驟中添加發酵微生物,同時進行糖之製造與乙醇發酵。   [0041] 欲達成上述目的的本發明之第20態樣為,如態樣18或態樣19之乙醇的製造方法,其中前述發酵微生物為酵母、黴菌或細菌。   [0042] 欲達成上述目的的本發明之第21態樣為,如態樣20之乙醇的製造方法,其中前述發酵微生物為啤酒酵母菌(Saccharomyces)屬、單胞菌(Zymomonas)屬、畢赤酵母(Pichia)屬、念珠菌(Candida)屬、發酵桿菌(Zymobacter)屬、棒狀桿菌(Corynebacterium)屬、克魯維酵母(Kluyveromyces)屬或大腸桿菌(Escherichia)屬所屬之微生物。   [0043] 欲達成上述目的的本發明之第22態樣為,如態樣18至態樣21中任一態樣的乙醇的製造方法,其中將乙醇發酵在15℃以上,35℃以下進行。 [發明之效果]   [0044] 依據本發明,可提供可藉由簡便步驟可提高以酵素進行糖化反應的效率之糖化反應液、糖化酵素組成物、糖的製造方法及乙醇的製造方法。
[實施發明的形態]   [0046] 對於本發明,作為生成所謂葡萄糖的糖之原料,使用纖維素及半纖維素的至少一方。   [0047] 該纖維素或半纖維素,例如含於闊葉樹、針葉樹等農林水產物資源,或含於稱為該農林水產物資源的廢棄物之纖維素系生物質。更具體為可舉出渣、稻草、玉米秸稈、油棕櫚空果房(Empty Fruit Bunches)、木材纖維、木材片、單板廢物、木粉、紙漿類、古紙類、綿、海鞘類、乙酸菌等原料。又,這些原料若為來自纖維素系生物質者即可,並無特別限定,可單獨使用一種,亦可混合2種類以上後使用。   [0048] 彼等中,亦以含於桉樹木粉(闊葉樹)、杉木粉(針葉樹)、渣、稻草、玉米秸稈、油棕櫚空果房、綿等的纖維素或半纖維素者為佳。使用此等時,雖然理由不明確,但容易解纖而能夠以比較高產率得到糖。   [0049] 其中,所謂纖維素為葡萄糖藉由β-1,4葡萄糖苷鍵進行聚合的聚合物。所謂半纖維素為葡萄糖、木糖、甘露糖、半乳糖等藉由葡萄糖苷鍵進行聚合的聚合物,除纖維素以外的水不溶性之多醣類。   [0050] 又,纖維素可含有該部分分解物之纖維寡糖、纖維二糖等,可為結晶性,亦可為非結晶性。又,亦可為經羧基甲基化、醛化或酯化的衍生物。且,纖維素或半纖維素為如上述所示,若為來自生物質者即可,並無特別限定,亦可為來自植物者、來自真菌者、來自細菌者等。   [0051] 作為本發明之糖化酵素,使用將纖維素酶作為主體者。該纖維素酶表示可將纖維素或半纖維素分解至葡萄糖等糖的酵素。   [0052] 作為生產該糖化酵素之微生物,雖無特別限定,例如可舉出枝頂孢(Acremonium)屬菌、曲黴菌(Aspergillus)屬菌、球毛殼(Chaetomium)屬菌、鐮孢菌(Fusarium)屬菌、腐質黴菌(Humicola)屬菌、白耙齒(Irpex)屬菌、黃孢原(Phanerochaete)屬菌、青黴菌(Penicillium)屬菌、裂褶菌(Schizophyllum)屬菌、孢子絲菌(Sporotrichum)屬菌、栓菌(Trametes)屬菌、木黴菌(Trichoderma)屬菌等。這些以外,亦可舉出梭狀芽孢桿菌(Clostridium)屬菌、假單胞菌(Pseudomonas)屬菌、纖維單胞菌(Cellulomonas)屬菌、瘤胃球菌(Ruminococcus)屬菌、芽孢桿菌(Bacillus)屬菌等細菌;硫化葉菌(Sulfolobus)屬菌、鏈黴菌(Streptomyces)屬菌、嗜熱菌(Thermoactinomyces)屬菌、高溫單孢菌(Thermomonospora)屬菌等放線菌。且,這些糖化酵素可藉由人工改變。又,這些糖化酵素可單獨使用1種類,或混合2種類以上後使用。   [0053] 彼等中,特別以來自Aspergillus屬的糖化酵素及來自Trichoderma屬的糖化酵素為佳。因這些糖化酵素對於結晶性纖維素的活性為高。   [0054] 又,纖維素酶可為一連酵素群。作為該酵素群,可舉出內切葡聚醣酶(Endoglucanase)(EC 3.2.1.74)、纖維二糖水解酶(Cellobiohydrolase)(EC 3.2.1.91)、β-葡萄糖苷酶(EC 23.2.4.1,EC 3.2.1.21)等。本發明以使用混合來自相異微生物的纖維素酶者為佳。此時,藉由這些相乘效果可進一步促進纖維素或半纖維素之糖化。   [0055] 上述纖維素酶一般多為在pH3以上、pH6以下的範圍具有最佳酵素活性者,亦可為在pH6~pH10的範圍具有最佳酵素活性而稱為鹼纖維素酶者。又,上述纖維素酶多數為在反應溫度25℃以上、50℃以下的範圍具有最佳酵素活性者為多,但亦可為在70℃以上、100℃以下的範圍具有最佳酵素活性而稱為耐熱性纖維素酶者。   [0056] 在本發明作為矽石或含有矽石的物質,可使用矽石、矽藻土或矽砂。含有矽石的物質之矽藻土及矽砂係將矽石作為主成分的天然物。矽石為至少含有二氧化矽之化合物的總稱,一般於表面一部分存在矽烷醇基。該矽石的粒子形狀可為球狀亦可為非球狀,其粒子結構可為中實結構亦可為多孔質結構,結晶性可為非晶質亦可為結晶質,可在粉末狀、懸浮液、分散液等狀態下使用。矽石表面之一部分亦可由矽烷醇基以外的其他官能基修飾。又,亦可為矽烷偶合劑或矽烷氧化物,或以矽酸離子等於矽石以外的化合物表面上進行反應而存在矽石層之形態。其中,特別使用膠態矽石、矽藻土及矽砂為佳。   [0057] 本發明中,膠態矽石的平均一次粒子徑為1nm以上,400nm以下,較佳為5nm以上,350nm以下,可存在糖化反應液中而使用。平均一次粒子徑係藉由氮吸附法(BET法)進行測定的比表面積S(m2 /g)以換算式(D(nm)=2720/S)而算出者。且,膠態矽石可作為分散於水、甲醇、乙醇、丙酮、甲基乙基酮、乙二醇等分散媒的分散液使用,分散液稱為膠體液或溶膠等。本發明中,若不阻礙酵素活性的範圍下,可選擇分散媒,但以使用水、乙醇等分散媒為佳。   [0058] 作為膠態矽石之製造方法,有將水玻璃作為原料之水玻璃法、將金屬烷氧化物作為原料的烷氧化物法、將氯化矽化合物作為原料的氣相法等。可使用任一製造法所得之膠態矽石,但藉由水玻璃法所得之膠態矽石為佳。   [0059] 本發明之下述一般式(1)中之R1 表示碳數1以上9以下的直鏈烷基,R2 及R3 各獨立表示氫原子、鹵素原子、醯基、乙醯基、醯胺基、胺基、烯丙基、芳基、醛基、碳數1以上6以下的直鏈或支鏈的烷基、碳數1以上6以下的伸烷基、碳數1以上6以下的烯基、碳數1以上6以下的烷氧基、胺基甲醯基、羧基、氰基、磺酸基、磺醯基、甲苯磺醯基、硝基、羥基、苯基、苯甲基、磷醯基或巰基,這些基可進一步具有取代基。R4 及R5 各獨立表示氫原子、醯基、乙醯基、醯胺基、烯丙基、芳基、醛基、碳數1以上6以下的直鏈或支鏈的烷基、碳數1以上6以下的伸烷基、碳數1以上6以下的烯基、胺基甲醯基、羧基、氰基、磺酸基、磺醯基、甲苯磺醯基、苯基、苯甲基或磷醯基,這些基可進一步具有取代基。又重複單位n為符合1以上500以下。R1 的烷基的碳數以1以上6以下為佳,較佳為1以上4以下。R2 及R3 的烷基、伸烷基、烯基及烷氧基的碳數以1以上4以下為佳,更佳為1以上3以下。R4 及R5 的烷基、伸烷基、烯基的碳數以1以上4以下為佳,更佳為1以上3以下。該重複單位n以1以上300以下為佳,更佳為1以上100以下。   [0060][0061] 本發明之下述一般式(2)中之R1 、R2 、R3 、及R4 各獨立表示,主鏈的碳數為1以上10以下的飽和或不飽和的直鏈或支鏈的烷基或烯基,前述烷基或烯基可進一步具有取代基。又,A1 及A2 各獨立表示主鏈的碳數為2以上4以下的直鏈或支鏈的環氧烷基(但,環氧烷基的單末端之氧原子鍵結於氫原子,單末端的碳原子鍵結於氧原子者),環氧烷單位的加成莫耳數m及n的總和為符合0以上50以下R1 、R2 、R3 、及R4 的烷基或烯基的碳數為1以上8以下者為佳,更佳為1以上6以下。A1 及A2 的環氧烷基之碳數以2或3為佳。環氧烷單位的加成莫耳數m及n的總和在0以上40以下者為佳,更佳為10以上30以下。   [0062][0063] 作為一般式(1)所示多元醇化合物,雖無特別限定,具體可舉出乙二醇(別稱;1,2-乙烷二醇)、二乙二醇、三乙二醇、四乙二醇、丙二醇(別稱;1,2-丙烷二醇)、二丙二醇、三丙二醇、三甲二醇(別稱;1,3-丙烷二醇)、1,2-丁二醇、1,3-丁二醇、1,4-丁二醇、2,3-丁二醇、1,2-戊烷二醇、1,5-戊烷二醇、2,4-戊烷二醇、己二醇(別稱;2-甲基戊烷-2,4-二醇)、1,2-己二醇、1,6-己二醇、1,2-庚烷二醇、1,7-庚烷二醇、1,2-辛烷二醇、1,8-辛烷二醇、1,2-壬二醇、1,9-壬二醇、3-甲氧基-1,2-丙烷二醇、3-(2-乙基己氧基)-1,2-丙烷二醇、3-胺基-1,2-丙烷二醇、3-甲基胺基-1,2-丙烷二醇、3-(二甲基胺基)-1,2-丙烷二醇、3-(二乙基胺基)-1,2-丙烷二醇、3-烯丙氧基-1,2-丙烷二醇、α-氯醇(別稱;3-氯-1,2-丙烷二醇)、3-苯氧基-1,2-丙烷二醇、3-巰基-1,2-丙烷二醇、2-甲基-1,3-丙烷二醇、新戊二醇(別稱;2,2-二甲基-1,3-丙烷二醇)、2-甲基-2-丙基-1,3-丙烷二醇、2-乙基-2-甲基-1,3-丙烷二醇、2-丁基-2-乙基-1,3-丙烷二醇、2,2ー二異丁基-1,3-丙烷二醇、2,2ー二異戊基-1,3-丙烷二醇、2-(2,2ー二乙氧基乙基)-1,3-丙烷二醇、2-伸甲基-1,3-丙烷二醇、絲氨醇(別稱;2-胺基-1,3-丙烷二醇)、2-胺基-2-甲基-1,3-丙烷二醇、2-胺基-2-乙基-1,3-丙烷二醇、二溴新戊二醇(別稱;2,2ー雙(溴甲基)-1,3-丙烷二醇)、溴硝丙二醇(別稱;2-溴-2-硝基-1,3-丙烷二醇)、2-甲基-2-硝基-1,3-丙烷二醇、2-苯基-1,3-丙烷二醇、2-苯甲氧基-1,3-丙烷二醇、3-甲基-1,3-丁二醇、4-苯甲氧基-1,3-丁二醇、2,2,3,3-四氟-1,4-丁二醇、頻那醇(別稱;2,3-二甲基-2,3-丁二醇)、DL-1,4-二氯-2,3-丁二醇、1,4-二巰基-2,3-丁二醇、六氟-2,3-雙(三氟甲基)-2,3-丁二醇、2,2,4-三甲基-1,3-戊烷二醇、3-甲基-1,5-戊烷二醇、2,4-二乙基-1,5-戊烷二醇、2,4-二甲基-2,4-戊烷二醇、2-乙基-1,3-己二醇、2,5-二甲基-2,5-己二醇等2元醇;甘油、二甘油、1,2,3-丁烷三醇、1,2,4-丁烷三醇、1,2,5-戊烷三醇、1,2,6-己烷三醇、1,2,7-庚烷三醇、1,2,8-辛烷三醇、1,2,9-壬三醇、五甘油(別稱;2-羥基甲基-2-甲基-1,3-丙烷二醇)、三羥甲基丙烷(別稱;2-乙基-2-羥基甲基-1,3-丙烷二醇)、三鹼(別稱;2-胺基-2-(羥基甲基)-1,3-丙烷二醇)、2-(溴甲基)-2-(羥基甲基)-1,3-丙烷二醇、2-(羥基甲基)-2-硝基-1,3-丙烷二醇等3元醇;季戊四醇(別稱;2,2ー雙(羥基甲基)-1,3-丙烷二醇)、雙三羥甲基丙烷(別稱;2,2’-氧基雙(伸甲基)雙(2-乙基-1,3-丙烷二醇))、L-蘇糖醇(別稱;L-1,2,3,4-丁烷四醇)等4價以上的醇;聚乙二醇、直鏈或支鏈的聚丙二醇、聚丁二醇、聚四伸甲基醚甘醇、聚氧乙烯聚氧丙二醇或聚氧乙烯聚氧伸丙基聚氧乙二醇的無規共聚物、交互共聚物及嵌段共聚物等聚烷二醇類;聚氧乙烯甘油基醚、聚氧伸丙基甘油基醚、聚氧乙烯聚氧伸丙基甘油基醚、聚氧乙烯聚氧伸丙基三羥甲基丙烷、聚氧四伸甲基聚氧乙二醇或聚氧四伸甲基聚氧丙二醇的無規共聚物、交互共聚物及嵌段共聚物、聚甘油等。又,上述多元醇可為單體、二聚物、三聚物等。彼等中亦以乙二醇、丙二醇、二丙二醇、三丙二醇、1,3-丁二醇、甘油、季戊四醇、聚乙二醇、聚丙二醇為佳。   [0064] 作為一般式(1)所示多元醇化合物的衍生物,雖無特別限定,例如可舉出乙二醇單甲基醚、二乙二醇單甲基醚、三乙二醇單甲基醚、乙二醇單乙基醚、二乙二醇單乙基醚、三乙二醇單乙基醚、乙二醇單丙基醚、乙二醇單異丙基醚、三乙二醇單異丙基醚、乙二醇單丁基醚、二乙二醇單丁基醚、三乙二醇單丁基醚、乙二醇單異丁基醚、乙二醇單-tert-丁基醚、二乙二醇單己基醚、丙二醇單甲基醚(別稱;丙二醇1-單甲基醚)、二丙二醇單甲基醚、三丙二醇單甲基醚、丙二醇單乙基醚、丙二醇單丙基醚、丙二醇1-單丁基醚、1,3-丙烷二醇單甲基醚、1,2-丁二醇1-單甲基醚、1,4-丁二醇單甲基醚、乙二醇二甲基醚、二乙二醇二甲基醚、乙二醇二乙基醚、二乙二醇二乙基醚、乙二醇二丁基醚、二乙二醇二丁基醚、丙二醇二甲基醚、二丙二醇二甲基醚、1,5-戊烷二醇二甲基醚、1,6-己二醇二甲基醚等多元醇烷基醚類(多元醇醚類);聚乙二醇單甲基醚、聚乙二醇二甲基醚、乙二醇單乙酸酯、乙二醇單烯丙基醚、二乙二醇胺(別稱;乙二醇單(2-胺基乙基)醚)、乙二醇單[2-(二乙基胺基)乙基]醚、乙二醇單苯甲基醚、二乙二醇單乙基醚乙酸酯、二乙二醇單丁基醚乙酸酯、二乙二醇單苯基醚、二乙二醇單(2-丙炔-1-基)醚、三乙二醇單氯醇、三乙二醇單(2-丙炔基)醚、三乙二醇單苯甲基醚、丙二醇1-單甲基醚2-乙酸酯、丙二醇2-單苯基醚、乙二醇二乙酸酯、二乙二醇二乙酸酯、三乙二醇二乙酸酯、乙二醇二氯乙酸酯、乙二醇二甲苯磺酸酯、二乙二醇二甲苯磺酸酯、乙二醇二丁醇鹽、乙二醇二苯基醚、乙二醇二苯甲基醚、乙二醇二苯甲酸酯、二乙二醇二苯甲酸酯、丙二醇二乙酸酯、三甲二醇二甲苯磺酸酯(別稱;1,3-丙烷二醇二甲苯磺酸酯)、新戊二醇二甲苯磺酸酯(別稱;2,2-二甲基-1,3-丙烷二醇二甲苯磺酸酯)、1,4-丁二醇二乙酸酯、二甲磺酸丁酯(別稱;1,4-丁二醇二甲烷磺酸酯)、1,4-丁二醇雙(3-胺基丙基)醚、1,4-丁二醇雙(醯基乙酸酯)、1,5-戊烷二醇二乙酸酯、2,5-己二醇二乙酸酯、1,8-辛烷二醇二乙酸酯、1,9-壬二醇二乙酸酯等甘醇醚類;聚氧伸丙基丁基醚等聚烷二醇烷基醚類;聚乙二醇烯丙基醚、聚乙二醇雙(3-胺基丙基)醚等聚烷二醇醚類等。彼等中亦以丙二醇1-單甲基醚為佳。   [0065] 作為一般式(2)所示乙炔甘醇化合物,雖無特別限定,例如可舉出2-丁炔-1,4-二醇、2,5-二甲基-3-己炔-2,5-二醇、3,6-二甲基-4-辛炔-3,6-二醇、2,3,6,7-四甲基-4-辛炔-3,6-二醇、4,7-二甲基-5-癸炔-4,7-二醇、2,4,7,9-四甲基-5-癸炔-4,7-二醇、2,5,8,11-四甲基-6-十二炔-5,8-二醇等。   [0066] 又,作為一般式(2)的乙炔甘醇化合物之環氧烷加成物,雖無特別限定,例如可舉出3,6-二甲基-4-辛基-3,6-二醇之環氧乙烷加成物(環氧乙烷加成莫耳數m+n=4)、2,4,7,9-四甲基-5-癸炔-4,7-二醇之環氧乙烷加成物(環氧乙烷加成莫耳數m+n=1.3)、2,4,7,9-四甲基-5-癸炔-4,7-二醇之環氧乙烷加成物(環氧乙烷加成莫耳數m+n=3.5)、2,4,7,9-四甲基-5-癸炔-4,7-二醇之環氧乙烷加成物(環氧乙烷加成莫耳數m+n=10)、2,4,7,9-四甲基-5-癸炔-4,7-二醇之環氧乙烷加成物(環氧乙烷加成莫耳數m+n=30)、2,5,8,11-四甲基-6-十二炔-5,8-二醇之環氧乙烷加成物(環氧乙烷加成莫耳數m+n=6)等乙炔甘醇之環氧乙烷衍生物。這些中,特別以2,4,7,9-四甲基-5-癸炔-4,7-二醇之環氧乙烷加成物(環氧乙烷加成莫耳數m+n=10)、2,4,7,9-四甲基-5-癸炔-4,7-二醇之環氧乙烷加成物(環氧乙烷加成莫耳數m+n=30)等為佳。   [0067] 作為乙炔甘醇化合物及其環氧烷加成物的市售品,例如可舉出日信化學工業股份有限公司製之炔二醇系列、烯烴系列、Kawaken fine化學股份有限公司製之乙炔醇系列等。   [0068] 一般式(1)及(2)所示化合物(A)可單獨使用,亦可併用複數化合物。   [0069] 本發明之糖化反應液為,於纖維素及半纖維素的至少一方作為原料中含有糖化酵素組成物之糖化酵素、矽石或含有矽石的物質,與選自由一般式(1)所示多元醇化合物及其衍生物,及一般式(2)所示乙炔甘醇及其環氧烷加成物所成群的至少1種化合物(A)者。詳細如後述,由糖化反應效率(僅稱為反應效率)之提高效果的觀點來看,對於糖化反應液,可併用矽石或含有矽石的物質及化合物(A)。   [0070] 其中,對於糖化反應液,糖化酵素之濃度換算為BSA(Bovine serum albumin;來自牛血清之白蛋白)的蛋白質濃度時為0.001質量%以上,3.0質量%以下,較佳為0.001質量%以上,1.0質量%以下。糖化酵素的濃度比此範圍低時,反應效率會降低而不佳,另一方面,比此高時,糖化酵素會變的不容易溶解於溶液中,而在經濟上並不適當。   [0071] 又,對於糖化反應液,矽石或含有矽石的物質中之矽石的濃度為0.001質量%以上,40質量%以下,較佳為0.005質量%以上,10質量%以下。矽石或含有矽石的物質中之矽石濃度比該範圍低時,會使反應效率降低故不佳,另一方面,比此高時,不僅分散性會惡化,經濟上亦不佳。   [0072] 又,對於糖化反應液,糖化酵素與矽石或含有矽石的物質中之矽石的質量比率(糖化酵素/矽石)為0.0002以上,300以下,較佳為0.002以上,30以下。兩者質量比率在此範圍以外時,反應效率之提高會顯著沒有。   [0073] 又,對於糖化反應液,化合物(A)的濃度為0.00001質量%以上,10質量%以下,較佳為0.0001質量%以上,1質量%以下。化合物(A)之濃度比此範圍低時,反應效率會降低而不佳,另一方面,比此高時不僅分散性會惡化,在經濟上亦不佳。   [0074] 又,對於糖化反應液,矽石或含有矽石的物質中之矽石與化合物(A)的質量比率(化合物(A)/矽石)為0.0001以上,1以下,較佳為0.001以上,0.1以下。兩者的質量比率若在此範圍外時,無法使反應效率顯著地提高。   [0075] 又,糖化反應液的pH為3以上11以下,較佳為3以上6以下。pH若比3低時,會產生矽石或含有矽石的物質的凝集,而降低糖化酵素之反應效率,另一方面,若pH比11高時,矽石或含有矽石的物質會變的容易溶解故不佳。   [0076] 作為糖化反應液之pH調整劑,可舉出如硫酸、鹽酸、硝酸之無機酸;如乙酸、草酸的羧酸;如檸檬酸、酒石酸、蘋果酸的羥酸;如氫氧化鈉或氫氧化鉀的氫氧化鹽;氨、尿素等。若不阻礙本發明之效果的範圍即可,並無特別限制該種類或濃度的使用。又,這些pH調整劑可單獨使用1種類或混合2種類以上後使用。且可進一步在具有緩衝作用的緩衝液之狀態下使用。   [0077] 又,本發明之糖化反應液為使反應溫度設定在5℃以上100℃以下,較佳為設定在20℃以上55℃以下。可配合糖化酵素的最適溫度而設定反應溫度為佳。一般而言,反應溫度若比5℃低時,糖化反應之效率會顯著降低,若比100℃高時,有著糖化酵素失活的顧慮故不佳。   [0078] 且,含有纖維素或半纖維素的纖維素系生物質之前處理可進行公知範圍者。一般而言,可藉由絞磨機等物理性粉碎及藉由酸或鹼處理而化學性地破壞木質素與纖維素及半纖維素的結構所得之糖化反應用原料即可。   [0079] 製造糖化反應液時,可於分散糖化酵素的反應液中添加矽石或含有矽石的物質及化合物(A),或分散矽石或含有矽石的物質及化合物(A)的反應液中添加糖化酵素。亦可同時添加矽石或含有矽石的物質及化合物(A)或個別添加,若可降低糖化反應效率即可與添加順序無關。此時,亦可將化合物(A)以粉末狀態下添加,或在溶液狀態下添加。又,若不阻礙本發明之效果的範圍即可,可pH調整劑等其他添加劑可以任意順序添加。   [0080] 如以上說明,本發明之糖化反應液係由於將纖維素及半纖維素的至少一方的原料中含有糖化酵素組成物之糖化酵素、矽石及選自由一般式(1)所示多元醇化合物及其衍生物、及一般式(2)所示乙炔甘醇及其環氧烷加成物所成群的至少1種化合物(A)而得。對於該糖化反應液,雖該機制並不明確,但可併用矽石或含有矽石的物質及化合物(A),而進一步促進纖維素或半纖維素的糖化。   [0081] 又,本發明之糖化反應液為藉由矽石或含有矽石的物質及化合物(A)的併用,可減少糖化酵素之使用量,故在成本性上為優良。   [0082] 使用在本發明所得之糖,藉由進行乙醇發酵的發酵微生物使乙醇發酵而可得乙醇。得到糖之後,添加進行乙醇發酵的發酵微生物,使乙醇發酵後得乙醇亦可,亦可於使用前述糖化反應液得到糖的步驟中添加進行乙醇發酵的發酵微生物,同時進行糖之製造與乙醇發酵而得到乙醇。   [0083] 本發明之發酵微生物可舉出酵母、黴菌、細菌等。這些中,特別以酵母或細菌者為佳。又,這些發酵微生物可單獨使用1種類或混合2種類以上使用。作為所使用的發酵微生物,例如可舉出啤酒酵母菌(Saccharomyces)屬、單胞菌(Zymomonas)屬、畢赤酵母(Pichia)屬、念珠菌(Candida)屬、發酵桿菌(Zymobacter)屬、棒狀桿菌(Corynebacterium)屬、克魯維酵母(Kluyveromyces)屬、大腸桿菌(Escherichia)屬等所屬微生物。   [0084] 進行乙醇發酵時的較佳發酵溫度為15℃以上35℃以下,以28℃以上32℃以下為更佳。一般而言,發酵溫度比15℃低時,發酵微生物之活動會變的不活發故乙醇發酵之效率會顯著降低,又比35℃高時,有發酵微生物滅亡的顧慮故不佳。   [0085] 又,本發明之藉由進行乙醇發酵的發酵微生物之乙醇的製造方法為,可藉由矽石或含有矽石的物質及化合物(A)之併用,進行乙醇發酵時的較佳發酵溫度下亦可有效率地藉由糖化酵素而得到糖,故利用所得之糖的乙醇發酵亦可有效率地進行。一般而言,因得到糖之反應溫度比得到乙醇的發酵溫度還高,故於乙醇發酵步驟前必須使反應液冷卻,雖會產生能量的浪費,但依據本發明之方法,可使得到糖之反應溫度與得到乙醇之發酵溫度成為相同溫度範圍,可避免能量之浪費而有效率。 [實施例]   [0086] 以下,依據實施例做更進一步的敘述,但本發明並未受到該實施例的任何限定。   [0087] [1.作為矽石或含有矽石的物質使用矽石的糖之製造] (1-1.平均一次粒子徑)   矽石的平均一次粒子徑可使用以下測定裝置進行測定。   氮吸附法測定裝置:Monosorb MS-16(Kanta Chrome Instruments Japan合同公司製)   [0088] (1-2.纖維素酶水溶液)   藉由以下程序,製作出纖維素酶水溶液。   於脫離子交換水中,添加所定量的混合纖維素酶之粉末,在室溫下以轉子一邊進行100rpm的30分鐘轉動,一邊溶解而得到纖維素酶水溶液。且,作為糖化酵素之纖維素酶,可使用在pH3以上pH6以下的範圍下具有最適酵素活性的來自里氏木黴菌(Trichoderma reesei;T. reesei)屬之纖維素酶(Sigma Aldrich製)及來自黑曲黴菌(Aspergillus niger;A. niger)屬的纖維素酶(MP biomedicals製)以7:3(w/w)的比例進行混合之混合纖維素酶。   [0089] (1-3.糖化酵素水溶液)   藉由以下的程序,製造出糖化酵素水溶液。   於脫離子交換水中,添加作為pH調整且最終成為0.05M的1M乙酸緩衝液(pH5.0)及在1-2.所得之纖維素酶水溶液,在室溫下藉由轉子一邊進行100rpm之30分鐘轉動,一邊進行混合,各得到下述表1所示的糖化酵素濃度(在本實施例為纖維素酶濃度)的糖化酵素水溶液。將這些糖化酵素水溶液作為比較試樣1~比較試樣3。各比較試樣的糖化酵素濃度為使用Bradford法(CBB法),換算為BSA(商品名:蛋白質標準物質、Sigma Aldrich製)之蛋白質濃度而算出。糖化酵素濃度算出的具體程序如以下所示。   [0090] 於容器長10mm的一次性容器中,添加2.5mL的將蛋白質分析CBB溶液(5倍濃縮)(Nacalai Tesque 股份有限公司製)以脫離子交換水稀釋至5倍者,其次,添加0.05mL的各比較試樣1~3,經密栓成為混合溶液。將該混合溶液以重複上下反轉混合至均勻。其後靜置30分鐘,使用分光光度計UV-3150(島津股份有限公司製作所製),測定波長595nm之吸光度。製作出已知BSA的蛋白質濃度之試料,同樣地測定吸光度而做成標準曲線。由所得之標準曲線算出糖化酵素濃度。且,於來自里氏木黴菌屬的纖維素酶之粉末1g中含有0.27g之蛋白質。又來自黑曲黴菌屬的纖維素酶之粉末1g中含有0.06g之蛋白質。   [0091][0092] (1-4.糖化酵素組成物)   藉由以下的程序製作出糖化酵素組成物。   於脫離子交換水中,添加作為pH調整而最終成為0.05M之1M乙酸緩衝液(pH5.0)、作為矽石以水玻璃法所製造的中實且球狀之膠態矽石(平均一次粒子徑:35nm)分散於水中的酸性矽石溶膠(pH2.1、矽石濃度40質量%)、作為化合物(A)的三丙二醇及以1-2.所得之纖維素酶水溶液,在室溫下,一邊以轉子進行100rpm的30分鐘轉動一邊使其混合,各得到下述表2所示糖化酵素濃度(在本實施例中為纖維素酶濃度)、矽石濃度及化合物(A)濃度之糖化酵素組成物。這些糖化酵素組成物作為試樣1~試樣8。且於下述表2所示的試樣1~試樣8之各構成成分的濃度為糖化酵素組成物中之濃度。   [0093] 又,作為化合物(A)除使用多元醇化合物、多元醇化合物之衍生物或乙炔甘醇之環氧烷加成物以外,與試樣1~試樣8同樣地,各製作出糖化酵素組成物。將這些糖化酵素組成物作為如下述表2所示的試樣9~試樣20。且,於下述表2所示的試樣9~試樣20之各構成成分的濃度為糖化酵素組成物中之濃度。   [0094] 且於下述表2中之化合物(A)的種類A~M如以下所示。   A:三丙二醇   B:乙二醇   C:聚乙二醇(平均分子量200)   D:丙二醇   E:二丙二醇   F:聚丙二醇(平均分子量250)   G:聚丙二醇(平均分子量700)   H:聚丙二醇(平均分子量1000)   I:丙二醇單甲基醚   J:1,3-丁二醇   K:甘油   L:2,4,7,9-四甲基-5-癸炔-4,7-二醇之環氧乙烷加成物(環氧乙烷加成莫耳數m+n=10)     (日信化學工業股份有限公司製之炔二醇465)   M:2,4,7,9-四甲基-5-癸炔-4,7-二醇之環氧乙烷加成物(環氧乙烷加成莫耳數m+n=30)     (日信化學工業股份有限公司製之炔二醇485)   [0095][0096] (含有1-5.三丙二醇之糖化酵素水溶液)   藉由以下程序,製造作為化合物(A)使用三丙二醇之含有三丙二醇的糖化酵素水溶液。   [0097] 於脫離子交換水中,添加作為pH調整而最終成為0.05M之1M乙酸緩衝液(pH5.0)、三丙二醇及在1-2.所得之纖維素酶水溶液,室溫下,一邊以轉子進行100rpm的30分鐘轉動一邊使其混合,各得到於下述表3所示的糖化酵素濃度(在本實施例中為纖維素酶濃度)及三丙二醇濃度之含有三丙二醇的糖化酵素水溶液。將這些含有三丙二醇的糖化酵素水溶液作為比較試樣4~比較試樣11。且,於下述表3所示的比較試樣4~比較試樣11之各構成成分的濃度為含有三丙二醇的糖化酵素水溶液中之濃度。   [0098][0099] (1-6.含有矽石的糖化酵素水溶液)   藉由以下程序,製作出含有矽石的糖化酵素水溶液。   於脫離子交換水中,添加作為pH調整而最終成為0.05M的1M乙酸緩衝液(pH5.0)、作為矽石以水玻璃法所製造的中實且球狀之膠態矽石(平均一次粒子徑粒子徑:35nm)分散於水的酸性矽石溶膠(pH2.1、矽石濃度40質量%)及在1-2.所得之纖維素酶水溶液,室溫下,一邊以轉子進行100rpm的30分鐘轉動一邊使其混合,各得到於下述表4所示的糖化酵素濃度(在本實施例中為纖維素酶濃度)及矽石濃度之含有矽石的糖化酵素水溶液。將這些含有矽石的糖化酵素水溶液作為比較試樣12~比較試樣14。且於下述表4所示的比較試樣12~比較試樣14的各構成成分之濃度為含有矽石的糖化酵素水溶液中之濃度。   [0100][0101] (1-7.糖化反應液)   於試樣1~試樣20的糖化酵素組成物中添加微結晶纖維素粉末,使其分散作為使用各試樣之糖化反應液。具體程序如以下所示。   [0102] 首先,於13.5mL的玻璃瓶中放入各試樣10mL,在以4mmφ×10mm的攪拌器進行攪拌的狀態下,添加微結晶纖維素粉末(結晶型:I型、商品名:Avicel PH-101、Sigma Aldrich製)0.05g(5mg/mL相當)後使其密栓。   [0103] 又,使用比較試樣1~比較試樣3的糖化酵素水溶液、比較試樣4~比較試樣11的含有三丙二醇的糖化酵素水溶液及比較試樣12~比較試樣14的含有矽石的糖化酵素水溶液以外,與試樣1~試樣20之糖化酵素組成物同樣地得到各比較試樣之糖化反應液。   [0104] (1-8.糖之製造)   將使用上述的各試樣及各比較試樣的糖化反應液在25℃之恆溫槽中,在攪拌下使其進行2天酵素反應。藉由該酵素反應而得到糖(葡萄糖)。   [0105] (1-9.葡萄糖生成量之算出) (實施例1)   使用酵素法(GOD法),對於自試樣1的糖化酵素組成物所得之糖化反應液(以下稱為實施例1之糖化反應液),算出1-8.之酵素反應2日後的葡萄糖生成量。   [0106] 於2mL微量試管中取出試樣1之糖化反應液的試料0.5mL,在105℃下15分鐘使酵素失去活性。其次,為了除去未反應的纖維素、矽石,於附有絶對孔徑0.1μm之濾器的2mL微量試管中移入試料,以高速冷卻離心分離機SRX-201(Tommy Seiko Co., Ltd.製)在10,000G,5分鐘的條件下進行離心分離後,回收濾液。於酵素法中使用葡萄糖CII-Test Wako(和光純藥工業股份有限公司製)。使用分光光度計UV-3150(島津股份有限公司製作所製)測定波長505nm之吸光度(容器長10mm)。具體程序如以下所示。   [0107] 於容器長10mm的一次性容器中添加發色試液3.0mL,其次添加上述濾液0.02mL,經密栓後成為混合溶液。其次,將該混合溶液重複上下反轉而混合均勻。其後,在24℃下靜置15分鐘,將波長505nm的吸光度使用分光光度計進行測定,作為Es。其次於容器長10mm的一次性容器中添加發色試液3.0mL,其次添加葡萄糖標準液II(500mg/dL)0.02mL,重複上下反轉並混合均勻後,在24℃下靜置15分鐘,將波長505nm的吸光度使用分光光度計進行測定,作為Estd。於此將發色試液3.0mL之吸光度作為對照組,測定實施例1之糖化反應液的吸光度Es及葡萄糖標準液II的吸光度Estd。   [0108] 其次,將實施例1的糖化反應液之葡萄糖生成量(mg/mL)自下述式(3)求得。該結果如下述表5所示。   [0109][0110] (實施例2~實施例20)   與實施例1同樣地,對於自試樣2~試樣20的糖化酵素組成物所得之各糖化反應液(以下稱為實施例2~實施例20的糖化反應液),算出1-8.的酵素反應2日後之葡萄糖生成量,該結果如下述表5所示。   [0111][0112] (比較例1~比較例14)   與實施例1同樣地,對於自比較試樣1~比較試樣3之糖化酵素水溶液、比較試樣4~比較試樣11的含有三丙二醇的糖化酵素水溶液及比較試樣12~比較試樣14的含有矽石的糖化酵素水溶液所得之各糖化反應液(以下稱為比較例1~比較例14的糖化反應液),算出1-8.的酵素反應2日後之葡萄糖生成量,該結果如下述表6所示。   [0113][0114] (1-10.糖化反應效率)   依據上述表5及上述表6的葡萄糖生成量,對於各糖化反應液之糖化反應效率做檢討。首先,對於由實施例3、實施例7、實施例8、比較例1~比較例3、比較例6、及比較例10~比較例14中之葡萄糖生成量,藉由三丙二醇之添加的糖化反應效率之提高效果進行檢討。   [0115] 圖1表示實施例3,7,8及比較例1~3,6,10~14的藉由三丙二醇之添加的糖化反應效率之提高效果的測定結果圖。如圖1所示,比較比較例1~比較例3的糖化反應液與比較例12~比較例14的糖化反應液時,於纖維素酶水溶液中添加矽石的比較例12~比較例14的葡萄糖生成量更為增加,可見到糖化反應效率之提高。又,比較比較例12~比較例14的糖化反應液與實施例3、實施例7、實施例8的糖化反應液時,於纖維素酶水溶液添加矽石及三丙二醇的實施例4、實施例7、實施例8的葡萄糖生成量更為增加,見到糖化反應效率更提高。另一方面,比較比較例1~比較例3的糖化反應液與比較例6、比較例10、比較例11的糖化反應液時,即使於纖維素酶水溶液中添加三丙二醇亦無法使糖化反應效率提高。因此,對於纖維素之糖化反應,藉由併用矽石與三丙二醇,可確認糖化反應效率的提高。   [0116] 又,藉由該結果,對於比較例1~比較例3的糖化反應液,與於纖維素酶水溶液中添加矽石的比較例12~比較例14的糖化反應液,若比較纖維素酶的使用量時,在比較例12~比較例14中可減低20%程度的使用量。另一方面,對於比較例1~比較例3的糖化反應液,與添加矽石及三丙二醇的實施例3、實施例7、實施例8的糖化反應液,若比較纖維素酶的使用量時,在實施例3、實施例7、實施例8中,可期待30%程度的使用量之削減,依據於纖維素酶水溶液中添加矽石的情況,可使於糖化反應中之纖維素酶的使用量進一步削減至10%程度。   [0117] 其次,對於由實施例1~實施例6、比較例1、比較例4~比較例9、比較例12中之葡萄糖的生成量,藉由三丙二醇的添加量(三丙二醇濃度)之糖化反應效率的提高效果進行檢討。   [0118] 圖2表示藉由實施例1~6及比較例1,4~9,12的三丙二醇濃度之糖化反應效率的提高效果之測定結果圖。如圖2所示,對於矽石與三丙二醇的質量比率(三丙二醇/矽石)大概為0.0001~1的範圍,可大幅度提高糖化反應效率,確認到兩者併用效果。因此,由該結果得知葡萄糖生成量特別取決於三丙二醇之添加量。且,即使於糖化酵素(纖維素酶)僅組合三丙二醇,亦未見到糖化反應效率的提高效果。   [0119] 又,對於由實施例9~實施例20、比較例1及比較例12中之葡萄糖的生成量,藉由三丙二醇以外的化合物(A)之多元醇化合物、多元醇化合物的衍生物或乙炔甘醇的環氧烷加成物之添加的糖化反應效率之提高效果進行檢討。   [0120] 圖3表示藉由實施例9~20及比較例1,12的多元醇化合物、多元醇化合物的衍生物或乙炔甘醇的環氧烷加成物之添加的糖化反應效率之提高效果的測定結果圖。如圖3所示,比較實施例9~實施例20的糖化反應液,與比較例1及比較例12的糖化反應液時,於纖維素酶水溶液中添加矽石及多元醇化合物、多元醇化合物的衍生物或乙炔甘醇的環氧烷加成物之實施例9~實施例20中見到糖化反應效率的提高效果。因此,對於纖維素之糖化反應,藉由併用矽石與作為化合物(A)的多元醇化合物、多元醇化合物的衍生物或乙炔甘醇的環氧烷加成物,可確認糖化反應效率的提高。   [0121] [2.使用販賣的纖維素酶的糖之製造] (2-1.纖維素酶水溶液)   由將來自T. reesei屬的纖維素酶(Sigma Aldrich製)及來自A. niger屬的纖維素酶(MP biomedicals製)以7:3(w/w)的比例進行混合之混合纖維素酶,變更為販賣的纖維素酶(製品名:Cellic(註冊商標) CTec2、Novozymes製)以外,與1-2.同樣地製作出纖維素酶水溶液。   [0122] (2-2.糖化酵素組成物)   藉由以下的程序,製作出糖化酵素組成物。   於脫離子交換水中添加作為pH調整而最終成為0.05M的1M乙酸緩衝液(pH5.0)、作為矽石以水玻璃法所製造的中實且球狀之膠態矽石(平均一次粒子徑:85nm)分散於水的鹼性矽石溶膠(pH9.3、矽石濃度40質量%)、作為化合物(A)的聚丙二醇(平均分子量1000)(以下稱為PPG1000)及在2-1.所得之纖維素酶水溶液,在室溫下,一邊以轉子進行100rpm的30分鐘轉動一邊使其混合,得到於下述表7所示的糖化酵素濃度(在本實施例中為纖維素酶濃度)、矽石濃度及PPG1000濃度的糖化酵素組成物。將該糖化酵素組成物作為試樣21。且,於下述表7所示的試樣21之各構成成分的濃度為糖化酵素組成物中之濃度。   [0123] (2-3.糖化酵素水溶液)   藉由以下程序製作出糖化酵素組成物。   於脫離子交換水中添加作為pH調整而最終成為0.05M的1M乙酸緩衝液(pH5.0),及上述纖維素酶水溶液,室溫下,一邊以轉子進行100rpm的30分鐘轉動一邊使其混合,得到於下述表7所示的糖化酵素濃度(在本實施例中為纖維素酶濃度)之糖化酵素水溶液。將該糖化酵素水溶液作為比較試樣15。   [0124] (2-4.含有聚丙二醇的糖化酵素水溶液)   在以下的程序,作為化合物(A)使用與2-2.相同的PPG1000而製造出含有PPG1000的糖化酵素水溶液。   [0125] 於脫離子交換水中,添加作為pH調整而最終成為0.05M的1M乙酸緩衝液(pH5.0)、PPG1000及在2-1.所得之纖維素酶水溶液,室溫下,一邊以轉子進行100rpm的30分鐘轉動一邊使其混合,得到如下述表7所示的糖化酵素濃度(在本實施例中為纖維素酶濃度)及PPG1000濃度的含有PPG1000的糖化酵素水溶液。將該含有PPG1000的糖化酵素水溶液作為比較試樣16。且,如下述表7所示的比較試樣16之各構成成分的濃度為含有PPG1000的糖化酵素水溶液中之濃度。   [0126] (2-5.含有矽石的糖化酵素水溶液)   在以下程序製作含有矽石的糖化酵素水溶液。   於脫離子交換水中添加作為pH調整而最終成為0.05M的1M乙酸緩衝液(pH5.0)、作為矽石以水玻璃法所製造的中實且球狀之膠態矽石(平均一次粒子徑:85nm)分散於水的鹼性矽石溶膠(pH9.3、矽石濃度40質量%)及在2-1.所得之纖維素酶水溶液,在室溫下,一邊以轉子進行100rpm的30分鐘轉動一邊使其混合,得到如下述表7所示的糖化酵素濃度(在本實施例中為纖維素酶濃度)及矽石濃度的含有矽石的糖化酵素水溶液。將該含有矽石的糖化酵素水溶液作為比較試樣17。且,如下述表7所示的比較試樣17之各構成成分的濃度為含有矽石的糖化酵素水溶液中之濃度。   [0127][0128] (2-6.糖化反應液)   於試樣21的糖化酵素組成物中添加微結晶纖維素粉末,經分散後作為糖化反應液。具體程序如以下所示。   [0129] 首先,於13.5mL的玻璃瓶中放入各試樣10mL,在以4mmφ×10mm的攪拌器進行攪拌的狀態下,添加微結晶纖維素粉末(結晶型:I型、商品名:Avicel PH-101、Sigma Aldrich製)1.00g(100mg/mL相當)後使其密栓。   [0130] 又,使用比較試樣15的糖化酵素水溶液、比較試樣16的含有PPG1000的糖化酵素水溶液及比較試樣17的含有矽石的糖化酵素水溶液以外,與試樣21的糖化酵素組成物同樣地,得到各比較試樣之糖化反應液。   [0131] (2-7.糖的製造)   將使用上述各試樣及各比較試樣的糖化反應液在50℃之恆溫槽中,在攪拌下進行3天酵素反應。藉由該酵素反應而得到糖(葡萄糖)。   [0132] (2-8.葡萄糖生成量的算出) (實施例21)   與實施例1同樣地,對於由試樣21的糖化酵素組成物所得之糖化反應液(以下稱為實施例21的糖化反應液),算出2-7.的酵素反應3日後之葡萄糖生成量,該結果如下述表8所示。   [0133] (比較例15~17)   與實施例1同樣地,對於由比較試樣15的糖化酵素水溶液、比較試樣16的含有PPG1000的糖化酵素水溶液及比較試樣17的含有矽石的糖化酵素水溶液所得之糖化反應液(以下稱為比較例15~17的糖化反應液),算出2-7.的酵素反應3日後之葡萄糖生成量,該結果如下述表8。   [0134][0135] (2-8.糖化反應效率)   依據上述表8的葡萄糖生成量,對於各糖化反應液的糖化反應效率進行檢討。首先,由實施例21及比較例15~比較例17中之葡萄糖生成量,藉由PPG1000的添加之糖化反應效率的提高效果進行檢討。   [0136] 圖4表示藉由實施例21及比較例15~比較例17的PPG1000之添加的糖化反應效率之提高效果的測定結果圖。如圖4所示,若比較比較例15的糖化反應液、於纖維素酶水溶液添加PPG1000之比較例16的糖化反應液、於纖維素酶水溶液添加矽石之比較例17的糖化反應液,與於纖維素酶水溶液添加矽石及PPG1000之實施例21的糖化反應液時,此等之中,於纖維素酶水溶液添加矽石及PPG1000之實施例21的葡萄糖生成量增加,見到糖化反應效率之提高。因此,即使用販賣的纖維素酶,藉由併用矽石與PPG1000時,可確認到糖化反應效率之提高。   [0137] [3.作為矽石或含有矽石的物質而使用矽藻土的糖之製造] (3-1.平均二次粒子徑)   矽藻土的平均二次粒子徑為使用以下測定裝置進行測定。   雷射衍射/散射式粒子徑分布測定裝置:LA-300(堀場股份有限公司製作所製)   [0138] (3-2.纖維素酶水溶液)   藉由以下的程序製作出纖維素酶水溶液。   於脫離子交換水中,添加所定量的混合纖維素酶之粉末,在室溫下一邊以轉子進行100rpm的30分鐘轉動,一邊溶解後得到纖維素酶水溶液。且,作為糖化酵素之纖維素酶,使用在pH3以上,pH6以下的範圍下具有最適酵素活性的來自里氏木黴菌(Trichoderma reesei;T. reesei)屬的纖維素酶(Sigma Aldrich製)及來自黑曲黴菌(Aspergillus niger;A. niger)屬的纖維素酶(MP biomedicals製)以7:3(w/w)的比例下經混合之混合纖維素酶。   [0139] (3-3.糖化酵素組成物)   藉由以下的程序製作出糖化酵素組成物。   於脫離子交換水中添加作為pH調整的最終成為0.05M之1M乙酸緩衝液(pH5.0)、作為含有矽石的物質之矽藻土(OpriteP-1200,中央矽石股份有限公司製之矽石含有率:90質量%、平均二次粒子徑:15μm)、作為化合物(A)與 2-2.同樣的PPG1000及以3-2.所得之纖維素酶水溶液,在室溫下,一邊以轉子進行100rpm的30分鐘轉動一邊使其混合,得到如下述表9所示的糖化酵素濃度(在本實施例中為纖維素酶濃度)、矽藻土濃度及PPG1000濃度的糖化酵素組成物。將該糖化酵素組成物作為試樣22。且,如下述表9所示的試樣22之各構成成分的濃度為糖化酵素組成物中之濃度。   [0140] 又,使用與平均二次粒徑相異的矽藻土以外,與試樣22同樣地,各製作出糖化酵素組成物。將這些糖化酵素組成物作為如下述表9所示的試樣23~試樣28。且,於下述表9所示的試樣23~試樣28的各構成成分之濃度為糖化酵素組成物中之濃度。   [0141][0142] 且,於上述表9中之矽藻土的種類N~S如以下所示。   N:OpriteP-1200、中央矽石股份有限公司製之矽石含有率:90質量%、平均二次粒子徑:15μm   O:矽石#100F、中央矽石股份有限公司製之矽石含有率:90質量%、平均二次粒子徑:19μm   P:矽石#300S、中央矽石股份有限公司製之矽石含有率:90質量%、平均二次粒子徑:19μm   Q:矽石#600S、中央矽石股份有限公司製之矽石含有率:90質量%、平均二次粒子徑:30μm   R:矽石#600H、中央矽石股份有限公司製之矽石含有率:90質量%、平均二次粒子徑:38μm   S:Silica QueenL、中央矽石股份有限公司製之矽石含有率:90質量%、平均二次粒子徑:25μm   [0143] (3-4.糖化酵素水溶液)   藉由以下的程序製作出糖化酵素組成物。   於脫離子交換水中添加作為pH調整的最終成為0.05M之1M乙酸緩衝液(pH5.0)及以3-2.所得之纖維素酶水溶液,在室溫下,一邊以轉子進行100rpm的30分鐘轉動一邊使其混合,得到於下述表10所示的糖化酵素濃度(在本實施例中為纖維素酶濃度)的糖化酵素水溶液。將該糖化酵素水溶液作為比較試樣18。   [0144] (3-5.含有PPG1000的糖化酵素水溶液)   藉由以下的程序,製作出作為化合物(A)使用PPG1000的含有PPG1000的糖化酵素水溶液。   [0145] 於脫離子交換水中添加作為pH調整的最終成為0.05M之1M乙酸緩衝液(pH5.0)、PPG1000及以3-2.所得之纖維素酶水溶液,在室溫下一邊以轉子進行100rpm的30分鐘轉動一邊使其混合,得到如下述表10所示的糖化酵素濃度(在本實施例中為纖維素酶濃度)及PPG1000濃度之含有PPG1000的糖化酵素水溶液。將該含有PPG1000的糖化酵素水溶液作為比較試樣19。且,於下述表10所示的比較試樣19之各構成成分的濃度為含有PPG1000的糖化酵素水溶液中之濃度。   [0146] (3-6.含有矽藻土的糖化酵素水溶液)   藉由以下的程序製作出含有矽藻土的糖化酵素水溶液。   於脫離子交換水中添加作為pH調整的最終成為0.05M之1M乙酸緩衝液(pH5.0)、作為含有矽石的物質的矽藻土(OpriteP-1200、中央矽石股份有限公司製之矽石含有率:90質量%、平均二次粒子徑:15μm)及以3-2.所得之纖維素酶水溶液,在室溫下,一邊以轉子進行100rpm的30分鐘轉動一邊使其混合,得到於下述表10所示的糖化酵素濃度(在本實施例中為纖維素酶濃度)及矽藻土濃度之含有矽藻土的糖化酵素水溶液。將該含有矽藻土的糖化酵素水溶液作為比較試樣20。且,如於下述表10所示的比較試樣20之各構成成分的濃度為含有矽藻土的糖化酵素水溶液中之濃度。   [0147] 又,使用平均二次粒徑相異的矽藻土以外,與比較試樣20同樣地,各製作出含有矽藻土的糖化酵素水溶液。將各些糖化酵素組成物作為於下述表10所示的比較試樣21~比較試樣26。且,於下述表10所示的比較試樣21~比較試樣26之各構成成分的濃度為含有矽藻土的糖化酵素水溶液中之濃度。   [0148][0149] 且,於上述表10中之矽藻土的種類N~S如以下所示。   N:OpriteP-1200、中央矽石股份有限公司製之矽石含有率:90質量%、平均二次粒子徑:15μm   O:矽石#100F、中央矽石股份有限公司製之矽石含有率:90質量%、平均二次粒子徑:19μm   P:矽石#300S、中央矽石股份有限公司製之矽石含有率:90質量%、平均二次粒子徑:19μm   Q:矽石#600S、中央矽石股份有限公司製之矽石含有率:90質量%、平均二次粒子徑:30μm   R:矽石#600H、中央矽石股份有限公司製之矽石含有率:90質量%、平均二次粒子徑:38μm   S:Silica QueenL、中央矽石股份有限公司製之矽石含有率:90質量%、平均二次粒子徑:25μm   [0150] (3-7.糖化反應液)   於試樣22~試樣28的糖化酵素組成物中添加微結晶纖維素粉末,經分散後得到糖化反應液。具體程序如以下所示。   [0151] 首先,於13.5mL的玻璃瓶中放入各試樣10mL,在以4mmφ×10mm的攪拌器進行攪拌的狀態下,添加微結晶纖維素粉末(結晶型:I型、商品名:Avicel PH-101、Sigma Aldrich製)0.50g(50mg/mL相當)後經密栓。   [0152] 又,使用比較試樣18的糖化酵素水溶液、比較試樣19之含有PPG1000的糖化酵素水溶液及比較試樣20~比較試樣26之含有矽藻土的糖化酵素水溶液以外,與試樣21~試樣28的糖化酵素組成物同樣地,得到各比較試樣的糖化反應液。   [0153] (3-8.糖之製造)   將使用上述各試樣及各比較試樣的糖化反應液在40℃的恆溫槽中,在攪拌下進行3天酵素反應。藉此酵素反應得到糖(葡萄糖)。   [0154] (3-9.葡萄糖生成量之算出) (實施例22~實施例28)   與實施例1同樣地,對於由試樣22~試樣28的糖化酵素組成物所得之糖化反應液(以下稱為實施例22~實施例28的糖化反應液),算出3-8.的酵素反應3日後之葡萄糖生成量,該結果如下述表11所示。   [0155][0156] (比較例18~26)   與實施例1同樣地,對於由比較試樣18的糖化酵素水溶液、比較試樣19的含有PPG1000的糖化酵素水溶液及比較試樣20~比較試樣26之含有矽藻土的糖化酵素水溶液所得之糖化反應液(以下稱為比較例18~比較例26的糖化反應液),算出3-8.的酵素反應3日後之葡萄糖生成量,該結果如下述表12所示。   [0157][0158] (3-10.糖化反應效率)   依據上述表11及上述表12之葡萄糖生成量,對於各糖化反應液的糖化反應效率進行檢討。首先對於由於實施例22~實施例28及比較例18~比較例26中之葡萄糖生成量,藉由PPG1000之添加的糖化反應效率之提高效果做檢討。   [0159] 圖5表示藉由實施例22~實施例28及比較例18~比較例26的PPG1000之添加的糖化反應效率之提高效果的測定結果圖。如圖5所示,比較比較例18的糖化反應液、於纖維素酶水溶液添加PPG1000之比較例19的糖化反應液、於纖維素酶水溶液添加矽藻土之比較例20~比較例26的糖化反應液、於纖維素酶水溶液添加矽藻土及PPG1000之實施例22~實施例28的糖化反應液時,於纖維素酶水溶液添加矽藻土及PPG1000之實施例22~實施例28的葡萄糖生成量有增加,見到糖化反應效率之提高。因此,對於纖維素的糖化反應,作為含有矽石的物質使用矽藻土,進一步藉由併用PPG1000,確認到糖化反應效率之提高。   [0160] [4.作為矽石或含有矽石的物質使用矽砂的糖之製造] (4-1.平均一次粒子徑)   矽砂的平均一次粒子徑為使用以下測定裝置進行測定。於測定時,藉由觀察倍率50倍觀察100個粒子,長軸之長度為使用算術平均值。   金屬顯微鏡:ECLIPSE ME600D(股份有限公司Nikon Inst Tech製)   [0161] (4-2.纖維素酶水溶液)   藉由以下程序製作出纖維素酶水溶液。   於脫離子交換水中,添加所定量之混合纖維素酶的粉末,在室溫下以轉子一邊進行100rpm之30分鐘轉動,一邊溶解而得到纖維素酶水溶液。且,作為糖化酵素之纖維素酶,可使用在pH3以上pH6以下的範圍具有最適酵素活性的來自里氏木黴菌(Trichoderma reesei;T. reesei)屬之纖維素酶(Sigma Aldrich製)及來自黑曲黴菌(Aspergillus niger;A. niger)屬的纖維素酶(MP biomedicals製)以7:3(w/w)的比例進行混合之混合纖維素酶。   [0162] (4-3.糖化酵素組成物)   藉由以下的程序製作出糖化酵素組成物。   於脫離子交換水中添加作為pH調整的最終成為0.05M之1M乙酸緩衝液(pH5.0)、作為含有矽石的物質之矽砂(5號、Toyo Materan股份有限公司製之矽石含有率:95質量%、平均一次粒子徑:310μm)、作為化合物(A)之與2-2.的PPG1000,及以4-2.所得之纖維素酶水溶液,在室溫下,一邊以轉子進行100rpm的30分鐘轉動一邊使其混合,得到於下述表13所示糖化酵素濃度(在本實施例中為纖維素酶濃度)、矽砂濃度及PPG1000濃度的糖化酵素組成物。將該糖化酵素組成物作為試樣29。且,於下述表13所示的試樣29之各構成成分的濃度為糖化酵素組成物中之濃度。   [0163] 又,作為化合物(A)使用2,4,7,9-四甲基-5-癸炔-4,7-二醇的環氧乙烷加成物(環氧乙烷加成莫耳數m+n=10)以外,與試樣29同樣地,製作出糖化酵素組成物。將該糖化酵素組成物作為於下述表13所示的試樣30。且,於下述表13所示的試樣30之各構成成分的濃度為糖化酵素組成物中之濃度。   [0164] (4-4.含有化合物(A)的糖化酵素水溶液)   藉由以下的程序製作出作為化合物(A)使用PPG1000的含有PPG1000的糖化酵素水溶液。   [0165] 於脫離子交換水中添加作為pH調整的最終成為0.05M之1M乙酸緩衝液(pH5.0)、PPG1000及以4-2.所得之纖維素酶水溶液,在室溫下,一邊以轉子進行100rpm的30分鐘轉動一邊使其混合,得到於下述表13所示的糖化酵素濃度(在本實施例中為纖維素酶濃度)及PPG1000濃度的含有化合物(A)的糖化酵素水溶液。將該含有化合物(A)的糖化酵素水溶液作為比較試樣27。且,於下述表13所示的比較試樣27之各構成成分的濃度為含有化合物(A)的糖化酵素水溶液中之濃度。   [0166] 又,作為化合物(A)使用2,4,7,9-四甲基-5-癸炔-4,7-二醇的環氧乙烷加成物(環氧乙烷加成莫耳數m+n=10)以外,與比較試樣27同樣,製作出含有化合物(A)的糖化酵素水溶液。將該含有化合物(A)的糖化酵素水溶液作為於下述表13所示的比較試樣28。且,於下述表13所示的比較試樣28之各構成成分的濃度為含有化合物(A)的糖化酵素水溶液中之濃度。   [0167] (4-5.含有矽砂的糖化酵素水溶液)   藉由以下的程序製作出含有矽砂的糖化酵素水溶液。   於脫離子交換水中添加作為pH調整的最終成為0.05M之1M乙酸緩衝液(pH5.0)、作為含有矽石的物質的矽砂(5號、Toyo Materan股份有限公司製之矽石含有率:95質量%、平均一次粒子徑:310μm)及以4-2.所得之纖維素酶水溶液,在室溫下,一邊以轉子進行100rpm的30分鐘轉動一邊使其混合,得到於下述表13所示的糖化酵素濃度(在本實施例中為纖維素酶濃度)及矽砂濃度之含有矽砂的糖化酵素水溶液。將該含有矽砂的糖化酵素水溶液作為比較試樣29。且,於下述表13所示的比較試樣29之各構成成分的濃度為含有矽砂的糖化酵素水溶液中之濃度。   [0168][0169] 且,於上述表13中之化合物(A)的種類U及V如以下所示。   U:聚丙二醇(平均分子量1000)   V:2,4,7,9-四甲基-5-癸炔-4,7-二醇的環氧乙烷加成物(環氧乙烷加成莫耳數m+n=10)     (日信化學工業股份有限公司製炔二醇465)   [0170] (4-6.糖化反應液)   使用試樣29, 30的糖化酵素組成物、比較試樣27, 28之含有化合物(A)的糖化酵素水溶液及比較試樣29之含有矽砂的糖化酵素水溶液以外,與試樣1~試樣18的糖化酵素組成物同樣地,得到試樣29, 試樣30及比較試樣27~比較試樣29的糖化反應液。   [0171] (4-7.糖之製造)   與實施例1同樣地,將使用上述之各試樣及各比較試樣的糖化反應液在25℃之恆溫槽中攪拌下進行2天酵素反應。藉由該酵素反應得到糖(葡萄糖)。   [0172] (4-8.葡萄糖生成量之算出) (實施例29,實施例30)   與實施例1同樣地,對於由試樣29及試樣30的糖化酵素組成物所得之糖化反應液(以下稱為實施例29, 30的糖化反應液),算出4-7.之酵素反應2日後的葡萄糖生成量,將此等結果如下述表14所示。   [0173] (比較例27~29)   與實施例1同樣地,對於由比較試樣27及比較試樣28之含有化合物(A)的糖化酵素水溶液及比較試樣29之含有矽砂的糖化酵素水溶液所得之糖化反應液(以下稱為比較例27~29的糖化反應液),算出4-7.酵素反應2日後之葡萄糖生成量,將此等結果如下述表14所示。   [0174][0175] (4-9.糖化反應效率)   依據上述表14之葡萄糖生成量,對於各糖化反應液的糖化反應效率進行檢討。首先,對於由實施例29、實施例30及比較例1、比較例27~比較例29中之葡萄糖生成量,藉由PPG1000或2,4,7,9-四甲基-5-癸炔-4,7-二醇之環氧乙烷加成物的添加之糖化反應效率提高效果進行檢討。   [0176] 圖6表示藉由實施例29, 30及比較例1,27~29之PPG1000或2,4,7,9-四甲基-5-癸炔-4,7-二醇之環氧乙烷加成物的添加之糖化反應效率的提高效果之測定結果圖示。如圖6所示,比較比較例1的糖化反應液、於纖維素酶水溶液添加PPG1000或2,4,7,9-四甲基-5-癸炔-4,7-二醇之環氧乙烷加成物的比較例27、比較例28的糖化反應液、於纖維素酶水溶液添加矽砂之比較例29的糖化反應液、於纖維素酶水溶液添加矽砂及PPG1000,或添加矽砂及2,4,7,9-四甲基-5-癸炔-4,7-二醇之環氧乙烷加成物的實施例29、實施例30的糖化反應液時,此等中,於纖維素酶水溶液添加矽砂及PPG1000或矽砂及2,4,7,9-四甲基-5-癸炔-4,7-二醇之環氧乙烷加成物的實施例29、實施例30的葡萄糖生成量有增加,見到糖化反應效率之提高。因此,對於纖維素的糖化反應,作為含有矽石的物質使用矽砂,藉由進一步併用PPG1000或2,4,7,9-四甲基-5-癸炔-4,7-二醇之環氧乙烷加成物,確認到糖化反應效率的提高。   [0177] [5.使用糖之乙醇的製造] (5-1.酵母水溶液)   藉由以下的程序製作出酵母水溶液。   於預先調整為35℃的脫離子交換水40g中添加酵母之粉末0.2g,保持35℃下使用磁力攪拌器,一邊進行20分鐘攪拌一邊溶解後得到0.5質量%(=酵母粉末0.2g/脫離子交換水40g)之酵母水溶液。且,作為酵母使用啤酒酵母菌(Saccharomyces)屬之釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae;S. cerevisiae) YP2(Sigma Aldrich製)。   [0178] (5-2.乙醇發酵水溶液)   藉由以下的程序製作出乙醇發酵水溶液。   於脫離子交換水中添加作為pH調整的最終成為pH5前後的硫酸、作為氮源的最終成為0.21mg/mL之尿素、在 1-2.所得之纖維素酶水溶液及在5-1.所得之酵母水溶液,在室溫下以磁力攪拌器下,一邊進行10分鐘轉動一邊進行混合,得到於下述表15所示的糖化酵素濃度(在本實施例中為纖維素酶濃度)及酵母濃度之乙醇發酵水溶液。將該乙醇發酵水溶液作為比較試樣30。   [0179] (5-3.乙醇發酵組成物)   藉由以下的程序製作出乙醇酵素組成物。   於脫離子交換水中,添加作為pH調整的最終成為pH5前後之硫酸、作為氮源的最終成為0.21mg/mL之尿素、作為含有矽石的物質之藉由水玻璃法所製造的中實且球狀之膠態矽石(平均一次粒子徑:85nm)分散於水的鹼性矽石溶膠(pH9.5、矽石濃度40質量%)、作為化合物(A)與2-2.同樣的PPG1000、在1-2.所得之纖維素酶水溶液及藉由5-1.所得之酵母水溶液,在室溫下,以磁力攪拌器下,一邊進行10分鐘轉動一邊使其混合,得到於下述表15所示的糖化酵素濃度(在本實施例中為纖維素酶濃度)、矽石濃度、PPG1000濃度及酵母濃度的乙醇發酵組成物。將該乙醇發酵組成物作為試樣31。且,於下述表15所示的試樣31之各構成成分的濃度為乙醇發酵組成物中之濃度。   [0180] (5-4.含有PPG1000的乙醇發酵水溶液)   藉由以下的程序製作出含有PPG1000的乙醇發酵水溶液。   於脫離子交換水中添加作為pH調整之最終成為pH5前後之硫酸、作為氮源的最終成為0.21mg/mL之尿素、作為化合物(A)之PPG1000、在1-2.所得之纖維素酶水溶液及在5-1.所得之酵母水溶液,在室溫下,以磁力攪拌器下一邊進行10分鐘轉動,一邊混合,得到於下述表15所示的糖化酵素濃度、PPG1000濃度及酵母濃度之含有PPG1000的乙醇發酵水溶液。將該含有PPG1000的乙醇發酵水溶液作為比較試樣31。且,於下述表15所示的比較試樣31之各構成成分的濃度為含有PPG1000的乙醇發酵水溶液中之濃度。   [0181] (5-5.含有矽石的乙醇發酵水溶液)   藉由以下的程序製作出含有矽石的乙醇發酵水溶液。   於脫離子交換水中添加作為pH調整的最終成為pH5前後之硫酸、作為氮源的最終成為0.21mg/mL之尿素、作為矽石藉由水玻璃法所製造的中實且球狀之膠態矽石(平均一次粒子徑粒子徑85nm)分散於水的鹼性矽石溶膠(pH9.5、矽石濃度40質量%)、在1-2.所得之纖維素酶水溶液及在5-1.所得之酵母水溶液,在室溫下,一邊以轉子進行100rpm的30分鐘轉動一邊使其混合,得到於下述表15所示的糖化酵素濃度(在本實施例中為纖維素酶濃度)、矽石濃度、及酵母濃度之含有矽石的乙醇發酵水溶液。將該含有矽石的乙醇發酵水溶液作為比較試樣32。且,於下述表15所示的比較試樣32之各構成成分的濃度為含有矽石的乙醇發酵水溶液中之濃度。   [0182][0183] (5-6.糖化反應及乙醇發酵液)   於試樣31的乙醇發酵組成物中添加微結晶纖維素粉末,經分散作為使用試樣31的糖化反應及乙醇發酵液。具體程序如以下所示。   [0184] 首先,於13.5mL的玻璃瓶中放入10mL的試樣31,藉由在4mmφ之10mm的攪拌器進行攪拌狀態下,添加微結晶纖維素粉末(結晶型:I型、商品名:Avicel PH-101、Sigma Aldrich製)0.20g(20mg/mL相當)後,以附有絶對孔徑0.22μm之疏水性PTEF製膜濾器的矽栓拴住。   [0185] 又,使用比較試樣30之乙醇發酵水溶液、比較試樣31之含有PPG1000的乙醇發酵水溶液及比較試樣32之含有含矽石物質的乙醇發酵水溶液以外,與試樣31之乙醇發酵組成物同樣地得到各比較試樣的糖化反應及乙醇發酵液。   [0186] (5-7.乙醇之製造)   將使用上述各試樣及各比較試樣的糖化反應及乙醇發酵液在31℃之恆溫槽中,攪拌下下2天同時進行各酵素反應及乙醇發酵。使用藉由該酵素反應所得之糖(葡萄糖)使乙醇發酵後得到乙醇。   [0187] (5-8.乙醇生成量之算出) (實施例31)   使用氣體層析法(GC),算出由試樣31之乙醇發酵組成物所得之糖化反應及乙醇發酵液(以下稱為實施例31的糖化反應及乙醇發酵液)的酵素反應及乙醇發酵後之乙醇生成量。   [0188] 於2mL微量試管中,放入實施例31的糖化反應及乙醇發酵液的試料0.5mL,在105℃下15分使酵素及酵母失活。其次欲除去未反應之纖維素、含有矽石的物質及酵母,藉由高速冷卻離心分離機SRX-201(Tommy Seiko Co., Ltd.製)以15,000G、30分鐘的條件下進行離心分離後,回收澄清液。乙醇生成量之定量為使用氣體層析法GC-2014s(島津股份有限公司製作所製)的1點標準曲線法進行測定,乙醇生成量(mg/mL)之測定結果如下述表16所示。   [0189] 具體的分析條件如以下所示。 <分析條件>   管柱:Pola packQ、長度1m、內徑3.2mm(GL Sciences股份有限公司製)   檢測器:FID   管柱溫度:150℃   流量:40mL/min   試樣量:2μL   標準曲線用標品:乙醇10mg/mL水溶液   [0190] (比較例30~比較例32)   與實施例31同樣地,對於比較試樣30之乙醇發酵水溶液、比較試樣31之含有PPG1000的乙醇發酵水溶液及比較試樣32之含有含矽石物質的乙醇發酵水溶液所得之各糖化反應及各乙醇發酵液(以下稱為比較例30~比較例32的糖化反應及乙醇發酵液),算出5-7.的糖化反應及乙醇發酵2日後之乙醇生成量,該結果如下述表16所示。   [0191][0192] (5-9.乙醇發酵效率)   依據上述表16之乙醇生成量,對於各糖化反應及乙醇發酵液之乙醇發酵效率做檢討。由實施例31及比較例30~比較例32中之乙醇生成量,對於藉由PPG1000之添加的糖化反應效率之提高效果做檢討。   [0193] 圖7表示實施例31及比較例30~32之藉由PPG1000的添加之乙醇發酵效率的提高效果之測定結果圖。如圖7所示,比較比較例30、比較例32的糖化反應及乙醇發酵液時,於纖維素酶水溶液及酵母水溶液中添加矽石的比較例32的乙醇生成量為增加,見到乙醇生成效率之提高。又,比較實施例31及比較例32的糖化反應及乙醇發酵液時,於纖維素酶水溶液及酵母水溶液添加矽石及PPG1000的實施例31之乙醇生成量為增加,見到進一步乙醇生成效率之提高。另一方面,比較比較例30、比較例31的糖化反應及乙醇發酵液時,即使於纖維素酶水溶液及酵母水溶液添加PPG1000,亦無法提高乙醇生成效率。因此,對於纖維素的糖化反應及乙醇發酵,藉由併用含有矽石的物質與PPG1000時,確認到乙醇生成效率之提高。 [產業上可利用性]   [0194] 本發明係關於適用於自含有纖維素或半纖維素的纖維素系生物質生成所謂葡萄糖的糖之糖化技術的產業領域,例如可利用在纖維素系生物乙醇之製造等。
[0045]   [圖1]表示實施例3,7,8及比較例1~3,6,10~14的藉由三丙二醇的添加之糖化反應效率的提高效果之測定結果圖。   [圖2]表示實施例1~6及比較例1,4~9,12的藉由三丙二醇濃度之糖化反應效率的提高效果之測定結果圖。   [圖3]表示實施例9~20及比較例1,12的藉由多元醇化合物、多元醇化合物的衍生物或乙炔甘醇之環氧烷加成物的添加之糖化反應效率的提高效果之測定結果圖。   [圖4]表示實施例21及比較例15~17的藉由PPG1000的添加之糖化反應效率的提高效果之測定結果圖。   [圖5]表示實施例22~28及比較例18~26的藉由PPG1000的添加之糖化反應效率的提高效果之測定結果圖。   [圖6]表示實施例29, 30及比較例1,27~29的藉由PPG1000或2,4,7,9-四甲基-5-癸炔-4,7-二醇的環氧乙烷加成物之添加的糖化反應效率之提高效果的測定結果圖。   [圖7]表示實施例31及比較例30~32的藉由PPG1000之乙醇發酵效率的提高效果之測定結果圖。

Claims (22)

  1. 一種糖化反應液,其為將纖維素及半纖維素中至少一方進行糖化者,其特徵為含有前述纖維素及前述半纖維素中至少一方、糖化酵素、矽石或含有矽石的物質,與選自由下述一般式(1)所示多元醇化合物及其衍生物,及下述一般式(2)所示乙炔甘醇及其環氧烷加成物所成群的至少1種化合物(A)者;[一般式(1)中的R1 表示碳數1以上9以下的直鏈烷基,R2 及R3 各獨立表示氫原子、鹵素原子、醯基、乙醯基、醯胺基、胺基、烯丙基、芳基、醛基、碳數1以上6以下的直鏈或支鏈的烷基、碳數1以上6以下的伸烷基、碳數1以上6以下的烯基、碳數1以上6以下的烷氧基、胺基甲醯基、羧基、氰基、磺酸基、磺醯基、甲苯磺醯基、硝基、羥基、苯基、苯甲基、磷醯基或巰基,這些基可進一步具有取代基;R4 及R5 各獨立表示氫原子、醯基、乙醯基、醯胺基、烯丙基、芳基、醛基、碳數1以上6以下的直鏈或支鏈的烷基、碳數1以上6以下的伸烷基、碳數1以上6以下的烯基、胺基甲醯基、羧基、氰基、磺酸基、磺醯基、甲苯磺醯基、苯基、苯甲基或磷醯基,這些基可進一步具有取代基;又重複單位n為符合1以上500以下][一般式(2)中的R1 、R2 、R3 、及R4 各獨立表示主鏈的碳數為1以上10以下的飽和或不飽和之直鏈或支鏈的烷基或烯基,前述烷基或烯基可進一步具有取代基;又,A1 及A2 各獨立表示主鏈的碳數為2以上4以下的直鏈或支鏈的環氧烷基(但,環氧烷基的單末端之氧原子鍵結於氫原子,單末端的碳原子鍵結於氧原子者),環氧烷單位的加成莫耳數m及n的總和為符合0以上50以下]。
  2. 如請求項1之糖化反應液,其中前述含有矽石的物質為矽藻土或矽砂。
  3. 如請求項1或請求項2之糖化反應液,其中前述矽石或前述含有矽石的物質中之矽石與前述化合物(A)之質量比率(化合物(A)/矽石)為0.0001以上,1以下。
  4. 如請求項1或請求項2之糖化反應液,其中前述多元醇化合物為含有選自由2元醇、3元醇及4元醇的單體、二聚物及三聚物以及聚烷二醇所成群的至少1種者。
  5. 如請求項1或請求項2之糖化反應液,其中前述多元醇化合物的衍生物為含有選自由多元醇醚類及聚烷二醇醚類所成群的至少1種者。
  6. 如請求項1或請求項2之糖化反應液,其中前述化合物(A)為含有選自由乙二醇、丙二醇、二丙二醇、三丙二醇、1,3-丁二醇、甘油、季戊四醇、聚乙二醇、聚丙二醇、丙二醇1-單甲基醚、2,4,7,9-四甲基-5-癸炔-4,7-二醇的環氧乙烷加成物(環氧乙烷加成莫耳數m+n=10)、2,4,7,9-四甲基-5-癸炔-4,7-二醇的環氧乙烷加成物(環氧乙烷加成莫耳數m+n=30)所成群的至少1種者。
  7. 一種糖化酵素組成物,其為將纖維素及半纖維素的至少一方進行糖化者,其特徵為含有糖化酵素、矽石或含有矽石的物質,與選自下述一般式(1)所示多元醇化合物及其衍生物及下述一般式(2)所示乙炔甘醇及其環氧烷加成物所成群的至少1種化合物(A),前述矽石或前述含有矽石的物質中之矽石與前述化合物(A)之質量比率(化合物(A)/矽石)為0.0001以上,1以下;[一般式(1)中之R1 表示碳數1以上9以下的直鏈烷基,R2 及R3 各獨立表示氫原子、鹵素原子、醯基、乙醯基、醯胺基、胺基、烯丙基、芳基、醛基、碳數1以上6以下的直鏈或支鏈的烷基、碳數1以上6以下的伸烷基、碳數1以上6以下的烯基、碳數1以上6以下的烷氧基、胺基甲醯基、羧基、氰基、磺酸基、磺醯基、甲苯磺醯基、硝基、羥基、苯基、苯甲基、磷醯基或巰基,這些基可進一步具有取代基;R4 及R5 各獨立表示氫原子、醯基、乙醯基、醯胺基、烯丙基、芳基、醛基、碳數1以上6以下的直鏈或支鏈的烷基、碳數1以上6以下的伸烷基、碳數1以上6以下的烯基、胺基甲醯基、羧基、氰基、磺酸基、磺醯基、甲苯磺醯基、苯基、苯甲基或磷醯基,這些基可進一步具有取代基;又重複單位n為符合1以上500以下][一般式(2)中之R1 、R2 、R3 及R4 各獨立表示主鏈的碳數為1以上10以下的飽和或不飽和之直鏈或支鏈的烷基或烯基,前述烷基或烯基可進一步具有取代基;又,A1 及A2 各獨立表示主鏈的碳數為2以上4以下的直鏈或支鏈的環氧烷基(但,環氧烷基的單末端之氧原子鍵結於氫原子,單末端的碳原子鍵結於氧原子者),環氧烷單位的加成莫耳數m及n的總和為符合0以上50以下]。
  8. 如請求項7所記載的糖化酵素組成物,其中前述含有矽石的物質為矽藻土或矽砂。
  9. 如請求項7或請求項8之糖化酵素組成物,其中前述多元醇化合物為含有選自由2元醇、3元醇及4元醇之單體、二聚物及三聚物以及聚烷二醇所成群的至少1種者。
  10. 如請求項7或請求項8之糖化酵素組成物,其中前述多元醇化合物之衍生物為含有選自由多元醇醚類及聚烷二醇醚類所成群的至少1種者。
  11. 如請求項7或請求項8之糖化酵素組成物,其中前述化合物(A)為含有選自由乙二醇、丙二醇、二丙二醇、三丙二醇、1,3-丁二醇、甘油、季戊四醇、聚乙二醇、聚丙二醇、丙二醇1-單甲基醚、2,4,7,9-四甲基-5-癸炔-4,7-二醇之環氧乙烷加成物(環氧乙烷加成莫耳數m+n=10)、2,4,7,9-四甲基-5-癸炔-4,7-二醇之環氧乙烷加成物(環氧乙烷加成莫耳數m+n=30)所成群的至少1種者。
  12. 一種糖的製造方法,其為使用將纖維素及半纖維素的至少一方進行糖化的糖化反應液而製造糖者,其特徵為使用含有前述纖維素及前述半纖維素的至少一方、糖化酵素、矽石或含有矽石的物質,與選自由下述一般式(1)所示多元醇化合物及其衍生物,及下述一般式(2)所示乙炔甘醇及其環氧烷加成物所成群的至少1種化合物(A)之糖化反應液而製造糖者;[一般式(1)中之R1 表示碳數1以上9以下的直鏈烷基,R2 及R3 各獨立表示氫原子、鹵素原子、醯基、乙醯基、醯胺基、胺基、烯丙基、芳基、醛基、碳數1以上6以下的直鏈或支鏈的烷基、碳數1以上6以下的伸烷基、碳數1以上6以下的烯基、碳數1以上6以下的烷氧基、胺基甲醯基、羧基、氰基、磺酸基、磺醯基、甲苯磺醯基、硝基、羥基、苯基、苯甲基、磷醯基或巰基,這些基可進一步具有取代基。R4 及R5 各獨立表示氫原子、醯基、乙醯基、醯胺基、烯丙基、芳基、醛基、碳數1以上6以下的直鏈或支鏈的烷基、碳數1以上6以下的伸烷基、碳數1以上6以下的烯基、胺基甲醯基、羧基、氰基、磺酸基、磺醯基、甲苯磺醯基、苯基、苯甲基或磷醯基,這些基可進一步具有取代基;又重複單位n為符合1以上500以下][一般式(2)中之R1 、R2 、R3 、及R4 各獨立表示主鏈的碳數為1以上10以下的飽和或不飽和之直鏈或支鏈的烷基或烯基,前述烷基或烯基可進一步具有取代基;又,A1 及A2 各獨立表示主鏈的碳數為2以上4以下的直鏈或支鏈之環氧烷基(但,環氧烷基的單末端之氧原子鍵結於氫原子,單末端的碳原子鍵結於氧原子者),環氧烷單位的加成莫耳數m及n的總和為符合0以上50以下]。
  13. 如請求項12之糖的製造方法,其中前述含有矽石的物質為矽藻土或矽砂。
  14. 如請求項12或請求項13之糖的製造方法,其中前述矽石或前述含有矽石的物質中之矽石與前述化合物(A)的質量比率(化合物(A)/矽石)為0.0001以上,1以下者。
  15. 如請求項12或請求項13之糖的製造方法,其中前述多元醇化合物為含有選自由2元醇、3元醇及4元醇的單體、二聚物及三聚物,以及聚烷二醇所成群的至少1種者。
  16. 如請求項12或請求項13之糖的製造方法,其中前述多元醇化合物的衍生物為含有選自由多元醇醚類及聚烷二醇醚類所成群的至少1種者。
  17. 如請求項12或請求項13之糖的製造方法,其中前述化合物(A)為含有選自由乙二醇、丙二醇、二丙二醇、三丙二醇、1,3-丁二醇、甘油、季戊四醇、聚乙二醇、聚丙二醇、丙二醇1-單甲基醚、2,4,7,9-四甲基-5-癸炔-4,7-二醇之環氧乙烷加成物(環氧乙烷加成莫耳數m+n=10)、2,4,7,9-四甲基-5-癸炔-4,7-二醇之環氧乙烷加成物(環氧乙烷加成莫耳數m+n=30)所成群的至少1種者。
  18. 一種乙醇之製造方法,其特徵為使用藉由如請求項12至請求項17中一項的糖之製造方法所得之糖,藉由發酵微生物進行乙醇發酵而製造出乙醇者。
  19. 如請求項18之乙醇的製造方法,其中於製造糖的步驟中添加發酵微生物,同時進行糖之製造與乙醇發酵。
  20. 如請求項18或請求項19之乙醇的製造方法,其中前述發酵微生物為酵母、黴菌或細菌。
  21. 如請求項20之乙醇的製造方法,其中前述發酵微生物為啤酒酵母菌(Saccharomyces)屬、單胞菌(Zymomonas)屬、畢赤酵母(Pichia)屬、念珠菌(Candida)屬、發酵桿菌(Zymobacter)屬、棒狀桿菌(Corynebacterium)屬、克魯維酵母(Kluyveromyces)屬或大腸桿菌(Escherichia)屬所屬之微生物。
  22. 如請求項18或請求項19之乙醇的製造方法,其中將乙醇發酵在15℃以上,35℃以下進行。
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