定義
術語「C
a
-烷基」意欲指示當自具支鏈或直鏈烴去除一個氫原子時所獲得之基團。該烷基包含1-2個碳原子，例如甲基及乙基。「烷基」中之碳原子數係由前綴「C
a
」指示，其中a係烴基中之碳數。因此，C
1
-烷基意欲指示包含1個碳原子之烷基，即甲基。C
2
-烷基意欲指示包含2個碳原子之烷基，即乙基。 術語「氰基」意欲指示藉助碳原子附接至母體分子部分之-CN基團。 術語「C
6
-環烷基」意欲指示包含6個碳原子之飽和環烷烴烴基，即環己基。 術語「烴基」意欲指示僅含有氫原子及碳原子之基團，其可含有一或多個碳-碳雙鍵及/或碳-碳三鍵，且其可包含環狀部分與具支鏈或直鏈部分之組合。該烴包含1-10個碳原子且較佳包含1-6個，例如1-4個、例如1-3個、例如1-2個、例如6個碳原子。術語包括如本文所指示之烷基及環烷基。 術語「羥基」或「羥基」意欲指示-OH基。 BrettPhos意欲指示2-(二環己基膦基)3,6-二甲氧基-2′,4′,6′-三異丙基-1,1'-聯苯。 tBuBrettPhos意欲指示2-(二-第三丁基膦基)-2′,4′,6′-三異丙基-3,6-二甲氧基-1,1′-聯苯。 tBuXPhos意欲指示2-二-第三丁基膦基-2′,4′,6′-三異丙基聯苯。 BrettPhos Pd G1意欲指示氯[2-(二環己基膦基)-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯][2-(2-胺基乙基)苯基]鈀(II)。 BrettPhos Pd G3意欲指示甲磺酸[(2-二-環己基膦基-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯)-2-(2'-胺基-1,1'-聯苯)]鈀(II)。 tBuBrettPhos Pd G3意欲指示甲磺酸[(2-二-第三丁基膦基-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯)-2-(2'-胺基-1,1'-聯苯)]鈀(II)， tBuXPhos Pd G1意欲指示[2-(二-第三丁基膦基)-2′,4′,6′-三異丙基-1,1′-聯苯][2-(2-胺基乙基)苯基)]氯化鈀(II)。 tBuXPhos Pd G3意欲指示甲磺酸[(2-二-第三丁基膦基-2′,4′,6′-三異丙基-1,1′-聯苯)-2-(2′-胺基-1,1′-聯苯)]鈀(II)。 若將取代基闡述為獨立地選自群組，則每一取代基獨立於另一者經選擇。因此，每一取代基可與其他取代基相同或不同。 術語「視情況經取代」意指「未經取代或經取代」，且因此本文所述通式涵蓋含有指定可選取代基之化合物以及不含有可選取代基之化合物。 術語「醫藥上可接受之鹽」意欲指示藉由使式(I)化合物反應所製備之鹽，其包含鹼性部分及適宜無機或有機酸，例如鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、硝酸、磷酸、甲酸、乙酸、2,2-二氯乙酸、己二酸、抗壞血酸、L-天冬氨酸、L-麩氨酸、半乳糖二酸、乳酸、馬來酸、L-蘋果酸、苯二甲酸、檸檬酸、丙酸、苯甲酸、戊二酸、葡萄糖酸、D-葡萄糖醛酸、甲磺酸、柳酸、琥珀酸、丙二酸、酒石酸、苯磺酸、乙烷-1,2-二磺酸、2-羥基乙磺酸、甲苯磺酸、胺磺酸、富馬酸、醋尿酸、L-乳酸、乙醇酸、草酸、糖二酸、DL-苦杏仁酸或L-酒石酸。醫藥上可接受之鹽之其他實例列示於Berge, S.M.; J. Pharm. Sci.; (1977), 66(1), 1-19中，其係以引用方式併入本文中。 術語「溶劑合物」意欲指示藉由化合物(例如式(I)化合物)與溶劑(例如醇、甘油、二噁烷或水)之間之相互作用形成之物質，其中該等物質係呈結晶型或呈非晶型。當水為溶劑時，該等物質稱為水合物。 如本文所用術語「治療」意指出於抵抗疾病、病症或病狀之目的管控及照護患者。術語意欲包括延遲疾病、病症或病狀之進展，改善、緩和或緩解症狀及併發症及/或治癒或消除疾病、病症或病狀。術語亦包括病狀之預防，其中預防應理解為出於抵抗疾病、病狀或病症之目的管控及照護患者，且包括投與活性化合物以防止症狀或併發症之發作。然而，預防(預防性)及治療性(治癒性)治療係兩個單獨態樣。 本文所引用之所有參考文獻(包括出版物、專利申請案及專利)皆係以全文引用之方式併入本文中，且其併入程度如同將每一參考文獻個別且特別指示以引用方式併入一般，不管在本文別處所做特定文件之任何單獨提供之併入。
本發明之實施例
在一實施例中，本發明提供通式(I)化合物，其中式(I)係通式(Ia)
其中R
1
-R
2
、R
4
-R
7
係如上文所定義，且其中Ra、Rb、Rc及Rd各自獨立地選自氫及氘； 或其醫藥上可接受之鹽、水合物或溶劑合物。 在一實施例中，本發明提供通式(I)化合物；其中式(I)係通式(Ib)
其中R
1
-R
2
、R
4
-R
7
係如上文所定義，且其中Ra、Rb、Rc及Rd各自獨立地選自氫及氘； 或其醫藥上可接受之鹽、水合物或溶劑合物。 在一實施例中，本發明提供通式(I)化合物；其中式(I)係通式(Ic)
其中R
1
-R
2
、R
4
-R
7
係如上文所定義，且其中Ra、Rb、Rc及Rd各自獨立地選自氫及氘； 或其醫藥上可接受之鹽、水合物或溶劑合物。 在一實施例中，本發明提供通式(I)化合物；其中式(I)係通式(Id)
其中R
1
-R
2
、R
4
-R
7
係如上文所定義，且其中Ra、Rb、Rc及Rd各自獨立地選自氫及氘； 或其醫藥上可接受之鹽、水合物或溶劑合物。 在一實施例中，本發明提供如本文所定義之通式(I)化合物；其中 A代表C
6
-環烷基；R
1
代表C
1
-烷基；R
2
代表C
1
-烷基，其中該C
1
-烷基經選自R
6
之取代基取代；R
3
代表C
2
-烷基，其中該C
2
-烷基經選自R
7
之取代基取代；R
4
代表氫；R
5
代表氫；R
6
代表氰基；R
7
代表羥基； 或其醫藥上可接受之鹽、水合物或溶劑合物。 在一實施例中，本發明提供如本文所定義之通式(I)化合物；其中 A代表C
6
-環烷基；R
1
代表視情況經一或多個氘取代之C
1
-烷基；R
2
代表C
1
-烷基，其中該C
1
-烷基經選自R
6
之取代基取代；R
3
代表C
2
-烷基，其中該C
2
-烷基經選自R
7
之取代基取代；R
4
代表氫；R
5
代表氫；R
6
代表氰基；R
7
代表羥基； 或其醫藥上可接受之鹽、水合物或溶劑合物。 認為本文所述兩個或更多個實施例之任何組合皆在本發明之範圍內。 本發明包括所有實施例，其中R
1
、R
2
、R
3
、R
4
、R
5
、R
6
及R
7
係以任何組合進行組合，如本文別處所述。 在實施例中，本發明提供如本文所定義之通式(I)化合物；該化合物係選自：
反式 -
2-[4-[2-[1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈，
反式 -
2-[4-[2-[(1
S
)-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈，
反式 -
2-[4-[2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈，
反式 -
2-[4-[2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-6-(三氘甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈，
反式 -
2-[4-[2-[1,2,2,2-四氘-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈，
順式 -
2-[4-[2-[1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈及
順式 -
2-[4-[2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈 或其醫藥上可接受之鹽、水合物或溶劑合物。 在一實施例中，本發明提供選自以下各項之如本文所定義之通式(I)化合物：
反式 -
2-[4-[2-[1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈，
反式 -
2-[4-[2-[(1
S
)-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈及
反式 -
2-[4-[2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈 或其醫藥上可接受之鹽、水合物或溶劑合物。 在一實施例中，本發明提供如本文所定義之通式(I)化合物，其選自以下各項之氘化形式：
反式 -
2-[4-[2-[1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈，
反式 -
2-[4-[2-[(1
S
)-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈及
反式 -
2-[4-[2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈 或其醫藥上可接受之鹽、水合物或溶劑合物。 本發明之實施例提供式(I)化合物，該化合物係
反式 -
2-[4-[2-[1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈 或其醫藥上可接受之鹽、水合物或溶劑合物。 本發明之實施例提供式(I)化合物，該化合物係
反式 -
2-[4-[2-[(1
S
)-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈或其醫藥上可接受之鹽、水合物或溶劑合物。 本發明之實施例提供式(I)化合物，該化合物係
反式 -
2-[4-[2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈或其醫藥上可接受之鹽、水合物或溶劑合物。 本發明之實施例提供式(I)化合物，該化合物係
反式 -
2-[4-[2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-6-(三氘甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈或其醫藥上可接受之鹽、水合物或溶劑合物。 本發明之實施例提供式(I)化合物，該化合物係
反式 -
2-[4-[2-[1,2,2,2-四氘-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈或其醫藥上可接受之鹽、水合物或溶劑合物。 本發明之實施例提供式(I)化合物，該化合物係
順式 -
2-[4-[2-[1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈或其醫藥上可接受之鹽、水合物或溶劑合物。 本發明之實施例提供式(I)化合物，該化合物係
順式 -
2-[4-[2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈或其醫藥上可接受之鹽、水合物或溶劑合物。 在一實施例中，本發明提供通式(I)化合物；其中該化合物係：
反式 -
2-[4-[2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈 或其醫藥上可接受之鹽。 在一實施例中，本發明提供通式(I)化合物；其中該化合物係：
反式 -
2-[4-[2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈 或其水合物。 在一實施例中，本發明提供通式(I)化合物；其中該化合物係：
反式 -
2-[4-[2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈 或其溶劑合物。 在一實施例中，本發明提供通式(I)化合物；其中該化合物係
反式 -
2-[4-[2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈之氘化形式。 在一實施例中，本發明提供通式(I)化合物；其中該化合物係：
反式 -
2-[4-[2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈。 在一實施例中，本發明提供通式(I)化合物；其中該化合物係：
反式 -
2-[4-[2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈丙二酸鹽。 在一實施例中，本發明提供通式(I)化合物；其中該化合物係：
反式 -
2-[4-[2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈乙醇酸鹽。 在一實施例中，本發明提供通式(I)化合物；其中該化合物係：
反式 -
2-[4-[2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈L-酒石酸鹽。 在一實施例中，本發明提供通式(I)化合物；其中該化合物係：
反式 -
2-[4-[2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈L-蘋果酸鹽。 在一實施例中，本發明提供通式(I)化合物；其中該化合物係：
反式 -
2-[4-[2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈硫酸鹽。 在一實施例中，本發明提供通式(I)化合物；其中該化合物係：
反式 -
2-[4-[2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈鹽酸鹽。 在一實施例中，本發明提供通式(I)化合物；其中該化合物係：
反式 -
2-[4-[2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈琥珀酸鹽。 在一實施例中，本發明提供通式(I)化合物；其中該化合物係：
反式 -
2-[4-[2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈草酸鹽。 在一實施例中，本發明提供通式(I)化合物；其中該化合物係：
反式 -
2-[4-[2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈富馬酸鹽。 在一實施例中，本發明提供通式(I)化合物；其中該化合物係：
反式 -
2-[4-[2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈1,5-萘二磺酸鹽。 在一實施例中，本發明提供通式(I)化合物；其中該化合物係：
反式 -
2-[4-[2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈DL-苦杏仁酸鹽。 在一或多個實施例中，本發明提供通式(II)之中間體
其中 A代表C
6
-環烷基； R
2
代表C
1
-烷基，其中該C
1
-烷基經選自R
6
之取代基取代；且其中該C
1
-烷基視情況經一或多個氘取代； R
4
代表氫或氘； R
5
代表氫或氘； R
6
代表氰基； R
8
代表鹵素； 或其鹽； 其用於製備通式(I)化合物。 在一實施例中，本發明提供選自以下各項之中間體： 2-[
反式 -
4-[(5-胺基-2-氯吡啶-4-基)胺基]環己基]乙腈 及其鹽。 在一或多個實施例中，本發明提供通式(III)之中間體：
其中 R
2
代表C
1
-烷基，其中該C
1
-烷基經選自R
6
之取代基取代；且其中該C
1
-烷基視情況經一或多個氘取代； R
4
代表氫或氘； R
5
代表氫或氘； R
6
代表氰基； R
7
代表羥基； Ra、Rb、Rc及Rd各自獨立地選自氫及氘； R
8
代表鹵素； 或其鹽； 其用於製備通式(Ia)之化合物。 在一實施例中，本發明提供選自以下各項之中間體： 2-[
反式 -
4-[6-氯-2-(1-羥基乙基)-1
H
-咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]-乙腈， 2-[
反式 -
4-[6-氯-2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-1
H
-咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈及
反式 -
2-[4-[6-氯-2-(1,2,2,2-四氘-1-羥基-乙基)咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基]環己基]乙腈 或其鹽。 在一實施例中，本發明係關於自化合物(III)製備化合物(Ia)之製程，其包含在鈀觸媒之存在下胺化化合物(III)， 其中 R
1
代表C
1
-烷基，其中該C
1
-烷基視情況經一或多個氘取代； R
2
代表C
1
-烷基，其中該C
1
-烷基經選自R
6
之取代基取代；且其中該C
1
-烷基視情況經一或多個氘取代； R
4
代表氫或氘； R
5
代表氫或氘； R
6
代表氰基； R
7
代表羥基； Ra、Rb、Rc及Rd各自獨立地選自氫及氘； R
8
代表鹵素； 或其鹽。 在一實施例中，本發明係關於自化合物(III)製備化合物(Ia)之製程，其包含在鈀觸媒之存在下胺化化合物(III)，其中鈀觸媒包含BrettPhos、tBuBrettPhos或tBuXPhos配體。 在一實施例中，本發明係關於自化合物(III)製備化合物(Ia)之製程，其包含在鈀觸媒之存在下胺化化合物(III)，其中鈀觸媒選自BrettPhos Pd G1、BrettPhos Pd G3、tBuBrettPhos Pd G3、tBuXPhos Pd G1或tBuXPhos Pd G3。 在一實施例中，本發明係關於自化合物(III)製備化合物(Ia)之製程，其包含在鈀觸媒之存在下胺化化合物(III)，其中鈀觸媒係自鈀源(例如PdCl
2
、Pd
2
(dba)
3
或Pd(OAc)
2
)與BrettPhos、tBuBrettPhos或tBuXPhos配體之組合製備。 式(I)化合物可以結晶型直接藉由自有機溶劑濃縮，或藉由自有機溶劑或該溶劑與可為有機或無機之共溶劑(例如水)之混合物結晶或再結晶獲得。晶體可以基本上無溶劑形式或作為溶劑合物(例如水合物)分離。本發明覆蓋所有結晶型(例如多形體及擬態多晶型)以及其混合物。 式(I)化合物包含經不對稱取代(手性)之碳原子，其導致異構形式(例如鏡像異構物及非鏡像異構物)之存在。本發明係關於所有此等異構物，其係呈光學純形式或其混合物形式(例如外消旋混合物或部分純化之光學混合物)。本發明之化合物及中間體之純立體異構形式可藉由應用業內已知之程序獲得。不同異構形式可藉由物理分離方法(例如選擇性結晶)及層析技術(例如使用手性固定相之高壓液相層析)分離。鏡像異構物可藉由選擇性結晶其可與光學活性酸形成之其非鏡像異構鹽彼此分離。光學純化化合物可隨後自該等純化非鏡像異構鹽釋放。鏡像異構物亦可藉由形成非鏡像異構衍生物來拆分。或者，鏡像異構物可藉由使用手性固定相之層析技術來分離。純立體異構形式亦可衍生自適當起始材料之相應純立體異構形式，條件係反應以立體選擇性或立體特異性方式進行。較佳地，若期望特定立體異構物，則該化合物將藉由立體選擇性或立體特異性製備方法合成。該等方法將有利地採用手性純起始材料。 此外，當分子中存在雙鍵或完全或部分飽和之環系統時，可形成幾何異構物。呈經分離、純或部分純化之幾何異構物或其混合物形式之任何幾何異構物皆意欲包括在本發明之範圍內。 二取代環烷烴(例如二取代環己烷)可形成幾何異構物；即
順式 -
及
反式 -
異構物。
順式 -
異構物在環之同一側具有兩種取代基，
反式 -
異構物在環之相對側具有取代基。呈經分離、純或部分純化之幾何異構物或其混合物形式之任何幾何異構物皆意欲包括在本發明之範圍內。 在通式(I)之化合物中，原子可展現其自然同位素豐度，或可以人工方式使一或多種原子富集具有相同原子序數但原子質量或質量數不同於在自然界中發現之原子質量或質量數的特定同位素。本發明欲包括通式(I)化合物之所有適宜同位素變化形式。舉例而言，氫之不同同位素形式包括
1
H、
2
H及
3
H，碳之不同同位素形式包括
12
C、
13
C及
14
C且氮之不同同位素形式包括
14
N及
15
N。富集氘(
2
H)可(例如)增加活體內半衰期或減少劑量方案，或可提供用作表徵生物試樣之標準之化合物。同位素富集之通式(I)化合物可藉由熟習此項技術者熟知之習用技術或藉由與本文一般程序及實例中所述彼等類似之製程使用適當同位素富集之試劑及/或中間體來製備。 在本發明之一或多個實施例中，如上文所定義之式I化合物可用於療法且具體而言可用於治療(例如)皮膚病，如增殖性及發炎皮膚病症、牛皮癬、異位性皮膚炎、硬皮症、酒渣鼻、皮膚癌、皮膚炎、疱疹樣皮膚炎、皮肌炎、白斑病、圓禿、接觸性皮膚炎、濕疹、乾皮病、魚鱗癬、蕁麻疹、慢性特發性搔癢症、壞疽性膿皮症、皮膚型紅斑狼瘡及扁平苔蘚；呼吸疾病，如氣喘、慢性阻塞性肺病、肺纖維化、囊性纖維化、鼻炎、細支氣管炎、棉屑沉著病、塵肺症、支氣管擴張症、過敏性肺炎、肺癌、間皮瘤及類肉瘤病；胃腸疾病，如發炎性腸病、潰瘍性結腸炎、克隆氏病、腹膜後纖維化、乳糜瀉及癌症；眼疾，如重症肌無力、薛格連氏症候群、結膜炎、鞏膜炎、眼色素層炎、乾眼症候群、角膜炎、虹膜炎；全身性適應症，如狼瘡、多發性硬化、類風濕性關節炎、I型糖尿病及糖尿病之併發症、癌症、關節黏連性脊椎炎及牛皮癬關節炎；癌症，如骨與軟組織腫瘤、頭頸癌以及其他自體免疫疾病及適應症，其中例如在器官移植中將期望免疫阻抑。 在一實施例中，本發明提供如上文所定義之式I化合物，其用於預防及/或治療牛皮癬或異位性皮膚炎。 在一實施例中，本發明提供如上文所定義之式I化合物，其用於預防及/或治療異位性皮膚炎。 在一實施例中，本發明提供預防、治療或改善免疫系統疾病(例如自體免疫疾病)之方法，該方法包含向患有該等疾病中至少一者之人投與有效量之一或多種上文通式I化合物視情況連同醫藥上可接受之載劑或一或多種賦形劑，視情況與其他具治療活性之化合物組合。 在一實施例中，本發明提供預防、治療或改善牛皮癬或異位性皮膚炎之方法，該方法包含向患有該等疾病中至少一者之人投與有效量之一或多種上文通式I化合物視情況連同醫藥上可接受之載劑或一或多種賦形劑，視情況與其他具治療活性之化合物組合。 在一實施例中，本發明提供預防、治療或改善異位性皮膚炎之方法，該方法包含向患有該等疾病中至少一者之人投與有效量之一或多種上文通式I化合物視情況連同醫藥上可接受之載劑或一或多種賦形劑，視情況與其他具治療活性之化合物組合。 在一實施例中，本發明提供式I之化合物，其用於製造供預防及/或治療免疫系統疾病用之藥劑，該疾病為(例如)自體免疫疾病，例如牛皮癬或異位性皮膚炎。 在一實施例中，本發明提供式I之化合物，其用於製造供預防及/或治療免疫系統疾病用之藥劑，該疾病為(例如)自體免疫疾病，例如異位性皮膚炎。 在本發明之一或多個實施例中，如上文所定義之式I化合物可用作抗發炎藥劑，其能夠調節蛋白質酪胺酸激酶之JAK家族之蛋白質酪胺酸激酶之活性，例如JAK1、JAK2、JAK3或TYK2蛋白質酪胺酸激酶。 在一或多個實施例中，本發明提供用於治療疾病之通式(I)化合物，該疾病對JAK1激酶活性之抑制作出反應。 除可用於人類治療以外，本發明之化合物亦可用於動物之獸醫治療，該等動物包括哺乳動物，例如馬、牛、綿羊、豬、狗及貓。
本發明之醫藥組合物
對於在療法中使用，本發明之化合物通常呈醫藥組合物之形式。因此，本發明係關於包含式(I)化合物、視情況連同一或多種其他具治療活性之化合物、連同醫藥上可接受之賦形劑、媒劑或載劑之醫藥組合物。賦形劑必須「可接受」意指與組合物之其他成分相容且對其接受者無害。 便捷地，活性成分包含0.0001重量%-99.9重量%之調配物。 以劑量單位形式，化合物可以適當間隔一天投與一或多次，然而，此始終取決於患者之病狀且根據由開業醫師所開之處方。便捷地，調配物之劑量單位含有介於0.001 mg與1000 mg之間、較佳介於0.1 mg與300 mg之間、更佳1-150 mg、例如3-100 mg之式(I)化合物。 本發明化合物之適宜劑量將(尤其)取決於患者之年齡及病狀、欲治療疾病之嚴重程度及開業醫師所熟知之其他因素。化合物可根據不同投藥時間表(例如每天、每週或以每月間隔)以經口、非經腸、局部、經皮或真皮內及其他途徑投與。一般而言，單一劑量將在0.001 mg/kg體重至400 mg/kg體重、例如0.1 - 4 mg/kg之範圍內。化合物可以濃注形式(即一次投與全部日劑量)或以分開劑量一天兩次或更多次投與。 在局部治療之情況下，提及「使用單位」可能較適當，其表示能投與患者且可容易地操縱並包裝之單一劑量，其保持為物理上及化學上穩定之單位劑量，包含活性材料本身或其與固體、半固體或液體醫藥稀釋劑或載劑之混合物。 與局部用途有關之術語「使用單位」意指單一來源，即單一劑量，其能以每平方公分治療面積0.001微克至1 mg且較佳0.05微克至0.5 mg所關注活性成分之施加形式局部投與患者。 亦設想在某些治療方案中，以較長間隔，例如每隔一天、每週或甚至以更長間隔投與係有益的。 若治療涉及投與其他具治療活性之化合物，則建議在
Goodman & Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics
，第9版，J.G. Hardman及L.E. Limbird (編輯)，McGraw-Hill 1995中查閱該等化合物之可用劑量。 可同時或依序投與本發明之化合物與一或多種其他活性化合物。 調配物包括(例如)呈適於經口、直腸、非經腸(包括皮下、腹膜內、肌內、關節內及靜脈內)、經皮、真皮內、經眼、局部、經鼻、舌下或經頰投與形式之彼等。 調配物可便捷地以劑量單位形式存在，並可藉由但不侷限於醫藥業內所熟知之任一方法製備，例如如Remington,
The Science and Practice of Pharmacy
，第21版，2005中所揭示。所有方法皆包括使活性成分與構成一或多種輔助成分之載劑締合之步驟。一般而言，調配物係藉由使活性成分與液體載劑、半固體載劑或微細固體載劑或該等之組合均勻且充分地締合，且然後(若需要)使產物成型為期望調配物來製備。 適於經口及經頰投與之本發明調配物可呈以下形式：各自含有預定量活性成分之離散單位形式，如膠囊、小藥囊、錠劑、口香糖或菱形錠劑；粉末、顆粒或丸粒形式；水性液體或非水性液體中之溶液或懸浮液形式；或凝膠、奈米乳液或微乳液、水包油乳液、油包水乳液或其他分配系統形式。用於水性懸浮液之適宜分散劑或懸浮劑包括合成或天然表面活性劑及增黏劑。活性成分亦可以濃注、舐劑或糊劑形式投與。 錠劑可藉由將活性成分視情況與一或多種輔助成分壓製、模製或凍乾來製得。壓製錠劑可藉由在適宜機器中壓製呈自由流動形式之活性成分(例如粉末或顆粒)來製備，該(等)活性成分視情況與黏合劑及/或填充劑；潤滑劑；崩解劑或分散劑混合。模製錠劑可藉由在適宜機器中模製經惰性液體稀釋劑潤濕之粉末狀活性成分及適宜載劑之混合物來製得。凍乾錠劑可在凍乾機中自原料藥之溶液形成。可包括適宜填充劑。 用於直腸投與之調配物可呈栓劑形式，其中本發明之化合物與低熔點、水溶性或不可溶固體混合。 適於非經腸投與之調配物便捷地包含活性成分之無菌油性或水性製劑，其較佳與接受者之血液等滲，例如等滲鹽水、等滲葡萄糖溶液或緩衝溶液。此外，調配物可含有共溶劑、增溶劑及/或複合劑。調配物可便捷地藉由(例如)藉助細菌截留過濾器過濾，將滅菌劑添加至調配物，輻照調配物或加熱調配物來滅菌。如(例如)Encyclopedia of Pharmaceutical Technology，第9卷，1994中所揭示之脂質體調配物亦適於非經腸投與。 或者，式(I)化合物可以無菌固體製劑形式存在，例如在即將使用之前可輕易地溶解於無菌溶劑中之凍乾粉末。 經皮調配物可呈硬膏劑、貼片、微針、脂質體或奈米顆粒遞送系統或施加至皮膚之其他皮膚調配物之形式。 適於經眼投與之調配物可呈活性成分(可呈微晶形式)之無菌水性製劑之形式，例如呈水性微晶懸浮液之形式。亦可使用(例如)如Pharmaceutical Technology，第2卷，1989中所揭示之脂質體調配物或生物可降解聚合物系統來提供用於經眼投與之活性成分。 適於局部(例如皮膚、真皮內或經眼)投與之調配物包括液體或半固體製劑，例如擦劑、洗劑、凝膠、施用物、噴霧劑、泡沫、成膜系統、微針、微乳液或奈米乳液、水包油或油包水乳液，例如乳膏、軟膏劑或糊劑；或溶液或懸浮液，例如滴劑。 對於局部投與，式(I)化合物通常以組合物之0.001重量%至20重量%之量存在，例如0.01%至約10%，但亦可以高達組合物之約100%之量存在。 適於經鼻或經頰投與之調配物包括粉末、自推動及噴霧調配物，例如氣溶膠及霧化劑。此等調配物更詳細地揭示於例如以下各項中：Modern Pharmaceutics，第2版，G.S. Banker及C.T. Rhodes (編輯)，第427-432頁，Marcel Dekker, New York；Modern Pharmaceutics，第3版，G.S. Banker及C.T. Rhodes (編輯)，第618-619頁及第718-721頁，Marcel Dekker, New York及Encyclopedia of Pharmaceutical Technology，第10卷，J. Swarbrick及J.C. Boylan (編輯)，第191-221頁，Marcel Dekker, New York。 除上文所提及之成分以外，式(I)化合物之調配物可包括一或多種額外成分，例如稀釋劑、緩衝劑、矯味劑、著色劑、表面活性劑、增稠劑、滲透增強劑、增溶劑、防腐劑(例如羥苯甲酸甲酯(包括抗氧化劑))、乳化劑及諸如此類。
製備方法
本發明化合物可以熟習合成技術者熟知之多種方式來製備。舉例而言，式(I)化合物可使用下文所概述之反應及技術連同合成有機化學業內已知之方法或如熟習此項技術者所瞭解之其變化形式來製備。較佳方法包括(但不限於)下文所述之彼等。反應係在適合所採用之試劑及材料且適於實現轉變之溶劑中實施。另外，在下文所述之合成方法中，應理解選擇所有經提出之反應條件(包括溶劑之選擇、反應氣氛、反應溫度、實驗之持續時間及後處理程序)為該反應之標準條件，此應由熟習此項技術者容易地認識到。並非在給定類別中之所有化合物皆可與一些所述方法中需要之一些反應條件相容。熟習此項技術者將容易地明瞭對與反應條件相容之取代基之此等限制且可使用替代方法。若需要，可使用合成有機化學家所熟知之標準方法來純化本發明之化合物或任何中間體，例如「Purification of Laboratory Chemicals」，第6版. 2009, W. Amarego及C. Chai, Butterworth-Heinemann中所述之方法。起始材料係可商業購得之已知化合物，或其可藉由熟習此項技術者熟知之常規合成方法來製備。
一般程序、製備及實例
起始材料可商業購得或在文獻中已知。試劑及溶劑可商業購得且除非另有說明，否則未經純化即使用。層析純化係使用具有預填充REVELERIS
®
二氧化矽快速柱之Grace REVELERIS
®
系統或Teledyne Isco CombiFlash® Rf系統或手動使用矽膠60來實施。以300 MHz、400 MHz或600 MHz在Bruker儀器上記錄
1
H NMR光譜，其中四甲基矽烷(δ = 0.00 ppm)作為內標準品。化學位移值(d，以ppm計)係相對於內部四甲基矽烷(d= 0.00)標準引用。在定義雙峰(d)、三重峰(t)、四重峰(q)或未定義(m)之情形中，除非已列舉範圍，否則多重峰之值大約取中間點。(br)指示寬峰，而(s)指示單峰。 通篇使用以下縮寫： AcOH 乙酸 Boc 第三丁氧基羰基 Cbz 苄基氧基羰基 DCM 二氯甲烷 dba 二亞苄基丙酮 DIPEA N,N-二異丙基乙胺 DMF N,N-二甲基甲醯胺 DMP 戴斯-馬丁過碘烷(Dess-Martin periodinane) DMSO 二甲基亞碸 DSC 差示掃描量熱法 ee 鏡像異構物過量 Et 乙基 EtOAc 乙酸乙酯 EtOH 乙醇 h 小時 HATU 1-[雙(二甲基胺基)亞甲基]-1
H
-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸鹽 HPLC 高效液相層析 HRMS 高解析度質譜 L 公升 m 毫 MeCN 乙腈 MeOH 甲醇 min 分鐘 m.p. 熔點 Ms 甲烷磺醯基 MS 質譜(mass spectrometry或mass spectrum) NMR 核磁共振光譜 rt 室溫，即18-30℃且通常20℃ RuPhos 2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基聯苯 SFC 超臨界流體層析 TBS 第三丁基二甲基矽基 TFA 三氟乙酸 THF 四氫呋喃 Tj 加熱夾套之溫度 TLC 薄層層析 tr 保留時間 Tr 反應混合物之溫度 UHPLC 超高效液相層析 UPLC 超高效液相層析 Xantphos 4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-
製備型 HPLC 酸性方法 裝置：
具有Gilson UV/VIS-155檢測器之Gilson HPLC系統
管柱：
Waters SunFire™ Prep C18 5 µm OBD 19 × 250 mm
試劑 ：
(A) 0.1%甲酸-水溶液；(B) MeCN
幫浦 ：
-流速：30 mL/min
鹼性方法 裝置 ：
具有Gilson UV/VIS-155檢測器之Gilson HPLC系統
管柱 ：
Waters XBridge® Prep C18 5 µm OBD 19 × 250 mm
試劑 ：
(A) 50 mM NH
4
HCO
3
溶液；(B) MeCN
幫浦：
-流速：30 mL/min
分析型 LC-MS 方法 A 裝置 ：
Shimadzu UHPLC 2020
管柱 ：
Acquity UPLC HSS C18, 1.8 µm, 2.1 × 50 mm
試劑 ：
-甲酸≥ 98%，Sigma-Aldrich -用於HPLC UV/梯度級之乙腈，Baker -純二甲亞碸(DMSO)，Chempur -用於HPLC之純化水
HPLC 條件：
- 波長：214 nm ± 4 nm, 254 nm ± 4 nm - 流速：0.5 ml/min - 管柱溫度：25℃ - 自動取樣器溫度：20℃ - 注射體積：3.0 µl - 分析時間：6分鐘 - 溶析：梯度
移動相 A ：
0.1 % v/v甲酸之水溶液
移動相 B ：
0.1 % v/v甲酸之乙腈溶液
用於注射器洗滌之溶液：
20% MeOH
MS 條件：
-質量範圍：100 - 1000 m/z -離子化：交流 -掃描時間：0.5 s
方法 B
使用具有2.1 × 50 mm Acquity UPLC® HSS T3 1.8 µm管柱之Waters Acquity UPLC系統及以正離子化電噴霧模式操作之Acquity SQ檢測器實施UPLC-MS分析。移動相對於緩衝液A由於10 mM乙酸銨水溶液中之0.1%甲酸組成且對於緩衝液B由於乙腈中之0.1%甲酸組成。在1.2 mL/min之流速及60℃之管柱溫度下使用經1.4分鐘之二元梯度(A:B 95:5→5:95)。
方法 C
使用在254 nm下具有UV檢測之Waters Acquity UPLC系統及以正離子化電噴霧模式操作之Waters LCT Premier XE高解析度TOF質譜儀實施具有高解析度質譜之UPLC-MS分析。使用與方法B中相同之管柱及移動相A及B，但具有較慢梯度(經4.8分鐘 A:B 99:1→1:99；0.7 mL/min；管柱溫度40℃)。
方法 D
LC-MS：使用電噴霧離子化及大氣壓化學離子化在Shimadzu LCMS-2010EV光譜儀上獲得質譜；管柱：Acquity BEH C18 (50 mm × 2.1 mm, 1.7 μm)；移動相：A：0.1%於水中之甲酸；B：0.1%於乙腈中之甲酸；梯度：時間(min) / % B：0/2、0.2/2、2.3/98、3.4 /98、3.41/2、3.5/2；管柱流速：0.8 mL/min。
方法 E
LC-MS：使用電噴霧離子化及大氣壓化學離子化在Shimadzu LCMS-2010EV光譜儀上獲得質譜；管柱：Acquity BEH C18 (50 mm × 2.1 mm, 1.7 μm)；移動相：A：0.1%於水中之甲酸；B：0.1%於乙腈中之甲酸；梯度時間(min) / % B：0/3、0.4/3、2.5/98、3.4/98、3.5/3、4/3；管柱溫度：35℃，流速：0.6 mL/min。
分析型手性固定相 SFC
使用具有Phenomenex Lux® 3 µm纖維素-4 (150 × 4.6 mm)管柱之Waters UPC2 SFC儀器實施手性固定相SFC分析。使用等度條件，其中移動相由CO
2
:MeOH 80:20組成且流速為3 mL/min。藉由對UV峰面積進行積分測定分析物之鏡像異構比。
中間體 中間體 1
2-[
反式 -
4-[(2-氯-5-硝基吡啶-4-基)胺基]環己基]乙腈
將
反式 -
4-(氰基甲基)環己基]三氟乙酸銨(Li, Y.-L.等人，US2014/0121198) (26.7 g, 105.8 mmol)及2,4-二氯-5-硝基吡啶(22.4 g, 116.3 mmol)於無水乙腈中之溶液在冰浴中冷凍，並逐滴添加
N
,
N
-二異丙基乙胺(55.3 mL, 317 mmol)。將所得混合物在rt下攪拌20小時。將反應混合物用NaHCO
3
飽和水溶液稀釋並用DCM (3 × 500mL)萃取。經Na
2
SO
4
乾燥合併之有機層，過濾，並在真空下蒸發。將粗產物與己烷、二乙醚及水一起研磨，以提供呈黃色固體狀之標題化合物(29.8 g, 95%)。 UPLC-MS (方法A)：t
R
= 3.41分鐘,
m
/
z
= 294.9 (M+H
+
)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-
d 6
) δ 8.87 (s, 1H), 8.03 (d,
J
= 8.3 Hz, 1H), 7.30 (s, 1H), 3.73 (dtd,
J
= 11.5, 7.7, 4.2 Hz, 1H), 2.50 (d,
J
= 4.2 Hz, 2H) 2.04 - 1.91 (m, 2H), 1.86 - 1.75 (m, 2H), 1.64 (ddd,
J
= 11.6, 5.7, 3.0 Hz, 1H), 1.53 - 1.39 (m, 2H), 1.31 (ddd,
J
= 25.4, 12.9, 4.2 Hz, 2H)。
中間體 2
2-[
反式 -
4-[(5-胺基-2-氯吡啶-4-基)胺基]環己基]乙腈
向中間體1 (3.5 g, 11.9 mmol)於MeOH:水9:1 (99 mL)中之溶液添加鐵(1.86 g, 33.2 mmol)及氯化銨(1.91 g, 35.6 mmol)。將所得混合物在回流下攪拌5小時。冷卻至rt後，藉由藉助矽藻土塞過濾去除固體。將濾餅用MeOH洗滌並將濾液濃縮以去除揮發物。用NaHCO
3
飽和水溶液(50 mL)稀釋殘餘物並用EtOAc (3 × 30 mL)萃取。經Na
2
SO
4
乾燥有機相並在真空中濃縮，從而得到呈棕色固體狀之標題化合物(3.0 g, 95%)。 UPLC-MS (方法A)：t
R
= 1.85分鐘,
m
/
z
= 265 (M+H
+
)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-
d 6
) δ 7.37 (s, 1H), 6.37 (s, 1H), 5.38 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.74 (s, 2H), 2.48 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 2.06 - 1.92 (m, 2H), 1.87 - 1.74 (m, 2H), 1.71 - 1.57 (m, 1H), 1.33 - 1.16 (m, 5H)。
中間體 3
2-[
反式 -
4-[6-氯-2-(1-羥基乙基)-1
H
-咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]-乙腈
將三乙基氧鎓四氟硼酸鹽(9.3 g, 49.1 mmol)及乳醯胺(4.4 g, 49.1 mmol)於THF (40 mL)中之混合物在rt下攪拌2小時 (澄清溶液)。將此溶液添加至中間體2 (2.6 g, 9.8 mmol)於EtOH (70 mL)中之溶液。將所獲得之混合物加熱至回流保持18小時。將反應混合物濃縮並將殘餘物在水(40 mL)與EtOAc (25 mL)之間分配。利用EtOAc (3 × 20 mL)萃取水相。經Na
2
SO
4
乾燥有機相並在真空中濃縮。管柱層析(20%於DCM中之EtOAc及10%於DCM中之MeOH作為溶析液)提供半固體，將其與二乙醚一起研磨，從而得到呈紅色固體狀之標題化合物(2.3 g, 73%)。 UPLC-MS (方法A)：t
R
= 2.52分鐘,
m
/
z
= 319 (M+H
+
)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-
d 6
) δ 8.70 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 5.81 (d,
J
= 6.8 Hz, 1H), 5.10 (p,
J
= 6.5 Hz, 1H), 4.74 - 4.60 (m, 1H), 2.55 (d,
J
= 6.1 Hz, 2H), 2.39 - 2.17 (m, 2H), 2.16 - 2.03 (m, 1H), 1.98 - 1.84 (m, 4H), 1.60 (d,
J
= 6.5 Hz, 3H), 1.38 - 1.22 (m, 2H)。
實例 實例 1 反式 - 2-[4-[2-[1- 羥基乙基 ]-6-( 甲基胺基 ) 咪唑并 [4,5-c
] 吡啶 -1- 基 ] 環己基 ] 乙腈 ( 化合物 1) 步驟1： 2-[
反式 -
4-[6-胺基-2-(1-羥基乙基)-1
H
-咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]-乙腈
將中間體3 (0.20 g, 0.63 mmol)、胺基甲酸第三丁基酯(0.15 g, 1.25 mmol)、參(二亞苄基丙酮)二鈀(0) (0.06 g, 0.06 mmol)、4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基
(0.11 g, 0.19 mmol)及磷酸三鉀(0.31 g, 1.44 mmol)在1,4-二噁烷(15 mL)中混合。用氬使所獲得混合物脫氣20分鐘並然後在130℃下且在微波輻照下加熱45分鐘。將混合物藉助矽藻土塞過濾，用MeOH /DCM (1:9)洗滌濾餅並將濾液濃縮。由於微波反應器之體積限制，使用相同量及條件將此反應再重複四次。將所獲得之殘餘物合併。短管柱層析(2%於DCM中之MeOH作為溶析液)提供粗混合物(0.7 g)，將其溶解於DCM (15 mL)中。向溶液逐滴添加TFA (1.3 mL, 17.5 mmol)。在室溫下將所獲得之混合物攪拌24小時。在真空中濃縮混合物。將殘留物溶解於DCM (15 mL)中並用NaHCO
3
水溶液(5 mL)洗滌。利用DCM (5 × 15 mL)萃取水相。經Na
2
SO
4
乾燥有機相並在真空中濃縮。管柱層析(梯度自MeOH:DCM 4:96至於MeOH中之7.5M NH
3
:DCM 5:95)提供呈黃色泡沫狀之標題化合物(0.195 g, 21%)。 UPLC-MS (方法A)：t
R
= 1.72分鐘,
m
/
z
= 300 (M+H
+
)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-
d 6
) δ 8.26 (d,
J
= 0.9 Hz, 1H), 6.66 (d,
J
= 1.0 Hz, 1H), 5.59 (d,
J
= 6.7 Hz, 1H), 5.39 (s, 2H), 4.96 (p,
J
= 6.6 Hz, 1H), 4.62 - 4.47 (m, 1H), 2.57 (d,
J
= 6.4 Hz, 2H), 2.23 - 2.06 (m, 2H), 2.01 - 1.72 (m, 5H), 1.54 (d,
J
= 6.5 Hz, 3H), 1.40 - 1.22 (m, 2H)。 步驟2：
反式 -
2-[4-[2-[1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈
向步驟1之產物(0.195 g, 0.65 mmol)於甲醇(5 mL)中之溶液添加多聚甲醛(0.078 g, 2.61 mmol)及甲醇鈉(0.176 g, 3.26 mmol)。將所獲得之混合物加熱至回流。2小時後，將混合物冷卻至0℃並添加硼氫化鈉(0.099 g, 2.61 mmol)。將所得之混合物在回流下加熱1小時。冷卻至rt後，藉由小心地添加NaHCO
3
飽和水溶液(10 mL)將反應淬滅。用EtOAc (3 × 10 mL)萃取水相。經Na
2
SO
4
乾燥有機相並在真空中濃縮。管柱層析(4%至10%於DCM中之MeOH作為溶析液)提供呈白色泡沫固體狀之標題化合物(0.152 g, 76%)。 HPLC-MS (方法C)：t
R
= 1.67分鐘,
m
/
z
= 314.1939 (M+H
+
)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-
d 6
) δ 8.34 (d,
J
= 0.9 Hz, 1H), 6.48 (d,
J
= 0.9 Hz, 1H), 5.90 (q,
J
= 4.9 Hz, 1H), 5.59 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 4.96 (p,
J
= 6.6 Hz, 1H), 4.61 - 4.50 (m, 1H), 2.80 (d,
J
= 4.9 Hz, 3H), 2.56 (d,
J
= 6.2 Hz, 2H), 2.30 - 2.11 (m, 2H), 1.98 - 1.82 (m, 5H), 1.55 (d,
J
= 6.5 Hz, 3H), 1.39 - 1.23 (m, 2H)。
實例 2 及 3 反式 - 2-[4-[2-[(1S
)-1- 羥基乙基 ]-6-( 甲基胺基 ) 咪唑并 [4,5-c
] 吡啶 -1- 基 ] 環己基 ] 乙腈 ( 化合物 2) 及反式 - 2-[4-[2-[(1R
)-1- 羥基乙基 ]-6-( 甲基胺基 ) 咪唑并 [4,5-c
] 吡啶 -1- 基 ] 環己基 ] 乙腈 ( 化合物 3) 使用以下條件藉由手性固定相SFC分離實例1之鏡像異構物(166 mg)：
藉由與自(
R
)-乳醯胺製備之(
R
)鏡像異構物之試樣比較確立絕對構形，參加下文實例3 (替代製備)。
實例 2 ( 化合物 2)
產量：73 mg，＞98% ee UPLC-MS (方法C)：t
R
= 1.67分鐘,
m
/
z
= 314.1908 (M+H
+
)。
1
H NMR (300 MHz, DMSO-
d 6
) δ 8.33 (d,
J
= 0.8 Hz, 1H), 6.47 (d,
J
= 1.0 Hz, 1H), 5.89 (q,
J
= 5.0 Hz, 1H), 5.58 (d,
J
= 6.7 Hz, 1H), 4.96 (p,
J
= 6.5 Hz, 1H), 4.63 - 4.47 (m, 1H), 2.79 (d,
J
= 5.0 Hz, 3H), 2.55 (d,
J
= 6.1 Hz, 2H), 2.30 - 2.10 (m, 2H), 2.01 - 1.76 (m, 5H), 1.54 (d,
J
= 6.4 Hz, 3H), 1.40 - 1.20 (m, 2H)。
實例 3 ( 化合物 3)
產量：67 mg，＞98% ee UPLC-MS (方法C)：t
R
= 1.67分鐘,
m
/
z
= 314.1975 (M+H
+
)。
1
H NMR (300 MHz, DMSO-
d 6
) δ 8.33 (d,
J
= 0.9 Hz, 1H), 6.47 (d,
J
= 1.1 Hz, 1H), 5.89 (q,
J
= 4.9 Hz, 1H), 5.58 (d,
J
= 6.5 Hz, 1H), 4.96 (p,
J
= 6.4 Hz, 1H), 4.63 - 4.46 (m, 1H), 2.79 (d,
J
= 5.0 Hz, 3H), 2.55 (d,
J
= 6.1 Hz, 2H), 2.29 - 2.11 (m, 2H), 2.00 - 1.77 (m, 5H), 1.54 (d,
J
= 6.5 Hz, 3H), 1.39 - 1.19 (m, 2H)。
1
H NMR (600 MHz, DMSO-
d 6
)δ 8.33 (d,
J
= 0.9 Hz, 1H), 6.48 (d,
J
= 1.0 Hz, 1H), 5.90 (q,
J
= 5.0 Hz, 1H), 5.59 (d,
J
= 6.7 Hz, 1H), 4.96 (p,
J
= 6.6 Hz, 1H), 4.55 (tt,
J
= 12.3, 4.0 Hz 1H), 2.79 (d,
J
= 5.0 Hz, 3H), 2.55 (d,
J
= 6.4 Hz, 2H), 2.20 (qdd, J = 12.8, 10.4, 3.7 Hz, 2H), 1.93 (ddd, J = 13.1, 6.3, 3.2 Hz, 2H), 1.89 - 1.86 (m, 2H), 1.86 - 1.84 (m, 1H), 1.54 (d,
J
= 6.5 Hz, 3H), 1.30 (qdt, J = 12.3, 7.6, 3.6 Hz, 2H)。
13
C NMR (151 MHz, DMSO-
d 6
) δ 155.5, 155.4, 141.3, 139.2, 133.3, 119.5, 86.4, 61.9, 54.0, 32.9, 30.7, 30.7, 29.1, 28.8, 28.8, 22.9, 21.5。
實例 3 ( 替代製備 1 號 ) 反式 - 2-[4-[2-[(1R
)-1- 羥基乙基 ]-6-( 甲基胺基 ) 咪唑并 [4,5-c
] 吡啶 -1- 基 ] 環己基 ] 乙腈 ( 化合物 3) 步驟12-[
反式 -
4-[6-氯-2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-1
H
-咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈
在氬下在100 mL螺紋帽小瓶中裝填三乙基氧鎓四氟硼酸鹽(8.00 g, 42.1 mmol)及無水THF (30 mL)。向白色懸浮液中一次性添加(
R
)-乳醯胺(3.87 g, 42.1 mmol)。在rt下攪拌所得溶液。約6分鐘後，發生弱的放熱反應並將反應容器在水浴中冷卻。在rt下2小時後，將此溶液添加至中間體2 (2.23 g, 8.42 mmol)於無水乙醇(45 mL)中之懸浮液中，並將所得溶液在80℃下攪拌過夜。蒸發揮發物並用碳酸氫鈉飽和水溶液(50 mL)處理殘餘物。用EtOAc (3 × 80 mL)萃取混合物，並將合併之有機相用鹽水(50 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥並過濾。蒸發揮發物提供殘餘物(13.5 g)，使用急速層析(DCM:MeOH 98:2至95:5)將其純化，以提供棕色泡沫(1.92 g)。將此與醚(20 mL)一起研磨，以提供呈固體狀之標題化合物(1.62 g, 57%)。 UPLC-MS (方法B)：t
R
= 0.52分鐘,
m
/
z
= 319.2 (M+H
+
)。
1
H NMR (300 MHz, DMSO-
d 6
) δ 8.69 (d,
J
= 0.8 Hz, 1H), 8.00 (d,
J
= 0.9 Hz, 1H), 5.80 (d,
J
= 6.8 Hz, 1H), 5.10 (p,
J
= 6.5 Hz, 1H), 4.74 - 4.59 (m, 1H), 2.54 (d,
J
= 6.4 Hz, 2H), 2.38 - 2.16 (m, 2H), 2.17 - 2.00 (m, 1H), 1.99 - 1.81 (m, 4H), 1.59 (d,
J
= 6.5 Hz, 3H), 1.41 - 1.18 (m, 2H)。 標題化合物之絕對構形係藉由單晶X-射線繞射來確認。
步驟 2
2-[4-[2-[(1
R
)-1-[
第三丁基
(二甲基)矽基]氧基乙基]-6-氯-咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈
將步驟1之產物(2.47 g, 7.75 mmol)於THF (35 mL)中之溶液在冰浴中冷卻並添加咪唑(791 mg, 11.6 mmol)。5分鐘後，添加TBSCl (1.28 g, 8.52 mmol)於THF (11 mL)中之溶液並移除冰浴。在rt下5小時後，使混合物升溫至45℃，並在此溫度下攪拌過夜。為實現完全轉化，添加另一份咪唑(791 mg, 11.6 mmol)及TBSCl (1.28 g, 8.52 mmol)於THF (5 mL)中之溶液。將混合物在45℃下再攪拌24小時並傾倒至鹽水(35 mL)及水(35 mL)之混合物中。將其用EtOAc (2 × 80 mL)萃取，用鹽水洗滌有機層，經Na
2
SO
4
乾燥，過濾並蒸發。藉由急速層析(DCM:EtOAc 90:10至80:20)純化殘餘物，以提供呈固體狀之標題化合物(2.95 g, 83%)。 UPLC-MS (方法B)：t
R
= 0.92分鐘,
m
/
z
= 433.3 (M+H
+
)。
1
H NMR (600 MHz, CDCl
3
) δ 8.75 (d,
J
= 0.8 Hz, 1H), 7.42 (d,
J
= 0.9 Hz, 1H), 5.34 (q,
J
= 6.8 Hz, 1H), 5.00 (tt,
J
= 12.5, 4.1 Hz, 1H), 2.41 (d,
J
= 6.4 Hz, 2H), 2.31 - 2.19 (m, 2H), 2.17 - 2.09 (m, 2H), 2.09 - 2.03 (m, 2H), 2.00 - 1.91 (m, 1H), 1.62 (d,
J
= 6.4 Hz, 3H), 1.48 - 1.33 (m, 2H), 0.91 (s, 9H), 0.14 (s, 3H), 0.03 (s, 3H)。
步驟 3
2-[4-[2-[(1
R
)-1-[
第三丁基
(二甲基)矽基]氧基乙基]-6-[(4-甲氧基苯基)甲基-甲基-胺基]咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈
在2 mL螺紋帽小瓶中裝填步驟2之產物(46.2 mg, 0.107 mmol)及4-甲氧基-
N
-甲基苄基胺(32.3 mg, 0.213 mmol)。用氬吹掃小瓶並添加第三丁醇鈉(12.3 mg, 0.128 mmol)、RuPhos (3.0 mg, 0.0064 mmol)及乙酸鈀(II) (0.72 mg, 0.0032 mmol)之混合物。在110℃下，將混合物在氬下攪拌17小時。將其冷卻至rt並添加二氯甲烷(0.45 mL)。將混合物用鹽水:水2:1 (0.45 mL)洗滌並用二氯甲烷(2 × 0.45 mL)萃取水層。經Na
2
SO
4
乾燥合併之有機層，過濾並蒸發，以提供含有標題化合物之粗產物及相應脫TBS之類似物(75.3 mg)。此物質未經純化即用於下一步驟。 UPLC-MS (方法B)：t
R
= 0.95分鐘,
m
/
z
= 548.4 (M+H
+
)。
步驟 4 反式 -
2-[4-[2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈
在0℃下，將來自步驟3之粗產物溶解於TFA (0.25 mL)中並將混合物在rt下攪拌1.5小時。在真空下去除揮發物並將殘餘物溶解在於二噁烷中之4 M氯化氫(0.25 mL)中。將混合物在rt下攪拌18小時，蒸發揮發物並將殘餘物溶解於二氯甲烷(0.25 mL)中。向此添加於甲醇(0.60 mL)中之2 M氨，以將pH調整至約10。在真空下去除揮發物，將殘餘物溶解於DCM:MeOH 95:5 (2 mL)中並過濾混合物。蒸發濾液並藉由層析(4 g預填充矽膠管柱，利用DCM:MeOH 96:4至94:6溶析)純化殘餘物，以提供含有約30% 4-甲氧基-
N
-甲基苄基胺之呈半固體狀之標題化合物(37.7 mg)。 UPLC-MS (方法B)：t
R
= 0.38分鐘,
m
/
z
= 314.3 (M+H
+
)。 分析型手性固定相SFC：(
S
)鏡像異構物(次要) t
R
= 5.37分鐘；(
R
)鏡像異構物(主要) t
R
= 5.78分鐘。
實例 3 ( 替代製備 2 號 ) 反式 - 2-[4-[2-[(1R
)-1- 羥基乙基 ]-6-( 甲基胺基 ) 咪唑并 [4,5-c
] 吡啶 -1- 基 ] 環己基 ] 乙腈 ( 化合物 3) 步驟 1
2-[
反式 -
4-[(2-氯-5-硝基吡啶-4-基)胺基]環己基]乙腈
將裝配有機械攪拌器、回流冷凝器及氬入口之20 L玻璃反應器抽真空並用氬吹掃兩次。在反應器中裝填700 g 2,4-二氯-5-硝基吡啶(3.63 mol, 1.0當量)、665 g
反式 -
4-(氰基甲基)環己基]銨鹽酸鹽(3.81 mol, 1.05當量)及7.00 L 2-丙醇。在25℃下攪拌所得漿液並添加1.90 L二異丙基乙胺(1.41 kg, 10.9 mol, 3.0當量)。用0.100 L 2-丙醇洗滌添加管並將漿液加熱至回流(Tj設定點= 95℃)。將混合物在回流下攪拌15小時並然後冷卻至25℃。在過程控制(LCMS)中顯示99%之轉化率。 藉由過濾分離產物，並在過濾器上用1.75 L 2-丙醇及然後3.80 L 2-丙醇洗滌。將濾餅轉移至玻璃杯中，並在真空中且在50℃下乾燥直至恒重為止；產生1.00 kg (94%)呈黃色固體狀之標題化合物；HPLC純度：98.8面積%。
步驟 2
2-[
反式 -
4-[(5-胺基-2-氯吡啶-4-基)胺基]環己基]乙腈
將2.0 L帕爾(Parr)振盪器反應燒瓶用氬吹掃並裝填5.00 g 5% Pt/C (具有50%水之糊狀物，0.05 g/g, 1.3 mmol)、100 g 2-[反式-4-[(2-氯-5-硝基吡啶-4-基)胺基]環己基]乙腈(339 mmol)及1.00 L乙醇。將帕爾振盪器反應器燒瓶置於帕爾振盪器中，並抽真空且重新填充氬兩次。接下來，將燒瓶抽真空並重新填充氫。將壓力調整至1.5巴並啟動震盪器。添加額外氫若干次，但2小時後停止消耗氫。在過程控制(HPLC)中顯示＞ 99%之轉化率，並添加600 mL二氯甲烷以防止標題化合物沈澱。將所得混合物攪拌10分鐘並經矽藻土過濾。用250 mL二氯甲烷洗滌濾餅，並藉由在減壓下且在50℃下蒸發去除來自合併濾液之溶劑。將殘餘物轉移至玻璃杯中，並在真空中且在50℃下乾燥直至恒重為止，產生85.1 g (95%)呈棕色固體狀之標題化合物；HPLC純度：94面積%。
步驟 3
2-[
反式 -
4-[6-氯-2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-1
H
-咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈
將裝配有機械攪拌器、回流冷凝器及氬入口之20 L玻璃反應器抽真空並用氬吹掃兩次。在反應器中裝填409 g (
R
)-乳醯胺(4.59 mol, 2.5當量)及4.90 L四氫呋喃。將溫度調整至23℃並一次性添加872 g三乙基氧鎓四氟硼酸鹽(4.59 mol, 2.5當量)。注意! 反應係放熱的且在添加後溫度達到43℃。將反應混合物冷卻並在23℃下攪拌90分鐘。將混合物轉移至10 L藍蓋燒瓶中並在氬下儲存。用2.7 L乙醇沖洗反應器並在乾淨反應器中裝填486 g 2-[
反式 -
4-[(5-胺基-2-氯吡啶-4-基)胺基]環己基]乙腈(1.84 mol, 1.0當量)及7.3 L乙醇。將溫度調整至23℃，並經約2-4分鐘之時期添加含有(
R
)-乳醯胺及三乙基氧鎓四氟硼酸鹽之四氫呋喃溶液。將反應混合物加熱至回流(Tr = 70℃, Tj 設定點 = 85℃)。觀察到白色鹽之沈澱。反應混合物不乾淨且係橙色的。6小時後，在過程控制(HPLC)中顯示＞95%之轉化率，並將反應混合物冷卻至23℃並再攪拌16小時。過濾混合物並用2.0 L四氫呋喃洗滌濾餅。將濾液轉移回反應器中，並在減壓下且在50℃下藉由蒸餾去除溶劑。當冷凝在Tr = 31℃ / 17毫巴下停止時，7小時後停止蒸餾。用7.3 L甲基第三丁基醚及7.3 L 10%碳酸鈉水溶液稀釋殘餘漿液。在23℃下將漿液攪拌14小時，此後藉由過濾分離標題化合物。用5.0 L水洗滌濾餅，吸乾並轉移回反應器中。接下來，將5.0 L水添加至反應器中並將所得漿液在23℃下攪拌60分鐘並過濾。用5.0 L水洗滌濾餅並吸乾。將所得灰白色固體轉移至玻璃杯中，並在真空中且在50℃下乾燥直至恒重為止；呈灰白色固體狀之標題化合物之典型產率為70-90%；濕濾餅之HPLC純度為95面積%。
步驟 4 反式 -
2-[4-[2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈
用氬吹掃裝配有機械攪拌器、回流冷凝器及氬入口之400 mL EasyMax玻璃反應器。在反應器中裝填5.43 g第三丁醇鈉(56.5 mmol, 1.2當量)、5.54 g酚(58.8 mmol, 1.25當量)及195 mL四氫呋喃。將混合物在25℃下攪拌20分鐘，此後添加15.0 g 2-[
反式 -
4-[6-氯-2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-1
H
-咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈(47.1 mmol, 1.0當量)。將加料漏斗用30 mL四氫呋喃沖洗並添加94.1 mL於四氫呋喃中之2 M甲胺(188 mmol, 4.0當量)。將所得混合物加熱至55℃ (Tj 設定點= 55℃)。在單獨反應燒瓶中，將0.210 g
t
BuBrettPhos Pd G3 (0.235 mmol, 0.005當量)溶解於4.0 mL四氫呋喃中。在55℃下，將
t
BuBrettPhos Pd G3溶液添加至反應混合物。23小時後，將深色均勻溶液冷卻至23℃並轉移至分液漏斗中。將反應混合物用2 × 225 mL 2 M氫氧化鈉水溶液洗滌。藉由在減壓下且在50℃下蒸發將有機相濃縮至約50%之體積，並用125 mL庚烷稀釋。 二氧化矽塞過濾；用250 mL庚烷/乙酸乙酯(1:1)活化105 g矽膠(7.0 g/g)，並將其傾倒至玻璃過濾器(8 cm直徑)中。將含有粗標題化合物之有機相緩慢加載至二氧化矽塞上。將雜質用2 × 250 mL庚烷/乙酸乙酯(1:1)及然後250 mL乙酸乙酯溶析。接下來，將標題化合物用5 × 200 mL四氫呋喃溶析。將含有標題化合物之部分彙集並藉由在減壓下蒸發去除溶劑，從而提供12.3 g (83%)呈棕色固體狀之粗標題化合物；HPLC純度95面積%。 Pd清除；在100 mL燒瓶中裝填3.00 g粗標題化合物(9.57 mmol)及45 mL甲醇。攪拌混合物，直至所有固體溶解為止，且然後添加0.30 g SiliaMetS® DMT (10%w/w二巰基三嗪，40-63 µm, 60 A)。將漿液加熱至50℃並攪拌4小時，此後使混合物冷卻至23℃並經矽藻土過濾。用6.0 mL甲醇洗滌濾餅，並藉由在減壓下蒸發自合併之濾液去除溶劑，從而產生2.75 g (92%回收率)標題化合物。 再結晶；在100 mL燒瓶中裝填3.00 g (9.57 mmol; HPLC純度96面積%)標題化合物及20 mL乙酸乙酯。將混合物加熱至回流並攪拌直至所有固體溶解為止。使混合物溶解並然後將10 mL甲基第三丁基醚逐滴添加至熱溶液中。使混合物冷卻至室溫並攪拌17小時。藉由過濾分離沈澱物，並在過濾器上用2 × 1.0 mL甲基第三丁基醚洗滌並在真空中且在50℃下乾燥直至恒重為止，從而產生1.81 g (60%)呈灰白色固體狀之標題化合物(結晶，m.p. (DSC起始溫度) 143 ± 2℃)；HPLC純度98面積%。
實例 4 反式 - 2-[4-[2-[(1R
)-1- 羥基乙基 ]-6-( 三氘 甲基胺基 ) 咪唑并 [4,5-c
] 吡啶 -1- 基 ] 環己基 ] 乙腈 ( 化合物 4) 步驟 1
1,1,1-三氘-
N
-[(4-甲氧基苯基)甲基]甲胺
在rt下且在氬下向4-甲氧基苯甲醛(0.243 mL, 2.00 mmol)於無水乙醇(3.0 mL)中之混合物添加三氘甲胺鹽酸鹽(282 mg, 4.00 mmol)及TEA (0.558 mL, 4.00 mmol)。將四異丙氧基鈦(IV)經2分鐘在輕微冷卻下添加至懸浮液。然後將反應混合物在rt下攪拌過夜。在rt下，17小時後添加NaBH
4
(113 mg, 3.00 mmol)。然後將懸浮液在rt下再攪拌6.5小時，然後在冷卻下小心地添加2M氨水(6 mL)。藉由過濾去除固體部分並用二氯甲烷(10 mL)洗滌濾餅。分離有機相。再次用二氯甲烷(10 mL)洗滌濾餅。用水洗滌合併之濾液並然後用1M HCl 水溶液(5 mL)處理。用二氯甲烷(10 mL)洗滌酸性水相，然後藉由添加2M NaOH將pH調整至約11。然後用二氯甲烷(3 × 10 mL)萃取水相。將合併之有機相用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥並過濾。在減壓下(60毫巴/35℃)蒸發提供呈無色液體形式之標題化合物(268 mg, 83%)。
1
H NMR (600 MHz, CDCl
3
) δ 7.25 - 7.21 (m, 2H), 6.89 - 6.84 (m, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.68 (s, 2H)。
步驟 2 反式 -
2-[4-[2-[(1
R
)-1-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基乙基]-6-[(4-甲氧基苯基)甲基-三氘甲基-胺基]咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈
在4 mL螺紋帽小瓶中裝填
反式 -
2-[4-[2-[(1
R
)-1-[
第三丁基
(二甲基)矽基]氧基乙基]-6-氯-咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈(150 mg, 0.346 mmol)及1,1,1-三氘-
N
-[(4-甲氧基苯基)甲基]甲胺(107 mg, 0.693 mmol)。將小瓶用氬吹掃並添加第三丁醇鈉(40 mg, 0.416 mmol)、RuPhos (9.7 mg, 0.021 mmol)及乙酸鈀(II) (2.3 mg, 0.010 mmol)之混合物。在110℃下，將混合物在氬下攪拌18小時。將其冷卻至rt並添加二氯甲烷/EtOH 95:5溶液(1.5 mL)。用鹽水:水2:1 (1.2 mL)洗滌混合物並用二氯甲烷/EtOH 95:5溶液(2 × 1.5 mL)萃取水層。將合併之有機層經Na
2
SO
4
乾燥，過濾並蒸發。管柱層析(1%至5%之於DCM中之MeOH作為溶析液)提供呈黃色泡沫狀之標題化合物及相應脫TBS之類似物(0.109 g)。此材料未經進一步純化即用於下一步驟中。
步驟 3 反式 -
2-[4-[2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-6-(三氘甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈
在0℃下將來自步驟2之粗產物溶解於TFA (0.75 mL)中並將混合物在rt下攪拌1.5小時。在真空下去除揮發物，並在0℃下將殘餘物溶解於於二噁烷(0.75 mL)中之4 M氯化氫中。將混合物在rt下攪拌17小時，然後藉由蒸發去除揮發物。將水(0.5 mL)添加至殘餘物中並用EtOAc (2 × 0.5 mL)洗滌水相。用水(0.5 mL)洗滌有機相。用碳酸鈉飽和水溶液將合併水相之pH調整至約11。然後用DCM:MeOH 95:5 (3 × 0.5 mL)萃取水相並將合併之有機相經Na
2
SO
4
乾燥、過濾並蒸發。管柱層析(3%至5%之於DCM中之MeOH作為溶析液)提供呈灰白色泡沫狀之標題化合物(48 mg, 42%)。 UPLC-MS (方法B)：t
R
= 0.38分鐘,
m
/
z
= 317.3 (M+H
+
)。
1
H NMR (600 MHz, DMSO-
d 6
) δ 8.33 (br s, 1H), 6.47 (br s, 1H), 5.87 (s, 1H), 5.59 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 4.96 (p, J = 6.5 Hz, 1H), 4.59 - 4.49 (m, 1H), 2.55 (d, J = 6.3 Hz, 2H), 2.25 - 2.14 (m, 2H), 1.96 - 1.80 (m, 5H), 1.54 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 1.35 - 1.24 (m, 2H)。
實例 5 反式 - 2-[4-[2-[1,2,2,2- 四氘 -1- 羥基乙基 ]-6-( 甲基胺基 ) 咪唑并 [4,5-c
] 吡啶 -1- 基 ] 環己基 ] 乙腈 ( 化合物 5) 步驟 1 反式 -
2-[4-(2-乙醯基-6-氯-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)環己基]乙腈
在0℃至5℃至RT下，向2-[
反式 -
4-[6-氯-2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-1
H
-咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈(5.0 g, 15.6 mmol)於DCM (50 mL)中之溶液逐份添加DMP (10 g, 23.5 mmol)。將反應混合物在RT下攪拌16小時。完成時，將反應混合物藉助矽藻土床過濾並用DCM洗滌。將濾液用飽和NaHCO
3
(300 mL)及鹽水溶液洗滌，經無水Na
2
SO
4
乾燥，在減壓下濃縮並藉由矽膠(100-200目)管柱層析(10%至20%於石油醚中之EtOAc作為溶析液)純化，以提供呈灰白色固體狀之標題化合物(3.5 g, 71%)。 LC-MS (方法D)：t
R
= 1.84分鐘,
m/z
= 316.11 (M+H
+
)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ 8.98 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 5.23-5.18 (m, 1H), 2.75 (s, 3H), 2.54 (d, J = 6.5, 2H), 2.31-2.23 (m, 2H), 2.08-2.05 (m, 1H), 1.94-1.89 (m, 4H), 1.30-1.27 (m, 2H)。
步驟 2 反式 -
2-[4-[6-氯-2-(2,2,2-三氘乙醯基)咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基]環己基]乙腈
在RT下向
反式 -
2-[4-(2-乙醯基-6-氯-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)環己基]乙腈(3.5 g, 11.1 mmol)於DMF (35 mL)中之懸浮液添加K
2
CO
3
(4.5 g, 33.2 mmol)，並隨後在該溫度下攪拌16小時。將反應混合物用D
2
O (10 mL)淬滅並在rt下攪拌4小時，然後添加冰冷水。添加乙酸乙酯(70 mL)。分離各相。用乙酸乙酯(2 × 35 mL)萃取水相並用鹽水洗滌合併之有機相，經無水Na
2
SO
4
乾燥，在減壓下濃縮並藉由管柱層析使用矽膠(100-200目) (10至20%於石油醚中之EtOAc作為溶析液)純化，以提供2.5 g呈灰白色固體狀之粗產物。所獲得之材料係同位素之混合物。基於
1
H NMR，同位素之分佈為：未氘化(CH
3
)：7.6%，單氘化(CH
2
D)：26.33%，二氘化(CHD
2
)：32.34%及三氘化(CD
3
)：33.72%。 利用所獲得粗產物重複上述程序，以提供1.8 g呈灰白色固體狀之新粗產物。基於
1
H NMR，同位素之分佈為：未氘化(CH
3
)：0.66%，單氘化(CH
2
D)：4.47%，二氘化(CHD
2
)：23.84%及三氘化(CD
3
)：71.02%。 利用所獲得粗產物再一次重複上述程序，以提供1.2 g (35%總產率)呈灰白色固體狀之「標題化合物」。同位素純度：99.3%。基於
1
H NMR，同位素之分佈為：未氘化(CH
3
)：0.66%，單氘化(CH
2
D)：3.47%，二氘化(CHD
2
)：21.85%及三氘化(CD
3
)：74.02%。 LC-MS (方法E)：t
R
= 1.79分鐘,
m/z
= 320.19 (M+H
+
)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ 8.98 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 5.40-5.45 (m, 1H), 2.39 (d, J = 6.5, 2H), 2.27-2.219 (m, 2H), 2.13-2.04 (m, 4H), 1.96-1.90 (m, 1H), 1.45-1.39 (m, 2H)。
步驟 3 反式 -
2-[4-[6-氯-2-(1,2,2,2-四氘-1-羥基-乙基)咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基]環己基]乙腈
在0℃至5℃下，向
反式 -
2-[4-[6-氯-2-(2,2,2-三氘乙醯基)咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基]環己基]乙腈(1.5 g, 4.69 mmol)於CD
3
OD (15 mL)中之懸浮液中添加NaBD
4
(0.29 g, 7.04 mmol)。將反應混合物在RT下攪拌1小時。完成時，將反應用D
2
O淬滅並將混合物在減壓下濃縮。將粗化合物溶解於H
2
O中並用10%於DCM中之MeOH (2 × 15 mL)萃取。將合併之有機層用鹽水洗滌，經無水Na
2
SO
4
乾燥，在減壓下濃縮並藉由矽膠(100-200目)管柱層析(1%至3%於DCM中之MeOH作為溶析液)純化，以提供呈灰白色固體狀之標題化合物(1.2g, 80%)。所獲得之化合物係同位素之混合物。基於
1
H NMR，同位素之分佈為：單氘化(CDOHCH
3
)：0.66%，二氘化(CDOHCH
2
D)：3.47%，三氘化(CDOHCHD
2
)：21.85%及四氘化(CDOHCD
3
)：74.02%。 LC-MS (方法E)：t
R
= 1.48分鐘,
m/z
= 323.23 (M+H
+
)。
1
H NMR (400 MHz, CDCl
3
) δ 8.69 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 5.77 (s, 1H), 4.68-4.63 (m, 1H), 2.54 (d, J = 6, 2H), 2.27-2.21 (m, 2H), 2.10-2.08 (m, 1H), 1.93-1.86 (m, 4H), 1.32-1.26 (m, 2H)。
步驟 4 反式 -
2-[4-[2-[1,2,2,2-四氘-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈
在密封管中，向反式-2-[4-[6-氯-2-(1,2,2,2-四氘-1-羥基-乙基)咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基]環己基]乙腈(0.10 g, 0.309 mmol)於脫氣1,4-二噁烷(5.0 mL)中之溶液中添加Cs
2
CO
3
(0.302 g, 0.927 mmol)、Brettphos Pd G1 (0.037 g, 0.046 mmol)並用氬吹掃10分鐘，然後添加於THF中之2M CH
3
NH
2
(0.60 mL, 1.24 mmol)。將反應混合物在80℃下攪拌16小時。完成時，將反應混合物冷卻至RT並藉助矽藻土墊過濾且用EtOAc洗滌。在減壓下濃縮濾液。將所獲得之殘餘物溶解於水中並用DCM (2 × 10 mL)萃取兩次。將合併之有機相用鹽水洗滌，經無水Na
2
SO
4
乾燥並在減壓下濃縮。藉由矽膠(100-200目)管柱層析(3%之於DCM中之MeOH作為溶析液)純化粗產物，以提供呈淺棕色固體狀之標題化合物(0.04 g, 41%)。 LC-MS (方法E)：t
R
= 1.14分鐘,
m/z
= 318 (M+H
+
)。 以莫耳%估計氘同位素分佈：D
0
、D
1
、D
2
、D
3
、D
4
= 0、0、3、21、76。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-
d 6
): δ (ppm) 8.32 (s, 1H), 6.47 (s, 1H), 5.93-5.89 (m, 1H), 5.58 (s, 1H), 4.57-4.51 (m, 1H), 2.78 (d, J = 5.2 Hz, 3H), 2.55 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 2.24-2.17 (m, 2H), 1.94-1.86 (m, 5H), 1.31-1.23 (m, 2H)。
實例 6 順式 - 2-[4-[2-[1- 羥基乙基 ]-6-( 甲基胺基 ) 咪唑并 [4,5-c
] 吡啶 -1- 基 ] 環己基 ] 乙腈 ( 化合物 6) 遵循類似於實例3之「替代製備2號」中所概述者之小規模程序獲得
順式 -
2-[4-[2-[1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈，其中僅有之主要差異在於在步驟1中，
反式 -
4-(氰基甲基)環己基]銨鹽酸鹽由
順式 -
4-(氰基甲基)環己基]銨鹽酸鹽(CAS登記號1461718-40-0)替代，且在步驟3中(
R
)-乳醯胺由乳醯胺替代。 UPLC-MS (方法C)：t
R
= 1.62分鐘,
m
/
z
= 314.4 (M+H
+
)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-
d 6
) δ 8.34 (s, 1H), 6.51 (s, 1H), 5.97 - 5.88 (m, 1H), 5.56 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 4.95 (p, J = 6.5 Hz, 1H), 4.60 - 4.46 (m, 1H), 2.85 - 2.77 (m, 5H), 2.27 - 2.08 (m, 3H), 1.89 - 1.62 (m, 6H), 1.54 (d, J = 6.5 Hz, 3H)。
實例 7 順式 - 2-[4-[2-[(1R
)-1- 羥基乙基 ]-6-( 甲基胺基 ) 咪唑并 [4,5-c
] 吡啶 -1- 基 ] 環己基 ] 乙腈 ( 化合物 7) 遵循類似於實例3之「替代製備2號」中所概述之小規模程序獲得
順式 -
2-[4-[2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈，其中僅有之主要差異在於在反應序列之第一步驟中，
反式 -
4-(氰基甲基)環己基]銨鹽酸鹽由
順式 -
4-(氰基甲基)環己基]銨鹽酸鹽(CAS登記號1461718-40-0)替代。 UPLC-MS (方法C)：t
R
= 1.62分鐘,
m
/
z
= 314.4 (M+H
+
)。
1
H NMR (400 MHz, DMSO-
d 6
) δ 8.35 (s, 1H), 6.53 (s, 1H), 5.98 (br s, 1H), 5.58 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 4.95 (p, J = 6.5 Hz, 1H), 4.60 - 4.46 (m, 1H), 2.86 - 2.76 (m, 5H), 2.27 - 2.07 (m, 3H), 1.89 - 1.62 (m, 6H), 1.54 (d, J = 6.5 Hz, 3H)。
實例 8 反式 - 2-[4-[2-[(1R
)-1- 羥基乙基 ]-6-( 甲基胺基 ) 咪唑并 [4,5-c
] 吡啶 -1- 基 ] 環己基 ] 乙腈丙二酸鹽 ( 化合物 8) 在45℃下，將
反式 -
2-[4-[2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈(1.40 g, 4.46 mmol)溶解於異丙醇(50 mL)中。添加於異丙醇(5.0 mL)中之丙二酸(232 mg, 2.23 mmol)。藉由在減壓下且在45℃下蒸發來減少反應混合物之體積(蒸餾出約30 mL異丙醇)。添加標題化合物之幾種參照晶體開始結晶。藉由在減壓下蒸發進一步減少反應混合物之體積(蒸餾出約15 mL異丙醇)。將所獲得之懸浮液在冰浴中冷卻，且不久後將固體過濾出並用冰冷異丙醇(3 × 2 mL)洗滌。在減壓下乾燥提供呈灰白色晶體狀之標題化合物(932 mg，約100%)。
1
H NMR (600 MHz, DMSO-
d 6
) δ 8.37 (s, 1H), 6.54 (s, 1H), 6.10 (br s, 1H), 5.66 (br s, 1H), 4.98 (q, J = 6.5 Hz, 1H), 4.62 - 4.51 (m, 1H), 3.17 (s, 2H), 2.81 (s, 3H), 2.55 (d, J = 6.3 Hz, 2H), 2.25 - 2.14 (m, 2H), 1.97 - 1.81 (m, 5H), 1.55 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 1.36 - 1.24 (m, 2H)。 M.p. (DSC起始溫度) 109 ± 2℃。
實例 9 反式 - 2-[4-[2-[(1R
)-1- 羥基乙基 ]-6-( 甲基胺基 ) 咪唑并 [4,5-c
] 吡啶 -1- 基 ] 環己基 ] 乙腈乙醇酸鹽 ( 化合物 9) 在45℃下，將
反式 -
2-[4-[2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈(1.80 g, 5.74 mmol)溶解於異丙醇(65 mL)中。添加於異丙醇(8.0 mL)中之乙醇酸(437 mg, 5.74 mmol)。藉由在減壓下且在45℃下蒸發來減少反應混合物之體積(蒸餾出約65 mL異丙醇)。添加標題化合物之幾種參照晶體緩慢地開始結晶。添加EtOAc (15 mL)。將所獲得之懸浮液在冰浴中冷卻，且不久後將固體過濾出並用EtOAc:異丙醇之冰冷9:1混合物(2 × 2 mL)洗滌。在減壓下乾燥提供呈灰白色晶體狀之標題化合物(1.57 g, 70%)。
1
H NMR (600 MHz, DMSO-
d 6
) δ 8.33 (s, 1H), 6.47 (s, 1H), 5.90 (br s, 1H), 5.58 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 4.96 (p, J = 5.3 Hz, 1H), 4.59 - 4.51 (m, 1H), 3.90 (s, 2H), 2.79 (s, 3H), 2.55 (d, J = 6.2 Hz, 2H), 2.25 - 2.14 (m, 2H), 1.97 - 1.80 (m, 5H), 1.54 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.36 - 1.25 (m, 2H)。 M.p. (DSC起始溫度) 100 ± 2℃。
實例 10 反式 - 2-[4-[2-[(1R
)-1- 羥基乙基 ]-6-( 甲基胺基 ) 咪唑并 [4,5-c
] 吡啶 -1- 基 ] 環己基 ] 乙腈 L- 酒石酸鹽 ( 化合物 10) 在45℃下，將
反式 -
2-[4-[2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈(1.50 g, 4.79 mmol)溶解於甲醇(25 mL)中。添加於甲醇(10 mL)中之L-酒石酸(360 mg, 2.40 mmol)。藉由在減壓下且在45℃下蒸發來減少反應混合物之體積(蒸餾出約10 mL甲醇)。添加標題化合物之幾種參照晶體開始結晶。添加異丙醇(30 mL)，並藉由在減壓下且在45℃下蒸發來減少反應混合物之體積(蒸餾出約20 mL)。將所獲得之懸浮液在冰浴中冷卻，且不久後將固體過濾出並用冰冷異丙醇(4 × 4 mL)洗滌。在減壓下乾燥提供呈灰白色晶體狀之標題化合物(1.55 g, 83%)。
1
H NMR (600 MHz, DMSO-
d 6
) δ 8.34 (s, 1H), 6.49 (s, 1H), 5.98 (br s, 1H), 5.60 (br s, 1H), 4.96 (q, J = 6.4 Hz, 1H), 4.60 - 4.49 (m, 1H), 4.28 (s, 1H), 2.80 (s, 3H), 2.55 (d, J = 6.3 Hz, 2H), 2.26 - 2.13 (m, 2H), 1.97 - 1.80 (m, 5H), 1.54 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 1.36 - 1.25 (m, 2H)。 M.p. (DSC起始溫度) 98 ± 2℃。
實例 11 反式 - 2-[4-[2-[(1R
)-1- 羥基乙基 ]-6-( 甲基胺基 ) 咪唑并 [4,5-c
] 吡啶 -1- 基 ] 環己基 ] 乙腈 L- 蘋果酸鹽 ( 化合物 11) 在45℃下，將
反式 -
2-[4-[2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈(1.50 g, 4.79 mmol)溶解於甲醇(25 mL)中。添加於甲醇(10 mL)中之L-蘋果酸(332 mg, 2.40 mmol)。藉由在減壓下且在45℃下蒸發來減少反應混合物之體積(蒸餾出約20 mL甲醇)。添加標題化合物之幾種參照晶體開始結晶。添加異丙醇(30 mL)，並藉由在減壓下且在45℃下蒸發來減少反應混合物之體積(蒸餾出約10 mL)。將所獲得之懸浮液在冰浴中冷卻，且不久後將固體過濾出並用冰冷異丙醇(4 × 4 mL)洗滌。在減壓下乾燥提供呈灰白色晶體狀之標題化合物(1.51 g, 79%)。
1
H NMR (600 MHz, DMSO-
d 6
) δ 8.34 (s, 1H), 6.49 (s, 1H), 5.95 (br s, 1H), 5.59 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 4.96 (p, J = 6.5 Hz, 1H), 4.59 - 4.51 (m, 1H), 4.23 (dd, J = 7.5, 5.3 Hz, 0.5H), 2.79 (s, 3H), 2.60 (dd, J = 15.6, 5.3 Hz, 0.5H), 2.55 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 2.43 (dd, J = 15.6, 7.5 Hz, 0.5H), 2.25 - 2.14 (m, 2H), 1.96 - 1.81 (m, 5H), 1.54 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 1.36 - 1.25 (m, 2H)。 M.p. (DSC起始溫度) 94℃ ± 2℃。
實例 12 反式 - 2-[4-[2-[(1R
)-1- 羥基乙基 ]-6-( 甲基胺基 ) 咪唑并 [4,5-c
] 吡啶 -1- 基 ] 環己基 ] 乙腈硫酸鹽 ( 化合物 12) 在45℃下，將
反式 -
2-[4-[2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈(1.50 g, 4.79 mmol)溶解於甲醇(10 mL)中。添加於異丙醇(5.0 mL)中之硫酸(1.0 M, 4.79 mL, 4.79 mmol)。藉由在減壓下且在45℃下蒸發來減少反應混合物之體積(蒸餾出約7 mL)。添加標題化合物之幾種參照晶體開始結晶。將所獲得之懸浮液在冰浴中冷卻，且不久後將固體過濾出並用冰冷異丙醇(2 × 2 mL)洗滌。在減壓下乾燥提供呈灰白色晶體狀之標題化合物(1.57 g)。
1
H NMR (600 MHz, DMSO-
d 6
) δ 13.32 (br s, 1H), 8.61 (s, 1H), 7.49 (br s, 1H), 6.95 (s, 1H), 5.91 (br s, 1H), 5.07 (q, J = 6.5 Hz, 1H), 4.67 - 4.58 (m, 1H), 2.96 (s, 3H), 2.56 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 2.26 - 2.14 (m, 2H), 1.99 - 1.87 (m, 5H), 1.57 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 1.38 - 1.27 (m, 2H)。 M.p. (DSC起始溫度) 169 ± 2℃。
實例 13 反式 - 2-[4-[2-[(1R
)-1- 羥基乙基 ]-6-( 甲基胺基 ) 咪唑并 [4,5-c
] 吡啶 -1- 基 ] 環己基 ] 乙腈 鹽酸鹽 ( 化合物 13) 在45℃下，將
反式 -
2-[4-[2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈(2.00 g, 6.38 mmol)溶解於異丙醇(70 mL)中。在rt下添加甲醇鹽酸(3.0 M, 6.38 mL, 19.1 mmol)。藉由在減壓下且在45℃下蒸發來減少反應混合物之體積(蒸餾出約45 mL)。添加標題化合物之幾種參照晶體開始結晶。藉由在減壓下蒸發進一步減少反應混合物之體積(蒸餾出約5 mL)。將所獲得之懸浮液在冰浴中冷卻且不久後將固體過濾出並用冰冷異丙醇(4 × 4 mL)洗滌。在減壓下乾燥提供呈灰白色晶體狀之標題化合物(1.30 g)。
1
H NMR (600 MHz, DMSO-
d 6
) δ 14.06 (br s, 1H), 8.60 (s, 1H), 7.84 (br s, 1H), 7.02 (s, 1H), 6.16 (br s, 1H), 5.07 (q, J = 6.5 Hz, 1H), 4.69 - 4.60 (m, 1H), 2.98 (s, 3H), 2.56 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 2.27 - 2.16 (m, 2H), 2.01 - 1.86 (m, 5H), 1.57 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 1.39 - 1.28 (m, 2H)。 M.p. (DSC起始溫度) 148 ± 2℃。
實例 14 反式 - 2-[4-[2-[(1R
)-1- 羥基乙基 ]-6-( 甲基胺基 ) 咪唑并 [4,5-c
] 吡啶 -1- 基 ] 環己基 ] 乙腈琥珀酸鹽 ( 化合物 14) 在約50℃下，將
反式 -
2-[4-[2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈(31.3 mg, 0.100 mmol)溶解於乙醇(0.20 mL)中。添加於乙醇(0.25 mL)中之琥珀酸(11.8 mg, 0.100 mmol)。藉由在減壓下且在45℃下蒸發來減少反應混合物之體積(蒸餾出約0.14 mL乙醇)。結晶發生後添加乙醇(0.10 mL)。將所獲得之懸浮液在冰浴中冷卻且不久後過濾，提供呈灰白色晶體狀之標題化合物(16 mg, 33%)。
1
H NMR (600 MHz, DMSO-
d 6
) δ 12.16 (br s, 3H), 8.33 (s, 1H), 6.48 (s, 1H), 5.91 (br s, 1H), 5.59 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 4.96 (p, J = 6.5 Hz, 1H), 4.59 - 4.50 (m, 1H), 2.79 (s, 3H), 2.55 (d, J = 6.3 Hz, 2H), 2.42 (s, 6H), 2.25 - 2.14 (m, 2H), 1.97 - 1.80 (m, 5H), 1.54 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 1.35 - 1.24 (m, 2H)。 M.p. (DSC起始溫度) 162 ± 2℃。
實例 15 反式 - 2-[4-[2-[(1R
)-1- 羥基乙基 ]-6-( 甲基胺基 ) 咪唑并 [4,5-c
] 吡啶 -1- 基 ] 環己基 ] 乙腈草酸鹽 ( 化合物 15) 在約50℃下，將
反式 -
2-[4-[2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈(31.3 mg, 0.100 mmol)溶解於乙醇(0.20 mL)中。添加於乙醇(0.25 mL)中之草酸(4.5 mg, 0.050 mmol)。將反應混合物在冰浴中冷卻且不久後過濾，提供呈灰白色晶體狀之標題化合物(27 mg)。
1
H NMR (600 MHz, DMSO-
d 6
) δ 8.39 (s, 1H), 6.57 (s, 1H), 4.98 (q, J = 6.5 Hz, 1H), 4.60 - 4.52 (m, 1H), 2.83 (s, 3H), 2.55 (d, J = 6.3 Hz, 2H), 2.25 - 2.14 (m, 2H), 1.97 - 1.82 (m, 5H), 1.55 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.36 - 1.25 (m, 2H)。 M.p. (DSC起始溫度) 134 ± 2℃。
實例 16 反式 - 2-[4-[2-[(1R
)-1- 羥基乙基 ]-6-( 甲基胺基 ) 咪唑并 [4,5-c
] 吡啶 -1- 基 ] 環己基 ] 乙腈富馬酸鹽 ( 化合物 16) 將
反式 -
2-[4-[2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈(3.00 g, 9.57 mmol)溶解於乙醇(6.0 mL)中。緩慢添加在約50℃下溶解於乙醇(12 mL)中之富馬酸(1.11 g, 9.57 mmol)。結晶發生。使所獲得之懸浮液達到rt，且不久後將固體過濾出並用乙醇(2 × 0.5 mL)洗滌。在減壓下乾燥提供呈灰白色晶體狀之標題化合物(3.26 g, 79%)。 1H NMR (600 MHz, DMSO-
d 6
) δ 8.34 (s, 1H), 6.63 (s, 2H), 6.49 (s, 1H), 4.97 (q, J = 6.5 Hz, 1H), 4.60 - 4.51 (m, 1H), 2.80 (s, 3H), 2.55 (d, J = 6.3 Hz, 2H), 2.26 - 2.14 (m, 2H), 1.97 - 1.80 (m, 5H), 1.54 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 1.35 - 1.24 (m, 2H)。 M.p. (DSC起始溫度) 111 ± 2℃。
實例 17 反式 - 2-[4-[2-[(1R
)-1- 羥基乙基 ]-6-( 甲基胺基 ) 咪唑并 [4,5-c
] 吡啶 -1- 基 ] 環己基 ] 乙腈 1,5- 萘二磺酸鹽 ( 化合物 17) 在約50℃下，將
反式 -
2-[4-[2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈(11.8 mg, 0.037 mmol)溶解於乙酸乙酯(1 mL)中。添加於H
2
O (150 μL)中之1,5-萘二磺酸(四水合物) (15.0 mg, 0.042 mmol)。將溶液在磁力攪拌單元上極緩慢地攪拌大約3天，之後藉由過濾分離灰白色晶體。
1
H NMR (600 MHz, DMSO-
d 6
) δ 8.88 (d,
J
= 8.5 Hz, 2H), 8.60 (s, 1H), 7.95 (dd,
J
= 7.1, 1.2 Hz, 2H), 7.54 (br s, 1H), 7.42 (dd,
J
= 8.5, 7.1 Hz, 2H), 6.97 (s, 1H), 5.06 (q,
J
= 6.5 Hz, 1H), 4.63 - 4.56 (m, 3H), 2.95 (s, 3H), 2.51 (d, J = 5.4 Hz, 2H), 2.28 - 2.06 (m, 2H), 1.95 - 1.72 (m, 5H), 1.56 (d,
J
= 6.5 Hz, 3H), 1.38 - 1.18 (m, 2H)。 M.p. (DSC起始溫度) 110 ± 2℃。
實例 18 反式 - 2-[4-[2-[(1R
)-1- 羥基乙基 ]-6-( 甲基胺基 ) 咪唑并 [4,5-c
] 吡啶 -1- 基 ] 環己基 ] 乙腈 DL- 苦杏仁酸鹽 ( 化合物 18) 在約50℃下，將
反式 -
2-[4-[2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈(9.92 mg, 0.032 mmol)及DL-苦杏仁酸(5.3 mg, 0.035 mmol)溶解於乙酸乙酯(1 mL)中。將溶液在磁力攪拌單元上極緩慢地攪拌大約3天，之後分離灰白色晶體藉由過濾。
1
H NMR (600 MHz, DMSO-
d 6
) δ 8.33 (d,
J
= 0.9 Hz, 1H), 7.45 - 7.37 (m, 2H), 7.37 - 7.31 (m, 2H), 7.31 - 7.25 (m, 1H), 6.48 (d,
J
= 1.0 Hz, 1H), 5.92 (br s, 1H), 5.59 (br s, 1H), 5.00 (s, 1H), 4.96 (q,
J
= 6.8 Hz, 1H), 4.63 - 4.47 (m, 1H), 2.79 (s, 3H), 2.55 (d,
J
= 6.4 Hz, 2H), 2.27 - 2.11 (m, 2H), 1.97 - 1.75 (m, 5H), 1.54 (d,
J
= 6.5 Hz, 3H), 1.38 - 1.21 (m, 2H)。 M.p. (DSC起始溫度) 153 ± 2℃。
實例 19 反式 - 2-[4-[2-[(1R
)-1- 羥基乙基 ]-6-( 甲基胺基 ) 咪唑并 [4,5-c
] 吡啶 -1- 基 ] 環己基 ] 乙腈二噁烷溶劑合物 ( 化合物 19)
在裝配有小磁棒之封蓋2.5 mL小瓶中製得大約15 mg
反式 -
2-[4-[2-[(1
R
)-1-羥基乙基]-6-(甲基胺基)咪唑并[4,5-
c
]吡啶-1-基]環己基]乙腈於0.4 mL 1,4-二噁烷:庚烷 (1:1)混合物中之懸浮液。在r.t下，將小瓶置於磁力攪拌單元上並以大約600 rpm攪拌兩週。藉由過濾分離固體材料並乾燥，然後進行熔點測定。 M.p. (DSC起始溫度) 77 ± 2℃。
JAK 激酶分析
自Carna Biosciences, Inc購買人類桿狀病毒表現之酪胺酸蛋白激酶(JAK) 1、2、3及酪胺酸激酶(TYK) 2 (編號分別為08-144, -045, -046, -147)。全部四種純化酶皆僅含有催化結構域。JAK1 (aa 850-1154)及TYK2 (aa 871-1187)經表現有N-末端融合之GST-標籤且JAK2及JAK3具有N-末端融合之His-標籤。在基於HTRF之分析(CisBio編號62TK0PEC)中量測合成肽之磷酸化抑制。首先，使用Labcyte ECHO 550液體處置器，將75 nL測試化合物溶液(100% DMSO)添加至白色淺384孔板(NUNC編號264706)中。此後，添加1 µL化合物稀釋緩衝液(50 mM HEPES, 0.05%牛血清白蛋白)及2 µL TK溶液(於激酶緩衝液[來自HTRFKinEASE TK套組之1×酶緩衝液，1 mM DTT] 中之TK受質-生物素)。然後，將5 µL激酶-ATP混合物(於激酶緩衝液中製備)添加至孔並將板在RT下培育20分鐘 (JAK2、JAK3及TYK2)至40分鐘 (JAK1)。對於全部四種激酶皆使用對應於ATP之K
m
之ATP濃度。緩衝液、受質、激酶及ATP之最終濃度為：JAK1：50 mM Hepes緩衝液(pH 7.0)、0.01% BSA、10 mM MgCl
2
、1 mM DTT、7 µM ATP、50 nM SEB、1 µM TK受質-生物素及5 ng/孔JAK1；JAK2：50mM Hepes緩衝液(pH 7.0)、0.01% BSA、5 mM MgCl
2
、1 mM DTT、4 µM ATP、1 µM TK受質-生物素及0.1 ng/孔JAK2；JAK3：50 mM Hepes緩衝液(pH 7.0)、0.01% BSA、5 mM MgCl
2
、1 mM DTT、2 µM ATP、1 µM TK受質-生物素及0.3 ng/孔JAK3；TYK2：50 mM Hepes緩衝液(pH 7.0)、0.01% BSA、5 mM MgCl
2
、1 mM DTT、13 µM ATP、50 nM SEB、1 µM TK受質-生物素及0.8 ng/孔TYK2。此後，藉由添加4 µL檢測混合物(最終濃度：50 mM Hepes緩衝液(pH 7.0)、0.01% BSA、0.8 M KF、20 mM EDTA、42 nM鏈黴抗生物素蛋白-XL665及1:400 STK Ab Cryptate)使激酶反應停止並將板在黑暗中培育過夜。使用PerkinElmer Envision讀取器使用以下濾光器來量化HTRF信號：320 nm激發濾光器、665 nm發射濾光器及615 nm第2發射濾光器。計算每個孔之比率((665/615) × 10
4
)。
STAT6 分析
以30-40,000個細胞/孔之密度將25 μL STAT6 bla-RA1 (Invitrogen編號K1243)細胞懸浮液接種於具有乾淨底部之384孔Black View板(PerkinElmer編號6007460)中之含有550 ng/mL CD40配體(Invitrogen編號PHP0025)之分析培養基(Opti-MEM (Invitrogen編號11058-021) + 0.5%熱不活化之胎牛血清(Invitrogen編號10082-147) + 1%非必需胺基酸(Invitrogen編號11140-050) + 1%丙酮酸鈉(Invitrogen編號11360-070) + 1%青黴素/鏈黴素(Invitrogen編號15140-122))中。將孔板在加濕37℃空氣/CO
2
(95%/5%)培育器中培育過夜。次日，使用Labcyte Echo 550液體處置器將125 nL測試化合物及參照化合物之溶液轉移至孔板中。然後將板在加濕37℃空氣/CO
2
(95%/5%)培育器中培育1小時。此後，亦使用Labcyte Echo 550將重組體人類介白素4 (Invitrogen編號PHC0045)添加至板中，直至最終濃度為10 ng/mL。然後將細胞在加濕37℃空氣/CO
2
(95%/5%)培育器中培育4½-5小時。然後，將8 µL LiveBLAzer受質混合物(Invitrogen編號K1095)添加至分析板，將其在RT下培育過夜。然後量測螢光：激發：405 nm；發射：460 nm (綠色通道)、發射：535 nm (藍色通道)。在兩個發射通道中減去背景並計算每個孔之比率460/535 nm。
STAT5 分析
以約10,000個細胞/孔之密度將25 μL STAT5 irf1-bla TF1 (Invitrogen編號K1219)細胞懸浮液接種於具有乾淨底部之384孔Black View板(PerkinElmer編號6007460)中之分析培養基(Opti-MEM (Invitrogen編號11058-021) + 0.5%熱不活化之胎牛血清(Invitrogen編號10082-147) + 1%非必需胺基酸(Invitrogen編號11140-050) + 1%丙酮酸鈉(Invitrogen編號11360-070) + 1%青黴素/鏈黴素(Invitrogen編號15140-122))中。將孔板在加濕37℃空氣/CO
2
(95%/5%)培育器中培育過夜。次日，使用Labcyte Echo 550液體處置器將125 nL測試化合物及參照化合物之溶液轉移至孔板中。然後將板在加濕37℃空氣/CO
2
(95%/5%)培育器中培育1小時。此後，亦使用Labcyte Echo 550將重組體人類促紅血球生成素(EPO) (Invitrogen編號PHC9634)添加至板，直至最終濃度為10 ng/mL。然後將細胞在加濕37℃空氣/CO
2
(95%/5%)培育器中培育4½-5小時。然後將8 µL LiveBLAzer受質混合物(Invitrogen編號K1095)添加至分析板，然後將其在RT下培育過夜。然後量測螢光：激發：405 nm；發射：460 nm (綠色通道)、發射：535 nm (藍色通道)。在兩個發射通道中減去背景並計算每個孔之比率460/535 nm。 在JAK1、JAK2、JAK3及TYK2激酶分析以及STAT6及STAT5分析中測試本發明之化合物。結果揭示於表1中。 表1
WO2011086053之*實例641及實例644係根據WO2011086053製備 JAK1相對於JAK2或JAK3之選擇性計算為各別EC
50
之JAK2:JAK1或JAK3:JAK1比率。針對STAT6相對於STAT5之選擇性完成類似計算。如自表1可見，本發明之化合物顯示對JAK1抑制相對於JAK2及JAK3之高選擇性；及對STAT6抑制(反映JAK1抑制)相對於STAT5 (反映JAK2抑制)之高選擇性。
激酶選擇性
本發明實例3以及WO2011086053之實例644及641之激酶選擇性概況係在CARNA Biosciences Inc.用由以下組成之群組來評估：23種酪胺酸激酶(包括JAK1 (ABL、CSK、EGFR、EPHA2、EPHB1、EPHB4、FGFR1、FLT3、IGF1R、ITK、JAK1、JAK3、KDR、LCK、MET、PDGFRα、PDGFRβ、PYK2、SRC、TIE2、TRKA及TYRO3))以及68種絲氨酸及蘇氨酸激酶(LCK、MET、AKT1、AMPKα1/β1/γ1、AurA、AurB、AurC、BRSK2 ([ATP] = Km值)、CaMK1α ([ATP] = Km值)、CaMK2α ([ATP] = Km值)、CaMK4、CDC2/CycB1、CDC7/ASK、CDK2/CycA2、CDK2/CyE1、CDK3/CyE1 ([ATP] = Km值)、CDK4/CyD3、CDK6/CyD3、CDK7/CycH/MAT1、CDK9/CycT1、CHK1、CK1ε、CK2α1/β、CK2α2/β、CLK1、CLK2、DAPK1、DYRK1B、Erk2、GSK3α、GSK3β、HGK、IKKβ、IRAK4 ([ATP] = Km值)、JNK2、LOK ([ATP] = Km值)、MAPKAP2、MLK1、MLK2、MNK2 ([ATP] = Km值)、MST1、MST2 ([ATP] = Km值)、NEK1、NEK2、NEK6、NEK7、NEK9、p38α、p70S6K、PAK1 ([ATP] = Km值)、PAK2、PAK5 ([ATP] = Km值)、PBK、PDK1、PIM1、PIM2、PKACα、PKCα、OKD2、PKN1 ([ATP] = Km值)、PLK1、PLK2 ([ATP] = Km值)、ROCK1、RSK1、SGK、skMLCK ([ATP] = Km值)及TSSK1)。評估通常係在1 mM之ATP濃度下進行，然而對於某些激酶，使用接近相應Km值之ATP濃度(此在每一相關激酶之括號中說明)。抑制百分比係在大約1000倍JAK1 EC
50
之抑制劑濃度下量測。結果匯總於表2中： 表2
如表2中所顯示，本發明之實例3展示對大組激酶之極高選擇性程度；即除JAK1以外之所測試激酶皆經抑制超過50%。 WO2011086053之實例644及641抑制除JAK1外之9種其他激酶50%或以上。 抑制脫靶激酶增加不良效應之風險，即高激酶選擇性可降低不良效應之風險。
CYP 抑制及 CYP 誘導
可逆CYP抑制、時間依賴性CYP抑制(TDI)及CYP誘導係根據權威指導在Cyprotex PLC測試。 對於可逆CYP抑制，在對於實例3在高達50 µM且對於WO2011086053之實例644及641高達25 µM之受質濃度下量測IC50。 可逆CYP抑制結果匯總於表3中。 表3
ND=未測定 如自表3可見，實例3在於最高50 µM之受質濃度下量測時展示無CYP抑制。 WO2011086053之實例644及641指示弱的CYP3A4抑制。 對於實例3指示無時間依賴性CYP抑制。 CYP3A4抑制可指示不期望的藥物-藥物相互作用。CYP抑制可影響血漿含量並增加共投與藥物之暴露，且潛在地導致不利的藥物反應或毒性。 CYP1A2、CYP2B6及CYP3A4基因表現之誘導分別可用作芳基烴受體(AhR)、孕甾烷X受體(PXR)及組成型雄甾烷受體(CAR)之活化之敏感性代表終點。藉由分別在相關濃度下量測AhR、CAR及PXR mRNA編碼之增加來評價該等核受體之誘導。 ＞2倍之轉變指示CYP誘導。 來自三個最高培育濃度之結果匯總於表4中。 表4：CYP誘導之與媒劑相比之平均倍數轉變
如自表4可見，實例3在最高至少50 µM之濃度不引起CYP3A4誘導或最高至少10 µM之濃度不引起CYP1A2及CYP2B6誘導。 WO2011086053之實例644在10 µM之濃度下引起CYP3A4誘導並在10 µM之濃度下引起CYP2B6誘導，且WO2011086053之實例641在20 µM及以上之濃度下引起CYP3A4誘導。 CYP3A4誘導可指示不期望之藥物-藥物相互作用。CYP誘導可降低共投與藥物之暴露，從而導致效能下降。另外，CYP誘導亦可因增加反應性代謝物形成而導致毒性。
結晶材料之水溶解度
評估結晶實例3、WO2011086053之實例644及641在不同pH下之水溶解度。溶解度(mg/mL)匯總於表5中： 表5
一般而言，水溶解度係影響經口調配物發展之關鍵態樣之一，且經口生物利用度高度依賴於藥物之溶解度。高溶解度將驅動化合物在GI道中之快速溶解，且所達到之高濃度將驅動穿過腸上皮吸收。因此，高溶解度可顯著增加在相關劑量下達成高經口生物利用度及期望之全身性暴露之可能性。
或其醫藥上可接受之鹽、水合物或溶劑合物；其中R1係C1-烷基，R2係C1-烷基，R3係C2-烷基，R4係氫，R5係氫。本發明進一步係關於該等化合物用於療法中、包含該等化合物之醫藥組合物、該等化合物用於治療自體免疫疾病及用於製備該等化合物之中間體。