TW201803901A - 抗ｆｅｌ ｄ１之人類抗體及其使用方法 - Google Patents

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Abstract

本發明係提供與貓過敏原Fel d1結合之抗體、包括此等抗體之組成物、編碼此等抗體之核酸以及使用此等抗體之方法。根據本發明特定的實施例，此等抗體為與Fel d1結合之全人類單株抗體。本發明之抗體可用於活體內與Fel d1過敏原結合，因而防止Fel d1過敏原與肥大細胞或嗜鹼性細胞表面上之預形IgE結合。如此一來，此等抗體係用作防止組織胺和其他發炎介質從肥大細胞及/或嗜鹼性細胞釋放出，因而改善致敏個體中對貓過敏原之不良反應。本發明之抗體亦可用於診斷目的，測定病患是否對Fel d1貓過敏原過敏。

Description

抗FEL D1之人類抗體及其使用方法
本發明係關於與貓過敏原Fel d1專一結合之人類抗體及人類抗體的抗原結合片段，包含此等抗體之治療組成物及使用該等抗體之方法。
Fel d1蛋白為一分泌性貓蛋白，其係屬於小型雙硫鍵連接的異源二聚蛋白之分泌球蛋白家族，僅發現於哺乳動物中(Klug,J.等人(2000),Ann.N.Y.Acad.Sci.923：348-354)。其為人類中貓過敏之主要因素(Platts-Mills,T.A.，等人(1997),J.Allergy Clin.Immunol.100：S2-S24)。大約有90-95%對貓過敏的病患對Fel d1蛋白具有IgE反應(van Ree，等人(1999),J.Allergy Clin.Immunol.104：1223-1230)。對Fel d1具過敏反應之病患的症狀，範圍可從輕度鼻炎和結膜炎至有生命威脅性的氣喘反應。Fel d1係由皮脂腺和鱗狀腺上皮細胞所產生並藉由舔和梳整轉移到毛皮(Bartholome,K.等人(1985),J.Allergy Clin.Immunol.76：503-506；Charpin,C.等人(1991),J.Allergy Clin.Immunol.88：77-82；Dabrowski,A.J.(1990)，等人J.Allergy Clin.Immunol.86：462-465)。其亦存在於唾腺、肛周腺和淚腺中(Andersen,M.C.，等人(1985),J.Allergy Clin.Immunol.76：563-569；van Milligen,F.J.(1992)，等人，Int.Arch.Allergy Appl.Immunol.92(4)：375-378)且主要的儲藏處似乎為 皮膚和毛髮(Mata,P.等人(1992),Ann.Allergy 69(4)：321-322)。
天然的Fel d1為一約18kDa之異源二聚醣蛋白。各異源二聚體包括二條藉由三個鏈內雙硫鍵共價連結之多肽鏈且其係由二種個別的基因所編碼(Duffort,OA，等人，(1991),Mol.Immunol.28：301-309；Morgenstern,JP，等人，(1991),PNAS 88：9690-9694；Griffith,I.J.，等人(1992),Gene 113：263-268；Kristensen,A.K.等人(1997),Biol.Chem.378：899-908)。1鏈包括70個胺基酸殘基而2鏈包括約90-92個胺基酸殘基。結構上二條鏈為相似的，但僅有10-15%序列一致性(Kaiser,L.等人(2003),J.Biol.Chem.278(39)：37730-37735)。雖然各鏈有時候係個別稱為Fel d1，但全蛋白過敏原需要此二條鏈。
Fel d1蛋白為對動物功能未知之蛋白，但在敏感的人類造成了IgG或IgE反應(過敏或氣喘反應)。雖然已知有其他貓過敏原，包括Fel d2(白蛋白)和Fel d3(胱蛋白)，但60%至90%所產生的抗-貓IgE係針對Fel d1(Leitermann,K.等人，(1984),J Allergy Clin.Immunol.74：147-153；Lowenstein,H.等人，(1985),Allergy 40：430-441；van Ree,R.等人，(1999),J.Allergy Clin.Immunol.104：1223-1230；Ichikawa,K.等人，(2011),Clin.Exp.Allergy,31：1279-1286)。
免疫球蛋白E(IgE)為造成其本身出現過敏性鼻炎、過敏性結膜炎、花粉熱、過敏性氣喘、蜂毒過敏及食物過敏之第1型過敏的原因。IgE在血液中循環並在嗜鹼性細胞和肥大細胞表面上與高親和性的IgE受體FcεR1α結合。在大部分的過敏反應中，過敏原係經由吸入、攝入或經由皮膚進入身體。然後過敏原與已和嗜鹼性細胞和肥大細胞表面上的高親和性受體結合之預形成的IgE結合，產生數個IgE分子交鏈並引發組織胺和其他發炎介質之釋放，造成各種過敏症狀。
過敏之治療包括用於抑制免疫活性之類固醇和舒緩氣喘症 狀之支氣管擴張劑。去敏感治療亦可用於嚴重過敏之病患。胜肽疫苗組合物已就特定敏感原，例如Fel d1之個體去敏感進行試驗(參見US2010/0239599A1和EP2380591A2)。抗體已被提出用於過敏之治療，因為其能阻斷過敏分子進入黏膜組織，或可在其有機會與已和肥大細胞或嗜鹼性細胞表面上的高親和性受體結合之IgE結合之前，與過敏原結合，因而阻止組織胺和其他發炎介質從這些細胞釋放出。
美國專利號5,670,626描述了使用單株抗體，藉由阻斷過敏原與黏膜組織結合來治療IgE-媒介的過敏疾病，例如過敏性鼻炎、過敏性氣喘和過敏性結膜炎。美國專利號6,849,259描述了在活體過敏之小鼠模型中使用抗原-專一性抗體抑制過敏性發炎。以牛奶為基底和蛋為基底的抗體系統已有描述。例如US20030003133A1揭示了使用牛奶做為過敏原之載體，引發對貓皮屑和其他過敏原之口服耐受性。經由使用抑制過敏原與肥大細胞結合能力之分子，用於降低動物對環境過敏原之過敏反應的組成物和方法，係描述於US2010/0143266中。其他Fel d1之抗體，de Groot等人已有描述(de Groot等人.，(1988),J.Allergy Clin.Immunol.82：778-786)。
本發明係提供與貓過敏原Fel d1專一結合之全人類單株抗體(mAb)及其抗原-結合片段。此等抗體可在過敏病患暴露於貓過敏原後，用於活體內與Fel d1過敏原結合，且因此可用於促進Fel d1之清除或阻斷過敏原與肥大細胞或嗜鹼性細胞表面上預形成的IgE結合。如此一來，本發明之抗體可用於防止組織胺和其他發炎介質從肥大細胞或嗜鹼性細胞釋放出，藉此防止或減少在對貓過敏原過敏之病患中所觀察到的不良效應。在特定的實施例中，此等抗體能於對Fel d1貓過敏原敏感的病患中，降低、減小或防止至少一種症狀，例如打噴嚏、充血、鼻塞、咳嗽、喘息、支氣管狹窄、 鼻炎或結膜炎。在特定的實施例中，此等抗體能在過敏個體中於活體內防止與暴露於貓過敏原有關甚至更嚴重的併發症，例如氣喘反應、重度過敏或甚至死亡。
本發明之抗體可為全長(例如IgG1或IgG4抗體)或可僅包括一抗原-結合部分(例如Fab、F(ab’)2或scFv片段)，及可經修飾影響功能性，例如刪除殘餘效應子功能(Reddy等人，(2000),J.Immunol.164：1925-1933)。
本發明第一方面係提供與Fel d1專一結合之單離的人類單株抗體或其抗原-結合片段。
在一實施例中，此抗體或其抗原-結合片段為一IgA同型以外之同型。
在一實施例中，此單離的人類抗體或其抗原-結合片段具有由IgG1、IgG2和IgG4組成之群中選出之同型。
在一實施例中，此單離的人類抗體或其抗原-結合片段係以等於或低於10-6M之KD與Fel d1專一結合。在一實施例中，此單離的人類抗體或其抗原-結合片段係以等於或低於1.8nM之KD與Fel d1專一結合。
在一實施例中，此單離的人類抗體或其抗原-結合片段包括三條重鏈CDR(HCDR1、HCDR2和HCDR3)，其係包含在任一由下列組成之群中選出的重鏈可變區(HCVR)序列內：SEQ ID NO：2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、242、258、274、290、306、322、338、354、370及460；及三條輕鏈CDR(LCDR1、LCDR2及LCDR3)，其係包含在任一由下列組成之群中選出的輕鏈可變區(LCVR)序列內：SEQ ID NOs：10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218、234、250、266、282、298、314、330、346、362、378和468。辨識HCVR和LCVR胺基酸序列中之CDR的方法和技術已為本項技術所熟知，並可用於辨識文中所揭示之專一性HCVR及/或LCVR胺基酸序 列內的CDR。可用於辨識CDR界限之示例習用法包括，例如Kabat定義、Chothia定義和AbM定義。一般而言，Kabat定義係以序列變異性為基準，Chothia定義係以結構環區域之位置為基準，而AbM定義為介於Kabat和Chothia法之折衷。參見，例如Kabat,"Sequences of Proteins of Immunological Interest," National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991)；Al-Lazikani等人，(1997),J.Mol.Biol.273：927-948；及Martin等人，(1989),Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86：9268-9272。亦可取得公開的資料庫用以辨識抗體內的CDR序列。
在一實施例中，此單離的人類抗體或其抗原-結合片段係包括三條重鏈CDR(HCDR1、HCDR2和HCDR3)，其係包含在任一由下列組成之群中選出的重鏈可變區(HCVR)序列內：SEQ ID NO：18、66、130、162、242、306、322、370和460；及三條輕鏈CDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)，其係包含在任一由下列組成之群中選出的輕鏈可變區(LCVR)序列內：SEQ ID NO：26、74、138、170、250、314、330、378和468。
在一實施例中，此單離的人類抗體或其抗原-結合片段係包括具有由下列組成之群中選出的胺基酸序列之HCVR：SEQ ID NO：2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、242、258、274、290、306、322、338、354、370和460。
在一實施例中，此單離的人類抗體或其抗原-結合片段係包括具有由下列組成之群中選出的胺基酸序列之HCVR：SEQ ID NO：18、66、130、162、242、306、322、370和460。
在一實施例中，此單離的人類抗體或其抗原-結合片段係包括具有由下列組成之群中選出的胺基酸序列之LCVR：SEQ ID NO：10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218、234、250、266、282、298、314、330、346、362、378和468。
在一實施例中，此單離的人類抗體或其抗原-結合片段係包括具有由下列組成之群中選出的胺基酸序列之LCVR：SEQ ID NO：26、74、138、170、250、314、330、378和468。
在一實施例中，此單離的人類抗體或其抗原-結合片段包括：(a)具有由下列組成之群中選出的胺基酸序列之HCVR：SEQ ID NO：2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、242、258、274、290、306、322、338、354、370和460；及(b)具有由下列組成之群中選出的胺基酸序列之LCVR：SEQ ID NO：10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218、234、250、266、282、298、314、330、346、362、378和468。
在一實施例中，此單離的人類抗體或其抗原-結合片段係包括：(a)具有由下列組成之群中選出的胺基酸序列之HCVR：SEQ ID NO：18、66、130、162、242、306、322、370和460；及(b)具有由下列組成之群中選出的胺基酸序列之LCVR：SEQ ID NO：26、74、138、170、250、314、330、378和468。
在一實施例中，此單離的人類抗體或其抗原-結合片段係包括：(a)具有由下列組成之群中選出的胺基酸序列之HCDR1區：SEQ ID NO：4、20、36、52、68、84、100、116、132、148、164、180、196、212、228、244、260、276、292、308、324、340、356、372和462；(b)具有由下列組成之群中選出的胺基酸序列之HCDR2區：SEQ ID NO：6、22、38、54、70、86、102、118、134、150、166、182、198、214、230、246、262、278、294、310、326、342、358、374和464；(c)具有由下列組成之群中選出的胺基酸序列之HCDR3區：SEQ ID NO：8、24、40、56、72、88、104、120、136、152、168、184、200、216、232,248、 264、280、296、312、328、344、360、376和466；(d)具有由下列組成之群中選出的胺基酸序列之LCDR1區：SEQ ID NO：12、28、44、60、76、92、108、124、140、156、172、188、204、220、236、252、268、284、300、316、332、348、364、380和470；(e)具有由下列組成之群中選出的胺基酸序列之LCDR2區：SEQ ID NO：14、30、46、62、78、94、110、126、142、158、174、190、206、222、238、254、270、286、302、318、334、350、366、382和472；及(f)具有由下列組成之群中選出的胺基酸序列之LCDR3區：SEQ ID NO：16、32、48、64、80、96、112、128、144、160、176、192、208、224、240、256、272、288、304、320、336、352、368、384和474。
在一實施例中，此單離的人類抗體或其抗原-結合片段係包括：(a)具有由下列組成之群中選出的胺基酸序列之HCDR1區：SEQ ID NO：20、68、132、164、244,308、324、372和462；(b)具有由下列組成之群中選出的胺基酸序列之HCDR2區：SEQ ID NO：22、70、134、166、246、310、326、374和464；(c)具有由下列組成之群中選出的胺基酸序列之HCDR3區：SEQ ID NO：24、72、136、168、248、312、328、376和466；(d)具有由下列組成之群中選出之胺基酸序列的LCDR1區：SEQ ID NO：28、76、140、172、252、316、332、380和470；(e)具有由下列組成之群中選出的胺基酸序列之LCDR2區：SEQ ID NO：30、78、142、174、254、318、334、382和472；and(f)具有由下列組成之群中選出的胺基酸序列之LCDR3區：SEQ ID NO：32、80、144、176、256、320、336、384和474。
在一實施例中，此單離的人類抗體或其抗原-結合片段係包 括由下列組成之群中選出之HCVR/LCVR胺基酸序列對：SEQ ID NO：2/10、18/26、34/42、50/58、66/74、82/90、98/106、114/122、130/138、146/154、162/170、178/186、194/202、210/218、226/234、242/250、258/266、274/282、290/298、306/314、322/330、338/346、354/362、370/378和460/468。
在一實施例中，此單離的人類抗體或其抗原-結合片段係包括由下列組成之群中選出之HCVR/LCVR胺基酸序列對：SEQ ID NO：18/26、66/74、130/138、162/170、242/250、306/314、322/330、370/378和460/468。
在一實施例中，與Fel d1結合之單離的人類抗體或其抗原-結合片段係包括由下列組成之群中選出之HCVR/LCVR胺基酸序列對：SEQ ID NO：18/26、66/74、130/138和162/170。
在一實施例中，與Fel d1結合之單離的人類抗體或其抗原-結合片段係包括由下列組成之群中選出之HCVR/LCVR胺基酸序列對：SEQ ID NO：18/26和322/330。
在一實施例中，與Fel d1結合之單離的人類抗體或其抗原-結合片段係包括由下列組成之群中選出之HCVR/LCVR胺基酸序列對：SEQ ID NO：18/26和306/314。
在一實施例中，與Fel d1結合之單離的人類抗體或其抗原-結合片段係包括由下列組成之群中選出之HCVR/LCVR胺基酸序列對：SEQ ID NO：18/26和370/378。
在一實施例中，與Fel d1結合之單離的人類抗體或其抗原-結合片段係包括由下列組成之群中選出之HCVR/LCVR胺基酸序列對：SEQ ID NOs：242/250和306/314。
在一實施例中，與Fel d1結合之單離的人類抗體或其抗原-結合片段係包括由下列組成之群中選出之HCVR/LCVR胺基酸序列對：SEQ ID NO：242/250和322/330。
在一實施例中，與Fel d1專一結合之單離的人類抗體或其抗原-結合片段係與至少一個由範圍從SEQ ID NO：396之大約位置15至大約位置24的胺基酸殘基；範圍從SEQ ID NO：396之大約位置85至大約位置103的胺基酸殘基；範圍從SEQ ID NO：396之大約位置85至大約位置104的胺基酸殘基；及範圍從SEQ ID NO：396之大約位置113至大約位置116的胺基酸殘基組成之群中選出的胺基酸序列相互作用。
在一實施例中，與Fel d1結合之單離的人類抗體或其抗原-結合片段係與範圍從SEQ ID NO：396之大約位置15至大約位置24的胺基酸殘基相互作用。
在一實施例中，與Fel d1結合之單離的人類抗體或其抗原-結合片段係與範圍從大約SEQ ID NO：396之大約位置85至大約位置103的胺基酸殘基相互作用。
在一實施例中，與Fel d1結合之單離的人類抗體或其抗原-結合片段係與範圍從SEQ ID NO：396之大約位置85至大約位置104的胺基酸殘基相互作用。
在一實施例中，與Fel d1結合之單離的人類抗體或其抗原-結合片段係與範圍從SEQ ID NO：396之大約位置113至大約位置116的胺基酸殘基相互作用。
在一實施例中，與Fel d1結合之單離的人類抗體或其抗原-結合片段係與至少一由下列組成之群中選出之胺基酸序列相互作用：SEQ ID NO：402、403、404和412。
在一實施例中，與Fel d1結合之單離的人類抗體或其抗原-結合片段係與SEQ ID NO：402相互作用。
在一實施例中，與Fel d1結合之單離的人類抗體或其抗原- 結合片段係與SEQ ID NO：403相互作用。
在一實施例中，與Fel d1結合之單離的人類抗體或其抗原-結合片段係與SEQ ID NO：404相互作用。
在一實施例中，與Fel d1結合之單離的人類抗體或其抗原-結合片段係與SEQ ID NO：426相互作用。
在一實施例中，與Fel d1結合之單離的人類抗體或其抗原-結合片段係與SEQ ID NO：412相互作用。
在一實施例中，與SEQ ID NO：402、403、404及/或426相互作用之單離的人類抗體或其抗原結合片段係包括三個包含在SEQ ID NO：18之重鏈可變區內的HCDR及三個包含在SEQ ID NO：26之輕鏈可變區內的LCDR。
在一實施例中，與SEQ ID NO：402、403、404及/或426相互作用之單離的人類抗體或其抗原結合片段係包括SEQ ID NO：20之HCDR1；SEQ ID NO：22之HCDR2；SEQ ID NO：24之HCDR3；SEQ ID NO：28之LCDR1；SEQ ID NO：30之LCDR2及SEQ ID NO：32之LCDR3。
在一實施例中，與SEQ ID NO：412相互作用之單離的人類抗體或其抗原結合片段係包括三個包含在SEQ ID NO：306重鏈可變區內的HCDR及三個包含在SEQ ID NO：314輕鏈可變區內的LCDR。
在一實施例中，與SEQ ID NO：412相互作用之單離的人類抗體或其抗原結合片段係包括SEQ ID NO：308之HCDR1；SEQ ID NO：310之HCDR2；SEQ ID NO之HCDR3：312；SEQ ID NO：316之LCDR1；SEQ ID NO：318之LCDR2及SEQ ID NO：320之LCDR3。
在一實施例中，與Fel d1結合之人類抗體其抗原結合片段係包括分別為SEQ ID NO：20、22和24之HCDR1、HCDR2和HCDR3胺基酸序列，以及分別為SEQ ID NO：28、30和32之LCDR1、LCDR2和 LCDR3胺基酸序列。
在一實施例中，與Fel d1結合之人類抗體或其抗原結合片段係包括分別為SEQ ID NO：68、70和72之HCDR1、HCDR2和HCDR3胺基酸序列及分別為SEQ ID NO：76、78和80之LCDR1、LCDR2和LCDR3胺基酸序列。
在一實施例中，與Fel d1結合之人類抗體或其抗原結合片段係包括分別為SEQ ID NO：132、134和136之HCDR1、HCDR2和HCDR3胺基酸序列及分別為SEQ ID NO：140、142和144之LCDR1、LCDR2和LCDR3胺基酸序列。
在一實施例中，與Fel d1結合之人類抗體或其抗原結合片段係包括分別為SEQ ID NO：164、166和168之HCDR1、HCDR2和HCDR3胺基酸序列及分別為SEQ ID NO：172、174和176之LCDR1、LCDR2和LCDR3胺基酸序列。
在一實施例中，與Fel d1結合之人類抗體或其抗原結合片段係包括分別為SEQ ID NO：244、246和248之HCDR1、HCDR2和HCDR3胺基酸序列及分別為SEQ ID NO：252、254和256之LCDR1、LCDR2和LCDR3胺基酸序列。
在一實施例中，與Fel d1結合之人類抗體或其抗原結合片段係包括分別為SEQ ID NO：308、310和312之HCDR1、HCDR2和HCDR3胺基酸序列及分別為SEQ ID NO：316、318和320之LCDR1、LCDR2和LCDR3胺基酸序列。
在一實施例中，與Fel d1結合之人類抗體或其抗原結合片段係包括分別為SEQ ID NO：324、326和328之HCDR1、HCDR2和HCDR3胺基酸序列及分別為SEQ ID NO：332、334和336之LCDR1、LCDR2和LCDR3胺基酸序列。
在一實施例中，與Fel d1結合之人類抗體或其抗原結合片段係包括分別為SEQ ID NO：372、374和376之HCDR1、HCDR2和HCDR3胺基酸序列及分別為SEQ ID NO：380、382和384之LCDR1、LCDR2和LCDR3胺基酸序列。
在一實施例中，本發明係提供與Fel d1結合之全人類單株抗體或其抗原-結合片段，其中該抗體或其片段具有一或多項下列特性：(i)包括具有由SEQ ID NO：18、66、130、162、242、306、322、370和460組成之群中選出的胺基酸序列之HCVR，或實質上具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之其類似序列；(ii)包括具有由SEQ ID NO：26、74、138、170、250、314、330、378和468組成之群中選出的胺基酸序列之LCVR，或實質上具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之其類似序列；(iii)包括具有由SEQ ID NO：24、72、136、168、248、312、328、376和466組成之群中選出的胺基酸序列之HCDR3區，或實質上具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之其類似序列；及具有由SEQ ID NO：32、80、144、176、256、320、336、384和474組成之群中選出的胺基酸序列之LCDR3區，或實質上具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之其類似序列；(iv)包括具有由SEQ ID NO：20、68、132、164、244、308、324、372和462組成之群中選出的胺基酸序列之HCDR1區，或實質上具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之其類似序列；具有由SEQ ID NO：22、70、134、166、246、310、326、374和464組成之群中選出的胺基酸序列之HCDR2區，或實質上具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之其類似序列；具有由SEQ ID NO：28、76、140、172、252、316、332、380和470組成之群中選出的胺基酸序列之LCDR1區，或實質上具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之其 類似序列；及具有由SEQ ID NO：30、78、142、174、254、318、334、382和472組成之群中選出的胺基酸序列之LCDR2區，或實質上具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之其類似序列；(v)以等於或低於10-6及較佳地等於或低於10-9之KD與Fel d1結合；(vi)在至少一過敏反應或發炎之動物模型中驗證效用；或(vii)與參照抗體相競爭與Fel d1結合。
在一實施例中，「參照抗體」可包括，例如具有由18/26、66/74、130/138、162/170、242/250、306/314、322/330、370/378和460/468組成之群中選出的重鏈和輕鏈胺基酸序列對之組合的抗體。
在一實施例中，與Fel d1結合之全人類單株抗體或其抗原結合片段係包括含有式X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8(SEQ ID NO：386)之HCDR1序列，其中X1為Gly，X2為Phe、Tyr或Gly，X3為Thr或Ser，X4為Phe或Ile，X5為Ser、Arg、Thr或Asn，X6為Asn、Thr、Asp或Ser，X7為Tyr而X8為Asn、Tyr或Ala；包括式X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8(SEQ ID NO：387)之HCDR2序列，其中X1為Ile，X2為Tyr、Ser或Asn、X3為Tyr、Ser、Gly、Pro或Asp，X4為Asp、Arg或Ser，X5為Gly、Val或Ser，X6為Ser、Gly、Arg或Tyr，X7為Tyr、Arg、Thr、Ser或Asn，而X8為Ile、Thr、Ala、Ser或不存在；包括式X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16(SEQ ID NO：388)之HCDR3序列，其中X1為Ala，X2為Lys或Arg，X3為Arg、Gly、His、Ser、Asp、Leu或Thr，X4為Thr、Pro、Arg、Gly或Glu，X5為Leu、Val、Gly、Lys、Tyr或Asn，X6為Ser、Arg、Thr、Ala、Tyr、Phe或Trp，X7為Tyr、Gly、Arg、Ala、Asn、Asp、His或Asn，X8為Tyr、Thr、Ser或His，X9為Val、Ser、Ala、Phe、Pro或不存在，X10為Met、Gly、Asp、Pro、Val或不存在，X11為Asp、Tyr、Ser、Gly、Phe或不存在，X12為Val、Asp、Phe或不存在，X13為Phe、Asp 或不存在，X14為Phe、Tyr或不存在，X15為Asp或不存在，X16為Tyr或不存在；包括式X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12(SEQ ID NO：389)之LCDR1序列，其中X1為Gln、X2為Gly、Ser或Asp，X3為Ile或Val，X4為Ser、Leu、Asn或Gly，X5為Asn、Tyr、Gly或Ser，X6為Tyr、Ser、Phe或Trp，X7為Ser或不存在，X8為Asn或不存在，X9為Asn或不存在，X10為Lys或不存在，X11為Gln或不存在，X12為Tyr或不存在；包括式X1-X2-X3(SEQ ID NO：390)之LCDR2序列，其中X1為Ala、Trp、Asp、Tyr、Lys、Gly或Ser，X2為Ala或Thr而X3為Ser；及包括式X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9(SEQ ID NO：391)之LCDR3序列，其中X1為Gln、Leu或His，X2為Lys、Gln或His，X3為Tyr、Ser或Leu，X4為Tyr、Asn、Gly、Asp或Ser，X5為Ser、Asp或Asn，X6為Leu、Ala、Tyr、Thr或Phe，X7為Pro或Arg，X8為Leu、Phe、Tyr或Thr而X9為Thr或不存在。
在一實施例中，本發明之特徵為對Fel d1專一之人類抗體或抗原-結合片段，其包括由衍生自VH、DH和JH胚原序列之核苷酸序列片段所編碼的HCVR，及由衍生自VK和JK胚原序列之核苷酸序列片段所編碼的LCVR，其組合係如表2所示。
本發明包括具有修飾糖基化模式之抗體。在某些應用中，移除不欲的糖基化位置之修飾作用可能為有用的，或例如移除海藻糖基用以增加抗體依賴的細胞毒殺(ADCC)功能(參見Shield等人(2002)JBC 277：26733)。在其他的應用上，可進行半乳糖基化之修飾作用以修改補體依賴的細胞毒殺作用(CDC)。
第二方面係提供單離的抗體或其抗原-結合片段，其係與包括重鏈可變區(HCVR)之互補決定區(CDR)及輕鏈可變區(LCVR)之CDR的抗體或抗原-結合片段競爭與Fel d1專一性結合，其中HCVR具有由SEQ ID NO：2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、242、258、274、290、306、322、338、354、370和460組成之群中選出之胺基酸序列；其中LCVR具有由SEQ ID NO：10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218、234、250、266、282、298、314、330、346、362、378和468組成之群中選出之胺基酸序列。
一實施例係提供單離的抗體或其抗原-結合片段，其係與包括重鏈可變區(HCVR)之互補決定區(CDR)及輕鏈可變區(LCVR)之CDR的抗體或抗原-結合片段競爭與Fel d1專一性結合，其中HCVR具有由SEQ ID NO：18、66、130、162、242、306、322、370和460組成之群中選出之胺基酸序列；其中LCVR具有由SEQ ID NO：26、74、138、170、250、314、330、378和468組成之群中選出之胺基酸序列。
在一相關的實施例中，本發明係提供單離的抗體或其抗原-結合片段，其係與包括在由SEQ ID NO：18/26、66/74、130/138、162/170、242/250、306/314、322/330、370/378和460/468組成之群中選出的重鏈和輕鏈序列對內含有重鏈和輕鏈CDR的抗體或抗原-結合片段競爭與Fel d1專一性結合。
第三方面係提供單離的抗體或其抗原-結合片段，其係與包括重鏈可變區(HCVR)之互補決定區(CDR)及輕鏈可變區(LCVR)之CDR的抗體或抗原-結合片段一樣，與Feld 1上相同的表位結合，其中該HCVR具有由SEQ ID NO：2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、242、258、274、290、306、322、338、354、370和60組成之群中選出之胺基酸序列；，其中該LCVR具有由SEQ ID NO：10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218、234、250、266、282、298、314、330、346、362、378和468組成之群中選出之胺基酸序列。
一實施例係提供單離的抗體或其抗原-結合片段，其係與包括重鏈可變區(HCVR)之互補決定區(CDR)及輕鏈可變區(LCVR)之CDR的抗體或抗原-結合片段一樣，與Feld 1上相同的表位結合，其中該HCVR具有由SEQ ID NO：18、66、130、162、242、306、322、370和460組成之群中選出之胺基酸序列；其中該LCVR具有由SEQ ID NO：10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218、234、250、266、282、298、314、330、346、362、378和468組成之群中選出之胺基酸序列。
在一相關的實施例中，本發明係提供單離的抗體或其抗原-結合片段，其係與包括在由SEQ ID NO：18/26、66/74、130/138、162/170、242/250、306/314、322/330、370/378和460/468組成之群中選出的輕鏈和重鏈序列對內含有重鏈和輕鏈CDR的抗體或抗原-結合片段一樣，與Feld 1上相同的表位結合。
第四方面係提供與Fel d1專一結合之雙專一性抗原結合分子，其包括二個含來自任何二或多個上述抗體之HCVR胺基酸序列和LCVR胺基酸序列的抗原結合區(雙臂)。
在一實施例中，雙專一性抗原結合分子係包括含如SEQ ID NO：370中所述之HCVR胺基酸序列及如SEQ ID NO：378中所述之LCVR胺基酸序列的第一抗原結合區，及含如SEQ ID NO：18中所述之HCVR胺基酸序列及如SEQ ID NO：378中所述之LCVR胺基酸序列的第二抗原結合區。
在一實施例中，雙專一性抗原結合分子係包括含三個分別如SEQ ID NO：372、374和376中所述的胺基酸序列所組成的重鏈互補決定區(HCDR1、HCDR2和HCDR3)，及三個分別如SEQ ID NO：380、382和384中所述的胺基酸序列所組成的輕鏈互補決定區(LCDR1、LCDR2和LCDR3)之第一抗原結合區；及其中第二抗原結合區係包括三個分別如SEQ ID NO：20、22和24中所述的胺基酸序列所組成的重鏈互補決定區(HCDR1、HCDR2和HCDR3)，以及三個分別如SEQ ID NO：380、382和384中所述的胺基酸序列所組成的輕鏈互補決定區(LCDR1、LCDR2和LCDR3)。
在一實施例中，雙專一性抗原結合分子係包括第一抗原結合區，其包含如SEQ ID NO：306中所述之HCVR胺基酸序列及如SEQ ID NO：314中所述之LCVR胺基酸序列，及第二抗原結合區，其包含如SEQ ID NO：18中所述之HCVR胺基酸序列及如SEQ ID NO：314中所述之LCVR胺基酸序列的。
在一實施例中，雙專一性抗原結合分子係包括三個分別如SEQ ID NO：308、310和312中所述的胺基酸序列所組成的重鏈互補決定區(HCDR1、HCDR2和HCDR3)，及三個分別如SEQ ID NO：316、318和320中所述的胺基酸序列所組成的輕鏈互補決定區(LCDR1、LCDR2和LCDR3)之第一抗原結合區；及其中第二抗原結合區係包括三個分別如SEQ ID NO：20、22和24中所述的胺基酸序列所組成的重鏈互補決定區(HCDR1、HCDR2和HCDR3)，以及三個分別如SEQ ID NO：316、318和320中所述的胺基酸序列所組成的輕鏈互補決定區(LCDR1、LCDR2和LCDR3)。
在一實施例中，本發明係提供對Fel d1專一之單離抗體或其抗原-結合片段，其係與任一本發明之雙專一性抗原結合分子競爭與Fel d1結合。
在一實施例中，本發明係提供對Fel d1專一之單離抗體或其抗原-結合片段，其係與任何本發明之雙專一性抗原結合分子一樣，和Feld 1上相同的表位結合。
在一實施例中，此雙專一性抗原結合分子為與Fel d1專一結 合之單離的人類單株抗體。
在一實施例中，此雙專一性抗原結合分子為與Fel d1專一結合之單離的人類單株抗體，其中該人類單株抗體為單專一性抗體或雙專一性抗體。
在一實施例中，本發明係提供包括至少一種如文中所述之雙專一性抗原結合分子及醫藥上可接受載劑或稀釋劑之醫藥組成物。
在一實施例中，本發明係提供用於治療對貓、貓皮屑、貓毛髮或其萃取物，或對Fel d1蛋白顯現敏感性或敏感反應之病患，或用於治療至少一種與貓、貓皮屑、貓毛髮或其萃取物，或對Fel d1蛋白之敏感性或敏感反應有關的症狀或併發症之方法，其包括將一有效量之一或多種本發明之雙專一性抗原-結合分子，或包括一有效量之一或多種本發明之雙專一性抗原-結合分子之醫藥組成物投予有此需要之病患，其中在投予本發明之雙專一性抗原-結合分子或包括本發明雙專一性抗原-結合分子之組成物後，該病患對貓、貓皮屑、貓毛髮或其萃取物或對Fel d1蛋白顯現敏感性降低或過敏反應減低，或對貓、貓皮屑、貓毛髮或其萃取物，或對Fel d1蛋白不會感受到任何敏感性或過敏反應，或其中該病患顯現減少至少一種與貓、貓皮屑、貓毛髮或其萃取物，或對Fel d1蛋白之敏感性或敏感反應有關的症狀或併發症，或降低至少一種與貓、貓皮屑、貓毛髮或其萃取物，或對Fel d1蛋白之敏感性或敏感反應有關的症狀或併發症之頻率或持續時間。
在一實施例中，本發明係提供投予一有效量的第二治療劑與可用於減低對貓、貓皮屑或對Fel d1蛋白敏感反應之至少一種本發明之雙專一性抗原-結合分子。此第二治療劑可由皮質類固醇、支氣管擴張劑、抗組織胺、腎上腺素、去充血劑、另外不同的Fel d1抗體和胜肽疫苗組成之群中選出。
在一實施例中，以一或多種本發明之雙專一性抗原-結合分子單獨或與第二治療劑組合治療，可在病患暴露於貓、貓皮屑或Fel d1蛋白後，使過敏性鼻炎、過敏性結膜炎、過敏性氣喘或過敏反應降低。
在第五方面，本發明係提供編碼Fel d1抗體或其片段之核酸分子。攜帶本發明核酸之重組的表現載體及已導入此等載體之宿主細胞亦涵蓋在本發明中，藉由在能產生抗體的條件下，培養此等宿主細胞，並回收所產生的抗體，作為製造抗體之方法。
在一實施例中，本發明提供一包括HCVR之抗體或其片段，其中該HCVR係由SEQ ID NO：1、17、33、49、65、81、97、113、129、145、161、177、193、209、225、241、257、273、289、305、321、337、353、369和459組成之群中選出的核酸序列或實質上具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%其同源性之相同序列所編碼。
在一實施例中，HCVR係由下列組成之群中選出的核酸序列所編碼：SEQ ID NO：17、65、129、161、241、305、321、369和459。
在一實施例中，此抗體或其片段進一步係包括由SEQ ID NO：9、25、41、57、73、89、105、121、137、153、169、185、201、217、233、249、265、281、297、313、329、345、361、377和467組成之群中選出的核酸序列或實質上具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%其同源性之相同序列所編碼的LCVR。
在一實施例中，此LCVR係由下列組成之群中選出的核酸序列所編碼：SEQ ID NO：25、73、137、169、249、313、329、377和467。
在一實施例中，本發明亦提供一抗體或抗體之抗原結合片段，其係包括由SEQ ID NO：7、23、39、55、71、87、103、119、135、151、167、183、199、215、231、247、263、279、295、311、327、343、359、375和465組成之群中選出之核苷酸序列或實質上具有至少90%、至 少95%、至少98%或至少99%序列一致性之其類似序列所編碼的HCDR3區；及由SEQ ID NO：15、31、47、63、79、95、111、127、143、159、175、191、207、223、239、255、271、287、303、319、335、351、367、383和473或組成之群中選出之核苷酸序列或實質上具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之其類似序列所編碼的LCDR3區。
在一實施例中，本發明係提供一抗體或抗體之抗原結合片段，其進一步包括由SEQ ID NO：3、19、35、51、67、83、99、115、131、147、163、179、195、211、227、243、259、275、291、307、323、339、355、371和461組成之群中選出之核苷酸序列或實質上具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之其類似序列所編碼的HCDR1區；由SEQ ID NO：5、21、37、53、69、85、101、117、133、149、165、181、197、213、229、245、261、277、293、309、325、341、357、373和463組成之群中選出之核苷酸序列或實質上具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之其類似序列所編碼的HCDR2區；由SEQ ID NO：11、27、43、59、75、91、107、123、139、155、171、187、203、219、235、251、267、283、299、315、331、347、363、379和469組成之群中選出之核苷酸序列或實質上具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之其類似序列所編碼的LCDR1區；及由SEQ ID NO：13、29、45、61、77、93、109、125、141、157、173、189、205、221、237、253、269、285、301、317、333、349、365、381和471組成之群中選出之核苷酸序列或實質上具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之其類似序列所編碼的LCDR2區。
第六方面係提供包括一治療上有效量之一或多種與Fel d1專一結合之單離的人類抗體或其抗原結合片段和一或多種醫藥上可接受賦形劑之醫藥組成物。
在一實施例中，此醫藥組成物係包括一治療上有效量之二或多種與Fel d1專一結合之單離的人類抗體或其抗原結合片段和一或多種醫藥上可接受的賦形劑。
在一實施例中，此醫藥組成物係包括：a)與Fel d1專一結合之單離的第一全人類單株抗體或其抗原-結合片段，其包括具有如SEQ ID NO：18中所述的胺基酸序列之HCVR；和如SEQ ID NO：26中所述的胺基酸序列之LCVR；及b)與Fel d1專一結合之單離的第二全人類單株抗體或其抗原-結合片段，其包括具有由SEQ ID NO：66、130、162、306、322、370和460組成之群中選出的胺基酸序列之HCVR；及SEQ ID NO：74、138、170、314、330、378和468組成之群中選出的胺基酸序列之LCVR。
在一實施例中，此醫藥組成物係包括：a)與Fel d1專一結合之單離的第一全人類單株抗體或其抗原-結合片段，其包括具有如SEQ ID NO：242中所述的胺基酸序列之HCVR；和如SEQ ID NO：250中所述的胺基酸序列之LCVR；及b)與Fel d1專一結合之單離的第二全人類單株抗體或其抗原-結合片段，其包括具有由SEQ ID NO：306、322和460組成之群中選出的胺基酸序列之HCVR；及SEQ ID NO：314、330和468組成之群中選出的胺基酸序列之LCVR。
在一實施例中，此醫藥組成物係包括：a)與Fel d1專一結合之單離的第一全人類單株抗體或其抗原-結合片段，係包括由SEQ ID NO：18/26所組成之HCVR/LCVR胺基酸序列對；及b)與Fel d1專一結合之第二全人類單株抗體或其抗原-結合片段，其包括由SEQ ID NO：66/74、130/138、162/170、306/314、322/330、370/378和460/468組成之群中選出的HCVR/LCVR胺基酸序列對。
在一實施例中，此醫藥組成物係包括：a)與Fel d1專一結合之單離的第一人類單株抗體或其抗原-結合片段，其包括由SEQ ID NO：18/26所組成之HCVR/LCVR胺基酸序列對；及b)與Fel d1專一結合之單離的第二人類單株抗體或其抗原-結合片段，其包括由SEQ ID NO：130/138所組成之HCVR/LCVR胺基酸序列對。
在一實施例中，此醫藥組成物係包括：a)與Fel d1專一結合之單離的第一人類單株抗體或其抗原-結合片段，其包括由SEQ ID NO：18/26所組成之HCVR/LCVR胺基酸序列對；及b)與Fel d1專一結合之單離的第二人類單株抗體或其抗原-結合片段，其包括由SEQ ID NO：322/330所組成之HCVR/LCVR胺基酸序列對。
在一實施例中，此醫藥組成物係包括：a)與Fel d1專一結合之單離的第一人類單株抗體或其抗原-結合片段，其包括由SEQ ID NO：18/26所組成之HCVR/LCVR胺基酸序列對；及b)與Fel d1專一結合之單離的第二人類單株抗體或其抗原-結合片段，其包括由SEQ ID NO：306/314所組成之HCVR/LCVR胺基酸序列對。
在一實施例中，此醫藥組成物係包括：a)與Fel d1專一結合之單離的第一人類單株抗體或其抗原-結合片段，其包括由SEQ ID NO：18/26所組成之HCVR/LCVR胺基酸序列對；及b)與Fel d1專一結合之單離的第二人類單株抗體或其抗原-結合片段，其包括由SEQ ID NO：370/378所組成之HCVR/LCVR胺基酸序列對。
在一實施例中，此醫藥組成物係包括：a)與Fel d1專一結合之單離的第一全人類單株抗體或其抗原-結合片段，其包括由SEQ ID NO：242/250所組成之HCVR/LCVR胺基酸序列對；及b)與Fel d1專一結合之單離的第二全人類單株抗體或其抗原-結合片段，其包括由SEQ ID NO：306/314和322/330組成之群中選出的HCVR/LCVR胺基 酸序列對。
在一實施例中，此醫藥組成物係包括：a)與Fel d1專一結合之單離的第一人類單株抗體或其抗原-結合片段，其包括由SEQ ID NO：242/250所組成之HCVR/LCVR胺基酸序列對；及b)與Fel d1專一結合之單離的第二人類單株抗體或其抗原-結合片段，其包括由SEQ ID NO：306/314所組成之HCVR/LCVR胺基酸序列對。
在一實施例中，此醫藥組成物係包括：a)與Fel d1專一結合之單離的第一人類單株抗體或其抗原-結合片段，其包括由SEQ ID NO：242/250所組成之HCVR/LCVR胺基酸序列對；及b)與Fel d1專一結合之單離的第二人類單株抗體或其抗原-結合片段，其包括由SEQ ID NO：322/33所0組成之HCVR/LCVR胺基酸序列對。
在一實施例中，此醫藥組成物係包括二或多種與Fel d1專一結合之單離的人類單株抗體或其抗原-結合片段，其包括由SEQ ID NO：18/26、66/74、130/138、162/170、242/250、306/314、322/330、370/378和460/468組成之群中選出的HCVR/LCVR胺基酸序列對。
在一實施例中，此醫藥組成物係包括四種與Fel d1專一結合之單離的人類單株抗體或其抗原-結合片段，其中該人類抗體或其抗原-結合片段係包括SEQ ID NO：18/26、66/74、130/138和162/170之HCVR/LCVR胺基酸序列對。
在一實施例中，本發明之特性為一組成物，其為一治療上有效量之一或多種本發明抗-Fel d1抗體或其抗原-結合片段及一治療上有效量之第二治療劑的組合物。
此第二治療劑可為小分子藥劑、蛋白/多肽、抗體、核酸分子，例如反義分子或siRNA。此第二治療劑可為合成的或天然衍生。
此第二治療劑可為任何與本發明抗體或其片段有利地組合 之藥劑，例如該等文中所述的抗體以外，能阻斷Fel d1與存在肥大細胞或嗜鹼性細胞之IgE結合的第二抗體。第二治療劑亦可為於治療任何過敏原之過敏反應中用作標準照護之任何藥劑。此第二治療劑可為抗組織胺、腎上腺素、去充血劑、皮質類固醇或胜肽疫苗。
在特定的實施例中，此第二治療劑可為幫助抵消或降低與本發明抗體或抗體之抗原-結合片段之可能副作用的藥劑(若此副作用可能發生時)。
亦應了解，本發明之抗體和醫藥上可接受組成物可用於組合治療中，亦即，抗體和醫藥上可接受組成物可與一或多種其他所欲的治療劑或治療程序同時、之前或之後給藥。用於組合療法之治療(治療劑或程序)的特定組合應考量所欲治療劑及/或程序和所欲達到的治療效用之相容性。亦應了解，所用的治療可對相同的病症達到所欲的效用(例如，抗體可與用於治療相同病症之另外的藥劑同時給藥)，或其可達到不同的效用(例如，防治任何有害的效應)。如文中所述，一般用於治療或預防特定疾病或症狀之另外的治療劑係適用所欲治療之疾病或症狀。
當多種治療劑係共同投予時，如相關技術中所理解，劑量可從而調整。
第七方面係提供用於治療對貓、貓皮屑、貓毛髮萃取物，或對Fel d1蛋白顯現敏感性或敏感反應之病患之方法，其包括根據本發明將一有效量之一或多種與Fel d1專一結合之單離的人類單株抗體或其抗原-結合片段，或包括一有效量之一或多種與Fel d1專一結合之單離的人類單株抗體或其片段之醫藥組成物投予有此需要之病患，其中在投予該抗體或包括該抗體之組成物後，該病患對貓、貓皮屑、貓毛髮萃取物或對Fel d1蛋白減輕敏感性或減少過敏反應，或對於貓、貓皮屑、貓毛髮萃取物或Fel d1蛋白未經歷任何敏感性或過敏反應。
在特定的實施例中，該抗體能於對Fel d1貓過敏原敏感之病患中降低、減少或防止至少一種症狀，例如打噴嚏、充血、鼻塞、咳嗽、喘息、支氣管狹窄、鼻炎或結膜炎。
在一實施例中，對Fel d1專一性之本發明抗體、或其抗原結合片段、或包括一或多種本發明抗體之組成物可用於活體中防止與Fel d1過敏有關之更嚴重的併發症，包括氣喘反應、過敏性休克或甚至因過敏所導致之死亡。
在一實施例中，此醫藥組成物係與第二治療劑組合投予病患。
在另外的實施例中，第二治療劑係由下列組成之群中選出：抗組織胺、腎上腺素、去充血劑、皮質類固醇、另外不同的Fel d1抗體、胜肽疫苗和任何其他可用於降低敏感反應之嚴重度或用於改善至少一種與過敏反應有關的症狀之緩解治療
從確認詳細說明之論述中其他的實施例將變得顯而易見。
詳細說明
在描述本方法之前，應了解，本發明不限於所述的特定方法和實驗條件，因為此等方法和條件可改變。亦應了解，文中所用的術語僅作為描述特定實施例之目的，且不希望受限，因為本發明之範圍將僅受限於所附的申請專利範圍。
除非另有說明，否則所有文中所用的技術和科學術語係具有如本發明所屬技術之一般技術者所正常理解之相同意義。如文中所用，術語「大約」當用於參照特定引述的數值時，係指該值可從該引述值做不大於1%的變化。例如，如文中所用，「約100」一詞包括99和101及所有介於之間的值(例如99.1、99.2、99.3、99.4等)。
雖然在施行或試驗本發明時可使用任何該等與文中所述的方法和物質類似或相當者，但較佳的方法和物質為目前所描述。
定義
術語「Fel d1」或「FELD1」，如文中所用，係指至少一種天然/原態形式或重組產生之Fel d1蛋白。Fel d1蛋白包括或選擇性包括Fel d1之1鏈(亦稱為A鏈)(SEQ ID NO：392)和Fel d1之2鏈(亦稱為B鏈)(SEQ ID NO：393)。天然的Fel d1蛋白為約18kDa異源二聚糖蛋白，係由二個獨立基因所衍生的二條鏈所組成(參見Duffort,O.A.等人，(1991),Mol.Immunol.28：301-309；Kristensen,A.K.等人，(1997),Biol.Chem.378：899-908；Kaiser L.等人(2003),J.Biol.Chem.278(39)：37730-37735)。重組產生的Fel d1蛋白亦如SEQ ID NO：396所示，其中此序列含有來自基因銀行登錄號NP_001041619.1(無訊號序列)之Fel d1 B鏈的18至109胺基酸殘基，與來自基因銀行登錄號NP_001041618.1(無訊號序列及帶有一D27G突變，其相當SEQ ID NO：396之位置101的甘胺酸)之Fel d1 A鏈19-88的胺基酸殘基線上融合。其他本發明之重組產生的Fel d1結構係以SEQ ID NO：385、394、395和397作為示例。
Fel d1之「1鏈」或「A鏈」為一多肽，係包括或選擇性包括SEQ ID NO：392之胺基酸序列或其同源序列。術語SEQ ID NO：392之同源序列，如文中所用，係指具有與SEQ ID NO：392之一致性大於70%，較佳地大於80%，更佳地大於90%，及甚佳地大於95%之多肽。Fel d1之1鏈的胺基酸序列係如基因銀行登錄號P30438所提供，或如登錄號NP_001041618.1，其亦包括於成熟蛋白中移除的訊號胜肽。
Fel d1之「2鏈」或「B鏈」為一多肽，係包括或選擇性包括SEQ ID NO：393之胺基酸序列或其同源序列。術語SEQ ID NO：393之同源序列，如文中所用，係指具有與SEQ ID NO：393之一致性大於70%，較佳地 大於80%，更佳地大於90%，及甚佳地大於95%之多肽。Fel d1之2鏈的胺基酸序列係如基因銀行登錄號P30440所提供，或如登錄號NP_001041619.1，其亦包括於成熟蛋白中移除的訊號胜肽。
術語「Fel d1片段」如文中所用，係指一多肽，其包括或選擇性包括至少一個Fel d1之抗原位點。在一實施例中，術語「Fel d1片段」如文中所用，係指一多肽，其包括或選擇性包括至少二個Fel d1之抗原位點。在一實施例中，抗原位點係以共價連接。在一實施例中，抗原位點係以至少一胜肽鍵連接。在一實施例中，二個抗原位點係以至少一胜肽鍵和一抗原位點間之間隔相連接。在一實施例中，此至少二個抗原位點係衍生自Fel d1之1鏈和Fel d1之2鏈。在一實施例中，此至少二個抗原位點係包括基因銀行登錄號P30438之23-92胺基酸序列和基因銀行登錄號P30440之18-109胺基酸序列。在一實施例中，此至少二個抗原位點係衍生自Fel d1之1鏈和Fel d1之2鏈。在一實施例中，此至少二個抗原位點係包括基因銀行登錄號NP_001041618.1之19-88胺基酸序列和基因銀行登錄號NP_001041619.1之18-109胺基酸序列。在一實施例中，此至少二個抗原位點係包括任何SEQ ID NO：385、394、395、396或397內之胺基酸序列。在一實施例中，任何Fel d1片段能在活體內引發與天然生成的Fel d1或重組產生的Fel d1專一結合之抗體的產生。
術語「抗體」如文中所用，係指任何抗原結合分子或包括至少一與特定抗原(例如Fel d1)專一結合或相互作用之互補決定區(CDR)的分子複合物。術語「抗體」，如文中所用，希望係指包括由雙硫鍵相連接的四條多肽鏈、二條重(H)鏈和二條輕(L)鏈之免疫球蛋白分子(亦即「全抗體分子」)以及其多聚體(例如IgM)或其抗原結合片段。各重鏈係包括一重鏈可變區(HCVR或VH)及一重鏈恆定區(包括CH1、CH2和CH3區)。各輕鏈係包括一輕鏈可變區(LCVR或VL)及一輕鏈恆定區(CL)。VH和VL區可進一步細分為 高變區，稱為互補決定區(CDR)，其間散佈著較保守性區域，稱為架構區(FR)。各VH和VL係由三個CDR和四個FR所組成，以下列順序由胺基端排列至羧基端：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。在本發明特定的實施例中，抗體(或其抗原結合片段)之FR可與人類胚原細胞序列相同，或經自然或人工修飾。胺基酸共有序列可以二或多個CDR之並排(side-by-side)分析為基準來定義。
一或多個CDR殘基之取代或一或多個CDR之刪除亦為可能的。抗體已描述於科學文獻中，其中一或多個CDR可經分配用於結合。Padlan等人(1995 FASEB J.9：133-139)以公開的結晶構造為基準，分析了抗體和其抗原間之接觸區並結論出僅約五分之一至三分之一的CDR殘基實際與抗原接觸。Padlan亦發現許多抗體其中一或二個CDR並無胺基酸與抗原接觸(亦參見Vajdos等人，2002 J Mol Biol 320：415-428)。
基於先前的研究，可由位於Chothia CDR外部之Kabat CDR區，藉由分子模型及/或經驗，辨識出沒有與抗原接觸的CDR殘基(例如CDRH2之H60-H65殘基通常不需要)。若CDR或其殘基被刪除了，其通常係以佔據另外的人類抗體序列或此序列同等物之對應位置的胺基酸來取代。CDR內的取代位置及取代的胺基酸亦可根據經驗來選擇。經驗取代作用可為保守性或非保守性取代作用。
相較於對應的胚原序列，與Fel d1專一結合之全人類單株抗體，如文中所揭示，可在重鏈和輕鏈可變區之架構及/或CDR區中包括一或多個胺基酸取代、插入及/或刪除。此等突變可藉由將文中所揭示之胺基酸序列與得自例如公開的抗體序列資料庫之胚原序列相比較，而容易地確定。本發明包括由任何文中所揭示的胺基酸序列所衍生之抗體及其抗原結合片段，其中在一或多個架構及/或CDR區中的一或多個胺基酸係突變成衍生抗體之胚原序列的對應殘基，或另一種人類胚原序列之對應殘基，或對 應胚原殘基之保守胺基酸取代(此等序列之改變在文中共同稱為胚原突變)。本項技術之一般技術者，由文中所揭示之重鏈和輕鏈可變區序列開始，可容易地製造許多包括一或多個個別的胚原突變或其組合之抗體和抗原結合片段。在特定的實施例中，VH及/或VL區內的所有架構及/或CDR殘基係突變回到衍生此抗體之原始胚原序列的殘基。在其他實施例中，僅特定的殘基突變回到原始的胚原序列，例如僅在FR1的前8個胺基酸中或FR4的後8個胺基酸中發現突變的殘基，或僅在CDR1、CDR2或CDR3內發現突變的殘基。在其他的實施例中，一或多個架構及/或CDR殘基係突變成不同胚原序列之對應殘基(亦即與最初衍生抗體之胚原序列不同的胚原序列)。再者，本發明之抗體在架構及/或CDR區內可含有任何二或多個胚原突變之組合，例如，其中特定的個別殘基係突變成特定胚原序列之對應殘基，而與原始胚原序列不同的其他殘基係維持原樣或突變成不同胚原序列之對應殘基。一旦獲得後，含有一或多個胚原突變之抗體和抗原結合片段可容易地試驗其一或多種所欲的性質，例如結合專一性改善、結合親和力增加、拮抗或促效性生物性質改善或增進(視情況而定)、致免疫力降低等。以此通用方法所得的抗體和抗原結合片段係涵蓋在本發明中。
本發明亦包括全人類單株抗體，其係包括具有一或多個保守取代之任何文中所揭示之HCVR、LCVR及/或CDR胺基酸序列的變體。例如，本發明包括全人類單株抗體，其相對於任何文中所揭示之HCVR、LCVR及/或CDR胺基酸序列，係具有含例如10個或更少、8個或更少、6個或更少、4個或更少之保守性胺基酸取代的HCVR、LCVR及/或CDR胺基酸序列。
術語「人類抗體」，如文中所用，希望係包括具有衍生自人類胚原免疫球蛋白序列之可變和恆定區的抗體。本發明之人類mAb可包括非由人類胚原免疫球蛋白序列所編碼之胺基酸殘基(例如藉由隨機或活體外 位置專一性誘變所導入之突變或活體內體細胞突變)，例如在CDR中及特別是CDR3。然而，術語「人類抗體」，如文中所用，不希望包括其中衍生自另外哺乳動物物種(例如小鼠)之胚原的CDR序列已稼接在人類FR序列上之mAb。
如文中所用「抗原結合分子」一詞係指與特定抗原專一結合之包括或包含至少一個互補決定區(CDR)單獨或與一或多個另外的CDR及/或架構區(FR)組合之蛋白、多肽或分子複合物。在特定的實施例中，抗原結合分子為一抗體或抗體之片段，如該等術語係於文中其他地方所定義。
如文中所用，「雙專一性抗原結合分子」一詞係指包括至少一第一抗原結合區和第二抗原結合區(亦即雙臂)之蛋白、多肽或分子複合物。與特定抗原專一結合之雙專一性抗原結合分子內的各抗原結合區係包括至少一個CDR單獨或與一或多個另外的CDR及/或FR組合。在本發明內文中，第一抗原結合區係與Fel d1上的第一抗原專一結合，而第二抗原結合區係與Fel d1上的第二，不同的抗原專一結合。
術語「專一性結合」或其類似術語，係指抗體或其抗原結合片段與抗原形成在生理條件下相當穩定之複合物。專一性結合其特徵可為平衡解離常數至少約1x10-6M或更低(例如更小的KD代表更緊密的結合)。測定二個分子是否為專一結合之方法已為本項技術所熟知並包括，例如平衡透析、表面電漿子共振等等。如文中所述，與Fel d1專一結合之抗體已藉由表面電漿子共振，例如BIACORETM辨識出。再者，與Fel d1和一或多種另外的抗原結合之多專一性抗體，或與Fel d1之二個不同區結合之雙專一性抗體(例如Fel d1之1鏈及/或2鏈)仍視為如文中所用之「專一性結合」的抗體。
術語「高親和性」抗體係指該等mAb對Fel d1，以KD表示，係具有至少10-8M之結合親和力；較佳地10-9M；甚佳地10-11M，甚佳地10-12M如以表面電漿子共振，例如BIACORETM或溶液親和性ELISA所測定。
術語「低解離速率」、「Koff」或「kd」係指抗體以1 x 10-3s-1或更低，較佳地1 x 10-4s-1或更低的速率常數，從Fel d1解離，如以表面電漿子共振，例如BIACORETM所測定。
術語抗體之「抗原結合部分」、抗體之「抗原結合片段」等等，如文中所用，包括任何與抗原專一性結合形成複合物之天然生成、酵素製得、合成或基因工程的多肽或糖蛋白。術語「抗體」，如文中所用，係指一或多種保留與Fel d1結合能力之抗體片段。
本發明之特定的實施例、抗體或抗體片段可與治療成份(免疫接合物)，例如皮質類固醇、第二抗-Fel d1抗體或腎上腺素、疫苗或任何其他可用於治療Fel d1之過敏反應的治療成份接合。
「單離的抗體」如文中所用，希望係指實質上無其他具有不同抗原專一性抗體(Ab)之抗體(例如與Fel d1專一結合之單離抗體或其片段實質上並無與Fel d1以外的抗原專一結合之Ab)。
「阻斷抗體」或「中和抗體」如文中所用(或「中和Fel d1活性之抗體」)，希望係指其與Fel d1結合產生抑制至少一種Fel d1生物活性之抗體，或其抗原結合部分。例如，本發明之抗體可幫助防止Fel d1之原發性過敏反應。另外，本發明之抗體可顯現防止Fel d1之續發性過敏反應之能力，或至少一種Fel d1過敏反應之症狀，包括如打噴嚏、咳嗽、氣喘症狀、或由Fel d1造成的過敏反應。抑制Fel d1生物活性可藉由測量一或多種Fel d1生物活性之指示劑，於活體外或活體內以一或多種數個已知標準(例如，如文中所述，被動皮膚過敏分析)或其他本項技術中已知的活體內分析(例如，其他動物模型，觀察在投予一或多種文中所述的抗體後，免於Fel d1挑戰之保護作用)加以評估。
術語「表面電漿子共振」如文中所用，係指得以藉由偵測生物感測器基質內蛋白濃度改變，進行即時生物分子交互作用分析之光學現 象，例如使用BIACORETM系統(Pharmacia Biosensor AB,Uppsala,Sweden and Piscataway,N.J.)。
術語「KD」，如文中所用，希望係指特定的抗體-抗原交互作用之平衡解離常數。
術語「表位」係指與抗體分子可變區中稱為補位(paratope)的特定抗原結合位置相互作用之抗原決定位。單一抗原可具有一個以上的表位。因此，不同的抗體可與抗原的不同區域結合並可具有不同的生物效應。術語「表位」亦指B細胞或T細胞回應的抗原位置。其亦指與抗體結合之抗原區域。表位可為線性或構型。線性表位係由多肽鏈相鄰的胺基酸殘基所產生。構型表位係由直鏈多肽鏈不同線段之空間上並列的胺基酸所產生。在特定的實施例中，表位可包括分子之化學活性表面基群之決定基，例如胺基酸、糖側鏈、磷酸基或磺醯基所組成，及在特定的實施例中，可可具有特定的三維結構特性及/或特定的帶電特性。表位亦可以結構或功能來定義。功能表位一般微結構表位之子群並具有直接促成交互作用親和力之殘基。由連續胺基酸所形成的表位典型地在暴露於變性溶劑時仍保留，而由三級摺疊所形成的表位典型地在以變性溶劑處理時則流失。一表位典型地在一獨特的空間構形中係包括至少3個，及通常至少5個或8-10個胺基酸。
術語「實質上一致」或「實質上相同」當指核酸或其片段時，係表示當以適當的核苷酸插入或刪除與另一核酸(或其互補股)最適化對齊時，以任何熟知的序列一致性演算法，例如下文所論述的FASTA、BLAST或GAP來測量，有至少約90%，及更佳地至少約95%、96%、97%、98%或99%之核苷酸鹼基具核苷酸序列一致性。與參照核酸分子具有實質上一致性的核酸分子，在特定情況下，可編碼與參照核酸分子所編碼的多肽具有相同或實質上類似胺基酸序列之多肽。
如用於多肽，術語「實質上類似」係指二胜肽序列，當以GAP或BESTFIT程式使用缺位重量最適化對齊時，享有至少90%序列一致性，甚佳地至少95%、98%或99%序列一致性。較佳地，不同的殘基位置係相差在保守性胺基酸取代。「保守性胺基酸取代」為其中一胺基酸殘基係經另一帶有類似化學性質(例如電荷或疏水性)側鏈(R基)之胺基酸殘基所取代。一般而言，保守性胺基酸取代實質上不會改變蛋白質的功能特性。在其中彼此有二或多個保守性取代之不同胺基酸序列的案例中，可調高序列一致性之百分比或類似程度以修正此保守性取代作用之性質。調整之方法已為熟習本項技術者所熟知。(參見，例如Pearson(1994)Methods Mol.Biol.24：307-331)。具有類似化學性質之側鏈的胺基酸基團實例包括1)脂系側鏈：甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、白胺酸及異白胺酸；2)脂系-羥基側鏈：絲胺酸及蘇胺酸；3)含醯胺側鏈：天門冬醯胺酸和麩醯胺酸；4)芳香側鏈：苯丙胺酸、酪胺酸及色胺酸；5)鹼性側鏈：離胺酸、精胺酸及組胺酸；6)酸性側鏈：天門冬胺酸和麩胺酸，及7)含硫側鏈有半胱胺酸和甲硫胺酸。較佳的保守性胺基酸取代基群有：纈胺酸-白胺酸-異白胺酸、苯丙胺酸-酪胺酸、離胺酸-精胺酸、丙胺酸-纈胺酸、麩胺酸-天門冬胺酸及天門冬醯胺酸-麩醯胺酸胺酸-胺酸。另外，保守性置換為任何在Gonnet等人((1992)Science 256：1443-1445)所揭示的PAM250對數似然矩陣中具有正值之變換。「中度保守性」置換為任何在PAM250對數似然矩陣中具有非負值之變化。
多肽之序列類似性，典型地係使用序列分析軟體來測量。蛋白分析軟體使用分配至各種取代、刪除和其他修飾作用(包括保守性胺基酸取代)之類似度量值配出類似的序列。例如，GCG軟體含有例如GAP和BESTFIT程式，其可以內定參數用於測定密切相關的多肽間(例如來自不同生物物種之同源多肽，或介於野生型和其突變蛋白)之序列同源性或序列一 致性。參見，例如GCG Version 6.1。多肽序列亦可使用FASTA，利用內定或建議參數，GCG Version 6.1內的程式，作比較。FASTA(例如FASTA2和FASTA3)提供查詢序列和搜尋序列間最佳重疊區之比對和序列一致性百分比(Pearson(2000)supra)。當本發明序列與含有較大量來自不同物種的序列資料庫作比較時，另一較佳的演算法為使用內定參數之電腦程式BLAST，特別是BLASTP或TBLASTN。(參見，例如Altschul等人(1990)J.Mol.Biol.215：403-410及(1997)Nucleic Acids Res.25：3389-402)，其各併於本文中做為參考。
在特定的實施例中，用於本發明方法中之抗體或抗體片段可為單專一性、雙專一性或多專一性。多專一性抗體可對一目標多肽的不同的表位具專一性或可含有對一個以上的多肽之表位具專一性之抗原結合區。可用於本發明內文中之示例的雙專一性抗體模式包括使用第一免疫球蛋白(Ig)CH3區及第二Ig CH3區，其中第一和第二Ig CH3區至少有一胺基酸互不相同，且相較於無此胺基差異之雙專一性抗體，其中至少一胺基酸之差異降低了雙專一性抗體與蛋白A之結合。在一實施例中，第一Ig CH3區結合蛋白A而第二Ig CH3區含有降低或消除蛋白A結合之突變，例如H95R修飾(IMGT外顯子編號；EU編號為H435R)。第二CH3可進一步包括Y96F修飾(IMGT；EU為Y436F)。在第二CH3中可發現的另外修飾作用，就IgG1 mAb而言係包括：D16E、L18M、N44S、K52N、V57M和V82I(IMGT；EU為D356E、L358M、N384S、K392N、V397M和V422I)；就IgG2 mAb而言係包括N44S、K52N和V82I(IMGT；EU為N384S、K392N和V422I)；及就IgG4 mAb而言係包括Q15R、N44S、K52N、V57M、R69K、E79Q和V82I(IMGT；EU為Q355R、N384S、K392N、V397M、R409K、E419Q和V422I)。上述之雙專一性抗體模式之變化係涵蓋在本發明之範圍內。
「治療上有效量」一詞係指投予後產生所欲效用之量。精確的量將依照治療目的而定，且將可由熟習本項技術者使用已知的技術來確定(參見，例如Lloyd(1999)The Art,Science and Technology of Pharmaceutical Compounding)。
本發明抗體可用於使貓-敏感性個體去敏化。術語「去敏化」在本文係定義為降低暴露於貓、貓皮屑或其產物，例如Fel d1之貓-敏感性個體的過敏反應(低於貓-敏感性個體可感受之程度)。
一般說明
家貓為許多室內過敏原來源之一，且對貓過敏原顯現敏感性之個體中症狀的嚴重度範圍係從相當輕度的鼻炎和結膜炎至可能威脅生命之氣喘症狀(Lau,S.等人(2000),Lancet 356：1392-1397)。當對貓顯現此敏感性之病患似乎對貓皮屑和毛皮中所發現的不同分子有反應時，主要的過敏原似乎為Fel d1(家貓過敏原1)。已顯示有大於80%對貓過敏的病患具有此抗原之IgE抗體(van Ree,R.等人(1999),J.Allergy Clin.Immunol 104：1223-1230)。
Fel d1蛋白為大約18kDa異源酸性糖蛋白，其含有約10-20%之N-連接的碳水化合物。各異源二聚體包括二條由二個個別基因所編碼的多肽鏈(Duffort,OA，等人，(1991),Mol.Immunol.28：301-309；Morgenstern,JP，等人，(1991),PNAS 88：9690-9694；Griffith,I.J.，等人(1992),Gene 113：263-268)。1鏈包括約70個胺基酸殘基而2鏈包括約90-92個胺基酸殘基。已提出天然的Fel d1中有三個鏈內雙硫鍵連接此二條鏈的(Kristensen,A.K.等人(1997),Biol.Chem.378：899-908)並就重組的Fel d1於晶體結構中確認(Kaiser,L.等人(2003),J.Biol.Chem.278：37730-37735；Kaiser,L.等人，(2007),J.Mol.Biol.370：714-727)。雖然各鏈有時係個別稱為 「Fel d1」，但全蛋白過敏原需有二條鏈。
Fel d1係由皮脂腺和鱗狀腺上皮細胞所產生並藉由舔和梳整轉移到毛皮(Bartholome,K.等人(1985),J.Allergy Clin.Immunol.76：503-506；Charpin,C.等人(1991),J.Allergy Clin.Immunol.88：77-82；Dabrowski,A.J.(1990)，等人J.Allergy Clin.Immunol.86：462-465)。其亦存在於唾腺、肛周腺和淚腺中(Andersen,M.C.，等人(1985),J.Allergy Clin.Immunol.76：563-569；van Milligen,F.J.等人，(1992),Int.Arch.Allergy Appl.Immunol.92：375-378)且主要的儲藏處似乎為皮膚和毛髮(Mata,P.等人(1992),Ann.Allergy 69(4)：321-322)。
Fel d1蛋白為對動物功能未知之蛋白，但在敏感的人類造成了IgG或IgE反應(過敏或氣喘反應)。雖然已知其他貓過敏原，包括Fel d2(白蛋白)和Fel d3(胱蛋白)，但60%至90%所產生的抗-貓IgE係針對Fel d1(Leitermann,K.等人，(1984),J Allergy Clin.Immunol.74：147-153；Lowenstein,H.等人，(1985),Allergy 40：430-441；van Ree,R.等人，(1999),J.Allergy Clin.Immunol.104：1223-1230；Ichikawa,K.等人，(2011),Clin.Exp.Allergy,31：1279-1286)。
免疫球蛋白E(IgE)為造成其本身出現過敏性鼻炎、過敏性結膜炎、花粉熱、過敏性氣喘、蜂毒過敏及食物過敏之第1型過敏的原因。IgE在血液中循環並在嗜鹼性細胞和肥大細胞表面上與高親和性的IgE受體FcεR1α結合。在大部分的過敏反應中，過敏原係經由吸入、攝入或經由皮膚進入身體。然後過敏原與已和嗜鹼性細胞和肥大細胞表面上的高親和性受體結合之預形的IgE結合，產生數個IgE分子交鏈並引發組織胺和其他發炎介質之釋放，造成各種過敏症狀。
貓過敏之治療包括去敏化治療，其係包括以漸增劑量的粗貓皮屑萃取物或衍生自Fel d1的短胜肽重複注射。使用貓皮屑之粗萃取物， Lilja等人，顯示在此等治療3年後，對貓過敏的病患仍會出現全身性過敏症狀(Lilja,Q.等人(1989),J.Allergy Clin.Immunol.83：37-44和Hedlin，等人(1991),J.Allergy Clin.Immunol.87：955-964)。使用衍生自Fel d1的短胜肽去敏化，在胜肽組和安慰劑對照組間產生非顯著差異(Oldfield,W.L.等人，(2002),Lancet,360：47-53)。僅在將大量的短胜肽(750ug)投予病患時才觀察到效用(Norman,P.S.等人(1996),Am.J.Respir.Crit.Care Med.154：1623-1628)。再者，已有報告提出在給予貓皮屑粗萃取物之病患以及給予短Fel d1胜肽治療之病患中有氣喘反應。因此，在貓過敏治療領域中需要替代的策略供治療對貓過敏原，特別是Fel d1敏感之病患。
抗體已被提出作為通用之過敏治療策略，因為其能阻斷過敏原分子進入黏膜組織並可在其有機會與已和肥大細胞或嗜鹼性細胞表面上的高親和性受體結合之IgE結合之前，與過敏原結合，因而阻止組織胺和其他發炎介質從這些細胞釋放出。美國專利號5,670,626描述了使用單株抗體，藉由阻斷過敏原與黏膜組織結合來治療IgE-媒介的過敏疾病，例如過敏性鼻炎、過敏性氣喘和過敏性結膜炎。美國專利號6,849,259描述了在活體之過敏小鼠模型中使用抗原-專一性抗體抑制過敏性發炎。以牛奶為基底和蛋為基底的抗體系統已有描述。例如US20030003133A1描述了使用牛奶做為過敏原之載體，引發對貓皮屑和其他過敏原之口服耐受性。經由使用抑制過敏原與肥大細胞結合之能力的分子，用於降低動物對環境過敏原之過敏反應的組成物和方法，係描述於US2010/0143266中。其他Fel d1之抗體de Groot等人已有描述(de Groot et.al.,(1988),J.Allergy Clin.Immunol.82：778-786)。
文中所述的全人類抗體顯現與Fel d1專一結合並可用於治療患有貓過敏之病患，特別是對Fel d1過敏原顯現敏感性之病患。使用此等抗體可為治療患有對貓皮屑敏感病患之有效方法，或其可用於防止因後 續暴露對Fel d1之反應加劇或與過敏有關之伴隨症狀，或可用於減少與主要暴露於帶有Fel d1過敏原的貓或與因後續暴露而再發生的症狀有關之過敏反應的嚴重性及/或持續時間。其可單獨使用或作為其他本項技術中用於治療此等過敏之已知治療成份或方式，例如(但不限於)皮質類固醇或腎上腺素治療的輔助治療。其可與Fel d1專一性之第二或第三不同抗體聯合使用。其可與過敏原專一之免疫治療(SIT)一起使用。
在特定的實施例中，本發明抗體係由小鼠以初級免疫原，例如天然Fel d1致免疫所得來，該免疫原可從市面上購得(參見，例如Indoor Biotech,#NA-FD1-2)或可以重組產生。在特定的實施例中，免疫原可為Fel d1之1鏈或Fel d1之2鏈，或可為先後或同時投予之1鏈和2鏈二者的組合物。1鏈之全長胺基酸序列(亦稱為FELD1 A)係如SEQ ID NO：392所示。1鏈之全長的胺基酸序列亦可在基因銀行登錄號P30438和NP_001041618.1中找到。2鏈之全長胺基酸序列(亦稱為FELD1 B)係如SEQ ID NO：393所示。2鏈之全長的胺基酸序列亦可在基因銀行登錄號P30440和NP_001041619.1中找到。
在特定的實施例中，重組產生的Fel d1免疫原可如Kaiser等人所述，藉由將二條Fel d1鏈直接融合來製造，產生具有類似天然Fel d1之重摺疊模式的溶合產物(Kaiser,L.等人，(2003),J.Biol.Chem.278(39)：37730-37735)。在特定的實施例中，免疫原可為如SEQ ID NO：385、394、395、396或397之結構中所示的融合蛋白，接著以二級免疫原或以天然或重組產生的Fel d1之免疫活性片段致免疫。
免疫原可為天然或重組產生的Fel d1之生物活性及/或免疫性片段或編碼其活性片段之DNA。此片段可衍生自1鏈或2鏈的N-端或C-端，或衍生自1鏈和2鏈二者的N端或C端。片段可從用作免疫原供製備Fel d1抗體之1鏈或2鏈的任何位置來製得。
在特定的實施例中，免疫原可為包括任何下列一或多項之融合蛋白：i)Fel d1 2鏈之18-109胺基酸殘基(參見基因銀行登錄號P30440以及SEQ ID NO：393)經由C端直接與Fel d1 1鏈之23-92胺基酸殘基(參見基因銀行登錄號P30438以及SEQ ID NO：392)的N端融合；ii)Fel d1 1鏈之23-92胺基酸殘基(參見基因銀行登錄號P30438以及SEQ ID NO：392)經由C端直接與Fel d1 2鏈之18-109胺基酸殘基(參見基因銀行登錄號P30440以及SEQ ID NO：393)的N端融合；iii)Fel d1 2鏈之18-109胺基酸殘基(參見基因銀行登錄號NP_001041619.1)經由C端直接與Fel d1 1鏈之19-88胺基酸殘基(參見基因銀行登錄號NP_001041618.1)的N端融合，例如SEQ ID NO：394或396中所示之結構；iv)Fel d1 1鏈之19-88胺基酸殘基(參見基因銀行登錄號NP_001041618.1)經由C端直接與Fel d1 2鏈之18-109胺基酸殘基(參見基因銀行登錄號NP_001041619.1)的N端融合。參見SEQ ID NO：395。在特定的實施例中，融合蛋白可在結構的C端具有一標籤，例如myc-myc-六聚組胺酸標籤(就此等結構請參見SEQ ID NO：385、396或397)。在相關的實施例中，融合蛋白可具有在結構之C端偶合的小鼠抗體Fc區(就此等結構請參見SEQ ID NOs：394或395)。在特定的實施例中，1鏈和2鏈係經由熟習本項技術者已知的連接子偶合，例如(G4S)3(就此結構請參見SEQ ID NOs：395和397)。
在特定的實施例中，與Fel d1專一結合之抗體係使用上述區域之片段，或由文中所述區域之N或C端或二端延伸至所指的區域外約5至20個胺基酸殘基之胜肽所製備。在特定的實施例中，上述之區域或其片段之任何組合可用於製備Fel d1專一性抗體。在特定的實施例中，任何一或多個Fel d1之上述區域或其片段可用於製備單專一性、雙專一性或多專一性抗體。
抗體之抗原結合片段
除非另有指出，否則術語「抗體」如文中所用，應了解係包括含有二條免疫球蛋白重鏈和二條免疫球蛋白輕鏈之抗體分子(亦即「全抗體分子」)以及其抗原結合片段。術語抗體之「抗原結合部分」、抗體之「抗原結合片段」等等，如文中所用，包括任何與抗原專一性結合形成複合物之天然生成、酵素製得、合成或基因工程的多肽或糖蛋白。抗體之「抗原結合部分」或「抗體片段」，如文中所用，係指一或多種保留與Fel d1之1鏈及/或2鏈專一結合能力之抗體片段。抗體片段可包括Fab片段、F(ab')2片段、Fv片段、dAb片段、含CDR之片段或單離的CDR。抗體之抗原結合片段可使用任何標準的技術，例如蛋白質水解消化作用或涉及操控和表現編碼抗體可變區和(視需要)恆定區的DNA之重組基因工程技術，衍生自全抗體分子。此DNA為已知的及/或可取得的，例如購自市面、DNA庫(包括，例如噬菌體-抗體庫)或可經合成的。此DNA可經定序和以化學或藉由使用分子生物技術操控，例如將一或多個可變及/或恆定區排列成適合的構形，或導入密碼子，製造半胱胺酸殘基，修飾、添加或刪除胺基酸等。
抗原結合片段之非限定實例包括：(i)Fab片段；(ii)F(ab')2片段；(iii)Fd片段；(iv)Fv片段；(v)單鏈Fv(scFv)分子；(vi)dAb片段；及(vii)由模擬抗體高變區之胺基酸殘基所組成的最小識別單位(例如單離的互補決定區(CDR)，如CDR3胜肽)，或限制性FR3-CDR3-FR4胜肽。其他工程化分子，例如區域專一性抗體、單區抗體、區域刪除抗體、嵌合抗體、CDR-嫁接抗體、雙抗體、三抗體、四抗體、微抗體、奈米抗體(例如單價奈米抗體、雙價奈米抗體等)、小模組免疫醫藥(SMIP)及鯊可變IgNAR區，亦涵蓋在文中所用的「抗原結合片段」之詞語內。
抗體之抗原結合片段典型地係包括至少一可變區。可變區可為任何大小或胺基酸組成之區域且一般應包括至少一個與架構序列相鄰或 在其框架內之CDR。在具有VL區與VH區結合之抗原結合片段中，VH和VL區可以任何適合的排列位於彼此相對處。例如可變區可為二聚化並含有VH-VH、VH-VL或VL-VL二聚體。另外，抗體之抗原結合片段可含有單體VH或VL區。
在特定的實施例中，抗體之抗原結合片段可含有至少一個可變區與至少一個恆定區共價連接。在本發明之抗體的抗原結合片段內可發現的可變區和恆定區之非限定、示例性組態包括：(i)VH-CH1；(ii)VH-CH2；(iii)VH-CH3；(iv)VH-CH1-CH2；(v)VH-CH1-CH2-CH3；(vi)VH-CH2-CH3；(vii)VH-CL；(viii)VL-CH1；(ix)VL-CH2；(x)VL-CH3；(xi)VL-CH1-CH2；(xii)VL-CH1-CH2-CH3；(xiii)VL-CH2-CH3；及(xiv)VL-CL。在任何可變區和恆定區之組態中，包括上列任何的示例性組態，可變區和恆定區可直接彼此相連接或可藉由完整或部分的絞鏈區或連接子區相連。絞鏈區可由至少2個(例如5、10、15、20、40、60或更多個)胺基酸所組成，其在單一多肽分子中相鄰的可變及/或恆定區間產生柔性和半柔性連結。再者，在本發明之抗體的抗原結合片段可包括以非共價彼此相互連結及/或與一或多個單體VH或VL區相連結(例如以雙硫鍵)之任何上列的可變和恆定區組態之同源二聚體或異源二聚體(或其他多聚體)。
因帶有全抗體分子，抗原結合片段可為單專一性或多專一性(例如雙專一性)。抗體之多專一性抗原結合片段典型地應包括至少二個不同的可變區，其中各可變區能專一與個別的抗原結合或與相同抗原上不同的表位結合。任何多專一性抗體模式，包括文中所揭示之示例的雙專一性抗體模式，可使用本項技術中可取得的習用技術來改造，使其適用於本發明抗體之抗原結合片段狀況。
人類抗體之製備
於轉殖的小鼠中產生人類抗體之方法已為已為本項技術所知。任何此等已知的方法皆可用本發明之內文中，用以製造與Fel d1專一結合之人類抗體。
使用VELOCIMMUNETM技術(參見例如，US 6,596,541,Regeneron Pharmaceuticals,VELOCIMMUNETM)或任何其他已知的產生單株抗體之方法，起初先分離對Fel d1具高親和力之具有人類可變區和小鼠恆定區的嵌合抗體。VELOCIMMUNE®技術包括產生基因轉殖小鼠，該小鼠具有包含操作上連接內生性小鼠恆定區基因座之人類重鏈和輕鏈可變區的基因體，使小鼠在回應抗原性刺激時得以產生一包括人類可變區和小鼠恆定區之抗體。將編碼抗體重鏈和輕鏈之可變區的DNA分離並以操作上連接編碼人類重鏈和輕鏈恆定區之DNA。然後將DNA表現在能表現全人類抗體之細胞中。
一般而言，係將VELOCIMMUNE®小鼠施以相關抗體，並從小鼠中回收表現抗體之淋巴細胞(例如B-細胞)。淋巴細胞可與骨髓瘤細胞株融合，製備無限增殖化的雜交瘤細胞株，並篩選及選擇此雜交瘤細胞株，鑑別出產生對相關抗原專一性之抗體的雜交瘤細胞株。可將編碼重鏈和輕鏈可變區之DNA分離出，並與所欲的重鏈和輕鏈之同型恆定區相連接。此抗體蛋白可在細胞中產生，例如CHO細胞。另外，編碼抗原-專一性嵌合抗體或重鏈和輕鏈之可變區的DNA可直接從抗原專一性的淋巴細胞分離出。
起初，將具有人類可變區和小鼠恆定區之高親和性嵌合抗體分離出。如下文實驗部分，測定抗體特性及就所欲的特性選擇，包括親和性、選擇性、表位等。將小鼠的恆定區以所欲的人類恆定區取代，產生本發明之全人類抗體，例如野生型或修飾型IgG1或IgG4(例如SEQ ID NO：751、52、753)。當所選的恆定區可根據特定用途而變時，高親和性抗原- 結合及目標專一性特性仍保留在可變區中。
一般而言，本發明之抗體具有非常高的親和性，當藉由固定在固相上或溶液相中與抗原結合來測量時，典型地具有從約10-12至約10-9M之KD。將小鼠恆定區以所欲的人類恆定區置換，產生本發明之全人類抗體。當所選的恆定區可根據特定用途而變時，高親和性抗原-結合及目標專一性特性仍保留在可變區中。
生物等效性
本發明之抗-Fel d1抗體及抗體片段涵蓋具有與所述的抗體不同但保留與Fel d1結合能力之胺基酸序列的蛋白。此等變體抗體和抗體片段，當與親代序列相比較時，係包括一或多個胺基酸之添加、刪除或取代，但具有與所述的抗體實質上相當之生物活性。同樣的，本發明之抗體編碼DNA序列，當與所揭示的序列相比較時，係包括一或多個核苷酸之添加、刪除或取代，但其所編碼的抗體或抗體片段與本發明之抗體或抗體片段實質上為生物等效的。
二種抗原結合蛋白或抗體，若例如其為醫藥同等物或醫藥替代品，當於類似的實驗條件下以單一劑量或多劑量之相同的莫耳劑量投予時，其吸收速率和程度並無顯示顯著的差異，則係視為生物等效性。某些抗體若其吸收程度相當但是吸收速率不同應可視為等效物或醫藥替代品，且仍可視為生物等效，因為此等吸收速率上的差異為故意的並反映在標示上，對於達到例如長期使用之有效體藥濃度並非必要的，且就特定藥物產品的研究上被認為是無醫療價值的。
在一實施例中，二種抗原結合蛋白若在其安全性、純度及效力上不具有臨床上有意義的差異，則為生物等效的。
在一實施例中，若相較於無此變更之持續治療，病患在無預 期增加有害效應之風險下(包括臨床上致免疫性之明顯改變或效用減低)可在參照產品和生物產品間作一或多次變更，則二種抗原結合蛋白為生物等效的。
在一實施例中，若二種抗原結合蛋白係藉由共同的機制或作用機制作用於症狀或所用症狀，而達到此等機制已知的程度，則二者係為生物等效的。
生物等效性可藉由活體內和活體外方法來驗證。生物等效性測量包括，例如(a)人類或其他哺乳動物之活體內試驗，其中係測量血液、血漿、血清或其他生物體液中隨時間變化之抗體濃度或其代謝物；(b)與人類活體內生物可利用性數據有相互關係及可合理預測此數據之活體外試驗；(c)人類或其他哺乳動物之活體內試驗，其中係測量隨時間變化之抗體(或其目標)的適當急性藥理效用；及(d)已建立抗體之安全性、效力或生物可利用性和生物等效性之良好對照的臨床試驗。
本發明抗體之生物等效變體可藉由，例如製造各種殘基或序列之取代，或刪除生物活性不需要的末端或內部殘基或序列來建構。例如，生物活性不需要的半胱胺酸殘基可刪除或以其他的胺基酸置換，以防止因變性而形成不必要或不正確的分子內雙硫橋。在其他內容中，生物等效抗體可包括抗體變體，其包含修飾抗體之糖基化特性的胺基酸改變，例如消除或移除糖基化之突變。
抗體的生物特性
一般而言，本發明之抗體可藉由與Fel d1的1鏈或2鏈，或Fel d1的1鏈和2鏈二者，或與1鏈或2鏈的片段結合來作用。
在特定的實施例中，本發明之抗體可與位於至少Fel d1的1鏈或2鏈C端區之表位結合。在一實施例中，抗體可與Fel d1之1鏈或2 鏈N端區域內的表位結合。
在特定的實施例中，本發明之抗體可在對Fel d1過敏原敏感的病患中藉由阻斷或抑制IgE與肥大細胞或嗜鹼性細胞結合加以作用。
在特定的實施例中，本發明之抗體可藉由與天然Fel d1蛋白之全長1鏈或2鏈的任何區域或片段結合加以作用，其胺基酸序列係如SEQ ID NO：392(1鏈)和SEQ ID NO：393(2鏈)所示。
在特定的實施例中，本發明之抗體可為雙專一性抗體。本發明之抗體可與1鏈的一表位結合，及可與2鏈的一表位結合。在特定的實施例中，本發明之雙專一性抗體可與1鏈中二個不同的表位結合。在特定的實施例中，本發明之雙專一性抗體可與2鏈中二個不同的表位結合。在特定的實施例中，本發明之雙專一性抗體可與其中一個1鏈或2鏈上之相同螺旋內二個不同的表位結合。Fel d1之結構係更詳細描述於Kaiser等人(Kaiser,L.等人(2003),J.Biol.Chem.278(39)：37730-37735)中，其中作者提到Fel d1係由8個螺旋H1-H4和H5-H8所組成，其分別相當於天然的Fel d1中之2鏈和1鏈。
在一實施例中，本發明係提供與Fel d1的1鏈及/或2鏈結合之全人類單株抗體或其抗原-結合片段，其中該抗體或其片段具有一或多項下列特性：(i)包括具有由SEQ ID NO：2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、242、258、274、290、306、322、338、354和370組成之群中選出的胺基酸序列或實質上具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之其類似序列之HCVR；(ii)包括具有由SEQ ID NO：10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218、234、250、266、282、298、314、330、346、362和378組成之群中選出的胺基酸序列或實質上具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之其類似序列之LCVR；(iii)包括具有由SEQ ID NO：8、24、40、56、72、88、104、120、136、152、168、184、200、216、232、248、264、280、296、312、328、344、360和376組成之群中選出的胺基酸序列或實質上具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之其類似序列之HCDR3區；及具有由SEQ ID NO：16、32、48、64、80、96、112、128、144、160、176、192、208、224、240、256、272、288、304、320、336、352、368和384組成之群中選出的胺基酸序列或實質上具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之其類似序列之LCDR3區；(iv)包括具有由SEQ ID NO：4、20、36、52、68、84、100、116、132、148、164、180、196、212、228、244、260、276、292、308、324、340、356和372組成之群中選出的胺基酸序列或實質上具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之其類似序列之HCDR1區；具有由SEQ ID NO：6、22、38、54、70、86、102、118、134、150、166、182、198、214、230、246、262、278、294、310、326、342、358和374組成之群中選出的胺基酸序列或實質上具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之其類似序列之HCDR2區；具有由SEQ ID NO：12、28、44、60、76、92、108、124、140、156、172、188、204、220、236、252、268、284、300、316、332、348、364和380組成之群中選出的胺基酸序列或實質上具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之其類似序列之LCDR1；及具有由SEQ ID NO：14、30、46、62、78、94、110、126、142、158、174、190、206、222、238、254、270、286、302、318、334、350、366和382組成之群中選出的胺基酸序列或實質上具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之其類似序列之LCDR2區；(v)以等於或低於10-9之KD與Fel d1的1鏈及/或2鏈結合；(vi)不會與子宮球蛋白(uteroglobin)交叉反應或結合；或(vii)在活體內被動皮膚過敏(PCA)小鼠模型中，使用Fel d1專一性小鼠IgE阻斷了染劑 外滲。
在一實施例中，本發明係提供二或多種本發明之全人類抗體之組合物用於製備組成物之用途，其中該抗體係與Fel d1的1鏈及/或2鏈結合，且其中包含在組成物中之各抗體或其片段係具有一或多項下列性質：(i)包括具有由SEQ ID NO：2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、242、258、274、290、306、322、338、354和370組成之群中選出的胺基酸序列或實質上具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之其類似序列之HCVR；(ii)包括具有由SEQ ID NO：10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218、234、250、266、282、298、314、330、346、362和378組成之群中選出的胺基酸序列或實質上具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之其類似序列之LCVR；(iii)包括具有由SEQ ID NO：8,24,40,56,72,88、104、120、136、152、168、184、200、216、232,248、264、280、296、312、328、344、360和376組成之群中選出的胺基酸序列或實質上具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之其類似序列之HCDR3區；及具有由SEQ ID NO：16、32、48、64、80、96、112、128、144、160、176、192、208、224、240、256、272、288、304、320、336、352、368和384組成之群中選出的胺基酸序列或實質上具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之其類似序列之LCDR3區；(iv)包括具有由SEQ ID NO：4、20、36、52、68、84、100、116、132、148、164、180、196、212、228、244、260、276、292、308、324、340、356和372組成之群中選出的胺基酸序列或實質上具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之其類似序列之HCDR1區；具有由SEQ ID NO：6、22、38、54、70、86、102、118、134、150、166、182、198、214、230、246、262、278、294、310、326、342、358和374組成之 群中選出的胺基酸序列或實質上具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之其類似序列之HCDR2區；具有由SEQ ID NO：12、28、44、60、76、92、108、124、140、156、172、188、204、220、236、252、268、284、300、316、332、348、364和380組成之群中選出的胺基酸序列或實質上具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之其類似序列之LCDR1區；及具有由SEQ ID NO：14、30、46、62、78、94、110、126、142、158、174、190、206、222、238、254、270、286、302、318、334、350、366和382組成之群中選出的胺基酸序列或實質上具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性之其類似序列之LCDR2區；(v)以等於或低於10-9之KD與Fel d1的1鏈及/或2鏈結合；(vi)不會與子宮球蛋白(uteroglobin)交叉反應或結合；(vii)在活體內被動皮膚過敏(PCA)小鼠模型中，使用Fel d1專一性小鼠IgE阻斷了染劑外滲；或(viii)當與本發明之第二抗體或其抗原結合片段組合時，降低了Fel d1挑戰動物肺中之黏液分泌細胞的頻率。
本發明之特定的Fel d1抗體，當單獨或組合使用時，如活體外和活體內分析所測定的，能結合或中和至少一種Fel d1的生物效應。本發明抗體之結合以及中和Fel d1活性的能力可使用任何熟習本項技術者已知的標準方法來測量，如文中所述，包括結合分析或中和活性分析(例如防止過敏)。
用於測量結合活性之非限定示例性活體外分析係說明於本文之實例4中。在實例4中，人類抗-Fel d1抗體之結合親和力和動力學常數係以表面電漿子共振所測定且該等測量係於T200 Biacore儀器中進行。
Fel d1蛋白或胜肽可經修飾包括特定用於標記或用於與載體分子連結目的之殘基的添加或取代，例如KLH。例如，可將半胱胺酸加在胜肽的N端或C端，或可加入連接子序列製備供連結之胜肽，例如免疫 用之KLH。Fel d1專一性抗體可不含有額外的標記或基團，或其可含有N-端或C-端標記或基團。在一實施例中，該標記或基團為生物素。在結合分析中，標記之位置(若有的話)可測定胜肽相對於結合胜肽之表面的向位。例如，若一表面塗覆上抗生物素，則將會面向含有N-端生物素之胜肽，使得胜肽C-端部分遠離表面。
表位定位及相關技術
術語「表位」，如文中所用，係指與抗體分子可變區中稱為補位(paratope)的特定抗原結合位置相互作用之抗原決定位。單一抗原可具有一個以上的表位。因此，不同的抗體可與抗原的不同區域結合並可具有不同的生物效應。表位可為構型或線性。構型表位係由直鏈多肽鏈不同線段之空間上並列的胺基酸所產生。線性表位係由多肽鏈相鄰的胺基酸殘基所產生。在特定的情況下，表位可在抗原上包括糖類基團、磷醯基基團或磺醯基基團。
本發明包括與一或多個在Fel d1分子之1鏈或2鏈區域中所發現的一或多個胺基酸相互作用之抗-Fel d1抗體，其包括，例如如SEQ ID NO：392所示之1鏈(A鏈)，或如SEQ ID NO：393所示2鏈(B鏈)，或在重組產生的Fel d1蛋白之相當區域內，如任一SEQ ID NO：385、394、395、396或397所示。與抗體結合之表位可由3或多個(例如3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20個或更多)位在任何前述區域或Fel d1分子片段內之胺基酸的單一連續序列所組成(例如在1鏈或2鏈中或跨過1鏈和2鏈二區域中之線性表位)。另外，表位可由多數個位在任一或二個前述區域或Fel d1分子片段內之非連續胺基酸所組成(例如構型表位)。
各種本項技術之一般技術者已知的技術皆可用於測定抗體 是否與多肽或蛋白內的「一或多個胺基酸交互作用」。示例的技術包括習用的交叉阻斷分析例如描述於Antibodies,Harlow and Lane(Cold Spring Harbor Press,Cold Spring Harb.,NY)中。其他方法包括丙胺酸掃描突變分析、胜肽墨點分析(Reineke(2004),Methods Mol Biol 248：443-463)及胜肽裂解分析晶體學研究和NMR分析。此外，可使用例如表位切除、表位萃取及抗原之化學修飾等方法(Tomer(2000)Protein Science 9：487-496)。可用於辨識多肽內與抗體作用之胺基酸的方法係以質譜偵測氫/氘交換。一般而言，氫/氘交換方法係包括以氘標定有關的蛋白，接著讓抗體與氘標定的蛋白結合。之後，將蛋白/抗體複合物轉置於水中及讓受抗體複合物保護的胺基酸內可交換的質子以比非介面部份之胺酸內的可交換質子更緩慢速率的進行氘-對-氫之回復交換。結果，形成蛋白/抗體界面之胺基酸可保留氘，且因此相較於非包含在界面內的胺基酸，係具有相對較高的質量。解離抗體後，將目標蛋白以蛋白酶裂解並以質譜分析，藉此找出氘標定殘基，其係相當於與抗體交互作用之專一性胺基酸。參見，例如hring(1999)Analytical Biochemistry 267(2)：252-259；Engen和Smith(2001)Anal.Chem.73：256A-265A。抗原/抗體複合物之X-光晶體學亦可用於表位定位之目的。
修飾輔助特性分析(MAP)亦稱為以抗原結構為基準之抗體特性分析(ASAP)，為一種根據各抗體對化學性或酵素性修飾抗原表面之結合性質的相似性，分類大量抗相同抗原之單株抗體(mAb)的方法(US 2004/0101920)。各種類可反映與另一種類所代表的表位明顯不同或部分重疊之獨特的表位。此技術能快速過濾基因相同的抗體，而得以將特性鑑別集中在基因上截然不同的抗體上。當用於雜種瘤篩選時，MAP可幫助鑑定產生具有所欲特性之mAb的稀有雜種瘤選殖株。MAP可用於將本發明之抗體分類成與不同表位結合之抗體群。
在特定的實施例中，抗-Fel d1抗體或其抗原結合片斷係與 任何一或多個作為示例之Fel d1的1鏈或2鏈，天然形式如示例的SEQ ID NO：392(1鏈)和SEQ ID NO：393(2鏈)，或重組產生如示例之任何SEQ ID NO：385、394、395、396和397或其片段之區域內的表位結合。在特定的實施例中，本發明抗體，如表1所示，係與至少一個由下列組成之群中選出的胺基酸序列相互作用：範圍從SEQ ID NO：396之約位置15至約位置24的胺基酸殘基；範圍從SEQ ID NO：396之約位置85至約位置103的胺基酸殘基；範圍從SEQ ID NO：396之約位置85至約位置104的胺基酸殘基；範圍從SEQ ID NO：396之約位置113至約位置116的胺基酸殘基。這些區域進一步係以SEQ ID NO：402、403、404、412和426作為示例。
本發明亦包括與相同表位或表位一部分結合之抗-Fel d1抗體，如任何表1中所述之特定示例性抗體，或具有任何表1中所述之示例性抗體的CDR序列之抗體。同樣的，本發明亦包括與任何表1中所述之特定示例性抗體，或具有任何表1中所述之示例性抗體的CDR序列之抗體，競爭與Fel d1或Fel d1片段結合之抗-Fel d1抗體。
藉由使用本項技術中已知的習用方法，可容易地測定抗體是否與參照的抗-Fel d1抗體相同的表位結合或是與其競爭結合。例如，測定試驗抗體是否與本發明參照的抗-Fel d1抗體相同之表位結合，係在飽和的條件讓參照抗體與Fel d1蛋白或胜肽結合。接著，評估試驗抗體與Fel d1分子結合之能力。若試驗抗體在與參照的抗-Fel d1抗體飽和結合後，能與Fel d1結合，則其可結論出，該試驗抗體係與參照抗-Fel d1抗體不同的表位結合。另一方面，若試驗抗體在與參照抗-Fel d1抗體飽和結合後，不能與Fel d1分子結合，則試驗抗體可能與和本發明之參照抗-Fel d1抗體結合的表位相同之表位結合。
為了測定一抗體是否與參照的抗-Fel d1抗體競爭結合，係以二個取向進行上述結合方法：第一取向：讓參照抗體在飽和的條件下與 Fel d1分子結合，接著評估試驗抗體與Fel d1分子之結合。第二取向：讓試驗抗體在飽和的條件下與Fel d1分子結合，接著評估參照抗體與Fel d1分子之結合。若在二個取向中，僅有第一(飽和)抗體能與Fel d1分子結合，則結論出試驗抗體和參照抗體係競爭與Fel d1結合。本項技術之一般技術者應了解，與參照抗體競爭結合之抗體可能不一定係與參照抗體相同之表位結合，但可能藉由與重疊或相鄰的表位結合，在立體上阻斷參照抗體之結合。
若各自競爭性地抑制(阻斷)另一抗體與抗原之結合，則二抗體係與相同或重疊的表位結合。亦即，如於競爭性結合分析中所測，一1-、5-、10-、20-或100-倍過量的抗體抑制另一抗體之結合至少50%，但較佳地75%、90%或甚至99%(參見，例如Junghans等人，Cancer Res.1990 50：1495-1502)。另外，若基本上降低或消除一抗體結合之抗原中所有的胺基酸突變降低或消除另一種抗體之結合，則二種抗體具有相同的表位。若降低或消除一抗體結合之某些胺基酸突變降低或消除另一種抗體之結合，則二種抗體具有重疊的表位。
然後可進行另外例行的實驗(例如胜肽突變和結合分析)，以確定所觀察到無試驗抗體結合事實上是否係由於與和參照抗體相同的表位結合所致，或是否是立體阻斷(或另外的現象)造成無觀察到結合。此類實驗可使用ELISA、RIA、表面電漿子共振、流式細胞儀或本項技術中可取得的另外其他量性或質性抗體-結合分析來進行。
免疫接合物
本發明涵蓋與一治療成份，例如能降低對存在貓皮屑或貓中，或貓可能居住的環境區域中之Fel d1過敏原之過敏反應，或改善至少一種與暴露於貓、貓皮屑或Fel d1過敏原有關的症狀，包括鼻炎、結膜炎 或呼吸困難或其嚴重性之藥劑接合的人類抗-Fel d1單株抗體。此藥劑可為皮質類固醇、第二不同的Fel d1抗體或疫苗。可與Fel d1抗體接合之治療劑成份的類型應考慮所欲治療的症狀和所欲達到的希望療效。另外，若希望的療效為治療與暴露於Fel d1過敏原有關的後遺症或症狀，或任何其他因該等暴露所導致的症狀，例如(但不限於)鼻炎或結膜炎，則有利的可與適用於治療此症狀之後遺症或徵狀，或減緩任何本發明抗體之副作用的藥劑接合。適合用於形成免疫接合物之藥劑已為本項技術所知，參見，例如WO 05/103081。
多專一性抗體
本發明之抗體可為單專一性、雙專一性或多專一性。多專一性抗體可對一目標多肽的不同表位具專一性或可含有對一個以上的多肽之表位具專一性之抗原結合區。參見，例如Tutt等人，1991,J.Immunol.147：60-69；Kufer等人，2004,Trends Biotechnol.22：238-244。本發明之抗體可與另外的功能性分子，例如另外的胜肽或蛋白相連結或共表現。例如，抗體或其片段可功能性連接(例如以化學偶合、基因融合、非共價連結或其他)至一或多個其他分子實體，例如另外的抗體或抗體片段，產生帶有第二結合專一性之雙專一性或多專一性抗體。例如，本發明包括雙專一性抗體，其中免疫球蛋白之一臂係對人類Fel d1之1鏈或其片段具專一性，而免疫球蛋白之另一臂係對Fel d1之2鏈或第二治療目標具專一性，或可與治療成份接合。
本發明之特定的示例性實施例包括雙專一性抗原結合分子，其為雙專一性抗體。各雙專一性抗體之抗原結合區包括一重鏈可變區(HCVR)和一輕鏈可變區(LCVR)。HCVR亦可稱為VH區，而LCVR亦可稱為VL區。典型地，各HCVR和LCVR係包括三個CDR其間穿插四個FR， 以下列順序由胺基端排列至羧基端：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。HCVR內的三個CDR文中可稱為HCDR1、HCDR2和HCDR3；而LCVR內的三個CDR在文中可稱為LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在本發明之雙專一性抗原結合分子中，各抗原結合區可包括或包含全抗體分子或抗體之抗原結合片段。術語抗體之「抗原結合部分」、抗體之「抗原結合片段」等等，如文中所用，包括任何與抗原專一性結合形成複合物之天然生成、酵素製得、合成或基因工程的多肽或糖蛋白。抗體之抗原結合片段可使用任何標準的技術，例如蛋白質水解消化作用或涉及操控和表現編碼抗體可變區和(視需要)恆定區的DNA之重組基因工程技術，衍生自全抗體分子。此DNA為已知的及/或可取得的，例如購自市面、DNA庫(包括，例如噬菌體-抗體庫)或可經合成的。此DNA可經定序和以化學或藉由使用分子生物技術操控，例如將一或多個可變及/或恆定區排列成適合的構形，或導入密碼子，製造半胱胺酸殘基，修飾、添加或刪除胺基酸等。
可包括在本發明雙專一性抗原結合分子內之抗原結合片段的非限定實例包括：(i)Fab片段；(ii)F(ab')2片段；(iii)Fd片段；(iv)Fv片段；(v)單鏈Fv(scFv)分子；(vi)dAb片段；及(vii)由模擬抗體高變區之胺基酸殘基所組成的最小識別單位(例如單離的互補決定區(CDR)，如CDR3胜肽)，或限制性FR3-CDR3-FR4胜肽。其他工程化分子，例如區域專一性抗體、單區抗體、區域刪除抗體、嵌合抗體、CDR-嫁接抗體、雙抗體、三抗體、四抗體、微抗體、奈米抗體(例如單價奈米抗體、雙價奈米抗體等)、小模組免疫醫藥(SMIP)及鯊可變IgNAR區，亦涵蓋在文中所用的「抗原結合片段」之詞語內。
抗體之抗原結合片段典型地將包括至少一可變區。可變區可為任何大小或胺基酸組成之區域且一般應包括至少一個與架構序列相鄰或 在其框架內之CDR。在具有VL區與VH區結合之抗原結合片段中，VH和VL區可以任何適合的排列位於彼此相對處。例如可變區可為二聚化並含有VH-VH、VH-VL或VL-VL二聚體。另外，抗體之抗原結合片段可含有單體VH或VL區。
在特定的實施例中，雙專一性抗原結合分子之抗原結合片段可含有至少一個可變區與至少一個恆定區共價連接。可在雙專一性抗原結合分子之抗原結合區內可發現的可變區和恆定區之非限定、示例性組態可包括：(i)VH-CH1；(ii)VH-CH2；(iii)VH-CH3；(iv)VH-CH1-CH2；(v)VH-CH1-CH2-CH3；(vi)VH-CH2-CH3；(vii)VH-CL；(viii)VL-CH1；(ix)VL-CH2；(x)VL-CH3；(xi)VL-CH1-CH2；(xii)VL-CH1-CH2-CH3；(xiii)VL-CH2-CH3；及(xiv)VL-CL。在任何可變區和恆定區之組態中，包括上列任何的示例性組態，可變區和恆定區可直接彼此相連接或可藉由完整或部分的絞鏈區或連接子區相連。絞鏈區可由至少2個(例如5、10、15、20、40、60或更多個)胺基酸所組成，其在單一多肽分子中相鄰的可變及/或恆定區間產生柔性和半柔性連結。再者，雙專一性抗原結合分子之抗原結合區可包括以非共價彼此相互連結及/或與一或多個單體VH或VL區相連結(例如以雙硫鍵)之任何上列的可變和恆定區組態之同源二聚體或異源二聚體(或其他多聚體)。
第一抗原結合區和第二抗原結合區可直接或間接彼此相連形成雙專一性抗原結合分子。另外，第一抗原結合區和第二抗原結合區可各自與個別的多聚體化區域連接。一多聚體化區域與另一多聚體化區域之連接幫助二個抗原結合區間的連接，藉此形成雙專一性抗原結合分子。如文中所用，「多聚體化區域」為具有與相同或類似結構之第二多聚體化區域連接能力之任何巨大分子、蛋白、多肽、胜肽或胺基酸。例如，多聚體化區域可為包括一免疫球蛋白CH3區之多肽。多聚體化組份之非限定實例為免疫球蛋白之Fc部分，例如選自同型IgG1、IgG2、IgG3和IgG4之IgG 的Fc區，以及各同型群組內任何異型。在特定的實施例中，多聚體化區域可為Fc片段或含有至少一個半胱胺酸殘基之長度1至約200個胺基酸之胺基酸序列。在其他實施例中，多聚體化區域可為半胱胺酸殘基或含半胱胺酸殘基之短胜肽。其他的多聚體化區域包括含有或包含白胺酸拉鏈、螺旋-環模體或卷曲螺旋模體。
任何雙專一性抗體格式或技術皆可用於製造本發明之雙專一性抗原結合分子。例如，具有第一抗原結合專一性之抗體或其片段可功能性連接(例如以化學偶合、基因融合、非共價連結或其他)至一或多個其他分子實體，例如具有第二抗原結合專一性之另外的抗體或其片段，產生雙專一性抗原結合分子。
可用於本發明內文中之示例的雙專一性抗體模式包括使用第一免疫球蛋白(Ig)CH3區及第二Ig CH3區，其中第一和第二Ig CH3區至少有一胺基酸互不相同，且相較於缺乏此胺基差異之雙專一性抗體，其中至少一胺基酸之差異降低了雙專一性抗體與蛋白A之結合。在一實施例中，第一Ig CH3區結合蛋白A而第二Ig CH3區含有降低或消除蛋白A結合之突變，例如H95R修飾(IMGT外顯子編號；EU編號為H435R)。第二CH3可進一步包括Y96F修飾(IMGT；EU為Y436F)。在第二CH3中可發現的另外修飾作用，就IgG1抗體而言係包括：D16E、L18M、N44S、K52N、V57M和V82I(IMGT；EU為D356E、L358M、N384S、K392N、V397M和V422I)；就IgG2抗體而言係包括N44S、K52N和V82I(IMGT；EU為N384S、K392N和V422I)；及就IgG4抗體而言係包括Q15R、N44S、K52N、V57M、R69K、E79Q和V82I(IMGT；EU為Q355R、N384S、K392N、V397M、R409K、E419Q和V422I)。上述之雙專一性抗體模式之變化係涵蓋在本發明之範圍內。
可用於本發明內文中之其他示例的雙專一性模式包括(不限 於)，例如scFv-為基礎或雙抗體雙專一性模式、雙可變區(DVD)-Ig、細胞雜交瘤(Quadroma)、knobs-into-holes、共同輕鏈(例如knobs-into-holes之共同輕鏈等)、CrossMab、CrossFab、(SEED)body、白胺酸拉鏈、Duobody、IgG1/IgG2、雙作用Fab(DAF)-IgG和Mab2雙專一模式(參見，例如Klein等人2012,mAbs 4：6,1-11和文中所引述的參考文獻，作為前述模式之審視)。雙專一性抗體亦可使用胜肽/核酸接合來建構，例如其中係使用帶有直交化學反應性之非天然胺基酸來產生位點-專一性抗體-寡核苷酸接合物，然後其以定義組成、價性和幾何學自行組合成多聚體複合物(參見，例如Kazane等人，J.Am.Chem.Soc.[Epub：Dec.4,2012])。
治療性給藥和調配物
本發明係提供包括本發明抗-Fel d1抗體或其抗原結合片段之治療組成物。本發明治療組成物之給藥將與適合的載劑、賦形劑和其他併入調配物中以提供改良的移轉、遞送、耐受等等之藥劑，經由適合的路徑，包括(但不限於)靜脈內、皮下、肌肉內、鼻內來投予。許多適合的調配物可參見所有醫藥化學家所知之處方集：Remington's Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Company,Easton,PA。這些調配物包括，例如散劑、糊劑、軟膏、膠凍、蠟、油類、脂類、含脂質(陽離子或陰離子)之小囊(例如LIPOFECTINTM)、DNA接合物、無水吸收糊劑、水包油和油包水乳液、乳液碳蠟(各種分子量之聚乙二醇)、半固體凝膠及含碳蠟之半固體混合物。亦可參見Powell等人"Compendium of excipients for parenteral formulations" PDA(1998)J Pharm Sci Technol 52：238-311。
抗體之劑量依照所欲投予對象之年齡和體型大小、目標疾病、症狀、給藥路徑等可改變。當本發明抗體係用於治療具有Fel d1敏感性個體中與暴露於貓或貓皮屑有關的鼻炎或結膜炎，或預防對貓過敏原之 過敏反應時，有利的係以靜脈內給予一般在約0.01至約30mg/kg體重，更佳地約0.02至約7、約0.03至約5，或約0.05至約3mg/kg體重之單一劑量的本發明抗體。依照症狀的嚴重度，可調整治療頻率和時間。在特定的實施例中，本發明之抗體或其抗原-結合片段可以至少約0.1mg至約800mg，約1至約500mg，約5至約300mg或約10至約200mg，至約100mg或至約50mg的起始劑量來給藥。在特定的實施例中，起始劑量可接著給予第二或多數個大約與起始劑量相同或低於起始劑量之後續劑量的抗體或其抗原-結合片段，其中該後續劑量係相隔至少1天至3天；至少一週，至少2週；至少3週；至少4週；至少5週；至少6週；至少7週；至少8週；至少9週；至少10週；至少12週；或至少14週。
各種的遞送系統已為所知並可用於投予本發明之醫藥組成物，例如包膠之微脂體、微粒、微膠囊、能表現突變病毒之重組細胞、媒介內吞作用之受體(參見，例如Wu等人(1987)J.Biol.Chem.262：4429-4432)。導入方法包括(但不限於)皮內、經皮、肌肉內、腹膜內、靜脈內、皮下、鼻內、硬膜外和口腔路徑。組成物可以任何方便的路徑，例如以輸注或團注、以經由上皮或黏膜層(例如口腔黏膜、直腸和腸內黏膜等)吸收來給藥，並可與其他生物活性劑共同給藥。給藥可為全身性或局部的。
醫藥組成物亦可以囊體來遞送，特別是微脂體(參見，例如Langer(1990)Science 249：1527-1533)。
在特定的情況下，醫藥組成物可以控制釋放系統來遞送。在一實施例中，可使用幫浦。在另一實施例中，可使用聚合物質。又在另一實施例中，控制釋放系統可放置在靠近組成物的目標處，因此僅需要全身劑量之一部分。
可注射的製備物可包括用於靜脈內、皮下、皮內及肌肉內注射、點滴輸注等之劑型。這些可注射製備物可以公開已知的方法來製備。 例如，可注射製備物可，例如藉由將上述抗體或其鹽溶解、懸浮或乳化於注射上習用的無菌水性媒劑或油性媒劑中來製備。注射用之水性媒劑有，例如生理食鹽水、含葡萄糖之等張溶液和其他佐劑等，其可與適合的增溶劑例如醇(例如乙醇)、多醇(例如丙二醇、聚乙二醇)、非離子介面活性劑[例如聚山梨醇酯80、HCO-50(氫化蓖麻油之聚環氧乙烷(50莫耳)加合物)]等組合使用。油性媒劑，可使用芝麻油、大豆油等，其可與增溶劑例如苯甲酸苯甲基酯、苯甲醇等組合使用。因此所製備的注射液較佳地係填充於適當的安瓶中。
本發明之醫藥組成物可以標準針或注射器由皮下或靜脈內來遞送。此外，就皮下遞送而言，筆型遞送裝置可容易地用於遞送本發明之醫藥組成物。此筆型遞送裝置可為重複使用型或拋棄型。可重複使用的筆型遞送裝置一般係利用含有醫藥組成物之可更換補充匣。一旦匣內的所有醫藥組成物投予後而補充匣變空，此空匣可容易丟棄並更換新的含醫藥組成物之補充匣。然後此筆型遞送裝置便可再使用。在拋棄型筆型遞送裝置中無可置換的補充匣。取而代之的，拋棄型筆型遞送裝置係預先填充醫藥組成物收藏在裝置內的儲槽中。一但醫藥組成物的儲槽變空，整個裝置便可丟棄。
許多可重複使用的筆型和自動注射器遞送裝置已應用於皮下遞送本發明之醫藥組成物。實例包括(但不一定限於)AUTOPENTM(Owen Mumford,Inc.,Woodstock,UK)、DISETRONICTM筆(Disetronic Medical Systems,Bergdorf,Switzerland)、HUMALOG MIX 75/25TM筆、HUMALOGTM筆、HUMALIN 70/30TM筆(Eli Lilly and Co.,Indianapolis,IN)、NOVOPENTM I、II及III(Novo Nordisk,Copenhagen,Denmark)、NOVOPEN JUNIORTM(Novo Nordisk,Copenhagen,Denmark)、BDTM筆(Becton Dickinson,Franklin Lakes,NJ),OPTIPENTM、OPTIPEN PROTM、OPTIPEN STARLETTM及 OPTICLIKTM(sanofi-aventis,Frankfurt,Germany)，僅提出一些。用於皮下遞送本發明醫藥組成物之拋棄型筆型遞送裝置包括(但不一定限於)SOLOSTARTM筆(sanofi-aventis)、FLEXPENTM(Novo Nordisk)及KWIKPENTM(Eli Lilly)、SURECLICKTM自動注射器(Amgen,Thousand Oaks,CA)、PENLETTM(Haselmeier,Stuttgart,Germany)、EPIPEN(Dey,L.P.)及HUMIRATM筆(Abbott Labs,Abbott Park IL)，僅提出一些。
有利地，上述之口服或非經腸用途之醫藥組成物係製備成適合活性成份劑量之單位劑型。此等單位劑量之劑型包括，例如錠劑、片劑、膠囊、注射劑(安瓶)、栓劑等。所含的前述抗體之量一般每單位劑量之劑型為約5至約500毫克；特別是注射形式，較佳的前述抗體係含有約5至約100毫而其他劑型為約10至約250毫克或至約500毫克。
抗體之治療用途
由於其與Fel d1相互作用，本發明抗體可用於治療個體在暴露於貓、貓皮屑或含Fel d1蛋白之環境後的主要反應，或至少一種與過敏反應有關的症狀，例如眼睛癢、結膜炎、鼻炎、喘息、呼吸困難或用於預防對Fel d1過敏原之續發反應，包括嚴重的過敏反應，或減低暴露於貓過敏原後症狀之嚴重度、持續時間及/或頻率。
又在本發明另一實施例中，本發明抗體係用於製備醫藥組成物供治療患有對貓、貓皮屑、貓毛髮或其萃取物及/或Fel d1蛋白敏感之病患。又在本發明另外的實施例中，本發明抗體係用於製備醫藥組成物供降低主要暴露於Fel d1之嚴重度，或用於降低對Fel d1蛋白之過敏反應的嚴重度、持續時間及/或次數。在本發明另一實施例中，本發明抗體係用作為任何其他可用於治療貓過敏原之藥劑，包括皮質類固醇、疫苗、抗原專一性免疫治療(SIT)或任何其他本項技術中已知的緩解治療之輔助治療。
組合治療
組合治療可包括本發明之抗-Fel d1抗體和任何可有利地與本發明抗體或與本發明抗體之生物活性片段組合之另外的治療劑。
例如，第二治療劑可用於幫助降低在暴露於貓、貓皮屑、貓毛髮或其萃取物及/或Fel d1，或暴露於貓居住的環境後之過敏症狀，例如皮質類固醇。抗體亦可用於與其他治療，例如Fel d1抗原專一性之疫苗結合。另外的治療活性組份可在本發明抗-Fel d抗體投予之前、同時或之後給藥。就本發明所揭示的目的，此給藥療法係考慮抗-Fel d1抗體與第二治療活性組份「組合」給藥。
給藥療法
根據本發明特定的實施例，多劑量之一或多種抗-Fel d1抗體(抗體組合物)或雙專一性抗原-結合分子可於一段定義的時間內投予一對象。根據本發明此方面之方法係包括先後將多劑量之本發明抗體、抗體組合物或雙專一性抗原-結合分子投予一對象。如文中所用，「先後給藥」係指各劑量之抗體、抗體組合物或雙專一性抗原-結合分子係於不同的時間點投予該對象，例如以預計的間隔隔開之不同日(例如小時、日、週或月)。本發明包括，包含將一單一起始劑量之抗體、抗體組合物或雙專一性抗原-結合分子先後投予病患，接著一或多個第二劑量之抗體及視需要接著一或多個第三劑量之抗體之方法。
術語「起始劑量」、「第二劑量」和「第三劑量」係指投予本發明抗體、抗體組合物或雙專一性抗原-結合分子之暫時順序。因此，「起始劑量」為治療療法開始時所投予之劑量(亦稱為「基線」劑量)；「第二劑量」為在起始劑量之後所投予之劑量；而「第三劑量」為在第二劑量之後 所投予之劑量。起始、第二和第三劑量皆可含有相同量之抗體、抗體組合物或雙專一性抗原-結合分子，但就給藥的頻率而言，一般可彼此不同。在特定的實施例中，然而，包含在起始、第二及/或第三劑量中之抗體、抗體組合物或雙專一性抗原-結合分子之量，在治療期間可互不相同(若適當，經上調或下調)。在特定的實施例中，係在治療療法開始時投予二或多個(例如2、3、4或5個)劑量為「承載劑量」，接著以較低頻率為基礎投予後續劑量(「維持劑量」)。
在一示例的本發明實施例中，各第二及/或第三劑量係緊接前面劑量之後的1至26週(例如，1、1½、2、2½、3、3½、4、4½、5、5½、6、6½、7、7½、8、8½、9、9½、10、10½、11、11½、12、12½、13、13½、14、14½、15、15½、16、16½、17、17½、18、18½、19、19½、20、20½、21、21½、22、22½、23、23½、24、24½、25、25½、26、26½週或更久)給藥。「緊接前面劑量」一詞，如文中所用，係指在一多重給藥之順序中，抗體、抗體組合物或雙專一性抗原-結合分子之劑量，在每個相鄰的劑量給藥之前以無插入劑量之順序給藥。
根據本發明此方面之方法可包括將任何數目之第二及/或第三劑量之與Fel d1專一結合的抗體、抗體組合物或雙專一性抗原-結合分子，投予一病患。例如，在特定的實施例中，僅將一單一第二劑量投予該病患。在其他實施例中，係將二或多個(例如2、3、4、5、6、7、8或更多)第二劑量投予該病患。同樣的，在特定的實施例中，僅將一單一第三劑量投予該病患。在其他實施例中，係將二或多個(例如2、3、4、5、6、7、8或更多)第三劑量投予該病患。
在涉及多重第二劑量之實施例中，各第二劑量可與其他第二劑量相同的頻率來給藥。例如，各第二劑量可在緊接前面劑量後1至2週，投予該病患。同樣的，在涉及多重第三劑量之實施例中，各第三劑量可與 其他第三劑量相同的頻率來給藥。例如，各第二劑量可在緊接前面劑量後2至4週，投予該病患。另外，投予病患之第二及/或第三劑量的頻率，在治療療法其間可不同。在治療期間，給藥頻率亦可依照個別病患之需求在臨床檢查後由醫師做調整。
抗體之診斷用途
本發明之抗-Fel d1抗體亦可用於偵測或測量樣本中之Fel d1，例如供作診斷目的。設想，可經由使用任何一或多種本發明抗體，測量Fel d1之存在，確認被認為係由Fel d1造成的過敏反應。用於Fel d1之示例診斷分析可包括，例如將得自病患的樣本與本發明之抗-Fel d1抗體接觸，其中該抗-Fel d1抗體係以可偵測的標記或受體分子標定或用作從病患樣本中選擇性分離Fel d1蛋白之捕捉配體。另外，未標定的抗-Fel d1抗體可與本身經可偵測標記標定之第二抗體組合用於診斷用途。可偵測標記或受體分子可為放射性同位素，例如3H、14C、32P、35S或125I；螢光或化學螢光基團，例如螢光素異硫氰酸酯或羅丹明(rhodamine)；或酵素例如鹼性磷酸酶、β半乳糖苷酶、辣根過氧化酶或螢光素酶(luciferase)。可用於偵測或測量樣本中之Fel d1的特定示例分析包括酵素連結免疫吸附法(ELISA)、放射性免疫分析(RIA)及螢光活化細胞分類(FACS)。
根據本發明可用於Fel d1診斷分析之樣本包括可得自病患任何組織或液體樣本，其在正常的生理條件下含有可偵測量之Fel d1蛋白或其片段。一般而言，測量得自健康/無過敏病患(例如未患有與Fel d1存在有關的敏感性之病患)之特定樣本中Fel d1的量，先用以建立一Fel d1量之基線或標準。然後可將Fel d1之基線量與得自疑似具有貓皮屑之Fel d1敏感性之個人的樣本中所測量之Fel d1量作比較。
實例
提出下列實例以提供本項技術之一般技術者如何製造及使用本發明方法和組合物之完整揭示和說明，但不希望限制發明者所認為之發明範圍。雖已盡力確保所用的相關數字(例如量、溫度等)之正確性，但仍應考量某些實驗誤差和偏差。除非另有指出，否則份數係為重量之份數，分子量為平均分子量，溫度係以攝氏度數表示，而壓力係為或接近大氣壓。
實例1.產生Fel d1人類抗體
包含下列任一項之免疫原可用於產生Fel d1之抗體。在特定的實施例中，本發明抗體係以初級免疫原，例如全長天然Fel d1(nFel d1)使小鼠免疫所得來，該Fel d1可從市面上購得(例如，來自Indoor Biotechnologies,# LTN-FD1-1)或以多步驟管柱層析自貓毛髮或皮屑分離(參見，例如Chapman MD，等人(1988),J.Immunol.140：812-818)或其可以重組產生(參見基因銀行登錄號P30438或NP_001041618.1為Fel d1之1鏈的全長胺基酸序列(亦稱為A鏈或FELD1 A；亦參見SEQ ID NO：392)和基因銀行登錄號P30440或NP_001041619.1為Fel d1之2鏈的全長胺基酸序列(亦稱為B鏈或FELD1 B；亦參見SEQ ID NO：393)或1鏈或2鏈之片段，或1鏈和2鏈二者之片段，接著以第二免疫原或天然蛋白之免疫活性片段致免疫。動物可單獨以1鏈蛋白或2鏈蛋白，或以1鏈和2鏈蛋白二者致免疫，先後或同時投予使其免疫。各種構造可使用1鏈和2鏈之部分以各種本項技術中已知的連接或間隔方法來製備。這些構造可單獨或以各種組合來使用，用於引出活體內之抗體反應。例如，重組的Fel d1構造，例如該等SEQ ID NO：385、394、395、396或397或其片段所示例之構造，可用作為免疫原。
在特定的實施例中，本發明抗體係以初級免疫原，例如天然Fel d1之生物活性及/或致免疫片段或編碼其活性片段的DNA，使小鼠免疫所得來。該片段可衍生自Fel d1之1鏈及/或2鏈的N-端或C-端區。
在特定的實施例中，重組產生的Fel d1免疫原可藉由將二條Fel d1鏈直接融合來製造，如Kaiser等人中所述，產生具有類似天然Fel d1之重摺疊模式的融合產物(Kaiser,L.等人，(2003),J.Biol.Chem.278(39)：37730-37735)。在特定的實施例中，免疫原可為如SEQ ID NO：385、394、395、396或397之結構中所示的融合蛋白，接著以二級免疫原或以天然或重組產生的Fel d1之免疫活性片段致免疫。
在特定的實施例中，用文中所述的研究中之重組Fel d1蛋白係包括i)Fel d1 B鏈(2鏈)和Fel d1 A鏈(1鏈)連接為連續、線上融合(與Fel d1 B鏈N-端)或ii)與Fel d1 A鏈N-端連續、線上融合，接著柔性連接子[(Gly4Ser)3]，接著Fel d1 B。這些結構亦包括如下示之C-端標籤(myc-myc-His6或小鼠IgG2a Fc區)。此等蛋白係表現在中國倉鼠卵巢(CHO)細胞中。用於提高CHO中之表現的外生性訊號序列不包括在序列列表中。
在特定的實施例中，免疫原可為包括任何下列一或多項之融合蛋白：i)Fel d1 2鏈之18-109胺基酸殘基(參見基因銀行登錄號P30440以及SEQ ID NO：393)經由C端直接與Fel d1 1鏈之23-92胺基酸殘基(參見基因銀行登錄號P30438以及SEQ ID NO：392)的N端融合；ii)Fel d1 1鏈之23-92胺基酸殘基(參見基因銀行登錄號P30438以及SEQ ID NO：392)經由C端與Fel d1 2鏈之18-109胺基酸殘基(參見基因銀行登錄號P30440以及SEQ ID NO：393)的N端融合；iii)Fel d1 2鏈之18-109胺基酸殘基(參見基因銀行登錄號NP_001041619.1)經由C端直接與Fel d1 1鏈之19-88胺基酸殘基(參見基因銀行登錄號NP_001041618.1)的N端融合，例如SEQ ID NO：394或396中所示之結構；iv)Fel d1 1鏈之19-88胺基酸殘基(參見基 因銀行登錄號NP_001041618.1)經由C端直接與Fel d1 2鏈之18-109胺基酸殘基(參見基因銀行登錄號NP_001041619.1)的N端融合。參見SEQ ID NO：395。在特定的實施例中，融合蛋白可在結構的C端具有一標籤，例如myc-myc-六聚組胺酸標籤(就此等結構請參見SEQ ID NO：385、396或397)。在相關的實施例中，融合蛋白可具有在結構之C端偶合的小鼠抗體Fc區(就此等結構請參見SEQ ID NOs：394或395)。在特定的實施例中，1鏈和2鏈係經由熟習本項技術者已知的連接子偶合，例如(G4S)3(就此結構請參見SEQ ID NO：395和397)。
在特定的實施例中，與Fel d1專一結合之抗體係使用上述區域之片段，或由文中所述區域之N或C端或二端延伸至所指的區域外約5至20個胺基酸殘基之胜肽所製備。在特定的實施例中，上述之區域或其片段之任何組合可用於製備Fel d1專一性抗體。在特定的實施例中，任何一或多個Fel d1之上述區域或其片段可用於製備單專一性、雙專一性或多專一性抗體。
可用作免疫原之全長蛋白或其片段，如上述係與刺激免免反應之輔助劑，直接投予包括編碼人類免疫球蛋白重鏈和κ輕鏈可變區之DNA的VELOCIMMUNE®小鼠。抗體之免疫反應係以Fel d1-專一性免疫分析來監測。當達到所欲的免疫反應時，收取脾臟細胞並與小鼠骨髓瘤細胞融合以保留其生存力及形成雜交瘤細胞。篩選及選擇雜交瘤細胞株以辨識出產生Fel d1專一性抗體之細胞株。使用此技術及各種上述的免疫原，得到數種抗-Fel d1嵌合抗體(亦即，具有人類可變區和小鼠恆定區之抗體)；以此法產生之示例抗體名稱係如下：H1M1230N、H1M1234N、H1M1241N、H2M1233N、H2M1236N、H2M1237N和H2M1242N。
如U.S.2007/0280945A1中所述，亦直接將抗-Fel d1抗體由未與骨髓瘤細胞融合之抗原陽性的B細胞分離出。使用此法，得到數種全 人類抗-Fel d1抗體(亦即，具有人類可變區和人類恆定區之抗體)；以此法產生之示例抗體名稱係如下：H4H2574P、H4H2590S、H4H2592B、H4H2594S、H4H2597P、H4H2606B、H4H2607B、H4H2608B、H4H2636P、H4H2645P、H4H2793P、H4H2797P和H4H2864P。
依照此實例之方法所產生的示例性抗體之生物性質係詳述於下列所示的實例中。
實例2.重鏈和輕鏈可變區胺基酸序列
表1係列出所選的Fel d1專一性抗體之重鏈和輕鏈可變區胺基酸序列對及其對應的抗體識別碼。抗體在文中典型地係依照下列命名法來指稱：Fc字首(例如「H4H」、「H1M」、「H2M」)，接著數字識別碼(例如，如表1中所示之「1232」)，接著「P」或「N」字尾。因此，根據此命名法，一抗體可稱為，例如「H1M1232N」。在用於文中之抗體命名上H4H、H1M和H2M字首係指抗體特定的Fc區。例如，「H2M」抗體具有小鼠IgG2 Fc，而「H4H」抗體則具有人類IgG4 Fc。本項技術之一般技術者應了解，H2M或H3M抗體可轉變為H4H抗體且反之亦然，但在任何情況下，如表1中數字識別碼所指之可變區(包括CDR)仍不變。具有相同數字抗體名稱，但N、P和G之字母字尾不同之抗體係指抗體具有包含相同CDR序列，但在CDR序列之外的區域(亦即，在架構區中)則含序列變異之重鏈和輕鏈。因此，特定抗體之N、P和G變體在其重鏈和輕鏈可變區中具有相同的CDR序列，但在其架構區內則互不相同。
Figure TW201803901AD00001
Figure TW201803901AD00002
實例3.可變基因利用分析
選殖編碼抗體可變區之核酸並定序，用以分析所產生的抗體結構。從核酸序列和預測的抗體之胺基酸，辨識各重鏈可變區(HCVR)和輕鏈可變區(LCVR)之基因用法(VH、D、JH、VK或JK)。表2係闡述用於所選之本發明抗體的基因用法。
Figure TW201803901AD00003
Figure TW201803901AD00004
實例4.以表面電漿子共振測定抗體與Fel d1之結合
使用即時表面電漿子共振生物感測器(Biacore T200或Biacore 2000)分析，就抗原與抗-Fel d1單株抗體之結合測定結合之結合及解離速率常數(分別為k a和k d)和計算平衡解離常數及解離半衰期(分別為K D和t1/2)。將Biacore感測器表面以多株兔抗-小鼠抗體(GE Healthcare,# BR-1008-38)或以單株小鼠抗-人類Fc抗體(GE Healthcare,# BR-1008-39)衍生化，用以捕捉抗-Fel d1抗體，分別以小鼠Fc(抗體ID字首H1M、H2M、H2aM、H2bM)或人類IgG4 Fc(抗體ID字首H4H)表現。就動力學配合，係在抗-Fel d1單株抗體-捕捉表面上，於25℃以50μl/min之流速在流動的緩衝液中(10mM HEPES,150mM NaCl,0.05% P20,3mM MgCl2,3mM CaCl2)，注射至少二種不同濃度(範圍從390pM至67nM)的天然Fel d1 (Indoor Biotech,# NA-FD1-2)或重組的蛋白Fel d1(B-A)-mmH(SEQ ID NO：396)。Fel d1(B-A)-mmH係表現在中國倉鼠卵巢(CHO)細胞並包括Fel d1 B(登錄#P30440)之18-109胺基酸，與帶有C-端myc-myc-六聚組胺酸標籤之Fel d1 A(登錄#P30438)的23-92胺基酸線上融合。監看抗體-抗原結合3至5分鐘，及監看抗原從捕捉的單株抗體之解離(單獨於25℃流動的緩衝液中)10至15分鐘。使用Scrubber 2.0曲線擬合軟體，藉由處理數據並與1：1結合模型擬合，測定動力學結合(k a)和解離(k d)速率常數。從動力學速率常數計算結合之解離平衡常數(K D)和解離半衰期(t1/2)為：K D=k d/k a和t1/2=ln(2)/k d。不同抗-Fel d1單株抗體之結合參數係列於表3和表4中。表3係顯示25°時天然Fel d1與捕捉的抗-Fel d1單株抗體結合之Biacore親和力，而表4係顯示25°時重組的Fel d1與捕捉的抗-Fel d1單株抗體結合之Biacore親和力。
如表3所示，就與天然Fel d1結合，25個受試抗體中10個具有低於1nM之K D值，範圍從207pM至982pM。如表4所示，就與天然Fel d1結合，25個受試抗體中17個具有低於1nM之K D值，範圍從144pM至924pM。二種抗體，H4H2574B和H4H2793P，在這些實驗條件下係與重組的非天然之Fel d1結合。
Figure TW201803901AD00005
Figure TW201803901AD00006
Figure TW201803901AD00007
Figure TW201803901AD00008
實例5.與天然(n)Fel d1結合之抗-Fel d1抗體的交叉競爭
使用Octet Red生物感測器系統(Fortebio Inc.)進行一結合實驗，測定一組8個抗-Fel d1抗體與天然Fel d1(nFel d1；Indoor Biotechnologies,#NA-FD1-2)結合之交叉競爭。實驗係在25℃於含0.1mg/mL BSA之HBST緩衝液(0.01M HEPES pH7.4,0.15M NaCl,3mM EDTA,0.05% v/v Surfactant P20)中進行。在各結合步驟之間以HBST緩衝液進行一個清洗步驟，並在結合和清洗期間使用軌道盤式震盪器以1000rpm.攪動測定盤。將第一抗-Fel d1抗體(mAb-1)從10ug/mL之儲存溶液以2分鐘捕捉至抗-hFc生物感測器表面上(最終捕捉量~1.5nm反應單位)。然後將塗覆的感測頭以100ug/mL的非相關抗體之溶液阻斷5分鐘。然後將感測頭浸入含500nM之nFel d1的孔槽中5分鐘，及然後浸入含50ug/mL第二抗-Fel d1抗體(mAb-2)之溶液的孔槽中。該mAb-2係添加100ug/mL非相關抗體，用以將非專一性結合降至最低。就8x8抗體矩陣，係測量mAb-2與預先和mAb-1複合的nFel d1結合之結合反應(表5)。將mAb-2與不同mAb-1/Fel d1捕捉表面(表5之一整欄)之各結合值減去mAb-1/Fel d1/mAb-2自我競爭值(其中mAb-1=mAb-2；表5之對角線)。低於0.10nm之值係顯示mAb-1和mAb-2對Fel d1 上共同結合位置為交叉競爭。
H4H2636P、H4H1616N、H4H2645P和H4H2864P四種抗體，係雙向彼此競爭與nFel d1結合，但不與任何其他抗-Fel d1抗體競爭。H4H1232N和H4H2597P二種抗體係雙向彼此競爭與nFel d1結合。H4H1232N和H4H2597P係單向與H4H1300N競爭。與H4H1300N之雙向競爭無法測定，因為H4H1300N並未與nFel d1預先複合。H4H1238N不會和任何抗-Fel d1抗體競爭與nFel d1結合。
Figure TW201803901AD00009
實例6.活體內模型中被動皮膚過敏(PCA)之抗-Fel d1抗體的效應
活體模型中被動皮膚過敏(PCA)係用於評估活體中肥大細 胞去粒作用。此模型包括將一過敏原專一的抗血清以皮內注射至皮膚的局部區域，接著以靜脈內注射抗原和染劑。過敏反應造成微血管擴張並增加敏感位置的血管滲透性，導致染劑優先堆積在此位置。可從組織萃取出染劑並以光譜分光測量來定量。將外滲至經試驗抗血清敏感化之組織的染劑與外滲至經非相關抗血清敏感化的組織做比較。
抗血清係藉由將Balb/c小鼠以5μg由貓毛髮萃取物純化之天然的Fel d1蛋白(Indoor Biotechnologies,# LTN-FD1-1)、5μg粗花生過敏原萃取物(Greer Laboratories,# XPF171D3A25)或1250個生物等效過敏單位(BAU)之標準化貓毛髮萃取物(Greer Laboratories,#GTE3A01)之1mg/ml明礬(Pierce,# 77161)溶於1X磷酸緩衝食鹽水之溶液，使其免疫所產生。二週後(第14天)將敏感化小鼠以等同最初致免疫所用之過敏原劑量提高刺激。提高刺激二週後(第28天)，殺死小鼠並收集血清。以ELISA測定分離的抗血中總IgE濃度。最終的抗血清濃度係於1X磷酸緩衝食鹽水中稀釋成2400ng/mL IgE。
在以如上述所產生的抗血清使耳朵致敏化之前，除非另有指出，否則係先將各組Balb/c小鼠以皮下注射人類IgG4同型對照抗體、抗-Fel d1抗體或抗-Fel d1抗體組合物，對單點實驗為5mg/kg劑量(總抗體劑量，各抗體2.5mg/kg)，就劑量範圍實驗濃度範圍係從0.06mg/kg至2mg/kg，用以測定PCA模型中抗-Fel d1抗體對肥大細胞去粒化之效應。以抗體預處理後三天，將一組小鼠(「天然Fel d1組」)以皮內分別注射10μl的天然Fel d1-衍生的抗血清或10μ的花生-衍生的抗血清(陰性對照)至右耳和左耳，使其致敏化。第二組小鼠(「貓萃取物組」)係以20μL的貓毛髮萃取物-衍生的抗血清或20μL花生-衍生的抗血清(陰性對照)分別注射至各小鼠的右耳和左耳，使其致敏化。致敏化後24小時，將天然Fel d1組之小鼠以靜脈注射(每隻小鼠100μL)0.25μg/mL溶於含0.5%(w/v)依凡氏藍色染劑(Sigma,# E2129)之1X磷酸緩衝食鹽水的天然Fel d1(Indoor Biotechnologies,# LTN-FD1-1)溶液挑戰。同樣地，致敏化後24小時，將貓萃取物組之小鼠以250BAU溶於含0.5%(w/v)依凡氏藍色染劑(Sigma,# E2129)之1X磷酸緩衝食鹽水的標準貓毛髮萃取物[標準貓毛髮萃取物(Greer Laboratories,#GTE3A01)]挑戰。抗原挑戰後一小時，割除耳朵並置於1mL甲醯胺中，於56℃培養3天，以便從組織萃取依凡氏藍色染劑(Evan’s blue dye)。然後從甲醯胺中移出耳朵組織，吸除過量的液體並秤重。將200毫升等份的各甲醯胺萃取液以雙重複轉置於9孔盤。以620nm測量所生成的上清液之吸收度。使用標準曲線將OD轉變為依凡氏藍色染劑濃度。就經同型對照抗體處理之組別，計算外滲至抗血清-致敏化耳朵之依凡氏藍色染劑的平均濃度(以耳朵組織重量正常化)並定義為F(同型，平均)。藉由從F(同型，平均)減去抗體-處理組的Fel d1或萃取物致敏化耳朵之依凡氏藍色染劑之量[定義為F(mAb,i)]，計算每隻小鼠因抗體預處理所造成的依凡氏藍色染劑降低量。然後將此數除以F(同型，平均)和抗體-處理組的花生致敏化耳朵之染劑量[P(mAb,i)]間的差，並乘以100，得到各小鼠之染劑外滲的總降低百分比(降低%)。
降低%(每隻小鼠)=100*[F(同型，平均)-F(mAb,i)]/[F(同型，平均)-P(mAb,i)]
然後計算各抗體組之染劑外滲的平均降低百分比。結果，以依凡氏藍(Evan’s blue)降低之百分比表示(平均±SD)，天然Fel d1組係如表6和表7所示，而貓毛髮萃取組係如表8所示。
如表6所示，來自天然Fel d1組的七組小鼠，當以固定濃度之抗-Fel d1抗體的特定組合物處理時，相較於接受對照抗體之小鼠，展現範圍從79%至103%的染劑外滲降低。經H4H2590S/H4H1238N、H4H2590S/H4H2574P或H4H1232N/H4H1616N成對抗體組合物處理之小 鼠，相較於接受對照抗體之小鼠，展現小於3%的染劑外滲降低，其驗證在此模型中並非所有的受試抗-Fel d1抗體皆為有效的。
此外，以天然Fel d1組之小鼠進行一劑量範圍實驗，如表7所示。單一抗體，就受試劑量，在降低染劑外滲上並不如抗-Fel d1抗體組合物有效。
多重劑量之特定抗-Fel d1抗體對(H4H2636P和H4H1232N)，以及單一(最高)劑量之各自這些抗-Fel d1抗體單獨，係使用以貓毛髮萃取物致敏化和挑戰之小鼠於PCA模型中進一步試驗，如表8所示。於2mg/kg時，這些單一抗-Fel d1抗體單獨在降低染劑外滲上並不如二種抗體之組合有效。H4H2636P和H4H1232N之組合在2mg/kg和1mg/kg時，於使用貓毛髮萃取物作為抗原之PCA模型中，相較同型對照組降低染劑外滲大於90%。
如藉由二因子ANOVA以貝氏(Bonferroni’s)事後檢定所測定，所有相較於同型對照組為統計上顯著之降低(p<0.05)，係以星號(*)標記。每組(n)所用的小鼠數目在表中係標示於括號內。
Figure TW201803901AD00010
Figure TW201803901AD00011
Figure TW201803901AD00012
Figure TW201803901AD00013
實例7.在活體模型中抗-Fel d1抗體於肺發炎之效應
活體內小鼠模型之肺發炎係用來評估過敏原引起的肺發炎和可能與氣喘或鼻結膜炎有關的黏液堆積。此模型包括重複將過敏原以鼻內投予至先前經過敏原-致敏化之小鼠中。過敏原-有關的發炎可造成肺黏液、嗜酸性細胞遷移至肺、血清總IgE和過敏原專一性IgG1之量增加。
將Balb/c小鼠由腹膜內以1ug從貓毛髮萃取物純化之天然Fel d 1蛋白(Indoor Biotechnologies,#LTN-FD1-1)之溶於1X磷酸緩衝食鹽水的1mg/mL明礬(Pierce,# 77161)溶液使其免疫。七天後，將致敏化小鼠由腹膜內以1ug天然Fel d 1蛋白(Indoor Biotechnologies,#LTN-FD1-1)之溶於1X磷酸緩衝食鹽水的1mg/mL明礬加強免疫。於第17、21和25天，將各組小鼠(n=5)以皮下注射20mg/kg(總抗體劑量)之人類IgG4同型對照抗體或 1：1的抗-Fel d1抗體組合物H4H1232N和H4H2636P。在第20、24和28天，將小鼠由鼻內以0.05ug稀釋於20uL之1X磷酸緩衝食鹽水的天然Fel d1挑戰。對照組小鼠係在同一天以20uL之1X磷酸緩衝食鹽水挑戰。在第32天，將所有的小鼠殺死並收取其肺葉。各組小鼠之實驗給劑和處理方法係如表9所示。
使用裝有附屬針之27G1/2 1mL TB注射器(Becton Dickinson,#309306)，經由末端心穿刺收集各小鼠之血清樣本，用以測定小鼠血清中循環的總IgE和Fel d1專一性IgG1。將血液樣本置入BD microtainer®血清分離試管(Becton Dickinson,#365956)，離心及然後將血清轉置於新的試管中儲存直到分析。
根據製造商的說明使用三明治ELISA OPTEIA套組(BD Biosciences,#555248)，測定各小鼠之血清樣本中的總IgE濃度。將血清樣本稀釋並以塗覆在96孔盤之抗-IgE捕捉抗體培養。以生物素抗-小鼠IgE第二抗體偵測總IgE。使用經純化的辣根過氧化酶(HRP)-標定之小鼠IgE作為標準。使用發色團3,3’,5,5’-四甲基聯苯胺(TMB)(BD OPTEIA基質式劑套組，BD,#555214)偵測HRP活性。然後加入1M硫酸之停止溶液，並以450nm於Molecular Devices SpectraMax M5盤勢判讀儀上測量吸收度。使用PrismTM軟體進行數據分析。各實驗組之血清中循環的IgE平均量係以ng/mL表示(±SEM)，如表10所示。由鼻內以Fel d1挑戰的小鼠，當以抗-Fel d1抗體組合物處理時，相較於接受同型對照抗體之小鼠[14080(±1505)ng/mL]，顯現循環的IgE顯著減少[6683(±1394)ng/mL]。
利用ELISA測定各小鼠之血清樣本中Fel d1專一性IgG1的量。將塗覆Fel d1的測定盤以一連續稀釋的小鼠血清樣本培養，接著以抗-小鼠IgG1-HRP接合抗體(BD Biosciences,# 559626)培養。所有的樣本係以TMB溶液展開和如上所述作分析。血清中循環的IgG1之相對量係以效 價單位表示(效價單位係藉由將所測量的OD乘以達到OD450大於二倍背景所需之稀釋倍數來計算)。各實驗組之血清中平均循環的Fel d 1-專一性IgG1之量係以效價x 103(±SEM)來表示，如表11所示。由鼻內以Fel d1挑戰的小鼠，當以抗-Fel d1抗體組合物處理時，相較於接受同型對照抗體之小鼠[效價526.1(±144.0)x103]，顯現血清中Fel d1-專一性IgG1之量顯著減少[效價105.3(±31.33)x103]。
收取肺葉供細胞浸潤分析：
放血後，將各小鼠之右肺葉移出並置於含杜氏修飾伊格培養基(Dulbecco’s Modified Eagle Medium)(DMEM)(Irvine Scientific,#9033)之小培養皿中，切成大小約2至3mm之方塊。然後該等方塊轉置於含20μg/mL DNA酶(Roche,#10104159001)和0.7U/mL釋放酶TH(Roche,#05401151001)，經漢克平衡鹽溶液(HBSS)(Gibco,#14025)稀釋之溶液的試管中，並置於37℃水浴中以每5分鐘窩流進行20分鐘。然後加入最終濃度10mM之乙二胺四乙酸(EDTA)(Gibco,#15575)停止此反應。將各肺葉搗碎，經由70μm過濾器過濾，離心及然後將肺小團懸浮於4mL的ACK解離緩衝液(Gibco,#10492)中，以移除紅血球。於室溫培養3分鐘後，加入DMEM使ACK緩衝液去除活性。將細胞懸浮液離心，及然後將細胞團懸浮於10mL的MACS緩衝溶液[Miltenyi auto MACS沖洗溶液(Militenyi Biotec,#130-091-222)和MACS BSA(Militenyi Biotec,#130-091-376)之混合物]。將再懸浮的樣本經由70μm過濾器過濾並將1x106個細胞置入96-孔V-底之測定盤中。然後將細胞離心並將團塊於40℃再懸浮於經MACS緩衝液稀釋之純化的大鼠抗-小鼠CD16/CD32 Fc Block(BD Biosciences Clone：2.4G2,#553142)歷時15分鐘。將細胞清洗二次及然後以經MACS緩衝液稀釋之適當的抗體混合物(如表12所述)，於4℃避光培養30分鐘。 抗體培養後，將細胞以MACS緩衝液清洗二次並於4℃同時避光再懸浮於BD cytofix(BD Biosciences,#554655)歷時15分鐘。清洗細胞，再懸浮於MACS緩衝液中及然後轉置於BD FACS試管(BD Biosciences,#352235)，以流式細胞儀分析嗜酸性細胞。嗜酸性細胞係定義為CD45+、GR1-、CD11clo、SiglecFhi之細胞。數據係於表13中以CD45+細胞中之嗜酸性細胞頻率來表示。
由鼻內以Fel d1挑戰的小鼠，當以抗-Fel d1抗體組合物處理時，相較於未接受抗體之小鼠(67%降低)或接受同型對照抗體之小鼠(46%降低)，顯現CD45+細胞中嗜酸性細胞頻率顯著減少，如表13所示。
收取肺葉供組織學分析：
放血後，將左肺葉移出並置於含有5mL的4%(w/v)多聚甲醛(Boston Bioproducts,# BM-155)之1X磷酸緩衝食鹽水溶液的試管中並於室溫儲存3天。然後將肺樣本吸乾及轉置於含70%酒精之試管進行組織學分析。將樣本送到Histoserv公司(Germantown,MD)進行切片和過碘酸雪夫氏(PAS)染色。
以Zeiss AxioCam MRc相機，使用Zeiss Axioplan 2造影光顯微鏡得到各PAS-染色的肺切片之全區大約35個數位影像。然後由較小影像建構全肺影像並使用ImageJ軟體在顏色閥插件的輔助下分析。經由使用者選擇顏色閥值鑑別和定量支氣管腔中黏液堆積之區域，並正常化至以分開的顏色閥值設定鑑別和定量之管腔的整個區域。各肺被黏液堆積所佔據的支氣管腔百分比係以[(年液面積/管腔面積)x 100]表示並就各治療組做計算。結果，以平均肺阻塞百分比(±SEM)表示，係如表14所示。
在肺發炎模型中，以抗-Fel d1抗體組合物治療之小鼠，相較於接受對照抗體之小鼠(10.81+/-1.13%黏液堆積)，展現肺支氣管中黏液堆 積減少之傾向(5.21+/-0.81%黏液堆積)，如表14所示。各小鼠組別間，並未觀察到支氣管腔大小或整個肺大小之差異。
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實例8.氫-氘交換之表位定位
為了測定由二種抗-Fel d1抗體所辨識之Fel d1的表位(由Fel d1 A鏈和FELD1 B鏈所組成的異源二聚蛋白)，係就各抗體與Fel d1共複合進行氫-氘(H/D)交換之研究。在H/D交換實驗之前，將由Feld1 B鏈(GenBank accession number NP_001041619.1)之18-109胺基酸與FELD1 A(GenBank accession #NP_001041618.1)之19-88胺基酸線上融合，以C-端myc-myc-六聚組胺酸標籤和以D27G突變表現(Fel d1B-A-mmH；SEQ ID：396)所組成的CHO細胞-表現重組Fel d1於37℃，在天然條件下使用PNG酶F(New England BioLabs,#0704)去糖基化4小時。就此研究，係將二種抗-FELD1抗體(H4H1232N和H4H2636P)與N-羥基琥珀亞醯胺(NHS)瓊脂糖微珠(GE Lifescience,#17-0906-01)根據製造商的方法共價連接。
為了定位由H4H1232N所辨識的Fel d1B-A-mmH結合表位，係進行二組H/D交換實驗(所有結合和交換反應係在室溫中進行)。第一個實驗係使用「溶液中交換/微珠中脫離(on-solution/off-beads)」模式」(於溶液中交換，接著於微珠中脫離交換)。就交換而言，係將去糖基化Fel d1B-A-mmH蛋白於D2O(PBS-D)所製備之pH 7.4的PBS緩衝液中氘化5和10分鐘，及然後於PBS-D中培養2分鐘與H4H1232N微珠結合。然後將Fel d1B-A-mmH-與H4H1232N微珠結合之共複合物以水H2O所製備之pH 7.4的PBS緩衝液(PBS-H)清洗並於PBS-H中並培養半個交換時間(脫離交換)，僅讓藉由與H4H1232N抗體結合而受保護之Fel d1B-A-mmH上的表位仍為氘化的。在脫離交換後，使用冰冷的0.1%三氟乙酸(TFA)水溶液將結合的Fel d1B-A-mmH由微珠中溶離出。然後將溶離的Fel d1B-A-mmH以固定化胃蛋白酶(Thermo Scientific,#20343)於4℃消化5分鐘。將生成的胜肽於4℃使用ZipTip®層析吸量管頭(Millipore,#ZTC18S096)根據製造商的方法分離，及然後立即以UltrafleXtreme基質輔助雷射脫附離子化-飛行時間(MALDI-TOF)-TOF質譜儀(MS)分析。
第二個實驗係稱為「微珠中交換/微珠中脫離(on-beads/off-beads)」(於微珠中交換，接著於微珠中脫離交換)。就此實驗，係讓去糖基化的Fel d1B-A-mmH先與H4H1232N微珠結合，及然後於PBS-D中培養5或10分鐘(以分開的子實驗)使其進行交換。如上「溶液中進行/微珠中脫離(on-solution/off-beads)」程序中所述，進行後續步驟(脫離交換、胃蛋白酶消化和MS分析)。計算所有偵測到的胜肽之質心值或平均質量-對-電荷比率，並比較溶液中交換/微珠中脫離和微珠中交換/微珠中脫離實驗。相較於微珠中交換/微珠中脫離程序，在溶液中交換/微珠中脫離程序後顯現質量增加之胜肽，包括因抗體結合而免於交換之Fel d1蛋白內的胺基酸，且因此顯露出結合表位區域。
使用上述H4H1232N相同的程序進行Fel d1B-A-mmH與抗-Fel d1抗體H4H2636P結合之H/D交換實驗，但以H4H2636P微珠取代H4H1232N微珠。
在Fel d1B-A-mmH與H4H1232N之H/D交換實驗中，所偵測的所有胜肽之質心m/z值的比較係如表15所示。這些胜肽係以液相層析-基質輔助雷射脫附離子化(LC-MALDI)MS來鑑別。對「溶液中交換/微珠中脫離」和「微珠中交換/微珠中脫離」二個方法，就各自二種不同的進行-交換和脫離-交換時間，大部份的胃酶肽得到類似的中心質量-對-電荷比率(差異<0.3 m/z單位)。然而，含Fel d1B-A-mmH(SEQ ID NO：396)之85-103、85-104至113-127胺基酸的三種胜肽，在5分鐘和10分鐘的二個實驗中具有>0.3的m/z質心值差異。這些溶液中交換/微珠中脫離和微珠中交換/微珠中脫離方法間的質心值差異，在表15中係以黑體字標示出。因為另外的胜肽SEQ ID NO：396之117-127胺基酸，在脫離交換後並未顯示氘核保留，所以在113-127胜肽中免於交換之區域可減少至SEQ ID NO：396的113-116殘基。85-104殘基(SEQ ID NO：403)和113-116殘基(SEQ ID NO：426)此 二個區域，在進行-交換後因H4H1232N與Fel d1B-A-mmH結合而免於完全脫離-交換。因此，這二個片段係藉由H/D交換定義為抗體H4H1232N與Fel d1B-A-mmH蛋白結合之非連續表位。
在Fel d1B-A-mmH與H4H2636P複合之H/D交換實驗中，所偵測的胜肽之質心m/z值的比較係如表16所示。僅有一胜肽，FELD1B-A-mmH之15-24胺基酸，相較於微珠中交換/微珠中脫離之條件，就溶液中交換/微珠中脫離條件顯現質心m/z值增加>0.3，其顯示此片段係藉由與H4H2636P結合而免於完全脫離-交換。大於0.3 m/z之質心值差異，在表16中係以黑體字標示出。因此，在此15-24區域內的胺基酸(SEQ ID NO：412)基於H/D交換法，係包括抗體H4H2636P與Fel d1B-A-mmH蛋白結合之表位。
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實例9.產生雙專一性抗體 製造Fel d1雙專一性抗體之說明
使用標準方法建構包括來自特定本發明所述之抗-Fel d1抗體對之重鏈和輕鏈結合區的雙專一性抗體。用於建構本實例之雙專一性抗體之抗-Fel d1抗體係以初級免疫原，例如全長天然的Fel d1，其可從市面上購得(例如來自Indoor Biotechnologies,#LTN-FD1-1)，或以多步驟管柱層析由貓毛髮或皮屑中分離(參見，例如Chapman MD，等人(1988),J.Immunol.140：812-818)，或其可以重組產生(參見，基因銀行登錄號P30438或NP_001041618.1為Fel d1之1鏈的全長胺基酸序列(亦稱為A鏈或FELD1 A；亦參見SEQ ID NO：392)及基因銀行登錄號P30440或NP_001041619.1為Fel d1之2鏈的全長胺基酸序列(亦稱為B鏈或FELD B；亦參見SEQ ID NO：393)或1鏈或2鏈之片段，或來自Fel d1蛋白之1鏈和2鏈二者之片段，使VelocImmune®小鼠免疫，接著以第二免疫原或以天然蛋白之面疫活性片段致免疫所得來。在一實施例中，所用的免疫原係以SEQ ID NO：394作為示例(與Fel d1 2鏈-1鏈-mFc線上融合)或SEQ ID NO：395(使用連接子和2鏈-mFc與Fel d1 1鏈融合)。
依照本發明實例所產生的雙專一性抗體係包括二個抗原-結合區(亦即結合臂1和2)。
稱為H4H3467D之一雙專一性抗體，係包括在Fab二臂上 之普通κ輕鏈，其係衍生自抗體H4H2864P(SEQ ID NO：378)。H4H3467D之一Fab臂係利用抗體H4H2864P(SEQ ID NO：370)之重鏈可變區(VH)，而另一Fab臂係利用H4H1232N(SEQ ID NO：18)之VH區。
本發明之第二雙專一性抗體，稱為H4H8751D，係包括在二Fab臂上之普通κ輕鏈，其係衍生自抗體H4H2636P(SEQ ID NO：314)。H4H8751D之一Fab臂係利用H4H2636P(SEQ ID NO：306)之VH區，而另一Fab臂係利用H4H1232N(SEQ ID NO：18)之VH區。
下表17係提供根據實例9所製造之二種雙專一性抗體的抗原結合區的組成構件。衍生自親代抗體之各種重鏈和輕鏈可變區的胺基酸序列識別碼(用於製備雙專一性抗體)亦提供於表17中。
Figure TW201803901AD00026
下表18A和18B係說明二種文中所述之雙專一性抗體之各種重鏈可變區(Table 18A)和輕鏈可變區(Table 18B)的胺基酸序列識別碼及其對應的互補決定區序列(CDR)。
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Figure TW201803901AD00029
以雙專一性抗體之Biacore分析測定結合和解離值
與純化的抗-Fel d1單專一性抗體和雙專一性抗體結合之天然Fel d1(下文稱為nFel d1)的結合和解離速率常數(分別為k a和k d)、平衡解離常數和解離半衰期(分別為K D和t1/2)係使用即時表面電漿子共振生物感測器分析於Biacore 2000儀器上測定。在一CM5晶片上，使用EDC-NHS化學，以單株小鼠抗-人類Fc抗體(GE,# BR-1008-39)衍生Biacore感測表面，用以捕捉抗-Fel d1單專一性和雙專一性抗體。所有的Biacore結合研究係於25℃在HBSP+電泳緩衝液中(0.01M HEPES pH 7.4,0.15M NaCl,3mM CaCl2,3mM MgCl2,0.05% v/v Surfactant P20)進行。將於HBSP+電泳緩衝液中所製備之不同濃度的nFel d1(Indoor Biotech,# NA-FD1-2)(範圍從600nM至2.34nM,6-倍稀釋)以50μL/min之流速注射於抗-Fel d1抗體捕捉表面上。監看nFel d1與捕捉的單株抗體之結合計4分鐘及監看nFel d1於HBSP+電泳緩衝液中之解離計7分鐘。以質量轉移限制，使用Scrubber 2.0曲線擬 合軟體，藉由將即時感應圖與1：1結合模型擬合，測定動力學結合(k a)和解離(k d)速率常數。然後從動力學速率常數計算結合之解離平衡常數(K D)和解離半衰期(t1/2)為：K D=k d/k a及t½(min)=[ln2/(60*k d)]。
於25℃時nFel d1與不同抗-Fel d1單專一性和雙專一性抗體結合之結合動力學係如表19所示。三種單專一性抗-Fel d1抗體係以範圍從155pM至1.6nM之K D值與nFel d1結合。二種雙專一性抗-Fel d1抗體H4H3467D和H4H8751D，分別係以範圍從250pM和34pM之K D值與nFel d1結合。
Figure TW201803901AD00030
將這些抗體與同型對照抗體於PCA活體內模型中使用天然Fel d1進行如前述之致敏化和挑戰(參見實例6)，用以測定抗-Fel d1雙專一性抗體與其單專一性親代抗體相比較之活體內效用。此研究之抗體係以1mg/kg總抗體濃度(當同時投予二種抗體時，使用各0.5mg/kg之抗體)來投予，每一實驗組使用8隻小鼠。以染劑外滲降低百分比±SD表示之各實驗組數據係如表20所示。
單專一性抗體H4H1232N和H4H2864P分別造成67(±26)%及81(±26)%之染劑外滲降低。單專一性抗體H4H1232N和H4H2864P之 組合造成98(±3.5)%之染劑外滲降低，而由單專一性抗體H4H1232N和H4H2864P所組成的雙專一性抗體H4H3467D造成93(±11)%之染劑外滲降低。
在另外的實驗中，單專一性抗體H4H1232N和H4H2636P分別造成64(±33)%和8.7(±79)%之染劑外滲降低。單專一性抗體H4H1232N和H4H2636P之組合造成90(±15)%之染劑外滲降低，而由單專一性抗體H4H1232N和H4H2636P所組成之雙專一性抗體H4H8751D造成77(±20)%之染劑外滲降低。
Figure TW201803901AD00031
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 34
Figure TW201803901AD00069
<210> 35
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 35
Figure TW201803901AD00070
<210> 36
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 36
Figure TW201803901AD00071
<210> 37
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 37
Figure TW201803901AD00072
<210> 38
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 38
Figure TW201803901AD00073
<210> 39
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 39
Figure TW201803901AD00074
<210> 40
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 40
Figure TW201803901AD00075
<210> 41
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 41
Figure TW201803901AD00076
Figure TW201803901AD00077
<210> 42
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 42
Figure TW201803901AD00078
<210> 43
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 43
Figure TW201803901AD00079
<210> 44
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 44
Figure TW201803901AD00080
<210> 45
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 45
Figure TW201803901AD00081
<210> 46
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 46
Figure TW201803901AD00082
<210> 47
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 47
Figure TW201803901AD00083
<210> 48
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 48
Figure TW201803901AD00084
<210> 49
<211> 381
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 49
Figure TW201803901AD00085
<210> 50
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 50
Figure TW201803901AD00086
<210> 51
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 51
Figure TW201803901AD00087
<210> 52
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 52
Figure TW201803901AD00088
<210> 53
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 53
Figure TW201803901AD00089
<210> 54
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 54
Figure TW201803901AD00090
<210> 55
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 55
Figure TW201803901AD00091
<210> 56
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 56
Figure TW201803901AD00092
<210> 57
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 57
Figure TW201803901AD00093
<210> 58
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 58
Figure TW201803901AD00094
<210> 59
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 59
Figure TW201803901AD00095
<210> 60
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 60
Figure TW201803901AD00096
<210> 61
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 61
Figure TW201803901AD00097
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<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 62
Figure TW201803901AD00098
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<211> 27
<212> DNA
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<220>
<223> 合成的
<400> 63
Figure TW201803901AD00099
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 64
Figure TW201803901AD00100
Figure TW201803901AD00101
<210> 65
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 65
Figure TW201803901AD00102
<210> 66
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 66
Figure TW201803901AD00103
<210> 67
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 67
Figure TW201803901AD00104
<210> 68
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 68
Figure TW201803901AD00105
<210> 69
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 69
Figure TW201803901AD00106
<210> 70
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 70
Figure TW201803901AD00107
<210> 71
<211> 48
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 71
Figure TW201803901AD00108
<210> 72
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 72
Figure TW201803901AD00109
<210> 73
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 73
Figure TW201803901AD00110
<210> 74
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 74
Figure TW201803901AD00111
<210> 75
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 75
Figure TW201803901AD00112
<210> 76
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 76
Figure TW201803901AD00113
<210> 77
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 77
Figure TW201803901AD00114
<210> 78
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 78
Figure TW201803901AD00115
<210> 79
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 79
Figure TW201803901AD00116
<210> 80
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 80
Figure TW201803901AD00117
<210> 81
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 81
Figure TW201803901AD00118
<210> 82
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 82
Figure TW201803901AD00119
Figure TW201803901AD00120
<210> 83
<211> 24
<212> DNA
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<220>
<223> 合成的
<400> 83
Figure TW201803901AD00121
<210> 84
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 84
Figure TW201803901AD00122
<210> 85
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 85
Figure TW201803901AD00123
<210> 86
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 86
Figure TW201803901AD00124
<210> 87
<211> 48
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 87
Figure TW201803901AD00125
<210> 88
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 88
Figure TW201803901AD00126
<210> 89
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 89
Figure TW201803901AD00127
<210> 90
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 90
Figure TW201803901AD00128
Figure TW201803901AD00129
<210> 91
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 91
Figure TW201803901AD00130
<210> 92
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 92
Figure TW201803901AD00131
<210> 93
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 93
Figure TW201803901AD00132
<210> 94
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 94
Figure TW201803901AD00133
<210> 95
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 95
Figure TW201803901AD00134
<210> 96
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 96
Figure TW201803901AD00135
<210> 97
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 97
Figure TW201803901AD00136
<210> 98
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 98
Figure TW201803901AD00137
Figure TW201803901AD00138
<210> 99
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 99
Figure TW201803901AD00139
<210> 100
<211> 8
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 100
Figure TW201803901AD00140
<210> 101
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 101
Figure TW201803901AD00141
<210> 102
<211> 7
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 102
Figure TW201803901AD00142
<210> 103
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 103
Figure TW201803901AD00143
<210> 104
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 104
Figure TW201803901AD00144
<210> 105
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 105
Figure TW201803901AD00145
<210> 106
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 106
Figure TW201803901AD00146
Figure TW201803901AD00147
<210> 107
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 107
Figure TW201803901AD00148
<210> 108
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 108
Figure TW201803901AD00149
<210> 109
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 109
Figure TW201803901AD00150
<210> 110
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 110
Figure TW201803901AD00151
<210> 111
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 111
Figure TW201803901AD00152
<210> 112
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 112
Figure TW201803901AD00153
<210> 113
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 113
Figure TW201803901AD00154
<210> 114
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 114
Figure TW201803901AD00155
<210> 115
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 115
Figure TW201803901AD00156
<210> 116
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 116
Figure TW201803901AD00157
<210> 117
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 117
Figure TW201803901AD00158
<210> 118
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 118
Figure TW201803901AD00159
<210> 119
<211> 48
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 119
Figure TW201803901AD00160
<210> 120
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 120
Figure TW201803901AD00161
<210> 121
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 121
Figure TW201803901AD00162
<210> 122
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 122
Figure TW201803901AD00163
<210> 123
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 123
Figure TW201803901AD00164
<210> 124
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 124
Figure TW201803901AD00165
<210> 125
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 125
Figure TW201803901AD00166
<210> 126
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 126
Figure TW201803901AD00167
<210> 127
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 127
Figure TW201803901AD00168
<210> 128
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 128
Figure TW201803901AD00169
<210> 129
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 129
Figure TW201803901AD00170
Figure TW201803901AD00171
<210> 130
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 130
Figure TW201803901AD00172
<210> 131
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 131
Figure TW201803901AD00173
<210> 132
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 132
Figure TW201803901AD00174
<210> 133
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 133
Figure TW201803901AD00175
<210> 134
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 134
Figure TW201803901AD00176
<210> 135
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 135
Figure TW201803901AD00177
<210> 136
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 136
Figure TW201803901AD00178
<210> 137
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 137
Figure TW201803901AD00179
<210> 138
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 138
Figure TW201803901AD00180
<210> 139
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 139
Figure TW201803901AD00181
<210> 140
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 140
Figure TW201803901AD00182
<210> 141
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 141
Figure TW201803901AD00183
<210> 142
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 142
Figure TW201803901AD00184
<210> 143
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 143
Figure TW201803901AD00185
<210> 144
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 144
Figure TW201803901AD00186
<210> 145
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 145
Figure TW201803901AD00187
<210> 146
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 146
Figure TW201803901AD00188
<210> 147
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 147
Figure TW201803901AD00189
<210> 148
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 148
Figure TW201803901AD00190
<210> 149
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 149
Figure TW201803901AD00191
<210> 150
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 150
Figure TW201803901AD00192
<210> 151
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 151
Figure TW201803901AD00193
<210> 152
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 152
Figure TW201803901AD00194
<210> 153
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 153
Figure TW201803901AD00195
<210> 154
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 154
Figure TW201803901AD00196
<210> 155
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 155
Figure TW201803901AD00197
<210> 156
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 156
Figure TW201803901AD00198
<210> 157
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 157
Figure TW201803901AD00199
<210> 158
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 158
Figure TW201803901AD00200
<210> 159
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 159
Figure TW201803901AD00201
<210> 160
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 160
Figure TW201803901AD00202
<210> 161
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 161
Figure TW201803901AD00203
<210> 162
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 162
Figure TW201803901AD00204
<210> 163
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 163
Figure TW201803901AD00205
<210> 164
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 164
Figure TW201803901AD00206
<210> 165
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 165
Figure TW201803901AD00207
<210> 166
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 166
Figure TW201803901AD00208
<210> 167
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 167
Figure TW201803901AD00209
<210> 168
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 168
Figure TW201803901AD00210
<210> 169
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 169
Figure TW201803901AD00211
<210> 170
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 170
Figure TW201803901AD00212
<210> 171
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 171
Figure TW201803901AD00213
<210> 172
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 172
Figure TW201803901AD00214
<210> 173
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 173
Figure TW201803901AD00215
<210> 174
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 174
Figure TW201803901AD00216
<210> 175
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 175
Figure TW201803901AD00217
<210> 176
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 176
Figure TW201803901AD00218
<210> 177
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 177
Figure TW201803901AD00219
<210> 178
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 178
Figure TW201803901AD00220
<210> 179
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 179
Figure TW201803901AD00221
<210> 180
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 180
Figure TW201803901AD00222
<210> 181
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 181
Figure TW201803901AD00223
<210> 182
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 182
Figure TW201803901AD00224
<210> 183
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 183
Figure TW201803901AD00225
<210> 184
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 184
Figure TW201803901AD00226
<210> 185
<211> 315
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 185
Figure TW201803901AD00227
<210> 186
<211> 105
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 186
Figure TW201803901AD00228
Figure TW201803901AD00229
<210> 187
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 187
Figure TW201803901AD00230
<210> 188
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 188
Figure TW201803901AD00231
<210> 189
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 189
Figure TW201803901AD00232
<210> 190
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 190
Figure TW201803901AD00233
<210> 191
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 191
Figure TW201803901AD00234
<210> 192
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 192
Figure TW201803901AD00235
<210> 193
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 193
Figure TW201803901AD00236
<210> 194
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 194
Figure TW201803901AD00237
Figure TW201803901AD00238
<210> 195
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 195
Figure TW201803901AD00239
<210> 196
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 196
Figure TW201803901AD00240
<210> 197
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 197
Figure TW201803901AD00241
<210> 198
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 198
Figure TW201803901AD00242
Figure TW201803901AD00243
<210> 199
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 199
Figure TW201803901AD00244
<210> 200
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 200
Figure TW201803901AD00245
<210> 201
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 201
Figure TW201803901AD00246
<210> 202
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 202
Figure TW201803901AD00247
Figure TW201803901AD00248
<210> 203
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 203
Figure TW201803901AD00249
<210> 204
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 204
Figure TW201803901AD00250
<210> 205
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 205
Figure TW201803901AD00251
<210> 206
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 206
Figure TW201803901AD00252
<210> 207
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 207
Figure TW201803901AD00253
<210> 208
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 208
Figure TW201803901AD00254
<210> 209
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 209
Figure TW201803901AD00255
<210> 210
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 210
Figure TW201803901AD00256
<210> 211
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 211
Figure TW201803901AD00257
<210> 212
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 212
Figure TW201803901AD00258
<210> 213
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 213
Figure TW201803901AD00259
<210> 214
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 214
Figure TW201803901AD00260
<210> 215
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 215
Figure TW201803901AD00261
<210> 216
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 216
Figure TW201803901AD00262
<210> 217
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 217
Figure TW201803901AD00263
<210> 218
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 218
Figure TW201803901AD00264
<210> 219
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 219
Figure TW201803901AD00265
<210> 220
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 220
Figure TW201803901AD00266
<210> 221
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 221
Figure TW201803901AD00267
<210> 222
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 222
Figure TW201803901AD00268
<210> 223
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 223
Figure TW201803901AD00269
<210> 224
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 224
Figure TW201803901AD00270
<210> 225
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 225
Figure TW201803901AD00271
<210> 226
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 226
Figure TW201803901AD00272
<210> 227
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 227
Figure TW201803901AD00273
<210> 228
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 228
Figure TW201803901AD00274
<210> 229
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 229
Figure TW201803901AD00275
<210> 230
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 230
Figure TW201803901AD00276
<210> 231
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 231
Figure TW201803901AD00277
<210> 232
<211> 13
<212> PRw
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 232
Figure TW201803901AD00278
<210> 233
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 233
Figure TW201803901AD00279
Figure TW201803901AD00280
<210> 234
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 234
Figure TW201803901AD00281
<210> 235
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 235
Figure TW201803901AD00282
<210> 236
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 236
Figure TW201803901AD00283
<210> 237
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 237
Figure TW201803901AD00284
<210> 238
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 238
Figure TW201803901AD00285
<210> 239
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 239
Figure TW201803901AD00286
<210> 240
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 240
Figure TW201803901AD00287
<210> 241
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 241
Figure TW201803901AD00288
<210> 242
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 242
Figure TW201803901AD00289
<210> 243
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 243
Figure TW201803901AD00290
<210> 244
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 244
Figure TW201803901AD00291
<210> 245
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 245
Figure TW201803901AD00292
<210> 246
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 246
Figure TW201803901AD00293
<210> 247
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 247
Figure TW201803901AD00294
<210> 248
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 248
Figure TW201803901AD00295
<210> 249
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 249
Figure TW201803901AD00296
<210> 250
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 250
Figure TW201803901AD00297
<210> 251
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 251
Figure TW201803901AD00298
<210> 252
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 252
Figure TW201803901AD00299
<210> 253
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 253
Figure TW201803901AD00300
<210> 254
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 254
Figure TW201803901AD00301
<210> 255
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 255
Figure TW201803901AD00302
<210> 256
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 256
Figure TW201803901AD00303
<210> 257
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 257
Figure TW201803901AD00304
<210> 258
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 258
Figure TW201803901AD00305
<210> 259
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 259
Figure TW201803901AD00306
<210> 260
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 260
Figure TW201803901AD00307
<210> 261
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 261
Figure TW201803901AD00308
<210> 262
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 262
Figure TW201803901AD00309
<210> 263
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 263
Figure TW201803901AD00310
<210> 264
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 264
Figure TW201803901AD00311
<210> 265
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 265
Figure TW201803901AD00312
<210> 266
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 266
Figure TW201803901AD00313
<210> 267
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 267
Figure TW201803901AD00314
<210> 268
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 268
Figure TW201803901AD00315
<210> 269
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 269
Figure TW201803901AD00316
<210> 270
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 270
Figure TW201803901AD00317
<210> 271
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 271
Figure TW201803901AD00318
<210> 272
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 272
Figure TW201803901AD00319
<210> 273
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 273
Figure TW201803901AD00320
<210> 274
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 274
Figure TW201803901AD00321
<210> 275
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 275
Figure TW201803901AD00322
<210> 276
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 276
Figure TW201803901AD00323
<210> 277
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 277
Figure TW201803901AD00324
<210> 278
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 278
Figure TW201803901AD00325
<210> 279
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 279
Figure TW201803901AD00326
<210> 280
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 280
Figure TW201803901AD00327
<210> 281
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 281
Figure TW201803901AD00328
<210> 282
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 282
Figure TW201803901AD00329
Figure TW201803901AD00330
<210> 283
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 283
Figure TW201803901AD00331
<210> 284
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 284
Figure TW201803901AD00332
<210> 285
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 285
Figure TW201803901AD00333
<210> 286
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 286
Figure TW201803901AD00334
<210> 287
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 287
Figure TW201803901AD00335
<210> 288
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 288
Figure TW201803901AD00336
<210> 289
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 289
Figure TW201803901AD00337
<210> 290
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 290
Figure TW201803901AD00338
Figure TW201803901AD00339
<210> 291
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 291
Figure TW201803901AD00340
<210> 292
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 292
Figure TW201803901AD00341
<210> 293
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 293
Figure TW201803901AD00342
<210> 294
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 294
Figure TW201803901AD00343
<210> 295
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 295
Figure TW201803901AD00344
<210> 296
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 296
Figure TW201803901AD00345
<210> 297
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 297
Figure TW201803901AD00346
<210> 298
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 298
Figure TW201803901AD00347
Figure TW201803901AD00348
<210> 299
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 299
Figure TW201803901AD00349
<210> 300
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 300
Figure TW201803901AD00350
<210> 301
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 301
Figure TW201803901AD00351
<210> 302
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 302
Figure TW201803901AD00352
<210> 303
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 303
Figure TW201803901AD00353
<210> 304
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 304
Figure TW201803901AD00354
<210> 305
<211> 345
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 305
Figure TW201803901AD00355
<210> 306
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 306
Figure TW201803901AD00356
Figure TW201803901AD00357
<210> 307
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 307
Figure TW201803901AD00358
<210> 308
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 308
Figure TW201803901AD00359
<210> 309
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 309
Figure TW201803901AD00360
<210> 310
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 310
Figure TW201803901AD00361
<210> 311
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 311
Figure TW201803901AD00362
<210> 312
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 312
Figure TW201803901AD00363
<210> 313
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 313
Figure TW201803901AD00364
<210> 314
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 314
Figure TW201803901AD00365
<210> 315
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 315
Figure TW201803901AD00366
<210> 316
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 316
Figure TW201803901AD00367
<210> 317
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 317
Figure TW201803901AD00368
<210> 318
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 318
Figure TW201803901AD00369
<210> 319
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 319
Figure TW201803901AD00370
<210> 320
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 320
Figure TW201803901AD00371
<210> 321
<211> 345
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 321
Figure TW201803901AD00372
<210> 322
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 322
Figure TW201803901AD00373
<210> 323
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 323
Figure TW201803901AD00374
<210> 324
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 324
Figure TW201803901AD00375
<210> 325
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 325
Figure TW201803901AD00376
<210> 326
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 326
Figure TW201803901AD00377
<210> 327
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 327
Figure TW201803901AD00378
<210> 328
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 328
Figure TW201803901AD00379
<210> 329
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 329
Figure TW201803901AD00380
Figure TW201803901AD00381
<210> 330
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 330
Figure TW201803901AD00382
<210> 331
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 331
Figure TW201803901AD00383
<210> 332
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 332
Figure TW201803901AD00384
<210> 333
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 333
Figure TW201803901AD00385
<210> 334
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 334
Figure TW201803901AD00386
<210> 335
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 335
Figure TW201803901AD00387
<210> 336
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 336
Figure TW201803901AD00388
<210> 337
<211> 348
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 337
Figure TW201803901AD00389
Figure TW201803901AD00390
<210> 338
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 338
Figure TW201803901AD00391
<210> 339
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 339
Figure TW201803901AD00392
<210> 340
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 340
Figure TW201803901AD00393
<210> 341
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 341
Figure TW201803901AD00394
<210> 342
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 342
Figure TW201803901AD00395
<210> 343
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 343
Figure TW201803901AD00396
<210> 344
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 344
Figure TW201803901AD00397
<210> 345
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 345
Figure TW201803901AD00398
<210> 346
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 346
Figure TW201803901AD00399
<210> 347
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 347
Figure TW201803901AD00400
<210> 348
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 348
Figure TW201803901AD00401
<210> 349
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 349
Figure TW201803901AD00402
<210> 350
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 350
Figure TW201803901AD00403
<210> 351
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 351
Figure TW201803901AD00404
<210> 352
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 352
Figure TW201803901AD00405
<210> 353
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 353
Figure TW201803901AD00406
<210> 354
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 354
Figure TW201803901AD00407
<210> 355
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 355
Figure TW201803901AD00408
<210> 356
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 356
Figure TW201803901AD00409
<210> 357
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 357
Figure TW201803901AD00410
<210> 358
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 358
Figure TW201803901AD00411
<210> 359
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 359
Figure TW201803901AD00412
<210> 360
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 360
Figure TW201803901AD00413
<210> 361
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 361
Figure TW201803901AD00414
<210> 362
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 362
Figure TW201803901AD00415
<210> 363
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 363
Figure TW201803901AD00416
<210> 364
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 364
Figure TW201803901AD00417
<210> 365
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 365
Figure TW201803901AD00418
<210> 366
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 366
Figure TW201803901AD00419
<210> 367
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 367
Figure TW201803901AD00420
<210> 368
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 368
Figure TW201803901AD00421
<210> 369
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 369
Figure TW201803901AD00422
<210> 370
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 370
Figure TW201803901AD00423
<210> 371
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 371
Figure TW201803901AD00424
<210> 372
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 372
Figure TW201803901AD00425
<210> 373
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 373
Figure TW201803901AD00426
<210> 374
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 374
Figure TW201803901AD00427
<210> 375
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 375
Figure TW201803901AD00428
<210> 376
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 376
Figure TW201803901AD00429
<210> 377
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 377
Figure TW201803901AD00430
<210> 378
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 378
Figure TW201803901AD00431
<210> 379
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 379
Figure TW201803901AD00432
<210> 380
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 380
Figure TW201803901AD00433
<210> 381
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 381
Figure TW201803901AD00434
<210> 382
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 382
Figure TW201803901AD00435
<210> 383
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 383
Figure TW201803901AD00436
<210> 384
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 384
Figure TW201803901AD00437
<210> 385
<211> 190
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 385
Figure TW201803901AD00438
<210> 386
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> 變體
<222> (1)...(1)
<223> Xaa=Gly
<220>
<221> 變體
<222> (2)...(2)
<223> Xaa=Phe,Tyr or Gly
<220>
<221> 變體
<222> (3)...(3)
<223> Xaa=Thr or Ser
<220>
<221> 變體
<222> (4)...(4)
<223> Xaa=Phe or Ile
<220>
<221> 變體
<222> (5)...(5)
<223> Xaa=Ser,Arg,Thr,or Asn
<220>
<221> 變體
<222> (6)...(6)
<223> Xaa=Asn,Thr,Asp,or Ser
<220>
<221> 變體
<222> (7)...(7)
<223> Xaa=Tyr
<220>
<221> 變體
<222> (8)...(8)
<223> Xaa=Asn,Tyr,or Ala
<400> 386
Figure TW201803901AD00439
<210> 387
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> 變體
<222> (1)...(1)
<223> Xaa=Ile
<220>
<221> 變體
<222> (2)...(2)
<223> Xaa=Tyr,Ser,or Asn
<220>
<221> 變體
<222> (3)...(3)
<223> Xaa=Tyr,Ser,Gly,Pro,or Asp
<220>
<221> 變體
<222> (4)...(4)
<223> Xaa=Asp,Arg,or Ser
<220>
<221> 變體
<222> (5)...(5)
<223> Xaa=Gly,Val,or Ser
<220>
<221> 變體
<222> (6)...(6)
<223> Xaa=Ser，Gly,Arg,or Tyr
<220>
<221> 變體
<222> (7)...(7)
<223> Xaa=Tyr,Arg,Thr,Ser,or Asn
<220>
<221> 變體
<222> (8)...(8)
<223> Xaa=Ile,Thr,Ala,Ser,or absent
<400> 387
Figure TW201803901AD00440
<210> 388
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> 變體
<222> (1)...(1)
<223> Xaa=Ala
<220>
<221> 變體
<222> (2)...(2)
<223> Xaa=Lys or Arg
<220>
<221> 變體
<222> (3)...(3)
<223> Xaa=Arg,Gly,His,Ser,Asp,Leu,or Thr
<220>
<221> 變體
<222> (4)...(4)
<223> Xaa=Thr,Pro,Arg,Gly,or Glu
<220>
<221> 變體
<222> (5)...(5)
<223> Xaa=Leu,Val,Gly,Lys,Tyr,or Asn
<220>
<221> 變體
<222> (6)...(6)
<223> Xaa=Ser,Arg,Thr,AlaTyr,Phe,or Trp
<220>
<221> 變體
<222> (7)...(7)
<223> Xaa=Tyr,Gly,Arg,Ala,Asn,Asp,His,or Asn
<220>
<221> 變體
<222> (8)...(8)
<223> Xaa=Tyr,Thr,Ser,or His
<220>
<221> 變體
<222> (9)...(9)
<223> Xaa=Val,Ser,Ala,Phe,Pro,or absent
<220>
<221> 變體
<222> (10)...(10)
<223> Xaa=Met,Gly,Asp,Pro,Val,or absent
<220>
<221> 變體
<222> (11)...(11)
<223> Xaa=Asp,Tyr,Ser,Gly,Phe,or absent
<220>
<221> 變體
<222> (12)...(12)
<223> Xaa=Val,Asp,Phe,or absent
<220>
<221> 變體
<222> (13)...(13)
<223> Xaa=Phe,Asp,or absent
<220>
<221> 變體
<222> (14)...(14)
<223> Xaa=Phe,Tyr,or absent
<220>
<221> 變體
<222> (15)...(15)
<223> Xaa=Asp or absent
<220>
<221> 變體
<222> (16)...(16)
<223> Xaa=Tyr or absent
<400> 388
Figure TW201803901AD00441
<210> 389
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> 變體
<222> (1)...(1)
<223> Xaa=Gln
<220>
<221> 變體
<222> (2)...(2)
<223> Xaa=Gly,Ser,or Asp
<220>
<221> 變體
<222> (3)...(3)
<223> Xaa=Ile or Val
<220>
<221> 變體
<222> (4)...(4)
<223> Xaa=Ser,Leu,Asn,or Gly
<220>
<221> 變體
<222> (5)...(5)
<223> Xaa=Asn,Tyr,Gly,or Ser
<220>
<221> 變體
<222> (6)...(6)
<223> Xaa=Tyr,Ser,Phe,or Trp
<220>
<221> 變體
<222> (7)...(7)
<223> Xaa=Ser or absent
<220>
<221> 變體
<222> (8)...(8)
<223> Xaa=Asn or absent
<220>
<221> 變體
<222> (9)...(9)
<223> Xaa=Asn or absent
<220>
<221> 變體
<222> (10)...(10)
<223> Xaa=Lys or absent
<220>
<221> 變體
<222> (11)...(11)
<223> Xaa=Gln or absent
<220>
<221> 變體
<222> (12)...(12)
<223> Xaa=Tyror absent
<400> 389
Figure TW201803901AD00442
<210> 390
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> 變體
<222> (1)...(1)
<223> Xaa=Ala,Trp,Asp,Tyr,Lys,Gly,or Ser
<220>
<221> 變體
<222> (2)...(2)
<223> Xaa=Ala or Thr
<220>
<221> 變體
<222> (3)...(3)
<223> Xaa=Ser
<400> 390
Figure TW201803901AD00443
<210> 391
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> 變體
<222> (1)...(1)
<223> Xaa=Gln,Leu,or His
<220>
<221> 變體
<222> (2)...(2)
<223> Xaa=Lys,Gln,or His
<220>
<221> 變體
<222> (3)...(3)
<223> Xaa=Tyr,Ser,or Leu
<220>
<221> 變體
<222> (4)...(4)
<223> Xaa=Tyr,Asn,Gly,Asp,or Ser
<220>
<221> 變體
<222> (5)...(5)
<223> Xaa=Ser,Asp,or Asn
<220>
<221> 變體
<222> (6)...(6)
<223> Xaa=Leu,Ala,Tyr,Thr,or Phe
<220>
<221> 變體
<222> (7)...(7)
<223> Xaa=Pro or Arg
<220>
<221> 變體
<222> (8)...(8)
<223> Xaa=Leu,Phe,Tyr,or Thr
<220>
<221> 變體
<222> (9)...(9)
<223> Xaa=Thror absent
<400> 391
Figure TW201803901AD00444
<210> 392
<211> 70
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 392
Figure TW201803901AD00445
<210> 393
<211> 92
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 393
Figure TW201803901AD00446
<210> 394
<211> 398
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 394
Figure TW201803901AD00447
<210> 395
<211> 413
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 395
Figure TW201803901AD00448
Figure TW201803901AD00449
<210> 396
<211> 199
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 396
Figure TW201803901AD00450
<210> 397
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 397
Figure TW201803901AD00451
Figure TW201803901AD00452
<210> 398
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 398
Figure TW201803901AD00453
<210> 399
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 399
Figure TW201803901AD00454
<210> 400
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 400
Figure TW201803901AD00455
<210> 401
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 401
Figure TW201803901AD00456
<210> 402
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 402
Figure TW201803901AD00457
<210> 403
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 403
Figure TW201803901AD00458
<210> 404
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 404
Figure TW201803901AD00459
<210> 405
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 405
Figure TW201803901AD00460
<210> 406
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 406
Figure TW201803901AD00461
<210> 407
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 407
Figure TW201803901AD00462
<210> 408
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 408
Figure TW201803901AD00463
<210> 409
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 409
Figure TW201803901AD00464
<210> 410
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 410
Figure TW201803901AD00465
<210> 411
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 411
Figure TW201803901AD00466
<210> 412
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 412
Figure TW201803901AD00467
<210> 413
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 413
Figure TW201803901AD00468
<210> 414
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 414
Figure TW201803901AD00469
<210> 415
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 415
Figure TW201803901AD00470
<210> 416
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 416
Figure TW201803901AD00471
<210> 417
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 417
Figure TW201803901AD00472
<210> 418
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 418
Figure TW201803901AD00473
<210> 419
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 419
Figure TW201803901AD00474
<210> 420
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 420
Figure TW201803901AD00475
<210> 421
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 421
Figure TW201803901AD00476
<210> 422
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 422
Figure TW201803901AD00477
<210> 423
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 423
Figure TW201803901AD00478
<210> 424
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 424
Figure TW201803901AD00479
<210> 425
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 425
Figure TW201803901AD00480
<210> 426
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 426
Figure TW201803901AD00481
<210> 427
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 427
Figure TW201803901AD00482
<210> 428
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 428
Figure TW201803901AD00483
<210> 429
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 429
Figure TW201803901AD00484
<210> 430
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 430
Figure TW201803901AD00485
<210> 431
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 431
Figure TW201803901AD00486
<210> 432
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 432
Figure TW201803901AD00487
<210> 433
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 433
Figure TW201803901AD00488
<210> 434
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 434
Figure TW201803901AD00489
<210> 435
<211> 342
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 435
Figure TW201803901AD00490
Figure TW201803901AD00491
<210> 436
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 436
Figure TW201803901AD00492
<210> 437
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 437
Figure TW201803901AD00493
<210> 438
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 438
Figure TW201803901AD00494
<210> 439
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 439
Figure TW201803901AD00495
<210> 440
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 440
Figure TW201803901AD00496
<210> 441
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 441
Figure TW201803901AD00497
<210> 442
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 442
Figure TW201803901AD00498
<210> 443
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 443
Figure TW201803901AD00499
<210> 444
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 444
Figure TW201803901AD00500
<210> 445
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 445
Figure TW201803901AD00501
<210> 446
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 446
Figure TW201803901AD00502
<210> 447
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 447
Figure TW201803901AD00503
<210> 448
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 448
Figure TW201803901AD00504
<210> 449
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 449
Figure TW201803901AD00505
<210> 450
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 450
Figure TW201803901AD00506
<210> 451
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 451
Figure TW201803901AD00507
<210> 452
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 452
Figure TW201803901AD00508
<210> 453
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 453
Figure TW201803901AD00509
<210> 454
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 454
Figure TW201803901AD00510
<210> 455
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 455
Figure TW201803901AD00511
<210> 456
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 456
Figure TW201803901AD00512
<210> 457
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 457
Figure TW201803901AD00513
<210> 458
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 458
Figure TW201803901AD00514
<210> 459
<211> 345
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 459
Figure TW201803901AD00515
<210> 460
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 460
Figure TW201803901AD00516
<210> 461
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 461
Figure TW201803901AD00517
<210> 462
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 462
Figure TW201803901AD00518
<210> 463
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 463
Figure TW201803901AD00519
<210> 464
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 464
Figure TW201803901AD00520
<210> 465
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 465
Figure TW201803901AD00521
<210> 466
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 466
Figure TW201803901AD00522
<210> 467
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 467
Figure TW201803901AD00523
<210> 468
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 468
Figure TW201803901AD00524
<210> 469
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 469
Figure TW201803901AD00525
<210> 470
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 470
Figure TW201803901AD00526
<210> 471
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 471
Figure TW201803901AD00527
<210> 472
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 472
Figure TW201803901AD00528
<210> 473
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 473
Figure TW201803901AD00529
<210> 474
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 474
Figure TW201803901AD00530
<210> 475
<211> 345
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 475
Figure TW201803901AD00531
<210> 476
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 476
Figure TW201803901AD00532
<210> 477
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 477
Figure TW201803901AD00533
<210> 478
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 478
Figure TW201803901AD00534
<210> 479
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 479
Figure TW201803901AD00535
<210> 480
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 480
Figure TW201803901AD00536
<210> 481
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 481
Figure TW201803901AD00537
<210> 482
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 482
Figure TW201803901AD00538
<210> 483
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 483
Figure TW201803901AD00539
<210> 484
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 484
Figure TW201803901AD00540
<210> 485
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 485
Figure TW201803901AD00541
<210> 486
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 486
Figure TW201803901AD00542
<210> 487
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 487
Figure TW201803901AD00543
<210> 488
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 488
Figure TW201803901AD00544
<210> 489
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 489
Figure TW201803901AD00545
<210> 490
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 490
Figure TW201803901AD00546

Claims (61)

  1. 一種與Fel d1專一結合之單離的人類單株抗體或其抗原-結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段為一IgA同型以外之同型。
  2. 如請求項第1項之單離的人類抗體或其抗原-結合片段，係具有由IgG1、IgG2和IgG4組成之群中選出之同型。
  3. 如請求項第1或2項之單離的人類抗體或其抗原-結合片段，其中該人類抗體或其抗原-結合片段，係以等於或低於10-6M之KD與Fel d1專一結合。
  4. 如請求項第1至3項任一項中之單離的人類抗體或其抗原-結合片段，其中該抗體係包括三條重鏈CDR(HCDR1、HCDR2和HCDR3)，其係包含在任一由下列組成之群中選出的重鏈可變區(HCVR)序列內：SEQ ID NO：2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、242、258、274、290、306、322、338、354和370；及三條輕鏈CDR(LCDR1、LCDR2及LCDR3)，其係包含在任一由下列組成之群中選出的輕鏈可變區(LCVR)序列內：SEQ ID NO：10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218、234、250、266、282、298、314、330、346、362和378。
  5. 如請求項第1至4項任一項中之單離的人類單株抗體或其抗原-結合片段，其中該抗體包括三條重鏈CDR(HCDR1、HCDR2和HCDR3)，其係包含在任一由下列組成之群中選出的重鏈可變區(HCVR)序列內：SEQ ID NO：18、66、130、162、242、306、322和370；及三條輕鏈CDR(LCDR1、LCDR2及LCDR3)，其係包含在任一由下列組成之群中選出的輕鏈可變區(LCVR)序列內：SEQ ID NO：26、74、138、170、250、314、330和378。
  6. 如請求項第1至5項任一項中之單離的人類抗體或其抗原-結合片段，係包括具有由下列組成之群中選出的胺基酸序列之HCVR：SEQ ID NO：2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、242、258、274、290、306、322、338、354和370。
  7. 如請求項第1至6項任一項中之單離的人類抗體或其抗原-結合片段，係包括具有由下列組成之群中選出的胺基酸序列之HCVR：SEQ ID NO：18、66、130、162、242、306、322和370。
  8. 如請求項第1至7項任一項中之單離的人類抗體或其抗原-結合片段，係包括具有由下列組成之群中選出的胺基酸序列之LCVR：SEQ ID NO：10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218、234、250、266、282、298、314、330、346、362和378。
  9. 如請求項第1至8項任一項中之單離的人類抗體或其抗原-結合片段，係包括具有由下列組成之群中選出的胺基酸序列之LCVR：SEQ ID NO：26、74、138、170、250、314、330和378。
  10. 如請求項第1至9項任一項中之單離的人類抗體或其抗原-結合片段，係包括：(a)具有由下列組成之群中選出的胺基酸序列之HCVR：SEQ ID NOs：2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、242、258、274、290、306、322、338、354和370；及(b)具有由下列組成之群中選出的胺基酸序列之LCVR：SEQ ID NO：10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218、234、250、266、282、298、314、330、346、362和378。
  11. 如請求項第1至10項任一項中之單離的人類抗體或其抗原-結合片段，係包括：(a)具有由下列組成之群中選出的胺基酸序列之HCVR：SEQ ID NOs：18、66、130、162、242、306、322和370；及(b)具有由下列組 成之群中選出的胺基酸序列之LCVR：SEQ ID NO：26、74、138、170、250、314、330和378。
  12. 如請求項第1至11項任一項中之單離的人類抗體或其抗原-結合片段，係包括：(a)具有由下列組成之群中選出的胺基酸序列之HCDR1區：SEQ ID NO：4、20、36、52、68、84、100、116、132、148、164、180、196、212、228、244、260、276、292、308、324、340、356和372；(b)具有由下列組成之群中選出的胺基酸序列之HCDR2區：SEQ ID NO：6、22、38、54、70、86、102、118、134、150、166、182、198、214、230、246、262、278、294、310、326、342、358和374；(c)具有由下列組成之群中選出的胺基酸序列之HCDR3區：SEQ ID NO：8、24、40、56、72、88、104、120、136、152、168、184、200、216、232,248、264、280、296、312、328、344、360和376；(d)具有由下列組成之群中選出的胺基酸序列之LCDR1區：SEQ ID NO：12、28、44、60、76、92、108、124、140、156、172、188、204、220、236、252、268、284、300、316、332、348、364和380；(e)具有由下列組成之群中選出的胺基酸序列之LCDR2區：SEQ ID NO：14、30、46、62、78、94、110、126、142、158、174、190、206、222、238、254、270、286、302、318、334、350、366和382；及(f)具有由下列組成之群中選出的胺基酸序列之LCDR3區：SEQ ID NO：16、32、48、64、80、96、112、128、144、160、176、192、208、224、240、256、272、288、304、320、336、352、368和384。
  13. 如請求項第1至12項任一項中之單離的人類抗體或其抗原-結合片段，係包括： (a)具有由下列組成之群中選出的胺基酸序列之HCDR1區：SEQ ID NO：20、68、132、164、244、308、324和372；(b)具有由下列組成之群中選出的胺基酸序列之HCDR2區：SEQ ID NO：22、70、134、166、246、310、326和374；(c)具有由下列組成之群中選出的胺基酸序列之HCDR3區：SEQ ID NO：24、72、136、168、248、312、328和376；(d)具有由下列組成之群中選出的胺基酸序列之LCDR1區：SEQ ID NO：28、76、140、172、252、316、332和380；(e)具有由下列組成之群中選出的胺基酸序列之LCDR2區：SEQ ID NO：30、78、142、174、254、318、334和382；及(f)具有由下列組成之群中選出的胺基酸序列之LCDR3區：SEQ ID NO：32、80、144、176、256、320、336和384。
  14. 如請求項第1至13項任一項中之單離的人類抗體或抗原-結合片段，係包括由下列組成之群中選出之HCVR/LCVR胺基酸序列對：SEQ ID NO：2/10、18/26、34/42、50/58、66/74、82/90、98/106、114/122、130/138、146/154、162/170、178/186、194/202、210/218、226/234、242/250、258/266、274/282、290/298、306/314、322/330、338/346、354/362和370/378。
  15. 如請求項第1至8項任一項中之單離的人類抗體或抗原-結合片段，係包括由下列組成之群中選出之HCVR/LCVR胺基酸序列對：SEQ ID NO：18/26、66/74、130/138、162/170、242/250、306/314、322/330和370/378。
  16. 如請求項第1至15項任一項中之單離的人類單株抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其片段係與至少一個選自下列胺基酸序列所組成之群組相互作用：範圍從SEQ ID NO：396之約位置15至約位置24的 胺基酸殘基；範圍從SEQ ID NO：396之約位置85至約位置103的胺基酸殘基；範圍從SEQ ID NO：396之約位置85至約位置104的胺基酸殘基；及範圍從SEQ ID NO：396之約位置113至約位置127的胺基酸殘基。
  17. 如請求項第16項之單離的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其片段係與範圍從SEQ ID NO：396之約位置15至約位置24的胺基酸殘基相互作用。
  18. 如請求項第16項之單離的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其片段係與範圍從SEQ ID NO：396之約位置85至約位置103的胺基酸殘基相互作用。
  19. 如請求項第16項之單離的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其片段係與範圍從SEQ ID NO：396之約位置85至約位置104的胺基酸殘基相互作用。
  20. 如請求項第16項之單離的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其片段係與範圍從SEQ ID NO：396之約位置113至約位置127的胺基酸殘基相互作用。
  21. 如請求項第1至15項任一項中之單離的抗體或其抗原-結合片段，其中該抗體或其片段係與至少一個由SEQ ID NO：402、403、404和412組成之序列中選出的胺基酸序列相互作用。
  22. 如請求項第21項之單離的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其片段係與SEQ ID NO：402相互作用。
  23. 如請求項第21項之單離的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其片段係與SEQ ID NO：403相互作用。
  24. 如請求項第21項之單離的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其片段係與SEQ ID NO：404相互作用。
  25. 如請求項第21項之單離的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其片段係與SEQ ID NO：412相互作用。
  26. 一種醫藥組成物，係包括一有效治療量之一或多種如請求項第1至25項任一項中之與Fel d1專一結合的單離人類單株抗體或其抗原-結合片段，以及一或多種醫藥上可接受賦形劑。
  27. 一種醫藥組成物，係包括一治療上有效量之與Fel d1專一結合的第一單離人類單株抗體或其抗原-結合片段；和如請求項第1至25項任一項中與Fel d1專一結合的第二單離的人類單株抗體或其抗原-結合片段，以及一或多種醫藥上可接受賦形劑。
  28. 如請求項第27項之醫藥組成物，其中：a)該與Fel d1專一結合之單離的第一人類單株抗體或其抗原-結合片段，係包括具有如SEQ ID NO：18的胺基酸序列之HCVR；和具有如SEQ ID NO：26的胺基酸序列之LCVR；及b)該與Fel d1專一結合之單離的第二人類單株抗體或其抗原-結合片段，係包括具有由SEQ ID NO：66、130、162、306、322和370組成之群中選出的胺基酸序列之HCVR；及具有由SEQ ID NOs：74、138、170、314、330和378組成之群中選出的胺基酸序列之LCVR。
  29. 如請求項第27項之醫藥組成物，其中：a)該與Fel d1專一結合之單離的第一人類單株抗體或其抗原-結合片段，係包括具有如SEQ ID NO：242的胺基酸序列之HCVR；和具有如SEQ ID NO：250的胺基酸序列之LCVR；及b)該與Fel d1專一結合之單離的第二人類單株抗體或其抗原-結合片段，係包括具有由SEQ ID NO：306和322組成之群中選出的胺基酸序列之HCVR；及具有由SEQ ID NO：314和330組成之群中選出的胺基酸序列之LCVR。
  30. 如請求項第27項之醫藥組成物，其中：a)該與Fel d1專一結合之單離的第一人類單株抗體或其抗原-結合片段，係包括由SEQ ID NO：18/26所組成之HCVR/LCVR胺基酸序列對；及b)該與Fel d1專一結合之單離的第二人類單株抗體或其抗原-結合片段，係包括由SEQ ID NO：66/74、130/138、162/170、306/314、322/330和370/378組成之群中選出的HCVR/LCVR胺基酸序列對。
  31. 如請求項第27項之醫藥組成物，其中：a)該與Fel d1專一結合之單離的第一人類單株抗體或其抗原-結合片段，係包括由SEQ ID NO：18/26所組成之HCVR/LCVR胺基酸序列對；及b)該與Fel d1專一結合之單離的第二人類單株抗體或其抗原-結合片段，係包括由SEQ ID NO：130/138所組成之HCVR/LCVR胺基酸序列對。
  32. 如請求項第27項之醫藥組成物，其中：a)該與Fel d1專一結合之單離的第一人類單株抗體或其抗原-結合片段，係包括由SEQ ID NO：18/26所組成之HCVR/LCVR胺基酸序列對；及b)該與Fel d1專一結合之單離的第二人類單株抗體或其抗原-結合片段，係包括由SEQ ID NO：322/330所組成之HCVR/LCVR胺基酸序列對。
  33. 如請求項第27項之醫藥組成物，其中：a)該與Fel d1專一結合之單離的第一人類單株抗體或其抗原-結合片段，係包括由SEQ ID NO：18/26所組成之HCVR/LCVR胺基酸序列對；及 b)該與Fel d1專一結合之單離的第二人類單株抗體或其抗原-結合片段，係包括由SEQ ID NO：306/314所組成之HCVR/LCVR胺基酸序列對。
  34. 如請求項第27項之醫藥組成物，其中：a)該與Fel d1專一結合之單離的第一人類單株抗體或其抗原-結合片段，係包括由SEQ ID NO：18/26所組成之HCVR/LCVR胺基酸序列對；及b)該與Fel d1專一結合之單離的第二人類單株抗體或其抗原-結合片段，係包括由SEQ ID NO：370/378所組成之HCVR/LCVR胺基酸序列對。
  35. 如請求項第27項之醫藥組成物，其中：a)該與Fel d1專一結合之單離的第一人類單株抗體或其抗原-結合片段，係包括由SEQ ID NO：242/250所組成之HCVR/LCVR胺基酸序列對；及b)該與Fel d1專一結合之單離的第二人類單株抗體或其抗原-結合片段，係包括由SEQ ID NO：306/314和322/330組成之群中選出的HCVR/LCVR胺基酸序列對。
  36. 如請求項第27項之醫藥組成物，其中：a)該與Fel d1專一結合之單離的第一人類單株抗體或其抗原-結合片段，係包括由SEQ ID NO：242/250所組成之HCVR/LCVR胺基酸序列對；及b)該與Fel d1專一結合之單離的第二人類單株抗體或其抗原-結合片段，係包括由SEQ ID NO：306/314所組成之HCVR/LCVR胺基酸序列對。
  37. 如請求項第27項之醫藥組成物，其中：a)該與Fel d1專一結合之單離的第一人類單株抗體或其抗原-結合片段，係包括由SEQ ID NO：242/250所組成之HCVR/LCVR胺基酸序列對；及b)該與Fel d1專一結合之單離的第二人類單株抗體或其抗原-結合片段，係包括由SEQ ID NO：322/330所組成之HCVR/LCVR胺基酸序列對。
  38. 如請求項第26項之醫藥組成物，係包括四種與Fel d1專一結合之單離的人類單株抗體或其抗原-結合片段，其中該人類抗體或其抗原-結合片段係包括SEQ ID NO：18/26、66/74、130/138和162/170之HCVR/LCVR胺基酸序列對。
  39. 一種單離的抗體或其抗原-結合片段，其係與含下列重鏈可變區(HCVR)之互補決定區(CDR)和輕鏈可變區(LCVR)之CDR的抗體或抗原-結合片段競爭專一結合Fel d1，其中該HCVR具有由SEQ ID NO：2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、242、258、274、290、306、322、338、354和370組成之群中選出的胺基酸序列；其中該LCVR具有由SEQ ID NOs：10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218、234、250、266、282、298、314、330、346、362和378組成之群中選出的胺基酸序列。
  40. 一種單離的抗體或其抗原-結合片段，其係與含下列重鏈可變區(HCVR)之互補決定區(CDR)和輕鏈可變區(LCVR)之CDR的抗體或抗原-結合片段競爭專一結合Fel d1，其中該HCVR具有由SEQ ID NO：18、66、130、162、242、306、322和370組成之群中選出的胺基酸序列；其中該LCVR具有由SEQ ID NOs：18、66、130、162、242、306、322和370組成之群中選出的胺基酸序列。
  41. 一種單離的抗體或其抗原-結合片段，其係和包括重鏈可變區(HCVR)之互補決定區(CDR)和輕鏈可變區(LCVR)之CDR的抗體或抗原-結合片段一樣，結合至Fel d1上的相同表位，其中該HCVR具有由SEQ ID NO：2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、242、258、274、290、306、322、338、354和370組成之群中選出的胺基酸序列；其中該LCVR具有由SEQ ID NO：10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218、234、250、266、282、298、314、330、346、362和378組成之群中選出的胺基酸序列。
  42. 一種單離的抗體或其抗原-結合片段，其係和包括重鏈可變區(HCVR)之互補決定區(CDR)和輕鏈可變區(LCVR)之CDR的抗體或抗原-結合片段一樣，結合至Fel d1上的相同表位，其中該HCVR具有由SEQ ID NO：18、66、130、162、242、306、322和370組成之群中選出的胺基酸序列；其中該LCVR具有由SEQ ID NO：10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218、234、250、266、282、298、314、330、346、362和378組成之群中選出的胺基酸序列。
  43. 一種核酸分子，其係編碼如請求項第1-25項或第39-42項任一項中與Fel d1專一結合的人類單株抗體或其片段。
  44. 一種表現載體，其係包括編碼如請求項第43項之與Fel d1專一結合的人類單株抗體或其片段之核酸。
  45. 一種宿主細胞，其係含有如請求項第44項之表現載體。
  46. 一種用於治療對貓、貓皮屑或對Fel d1蛋白顯現敏感性或過敏反應之病患的方法，其包括將一有效量之一或多種如請求項第1-25項或第39-42項任一項中與Fel d1專一結合的單離人類單株抗體或其抗原結合片段，或包括一有效量之一或多種如請求項第26-38項任一項中之與 Fel d1專一結合的單離人類單株抗體或其抗原結合片段的醫藥組成物投予有此需要之病患，其中該病患在投予該抗體或含該抗體之醫藥組成物後，對於貓、貓皮屑、或對Fel d1蛋白顯現降低敏感性或減少過敏反應，或對於貓、貓皮屑或對Fel d1蛋白並未經歷任何敏感性或過敏反應。
  47. 如請求項第46項之方法，進一步係包括投予一有效量之可用於減低對貓、貓皮屑或對Fel d1蛋白之過敏反應的第二治療劑。
  48. 如請求項第47項之方法，其中該第二治療劑係由下列組成之群中選出：皮質類固醇、支氣管擴張劑、抗組織胺、腎上腺素、去充血劑、皮質類固醇、另外不同的Fel d1抗體和胜肽疫苗。
  49. 如請求項第46至48項任一項中之方法，其中該治療可在病患暴露於貓、貓皮屑或Fel d1蛋白後降低過敏性鼻炎、過敏性結膜炎、過敏性氣喘或過敏反應。
  50. 一種與Fel d1專一結合之雙專一性抗原-結合分子，其係包括含有如SEQ ID NO：370之HCVR胺基酸序列和如SEQ ID NO：378之LCVR胺基酸序列的第一抗原-結合區，及含有如SEQ ID NO：18之HCVR胺基酸序列和如SEQ ID NO：378之LCVR胺基酸序列的第二抗原-結合區。
  51. 如請求項第50項之雙專一性抗原-結合分子，其中該第一抗原-結合區係包括三個分別如SEQ ID NO：372、374和376的胺基酸序所組成之重鏈互補決定區(HCDR1、HCDR2和HCDR3)，以及三個分別如SEQ ID NO：380、382和384的胺基酸序所組成之輕鏈互補決定區(LCDR1、LCDR2和LCDR3)；且其中該第二抗原-結合區係包括三個分別如SEQ ID NO：20、22和24的胺基酸序所組成之重鏈互補決定區(HCDR1、 HCDR2和HCDR3)，以及三個分別如SEQ ID NO：380、382和384的胺基酸序所組成之輕鏈互補決定區(LCDR1、LCDR2和LCDR3)。
  52. 一種與Fel d1專一結合之雙專一性抗原-結合分子，其係包括含有如SEQ ID NO：306之HCVR胺基酸序列和如SEQ ID NO：314之LCVR胺基酸序列的第一抗原-結合區，及含有如SEQ ID NO：18之HCVR胺基酸序列和如SEQ ID NO：314之LCVR胺基酸序列的第二抗原-結合區。
  53. 如請求項第52項之雙專一性抗原-結合分子，其中該第一抗原-結合區係包括三個分別如SEQ ID NO：308、310和312的胺基酸序所組成之重鏈互補決定區(HCDR1、HCDR2和HCDR3)，以及三個分別如SEQ ID NO：316、318和320的胺基酸序所組成之輕鏈互補決定區(LCDR1、LCDR2和LCDR3)；且其中該第二抗原-結合區係包括三個分別如SEQ ID NO：20、22和24的胺基酸序所組成之重鏈互補決定區(HCDR1、HCDR2和HCDR3)，以及三個分別如SEQ ID NO：316、318和320的胺基酸序所組成之輕鏈互補決定區(LCDR1、LCDR2和LCDR3)。
  54. 一種對Fel d1專一之單離抗體或其抗原-結合片段，其係與如請求項第50至53項任一項中之雙專一性抗原-結合分子競爭結合Fel d1。
  55. 一種對Fel d1專一之單離抗體或其抗原-結合片段，其係和如請求項第50至53項任一項中之雙專一性抗原-結合分子一樣，結合至Fel d1上的相同表位。
  56. 如請求項第54或55項之單離抗體，其中該抗體為一單專一性抗體或雙專一性抗體。
  57. 一種醫藥組成物，其係包括如請求項第50至53項任一項中之雙專一性抗原-結合分子，以及醫藥上可接受載劑或稀釋劑。
  58. 一種用於治療對貓、貓皮屑、貓毛髮萃取物或對Fel d1蛋白顯現敏感性或過敏反應之病患的方法，其包括將一有效量之一或多種如請求項第50-53項任一項中之雙專一性抗原-結合分子，或包括一有效量之一或多種如請求項第50-53項任一項中之雙專一性抗原-結合分子的醫藥組成物投予有此需要之病患，其中該病患在投予該雙專一性抗原-結合分子或包括該雙專一性抗原-結合分子之組成物後，對貓、貓皮屑、貓毛萃取物或對Fel d1蛋白之顯現降低敏感性或減少過敏反應，或對於貓、貓皮屑、貓毛萃取物或對Fel d1蛋白並未經歷任何敏感性或過敏反應。
  59. 如請求項第58項之方法，進一步係包括投予一有效量之可用於減低對貓、貓皮屑、貓毛髮萃取物或對Fel d1蛋白之過敏反應的第二治療劑。
  60. 如請求項第59項之方法，其中該第二治療劑係由下列組成之群中選出：皮質類固醇、支氣管擴張劑、抗組織胺、腎上腺素、去充血劑、皮質類固醇、另外不同的Fel d1抗體和胜肽疫苗。
  61. 如請求項第58至60項任一項中之方法，其中該治療可在病患暴露於貓、貓皮屑、貓毛髮萃取物或Fel d1蛋白後降低過敏性鼻炎、過敏性結膜炎、過敏性氣喘或過敏反應。
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