CN110234354B - 包含抗-fel d1抗体的组合物和用于减少人类对猫的过敏症的至少一种症状的方法 - Google Patents
包含抗-fel d1抗体的组合物和用于减少人类对猫的过敏症的至少一种症状的方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了减少人类对猫的过敏症的症状的组合物和方法。通过延长免疫球蛋白停留在宠物食品中施用抗‑Fel D1分子的猫的口腔内的时间来增强特异性结合家猫过敏原1号(Fel D1)的分子的有效性。该组合物和方法使用粉末,该粉末为包封抗‑Fel D1分子的干燥的水凝胶,并且水凝胶基于明胶、胶原肽或明胶和胶原肽;和角叉菜胶。制备粉末的方法提供了高包封功效、抗‑Fel D1分子在猫的口腔中的缓释、以及抗‑Fel D1分子在猫的口腔中的口腔粘附。
Description
相关申请的交叉引用
本申请要求提交于2017年1月24日的美国临时申请号62/449,883的优先权,该美国临时申请的公开内容以引用方式并入本文。
背景技术
约20%的成年人对猫和/或它们的皮屑患有过敏。猫过敏的症状从轻度鼻炎和结膜炎到威胁生命的哮喘反应,猫过敏是对猫所有权的主要障碍。例如,猫过敏是猫主人将猫送回动物收容所的主要原因。
大多数猫过敏是由称为Fel D1(家猫(Feline domesticus)过敏原1号)的小型稳定性糖蛋白引起的。这种蛋白质通过他们的梳理过程转移到猫皮屑上并变成空气传播。在吸入附着有Fel D1的猫皮屑时,由于人类免疫细胞对Fel D1的识别,因此触发过敏级联反应。
发明内容
本公开涉及特异性结合Fel D1的分子的口腔粘附/粘膜粘附,用于抗-Fel D1分子的受控释放的水凝胶技术,以及从水凝胶产生粉末的加工方法。这种抗-Fel D1分子(例如来自用Fel D1免疫的禽类的蛋免疫球蛋白诸如IgY)可以减少人类对猫的过敏症的至少一种症状,因为它阻断了人免疫细胞对Fel D1的识别。这种抗-Fel D1分子的提议作用位点在猫的口腔内,其中Fel D1蛋白被分泌和/或在猫的皮毛上,Fel D1在梳理过程中沉积在那里。
本发明人提出通过其食物将抗-Fel D1分子递送给猫。最初的动物试验表明,通过其食物向猫施用该分子仅导致猫唾液中游离Fel D1减少约30%-35%。本发明人认为,主要限制是需要抗-Fel D1分子长时间停留在猫的口腔中,但是进食和饮水的过程导致在食物中施用的大量分子被吞咽,因此不具有效果。增加IgY口腔停留可以通过两种不同的方式测量。在一个方面,IgY可被测量为在特定时间点例如在饮食5分钟后具有更高的浓度。在另一方面,IgY可以测量为花费更长时间降低至某一阈值以下,例如,大于10ug/ml,≥1ug/ml或甚至>100ng/ml。
本发明人认为,在猫的口腔中产生用于递送的控释水凝胶的主要挑战之一是确保水凝胶在猫的口腔内瞬时溶解而不是熔化,具有粘膜粘附性质,并且对猫有吸引力。壳聚糖是一种众所周知的高粘膜粘附性聚合物,但在酸性pH下具有粘膜粘附性,猫的口腔和典型的宠物食品具有中性pH值。另一种主要的粘膜粘附性聚合物是猪明胶,但是由明胶产生的凝胶在体温下熔化。
如本文后面公开的实验结果中详述的,本发明人惊奇地发现另外的生物聚合物可以控制基于明胶的水凝胶的熔化/溶解。具体地,作为明胶/κ-角叉菜胶共凝胶的湿水凝胶提供了抗-Fel D1免疫球蛋白(IgY)的较慢释放。这一发现是出乎意料的,因为生物聚合物的组合通常不会产生良好的凝胶,因为这两种聚合物经历相分离。Lundin,L.O.,Odic,K.和Foster,T.J.(1999)混合角叉菜胶体系中的相分离。Proceedings to Supermolecular andColloidal Structures in Biomaterials and Biosubstrates,迈索尔,印度。
因此,在一个实施方案中,提供了提供抗-Fel D1分子的缓释的食品级粉末。食品级粉末可包含干燥的水凝胶和抗-Fel D1分子;其中所述干燥的水凝胶包含明胶、胶原肽、或明胶和胶原肽;和角叉菜胶;其中将抗-Fel D1分子包封在干燥的水凝胶中。
另外,在一个实施方案中,本公开提供了一种制备食品级粉末的方法,该食品级粉末提供抗-Fel D1分子的缓释。该方法包括:加热包含明胶、角叉菜胶和抗-Fel D1分子的溶液;形成加热溶液的液滴;通过使液滴经受包含盐或油的胶凝浴来胶凝化液滴,以形成其中包封抗-Fel D1分子的胶凝珠;以及将胶凝珠干燥,形成食品级粉末。
可以通过使加热溶液通过喷嘴来形成液滴。溶液的加热可包括使溶液经受约60℃的温度。胶凝浴可包含约100mM的氯化钾。干燥可包括使所述的珠经受流化床干燥。
本发明人还指出,食品工业中最常见的干燥方法是喷雾干燥,但发现明胶或明胶/角叉菜胶组合物的常规喷雾干燥导致体外测试期间抗-Fel D1分子(IgY)由于高度多孔的粉末结构而快速释放。令人惊讶的是,本发明人发现,当组合物在干燥前凝胶化时,体外试验期间抗-Fel D1分子的释放相当慢。例如,挤出过程导致更高百分比的包封和更大的控制粉末颗粒的最终尺寸的能力。有趣的是,当在挤出之前将角叉菜胶掺入混合物中时,挤出过程导致更好的结构(更光滑的表面,更少的夹杂物)。
因此,在一个实施方案中,本公开提供了一种制备食品级粉末的方法,该食品级粉末提供抗-Fel D1分子的缓释。该方法包括:加热包含明胶、角叉菜胶和抗-Fel D1分子的溶液;挤出所述的加热溶液以冷却加热溶液并形成其中包封抗-Fel D1分子的挤出的水凝胶;以及将挤出的水凝胶干燥。
该方法可包括将干燥的水凝胶研磨至预定尺寸。溶液的加热可以包括在挤出之前使溶液经受至少约60℃的温度,并且可以进一步包括使溶液经受温度为至少约40℃的保持罐,然后将溶液从保持罐转移到使溶液经受至少约60℃的温度的另一个装置。挤出可以通过管式热交换器进行,该管式热交换器的温度为约5℃至约55℃,或者在一个方面,为约5℃至约35℃,并且溶液的加热的至少一部分可以在管式热交换器的漏斗和/或泵中进行。该方法可包括在干燥之前将挤出的水凝胶浸入包含钙的组合物中。干燥可包括使挤出的水凝胶经受干燥烘道,烘箱或流化床干燥器。
在另一个实施方案中,本公开提供了一种食品级粉末,该食品级粉末提供抗-FelD1分子的缓释。食品级粉末包含干燥的水凝胶,该干燥的水凝胶包含明胶、胶原、或明胶和胶原肽;角叉菜胶;和抗-Fel D1分子;其中将抗-Fel D1分子包封在干燥的水凝胶中。可通过上述两种方法中的一种制备粉末。
本发明人还注意到,熟知的是,将明胶喷雾干燥是非常困难的。原因是高总固体下的明胶溶液具有高弹性,在喷雾干燥的雾化过程中形成长丝。在喷雾干燥过程中形成长丝导致粉末具有非常低的孔隙率并且非常蓬松,并且这两种特征严重限制了粉末流动性和加工能力。
本发明人惊奇地发现,优化的喷雾干燥条件以及对明胶特性(例如分子量)和壁材料的仔细选择可以开发出能够被喷雾干燥的制剂,所得粉末保持其粘膜粘附性能。值得注意的是,仅通过干混明胶和抗-Fel D1分子而产生的粉末不会导致抗-Fel D1分子的口腔保留增加,因为抗-Fel D1分子未被包封。
因此,在一个实施方案中,本公开提供了一种制备食品级粉末的方法,该食品级粉末提供抗-Fel D1分子的缓释。该方法包括将包含抗-Fel D1分子和5.0重量%至20.0重量%的明胶的溶液喷雾干燥,以形成其中包封抗-Fel D1分子的干燥的水凝胶,其中明胶具有40至300的布卢姆值,在一个方面,40至300,或甚至约100。
所得粉末可为提供抗-Fel D1分子的缓释并包含干燥的水凝胶的食品级粉末,干燥的水凝胶包含抗-Fel D1分子和0.5重量%至90重量%的明胶。将抗-Fel D1分子包封于干燥的水凝胶中,并且粉末可具有约0.265g/cm3至约0.3g/cm3的密度。在一个实施方案中,明胶可以是在pH低于7.0下具有正电荷的A型猪明胶,并且可以是在干燥的水凝胶中能够在低于60℃下胶凝的仅有的生物聚合物。在一个实施方案中,明胶和胶原肽可具有2,000道尔顿至1百万道尔顿的分子量和/或40至300的布卢姆值。
本公开还提供了减轻人类对猫过敏的症状的方法。该方法包括向猫口服施用有效量的本文公开的食品级粉末的任何实施方案和/或由制备本文所公开的食品级粉末的任何方法产生的食品级粉末。该粉末可以作为宠物食品的一部分施用,所述宠物食品还包含至少一种选自蛋白质、脂肪、碳水化合物、维生素和矿物质的组分。
本公开提供的一个或多个实施方案的优点是减少、最小化或预防致敏人中对猫的过敏反应的至少一种症状。
本公开提供的一个或多个实施方案的另一个优点是减少、最小化或预防由猫引起的过敏。
本公开提供的一个或多个实施方案的另一个优点是在其接触敏感人之前将猫的口腔暴露于结合FelD1的分子;结合的过敏原不能与人体内的肥大细胞相互作用,从而不会引起过敏反应。
本公开提供的一个或多个实施方案的另一个优点是载体/递送系统,其增强了抗-Fel D1分子在猫的口腔中的口服停留时间并且对猫非常有吸引力(例如,可在宠物食品中施用)。
本公开提供的一个或多个实施方案的另一个优点是增加所有者的吸引力,增加猫的所有量,并改善拥有猫的家庭中的成人和儿童的健康。
本公开提供的一个或多个实施方案的又另一个优点是使用多种技术来减轻人类对猫的过敏症的症状。
本公开提供的一个或多个实施方案的又另一个优点是控制包封活性分子的水凝胶的熔化/溶解。
本公开提供的一个或多个实施方案的另一个优点是使用猫的饮食解决猫过敏,从而减少或消除过敏人服用药物或避免与猫接触的需要。
本公开提供的一个或多个实施方案的另一个优点是提供因为高包封功效(例如,通过使用原位胶凝而不是胶凝浴)和/或抗-Fel D1分子的损失最小(例如,通过处理与较低温度相关的较高粘度基质)而具有高含量的抗-Fel D1分子的粉末。
本公开提供的一个或多个实施方案的另一个优点是由于胶凝温度特征,股线强度和润滑性质而容易形成挤出的包封材料。
本文描述了附加的特征和优点,并且根据以下具体实施方式和附图,这些特征和优点将显而易见。
附图说明
图1A是可用于制备食品级粉末的第一方法的实施方案的系统的示意图,所述食品级粉末减少人类对猫的过敏症的至少一种症状(“滴落方法”)。
图1B是通过滴落方法制备的食品级粉末的实施方案的示意图。
图2A是可用于制备食品级粉末的第二方法的实施方案的系统的示意图,所述食品级粉末减少人类对猫的过敏症的至少一种症状(“挤出方法”)。
图2B包含通过挤出方法制备的食品级粉末的实施方案与通过常规喷雾干燥制备的食品级粉末之间的对比照片。
图2C为可用于挤出方法的系统的实施方案的照片。
图2D是图2C的系统在使用中的照片。
图3是可用于制备食品级粉末的第三方法的实施方案的系统的示意图,所述食品级粉末减少人类对猫的过敏症的至少一种症状(“受控喷雾干燥方法”)。
图4是抗-Fel D1IgY从不同组合物的水凝胶的随时间的相对释放的图。
图5包含显示由10重量%A型明胶和2重量%蛋黄提取物的溶液制备的不同水凝胶的视觉外观的照片。将样品制备为:(I)凝胶片3×20×20mm,(II)喷雾干燥粉末(直径,D4,332μm),(III)通过滴入油中制备的湿珠粒,和(IV)由(III)制成的干燥珠粒。
图6包含由10重量%明胶和2重量%蛋黄提取物的溶液制成的粉末的横截面的扫描电子显微镜(SEM)图像。粉末通过以下制备:(I)通过喷雾干燥或(II)通过滴落然后流化床干燥。
图7A-D包含湿(A-C)和干(D)珠粒的微观结构复杂性的SEM分析。组成:9.81重量%明胶(A型),1.99重量%活性成分,1.47重量%WR78角叉菜胶,并且不含盐。(A)冷冻断裂低温-SEM,(B)具有冰升华的低温-SEM,(C)具有延长的冰升华的低温-SEM和(D)干燥珠粒的SEM。
图8是不同凝胶制备方法对抗-Fel IgY从用2重量%蛋黄提取物制备的10重量%明胶A型水凝胶的释放的影响的图。将样品制备为:(I)凝胶片3×20×20mm,(II)喷雾干燥粉末(直径,D4,3 32μm),(III)通过滴入油中制备的湿珠粒,和(IV)由(III)制成的干燥珠粒。
图9A和图9B包含通过将10重量%明胶,1重量%κ-角叉菜胶和2重量%蛋黄提取物的溶液喷雾干燥制备的粉末(A)和粉末(B)的扫描电子显微照片。
图10A-10C包含照片(A和B)和通过将10重量%明胶(A型280布卢姆),1重量%κ-角叉菜胶和2重量%蛋黄提取物的溶液喷雾干燥制备的干珠粒和湿珠粒的扫描电子显微照片(C)。
图11A和图11B包含显示不同凝胶制备方法对IgY从用2重量%蛋黄提取物制备的10重量%明胶/1重量%κ-角叉菜胶共水凝胶的释放的影响的图。将样品制备为:(I)通过滴入100mM KCl溶液制备的湿珠粒,(II)由(I)制备的干珠粒,(III)通过将10重量%明胶(A型)和2重量%蛋黄提取物滴入油中制备的湿珠粒,和(IV)由(III)制备的干珠粒。
图12包含关于通过滴落和挤出方法包封的抗-Fel D1IgY的变性和包封效率的实验数据的图。
图13包含关于通过滴落和挤出方法包封的抗-Fel D1IgY的受控释放的实验数据的图。
图14为关于通过挤出方法包封的抗-Fel D1IgY的口腔粘附性的实验数据的图。
图15为关于未包封的抗-Fel D1IgY的体内口腔停留时间的实验数据的图。
图16为关于通过受控喷雾干燥方法包封的抗-Fel D1IgY的口腔粘附性的实验数据的图。
图17为示出不同喷雾干燥的明胶粉末的组成和粉末性质(物理外观和密度)的表。粉末质量指标:1—不能泵送液体,2—堵塞喷嘴,3—广泛蜘蛛网,4—蓬松粉末,5—中等致密粉末,6—致密粉末。
图18是示出用于评估包封对IgY口腔保留的影响的临床试验的设计的示意图。
图19是用于评估包封对IgY口腔保留的影响的人类临床试验的两个测试样品的组成。
图20:在两种处理中人唾液IgY浓度相对于时间的变化i)在1g蛋粉中递送140mgIgY,ii)以明胶(A型,100布卢姆)和脱脂蛋黄蛋白的喷雾干燥粉末递送140mg的IgY。误差条表示95%置信区间,n=12个参与者。
具体实施方式
定义
如在本公开和所附权利要求中所用,单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括复数指代物,除非上下文另外明确规定。词语“包括”、“包含”和“含有”都将被解释为包含性的而非排他性的。同样地,术语“包括”、“包含”和“或”都应当视为包含性的,除非上下文明确禁止这一解释。然而,本文所公开的装置可不含未明确公开的任何要素。因此,使用术语“包括/包含”的实施方案的公开内容包括“基本上由所指明的组分组成”的实施方案和“由所指明的组分组成”的实施方案的公开内容。
在“X和/或Y”的上下文中使用的术语“和/或”应被解释为“X”或“Y”或“X和Y”。在本文中使用的情况下,术语“示例”和“诸如”(特别是当随后是术语列表时)仅仅是示例性和说明性的,并且不应被视为是排他性或全面性的。本文所公开的任何实施方案可与本文所公开的任何其它实施方案组合,除非另有明确说明。
本文中使用的范围是缩略的,以避免列出该范围内的每个值。可选择范围内的任何适当的值作为该范围的上限值或下限值。此外,本文中的数值范围包含该范围内的所有整数或分数。
本文中表示的所有百分数均以占组合物的总重量的重量计,除非另有表示。提及pH时,其值对应于使用标准设备在25℃下测量的pH。如本文所用,关于数字的“约”或“基本上”应理解为是指某一数值范围内的数字,例如该所提及数字的-10%至+10%、-5%至+5%、-1%至+1%,并且在一个方面-0.1%至+0.1%的范围。
“食品级”是指粉末是猫可食用的并且对猫无毒。例如,食品级粉末包含最多5.0重量%的甘油。
术语“过敏”与“过敏应答”或“过敏反应”是同义的。这些术语中的每一者是指动物体内发生的原本不会有害于动物的针对外源性抗原(或“过敏原”)的免疫应答状态。过敏应答的“症状”是指免疫应答的任何量度,例如在分子水平(包括蛋白质或转录物或基因的活性或表达的量度)、细胞水平、器官水平、系统水平或生物体水平上。此类症状可包括一种或多种此类水平。“减少至少一种症状”包括在此类症状发生之前将其减少,使得不存在对过敏应答的症状,从而防止过敏应答。
症状可包括一般现象,诸如通常与过敏相关的炎症、呼吸道疾病、肿胀或不适、鼻炎、水肿和过敏性皮肤病,包括但不限于特应性皮炎(例如,湿疹)、荨麻疹(例如,麻疹)和血管性水肿,以及过敏性接触性皮炎。过敏性应答“症状”的更具体现象包括例如在细胞水平的任何可测量或可观察的变化,包括但不限于细胞群的局部或系统变化、嗜酸性粒细胞增多症、免疫细胞(包括例如肥大细胞和/或嗜碱性粒细胞)的募集和/或活化、抗原递呈细胞(包括但不限于携带FcεRI的树突细胞)的变化、细胞内或分子变化,包括免疫级联中一个或多个步骤的测量或观察、介导过敏性应答的细胞内化合物(例如,介导因子)的释放以及一个或多个细胞因子(例如,IL-3、IL-5、IL-9、IL-4或IL-13)或其相关化合物或拮抗剂的变化。本领域的技术人员应当理解,本文所定义的某些症状比其他症状更易测量,并且一些症状通过对症状的主观评估或自我评估来测量。对于其他症状,存在方便或快速的测定法或测量法,用于客观地评估变化。
如本文所用,“有效量”是施用给猫的任何本文所公开的组合物的量,其在与猫相同的环境(例如,房屋、房间、汽车、办公室、酒店、庭院、车库)中减少致敏人中猫过敏症的至少一种症状。相对术语“减少至少一种症状”和类似术语是指相对于如果不使用组合物和方法但条件另外相同的严重性,则由本文所公开的组合物和方法所导致的降低的严重性。如本文所用,“减少至少一种症状”包括但不限于在这些症状发生之前将其减少,使得不存在对过敏应答的症状,从而防止过敏应答。
如本文所用,“抗-Fel D1分子”是能够特异性结合家猫过敏原1号(Fel D1)的任何分子,例如抗体、适配体、Fel D1的激动剂/拮抗剂、或此类分子的部分(例如抗体的抗原结合片段(Fab))。术语“抗体”包括任何类型且来自任何物种的多克隆和单克隆抗体,以及免疫球蛋白片段诸如Fv、Fab、Fab'、F(ab')2、或与抗原具有分子特异性相互作用(例如,展示特异性结合)的其他抗原结合抗体片段、序列或子序列。
在一个实施方案中,抗-Fel D1分子是通过用Fel D1免疫禽类(诸如鸡)而产生的抗体(例如IgY),以引起蛋中抗体的产生。抗体可与蛋分离并施用于动物;或者可将蛋和/或蛋的一部分诸如蛋黄直接施用到适于施用给动物的食物或其他组合物中或与他们混合。在一个方面,抗-Fel D1分子可为Wells等人的美国专利号8,454,953中公开的分子的实施方案中的一个,“Methods for reducing allergies caused by environmentalallergens”,该专利全文以引用方式并入本文。
本文公开的方法、装置和其他提议不限于具体方法、方案及试剂,因为正如本领域的技术人员将认识到的,这些具体方法、方案及试剂可作出改变。此外,本文所用的术语仅出于描述具体实施方案的目的,并不限制所公开的或要求保护的范围。
除非另外定义,否则本文使用的全部科技术语、专业术语及首字母缩略词都具有本公开所属领域或使用这些术语的领域的普通技术人员所通常理解的含义。虽然可使用任何与本文所述那些组合物、方法、制品或者其他装置或材料类似或等效的组合物、方法、制品或者其他装置或材料,但本文描述了特定的设备、方法、制品或者其他装置或材料。
实施方案
本公开整体涉及使用活性分子的组合物和方法,该活性分子降低人类对猫的过敏症的至少一种症状。更具体地讲,本公开涉及通过延长活性分子留在施用活性分子的猫的口腔中的时间和/或增加在口腔中检测到的活性分子的浓度来提高活性分子的有效性。可通过两种不同的方式测量增加活性分子,例如IgY,口腔停留。在一个方面,活性分子可被测量为在特定时间点例如在食用5分钟后具有更高的浓度。在另一方面,活性分子可被测量为花费更长时间降低至在口腔中的某一阈值以下,例如,大于10ug/ml,≥1ug/ml或甚至>100ng/ml。
本公开的一个方面是提供抗-Fel D1分子的缓释的食品级粉末。将抗-Fel D1分子包封在干燥的水凝胶中。
在一个实施方案中,食品级粉末包含干燥的水凝胶,干燥的水凝胶包含明胶、角叉菜胶和抗-Fel D1分子。在一个方面,明胶和角叉菜胶是在干燥的水凝胶中能够在低于60℃下胶凝的仅有的生物聚合物。在另一方面,明胶和角叉菜胶是仅有的非过敏还原生物聚合物。明胶可来自任何来源,诸如猪、牛或鱼。在一个方面,与角叉菜胶一起使用的明胶是A型明胶(酸处理的),具有正电荷并且具有2,000尔顿至2,000,000道尔顿(即40布卢姆至300布卢姆),或在一个方面100布卢姆至200布卢姆的中等分子量。例如,在一个具体的实施方案中,是在pH低于7.0下具有正电荷的猪明胶。
角叉菜胶可以是来自藻类或植物源的任何角叉菜胶(例如,κ、ι或γ角叉菜胶)。在一个方面,角叉菜胶可包含盐离子(例如钾、钙、镁、钠)。例如,角叉菜胶可以是κ角叉菜胶、ι角叉菜胶、κ角叉菜胶和ι角叉菜胶的共聚物或κ角叉菜胶和ι角叉菜胶的混合物。一个方面是在钾存在下胶凝的角叉菜胶,即κ角叉菜胶或κ角叉菜胶和ι角叉菜胶的共聚物。
食品级粉末可包含抗-Fel D1分子的源。在一个方面,抗-Fel D1分子可以是抗-Fel D1IgY,并且源可以是来自用Fel D1免疫的禽类的部分脱脂的蛋黄粉末。粉末可包含0.5重量%至90重量%的明胶,0.1重量%至50重量%的角叉菜胶和10重量%至99.5重量%的抗-Fel D1分子的源;在一个方面,10.0重量%至80.0重量%的明胶,0.5重量%至20重量%的角叉菜胶和20重量%至89.5重量%的抗-Fel D1分子的源;并且在一个具体方面,20.0重量%至80.0重量%的明胶,1重量%至10重量%的角叉菜胶和19重量%至79重量%的抗-Fel D1分子的源;并且在另一方面,25.0重量%至60.0重量%的明胶,1重量%至10重量%的角叉菜胶和39重量%至74重量%的抗-Fel D1分子的源。
本公开的另一方面是制备食品级粉末的方法,该食品级粉末提供抗-Fel D1分子的缓释,例如如上所述的包含明胶,角叉菜胶和抗-Fel D1分子的粉末。在一个方面,该方法可包括将包含明胶,角叉菜胶和抗-Fel D1分子的溶液加热至约60℃的温度。该方法还可包括形成加热溶液的液滴,例如通过使加热溶液通过喷嘴。基质材料(明胶和角叉菜胶)可通过喷嘴雾化。图1A是用于进行该方法的合适设备的非限制性示例的示意图,图1B为包封在由该方法形成的明胶-角叉菜胶共聚物中的活性化合物(抗-Fel D1分子)的图示。
可通过使液滴经受包含盐或油的胶凝浴来胶凝液滴,例如通过将液滴滴落,喷射或刺入浴中,以形成其中包封抗-Fel D1分子的胶凝珠。在一个实施方案中,注射器泵或容积泵将加热溶液通过喷嘴推动到胶凝浴中。
所述浴可包含约25mM-100mM的氯化钾或100mM的氯化钙,或两者皆有。就此而言,本发明人发现,使用高于100mM的氯化钾浓度的一些实施方案导致角叉菜胶熔点过高,从而提高加工温度并导致抗-Fel D1分子的活性由于变性而损失相当大(30%-80%)。在一些实施方案中,氯化钾可被氯化钙部分或完全地取代。
可收集,任选洗涤并干燥胶凝珠以形成食品级粉末。在一个方面,胶凝珠可通过流化床干燥进行干燥。例如,可将经洗涤的湿珠在具有25℃的入口空气温度的流化床干燥器中在80m3/分钟的空气流速下干燥3至5小时。
虽然上文详述的方法适于制备提供抗-Fel D1分子的缓释的食品级粉末,但本发明人发现了一种挤出方法,其中将较高百分比的抗-Fel D1分子包封并且具有更大的控制粉末颗粒的最终尺寸的能力。此外,当角叉菜胶在挤出之前掺入到混合物中时,该挤出方法令人惊讶地导致更好的结构(例如,更光滑的表面,更少的夹杂物)。
因此,本公开提供制备食品级粉末的方法的另一个实施方案,该食品级粉末提供抗-Fel D1分子的缓释并包含明胶,角叉菜胶和抗-Fel D1分子。该方法可包括在具有至少约40℃的温度的保持罐中加热包含明胶,角叉菜胶和抗-Fel D1分子的溶液。然后可将溶液加热至至少约50℃-60℃的温度,例如在管式热交换器的漏斗和/或泵中。然后,管式热交换器可将加热溶液冷却并挤出其中包封抗-Fel D1分子的水凝胶。例如,管式热交换器可具有约15℃至约25℃的温度。在一个方面,该方法不采用胶凝浴,从而避免了与此类浴相关联的损失,例如洗涤和收集胶凝珠。
图2A为用于执行该方法的合适设备的非限制性实施例的示意图,图2B包含将通过该方法获得的致密粉末结构与通过常规喷雾干燥获得的高度多孔粉末结构进行比较的照片,图2C为用于执行该方法的合适设备的非限制性实施例的照片。热交换器可挤出所需形状的水凝胶,例如如图2D的照片所示的水凝胶股线。
在一个实施方案中,在干燥之前将挤出的水凝胶浸入包含氯化钙的组合物中。在另一个实施方案中,在干燥之前将挤出的水凝胶浸入包含氯化钾的组合物中,例如约1mM氯化钾的浴。在一个方面,挤出的水凝胶可在干燥烘道或流化床干燥器中干燥。所述方法可包括将干燥的水凝胶研磨至预定尺寸以形成粉末。
例如,挤出材料的股线(或其切割件)可在具有20℃-25℃的入口空气温度的流化床干燥器中以120m3/分钟的空气流速干燥30至60分钟,然后在约40℃下以约120m3/分钟的空气流速再干燥60至90分钟。收集所得的干燥材料,并且“按原样”使用或研磨以将粒度进一步减小至所需的尺寸。
又如,挤出材料的股线(或其切割件)可在具有20℃-25℃的入口空气温度的干燥烘道中以20-80m3/分钟的空气流速干燥30至60分钟,然后在约40℃下以约20-120m3/分钟的空气流速再干燥60至90分钟。收集所得的干燥材料,并且“按原样”使用或研磨以将粒度进一步减小至所需的尺寸。
如上所述,本发明人惊奇地发现,优化的喷雾干燥条件以及对明胶性质(例如分子量)和壁材料的仔细选择可形成能够被喷雾干燥的制剂,所得粉末保持其粘膜粘附性。因此,本公开的另一个方面是提供抗-Fel D1分子的缓释并且包含喷雾干燥的水凝胶的食品级粉末,所述水凝胶包含抗-Fel D1分子和0.5重量%至90.0重量%的明胶。包含喷雾干燥的水凝胶的粉末具有约0.1g/cm3至约0.6g/cm3,约0.265g/cm3至约0.5g/cm3,或在一个方面,约0.4g/cm3至约0.5g/cm3的密度。可将抗-Fel D1分子包封在喷雾干燥的水凝胶中。在一个实施方案中,明胶可以是在喷雾干燥的水凝胶中能够在低于60℃下胶凝的仅有的生物聚合物。在一些方面,明胶可具有40至300,或40至200,或甚至约100的布卢姆值。在一个方面,明胶可为A型明胶(酸处理的)。
在一个实施方案中,粉末可包含10.0重量%至99.5重量%的抗-Fel D1分子的源(例如,来自用Fel D1免疫的禽类的部分脱脂的蛋黄粉末)。在一个方面,粉末可包含10.0重量%至80.0重量%的明胶和20重量%至90重量%的抗-Fel D1分子的源。在另一方面,粉末可包含25.0重量%至80.0重量%的明胶和20重量%至75重量%的抗-Fel D1分子的源。在另一方面,粉末可包含25.0重量%至60.0重量%的明胶和40重量%至75重量%的抗-FelD1分子的源。
图3示出了用于制备该粉末实施方案的合适设备的非限制性实施例。用于制备该粉末实施方案的方法可包括将包含抗-Fel D1分子和5.0重量%至20.0重量%的明胶的溶液喷雾干燥,以形成其中包封抗-Fel D1分子的干燥的水凝胶,其中明胶具有40至200的布卢姆值。在一个实施方案中,明胶可以是在溶液中能够在低于60℃下胶凝的仅有的生物聚合物。在另一个实施方案中,明胶可具有40至200,或在一个方面约100的布卢姆值。
该溶液可包含0.5重量%至30.0重量%的抗-Fel D1分子的源(例如,来自用FelD1免疫的禽类的部分脱脂的蛋黄粉末)。在一个方面,溶液可包含2.0重量%至15.0重量%的明胶和2.0重量%至20.0重量%的抗-Fel D1分子的源;并且在一个具体方面,7.5重量%至12.5重量%的明胶和5重量%至20重量%的抗-Fel D1分子的源。
本公开的另一个方面是减少人类对猫的过敏症的症状的方法。该方法包括向猫口服施用有效量的本文所公开的任何食品级粉末和/或由本文所公开的任何方法产生的食品级粉末。该粉末可以作为宠物食品的一部分施用,所述宠物食品还包含至少一种选自蛋白质、脂肪、碳水化合物、维生素和矿物质的组分。该方法可将抗-Fel D1分子与猫的口腔中的Fel D1结合,从而防止Fel D1在易受或患有由Fel D1引起的过敏的人类中引起过敏反应。
实施例
以举例的方式而非进行限制,以下非限制性实施例在本公开提供的实施方案中说明了减少人类对猫的过敏症的症状的组合物和方法。
实施例1
进行了第一项研究以了解不同干燥方法对抗-Fel D1IgY从水凝胶中的释放的影响,以帮助指导用于递送系统的制造方法的开发。两种不同的水凝胶制剂;使用两种方法产生i)仅简单明胶制剂和ii)明胶/κ角叉菜胶共凝胶制剂;i)直接喷雾干燥和ii)珠粒形成后进行干燥。中心假设是在干燥之前胶凝化水凝胶将导致更好的胶囊结构,其更能够减慢抗-Fel D1IgY从干燥的水凝胶的释放速率。
该研究发现用于产生水凝胶粉末的干燥类型可对抗-Fel D1IgY从水凝胶微胶囊的释放速率具有重大影响。已发现,在干燥前胶凝化水凝胶制剂导致具有更厚和更致密壁结构的微胶囊。所得的“凝胶→干燥”微胶囊具有的Fel D1IgY释放速率是喷雾干燥的微胶囊的1/2.75。在仅简单明胶微胶囊与复合明胶/κ角叉菜胶共凝胶之间未观察到抗-FelD1IgY释放速率的差异。在明胶/κ角叉菜胶共凝胶的湿水凝胶中,抗-Fel D1IgY从共凝胶的释放是仅明胶凝胶的十分之一。
先前包封内的工作评估了几种不同的技术(即水凝胶、自组装结构、脂质体和油包水乳液)以增强抗-Fel D1IgY在猫的口腔中的停留时间。总的来说,发现A型明胶生物聚合物水凝胶是主要技术,因为他们具有高包封功效和固有的粘膜粘附性。
如图4所示,简单明胶(10重量%)水凝胶的局限性在于,当暴露于口腔条件(37℃和模拟唾液)时,他们快速释放所有包封的IgY。然而,已发现将明胶水凝胶与第二水凝胶(例如琼脂、角叉菜胶)组合可使润湿明胶/κ角叉菜胶水凝胶在两小时内释放抗-FelD1IgY。令人惊讶的是,与单独使用明胶或单独使用角叉菜胶的简单水凝胶相比,所有的共凝胶具有更慢的抗-Fel D1IgY释放动力学,突显了组合这两种生物聚合物的独特协同作用。
这些水凝胶具有高Aw(>0.6),这对抗-Fel D1IgY的稳定性存在来自微生物腐败,蛋白质氧化/变性和酶降解的显著风险。因此,必须干燥这些水凝胶结构,而不会损失其在2至4小时内缓释抗-Fel D1IgY的能力。水凝胶基质可使用多种方法干燥,每种方法对最终粉末结构具有影响,从而对IgY释放动力学具有影响。最常规的方法是喷雾干燥,其中母液在雾化气流中直接干燥,而不使溶液通过凝胶状态。第二种方法是“凝胶→干燥”,其中在干燥步骤之前产生母液的湿凝胶颗粒(例如通过挤出/滴落或造粒)。“凝胶→干燥”方法的优点是水凝胶的结构更有可能被保留。
首先使用由明胶构成的简单水凝胶来检查不同干燥技术对抗-Fel D1IgY从水凝胶的释放的影响。母液由10重量%明胶(A型布卢姆280)和2重量%蛋黄提取物组成。如图5所示,根据溶液是直接干燥而不胶凝(图II)还是在干燥前胶凝(图IV),从该溶液获得不同的结构。
如图6所示,当直接干燥溶液而不胶凝时,所得的粉末颗粒很小,非常多孔,甚至是中空的(图I)。这种粉末结构对于由低总固体(12重量%)的溶液制成的喷雾干燥的粉末是常见的。当明胶溶液在干燥前通过滴落胶凝时,所得粉末颗粒“收缩”,但具有厚的,非常致密的粉末壁结构(图II)。
显然,在干燥前胶凝化水凝胶导致与经由喷雾干燥的直接干燥显著不同的结构。为了深入了解该结构是如何形成的,使用具有冰升华的低温SEM来研究水凝胶的微观结构。图7A示出了凝胶珠粒的外部视图,其结构的仅有的明显的元件为其为具有粗糙表面的球体。水凝胶的内部结构的横截面分析可通过冷冻断裂SEM来实现(图7B和图7C)。图7B和图7C两者均示出,明胶水凝胶形成网状结构,其中每个单元的壁内具有明胶的浓度,并且每个单元的中间具有大空隙。除去结构中的水的冰升华示出了明胶水凝胶的多孔结构的复杂性,其中存在形成致密蜂窝状基质的多孔结构的层次结构。
在初始观察时,人们可能会认为这些细胞的大小(在微米尺度上)太大而不能限制IgY的传输。然而,检查明胶凝胶的壁的精细结构显示出非常厚的致密网络(图7B的右图)。在干燥时,该多孔结构自身塌陷以形成粉末颗粒的非常致密的壁。
通过将粉末分散在37℃的盐水中以模拟口腔条件来评估抗-Fel D1IgY从这些不同颗粒中的释放。图8显示了抗-Fel D1IgY从不同水凝胶结构的释放:(I)湿凝胶片,(II)喷雾干燥的颗粒,(III)湿水凝胶珠粒和(IV)干燥的水凝胶珠粒。
抗-Fel D1IgY从对照样品10重量%明胶的凝胶片中的释放在图8中显示。当将凝胶片浸入冷盐水中时,最初几乎没有抗-Fel D1IgY,表明其具有高IgY包封效率(>98%)。在浸入37℃的盐水中时,释放的抗-Fel D1IgY的量迅速增加,5分钟后达到80%,15分钟后达到100%。由于10重量%的明胶凝胶在高于25℃-30℃的温度下熔化,因此可以预期这种快速释放。
同样,小的湿明胶珠粒在浸入37℃盐水中时迅速释放抗-Fel D1IgY,在15分钟内释放100%的IgY,这也是由于水凝胶的熔化(图8)。然而,当干燥湿珠粒时,抗-Fel D1IgY的释放明显减慢:15分钟后,仅释放33.5%的IgY;在30分钟时,释放75%的IgY;60分钟时,释放100%的IgY(图8)。
相比之下,使用喷雾干燥将明胶溶液直接干燥不导致IgY释放的延迟。当将喷雾干燥的明胶粉末浸入37℃盐水中时,在5分钟后50%的IgY释放,在15分钟后100%释放(图8)。
与胶凝后干燥的珠粒相比,IgY从喷雾干燥的粉末的释放的速率存在显著差异。IgY释放的这种差异可能是由于两种技术产生的粉末壁结构的差异。喷雾干燥导致具有非常薄的壁结构的胶囊,其将具有暴露于盐水的相对较高量的表面积。相比之下,在胶凝后将明胶溶液干燥产生粉末颗粒,所述粉末颗粒具有厚的致密壁结构,其具有暴露于盐水的相对较低量的表面积。较低的表面积与体积比以及较厚/较致密的粉末壁结构可能导致粉末颗粒的溶解慢得多,导致更慢的抗-Fel D1IgY释放。
也使用由明胶和角叉菜胶组成的复合水凝胶共凝胶来检查不同干燥技术对抗-Fel D1IgY从水凝胶的释放的影响。母液由10重量%的明胶(A型布卢姆280),1重量%的κ角叉菜胶和2重量%的蛋黄提取物组成。使用(i)喷雾干燥和(iii)滴落然后流化床干燥来评估干燥共凝胶体系的效果。
图9A示出了明胶/κ角叉菜胶体系在其被喷雾干燥后的外观。喷雾干燥的明胶/κ角叉菜胶粉末由具有薄壁的中空小颗粒组成。此外,聚集体存在于结构中,所述结构被发现是通过溶液的线结合在一起的小的单独粉末颗粒的集合(图9B)。这种结构是由于10重量%明胶,1重量%κ角叉菜胶母液的高粘弹性而产生的。高粘弹性溶液难以雾化,因为两个分离液滴之间的流体桥阻碍了完全的液滴破碎,导致了股线的形成。这些股线可以通过与彼此或喷雾塔中的液滴相互作用来形成纤维或聚集体。当旋转盘用于溶液的雾化时尤其如此。
图10A和10B分别显示了湿明胶/κ-角叉菜胶共珠粒和干明胶/κ-角叉菜胶共凝胶珠粒的外观,两者均通过将母液滴加到100mM KCl中而产生。将珠粒胶凝然后将其干燥的过程产生粉末颗粒,其具有厚的,非常致密的粉末壁结构(图10C)。大多数粉末颗粒在其中具有许多气穴,可能是由于去除水导致的体积损失的结果。类似于仅明胶体系的升华实验(未显示)表明,与仅明胶体系相比,共凝胶具有类似的湿珠粒结构。
图11A提供了抗-FelD1IgY从10重量%明胶/1重量%κ-角叉菜胶共凝胶喷雾干燥的粉末的释放曲线。当置于冷盐水中时,明胶/角叉菜胶共凝胶喷雾干燥的粉末释放10%的IgY,表明IgY包封效率高(约90%)。然而,当将共凝胶粉末置于37℃盐水中时,IgY的释放迅速,在5分钟后30%的IgY释放,在15分钟后90%释放,在30分钟后100%释放。这种释放速率与仅明胶胶囊相当,并且表明κ-角叉菜胶的存在对IgY释放没有影响。
图11A还提供了IgY从10重量%明胶/1重量%κ-角叉菜胶共凝胶珠粒的湿式和干式形式的释放曲线。湿珠粒和干珠粒两者均表现出高IgY包封效率,当将珠粒分散于冷盐水(4℃)中时释放<2重量%的IgY。当将湿珠粒浸入37℃盐水中时,IgY释放是快速的:在5分钟后约50%的IgY释放,并且在15分钟后100%释放。与湿共凝胶珠粒相比,干共凝胶珠粒表现出较慢的IgY释放。当将干共凝胶珠粒置于37℃盐水中时,IgY释放缓慢:5分钟后17%的IgY释放,15分钟后升至40%,30分钟后67%,在60分钟左右整个IgY释放。
在干燥之前胶凝化共凝胶溶液导致IgY释放速率显著减慢(约2.75倍)。然而,干共凝胶珠粒的IgY释放速率与干明胶珠粒的IgY释放速率相当(图11B)。这表明κ-角叉菜胶的存在不会导致IgY释放的额外减缓。该结果与先前对湿凝胶的工作形成对比,这表明与仅明胶水凝胶相比,明胶/角叉菜胶共凝胶具有1/10的IgY释放速率(图11B)。与干明胶凝胶珠粒(在干燥状态和润湿状态下)相比,干共凝胶缺乏更缓慢的IgY释放速率表明角叉菜胶凝胶未正确形成。因为所述溶液的粘度太高而不能滴落,所以通过将共凝胶溶液滴入100mM KCl溶液中,形成这些珠粒。通过在胶凝之前使KCl在共凝胶溶液中产生初始的共凝胶片。从先前的实验中显而易见的是,从共凝胶溶液中除去KCl可能是IgY释放不因在共凝胶中存在角叉菜胶而减缓的关键原因。
总之,用于产生水凝胶粉末的干燥类型可能对IgY从水凝胶微胶囊释放的速率具有重大影响。发现在干燥之前胶凝化水凝胶制剂导致具有更厚和更致密的壁结构的微胶囊。所得的“胶凝→干燥”微胶囊的IgY释放速率是喷雾干燥的微胶囊的IgY释放速率的1/2.75。在仅简单明胶微胶囊和复合明胶/κ-角叉菜胶共凝胶之间没有观察到IgY释放速率的差异。在湿水凝胶中,明胶/κ-角叉菜胶共凝胶提供的IgY释放是仅明胶凝胶的IgY释放的1/10。
实施例2
进行第二个实验以研究本文公开的采用胶凝浴的滴落方法和本文公开的不使用胶凝浴的挤出方法。在明胶-角叉菜胶共聚物凝胶中使用抗-Fel D1IgY。
口服递送媒介物应具有高含量的活性分子。活性分子的典型损失是由于加工/制造期间的低包封功效和IgY变性造成的。与变性和包封效率相关的滴落方法和挤出方法的结果示于图12中。关于抗-Fel D1IgY的变性,在滴落方法的制造期间损失20%至60%的IgY,并且在挤出方法的制造期间损失0%至15%的IgY。关于抗-Fel D1IgY的包封,在滴落方法的胶凝步骤期间在浴中损失约20%的IgY,并且在挤出方法期间损失小于1%的IgY。
口服递送媒介物还应具有活性分子的受控释放;抗-Fel D1IgY在猫的口腔中的释放通过溶解发生。因此,在37℃的模拟唾液中研究抗-Fel D1IgY的释放。如图13所示,蛋粉中的抗-Fel D1IgY具有快速释放:在不到5分钟内释放100%(对照1),并且仅明胶中包封的抗-Fel D1IgY也具有快速释放:在不到5分钟内释放90%(对照2)。明胶-角叉菜胶共聚物凝胶当使用滴落方法时允许100%释放的时间从30分钟调整到90分钟,并且当使用挤出方法时,允许100%释放的时间从30分钟调整到60分钟。
口服递送媒介物还应具有口腔粘附性,因为抗-Fel D1IgY在猫的口腔中的缓释需要IgY在口腔中停留一段时间。粘膜粘附颗粒因此是有利的,因为他们可以粘附到唾液膜上。通过研究在约37℃下与人唾液膜的相互作用,特别是通过在36.8℃下测量对唾液薄膜的吸附,将来自挤出方法的颗粒的口腔粘附与游离IgY进行比较。结果示于图14中。游离IgY与唾液膜没有相互作用,但来自共凝胶挤出的颗粒与唾液膜的相互作用适度增加,颗粒清晰沉积在膜上(Δ质量期D)。
实施例3
为了进一步研究使用包封来改善抗-Fel D1IgY的口服停留时间,进行了第三个实验。图15是显示在喂食1g或2g含有抗-Fel D1IgY的蛋黄与湿食物或干食物后抗-Fel D1IgY在猫的唾液中的浓度的图。在猫的口腔中检测到不到5%的抗-Fel D1IgY,其余的被快速吞咽。
通过研究在约37℃下与人唾液膜的相互作用,特别是通过在36.8℃下测量对唾液薄膜的吸附,将来自受控喷雾干燥方法的颗粒的口腔粘附与游离IgY进行比较。结果示于图16中。游离IgY与唾液膜没有相互作用,但来自受控喷雾干燥方法的颗粒与唾液膜的相互作用明显增加,颗粒清晰沉积在膜上(Δ质量期D)。
实施例4
进行第四个实验,其中进一步分析喷雾干燥的明胶/IgY混合物。不受理论束缚,本发明人认为喷雾干燥的明胶/IgY混合物的粘膜粘附依赖于允许一些初始水合的多孔粉末结构,其通过i)静电相互作用(明胶上的正电荷)和对水的水合/竞争(即颗粒是粘性的)的组合产生粘膜粘附相互作用。明胶-角叉菜胶的玻璃态共凝胶虽然仍然有效,但由于水合慢得多而具有较低的口腔粘附。
如果可以使颗粒粘附到口腔表面,则可以通过控制溶解速度来进一步增强口腔停留时间。本文公开的滴落和挤出方法的粉末通过粉末孔隙率和角叉菜胶凝胶的受控拆卸来控制溶解。喷雾干燥的明胶/IgY混合物使用多孔明胶粉末,其具有相对快速的体外溶解,主要目的是使口腔粘附最大化。然而,临床试验的非正式反馈表明,体内溶解比体外观察慢,并且可能是有益的。
众所周知,由明胶产生粉末可能是困难的。主要的技术挑战是明胶溶液的粘弹性在干燥器中的雾化过程中限制了液滴破裂。如果溶液具有过高的粘度,或者如果雾化过快,则溶液产生长丝结构而不是粉末颗粒。这产生具有低密度的“蓬松”粉末。低粉末密度在粉末处理,粉末稳定性或尝试将其作为包衣施加到产品时产生问题。
如图17所示,为了克服具有低密度的蓬松明胶粉末的问题,本发明人发现了三个可以改善密度的因素:(1)明胶浓度-明胶浓度高于16%产生高度丝状粉末,因此不能喷雾干燥(表1-TJW 040系列-比较ii);(2)明胶分子量(布卢姆强度)—切换至较低分子量的明胶(布卢姆100而不是280)降低长丝形成,增加粉末密度(表1—比较i);以及(3)与其他蛋白质/分子组合—增加活性成分/赋形剂的量降低长丝形成,增加粉末密度(表1-TJW 040系列比较ii)。
使用这些策略,粉末密度可以从对于TJW 020A样品的0.1-0.15g/cm3的不可用粉末增加到TJW 050A和106种粉末,其密度(0.265-0.3g/cm3)接近商业乳清蛋白分离物(WPI)乳粉(0.43g/cm3)的密度。
实施例5
进行第五个实验,评估包封对IgY口服保留的影响。使用随机交叉研究设计(图18),向12名人类受试者给予两种粉末[i)IgY对照-脱脂蛋黄粉末和ii)包封在明胶(a型,100布卢姆)中的脱脂蛋黄粉末],并且要求将粉末咀嚼30秒然后吞咽。两个测试样品的组成和剂量在图19中给出。根据图18中概述的临床试验方案,通过在基线和不同时间点测量唾液中的IgY浓度来评估IgY的口服保留。口服保留的量度是;最大浓度(Cmax)和曲线下的面积(AUC)。
图20i示出了对照IgY和包封在喷雾干燥的明胶中的IgY的参与者唾液中IgY浓度(ng.ml-1)随时间的平均变化。在食用对照IgY后,IgY浓度在5分钟(第一时间点)时以206645±71911ng.ml-1达到峰值。在食用对照IgY(脱脂蛋黄粉末)后,唾液IgY浓度则在15分钟时指数下降至21502±6095ng.ml-1,30分钟时为3224±905ng.ml-1,60分钟时为1329±480ng.ml-1,两小时后以200μg.mL-1至300μg.mL-1达到稳定水平。在人口腔中检测到的IgY的平均总量在1.95mg(单整合)和3至3.5mg(双指数pk整合)之间。在人受试者口腔中检测到的IgY的平均量为初始施用量(约123mg)的约1.6%至2.8%。
图20ii还示出了包封对人唾液IgY浓度的影响。喷雾干燥包封的IgY在5分钟时具有871,000ng.mL-1的Cmax,这是对照IgY的4.2倍(p<0.001)。在食用对照IgY(脱脂蛋黄粉末)后,唾液IgY浓度则在15分钟时指数下降至81,500ng.mL-1,30分钟时为10,200ng.mL-1,60分钟时为980ng.mL-1,两小时后以400ng.mL-1至500ng.mL-1达到稳定水平。在食用喷雾干燥包封的IgY后,前30分钟内IgY的唾液浓度是对照IgY的4倍(p<0.05)。虽然喷雾干燥包封的IgY和对照IgY的唾液IgY浓度在摄取后60分钟是相同的,但喷雾干燥包封的唾液IgY浓度在90分钟和120分钟时为对照的两倍(p<0.15)。对于喷雾干燥包封的IgY,检测到的IgY的总量为7.8(梯形整合)至13.2(双指数pk整合)mg IgY,其等于施用剂量的6.4%至10.7%。这些结果突出表明,使用喷雾干燥将IgY包封在粘膜粘附明胶中,可将IgY的功效(Cmax和AUC两者)提高4倍(p<0.001)。
应当理解,对本文所述的目前实施方案作出的各种变化和修改对于本领域的技术人员将显而易见。可在不脱离本发明主题的实质和范围且不减弱其预期优点的前提下作出这些变化和修改。因此,此类变化和修改旨在由所附权利要求书涵盖。
Claims (20)
1.食品级粉末,所述食品级粉末提供抗-Fel D1 IgY抗体的缓释,所述食品级粉末包含干燥的水凝胶和所述抗-Fel D1 IgY抗体;其中所述干燥的水凝胶包含明胶、胶原肽、或明胶和胶原肽;和角叉菜胶;
其中将所述抗-Fel D1 IgY抗体包封在所述干燥的水凝胶中。
2.根据权利要求1所述的食品级粉末,其中所述明胶或所述明胶和胶原肽来自在低于7.0的pH下具有正电荷的A型猪明胶。
3.根据权利要求1所述的食品级粉末,其中所述角叉菜胶选自:(i)κ角叉菜胶,(ii)ι角叉菜胶,(iii)κ角叉菜胶和ι角叉菜胶的物理混合物,和(iv)κ角叉菜胶和ι角叉菜胶的共聚物。
4.根据权利要求1所述的食品级粉末,其中所述明胶和所述角叉菜胶是所述干燥的水凝胶中唯一的生物聚合物。
5.根据权利要求1所述的食品级粉末,其中所述干燥的水凝胶为喷雾干燥的水凝胶,其包含所述抗-Fel D1 IgY抗体和0.5重量%至90重量%的明胶,并且所述粉末具有0.265g/cm3至0.3g/cm3的密度。
6.根据权利要求5所述的食品级粉末,其中所述明胶和胶原肽具有介于2,000道尔顿和1百万道尔顿之间的分子量和40至300的布卢姆值。
7.根据权利要求5所述的食品级粉末,所述食品级粉末包含25.0重量%至60.0重量%的所述明胶和40重量%至75重量%的所述抗-FelD1 IgY抗体源。
8.制备提供抗-Fel D1 IgY抗体的缓释的食品级粉末的方法,所述方法包括:
加热包含明胶、角叉菜胶和所述抗-Fel D1 IgY抗体的溶液;
形成所述加热溶液的液滴;
通过使所述液滴经受包含盐或油的胶凝浴来胶凝化所述液滴,以形成其中包封所述抗-Fel D1 IgY抗体的胶凝珠;以及
将所述胶凝珠干燥以形成所述食品级粉末。
9.根据权利要求8所述的方法,其中所述胶凝浴包含约100mM的氯化钾、约100mM的氯化钙、或两者皆有。
10.根据权利要求8所述的方法,其中所述干燥包括使所述胶凝珠经受流化床干燥。
11.根据权利要求8所述的方法,其中所述明胶和所述角叉菜胶是在所述干燥的水凝胶中能够在低于60℃下胶凝的仅有的生物聚合物。
12.制备提供抗-Fel D1 IgY抗体的缓释的食品级粉末的方法,所述方法包括:
加热包含明胶、角叉菜胶和所述抗-FelD1 IgY抗体的溶液;
挤出所述的加热溶液以冷却和成形所述加热溶液并形成其中包封所述抗-FelD1 IgY抗体的挤出的水凝胶;以及
将所述挤出的水凝胶干燥。
13.根据权利要求12所述的方法,其中所述挤出通过具有0.1℃至35℃的温度的管式热交换器来进行。
14.根据权利要求12所述的方法,所述方法还包括在所述干燥之前将所述挤出的水凝胶浸入包含钙、镁、钾、铷或铯的组合物中。
15.根据权利要求12所述的方法,其中所述干燥包括使所述挤出的水凝胶经受干燥烘道、烘箱或流化床干燥器。
16.制备提供抗-Fel D1 IgY抗体的缓释的根据权利要求1所述的食品级粉末的方法,所述方法包括将包含所述抗-Fel D1 IgY抗体和5.0重量%至20.0重量%的明胶和胶原肽的溶液喷雾干燥,以形成其中包封所述抗-Fel D1 IgY抗体的干燥的水凝胶,其中所述明胶和胶原肽具有介于2,000道尔顿和1百万道尔顿之间的分子量和或40至300的布卢姆值。
17.根据权利要求16所述的方法,其中所述明胶和胶原肽是在所述干燥的水凝胶中能够在低于60℃下胶凝的仅有的生物聚合物。
18.根据权利要求16所述的方法,其中所述溶液包含7.5重量%至12.5重量%的所述明胶和5重量%至20重量%的所述抗-Fel D1 IgY抗体源。
19.根据权利要求1所述的食品级粉末在制备用于减少人类对猫的过敏症的症状的产品中的用途。
20.根据权利要求19所述的用途,其中所述产品作为宠物食品的一部分施用,所述宠物食品还包含至少一种选自蛋白质、脂肪、碳水化合物、维生素和矿物质的组分。
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---|---|---|---|---|
US11352417B2 (en) | 2016-12-22 | 2022-06-07 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Method of treating an allergy with allergen-specific monoclonal antibodies |
AU2018212707B2 (en) * | 2017-01-24 | 2024-05-09 | Societe Des Produits Nestle S.A. | Compositions comprising anti-Fel D1 antibodies and methods for reducing at least one symptom of human allergy to cats |
EP3631464A1 (en) * | 2017-05-25 | 2020-04-08 | Société des Produits Nestlé S.A. | Methods for enabling pet ownership |
US20220363739A1 (en) * | 2021-05-17 | 2022-11-17 | Société des Produits Nestlé S.A. | Compositions and methods for reducing at least one symptom of human allergy to cats |
Citations (16)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1992015613A1 (en) * | 1991-02-28 | 1992-09-17 | Immulogic Pharmaceutical Corporation | Improved preparation of cat dander allergens for immunotherapeutic purposes and uses therefor |
WO1993013772A1 (en) * | 1992-01-21 | 1993-07-22 | Immulogic Pharmaceutical Corporation | Methods for using histamine derivatives as immunomodulators and in immunotherapeutics |
CN1602158A (zh) * | 2001-12-11 | 2005-03-30 | 雀巢产品有限公司 | 用于骨健康的含有植物提取物的食物或宠物食物组合物 |
WO2005110474A2 (en) * | 2004-05-10 | 2005-11-24 | Macrogenics, Inc. | HUMANIZED FcϜRIIB SPECIFIC ANTIBODIES AND METHODS OF USE THEREOF |
WO2005115449A1 (en) * | 2004-05-28 | 2005-12-08 | Alk-Abelló A/S | Method of treating allergy and infection by eliciting an iga antibody response |
WO2008103046A1 (en) * | 2007-02-21 | 2008-08-28 | Fujifilm Manufacturing Europe B.V. | A controlled release composition |
CN101253861A (zh) * | 2003-12-04 | 2008-09-03 | 拜尔农作物科学股份公司 | 具有杀昆虫和杀螨虫性能的活性化合物结合物 |
WO2009009061A1 (en) * | 2007-07-09 | 2009-01-15 | Nestec S.A. | Methods for reducing allergies caused by environmental allergens |
CN101360485A (zh) * | 2005-10-26 | 2009-02-04 | 班纳制药公司 | 作为胶囊填充物的基于亲水性载体的双重控释基质系统 |
CN102282173A (zh) * | 2008-03-24 | 2011-12-14 | 艾博特生物技术有限公司 | 用于治疗骨丢失的方法和组合物 |
AU2011265460A1 (en) * | 2003-01-09 | 2012-01-19 | Macrogenics, Inc. | Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same |
CN104411719A (zh) * | 2012-05-03 | 2015-03-11 | 瑞泽恩制药公司 | 针对fel d1 的人源抗体及其使用方法 |
CN104936622A (zh) * | 2012-12-28 | 2015-09-23 | 布莱德治疗有限公司 | 包封在颗粒中的靶向缀合物及其制剂 |
CN105722403A (zh) * | 2013-11-18 | 2016-06-29 | 雀巢产品技术援助有限公司 | 涂覆干燥宠物粗磨食物的组合物和方法 |
CA2893245A1 (en) * | 2015-06-02 | 2016-12-02 | Stealth Peptides International, Inc. | Therapeutic compositions including bpm 31510, variants and analogues thereof, and uses thereof to treat and prevent mitochondrial diseases and disorders |
CN106178085A (zh) * | 2006-08-02 | 2016-12-07 | 巴克斯特国际有限公司 | 速效干燥密封剂以及使用和制备方法 |
Family Cites Families (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2587219B2 (ja) | 1986-06-10 | 1997-03-05 | エーザイ株式会社 | 溶解遅延性のゼラチン製剤組成物 |
ZA935569B (en) | 1992-07-31 | 1994-04-12 | Daratech Pty Ltd | Controlled release implants |
JP4731793B2 (ja) * | 2000-12-28 | 2011-07-27 | アルセア テクノロジーズ インコーポレイテッド | 抗体全体またはそのフラグメントの結晶、ならびにこの結晶を作製および使用するための方法 |
US20030181416A1 (en) * | 2002-01-10 | 2003-09-25 | Comper Wayne D. | Antimicrobial charged polymers that exhibit resistance to lysosomal degradation during kidney filtration and renal passage, compositions and method of use thereof |
US6987182B2 (en) * | 2003-03-26 | 2006-01-17 | North Carolina State University | Process for producing cold-gelling hydrocolloids |
US9388236B2 (en) * | 2007-07-09 | 2016-07-12 | Nestec Sa | Methods for reducing allergies caused by environmental allergens |
EP2219604A2 (fr) | 2007-11-14 | 2010-08-25 | MA.I.A Woundcare | Biomateriau permettant la delivrance controlee d'actifs |
GB0918590D0 (en) | 2009-10-22 | 2009-12-09 | Ayanda As | Composition |
US9504750B2 (en) | 2010-01-28 | 2016-11-29 | Advanced Bionutrition Corporation | Stabilizing composition for biological materials |
CN103251971A (zh) | 2013-05-22 | 2013-08-21 | 乐美加特种纤维(连云港)有限公司 | 一种多功能缓释透明固体透明芳香剂及其制备方法 |
CN104147627A (zh) | 2014-08-22 | 2014-11-19 | 乐美加日用品(连云港)有限公司 | 一种多功能缓释本草益康芳香剂及其制备方法 |
US20160058045A1 (en) * | 2014-08-26 | 2016-03-03 | Pepsico, Inc. | Method of Loading Flavor into an Aerogel and Flavor Impregnated Aerogel Based on Food Grade Materials |
AU2018212707B2 (en) * | 2017-01-24 | 2024-05-09 | Societe Des Produits Nestle S.A. | Compositions comprising anti-Fel D1 antibodies and methods for reducing at least one symptom of human allergy to cats |
-
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Patent Citations (18)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1992015613A1 (en) * | 1991-02-28 | 1992-09-17 | Immulogic Pharmaceutical Corporation | Improved preparation of cat dander allergens for immunotherapeutic purposes and uses therefor |
WO1993013772A1 (en) * | 1992-01-21 | 1993-07-22 | Immulogic Pharmaceutical Corporation | Methods for using histamine derivatives as immunomodulators and in immunotherapeutics |
CN1602158A (zh) * | 2001-12-11 | 2005-03-30 | 雀巢产品有限公司 | 用于骨健康的含有植物提取物的食物或宠物食物组合物 |
AU2011265460A1 (en) * | 2003-01-09 | 2012-01-19 | Macrogenics, Inc. | Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same |
CN101253861A (zh) * | 2003-12-04 | 2008-09-03 | 拜尔农作物科学股份公司 | 具有杀昆虫和杀螨虫性能的活性化合物结合物 |
WO2005110474A2 (en) * | 2004-05-10 | 2005-11-24 | Macrogenics, Inc. | HUMANIZED FcϜRIIB SPECIFIC ANTIBODIES AND METHODS OF USE THEREOF |
WO2005115449A1 (en) * | 2004-05-28 | 2005-12-08 | Alk-Abelló A/S | Method of treating allergy and infection by eliciting an iga antibody response |
CN101360485A (zh) * | 2005-10-26 | 2009-02-04 | 班纳制药公司 | 作为胶囊填充物的基于亲水性载体的双重控释基质系统 |
CN106178085A (zh) * | 2006-08-02 | 2016-12-07 | 巴克斯特国际有限公司 | 速效干燥密封剂以及使用和制备方法 |
WO2008103046A1 (en) * | 2007-02-21 | 2008-08-28 | Fujifilm Manufacturing Europe B.V. | A controlled release composition |
WO2009009061A1 (en) * | 2007-07-09 | 2009-01-15 | Nestec S.A. | Methods for reducing allergies caused by environmental allergens |
AU2008275624A1 (en) * | 2007-07-09 | 2009-01-15 | Société des Produits Nestlé S.A. | Methods for reducing allergies caused by environmental allergens |
CN101686974A (zh) * | 2007-07-09 | 2010-03-31 | 雀巢产品技术援助有限公司 | 减轻因环境过敏原导致的过敏症的方法 |
CN102282173A (zh) * | 2008-03-24 | 2011-12-14 | 艾博特生物技术有限公司 | 用于治疗骨丢失的方法和组合物 |
CN104411719A (zh) * | 2012-05-03 | 2015-03-11 | 瑞泽恩制药公司 | 针对fel d1 的人源抗体及其使用方法 |
CN104936622A (zh) * | 2012-12-28 | 2015-09-23 | 布莱德治疗有限公司 | 包封在颗粒中的靶向缀合物及其制剂 |
CN105722403A (zh) * | 2013-11-18 | 2016-06-29 | 雀巢产品技术援助有限公司 | 涂覆干燥宠物粗磨食物的组合物和方法 |
CA2893245A1 (en) * | 2015-06-02 | 2016-12-02 | Stealth Peptides International, Inc. | Therapeutic compositions including bpm 31510, variants and analogues thereof, and uses thereof to treat and prevent mitochondrial diseases and disorders |
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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GR01 | Patent grant | ||
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