TW201739763A - 抗ctla-4抗體 - Google Patents

Abstract

揭示抗CTLA-4抗體。亦揭示包含此等抗體之組成物，以及使用其等之用途及方法。

Description

抗CTLA-4抗體

發明領域 本發明係有關於結合胞毒型T淋巴球關聯性蛋白4(CTLA-4)的抗體。

發明背景 T細胞衰竭為於許多慢性感染及癌症期間出現之T細胞官能不良的狀態。其被定義為T細胞效應子功能很差、抑制受體之持續表現，以及與功能效應子或記憶T細胞不同的轉錄狀態。衰竭會防礙感染及腫瘤的最佳控制(E John Wherry,Nature Immunology 12, 492-499 (2011))。

T細胞衰竭係特徵在於T細胞功能逐步且進行性的喪失。衰竭於許多慢性淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎病毒(LCMV)感染是明確定義的且一般於抗原持久性的情況下發展，其發生於許多慢性感染之後，包括B型肝炎、C型肝炎及人類免疫不全病毒感染，以及腫瘤轉移期間。衰竭不是始終如一的障礙設定，因為會顯現出表現型及功能缺陷的階段性變化，以及此等細胞與原型的效應子、記憶及應變性缺失的(anergic)T細胞有區別。衰竭的T細胞最常於高惡性度(high-grade)慢性感染期間出現，且抗原刺激的水平及持續期間是進程的關鍵決定因素。(Yi等人，Immunology Apr 2010；129(4):474-481)。

循環人類腫瘤專一性CD8⁺ T細胞可為胞毒型的且於活體內生產細胞介素，其表示自我(self-)及腫瘤專一性人類CD8⁺ T細胞會於有效力的免疫療法後達到功能勝任性(functional competence)，諸如用胜肽、不完全佛恩得佐劑(incomplete Freund’s adjuvant)(IFA)及CpG進行疫苗接種或是授受性轉移(adoptive transfer)。與末梢血液相比，T細胞浸潤腫瘤位置通常為功能不全的，加上異常低的細胞介素(cytokine)生產及抑制受體PD-1、CTLA-4、TIM-3及LAG-3之向上調節。功能不全為可逆的，因為從黑色素瘤組織單離的T細胞能於短期活體外培養之後恢復IFN-γ生產。然而，仍然要確定此功能減損是否涉及另外的分子途徑，可能類似動物模式內所界定的T細胞衰竭或無反應性(anergy)。(Baitsch等人，J Clin Invest. 2011;121(6):2350-2360)。

胞毒型T淋巴球相關蛋白4(CTLA-4)，亦稱為CD152，於人類係由一種CTLA4 基因所編碼的第I型跨膜蛋白。於McCoy and Le Gros Immunology and Cell Biology (1999) 77: 1-10及Grosso and Kunkel, Cancer Immunity (2013) 13: 5內，回顧本文所述之CTLA-4的分子性質與生物功能。

正向共刺激受體CD28與其於抗原呈現細胞(APCs)上之配體CD80及CD86之結合，導致T細胞的活化作用，造成T細胞增殖及介白素-2(IL-2)之生產。CTLA-4表現於活化的CD4+及CD8+T細胞之細胞表面，以及是一種重要的T細胞功能負向調節子。CTLA-4具有的結構與CD28相似，而且與CD80及CD86二者結合，但是有更大的結合性(avidity)與親和力(affinity) (Collins等人，Immunity (2002) 17: 201-210)。

業已顯示CTLA-4經由內在及外在的機轉二者來負向調節免疫的活化作用，總結於Grosso and Kunkel, Cancer Immunity (2013) 13: 5之表1內。簡言之，(i)經由APCs上之CD80及CD86之逆向發送訊息會導致T細胞反應之抑止及/或促進初始的(naïve)T細胞轉變成Tregs，(ii)經由CTLA-3發送訊息會刺激生產調節細胞介素例如TGF-β，導致抑制APCs之抗原呈現及抑制T細胞功能，(iii)CTLA-4與CD80/CD86結合會降低此等配體被CD28結合之可用性，導致透過APC之T細胞的活化作用降低，(iv)CTLA-4與CD80/CD86結合造成其等之反式胞吞作用(transendocytosis)，降低APCs活化T細胞的能力，(v)CTLA-4會補給抑制蛋白，例如PP2A及PTPN11至T細胞突觸，抑制經由CD28及TCR發送訊息，(vi)CTLA-4作用為高親和力競爭者，其佔據CD80/86且從而妨礙CD28之結合，(vii)一種CTLA-4之可溶性剪接變異體可能可以抑制T細胞活化作用，以及(viii) CTLA-4抑制T細胞終止訊息，其對於透過APCs之T細胞活化作用是重要的。

CTLA-4之負向調節的抑制作用已顯示會促進刺激適應性免疫反應及T細胞的活化。CTLA-4-阻斷抗體已經於小鼠癌症模式內顯示是有效的，以及抗-CTLA-4抗體，例如伊匹單抗(ipilimumab) (益伏(Yervoy)，MDX-010，10D1；WO2001014424 A1內所述)及摧麥拉單抗(tremelimumab) (ticilimumab；CP-675,206)被探討作為促進癌症之抗腫瘤免疫性的策略。CTLA-4之阻斷對於T細胞衰竭相關的障礙，例如慢性病毒感染，也是一種有希望的治療策略。

已經證實伊匹單抗不能與小鼠CTLA-4結合(WO 2001/1014424 A1，表5，第81頁)，以及摧麥拉單抗同樣也顯示不會與鼠類CTLA-4結合(Hanson等人之Proc Amer Assoc Cancer Res (2004) 64: 877)。Hanson等人亦揭露摧麥拉單抗顯示會與人類CD28結合。

發明概要 本發明係有關於與CTLA-4結合之抗體或抗原結合片段。亦揭示重及輕鏈多肽。該抗體、抗原結合片段及多肽可以以經單離及/或純化的形式來提供，以及可以調配成適合用於研究、療法及診斷的組成物。

於一些具體例中，該抗體或抗原結合片段或多肽可以於T細胞，例如CD4⁺ 或CD8⁺ T細胞，有效地恢復T細胞功能。於一些具體例中，該抗體或抗原結合片段或多肽可以於展現出T細胞衰竭或T細胞無反應性之T細胞內有效地恢復T細胞功能。

於本發明的一個態樣中，提供一種抗體或抗原結合片段，其會與CTLA-4結合且其顯示與CD28實質沒有結合。

於本發明的另一個態樣中，提供一種抗體或抗原結合片段，其會與CTLA-4結合，且其不會防止或抑制CD28和CD80之間的交互作用，及/或CD28和CD86之間的交互作用。

於本發明的一個態樣中，提供一種抗體或抗原結合片段，該抗體之胺基酸序列可以包含i)至iii)之胺基酸序列，或iv)至vi)之胺基酸序列，或較佳為i)至vi)之胺基酸序列： i)LC-CDR1：RATQGISSWLA(序列辨識編號：5)； ii) LC-CDR2:AASSLQS (序列辨識編號：6)； iii)LC-CDR3：QQANTLPLFT(序列辨識編號：7)； iv)HC-CDR1：SNTAAWN (序列辨識編號：8)； v)HC-CDR2：RTYYRSKWYSDYGLSVKS(序列辨識編號：9)； vi)HC-CDR3：EGSGGTLIY (序列辨識編號：10)； 或其之一變異體，其中該序列(i)至(vi)之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。

於一些具體例中，LC-CDR1為RATQGISSWLA(序列辨識編號：5)。於一些具體例中，LC-CDR2為AASSLQS(序列辨識編號：6)。於一些具體例中，LC-CDR3為QQANTLPLFT(序列辨識編號：7)。於一些具體例中，HC-CDR1為SNTAAWN(序列辨識編號：8)。於一些具體例中，HC-CDR2為RTYYRSKWYSDYGLSVKS(序列辨識編號：9)。於一些具體例中，HC-CDR3為EGSGGTLIY(序列辨識編號：10)。

於一些具體例中，該抗體或抗原結合片段可以包含合併有下列的CDRs的至少一輕鏈可變異區域： LC-CDR1：RATQGISSWLA (序列辨識編號：5) LC-CDR2：AASSLQS (序列辨識編號：6) LC-CDR3：QQANTLPLFT (序列辨識編號：7)。

於一些具體例中，該抗體或抗原結合片段可以包含合併有下列的CDRs的至少一重鏈可變異區域： HC-CDR1：SNTAAWN (序列辨識編號：8) HC-CDR2：RTYYRSKWYSDYGLSVKS(序列辨識編號：9) HC-CDR3：EGSGGTLIY (序列辨識編號：10)。

該抗體可以包含合併有圖1中顯示的CDRs之至少一輕鏈可變異區域。該抗體可以包含合併有圖2中顯示的CDRs之至少一重鏈可變異區域。

該抗體可以包含至少一輕鏈可變異區域(V_L )，其含有下列胺基酸序列：序列辨識編號1、5、6、7；或2、5、6、7之一者，或是圖1中顯示的胺基酸序列之一者，或是一胺基酸序列，其與序列辨識編號1、5、6、7；或2、5、6、7之一者，或是與圖1中顯示的V_L 鏈胺基酸序列之胺基酸序列，具有至少70%，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。

該抗體可以包含至少一重鏈可變異區域(V_H )，其含有下列胺基酸序列：序列辨識編號3、8、9、10；或4、8、9、10之一者，或是圖2中顯示的胺基酸序列之一者，或是一胺基酸序列，其與序列辨識編號3、8、9、10；或4、8、9、10之一者，或是與圖2中顯示的V_H 鏈胺基酸序列之胺基酸序列，具有至少70%，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。

該抗體可以包含至少一輕鏈可變異區域，其含有下列胺基酸序列：序列辨識編號1、5、6、7；或2、5、6、7之一者，或是圖1中顯示的胺基酸序列之一者(或是一胺基酸序列，其與序列辨識編號1、5、6、7；或2、5、6、7之一者，或是與圖1中顯示的V_L 鏈胺基酸序列之胺基酸序列之一者，具有至少70%，更佳為至少75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性)，以及至少一重鏈可變異區域，其含有下列胺基酸序列：序列辨識編號3、8、9、10；或4、8、9、10之一者，或是圖2中顯示的胺基酸序列之一者(或是一胺基酸序列，其與序列辨識編號3、8、9、10；或4、8、9、10之一者，或是與圖2中顯示的V_H 鏈胺基酸序列之胺基酸序列之一者，具有至少70%，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性)。

該抗體可選擇性地結合CTLA-4，選擇性地為人類或鼠類CTLA-4。於一些具體例中，該抗體與人類及鼠類CTLA-4二者均能結合。該抗體可選擇性地具有如上所述之胺基酸序列組分。該抗體可以為IgG。於一個具體例中，提供一種活體外複合物，選擇性地為經單離的，其包含如本文所述與CTLA-4結合的一種抗體或抗原結合片段。

該抗體可選擇性地抑制或預防人類CTLA-4及人類CD80或CD86之間，或鼠類CTLA-4及鼠類CD80或CD86之間的交互作用或功能性締合。這種CTLA-4及CD80或CD86之間交互作用或功能性締合之抑制或預防，可以抑制或預防CD80或CD86媒介的CTLA-4活化作用，CD80/CTLA-4發送訊息，或CD86/CTLA-4發送訊息。

於本發明的一個態樣中，提供一種經單離的輕鏈可變異區域多肽，該輕鏈可變異區域多肽包含下列的CDRs： LC-CDR1：RATQGISSWLA (序列辨識編號：5) LC-CDR2：AASSLQS (序列辨識編號：6) LC-CDR3：QQANTLPLFT (序列辨識編號：7)。

於本發明的一個態樣中，提供一種經單離的輕鏈可變異區域多肽，其包含一胺基酸序列，其與輕鏈序列：序列辨識編號：1或2(圖1)有至少85%的序列同一性。於一些具體例中，該經單離的輕鏈可變異區域多肽能與CTLA-4結合。

於本發明的一個態樣中，提供一種經單離的重鏈可變異區域多肽，該重鏈可變異區域多肽包含下列的CDRs： HC-CDR1：SNTAAWN (序列辨識編號：8) HC-CDR2：RTYYRSKWYSDYGLSVKS(序列辨識編號：9) HC-CDR3：EGSGGTLIY (序列辨識編號：10)。

於本發明的一個態樣中，提供一種經單離的重鏈可變異區域多肽，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：3或4之重鏈序列(圖2)有至少85%的序列同一性。於一些具體例中，該經單離的重鏈可變異區域多肽能與CTLA-4結合。

於本發明的一個態樣中，提供一種抗體或抗原結合片段，該抗體或抗原結合片段包含一重鏈及一輕鏈可變異區域序列，其中： 該輕鏈包含一LC-CDR1、LC-CDR2、LC-CDR3，其與下列有至少85%的整體序列同一性：LC-CDR1：RATQGISSWLA(序列辨識編號：5)、LC-CDR2：AASSLQS(序列辨識編號：6)、LC-CDR3：QQANTLPLFT (序列辨識編號：7)，以及； 該重鏈包含一HC-CDR1、HC-CDR2、HC-CDR3，其與下列有至少85%的整體序列同一性：HC-CDR1：SNTAAWN(序列辨識編號：8)、HC-CDR2：RTYYRSKWYSDYGLSVKS(序列辨識編號：9)、HC-CDR3：GSGGTLIY(序列辨識編號：10)。

於一些具體例中，序列同一性的程度可以為下列中之一者：86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%。

於本發明的另一個態樣中，提供一種抗體或抗原結合片段，選擇性地為經單離的，其包含一重鏈及一輕鏈可變異區域序列，其中： 該輕鏈序列與輕鏈序列：序列辨識編號：1或2(圖1)有至少85%的序列同一性，以及； 該重鏈序列與序列辨識編號：3或4(圖2)之該重鏈序列有至少85%的序列同一性。

於一些具體例中，序列同一性的程度可以為下列中之一者：86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%。

於一些具體例中，該抗體、抗原結合片段或多肽於CDRs之間進一步包含可變異區域輕鏈框架序列，依據LCFR1:LC-CDR1:LCFR2:LC-CDR2:LCFR3: LC-CDR3:LCFR4之排列。框架序列可以衍生自人類一致框架序列。

於本發明的一個態樣中，提供一種經單離的輕鏈可變異區域多肽，選擇性地組合以如本文所述之重鏈可變異區域多肽，該輕鏈可變異區域多肽包含下列的CDRs： LC-CDR1：RATQGISSWLA (序列辨識編號：5) LC-CDR2：AASSLQS (序列辨識編號：6) LC-CDR3：QQANTLPLFT (序列辨識編號：7)。

於一些具體例中，該抗體、抗原結合片段或多肽於CDRs之間進一步包含可變異區域重鏈框架序列，依據HCFR1:HC-CDR1:HCFR2:HC-CDR2:HCFR3: HC-CDR3:HCFR4之排列。框架序列可以衍生自人類一致框架序列。

於本發明的一個態樣中，提供一種經單離的重鏈可變異區域多肽，選擇性地組合以如本文所述之輕鏈可變異區域多肽，該重鏈可變異區域多肽包含下列的CDRs： HC-CDR1：SNTAAWN (序列辨識編號：8) HC-CDR2：RTYYRSKWYSDYGLSVKS(序列辨識編號：9) HC-CDR3：EGSGGTLIY (序列辨識編號：10)。

於一些具體例中，該抗體或抗原結合片段可以進一步包含一種人類恆定區域。舉例而言，選自於IgG1、IgG2、IgG3及IgG4中之一者。

於一些具體例中，該抗體或抗原結合片段可以進一步包含一種鼠類恆定區域。舉例而言，選自於IgG1、IgG2A、IgG2B及IgG3中之一者。

於本發明的另外的一個態樣中，提供一種抗體或抗原結合片段，選擇性地為經單離的，其能與CTLA-4結合，其為一種雙專一性抗體或雙專一性抗原結合片段。該雙專一性抗體或雙專一性抗原結合片段包含(i)一種如本文所述能與CTLA-4結合的抗原結合片段或多肽，以及(ii)一種能與CTLA-4之外的標靶蛋白結合的抗原結合片段或多肽。

於一些具體例中，CTLA-4之外的標靶蛋白可以為一種細胞表面受體，例如表現於T細胞的細胞表面之上的一種受體。於一些具體例中，細胞表面受體可以為一種免疫查核點受體，例如一種共刺激受體或一種抑制受體。於一些具體例中，共刺激受體可以選自於CD27、CD28、ICOS、CD40、CD122、OX43、4-1BB及GITR。於一些具體例中，抑制受體可以選自於B7-H3、B7-H4、BTLA、LAG-3、A2AR、VISTA、TIM-3、PD-1及KIR。

於一些具體例中，CTLA-4之外的標靶蛋白可以為一種癌症標誌，其之表現與一癌症有關連。於一些具體例中，癌症標誌可以表現於細胞表面。於一些具體例中，癌症標誌可以選自於HER-2、HER-3、EGFR、EpCAM、CD30、CD33、CD38、CD20、CD24、CD90、CD15、CD52、CA-125、CD34、CA-15-3、CA-19-9、CEA、CD99、CD117、CD31、CD44、CD123、CD133、ABCB5及CD45。

於本發明的另一個態樣中，提供一種嵌合抗原受體(CAR)，其包含如本文所述之一抗原結合片段。

於另一個態樣中，本發明提供一種包含如本文所述之CAR的細胞。

於本發明的另一個態樣中，提供一種活體外複合物，其包含如本文所述與CTLA-4結合之一種抗體、抗原結合片段、多肽、CAR或細胞。該活體外複合物可以選擇性地予以單離。

於本發明的另一個態樣中，提供一種組成物，例如一種藥學組成物或藥劑。該組成物可以包含如本文所述之一種抗體、抗原結合片段、多肽、CAR或細胞以及至少一藥學上可接受的載劑、賦形劑、佐劑或稀釋劑。

於本發明的另一個態樣中，提供一種經單離的核酸，其編碼如本文所述之抗體、抗原結合片段、多肽或CAR。該核酸可以具有序列辨識編號11、12、13或14(圖3)中一者的序列，或由於遺傳密碼簡併的一編碼序列，或可以具有一核苷酸序列，該核苷酸序列與其有至少70%的同一性，選擇性地為下列中之一者的同一性：75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%。

於本發明的一個態樣中，提供一種載體，其包含本文所述之一種核酸。於本發明的另一個態樣中，提供一種宿主細胞，其包含該載體。舉例而言，宿主細胞可以為真核或哺乳動物，例如中國倉鼠卵巢(CHO)，或人類，或者可以為一原核細胞，例如大腸桿菌。

於本發明的一個態樣中，提供一種用於製造如本文所述之抗體或抗原結合片段、多肽或CAR之方法，該方法包含於適合表現編碼該抗體、抗原結合片段、多肽或CAR之載體的條件下培養如本文所述之宿主細胞，以及回收該抗體、抗原結合片段、多肽或CAR。

於本發明的另一個態樣中，提供一種抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物，供使用於療法，或醫學治療方法。於本發明的另一個態樣中，提供一種如本文所述之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物，供使用於治療一T細胞官能不良障礙。於本發明的另一個態樣中，提供一種如本文所述之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物於製造一藥劑或藥學組成物之用途，該藥劑或藥學組成物供使用於治療T細胞官能不良障礙。

於本發明的另一個態樣中，提供一種提升T細胞功能之方法，其包含投與如本文所述之一抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物至一官能不良T細胞。該方法可以於活體外或於活體內執行。

於本發明的另一個態樣中，提供一種治療一T細胞官能不良障礙的方法，該方法包含投與如本文所述之一抗體、抗原結合片段或多肽至一罹患T細胞官能不良障礙的病人。

於本發明的另一個態樣中，提供一種抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物，供使用於治療一癌症。於本發明的另一個態樣中，提供一種如本文所述之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物於製造一藥劑或藥學組成物之用途，該藥劑或藥學組成物供使用於治療一癌症。

於本發明的另一個態樣中，提供一種殺死腫瘤細胞的方法，該方法包含投與如本文所述之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物至罹患一腫瘤細胞。該方法可以於活體外或於活體內執行。殺死腫瘤細胞舉例而言，可以是由於抗體依賴性細胞媒介的細胞毒性(ADCC)、補體依賴性細胞毒性(CDC)或經由與該抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物綴合的一藥物之作用。

於本發明的另一個態樣中，提供一種治療癌症的方法，該方法包含投與如本文所述之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物至罹患一癌症的一病人。

癌症可以是一種表現或過度表現CTLA-4的癌症，或是可以包含表現或過度表現CTLA-4的細胞。

於本發明的另一個態樣中，提供一種調控一主體內免疫反應的方法，該方法包含投與一種如本文所述之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物至該主體，以使得該主體內的免疫反應被調控。

於本發明的另一個態樣中，提供一種抑制腫瘤細胞生長的方法，其包含投與一種如本文所述之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物。該方法可以於活體外或於活體內進行。於一些具體例中，提供一種抑制一主體內腫瘤細胞生長的方法，該方法包含投與治療有效量的如本文所述之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物至該主體。

於本發明的另一個態樣中，提供一種方法，該方法包含使一種含有或懷疑含有CTLA-4的樣本與一種如本文所述之抗體、抗原結合片段、CAR或細胞接觸，以及偵測抗體、抗原結合片段、CAR或細胞與CTLA-4的複合物之形成。

於本發明的另一個態樣中，提供一種診斷一主體之一疾病或病況的方法，該方法包含於活體外使來自一主體的樣本與一種如本文所述之抗體、抗原結合片段、CAR或細胞接觸，以及偵測抗體、抗原結合片段、CAR或細胞與CTLA-4的複合物之形成。

於本發明另外的態樣中，提供一種如本文所述之抗體、抗原結合片段、CAR或細胞之用途，供用於活體外偵測CTLA-4。於本發明的另一個態樣中，提供一種如本文所述之抗體、抗原結合片段、CAR或細胞作為一活體外診斷劑之用途。

於本發明的方法中，該抗體、抗原結合片段、多肽、CAR或細胞可以提供為一種如本文所述之組成物。

於另一個態樣中，本發明提供一種治療或預防一主體內一癌症的方法，其包含： (a) 從一主體單離至少一細胞； (b) 修飾該至少一細胞以表現或包含如本文所述之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、核酸或載體，以及； (c) 投與該經修飾的至少一細胞至一主體。

於另一個態樣中，本發明提供一種治療或預防一主體內一癌症的方法，其包含： (a) 從一主體單離至少一細胞； (b) 導入如本文所述之核酸或載體至該至少一細胞內，藉此修飾該至少一細胞，以及； (c) 投與該經修飾的至少一細胞至一主體。

於另一個態樣中，本發明提供一種部件之套組(a kit of parts)，其包含預定量之如本文所述之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、組成物、核酸、載體或細胞。

於一些具體例中，該抗體可以為如本文所述之克隆(clone)2C8或2C8_gI。說明 抗體

如於本發明之抗體較佳地選擇性地以2至20 nM範圍內的K_D 與CTLA-4(抗原)，較佳為人類或鼠類CTLA-4結合。

如於本發明之抗體可以提供呈經單離的形式。

如於本發明之抗體可以展現下列特質中之至少一者： a) 以1µM或更少的K_D ，較佳為≤100 nM、≤75 nM、≤50 nM、≤40 nM、≤30 nM、≤20 nM、≤15 nM、≤12.5 nM、≤10 nM、≤9 nM、≤8 nM、≤7 nM、≤6 nM、≤5 nM、≤4 nM ≤3 nM、≤2 nM、≤1 nM、≤500pM中的一者之K_D ，與人類或小鼠CTLA-4結合(諸如，依SPR來判定)； b) 以EC50 = 1 µM或更少，較佳為≤100 nM、≤75 nM、≤50 nM、≤40 nM、≤30 nM、≤20 nM、≤15 nM、≤12.5 nM、≤10 nM、≤9 nM、≤8 nM、≤7 nM、≤6 nM、≤5 nM、≤4 nM ≤3 nM、≤2 nM、≤1 nM、≤500pM中的一者之結合親和力，與人類或小鼠CTLA-4結合(諸如，依ELISA來判定)； c) 以EC50 = 500 pM或更少，較佳為≤400 pM、≤300 pM、≤200 pM、≤150 pM、≤100 pM、≤90 pM、≤80 pM、≤75 pM、≤70、≤65 pM、≤60 pM、≤55 pM、≤50 pM中的一者之結合的結合性(avidity of binding)，與人類或小鼠CTLA-4結合(諸如，依ELISA來判定)； d)顯示與CD28實質沒有結合(諸如，人類CD28或小鼠CD28)。 e) 與人類及小鼠CTLA-4結合，且顯示與結合人類CD28沒有實質結合； f) 抑制或防止CTLA-4及CD80，選擇性地人類CTLA-4及人類CD80，之間的交互作用； g) 抑制或防止CTLA-4及CD86，選擇性地人類CTLA-4及人類CD86，之間的交互作用； h) 抑制或防止CTLA-4及CD80之間的交互作用以及CTLA-4及CD86之間的交互作用，選擇性地人類CTLA-4、人類CD80及人類CD86； i) 不會抑制或防止CD28及CD80，選擇性地人類CD28及人類CD80，之間的交互作用； j) 不會抑制或防止CD28及CD86，選擇性地人類CD28及人類CD86，之間的交互作用； k) 不會抑制或防止CD28及CD80之間的交互作用以及CD28及CD86之間的交互作用，選擇性地人類CD28、人類CD80及人類CD86； l) 使活體外T細胞的活化作用增高； m) 使T細胞於T細胞再活化分析中之IL-2生產增高； n) 對感染回應，而使T細胞增殖、IL-2生產及IFNγ生產之一者或更多者增加； o) 抑制腫瘤生長，選擇性為活體內的腫瘤生長。

於一些具體例中，如本發明之抗體可用於增生一種免疫細胞，如T細胞族群之方法內。如本發明之抗體可用於增生帶有所欲特質的免疫細胞族群。

於一些具體例中，本發明之抗體於用於增生一種有效應子表現型(如CTLs)的免疫細胞族群，優先有免疫調節/免疫抑止表現型(如Tregs)的免疫細胞之方法內，可用於增生。

按「抗體」包括其之片段或衍生物，或一種合成抗體或合成抗體片段。

鑑於今日關於單株抗體的技術，可製備多數抗原之抗體。抗原結合部分可以為一種抗體的一部分(舉例而言，一種Fab片段)或一種合成抗體片段(舉例而言，一種單鏈Fv片段[ScFv])。對選擇的抗原合適的單株抗體可藉由已知的技術予以製備，舉例而言"Monoclonal Antibodies: A manual of techniques ", H Zola (CRC出版社，1988)之內及"Monoclonal Hybridoma Antibodies: Techniques and Applications ", J G R Hurrell (CRC出版社，1982)之內揭示的該等。Neuberger等人詳述了嵌合型抗體(1988, 8th International Biotechnology Symposium Part 2, 792-799)。

單株抗體(mAbs)係有用於本發明的方法，且為專一靶定一抗原上的一單一抗原決定位之均質的抗體族群。

多株抗體係有用於本發明的方法。單專一性多株抗體為較佳的。合適的多株抗體可使用本技藝眾所周知的方法予以製備。

於一些具體例中，抗體/片段為一種完全人類抗體/片段。一種完全人類抗體/片段係由人類核酸序列所編碼。完全人類抗體/片段沒有非人類胺基酸序列。

於一些具體例中，抗體/片段為一種嵌合抗體/片段。一種嵌合抗體/片段可包含衍生自不同抗體/片段的胺基酸序列。舉例而言，一種嵌合抗體/片段可包含來自一種抗體/抗原結合片段之CDRs或可變異域序列，以及來自另一種抗體/抗原結合片段之恆定區域序列。於一些具體例中，一種嵌合抗體/片段可包含來自一種抗體/抗原結合片段之CDRs，以及來自另一種抗體/抗原結合片段之恆定區域序列及框架區域序列。

於一些具體例中，該嵌合抗體/片段可包含本文所述之抗CTLA-4克隆2C8或2C8_gl之CDRs或可變異域序列，以及來自另一種抗體/抗原結合片段之恆定區域序列。於一些具體例中，該嵌合抗體/片段可包含本文所述之抗CTLA-4克隆2C8或2C8_gl之CDRs，以及來自另一種抗體/抗原結合片段之恆定區域序列及框架區域序列。

於一些具體例中，一種嵌合抗體/片段可包含來自一種物種之抗體的CDRs或可變異域序列，以及來自另一種物種之抗體的恆定區域序列。於一些具體例中，一種嵌合抗體/片段可包含來自一種物種之抗體的CDRs，以及來自另一種物種之抗體的恆定區域序列及框架區域序列。

於一些具體例中，一種如本發明之嵌合抗體/片段可包含來自本文所述之抗CTLA-4克隆2C8或2C8_gl之CDRs或可變異域序列，以及來自非人類物種之抗體的恆定區域序列。於一些具體例中，一種如本發明之嵌合抗體/片段可包含本文所述之抗CTLA-4克隆2C8或2C8_gl之CDRs，以及來自非人類物種之抗體的恆定區域序列及框架區域序列。於一些具體例中，非人類物種為例如非人類哺乳動物(諸如，兔、天竺鼠、大鼠、小鼠或其他的囓齒動物(包括囓齒目的任何動物)、貓、狗、豬、綿羊、山羊、牛(包括乳牛，例如乳用母牛或牛屬(orderBos )的任何動物)、馬(包括馬科屬(orderEquidae )的任何動物)、驢或非人類靈長類動物)。

於一些具體例中，一種如本發明之抗體/片段可包含修飾(例如一或更多個胺基酸取代)以增加與感興趣的物種天然生產的抗體之相似性。

抗體的抗原結合片段，諸如Fab及Fab₂ 片段，亦可以使用/提供作為能經遺傳工程處理的抗體及抗體片段。該抗體之可變異重(V_H )及可變異輕鏈(V_L )域係涉及抗原辨識，早期蛋白酶消化實驗最先確認的事實。由囓齒動物抗體的"人化"，發現到進一步的證實。囓齒動物來源的可變異域可以與人類來源的恆定域融合，以使得形成的抗體保持囓齒動物親代抗體的抗原專一性(Morrison等人之(1984) Proc. Natl. Acad. Sd. USA 81, 6851-6855)。

從涉及全體都含一種或更多種可變異域之細菌的抗體片段表現實驗得知，抗原專一性係由可變異域賦予且不依賴恆定域。此等分子包括似Fab分子(Better等人之(1988) Science 240, 1041)；Fv分子(Skerra等人之(1988) Science 240, 1038)；單鏈Fv(ScFv)分子，其中V_H 及V_L 的伙伴域係經由一種撓性寡肽予以鍵聯(Bird等人之(1988) Science 242, 423；Huston等人之(1988) Proc. Natl. Acad. Sd. USA 85, 5879)，以及包含經單離的V域之單域抗體(dAbs) (Ward等人之(1989) Nature 341, 544)。於Winter & Milstein (1991) Nature 349, 293- 299內可找到涉及保持其等之專一性結合位址之抗體片段合成技術之一般回顧。

按"ScFv分子"係意指其中V_H 及V_L 的伙伴域係，例如經由一種撓性寡肽共價鍵聯的分子。

Fab、Fv、ScFv及dAb抗體片段全體可以於大腸桿菌內表現且由大腸桿菌分泌，因而允許輕鬆生產大量的該片段。

整個抗體及F(ab')₂ 片段為"二價的"。按"二價的"係意指該抗體及F(ab')₂ 片段具有二個抗原組合位址。相比之下，Fab、Fv、ScFv及dAb抗體片段為單價的，只具有一個抗原組合位址。與CTLA-4結合的合成抗體亦可以使用如本技藝眾所周知的噬菌體顯示技術來製造。

亦提供多專一性抗體及多專一性抗原結合片段，其包含如本發明之抗原結合片段或多肽。

當使用於本文中，‘多專一性’意指具有超過一種抗原決定位之專一性。於一些具體例中，一種多專一性抗體或多專一性抗原結合片段可以對，例如2(雙專一性)、3(三專一性)、4、5、6、7、8、9或10種不同的抗原決定位為專一的。

於一些具體例中，如本發明之多專一性抗體/片段可以對超過一種標靶分子具有專一性。於一些具體例中，一種多專一性抗體/片段可以對，例如2(雙專一性)、3(三專一性)、4、5、6、7、8、9或10種不同的標靶分子為專一的。

於一些具體例中，該多專一性抗體及多專一性抗原結合片段包含一種能與CTLA-4結合的抗原結合片段，以及一種能與另一種標靶蛋白結合的抗原結合片段。於一些具體例中，該多專一性抗體/片段包含一種能與CTLA-4結合的抗原結合片段，以及例如1、2、3、4、5、6、7、8或9種能與另一種標靶蛋白，即CTLA-4之外的蛋白，結合的抗原結合片段。

本申請案亦提供一種能與CTLA-4結合之抗體或抗原結合片段，且其為一種雙專一性抗體或一種雙專一性抗原結合片段。於一些具體例中，該雙專一性抗體或雙專一性抗原結合片段可以為經單離的。

於一些具體例中，該雙專一性抗體及雙專一性抗原結合片段包含一種如本發明之抗原結合片段或多肽。於一些具體例中，該雙專一性抗體及雙專一性抗原結合片段包含一種能與CTLA-4結合的抗原結合片段，其中能與CTLA-4結合的抗原結合片段包含如本發明之抗原結合片段或多肽或是由如本發明之抗原結合片段或多肽所組成。

於一些具體例中，該雙專一性抗體及雙專一性抗原結合片段包含一種能與CTLA-4結合的抗原結合片段，以及一種能與另一種標靶蛋白結合的抗原結合片段。

能與另一種標靶蛋白結合的抗原結合片段可以為能與CTLA-4之外的另一種蛋白結合。

於一些具體例中，標靶蛋白可以為一種細胞表面受體。於一些具體例中，標靶蛋白可以為一種表現於一免疫細胞，如T細胞，的細胞表面上的細胞表面受體。於一些具體例中，細胞表面受體可以為一種免疫查核點受體。於一些具體例中，免疫查核點受體可以為一種共刺激受體。於一些具體例中，共刺激受體可以選自於CD27、CD28、ICOS、CD40、CD122、OX43、4-1BB及GITR。於一些具體例中，免疫查核點受體可以為一種抑制受體。於一些具體例中，抑制受體可以選自於B7-H3、B7-H4、BTLA、LAG-3、A2AR、VISTA、TIM-3、PD-1及KIR。

於一些具體例中，標靶蛋白可以為一種癌症標誌。也就是，標靶蛋白可以為一種蛋白，其之表現(如，向上調節的表現)與癌症有關連。於一些具體例中，癌症標誌可以表現於細胞表面。於一些具體例中，癌症標誌可以為一種受體。於一些具體例中，癌症標誌可以選自於HER-2、HER-3、EGFR、EpCAM、CD30、CD33、CD38、CD20、CD24、CD90、CD15、CD52、CA-125、CD34、CA-15-3、CA-19-9、CEA、CD99、CD117、CD31、CD44、CD123、CD133、ABCB5及CD45。

於一些具體例中，CD27的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CD27抗體克隆0323(Millipore)或瓦利路單抗(varlilumab) (Celldex Therapeutics)之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CD27結合片段。於一些具體例中，CD28的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CD28抗體克隆CD28.6(eBioscience)、克隆CD28.2、克隆JJ319(Novus Biologicals)、克隆204.12、克隆B-23、克隆10F3(Thermo Scientific Pierce Antibodies)、克隆37407(R&D Systems)、克隆204-12(Abnova Corporation)、克隆15E8(EMD Millipore)、克隆204-12、克隆YTH913.12(AbD Serotec)、克隆B-T3(Acris Antibodies)、克隆9H6E2(Sino Biological)、克隆C28/77(MyBioSource.com)、克隆KOLT-2(ALPCO)、克隆152-2E10(Santa Cruz Biotechnology)或克隆XPH-56(Creative Diagnostics)之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CD28結合片段。於一些具體例中，ICOS的抗原結合片段可以包含，諸如抗-ICOS抗體克隆ISA-3(eBioscience)、克隆SP98(Novus Biologicals)、克隆1G1、克隆3G4(Abnova Corporation)、克隆669222(R&D Systems)、克隆TQ09 (Creative Diagnostics)或克隆C398.4A(BioLegend)之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的ICOS結合片段。於一些具體例中，CD40的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CD40抗體克隆82111(R&D Systems)或ASKP1240 (Okimura等人，AM J Transplant (2014) 14(6) 1290-1299)之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CD40結合片段。於一些具體例中，CD122的抗原結合片段可以包含抗-CD122抗體克隆mikβ2(PharMingen)之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CD122結合片段。於一些具體例中，OX43的抗原結合片段可以包含，諸如US 20130280275、US 8283450或WO2013038191之內揭示的抗-OX43抗體，例如克隆12H3或克隆20E5之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的OX43結合片段。於一些具體例中，4-1BB的抗原結合片段可以包含，諸如抗-4-1BB抗體PF-05082566(Fisher等人，Cancer Immunol Immunother (2012) 61: 1721-1733)或烏瑞魯單抗(urelumab) (BMS-665513；Bristol-Myers Squibb；Li and Liu, Clin Pharmacol (2013)；5: 47-53)之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的4-1BB結合片段。於一些具體例中，GITR的抗原結合片段可以包含，諸如抗-GITR抗體TRX-518(Tolerx^R ；Schaer等人，(2010) 11(12): 1378-1386)或克隆AIT 518D (LifeSpan Biosciences)之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的GITR結合片段。於一些具體例中，B7-H3的抗原結合片段可以包含，諸如US 20130078234、WO2014160627或WO2011109400之內揭示的抗-B7-H3抗體克隆之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的B7-H3結合片段。於一些具體例中，B7-H4的抗原結合片段可以包含，諸如WO2013067492、WO2009073533或EP2934575之內揭示的抗-B7-H4抗體克隆，舉例而言克隆2H9，之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的B7-H4結合片段。於一些具體例中，BTLA的抗原結合片段可以包含，諸如抗-BTLA抗體克隆1B7、克隆2G8、克隆4C5(Abnova Corporation)、克隆4B8(antibodies-online)、克隆MIH26(Thermo Scientific Pierce Antibodies)、克隆UMAB61(OriGene Technologies)、克隆330104(R&D Systems)、克隆1B4 (LifeSpan BioSciences)、克隆440205、克隆5E7(Creative Diagnostics)之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的BTLA結合片段。於一些具體例中，LAG-3的抗原結合片段可以包含，諸如抗-LAG-3抗體克隆17B4 (Enzo Life Sciences)、克隆333210(R&D Systems)、克隆14L676(United States Biological)、BMS-986016，或WO 2015042246 A1之內揭示的抗-LAG-3抗體，之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的LAG-3結合片段。於一些具體例中，A2AR的抗原結合片段可以包含，諸如抗-A2AR抗體克隆7F6(Millipore；Koshiba等人之Molecular Pharmacology (1999)；55: 614-624，之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的A2AR結合片段。於一些具體例中，VISTA的抗原結合片段可以包含，諸如WO2015097536或US20140105912之內揭示的抗-VISTA抗體，例如克隆13F3，之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的VISTA結合片段。於一些具體例中，TIM-3的抗原結合片段可以包含，諸如抗-TIM-3抗體克隆F38-2E2 (BioLegend)、克隆2E2(Merck Millipore；Pires da Silva等人，Cancer Immunol Res (2014) 2(5): 410-422)、克隆6B6E2、克隆024(Sino Biological) 克隆344801(R&D Systems)、克隆E-18、克隆H-191(Santa Cruz Biotechnology)或克隆13A224(United States Biological)，之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的TIM-3結合片段。於一些具體例中，PD-1抗原結合片段可以包含，諸如抗-PD-1抗體克隆J116、克隆MIH4 (eBioscience)、克隆7A11B1(Rockland Immunochemicals Inc.)、克隆192106(R&D Systems)、克隆J110、克隆J105(MBL International)、克隆12A7D7、克隆7A11B1(Abbiotec)、克隆#9X21(MyBioSource.com)、克隆4H4D1(Proteintech Group)、克隆D3W4U、克隆D3O4S(Cell Signaling Technology)、克隆RMP1-30、克隆RMP1-14(Merck Millipore)、克隆EH12.2H7(BioLegend)、克隆10B1227 (United States Biological)、克隆UMAB198、克隆UMAB197(Origene Technologies)、納武單抗(nivolumab) (BMS-936558)、拉姆珠單抗(lambrolizumab)，或是WO 2010/077634或WO 2006/121168之內所述的抗-PD-1抗體，之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的PD-1結合片段。於一些具體例中，KIR的抗原結合片段可以包含，諸如抗-KIR抗體克隆1-7F9(Romagne等人，Blood (2009) 114(13): 2667-2677)、利瑞魯單抗(lirilumab) (BMS-986015；Sola等人，J Immunother Cancer (2013)；1:P40)或是US 2015/0344576或WO 2014/066532之內所述的抗-KIR抗體，之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的KIR結合片段。於一些具體例中，HER-2的抗原結合片段可以包含，諸如抗-HER-2抗體曲妥珠單抗(trastuzumab) (賀癌平(Herceptin))，或是WO 2003/006509或WO 2008/019290之內所述的抗-HER-2抗體，之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的HER-2結合片段。於一些具體例中，HER-3的抗原結合片段可以包含，諸如抗-HER-3抗體克隆MM-121(Lyu等人，Int. J Clin Exp Pathol (2015) 8(6): 6143-6156)、MEHD7945A(Schaefer等人，Cancer Cell (2011) 20(4): 472-486)、AMG 888(U3-1287；Aurisicchio等人，Oncotarget (2012) 3(8): 744-758)，或是WO2008/100624或WO 2013048883之內所述的抗-HER-3抗體，之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的HER-3結合片段。於一些具體例中，EGFR的抗原結合片段可以包含，諸如抗-EGFR抗體帕尼單抗(panitumumab) (ABX-EGF；維必施(Vectibix))、西妥昔單抗(cetuximab)(愛必妥(Erbitux))、尼妥珠單抗(nimotuzumab)、馬妥株單抗(matazumab) (EMD 7200)或抗體克隆048-006(Sogawa等人，Nucl Med Comm (2012) 33(7): 719-725)之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的EGFR結合片段。於一些具體例中，EpCAM的抗原結合片段可以包含，諸如抗-EpCAM抗體依決洛單抗(edrecolomab)、ING-1、3622W4，或阿德木單抗(adecatumumab) (Munz等人，Cancer Cell Int (2010) 10:44)之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的EpCAM結合片段。於一些具體例中，CD30的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CD30抗體本妥昔單抗(brentuximab) (cAC10)、克隆SGN-30(Wahl等人，Cancer Res 2002 62(13):3736-3742)、克隆5F11(Borchmann等人，Blood (2003) 102(1): 3737-3742)，或是WO 1993024135或WO 2003059282之內所述的抗-CD30抗體，之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CD30結合片段。於一些具體例中，CD33的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CD33抗體林妥珠單抗(lintuzumab) (SGN-33)、吉妥珠單抗(gemtuzumab) (Mylotarg)或克隆hP67.7(Sievers等人，Blood (1999) 93(11): 3678-3684)，之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CD33結合片段。於一些具體例中，CD38的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CD38抗體達雷木單抗(daratumumab) (Darzalex)、SAR650984(Martin等人，J Clin Oncol (2014) 32:5s、(suppl；abstr 8532)或MOR202 (MorphoSys AG)，或是WO 2006099875或US 20100285004之內所述的抗-CD38抗體，之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CD38結合片段。於一些具體例中，CD20的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CD20抗體利妥昔單抗(rituximab)、奥瑞珠單抗(ocrelizumab)、奧菲汀姆單抗(ofatumumab)、奥比妥珠單抗(obinutuzumab)或BM-ca (Kobayashi等人，Cancer Med (2013) 2(2): 130-143)，之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CD20結合片段。於一些具體例中，CD24的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CD24抗體克隆eBioSN3 (eBioscience)、克隆ML5(BD Biosciences)，或是WO 2008059491之內所述的抗-CD24抗體，之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CD24結合片段。於一些具體例中，CD90的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CD90抗體克隆5E10(BD Biosciences)之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CD90結合片段。於一些具體例中，CD15的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CD15抗體克隆C3D-1、Carb-3(DAKO A/S)、MMA(Roche)或BY87(Abcam)之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CD15結合片段。於一些具體例中，CD52的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CD52抗體阿來組單抗(alemtuzumab)、克隆HI186或克隆YTH34.5 (AbD Serotec)之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CD52結合片段。於一些具體例中，CA-125的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CA-125抗體奥戈伏單抗(oregovomab)之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CA-125結合片段。於一些具體例中，CD34的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CD34抗體克隆561(BioLegend)、克隆581(Beckton Dickinson)或克隆5F3(Sigma Aldrich)之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CD34結合片段。於一些具體例中，CA-15-3的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CA-15-3抗體克隆2F16(USBiological)、克隆TA998 (ThermoFisher Scientific)、克隆1D1(Sigma Aldrich)或Mab AR20.5(Qi等人，Hybrid Hybridomics (2001) 20(5-6): 313-324)，之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CA-15-3結合片段。於一些具體例中，CA-19-9的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CA-19-9抗體克隆116-NS-19-9 (DAKO A/S)、克隆SPM110或克隆121SLE (ThermoFisher Scientific)之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CA-19-9結合片段。於一些具體例中，CEA的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CEA抗體拉貝珠單抗(labetuzumab)、C2-45(Kyowa Hakko Kirin Co. Ltd.)，或是Imakiire等人，Int J Cancer (2004) 108: 564-570或WO 2011034660之內揭示的抗-CEA抗體，之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CEA結合片段。於一些具體例中，CD99的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CD99抗體克隆C7A(Moricoli等人，J Immunol Methods (2014) 408: 35-45)或克隆12E7(DAKO A/S)之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CD99結合片段。於一些具體例中，CD117的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CD117抗體克隆CK6(Lebron等人，Cancer Biol Ther (2014) 15(9): 1208-1218)或克隆104D2(Sigma Aldrich)之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CD117結合片段。於一些具體例中，CD31的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CD31抗體克隆JC70A(DAKO A/S)之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CD31結合片段。於一些具體例中，CD44的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CD44抗體PF-03475952 (Runnels等人，Adv Ther (2010)； 27(3): 168-180)、RG7356 (Vugts等人，MAbs (2014) 6(2): 567-575)、克隆IM7或克隆A3D8(Sigma Aldrich)，之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CD44結合片段。於一些具體例中，CD123的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CD123抗體CSL362 (Nievergall等人，Blood (2014) 123(8):1218-1228)、CSL360(He等人，Leuk Lymphoma (2015) 56(5): 1406-1415) 73G (Jin等人，Cell Stem Cell (2009) 5(1): 31-42)克隆6H6(AbD Serotec)，或是WO 2014130635之內所述的抗-CD123抗體，之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CD123結合片段。於一些具體例中，CD133的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CD133抗體克隆6B3、克隆9G4、克隆AC141(Wang等人，Hybridoma (Larchmt) (2010) 29(3): 241-249)、克隆6B6(Chen等人，Hybridoma (Larchmt) (2010) 29(4): 305-310、克隆AC113(Miltenyi Biotec)，或是WO 2011149493之內所述的抗-CD133抗體，之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CD133結合片段。於一些具體例中，ABCB5的抗原結合片段可以包含，諸如抗-ABCB5抗體克隆5H3C6(Thermo Fisher Scientific)之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的ABCB5結合片段。於一些具體例中，CD45的抗原結合片段可以包含，諸如抗-CD45抗體YAML568(Glatting等人，J Nucl Med (2006) 47(8): 1335-1341)或克隆BRA-55(Sigma Aldrich)，之CDRs、輕及重鏈可變異域或其他的CD45結合片段。

依據本發明之雙專一性抗體之抗原結合片段或雙專一性抗原結合片段可以為任何能與一抗原結合的多肽。於一些具體例中，一種抗原結合片段包含至少三輕鏈CDRs(即，LC-CDR1、LC-CDR2及LC-CDR3)以及三重鏈CDRs (即，HC-CDR1、HC-CDR2及HC-CDR3)，其等一起界定一種抗體或抗原結合片段的抗原結合區域。於一些具體例中，一種抗原結合片段可以包含一種抗體或抗原結合片段之輕鏈可變異域及重鏈可變異域。於一些具體例中，一種抗原結合片段可以包含一種抗體或抗原結合片段之輕鏈多肽及重鏈多肽。

依據本發明之雙專一性抗體及雙專一性抗原結合片段可以提供呈任何合適的形式，諸如Kontermann MAbs 2012, 4(2): 182-197之內所述的該等形式，其之整體內容藉此被併入以作為參考資料。舉例而言，一種雙專一性抗體或雙專一性抗原結合片段可以為一種雙專一性抗體綴合物(諸如，一種IgG2、F(ab’)₂ 或CovX-Body)、一種雙專一性IgG或似IgG分子(諸如，一種IgG、scFv₄ -Ig、IgG-scFv、scFv-IgG、DVD-Ig、IgG-sVD、sVD-IgG、2合1-IgG、mAb² 或Tandemab共同輕鏈(Tandemab common LC))、一種不對稱雙專一性IgG或似IgG分子(諸如，一種kih IgG、kih IgG common LC、CrossMab、kih IgG-scFab、mAb-Fv、電荷對(charge pair)或鏈交換結構域小體(SEED-body))、一種小型雙專一性抗體分子(諸如，一種雙價抗體(diabody) (Db)、dsDb、DART、scDb、tandAbs、串連scFv(tandem scFv) (taFv)、串連dAb/VHH、三體(triple body)、三頭(triple head)、Fab-scFv或F(ab’)₂ -scFv₂ )、一種雙專一性Fc及C_H 3融合蛋白(諸如，一種taFv-Fc、雙-雙價抗體(Di-diabody)、scDb-C_H 3、scFv-Fc-scFv、HCAb-VHH、scFv-kih-Fc或scFv-kih-C_H 3)，或是一種雙專一性融合蛋白(諸如，一種scFv₂ -白蛋白、scDb-白蛋白、taFv-毒素、DNL-Fab₃ 、DNL-Fab₄ -IgG、DNL-Fab₄ -IgG-細胞介素₂ )。特別參見Kontermann MAbs 2012, 4(2): 182-19之圖2。

熟習此項技術者能設計及製備如本發明之雙專一性抗體及雙專一性抗原結合片段。

生產雙專一性抗體的方法包括例如，用可還原的雙硫或非可還原的硫醚鍵進行抗體或抗體片段之化學交聯作用，舉例而言，如Segal and Bast, 2001. Production of Bispecific Antibodies. Current Protocols in Immunology. 14:IV:2.13:2.13.1–2.13.16之內所述者，其之整體內容藉此被併入以作為參考資料。舉例而言，可以使用N -琥珀醯亞胺-3-(-2-吡啶二硫代)-丙酸酯(SPDP)、經由鉸鏈區SH-基團予以化學交聯，諸如Fab片段，以創造雙硫鍵聯的雙專一性F(ab)₂ 異二聚體。

其他生產雙專一性抗體的方法包括融合生產抗體的融合瘤，諸如用聚乙二醇，以生產能分泌雙專一性抗體的四源雜交瘤細胞(quadroma cell)，舉例而言如D. M. and Bast, B. J. 2001. Production of Bispecific Antibodies. Current Protocols in Immunology. 14:IV:2.13:2.13.1–2.13.16之內所述者。

依據本發明之雙專一性抗體及雙專一性抗原結合片段可以從諸如，一種編碼抗原結合分子的多肽之核酸建構物之表現而重組地生產，舉例而言，如Antibody Engineering: Methods and Protocols，第二版 (Humana Press, 2012)，於第40章: Production of Bispecific Antibodies: Diabodies and Tandem scFv (Hornig and Färber-Schwarz)，或法國，How to make bispecific antibodies, Methods Mol. Med. 2000；40:333-339，之內所述者，其等二者之整體內容藉此被併入以作為參考資料。

舉例而言，一種編碼二種抗原結合片段之輕及重鏈可變異域的DNA建構物(即，能結合CTLA-4的抗原結合片段之輕及重鏈可變異域，以及能與另一種標靶蛋白結合的抗原結合片段之輕及重鏈可變異域)，且於抗原結合片段之間包括編碼一合適的鍵接子之序列或二聚合域，可藉由分子選殖的技術予以製備。重組雙專一性抗體之後能藉由建構物(諸如，於活體外)表現於一合適的宿主細胞(諸如，一種哺乳動物宿主細胞)來生產，以及表現的重組雙專一性抗體繼而能選擇性地予以純化。

抗體可以藉由一種親和力成熟方法來生產，該方法產生一種經修飾的抗體，與未經修飾的親代抗體相比，該經修飾的抗體對抗原的抗體親和力方面有改良。親和力成熟的抗體可藉由本技藝已知的程序來生產，諸如，Marks等人，Rio/Technology 10:779-783 (1992)；Barbas等人之Proc Nat. Acad. Sci. USA 91:3809-3813 (1994)； Schier等人之Gene 169:147-155 (1995)；Yelton等人之J. Immunol. 155:1994-2004 (1995)；Jackson等人，J. Immunol. 154(7):331 0-15 9 (1995)；以及Hawkins等人，J. Mol. Biol. 226:889-896 (1992)。

如本發明之抗體較佳地與CTLA-4展現專一性結合。一種專一性地與一標靶分子結合之抗體較佳會以更大的親和力與標靶結合，及/或以其與其他標靶結合更長的持續時間與標靶結合。於一些具體例中，本抗體可以以比PD-1、TIM-3、ICOS、BTLA、CD28或LAG-3之一者或更多者，更大的親和力與CTLA-4結合。

於本發明之具體例中，該抗體或抗原結合片段展現出與CD28，例如人類CD28實質沒有結合。此為能與CTLA-4結合的抗體出乎意料的特徵，因為先前技藝的抗體(例如抗體克隆L3D10)於高濃度展現出會與CD28結合(參見例如圖5)。有利地，此等抗體能抑制/防止CTLA-4/CD80或CTLA-4/CD86發送訊息，而不會抑制/防止CD28/CD80或CD28/CD86發送訊息。

當使用於本文中，‘實質沒有結合’係指結合作用沒有實質大於陰性對照抗體(例如，一種針對CD28無關的標靶之抗體，或是已知不結合CD28之抗體)的水平。於一些具體例中，如本發明之抗體於一假定的分析或假定的濃度下，可以展現出與CD28(例如人類CD28)的結合作用，其為陰性對照抗體(例如，一種針對CD28無關的標靶之抗體，或是已知不結合CD28之抗體)所展現對CD25的結合作用之≤500%、≤400%、≤300%、≤250%、≤200%、≤150%或≤100%。

如本發明之抗體對一假定分子的結合作用可以藉由熟習此項技術者眾所皆知的技術來測量，包括ELISA、SPR、生物層干涉術(Bio-Layer Interferometry)、流動式細胞測量術或藉由放射免疫分析(RIA)測量。經由此分析，可以測量並定量對一假定標的的結合作用。於一些具體例中，結合作用可以是一假定的分析偵測到的反應。

於一個具體例中，當以諸如ELISA、SPR、生物層干涉術或RIA測量時，一種抗體對不相關標靶結合的程度係小於該抗體對標靶結合的程度之大約10%。任擇地，結合專一性可以就結合親和力方面來反映，其中本發明的抗CTLA-4抗體與CTLA-4結合之K_D ，係比該抗體對另一種標靶分子的K_D 更大至少0.1數量級數(即，0.1 x 10ⁿ ，n為表示數量級數的整數)。此可以選擇性地為下列中之一者：至少0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.5或2.0。

如本發明之抗體較佳具有下列中一者之解離常數(K_D )：≤10nM、≤5nM、≤3nM、≤2nM、≤1.5nM、≤1.4nM、≤1.3nM、≤1.25nM、≤1.24nM、≤1.23nM、≤1.22nM、≤1.21nM、≤1.2nM、≤1.15nM、≤1.1nM ≤1.05nM、≤1nM、≤900pM、≤800pM、≤700pM、≤600pM、≤500pM。K_D 可以在大約0.1至大約3 nM的範圍內。一種抗體對其標靶的結合親和力通常就其之解離常數(K_D )來說明。 結合親和力可藉由本技藝已知的方法來測量，諸如ELISA、表面電漿子共振(SPR；參見諸如，Hearty等人，Methods Mol Biol (2012) 907:411-442)、生物層干涉術(參見諸如，Lad等人，(2015) J Biomol Screen 20(4): 498-507)，或用抗體的Fab版本及抗原分子執行的放射性標記抗原結合分析(RIA)。

如於本發明之抗體較佳地展現比參考抗CTLA-4抗體之結合親和力更大的親和力或相似的親和力，來與CTLA-4(如人類CTLA-4或小鼠CTLA-4)結合。一種如本發明之抗體及一參考抗體對一假定標的之相對結合親和力可以如本文所述，舉例而言藉由ELISA來判定。

如於本發明之抗體可以以比抗體克隆L3D10(舉例而言於May等人之Blood (2005) 105: 1114-1120內所述)之結合親和力更大的親和力或相似的親和力，來與人類CTLA-4結合。於一些具體例中，該抗體可以展現比能與小鼠CTLA-4結合之參考抗體更大的親和力或相似的親和力，與小鼠CTLA-4之結合。

當使用於本文中，與一種參考抗體與標靶分子結合相比，對一假定的標靶分子展現‘更大的親和力’之一種抗體，係以與參考抗體與標靶分子結合的力量相比之下更大的力量與標靶分子結合。一種抗體對一假定的標靶分子之親和力可以定量判定。於一些具體例中，對標靶蛋白展現比參考抗體更大的親和力之一種抗體，可以以比參考抗體與標靶結合的K_D 值或EC50值更小的數值與標靶分子結合。

於一些具體例中，一種如本發明的抗體於一假定的分析中對於CTLA-4，可以具有比參考抗體對於CTLA-4之親和力為1.01倍或更大，1.05倍或更大，1.1倍或更大，1.15倍或更大，1.2倍或更大，1.25倍或更大，1.3倍或更大，1.35倍或更大，1.4倍或更大，1.45倍或更大，1.5倍或更大之親和力。在一些具體例中，一種如本發明的抗體於一假定的分析中，可以以參考抗體對於CTLA-4之對應的K_D 值或EC50值之0.99倍或更小，0.95倍或更小，0.9倍或更小，0.85倍或更小，0.8倍或更小，0.75倍或更小，0.7倍或更小，0.65倍或更小，0.6倍或更小，0.55倍或更小，0.5倍或更小，的K_D 值或EC50值與CTLA-4結合。

如本發明之抗體較佳以EC50 = 500 pM或更少，較佳為≤400 pM、≤300 pM、≤200 pM、≤150 pM、≤100 pM、≤90 pM、≤80 pM、≤75 pM、≤70、≤65 pM、≤60 pM、≤55 pM、≤50 pM中的一者之結合的結合性(avidity of binding)，與人類或小鼠CTLA-4結合。當使用於本文中，結合的結合性係指一種抗體與標靶分子結合以形成抗體：標靶複合物的力量。一種具高結合性的抗體與標靶分子之結合更強，且因而形成穩定的抗體：標靶複合物。一種抗體與標靶分子之結合的結合性可以舉例而言如本文所述，藉由ELISA來分析及定量。

於一些具體例中，如本發明之抗體可以抑制/防止CTLA-4及CD80之間的交互作用。於一些具體例中，如本發明之抗體可以抑制/防止CTLA-4及CD86之間的交互作用。於一些具體例中，如本發明之抗體可以抑制/防止CTLA-4及CD80之間的交互作用，以及抑制/防止CTLA-4及CD86之間的交互作用。

CTLA-4及CD80或CD86之間的交互作用之抑制/防止，可以透過分析CTLA-4及CD80或CD86之間的交互作用有關的反應來推斷。如本發明的抗體關於CTLA-4及CD80或CD86之間的交互作用之相對抑制/防止，可以舉例而言如本文中所述於活體外判定。

在一些具體例中，一種如本發明的抗體可以抑制/防止CTLA-4及CD80或CD86之間的交互作用，至大於或等於一種能與CTLA-4結合之參考抗體，例如抗體克隆L3D10，抑制/防止CTLA-4及CD80或CD86之間的交互作用的程度。於一些具體例中，一種如本發明的抗體於一假定的分析中可以抑制/防止CTLA-4及CD80或CD86之間的交互作用，比一種能與CTLA-4結合之參考抗體抑制/防止CTLA-4及CD80或CD86之間的交互作用，達以下的程度：為1.01倍或更大，1.05倍或更大，1.1倍或更大，1.15倍或更大，1.2倍或更大，1.25倍或更大，1.3倍或更大，1.35倍或更大，1.4倍或更大，1.45倍或更大，1.5倍或更大。

於一些具體例中，如本發明之抗體可以抑制/防止CD28及CD80之間的交互作用。於一些具體例中，如本發明之抗體可以抑制/防止CD28及CD86之間的交互作用。於一些具體例中，如本發明之抗體可以抑制/防止CD28及CD80之間的交互作用，以及可以抑制/防止CD28及CD86之間的交互作用。

CD28及CD80或CD86之間的交互作用之抑制/防止，可以透過測量與CD28及CD80或CD86之間的交互作用有關的反應來分析，舉例而言一活體外分析。

於一些具體例中，與CD28及CD80或CD86之間的交互作用有關的反應於本發明之抗體存在下，可以為沒有該抗體的反應或是陰性對照抗體(例如，一種針對無關的標靶之抗體，或是已知不結合CD28、CD80或CD86的抗體)存在下的反應之≥70%、≥75%、≥80%、≥85%、≥90%、≥95%或≥99%。

於一些具體例中，一種如本發明的抗體可以抑制/防止CTLA-4及CD80或CD86之間的交互作用，至大於或等於一種能與CTLA-4結合之參考抗體，例如抗體克隆L3D10，抑制/防止CTLA-4及CD80或CD86之間的交互作用的程度。於一些具體例中，一種如本發明的抗體於一假定的分析中可以抑制/防止CTLA-4及CD80或CD86之間的交互作用，比一種能與CTLA-4結合之參考抗體抑制/防止CTLA-4及CD80或CD86之間的交互作用，達以下的程度：為1.01倍或更大，1.05倍或更大，1.1倍或更大，1.15倍或更大，1.2倍或更大，1.25倍或更大，1.3倍或更大，1.35倍或更大，1.4倍或更大，1.45倍或更大，1.5倍或更大。

如本發明的抗體較佳會使活體外T細胞的活化作用增高。增高的T細胞活化作用可藉由偵測T細胞於一假定的分析內增高的T細胞增殖、IL-2表現/生產或IFNγ表現/生產之一者或更多者來推斷。T細胞增殖可藉由熟悉此藝者已知的方法來評估，諸如藉由3H胸腺嘧啶(tritiated thymidine)之嵌入或藉由CFSE染料稀釋予以測量，例如如Anthony等人，2012 Cells 1:127-140之內所述者。IL-2及/或IFNγ表現/生產可藉由諸如，熟悉此藝者眾所周知的核酸及/或抗體基(antibody-based)方法予以分析，諸如qRT-PCR、西方墨點法、免疫組織化學法、免疫細胞化學法、流動式細胞測量術、ELISA、ELISPOT，或報導基(reporter-based)的方法。

於一些具體例中，一種如本發明的抗體於一假定的分析中可以使T細胞增殖、IL-2生產及IFNγ生產之一者或更多者，增加至相似於一種能與CTLA-4結合之參考抗體(例如L3D10)的程度或大於一種能與CTLA-4結合之參考抗體(例如L3D10)的程度。於一些具體例中，一種如本發明的抗體在假定的分析內可以使T細胞增殖、IL-2生產及IFNγ生產之一者或更多者，比一種能與CTLA-4結合之參考抗體回應於T細胞增殖、IL-2生產及IFNγ生產方面之增加，增大達以下的程度：為1.01倍或更大，1.05倍或更大，1.1倍或更大，1.15倍或更大，1.2倍或更大，1.25倍或更大，1.3倍或更大，1.35倍或更大，1.4倍或更大，1.45倍或更大，1.5倍或更大。

於一些具體例中，如本發明的抗體可以能夠抑制腫瘤生長或癌症進展。於一些具體例中，如本發明的抗體可以展現抗癌活性。於一些具體例中，腫瘤生長或癌症進展之抑制可以於活體內。‘抑制’可以為腫瘤生長之降低或控制，或是癌細胞數目之降低或控制。腫瘤生長或癌症進展之抑制可以於活體內，舉例而言如本文所述於癌症動物模式內評估。

如本發明之抗體可以為"拮抗劑"抗體，其抑制或降低其所結合抗原的生物活性。CTLA-4及CD80及/或CD86之間的交互作用之阻斷係透過抑制CTLA-4媒介的免疫抑制發送訊息途徑，而協助恢復T細胞功能。

本發明亦提供一種嵌合抗原受體(CAR)，其包含如本發明之抗原結合片段。

嵌合抗原受體(CARs)為重組受體，其提供抗原結合及T細胞活化功能二者。CAR結構及遺傳工程處理係舉例而言，於Dotti等人之Immunol Rev (2014) 257(1)內被回顧，其之整體藉此被併入以作為參考資料。

CARs包含一種抗原結合區域，其與一細胞膜錨定區及一發送訊息區鍵聯。一種選擇的鉸鏈區可以於抗原結合區域與細胞膜錨定區域之間提供分隔，以及可以作用為一種撓性鍵接子。

一種CAR的抗原結合區域可以以一種抗體的抗原結合區域為基礎，該抗體對CAR靶定的抗原是專一的，或是其他能與標靶結合的製劑為基礎。舉例而言，一種CAR的抗原結合域可以包含一種專一地結合標靶蛋白的抗體之互補性決定區域(CDRs)的胺基酸序列或完整的輕鏈及重鏈可變異區域胺基酸序列。CARs的抗原結合域可以根據其他的蛋白：蛋白的交互作用來靶定抗原，諸如配體：受體結合；舉例而言，已經使用一種根據IL-13之抗原結合域來發展出一種IL-13Rα2-靶定的CAR(參見諸如，Kahlon等人之2004 Cancer Res 64(24): 9160-9166)。

本發明的CAR包含一種CTLA-4結合區域。於一些具體例中，本發明的CAR包含一抗原結合區域，其包含如本發明之抗體/抗原結合片段或由如本發明之抗體/抗原結合片段所組成。

本發明的CAR之CTLA-4結合區域可以提供為任何合適的形式，例如scFv、Fab等等。於一些具體例中，本發明的CAR之CTLA-4結合區域包含一種CTLA-4結合scFv或由一種CTLA-4結合scFv所組成。

CAR的抗原結合區域與發送訊息區之間提供細胞膜錨定區域。細胞膜錨定區域係提供用於使CAR錨定至一種細胞的細胞膜，該細胞表現CAR，及細胞外空間之抗原結合區域及細胞內部的發送訊息區。於一些具體例中，本發明的CAR包含一種細胞膜錨定區域，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列包含CD3-ζ、CD4、CD8或CD28中一者的跨膜區域胺基酸序列、由CD3-ζ、CD4、CD8或CD28中一者的跨膜區域胺基酸序列所組成，或是衍生自CD3-ζ、CD4、CD8或CD28中一者的跨膜區域胺基酸序列。

當使用於本文中，一種‘衍生自’一參考胺基酸序列之區域包含一胺基酸序列，其與參考序列有至少60%的序列同一性，例如下列中之一者：至少65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的序列同一性。

一種CAR的發送訊息區允許T細胞之活化。CAR的發送訊息區可以包含CD3-ζ的細胞內域之胺基酸序列，其提供表現CAR的T細胞之磷酸化及活化作用之免疫受體酪胺酸的活化模體(immunoreceptor tyrosine-based activation motifs) (ITAMs)。包含其他含ITAM蛋白的序列之發送訊息區亦已經使用於CARs，諸如包含FcγRI之含ITAM區域的域(Haynes等人，2001 J Immunol 166(1):182-187)。包含衍生自CD3-ζ的細胞內域之發送訊息區之CARs通常稱為第一代CARs。

CARs的發送訊息區亦包含衍生自共刺激分子之發送訊息區的共刺激序列，一旦與標靶蛋白結合用以促進表現CAR的T細胞之活化。合適的共刺激分子包括CD28、OX40、4-1BB、ICOS及CD27。具有一種包括額外的共刺激序列之發送訊息區的CARs，通常稱為第二代CARs。

於一些情況中，CARs係予以遺傳工程處理以提供不同的細胞內共刺激發送訊息途徑。舉例而言，與CD28共刺激有關連的發送訊息優先活化磷脂酸肌醇3-激酶(P13K)的途徑，而4-1BB-媒介的發送訊息係經由TNF受體相關因子(TRAF)轉接蛋白。CARs之發送訊息區有時因而含有衍生自超過一個共刺激分子的發送訊息區之共刺激序列。包含一種帶有多重的共刺激序列之發送訊息區的CARs通常稱為第三代CARs。

於一些具體例中，本發明的CAR包含一種或更多種共刺激序列，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列包含CD28、OX40、4-1BB、ICOS及CD27之一者或更多者的細胞內域之胺基酸序列、由CD28、OX40、4-1BB、ICOS及CD27之一者或更多者的細胞內域之胺基酸序列所組成，或是衍生自CD28、OX40、4-1BB、ICOS及CD27之一者或更多者的細胞內域之胺基酸序列。

一種選擇的鉸鏈區可以於抗原結合域與跨膜域之間提供分隔，以及可以作用為一種撓性鍵接子。鉸鏈區可以為撓性域，其允許結合部分定位於不同的方向。鉸鏈區可以衍生自免疫球蛋白的IgG1或CH2CH3區域。於一些具體例中，本發明的CAR包含一種鉸鏈區，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列包含免疫球蛋白的IgG1或CH2CH3區域之鉸鏈區的胺基酸序列、由免疫球蛋白的IgG1或CH2CH3區域之鉸鏈區的胺基酸序列所組成，或是衍生自免疫球蛋白的IgG1或CH2CH3區域之鉸鏈區的胺基酸序列。

CARs可以組合以共刺激配體、嵌合型共刺激受體或細胞介素，以進一步提升T細胞效能、專一性及安全(Sadelain等人，The basic principles of chimeric antigen receptor (CAR) design. Cancer Discov. 2013 April；3(4): 388–398. doi:10.1158/2159-8290. CD-12-0548，其特別被併入本文中以作為參考資料)。

亦提供一種細胞，其包含一種如本發明的CAR。如本發明的CAR可以使用來產生T細胞。經遺傳工程處理使CARs進入T細胞可以在轉導及增生之活體外培養的期間予以執行，諸如發生在授受性T細胞療法的T細胞增生期間。

於一些態樣中，抗體是克隆2C8或2C8_gI，或是2C8或2C8_gI的變異體。2C8或2C8_gI包含下列的CDRs序列： LC-CDR1：RATQGISSWLA (序列辨識編號：5) LC-CDR2：AASSLQS (序列辨識編號：6) LC-CDR3：QQANTLPLFT (序列辨識編號：7)。 重鏈： HC-CDR1：SNTAAWN (序列辨識編號：8) HC-CDR2：RTYYRSKWYSDYGLSVKS(序列辨識編號：9) HC-CDR3：EGSGGTLIY (序列辨識編號：10)。 CDR序列係藉由Kabat定義來判定。

如本發明之抗體可以包含2C8或2C8_gI之CDRs或下列中之一者：序列辨識編號1及3；或2及4。於如本發明之抗體中，六個CDR序列中的一或二或三或四者可以變化。一變異體於六個CDR序列中的一或二者可以具有一或二個胺基酸取代。

抗CTLA-4克隆之V_H 及V_L 鏈的胺基酸序列係顯示於圖1及2中。編碼的核苷酸序列係顯示於圖3中。

輕及重鏈CDRs於結合一些不同的框架區域亦可以是特別有用的。因此，具有LC-CDR1-3或HC-CDR1-3之輕及/或重鏈可擁有一任擇的框架區域。合適的框架區域為本技藝眾所周知的的，以及描述於舉例而言，M. Lefranc & G. Lefranc (2001) "The Immunoglobulin FactsBook", Academic Press之內，併入本文中以作為參考資料。

於此說明書中，抗體可具有包含一胺基酸序列之V_H 及/或V_L 鏈，該胺基酸序列與下列之V_H 及/或V_L 胺基酸序列的一者或更多者：序列辨識編號1及3；或2及4，或圖1及2中顯示的一胺基酸序列或數個胺基酸序列，有高百分率的序列同一性。

舉例而言，如本發明之抗體包括會結合CTLA-4且具有一V_H 或V_L 鏈之抗體，該V_H 或V_L 鏈包含一胺基酸序列，其與為序列辨識編號1至4中一者的V_H 或V_L 鏈胺基酸序列，或圖1及2中顯示的一胺基酸序列或數個胺基酸序列，具有至少70%，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。

如本發明之抗體可以被可偵測標示，或至少能被偵測。舉例而言，抗體可以用一放射性原子或著色的分子或螢光分子或能以任何其他方式容易地偵測的分子，予以標示。合適的可偵測分子包括螢光蛋白、螢光素酶、酵素基質及放射性標記。結合部分可以直接用一種可偵測的標示予以標示或者其可以被間接標示。舉例而言，結合部分可能是一種未標示的抗體，其能被另一種自身標示的抗體所偵測。

任擇地，二級抗體可以已經與其生物素(it biotin)結合，且利用經標示的鏈黴抗生物素蛋白(streptavidin)與生物素之結合來間接標示一級抗體。 核酸/載體

本發明提供一種編碼如本發明之抗體、抗原結合片段或CAR的核酸。於一些具體例中，該核酸為從例如其他的核酸或天然存在的生物材料予以純化或單離的。

本發明亦提供一種載體，其包含編碼如本發明之抗體、抗原結合片段或CAR的核酸。

可提供如本發明之核酸及/或載體用於導入至一細胞之內，例如一種初級人類免疫細胞。合適的載體包括質體、二元載體(binary vector)、DNA載體、mRNA載體、病毒載體(諸如，γ反轉錄病毒載體(如鼠類白血病病毒(MLV)-衍生的載體)、慢病毒(lentiviral)載體、腺病毒載體、腺病毒相關病毒載體、牛痘病毒載體及疱疹病毒載體)、轉位子基(transposon-based)載體以及人工染色體(諸如，酵母人工染色體)，例如如同Maus等人，Annu Rev Immunol (2014) 32:189-225或Morgan and Boyerinas, Biomedicines 2016 4, 9之內所述者，二者之整體內容均藉此被併入以作為參考資料。於一些具體例中，病毒載體可以是一種慢病毒、反轉錄病毒、腺病毒，或是單純疱疹病毒載體。於一些具體例中，慢病毒載體可以為pELNS，或是可以衍生自pELNS。於一些具體例中，載體可以是一種編碼CRISPR/Cas9的載體。 包含/表現抗體/片段/CARs的細胞

本發明亦提供一種細胞，其包含或表現一種如本發明的抗體、抗原結合片段或CAR。亦提供一種細胞，其包含或表現一種如本發明的核酸或載體。

細胞可以為一種真核細胞，例如哺乳動物細胞。哺乳動物可以為一人類，或非人類哺乳動物(諸如，兔、天竺鼠、大鼠、小鼠或其他的囓齒動物(包括囓齒目的任何動物)、貓、狗、豬、綿羊、山羊、牛(包括乳牛，例如乳用母牛或牛屬(orderBos )的任何動物)、馬(包括馬科屬(orderEquidae )的任何動物)、驢以及非人類靈長類動物)。

於一些具體例中，細胞可以來自於一人類主體，或是已經從一人類主體獲得。

細胞可以是一種免疫細胞。細胞可以是一種造血來源的細胞，諸如嗜中性球、嗜酸性球、嗜鹼性球、樹突細胞、淋巴球或單核球。淋巴球可以是諸如，T細胞、B細胞、NK細胞、NKT細胞或先天性淋巴細胞(ILC)，或是其之前驅物。細胞可以表現諸如，CD3多肽(諸如，CD3γ CD3ε CD3ζ或CD3δ)、TCR多肽(TCRα或TCRβ)、CD27、CD28、CD4或CD8。於一些具體例中，細胞是T細胞。於一些具體例中，T細胞是CD3+ T細胞。於一些具體例中，T細胞是CD3+、CD8+ T細胞。於一些具體例中，T細胞是胞毒型T細胞(諸如胞毒型T淋巴球(CTL))。

於細胞為包含如本發明之CAR的T細胞的情況中，該細胞可以稱為CAR-T細胞。

於一些具體例中，細胞是一種抗原專一性T細胞。於本文的具體例中，一種“抗原專一性”T細胞為一種細胞，其對該T細胞專一的抗原或表現該抗原的細胞回應而展現某些功能特質。於一些具體例中，該等特質為與效應子T細胞，例如胞毒型T細胞有關連的功能特質。於一些具體例中，一抗原專一性T細胞可以舉例而言，對該T細胞專一的抗原或是一種包含/表現該T細胞專一的抗原之細胞回應，而展現一種或更多種下列特質：對於例如一種包含/表現T細胞專一的抗原之細胞之細胞毒性；增殖，IFNγ表現，CD107a表現，IL-2表現，TNFα表現，穿孔蛋白表現，顆粒酶表現，顆粒溶解素(granulysin)表現，及/或FAS配體(FASL)表現。於一些具體例中，T細胞具有專一性的抗原可以是一種病毒的胜肽或多肽，例如艾司坦氏-巴爾氏病毒(Epstein-Barr virus)(EBV)、流行性感冒病毒、麻疹病毒、B型肝炎病毒(HBV)、C型肝炎病毒(HCV)、人類免疫不全病毒(HIV)、淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎病毒(LCMV)、單純疱疹病毒(HSV)或是人類乳頭瘤病毒(HPV)。

本發明亦提供一種用於生產一細胞之方法，該細胞包含如本發明之核酸或載體，該方法包含將如本發明之核酸或載體導入一細胞內。本發明亦提供一種用於生產一細胞之方法，該細胞表現如本發明之抗體、抗原結合片段或CAR，該方法包含將如本發明之核酸或載體導入一細胞內。於一些具體例中，該方法額外包含於適合該細胞表現該核酸或載體之載體的條件下培養該細胞。於一些具體例中，該方法係於活體外執行。

於一些具體例中，將如本發明之經單離的核酸或載體導入一細胞內包含轉導，例如反轉錄病毒轉導。因此，於一些具體例中，該經單離的核酸或載體被包含於一病毒載體內，或該載體是一病毒載體。於一些具體例中，該方法包含藉由電穿孔將如本發明之核酸或載體導入，舉例而言如Koh等人，Molecular Therapy – Nucleic Acids (2013) 2, e114之內所述，其之整體內容藉此被併入以作為參考資料。

本發明亦提供透過依據本發明之生產細胞的方法所獲得或可獲得的細胞。 偵測方法

如本文所述之抗體、抗原結合片段、CAR或細胞可以使用於涉及該抗體、抗原結合片段、CAR或細胞與CTLA-4結合的方法之內。此等方法可以涉及抗體、抗原結合片段、CAR或細胞與CTLA-4的結合複合物之偵測。確切而言，於一個具體例中，提供一種方法，該方法包含使一種含有或懷疑含有CTLA-4的樣本與一種如本文所述之抗體、抗原結合片段、CAR或細胞接觸，以及偵測抗體、抗原結合片段、CAR或細胞與CTLA-4的複合物之形成。

合適的方法形式為本技藝眾所周知的，包括免疫分析，諸如三明治分析，例如ELISA。該方法可以涉及用一可偵測的標示，例如螢光、冷光或放射性標記，來標示該抗體、抗原結合片段、CAR或細胞，或是CTLA-4，或是二者。CTLA-4之表現可藉由舉例而言，以活體組織切片檢查獲得的一組織樣本之免疫組織化學法(IHC)來測量。

此種方法可以提供一種診斷一疾病或病況的方法之基礎，其需要偵測及或定量CTLA-4或CD80或CD86。此等方法可以於活體外的一病人樣本執行，或是在一病人樣本處理後執行。一旦收集樣本，執行活體外診斷方法時不需要病人在場，且因而該方法可以為一種不於人類或動物體上實施的方法。

此等方法可涉及判定一病人樣本內存在的CTLA-4的量。該方法可以進一步包含，對比標準或參考的值來比較判定的量作為該方法達成診斷的一部分。可以使用其他的診斷測試來與於此所述的該等診斷測試結合，以提升診斷或預後的準確度或用於證實使用於此所述的測試所獲得的結果。

癌細胞可以利用CTLA-4途徑來創造免疫抑止的環境，其係藉由向上調節CTLA-4表現、允許抑制性CTLA-4受體於任何浸潤於腫瘤微環境的T細胞上之活化作用，且藉此抑止其等之活性。於許多不同的癌症類型業已證實CTLA-4向上的調節表現，以及高CTLA-4表現亦已與不良的臨床結果有關聯。

一病人樣本內存在的CTLA-4或CD80或CD86之水平可以表明一病人可以對一種抗CTLA-4抗體之治療作出反應。一樣本內存在高水平的CTLA-4或CD80或CD86可以使用來選擇病人用於一種抗CTLA-4抗體之治療。本發明的抗體因而可以使用來選擇病人用於抗CTLA-4療法之治療。

偵測一樣本內的CTLA-4可以使用於診斷病人體內的一種T細胞官能不良障礙或癌症病況、診斷一癌症病況的體質，或提供一癌症病況的預後(預知(prognosticating))之目的。診斷或預後可以與現存的(事先診斷的)癌症—可以為良性或惡性的—的病況有關，可以與一懷疑的癌症病況有關，或者可以與篩選病人的癌症病況(其可能是事先未經診斷的)有關。

於一個具體例中，可以偵測CD8+ T細胞上CTLA-4的表現水平，俾以指示T細胞衰竭的程度以及疾病狀態的嚴重性。

於一個具體例中，可以偵測CD80或CD86於例如，抗原呈現細胞或腫瘤細胞上的表現水平，俾以指示一種疾病狀態，舉例而言感染、組織發炎或一癌症，的存在或嚴重性。

一樣本可以取自於任何組織或身體的流體。樣本可以包含或可以衍生自：一分量的血液；一分量衍生自個體血液的血清，其可以包含所獲得的血液移除纖維蛋白凝塊及血液細胞後的流體部分；一組織樣本或活體組織切片檢查；或自該個體單離的細胞。

如本發明的方法較佳於活體外執行。術語“活體外”打算包含以培養物內的細胞進行的實驗，而術語“活體內”打算包含以完整的多細胞生物進行的實驗。 治療應用

如本發明之抗體、抗原結合片段、CAR、細胞及多肽，以及包含此等製劑的組成物可以提供用於醫學治療方法。治療可以提供給具有需要治療的疾病或病況之主體。疾病或病況可以為下列中之一者：一種T細胞官能不良障礙，包括與一癌症有關連的T細胞官能不良障礙，或一癌症，或是與感染有關連的T細胞官能不良障礙，或一感染。

一種T細胞官能不良障礙可以為一種疾病或病況，其中正常的T-細胞功能受損、造成主體對病原性抗原的免疫反應向下調節，該病原性抗原為例如由外源性媒介(agent)諸如微生物、細菌及病毒感染所產生，或是於一些疾病狀態由宿主產生，諸如以一些癌症的形式(諸如以腫瘤關聯性抗原的形式)。

T細胞官能不良障礙可以包含T細胞衰竭或T細胞無反應性。T細胞衰竭包含CD8⁺ T細胞無法增殖或發揮T細胞效應子功能的狀態，諸如細胞毒性以及對抗原刺激回應分泌細胞介素(諸如IFNγ)。衰竭的T細胞亦可特徵在於CTLA-4之持續表現，阻斷CTLA-4：CD80或CTLA-4：CD86的交互作用可以逆轉T細胞衰竭以及恢復抗原專一性T細胞反應。

T細胞官能不良障礙可以顯現為一種感染，或是不能發動有效的免疫反應對抗感染。感染可以為慢性、持續性、潛伏或緩慢的，以及可能是細菌、病毒、真菌或寄生蟲感染的結果。確切而言，可以提供治療給有細菌、病毒或是真菌感染的病人。細菌感染的實例包括幽門螺旋桿菌(Helicobacter pylori )感染。病毒感染的實例包括HIV、B型肝炎或C型肝炎感染。

T細胞官能不良障礙可能與癌症有關連，諸如腫瘤免疫逃避(tumor immune escape)。許多人類腫瘤表現T細胞辨識且能誘發免疫反應的腫瘤關聯性抗原。透過CTLA-4而抑制T細胞活化之負向調節，已經於幾個研究內顯示為有希望的癌症治療法，舉例而言於Grosso and Kunkel, Cancer Immunity (2013) 13: 5。

亦可以治療癌症，該癌症沒有T細胞官能不良障礙的徵兆，諸如T細胞衰竭，但是使用一種如本發明之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR或細胞允許主體抑止CTLA-4發送訊息且發動有效的免疫反應伴隨有限的減損、迴避(evasion)或誘發腫瘤免疫逃避。於此等治療方面，該抗體、抗原結合片段、多肽、CAR或細胞可以提供用於一癌症的治療，其牽涉到要避免發展出腫瘤免疫逃避。

亦可以治療過度表現CTLA-4之癌症。舉例而言，此等過度表現CTLA-4之腫瘤細胞可以藉由CTLA-4抗體之治療、藉由抗體依賴性細胞媒介的細胞毒性(ADCC)、補體依賴性細胞毒性(CDC)或使用抗CTLA-4抗體-藥物綴合物而直接殺死。

治療的目的可以是預防T細胞官能不良障礙，例如預防感染或癌症的發展或進展。確切而言，該抗體、抗原結合片段、CAR、細胞及多肽可以使用來調配藥學組成物或藥劑，以及主體可以預防性地治療以對抗疾病狀態的發展。此可以在疾病狀態的症狀開始之前發生，及/或可以提供給認為有較大的感染或癌症的發展風險之主體。

治療可以包含連同疫苗的共療法，例如T-細胞疫苗，其可以涉及同時、分別或連續療法，或是疫苗與抗體、抗原結合片段、CAR、細胞或多肽之單一組成物的組合投與。於此上下文內，該抗體、抗原結合片段、CAR、細胞或多肽可以提供作為疫苗的佐劑。衰竭T細胞有限的增殖潛力已經被認為是T-細胞免疫療法失敗的主要原因，以及一種能阻斷或逆轉T細胞衰竭的製劑之組合為改良T-細胞免疫療法功效有潛力的策略(Barber等人，Nature Vol 439, No. 9 p682-687 Feb 2006)。

一種抗體、抗原結合片段、CAR、細胞或多肽之投與較佳為"治療有效量"，此量係足以對個體顯示益處。投與的實際量，以及投與的速率及時間過程會取決於要治療的疾病本質及嚴重性。治療的處方，例如決定劑量等等，係在普通科醫生及其他醫生的責任範圍內，並且典型地要考慮要治療的疾病、個別病人的狀況、遞送的位置、投與的方法以及開業醫生已知的其他因素。以上提及的技術與程序之實例可以於Remington’s Pharmaceutical Sciences, 20th版，2000, pub. Lippincott, Williams & Wilkins內找到。 調配藥學有用的組成物及藥劑

如本發明之抗體、抗原結合片段、CAR、細胞及多肽可以調配為供臨床使用之藥學組成物，以及可以包含一種藥學上可接受的載劑、稀釋劑、賦形劑或佐劑。

依據本發明，亦提供用於生產藥學上有用的組成物之方法，此等生產方法可以包含選自於下列的一或多個步驟：單離一種如本文所述之抗體、抗原結合片段、CAR、細胞或多肽；及/或混合一種如本文所述之抗體、抗原結合片段、CAR、細胞或多肽，及一藥學上可接受的載劑、佐劑、賦形劑、或稀釋劑。

舉例而言，本發明另外的態樣係有關於一種調配或生產一藥劑或藥學組成物之方法，該藥劑或藥學組成物係供用於治療T細胞官能不良障礙，該方法包含藉由混合一種如本文所述之抗體、抗原結合片段、CAR、細胞或多肽，與一藥學上可接受的載劑、佐劑、賦形劑或稀釋劑，來調配一藥學組成物或藥劑。 感染

一種感染可以是任何的感染或感染疾病，例如細菌、病毒、真菌或是寄生蟲感染。於一些具體例中，可能特別希望治療慢性/持續性的感染，例如此等與T細胞官能不良或T細胞衰竭有關連的感染。

T細胞衰竭為許多慢性感染(包括病毒、細菌及寄生蟲)以及癌症的整個期間出現的T細胞官能不良狀態，是很明確的(WherryNature Immunology Vol.12, No.6, p492-499，2011年六月)。

一種感染或感染疾病可以為CTLA-4被向上調節之感染或感染疾病。

可以治療的細菌感染之實例包括由於下列之感染：芽胞桿菌屬物種(Bacillus spp. )、百日咳博德氏桿菌(Bordetella pertussis )、梭菌屬物種(Clostridium spp. )、棒狀桿菌屬物種(Corynebacterium spp. )、霍亂弧菌(Vibrio chloerae )、葡萄球菌屬物種(Staphylococcus spp. )、鏈球菌屬物種(Streptococcus spp. )、大腸桿菌屬(Escherichia )、克留氏菌屬(Klebsiella )、變形桿菌屬(Proteus )、耶氏桿菌屬(Yersinia )、伊文氏桿菌屬(Erwina )、沙門氏桿菌屬(Salmonella )、李氏菌屬物種(Listeria sp )、幽門螺旋桿菌(Helicobacter pylori )、分枝桿菌(mycobacteria) (諸如，結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis ))以及綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa )。舉例而言，細菌感染可以是敗血症或結核病。

Kirman等人之Infect Immun (1999) 67(8): 3786-3792描述CTLA-4阻斷會提升分枝桿菌感染誘發的免疫反應的能力，以及Rowe等人之Immunology (2008) 128: e471-e478描述T細胞對單核球增多性李氏菌(Listeria monocytogenes )感染的反應透過阻斷CTLA-4而增大。

可以治療的病毒感染之實例包括由於下列之感染：流行性感冒病毒、麻疹病毒、B型肝炎病毒(HBV)、C型肝炎病毒(HCV)、人類免疫不全病毒(HIV)、淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎病毒(LCMV)、單純疱疹病毒以及人類乳頭瘤病毒。

於HIV感染期間，CTLA-4之表現已經顯示為與病毒負荷量正相關，以及CTLA-4的阻斷已經顯示會恢復HIV-專一性CD4+ T細胞的增殖作用以及IFN-γ及IL-2的生產(Kaufmann等人之Nat Immunol (2007) 8:1246-1252)。CTLA-4的阻斷也會降低HIV-專一性CD8+ T細胞TGF-β及IL-10的生產，但是增高HIV-專一性CD8+ T細胞的IFN-γ生產製造(Elrefaei等人之PLoS One (2009) 4(12): e8194)。

慢性病毒感染，諸如由LCMV、HCV、HBV，以及HIV造成的該等，通常涉及躲避免疫廓清作用(immune clearance)機轉，例如抑制受體的表現增高。Schurich等人之(2011) 53(5): 1494-1503描述慢性HBV感染的病人之CD8 T細胞上CTLA-4之向上調節的表現，以及此情況與病毒負荷量相關。

可以治療的真菌感染之實例包括由於下列之感染：鏈隔孢菌屬物種(Alternaria sp )、麴菌屬物種(Aspergillus sp )、念珠菌屬物種(Candida sp )及組織漿菌屬物種(Histoplasma sp. )。真菌感染可以是真菌敗血症或組織漿菌病。T細胞衰竭於媒介真菌感染的重要性已經由諸如，Chang等人之Critical Care (2013) 17:R85，以及Lázár-Molnár等人之PNAS (2008) 105(7): 2658-2663所確立。

可以治療的寄生蟲感染之實例包括瘧原蟲(Plasmodium )物種的感染(諸如，惡性瘧原蟲(Plasmodium falciparum )、約氏瘧原蟲(Plasmodium yoeli )、卵形瘧原蟲(Plasmodium ovale )、間日瘧原蟲(Plasmodium vivax )，或是狨瘧蟲(Plasmodium chabaudi chabaudi )。寄生蟲感染可以為一疾病，諸如瘧疾、萊什曼病及弓蟲症。 癌症

一種癌症可以為任何不想要的細胞增殖(或其自身表現出不想要的細胞增殖之任何疾病)、贅生物或腫瘤，或是不想要的細胞增殖、贅生物或腫瘤的風險增高或是體質。癌症可能是良性或惡性的，以及可能為原發性或是繼發性(轉移的)。贅生物或是腫瘤可能為任何異常的細胞生長或增殖，以及可能位於任何的組織內。組織之實例包括腎上腺、腎上腺髓質、肛門、闌尾、膀胱、血液、骨骼、骨髓、腦、胸、盲腸、中樞神經系統(包括或是排除腦) 小腦、子宮頸、結腸、十二指腸、子宮內膜、上皮細胞(例如腎臟上皮)、膽囊、食道、神經膠細胞、心臟、迴腸、空腸、腎臟、淚腺(lacrimal glad)、喉、肝臟、肺臟、淋巴、淋巴結、淋巴母細胞、上頜骨、縱膈、腸繫膜、子宮肌層、鼻咽、網膜、口腔、卵巢、胰臟、腮腺、周邊神經系統、腹膜、胸膜、前列腺、唾腺、乙狀結腸、皮膚、小腸、軟組織、脾臟、胃、睪丸、胸腺、甲狀腺、舌、扁桃腺、氣管、子宮、女陰、白血球細胞。

於一些具體例中，可以治療的腫瘤可以為選自於下列組織所組成的群組之癌症：結腸、直腸、鼻咽、子宮頸、口咽、胃、肝臟、頭頸部、口腔、食道、唇、口、舌、扁桃腺、鼻、咽喉、唾腺、竇、咽、喉、前列腺、肺臟、膀胱、皮膚、腎臟、卵巢或中皮層。

要治療的腫瘤可以為神經或非神經系統腫瘤。神經系統腫瘤可以發源於中樞或周邊神經系統，例如神經膠質瘤、神經管胚細胞瘤、腦脊髓膜瘤、神經纖維瘤、室管膜瘤、神經鞘瘤、神經纖維肉瘤、星細胞瘤及寡樹突神經膠細胞瘤。非神經系統癌症/腫瘤可以發源於任何其他非神經組織，實例包括黑色素瘤、間皮瘤、淋巴瘤、骨髓瘤、白血病、非何杰金氏淋巴瘤(Non-Hodgkin's lymphoma) (NHL)、何杰金氏淋巴瘤(Hodgkin's lymphoma)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性骨髓白血病(AML)、骨髓發育不良症候群(myelodysplastic syndrome)(MDS)、皮膚T細胞淋巴瘤(CTCL)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、肝癌、表皮樣癌、前列腺癌、乳癌、肺癌、結腸癌、卵巢癌、胰臟癌、胸腺癌、NSCLC、血液癌症及肉瘤。

於特定的具體例中，要治療的癌症可以為前列腺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌或黑色素瘤(例如晚期黑色素瘤)。

於一些具體例中，要治療的癌症可以為結腸癌(colon cancer)、結腸癌(colon carcinoma)、結腸直腸癌、鼻咽癌、子宮頸癌、口咽癌、胃癌、肝細胞癌、頭頸部癌症、頭頸部鱗狀細胞癌(HNSCC)、口腔癌、喉癌、前列腺癌、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、泌尿上皮癌(urothelial carcinoma)、、黑色素瘤、晚期黑色素瘤、腎細胞癌、卵巢癌或間皮瘤。 授受性T細胞轉移療法

於本發明的具體例中，一種治療或預防(prophylaxis)的方法可以包含免疫細胞之授受性細胞轉移。授受性T細胞轉移療法一般而言係指從一主體移去白血球細胞的方法，典型地係透過抽取一血液樣本，由血液樣本分離白血球細胞，於活體外或擬體內(ex vivo )增生且返回相同的主體或不同的主體。治療典型目的在於增加主體內所欲的T細胞族群活化型的量/濃度。此等處理對經歷T細胞衰竭的主體可能是有益的。

能阻斷T細胞衰竭機轉或是使其逆轉之抗體，提供了一種提升T細胞活性及促進T細胞增生的手段。

針對免疫查核點受體(諸如CTLA-4)的抗體亦可用於T細胞增生之方法，例如用於增生特別感興趣的T細胞族群。舉例而言，抗體可用於T細胞增生之方法，其優先增生具有所欲特質的T細胞亞群(例如優先於具有非所欲特質的T細胞亞群)。

因此，於本發明另外的態樣中，提供一種用於增生一T細胞族群之方法，其中T細胞係於活體外或擬體內與如本發明之抗體、抗原結合片段、CAR、細胞或多肽接觸。

該方法可選擇性地包含一或更多下列步驟：從一主體採集一血液樣本；從該血液樣本單離T細胞；於活體外或擬體內細胞培養物內培養該T細胞(其等可於該處與該抗體、抗原結合片段、CAR、細胞或多肽接觸)，收集經增生的T細胞族群；混合該T細胞與一佐劑、稀釋劑或載劑；投與該經增生的T細胞至一主體。

因此，於本發明的一些態樣中，提供一種治療有T細胞官能不良障礙的主體之方法，該方法包含從需要治療的一主體獲得血液樣本，於如本發明之抗體、抗原結合片段、CAR、細胞或多肽存在下，培養得自於該血液樣本的T細胞，以便增生該T細胞族群，收集經增生的T細胞，以及投與該經增生的T細胞至需要治療的一主體。

T細胞可以從需要治療的一主體獲得，以及可以予以單離及/或純化。其等可以為一種CD4⁺ 及/或CD8⁺ T細胞族群。T細胞可以代表一種經歷T細胞衰竭的族群，以及可以選擇性地具有向上調節的CTLA-4表現。

在培養的期間，T細胞可以於適合允許T細胞增生至所欲的細胞數目之條件及時間期間，與該抗體、抗原結合片段、CAR、細胞或多肽接觸。於合適的時間期間之後，可以收穫T細胞，選擇性濃縮，以及可以與合適的載劑、佐劑或稀釋劑混合，且返回主體的身體。一主體可以進行此療法一輪或更多輪。

T細胞增生的方法為本技藝眾所周知的，諸如於以下所述的該等：Kalamasz等人，J Immunother 2004 Sep-Oct；27(5):405-18；Montes等人，Clin Exp Immunol 2005 Nov;142(2):292-302；Wӧlfl and GreenburgNature Protocols 9 p950-966，2014年三月27日；Trickett and KwanJournal of Immunological Methods Vol. 275, 第1-2期，2003年四月1日，p251-255；Butler等人之PLoSONE 7(1) 12 Jan 2012。

舉例而言，T細胞增生的方法可以包含刺激T細胞。刺激可以包含非專一性刺激，例如藉由抗-CD3/抗-CD28予以治療。T細胞的刺激可以包含專一性刺激，例如以(諸如例如，與抗原呈現細胞表現的MHC複合)的抗原予以治療。T細胞增生的方法可以包含於一種或更多種促進T細胞增殖/增生的因子存在下培養。舉例而言，T細胞增生的方法可以包含於IL-2存在下培養。

於本發明中，執行授受性細胞轉移(ACT)的目的可以是，將一細胞或細胞族群導入至一主體，及/或使一主體內一細胞或細胞族群的頻率增加。

授受性T細胞轉移舉例而言，係描述於Kalos and June 2013, Immunity 39(1): 49-60之內，其之整體內容藉此被併入以作為參考資料。NK細胞之授受性轉移舉例而言，係描述於Davis等人之2015, Cancer J. 21(6): 486–491之內，其之整體內容藉此被併入以作為參考資料。

細胞可以是諸如嗜中性球、嗜酸性球、嗜鹼性球、樹突細胞、淋巴球或單核球。淋巴球可以是諸如，T細胞、B細胞、NK細胞、NKT細胞或先天性淋巴細胞(ILC)，或是其之前驅物。於一些具體例中，細胞是T細胞。於一些具體例中，T細胞是CD3+ T細胞。於一些具體例中，T細胞是CD3+、CD8+ T細胞。於一些具體例中，T細胞是胞毒型T細胞(諸如胞毒型T淋巴球(CTL))。於一些具體例中，T細胞是病毒專一性T細胞。於一些具體例中，T細胞對EBV、HPV、HBV、HCV或HIV是專一的。

本發明提供一種治療或預防一主體內一疾病或病況的方法，該方法包含修飾得自一主體的至少一細胞以表現或包含如本發明之抗體、抗原結合片段、CAR、核酸或載體，選擇性地增生經修飾的至少一細胞，以及投與該經修飾的至少一細胞至一主體。

於一些具體例中，該方法包含： (a) 從一主體單離至少一細胞； (b) 修飾該至少一細胞以表現或包含如本發明之抗體、抗原結合片段、CAR、核酸或載體， (c) 選擇性地增生該經修飾的至少一細胞，以及； (d) 投與該經修飾的至少一細胞至一主體。

於一些具體例中，單離出細胞的主體為投與該經修飾細胞的主體(亦即，授受性轉移屬於自體細胞)。於一些具體例中，單離出細胞的主體與投與該經修飾細胞的主體是不同的主體(亦即，授受性轉移屬於同種異體的細胞)。

如本發明之至少一經修飾的細胞可依據熟悉此藝者眾所周知的方法予以修飾。修飾可以包含核酸轉換以永久性或暫時性的表現轉換的核酸。

於一些具體例中，該細胞可額外修飾成包含或表現一種嵌合抗原受體(CAR)，或編碼一CAR之核酸或載體。

可以使用任何合適的遺傳工程處理平台來修飾如本發明之細胞。合適的修飾細胞的方法包括使用例如下列的遺傳工程處理平台：γ反轉錄病毒載體、慢病毒(lentiviral)載體、腺病毒載體、DNA轉染、轉位子為基的基因遞送以及RNA轉染，舉例而言，如Maus等人，Annu Rev Immunol (2014) 32:189-225之內所述者，以上被併入以作為參考資料。

於一些具體例中，該方法可包含一或更多下列步驟：從一主體採集一血液樣本；從該血液樣本單離及/或增生至少一細胞；於活體外或擬體內細胞培養物內培養該至少一細胞；導入如發明之抗體、抗原結合片段、CAR、核酸或載體至該至少一細胞內，藉此修飾該至少一細胞；增生該至少一經修飾細胞；收集該至少一經修飾細胞；混合該經修飾細胞與一佐劑、稀釋劑或載劑；投與該經修飾細胞至一主體。

於一些具體例中，該方法可以額外包含治療該細胞以誘發/提升該抗體、抗原結合片段、CAR、核酸或載體的表現。舉例而言，該核酸/載體可以包含一控制元素用於對特定的製劑治療回應，而可誘發的向上調節來自該核酸/載體之該抗體、抗原結合片段或CAR的表現。於一些具體例中，治療可以藉由對已經投與如發明之經修飾細胞的主體，於活體內投與製劑來進行。於一些具體例中，治療可以藉由對擬體內或於活體外培養物內的細胞，於擬體內或於活體外投與製劑來進行。

熟習此項技術者能夠判定適合用於如本發明之細胞的授受性轉移之試劑及程序，舉例而言參照Dai等人，2016 J Nat Cancer Inst 108(7): djv439，其之整體內容被併入以作為參考資料。

於一相關態樣中，本發明提供一種製備一經修飾細胞的方法，該方法包含導入如發明之抗體、抗原結合片段、CAR、核酸或載體至一細胞內，藉此修飾該至少一細胞。該方法較佳於活體外或擬體內執行。

於一個態樣中，本發明提供一種治療或預防一主體之疾病或病況的方法，其包含： (a) 從一主體單離至少一細胞； (b) 導入如發明之核酸或載體至該至少一細胞內，藉此修飾該至少一細胞；以及 (c) 投與該經修飾的至少一細胞至一主體。

於一些具體例中，該細胞可額外修飾以導入一種編碼一嵌合抗原受體(CAR)之核酸或載體。

於一些具體例中，該方法額外包含治療或預防性介入，舉例而言用於治療或預防一癌症。於一些具體例中，該治療或預防性介入係選自於化學療法、免疫療法、放射療法、外科手術、疫苗接種及/或激素療法。 同時或相繼投與

組成物可以單獨投與或是組合以其他的治療同時或相繼投與，取決於待治療的病況。

於本說明書中，本發明之抗體、抗原結合片段、CAR、細胞或多肽以及抗感染製劑或化學治療劑(治療劑)可以同時或相繼投與。

於一些具體例中，本發明之抗體、抗原結合片段、CAR、細胞或多肽之治療可以伴隨著化學療法。

同時投與係指一起投與該抗體、抗原結合片段、CAR、細胞或多肽及治療劑，舉例而言作為一種含有二製劑的藥學組成物(組合製備)，或是彼此緊密相連地投與，以及選擇性地經由相同的投與途徑，例如至相同的動脈、靜脈或其他血管。

相繼投與係指投與該抗體、抗原結合片段、CAR、細胞或多肽或治療劑中之一者，接著於假定的時間間隔之後分開投與另一種製劑。二種製劑不需要以相同的途徑投與，雖然於一些具體例中是這種情況。時間間隔可以為任何的時間間隔。

PD-1/PD-L1途徑及CTLA-4阻斷之組合抑制也已顯示出會提供抗腫瘤功效–參見Wolchok等人之NEJM (2013)；369:122-133。因此，於一個態樣中，本發明提供如本發明之抗體、抗原結合片段、CAR、細胞或多肽供用於與PD-1/PD-L1途徑抑制劑之組合療法。

於一些具體例中，本發明提供連同PD-1、PD-L1或PD-1/PD-L1途徑之抑制劑的組合療法。於一些具體例中，該抑制劑為能抑制或防止PD-1與PD-L1之間的交互作用所媒介之發送訊息的一種製劑。於一些具體例中，該抑制劑為能向下調節PD-1及/或PD-L1的基因或蛋白表現之製劑。於一些具體例中，該抑制劑為一種能抑制或防止PD-1與PD-L1之間結合之製劑。於一些具體例中，該抑制劑為一種抗體。於一些具體例中，該抑制劑為一種能與PD-1結合的抗體。於一些具體例中，該抑制劑為一種能與PD-L1結合的抗體。該抗體可以為一種拮抗劑抗體或阻斷抗體。PD-1、PD-L1或PD-1/PD-L1途徑之抑制劑為熟悉此藝者眾所周知的，以及包括舉例而言，納武單抗(nivolumab)、聯合利妥昔單抗(pidilizumab)、BMS 936559、MPDL328oA、派姆單抗(pembrolizumab)及阿維魯單抗(avelumab)。依據本發明預期供使用的PD-1/PDL-1抑制劑包括Sunshine and Taube “PD-1/PD-L1 inhibitors”, Curr. Opin. Pharmacol. 2015, 23:32-38之內所述的該等，其之整體內容藉此被併入以作為參考資料。 抗感染製劑

於治療感染方面，一種本發明之抗體、抗原結合片段、CAR、細胞或多肽可以組合以一抗感染製劑來投與，如上所述。抗感染製劑可以為一種已知對於感染有責任的微生物或病毒有作用的製劑。

合適的抗感染製劑包括抗生素(諸如青黴素、頭孢菌素(cephalosporins)、利福黴素(rifamycin)、閏年黴素(lipiarmycins)、喹諾酮(quinolone)、磺胺(sulfonamides)、大環內酯(macrolides)、林可胺類(lincosamides)、四環黴素、環狀脂肽(cyclic lipopeptides)、甘胺醯環素(glycylcyclines)、噁唑烷酮(oxazolidinones)及閏年黴素(lipiarmycins))、抗病毒劑(諸如反轉錄酶抑制劑、整合酶抑制劑(integrase inhibitors)、轉錄因子抑制劑、反義及siRNA製劑及蛋白酶抑制劑)、抗真菌劑(諸如多烯、咪唑(imidiazoles)、三唑(triazoles)、噻唑(thiazoles)、烯丙胺及棘白菌素(echinocandins))，以及抗寄生蟲劑(諸如抗線蟲劑、抗絛蟲劑、抗吸蟲劑、抗阿米巴劑及抗原蟲劑)。 化學療法

化學療法係指用一種藥物或游離輻射(諸如，利用X射線或γ射線之放射療法)來治療一癌症。於較佳的具體例中，化學療法係指用一種藥物之治療。藥物可以為一化學實體，例如小分子藥品、抗生素、DNA嵌入劑、蛋白抑制劑(諸如激酶抑制劑)，或是一生物製劑，例如抗體、抗體片段、核酸或胜肽適配體、核酸(諸如DNA、RNA)、胜肽、多肽，或是蛋白。藥物可以調配成一藥學組成物或藥劑。調配物可以包含一種或更多種藥物(諸如一種或更多種活性製劑)連同一藥學上可接受的稀釋劑、賦形劑或載劑。

一種治療可以涉及超過一種藥物的投與。一種藥物可以單獨投與或組合以其他的治療同時或相繼投與，取決於待治療的病況。舉例而言，化學療法可以為涉及投與二種藥物的共療法，其等之一者或更多者可以是打算要治療癌症者。

化學療法可以藉由一種或更多種投與途徑予以投與，例如非經腸、靜脈內注射、口腔、皮下、皮內或腫瘤內。

化學療法可以依據一種治療攝生法(regime)來投與。治療攝生法可以是預定的化學療法投與之時刻表、計畫、方案或時間表，其可由醫師或開業醫生予以製備，以及可以修改以適合需要治療的病人。

治療攝生法可以表示下列之一者或更多者：病人被投與的化學療法類型；各藥物或放射線的劑量；投與之間的時間間隔；各治療的長度；任何治療假期(treatment holiday)，設若有，的數目及本質等等。於共療法方面，可以提供指示出各藥物如何被投與之單一治療攝生法。

化學治療藥物及生物製品可以選自於：烷化劑，例如順鉑(cisplatin)、卡鉑(carboplatin)、甲基二(氯乙基)胺(mechlorethamine)、環磷醯胺(cyclophosphamide)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、異環磷醯胺(ifosfamide)；嘌呤或嘧啶抗代謝劑，例如硫唑嘌呤(azathiopurine)或巰嘌呤(mercaptopurine)；生物鹼(alkaloid)及萜類，諸如長春花生物鹼(vinca alkaloid)(諸如長春新鹼(vincristine)、長春鹼(vinblastine)、長春瑞賓(vinorelbine)、長春地辛(vindesine))、鬼臼毒素(podophyllotoxin)、依託泊苷(etoposide)、替尼泊苷(teniposide)、紫杉烷(taxanes)諸如紫杉醇(paclitaxel)(紫杉醇^TM (Taxol^TM ))、多烯紫杉醇(docetaxel)；拓撲異構酶抑制劑，諸如第I型拓撲異構酶抑制劑喜樹鹼(camptothecin)伊立替康(irinotecan)及拓撲替康(topotecan)，或是第II型拓撲異構酶抑制劑安吖啶(amsacrine)、依託泊苷(etoposide)、依託泊苷磷酸鹽(etoposide phosphate)、替尼泊苷(teniposide)；抗腫瘤抗生素(諸如蒽環類(anthracyline)抗生素)，諸如放線菌素(dactinomycin)、多柔比星(doxorubicin)、阿德力黴素^TM (Adriamycin^TM ))、表柔比星(epirubicin)、博萊黴素(bleomycin)、雷帕黴素(rapamycin)；抗體基的製劑，諸如抗-PD-1抗體、抗-PD-L1抗體、抗-TIM-3抗體、抗-CTLA-4、抗-4-1BB、抗-GITR、抗-CD27、抗-BLTA、抗-OX43、抗-VEGF、抗-TNFα、抗-IL-2、抗GpIIb/IIIa、抗-CD-52、抗-CD20、抗-RSV、抗-HER2/neu(erbB2)、抗-TNF受體、抗-EGFR抗體、單株抗體或抗原片段實例包括：西妥昔單抗(cetuximab)、帕尼單抗(panitumumab)、英夫利昔單抗(infliximab)、巴利昔單抗(basiliximab)、貝伐單抗(bevacizumab)(癌思停®(Avastin®))、阿昔單抗(abciximab)、達利珠單抗(daclizumab)、吉妥珠單抗(gemtuzumab)、阿來組單抗(alemtuzumab)、利妥昔單抗(rituximab) (莫須瘤®(Mabthera®))、帕利珠單抗(palivizumab)、曲妥珠單抗(trastuzumab)、依那西普(etanercept)、阿達木單抗(adalimumab)、尼妥珠單抗(nimotuzumab)；EGFR抑制劑諸如厄洛替尼(erlotinib)、西妥昔單抗(cetuximab)及吉菲替尼(gefitinib)；抗血管生成劑，諸如貝伐單抗(bevacizumab) (癌思停®(Avastin®))；癌症疫苗諸如西普魯塞-T(Sipuleucel-T)(普羅文奇®(Provenge®))。

於一個具體例中，化學治療劑為一種抗-PD-1抗體、抗-PD-L1抗體、抗-TIM-3抗體、抗-LAG-3、抗-41BB、抗-GITR、抗-CD27、抗-BLTA、抗-OX43、抗-VEGF、抗-TNFα、抗-IL2、抗-GpIIb/IIIa、抗-CD-52、抗-CD20、抗-RSV、抗-HER2/neu(erbB2)、抗-TNF受體、抗-EGFR或其他的抗體。於一些具體例中，化學治療劑為一種免疫查核點抑制劑或共刺激分子。

另外的化學治療藥物可以選自於：13-順維他命A酸(13-cis-Retinoic Acid)、2-氯去氧腺苷(2-Chlorodeoxyadenosine)、5-阿扎胞苷5-氟尿嘧啶(5-Azacitidine 5-Fluorouracil)、6-巰嘌呤(6-Mercaptopurine)、6-硫鳥嘌呤(6-Thioguanine)、亞伯杉(Abraxane)、阿古泰因®(Accutane®)、放線菌素-D(Actinomycin-D)阿德力黴素®(Adriamycin®)、阿祖西®(Adrucil®)、癌伏妥®(Afinitor®)、安閣靈®(Agrylin®)、來可得®(Ala-Cort®)、阿地白介素(Aldesleukin)、阿來組單抗(Alemtuzumab)、愛寧達(ALIMTA)、阿利維A酸(Alitretinoin)、硫酸長春花鹼(Alkaban-AQ®)、威克瘤®(Alkeran®)、全反維他命A酸(All-transretinoic Acid)、α干擾素、六甲蜜胺(Altretamine)、胺甲喋呤(Amethopterin)、氨磷汀(Amifostine)、胺麩精(Aminoglutethimide)、安閣靈(Anagrelide)、尼魯米特®(Anandron®)、阿那曲唑(Anastrozole)、阿拉伯糖基胞嘧啶(Arabinosylcytosine)、耐血比®(Aranesp®)、雷狄亞®(Aredia®)、安美達®(Arimidex®)、諾曼癌素®(Aromasin®)、阿倫恩®(Arranon®)、三氧化二砷、天冬醯胺酸酶、ATRA癌思停®(ATRA Avastin®)、阿扎胞苷(Azacitidine)、BCG、BCNU、苯達莫司汀(Bendamustine)、貝伐單抗(Bevacizumab)、貝沙羅汀(Bexarotene)、BEXXAR®、比卡魯胺(Bicalutamide)、BiCNU、撲類惡®(Blenoxane®)、博萊黴素(Bleomycin)、波替單抗(Bortezomib)、硫酸布他卡因(Busulfan)、補束剋®(Busulfex®)、甲醯四氫葉酸鈣(Calcium Leucovorin)、坎帕斯®(Campath®)、開普拓®(Camptosar®)、喜樹鹼-11(Camptothecin-11)、卡培他濱(Capecitabine)、Carac™、卡鉑(Carboplatin)、雙氯乙基亞硝脲(Carmustine)、可蘇多®(Casodex®)、CC-5013、CCI-779、CCNU、CDDP、CeeNU、司比定®(Cerubidine®)、西妥昔單抗(Cetuximab)、苯丁酸氮芥(Chlorambucil)、順鉑(Cisplatin)、醛葉酸(Citrovorum Factor)、克拉屈濱(Cladribine)、皮質酮(Cortisone)、可美淨®(Cosmegen®)、CPT-11、環磷醯胺(Cyclophosphamide)、氨魯米特®(Cytadren®)、阿糖胞苷賽德薩-U®(Cytarabine Cytosar-U®)、環磷醯胺®(Cytoxan®)、達克金(Dacogen)、放線菌素(Dactinomycin)、α達貝泊汀(Darbepoetin Alfa)、達沙替尼(Dasatinib)、道諾黴素(Daunomycin)、道諾黴素(Daunorubicin)、道諾黴素鹽酸鹽(Daunorubicin Hydrochloride)、道諾黴素脂質體(Daunorubicin Liposomal)、多柔比星脂質體®(DaunoXome®)、的確當(Decadron)、地西他濱(Decitabine)、達美固體膚®(Delta-Cortef®)、去氫可的松®(Deltasone®)、地尼白介素(Denileukin，Diftitox)、阿拉伯糖苷胞嘧啶脂質體™(DepoCyt™)、地塞米松(Dexamethasone)、地塞米松醋酸鹽(Dexamethasone Acetate)、地塞米松磷酸鈉(Dexamethasone Sodium Phosphate)、克僂強(Dexasone)、右雷佐生(Dexrazoxane)、DHAD、DIC、地塞米松(Diodex)、多烯紫杉醇(Docetaxel)、多柔比星脂質體®(Doxil®)、多柔比星(Doxorubicin)、多柔比星脂質體(Doxorubicin Liposomal)、羥基脲™(Droxia™)、DTIC、DTIC-Dome®、史耐輝®(Duralone®)、癌立佳™(Eligard™)、艾倫斯™(Ellence™)、益樂鉑™(Eloxatin™)、天冬醯胺酸酶®(Elspar®)、依立適®(Emcyt®)、表柔比星(Epirubicin)、阿法依伯汀(Epoetin Alfa)、愛必妥(Erbitux)、厄洛替尼(Erlotinib)、伊文氏桿菌L-天冬醯胺酸酶(Erwinia L-asparaginase)、雌莫司汀(Estramustine)、依託泊苷乙醇(Ethyol Etopophos®)、依託泊苷(Etoposide)、依託泊苷磷酸鹽(Etoposide Phosphate)、氟他胺®(Eulexin®)、依維莫司(Everolimus)、鈣穩®(Evista®)、依西美坦(Exemestane)、法洛德®(Faslodex®)、復乳納®(Femara®)、惠爾血添(Filgrastim)、氟尿苷(Floxuridine)、福達樂®(Fludara®)、氟達拉濱(Fludarabine)、氟尿嘧啶®(Fluoroplex®)、氟尿嘧啶(Fluorouracil)、氟羥甲基睪酮、氟他胺(Flutamide)、醛葉酸(Folinic Acid)、FUDR®、氟维司群(Fulvestrant)、吉菲替尼(Gefitinib)、吉西他汀(Gemcitabine)、吉妥珠單抗奥唑米星(Gemtuzumab ozogamicin)、格列衛™(Gleevec™)、格立得植入劑®(Gliadel® Wafer)、戈舍瑞林(Goserelin)、顆粒性白血球群落刺激因子、顆粒性白血球巨噬細胞群落刺激因子、賀癌平®(Herceptin®)、地塞米松(Hexadrol)、克瘤靈®(Hexalen®)、六甲蜜胺(Hexamethylmelamine)、HMM、癌康定®(Hycamtin®)、羥基脲®(Hydrea®)、醋酸氫皮質酮®(Hydrocort Acetate®)、氫皮質酮、氫皮質酮磷酸鈉、丁二酸鈉氫皮質酮、氫可酮磷酸鹽(Hydrocortone Phosphate)、羥基脲(Hydroxyurea)、替伊莫單抗(Ibritumomab)、替伊莫單抗(Ibritumomab Tiuxetan)、伊達比星®(Idamycin®)、伊達比星(Idarubicin)、異環磷醯胺®(Ifex®)、IFN-α、異環磷醯胺(Ifosfamide)、IL-11、IL-2、甲磺酸伊馬替尼(Imatinib mesylate)、咪唑甲醯胺(Imidazole Carboxamide)、α干擾素、α-2b干擾素(PEG綴合物)、介白素-2、介白素-11、因治隆®(Intron A®)(α-2b干擾素)、艾瑞莎®(Iressa®)、伊立替康(irinotecan)、異視網酸(Isotretinoin)、伊沙匹隆(Ixabepilone)、易莎平™(Ixempra™)、天冬醯胺酸酶(Kidrolase)、醋酸氫皮質酮®(Lanacort®)、拉帕替尼(Lapatinib)、L-天冬醯胺酸酶(L-asparaginase)、LCR、雷利度胺(Lenalidomide)、來曲唑(Letrozole)、甲醯四氫葉酸(Leucovorin)、瘤克寧(Leukeran)、白胺酸™(Leukine™)、亮丙瑞林(Leuprolide)、長春新鹼(Leurocristine)、祿斯得停™(Leustatin™)、Ara-C脂質體(Liposomal Ara-C)、強體松®(Liquid Pred®)、洛莫司汀(Lomustine)、L-PAM、L-溶肉瘤素(L-Sarcolysin)、柳菩林®(Lupron®)、柳菩林持續性藥效皮下注射劑®(Lupron Depot®)、甲基苄肼®(Matulane®)、目滴(Maxidex)、甲基二(氯乙基)胺(Mechlorethamine)、甲基二(氯乙基)胺鹽酸鹽(Mechlorethamine Hydrochloride)、甲基潑尼松龍®(Medralone®)、美卓佑®(Medrol®)、滅惡速®(Megace®)、甲地孕酮(Megestrol)、醋酸甲地孕酮Megestrol Acetate)、黴法蘭(Melphalan)、巰嘌呤(Mercaptopurine)、美司鈉(Mesna)、美司鈉™(Mesnex™)、胺甲喋呤(Methotrexate)、胺甲喋呤鈉(Methotrexate Sodium)、甲基普賴蘇濃(Methylprednisolone)、潑尼松®(Meticorten®)、絲裂黴素(Mitomycin)、絲裂黴素-C(Mitomycin-C)、雙羥蒽醌(Mitoxantrone)、M-潑尼松龍®(M-Prednisol®)、MTC、MTX、氮芥®(Mustargen®)、氮芥(Mustine)、排多癌®(Mutamycin®)、邁樂寧®(Myleran®)、Mylocel™、麥羅塔®(Mylotarg®)、溫諾平®(Navelbine®)、奈拉濱(Nelarabine)、環磷醯胺®(Neosar®)、倍血添™(Neulasta™)、奥普瑞白介素®(Neumega®)、優保津®(Neupogen®)、蕾莎瓦®(Nexavar®)、尼魯米特®(Nilandron®)、尼魯米特(Nilutamide)、噴司他丁(Nipent®)、氮芥子氣(Nitrogen Mustard)、諾瓦得士®(Novaldex®)、諾安托®(Novantrone®)、體抑素胜(Octreotide)、醋酸奥曲肽(Octreotide acetate)、左旋天冬醯胺酸酶®(Oncospar®)、安可平®(Oncovin®)、地尼白介素-2®(Ontak®)、紫杉醇™(Onxal™)、奥普瑞白介素(Oprevelkin)、潑尼松龍®(Orapred®)、潑尼松龍®(Orasone®)、奥沙利鉑(Oxaliplatin)、紫杉醇(Paclitaxel)、蛋白結合的紫杉醇(Paclitaxel Protein-bound)、帕米膦酸(Pamidronate)、帕尼單抗(Panitumumab)、阿利維A酸®(Panretin®)、伯爾定®(Paraplatin®)、氫化潑尼松®(Pediapred®)、PEG干擾素、培門冬酶(Pegaspargase)、培非格司亭(Pegfilgrastim)、派樂能™(PEG-INTRON™)、PEG-L-天冬醯胺酸酶、PEMETREXED、噴司他丁(Pentostatin)、苯丙胺酸氮芥(Phenylalanine Mustard)、普拉汀諾®(Platinol®)、普拉汀諾-AQ®(Platinol-AQ®)、普賴蘇濃(Prednisolone)、強體松(Prednisone)、潑尼松龍®(Prelone®)、丙卡巴肼(Procarbazine)、PROCRIT®、普留淨®(Proleukin®)、Prolifeprospan 20及雙氯乙基亞硝脲植入劑巰基嘌呤®(Prolifeprospan 20 with Carmustine Implant Purinethol®)、雷洛昔芬(Raloxifene)、瑞復美®(Revlimid®)、胺甲喋呤®(Rheumatrex®)、利妥昔單抗®(Rituxan®)、利妥昔單抗(Rituximab)、羅飛龍-A®(Roferon-A®)(α-2b干擾素)、魯貝克®(Rubex®)、紅比黴素鹽酸鹽(Rubidomycin hydrochloride)、善得定®善得定LAR®(Sandostatin® Sandostatin LAR®)、沙格司亭(Sargramostim)、舒汝固體膚®(Solu-Cortef®)、舒汝美卓佑®(Solu-Medrol®)、索拉非尼(Sorafenib)、柏萊™(SPRYCEL™)、STI-571、鏈佐黴素(Streptozocin)、SU11248、舒尼替尼(Sunitinib)、紓癌特®(Sutent®)、泰莫西芬(Tamoxifen)、得舒緩®(Tarceva®)、塔革雷汀®(Targretin®)、紫杉醇®(Taxol®)、剋癌易®(Taxotere®)、泰道®(Temodar®)、替莫唑胺(Temozolomide)、坦羅莫司(Temsirolimus)、替尼泊苷(Teniposide)、TESPA、沙利竇邁(Thalidomide)、沙利度胺®(Thalomid®)、TheraCys®、硫鳥嘌呤(Thioguanine)、硫鳥嘌呤硫鳥嘌呤®(Thioguanine Tabloid®)、乙硫磷胺(Thiophosphoamide)、塞替派®(Thioplex®)、塞替派(Thiotepa)、TICE®、依托泊苷®(Toposar®)、托普迪肯(Topotecan)、托瑞米芬(Toremifene)、特癌適®(Torisel®)、托西莫單抗(Tositumomab)、曲妥珠單抗(Trastuzumab)、普癌汰®(Treanda®)、視網酸(Tretinoin)、胺甲喋呤™(Trexall™)、萃克森®(Trisenox®)、TSPA、泰嘉錠® (TYKERB®)、VCR、維必施™(Vectibix™)、長春鹼®(Velban®)、萬科®(Velcade®)、滅必治®(VePesid®)、凡善能®(Vesanoid®)、醋酸亮丙瑞林植入劑®(Viadur™)、委丹扎®(Vidaza®)、長春鹼(Vinblastine)、長春鹼硫酸鹽(Vinblastine Sulfate)、硫酸長春新鹼注射劑®(Vincasar Pfs®)、長春新鹼(Vincristine)、長春瑞賓(Vinorelbine)、長春瑞賓酒石酸鹽(vinorelbine tartrate)、VLB、VM-26、伏立諾他(Vorinostat)、VP-16、威孟®(Vumon®)、截瘤達®(Xeloda®)、鏈佐星®(Zanosar®)、澤娃靈™ (Zevalin™)、右雷佐生®(Zinecard®)、諾雷德®(Zoladex®)、唑來磷酸(Zoledronic acid)、伏立諾他®(Zolinza)、卓骨祂®(Zometa®)。 投與途徑

如本發明的態樣之抗體、抗原結合片段、CAR、細胞、多肽及其他的治療劑、藥劑及藥學組成物，可以予以調配供一些途徑投與，投與途徑包括但不限於：非經腸、靜脈內、動脈內、肌肉內、皮下的、皮內、腫瘤內以及口腔。抗體、抗原結合片段、CAR、細胞、多肽及其他的治療劑可以調配呈流體或固體形式。流體調配物可以予以調配供注射投與至人類或動物體之選擇部位。 劑量攝生法

可以提供多重劑量的抗體、抗原結合片段、CAR、細胞或多肽。一或更多劑量或是各劑量可以伴隨著另一種治療劑之同時或相繼投與。

多重的劑量可以相隔預定的時間間隔，時間間隔可以選擇自於下列中之一者：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30，或31天，或是1、2、3、4、5，或是6個月。作為舉例，可以每7、14、21或28天(加或減3、2或是1天)給予劑量一次。 套組

於本發明的一些態樣中，提供一種部件之套組(a kit of parts)。於一些具體例中，該套組具有至少一容器，其具有預定量之抗體、抗原結合片段、CAR、細胞或多肽。該套組可以提供一藥劑或藥學組成物形式之抗體、抗原結合片段、CAR、細胞或多肽，以及可以將投與使用說明一起提供給病人俾以治療一種特定的疾病或病況。可以調配抗體、抗原結合片段、CAR、細胞或多肽以便合適於注射或灌注(infusion)至腫瘤或血液。

於一些具體例中，該套組可以進一步包含至少一容器，其具有預定量之另一種治療劑(諸如，抗感染製劑或化療劑)。於此等具體例中，該套組亦可以包含第二藥劑或藥學組成物，以使得二藥劑或藥學組成物可以同時或分別投與，以便使得其等提供一種用於該特定的疾病或病況之組合治療。亦可以調配治療劑以便合適於注射或灌注至腫瘤或血液。 主體

待治療的主體可以為任何動物或人類。主體較佳為哺乳動物，更佳為人類。主體可以為一非人類哺乳動物，但更佳為人類。主體可以為雄性或雌性。主體可以為一病人。一主體可以已經診斷有需要治療的疾病或病況，或懷疑具有此一疾病或病況。 蛋白表現

合適用於細胞內生產如本發明之多肽的分子生物學技術為本技藝眾所周知的，諸如於Sambrook等人，Molecular Cloning: A Laboratory Manual, New York: Cold Spring Harbor Press, 1989，內闡述的該等。

可以從一核苷酸序列來表現多肽。核苷酸序列可以被包含於細胞內存在的載體之內，或是可以合併至細胞之基因組內。

當使用於本文中，一種“載體”為一種寡核苷酸分子(DNA或RNA)使用作為將外源性遺傳材料轉移至一細胞內的媒介物(vehicle)。載體可以為一表現載體用於表現遺傳材料於細胞內。此載體可以包括一種啟動子序列，其可操縱地鏈接至編碼待表現的基因序列之核苷酸序列。一種載體亦可以包括一終止密碼子及表現增強子。本技藝已知的任何合適的載體、啟動子、增強子及終止密碼子均可以用於從本發明之載體來表現多肽。合適的載體包括質體、二元載體、病毒載體以及人工染色體(諸如，酵母人工染色體)。

於本說明書中，術語“可操縱地鏈接”可以包括一選擇的核苷酸序列及調節性核苷酸序列(諸如，啟動子及/或增強子)共價鍵聯的情況，以這樣的方式以使核苷酸序列表現處於調節序列的影響或控制之下(藉此形成一表現匣)。因而，設若一種調節序列能夠影響核苷酸序列的轉錄，則該調節序列係可操縱地鏈接至選擇的核苷酸序列。在適當情況下，形成的轉錄本繼而可以轉譯成所欲的蛋白或多肽。

可以使用合適多肽表現的任何細胞來生產如本發明之胜肽。細胞可以為一種原核細胞或真核細胞。合適的原核細胞包括大腸桿菌。真核細胞之實例包括酵母細胞、植物細胞、昆蟲細胞或哺乳動物細胞。於一些情況中，細胞不是原核細胞，因為一些原核細胞不允許如真核細胞一般的轉譯後修飾。此外，真核細胞可能有非常高的表現水平，以及能使用適當的標籤容易地從真核細胞純化蛋白。亦可以使用會提升蛋白分泌至培養基內的特異性質體。

生產感興趣的多肽的方法可以涉及一種經修飾以表現該多肽的細胞之培養或發酵。培養或發酵可以於一生物反應器內執行，該生物反應器提供適當的營養、空氣/氧及/或生長因子之供應。透過分區培養培養基/發酵肉湯、萃取蛋白內含物，以及分離個別的蛋白以單離分泌的多肽，而可從細胞收集分泌的蛋白。培養、發酵及分離的技術為熟悉此藝者眾所周知的。

生物反應器包括一種或更多種可以培養細胞的器皿。生物反應器內之培養可以連續發生，伴隨連續的反應物流進入反應器內，以及連續的培養細胞流離開反應器。任擇地，培養可以分批發生。監視及控制生物反應器之環境條件，諸如器皿內之pH、氧、進入及離開的流動速率，以及擾動，以便提供給要培養的細胞最佳的條件。

培養表現感興趣的多肽之細胞後，該種多肽較佳為經單離的。可以使用本技藝已知從細胞培養物分離多肽/蛋白之任何合適的方法。為了從培養物單離感興趣的多肽/蛋白，可能必須先從含有感興趣的多肽/蛋白之培養基分離培養的細胞。設若感興趣的多肽/蛋白係從細胞分泌，則可以藉由離心而使細胞與含有分泌的多肽/蛋白之培養基分離。設若興趣的多肽/蛋白集合於細胞內，離心之前使細胞破裂將是必要的，舉例而言使用超音波處理、快速的凍融或滲透溶解。離心將產生含有培養細胞或是培養細胞之細胞碎片之小丸，以及含有培養基及感興趣的多肽/蛋白之上清液。

繼而可能希望從上清液或培養基單離感興趣的多肽/蛋白，上清液或培養基可能含有其他的蛋白及非蛋白組份。從上清液或培養基分離多肽/蛋白組份的一般做法係透過沉澱。不同溶解度的多肽/蛋白係於不同濃度的沉澱劑，諸如硫酸銨，之下沉澱。舉例而言，於低濃度的沉澱劑下，萃取出水溶性蛋白。因而，透過添加漸增濃度的沉澱劑，可以區分出不同溶解度的蛋白。隨後可以使用透析以從分離的蛋白移除硫酸銨。

其他區分不同的多肽/蛋白的方法為本技藝已知的，舉例而言離子交換層析法及粒徑層析法(size chromatography)。此等方法可以使用作為沉澱之替代方案，或是可以於沉澱後執行。

一旦感興趣的多肽/蛋白已經自培養物單離，可能需要使蛋白濃縮。一些濃縮感興趣的蛋白的方法為本技藝已知的，諸如超過濾或冷凍乾燥法。 序列同一性

判定胺基酸或核苷酸序列同一性百分比之排列比對的目的可以以熟悉此藝者已知的各種方式來完成，舉例而言使用可公開取得的電腦軟體，諸如ClustalW 1.82. T-coffee或Megalign(DNASTAR)軟體。當使用此軟體時，較佳使用預設參數，例如空格(gap)罰分或擴展罰分。ClustalW 1.82之預設參數為：蛋白開放空格罰分(Protein Gap Open Penalty) = 10.0，蛋白空格擴展罰分= 0.2，蛋白矩陣(Protein matrix) = Gonnet，蛋白/DNA ENDGAP = -1，蛋白/DNA GAPDIST = 4。

本發明包括所述之態樣與較佳特徵之組合，但是明確不允許或明確避免的這樣的組合被排除。

本文中使用之節標題係僅僅為了編制的目的以及不被解釋為限制所說明的主題。

本發明的態樣及具體例現在將參照附圖予以闡釋，以作為例證。進一步的態樣與具體例對於本技藝中具有技術者會是明顯的。本文中提及的全部文件係併入本文中以作為參考資料。

貫穿本說明，包括隨後的申請專利範圍，除非上下文另外要求，否則會瞭解到用字「包含(comprise)」及變體，例如「包含(comprises)」及「包含(comprising)」，是暗示含括所述的事物或步驟或是事物或步驟組，但是不排除任何其他的事物或步驟或是事物或步驟組。

必須注意到，當使用於本說明書及隨附的申請專利範圍中，除非上下文另外明確指定，否則單數形式「一(a)」、「一(an)」，以及「該」包括複數的指示對象。於本文中範圍可以表達為由「大約」一特定的數值及/或至「大約」另一特定的數值。當表達此一範圍時，另一具體例會包括由該一特定的數值及/或至其他的特定數值。同樣地，當用先行詞「大約」、以近似值表達數值時，會瞭解到該特定的數值構成另一具體例。

下列編號的段落(paras)說明本發明的特定態樣及具體例：

1. 一種治療癌症的方法，其包含投與一抗體或抗原結合片段至罹患一癌症的一病人，其中該抗體或抗原結合片段與CTLA-4結合，且包含： 合併有下列CDRs的至少一輕鏈可變異區域： LC-CDR1：RATQGISSWLA(序列辨識編號：5) LC-CDR2：AASSLQS (序列辨識編號：6) LC-CDR3：QQANTLPLFT(序列辨識編號：7)；以及 合併有下列CDRs的至少一重鏈可變異區域： HC-CDR1：SNTAAWN (序列辨識編號：8) HC-CDR2：RTYYRSKWYSDYGLSVKS(序列辨識編號：9) HC-CDR3：EGSGGTLIY (序列辨識編號：10)。

2. 段落1的方法，其中該抗體或抗原結合片段包含一重鏈可變異區域序列，其與序列辨識編號：3或4之胺基酸序列有至少85%的序列同一性，以及一輕鏈可變異區域序列，其與序列辨識編號：1或2之胺基酸序列有至少85%的序列同一性。

3. 段落1的方法，其中該抗體或抗原結合片段包含一重鏈可變異區域，其包含序列辨識編號：3或4之胺基酸序列，以及一輕鏈可變異區域，其包含序列辨識編號：1或2之胺基酸序列。

4. 段落1的方法，其中該癌症為選自於下列組織所組成的群組之癌症：結腸、直腸、鼻咽、子宮頸、口咽、胃、肝臟、頭頸部、口腔、食道、唇、口、舌、扁桃腺、鼻、咽喉、唾腺、竇、咽、喉、前列腺、肺臟、膀胱、皮膚、腎臟、卵巢或中皮層，或者其中該癌症係選自於下列所組成的群組：結腸癌(colon cancer)、結腸癌(colon carcinoma)、結腸直腸癌、鼻咽癌、子宮頸癌、口咽癌、胃癌、肝細胞癌、頭頸部癌症、頭頸部鱗狀細胞癌(HNSCC)、口腔癌、喉癌、前列腺癌、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、泌尿上皮癌、黑色素瘤、晚期黑色素瘤、腎細胞癌、卵巢癌及間皮瘤。

5. 段落1的方法，其中該抗體或抗原結合片段之投與方式為靜脈內。

6. 段落1的方法，其中該抗體包含一種人類恆定區域，其係選自於IgG1、IgG2、IgG3及IgG4。

7. 段落1的方法，其中該抗原結合片段為Fab片段或scFv片段。

8. 段落1的方法，其中該抗原結合片段包含一種嵌合抗原受體(CAR)。

9.一種治療癌症的方法，其包含投與一抗體或抗原結合片段至罹患一癌症的一病人，其中該抗體或抗原結合片段與CTLA-4結合，且包含： 重鏈可變異區域，其包含序列辨識編號：3或4之胺基酸序列，以及 輕鏈可變異區域，其包含序列辨識編號：1或2之胺基酸序列。

10. 段落9的方法，其中該癌症為選自於下列組織所組成的群組之癌症：結腸、直腸、鼻咽、子宮頸、口咽、胃、肝臟、頭頸部、口腔、食道、唇、口、舌、扁桃腺、鼻、咽喉、唾腺、竇、咽、喉、前列腺、肺臟、膀胱、皮膚、腎臟、卵巢或中皮層，或者其中該癌症係選自於下列所組成的群組：結腸癌(colon cancer)、結腸癌(colon carcinoma)、結腸直腸癌、鼻咽癌、子宮頸癌、口咽癌、胃癌、肝細胞癌、頭頸部癌症、頭頸部鱗狀細胞癌(HNSCC)、口腔癌、喉癌、前列腺癌、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、泌尿上皮癌、黑色素瘤、晚期黑色素瘤、腎細胞癌、卵巢癌及間皮瘤。

11.段落9的方法，其中該抗體或抗原結合片段之投與方式為靜脈內。

12.段落9的方法，其中該抗體包含一種人類恆定區域，其係選自於IgG1、IgG2、IgG3及IgG4。

13.段落9的方法，其中該抗原結合片段為Fab片段或scFv片段。

14. 段落9的方法，其中該抗原結合片段包含一種嵌合抗原受體(CAR)。

15. 一種治療一主體的癌症之方法，該方法包含： 於結合CTLA-4之抗體或抗原結合片段存在下，培養從來自有癌症的主體之血液樣本得到的T細胞，以增生T細胞族群；以及 投與該經增生的T細胞至該主體； 其中結合CTLA-4之該抗體或抗原結合片段包含： 合併有下列的CDRs的至少一輕鏈可變異區域： LC-CDR1：RATQGISSWLA (序列辨識編號：5) LC-CDR2：AASSLQS (序列辨識編號：6) LC-CDR3：QQANTLPLFT(序列辨識編號：7)；以及 合併有下列的CDRs的至少一重鏈可變異區域： HC-CDR1：SNTAAWN (序列辨識編號：8) HC-CDR2：RTYYRSKWYSDYGLSVKS(序列辨識編號：9) HC-CDR3：EGSGGTLIY (序列辨識編號：10)。

16. 段落15的方法，其中該抗體或抗原結合片段包含一重鏈可變異區域，其包含序列辨識編號：3或4之胺基酸序列，以及一輕鏈可變異區域，其包含序列辨識編號：1或2之胺基酸序列。

17. 段落15的方法，其中該癌症為選自於下列組織所組成的群組之癌症：結腸、直腸、鼻咽、子宮頸、口咽、胃、肝臟、頭頸部、口腔、食道、唇、口、舌、扁桃腺、鼻、咽喉、唾腺、竇、咽、喉、前列腺、肺臟、膀胱、皮膚、腎臟、卵巢或中皮層，或者其中該癌症係選自於下列所組成的群組：結腸癌(colon cancer)、結腸癌(colon carcinoma)、結腸直腸癌、鼻咽癌、子宮頸癌、口咽癌、胃癌、肝細胞癌、頭頸部癌症、頭頸部鱗狀細胞癌(HNSCC)、口腔癌、喉癌、前列腺癌、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、泌尿上皮癌、黑色素瘤、晚期黑色素瘤、腎細胞癌、卵巢癌及間皮瘤。

18. 段落15的方法，其中該抗體包含一種人類恆定區域，其係選自於IgG1、IgG2、IgG3及IgG4。

19. 段落15的方法，其中該抗原結合片段為Fab片段或scFv片段。

20. 段落15的方法，其中該抗原結合片段包含一種嵌合抗原受體(CAR)。

較佳實施例之詳細說明實施例 本發明人於下列實施例內說明抗CTLA-4抗體之單離及特徵化，該抗體顯示出會結合人類及小鼠CTLA-4，不結合人類CD28，能阻斷CTLA-4與CD80之交互作用，抑制CTLA-4/CD80及CTLA-4/CD86發送訊息，以及展現活體內抗癌活性。 實施例1：抗-人類CTLA-4抗體克隆2C8之單離

抗CTLA-4抗體係自一種人類抗體噬菌體顯示庫、經由活體外選擇而予以單離。以阻斷ELISA方式來篩選抗體阻斷CTLA-4與其配體結合的能力。於測試的384個克隆中，克隆2C8是顯示出激烈抑制CTLA-4結合的唯一的克隆(圖4)。 實施例2：2C8與人類CTLA-4之結合分析

2C8與人類CTLA-4之結合係藉由ELISA來分析。將人類CTLA-4塗覆於ELISA平盤之上，以及添加各種濃度的2C8 Fab或陰性對照Fab。結果顯示於圖5中。2C8顯現出以劑量依賴方式，與人類CTLA-4強力結合的能力。 實施例3：人類CTLA-4與CD80之間的交互作用之阻斷分析

2C8抑制CTLA-4與其配體，CD80，結合的能力係藉由ELISA來分析。簡言之，將CD80塗覆於ELISA平盤之上。用人類CTLA-4來預孵育2C8、陰性對照Fab或L3D10(一種商業的、小鼠抗人類CTLA-4 IgG1)，然後添加至ELISA平盤上。CTLA-4與CD80之結合係藉由ELISA來判定。

結果顯示於圖3中。顯現出2C8會阻斷CTLA-4與CD80之間的交互作用。 實施例4：使2C8遺傳工程處理成2C8_gI

抗體克隆2C8係表現為人類IgG1。使2C8可變異域之框架區域遺傳工程處理以還原(revert)成似生殖系列免疫球蛋白，且遺傳工程處理的克隆命名為2C8_gI。 實施例5：物種交叉反應性分析

2C8辨識小鼠CTLA-4之能力係藉由ELISA來分析。將2C8 IgG、2C8_gl IgG及商業的大鼠抗小鼠CTLA-4 IgG塗覆於ELISA平盤之上。使小鼠CTLA-4生物素化，然後添加各種濃度至ELISA平盤上。使用鏈黴抗生物素蛋白-HRP來顯現小鼠CTLA-4與抗體之結合。

結果顯示於圖7中。顯現出2C8能夠辨識小鼠CTLA-4，且效率比商業的陽性對照大很多。生殖系列還原遺傳工程處理(reversion engineering)不影響2C8_gl抗體的結合能力，其與2C8顯現出相同的結合剖面圖(圖7)。 實施例6：交叉物種反應性(cross species reactivity)之分析；與石蟹獼猴及恆河猴CTLA-4之結合

用石蟹獼猴/恆河猴CTLA-4來進行相似的ELISA。使用伊匹單抗作為陽性對照。2C8強有力地辨識 石蟹獼猴/恆河猴CTLA-4(圖14)。 實施例7：與CD28之交叉反應性分析

CTLA-4與CD28共享其配體。雖然CD28與CD80和CD86結合即傳送刺激訊息至T細胞，但是CTLA-4卻發送抑制訊息。藉由ELISA來研究2C8與CD28之結合作用。與人類Fc綴合的人類CD28塗覆於ELISA平盤之上，以及添加各種濃度的抗CTLA-4或陰性對照抗體。

結果顯示於圖8中。不像商業的大鼠抗小鼠CTLA-4 IgG，2C8顯示完全不會與CD28結合，即使是高濃度的抗體(圖5)。特別地，2C8顯示與CD28之結合比L3D10更少。 實施例8：2C8與CTLA-4之結合親和力分析

抗體2C8與CTLA-4之結合親和力係藉由ELISA來測量。將抗體塗覆於平盤上，以及添加不同濃度的人類CTLA-4。繪製劑量反應曲線(參見圖9)並計算有效濃度50% (EC50)。於此分析中，2C8顯示5.0 nM之平均EC50(來自2個獨立的實驗)。

小鼠CTLA-4之結合親和力係同樣地予以測量，以及外推小鼠CTLA-4之EC50；2C8 IgG1顯示9.6nM之EC50(2C8_gl IgG1為23.5nM，帶有LALA突變之2C8 IgG1為5.1nM，及2C8 IgG4為7.0nM)(圖15)。“LALA”突變係指Fc區域234及234位置之白胺酸殘基突變為丙胺酸(即，L234A，L235A)；此突變已知會弱化Fc及Fc-γR之間的交互作用，且因而妨礙ADCC活性(參見如Hezareh等人，J Virol (2001) 75(24):12161-12168)。

2C8與人類CTLA-4之結合親和力亦藉由表面電漿子共振(SPR)分析來測量。將抗體固定於一感應晶片上，以及使不同濃度的人類CTLA-4從上面流過，且測量反應。於此分析中，2C8顯示9.6 nM之結合親和力(K_D )。 實施例9：2C8與CTLA-4之結合的結合性分析

抗體2C8與人類CTLA-4之結合的結合性係藉由ELISA來測量。簡言之，將人類CTLA-4塗覆於ELISA平盤上，以及添加各種濃度的抗人類CTLA-4抗體至ELISA平盤。繪製劑量反應曲線(參見圖10)並計算EC50。獨立的分析之2C8的平均EC50為63.6pM。

小鼠CTLA-4之結合的結合性係同樣地藉由ELISA予以測量(圖16)。以小鼠蛋白，2C8 IgG1之EC50為4.9nM (2C8_gl IgG1為77.1nM；帶有LALA突變之2C8 IgG1為8.0nM；2C8 IgG4為20.9nM)。 實施例10：細胞表面上表現的CTLA-4之結合作用分析

HEK-293.6E細胞被轉染人類或小鼠CTLA-4。過度表現的繼而於2C8或同型對照存在下孵育，以及藉由流動式細胞測量術來測量抗體與細胞之結合作用。

2C8於此等分析內能有效地與細胞表面表現的人類CTLA-4(圖17)及小鼠CTLA-4(圖18)結合。 實施例11：抗-CTLA-4抗體2C8之活體外活性分析

執行一種T細胞再活化分析來分析抗體的活性。於分析中，用植物性血球凝集素及CD80或CD86任一者來刺激Jurkat T細胞。此等治療後，細胞分泌IL-2。添加CTLA-4抑制刺激作用及IL-2分泌。以ELISA來測量抗CTLA-4及對照抗體存在下，細胞活化，即IL-2分泌的水平(圖11)。於再活化分析中，使用伊匹單抗(人類抗-huCTLA-4，以益伏®(Yervoy®)銷售)或L3D10(商業的小鼠抗-huCTLA-4 IgG1κ)任一者作為陽性對照。

於經由CD80(圖11)或經由CD86(圖12)刺激且用CTLA-4抑制之後，2C8能恢復Jurkat T細胞之IL-2分泌活性。

該分析重複數次且一致地顯示2C8及衍生的抗體抑止CTLA-4-媒介的抑制之能力(圖19)。於此等分析內，2C8顯示EC50在0.6至2.0nM的範圍，與伊匹單抗非常相似，伊匹單抗顯示EC50在0.5及1.4nM之間。LALA突變不影響抗體的效能，因帶有突變之2C8顯示EC50在0.7及1.2nM之間。抗體的生殖系列版本於一個實驗中顯示有較高的EC50(5.6nM)，以及其他者為可比較的EC50(1.1nM)，此可能不是顯著的。 實施例12：抗-CTLA-4抗體2C8之活體內活性分析

亦於一種腫瘤生長小鼠模式內活體內，使用結腸癌MC38細胞來測試2C8之活性。於第0天以2 x 10⁶ 個MC38細胞予以皮下接種小鼠。於第8天開始，小鼠予以腹膜內注射五劑量(每隻動物200 μg)的2C8 IgG1或IgG1同型對照抗體。於整個實驗從頭到尾測量腫瘤大小。

二個獨立的實驗結果顯示於圖13A及13B中。2C8顯示有效的控制腫瘤生長。

現在將參照附圖來討論具體例及實驗，以闡釋本發明之原理，其中： 圖1. 抗CTLA-4抗體克隆2C8及2C8_gI的輕鏈可變異域序列。在CDRs的下面劃線且分別顯示。 圖2. 抗CTLA-4抗體克隆2C8及2C8_gI的重鏈可變異域序列。在CDRs的下面劃線且分別顯示。 圖3.抗CTLA-4抗體克隆2C8及2C8_gI的重及輕鏈可變異域序列之核苷酸及編碼的胺基酸序列。 圖4. 長條圖顯示生物淘選(biopanning)之後抗人類CTLA-4選中(hits)之選擇。Fab與人類CTLA-4混合，以及藉由ELISA來分析與CD80結合作用。箭頭指示克隆2C8，其被鑑定為CTLA-4與CD80結合作用有效的阻斷劑。 圖5. 圖顯示2C8 Fab與人類CTLA-4結合之ELISA分析結果。 圖6. 圖顯示以2C8 Fab結合阻斷CTLA-4與CD80結合之ELISA分析結果。 圖7. 圖顯示2C8 IgG與小鼠CTLA-4結合之ELISA分析結果。 圖8. 圖顯示2C8與人類CD28結合之ELISA分析結果。 圖9. 圖顯示2C8與人類CTLA-4結合之結合親和力的ELISA分析結果。顯示二個獨立實驗的平均吸光度± SD，2個獨立實驗均執行二重複。 圖10. 圖顯示2C8與人類CTLA-4結合之結合性ELISA分析結果。 圖11. 圖表顯示經由CD80之活化作用於CTLA-4-誘發抑制之後，透過2C8而恢復T細胞活性。顯示2個獨立的吸光度測量實驗、二重複之平均值±SD，對應於上清液之IL-2濃度。 圖12. 圖表顯示經由CD86之活化作用於CTLA-4-誘發抑制之後，透過2C8而恢復T細胞活性。顯示2個獨立的吸光度測量實驗、二重複之平均值±SD，對應於上清液之IL-2濃度。 圖13. 圖顯示於結腸癌之MC38腫瘤生長小鼠模式內活體內2C8之抗腫瘤活性的分析結果。(A)及(B)顯示二個獨立實驗的結果。 圖14. 圖表顯示2C8與石蟹獼猴(cynomolgus)/恆河猴CTLA-4之結合作用。 圖15. 圖表顯示小鼠CTLA-4之結合親和力。顯示帶有LALA突變之2C8、2C8gl及2C8之IgG1版本，2C8之IgG4版本，及伊匹單抗(人類抗-huCTLA-4)與IgG1同型對照之二重複的平均吸光度± SD。 圖16. 圖表顯示小鼠CTLA-4之結合的結合性。顯示帶有LALA突變之2C8、2C8gl及2C8之IgG1版本，2C8之IgG4版本，及伊匹單抗(抗-huCTLA-4，已知其不會與小鼠CTLA-4交叉反應)與IgG1同型對照之二重複的平均吸光度± SD。 圖17. 圖表顯示2C8與轉染人類CTLA-4的HEK-293.6E細胞之結合作用。顯示二重複之平均螢光強度平均值±SD。 圖18. 圖表顯示2C8與轉染小鼠CTLA-4的HEK-293.6E細胞之結合作用。顯示二重複之平均螢光強度平均值±SD。 圖19A至19D.圖表顯示於CTLA-4-誘發的活化抑制之後，透過2C8或衍生的抗體而恢復T細胞活性。顯示4個獨立實驗(A至D)、分泌的IL-2之二重複平均值±SD，使用伊匹單抗作為陽性對照及IgG1同型對照。

＜110＞ 新加坡科技研究局 ＜120＞ 抗CTLA-4抗體 ＜130＞ RIC/FP7253289 ＜140＞ 10201603721T ＜141＞ 2016-05-10 ＜160＞ 14 ＜170＞ PatentIn版本3.5 ＜210＞ 1 ＜211＞ 108 ＜212＞ PRT ＜213＞ 人工序列 ＜220＞ ＜223＞ 抗CTLA-4抗體2C8克隆的輕鏈可變異域 ＜400＞ 1 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Thr Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Thr Leu Pro Leu 85 90 95 Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 ＜210＞ 2 ＜211＞ 108 ＜212＞ PRT ＜213＞ 人工序列 ＜220＞ ＜223＞ 抗CTLA-4抗體2C8 gl克隆的輕鏈可變異域 ＜400＞ 2 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Thr Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Thr Leu Pro Leu 85 90 95 Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 ＜210＞ 3 ＜211＞ 121 ＜212＞ PRT ＜213＞ 人工序列 ＜220＞ ＜223＞ 抗CTLA-4抗體2C8克隆的重鏈可變異域 ＜400＞ 3 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Thr Val Ser Ser Asn 20 25 30 Thr Ala Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Ser Asp Tyr Gly 50 55 60 Leu Ser Val Lys Ser Arg Met Thr Ile Asn Ala Asp Thr Ser Lys Asn 65 70 75 80 Gln Val Ser Leu His Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val 85 90 95 Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Gly Ser Gly Gly Thr Leu Ile Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 ＜210＞ 4 ＜211＞ 121 ＜212＞ PRT ＜213＞ 人工序列 ＜220＞ ＜223＞ 抗CTLA-4抗體2C8 gl克隆的重鏈可變異域 ＜400＞ 4 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn 20 25 30 Thr Ala Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Ser Asp Tyr Gly 50 55 60 Leu Ser Val Lys Ser Arg Ile Thr Ile Asn Pro Asp Thr Ser Lys Asn 65 70 75 80 Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val 85 90 95 Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Gly Ser Gly Gly Thr Leu Ile Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 ＜210＞ 5 ＜211＞ 11 ＜212＞ PRT ＜213＞ 人工序列 ＜220＞ ＜223＞ 抗CTLA-4抗體2C8克隆的輕鏈可變異域 LC-CDR1 ＜400＞ 5 Arg Ala Thr Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 ＜210＞ 6 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞ 人工序列 ＜220＞ ＜223＞ 抗CTLA-4抗體2C8克隆的輕鏈可變異域 LC-CDR2 ＜400＞ 6 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 ＜210＞ 7 ＜211＞ 10 ＜212＞ PRT ＜213＞ 人工序列 ＜220＞ ＜223＞ 抗CTLA-4抗體2C8克隆的輕鏈可變異域 LC-CDR3 ＜400＞ 7 Gln Gln Ala Asn Thr Leu Pro Leu Phe Thr 1 5 10 ＜210＞ 8 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞ 人工序列 ＜220＞ ＜223＞ 抗CTLA-4抗體2C8克隆的重鏈可變異域 LC-CDR1 ＜400＞ 8 Ser Asn Thr Ala Ala Trp Asn 1 5 ＜210＞ 9 ＜211＞ 18 ＜212＞ PRT ＜213＞ 人工序列 ＜220＞ ＜223＞ 抗CTLA-4抗體2C8克隆的重鏈可變異域 LC-CDR2 ＜400＞ 9 Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Ser Asp Tyr Gly Leu Ser Val 1 5 10 15 Lys Ser ＜210＞ 10 ＜211＞ 9 ＜212＞ PRT ＜213＞ 人工序列 ＜220＞ ＜223＞ 抗CTLA-4抗體2C8克隆的重鏈可變異域 LC-CDR3 ＜400＞ 10 Glu Gly Ser Gly Gly Thr Leu Ile Tyr 1 5 ＜210＞ 11 ＜211＞ 324 ＜212＞ DNA ＜213＞ 人工序列 ＜220＞ ＜223＞ 抗CTLA-4抗體2C8克隆的輕鏈可變異域 ＜400＞ 11 gacatccagt tgacccagtc tccatcttct gtgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgactca gggtataagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatcc 180 aggttcagcg gcagtggctc tgggacagag ttcactctca ctatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaatactc tccccttatt cactttcggc 300 cctgggacca aagtggatat caaa 324 ＜210＞ 12 ＜211＞ 324 ＜212＞ DNA ＜213＞ 人工序列 ＜220＞ ＜223＞ 抗CTLA-4抗體2C8 gl克隆的輕鏈可變異域 ＜400＞ 12 gacatccaga tgacccagtc tccatcttct gtgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgactca gggtataagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatcc 180 aggttcagcg gcagtggctc tgggacagat ttcactctca ctatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaatactc tccccttatt cactttcggc 300 cctgggacca aagtggatat caaa 324 ＜210＞ 13 ＜211＞ 363 ＜212＞ DNA ＜213＞ 人工序列 ＜220＞ ＜223＞ 抗CTLA-4抗體2C8克隆的重鏈可變異域 ＜400＞ 13 caggtacagc tgcagcagtc aggtccagga ctggtgaagc cctcgcagac cctctcactc 60 acctgcgcca tctccgggga cactgtctct agcaacactg ctgcttggaa ttggatcagg 120 cagtccccct cgagaggcct tgagtggctg ggaaggacat actacaggtc caagtggtat 180 agtgactatg gactatctgt gaaaagtcgg atgaccatca atgcagacac atccaagaac 240 caggtctccc tacacctgaa ctctgtaact cccgaagaca cggctgtata ttactgtgca 300 agagagggca gtggcggaac tttgatctac tggggccagg gaaccctggt caccgtctca 360 agc 363 ＜210＞ 14 ＜211＞ 363 ＜212＞ DNA ＜213＞ 人工序列 ＜220＞ ＜223＞ 抗CTLA-4抗體2C8 gl克隆的重鏈可變異域 ＜400＞ 14 caggtacagc tgcagcagtc aggtccagga ctggtgaagc cctcgcagac cctctcactc 60 acctgcgcca tctccgggga cagtgtctct agcaacactg ctgcttggaa ttggatcagg 120 cagtccccct cgagaggcct tgagtggctg ggaaggacat actacaggtc caagtggtat 180 agtgactatg gactatctgt gaaaagtcgg ataaccatca atccagacac atccaagaac 240 cagttctccc tacagctgaa ctctgtaact cccgaagaca cggctgtata ttactgtgca 300 agagagggca gtggcggaac tttgatctac tggggccagg gaaccctggt caccgtctca 360 agc 363

Claims (53)

1. 一種抗體或抗原結合片段，其能與胞毒型T淋巴球關聯性蛋白4(CTLA-4)結合，選擇性地為經單離的，其具有i)至vi)的胺基酸序列： i)LC-CDR1：RATQGISSWLA(序列辨識編號：5)； ii)LC-CDR2：AASSLQS (序列辨識編號：6)； iii)LC-CDR3：QQANTLPLFT(序列辨識編號：7)； iv)HC-CDR1：SNTAAWN (序列辨識編號：8)； v)HC-CDR2：RTYYRSKWYSDYGLSVKS(序列辨識編號：9)； vi)HC-CDR3：EGSGGTLIY (序列辨識編號：10)； 或其之一變異體，其中該序列(i)至(vi)之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
2. 如請求項1之抗體或抗原結合片段，其中LC-CDR1為RATQGISSWLA(序列辨識編號：5)。
3. 如請求項1或請求項2之抗體或抗原結合片段，其中LC-CDR2為AASSLQS(序列辨識編號：6)。
4. 如請求項1至3中任一項之抗體或抗原結合片段，其中LC-CDR3為QQANTLPLFT(序列辨識編號：7)。
5. 如請求項1至4中任一項之抗體或抗原結合片段，其中HC-CDR1為SNTAAWN(序列辨識編號：8)。
6. 如請求項1至5中任一項之抗體或抗原結合片段，其中HC-CDR2為RTYYRSKWYSDYGLSVKS (序列辨識編號：9)。
7. 如請求項1至6中任一項之抗體或抗原結合片段，其中HC-CDR3為EGSGGTLIY(序列辨識編號：10)。
8. 如請求項1至7中任一項之抗體或抗原結合片段，其具有合併有下列CDR的至少一輕鏈可變異區域： LC-CDR1：RATQGISSWLA (序列辨識編號：5) LC-CDR2：AASSLQS (序列辨識編號：6) LC-CDR3：QQANTLPLFT (序列辨識編號：7)。
9. 如請求項1至8中任一項之抗體或抗原結合片段，其具有合併有下列CDR的至少一重鏈可變異區域： HC-CDR1：SNTAAWN (序列辨識編號：8) HC-CDR2：RTYYRSKWYSDYGLSVKS(序列辨識編號：9) HC-CDR3：EGSGGTLIY (序列辨識編號：10)。
10. 如請求項1至9中任一項之抗體或抗原結合片段，其不會與CD28結合。
11. 一種抗體或抗原結合片段，其與CTLA-4結合，且其顯示與CD28實質沒有結合。
12. 如請求項1至11中任一項之抗體或抗原結合片段，其與人類或鼠類CTLA-4專一地結合。
13. 如請求項1至12中任一項之抗體或抗原結合片段，其抑制CTLA-4及CD80之間的交互作用，選擇性地為人類CTLA-4及人類CD80之間的交互作用。
14. 如請求項1至13中任一項之抗體或抗原結合片段，其抑制CTLA-4及CD86之間的交互作用，選擇性地為人類CTLA-4及人類CD86之間的交互作用。
15. 如請求項1至14中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該抗體於展現T細胞衰竭或T細胞無反應性(anergy)之T細胞內有效地恢復T細胞功能。
16. 一種經單離的輕鏈可變異區域多肽，其包含下列的CDR： LC-CDR1：RATQGISSWLA (序列辨識編號：5) LC-CDR2：AASSLQS (序列辨識編號：6) LC-CDR3：QQANTLPLFT (序列辨識編號：7)。
17. 一種經單離的輕鏈可變異區域多肽，其包含一胺基酸序列，其與輕鏈序列：序列辨識編號：1或2(圖1)有至少85%的序列同一性。
18. 一種經單離的重鏈可變異區域多肽，其包含下列的CDR： HC-CDR1：SNTAAWN (序列辨識編號：8) HC-CDR2：RTYYRSKWYSDYGLSVKS(序列辨識編號：9) HC-CDR3：EGSGGTLIY (序列辨識編號：10)。
19. 一種經單離的重鏈可變異區域多肽，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：3或4(圖2)之重鏈序列有至少85%的序列同一性。
20. 如請求項15或請求項16之經單離的輕鏈可變異區域多肽，與如請求項18或請求項19之重鏈可變異區域多肽之組合。
21. 一種能與CTLA-4結合之抗體或抗原結合片段，其包含一重鏈及一輕鏈可變異區域序列，其中： 該輕鏈包含一LC-CDR1、LC-CDR2、LC-CDR3，其與下列有至少85%的整體序列同一性：LC-CDR1：RATQGISSWLA(序列辨識編號：5)、LC-CDR2：AASSLQS(序列辨識編號：6)、LC-CDR3：QQANTLPLFT(序列辨識編號：7)，以及； 該重鏈包含一HC-CDR1、HC-CDR2、HC-CDR3，其與下列有至少85%的整體序列同一性：HC-CDR1：SNTAAWN(序列辨識編號：8)、HC-CDR2：RTYYRSKWYSDYGLSVKS(序列辨識編號：9)、HC-CDR3：EGSGGTLIY(序列辨識編號：10)。
22. 一種能與CTLA-4結合之抗體或抗原結合片段，選擇性地為經單離的，其包含一重鏈及一輕鏈可變異區域序列，其中： 該輕鏈序列與輕鏈序列：序列辨識編號：1或2(圖1)有至少85%的序列同一性，以及； 該重鏈序列與序列辨識編號：3或4(圖2)之該重鏈序列有至少85%的序列同一性。
23. 一種抗體或抗原結合片段，選擇性地為經單離的，其能與CTLA-4結合，其為一雙專一性抗體或一雙專一性抗原結合片段，其包含(i)一如請求項1至22中任一項之抗原結合片段或多肽，以及(ii)能與CTLA-4之外的一標靶蛋白結合的一抗原結合片段或多肽。
24. 如請求項23之抗體或抗原結合片段，其中能與CTLA-4之外的一標靶蛋白結合的該抗原結合片段或多肽能與下列中之一者結合：PD-1、PD-L1、CD27、CD28、ICOS、CD40、CD122、OX43、4-1BB、GITR、B7-H3、B7-H4、BTLA、LAG-3、A2AR、VISTA、TIM-3、KIR、HER-2、HER-3、EGFR、EpCAM、CD30、CD33、CD38、CD20、CD24、CD90、CD15、CD52、CA-125、CD34、CA-15-3、CA-19-9、CEA、CD99、CD117、CD31、CD44、CD123、CD133、ABCB5及CD45。
25. 一種嵌合抗原受體(CAR)，其包含如請求項1至24中任一項之抗原結合片段。
26. 一種包含如請求項25之CAR的細胞。
27. 一種活體外複合物，選擇性地為經單離的，其包含與CTLA-4結合的如請求項1至26中任一項之抗體或抗原結合片段、多肽、CAR或細胞。
28. 一種組成物，其包含如請求項1至25中任一項之抗體或抗原結合片段、多肽或CAR以及至少一藥學上可接受的載劑。
29. 一種經單離的核酸，其編碼如請求項1至25中任一項之抗體、抗原結合片段、多肽或CAR。
30. 一種載體，其包含如請求項29之核酸。
31. 一種宿主細胞，其包含如請求項30之載體。
32. 一種用於製造如請求項1至25中任一項之抗體、抗原結合片段、多肽或CAR之方法，其包含於適合表現編碼該抗體、抗原結合片段、多肽或CAR之載體的條件下培養如請求項31之宿主細胞，以及回收該抗體或抗原結合片段或多肽或CAR。
33. 如請求項1至26或28中任一項之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物，供用於療法，或醫學治療方法。
34. 如請求項1至26或28中任一項之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物，供用於治療一T細胞官能不良障礙。
35. 如請求項1至26或28中任一項之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物，供用於治療癌症。
36. 如請求項1至26或28中任一項之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物，供用於治療一感染疾病。
37. 一種如請求項1至26或28中任一項之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物於製造一藥劑之用途，該藥劑供用於治療一T細胞官能不良障礙。
38. 一種如請求項1至26或28中任一項之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物於製造一藥劑之用途，該藥劑供用於治療癌症。
39. 一種如請求項1至26或28中任一項之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物於製造一藥劑之用途，該藥劑供用於治療一感染疾病。
40. 一種活體外或活體內提升T細胞功能之方法，其包含投與如請求項1至26或28中任一項之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物至一官能不良T細胞。
41. 一種治療一T細胞官能不良障礙的方法，其包含投與如請求項1至26或28中任一項之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物至罹患一T細胞官能不良障礙的一病人。
42. 一種治療癌症的方法，其包含投與如請求項1至26或28中任一項之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物至罹患一癌症的一病人。
43. 一種治療一感染疾病的方法，其包含投與如請求項1至26或28中任一項之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物至罹患一感染疾病的一病人。
44. 一種方法，其包含使含有或懷疑含有CTLA-4的一樣本與如請求項1至26中任一項之抗體、抗原結合片段、CAR或細胞接觸，以及偵測一抗體、抗原結合片段、CAR或細胞與CTLA-4的複合物之形成。
45. 一種診斷一主體之一疾病或病況的方法，該方法包含於活體外使來自該主體的一樣本與如請求項1至26中任一項之抗體、抗原結合片段、CAR或細胞接觸，以及偵測一抗體、抗原結合片段、CAR或細胞與CTLA-4的複合物之形成。
46. 一種選擇或分層(stratifying)CTLA-4或CD86或CD80標靶劑治療之一主體的方法，該方法包含於活體外使來自該主體的一樣本與如請求項1至26中任一項之抗體、抗原結合片段、CAR或細胞接觸，以及偵測一抗體、抗原結合片段、CAR或細胞與CTLA-4的複合物之形成。
47. 一種如請求項1至26中任一項之抗體、抗原結合片段、CAR或細胞供用於活體外偵測CTLA-4之用途。
48. 一種如請求項1至26中任一項之抗體、抗原結合片段、CAR或細胞作為一活體外診斷劑之用途。
49. 一種用於增生一T細胞族群之方法，其中T細胞係於活體外或擬體內(ex vivo )與如請求項1至26或28中任一項之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物接觸。
50. 一種治療有一T細胞官能不良障礙的一主體之方法，該方法包含於如請求項1至26或28中任一項之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、細胞或組成物存在下，培養從來自一主體的一血液樣本得到的T細胞，以便增生該T細胞族群，收集經增生的T細胞，以及投與該經增生的T細胞至需要治療的一主體。
51. 一種於一主體內治療或預防一癌症的方法，其包含： (a)從一主體單離至少一細胞； (b)修飾該至少一細胞以表現或包含如請求項1至26、29或30中任一項之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、核酸或載體，以及； (c)投與該經修飾的至少一細胞至一主體。
52. 一種於一主體內治療或預防一癌症的方法，其包含： (a)從一主體單離至少一細胞； (b)導入如請求項29之核酸或如請求項30之載體至該至少一細胞內，藉此修飾該至少一細胞，以及； (c)投與該經修飾的至少一細胞至一主體。
53. 一種部件之套組(a kit of parts)，其包含一預定量之如請求項1至26或28至31中任一項之抗體、抗原結合片段、多肽、CAR、組成物、核酸、載體或細胞。