TW201725051A

TW201725051A - 水性醫藥調配物

Info

Publication number: TW201725051A
Application number: TW105140288A
Authority: TW
Inventors: 吉安路卡雷納迪; 里歐亞莉珊卓拉戴爾; 希薇亞費塔肯基利
Original assignee: 馬克專利公司; 輝瑞大藥廠
Priority date: 2015-12-07
Filing date: 2016-12-06
Publication date: 2017-07-16
Also published as: CN108367072A; AU2016368099A1; BR112018010211A2; UA123270C2; PL3386541T3; US20210100903A1; PT3386541T; MY195681A; PH12018500894A1; JP6925337B2; LT3386541T; ZA201804534B; EP3747466A1; KR102697026B1; NZ743964A; DK3386541T3; CN108367072B; CY1123358T1; TWI630917B; CL2018001488A1

Abstract

本發明係關於新穎抗PD-L1抗體調配物。特別地，本發明係關於該抗PD-L1抗體阿維魯單抗(Avelumab)之水性醫藥調配物。

Description

水性醫藥調配物

本發明係關於新穎抗PD-L1抗體調配物。特別地，本發明係關於抗PD-L1抗體阿維魯單抗(Avelumab)之水性醫藥調配物。

程式化死亡1(PD-1)受體及PD-1配體1及2(PD-L1、PD-L2)在免疫調節中起不可或缺之作用。在活化T細胞上表現之PD-1由基質細胞、腫瘤細胞或二者表現之PD-L1及PD-L2活化，從而起始T細胞死亡及局部免疫抑制(Dong H、Zhu G、Tamada K、Chen L.B7-H1,a third member of the B7 family,co-stimulates T-cell proliferation and interleukin-10 secretion.Nat Med 1999；5：1365-69；Freeman GJ,Long AJ,Iwai Y等人，Engagement of the PD-1 immunoinhibitory receptor by a novel B7 family member leads to negative regulation of lymphocyte activation.J Exp Med 2000；192：1027-34；Dong H、Strome SE、Salomao DR等人，Tumor-associated B7-H1 promotes T-cell apoptosis：a potential mechanism of immune evasion.Nat Med 2002；8：793-800.[Erratum,Nat Med 2002；8：1039；Topalian SL、Drake CG、Pardoll DM.Targeting the PD-1/B7-H1(PD-L1)pathway to activate anti-tumor immunity.Curr Opin Immunol 2012；24：207-12)，此可能為腫瘤發育及生長提供免疫耐受環境。相反，在非臨床動物模型中，抑制此相互作用可增強局部T細胞反應且調介抗腫瘤活性(Dong H、Strome SE、Salomao DR等人，Nat Med 2002；8：793-800.[Erratum,Nat Med 2002；8：1039；Iwai Y、Ishida M、Tanaka Y等人，Involvement of PD-L1 on tumor cells in the escape from host immune system and tumor immunotherapy by PD-L1 blockade.Proc Natl Acad Sci USA 2002；99：12293-97)。在臨床環境中，業內已報導用阻斷PD-1-PD-L1相互作用之抗體治療在晚期或轉移性實體腫瘤患者中產生7%至38%之客觀反應率及可耐受安全性概況(Hamid O、Robert C、Daud A等人，Safety and tumor responses with lambrolizumab(Anti-PD-1)in melanoma.N Engl J Med 2013；369：134-44；Brahmer JR、Tykodi SS、Chow LQ等人，Safety and activity of anti-PD-L1 antibody in patients with advanced cancer.N Engl J Med 2012；366(26)：2455-65；Topalian SL、Hodi FS、Brahmer JR等人，Safety,activity,and immune correlates of anti-PD-1 antibody in cancer.N Engl J Med 2012；366(26)：2443-54；Herbst RS、Soria J-C、Kowanetz M等人，Predictive correlates of response to the anti-PD-L1 antibody MPDL3280A in cancer patients.Nature 2014；515：563-67)。應注意，反應似乎延長，對於大多數患者持續時間為1年或更長時間。

阿維魯單抗(亦稱為MSB0010718C)係免疫球蛋白(Ig)G1同型之完整人類單株抗體。阿維魯單抗選擇性結合至PD-L1且競爭性阻斷其與PD-1之相互作用。

與靶向T細胞之抗PD-1抗體相比，阿維魯單抗靶向腫瘤細胞，且因此預期具有較少副作用，包括較低的自體免疫相關安全性問題風險，此乃因阻斷PD-L1使PD-L2-PD-1路徑完整以促進周邊自身耐受性(Latchman Y、Wood CR、Chernova T等人，PD-L1 is a second ligand for PD-1 and inhibits T cell activation.Nat Immunol 2001；2(3)：261-68)。

阿維魯單抗當前在診療所中在多種癌症類型中進行測試，該等癌症類型包括非小細胞肺癌、泌尿上皮癌、間皮瘤、默克細胞癌(Merkel cell carcinoma)、胃或胃食道接合部癌、卵巢癌及乳癌。

阿維魯單抗及其序列變體及抗原結合片段之胺基酸序列揭示於WO2013079174中，其中具有阿維魯單抗之胺基酸序列之抗體稱為A09-246-2。該專利亦揭示製造方法及某些醫學用途。

阿維魯單抗之其他醫學用途闡述於WO2016137985、PCT/IB2016/052748、PCT/US2016/037498、PCT/US2016/053939、美國專利申請案第62/341,921號中。

WO2013079174在部分2.4a中亦闡述具有阿維魯單抗之胺基酸序列之抗體的人類水性調配物。此調配物包含濃度為10mg/ml之抗體、作為抗氧化劑之甲硫胺酸且具有5.5之pH。

IgG1型未醣基化抗PD-L1抗體之調配物研究闡述於WO2015048520中，其中選擇pH為5.8之調配物用於臨床研究。

由於阿維魯單抗通常係經由靜脈內輸注遞送至患者，且因此以水性形式提供，本發明係關於適於穩定具有其轉譯後修飾且濃度較高之阿維魯單抗之其他水性調配物，如WO2013079174中所揭示。

圖1a(SEQ ID NO：1)顯示阿維魯單抗之全長重鏈序列，如由用作宿主生物體之CHO細胞所表現。

然而，通常觀察到在抗體產生之進程中，重鏈之C末端離胺酸(K)裂解掉。位於Fc部分中之此修飾對抗體-抗原結合無影響。因此，在一些實施例中，阿維魯單抗之重鏈序列之C末端離胺酸(K)不存在。阿維魯單抗之不含C末端離胺酸之重鏈序列顯示於圖1b(SEQ ID NO：2)中。

圖2(SEQ ID NO：3)顯示阿維魯單抗之全長輕鏈序列。

具有高相關性之轉譯後修飾係醣基化。

在真核細胞之內質網中製得之大部分可溶性及膜結合蛋白經歷醣基化，其中稱為醣基轉移酶之酶使一或多個糖單元附接至該等蛋白質之特異性醣基化位點。最通常而言，附接點為NH₂或OH基團，此產生N-連接或O-連接醣基化。

此亦適用於在真核宿主細胞中重組產生之蛋白質，例如抗體。重組IgG抗體在CH2結構域中之Fc區之某一天冬醯胺殘基處含有保守N-連接醣基化位點。N-連接醣基化在抗體中具有許多已知物理功能，例如影響其溶解度及穩定性、蛋白酶抗性、與Fc受體之結合、細胞運輸及活體內循環半衰期(Hamm M.等人，Pharmaceuticals 2013,6,393-406)。IgG抗體N-聚醣結構主要為二等分複合體型結構，其包含b-D-N-乙醯基葡糖胺(GlcNac)、甘露糖(Man)及通常半乳糖(Gal)及岩藻糖(Fuc)單元。

在阿維魯單抗中，單一醣基化位點係Asn300，其位於兩條重鏈之CH2結構域中。醣基化之細節闡述於實例1中。

由於醣基化影響抗體之溶解度及穩定性，故在欲研發抗體之醫藥上適宜之穩定調配物時，謹慎地將此參數考慮在內。

令人驚訝的是，本專利申請案之發明者已發現，可使特徵完全在於其胺基酸序列及其轉譯後修飾之阿維魯單抗在多種pH值低至5.2之不存在抗氧化劑之水性調配物中穩定。

圖1a：阿維魯單抗之重鏈序列(SEQ ID NO：1)

圖1b：阿維魯單抗之重鏈序列，其缺少C末端K(SEQ ID NO：2)

圖2：阿維魯單抗之輕鏈序列(SEQ ID NO：3)

圖3：阿維魯單抗之二級結構

圖4：阿維魯單抗聚醣之2AB HILIC-UPLC層析圖

圖5：圖4之峰之編號

圖6：藉由SE-HPLC測定之DoE2調配物之總聚集物(40℃)

圖7：藉由SE-HPLC測定之DoE2調配物之總聚集物(25℃)

圖8：藉由生物分析儀測定之DoE2調配物之片段(40℃)

圖9：藉由生物分析儀測定之DoE2調配物之片段(25℃)

圖10：DoE2之酸性簇及主峰豐度(25℃)

圖11：在2℃-8℃下之長期穩定性LMW(%)

圖12：在2℃-8℃下之長期穩定性不可視粒子10μm

圖13：在2℃-8℃下之長期穩定性不可視粒子25μm

圖14：在2℃-8℃下之長期穩定性酸性簇(%)

圖15：在2℃-8℃下之長期穩定性主峰(%)

圖16：在2℃-8℃下之長期穩定性鹼性簇(%)

圖17：在25℃下之長期穩定性LMW(%)

圖18：在25℃下之長期穩定性不可視粒子10μm

圖19：在25℃下之長期穩定性不可視粒子25μm

圖20：在25℃下之長期穩定性酸性簇(%)

圖21：在25℃下之長期穩定性主峰(%)

圖22：在25℃下之長期穩定性鹼性簇(%)

圖23：在40℃下之長期穩定性LMW(%)

圖24：在40℃下之長期穩定性不可視粒子10μm

圖25：在40℃下之長期穩定性不可視粒子25μm

圖26：在40℃下之長期穩定性酸性簇(%)

圖27：在40℃下之長期穩定性主峰(%)

圖28：在40℃下之長期穩定性鹼性簇(%)

定義

除非另外陳述，否則本說明書及申請專利範圍中所用之以下術語具有下文所述之以下含義。

本文對「阿維魯單抗」之提及包括IgG1型抗PD-L1抗體，如WO2013079174中藉由其胺基酸序列所定義，及如本發明專利申請案中藉由其胺基酸序列及藉由其轉譯後修飾所定義。本文對「阿維魯單抗」之提及可包括例如可與WO2013079174中所揭示之胺基酸序列共享至少75%、適宜地至少80%、適宜地至少85%、適宜地至少90%、適宜地至少95%、適宜地至少96%、適宜地至少97%、適宜地至少98%或最適宜地至少99%胺基酸序列一致性的生物類似物。或者或另外，本文對「阿維魯單抗」之提及可包括本文所揭示之轉譯後修飾、尤其醣基化形式不同之生物類似物。

術語「生物類似物」(亦稱為仿製生物製品)為業內所熟知，且熟習此項技術者將容易地瞭解何時應將原料藥視為阿維魯單抗之生物類似物。術語「生物類似物」通常用於闡述先前官方授權銷售許可之「創新者生物醫藥產品」之後續形式(通常來自不同來源)(原料藥係由活生物體製得或源自活生物體或經由重組DNA或受控基因表現方法製得之「生物製品」)。由於生物製品具有較高分子複雜度且通常對製造過程中之變化敏感(例如若在其製造中使用不同細胞系)，且由於後續仿製製造商通常無法獲取創始人之分子純系、細胞庫、關於發酵及純化製程之技術訣竅，且無法獲取活性原料藥本身(僅創新者之商業化藥品)，故任何「生物類似物」不太可能與創新者藥品完全相同。

在本文中，術語「緩衝液」或「緩衝溶液」係指通常包含酸(通常為弱酸，例如乙酸、檸檬酸、組胺酸之咪唑鎓形式)及其共軛鹼之混合物(例如乙酸鹽或檸檬酸鹽，例如乙酸鈉、檸檬酸鈉，或組胺酸)或者鹼(通常為弱鹼，例如組胺酸)及其共軛酸之混合物(例如質子化組胺酸鹽)的水溶液。「緩衝溶液」之pH僅將在添加少量強酸或強鹼後因「緩衝劑」所賦予之「緩衝效應」而稍有變化。

在本文中，「緩衝液系統」包含一或多種緩衝劑及/或其共軛酸/鹼，且更適宜地包含一或多種緩衝劑及其共軛酸/鹼，且最適宜地包含僅一種緩衝劑及其共軛酸/鹼。除非另外陳述，否則本文對於「緩衝液系統」所規定之任何濃度(即緩衝液濃度)適宜地指緩衝劑及/或其共軛酸/鹼之總濃度。換言之，本文對於「緩衝液系統」所規定之濃度適宜地指所有相關緩衝物質(即彼此處於動態平衡中之物質，例如檸檬酸鹽/檸檬酸)之總濃度。因此，組胺酸緩衝液系統之給定濃度通常與組胺酸及組胺酸咪唑鎓形式之總濃度相關。然而，在組胺酸之情形下，該等濃度通常藉由參照組胺酸或其鹽之輸入量直接計算。包含相關緩衝液系統之組合物之總體pH通常反映每一相關緩衝物質之平衡濃度(即緩衝劑與其共軛酸/鹼之平衡)。

在本文中，術語「緩衝劑」係指緩衝液或緩衝溶液之酸或鹼組份(通常弱酸或弱鹼)。緩衝劑幫助將給定溶液之pH維持在或接近預定值，且緩衝劑通常經選擇以與預定值互補。緩衝劑適宜地係產生期望緩衝效應之單一化合物，尤其當該緩衝劑與適量(取決於預定期望pH)其相應「共軛酸/鹼」混合(且適宜地能夠與其交換質子)時或若在原位形成所需量之其相應「共軛酸/鹼」，此可藉由添加強酸或強鹼直至達到所需pH來達成。舉例而言，在乙酸鈉緩衝液系統中，可使用乙酸鈉溶液(鹼性)起始，然後用例如鹽酸酸化，或向乙酸溶液(酸性)中添加氫氧化鈉或乙酸鈉，直至達到期望pH。

通常，「穩定劑」係指有助於維持具體而言在冷凍及/或凍乾及/或儲存期間(尤其在暴露於應力時)生物醫藥藥物之結構完整性之組份。此穩定效應可出於多種原因而產生，但通常該等穩定劑可用作減輕蛋白質變性之滲透物。如本文所用之穩定劑係胺基酸(即並非肽或蛋白質之一部分之游離胺基酸，例如甘胺酸、精胺酸、組胺酸、天冬胺酸、離胺酸)及糖穩定劑，例如糖多元醇(例如甘露醇、山梨醇)及/或二醣(例如海藻糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖)。

如本文所用之術語「穩定劑」之含義不包括用作本發明緩衝劑、抗氧化劑或表面活性劑之藥劑，即使其尤其可展現穩定活性。

在本文中，術語「表面活性劑(surfactant)」係指表面活性劑(surface-active agent)，較佳非離子表面活性劑。本文所用表面活性劑之實例包括聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20(聚氧乙烯(20)去水山梨醇單月桂酸酯)，亦以商標名Tween 20為業內已知)；泊洛沙姆(poloxamer)(例如泊洛沙姆188，其係由側接有兩條聚氧乙烯(聚(環氧乙烷))親水鏈之聚氧丙烯(聚(環氧丙烷))中心疏水鏈構成之非離子三嵌段共聚物，亦以商標名Lutrol F 68為業內已知)。

在本文中，術語「穩定」通常係指組份、通常活性組份或其組合物在保存/儲存期間之物理穩定性及/或化學穩定性及/或生物穩定性。

如本文所用之術語「表面活性劑」之含義不包括用作本發明緩衝劑、抗氧化劑或穩定劑之藥劑，即使其尤其可展現表面活性劑活性。

在本文中，術語「抗氧化劑」係指能夠防止或減少生物醫藥藥物氧化以使其在調配物中穩定之藥劑。抗氧化劑包括自由基清除劑(例如抗壞血酸、BHT、亞硫酸鈉、對胺基苯甲酸、麩胱甘肽或沒食子酸丙酯)、螯合劑(例如EDTA或檸檬酸)或鏈終止子(例如甲硫胺酸或N-乙醯基半胱胺酸)。

如本文所用之術語「抗氧化劑」之含義不包括用作本發明緩衝劑、穩定劑或表面活性劑之藥劑，即使其尤其可展現抗氧化活性。

「稀釋劑」係構成任何液體醫藥組合物中之其餘成份、例如以使得總重量百分比為100%之藥劑。在本文中，液體醫藥組合物係水性醫藥組合物，以使得如本文所用之「稀釋劑」係水，較佳注射用水(WFI)。

在本文中，術語「粒徑」或「孔徑」分別係指給定粒子或孔洞之最長尺寸之長度。兩個大小可使用雷射粒徑分析儀及/或電子顯微鏡(例如穿透式電子顯微鏡(TEM)或掃描電子顯微鏡(SEM))來量測。粒子計數(對於任一給定大小)可使用實例中所概述之方案及設備來獲得，其與不可視粒子之粒子計數相關。

在本文中，術語「約」係指容易地為熟習此技術領域者已知之各別值之一般誤差範圍。本文對「約」值或參數之提及包括(且闡述)關於該值或參數本身之實施例。在懷疑或應無關於某一值或參數之誤差範圍之業內公認常用理解的情形下，「約」意指此值或參數之±5%。

在本文中，與聚醣種類相關之術語「份額%」直接係關於不同種類之數量。舉例而言，術語「該FA2G1具有佔所有聚醣種類25%-41%之份額」意指在50個具有100條重鏈之所分析抗體分子中，25-41條重鏈將展現FA2G1醣基化模式。

應瞭解，對「治療(treating或treatment)」之提及包括預防以及緩和病況之已確立症狀。因此，「治療(treating或treatment)」狀態、病症或病況包括：(1)預防或延遲人類所罹患之狀態、病症或病況之臨床症狀之出現，該人類可患有或易患狀態、病症或病況但尚未經歷或展示狀態、病症或病況之臨床或亞臨床症狀，(2)抑制狀態、病症或病況，即阻止、減輕或延遲疾病之發展或其復發(在維持治療之情形下)或其至少一種臨床或亞臨床症狀，或(3)緩解或減弱疾病，即使狀態、病症或病況或其至少一種臨床或亞臨床症狀消退。

水性抗PD-L1抗體調配物

在第一態樣中，本發明提供新穎水性醫藥抗體調配物，其包含：(i)濃度為1mg/mL至30mg/mL之阿維魯單抗作為抗體；(ii)濃度為5mM至15mM之乙酸鹽或組胺酸作為緩衝劑；(iii)濃度為240mM至320mM之D-甘露醇或海藻糖、或濃度為50mM至150mM之精胺酸HCl及濃度為25mM至75mM之麩胺酸的組合作為穩定劑；(iv)濃度為0.25mg/mL至0.75mg/mL之泊洛沙姆188或聚山梨醇酯 20作為表面活性劑，或不使用表面活性劑；其中調配物不包含甲硫胺酸，且另外，其中調配物具有5.0至6.0、較佳5.0至5.6之pH。

在較佳實施例中，調配物不包含任何抗氧化劑。

在實施例中，該調配物中阿維魯單抗之濃度為約10mg/mL至約20mg/mL。

在另一實施例中，該調配物中乙酸鹽或組胺酸之濃度為約10mM。

在另一實施例中，該調配物中D-甘露醇或海藻糖之濃度為約280mM，或對於精胺酸HCl及麩胺酸之組合，精胺酸HCl之濃度為約150mM且麩胺酸之濃度為約50mM。

在另一實施例中，該調配物中泊洛沙姆188或聚山梨醇酯20之濃度為約0.5mg/mL。

在另一實施例中，該調配物之pH為5.2(±0.1)至5.5(±0.1)。

在較佳實施例中，該調配物包含濃度為約10mM之乙酸鹽，且不包含任何其他緩衝劑。

在另一較佳實施例中，該調配物包含濃度為約280mM之D-甘露醇或海藻糖，且不包含任何其他穩定劑。

在另一較佳實施例中，該調配物包含濃度為約0.5mg/mL之聚山梨醇酯20或泊洛沙姆188，且不包含任何其他表面活性劑。

在實施例中，該調配物包含：(i)濃度為約10mg/mL之阿維魯單抗作為抗體；(ii)濃度為約10mM之乙酸鹽作為緩衝劑；(iii)濃度為約280mM之D-甘露醇或海藻糖作為穩定劑； (iv)濃度為約0.5mg/mL之聚山梨醇酯20或泊洛沙姆188作為表面活性劑；且不包含甲硫胺酸，且具有約5.5之pH。

在較佳實施例中，該調配物包含：(i)濃度為10mg/mL之阿維魯單抗；(ii)濃度為10mM之乙酸鹽；(iii)濃度為280mM之D-甘露醇或海藻糖；(iv)濃度為0.5mg/mL之聚山梨醇酯20或泊洛沙姆188；且具有5.5(±0.1)之pH。

在較佳實施例中，該調配物係由以下組成：(i)濃度為10mg/mL之阿維魯單抗；(ii)濃度為10mM之乙酸鈉三水合物；(iii)濃度為280mM之D-甘露醇或海藻糖；(iv)濃度為0.5mg/mL之聚山梨醇酯20或泊洛沙姆188；(v)用來調節pH之HCl；(vi)水(注射用)作為溶劑；且具有5.5(±0.1)之pH。

在較佳實施例中，該調配物係由以下組成：(i)濃度為10mg/mL之阿維魯單抗；(ii)濃度為10mM之乙酸鈉三水合物；(iii)濃度為280mM之海藻糖二水合物；(iv)濃度為0.5mg/mL之聚山梨醇酯20；(v)用來調節pH之HCl； (vi)水(注射用)作為稀釋劑；且具有5.5(±0.1)之pH。

在更佳實施例中，該調配物係由以下組成：(i)濃度為10mg/mL之阿維魯單抗；(ii)濃度為10mM之乙酸鈉三水合物；(iii)濃度為280mM之D-甘露醇；(iv)濃度為0.5mg/mL之聚山梨醇酯20；(v)用來調節pH之HCl；(vi)水(注射用)作為稀釋劑；且具有5.5(±0.1)之pH。

在另一實施例中，該調配物包含：(i)濃度為約20mg/mL之阿維魯單抗作為抗體；(ii)濃度為約10mM之乙酸鹽作為緩衝劑；(iii)濃度為約280mM之D-甘露醇或海藻糖作為穩定劑；(iv)濃度為約0.5mg/mL之聚山梨醇酯20或泊洛沙姆188作為表面活性劑；且不包含甲硫胺酸，且具有5.2(±0.1)之pH。

在較佳實施例中，該調配物包含：(i)濃度為20mg/mL之阿維魯單抗；(ii)濃度為10mM之乙酸鹽；(iii)濃度為280mM之D-甘露醇或海藻糖；(iv)濃度為0.5mg/mL之聚山梨醇酯20或泊洛沙姆188；且具有5.5(±0.1)之pH。

在較佳實施例中，該調配物包含：(i)濃度為20mg/mL之阿維魯單抗；(ii)濃度為10mM之乙酸；(iii)濃度為280mM之D-甘露醇或海藻糖二水合物；(iv)濃度為0.5mg/mL之聚山梨醇酯20或泊洛沙姆188；(v)用來調節pH之乙酸鈉；(vi)水(注射用)作為稀釋劑；且具有5.2(±0.1)之pH。

在更佳實施例中，該調配物係由以下組成：(i)濃度為20mg/mL之阿維魯單抗；(ii)濃度為10mM之乙酸；(iii)濃度為280mM之D-甘露醇；(iv)濃度為0.5mg/mL之聚山梨醇酯20；(v)用來調節pH之乙酸鈉；(vi)水(注射用)作為稀釋劑；且具有5.2(±0.1)之pH。

在更佳實施例中，該調配物係由以下組成：(i)濃度為20mg/mL之阿維魯單抗；(ii)濃度為10mM之乙酸；(iii)濃度為280mM之海藻糖二水合物；(iv)濃度為0.5mg/mL之聚山梨醇酯20；(v)用來調節pH之乙酸鈉；(vi)水(注射用)作為稀釋劑；且具有5.2(±0.1)之pH。

在更佳實施例中，該調配物係由以下組成：(i)濃度為20mg/mL之阿維魯單抗；(ii)濃度為10mM之乙酸；(iii)濃度為280mM之D-甘露醇；(iv)濃度為0.5mg/mL之泊洛沙姆188；(v)用來調節pH之乙酸鈉；(vi)水(注射用)作為稀釋劑；且具有5.2(±0.1)之pH。

在更佳實施例中，該調配物係由以下組成：(i)濃度為20mg/mL之阿維魯單抗；(ii)濃度為10mM之乙酸；(iii)濃度為280mM之海藻糖二水合物；(iv)濃度為0.5mg/mL之泊洛沙姆188；(v)用來調節pH之乙酸鈉；(vi)水(注射用)作為稀釋劑；且具有5.2(±0.1)之pH。

在較佳實施例中，該調配物係由以下組成：(i)濃度為20mg/mL之阿維魯單抗；(ii)濃度為10mM之乙酸(0.6mg/mL)；(iii)濃度為280mM之D-甘露醇(51mg/mL)；(iv)濃度為0.5mg/mL之聚山梨醇酯20；(v)濃度為7.5mM(0.3mg/mL)之氫氧化鈉； (vi)水(注射用)作為稀釋劑；且具有5.0至5.6、較佳5.2(±0.1)之pH。

在較佳實施例中，後一調配物係藉由組合以下來製得：(i)20mg/mL之阿維魯單抗；(ii)0.6mg/mL之冰乙酸；(iii)51mg/mL之D-甘露醇；(iv)0.5mg/mL之聚山梨醇酯20；(v)0.3mg/mL之氫氧化鈉；(vi)水(注射用)作為稀釋劑；以獲得期望體積之調配物。

在另一實施例中，本發明係關於水性醫藥抗體調配物，其pH係用氫氧化鈉來調節。因此，調配物係由以下組成：濃度為20mg/mL之阿維魯單抗作為活性成份；及冰乙酸、D-甘露醇、聚山梨醇酯20、氫氧化鈉及注射用水作為賦形劑；其中調配物具有5.0至5.6、較佳5.2(±0.1)之pH。

在較佳實施例中，調配物具有270mOsm/kg與330mOsm/kg之間之滲透壓。

在實施例中，如上文所述調配物中之該阿維魯單抗具有圖1a之重鏈序列(SEQ ID NO：1)或圖1b之重鏈序列(SEQ ID NO：2)、圖2之輕鏈序列(SEQ ID NO：3)，且在Asn300上攜帶醣基化，其包含FA2及FA2G1作為主要聚醣種類，總份額佔所有聚醣種類>70%。

在較佳實施例中，在阿維魯單抗醣基化中，該FA2具有佔所有聚醣種類44%-54%之份額，且該FA2G1具有佔所有聚醣種類25%-41%之份額。

在較佳實施例中，在阿維魯單抗醣基化中，該FA2具有佔所有聚醣種類47%-52%之份額，且該FA2G1具有佔所有聚醣種類29%-37%之份額。

在較佳實施例中，在阿維魯單抗醣基化中，該FA2具有佔所有聚醣種類約49%之份額，且該FA2G1具有佔所有聚醣種類約30%-約35%之份額。

在較佳實施例中，阿維魯單抗醣基化進一步包含以下作為次要聚醣種類：佔所有聚醣種類之份額<5%之A2、佔所有聚醣種類之份額<5%之A2G1、佔所有聚醣種類之份額<5%之A2G2及佔所有聚醣種類之份額<7%之FA2G2。

在較佳實施例中，在阿維魯單抗醣基化中，該A2具有佔所有聚醣種類3%-5%之份額，該A2G1具有佔所有聚醣種類<4%之份額，該A2G2具有佔所有聚醣種類<3%之份額，且該FA2G2具有佔所有聚醣種類5%-6%之份額。

在較佳實施例中，在阿維魯單抗醣基化中，該A2具有佔所有聚醣種類約3.5%-約4.5%之份額，該A2G1具有佔所有聚醣種類約0.5%-約3.5%之份額，該A2G2具有佔所有聚醣種類<2.5%之份額，且該FA2G2具有佔所有聚醣種類約5.5%之份額。

在實施例中，如上文所述調配物中之該阿維魯單抗具有圖1b之重鏈序列(SEQ ID NO：2)。

在實施例中，如上文所述之阿維魯單抗調配物用於靜脈內(IV)投與。

藥物遞送裝置

在本發明之第二態樣中提供藥物遞送裝置，其包含如本文所定義之液體醫藥組合物。適宜地，藥物遞送裝置包含醫藥組合物駐留於其內之室。適宜地，藥物遞送裝置係無菌的。

藥物遞送裝置可為瓶、安瓿、注射器、注射筆(例如基本上納入注射器)或i.v.(靜脈內)袋。

水性醫藥調配物係非經腸投與、較佳經由皮下注射、肌內注射、i.v.注射或i.v.輸注來投與。最佳投與方式係i.v.輸注。

在較佳實施例中，藥物遞送裝置係含有如上文所述調配物之瓶。

在更佳實施例中，該瓶含有於10mL溶液中濃度為20mg/mL之200mg阿維魯單抗。

在甚至更佳實施例中，瓶係玻璃瓶。

醫學治療

在第三態樣中，本發明提供治療癌症之方法，其包含向患者投與如上文所述之調配物。

在實施例中，欲治療之癌症選自非小細胞肺癌、泌尿上皮癌、膀胱癌、間皮瘤、默克細胞癌、胃或胃食道接合部癌、卵巢癌、乳癌、胸腺瘤、胃腺癌、腎上腺皮質癌、頭頸部鱗狀細胞癌、腎細胞癌、黑色素瘤及/或經典霍奇金氏淋巴瘤(classical Hodgkin’s lymphoma)。

縮寫

實例 用於測定穩定性之方法

為評價所測試抗體調配物之穩定性且選擇最佳候選者，根據以下方案測定作為穩定性參數之熱應力、機械應力、光曝露、滲透壓、濁度、蛋白質含量、總聚集物、片段化、pH、同種型、圓二色性、不可視粒子及生物活性：

熱應力：

在40℃下：將原始瓶容器中之樣品於恒溫櫃中於40℃±2℃之溫度(RH 75%±5%)下培育且在預定時間點抽出。

在25℃下：將原始瓶容器中之樣品於恒溫櫃中於25℃±2℃之溫度(RH 60%±5%)下培育且在預定時間點抽出。

機械應力：

將原始瓶容器中之樣品置於定軌振盪器上，在300rpm下維持高達24小時(室溫)。

光曝露：

將原始瓶容器中之樣品曝露於光源下達7小時，將Suntest機器中之輻照度值調節至765W/m²(輻射波長介於320nm與800nm之間)。

滲透壓：

正常人類血漿具有約280mOSm/kg之滲透壓(Medical Physiology-Principles for Clinical Medicine.由Rodney A.Rhoades PhD、David R.Bell PhD編輯)。一般而言，在研發非經腸調配物時，欲靶向滲透壓接近300mOsm/kg之溶液。可接受之範圍(根據產品說明書)為250-400mOsm/kg。

在此處，滲透壓係藉由冰點降低法測定添加溶質後水溶液之凝固點下降來確定。溶質之量及因此所觀察到之滲透壓值與所觀察到之複合溶液之凝固點下降成比例。

濁度：

溶液之濁度係使用能夠量測散射或減弱的光之濁度計(Hach Lange型號2100AN)來測定。藉由870±30nm發光二極體(LED)總成照亮對比體積比色管中之約3mL溶液。檢測器監測散射光且藉由與一系列已知濁度之標準品比較來提供溶液之濁度(NTU)。

蛋白質含量：

蛋白質含量係經由溶液(用相關緩衝液稀釋至約0.5mg/mL蛋白質濃度)在280nm及320nm下在1cm路徑長度石英比色管中之光學密度來測定。假設莫耳消光係數為1.46cm²/mg，則藉由應用下式來獲得蛋白質濃度：(A280-A320)/(1.46cm²/mg×1cm)。

總聚集物：

聚集物之量係藉由SE-HPLC方法來測定。在保持在22℃±5℃之溫度下之TSK凝膠Super SW3000 4.6mm×30cm(代碼18675)中以0.35mL/min之流速(移動相為50mM磷酸鈉+0.4過氯酸鈉，pH 6.3±0.1)注射20μL之樣品體積(樣品用PBS稀釋至約0.5mL)。在214nm下進行UV檢測。

片段化：

藉由生物分析儀來測定低分子物質(或片段)。在介於1.25-3.75mg/mL之間之濃度(用純水進行稀釋)下分析樣品。合併每一稀釋樣品之3μL與2μL相應樣品緩衝液(在還原條件下實施測試時藉由添加DTT)及1μL 60mM馬來醯亞胺溶液。在70℃下將樣品加熱5分鐘，然後添加84μL純水且將溶液渦旋並旋轉沉降。將6μL裝載至晶片(0.25-0.75μg蛋白質)上。將晶片置於Agilent 2100生物分析儀中且在後續5分鐘內起始分析。

同種型：

藉由iCE來測定同種型分佈。使用Fc包覆之毛細管柱(內徑為100mm且長50mm)。使用0.1%甲基纖維素中之100mM NaOH溶液作為陰極溶液及0.1%甲基纖維素中之80mM o-磷酸作為陽極溶液來實施分離。自80μL主混合物溶液(藉由混合700μL 0.1%甲基纖維素、10μL Pharmalyte 5-8、70μL Pharmalyte 8-10.5、10μL 7.65pI標記物及10μL 9.77pI標記物來獲得)開始、向其中添加適宜體積之經洗滌阿維魯單抗樣品(在洗滌以移除調配物組份後對應於200μg蛋白質)來製備樣品。添加對應於(120μL-在先前步驟添加之經洗滌阿維魯單抗樣品之體積)的量之純水。在280nm之檢測波長下設定預聚焦及聚焦時間分別為1分鐘及15分鐘且預聚焦及聚焦電壓分別為1500V及3000V來實施分離。在1000mBar之壓力下注射樣品。

pH：藉由習用電位滴定法來測定。

圓二色性(CD)：

使用Jasco之CD分光偏光計(型號J810)在近UV範圍內(320-250nm)實施對阿維魯單抗三級結構之研究。用純水將樣品稀釋至1.5mg/mL蛋白質濃度，且填充於1cm路徑長度之石英比色管中後，在室溫、以20nm/min之掃描速度、0.5nm之數據步長(data pitch)、8s之積分時間及標準靈敏度分析。

不可視粒子：

經由光遮蔽方法之技術使用Pamas SVSS-C粒子計數器計數不可視粒子。用純水將樣品稀釋5倍以獲得至少25mL之最終體積來測試。

生物活性：

對於實例5中所述之長期穩定性研究，量測生物活性作為另一穩定性參數。

所用方法係基於吸收於ELISA板上之阿維魯單抗以劑量依賴性方式結合存在於細胞系HEK-293上其抗原PD-L1(hPDL1，用PD-L1永久轉染)的能力。所用劑量為400ng/mL、200ng/mL、100ng/mL、50ng/mL、25ng/mL、12.5ng/mL、6.25ng/mL及3.12ng/mL。由所獲得之數據計算EC₅₀值。樣品之生物活性(功效)表示為樣品之生物活性對標準品之百分比且計算如下：功效(樣品)[%]=(EC₅₀(樣品)/EC₅₀(標準品))* 100.7。

製造方法

本發明亦提供一種製造如本文所定義之水性醫藥調配物之方法。該方法適宜地包含以認為適宜之任何特定順序將形成水性醫藥調配物所需之任何相關組份混合在一起。熟習此項技術者可能提及業內所熟知用於形成水性醫藥調配物之實例或技術(尤其用於經由注射器注射或靜脈內輸注者)。

該方法可涉及首先製備不包括阿維魯單抗之一些或所有組份(視情況與一些或所有稀釋劑)之預混合物(或預溶液)，且然後可將阿維魯單抗自身(視情況與一些稀釋劑一起或預溶解於一些稀釋劑中)與預混合物(或預溶液)混合以提供水性醫藥調配物，或然後將最終組份添加至組合物中以提供最終水性醫藥調配物。較佳地，該方法涉及形成緩衝液系統，適宜地包含如本文所定義之緩衝劑之緩衝液系統。緩衝液系統適宜地在添加阿維魯單抗之前形成於預混合物中。緩衝液系統可經由簡單地混合緩衝劑(以現成供應)與其共軛酸/鹼(適宜地以相對適宜之量以提供期望pH，此可由熟習此項技術者憑經驗或實驗方式測定)來形成。在乙酸鹽緩衝液系統之情形下，此意指例如混合乙酸鈉與HCl、或混合乙酸與NaOH或乙酸鹽。可藉由添加所需量之鹼或酸或所需量之緩衝劑或共軛酸/鹼來慎重地調節最終水性醫藥調配物之任一預混合物之pH。

在某些實施例中，使緩衝劑及/或緩衝液系統預形成為單獨混合物，且經由緩衝液交換(例如使用滲濾直至達到相關濃度或滲透壓為止)將緩衝液系統轉移至水性醫藥調配物之前體(包含除緩衝劑及/或緩衝液系統外之一些或所有組份，適宜地包含阿維魯單抗及可能地僅阿維魯單抗)。此後若需要可添加其他賦形劑以產生最終液體醫藥組合物。可在存在所有組份之後立即或之前來調節pH。

可將任何、一些或所有組份預溶解於稀釋劑中或與其預混合，然後與其他組份混合。

可適宜地過濾最終水性醫藥調配物以移除微粒物質。適宜地，過濾係經由大小等於或小於1μm、適宜地等於0.22μm之濾器來進行。適宜地，過濾係經由PES濾器或PVDF濾器、適宜地利用0.22μm PES濾器來進行。

熟習此項技術者熟知可如何使用水性醫藥調配物來製備IV溶液，以使得可靜脈內投與抗體原料藥。

IV溶液之製備通常係由以下步驟組成：用塑膠注射器(PP)及針自鹽水袋(例如0.9%或0.45%鹽水)抽出一定量之溶液，及用水性醫藥調配物替代。所替代溶液之量將端視患者之體重而定。

實例1-阿維魯單抗之結構 1.1 一級結構

阿維魯單抗係具有兩個重鏈及兩個輕鏈分子之IgG。雙鏈之胺基酸序列顯分別示於圖1a(SEQ ID NO：1)/1b(SEQ ID NO：2)及2(SEQ ID NO：3)中。

1.2 二級結構

使用LC-MS及MS/MS方法來確認分子之完整鏈及蛋白質之轉譯後修飾之存在。阿維魯單抗分子亞單位之二級結構顯示於圖3中。

如藉由胰蛋白酶消化獲得之肽之UPLC-Q-TOF質譜所確認，二硫鍵Cys21-Cys96、Cys21-Cys90、Cys147-Cys203、Cys138-Cys197、Cys215-Cys223、Cys229-Cys229、Cys232-Cys232、Cys264-Cys324及Cys370-Cys428形成9個典型IgG鍵結模式。

1.3 醣基化

該分子含有在重鏈之Asn300上之N-醣基化位點。如藉由肽映射所確定，藉由MALDI-TOF鑑別之主要結構係含有0個半乳糖殘基(G0F)、1個半乳糖殘基(G1F)或2個半乳糖殘基(G2F)之複雜二等分型核心岩藻糖基化寡醣。主要種類為G0F及G1F。

已藉由HILIC-UPLC-ESI-Q-TOF來分析由2-胺基苯甲醯胺螢光標記之阿維魯單抗聚醣。圖4顯示所發現聚醣之UPLC概況。

表示聚醣結構單元之幾何形狀對應於以下分子實體：Man △Fuc ○Gal □GalNAc GlcNAc ◇NANA NGNA

Man：甘露糖，Fuc：岩藻糖，Gal：半乳糖，GalNAc：N-乙醯基半乳胺糖，NANA：唾液酸，NGNA：N-羥乙醯基神經胺酸

所用聚醣命名遵循如由Harvey等人提出之Oxford Notation(Proteomics 2009,9,3796-3801)。在含有岩藻糖之種類(FA2、FA2G1、FA2G2)中，Fuc-GlcNAc連接為α1-6。在具有末端GlcNAc之種類中，GlcNAc-Man連接為β1-2。在含有半乳糖之種類中，Gal-GlcNAc連接為β1-4。

所報告層析譜已經積分且產生阿維魯單抗之聚醣種類分佈，如表2a中所顯示。

聚醣映射分析確認藉由肽映射所實施之鑑別(其允許鑑別兩個主要聚醣種類)，另外第二及次要種類亦藉由特異性針對聚醣分析之此方法來表徵。

在另一量測中，觀察到以下聚醣種類分佈

實例2-DoE1篩選

在10mg/mL阿維魯單抗下篩選DoE1之初次實驗設計評價若干因素(例如不同緩衝液類型/pH、賦形劑、表面活性劑類型及相關濃度)之影響。該研究可選擇可最大化蛋白質穩定性之最佳條件。

在DoE1中，對於研究將以下因素考慮在內：

- 緩衝液類型及pH：欲在5.0-6.0之pH範圍內評估之乙酸鹽、檸檬酸鹽及組胺酸緩衝液。

- 賦形劑：考慮3種不同賦形劑以給出關於糖/多元醇或胺基酸對於在調配物中複合是否較佳之指示，

- 表面活性劑類型及濃度：欲在不同濃度(0-1mg/mL)下評估之兩種替代性表面活性劑(Tween 20及泊洛沙姆188)。

該研究係在DIN6R瓶(Schott)中在10mg/mL之蛋白質濃度下以8mL 之填充體積(80mg/瓶)來實施。

表3圖解說明所研究DoE1調配物之選擇。

DoE1允許進行適宜緩衝液/pH、賦形劑類型及表面活性劑類型之選擇以用於實例3中所述之後續DoE2研究。

(1)對應於280mM

(2)對應於150mM

(3)對應於50mM

(4)WO2013079174中所揭示之調配物

2.1 製造

藉由在三種緩衝液中切向流過濾(使用具有10kDa截止值之Pellicon XL Biomax盒)對預調配原料藥(DS)(10(±1)mg/mL阿維魯單抗、1.36mg/mL乙酸鈉三水合物、51mg/mL D-甘露醇、0.21mg/mL L-甲硫胺酸，鹽酸調節至pH 5.5)進行緩衝液交換：10mM乙酸鈉pH 5.0、10mM檸檬酸鈉pH 5.0及10mM組胺酸pH 5.75，直至達成三倍體積交換。在每一步驟下，用相關緩衝液將DS溶液稀釋5倍。經交換DS材料中之最終目標蛋白質濃度為>10mg/mL。然後將所需賦形劑添加至相關緩衝液交換之DS材料中，將pH及最終溶液重量調節至目標以獲得表3中所列示之DP組合物。

各成份至經交換DS溶液中之添加序列如下：將D-甘露醇或海藻糖二水合物或精胺酸HCl+麩胺酸添加至經交換DS溶液中，攪拌直至完全溶解，添加L-甲硫胺酸且攪拌直至完全溶解(僅用於參照物)，添加泊洛沙姆188或聚山梨醇酯20(50mg/mL原液)，攪拌直至完全溶解，檢查pH且用氫氧化鈉調節至目標。

將藥品(DP)溶液填充(8mL)於DIN6R瓶(Schott)中。

在DS滲濾過程期間之目視檢查揭露，當在乙酸鈉與組胺酸緩衝液中進行交換時，檸檬酸鈉緩衝液引起通常較高之乳光，同時獲得顯著較澄清之溶液。

在表4中，顯示經實施以測定在緩衝液交換後三種DS材料之蛋白質回收率、滲透壓(Osmomat 030/D,Gonotec)及濁度之實驗之結果。獲得令人滿意之蛋白質回收率(>89%)及最終滲透壓值(<61mOsm/kg)。濁度分析確認在檸檬酸鈉中交換之DS之較高乳光。

2.2.滲透壓

與DoE1篩選相關之DP調配物之滲透壓值包含在299-396mOsm/kg範圍內，且大部分調配物具有低於約360mOsm/kg之滲透壓。

量測係在完成製造後之時間0時實施。

所獲得之值與目標(可接受範圍250-400mOsm/Kg)一致。含有海藻糖二水合物之溶液因此成份對凝固點之效應而顯示較高值(接近400mOsm/kg)及後續(表觀)滲透壓升高。

2.3 熱應力 2.3.1 蛋白質含量

如藉由OD量測所測定，時間0含量值與理論值(10mg/mL)一致。在40℃下1個月後觀察到無顯著變化。

2.3.2 總聚集物

藉由SE-HPLC測定在時間0及在40℃儲存2週及4週後之總聚集物DoE1調配物。

可突出顯示在40℃下熱應力後聚集物無統計學上顯著之變化，由此指示所測試之不同基質之聚集模式產生不變/可忽略之變化。

2.3.3 片段化

藉由生物分析儀(2100生物分析儀，Agilent)測定在時間0及在40℃下儲存2週及4週後DoE1調配物之片段化。

數據指示：

- pH係在40℃下蛋白質片段化之關鍵因素。在pH>5.75時，片段化往往顯著增加(最通常在DoE1-13至DoE1-19之調配物中，在檸檬酸鹽及組胺酸緩衝液中)。

- 呈現片段化之最小變化之調配物係在5.0-5.75之pH範圍內、較佳在D-甘露醇或海藻糖二水合物存在下之彼等(DoE1-2-8-9-10-12)。

- 調配物DoE1-7(檸檬酸鹽緩衝液pH 5.25，在D-甘露醇及Tween 20存在下)呈現具有一致峰倍增之異常譜(除在製造期間已突出顯示之問題及濁度/乳光增加外，關於片段化之一些問題可能與使用檸檬酸鹽作為緩衝劑相關)。

2.3.4 濁度

藉由比濁法測定在時間0及在40℃下儲存2週及4週後DoE1調配物之濁度。

在含有檸檬酸鹽作為pH緩衝劑之所有DP調配物中一致地觀察到乳光/強乳光。

發現乙酸鈉及組胺酸中之所有調配物皆係澄清/稍有乳光的，且觀察到在40℃下儲存1個月期間無顯著變化。

2.3.5 pH

觀察到pH無變化。

2.4 機械應力

使DoE1調配物在瓶中在300rpm(室溫)下經受24小時迴轉式振盪。在應力終止後，測試樣品之聚集物及乳光。

2.4.1 總聚集物

藉由SE-HPLC測定機械應力後之總聚集物且與時間0結果進行比較。觀察到可忽略之變化。

2.4.2 濁度

藉由比濁法(2100AN IS,Hach Lange)測定機械應力後DoE1調配物之濁度且與時間0結果進行比較。藉由ANOVA評估數據且觀察到源自表面活性劑存在之中等顯著之影響(0.01<p值<0.05)。Tween 20或泊洛沙姆188可有助於最小化機械應力後之濁度變化。

2.5 光曝露

使DoE1調配物經受7小時765W/m²之輻照(Suntest CPS,Atlas)。在光應力終止後，測試樣品之聚集物、乳光、pH及同種型譜。

2.5.1 總聚集物

最通常在使用檸檬酸鈉緩衝液時，使用SE-HPLC(Alliance,Waters)觀察到稍小變化(p值<0.01)。

乙酸鈉及組胺酸係較佳緩衝液以最小化聚集變化。

2.5.2 濁度

如藉由比濁法所測定，通常在pH值>5.75之檸檬酸鹽緩衝液中發現最明顯的濁度增加(DoE1-13及DoE1-16及DoE1-17)。

2.5.3 pH

觀察到無變化。

2.6 DoE1：結果

評估在熱、機械及光應力背景下獲得之數據以確定提供針對應力之最大蛋白質抗性之條件。

該分析之結果報告於表5中。

亦報告，外推調配物以綠色突出顯示(ID編號=外推)，而在所測試彼等之背景下最相似之調配物係DoE1-4。

該等數據展示，乙酸鹽緩衝液pH 5.0-5.5提供經改良之蛋白質穩定性，且存在濃度高於0.2mg/mL之表面活性劑(例如Tween 20或泊洛沙姆188)對調配物中經改良之蛋白質穩定性亦至關重要。

實例3

第二DoE篩選「DoE2」旨在微調在DoE1完成後選擇之調配物且同時使蛋白質濃度增加至20mg/mL。

利用此第二調配物篩選，在10mM乙酸鈉緩衝液(pH 5.2)存在下在熱應力(在40℃下1個月、在25℃及2℃-8℃下8週)及機械振盪(在300rpm、室溫下24小時)後，測試賦形劑(D-甘露醇、海藻糖二水合物)及表面活性劑(無表面活性劑、0.5mg/mL之泊洛沙姆188或聚山梨醇酯20)不同之20mg/mL蛋白質濃度之6種調配物。相關組合物列示於表6中。

實施DoE2研究以比較方式評估在乙酸鈉緩衝液(pH 5.2)中在20mg/mL之增加的蛋白質濃度下D-甘露醇對海藻糖二水合物之效應及表面活性劑(Tween 20或泊洛沙姆188或無表面活性劑)之影響。在設計中已納入兩個pH 5.5參照樣品：含有L-甲硫胺酸之「參照物」及不含L-甲硫胺酸之參照調配物，此對應於DoE1-8。

3.1 製造

使用預調配原料藥(DS)(27.1mg/mL阿維魯單抗於10mM乙酸鈉pH 5.5中)。然後將所需賦形劑添加至DS材料中。

成份至DS溶液中之添加序列如下：添加D-甘露醇或海藻糖二水合物，攪拌直至完全溶解，添加泊洛沙姆188或聚山梨醇酯20(20mg/mL原液)，攪拌直至完全溶解，添加L-甲硫胺酸且攪拌直至完全溶解(僅用於參照物)，攪拌直至完全溶解，檢查pH且用氫氧化鈉或稀乙酸調節至目標。

用相關緩衝液將溶液之重量調節至目標以獲得表7中所列示之DP組合物。

將DP溶液填充(8mL)於DIN6R瓶中。

3.2 熱應力 3.2.1 蛋白質含量

觀察到在40℃下4週(表7)及在25℃下8週(表8)期間蛋白質含量(OD,Lambda 35,Perkin Elmer)無變化。

3.2.2 總聚集物

在40℃及25℃下之穩定性期間藉由SE-HPLC測定之總聚集物分別表示於圖6及7中。僅觀察到少量不顯著之聚集變化。

3.2.3 藉由生物分析儀測定之片段化

評估在40℃下1個月期間及在25℃下2個月後之片段。相關結果分別顯示於圖8及圖9中。

在40℃下，除在1個月後呈現高於7%之片段量之調配物DoE2-1外，觀察到其他調配物具有類似行為(在1個月後片段為4%-6%)，且調配物DoE2-4、DoE2-5及DoE2-6具有稍佳性能(在40℃下1個月後片段為4.0%-4.5%)。

在25℃下，在2個月後發現相似的片段化百分比(4.6%-6.1%)。

3.2.4 同種型譜

藉由iCE280(Fast IEF分析儀，Convergent Bioscience)測定在時間0及在40℃下儲存4週後DoE2調配物之同種型譜。在40℃下儲存後通常可測得酸性簇增加，同時觀察到鹼性同種型之同步減少。

評估在40℃下1個月期間(表9)及在25℃下8週後(圖10)之同種型譜。

在兩種應力條件下在所有樣品中觀察到相當變化。

3.2.6 濁度

在40℃下1個月後(表8)及在25℃下2個月後(表9)後觀察到無變化。

3.2.7 pH

在40℃下1個月後(表12)及在25℃下2個月後(表13)觀察到無變化。

3.2.8 圓二色性

收集在時間0及在40℃下4週及在25℃下8週後DoE2調配物在近UV範圍內之CD光譜(J-810分光偏光計，Jasco)。

在40℃下4週及在25℃下8週後，所有調配物中之蛋白質通常保留其三級結構。

3.2.9 不可視粒子

測定在2℃-8℃下儲存8週後DoE2調配物之不可視粒子。結果顯示於表14中。發現該等值在歐洲藥典限值(European Pharmacopoeia limit)內(對於標稱含量小於100mL之容器中所供應之溶液)。

3.3 機械應力 3.3.1 藉由生物分析儀測定之片段化

在300rpm下24小時後，在所有樣品中觀察到片段稍有變化(表15)(至多5.0%-6.5%)且與所測試之特定組合物無特定關聯。

3.3.2 聚集物

在機械振盪後觀察到無變化(表16)。

表16：在24小時振盪(300rpm；室溫)後藉由SE-HPLC測定之DoE2調配物之聚集物(%)

3.3.3 pH

在機械振盪後觀察到無變化(表17).

3.4 濁度

在機械振盪後觀察到無變化(表18)。

3.5 DoE2：結果

該等結果展示，pH 5.2(自DoE1外推而來)並不影響片段化且因此適用於穩定調配物中。展示保留蛋白質穩定性之最佳pH介於5.0-5.5範圍內(DoE1)。相比之下，5.6-5.7之pH值可產生較高片段化。

甘露醇及海藻糖二水合物產生相似行為。

發現泊洛沙姆188並不優於Tween 20。

該等結果亦展示，在DoE2調配物中較高蛋白質濃度(20mg/mL)係可行的且無所觀察到或預期的穩定性問題。

DoE2：比較調配物3(該調配物最佳且最終經選擇在20mg/mL下進一步使用)與參照調配物在時間0、在40℃下4週及在25℃下8週後之同種型譜，以評估兩種調配物之間在不同條件下在穩定性時間期間是否存在不同行為。結果呈現於表19中。

關於參照調配物，在25℃下之另一時間點(8週)亦突出顯示相對於參照調配物無源自pH降低之主要問題。

實例4-抗氧化劑(L-甲硫胺酸)之效應

由於在WO2013079174中所揭示之調配物中使用甲硫胺酸，故本發明阿維魯單抗調配物研發亦旨在闡明此化合物作為抗氧化劑之影響。

用200μL 6% H₂O₂將10mg/mL樣品(來自DoE1組)稀釋2倍，以獲得約5mg/mL之最終蛋白質濃度及3% H₂O₂，且然後在5℃下培育3h。在培育結束時，藉由超速離心使用Amicon Ultra(Millipore)4mL 10kDa用水來洗滌樣品(每一步驟用1mL洗滌4次)。Amicon處理後之最終蛋白質濃度為約10mg/mL。

DoE1：調配物8與DoE2之參照調配物相同，只是存在L-甲硫胺酸：用H₂O₂(在2℃-8℃下3小時)強制氧化兩種調配物，且隨後藉由iCE280(在電泳圖中，氧化通常可使更具酸性之物質增加)及生物分析儀測試旨在確定兩種調配物中所出現之任何差別是否歸因於抗氧化劑之存在。結果呈現於表20及21中。

表20：在強制氧化處理後藉由iCE280測定之DoE1調配物8及參照調配物之同種型譜。上表：樣品儲存在2℃-8℃下。下表：樣品儲存在40℃

對於兩種調配物(含或不含甲硫胺酸)觀察到相當酸性簇豐度。

亦藉由生物分析儀測試該等樣品之片段(表21)：對兩種調配物(含或不含甲硫胺酸)觀察到相當片段化程度。

該等結果表明，無需抗氧化劑來穩定阿維魯單抗且因此可自調配物省略。

實例5-長期穩定性研究 5.1 藥品組合物及強度

製造表22中所列示之阿維魯單抗調配物1、2、3、4及5且將其用於長期穩定性研究。製造製程包括複合，然後經由0.22μm膜(測試PES及PVDF濾器)進行滅菌雙重過濾步驟，最後填充於瓶中。

調配物5對應於如實例2及3中所述亦用於DoE-1及DoE-2研究中之參照物。

在製造(時間0)時，測定滲透壓且發現與預期值一致(範圍：320-350mOsm/kg)。

5.2 穩定性研究計劃及持續時間

關於調配物之穩定性，研究時間表、儲存條件及欲施加之測試概述於表23中。對於每一時間點，該表指示欲測試之儲存條件。

樣品之儲存已使用直立位置之瓶來實施。

欲在40℃下1個月、在加速條件下6個月(在25℃下)及在長期條件下12個月(2℃-8℃)期間實施該研究。

在40℃(直至1個月)、25℃(直至6個月)及2℃-8℃(直至12個月)下收集數據。

5.3 在2℃-8℃下之穩定性 5.3.1 藉由目視檢查之著色度

觀察到在穩定性期間無變化。所有溶液仍比最澄清標準溶液(<Y7)更澄清。各值皆在規格內。

5.3.2 藉由比濁法測定之乳光度

所有溶液顯示包含在澄清溶液範圍(1-3NTU)內之濁度。各值皆在規格內。

5.3.3 pH

觀察到在穩定性期間無變化。所有溶液顯示pH值與目標一致(對於調配物1至4為5.2±0.1且對於參照DP為5.5±0.1)。各值皆在規格內。

5.3.4 藉由OD測定之蛋白質含量

發現在研究期間調配物1及2之濃度(目標濃度=20mg/mL)介於18.7-19.8mg/mL範圍內(相對於目標在±10%限值內)，且不隨時間顯著變化。

發現在研究期間調配物3及4及參照DP之濃度(目標濃度=10mg/mL)介於9.3-10.2mg/mL範圍內；發現無顯著變化。

因此，蛋白質含量在2℃-8℃之12個月穩定性期間保持不變(各值皆在規格內)。

5.3.5 藉由SE-HPLC測定之二聚體及HMWs

在2℃-8℃下12個月期間相對於時間0聚集無變化。各值皆在規格內。

5.3.6 藉由非還原性SDS-PAGE測定之片段(LMWs)

如圖11中所顯示，樣品顯示藉由非還原性SDS-PAGE測定之LMWs之時間0值於11.9%-16.2%範圍內，然後在下一點(8週)增加+5%-7%且在剩餘穩定性期間較小變化直至6個月。

5.3.7 不可視粒子

關於每個容器之不可視粒子，計數低於美國、歐洲及日本藥典對於標稱含量小於100mL之輸注或注射用溶液所設定之限值(對於等於或大於10μm為6000/容器且對於等於或大於25μm為600/容器)。對於不可視粒子10μm及不可視粒子25μm，兩個粒徑範圍之相關條形圖分別顯示於圖12及圖13中。

突顯不可視粒子在儲存時無變化。

5.3.8 生物活性

對於穩定性研究進程中所測試之所有時間點，生物活性值通常介於 89%-110%範圍內。觀察到在儲存後未減小。

5.3.9 同種型模式

來自iCE280實驗之結果報告於圖14(酸性簇，峰1-2-3-4之和)、圖15(主峰)及圖16(鹼性簇，峰6-7之和)中。在整個12個月穩定性時段內保持同種型譜。在冷藏條件下，觀察到pH對抗體之同種型無影響。

5.3.10 2℃-8℃穩定性結果

發現在2℃-8℃下之12個月穩定性期間所測試5種調配物之物理-化學性質皆未經歷顯著變化。同種型模式尤其令人驚奇，此乃因調配物1至4不存在甲硫胺酸。

5.4 在25℃下之穩定性 5.4.1 藉由目視檢查之著色度

5.4.2 藉由比濁法測定之乳光度

所有溶液顯示包含在1-3NTU(澄清溶液範圍)之間之濁度。各值皆在規格內。

5.4.3 pH

觀察到在穩定性期間無變化。所有溶液顯示pH值與目標一致(對於調配物1-2-3-4為5.2±0.1且對於參照DP為5.5±0.1)。各值皆在規格內。

5.4.4 藉由OD測定之蛋白質含量

發現在研究期間調配物1及2之濃度(目標濃度=20mg/mL)介於18.5-20.0mg/mL範圍內(相對於目標在±10%限值內)，且不隨時間顯著變化。

發現在研究期間調配物3及4及參照DP之濃度(目標濃度=10mg/mL) 介於9.5-10.0mg/mL範圍內；發現無顯著變化。

因此，蛋白質含量在25℃下之6個月穩定性期間保持不變。各值皆在規格內。

5.4.5 藉由SE-HPLC測定之二聚體及HMW

在25℃下6個月期間聚集相對於時間0無變化。在整個研究中發現聚集低於規格限值(不大於5%)。

5.4.6 藉由非還原性SDS-PAGE測定之片段(LMW)

樣品顯示藉由非還原性SDS-PAGE測定之LMW之時間0值介於11.9%-16.2%範圍內，然後在下一點(4週)逐步增加，隨後在剩餘穩定性期間較小變化直至6個月(圖17)。

5.4.7 不可視粒子

關於每個容器之不可視粒子，計數低於由美國、歐洲及日本藥典對於標稱含量小於100mL之輸注或注射用溶液所設定之限值(對於等於或大於10μm為6000/容器且對於等於或大於25μm為600/容器)。相關條形圖顯示於圖18及圖19中。

突出顯示不可視粒子在25℃下之穩定性後無變化。

5.4.8 生物活性

對於穩定性研究進程中所測試之所有時間點，生物活性值通常介於90%-110%範圍內。觀察到在25℃下之穩定性後未減小。

5.4.9 同種型模式

來自iCE280實驗之結果報告於圖20(酸性簇，峰1-2-3-4之和)、圖21(主峰)及圖22(鹼性簇，峰6-7之和)中。

酸性簇往往在25℃下儲存期間增加。所有樣品顯示在25℃下6個月後約+10%之酸性簇增加以及主峰(在6個月後-5%)及鹼性簇(在6個月後-5%)之同步減少。

5.4.10 25℃穩定性結果

關於在25℃下之6個月穩定性，所測試之5種調配物顯示蛋白質含量、外觀、澄清度、pH、聚集物、不可視粒子及生物活性相對於時間0無變化。

根據非還原性SDS-PAGE發現在25℃下6個月後片段增加+5%，而藉由生物分析儀突出顯示無統計學上顯著之變化。

藉由iCE280測定之同種型譜之相似行為：所有調配物之酸性簇往往在6個月研究期間增加+10%，而主峰及鹼性簇同步減少。

5.5 在40℃下之穩定性 5.5.1 藉由目視檢查之著色度

觀察到在穩定性期間無變化。所有溶液仍比最澄清標準溶液(<Y7)更澄清。

5.5.2 藉由比濁法測定之乳光度

觀察到在穩定性期間無變化。所有溶液顯示包含2NTU(澄清溶液範圍)之濁度。各值皆在規格內。

5.5.3 pH

5.5.4 藉由OD測定之蛋白質含量

發現在研究期間調配物1及2之濃度(目標濃度=20mg/mL)介於18.0-19.0mg/mL範圍內(相對於目標在±10%限值內)，且無蛋白質隨時間損失之傾向。

發現在研究期間調配物3及4及參照DP之濃度(目標濃度=10mg/mL)介於9.5-10.0mg/mL範圍內，且無蛋白質隨時間損失之傾向。各值皆在規格內。

總而言之，在所測試條件(在40℃下直至1個月)下熱應力對蛋白質含量無害。

5.5.5 藉由SE-HPLC測定之二聚體及HMW

突出顯示在1個月後聚集無主要變化。在1個月後所有值皆低於1%總聚集物(低於不大於5%之規格限值)。

5.5.6 藉由非還原性SDS-PAGE、生物分析儀測定之片段(LMW)

鑒於非還原性SDS-PAGE方法之可變性(例如測得DP 01-190214及DP 02-190214之時間0值分別為11.9及14.5)，可推斷出在研究期間在40℃下未發生主要變化(圖23)。

5.5.7 不可視粒子

關於每個容器之不可視粒子，計數低於由美國、歐洲及日本藥典對於標稱含量小於100mL之輸注或注射用溶液所設定之限值(對於等於或大於10μm為6000/容器且對於等於或大於25μm為600/容器)。相關條形圖顯示於圖24及圖25中。

突出顯示在熱應力後不可視粒子無變化。

5.5.8 生物活性

對於穩定性研究進程中所測試之所有時間點，生物活性值通常介於99%-120%範圍內。在熱應力後在樣品中觀察到未減小。

5.5.9 同種型模式

來自iCE280實驗之結果報告於圖26(酸性簇，峰1-2-3-4之和)、圖27(主峰)及圖28(鹼性簇，峰6-7之和)中。

酸性簇往往在40℃下儲存期間增加。

主峰變化(圖27)確認10mg/mL之新調配物稍佳之穩定性及其餘組合物之一致行為。

利用鹼性簇測定獲得之結果確認上述結果。

直至兩週，在5種組合物中觀察到相似行為。在較高穩定性時間下，在20mg/mL與10mg/mL阿維魯單抗DP之間出現稍微不同(在10mg/mL下在調配物中具有稍佳之抗性)。

5.5.10 40℃穩定性結果

在40℃(1個月)下，所測試之5種調配物顯示蛋白質含量、外觀、澄清度、pH、聚集物、不可視粒子及生物活性相對於時間0無變化。

iCE280突出顯示10mg/mL與20mg/mL DP調配物之間之較小差別(酸性簇往往在儲存後經歷一定增加，此在20mg/mL DP調配物中比在10mg/mL DP調配物中稍微明顯)。

5.6 結論 5.6.1 在2℃-8℃下之穩定性(12個月)

發現所有調配物係穩定的：觀察到外觀、濁度(藉由比濁法)、不可視粒子、pH、蛋白質含量(藉由OD)、聚集(藉由SE-HPLC)、片段(藉由非還原性SDS-PAGE及生物分析儀)、同種型譜(藉由iCE280)及生物活性(藉由生物分析)相對於時間0無顯著變化。

5.6.2 在25℃下之穩定性(6個月)

蛋白質含量、外觀、澄清度、pH、聚集物、不可視粒子及生物活性相對於時間0無變化。

發現根據非還原性SDS-PAGE在25℃下6個月後片段增加+5%，而藉由生物分析儀(該方法用作添加穩健性之另一工具以對片段化出現得出結論)突出顯示無統計學上顯著之變化。

藉由iCE280觀察到同種型譜之相似行為：所有調配物之酸性簇往往在6個月研究期間增加+10%，且主峰及鹼性簇同步減少。

5.6.3 在40℃下之穩定性(1個月)

iCE280突出顯示10mg/mL與20mg/mL DP調配物之間之較小差別(酸性簇往往在儲存後經歷一定增加，此在20mg/mL DP調配物中比在10mg/mL DP調配物中稍微明顯)

5.7 在24個月期間之穩定性 5.7.1 DP組合物之製造

製造以下DP組合物且研究其在24個月時段期間之穩定性：

*對應於10mM乙酸鈉

**最終pH：5.2

兩種調配物對應於如表22中所顯示之調配物DP 01-190214。唯一差別在於當與0.6mg/mL冰乙酸組合時，使用0.3mg/mL(7.5mM)固定量之氫氧化鈉來產生5.2之pH。調配物DP 01-160414與DP 02-160414之間之唯一差別在於後一調配物具有30mL/瓶之體積，而前者具有10mL/瓶。

經由0.22μm PVDF膜將兩種調配物雙重過濾，然後人工填充於瓶中。測試過濾之前及之後的蛋白質含量；相關結果指示，在雙重無菌過濾後蛋白質未發生損失

已對各別最終容器(瓶)中之兩種調配物收集直至24個月(在+5℃±3℃下)及在+25℃±2℃(RH 60%±5%)下直至6個月之穩定性數據。

5.7.2 直至24個月(在+5℃±3℃下)之穩定性

在+5℃±3℃下，直至24個月，觀察到蛋白質含量(藉由OD)、HMW(藉由SE-HPLC)、濁度(藉由比濁法)、粒子形成(藉由光遮蔽)、著色度(藉由目視檢查)及生物功效無變化。酸性同種型稍有增加(在2年後對所有組合物觀察到+5%)。

藉由非還原性SDS-PAGE、生物分析儀及非還原性CE-SDS觀察到片段化無統計學上顯著之變化。

5.7.3 在+25℃±2℃(RH 60%±5%)下直至6個月之穩定性

在+25℃±2℃(RH 60%±5%)下，直至6個月，觀察到蛋白質含量(藉由OD)、HMW(藉由SE-HPLC)、濁度(藉由比濁法)、粒子形成(藉由光遮蔽)、同種型譜(藉由iCE280)、著色度(藉由目視檢查)、電泳純度(藉由還原性SDS/-PAGE)及生物功效無變化。與在5℃下之穩定性相似，觀察到在+25℃±2℃(RH 60%±5%)下片段化無統計學上顯著之變化(藉由生物分析儀確認結果)。

5.7.4 保持時間

過濾前之保持時間(於袋中，在室溫下至多24小時)、過濾後之保持時間(於袋中，在室溫下至多72小時)及振盪(在室溫下在200rpm下至多24小時)顯示蛋白質含量、粒子形成、聚集物及濁度無顯著變化，由此指示通常認為在製造製程期間無可在標準操作時間期間出現之主要問題。

5.7.5 冷凍/解凍研究

冷凍/解凍研究證實所測試之調配物可安全地冷凍於-80℃下，且然後升溫至+5℃±3℃或+25℃，且蛋白質未出現主要變化。

<110> 德商馬克專利公司

<120> 水性醫藥調配物

<130> P 15/241

<160> 3

<170> BiSSAP 1.3.6

<210> 1

<211> 450

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 阿維魯單抗之重鏈序列

<400> 1

<210> 2

<211> 449

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 阿維魯單抗之重鏈序列，缺少C末端K

<400> 2

<210> 3

<211> 216

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 阿維魯單抗之輕鏈序列

<400> 3

Claims

一種水性醫藥抗體調配物，其包含：(i)濃度1mg/mL至30mg/mL之阿維魯單抗(Avelumab)作為抗體；(ii)濃度5mM至15mM之乙酸鹽或組胺酸作為緩衝劑；(iii)濃度240mM至320mM之D-甘露醇或海藻糖、或濃度50至150mM之精胺酸HCl及濃度25mM至75mM之麩胺酸的組合作為穩定劑；(iv)濃度0.25mg/mL至0.75mg/mL之泊洛沙姆(Poloxamer)188或聚山梨醇酯20作為表面活性劑，或無表面活性劑；其中該調配物不包含甲硫胺酸，且另外其中該調配物具有5.0至6.0之pH。
如請求項1之調配物，其中該pH為5.0至5.6。
如請求項1或2之調配物，其中阿維魯單抗之濃度為約10mg/mL至約20mg/mL。
如請求項1至3之調配物，其中該乙酸鹽或組胺酸之濃度為約10mM。
如請求項1至3之調配物，其中該D-甘露醇或海藻糖之濃度為約280 mM，或對於精胺酸HCl及麩胺酸之該組合，精胺酸HCl之濃度為約150mM且麩胺酸之濃度為約50mM。
如請求項1至3之調配物，其中該泊洛沙姆188或聚山梨醇酯20之濃度為約0.5mg/mL。
如請求項1至3之調配物，其中該pH為5.2(±0.1)至5.5(±0.1)。
如請求項1至7中任一項之調配物，其包含濃度約10mM之乙酸鹽，且不包含任何其他緩衝劑。
如請求項1至8中任一項之調配物，其包含濃度約280mM之D-甘露醇或海藻糖，且不包含任何其他穩定劑。
如請求項1至9中任一項之調配物，其包含濃度約0.5mg/mL之聚山梨醇酯20或泊洛沙姆188，且不包含任何其他表面活性劑。
一種水性醫藥抗體調配物，其包含：(i)濃度約10mg/mL之阿維魯單抗作為抗體；(ii)濃度約10mM之乙酸鹽作為緩衝劑；(iii)濃度約280mM之D-甘露醇或海藻糖作為穩定劑；(iv)濃度約0.5mg/mL之聚山梨醇酯20或泊洛沙姆188作為表面活性劑；其中該調配物不包含甲硫胺酸，且另外其中該調配物具有5.5(±0.1)之pH。
如請求項9之調配物，其包含：(i)濃度10mg/mL之阿維魯單抗；(ii)濃度10mM之乙酸鹽；(iii)濃度280mM之D-甘露醇或海藻糖；(iv)濃度0.5mg/mL之聚山梨醇酯20或泊洛沙姆188；其中該調配物具有5.5(±0.1)之pH。
如請求項10之調配物，其係由以下組成：(i)濃度10mg/mL之阿維魯單抗；(ii)濃度10mM之乙酸鈉三水合物；(iii)濃度280mM之D-甘露醇或海藻糖；(iv)濃度0.5mg/mL之聚山梨醇酯20或泊洛沙姆188；(v)用來調節pH之HCl；(vi)水(注射用)作為溶劑；其中該調配物具有5.5(±0.1)之pH。
如請求項13之調配物，其係由以下組成：(i)濃度10mg/mL之阿維魯單抗；(ii)濃度10mM之乙酸鈉三水合物；(iii)濃度280mM之海藻糖二水合物； (iv)濃度0.5mg/mL之聚山梨醇酯20；(v)用來調節pH之HCl；(vi)水(注射用)作為稀釋劑；其中該調配物具有5.5(±0.1)之pH。
如請求項11之調配物，其係由以下組成：(i)濃度10mg/mL之阿維魯單抗；(ii)濃度10mM之乙酸鈉三水合物；(iii)濃度280mM之D-甘露醇；(iv)濃度0.5mg/mL之聚山梨醇酯20；(v)用來調節pH之HCl；(vi)水(注射用)作為稀釋劑；其中該調配物具有5.5(±0.1)之pH。
如請求項1之調配物，其包含：(i)濃度約20mg/mL之阿維魯單抗作為抗體；(ii)濃度約10mM之乙酸鹽作為緩衝劑；(iii)濃度約280mM之D-甘露醇或海藻糖作為穩定劑；(iv)濃度約0.5mg/mL之聚山梨醇酯20或泊洛沙姆188作為表面活性劑；其中該調配物具有5.2(±0.1)之pH。
如請求項16之調配物，其包含： (i)濃度20mg/mL之阿維魯單抗；(ii)濃度10mM之乙酸鹽；(iii)濃度280mM之D-甘露醇或海藻糖；(iv)濃度0.5mg/mL之聚山梨醇酯20或泊洛沙姆188；其中該調配物具有5.5(±0.1)之pH。
如請求項1至12、16或17中任一項之調配物，其中該調配物不包含抗氧化劑。
如請求項16之調配物，其係由以下組成：(i)濃度20mg/mL之阿維魯單抗；(ii)濃度10mM之乙酸；(iii)濃度280mM之D-甘露醇或海藻糖二水合物；(iv)濃度0.5mg/mL之聚山梨醇酯20或泊洛沙姆188；(v)用來調節該pH之乙酸鈉；(vi)水(注射用)作為稀釋劑；其中該調配物具有5.2(±0.1)之pH。
如請求項19之調配物，其係由以下組成：(i)濃度20mg/mL之阿維魯單抗；(ii)濃度10mM之乙酸；(iii)濃度280mM之D-甘露醇；(iv)濃度0.5mg/mL之聚山梨醇酯20； (v)用來調節該pH之乙酸鈉；(vi)水(注射用)作為稀釋劑；其中該調配物具有5.2(±0.1)之pH。
如請求項19之調配物，其係由以下組成：(i)濃度20mg/mL之阿維魯單抗；(ii)濃度10mM之乙酸；(iii)濃度280mM之海藻糖二水合物；(iv)濃度0.5mg/mL之聚山梨醇酯20；(v)用來調節該pH之乙酸鈉；(vi)水(注射用)作為稀釋劑；其中該調配物具有5.2(±0.1)之pH。
如請求項19之調配物，其係由以下組成：(i)濃度20mg/mL之阿維魯單抗；(ii)濃度10mM之乙酸；(iii)濃度280mM之D-甘露醇；(iv)濃度0.5mg/mL之泊洛沙姆188；(v)用來調節該pH之乙酸鈉；(vi)水(注射用)作為稀釋劑；其中該調配物具有5.2(±0.1)之pH。
如請求項19之調配物，其係由以下組成： (i)濃度20mg/mL之阿維魯單抗；(ii)濃度10mM之乙酸；(iii)濃度280mM之海藻糖二水合物；(iv)濃度0.5mg/mL之泊洛沙姆188；(v)用來調節該pH之乙酸鈉；(vi)水(注射用)作為稀釋劑；其中該調配物具有5.2(±0.1)之pH。
如請求項16之調配物，其係由以下組成：(i)濃度20mg/mL之阿維魯單抗；(ii)濃度10mM之乙酸；(iii)濃度280mM之D-甘露醇；(iv)濃度0.5mg/mL之聚山梨醇酯20；(v)濃度7.5mM之氫氧化鈉；(vi)水(注射用)作為稀釋劑；其中該調配物具有5.2(±0.1)之pH。
如請求項24之調配物，其中該調配物係由組合以下製得：(i)20mg/mL之阿維魯單抗；(ii)0.6mg/mL之冰乙酸；(iii)51mg/mL之D-甘露醇；(iv)0.5mg/mL之聚山梨醇酯20；(v)0.3mg/mL之氫氧化鈉； (vi)水(注射用)作為稀釋劑。
如請求項2之調配物，其係由以下組成：(i)濃度20mg/mL之阿維魯單抗；(ii)濃度0.6mg/mL之乙酸；(iii)濃度51mg/mL之D-甘露醇；(iv)濃度0.5mg/mL之聚山梨醇酯20；(v)濃度0.3mg/mL之氫氧化鈉；(vi)水(注射用)作為稀釋劑；其中該調配物具有5.0至5.6之pH。
一種水性醫藥抗體調配物，其係由以下組成：濃度20mg/mL之阿維魯單抗作為活性成份；及冰乙酸、D-甘露醇、聚山梨醇酯20、氫氧化鈉及注射用水作為賦形劑；其中該調配物具有5.0至5.6之pH。
如請求項27之調配物，其具有5.2(±0.1)之pH。
如請求項1至28之調配物，其中該阿維魯單抗具有(SEQ ID NO：1)或(SEQ ID NO：2)之重鏈序列、(SEQ ID NO：3)之輕鏈序列，且在Asn300上攜帶醣基化，其包含FA2及FA2G1作為主要聚醣種類，總份額(joint share)佔所有聚醣種類>70%。
如請求項29之調配物，其中在該阿維魯單抗醣基化中，該FA2具有所有聚醣種類44%至54%之份額(share)，且該FA2G1具有所有聚醣種類25%至41%之份額。
如請求項30之調配物，其中在該阿維魯單抗醣基化中，該FA2具有所有聚醣種類47%至52%之份額，且該FA2G1具有所有聚醣種類29%至37%之份額。
如請求項29之調配物，其中在該阿維魯單抗醣基化中，該FA2具有所有聚醣種類約49%之份額，且該FA2G1具有所有聚醣種類約30%至約35%之份額。
如請求項29至32中任一項之調配物，其中該阿維魯單抗醣基化進一步包含以下作為次要聚醣種類：佔所有聚醣種類之份額<5%之A2、佔所有聚醣種類之份額<5%之A2G1、佔所有聚醣種類之份額<5%之A2G2及佔所有聚醣種類之份額<7%之FA2G2。
如請求項33之調配物，其中在該阿維魯單抗醣基化中，該A2具有所有聚醣種類3%至5%之份額，該A2G1具有所有聚醣種類<4%之份額，該A2G2具有所有聚醣種類<3%之份額，且該FA2G2具有所有聚醣種類5%至6%之份額。
如請求項34之調配物，其中在該阿維魯單抗醣基化中，該A2具有所有聚醣種類約3.5%至約4.5%之份額，該A2G1具有所有聚醣種類約0.5% 至約3.5%之份額，該A2G2具有所有聚醣種類<2.5%之份額，且該FA2G2具有所有聚醣種類約5.5%之份額。
如請求項29至35中任一項之調配物，其中該阿維魯單抗具有(SEQ ID NO：2)之重鏈序列。
如請求項1至36中任一項之調配物，其用於靜脈內(IV)投與。
一種瓶，其含有如請求項37之調配物。
如請求項38之瓶，其含有於10mL溶液中濃度為20mg/mL之200mg阿維魯單抗。
如請求項38或39之瓶，其係玻璃瓶。
一種治療癌症之方法，其包含向患者投與如請求項1至37中任一項之調配物。
如請求項41之方法，其中該癌症選自非小細胞肺癌、泌尿上皮癌、膀胱癌、間皮瘤、默克細胞癌(Merkel cell carcinoma)、胃或胃食道接合部癌、卵巢癌、乳癌、胸腺瘤、胃腺癌、腎上腺皮質癌、頭頸部鱗狀細胞癌、腎細胞癌、黑色素瘤及/或經典霍奇金氏淋巴瘤(classical Hodgkin’s lymphoma)。