TW201706277A

TW201706277A - Janus激酶抑制劑

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Publication number: TW201706277A
Application number: TW105116590A
Authority: TW
Inventors: 吳顥; 毛魏魏; 黃奕強; 樊莉莉; 曙輝陳
Original assignee: 南京明德新藥研發股份有限公司
Priority date: 2015-05-29
Filing date: 2016-05-27
Publication date: 2017-02-16
Also published as: KR20170141787A; CN107531711A; EP3305788A1; AU2016271904B2; CA2983481C; PL3305788T3; CA2983481A1; MX2017013797A; KR102081272B1; AU2016271904A1; CN107531711B; JP6564473B2; US20180162879A1; ES2822748T3; HUE050842T2; EA201792116A1; EP3305788B1; DK3305788T3; JP2018516264A; TWI692481B

Abstract

本發明公開了一系列Janus激酶抑制劑，具體公開了式（Ⅰ）化合物或其藥學上可接受的鹽及其在製備治療與JAK相關疾病的藥物中的應用。□

Description

Janus激酶抑制劑

本發明涉及一系列Janus激酶抑制劑，具體涉及式（Ⅰ）化合物或其藥學上可接受的鹽。

JAK屬於參與炎症、自身免疫疾病、增殖性疾病、移植排斥、涉及軟骨更新(turnover)受損的疾病、先天軟骨畸形和/或與IL6分泌過多相關的疾病的酪氨酸激酶家族。本發明還提供所述化合物、含有所述化合物的藥物組合物的生產方法和通過施用本發明化合物預防和/或治療炎症、自身免疫疾病、增殖性疾病、移植排斥、涉及軟骨更新受損的疾病、先天軟骨畸形和/或與IL6分泌過多相關的疾病的方法。

Janus激酶(JAK)是轉導細胞因子訊號從膜受體到STAT轉錄因子的細胞質酪氨酸激酶。現有技術已經描述了四種JAK家族成員：JAK1、JAK2、JAK3和TYK2。當細胞因子與其受體結合時，JAK家族成員自磷酸化和/或彼此轉磷酸化，隨後STATs磷酸化，然後遷移至細胞核內以調節轉錄。JAK-STAT細胞內訊號轉導適用於干擾素、大多數白血球介素以及多種細胞因子和內分泌因子，例如EPO、TPO、GH、OSM、LIF、CNTF、GM-CSF和PRL(Vainchenker W.等人(2008))。

遺傳學模型和小分子JAK抑制劑的組合研究揭示了幾種JAKs的治療潛能。通過小鼠和人遺傳學確證JAK3是免疫抑制靶點(O’Shea J.等人(2004))。JAK3抑制劑成功用於臨床開發，最初用於器官移植排斥，但後來也用於其它免疫炎性適應症，例如類風濕性關節炎(RA)、銀屑病和克隆病(http：//clinicaltrials.gov/)。TYK2是免疫炎性疾病的潛在靶點，已經通過人遺傳學和小鼠剔除研究確證(Levy D.和Loomis C.(2007))。JAK1是免疫炎性疾病領域的新靶點。將JAK1與其它JAKs雜二聚化以轉導細胞因子驅動的促炎訊號傳導。因此，預期抑制JAK1和/或其它JAK對於一系列炎性病症和其它由JAK介導的訊號轉導驅動的疾病是具有治療益處的。

本發明提供了式(Ⅰ)所示化合物或其藥學上可接受的鹽，其中，R選自C(R)或N；L₁ 選自單鍵、-C(=O)O-、-C(=O)-、-S(=O)-、-S(=O)₂ -、-C(=O)N(R)-、-N(R)C(=O)N(R)-、-N(R)-、-S(=O)N(R)-、-S(=O)₂ N(R)C(R)₂ -、-S(=O)N(R)C(R)₂ -；R₁ 選自H、CN、OH、NH₂ 、鹵素，或選自任選被1、2、3或4個R取代的：C_1-6 烷基、C_1-6 雜烷基、C_3-6 元環烷基、3~6元雜環烷基；R分別獨立地選自H、CN、OH、NH₂ 、鹵素，或分別選自任選被1、2、3或4個R’取代的：C_1-6 烷基、C_1-6 雜烷基；R’選自鹵素、OH、NH₂ 、CN、Me、Et、CF₃ 、CH₂ CF₃ 、NHCH₃ 、N(CH₃ )₂ ；所述「雜」選自雜原子或雜原子團，選自N、O、S、-C(=O)O-、-C(=O)-、-S(=O)-、-S(=O)₂ -，上述任意一種情況下所述「雜」的數目分別獨立地選自1、2或3。

本發明的一些方案中，上述R選自H、CN、OH、NH₂ 、鹵素，或選自任選被1、2或3個R’取代的：Me、Et、NHCH₃ 、N(CH₃ )₂ 、、。

本發明的一些方案中，上述L₁ 選自單鍵、-C(=O)O-、-C(=O)-、-S(=O)-、-S(=O)₂ -、-C(=O)NH-、-NHC(=O)NH-、-NH-、-S(=O)NH-、-S(=O)₂ NHCH₂ -、-S(=O)NHCH₂ -。

本發明的一些方案中，上述R₁ 選自CN、OH、NH₂ ，或選自任選被1、2、3或4個R取代的：C_1-3 烷基、C_1-2 烷基-N(C_1-2 烷基)₂ 、C_1-2 烷基-NH-C_1-2 烷基、C_1-3 烷基-S(=O)₂ -C_1-3 烷基、C_1-3 烷基-S(=O)-C_1-3 烷基、C_4-5 環烷基、4~5元雜環烷基。

本發明的一些方案中，上述R₁ 選自CN，或選自任選被1、2、3或4個R取代的：Me、Et、、、、。

本發明的一些方案中，上述R₁ 選自CN、Me、、、、、、、。

本發明的化合物，其選自：。

本發明還提供式（Ⅰ）化合物的製備方法，包括如下步驟：其中，PG為氨基保護基，選自苄氧羰基（Cbz）、叔丁氧羰基（Boc）、笏氧羰基（Fmoc）、烯丙氧羰基（Alloc）、三甲基矽乙氧羰基（Teco）、甲氧羰基、乙氧羰基、鄰苯二甲醯基（Pht）、對甲苯磺醯基（Tos）、三氟乙醯基（Tfa）、苄基（Bn）、對甲氧基苄基（PMB）。

本發明還提供一種藥物組合物，包括治療有效量的上述化合物或其藥學上可接受的鹽以及藥學上可接受的載體。

本發明還提供了上述化合物或其藥學上可接受的鹽或上述藥物組合物在製備治療治療與Janus激酶相關疾病的藥物中的應用。

本發明的一些方案中，上述疾病為關節炎。

本發明的一些方案中，上述疾病為類風濕性關節炎。

相關定義

除非另有說明，本文所用的下列術語和短語旨在具有下列含義。一個特定的術語或短語在沒有特別定義的情況下不應該被認為是不確定的或不清楚的，而應該按照普通的含義去理解。當本文中出現商品名時，意在指代其對應的商品或其活性成分。這裡所採用的術語「藥學上可接受的」，是針對那些化合物、材料、組合物和/或劑型而言，它們在可靠的醫學判斷的範圍之內，適用於與人類和動物的組織接觸使用，而沒有過多的毒性、刺激性、過敏性反應或其它問題或併發症，與合理的利益/風險比相稱。

術語「藥學上可接受的鹽」是指本發明化合物的鹽，由本發明發現的具有特定取代基的化合物與相對無毒的酸或鹼製備。當本發明的化合物中含有相對酸性的官能團時，可以通過在純的溶液或合適的惰性溶劑中用足夠量的鹼與這類化合物的中性形式接觸的方式獲得鹼加成鹽。藥學上可接受的鹼加成鹽包括鈉、鉀、鈣、銨、有機氨或鎂鹽或類似的鹽。當本發明的化合物中含有相對鹼性的官能團時，可以通過在純的溶液或合適的惰性溶劑中用足夠量的酸與這類化合物的中性形式接觸的方式獲得酸加成鹽。藥學上可接受的酸加成鹽的實例包括無機酸鹽，所述無機酸包括例如鹽酸、氫溴酸、硝酸、碳酸，碳酸氫根，磷酸、磷酸一氫根、磷酸二氫根、硫酸、硫酸氫根、氫碘酸、亞磷酸等；以及有機酸鹽，所述有機酸包括如乙酸、丙酸、異丁酸、馬來酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、鄰苯二甲酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、檸檬酸、酒石酸和甲磺酸等類似的酸；還包括氨基酸（如精氨酸等）的鹽，以及如葡糖醛酸等有機酸的鹽（參見Berge et al., "Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Science 66: 1-19 (1977))。本發明的某些特定的化合物含有鹼性和酸性的官能團，從而可以被轉換成任一鹼或酸加成鹽。

優選地，以常規方式使鹽與鹼或酸接觸，再分離母體化合物，由此再生化合物的中性形式。化合物的母體形式與其各種鹽的形式的不同之處在於某些物理性質，例如在極性溶劑中的溶解度不同。

本文所用的「藥學上可接受的鹽」屬本發明化合物的衍生物，其中，通過與酸成鹽或與鹼成鹽的方式修飾所述母體化合物。藥學上可接受的鹽的實例包括但不限於：鹼基比如胺的無機酸或有機酸鹽、酸根比如羧酸的鹼金屬或有機鹽等等。藥學上可接受的鹽包括常規的無毒性的鹽或母體化合物的季銨鹽，例如無毒的無機酸或有機酸所形成的鹽。常規的無毒性的鹽包括但不限於那些衍生自無機酸和有機酸的鹽，所述的無機酸或有機酸選自2-乙醯氧基苯甲酸、2-羥基乙磺酸、乙酸、抗壞血酸、苯磺酸、苯甲酸、碳酸氫根、碳酸、檸檬酸、依地酸、乙烷二磺酸、乙烷磺酸、富馬酸、葡庚糖、葡糖酸、谷氨酸、乙醇酸、氫溴酸、鹽酸、氫碘酸鹽、羥基、羥萘、羥乙磺酸、乳酸、乳糖、十二烷基磺酸、馬來酸、蘋果酸、扁桃酸、甲烷磺酸、硝酸、草酸、雙羥萘酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、多聚半乳糖醛、丙酸、水楊酸、硬脂酸、亞乙酸、琥珀酸、氨基磺酸、對氨基苯磺酸、硫酸、單寧、酒石酸和對甲苯磺酸。

本發明的藥學上可接受的鹽可由含有酸根或鹼基的母體化合物通過常規化學方法合成。一般情況下，這樣的鹽的製備方法是：在水或有機溶劑或兩者的混合物中，經由游離酸或鹼形式的這些化合物與化學計量的適當的鹼或酸反應來製備。一般地，優選醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈等非水介質。

除了鹽的形式，本發明所提供的化合物還存在前藥形式。本文所描述的化合物的前藥容易地在生理條件下發生化學變化從而轉化成本發明的化合物。此外，前體藥物可以在體內環境中通過化學或生化方法被轉換到本發明的化合物。

本發明的某些化合物可以以非溶劑化形式或者溶劑化形式存在，包括水合物形式。一般而言，溶劑化形式與非溶劑化的形式相當，都包含在本發明的範圍之內。

本發明的某些化合物可以具有不對稱碳原子（光學中心）或雙鍵。外消旋體、非對映異構體、幾何異構體和單個的異構體都包括在本發明的範圍之內。

本文中消旋體、ambiscalemic and scalemic或者對映體純的化合物的圖示法來自Maehr, J. Chem. Ed. 1985, 62: 114-120。 1985年，62：114-120。除非另有說明，用楔形鍵和虛線鍵表示一個立體中心的絕對構型。當本文所述化合物含有烯屬雙鍵或其它幾何不對稱中心，除非另有規定，它們包括E 、 Z 幾何異構體。同樣地，所有的互變異構形式均包括在本發明的範圍之內。

本發明的化合物可以存在特定的幾何或立體異構體形式。本發明設想所有的這類化合物，包括順式和反式異構體、(-)-和(+)-對對映體、(R )-和(S )-對映體、非對映異構體、(D )-異構體、(L )-異構體，及其外消旋混合物和其他混合物，例如對映異構體或非對映體富集的混合物，所有這些混合物都屬本發明的範圍之內。烷基等取代基中可存在另外的不對稱碳原子。所有這些異構體以及它們的混合物，均包括在本發明的範圍之內。

可以通過的手性合成或手性試劑或者其他常規技術製備光學活性的(R )-和(S )-異構體以及D 和L 異構體。如果想得到本發明某化合物的一種對映體，可以通過不對稱合成或者具有手性助劑的衍生作用來製備，其中將所得非對映體混合物分離，並且輔助基團裂開以提供純的所需對映異構體。或者，當分子中含有鹼性官能團（如氨基）或酸性官能團（如羧基）時，與適當的光學活性的酸或鹼形成非對映異構體的鹽，然後通過本領域所公知的常規方法進行非對映異構體拆分，然後回收得到純的對映體。此外，對映異構體和非對映異構體的分離通常是通過使用色譜法完成的，所述色譜法採用手性固定相，並任選地與化學衍生法相結合（例如由胺生成氨基甲酸鹽）。

本發明的化合物可以在一個或多個構成該化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素標記化合物，比如氚（³ H）、碘-125（¹²⁵ I）或C-14（¹⁴ C）。本發明的化合物的所有同位素組成的變換，無論放射性與否，都包括在本發明的範圍之內。

術語「藥學上可接受的載體」是指能夠遞送本發明有效量活性物質、不干擾活性物質的生物活性並且對宿主或者患者無毒副作用的任何製劑或載體介質代表性的載體包括水、油、蔬菜和礦物質、膏基、洗劑基質、軟膏基質等。這些基質包括懸浮劑、增黏劑、透皮促進劑等。它們的製劑為化妝品領域或局部藥物領域的技術人員所周知。關於載體的其他訊息，可以參考Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Ed., Lippincott, Williams & Wilkins (2005)，該文獻的內容通過引用的方式併入本文。

術語「賦形劑」通常是指配製有效的藥物組合物所需要載體、稀釋劑和/或介質。

針對藥物或藥理學活性劑而言，術語「有效量」或「治療有效量」是指無毒的但能達到預期效果的藥物或藥劑的足夠用量。對於本發明中的口服劑型，組合物中一種活性物質的「有效量」是指與該組合物中另一種活性物質聯用時為了達到預期效果所需要的用量。有效量的確定因人而異，取決於受體的年齡和一般情況，也取決於具體的活性物質，個案中合適的有效量可以由本領域技術人員根據常規試驗確定。

術語「活性成分」、「治療劑」，「活性物質」或「活性劑」是指一種化學實體，它可以有效地治療目標紊亂、疾病或病症。

術語「被取代的」是指特定原子上的任意一個或多個氫原子被取代基取代，可以包括重氫和氫的變體，只要特定原子的價態是正常的並且取代後的化合物是穩定的。當取代基為酮基（即=O）時，意味著兩個氫原子被取代。酮取代不會發生在芳香基上。術語「任選被取代的」是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有規定，取代基的種類和數目在化學上可以實現的基礎上可以是任意的。

當任何變量（例如R）在化合物的組成或結構中出現一次以上時，其在每一種情況下的定義都是獨立的。因此，例如，如果一個基團被0-2個R所取代，則所述基團可以任選地至多被兩個R所取代，並且每種情況下的R都有獨立的選項。此外，取代基和/或其變體的組合只有在這樣的組合會產生穩定的化合物的情況下才是被允許的。

當一個連接基團的數量為0時，比如-(CRR)₀ -，表示該連接基團為單鍵。

當其中一個變量選自單鍵時，表示其連接的兩個基團直接相連，比如A-L-Z中L代表單鍵時表示該結構實際上是A-Z。

當一個取代基為空缺時，表示該取代基是不存在的，比如A-X中X為空缺時表示該結構實際上是A。當一個取代基的鍵可以交叉連接到一個環上的兩個原子時，這種取代基可以與這個環上的任意原子相鍵合。當所列舉的取代基中沒有指明其通過哪一個原子連接到化學結構通式中包括但未具體提及的化合物時，這種取代基可以通過其任何原子相鍵合。取代基和/或其變體的組合只有在這樣的組合會產生穩定的化合物的情況下才是被允許的。例如，結構單元或表示其可在環己基或者環己二烯上的任意一個位置發生取代。

除非另有規定，術語「雜」表示雜原子或雜原子團(即含有雜原子的原子團)，包括碳（C）和氫（H）以外的原子以及含有這些雜原子的原子團，例如包括氧（O）、氮（N）、硫（S）、矽（Si）、鍺（Ge）、鋁（Al）、硼（B）、-O-、-S-、=O、=S、-C(=O)O-、-C(=O)-、-C(=S)-、-S(=O)、-S(=O)₂ -，以及任選被取代的-C(=O)N(H)-、-N(H)-、-C(=NH)-、-S(=O)₂ N(H)-或-S(=O)N(H)-。

除非另有規定，「環」表示被取代或未被取代的環烷基、雜環烷基、環烯基、雜環烯基、環炔基、雜環炔基、芳基或雜芳基。所謂的環包括單環、聯環、螺環、並環或橋環。環上原子的數目通常被定義為環的元數，例如，「5～7元環」是指環繞排列5～7個原子。除非另有規定，該環任選地包含1～3個雜原子。因此，「5～7元環」包括例如苯基、吡啶和呱啶基；另一方面，術語「5～7元雜環烷基環」包括吡啶基和呱啶基，但不包括苯基。術語「環」還包括含有至少一個環的環系，其中的每一個「環」均獨立地符合上述定義。

除非另有規定，術語「雜環」或「雜環基」意指穩定的含雜原子或雜原子團的單環、雙環或三環，它們可以是飽和的、部分不飽和的或不飽和的（芳族的），它們包含碳原子和1、2、3或4個獨立地選自N、O和S的環雜原子，其中上述任意雜環可以稠合到一個苯環上形成雙環。氮和硫雜原子可任選被氧化（即NO和S(O)p，p是1或2）。氮原子可以是被取代的或未取代的（即N或NR，其中R是H或本文已經定義過的其他取代基）。該雜環可以附著到任何雜原子或碳原子的側基上從而形成穩定的結構。如果產生的化合物是穩定的，本文所述的雜環可以發生碳位或氮位上的取代。雜環中的氮原子任選地被季銨化。一個優選方案是，當雜環中S及O原子的總數超過1時，這些雜原子彼此不相鄰。另一個優選方案是，雜環中S及O原子的總數不超過1。如本文所用，術語「芳族雜環基團」或「雜芳基」意指穩定的5、6、7元單環或雙環或7、8、9或10元雙環雜環基的芳香環，它包含碳原子和1、2、3或4個獨立地選自N、O和S的環雜原子。氮原子可以是被取代的或未取代的（即N或NR，其中R是H或本文已經定義過的其他取代基）。氮和硫雜原子可任選被氧化（即NO和S(O)p，p是1或2）。值得注意的是，芳香雜環上S和O原子的總數不超過1。橋環也包含在雜環的定義中。當一個或多個原子（即C、O、N或S）連接兩個不相鄰的碳原子或氮原子時形成橋環。優選的橋環包括但不限於：一個碳原子、兩個碳原子、一個氮原子、兩個氮原子和一個碳-氮基。值得注意的是，一個橋總是將單環轉換成三環。橋環中，環上的取代基也可以出現在橋上。

雜環化合物的實例包括但不限於：吖啶基、吖辛因基、苯並咪唑基、苯並呋喃基、苯並巰基呋喃基、苯並巰基苯基、苯並噁唑基、苯並噁唑啉基、苯並噻唑基、苯並三唑基、苯並四唑基、苯並異噁唑基、苯並異噻唑基、苯並咪唑啉基、哢唑基、4aH -哢唑基、哢啉基、苯並二氫吡喃基、色烯、噌啉基十氫喹啉基、2H , 6H -1, 5,2-二噻嗪基、二氫呋喃並[2,3-b ]四氫呋喃基、呋喃基、呋咱基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1H -吲唑基、吲哚烯基、二氫吲哚基、中氮茚基、吲哚基、3H -吲哚基、異苯並呋喃基、異吲哚基、異二氫吲哚基、異喹啉基、異噻唑基、異噁唑基、亞甲二氧基苯基、嗎啉基、萘啶基，八氫異喹啉基、噁二唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、噁唑烷基、噁唑基、羥吲哚基、嘧啶基、菲啶基、菲咯啉基、吩嗪、吩噻嗪、苯並黃嘌呤基、酚噁嗪基、酞嗪基、呱嗪基、呱啶基、呱啶酮基、4-呱啶酮基、胡椒基、蝶啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、噠嗪基、吡啶並噁唑、吡啶並咪唑、吡啶並噻唑、吡啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、2H -吡咯基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、4H -喹嗪基、喹喔啉基、奎寧環基、四氫呋喃基、四氫異喹啉基、四氫喹啉基、四唑基，6H -1,2,5-噻二嗪基、1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、噻蒽基、噻唑基、異噻唑基噻吩基、噻吩並噁唑基、噻吩並噻唑基、噻吩並咪唑基、噻吩基、三嗪基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,5-三唑基、1,3,4-三唑基和呫噸基。還包括稠環和螺環化合物。

除非另有規定，術語「烴基」或者其下位概念（比如烷基、烯基、炔基、芳基等等）本身或者作為另一取代基的一部分表示直鏈的、支鏈的或環狀的烴原子團或其組合，可以是完全飽和的（如烷基）、單元或多元不飽和的（如烯基、炔基、芳基），可以是單取代或多取代的，可以是一價（如甲基）、二價（如亞甲基）或者多價（如次甲基），可以包括二價或多價原子團，具有指定數量的碳原子（如C₁ -C₁₂ 表示1至12個碳，C_1-12 選自C₁ 、C₂ 、C₃ 、C₄ 、C₅ 、C₆ 、C₇ 、C₈ 、C₉ 、C₁₀ 、C₁₁ 和C₁₂ ；C_3-12 選自C₃ 、C₄ 、C₅ 、C₆ 、C₇ 、C₈ 、C₉ 、C₁₀ 、C₁₁ 和C₁₂ 。）。「烴基」包括但不限於脂肪烴基和芳香烴基，所述脂肪烴基包括鏈狀和環狀，具體包括但不限於烷基、烯基、炔基，所述芳香烴基包括但不限於6-12元的芳香烴基，例如苯、萘等。在一些實施例中，術語「烴基」表示直鏈的或支鏈的原子團或它們的組合，可以是完全飽和的、單元或多元不飽和的，可以包括二價和多價原子團。飽和烴原子團的實例包括但不限於甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、叔丁基、異丁基、仲丁基、異丁基、環己基、（環己基）甲基、環丙基甲基，以及正戊基、正己基、正庚基、正辛基等原子團的同系物或異構體。不飽和烴基具有一個或多個雙鍵或三鍵，其實例包括但不限於乙烯基、2-丙烯基、丁烯基、巴豆基、2-異戊烯基、2-（丁二烯基）、2,4-戊二烯基、3-（1,4-戊二烯基）、乙炔基、1-和3-丙炔基、3-丁炔基，以及更高級的同系物和異構體。

除非另有規定，術語「雜烴基」或者其下位概念（比如雜烷基、雜烯基、雜炔基、雜芳基等等）本身或者與另一術語聯合表示穩定的直鏈的、支鏈的或環狀的烴原子團或其組合，有一定數目的碳原子和至少一個雜原子組成。在一些實施例中，術語「雜烷基」本身或者與另一術語聯合表示穩定的直鏈的、支鏈的烴原子團或其組合物，有一定數目的碳原子和至少一個雜原子組成。在一個典型實施例中，雜原子選自B、O、N和S，其中氮和硫原子任選地被氧化，氮雜原子任選地被季銨化。雜原子或雜原子團可以位於雜烴基的任何內部位置，包括該烴基附著於分子其餘部分的位置，但術語「烷氧基」、「烷氨基」和「烷硫基」（或硫代烷氧基）屬慣用表達，是指分別通過一個氧原子、氨基或硫原子連接到分子的其餘部分的那些烷基基團。實例包括但不限於-CH₂ -CH₂ -O-CH₃ 、-CH₂ -CH₂ -NH-CH₃ 、-CH₂ -CH₂ -N(CH₃ )-CH₃ 、-CH₂ -S-CH₂ -CH₃ 、-CH₂ -CH₂ 、-S(O)-CH₃ 、-CH₂ -CH₂ -S(O)₂ -CH₃ 、-CH=CH-O-CH₃ 、 -CH₂ -CH=N-OCH₃ 和–CH=CH-N(CH₃ )-CH₃ 。至多兩個雜原子可以是連續的，例如-CH₂ -NH-OCH₃ 。

除非另有規定，術語「環烴基」、「雜環烴基」或者其下位概念（比如芳基、雜芳基、環烷基、雜環烷基、環烯基、雜環烯基、環炔基、雜環炔基等等）本身或與其他術語聯合分別表示環化的「烴基」、「雜烴基」。此外，就雜烴基或雜環烴基（比如雜烷基、雜環烷基）而言，雜原子可以佔據該雜環附著於分子其餘部分的位置。環烴基的實例包括但不限於環戊基、環己基、1-環己烯基、3-環己烯基、環庚基等。雜環基的非限制性實例包括1-（1,2,5,6-四氫吡啶基）、1-呱啶基、2-呱啶基、3-呱啶基、4-嗎啉基、3-嗎啉基、四氫呋喃-2-基、四氫呋喃吲哚-3-基、四氫噻吩-2-基、四氫噻吩-3-基、1-呱嗪基和2-呱嗪基。

除非另有規定，術語「烷基」用於表示直鏈或支鏈的飽和烴基，可以是單取代（如-CH₂ F）或多取代的（如-CF₃ ），可以是一價（如甲基）、二價（如亞甲基）或者多價（如次甲基）。烷基的例子包括甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(如，n-丙基和異丙基)、丁基(如，n-丁基、異丁基、s-丁基、t-丁基)、戊基(如，n-戊基、異戊基、新戊基)等。

除非另有規定，「烯基」指在鏈的任何位點上具有一個或多個碳碳雙鍵的烷基，可以是單取代或多取代的，可以是一價、二價或者多價。烯基的例子包括乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基、丁間二烯基、戊間二烯基、己間二烯基等。

除非另有規定，「炔基」指在鏈的任何位點上具有一個或多個碳碳三鍵的烷基，可以是單取代或多取代的，可以是一價、二價或者多價。炔基的例子包括乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基等。

除非另有規定，環烷基包括任何穩定的環狀或多環烴基，任何碳原子都是飽和的，可以是單取代或多取代的，可以是一價、二價或者多價。這些環烷基的實例包括，但不限於，環丙基、降冰片烷基、[2.2.2]二環辛烷、[4.4.0]二環癸烷等。

除非另有規定，環烯基包括任何穩定的環狀或多環烴基，該烴基在環的任何位點含有一個或多個不飽和的碳-碳雙鍵，可以是單取代或多取代的，可以是一價、二價或者多價。這些環烯基的實例包括，但不限於，環戊烯基、環己烯基等。

除非另有規定，環炔基包括任何穩定的環狀或多環烴基，該烴基在環的任何位點含有一個或多個碳-碳三鍵，可以是單取代或多取代的，可以是一價、二價或者多價。

除非另有規定，術語「鹵代素」或「鹵素」本身或作為另一取代基的一部分表示氟、氯、溴或碘原子。此外，術語「鹵代烷基」意在包括單鹵代烷基和多鹵代烷基。例如，術語「鹵代（C₁ -C₄ ）烷基」意在包括但不僅限於三氟甲基、2,2,2-三氟乙基、4-氯丁基和3-溴丙基等等。除非另有規定，鹵代烷基的實例包括但不僅限於：三氟甲基、三氯甲基、五氟乙基和五氯乙基。

「烷氧基」代表通過氧橋連接的具有特定數目碳原子的上述烷基，除非另有規定，C_1-6 烷氧基包括C₁ 、C₂ 、C₃ 、C₄ 、C₅ 和C₆ 的烷氧基。烷氧基的例子包括但不限於：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基和S -戊氧基。除非另有規定，術語「芳基」表示多不飽和的芳族烴取代基，可以是單取代或多取代的，可以是一價、二價或者多價，它可以是單環或多環（比如1至3個環；其中至少一個環是芳族的），它們稠合在一起或共價連接。術語「雜芳基」是指含有一至四個雜原子的芳基（或環）。在一個示範性實例中，雜原子選自B、N、O和S，其中氮和硫原子任選地被氧化，氮原子任選地被季銨化。雜芳基可通過雜原子連接到分子的其餘部分。芳基或雜芳基的非限制性實施例包括苯基、1-萘基、2-萘基、4-聯苯基、1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、3-吡唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、吡嗪基、2-噁唑基、4-噁唑基、2-苯基-4-噁唑基、5-噁唑基、3-異噁唑基、4-異噁唑基、5-異噁唑基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-苯並噻唑基、嘌呤基、2-苯並咪唑基、5-吲哚基、1-異喹啉基、5-異喹啉基、2-喹喔啉基、5-喹喔啉基、3-喹啉基和6-喹啉基。上述任意一個芳基和雜芳基環系的取代基選自下文所述的可接受的取代基。

除非另有規定，芳基在與其他術語聯合使用時（例如芳氧基、芳硫基、芳烷基）包括如上定義的芳基和雜芳基環。因此，術語「芳烷基」意在包括芳基附著於烷基的那些原子團（例如苄基、苯乙基、吡啶基甲基等），包括其中碳原子（如亞甲基）已經被例如氧原子代替的那些烷基，例如苯氧基甲基、2-吡啶氧甲基3-（1-萘氧基）丙基等。

術語「離去基團」是指可以被另一種官能團或原子通過取代反應（例如親和取代反應）所取代的官能團或原子。例如，代表性的離去基團包括三氟甲磺酸酯；氯、溴、碘；磺酸酯基，如甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、對溴苯磺酸酯、對甲苯磺酸酯等；醯氧基，如乙醯氧基、三氟乙醯氧基等等。

術語「保護基」包括但不限於「氨基保護基」、「羥基保護基」或「巰基保護基」。術語「氨基保護基」是指適合用於阻止氨基氮位上副反應的保護基團。代表性的氨基保護基包括但不限於：甲醯基；醯基，例如鏈烷醯基（如乙醯基、三氯乙醯基或三氟乙醯基）；烷氧基羰基，如叔丁氧基羰基(Boc)；芳基甲氧羰基，如苄氧羰基(Cbz)和9-芴甲氧羰基(Fmoc)；芳基甲基，如苄基（Bn）、三苯甲基(Tr)、1,1-二-（4'-甲氧基苯基）甲基；甲矽烷基，如三甲基甲矽烷基（TMS）和叔丁基二甲基甲矽烷基（TBS）等等。術語「羥基保護基」是指適合用於阻止羥基副反應的保護基。代表性羥基保護基包括但不限於：烷基，如甲基、乙基和叔丁基；醯基，例如鏈烷醯基（如乙醯基）；芳基甲基，如苄基（Bn）、對甲氧基苄基（PMB）、9-芴基甲基(Fm)和二苯基甲基（二苯甲基，DPM）；甲矽烷基，如三甲基甲矽烷基（TMS）和叔丁基二甲基甲矽烷基（TBS）等等。

本發明的化合物可以通過本領域技術人員所熟知的多種合成方法來製備，包括下面列舉的具體實施方式、其與其他化學合成方法的結合所形成的實施方式以及本領域技術上人員所熟知的等同替換方式，優選的實施方式包括但不限於本發明的實施例。

本發明所使用的溶劑可經市售獲得。本發明採用下述縮略詞：aq代表水；HATU代表O-(7-氮雜苯並三唑-1-基）-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽；EDC代表N-（3-二甲基氨基丙基）-N'-乙基碳二亞胺鹽酸鹽；m-CPBA代表3-氯過氧苯甲酸；eq代表當量、等量；CDI代表羰基二咪唑；DCM代表二氯甲烷；PE代表石油醚；DIAD代表偶氮二羧酸二異丙酯；DMF代表N，N-二甲基甲醯胺；DMSO代表二甲亞碸；EtOAc代表乙酸乙酯；EtOH代表乙醇；MeOH代表甲醇；Cbz代表苄氧羰基，是一種胺保護基團；BOC代表叔丁基羰基是一種胺保護基團；HOAc代表乙酸；NaCNBH₃ 代表氰基硼氫化鈉；r.t.代表室溫；O/N代表過夜；THF代表四氫呋喃；Boc₂ O代表二-叔丁基二碳酸酯；TFA代表三氟乙酸；DIPEA代表二異丙基乙基胺；SOCl₂ 代表氯化亞碸；CS₂ 代表二硫化碳；TsOH代表對甲苯磺酸；NFSI代表N-氟-N-（苯磺醯基）苯磺醯胺；NCS代表1-氯吡咯烷-2,5-二酮；n-Bu₄ NF代表氟化四丁基銨；iPrOH代表2-丙醇；mp代表熔點；LDA代表二異丙基胺基鋰；Fmoc代表笏氧羰基；Alloc代表烯丙氧羰基、Teco代表三甲基矽乙氧羰基；Pht代表鄰苯二甲醯基；Tos代表對甲苯磺醯基；Tfa代表三氟乙醯基；Bn代表苄基；PMB代表對甲氧基苄基。

化合物經手工或者ChemDraw®軟體命名，市售化合物採用供應商目錄名稱。

具體實施方式。

實施例1：

步驟1：將2-氯-4-硝基-1-氧-吡啶-1-鎓（40.0 g，229.2 mmol）和（4-甲氧基苯基）甲胺（63 g，458.4 mmol）溶於EtOH（400 mL）中，所得溶液攪拌回流反應5小時。TLC（PE：EA=2:1）顯示反應完全。將EtOH體積濃縮一半，並在冰浴中冷卻2~3小時，將所得冷的混合物過濾，分離出的固體分別用PE（60 mL*3）和冰水（60 mL * 3）洗滌。真空乾燥得橙色固體N-[（4-甲氧基苯基）甲基]-4-硝基-1-氧-吡啶-1-鎓-2-胺（38.6 g，140.2 mmol，產率61.2%）。MS (ESI) 計算值C₁₃ H₁₃ N₃ O₄ 275，測定值276 [M + H]⁺ 。

步驟2：在0℃下，向N-[（4-甲氧基苯基）甲基]-4-硝基-1-氧-吡啶-1-鎓-2-胺（5.0 g，18.16 mmol）的CHCl₃ （50 mL）逐滴加入的PCl₃ （8.4 g，60.8 mmol），加完後將反應混合物升至25℃並劇烈攪拌反應16小時。TLC（PE：EA=1：1）顯示反應完全。將反應混合物過濾，所得固體用PE（30 mL * 3）洗滌，得到黃色固體化合物N-[（4-甲氧基苯基）甲基]-4-硝基-吡啶-2-胺（4.2克，粗品）未經進一步純化，直接用於下一步反應。MS (ESI) 計算值C₁₅ H₁₈ N₆ 259，測定值260[M + H]⁺ 。

步驟3：常溫下，向N-[（4-甲氧基苯基）甲基]-4-硝基-吡啶-2-胺（4.2 g，16.2mmol）的甲苯溶液中（10 mL）逐滴加入TFA（5.0 mL）。然後，將混合物在80℃下攪拌反應2小時。TLC（PE：EA=1：1）顯示反應完全。將混合物在減壓下濃縮除去溶劑。將殘餘物用H₂ O（50 mL）稀釋，用固體NaHCO₃ 調節pH至中性，水相用EA（50 mL*3）萃取。合併的有機相用無水硫酸鈉乾燥、過濾並減壓濃縮，所得殘留物用柱色譜法純化（二氧化矽，石油醚/乙酸乙酯=1/0〜1：1），得到橙色固體化合物4-硝基吡啶-2-胺（700 mg，5.0 mmol，產率31.1%）。MS (ESI) 計算值C₅ H₅ N₃ O₂ 139，測定值140 [M + H]⁺ 。

步驟4：常溫下，向4-硝基吡啶-2-胺（200 mg，1.4 mmol）的DME（5 mL）中加入3-溴-2-氧代-丙酸乙酯（280 mg，1.4 mmol）。所得混合物在25℃下攪拌反應1小時後，減壓濃縮除去溶劑，殘餘物用EtOH（10 mL）溶解，並回流反應3小時。TLC顯示反應完全。反應液冷卻至常溫，減壓濃縮溶劑。殘餘物用飽和NaHCO₃ 水溶液（25 mL）鹼化，水相用DCM（15 mL * 3）萃取，合併的有機相用無水硫酸鈉乾燥、過濾並減壓濃縮，所得到殘餘物用快速柱色譜法（EA:PE =10-60%）純化，得到淺黃色固體化合物7-硝基咪唑並[1,2-a]吡啶-2-羧酸乙酯（302 mg，產率88.9%）。MS (ESI) 計算值C₁₀ H₉ N₃ O₄ 235，測定值236 [M + H]⁺ 。

步驟5：常溫下，向7-硝基咪唑並[1,2-a]吡啶-2-羧酸乙酯（150 mg，637.8 mmol）的乙醇（20 mL）溶液中，分別加入HCl（7 mg ，0.2 mmol）和PtO₂ （15 mg，0.6 mmol），反應體系重複抽真空充N₂ 三次後，充入H₂ （50 psi）並在50℃攪拌反應16小時。TLC（PE：EA=1：1）顯示反應完全。將反應混合物體積濃縮過半，過濾，得到白色固體化合物7-氨基-5,6,7,8-四氫咪唑並[1,2-α]吡啶-2-羧酸乙酯鹽酸鹽（120 mg，粗品）。MS (ESI) 計算值C₁₀ H₁₅ N₃ O₂ 209，測定值210 [M + H]⁺ 。

步驟6：將7-氨基-5,6,7,8-四氫咪唑並[1,2-a]吡啶-2-羧酸乙酯鹽酸鹽（100 mg，0.4 mmol）和4-氯-7-（對甲苯磺醯基）吡咯並[2,3-d]嘧啶（137 mg，0.4 mmol）溶解於n-BuOH（5 mL）中，並加入DIEA（158 mg，1.2 mmol），所得混合物攪拌回流反應16小時。LC-MS顯示反應完全。反應混合液減壓濃縮，所得殘餘物用H₂ O（10 mL）稀釋，水相用EA萃取（20 mL *3）。合併的有機相用無水硫酸鈉乾燥、過濾、減壓濃縮，得到的殘餘物通過製備型TLC（PE：EA = 0:1）純化得到淺黃色固體化合物7-[[7-（對甲苯磺醯基）吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-5,6,7,8-四氫咪唑並[1,2-a]吡啶-2-羧酸乙酯（55 mg，0.11 mmol，產率28.1%）。MS (ESI) 計算值C₂₃ H₂₄ N₆ O₄ S 480，測定值481 [M + H]⁺ 。

步驟7：在0℃下，N₂ 氛圍中，向7-[[7-（對甲苯磺醯基）吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-5,6,7,8-四氫咪唑並[1,2-a]吡啶-2-羧酸乙酯（3.0 g，6.2 mmol）的THF（150 mL）溶液中，分批加入NaH（499 mg，12.5 mmol）。該混合物在此溫度下繼續攪拌1小時，然後逐滴加入MeI（7.1 g，50.2 mmol），加完後，移到常溫繼續攪拌1小時。TLC顯示反應完成。加入飽和NH₄ Cl (10 mL)淬滅，稍後加入冰水（50 mL）沖釋，水相用DCM/MeOH (3：1，50 mL*3）混合溶劑萃取。將合併的有機相用硫酸鈉乾燥、過濾、減壓濃縮，得到粗產物用快速柱色譜法（DCM：MeOH =10：1）純化得到淡黃色固體7-[甲基-[7-（對甲苯磺醯基）吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-5,6,7,8-四氫咪唑並[1,2-a]吡啶-2-羧酸乙酯（中間體1）（1.5 g，產率45 %）。MS (ESI) 計算值C₂₄ H₂₆ N₆ O₄ S 494，測定值495 [M + H]⁺ 。

步驟8：在25℃下，向7-[甲基-[7-（對甲苯磺醯基）吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-5,6,7,8-四氫咪唑並[1,2-a]吡啶-2-羧酸乙酯（1.5 g，3.0 mmol）的EtOH（20 mL）溶液中，加入NaOEt（1.0 g，15 mmol），並在此溫度下攪拌16小時。TLC（DCM：MeOH = 10：1）顯示反應完全。反應混合物在減壓下濃縮，將殘餘物用水(50 mL)稀釋，水相用DCM/MeOH (10：1，50 mL*3）萃取。合併的有機相用無水硫酸鈉乾燥、過濾、減壓濃縮，得到殘留物通過柱色譜法純化（二氧化矽，DCM/MeOH = 1/0〜10：1），得到白色固體化合物7-[甲基（7H-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基）氨基]-5,6,7,8-四氫咪唑並[1,2-a]吡啶-2-羧酸乙酯（WX550，中間體2）（600 mg，1.76 mmol，產率58.2%）。MS (ESI) 計算值C₁₇ H₂₀ N₆ O₂ 340，測定值341 [M + H]⁺ 。

步驟9：在0℃下，向7-[甲基（7H-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基）氨基]-5,6,7,8-四氫咪唑並[1,2-a]吡啶-2-羧酸乙酯（500 mg，1.5 mmol）的THF（10.00mL）溶液中，分批加入LiAlH₄ （111 mg，2.9 mmol），所得混合物移到常溫攪拌2小時。TLC（DCM：MeOH = 10:1）顯示反應完成。在0℃下，加入H₂ O/THF=1/1（20 mL）淬滅，過濾，水相用DCM/MeOH （10：1，50 mL*3）萃取。合併的有機相用無水硫酸鈉乾燥、過濾、減壓濃縮，得到淺黃色固體化合物7-[甲基（7H-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基）氨基]-5,6,7,8-四氫咪唑並[1,2-a]吡啶-2-基]甲醇（中間體3）（320 mg，粗品），未經進一步純化，直接用於下一步反應。MS (ESI) 計算值C₁₅ H₁₈ N₆ O 298，測定值299 [M + H]⁺ 。

步驟10：常溫下，向7-[甲基（7H-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基）氨基]-5,6,7,8-四氫咪唑並[1,2-a]吡啶-2-基]甲醇（150 mg，0.5 mmol）的DCM（5 mL）溶液中，加入二氯亞碸（300 mg，2.5 mmol），所得混合物在70℃下攪拌1小時。TLC（DCM：MeOH=10：1）顯示反應完成。減壓下濃縮，得到粗產物N-〔2-（氯甲基）-5,6,7,8-四氫咪唑並[1,2-a]吡啶-7-基]-N-甲基-7H-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-胺（150 mg，鹽酸鹽粗品）(中間體4)，未經進一步純化，直接用於下一步反應。MS (ESI) 計算值C₁₅ H₁₇ ClN₆ 316，測定值317 [M + H]⁺ 。

步驟11：向N-[2-（氯甲基）-5,6,7,8-四氫咪唑並[1,2-a]吡啶-7-基]-N-甲基-7H-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-胺（150 mg，0.42 mmol）的DMSO（5 mL）溶液中，加入氰化鈉（41mg，0.85 mmol），然後將混合物在40℃下攪拌反應10小時。LC-MS表明原料消耗完全，產物生成。加入水（10 mL）淬滅，水相用DCM/MeOH(3：1，20 mL * 3)萃取。合併有機相並用飽和鹽水（20 mL*2）洗滌，無水硫酸鈉乾燥、過濾、減壓濃縮，得到的殘餘物用製備型HPLC（鹼性條件）分離得到白色固體化化合物2-[7-[甲基（7H-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基）氨基] -5,6,7,8-四氫咪唑並[1,2-a]吡啶-2-基]乙腈(WX552)（60 mg，產率46%）。MS (ESI) 計算值C₁₆ H₁₇ N₇ 307，測定值308 [M + H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d₆ ) 　 8.12 (s, 1H), 7.16 (d, J=3.01 Hz, 1H), 7.02 (s, 1H), 6.61 (d, J=3.01 Hz, 1H), 4.11-4.22 (m, 1H), 3.95-4.08 (m, 1H), 3.79 (s, 2H), 3.28 (s, 3H), 2.88-3.08 (m, 2H), 2.26-2.41 (m, 1H), 2.05 (d, J=11.80 Hz, 1H)。

步驟12：將消旋的2-[7-[甲基（7H-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基）氨基] -5,6,7,8-四氫咪唑並[1,2-a]吡啶-2-基]乙腈(WX552) (30 mg) 通過手性柱分離，得到（S或R）2 - [7-[甲基（7H-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基）氨基] -5,6,7,8-四氫咪唑並[1,2-a]吡啶-2-基]乙腈 (WX612，10 mg) 和（R或S）2 - [7-[甲基（7H-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基）氨基] -5,6,7,8-四氫咪唑並[1,2-a]吡啶-2-基]乙腈(WX613，11 mg)。

SFC分離條件：柱：AD (250 mm * 30 mm，10 mM)手性柱流動相：A：超臨界CO₂ ，B：異丙醇(含0.1%氨水)，A：B = 60：40 流速：80 mL/min 柱溫：38°C 波長：220 nm 噴射壓力：100 Bar 噴嘴溫度：60°C 蒸發溫度：20°C 修整溫度：25°C

WX612：保留時間4.870 min；MS (ESI) 計算值C₁₆ H₁₇ N₇ 307，測定值308 [M + H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, METHANOL-d₄ ) 　 8.15 (s, 1H), 7.14 (d, J=3.51 Hz, 1H), 7.05 (s, 1H), 6.71 (d, J=3.51 Hz, 1H), 5.41-5.51 (m, 1H), 4.23-4.30 (m, 1H), 4.14 (dt, J=4.27, 12.17 Hz, 1H), 3.77 (s, 2H), 3.40 (s, 3H), 3.04-3.19 (m, 2H), 2.46 (dq, J=5.77, 12.38 Hz, 1H), 2.21 (d, J=13.05 Hz, 1H)。

WX613：保留時間5.709 min；MS (ESI) 計算值C₁₆ H₁₇ N₇ 307，測定值308 [M + H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, METHANOL-d₄ ) 　 8.15 (s, 1H), 7.14 (d, J=3.51 Hz, 1H), 7.04 (s, 1H), 6.70 (d, J=3.51 Hz, 1H), 5.37-5.51 (m, 1H), 4.22-4.31 (m, 1H), 4.14 (dt, J=4.52, 12.30 Hz, 1H), 3.77 (s, 2H), 3.40 (s, 3H), 3.03-3.20 (m, 2H), 2.46 (dq, J=5.90, 12.34 Hz, 1H), 2.21 (d, J=11.80 Hz, 1H)。

實施例2：

步驟1：常溫下，向7-[甲基（7H-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基）氨基] -5,6,7,8-四氫咪唑並[1,2-a]吡啶-2-基]甲醇（中間體2）（200 mg，0.44 mmol）的DCM（20 mL）溶液中，加入活化的二氧化錳（384 mg，4.4 mmol）。所得懸濁液在50℃攪拌反應4小時。LC-MS顯示反應物被完全消耗。將反應混合物冷卻至室溫，過濾、濃縮、得到白色固體7-[甲基（7H-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基）氨基] -5,6,7,8-四氫咪唑並[1,2-a] 吡啶-2-甲醛（160 mg，粗品），無需進一步純化，直接用於下一步反應。MS (ESI) 計算值C₁₅ H₁₆ N₆ O 296，測定值297 [M + H]⁺ 。

步驟2：在0℃下，氮氣氛圍中，向含有7-[甲基（7H-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基）氨基] -5,6,7,8-四氫咪唑並[1,2-a] 吡啶-2-甲醛（159 mg，0.35 mmol）的DCM（8 mL）溶液中加入二乙氨基三氟化硫(DAST)（228 mg，1.41 mmol），加完後將該混合物移到25℃攪拌反應14小時。LC-MS顯示反應完全。將反應混合物倒入冷卻的飽和碳酸氫鈉溶液（10 mL）中，水相用DCM/MeOH（10：1，15 mL*3）萃取。合併的有機相用飽和鹽水洗滌、無水硫酸鈉乾燥、過濾、減壓濃縮。將殘餘物通過製備型HPLC（鹼性方法）純化，得到N-(2-(二氟甲基)-5,6,7,8-四氫咪唑並[1,2-a] 吡啶-7-基)-N-甲基-7H-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-氨基(WX611)（156 mg，產率93.6%）。MS (ESI) 計算值C₁₆ H₁₈ F₂ N₆ 332，測定值333 [M + H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, METHANOL-d₄ ) 　 8.44 (br. s., 1H), 8.01 (br. s., 1H), 7.40 (br. s., 1H), 7.03 (br. s., 1H), 5.84-6.22 (m, 1H), 5.64 (br. s., 1H), 4.55 (d, J=9.79 Hz, 1H), 4.40 (d, J=10.29 Hz, 1H), 3.78 (t, J=14.43 Hz, 2H), 3.56 (br. s., 3H), 3.48 (br. s., 2H), 3.37 (s, 1H), 2.68 (d, J=7.53 Hz, 1H), 2.42 (d, J=12.30 Hz, 1H)。

實施例3：

步驟1：常溫下，向N-[2-(氯甲基)-5,6,7,8-四氫咪唑並[1,2-a] 吡啶-7-基]-N-甲基-7-(對甲基苯磺醯基) 吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-胺（中間體5）（130 mg，0.28 mmol）的吡啶（5 mL）溶液中加入NH₃ 的MeOH溶液(10 mL，10 M)，所得的該混合物在25℃攪拌10小時。TLC（DCM：MeOH = 10：1）顯示反應完全。加入H₂ O（20 mL）淬滅。水相用DCM/MeOH（5：1，15 mL*3）萃取。合併的有機相用飽和鹽水洗滌、無水硫酸鈉乾燥、過濾、減壓濃縮。得到黃色固體化合物N-[2-(胺甲基)-5,6,7,8-四氫咪唑並[1,2-a] 吡啶-7-基]-N-甲基-7-(對甲基苯磺醯基) 吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-胺（60 mg，粗品），無需進一步純化，直接用於下一步反應。MS (ESI) 計算值C₂₂ H₂₅ N₇ O₂ S 451，測定值452 [M + H]⁺ 。

步驟2：0℃下，向溶解有N-[2-(胺甲基)-5,6,7,8-四氫咪唑並[1,2-a] 吡啶-7-基]-N-甲基-7-(對甲基苯磺醯基) 吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-胺（150 mg，0.33 mmol）和TEA（100 mg，1 mmol）的DCM（5 mL）溶液中加入甲磺醯氯（46 mg，0.4 mmol），所得混合物移到25℃下攪拌反應16小時。LC-MS顯示反應完全。將該混合物在減壓下濃縮以除去溶劑。所得殘餘物用H₂ O（15 mL）溶解，並用DCM/MeOH（5：1，30 mL*3）萃取。將合併的有機層用無水硫酸鈉乾燥、過濾、減壓濃縮得到淺黃色固體化合物N-((7-(甲基-(7-(對甲苯醯基-7H-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基)胺)- 5,6,7,8-四氫咪唑並[1,2-a] 吡啶-2-基)甲基)甲烷磺醯胺（60 mg，粗品），無需進一步純化，直接用於下一步反應。MS (ESI) 計算值C₂₃ H₂₇ N₇ O₄ S₂ 529，測定值530 [M + H]⁺ 。

步驟3：常溫下，向N-((7-(甲基-(7-(對甲苯醯基-7H-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基)胺)- 5,6,7,8-四氫咪唑並[1,2-a] 吡啶-2-基)甲基)甲烷磺醯胺（50 mg，0.94 mmol）的H₂ O（5 mL）/THF（5毫升）溶液中加入NaOH（6 mg，0.14 mmol）。所得的該混合物在90℃攪拌回流4小時。TLC顯示原料消耗完全，新點生成；LCMS顯示目標分子量。將反應混合物在減壓下濃縮以除去溶劑。將殘餘物用H₂ O（15 mL）溶解，並用二氯甲烷/異丙醇（3：1，20 mL* 3）萃取。將合併的有機層用無水硫酸鈉乾燥、過濾、減壓濃縮。得到殘餘物通過製備型HPLC（鹼性條件）純化得到N-((7-(甲基-(7H-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基)胺)- 5,6,7,8-四氫咪唑並[1,2-a] 吡啶-2-基)甲基)甲烷磺醯胺（WX606，22 mg，產率62.1%）。MS (ESI) 計算值C₁₆ H₂₁ N₇ O₂ S 375，測定值376 [M + H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, METHANOL-d₄ ) 　 8.15 (s, 1H), 7.13 (d, J=3.51 Hz, 1H), 7.01 (s, 1H), 6.70 (d, J=3.76 Hz, 1H), 5.39-5.48 (m, 1H), 4.22-4.29 (m, 1H), 4.17 (s, 3H), 3.40 (s, 3H), 3.04-3.14 (m, 2H), 2.91 (s, 3H), 2.45 (dq, J=5.90, 12.34 Hz, 1H), 2.21 (d, J=11.29 Hz, 1H)。

實施例 4：

N-甲基-N-[2-(甲氨甲基)-5,6,7,8-四氫咪唑並[1,2-a] 吡啶-7-基]-7H-7H-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-胺（WX605）的製備和純化方法與 WX606的製備和純化方法相類似。向N-[2-(氯甲基)-5,6,7,8-四氫咪唑並[1,2-a] 吡啶-7-基]-N-甲基-7-(對甲基苯磺醯基) 吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-胺（中間體5）（130 mg，0.28 mmol）的吡啶（5 mL）溶液中加入甲胺的MeOH溶液，得到甲胺化合物，然後用NaOH在H₂ O（5 mL）/ THF（5毫升）溶液中水解，反應完全後用同樣的後處理和HPLC分離，得到N-甲基-N-[2-(甲氨甲基)-5,6,7,8-四氫咪唑並[1,2-a] 吡啶-7-基]-7H-7H-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-胺（WX605）(25 mg，產率68%)。MS (ESI) 計算值C₁₆ H₂₁ N₇ 311，測定值312 [M + H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) 　 8.15 (s, 1H), 7.02 (d, J=3.51 Hz, 1H), 6.83 (s, 1H), 6.54 (d, J=3.51 Hz, 1H), 5.46 (br. s., 1H), 4.00-4.18 (m, 2H), 3.67 (s, 2H), 3.37 (d, J=16.31 Hz, 2H), 3.32 (s, 3H), 3.08-3.19 (m, 1H), 2.96 (dd, J=11.80, 16.06 Hz, 1H), 2.44 (s, 3H)。

實施例5：

步驟1：在乙基7-[甲基-[7-（對甲苯磺醯基）吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-5,6,7,8-四氫咪唑[1,2-a]吡啶-2-羧酸甲酯 (4.0 g，8.1 mmol)的THF (40 mL)和H₂ O (8 mL)溶液中，加入LiOH‧H₂ O (509 mg，12.1 mmol)，將混合物在20℃下攪拌10小時。TLC表明反應物完全被消耗。將反應混合物在減壓下除去THF，殘餘物用2M HCl (4 mL)調至pH=2-3，生成白色固體，將固體濾出並在減壓下濃縮得到7-[甲基-[7-（對甲苯磺醯基）吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-5,6,7,8-四氫咪唑[1,2-a] 吡啶-2-羧酸 (3.6 g，產率95.4%)為白色固體。MS (ESI) 計算值C₂₂ H₂₂ N₆ O₄ S 466，測定值467 [M + H]⁺ 。

步驟2：在0°C下，向7-[甲基-[7-（對甲苯磺醯基）吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-5,6,7,8-四氫咪唑[1,2-a]吡啶-2-羧酸(1.8 g，3.9 mmol)的DMF(20 mL) 溶液中，加入CDI(751 mg，4.6 mmol)，反應液溫度升至25°C攪拌2小時後，加入固體氯化銨(2.1 g，38.6 mmol)後，反應常溫過夜。LC-MS顯示反應物完全被消耗。將反應混合物倒入冰水(50 mL)中，白色固體析出，將固體濾出，用水（20 mL）洗滌，減壓旋乾得到7-[甲基-[7-（對甲苯磺醯基）吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-5,6,7,8-四氫咪唑[1,2-a]吡啶-2-甲醯胺(2.5 g粗品)為白色固體，產品直接用於下一步。MS (ESI) 計算值 C₂₂ H₂₃ N₇ O₃ S 465，測定值466 [M + H]⁺ 。

步驟3：將7-[甲基-[7-（對甲苯磺醯基）吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-5,6,7,8-四氫咪唑[1,2-a]吡啶-2-甲醯胺(2.5 g，5.4 mmol)溶解在THF (20 mL)、MeOH (10 mL)和H₂ O (6 mL)中，加入NaOH (429.6 mg，10.7 mmol)。將混合物加熱至60℃攪拌30分鐘。LC-MS顯示反應物被完全消耗。將反應混合物在減壓下濃縮得到7-[甲基-[7氫吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-5,6,7,8-四氫咪唑[1,2-a]吡啶-2-甲醯胺(2.0 g粗品)為白色固體，產品直接用於下一步。MS (ESI) 計算值C₁₅ H₁₇ N₇ O 311，測定值312 [M + H]⁺ 。

步驟4：在0°C下，向7-[甲基-[7氫吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-5,6,7,8-四氫咪唑[1,2-a]吡啶-2-甲醯胺(2.0 g，6.4 mmol)和三乙胺(3.9 g，38.5 mmol)的THF (20 mL)溶液中逐滴加入TFAA (4.1 g，19.3 mmol)，加完後，將反應液常溫攪拌30分鐘。LC-MS顯示原料被完全消耗。將反應混合物倒入冰水（20 mL）中，用DCM/MeOH(5：1，100 mL * 2)萃取。將合併的有機層用飽和食鹽水（20 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾並在減壓下濃縮得到殘餘物。將殘餘物通過柱色譜法純化（DCM/MeOH=40/1 to 20:1）得到7-[甲基-[7氫吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-5,6,7,8-四氫咪唑[1,2-a]吡啶-2-腈（WX591，78 mg，產率為19.8%）。MS (ESI) 計算值C₁₅ H₁₅ N₇ 293，測定值294 [M + H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 　 11.44-11.71 (m, 1H), 7.99-8.17 (m, 2H), 7.11-7.20 (m, 1H), 6.63 (dd, J=1.76, 3.26 Hz, 1H), 5.33 (br. s., 1H), 4.21-4.31 (m, 1H), 4.13 (dt, J=4.14, 12.49 Hz, 1H), 3.27 (s, 3H), 2.91-3.11 (m, 2H), 2.31-2.44 (m, 1H), 2.07 (d, J=11.54 Hz, 1H)。

步驟5：將消旋的7-[甲基-[7氫吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-5,6,7,8-四氫咪唑[1,2-a]吡啶-2-腈(30 mg，102.3 mmol) 通過手性柱分離得到(S或R)-7-[甲基-[7氫吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-5,6,7,8-四氫咪唑[1,2-a]吡啶-2-腈(P1，WX614，10 mg，產率為32.8%)和(R或S)-7-[甲基-[7氫吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-5,6,7,8-四氫咪唑[1,2-a]吡啶-2-腈(WX615，10 mg，產率為31.9%)。

SFC分離條件：柱：AD (250 mm * 30 mm，10 mM)手性柱流動相：A：超臨界CO₂ ，B：乙醇(含0.1%異丙醇)，A：B=55：45 流速：80 mL/min 柱溫：38°C 波長：220 nm 噴射壓力：100 Bar 噴嘴溫度：60°C 蒸發溫度：20°C 修整溫度：25°C

WX614：保留時間5.507 min；MS (ESI) 計算值C₁₅ H₁₅ N₇ 293，測定值294 [M + H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 　 11.44-11.71 (m, 1H), 7.99-8.17 (m, 2H), 7.11-7.20 (m, 1H), 6.63 (dd, J=1.76, 3.26 Hz, 1H), 5.33 (br. s., 1H), 4.21-4.31 (m, 1H), 4.13 (dt, J=4.14, 12.49 Hz, 1H), 3.27 (s, 3H), 2.91-3.11 (m, 2H), 2.31-2.44 (m, 1H), 2.07 (d, J=11.54 Hz, 1H)。

WX615：保留時間6.407 min；MS (ESI) 計算值C₁₅ H₁₅ N₇ 293，測定值294 [M + H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 　 11.44-11.71 (m, 1H), 7.99-8.17 (m, 2H), 7.11-7.20 (m, 1H), 6.63 (dd, J=1.76, 3.26 Hz, 1H), 5.33 (br. s., 1H), 4.21-4.31 (m, 1H), 4.13 (dt, J=4.14, 12.49 Hz, 1H), 3.27 (s, 3H), 2.91-3.11 (m, 2H), 2.31-2.44 (m, 1H), 2.07 (d, J=11.54 Hz, 1H)。

實施例6：

步驟1：7-[甲基(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基]-5,6,7,8-四氫咪唑[1,2-a]吡啶-2-羧酸的製備和純化與7-[甲基-[7氫吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-5,6,7,8-四氫咪唑[1,2-a] 吡啶-2-甲醯胺的製備和純化相同。MS (ESI) 計算值C₁₅ H₁₆ N₆ O₂ 312，測定值313 [M + H]⁺ 。

步驟2：將7-[甲基(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基]-5,6,7,8-四氫咪唑[1,2-a]吡啶-2-羧酸（120 mg，384.2 mmol）、EDCI（184 mg，960.5 mmol）溶解在吡啶（5 mL）中，反應液在25℃下攪拌15分鐘後，加入3,3-二氟環丁胺（49 mg，461.1 mmol），混合物在25℃下攪拌1小時。LC-MS顯示原料消耗完全。反應液加水（20 mL）稀釋，用DCM：i-PrOH=3：1 (20 mL * 3)萃取，合併的有機層用無水硫酸鈉乾燥、過濾和減壓濃縮得到殘餘物。將殘餘物通過製備型HPLC純化（鹼性條件）得到氮-(3,3-二氟環丁基)-7-[甲基(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基]-5,6,7,8-四氫咪唑並[1,2-a]吡啶-2-甲醯胺(WX593)（30 mg，產率15.9%）。MS (ESI) 計算值C₁₉ H₂₁ F₂ N₇ O 401，測定值402 [M + H]⁺ 。¹ H NMR(400 MHz, METHANOL-d₄ ) 　 8.15 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.14 (d, J=3.76 Hz, 1H), 6.71 (d, J=3.51 Hz, 1H), 5.42-5.53 (m, 1H), 4.30-4.39 (m, 2H), 4.14-4.27 (m, 1H), 3.41 (s, 3H), 3.08-3.23 (m, 2H), 2.91-3.05 (m, 2H), 2.62-2.78 (m, 2H), 2.48 (dq, J=5.65, 12.34 Hz, 1H), 2.23 (d, J=11.29 Hz, 1H)。

類似於化合物WX593的製備和純化方法得到化合物WX579、WX580、WX581、WX592和WX604。

WX579（15 mg，產率9.6%）。MS (ESI) 計算值C₁₇ H₁₈ F₃ N₇ O 393，測定值394 [M + H]⁺ 。¹ H NMR(400 MHz, METHANOL-d₄ ) 　 8.15 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.14 (d, J=3.51 Hz, 1H), 6.71 (d, J=3.51 Hz, 1H), 5.41-5.54 (m, 1H), 4.28-4.39 (m, 1H), 4.20 (dt, J=4.39, 12.36 Hz, 1H), 4.03-4.13 (m, 2H), 3.40 (s, 3H), 3.08-3.23 (m, 2H), 2.47 (dq, J=5.77, 12.38 Hz, 1H), 2.23 (d, J=11.54 Hz, 1H)。

WX580（25 mg，產率29.7%）。MS (ESI) 計算值C₁₇ H₁₉ F₂ N₇ O 375，測定值376 [M + H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, METHANOL-d₄ ) 　 8.44 (br. s., 1H), 8.01 (br. s., 1H), 7.40 (br. s., 1H), 7.03 (br. s., 1H), 5.84-6.22 (m, 1H), 5.64 (br. s., 1H), 4.55 (d, J=9.79 Hz, 1H), 4.40 (d, J=10.29 Hz, 1H), 3.78 (t, J=14.43 Hz, 2H), 3.56 (br. s., 3H), 3.48 (br. s., 2H), 3.37 (s, 1H), 2.68 (d, J=7.53 Hz, 1H), 2.42 (d, J=12.30 Hz, 1H)。

WX581（35 mg，產率44.6%）。MS (ESI) 計算值C₁₇ H₁₈ N₈ O 350，測定值351 [M + H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, METHANOL-d₄ ) 　 8.15 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.14 (d, J=3.76 Hz, 1H), 6.71 (d, J=3.51 Hz, 1H), 5.42-5.55 (m, 1H), 4.30-4.40 (m, 3H), 4.21 (dt, J=4.52, 12.42 Hz, 1H), 3.41 (s, 3H), 3.08-3.23 (m, 2H), 2.48 (tt, J=6.24, 12.45 Hz, 1H), 2.23 (d, J=10.29 Hz, 1H)。

WX592（25 mg，產率15.6%）。MS (ESI) 計算值C₁₈ H₂₃ N₇ O₃ S 417，測定值418 [M + H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, METHANOL-d₄ ) 　 8.44 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.41 (d, J=3.51 Hz, 1H), 7.04 (d, J=3.76 Hz, 1H), 5.64 (d, J=8.53 Hz, 1H), 4.55 (dd, J=4.02, 13.30 Hz, 1H), 4.37 (dt, J=4.27, 12.55 Hz, 1H), 3.88 (t, J=6.65 Hz, 2H), 3.56 (s, 3H), 3.42-3.49 (m, 4H), 3.05 (s, 3H), 2.59-2.74 (m, 1H), 2.42 (d, J=13.05 Hz, 1H)。

WX604（65 mg，產率41.6%）。MS (ESI) 計算值C₁₆ H₁₉ N₇ O 325，測定值326 [M + H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) 　 8.13 (s, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.02 (d, J=3.51 Hz, 1H), 6.52 (d, J=3.51 Hz, 1H), 5.45 (br. s., 1H), 4.06-4.25 (m, 2H), 4.02 (br. s., 2H), 3.26-3.36 (m, 4H), 3.07-3.19 (m, 1H), 2.96 (dd, J=11.80, 16.06 Hz, 1H), 2.09-2.37 (m, 2H)。

JAK1、JAK2、JAK3激酶體外活性測試。

實驗材料：重組人源JAK1、JAK2、JAK3蛋白酶均購自Life technology。LANCE Ultra ULight™-JAK-1 (Tyr1023) peptide和LANCE Eu-W1024 Anti-phosphotyrosine (PT66) 均購自PerkinElmer。使用多聯酶標儀 Envision (PerkinElmer)讀板。

實驗方法：將測試化合物進行3倍濃度梯度稀釋，終濃度為10 mM到0.17 nM 11個濃度，每個濃度兩個複孔；DMSO在檢測反應中的含量為1%。

JAK1酶反應： 2 nM JAK1 蛋白激酶，50 nM LANCE Ultra ULight™-JAK-1 (Tyr1023) peptide，38 mM ATP，50 mM HEPES (pH 7.5)，10 mM MgCl₂ ，1 mM EGTA，2 mM DTT，0.01% BRIJ-35。檢測板為White Proxiplate 384-Plus plate (PerkinElmer)，室溫反應90分鐘，反應體系為10 ml。

JAK2酶反應： 0.02 nM JAK2 蛋白激酶，50 nM LANCE Ultra ULight™-JAK-1 (Tyr1023) peptide，12 mM ATP，50 mM HEPES (pH 7.5)，10 mM MgCl₂ ，1 mM EGTA，2 mM DTT，0.01% BRIJ-35。檢測板為White Proxiplate 384-Plus plate (PerkinElmer)，室溫反應60分鐘，反應體系為10 ml。

JAK3酶反應： 0.05 nM JAK2 蛋白激酶，50 nM LANCE Ultra ULight™-JAK-1 (Tyr1023) peptide，4 mM ATP，50 mM HEPES (pH 7.5)，10 mM MgCl₂ ，1 mM EGTA，2 mM DTT，0.01% BRIJ-35。檢測板為White Proxiplate 384-Plus plate (PerkinElmer)，室溫反應90分鐘，反應體系為10 ml。

反應檢測：加10 ml檢測試劑至反應板中，其中LANCE Eu-W1024 Anti-phosphotyrosine (PT66)終濃度為2 nM，EDTA終濃度為10 mM，室溫孵育60分鐘，Envision儀器讀板。

數據分析：通過下列公式將讀數轉化成抑制率（%）= (Min-Ratio)/(Max-Min)×100%。4參數曲線擬合（Model 205 in XLFIT5，iDBS）測得IC₅₀ 數據，具體見表1。表1 A≤10 nM; 10＜B≤100 nM；100＜C≤1000 nM；D ＞ 1000 nM

藥代動力學(PK)試驗：將試驗化合物溶解後得到的澄清溶液分別經尾靜脈注射和灌胃給予雄性DBA/1小鼠體內（過夜禁食，7~8周齡）。給予受試化合物後，靜脈注射組在0.083、0.25、0.5、1、2、4、8和24小時，灌胃組在0.25、0.5、1、2、4、8和24小時，分別從下頜靜脈採血並離心後獲得血漿。採用LC-MS/MS法測定血藥濃度，使用WinNonlin™ Version 6.3藥動學軟體，以非房室模型線性對數梯形法計算相關藥代動力學參數。

表2-1 WX552在小鼠中的PK測試結果

表2-2 WX591在小鼠中的PK測試結果

表2-3 WX614 在小鼠中的PK測試結果

本發明的化合物WX552、WX591、WX614在小鼠中都有良好的口服生物利用度、較高的暴露量，有利於產生體內藥效。

大鼠佐劑誘導的關節炎模型藥效試驗：用大鼠佐劑關節炎模型驗證本發明化合物的治療關節炎的作用。雌性，體重160-180克Lewis大鼠用異氟烷麻醉後，在左後腳皮下注射0.1 ml結核分枝桿菌懸浮液。在造模13天後分組並給予相應的受試化合物，如對大鼠分別給予1 mpk、3 mpk、10 mpk的受試化合物WX614、10 mpk的受試化合物WX552和10 mpk的受試化合物WX591溶解在DMSO/PEG400/H₂ O混合溶媒中，並口服給予雌性Lewis大鼠（每個劑量組的受試動物數為10）。連續給藥兩周，期間觀察大鼠狀態，記錄足體積腫脹情況並評分。試驗表明本發明化合物WX614、WX552和WX591均展示出良好的關節炎抑制活性。

表3-1

小鼠膠原誘導的關節炎模型藥效試驗：用小鼠膠原誘導的關節炎模型驗證本發明化合物的治療關節炎的作用。選擇DBA/l雄性小鼠，於第0天和第21天尾根部皮下注射膠原與弗氏完全佐劑的乳劑，第29天左右開始分組，將發明化合物WX6144 (3 mpk、10 mpk、30 mpk)溶解在DMSO/PEG400/H₂ O[5/20/75 (v/v/v)]中，並口服給予CIA小鼠（上海斯萊克實驗動物有限公司，每個劑量組的受試動物數為10），連續給藥2周，期間記錄小鼠體重，並對小鼠的關節炎症進行臨床評分，結果顯示本發明化合物WX614對小鼠類風濕性關節炎有明顯的治療作用。

表3-2

無

Claims

式(Ⅰ)所示化合物或其藥學上可接受的鹽，其中， A選自C(R)或N； L₁ 選自單鍵、-C(=O)O-、-C(=O)-、-S(=O)-、-S(=O)₂ -、-C(=O)N(R)-、-N(R)C(=O)N(R)-、-N(R)-、-S(=O)N(R)-、-S(=O)₂ N(R)C(R)₂ -、-S(=O)N(R)C(R)₂ -； R₁ 選自H、CN、OH、NH₂ 、鹵素，或選自任選被1、2、3或4個R取代的：C_1-6 烷基、C_1-6 雜烷基、C_3-6 元環烷基、3~6元雜環烷基； R分別獨立地選自H、CN、OH、NH₂ 、鹵素，或分別選自任選被1、2、3或4個R’取代的：C_1-6 烷基、C_1-6 雜烷基； R’選自鹵素、OH、NH₂ 、CN、Me、Et、CF₃ 、CH₂ CF₃ 、NHCH₃ 、N(CH₃ )₂ ；所述「雜」選自雜原子或雜原子團，選自N、O、S、-C(=O)O-、-C(=O)-、-S(=O)-、-S(=O)₂ -，上述任意一種情況下所述「雜」的數目分別獨立地選自1、2或3。
如申請專利範圍第1項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中，R選自H、CN、OH、NH₂ 、鹵素，或選自任選被1、2或3個R’取代的：Me、Et、NHCH₃ 、N(CH₃ )₂ 、、。
如申請專利範圍第1或2項中任意一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中，L₁ 選自單鍵、-C(=O)O-、-C(=O)-、-S(=O)-、-S(=O)₂ -、-C(=O)NH-、-NHC(=O)NH-、-NH-、-S(=O)NH-、-S(=O)₂ NHCH₂ -、-S(=O)NHCH₂ -。
如申請專利範圍第1或2項中任意一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中，R₁ 選自H、CN、OH、NH₂ ，或選自任選被1、2、3或4個R取代的：C_1-3 烷基、C_1-2 烷基-N(C_1-2 烷基)₂ 、C_1-2 烷基-NH-C_1-2 烷基、C_1-3 烷基-S(=O)₂ -C_1-3 烷基、C_1-3 烷基-S(=O)- C_1-3 烷基、C_4-5 環烷基、4~5元雜環烷基。
如申請專利範圍第4項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽，R₁ 選自CN，或選自任選被1、2、3或4個R取代的：Me、Et、、、、。
如申請專利範圍第5項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽，上述R₁ 選自CN、Me、、、、、、、。
如申請專利範圍第1項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽，其選自：。
如申請專利範圍第1項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽的製備方法，包括如下步驟：其中，PG為氨基保護基，優選自Cbz、Boc、Fmoc、Alloc、Teco、甲氧羰基、乙氧羰基、Pht、Tos、Tfa、Bn、PMB；以及 R₁ 如申請專利範圍第1項所定義。
一種藥物組合物，包括治療有效量的如申請專利範圍第1至8項中任意一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽，以及藥學上可接受的載體。
如申請專利範圍第1至8項中任意一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽或如申請專利範圍第9項所述的藥物組合物在製備治療與Janus激酶相關疾病的藥物中的應用。
如申請專利範圍第10項所述的應用，其中所述疾病為關節炎。
如申請專利範圍第10項所述的應用，其中所述疾病為類風濕性關節炎。