CN107531711B - Janus激酶抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一系列Janus激酶抑制剂，具体公开了式(Ⅰ)化合物或其药学上可接受的盐及其在制备治疗与JAK相关疾病的药物中的应用。

Description

Janus激酶抑制剂
技术领域
本发明涉及一系列Janus激酶抑制剂，具体涉及式(Ⅰ)化合物或其药学上可接受的盐。
背景技术
JAK属于参与炎症、自身免疫疾病、增殖性疾病、移植排斥、涉及软骨更新(turnover)受损的疾病、先天软骨畸形和/或与IL6分泌过多相关的疾病的酪氨酸激酶家族。本发明还提供所述化合物、含有所述化合物的药物组合物的生产方法和通过施用本发明化合物预防和/或治疗炎症、自身免疫疾病、增殖性疾病、移植排斥、涉及软骨更新受损的疾病、先天软骨畸形和/或与IL6分泌过多相关的疾病的方法。
Janus激酶(JAK)是转导细胞因子信号从膜受体到STAT转录因子的细胞质酪氨酸激酶。现有技术已经描述了四种JAK家族成员：JAK1、JAK2、JAK3和TYK2。当细胞因子与其受体结合时，JAK家族成员自磷酸化和/或彼此转磷酸化，随后STATs磷酸化，然后迁移至细胞核内以调节转录。JAK-STAT细胞内信号转导适用于干扰素、大多数白细胞介素以及多种细胞因子和内分泌因子，例如EPO、TPO、GH、OSM、 LIF、CNTF、GM-CSF和PRL(Vainchenker W.等人(2008))。
遗传学模型和小分子JAK抑制剂的组合研究揭示了几种JAKs的治疗潜能。通过小鼠和人遗传学确证JAK3是免疫抑制靶点(O’Shea J.等人(2004))。JAK3抑制剂成功用于临床开发，最初用于器官移植排斥，但后来也用于其它免疫炎性适应证，例如类风湿性关节炎(RA)、银屑病和克隆病(http： //clinicaltrials.gov/)。TYK2是免疫炎性疾病的潜在靶点，已经通过人遗传学和小鼠剔除研究确证 (Levy D.和Loomis C.(2007))。JAK1是免疫炎性疾病领域的新靶点。将JAK1与其它JAKs杂二聚化以转导细胞因子驱动的促炎信号传导。因此，预期抑制JAK1和/或其它JAK对于一系列炎性病症和其它由 JAK介导的信号转导驱动的疾病是具有治疗益处的。
发明内容
本发明提供了式(Ⅰ)所示化合物或其药学上可接受的盐，
Figure BDA0001437484740000011
其中，
R选自C(R)或N；
L1选自单键、-C(＝O)O-、-C(＝O)-、-S(＝O)-、-S(＝O)2-、-C(＝O)N(R)-、-N(R)C(＝O)N(R)-、-N(R)-、 -S(＝O)N(R)-、-S(＝O)2N(R)C(R)2-、-S(＝O)N(R)C(R)2-；
R1选自H、CN、OH、NH2、卤素，或选自任选被1、2、3或4个R取代的：C1-6烷基、C1-6杂烷基、C3-6元环烷基、3-6元杂环烷基；
R分别独立地选自H、CN、OH、NH2、卤素，或分别选自任选被1、2、3或4个R’取代的：C1-6烷基、C1-6杂烷基；
R’选自卤素、OH、NH2、CN、Me、Et、CF3、CH2CF3、NHCH3、N(CH3)2；
所述“杂”选自杂原子或杂原子团，选自N、O、S、-C(＝O)O-、-C(＝O)-、-S(＝O)-、-S(＝O)2-，上述任意一种情况下所述“杂”的数目分别独立地选自1、2或3。
本发明的一些方案中，上述R选自H、CN、OH、NH2、卤素，或选自任选被1、2或3个R’取代的： Me、Et、NHCH3、N(CH3)2、NHCH3、N(CH3)2、
Figure BDA0001437484740000021
本发明的一些方案中，上述L1选自单键、-C(＝O)O-、-C(＝O)-、-S(＝O)-、-S(＝O)2-、-C(＝O)NH-、- NH C(＝O)NH-、-NH-、-S(＝O)NH-、-S(＝O)2NHCH2-、-S(＝O)NHCH2-。
本发明的一些方案中，上述R1选自CN、OH、NH2，或选自任选被1、2、3或4个R取代的：C1-3烷基、C1-2烷基-N(C1-2烷基)2、C1-2烷基-NH-C1-2烷基、C1-3烷基-S(＝O)2-C1-3烷基、C1-3烷基-S(＝O)-C1-3烷基、 C4-5环烷基、4-5元杂环烷基。
本发明的一些方案中，上述R1选自CN，或选自任选被1、2、3或4个R取代的：Me、Et、
Figure BDA0001437484740000022
Figure BDA0001437484740000023
本发明的一些方案中，上述R1选自CN、Me、
Figure BDA0001437484740000024
Figure BDA0001437484740000025
本发明的化合物，其选自：
Figure BDA0001437484740000031
本发明还提供式(Ⅰ)化合物的制备方法，包括如下步骤：
Figure BDA0001437484740000041
其中，PG为氨基保护基，选自苄氧羰基(Cbz)、叔丁氧羰基(Boc)、笏氧羰基(Fmoc)、烯丙氧羰基(Alloc)、三甲基硅乙氧羰基(Teco)、甲氧羰基、乙氧羰基、邻苯二甲酰基(Pht)、对甲苯磺酰基(Tos)、三氟乙酰基(Tfa)、苄基(Bn)、对甲氧基苄基(PMB)。
本发明还提供一种药物组合物，包括治疗有效量的上述化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体。
本发明还提供了上述化合物或其药学上可接受的盐或上述药物组合物在制备治疗治疗与Janus激酶相关疾病的药物中的应用。
本发明的一些方案中，上述疾病为关节炎。
本发明的一些方案中，上述疾病为类风湿性关节炎。
相关定义
除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。这里所采用的术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，由本发明发现的具有特定取代基的化合物与相对无毒的酸或碱制备。当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的碱与这类化合物的中性形式接触的方式获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐包括钠、钾、钙、铵、有机氨或镁盐或类似的盐。当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的酸与这类化合物的中性形式接触的方式获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括无机酸盐，所述无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸，碳酸氢根，磷酸、磷酸一氢根、磷酸二氢根、硫酸、硫酸氢根、氢碘酸、亚磷酸等；以及有机酸盐，所述有机酸包括如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸和甲磺酸等类似的酸；还包括氨基酸(如精氨酸等)的盐，以及如葡糖醛酸等有机酸的盐(参见Berge et al.,"PharmaceuticalSalts",Journal of Pharmaceutical Science 66:1-19(1977))。本发明的某些特定的化合物含有碱性和酸性的官能团，从而可以被转换成任一碱或酸加成盐。
优选地，以常规方式使盐与碱或酸接触，再分离母体化合物，由此再生化合物的中性形式。化合物的母体形式与其各种盐的形式的不同之处在于某些物理性质，例如在极性溶剂中的溶解度不同。
本文所用的“药学上可接受的盐”属于本发明化合物的衍生物，其中，通过与酸成盐或与碱成盐的方式修饰所述母体化合物。药学上可接受的盐的实例包括但不限于：碱基比如胺的无机酸或有机酸盐、酸根比如羧酸的碱金属或有机盐等等。药学上可接受的盐包括常规的无毒性的盐或母体化合物的季铵盐，例如无毒的无机酸或有机酸所形成的盐。常规的无毒性的盐包括但不限于那些衍生自无机酸和有机酸的盐，所述的无机酸或有机酸选自2-乙酰氧基苯甲酸、2-羟基乙磺酸、乙酸、抗坏血酸、苯磺酸、苯甲酸、碳酸氢根、碳酸、柠檬酸、依地酸、乙烷二磺酸、乙烷磺酸、富马酸、葡庚糖、葡糖酸、谷氨酸、乙醇酸、氢溴酸、盐酸、氢碘酸盐、羟基、羟萘、羟乙磺酸、乳酸、乳糖、十二烷基磺酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲烷磺酸、硝酸、草酸、双羟萘酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、多聚半乳糖醛、丙酸、水杨酸、硬脂酸、亚乙酸、琥珀酸、氨基磺酸、对氨基苯磺酸、硫酸、单宁、酒石酸和对甲苯磺酸。
本发明的药学上可接受的盐可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下，这样的盐的制备方法是：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。一般地，优选醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈等非水介质。
除了盐的形式，本发明所提供的化合物还存在前药形式。本文所描述的化合物的前药容易地在生理条件下发生化学变化从而转化成本发明的化合物。此外，前体药物可以在体内环境中通过化学或生化方法被转换到本发明的化合物。
本发明的某些化合物可以以非溶剂化形式或者溶剂化形式存在，包括水合物形式。一般而言，溶剂化形式与非溶剂化的形式相当，都包含在本发明的范围之内。
本发明的某些化合物可以具有不对称碳原子(光学中心)或双键。外消旋体、非对映异构体、几何异构体和单个的异构体都包括在本发明的范围之内。
本文中消旋体、ambiscalemic and scalemic或者对映体纯的化合物的图示法来自Maehr,J.Chem. Ed.1985,62:114-120。1985年，62：114-120。除非另有说明，用楔形键和虚线键表示一个立体中心的绝对构型。当本文所述化合物含有烯属双键或其它几何不对称中心，除非另有规定，它们包括E、 Z几何异构体。同样地，所有的互变异构形式均包括在本发明的范围之内。
本发明的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本发明设想所有的这类化合物，包括顺式和反式异构体、(-)-和(+)-对对映体、(R)-和(S)-对映体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)-异构体，及其外消旋混合物和其他混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，所有这些混合物都属于本发明的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物，均包括在本发明的范围之内。
可以通过的手性合成或手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(R)-和(S)-异构体以及D和L 异构体。如果想得到本发明某化合物的一种对映体，可以通过不对称合成或者具有手性助剂的衍生作用来制备，其中将所得非对映体混合物分离，并且辅助基团裂开以提供纯的所需对映异构体。或者，当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如羧基)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的常规方法进行非对映异构体拆分，然后回收得到纯的对映体。此外，对映异构体和非对映异构体的分离通常是通过使用色谱法完成的，所述色谱法采用手性固定相，并任选地与化学衍生法相结合(例如由胺生成氨基甲酸盐)。
本发明的化合物可以在一个或多个构成该化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素标记化合物，比如氚(3H)，碘-125(125I)或C-14(14C)。本发明的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本发明的范围之内。
术语“药学上可接受的载体”是指能够递送本发明有效量活性物质、不干扰活性物质的生物活性并且对宿主或者患者无毒副作用的任何制剂或载体介质代表性的载体包括水、油、蔬菜和矿物质、膏基、洗剂基质、软膏基质等。这些基质包括悬浮剂、增粘剂、透皮促进剂等。它们的制剂为化妆品领域或局部药物领域的技术人员所周知。关于载体的其他信息，可以参考Remington:The Science and Practice of Pharmacy,21st Ed.,Lippincott,Williams&Wilkins(2005)，该文献的内容通过引用的方式并入本文。
术语“赋形剂”通常是指配制有效的药物组合物所需要载体、稀释剂和/或介质。
针对药物或药理学活性剂而言，术语“有效量”或“治疗有效量”是指无毒的但能达到预期效果的药物或药剂的足够用量。对于本发明中的口服剂型，组合物中一种活性物质的“有效量”是指与该组合物中另一种活性物质联用时为了达到预期效果所需要的用量。有效量的确定因人而异，取决于受体的年龄和一般情况，也取决于具体的活性物质，个案中合适的有效量可以由本领域技术人员根据常规试验确定。
术语“活性成分”、“治疗剂”，“活性物质”或“活性剂”是指一种化学实体，它可以有效地治疗目标紊乱、疾病或病症。
术语“被取代的”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，可以包括重氢和氢的变体，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为酮基(即＝O)时，意味着两个氢原子被取代。酮取代不会发生在芳香基上。术语“任选被取代的”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有规定，取代基的种类和数目在化学上可以实现的基础上可以是任意的。
当任何变量(例如R)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。因此，例如，如果一个基团被0-2个R所取代，则所述基团可以任选地至多被两个R所取代，并且每种情况下的R都有独立的选项。此外，取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
当一个连接基团的数量为0时，比如-(CRR)0-，表示该连接基团为单键。
当其中一个变量选自单键时，表示其连接的两个基团直接相连，比如A-L-Z中L代表单键时表示该结构实际上是A-Z。
当一个取代基为空缺时，表示该取代基是不存在的，比如A-X中X为空缺时表示该结构实际上是A。当一个取代基的键可以交叉连接到一个环上的两个原子时，这种取代基可以与这个环上的任意原子相键合。当所列举的取代基中没有指明其通过哪一个原子连接到化学结构通式中包括但未具体提及的化合物时，这种取代基可以通过其任何原子相键合。取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。例如，结构单元
Figure BDA0001437484740000071
表示其可在环己基或者环己二烯上的任意一个位置发生取代。
除非另有规定，术语“杂”表示杂原子或杂原子团(即含有杂原子的原子团)，包括碳(C)和氢(H) 以外的原子以及含有这些杂原子的原子团，例如包括氧(O)、氮(N)、硫(S)、硅(Si)、锗(Ge)、铝 (Al)、硼(B)、-O-、-S-、＝O、＝S、-C(＝O)O-、-C(＝O)-、-C(＝S)-、-S(＝O)、-S(＝O)2-，以及任选被取代的-C(＝O)N(H)-、-N(H)-、-C(＝NH)-、-S(＝O)2N(H)-或-S(＝O)N(H)-。
除非另有规定，“环”表示被取代或未被取代的环烷基、杂环烷基、环烯基、杂环烯基、环炔基、杂环炔基、芳基或杂芳基。所谓的环包括单环、联环、螺环、并环或桥环。环上原子的数目通常被定义为环的元数，例如，“5～7元环”是指环绕排列5～7个原子。除非另有规定，该环任选地包含1～3个杂原子。因此，“5～7元环”包括例如苯基、吡啶和哌啶基；另一方面，术语“5～7元杂环烷基环”包括吡啶基和哌啶基，但不包括苯基。术语“环”还包括含有至少一个环的环系，其中的每一个“环”均独立地符合上述定义。
除非另有规定，术语“杂环”或“杂环基”意指稳定的含杂原子或杂原子团的单环、双环或三环，它们可以是饱和的、部分不饱和的或不饱和的(芳族的)，它们包含碳原子和1、2、3或4个独立地选自N、O和S的环杂原子，其中上述任意杂环可以稠合到一个苯环上形成双环。氮和硫杂原子可任选被氧化(即NO和S(O)p，p是1或2)。氮原子可以是被取代的或未取代的(即N或NR，其中R是H或本文已经定义过的其他取代基)。该杂环可以附着到任何杂原子或碳原子的侧基上从而形成稳定的结构。如果产生的化合物是稳定的，本文所述的杂环可以发生碳位或氮位上的取代。杂环中的氮原子任选地被季铵化。一个优选方案是，当杂环中S及O原子的总数超过1时，这些杂原子彼此不相邻。另一个优选方案是，杂环中S及O原子的总数不超过1。如本文所用，术语“芳族杂环基团”或“杂芳基”意指稳定的5、6、7元单环或双环或7、8、9或10元双环杂环基的芳香环，它包含碳原子和1、2、3或4个独立地选自N、O和S的环杂原子。氮原子可以是被取代的或未取代的(即N或NR，其中R是H或本文已经定义过的其他取代基)。氮和硫杂原子可任选被氧化(即NO和S(O)p，p是1或2)。值得注意的是，芳香杂环上S和O原子的总数不超过1。桥环也包含在杂环的定义中。当一个或多个原子(即C、O、 N或S)连接两个不相邻的碳原子或氮原子时形成桥环。优选的桥环包括但不限于：一个碳原子、两个碳原子、一个氮原子、两个氮原子和一个碳-氮基。值得注意的是，一个桥总是将单环转换成三环。桥环中，环上的取代基也可以出现在桥上。
杂环化合物的实例包括但不限于：吖啶基、吖辛因基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并巯基呋喃基、苯并巯基苯基、苯并恶唑基、苯并恶唑啉基、苯并噻唑基、苯并三唑基、苯并四唑基、苯并异恶唑基、苯并异噻唑基、苯并咪唑啉基、咔唑基、4aH-咔唑基、咔啉基、苯并二氢吡喃基、色烯、噌啉基十氢喹啉基、2H,6H-1,5,2-二噻嗪基、二氢呋喃并[2,3-b]四氢呋喃基、呋喃基、呋咱基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1H-吲唑基、吲哚烯基、二氢吲哚基、中氮茚基、吲哚基、3H-吲哚基、异苯并呋喃基、异吲哚基、异二氢吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异恶唑基、亚甲二氧基苯基、吗啉基、萘啶基，八氢异喹啉基、恶二唑基、1,2,3-恶二唑基、1,2,4-恶二唑基、1,2,5-恶二唑基、1,3,4-恶二唑基、恶唑烷基、恶唑基、羟吲哚基、嘧啶基、菲啶基、菲咯啉基、吩嗪、吩噻嗪、苯并黄嘌呤基、酚恶嗪基、酞嗪基、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮基、4-哌啶酮基、胡椒基、蝶啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并恶唑、吡啶并咪唑、吡啶并噻唑、吡啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、 2H-吡咯基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、4H-喹嗪基、喹喔啉基、奎宁环基、四氢呋喃基、四氢异喹啉基、四氢喹啉基、四唑基，6H-1,2,5-噻二嗪基、1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、噻蒽基、噻唑基、异噻唑基噻吩基、噻吩并恶唑基、噻吩并噻唑基、噻吩并咪唑基、噻吩基、三嗪基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,5-三唑基、1,3,4-三唑基和呫吨基。还包括稠环和螺环化合物。
除非另有规定，术语“烃基”或者其下位概念(比如烷基、烯基、炔基、芳基等等)本身或者作为另一取代基的一部分表示直链的、支链的或环状的烃原子团或其组合，可以是完全饱和的(如烷基)、单元或多元不饱和的(如烯基、炔基、芳基)，可以是单取代或多取代的，可以是一价(如甲基)、二价 (如亚甲基)或者多价(如次甲基)，可以包括二价或多价原子团，具有指定数量的碳原子(如C1-C12表示1至12个碳，C1-12选自C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9、C10、C11和C12；C3-12选自C3、C4、C5、C6、 C7、C8、C9、C10、C11和C12。)。“烃基”包括但不限于脂肪烃基和芳香烃基，所述脂肪烃基包括链状和环状，具体包括但不限于烷基、烯基、炔基，所述芳香烃基包括但不限于6-12元的芳香烃基，例如苯、萘等。在一些实施例中，术语“烃基”表示直链的或支链的原子团或它们的组合，可以是完全饱和的、单元或多元不饱和的，可以包括二价和多价原子团。饱和烃原子团的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、异丁基、环己基、(环己基)甲基、环丙基甲基，以及正戊基、正己基、正庚基、正辛基等原子团的同系物或异构体。不饱和烃基具有一个或多个双键或三键，其实例包括但不限于乙烯基、2-丙烯基、丁烯基、巴豆基、2-异戊烯基、2-(丁二烯基)、2， 4-戊二烯基、3-(1，4-戊二烯基)、乙炔基、1-和3-丙炔基，3-丁炔基，以及更高级的同系物和异构体。
除非另有规定，术语“杂烃基”或者其下位概念(比如杂烷基、杂烯基、杂炔基、杂芳基等等)本身或者与另一术语联合表示稳定的直链的、支链的或环状的烃原子团或其组合，有一定数目的碳原子和至少一个杂原子组成。在一些实施例中，术语“杂烷基”本身或者与另一术语联合表示稳定的直链的、支链的烃原子团或其组合物，有一定数目的碳原子和至少一个杂原子组成。在一个典型实施例中，杂原子选自B、O、N和S，其中氮和硫原子任选地被氧化，氮杂原子任选地被季铵化。杂原子或杂原子团可以位于杂烃基的任何内部位置，包括该烃基附着于分子其余部分的位置，但术语“烷氧基”、“烷氨基”和“烷硫基”(或硫代烷氧基)属于惯用表达，是指分别通过一个氧原子、氨基或硫原子连接到分子的其余部分的那些烷基基团。实例包括但不限于-CH2-CH2-O-CH3、-CH2-CH2-NH-CH3、-CH2-CH2-N(CH3)-CH3、 -CH2-S-CH2-CH3、-CH2-CH2、-S(O)-CH3、-CH2-CH2-S(O)2-CH3、-CH＝CH-O-CH3、-CH2-CH＝N-OCH3和 CH＝CH-N(CH3)-CH3。至多两个杂原子可以是连续的，例如-CH2-NH-OCH3。
除非另有规定，术语“环烃基”、“杂环烃基”或者其下位概念(比如芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、环烯基、杂环烯基、环炔基、杂环炔基等等)本身或与其他术语联合分别表示环化的“烃基”、“杂烃基”。此外，就杂烃基或杂环烃基(比如杂烷基、杂环烷基)而言，杂原子可以占据该杂环附着于分子其余部分的位置。环烃基的实例包括但不限于环戊基、环己基、1-环己烯基、3-环己烯基、环庚基等。杂环基的非限制性实例包括1-(1,2,5,6-四氢吡啶基)、1-哌啶基、2-哌啶基，3-哌啶基、4-吗啉基、3-吗啉基、四氢呋喃-2-基、四氢呋喃吲哚-3-基、四氢噻吩-2-基、四氢噻吩-3-基，1-哌嗪基和2-哌嗪基。
除非另有规定，术语“烷基”用于表示直链或支链的饱和烃基,可以是单取代(如-CH2F)或多取代的(如-CF3)，可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)。烷基的例子包括甲基(Me)，乙基(Et)，丙基(如，n-丙基和异丙基)，丁基(如，n-丁基，异丁基，s-丁基，t-丁基)，戊基(如，n-戊基，异戊基，新戊基)等。
除非另有规定，“烯基”指在链的任何位点上具有一个或多个碳碳双键的烷基,可以是单取代或多取代的，可以是一价、二价或者多价。烯基的例子包括乙烯基，丙烯基，丁烯基，戊烯基，己烯基，丁间二烯基，戊间二烯基，己间二烯基等。
除非另有规定，“炔基”指在链的任何位点上具有一个或多个碳碳三键的烷基，可以是单取代或多取代的，可以是一价、二价或者多价。炔基的例子包括乙炔基，丙炔基，丁炔基，戊炔基等。
除非另有规定，环烷基包括任何稳定的环状或多环烃基，任何碳原子都是饱和的，可以是单取代或多取代的，可以是一价、二价或者多价。这些环烷基的实例包括，但不限于，环丙基、降冰片烷基、[2.2.2] 二环辛烷、[4.4.0]二环癸烷等。
除非另有规定，环烯基包括任何稳定的环状或多环烃基，该烃基在环的任何位点含有一个或多个不饱和的碳-碳双键，可以是单取代或多取代的，可以是一价、二价或者多价。这些环烯基的实例包括，但不限于，环戊烯基、环己烯基等。
除非另有规定，环炔基包括任何稳定的环状或多环烃基，该烃基在环的任何位点含有一个或多个碳 -碳三键，可以是单取代或多取代的，可以是一价、二价或者多价。
除非另有规定，术语“卤代素”或“卤素”本身或作为另一取代基的一部分表示氟、氯、溴或碘原子。此外，术语“卤代烷基”意在包括单卤代烷基和多卤代烷基。例如，术语“卤代(C1-C4)烷基”意在包括但不仅限于三氟甲基、2，2，2-三氟乙基、4-氯丁基和3-溴丙基等等。除非另有规定，卤代烷基的实例包括但不仅限于：三氟甲基、三氯甲基、五氟乙基，和五氯乙基。
“烷氧基”代表通过氧桥连接的具有特定数目碳原子的上述烷基，除非另有规定，C1-6烷氧基包括 C1、C2、C3、C4、C5和C6的烷氧基。烷氧基的例子包括但不限于：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基和S-戊氧基。除非另有规定，术语“芳基”表示多不饱和的芳族烃取代基，可以是单取代或多取代的，可以是一价、二价或者多价，它可以是单环或多环 (比如1至3个环；其中至少一个环是芳族的)，它们稠合在一起或共价连接。术语“杂芳基”是指含有一至四个杂原子的芳基(或环)。在一个示范性实例中，杂原子选自B、N、O和S，其中氮和硫原子任选地被氧化，氮原子任选地被季铵化。杂芳基可通过杂原子连接到分子的其余部分。芳基或杂芳基的非限制性实施例包括苯基、1-萘基、2-萘基、4-联苯基、1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、3-吡唑基、 2-咪唑基、4-咪唑基、吡嗪基、2-恶唑基、4-恶唑基、2-苯基-4-恶唑基、5-恶唑基、3-异恶唑基、 4-异恶唑基、5-异恶唑基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-苯并噻唑基、嘌呤基、2-苯并咪唑基、 5-吲哚基、1-异喹啉基、5-异喹啉基、2-喹喔啉基、5-喹喔啉基、3-喹啉基和6-喹啉基。上述任意一个芳基和杂芳基环系的取代基选自下文所述的可接受的取代基。
除非另有规定，芳基在与其他术语联合使用时(例如芳氧基、芳硫基、芳烷基)包括如上定义的芳基和杂芳基环。因此，术语“芳烷基”意在包括芳基附着于烷基的那些原子团(例如苄基、苯乙基、吡啶基甲基等)，包括其中碳原子(如亚甲基)已经被例如氧原子代替的那些烷基，例如苯氧基甲基、2- 吡啶氧甲基3-(1-萘氧基)丙基等。
术语“离去基团”是指可以被另一种官能团或原子通过取代反应(例如亲和取代反应)所取代的官能团或原子。例如，代表性的离去基团包括三氟甲磺酸酯；氯、溴、碘；磺酸酯基，如甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、对溴苯磺酸酯、对甲苯磺酸酯等；酰氧基，如乙酰氧基、三氟乙酰氧基等等。
术语“保护基”包括但不限于“氨基保护基”、“羟基保护基”或“巯基保护基”。术语“氨基保护基”是指适合用于阻止氨基氮位上副反应的保护基团。代表性的氨基保护基包括但不限于：甲酰基；酰基，例如链烷酰基(如乙酰基、三氯乙酰基或三氟乙酰基)；烷氧基羰基，如叔丁氧基羰基(Boc)；芳基甲氧羰基，如苄氧羰基(Cbz)和9-芴甲氧羰基(Fmoc)；芳基甲基，如苄基(Bn)、三苯甲基(Tr)、1,1- 二-(4'-甲氧基苯基)甲基；甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)等等。术语“羟基保护基”是指适合用于阻止羟基副反应的保护基。代表性羟基保护基包括但不限于：烷基，如甲基、乙基和叔丁基；酰基，例如链烷酰基(如乙酰基)；芳基甲基，如苄基(Bn)，对甲氧基苄基(PMB)、9-芴基甲基(Fm)和二苯基甲基(二苯甲基，DPM)；甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)等等。
本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。
本发明所使用的溶剂可经市售获得。本发明采用下述缩略词：aq代表水；HATU代表O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N'，N'-四甲基脲六氟磷酸盐；EDC代表N-(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐；m-CPBA代表3-氯过氧苯甲酸；eq代表当量、等量；CDI代表羰基二咪唑；DCM代表二氯甲烷；PE代表石油醚；DIAD代表偶氮二羧酸二异丙酯；DMF代表N，N-二甲基甲酰胺；DMSO代表二甲亚砜；EtOAc代表乙酸乙酯；EtOH代表乙醇；MeOH代表甲醇；Cbz代表苄氧羰基，是一种胺保护基团； BOC代表叔丁基羰基是一种胺保护基团；HOAc代表乙酸；NaCNBH3代表氰基硼氢化钠；r.t.代表室温； O/N代表过夜；THF代表四氢呋喃；Boc2O代表二-叔丁基二碳酸酯；TFA代表三氟乙酸；DIPEA代表二异丙基乙基胺；SOCl2代表氯化亚砜；CS2代表二硫化碳；TsOH代表对甲苯磺酸；NFSI代表N-氟-N-(苯磺酰基)苯磺酰胺；NCS代表1-氯吡咯烷-2,5-二酮；n-Bu4NF代表氟化四丁基铵；iPrOH代表2-丙醇； mp代表熔点；LDA代表二异丙基胺基锂；Fmoc代表笏氧羰基；Alloc代表烯丙氧羰基、Teco代表三甲基硅乙氧羰基；Pht代表邻苯二甲酰基；Tos代表对甲苯磺酰基；Tfa代表三氟乙酰基；Bn代表苄基； PMB代表对甲氧基苄基。
化合物经手工或者
Figure BDA0001437484740000111
软件命名，市售化合物采用供应商目录名称。
具体实施方式
实施例1:
Figure BDA0001437484740000121
步骤1：将2-氯-4-硝基-1-氧-吡啶-1-鎓(40.0g，229.2mmol)和(4-甲氧基苯基)甲胺(63g, 458.4mmol)溶于EtOH(400mL)中，所得溶液搅拌回流反应5小时。TLC(PE：EA＝2:1)显示反应完全。将EtOH体积浓缩一半，并在冰浴中冷却2-3小时，将所得冷的混合物过滤，分离出的固体分别用PE(60mL*3)和冰水(60mL*3)洗涤。真空干燥得橙色固体N-[(4-甲氧基苯基)甲基]-4- 硝基-1-氧-吡啶-1-鎓-2-胺(38.6g，140.2mmol，产率61.2％)。MS(ESI)计算值C13H13N3O4 275, 测定值276[M+H]+。
步骤2：在0℃下，向N-[(4-甲氧基苯基)甲基]-4-硝基-1-氧-吡啶-1-鎓-2-胺(5.0g，18.16mmol) 的CHCl3(50mL)逐滴加入的PCl3(8.4g，60.8mmol)，加完后将反应混合物升至25℃并剧烈搅拌反应16小时。TLC(PE：EA＝1：1)显示反应完全。将反应混合物过滤，所得固体用PE(30mL*3) 洗涤，得到黄色固体化合物N-[(4-甲氧基苯基)甲基]-4-硝基-吡啶-2-胺(4.2克，粗品)未经进一步纯化，直接用于下一步反应。MS(ESI)计算值C15H18N6 259,测定值260[M+H]+。
步骤3：常温下，向N-[(4-甲氧基苯基)甲基]-4-硝基-吡啶-2-胺(4.2g，16.2mmol)的甲苯溶液中(10mL)逐滴加入TFA(5.0mL)。然后，将混合物在80℃下搅拌反应2小时。TLC(PE：EA＝1：1) 显示反应完全。将混合物在减压下浓缩除去溶剂。将残余物用H2O(50mL)稀释，用固体NaHCO3调节 pH至中性，水相用EA(50mL*3)萃取。合并的有机相用无水硫酸钠干燥、过滤、并减压浓缩，所得残留物用柱色谱法纯化(二氧化硅，石油醚/乙酸乙酯＝1/0～1：1)，得到橙色固体化合物4-硝基吡啶-2- 胺(700mg，5.0mmol，产率31.1％)。MS(ESI)计算值C5H5N3O2 139,测定值140[M+H]+。
步骤4：常温下，向4-硝基吡啶-2-胺(200mg，1.4mmol)的DME(5mL)中加入3-溴-2-氧代-丙酸乙酯(280mg，1.4mmol)。所得混合物在25℃下搅拌反应1小时后，减压浓缩除去溶剂，残余物用 EtOH(10mL)溶解，并回流反应3小时。TLC显示反应完全。反应液冷却至常温，减压浓缩溶剂。残余物用饱和NaHCO3水溶液(25mL)碱化，水相用DCM(15mL*3)萃取，合并的有机相用无水硫酸钠干燥、过滤、并减压浓缩，所得到残余物用快速柱色谱法(EA:PE＝10-60％)纯化，得到浅黄色固体化合物7-硝基咪唑并[1,2-]吡啶-2-羧酸乙酯(302mg，产率88.9％)。MS(ESI)计算值C10H9N3O4 235, 测定值236[M+H]+。
步骤5:常温下，向7-硝基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-羧酸乙酯(150mg，637.8mmol)的乙醇(20mL) 溶液中，分别加入HCl(7mg，0.2mmol)和PtO2(15mg，0.6mmol)，反应体系重复抽真空充N2三次后，充入H2(50ps i)并在50℃搅拌反应16小时。TLC(PE：EA＝1：1)显示反应完全。将反应混合物体积浓缩过半，过滤，得到白色固体化合物7-氨基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-α]吡啶-2-羧酸乙酯盐酸盐(120mg，粗品)。MS(ESI)计算值C10H15N3O2 209,测定值210[M+H]+。
步骤6:将7-氨基-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-2-羧酸乙酯盐酸盐(100mg，0.4mmol)和4-氯 -7-(对甲苯磺酰基)吡咯并[2,3-d]嘧啶(137mg，0.4mmol)溶解于n-BuOH(5mL)中，并加入DIEA (158mg，1.2mmol)，所得混合物搅拌回流反应16小时。LC-MS显示反应完全。反应混合液减压浓缩，所得残余物用H2O(10mL)稀释，水相用EA萃取(20mL*3)。合并的有机相用无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩，得到的残余物通过制备型TLC(PE：EA＝0:1)纯化得到浅黄色固体化合物7-[[7- (对甲苯磺酰基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-2-羧酸乙酯(55 mg，0.11mmol，产率28.1％)。
MS(ESI)计算值C23H24N6O4S 480,测定值481[M+H]+。
步骤7:在0℃下，N2氛围中，向7-[[7-(对甲苯磺酰基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-5,6,7,8- 四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-2-羧酸乙酯(3.0g，6.2mmol)的THF(150mL)溶液中,分批加入NaH(499 mg，12.5mmol)。该混合物在此温度下继续搅拌1小时，然后逐滴加入MeI(7.1g，50.2mmol)，加完后，移到常温继续搅拌1小时。TLC显示反应完成。加入饱和NH4Cl(10mL)淬灭，稍后加入冰水 (50mL)冲释，水相用DCM/MeOH(3：1,50mL*3)混合溶剂萃取。将合并的有机相用硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩，得到粗产物用快速柱色谱法(DCM：MeOH＝10：1)纯化得到淡黄色固体7-[甲基-[7- (对甲苯磺酰基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-2-羧酸乙酯(中间体1)(1.5g，产率45％)。MS(ESI)计算值C24H26N6O4S 494,测定值495[M+H]+。
步骤8:在25℃下，向7-[甲基-[7-(对甲苯磺酰基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-2-羧酸乙酯(1.5g，3.0mmol)的EtOH(20mL)溶液中，加入NaOEt(1.0g， 15mmol)并在此温度下搅拌16小时。TLC(DCM：MeOH＝10：1)显示反应完全。反应混合物在减压下浓缩，将残余物用水(50mL)稀释，水相用DCM/MeOH(10：1,50mL*3)萃取。合并的有机相用无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩，得到残留物通过柱色谱法纯化(二氧化硅，DCM/MeOH＝1/0～10：1)，得到白色固体化合物7-[甲基(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基]-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-2-羧酸乙酯(WX550,中间体2)(600mg，1.76mmol，产率58.2％)。MS(ESI)计算值C17H20N6O2 340, 测定值341[M+H]+。
步骤9:在0℃下，向7-[甲基(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基]-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-2-羧酸乙酯(500mg，1.5mmol)的THF(10.00mL)溶液中，分批加入LiAlH4(111mg，2.9mmol)，所得混合物移到常温搅拌2小时。TLC(DCM:MeOH＝10:1)显示反应完成。在0℃下，加入H2O/THF＝ 1/1(20mL)淬灭，过滤，水相用DCM\MeOH(10：1,50mL*3)萃取。合并的有机相用无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩，得到浅黄色固体化合物7-[甲基(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基]-5,6,7,8- 四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基]甲醇(中间体3)(320mg，粗品)，未经进一步纯化，直接用于下一步反应。MS(ESI)计算值C15H18N6O 298,测定值299[M+H]+。
步骤10:常温下，向7-[甲基(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基]-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基]甲醇(150mg，0.5mmol)的DCM(5mL)溶液中，加入二氯亚砜(300mg，2.5mmol)，所得混合物在70℃下搅拌1小时。TLC(DCM：MeOH＝10：1)显示反应完成。减压下浓缩，得到粗产物 N-〔2-(氯甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基]-N-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(150 mg，盐酸盐粗品)(中间体4)，未经进一步纯化，直接用于下一步反应。MS(ESI)计算值C15H17ClN6 316, 测定值317[M+H]+。
步骤11:向N-[2-(氯甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基]-N-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(150mg，0.42mmol)的DMSO(5mL)溶液中，加入氰化钠(41mg，0.85mmol)，然后将混合物在40℃下搅拌反应10小时。LC-MS表明原料消耗完全，产物生成。加入水(10mL)淬灭，水相用 DCM/MeOH(3：1,20mL*3)萃取。合并有机相并用饱和盐水(20mL*2)洗涤，无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩，得到的残余物用制备型HPLC(碱性条件)分离得到白色固体化化合物2-[7-[甲基(7H- 吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基]-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基]乙腈(WX552)(60mg，产率 46％)。MS(ESI)计算值C16H17N7 307,测定值308[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)8.12(s, 1H),7.16(d,J＝3.01Hz,1H),7.02(s,1H),6.61(d,J＝3.01Hz,1H),4.11-4.22(m,1H),3.95-4.08 (m,1H),3.79(s,2H),3.28(s,3H),2.88-3.08(m,2H),2.26-2.41(m,1H),2.05(d,J＝11.80 Hz,1H).
步骤12:将消旋的2-[7-[甲基(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基]-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a] 吡啶-2-基]乙腈(WX552)(30mg)通过手性柱分离，得到(S或R)2-[7-[甲基(7H-吡咯并[2,3-d] 嘧啶-4-基)氨基]-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基]乙腈(WX612，10mg)和(R或S)2-[7-[甲基(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基]-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基]乙腈(WX613，11mg)。 SFC分离条件:
柱:AD(250mm*30mm,10um)手性柱
流动相:A:超临界CO2,B:B:异丙醇(含0.1％氨水),A:B＝60:40
流速:80mL/min
柱温:38℃
波长:220nm
喷射压力:100Bar
喷嘴温度:60℃
蒸发温度:20℃
修整温度:25℃
WX612:保留时间4.870min；MS(ESI)计算值C16H17N7 307,测定值308[M+H]+.1H NMR(400MHz, METHANOL-d4)8.15(s,1H),7.14(d,J＝3.51Hz,1H),7.05(s,1H),6.71(d,J＝3.51Hz,1H), 5.41-5.51(m,1H),4.23-4.30(m,1H),4.14(dt,J＝4.27,12.17Hz,1H),3.77(s,2H),3.40(s, 3H),3.04-3.19(m,2H),2.46(dq,J＝5.77,12.38Hz,1H),2.21(d,J＝13.05Hz,1H)
WX613:保留时间5.709min；MS(ESI)计算值C16H17N7 307,测定值308[M+H]+.1H NMR(400MHz, METHANOL-d4)8.15(s,1H),7.14(d,J＝3.51Hz,1H),7.04(s,1H),6.70(d,J＝3.51Hz,1H), 5.37-5.51(m,1H),4.22-4.31(m,1H),4.14(dt,J＝4.52,12.30Hz,1H),3.77(s,2H),3.40(s, 3H),3.03-3.20(m,2H),2.46(dq,J＝5.90,12.34Hz,1H),2.21(d,J＝11.80Hz,1H)
实施例2:
Figure BDA0001437484740000161
步骤1：常温下，向7-[甲基(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基]-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶 -2-基]甲醇(中间体2)(200mg，0.44mmol)的DCM(20mL)溶液中，加入活化的二氧化锰(384mg， 4.4mmol)。所得悬浊液在50℃搅拌反应4小时。LC-MS显示反应物被完全消耗。将反应混合物冷却至室温，过滤、浓缩、得到白色固体7-[甲基(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基]-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲醛(160mg，粗品)，无需进一步纯化，直接用于下一步反应。MS(ESI)计算值 C15H16N6O 296,测定值297[M+H]+.
步骤2：在0℃下，氮气氛围中，向含有7-[甲基(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基]-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲醛(159mg，0.35mmol)的DCM(8mL)溶液中加入二乙氨基三氟化硫(DAST) (228mg，1.41mmol)，加完后将该混合物移到25℃搅拌反应14小时。LC-MS显示反应完全。将反应混合物倒入冷却的饱和碳酸氢钠溶液(10mL)中，水相用DCM/MeOH(10：1，15mL*3)萃取。合并的有机相用饱和盐水洗涤、无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩。将残余物通过制备型HPLC(碱性方法) 纯化，得到N-(2-(二氟甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)-N-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-氨基(WX611)(156mg，产率93.6％)。MS(ESI)计算值C16H18F2N6 332,测定值333[M+H]+.1H NMR(400MHz,METHANOL-d4)8.44(br.s.,1H),8.01(br.s.,1H),7.40(br.s.,1H),7.03 (br.s.,1H),5.84-6.22(m,1H),5.64(br.s.,1H),4.55(d,J＝9.79Hz,1H),4.40(d,J＝10.29 Hz,1H),3.78(t,J＝14.43Hz,2H),3.56(br.s.,3H),3.48(br.s.,2H),3.37(s,1H),2.68 (d,J＝7.53Hz,1H),2.42(d,J＝12.30Hz,1H)
实施例3
Figure BDA0001437484740000171
步骤1：常温下，向N-[2-(氯甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基]-N-甲基-7-(对甲基苯磺酰基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(中间体5)(130mg，0.28mmol)的吡啶(5mL)溶液中加入NH3的 MeOH溶液(10mL,10M)，所得的该混合物在25℃搅拌10小时。TLC(DCM：MeOH＝10：1)显示反应完全。加入H2O(20mL)淬灭。水相用DCM/MeOH(5：1，15mL*3)萃取。合并的有机相用饱和盐水洗涤、无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩。得到黄色固体化合物N-[2-(胺甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a] 吡啶-7-基]-N-甲基-7-(对甲基苯磺酰基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(60mg，粗品)，无需进一步纯化，直接用于下一步反应。MS(ESI)计算值C22H25N7O2S 451,测定值452[M+H]+。
步骤2：0℃下，向溶解有N-[2-(胺甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基]-N-甲基-7-(对甲基苯磺酰基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(150mg，0.33mmol)和TEA(100mg，1mmol)的DCM(5mL) 溶液中加入甲磺酰氯(46mg，0.4mmol)，所得混合物移到25℃下搅拌反应16小时。LC-MS显示反应完全。将该混合物在减压下浓缩以除去溶剂。所得残余物用H2O(15mL)溶解，并用DCM/MeOH(5：1， 30mL*3)萃取。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤、减压浓缩得到浅黄色固体化合物N-((7-(甲基-(7-(对甲苯酰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)胺)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基) 甲烷磺酰胺(60mg，粗品)，无需进一步纯化，直接用于下一步反应。MS(ESI)计算值C23H27N7O4S2 529, 测定值530[M+H]+。
步骤3：常温下，向N-((7-(甲基-(7-(对甲苯酰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)胺)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)甲烷磺酰胺(50mg，0.94mmol)的H2O(5mL)/THF(5毫升)溶液中加入NaOH(6mg，0.14mmol)。所得的该混合物在90℃搅拌回流4小时。TLC显示原料消耗完全，新点生成；LCMS显示目标分子量。将反应混合物在减压下浓缩以除去溶剂。将残余物用H2O(15mL) 溶解，并用二氯甲烷/异丙醇(3:1，20mL*3)萃取。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥、过滤、减压浓缩。得到残余物通过制备型HPLC(碱性条件)纯化得到N-((7-(甲基-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基) 胺)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)甲基)甲烷磺酰胺(WX606，22mg，产率62.1％)。MS(ESI) 计算值C16H21N7O2S 375,测定值376[M+H]+。1H NMR(400MHz,METHANOL-d4)8.15(s,1H),7.13 (d,J＝3.51Hz,1H),7.01(s,1H),6.70(d,J＝3.76Hz,1H),5.39-5.48(m,1H),4.22-4.29(m, 1H),4.17(s,3H),3.40(s,3H),3.04-3.14(m,2H),2.91(s,3H),2.45(dq,J＝5.90,12.34Hz, 1H),2.21(d,J＝11.29Hz,1H)
实施例4
Figure BDA0001437484740000181
N-甲基-N-[2-(甲氨甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基]-7H-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺 (WX605)的制备和纯化方法与WX606的制备和纯化方法相类似。向N-[2-(氯甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基]-N-甲基-7-(对甲基苯磺酰基)吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(中间体5)(130mg， 0.28mmol)的吡啶(5mL)溶液中加入甲胺的MeOH溶液,得到甲胺化合物,然后用NaOH在H2O(5mL) /THF(5毫升)溶液中水解,反应完全后用同样的后处理和HPLC分离,得到N-甲基-N-[2-(甲氨甲基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基]-7H-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(WX605)(25mg,产率 68％)。MS(ESI)计算值C16H21N7311,测定值312[M+H]+。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)8.15 (s,1H),7.02(d,J＝3.51Hz,1H),6.83(s,1H),6.54(d,J＝3.51Hz,1H),5.46(br.s.,1H), 4.00-4.18(m,2H),3.67(s,2H),3.37(d,J＝16.31Hz,2H),3.32(s,3H),3.08-3.19(m,1H), 2.96(dd,J＝11.80,16.06Hz,1H),2.44(s,3H)
实施例5:
Figure BDA0001437484740000191
步骤1：在乙基7-[甲基-[7-(对甲苯磺酰基)吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-5,6,7,8-四氢咪唑[1,2-a] 吡啶-2-羧酸甲酯(4.0g,8.1mmol)的THF(40mL)和H2O(8mL)溶液中，加入LiOH.H2O(509mg, 12.1mmol)，将混合物在20℃下搅拌10小时。TLC表明反应物完全被消耗。将反应混合物在减压下除去THF，残余物用2M HCl(4mL)调至pH＝2-3，生成白色固体，将固体滤出并在减压下浓缩得到7-[甲基-[7-(对甲苯磺酰基)吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-5,6,7,8-四氢咪唑[1,2-a]吡啶-2-羧酸(3.6g, 产率95.4％)为白色固体。MS(ESI)计算值C22H22N6O4S 466,测定值467[M+H]+.
步骤2:在0℃下，向7-[甲基-[7-(对甲苯磺酰基)吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-5,6,7,8-四氢咪唑[1,2-a]吡啶-2-羧酸(1.8g,3.9mmol)的DMF(20mL)溶液中，加入CDI(751mg,4.6mmol)，反应液温度升至25℃搅拌2小时后,加入固体氯化铵(2.1g,38.6mmol)后，反应常温过夜。LC-MS 显示反应物完全被消耗。将反应混合物倒入冰水(50mL)中，白色固体析出，将固体滤出，用水(20mL) 洗涤，减压旋干得到7-[甲基-[7-(对甲苯磺酰基)吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-5,6,7,8-四氢咪唑 [1,2-a]吡啶-2-甲酰胺(2.5g粗品)为白色固体,产品直接用于下一步。MS(ESI)计算值C22H23N7O3S 465,测定值466[M+H]+。
步骤3:将7-[甲基-[7-(对甲苯磺酰基)吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-5,6,7,8-四氢咪唑[1,2-a]吡啶-2-甲酰胺(2.5g,5.4mmol)溶解在THF(20mL),MeOH(10mL)和H2O(6mL)中，加入NaOH (429.6mg,10.7mmol)。将混合物加热至60℃搅拌30分钟。LC-MS显示反应物被完全消耗。将反应混合物在减压下浓缩得到7-[甲基-[7氢吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-5,6,7,8-四氢咪唑[1,2-a]吡啶-2-甲酰胺(2.0g粗品)为白色固体，产品直接用于下一步。MS(ESI)计算值C15H17N7O 311,测定值312[M+H]+。
步骤4：在0℃下，向7-[甲基-[7氢吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-5,6,7,8-四氢咪唑[1,2-a]吡啶 -2-甲酰胺(2.0g,6.4mmol)和三乙胺(3.9g,38.5mmol)的THF(20mL)溶液中逐滴加入TFAA(4.1 g,19.3mmol)，加完后，将反应液常温搅拌30分钟。LC-MS显示原料被完全消耗。将反应混合物倒入冰水(20mL)中，用DCM/MeOH(5:1,100mL*2)萃取。将合并的有机层用饱和食盐水(20mL) 洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩得到残余物。将残余物通过柱色谱法纯化(DCM/MeOH＝40/1 to 20:1)得到7-[甲基-[7氢吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-5,6,7,8-四氢咪唑[1,2-a]吡啶-2-腈 (WX591,378mg,产率为19.8％)。MS(ESI)计算值C15H15N7 293,测定值294[M+H]+.1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)11.44-11.71(m,1H),7.99-8.17(m,2H),7.11-7.20(m,1H),6.63(dd,J＝1.76, 3.26Hz,1H),5.33(br.s.,1H),4.21-4.31(m,1H),4.13(dt,J＝4.14,12.49Hz,1H),3.27(s, 3H),2.91-3.11(m,2H),2.31-2.44(m,1H),2.07(d,J＝11.54Hz,1H).
步骤5:将消旋的7-[甲基-[7氢吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-5,6,7,8-四氢咪唑[1,2-a]吡啶-2-腈 (30mg,102.3umol)通过手性柱分离得到(S或R)-7-[甲基-[7氢吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-5,6,7,8-四氢咪唑[1,2-a]吡啶-2-腈(P1,WX614,10mg,产率为32.8％)和(R或S)-7-[甲基-[7 氢吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-5,6,7,8-四氢咪唑[1,2-a]吡啶-2-腈(WX615，10mg,产率为 31.9％)。
SFC分离条件:
柱:AD(250mm*30mm,10um)手性柱
流动相:A:超临界CO2,B:B:乙醇(含0.1％异丙醇),A:B＝55:45
流速:80mL/min
柱温:38℃
波长:220nm
喷射压力:100Bar
喷嘴温度:60℃
蒸发温度:20℃
修整温度:25℃
WX614:保留时间5.507min；MS(ESI)计算值C15H15N7 293,测定值294[M+H]+.1H NMR(400MHz, DMSO-d6)11.44-11.71(m,1H),7.99-8.17(m,2H),7.11-7.20(m,1H),6.63(dd,J＝1.76,3.26 Hz,1H),5.33(br.s.,1H),4.21-4.31(m,1H),4.13(dt,J＝4.14,12.49Hz,1H),3.27(s,3H), 2.91-3.11(m,2H),2.31-2.44(m,1H),2.07(d,J＝11.54Hz,1H).
WX615:保留时间6.407min；MS(ESI)计算值C15H15N7 293,测定值294[M+H]+.1H NMR(400MHz, DMSO-d6)11.44-11.71(m,1H),7.99-8.17(m,2H),7.11-7.20(m,1H),6.63(dd,J＝1.76,3.26 Hz,1H),5.33(br.s.,1H),4.21-4.31(m,1H),4.13(dt,J＝4.14,12.49Hz,1H),3.27(s,3H), 2.91-3.11(m,2H),2.31-2.44(m,1H),2.07(d,J＝11.54Hz,1H).
实施例6:
Figure BDA0001437484740000211
步骤1：7-[甲基(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基]-5,6,7,8-四氢咪唑[1,2-a]吡啶-2-羧酸的制备和纯化与7-[甲基-[7氢吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-5,6,7,8-四氢咪唑[1,2-a]吡啶-2-甲酰胺的制备和纯化相同。MS(ESI)计算值C15H16N6O2 312,测定值313[M+H]+。
步骤2：将7-[甲基(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基]-5,6,7,8-四氢咪唑[1,2-a]吡啶-2-羧酸(120mg, 384.2umol)，EDCI(184mg,960.5umol)溶解在吡啶(5mL)中，反应液在25℃下搅拌15分钟后，加入3,3-二氟环丁胺(49mg,461.1umol)，混合物在25℃下搅拌1小时。LC-MS显示原料消耗完全。反应液加水(20mL)稀释，用DCM:i-PrOH＝3:1(20mL*3)萃取，合并的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤和减压浓缩得到残余物。将残余物通过制备型HPLC纯化(碱性条件)得到氮-(3,3-二氟环丁基)-7-[甲基(7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基]-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酰胺(WX593) (30mg,产率15.9％)。MS(ESI)计算值C19H21F2N7O 401,测定值402[M+H]+。1H NMR(400MHz, METHANOL-d4)8.15(s,1H),7.61(s,1H),7.14(d,J＝3.76Hz,1H),6.71(d,J＝3.51Hz,1H), 5.42-5.53(m,1H),4.30-4.39(m,2H),4.14-4.27(m,1H),3.41(s,3H),3.08-3.23(m,2H), 2.91-3.05(m,2H),2.62-2.78(m,2H),2.48(dq,J＝5.65,12.34Hz,1H),2.23(d,J＝11.29Hz, 1H)
类似于化合物WX593的制备和纯化方法得到化合物WX579，WX580，WX581，WX592和WX604。
WX579(15mg,产率9.6％)。MS(ESI)计算值C17H18F3N7O 393,测定值394[M+H]+。1HNMR(400MHz, METHANOL-d4)8.15(s,1H),7.66(s,1H),7.14(d,J＝3.51Hz,1H),6.71(d,J＝3.51Hz,1H), 5.41-5.54(m,1H),4.28-4.39(m,1H),4.20(dt,J＝4.39,12.36Hz,1H),4.03-4.13(m,2H),3.40 (s,3H),3.08-3.23(m,2H),2.47(dq,J＝5.77,12.38Hz,1H),2.23(d,J＝11.54Hz,1H)
WX580(25mg,产率29.7％)。MS(ESI)计算值C17H19F2N7O 375,测定值376[M+H]+。1HNMR(400MHz, METHANOL-d4)8.44(br.s.,1H),8.01(br.s.,1H),7.40(br.s.,1H),7.03(br.s.,1H), 5.84-6.22(m,1H),5.64(br.s.,1H),4.55(d,J＝9.79Hz,1H),4.40(d,J＝10.29Hz,1H),3.78 (t,J＝14.43Hz,2H),3.56(br.s.,3H),3.48(br.s.,2H),3.37(s,1H),2.68(d,J＝7.53Hz, 1H),2.42(d,J＝12.30Hz,1H)
WX581(35mg,产率44.6％)。MS(ESI)计算值C17H18N8O 350,测定值351[M+H]+。1HNMR(400MHz, METHANOL-d4)8.15(s,1H),7.67(s,1H),7.14(d,J＝3.76Hz,1H),6.71(d,J＝3.51Hz,1H), 5.42-5.55(m,1H),4.30-4.40(m,3H),4.21(dt,J＝4.52,12.42Hz,1H),3.41(s,3H),3.08-3.23 (m,2H),2.48(tt,J＝6.24,12.45Hz,1H),2.23(d,J＝10.29Hz,1H)
WX592(25mg,产率15.6％)。MS(ESI)计算值C18H23N7O3S 417,测定值418[M+H]+。1HNMR(400MHz, METHANOL-d4)8.44(s,1H),7.95(s,1H),7.41(d,J＝3.51Hz,1H),7.04(d,J＝3.76Hz,1H), 5.64(d,J＝8.53Hz,1H),4.55(dd,J＝4.02,13.30Hz,1H),4.37(dt,J＝4.27,12.55Hz,1H), 3.88(t,J＝6.65Hz,2H),3.56(s,3H),3.42-3.49(m,4H),3.05(s,3H),2.59-2.74(m,1H), 2.42(d,J＝13.05Hz,1H)
WX604(65mg,产率41.6％)。MS(ESI)计算值C16H19N7O 325,测定值326[M+H]+。1HNMR(400MHz, CHLOROFORM-d)8.13(s,1H),7.45(s,1H),7.02(d,J＝3.51Hz,1H),6.52(d,J＝3.51Hz,1H), 5.45(br.s.,1H),4.06-4.25(m,2H),4.02(br.s.,2H),3.26-3.36(m,4H),3.07-3.19(m,1H), 2.96(dd,J＝11.80,16.06Hz,1H),2.09-2.37(m,2H)
Jak1,2,Jak3激酶体外活性测试
实验材料
重组人源JAK1、JAK2、JAK3蛋白酶均购自Life technology。LANCE Ul traULight-JAK-1(Tyr1023) peptide和LANCE Eu-W1024Anti-phosphotyrosine(PT66)均购自PerkinElmer。使用多联酶标仪 Envision(PerkinElmer)读板。
实验方法
将测试化合物进行3倍浓度梯度稀释，终浓度为10uM到0.17nM 11个浓度，每个浓度两个复孔；DMSO 在检测反应中的含量为1％。
JAK1酶反应：
2nM JAK1蛋白激酶,50nM LANCE Ultra ULight-JAK-1(Tyr1023)peptide,38uMATP，50mM HEPES(pH 7.5),10mM MgCl2,1mM EGTA,2mM DTT，0.01％BRIJ-35。检测板为White Proxiplate 384-Plus plate(PerkinElmer)，室温反应90分钟，反应体系为10ul。
JAK2酶反应：
0.02nM JAK2蛋白激酶,50nM LANCE Ultra ULight-JAK-1(Tyr1023)peptide,12uM ATP，50 mM HEPES(pH 7.5),10mM MgCl2,1mM EGTA,2mM DTT，0.01％BRIJ-35。检测板为White Proxiplate 384-Plus plate(PerkinElmer)，室温反应60分钟，反应体系为10ul。
JAK3酶反应：
0.05nM JAK2蛋白激酶,50nM LANCE Ultra ULight-JAK-1(Tyr1023)peptide,4uMATP，50mM HEPES(pH 7.5),10mM MgCl2,1mM EGTA,2mM DTT，0.01％BRIJ-35。检测板为White Proxiplate 384-Plus plate(PerkinElmer)，室温反应90分钟，反应体系为10ul。
反应检测：
加10ul检测试剂至反应板中，其中LANCE Eu-W1024Ant i-phosphotyros ine(PT66)终浓度为2nM，EDTA 终浓度为10mM，室温孵育60分钟，Envis ion仪器读板。
数据分析
通过下列公式将读数转化成抑制率(％)＝(Min-Ratio)/(Max-Min)×100％。4参数曲线拟合(Model 205 in XLFIT5,iDBS)测得IC50数据，具体见表1。
表1
Figure BDA0001437484740000231
Figure BDA0001437484740000241
A≤10nM；10＜B≤100nM；100＜C≤1000nM；D>1000nM
药代动力学(PK)试验
将试验化合物溶解后得到的澄清溶液分别经尾静脉注射和灌胃给予雄性DBA/1小鼠体内(过夜禁食，7-8周龄)。给予受试化合物后，静脉注射组在0.083,0.25,0.5,1,2,4,8和24小时，灌胃组在0.25,0.5,1,2,4,8和24小时，分别从下颌静脉采血并离心后获得血浆。采用LC-MS/MS法测定血药浓度，使用WinNonlin Version 6.3药动学软件，以非房室模型线性对数梯形法计算相关药代动力学参数。
表2-1 WX552在小鼠中的PK测试结果
PK Parameters Mean
T<sub>1/2</sub>(hr) 1.18
C<sub>max</sub>(nM) 3723
AUC<sub>0-inf</sub>(nM.hr) 11448
Bioavailability(％)<sup>a</sup> 74.39
表2-2 WX591在小鼠中的PK测试结果
PK Parameters Mean
T<sub>1/2</sub>(hr) 2.26
C<sub>max</sub>(nM) 3017
AUC<sub>0-inf</sub>(nM.hr) 10467
Bioavailability(％)<sup>a</sup> 87.0
表2-3 WX614在小鼠中的PK测试结果
PK Parameters Mean
T<sub>1/2</sub>(h) 1.76
C<sub>max</sub>(nM) 3087
AUC<sub>0-inf</sub>(nM.h) 10200
Bioavailability(％)<sup>a</sup> 73.9
本发明的化合物WX552,WX591,WX614在小鼠中都有良好的口服生物利用度,较高的暴露量,有利于产生体内药效.
大鼠佐剂诱导的关节炎模型药效试验：
用大鼠佐剂关节炎模型验证本发明化合物的治疗关节炎的作用。
雌性,体重160-180克Lewis大鼠用异氟烷麻醉后，在左后脚皮下注射0.1ml结核分枝杆菌悬浮液。在造模13天后分组并给予相应的受试化合物，如对大鼠分别给予1mpk,、3mpk、10mpk的受试化合物WX614, 10mpk的受试化合物WX552,和10mpk的受试化合物WX591溶解在DMSO/PEG400/H2O混合溶媒中，并口服给予雌性Lewis大鼠(每个剂量组的受试动物数为10)。连续给药两周，期间观察大鼠状态，记录足体积肿胀情况并评分。试验表明本发明化合物WX614,WX552和WX591均展示出良好的关节炎抑制活性。
表3-1
Figure BDA0001437484740000251
Figure BDA0001437484740000261
小鼠胶原诱导的关节炎模型药效试验：：
用小鼠胶原诱导的关节炎模型验证本发明化合物的治疗关节炎的作用。
选择DBA/l雄性小鼠，于第0天和第21天尾根部皮下注射胶原与弗氏完全佐剂的乳剂，第29天左右开始分组,将发明化合物WX6144(3mpk,10mpk,30mpk)、溶解在DMSO/PEG400/H2O[5/20/75(v/v/v)]中，并口服给予CIA小鼠(上海斯莱克实验动物有限公司，每个剂量组的受试动物数为10)，连续给药2周,期间记录小鼠体重，并对小鼠的关节炎症进行临床评分，结果显示本发明化合物WX614对小鼠类风湿性关节炎有明显的治疗作用。
表3-2
Figure BDA0001437484740000262

Claims (5)

1.如下列化学式所示化合物或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0002179697830000011
Figure FDA0002179697830000021
2.一种药物组合物，包括治疗有效量的根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。
3.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求2所述的药物组合物在制备治疗与Janus激酶相关疾病的药物中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其中所述疾病为关节炎。
5.根据权利要求3所述的应用，其中所述疾病为类风湿性关节炎。
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Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX2019002077A (es) * 2016-11-23 2019-05-15 Wuxi Fortune Pharmaceutical Co Ltd Formas cristalinas y formas de sal de compuestos de 7h-pirrolo[2,3-d]pirimidina y metodo de preparacion de las mismas.
WO2019061299A1 (en) * 2017-09-29 2019-04-04 Rhodia Operations PROCESS FOR THE PREPARATION OF AMINOMETHYL-SUBSTITUTED HETEROCYCLOCCANE
CN107778321A (zh) * 2017-10-31 2018-03-09 无锡福祈制药有限公司 一种托法替尼类似物
CN107602591A (zh) * 2017-10-31 2018-01-19 无锡福祈制药有限公司 一种Janus激酶3抑制剂
CN107573364A (zh) * 2017-10-31 2018-01-12 无锡福祈制药有限公司 一种jak激酶抑制剂
CN107805259A (zh) * 2017-10-31 2018-03-16 无锡福祈制药有限公司 一种吡咯并嘧啶类化合物
CN107602590A (zh) * 2017-10-31 2018-01-19 无锡福祈制药有限公司 具有Janus激酶抑制活性的桥环化合物
CN107652308A (zh) * 2017-10-31 2018-02-02 无锡福祈制药有限公司 一种Janus激酶3抑制剂
EP3915989B1 (en) * 2019-01-30 2023-06-28 FelicaMed Biotechnology Co., Ltd Jak inhibitor and preparation method therefor
BR112021018168B1 (pt) 2019-03-21 2023-11-28 Onxeo Composição farmacêutica, combinação e kit compreendendo uma molécula dbait e um inibidor de quinase para o tratamento de câncer
EP3981769A4 (en) * 2019-06-05 2023-07-19 Guangzhou Joyo Pharmatech Co., Ltd PYRROLOPYRIMIDINE COMPOUND AND USE
AU2020378630A1 (en) 2019-11-08 2022-05-26 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for the treatment of cancers that have acquired resistance to kinase inhibitors
CN110923288A (zh) * 2019-12-19 2020-03-27 卓和药业集团有限公司 一种wxfl10203614中间体的生物学拆分方法
CN111004236B (zh) * 2019-12-19 2022-04-05 卓和药业集团股份有限公司 一种wxfl10203614中间体的动态动力学拆分方法
CN111039963B (zh) * 2019-12-31 2021-03-19 卓和药业集团有限公司 Wxfl10203614水溶性类似物及其合成方法
CN111087412B (zh) * 2019-12-31 2021-04-09 卓和药业集团有限公司 一类吡咯并嘧啶衍生物及其合成方法
WO2021148581A1 (en) 2020-01-22 2021-07-29 Onxeo Novel dbait molecule and its use
CN112168827A (zh) * 2020-11-03 2021-01-05 卓和药业集团有限公司 一种用于治疗银屑病的药物组合物及其制备方法
CN113372366B (zh) * 2020-12-04 2022-08-30 广州嘉越医药科技有限公司 一种吡咯并嘧啶类化合物的盐、其晶型及其应用
CN114591333B (zh) * 2020-12-04 2023-08-01 广州嘉越医药科技有限公司 一种吡咯并嘧啶类化合物的制备方法
CN113372343B (zh) * 2020-12-04 2022-07-29 广州嘉越医药科技有限公司 一种吡咯并嘧啶类化合物中间体及其制备方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1409712A (zh) * 1999-12-10 2003-04-09 辉瑞产品公司 吡咯并[2,3－d]嘧啶化合物

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1087970B1 (en) * 1998-06-19 2004-04-28 Pfizer Products Inc. PYRROLO 2,3-d]PYRIMIDINE COMPOUNDS
US7160890B2 (en) 1999-12-02 2007-01-09 Osi Pharmaceuticals, Inc. Compounds specific to adenosine A3 receptor and uses thereof
YU42703A (sh) 2000-12-01 2006-03-03 Osi Pharmaceuticals Inc. Jedinjenja specifična za dobijanje adenozinske a1,a2a i a3 receptore i njihove primene
US7301023B2 (en) 2001-05-31 2007-11-27 Pfizer Inc. Chiral salt resolution
GB0719803D0 (en) 2007-10-10 2007-11-21 Cancer Rec Tech Ltd Therapeutic compounds and their use
BRPI0917459B1 (pt) 2008-08-20 2017-09-12 Zoetis Services Llc N-methyl-1- [trans-4- [methyl (7h-pyrrol [2,3-d] pyridol [2,3-d] pyrimidine compounds, use of these in therapy and crystalline a form of n-methyl- pyrimidin-4-yl) amino] cyclohexyl} methanosulphonamide
ES2552805T3 (es) * 2009-04-20 2015-12-02 Auspex Pharmaceuticals, Llc Inhibidores piperidínicos de la cinasa Janus 3
TW201111385A (en) * 2009-08-27 2011-04-01 Biocryst Pharm Inc Heterocyclic compounds as janus kinase inhibitors
WO2011130146A1 (en) 2010-04-14 2011-10-20 Array Biopharma Inc. 5, 7-substituted-imidazo [1, 2-c] pyrimidines as inhibitors of jak kinases
AU2012323399A1 (en) 2011-10-12 2014-05-29 Array Biopharma Inc. 5,7-substituted-imidazo[1,2-c]pyrimidines
CN104114553B (zh) * 2011-12-12 2017-03-01 雷迪博士实验室有限公司 作为原肌球蛋白受体激酶(Trk)抑制剂的取代的吡唑并[1,5‑a]吡啶
JP6075736B2 (ja) * 2011-12-21 2017-02-08 ジエンス ヘンルイ メデイシンカンパニー リミテッドＪｉａｎｇｓｕ Ｈｅｎｇｒｕｉ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｃｏ．，Ｌｔｄ． ピロール−６員ヘテロアリール環誘導体、その合成法およびその医薬用途
US8551542B1 (en) 2012-09-20 2013-10-08 Basic Research L.L.C. Methods and compositions for increasing growth hormones
RS56503B1 (sr) * 2013-02-22 2018-02-28 Pfizer Derivati pirolo [2,3-d] pirimidina kao inhibitori janus kinaza (jak)
CA2902781C (en) * 2013-02-27 2020-12-29 Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. Novel pyrazole derivative
PT3077395T (pt) * 2013-12-05 2018-01-03 Pfizer Pirrolo[2,3-d]pirimidinilo, pirrolo[2,3-b]pirazinilo e pirrolo[2,3-d]piridinilo acrilamidas
BR112015025543B1 (pt) 2013-12-09 2020-11-03 Unichem Laboratories Limited processo para a preparação de (3r,4r)-(1-benzil-4- metilpiperidina-3-il)-metilamina e compostos intermediários
WO2015188369A1 (en) * 2014-06-13 2015-12-17 Merck Sharp & Dohme Corp. Purine inhibitors of human phosphatidylinositol 3-kinase delta

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1409712A (zh) * 1999-12-10 2003-04-09 辉瑞产品公司 吡咯并[2,3－d]嘧啶化合物

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