TW201627292A - 新穎ｆｘｒ（ｎｒ１ｈ４）調節化合物 - Google Patents

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Abstract

本發明係關於與NR1H4受體(FXR)結合並用作FXR之促效劑的化合物。本發明進一步關於該等化合物用於製備由該等化合物結合該核受體來治療疾病及/或病狀之藥劑的用途，以及該等化合物之合成方法。

Description

新穎FXR(NR1H4)調節化合物
本發明係關於一種與NR1H4受體(FXR)結合並充當FXR之促效劑或調節劑的化合物。本發明進一步地係關於該等化合物於通過藉由該等化合物結合該核受體來治療及/或預防疾病及/或病狀的用途。
多細胞生物依賴於細胞及體腔室間之資訊傳送的高級機制。經傳輸的資訊可為高度複雜並可導致包含細胞分化、增殖、或再生之基因程式發生變化。訊號(或激素)常為低分子量分子(諸如肽、脂肪酸、或膽固醇衍生物)。
此等訊號中有許多藉由最終改變特定基因之轉錄產生效果。一組經充分研究的介導細胞對各種訊號之反應的蛋白質為稱為核受體(於後文中常稱為「NR」)之轉錄因子家族。此組之成員包含類固醇激素、維生素D、蛻皮激素、順式及反式維生素A酸、甲狀腺素、膽汁酸、膽固醇衍生物、脂肪酸(及其他過氧化物酶體增殖物)之受體、及所謂的孤兒受體，其在結構上與此組之其他成員類似但其係已知無配體的蛋白質。孤兒受體可能指示細胞中未知訊號傳遞路徑或可為無需配體活化起作用之核受體。藉由此等孤兒受體中某些受體之轉錄活化可於無外源性配體存在下及/或通過源自細胞表面之信號轉導途徑發生(D.J.Mangelsdorf等人，Cell 1995,83,835；R.M.Evans,Mol.Endocrinol.2005,19,1429)。
一般而言，已於NR中定義三個功能域。據信，胺基末端區域具 有某些調節功能。接著係後文中稱為「DBD」之DNA結合域，其通常包括兩個鋅指單元及於反應基因之啟動子內識別於後文中稱為「HRE」之特定激素反應單元。已顯示，「DBD」中之特定胺基酸殘基賦予DNA序列結合特異性(M.Schena and K.R.Yamamoto,Science 1988,241,965)。於後文中稱為「LBD」之配體結合域係位於已知NR之羧基末端區域中。
於缺少激素時，LBD顯示出干擾DBD與其HRE之相互作用。激素結合似乎導致NR中之構象改變且因此開啟此干擾(A.M.Brzozowski等人，Nature 1997,389,753)。無LBD之NR將組成性地活化轉錄，但係處於低水平。
建議將共激活劑或轉錄活化劑橋接於序列特異性轉錄因子、基礎轉錄機構(basal transcription machinery)之間，及此外影響靶細胞之染色質結構。若干蛋白質(如SRC-1、ACTR、及Grip1)以配體增強方式與NR相互作用(D.M.Heery等人，Nature 1997,387,733；T.Heinzel等人，Nature 1997,387,43；K.W.Nettles and G.L.Greene,Annu.Rev.Physiol.2005,67,309)。
核受體調節劑(如類固醇激素)藉由與胞內受體結合及形成核受體-配體錯合物影響特定細胞之生長及功能。隨後，核受體-激素錯合物與特定基因之控制區域中之HRE相互作用並改變特定基因表現(A.Aranda and A.Pascual,Physiol.Rev.2001,81,1269)。
類法尼醇X受體α(Farnesoid X Receptor alpha；當意指人類受體時，於後文中亦常稱為NR1H4)為一種原型的2型核受體，其在以異二聚體方式與視黃醛X受體結合至靶基因之啟動子區域後活化基因(B.M.Forman等人，Cell 1995,81,687)。NR1H4之相關生理學配體為膽汁酸(D.J.Parks等人，Science 1999,284,1365；M.Makishima等人，Science 1999,284,1362)。最有效者為鵝去氧膽酸(CDCA)，其調節參 與膽汁酸恆穩狀態之若干種基因的表現。法尼醇及衍生物(統稱為類法尼醇)係最初描述為以高濃度將大鼠直系同源物活化，但其等不可將人類或小鼠受體活化。FXR係於肝中表現，遍及整個胃腸道(包括食道、胃、十二指腸、小腸、結腸、卵巢、腎上腺及腎臟)。除了控制胞內基因表現外，FXR似乎亦藉由向上調節細胞介素纖維母細胞生長因子15(齧齒動物)或19(猴類，人類，J.A.Holt等人，Genes Dev.2003,17,1581；T.Inagaki等人，Cell Metab.2005,2,217)之表現參與旁分泌及內分泌信號傳遞。
作為FXR調節劑之小分子化合物已於以下公開案中揭示：WO 2000/037077、WO 2003/015771、WO 2004/048349、WO 2007/076260、WO 2007/092751、WO 2007/140174、WO 2007/140183、WO 2008/051942、WO 2008/157270、WO 2009/005998、WO 2009/012125、WO 2008/025539、WO 2008/025540、WO 2008/157270、WO 2009/005998、WO 2009/012125、WO 2011/020615、WO 2012/087519、WO 2012/087520及WO 2012/087521。另外，近來已審查其他小分子FXR調節劑(M.L.Crawley,Expert Opin Ther.Pat.2010,20,1047；D.Merk等人，Future Med.Chem.2012,4,1015及C.Gege等人，Curr.Top.Med.Chem.2014,14,2143)。
於WO 2013/007387中，吾人揭示具有以下一般式之含羥基環丁基及氮雜環丁烷衍生物
其中變量係與於此公開案中所定義類似。
儘管迄今揭示多種FXR促效劑，但仍需得到改良FXR促效劑。
已藉由根據以下式(1)之化合物、其對映異構物、非對映異構 物、互變異構物、溶劑化物、前藥或醫學上可接受之鹽解決該問題
其中R係選自下列組成之群：氫、鹵素、C1-6-烷基、C2-6-烯基、C2-6-炔基、鹵基-C1-6-烷基、C0-6-伸烷基-R7、C0-6-伸烷基-O-R7、C0-6-伸烷基-CN、C0-6-伸烷基-NR7R8、O-C3-10-環烷基、O-C1-6-伸烷基-O-R7、O-C3-10-雜環烷基、C0-6-伸烷基-CO2R7、C0-6-伸烷基-C(O)R7、C0-6-伸烷基-C(O)NR7R8、C0-6-伸烷基-C(O)NR7SO2R7、C0-6-伸烷基-N(R7)C(O)R7、C0-6-伸烷基-SOx-R7、C0-6-伸烷基-SO3H、C0-6-伸烷基-SO2-NR7R8、C0-6-伸烷基-SO2-NR8COR7、C0-6-伸烷基-N(R7)SO2-R8、及C0-6-伸烷基-SO2-C3-10-雜環烷基，其中伸烷基、環烷基、雜環烷基及5員或6員雜芳基為未經取代或經1個至4個獨立選自下列組成之群之取代基取代：鹵素、CN、C1-3-烷基、鹵基-C1-3-烷基、OH、側氧基(oxo)、CO2H、SO3H、O-C1-3-烷基及O-鹵基-C1-3-烷基；R7係獨立選自下列組成之群：氫、C1-6-烷基、鹵基-C1-6-烷基、C0-6-伸烷基-C3-8-環烷基、C0-6-伸烷基-C3-8-雜環烷基、5員或6員雜芳基及苯基，其中烷基、伸烷基、環烷基、雜環烷基、苯基及雜芳基為未經取代或經1個至6個獨立選自下列組成之群之取代基取代：鹵素、CN、OH、側氧基、CO2H、C1-3-烷基、鹵基-C1-3-烷基、O-C1-3-烷基、O-鹵基-C1-3-烷基、SO3H及SO2-C1-3-烷基；R8係獨立選自下列組成之群：氫、C1-6-烷基、鹵基-C1-6-烷基及C3-6-環烷基；或R7及R8連同其等所連接之氮一起可形成含有碳原子及視情況含 有1個或2個選自O、S或N之雜原子的3員至8員環，其中該環為未經取代或經1個至4個獨立選自下列組成之群之取代基取代：氟、OH、側氧基、C1-4-烷基及鹵基-C1-4-烷基；A為6員至10員單或雙環芳基或5員至10員含有1個至5個獨立選自N、O及S組成之群之雜原子的單或雙環雜芳基，其中芳基及雜芳基為未經取代或經一個或兩個獨立選自下列組成之群之基團取代：OH、鹵素、CN、O-C1-6-烷基、O-鹵基-C1-6-烷基、C1-6-烷基、鹵基-C1-6-烷基、C3-6-環烷基及鹵基-C3-6-環烷基；B為C5-8-環烷基環或，若Y為N，則B為含有一個氮原子的C5-8-雜環烷基，且其中取代基Q不直接與取代基A相鄰；Q係選自下列組成之群：苯基、吡啶基、噻唑基、苯硫基(thiophenyl)、嘧啶基、噁唑基、吡唑基、咪唑基及三唑基，各未經取代或經一個或兩個獨立選自下列組成之群之基團取代：鹵素、C1-4-烷基、鹵基-C1-4-烷基、C1-4-烷氧基或鹵基-C1-4-烷氧基；Y係選自N、CH或CF；Z係選自 其中L係選自下列組成之群：鍵、C1-3-伸烷基及C1-3-伸烷基-O-；Y'係選自苯基、吡啶基、吡啶基-N-氧化物、嘧啶基、吡啶酮基、嘧啶酮基、C4-8-環烷基、及C4-8-雜環烷基，其中苯基、吡啶基、吡啶基-N-氧化物、嘧啶基、吡啶酮基、嘧啶酮基、C4-8-環烷基、及C4-8-雜環烷基係經R2及R3取代及視情況經選自氟、氯、CN、NH2、NH(C1-3-烷基)、N(C1-3-烷基)2、C1-3-烷基、氟-C1-3-烷基、OH、C1-3- 烷氧基、氟-C1-3-烷氧基、C3-6-環烷基及氟-C3-6-環烷基之基團取代一次或兩次；R1係選自下列組成之群：C1-4-烷基及C3-6-環烷基，其中C1-4-烷基係未經取代或經1個至3個獨立選自下列組成之群之取代基取代：氟、羥基、C1-3-烷氧基及氟-C1-3-烷氧基，及C3-6-環烷基係未經取代或經1個至3個獨立選自下列組成之群之取代基取代：氟、羥基、C1-3-烷基、氟-C1-3-烷基、C1-3-烷氧基及氟-C1-3-烷氧基；R2及R3係獨立選自下列組成之群：氫、鹵素、C1-3-烷基、鹵基-C1-3-烷基、C1-3-烷氧基、鹵基-C1-3-烷氧基、環丙基及氟-環丙基；R4係獨立選自鹵素、C1-3-烷基、鹵基-C1-3-烷基、C1-3-烷氧基、鹵基-C1-3-烷氧基、C3-6-環烷基、及氟-C3-6-環烷基；R5係選自下列組成之群：氫、氟、CH3、CHF2及CF3；n係選自0、1、2、3及4；及x係選自0、1及2。
在另一實施例中，本發明係關於一種作為藥劑之式(1)化合物。
於另一實施例中，本發明係關於用於預防及/或治療由FXR介導之疾病的式(1)化合物。
於另一實施例中，本發明係關於式(1)化合物於製造用於預防及/或治療由FXR介導之疾病之藥劑的用途。
於又一實施例中，本發明係關於一種對有此需要的個體治療或預防由FXR介導之疾病的方法，該方法包括向該個體投與有效量之式(1)化合物。
於另一結合以上或以下實施例中任一者之實施例中，該疾病係選自慢性肝內或某種形式之肝外膽汁鬱積性病狀；肝纖維化；肝之阻塞性或慢性炎症；肝硬化；肝脂肪變性及相關症候群、與酒精誘發的硬化或病毒媒介(viral-borne)形式肝炎相關之膽汁鬱積性或纖維化效 應；重大肝切除術(major liver resection)後之肝衰竭或肝缺血；化學治療相關之脂肪肝炎(steatohepatitis)(CASH)；急性肝衰竭；及/或發炎性腸病。
於另一結合以上或以下實施例中任一者之實施例中，該疾病係選自脂質及脂蛋白病症；II型糖尿病以及I型及II型糖尿病之臨床併發症，包括糖尿病性腎病、糖尿病性神經病、糖尿病性視網膜病及臨床表現長期糖尿病之其他觀察效應；由因脂質及特定甘油三酸酯強制累積及後續促纖維變性(profibrotic)途徑活化導致器官之慢性脂肪及纖維變性而造成之病狀及疾病，諸如非酒精性脂肪肝病(NAFLD)，或非酒精性脂肪肝炎(NASH)；肥胖症或代謝症候群(異常血脂症、糖尿病或異常高身體質量指數之合併病狀)；及/或急性心肌梗塞、急性中風或慢性阻塞性動脈粥狀硬化之終點發生的血栓。
於另一結合以上或以下實施例中任一者之實施例中，該疾病係選自非惡性過度增生性疾病及惡性過度增生性疾病，特定言之肝細胞癌、結腸腺瘤及息肉症、結腸腺癌、乳癌、胰腺癌、巴雷特氏(Barrett's)食道症或胃腸道及肝之其他形式之腫瘤病。
本發明化合物具有根據技術方案1中之式(1)之一般化學結構。
於結合以上或以下實施例中任一者之一較佳實施例中，式(1)中之R係選自下列組成之群：CO2H、SO3H、CONR7R8、四唑基、1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮-3-基及SO2NHCOR7。
於結合以上或以下實施例中任一者之另一較佳實施例中，R7係選自下列組成之群：氫、C1-6-烷基、鹵基-C1-6-烷基、C1-6-伸烷基-R9、SO2-C1-3-烷基。
於結合以上或以下實施例中任一者之另一較佳實施例中，R8係選自下列組成之群：氫、C1-6-烷基、鹵基-C1-6-烷基。
於結合以上或以下實施例中任一者之另一較佳實施例中，R9係選 自下列組成之群：COOH、OH及SO3H。
於結合以上或以下實施例中任一者之一較佳實施例中，A係選自下列組成之群：苯基、吡啶基、嘧啶基、吡唑基、吲哚基、噻吩基、苯并噻吩基、吲唑基、苯并異噁唑基、苯并呋喃基、苯并三唑基、呋喃基、苯并噻唑基、噻唑基、噁二唑基、噁唑基、萘基、喹啉基、異喹啉基、苯并咪唑基，各未經取代或經一個或兩個獨立選自下列組成之群之基團取代：OH、鹵素、CN、O-C1-6-烷基、O-鹵基-C1-6-烷基、C1-6-烷基、鹵基-C1-6-烷基、C3-6-環烷基及鹵基-C3-6-環烷基。
更佳地，A係選自下列組成之群：苯基、吡啶基、吲哚基、吲唑基、苯并異噻唑基、三唑并吡啶基、苯并噻唑基、噻唑基、噁唑基、喹啉基，各未經取代或經一個或兩個獨立選自下列組成之群之基團取代：OH、鹵素、CN、O-C1-6-烷基、O-鹵基-C1-6-烷基、C1-6-烷基、鹵基-C1-6-烷基、C3-6-環烷基及鹵基-C3-6-環烷基。
於結合以上或以下實施例中任一者之另一較佳實施例中，R-A係選自
於結合以上或以下實施例中任一者之另一較佳實施例中，Z係選自 其中L係選自下列組成之群：鍵、C1-3-伸烷基及C1-3-伸烷基-O-；X係選自下列組成之群：CH、CF、N及NO；R1係選自下列組成之群：C1-4-烷基及C3-6-環烷基，其中C1-4-烷基係未經取代或經1個至3個獨立選自下列組成之群之取代基取代：氟、羥基、C1-3-烷氧基及氟-C1-3-烷氧基，及C3-6-環烷基係未經取代或經1個至3個獨立選自下列組成之群之取代基取代：氟、羥基、C1-3-烷基、氟-C1-3-烷基、C1-3-烷氧基及氟-C1-3-烷氧基；R2及R3係獨立選自下列組成之群：氫、鹵素、C1-3-烷基、鹵基-C1-3-烷基、C1-3-烷氧基、鹵基-C1-3-烷氧基、環丙基及氟-環丙基；及R5係選自下列組成之群：氫、氟、CH3、CHF2及CF3。
於結合以上或以下實施例中任一者之一更佳實施例中，Z係選自 其中 X係選自下列組成之群：CH、CF、N及NO；R1係選自下列組成之群：CF3、CHF2、異丙基及環丙基，其中異丙基及環丙基係未經取代或經一個或兩個氟或一個羥基取代；R2係選自下列組成之群：氟、氯、CH3、CHF2、CF3、OCHF2及OCF3；R3係選自下列組成之群：氫、氟、氯、CH3、CHF2、CF3、OCHF2及OCF3；及R5係選自下列組成之群：氫、氟、CH3、CHF2及CF3。
於結合以上或以下實施例中任一者之另一較佳實施例中，部分係選自
於一更佳實施例中，提供式(2)之化合物
其中A係選自下列組成之群：苯基、吡啶基、嘧啶基、吡唑基、吲哚基、噻吩基、苯并噻吩基、吲唑基、苯并異噁唑基、苯并呋喃基、苯并三唑基、呋喃基、苯并噻唑基、噻唑基、噁二唑基、噁唑基、萘基、喹啉基、異喹啉基、苯并咪唑基，各未經取代或經一個或兩個獨立選自下列組成之群之基團取代：OH、鹵素、CN、O-C1-6-烷基、O-鹵基-C1-6-烷基、C1-6-烷基、鹵基-C1-6-烷基、C3-6-環烷基及鹵基-C3-6- 環烷基；R係選自下列組成之群：CO2H、SO3H、CONR7R8、四唑基、1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮-3-基及SO2NHCOR7，其中R7係選自下列組成之群：氫、C1-6-烷基、鹵基-C1-6-烷基、C1-6-伸烷基-R9、SO2-C1-6-烷基；R8係選自下列組成之群：氫、C1-6-烷基、鹵基-C1-6-烷基；及R9係選自下列組成之群：COOH、OH及SO3H；Q係選自下列組成之群：苯基、吡啶基、噻唑基、苯硫基及嘧啶基，各未經取代或經一個或兩個獨立選自下列組成之群之基團取代：氟、氯、CH3、CHF2及CF3；Z係選自 X係選自下列組成之群：CH、N及NO；R1係選自下列組成之群：異丙基及環丙基，其中異丙基及環丙基係未經取代或經一個或兩個氟或一個羥基取代；R2係選自下列組成之群：氟、氯、CH3、CHF2、CF3、OCHF2及OCF3；及R3係選自下列組成之群：氫、氟、氯、CH3、CHF2、CF3、OCHF2及OCF3。
於另一較佳實施例中，提供式(3)之化合物
其中 A係選自下列組成之群：苯基、吡啶基、嘧啶基、吡唑基、吲哚基、噻吩基、苯并噻吩基、吲唑基、苯并異噁唑基、苯并呋喃基、苯并三唑基、呋喃基、苯并噻唑基、噻唑基、噁二唑基、噁唑基、萘基、喹啉基、異喹啉基、苯并咪唑基，各未經取代或經一個或兩個獨立選自下列組成之群之基團取代：OH、鹵素、CN、O-C1-6-烷基、O-鹵基-C1-6-烷基、C1-6-烷基、鹵基-C1-6-烷基、C3-6-環烷基及鹵基-C3-6-環烷基；R係選自下列組成之群：CO2H、SO3H、CONR7R8、四唑基、1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮-3-基及SO2NHCOR7，其中R7係選自下列組成之群：氫、C1-6-烷基、鹵基-C1-6-烷基、C1-6-伸烷基-R9、SO2-C1-6-烷基；R8係選自下列組成之群：氫、C1-6-烷基、鹵基-C1-6-烷基；及R9係選自下列組成之群：COOH、OH及SO3H；Q係選自下列組成之群：苯基、吡啶基、噻唑基、苯硫基及嘧啶基，各未經取代或經一個或兩個獨立選自下列組成之群之基團取代：氟、氯、CH3、CHF2及CF3；Z係選自 X係選自下列組成之群：CH、N及NO；R1係選自下列組成之群：異丙基及環丙基，其中異丙基及環丙基係未經取代或經一個或兩個氟或一個羥基取代；R2係選自下列組成之群：氟、氯、CH3、CHF2、CF3、OCHF2及OCF3；及R3係選自下列組成之群：氫、氟、氯、CH3、CHF2、CF3、 OCHF2及OCF3。
於本發明之背景中，「C1-6-烷基」意指具有1個至6個碳原子之飽和烷基鏈，其可為直鏈或分支鏈。其實例包括甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第三丁基、正戊基、異戊基、新戊基及己基。
術語「鹵基-C1-6-烷基」意指烷基鏈中一個或多個氫原子係經鹵素取代。其一較佳實例為CF3。
「C2-6-烯基」意指可為直鏈或分支鏈之具有1個至6個碳原子之烷基鏈，其含有至少一個碳碳雙鍵。其實例包括乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基或(1E,3Z)-2-甲基戊-1,3-二烯-1-基。較佳實例為乙烯基、丙烯基或(1E,3Z)-2-甲基戊-1,3-二烯-1-基。
「C2-6-炔基」意指可為直鏈或分支鏈之具有1個至6個碳原子之烷基鏈，其含有至少一個碳碳三鍵。其實例包括乙炔基、丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、1-己炔、2-己炔或3-己炔。其較佳實例包括乙炔基及丙炔基。
「C0-6-伸烷基」意指各基團為二價且將所附殘基與分子之剩餘部分連接。此外，於本發明之背景中，「C0-伸烷基」意為代表鍵。
C5-10-環烷基基團意指含5個至10個碳原子飽和或部分不飽和單、雙或螺環環系統。橋接碳環環系統包含兩個或更多個共用不相鄰橋頭環原子之環系統。實例包括環戊基、環己基、環己烯基、雙環[2.2.2]辛基、雙環[3.2.1]辛烷基、螺[3.3]庚基、雙環[2.2.1]庚基、金鋼烷基及五環[4.2.0.02,5.03,8.04,7]辛基。
C3-10-雜環烷基基團意指飽和的或部分不飽和的3員至10員碳單環、雙環或螺環環，其中1個、2個或3個碳原子係各經1個、2個或3個雜原子取代，其中該等雜原子係獨立選自N、O、S、SO及SO2。其實例包括環氧基、氧雜環丁基、吡咯啶基、四氫呋喃基、哌啶基、哌嗪 基、四氫哌喃基、1,4-二氧雜環己基、嗎啉基、4-奎寧環基、1,4-二氫吡啶基及3,6-二氫-2H-硫哌喃基。C3-10-雜環烷基基團可經碳原子或氮原子與分子之剩餘部分連接。
含有多至4個雜原子之5員至10員單環或二環雜芳族環系統(本申請案中亦稱為雜芳基)意指單環雜芳族環(諸如吡咯基、咪唑基、呋喃基、苯硫基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、吡唑基、噁唑基、異噁唑基、三唑基、噁二唑基及噻二唑基)。其另外意指其中該(等)雜原子可存在於一個或兩個環(包括橋頭原子)中之雙環環系統。其實例包括喹啉基、異喹啉基、喹噁啉基、苯并咪唑基、苯并異噁唑基、苯并呋喃基、苯并噁唑基、吲哚基、吲嗪基及吡唑并[1,5-a]嘧啶基。雜芳基系統之氮原子或硫原子亦可視需要氧化至對應的N-氧化物、S-氧化物或S,S-二氧化物。若未另外說明，則該雜芳基系統可經碳原子或氮原子連接。與N連接的雜環之實例為
6員至10員單環或雙環芳族環系統(本申請案中亦稱為芳基)意指芳族碳環(諸如苯基或萘基)。
術語「N-氧化物」表示化合物，其中雜芳族系統(較佳為吡啶基)中之該氮係氧化的。此等化合物可以以已知的方式藉由使本發明化合物(諸如於吡啶基基團中)與H2O2或過酸於惰性溶劑中反應獲得。
鹵素係選自氟、氯、溴及碘，更佳為氟或氯及最佳為氟。
此外，本發明之化合物部分服從互變異構現象。例如，若於環中含有氮原子之雜芳族基團係於與氮原子相鄰之碳原子上經羥基基團取代，則可出現以下互變異構現象：
C3-6-環烷基或C3-6-雜環烷基可係經直鏈或螺環連接的，例如當環己烷係經雜環烷基基團環氧丙烷取代，以下結構係可能的：
技術熟練者應明白，當可替代之取代基的清單包括不可用於取代特定基團之成員時(因其等原子價要求或其他原因)，該清單係意欲藉助技術熟練者之知識理解為僅包括該清單之彼等適宜取代特定基團之成員。
本發明化合物可呈前藥化合物之形式。「前藥化合物」意為於生物體內在生理條件下藉由與酶、胃酸、或類似者反應可轉化為本發明化合物的衍生物(例如藉由氧化作用、還原作用、水解作用或類似者，其各係經酶解進行)。前藥之實例為化合物，其中本發明化合物中之胺基係經醯化、烷基化或磷酸化而形成(例如)二十烷醯基胺基、丙胺醯胺基、特戊醯氧甲基胺基或其中羥基基團係經醯化、烷基化、磷酸化或轉化為硼酸根(例如)乙醯氧基、棕櫚醯氧基、特戊醯氧基、琥珀醯氧基、富馬醯氧基、丙胺醯氧基或其中羧基基團係經酯化或經醯胺化。此等化合物可由本發明化合物根據熟知方法製備。前藥之其他實例為化合物，其中本發明化合物中之羧酸根係(例如)經轉化為烷基-、芳基-、膽鹼-、胺基、醯氧基甲酯、亞麻醯酯。
於人類肝臟中，UDP葡萄糖醛酸轉移酶作用於具有胺基、胺甲醯基、硫代(硫氫基)或羥基基團之某些化合物上，以便經糖苷鍵接合尿苷二磷酸-α-D-葡萄糖醛酸，或於II相代謝過程中將具有羧基或羥基基團之化合物酯化。本發明之化合物可係經葡萄糖醛酸化，亦即經接合至葡萄糖苷酸以便形成葡萄糖醛酸苷(特定言之(β-D)葡萄糖苷酸)。
本發明化合物之代謝物亦係於本發明之範圍內。
一個形成膽汁之步驟為單個膽汁酸與胺基酸(特定言之甘胺酸或牛磺酸)接合。本發明化合物可於可取代之位置與甘胺酸或牛磺酸接合。
在本發明化合物或其前藥可出現互變異構現象(例如酮-烯醇互變異構現象)之情況下，個別形式(如例如酮及烯醇形式)及其呈任何比率之混合物係於本發明之範圍內。此亦適用於立體異構物(例如對映異構物、順式/反式異構物、構像異構物及類似者)。
若需要，異構物可藉由此項技術中熟知之方法(例如藉由液相層析法)分離。此適用於對映異構物，其係藉由使用例如對掌性固定相。此外，對映異構物可藉由轉化為非對映異構物，即與對映體純輔助化合物偶合，隨後分離所得非對映異構物及裂解輔助殘基而分離。或者，本發明化合物之任何對映異構物可使用光學純起始材料由立體選擇性合成獲得。另一由外消旋混合物獲得純對映異構物之方式可使用與對掌性相對離子之對映異構物選擇性結晶作用。
本發明化合物可呈醫藥上可接受之鹽或溶劑化物之形式。術語「醫藥上可接受之鹽」係指由醫藥上可接受之無毒性鹼或酸(包括無機鹼或酸及有機鹼或酸)製備之鹽。若本發明化合物含有一個或多個酸性或鹼性基團，本發明亦包括其對應醫藥上或毒物學上可接受之鹽(尤其其醫藥上可利用之鹽)。因此，含有酸性基團之本發明化合物可以此等基團存在且可根據本發明例如以鹼金屬鹽、鹼土金屬鹽或銨鹽使用。此等鹽之更確切實例包括鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽，或與氨或有機胺(諸如乙胺、乙醇胺、三乙醇胺或胺基酸)之鹽。可存在含有一個或多個鹼性基團(即可質子化之基團)之本發明化合物且可根據本發明以其與無機或有機酸之加成鹽形式使用。適宜酸之實例包括氯化氫、溴化氫、磷酸、硫酸、硝酸、甲磺酸、對甲苯磺酸、萘二磺酸、 草酸、乙酸、酒石酸、乳酸、水楊酸、苯甲酸、蟻酸、丙酸、特戊酸、二乙基乙酸、丙二酸、琥珀酸、庚二酸、富馬酸、順丁烯二酸、蘋果酸、胺基磺酸、苯基丙酸、葡萄糖酸、抗壞血酸、異菸鹼酸、檸檬酸、己二酸及熟習此項技術者已知之其他酸。若本發明化合物同時含有酸性及鹼性基團於分子中，則除了所提及之鹽形式以外本發明亦包括內鹽或甜菜鹼(兩性離子)。各鹽可藉由熟習此項技術者已知之習用方法，例如藉由其與有機或無機酸或鹼於溶劑或分散劑中接觸，或藉由與其他鹽進行陰離子交換或陽離子交換獲得。本發明亦包括本發明化合物之所有鹽，其因生理相容性低而不直接適用於藥物中，但其可例如用作中間物用於化學反應或用於製備醫藥上可接受之鹽。
另外，本發明化合物可以溶劑化物之形式存在，諸如包括水溶劑化物、或醫藥上可接受之溶劑化物(諸如醇，尤其乙醇)。
此外，本發明提供包含至少一種本發明化合物、或其前藥化合物、或醫藥上可接受之鹽或其溶劑化物作為活性成分以及醫藥上可接受之載劑的醫藥組合物。
「醫藥組合物」意指一或多種活性成分，及構成載劑之一或多種惰性成分，以及直接地或間接地產生自於任何兩或多種成分之組合、絡合或聚集，或一或多種成分之離解，或一或多種成分之其他類型的反應或相互作用的任何產物。因此，本發明之醫藥組合物涵蓋藉由混合本發明之至少一種化合物與醫藥上可接受的載劑而製得之任何組合物。
本發明之醫藥組合物可額外包括一種或多種其他組合物作為活性成分(例如前藥組合物)或其他核受體調節劑。
該等組合物適合經口、直腸、局部、非經腸(包括皮下、肌內及靜脈內)、眼(眼內)、肺(鼻或頰吸入)或鼻投與的組合物，但任何指定情形下之最適宜的途徑將取決於所治療病狀之性質及嚴重性及活性成 分之性質。其可方便地以單位劑型存在及藉由藥學技術中熟知之任何方法製備。
本發明進一步係關於該等化合物於通過藉由該等化合物結合該核受體來治療及/或預防疾病及/或病狀的用途。另外，本發明係關於該等化合物於製備通過藉由該等化合物結合該核受體來治療及/或預防疾病及/或病狀之藥劑的用途。明確言之，本發明係關於式(1)之化合物於製備藥劑之用途，該藥劑係用於預防及/或治療慢性肝內或某種形式之肝外膽汁鬱積性病狀、肝纖維化、急性肝內膽汁鬱積性病狀、起因于不恰當膽汁組成之阻塞性或慢性炎症、伴隨膳食脂肪及脂溶性膳食維生素攝取減少之胃腸病狀、發炎性腸病、脂質及脂蛋白病症、II型糖尿病及I型及II型糖尿病之臨床併發症、由因脂質及特定甘油三酸酯強制累積及後續促纖維變性途徑活化導致器官之慢性脂肪及纖維變性而造成之病狀及疾病、肥胖症及代謝症候群(異常血脂症、糖尿病及異常高身體質量指數之合併病狀)、急性心肌梗塞、急性中風、慢性阻塞性動脈粥狀硬化之終點發生的血栓、由胞內細菌及寄生原蟲引起之持續性感染、良性過度增生性疾病、惡性過度增生性疾病、尤其結腸腺癌及肝細胞癌、脂肪肝及相關症候群、作為慢性肝病及手術肝切除之結果之肝衰竭及肝功能障礙、B型肝炎感染、C型肝炎感染及/或與酒精誘發之硬化或病毒媒介形式肝炎相關的膽汁鬱積性及纖維化效應。
本文中所指之藥劑可經習知方法製備，包括組合本發明化合物及醫藥上可接受之載劑。
FXR係經推選為核膽汁酸感測器。因此，其可調節肝中膽汁酸之合成輸出及其等於腸中之循環(藉由調節膽汁酸結合蛋白)。但除了膽汁酸生理學外，FXR似乎參與與病源學相關及用於治療不同疾病(如膽固醇膽結石、諸如II型糖尿病、異常血脂症或肥胖症之代謝障礙、 諸如發炎性腸病之慢性發炎性疾病或慢性肝內型膽汁鬱積及許多其他疾病)之許多不同生理過程之調節(T.Claudel等人，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.2005,25,2020；Y.D.Wang等人，Cell Res.2008,18,1087)。
FXR調節肝中及胃腸道中之應答基因之複雜模式。基因產物對不同生理過程有影響。於FXR之功能分析過程中，所分析之第一調節網絡為膽汁酸合成之調節。當LXR經由調節核受體LRH-1之誘導來誘導將膽固醇轉化為膽汁酸之關鍵酶(Cyp7A1)時，FXR經由編碼SHP(另一種主要抑制LRH-1之核受體)之mRNA之向上調節抑制Cyp7A1之誘導。因為FXR結合此路徑之最後產物(諸如膽酸(CA)或CDCA之初級膽汁酸)，所以此可視為於基因表現水平上之反饋抑制之一實例(B.Goodwin等人，Mol.Cell 2000,6,517；T.T.Lu等人，Mol.Cell 2000,6,507)。與經SHP抑制膽汁酸合成并行，FXR誘導一系列所謂ABC(ATP結合匣)運輸蛋白，其負責將有毒膽汁酸自肝細胞細胞溶質輸出至小管(膽汁發源之小膽管分枝)。FXR之此保肝功能首先伴隨FXR基因敲除小鼠之首次變得明顯(C.J.Sinal等人，Cell 2000,102,731)。於此顯示出若干種ABC運輸蛋白於肝中之表現不足或過度表現。另外，詳細分析揭示主要膽汁鹽排洩泵BSEP或ABCB11(M.Ananthanarayanan等人，J.Biol.Chem.2001,276,28857；J.R.Plass等人，Hepatology 2002,35,589)及介導脂質自脂蛋白向磷脂轉移之關鍵酶(PLTP)(N.L.Urizar等人，J.Biol.Chem.2000,275,39313)，及磷脂之兩種關鍵小管膜轉運蛋白MRP-2(ABCC4)(H.R.Kast等人，J.Biol.Chem.2002,277,2908)及MDR-3(ABCB4)(L.Huang等人，J.Biol.Chem.2003,278,51085)係藉由FXR進行之配體導向轉錄活化之直接標靶(概述於：M.Miyata,J.Pharmacol.Exp.Ther.2005,312,759；G.Rizzo等人，Curr.Drug Targets Immune Endocr.Metabol Disord.2005,5,289)。
FXR似乎為膽汁酸之合成、輸送及再循環之主要代謝產物感測器及調節劑之事實建議使用FXR配體誘導膽汁流動及使膽汁酸組分向更親水組合物改變。隨著作為工具化合物之第一合成FXR配體GW4064(P.R.Maloney等人，J.Med.Chem.2000,43,2971；T.M.Willson等人，Med.Res.Rev.2001,21,513)及半合成人造膽汁酸配體6-α-乙基-CDCA之發展，可藉由強效促效劑分析FXR之超刺激效果。據顯示兩種配體均誘導膽汁於膽管結扎的動物內流動。此外，除了促膽汁分泌效果外，亦顯示保肝效果(R.Pellicciari等人，J.Med.Chem.2002,45,3569；Y.Liu等人，J.Clin.Invest.2003,112,1678)。另外，此保肝效果縮小為由基質金屬蛋白酶組織抑制劑(TIMP-1及TIMP-2)之抑制、肝星狀細胞中之膠原質沉積分解基質金屬蛋白酶2之誘導及隨後藉由FXR促效劑使α-膠原質mRNA及轉變生長因子β(TGF-β)mRNA(兩者均為FXR為促纖維變性因子)減少產生之抗纖維化作用(S.Fiorucci等人，Gastroenterology 2004,127,1497；S.Fiorucci等人，J.Pharmacol.Exp.Ther.2005,314,584)。此外，於膽管結扎之動物模型中及雌激素誘發膽汁鬱積之動物模型中顯示抗膽汁鬱積活性(S.Fiorucci等人，J.Pharmacol.Exp.Ther.2005,313,604)。
基因研究顯示在膽汁鬱積之遺傳形式(進行性家族性肝內膽汁鬱積症(Progressive Familiar Intrahepatic Cholestasis=PFIC)，I-IV型)中，FXR自身之核定位因FIC1基因(於PFICI型中，亦稱為拜勒病(Byler's Disease))之突變而減弱(F.Chen等人，Gastroenterology 2004,126,756；L.Alvarez等人，Hum.Mol.Genet.2004,13,2451)或編碼MDR-3磷脂輸出泵之FXR靶基因之水平降低(於PFIC III型中)。綜合起來，越來越多證據顯示FXR結合化合物將於慢性膽汁鬱積性病狀(諸如原發性膽汁性肝硬化(PBC)或原發性硬化性膽管炎(PSC))之治療方 案中顯示實質臨床效用(綜述於：G.Rizzo等人，Curr.Drug Targets Immune Endocr.Metabol.Disord.2005,5,289；G.Zollner等人，Mol.Pharm.2006,3,231；S.Y.Cai等人，Expert Opin.Ther.Targets 2006,10,409)。
FXR活化對膽汁酸代謝及排泄之深刻影響不但與膽汁鬱積性症候群相關而且更直接用於膽結石形成之療法。膽固醇膽結石因主動自肝細胞泵入小管內腔中之膽固醇之低溶解度而形成。正是三種主要组分(膽汁酸、磷脂和游離膽固醇)之含量之相對百分比決定混合膠束之形成並就此決定游離膽固醇於膽汁中之表觀溶解度。FXR多型性圖譜作為數量性狀基因座為導致膽結石疾病之一個因素(H.Wittenburg,Gastroenterology 2003,125,868)。使用合成FXR工具化合物GW4064，可顯示FXR之活化引致膽固醇飽和指數(CSI)之改善並直接引致C57L易形成膽結石小鼠中之膽結石形成停止，而於FXR基因敲除小鼠中，藥物治療對於膽結石形成無影響(A.Moschetta等人，Nature Medicine 2004,10,1352)。
此等結果使FXR具備作為用於研發可用於防止膽固醇膽結石形成或防止於手術切除或衝擊波碎石術後膽結石之再形成之小分子促效劑之良好靶標之資格(論述於：S.A.Doggrell,Curr.Opin.Investig.Drugs 2006,7,344)。
因此，於本發明之一實施例中，式(1)之化合物及包含該化合物之醫藥組合物係用於起因于不恰當膽汁組成之阻塞性或慢性炎症(諸如膽結石病，亦稱為膽固醇膽結石)之預防及/或治療。
除了FXR於肝臟中小分子刺激活化後顯示之強效保肝及利膽及抗纖維化效應外，FXR似乎還具有保護腸免於瘤性轉化及於腸道中形成息肉及其等轉化為腺癌之作用(S.Modica等人，Cancer Res.2008,68,9589及R.R.Maran等人，J.Pharmacol.Exp.Ther.2009,328,469)。與 腸中之情況類似，缺乏FXR導致肝細胞癌(HCC)(最普遍肝癌形式)之形成大幅增加(I.Kim等人，Carcinogenesis 2007,28,940及F.Yang等人，Cancer Res.2007,67,863)。反之，功能性FXR防止結腸腺癌及肝細胞癌之形成，FXR活化誘導肝切除術後之肝臟再生(W.Huang等人，Science 2006,312,233)。
與FXR活化相關之組合保肝、抗腫瘤及肝再生性效果可於療法上開發FXR促效劑之用於治療嚴重肝臟疾病之用途。於一實施例中，本發明化合物及含有該等化合物之醫藥組合物係用於治療肝臟疾病(諸如HCC)、刺激肝臟再生及緩解與重大肝切除術相關之副作用、與病源學無關之肝硬化及於肝移植或主要肝手術之過程中預防或治療肝缺血。
自發現第一合成FXR促效劑及將其投與至囓齒動物後，其證實FXR為血清甘油三酸酯之關鍵調節劑(P.Maloney等人，J.Med.Chem.2000,43,2971；T.Willson等人，Med.Res.Rev.2001,21,513)。於過去六年內，越來越多的公開證據表明，經合成促效劑活化之FXR不僅導致血清甘油三酸酯之顯著減少(主要呈減少之VLDL之形式)，而且導致總血清膽固醇之減少(H.R.Kast等人，Mol.Endocrinol.2001,15,1720；N.L.Urizar等人，Science 2002,296,1703；G.Lambert等人，J.Biol.Chem.2003,278,2563；M.Watanabe等人，J.Clin.Invest.2004,113,1408；A.Figge等人，J.Biol.Chem.2004,279,2790；S.Bilz等人，Am.J.Physiol.Endocrinol.Metab.2006,290,E716)。
但血清甘油三酸酯之降低並非獨立存在之效果。使用合成FXR促效劑GW4064治療db/db或ob/ob小鼠引致血清甘油三酸酯、總膽固醇、游離脂肪酸、酮體(諸如3-OH丁酸酯)之顯著及聯合減少。此外，FXR活化參與肝細胞中之細胞內的胰島素發訊路徑，導致來自肝臟糖生成作用之葡萄糖產量減少但伴隨肝糖原之增加。胰島素敏感度及葡 萄糖耐受性受到FXR治療之積極影響(K.R.Stayrook等人，Endocrinology 2005,146,984；Y.Zhang等人，PNAS 2006,103,1006；B.Cariou等人，J.Biol.Chem.2006,281,11039；K.Ma等人，J.Clin.Invest.2006,116,1102；D.Duran-Sandoval等人，Biochimie 2005,87,93)。近來，亦於用高脂質飲食過度飼餵之小鼠中觀察到體重減少之效果(C.Lihong等人，美國糖尿病協會(ADA)第66屆科學年會，2006年6月，摘要編號856-P)。此體重減輕效果可能由FXR誘導FGF-19(一種已知引致重量減輕及運動表現型之纖維母細胞生長因子)引發(J.Holt等人，Genes Dev.2003,17,1581；E.Tomlinson等人，Endocrinology 2002,143,1741)。於最近專利申請案中，顯示FXR促效劑於體重減輕上之效果(WO 2004/087076；WO 2003/080803)。
綜合起來，FXR促效劑之此等藥理學效果可以不同治療方式中開發：FXR結合化合物因其等胰島素敏感性、產糖原性(glycogenogenic)、及降脂效果而被認為係治疗II型糖尿病之良好候選者。
於一實施例中，本發明化合物及包含該等化合物之醫藥組合物係用於II型糖尿病之預防及/或治療，該疾病可藉由於肝臟內FXR介導向上調節全身性胰島素敏感度及細胞內胰島素發訊、增加周圍葡萄糖攝入及代謝、增加肝糖於肝臟內之儲存、減少來自肝臟負荷之糖生成作用之葡萄糖向血清的輸出來克服。
於另一實施例中，該等化合物及醫藥組合物係用於預防及/或治療慢性肝內型膽汁鬱積(諸如PBC、PSC、進行性家族性膽汁鬱積症(PFIC)、酒精誘發之肝硬化及相關膽汁鬱積症)，及一些形式之肝外膽汁鬱積性病狀，或肝纖維化。
本發明亦係關於式(1)化合物或含有該化合物之醫藥組合物，其用於預防及/或治療伴隨減少攝取膳食脂肪及脂溶性膳食維生素之胃 腸病症，該等病症可藉由提高膽汁酸及磷脂之腸水平來克服。
於另一實施例中，該化合物或醫藥組合物係用於預防及/或治療選自下列組成之群之疾病：脂質及脂蛋白病症，諸如作為臨床明顯病症之高膽固醇血症、高三酸甘油脂血症、及動脈粥狀硬化症，其等可藉由FXR對於降低總血漿膽固醇、降低血清甘油三酸酯、增加肝膽固醇向膽汁酸轉化及增加於肝臟中之VLDL及其他脂蛋白之清除及代謝性轉化之有益效果加以緩解。
於另一實施例中，該化合物及醫藥組合物係用於預防及/或治療疾病，其中FXR-靶藥劑之組合降脂、抗膽汁鬱積性及抗纖維化效應可經開發用於治療脂肪肝及相關症候群(諸如NASH)，或用於治療與酒精誘發之硬化或病毒媒介形式之肝炎相關的膽汁鬱積性及纖維化效應。
結合降血脂效果，其亦顯示功能性FXR之損失會導致ApoE基因敲除小鼠中之動脈粥樣硬化之增加(E.A.Hanniman等人，J.Lipid Res.2005,46,2595)。因此，FXR促效劑可具有作為抗動脈粥樣硬化及心臟保護藥物之臨床效用。血管平滑肌細胞中內皮素-1之向下調節亦可對此等有益治療效果有貢獻(F.He等人，Circ.Res.2006,98,192)。
本發明亦係關於式(1)化合物或包含該化合物之醫藥組合物，其係用於預防性及創傷後治療心血管病症(諸如急性心肌梗塞、急性中風、或慢性阻塞性動脈粥狀硬化之終點發生的血栓)。
除了控制腸及結腸息肉形成外，FXR似乎會於乳癌組織及細胞系中表現但不會於健康乳房組織中表現，且似乎於ER陽性乳癌細胞中會與雌激素受體相互作用(K.E.Swales等人，Cancer Res.2006,66,10120及F.Journe等人，Breast Cancer Res.Treat.2009,115,523)。
此將容許視FXR亦作為用於治療增生性疾病之潛在標靶，尤其係表現FXR之小分子響應形式之轉移癌形式。
於另一實施例中，該等化合物及醫藥組合物係用於預防及/或治療惡性過度增生性疾病(諸如不同形式之癌，尤其為某些形式之乳房癌、肝臟癌或結腸癌)，其中用FXR配體之干擾將具有有益效果。
最後，FXR似乎亦參與控制腸中之抗菌防禦(T.Inagaki等人，PNAS.2006,103,3920)，但未理解確切機制。然而，自此等已發表之數據可推斷，用FXR促效劑治療可於發炎性腸病(IBD)，特定言之影響腸之上(回腸)部分之彼等形式(例如回腸克羅恩氏病)的療法中具有有益效果，因為此似乎係FXR控制細菌生長之作用位置。於IBD中，適應性免疫反應之脫敏作用不知何故於腸免疫系統被削弱。隨後，細菌之過度生長遂建立慢性發炎反應之誘因。因此，藉由FXR負荷機制抑制細菌生長可為防止急性發炎發作之關鍵機制。
因此，本發明亦係關於式(1)化合物或包含該化合物之醫藥組合物，其用於預防及/或治療與發炎性腸病(諸如克羅恩氏病或潰瘍性結腸炎)相關之疾病。據信FXR-介導之腸內屏蔽功能之復原及非共生細菌負載量之減少有助於減少細菌性抗原曝露至腸免疫系統及因此可減弱發炎反應。
本發明進一步係關於一種化合物或醫藥組合物，其係用於預防及/或治療肥胖症及相關病症(諸如代謝症候群(異常血脂症、糖尿病及異常高身體質量指數之合併病狀))，該等疾病可經FXR-介導之血清甘油三酸酯、血糖之降低及胰島素敏感度之增長及FXR-介導之體重減輕來克服。
於另一實施例中，本發明之化合物或醫藥組合物係用於預防及/或治療I型及II型糖尿病之臨床併發症。此等併發症之實例包括糖尿病性腎病、糖尿病性視網膜病、糖尿病性神經病、或周邊動脈閉塞性疾病(PAOD)。本發明亦包括糖尿病之其他臨床併發症。
此外，因脂質及特定甘油三酸酯累積及後續促纖維變性途徑活 化導致器官之慢性脂肪及纖維變性而造成之病狀及疾病亦可藉由應用本發明之化合物或醫藥組合物來預防及/或治療。此等病狀及疾病包括肝臟中之NASH及慢性膽汁鬱積性病狀、腎臟中之腎小球硬化及糖尿病性腎病、眼中之黃斑變性及糖尿病性視網膜病及腦中之神經退化性疾病(諸如阿茲海默氏(Alzheimer's)症)、或周圍神經系統中之糖尿病性神經病。
在實際應用中，根據常規醫藥複合技術，本發明之化合物可作為活性成分與醫藥上的載劑以密切混合物組合。取決於投與所要求的製劑形式(例如經口或非經腸(包括靜脈內))，該載劑可採取多種形式。在製備口服劑型組合物中，可使用任何常用的醫藥介質，如(例如)在口服液體製劑(例如懸浮液、酏劑及溶液)的情形下，水、二醇、油、酒精、調味劑、防腐劑、著色劑等；或在口服固體製劑(例如粉末、硬及軟膠囊及錠劑)的情形下，諸如澱粉、糖、微晶纖維素、稀釋劑、成粒劑、潤滑劑、黏合劑、崩解劑等之載劑，其中固體口服製劑相比液體製劑更佳。
因為錠劑及膠囊易於投與，其代表最有利的口服單位劑型，在該情形下顯然使用固體醫藥載劑。若需要，可藉由標準水性或非水性技術塗覆錠劑。此等組合物及製劑應包含至少0.1%的活性化合物。該等組合物中之活性化合物的百分比當然可變化且可合宜地介於該單位之約2重量%至約60重量%之間。此等治療上有用組合物中活性化合物之量為可獲得有效劑量者。活性化合物亦可作為例如液體滴劑或噴霧經鼻內投與。
錠劑、丸劑、膠囊等亦可包含黏合劑，諸如黃蓍膠、阿拉伯膠、玉米澱粉或明膠；賦形劑，諸如磷酸二鈣；崩解劑，諸如玉米澱粉、馬鈴薯澱粉、褐藻酸；潤滑劑，諸如硬脂酸鎂；及甜味劑，諸如蔗糖、乳糖或糖精。當單位劑型為膠囊時，其除以上類型之物質之外 可包含液體載劑，諸如脂肪油。
各種其他物質可存在作為塗料或用以改變劑量單位之物理形式。例如，錠劑可經蟲膠、糖或兩者包覆。除活性成分之外，糖漿或酏劑可包含作為甜味劑之蔗糖、作為防腐劑之對羥基苯甲酸甲酯及對羥基苯甲酸丙酯、染料及調味劑(諸如櫻桃或橘子味)。
由於本發明之化合物大多代表羧酸或其類似陰離子同電子排列體(isosters)，且因眾所周知離子型藥物化合物之鹽形式可實質上影響藥物化合物之生物可用性，本發明之化合物亦可以與多種相對陽離子之鹽使用以產生可口服之調配物。其中此等醫藥可接受之陽離子可為單價或二價離子(諸如銨、鹼金屬鈉或鉀、或鹼土金屬鎂或鈣)、某些醫藥可接受之胺(諸如三(羥甲基)胺基甲烷、乙二胺、二乙胺、哌嗪或其他)、或某些陽離子胺基酸(諸如離胺酸或精胺酸)。
本發明之化合物亦可非經腸投與。此等活性化合物之溶液或懸浮液可在適當地與界面活性劑(諸如羥基丙基纖維素)混合的水中製備。分散液亦可在甘油、液體聚乙二醇及其於油中之混合物中製備。在一般儲存及使用條件下，此等製劑包含防腐劑以防止微生物之生長。
適合可注射應用之醫藥形式包括無菌水溶液或分散液及用於臨時配製無菌可注射溶液或分散液之無菌粉末。在所有情形中，該形式必須為無菌且必須為達到容易注射程度之流體。其必須在製造及儲存之條件下為穩定且必須抵抗微生物(諸如細菌及真菌)之污染作用而保存。載劑可為溶劑或分散介質，包含例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇及液體聚乙二醇)、其適當混合物，及植物油。
可應用任何適宜的投與途徑以向哺乳動物(尤其人類)提供有效劑量之本發明化合物。例如，可使用口服、直腸、局部、非經腸、眼睛、肺、鼻等。劑型包括錠劑、口含錠、分散液、懸浮液、溶液、膠 囊、乳膏、軟膏、氣霧劑等。較佳地，經口投與本發明化合物。
取決於所用之特定化合物、投與模式、正治療病症及正治療病症之嚴重性，可改變所用活性成分的有效劑量。熟習此項技術者容易確定該劑量。
當在治療或預防本發明化合物適用之FXR介導之病症時，一般會在本發明化合物依每公斤動物體重約0.1毫克至約100毫克之每日劑量(較佳以單次日劑量或一天兩至六次之分次劑量)、或呈持續釋放形式投與情況下獲得滿意結果。對於大多數大型哺乳動物，總每日劑量為約1.0毫克至約1000毫克，較佳約1毫克至約50毫克。在70kg成人的情形下，總每日劑量一般為約7毫克至約350毫克。可調整該劑量方案以提供最佳的治療反應。
本發明化合物可根據以下反應方案及實例之步驟，使用適當材料製備，並進一步藉由以下具體實例舉例說明。此外，藉由使用本文中所述之步驟，結合一般技術，可容易製備本文中所主張之本發明其他化合物。然而，於實例中所示之化合物並非解釋為形成視為係本發明之唯一屬類。該等實例進一步顯示用於本發明化合物之製備的細節。熟習此項技術者將容易理解，以下製備步驟之條件及過程的已知變化可用於製備此等化合物。本發明化合物一般係以其等醫藥可接受之鹽(諸如以上所述之彼等)之形式分離。
對應所分離之鹽之胺-游離鹼可藉由用適宜鹼(諸如碳酸氫鈉水溶液、碳酸鈉、氫氧化鈉及氫氧化鉀)中和，及將所釋出之胺-游離鹼萃取入有機溶劑，隨後蒸發產生。以此方式分離之胺-游離鹼可藉由於有機溶劑中溶解，隨後藉由添加適宜酸及接著蒸發、沉澱或結晶進一步轉化為另一種醫藥可接受之鹽。對應所分離之鹽之游離羧酸可藉由用適宜酸(諸如鹽酸、硫酸氫鈉、磷酸二氫鈉水溶液)中和，及將所釋出之游離羧酸萃取入有機溶劑，隨後蒸發產生。以此方式分離之游離 羧酸可藉由於有機溶劑中溶解，隨後藉由添加適宜鹼及接著蒸發、沉澱或結晶進一步轉化為另一種醫藥可接受之鹽。
於下文顯示本發明化合物之製備之圖解。除非另外於反應方案中指明，否則該等變化具有與如上所述相同之意義。以下所呈現之實例係意欲顯示本發明之特定實施例。於以下所述之合成中所使用的適宜起始材料、構件塊及試劑可自(例如)Sigma-Aldrich或Acros Organics購得，或可藉由於文獻中所述之步驟例行製得(例如於「March's Advanced Organic Chemistry：Reactions,Mechanisms,and Structure」，第5版；John Wiley & Sons or T.Eicher,S.Hauptmann「The Chemistry of Heterocycles；Structures,Reactions,Synthesis and Application」，第2版，Wiley-VCH 2003；Fieser等人「Fiesers' Reagents for organic Synthesis」John Wiley & Sons 2000中)。
縮寫清單
一般合成法1
實例1c：2-(4-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)異菸鹼腈
步驟1：2-(1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷-8-基)異菸鹼腈(1a)
於微波中，將2-氯異菸鹼腈(300mg，2.17mmol)溶解於DMF(3ml)，隨後用1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷(0.42ml，3.25mmol)及碳酸鉀(600mg，4.33mmol)處理。將小瓶密封並於微波反應器中於110℃加熱20分鐘。於冷卻至室溫後，添加水及用EtOAc萃取混合物兩次，用鹽水將有機層清洗4次，藉由Na2SO4乾燥、過濾並隨後濃縮。經管柱層析法(ISCO 25g 0-40% EtOAc/已烷)純化產生產物(310mg，58%產率)。
步驟2：2-(4-氧基哌啶-1-基)異菸鹼腈(1b)
將2-(1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷-8-基)異菸鹼腈(310mg，1.26mmol)溶解於THF(4ml)中，添加4M HCl(4ml)，及於室溫下攪拌反應整夜。添加水，隨後用1N NaOH將pH調整至8。添加EtOAc，分離各相。用EtOAc萃取水相一次，用鹽水將合併之有機物清洗，藉由Na2SO4乾燥、過濾並濃縮(186mg，73%產率)。
步驟3，實例1c：2-(4-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)異菸鹼腈(1c)
將含有4-((4-溴-3-氯苯氧基)甲基)-5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑(200mg，0.42mmol)之烘乾反應小瓶密封、抽空、並用N2填充 三次，隨後經由注射器添加2-MeTHF(3ml)。隨後於室溫下經由注射器一滴一滴地添加含於THF中之1.3M異丙基氯化鎂氯化鋰錯合物(0.39ml)並於室溫下攪拌該混合物達1小時，隨後加熱至50℃達1小時。額外添加1.2eq i-PrMgCl並於50℃持續加熱2小時。將溶液冷卻至室溫隨後經注射器將其添加至2-(4-氧基哌啶-1-基)異菸鹼腈(85mg，0.42mmol)在THF(2ml)中之溶液，並將混合物於室溫下攪拌整夜。將該混合物用H2O及EtOAc淬滅，隨後用1N HCl酸化。將各相分離，用鹽水將有機物清洗，藉由Na2SO4乾燥，並濃縮。經層析法(ISCO 25g金二氧化矽0-100% EtOAc/已烷)純化產生產物。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ 8.27(d,J=5.0Hz,1H),7.66-7.46(m,4H),7.34(s,1H),6.88(dd,J=5.0,1.1Hz,1H),6.80-6.71(m,2H),5.27(s,1H),4.86(s,2H),4.24(d,J=12.5Hz,2H),3.31-3.20(m,2H),2.48-2.35(m,2H),1.50(d,J=13.2Hz,2H),1.26-1.03(m,5H).)。MS(M+H)：595.05。
實例1：2-(4-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)異菸鹼酸(1)
於燒瓶中，將2-(4-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)異菸鹼腈(40mg，0.07mmol)溶解於乙醇(1.5ml)中，用4M氫氧化鈉水溶液(0.67mL)處理並於室溫下攪拌1小時，隨後加熱至80℃達3小時。將該混合物冷卻並將EtOH於真空條件下移除。將剩餘溶液於冰浴中冷卻，用約2ml水處理，並用1M HCl將pH調整至約4。用EtOAc萃取混合物，用鹽水清洗，藉由Na2SO4乾燥、過濾並濃縮以便產生產物(29mg，70%產率)。1H NMR (300MHz,DMSO-d6)δ 13.39(s,1H),8.23(d,J=5.1Hz,1H),7.67-7.45(m,4H),7.23(d,J=1.3Hz,1H),6.97(dd,J=5.1,1.1Hz,1H),6.80-6.70(m,2H),5.24(s,1H),4.86(s,2H),4.20(d,J=12.0Hz,2H),3.31-3.20(m,2H),2.47-2.35(m,2H),1.51(d,J=13.1Hz,2H),1.28-1.01(m,5H)。MS(M+H)：614.05。
一般合成法2
實例2：2-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯啶-1-基)異菸鹼酸(2)
步驟1：2-(3-羥基吡咯啶-1-基)異菸鹼腈(2a)
於配備有磁力攪拌棒及冷凝器之100ml燒瓶中放置2-氯異菸鹼腈(1500mg，10.8mmol)、DMF(15ml)、3-吡咯啶醇(1.3ml，16.2mmol)及碳酸鉀(2300mg，21.7mmol)。將該反應加熱至60℃達3小時，隨後濃縮以便移除DMF，用EtOAc及水稀釋，分離，用EtOAc萃取1X，用鹽水清洗四次，於硫酸鈉上乾燥、過濾，隨後於減壓下濃縮(1770mg，86%產率)。
步驟2：2-(3-氧雜吡咯啶-1-基)異菸鹼腈(2b)
於配備有磁力攪拌棒之燒瓶中，用戴斯-馬丁高碘烷(4760mg，11.23mmol)分四份處理2-(3-羥基吡咯啶-1-基)異菸鹼腈(1770mg，9.35mmol)含於二氯甲烷(90ml)之溶液並將該混合物於室溫下攪拌整夜。用硫代硫酸鈉溶液淬滅該反應，用EtOAc稀釋並攪拌約15分鐘，隨後用水處理以便獲得澄清溶液。將各層分離並用50%碳酸氫鈉水溶液及隨後用鹽水清洗該等有機物，藉由Na2SO4乾燥，過濾並濃縮。經管柱層析法(ISCO 40g二氧化矽，0-100% EtOAc/已烷)純化產生產物。
步驟3：2-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯啶-1-基)異菸鹼腈(2c)
於配備有磁力攪拌棒之烘乾反應瓶中於氮氣條件下，將4-((4-溴-3-氯苯氧基)甲基)-5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑(430mg，0.74mmol)溶解於2-MeTHF(1.4mL)。向此瓶一滴一滴地添加含於THF(1.5ml，1.9mmol)中之1.3M i-PrMgCl-LiCl錯合物並將該混合物攪拌2.5小時。將該混合物於冰/水浴中冷卻並添加2-(3-氧雜吡咯啶-1-基)異菸鹼腈含於2-MeTHF(0.8mL)中之縣浮液。將該混合物攪拌2小時，隨後用水淬滅，用EtOAc稀釋，用1N HCl酸化，隨後攪拌15分鐘。將各層分離，用水清洗及隨後用鹽水清洗有機物，藉由Na2SO4乾燥，過濾並濃縮。使用ISCO 40g金二氧化矽0-60% EtOAc/已烷)純化產生產物(490mg，60%)。
步驟4，實例2：外消旋2-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯啶-1-基)異菸鹼酸(2)
於100ml燒瓶中，用4M氫氧化鈉水溶液(7.4ml)處理2-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯啶-1-基)異菸鹼腈(430mg，0.739mmol)含於乙醇(14ml)之溶液並於70℃下攪拌2.5小時。將該混合物冷卻至室溫並於真空下將EtOH移除。將剩餘溶液於冰浴中冷卻，用約2ml水處理，並用1M HCl將pH調整至約4。用EtOAc萃取混合物一次，用鹽水清洗，藉由Na2SO4乾燥、過濾並濃縮以便產生產物(421mg，95%產率)。1H NMR(300MHz,DMSO-d 6)δ 13.32(s,1H),8.19(dd,J=5.1,0.8Hz,1H),7.66-7.47(m,4H),6.93(dd,J=5.2,1.3Hz,1H),6.89(d,J=2.6Hz,1H),6.84(s,1H),6.77(dd,J=8.8,2.6Hz,1H),5.43(s,1H),4.90(s,2H),3.89-3.75(m,2H),3.65(d,J=8.9Hz,1H),3.58-3.45(m,1H),2.61(t,J=10.5Hz,1H),2.46-2.38(m,1H),2.30-2.15(m,1H),1.25-1.05(m,4H)。MS(M+H)：600.05。
隨後使此材料接受對掌性拆分(SFC AD-H，40%EtOH)以便產生單一異構物：實例2a及2b。
實例2a：2-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯啶-1-基)異菸鹼酸，對映異構物1
1H NMR(300MHz,DMSO-d 6)δ 13.30(s,1H),8.20(dd,J=5.2, 0.7Hz,1H),7.67-7.46(m,5H),6.95(dd,J=5.1,1.3Hz,1H),6.90(d,J=2.6Hz,1H),6.85(s,1H),6.78(dd,J=8.8,2.6Hz,1H),5.44(s,1H),4.92(s,2H),3.90-3.74(m,2H),3.71-3.65(m,1H),3.62-3.47(m,1H),2.64(q,J=10.2,9.5Hz,1H),2.50-2.38(m,1H),2.24(dd,J=12.6,6.0Hz,1H),1.26-1.03(m,4H)。MS(M+H)：600.12。
實例2b：2-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯啶-1-基)異菸鹼酸，對映異構物2
1H NMR(300MHz,DMSO-d 6)δ 13.34(s,1H),8.19(dd,J=5.1,0.7Hz,1H),7.65-7.46(m,4H),6.94(dd,J=5.1,1.3Hz,1H),6.90(d,J=2.6Hz,1H),6.84(d,J=1.4Hz,1H),6.78(dd,J=8.8,2.7Hz,1H),5.44(s,1H),4.91(s,2H),3.89-3.76(m,2H),3.75-3.60(m,1H),3.60-3.46(m,1H),2.72-2.55(m,1H),2.50-2.38(m,1H),2.30-2.18(m,IH),1.26-1.07(m,4H)。MS(M+H)：600.07
一般合成法3
實例3：4-(4-((4-(1-(4-羧基吡啶-2-基)-4-羥基哌啶-4-基)-3-氯苯氧基)甲基)-5-環丙基異噁唑-3-基)-3,5-二氯吡啶1-氧化物(3)步驟1： 2-(1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷-8-基)異菸鹼酸甲酯(3a)
向2-氯吡啶-4-羧酸甲酯(2.6g，15.2mmol)含於DMF(12.7mL)之溶液中添加1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷(2.3ml，18.3mmol)、K2CO3(4.2g，30.5mmol)。將該混合物在N2氛圍下於65℃攪拌4小時。將所得溶液冷卻至室溫，添加H2O，用EtOAc萃取水性溶液，合併之有機物藉由Na2SO4乾燥並濃縮。經層析法(ISCO(24g矽膠管柱)使用100%己烷-1：1己烷/EtOAc的梯度)純化產出化合物3a(220mg，5%產率)。
步驟2：2-(4-氧基哌啶-1-基)異菸鹼酸甲酯(3b)
根據實例1/步驟2中所述之步驟，自2-(1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷-8-基)異菸鹼酸甲酯(3a)以定量產率獲得化合物3b。
步驟3：2-(4-(4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-氯苯基)-4-羥基哌啶-1-基)異菸鹼酸甲酯(3c)
於經N2沖洗之烘乾反應瓶中放入(4-溴-3-氯苯氧基)(第三丁基)二甲基矽烷(255mg，0.79mmol)之2-MeTHF(1mL)溶液。隨後於室溫下經注射器一滴一滴地添加含於THF之1.3M異丙基氯化鎂氯化鋰錯合物(0.92ml，1.2mmol)，且將混合物攪拌3小時。緩慢添加(4-氧代哌啶-1-基)異菸鹼酸甲酯(3b)含於2-MeTHF(1ml)之溶液且將該混合物於室溫下攪拌30分鐘。用H2O淬滅反應，用EtOAc萃取，用鹽水將有機物 清洗，藉由Na2SO4乾燥，並濃縮。經層析法(ISCO(12g矽膠管柱)使用100%己烷-7：3己烷/EtOAc的梯度)純化產出化合物3c(124mg，30%產率)。
步驟4：2-(4-(2-氯-4-羥基苯基)-4-羥基哌啶-1-基)異菸鹼酸甲酯(3d)
於室溫下向2-(4-(4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-氯苯基)-4-羥基哌啶-1-基)異菸鹼酸甲酯(3c)(124mg，0.26mmol)含於2-MeTHF(2mL)之溶液添加1M TBAF之THF(0.3ml，0.29mmol)溶液並於室溫下將混合物攪拌30分鐘。用水淬滅該混合物並用EtOAc萃取。用鹽水(20mL)清洗有機相，藉由Na2SO4乾燥，並濃縮以獲得標題化合物(94mg)，其可無需另外純化即可於下一個步驟中直接使用。
步驟5：3,5-二氯-4-(4-((3-氯-4-(4-羥基-1-(4-(甲氧羰基)吡啶-2-基)哌啶-4-基)苯氧基)甲基)-5-環丙基異噁唑-3-基)吡啶1-氧化物(3e)
於室溫下使3,5-二氯-4-(4-(氯甲基)-5-環丙基異噁唑-3-基)吡啶1-氧化物(100mg，0.31mmol)(如於WO2011/020615中所述製備)、2-(4-(2-氯-4-羥基苯基)-4-羥基哌啶-1-基)異菸鹼酸甲酯(3d)(125mg，0.34mmol)及K2CO3(87mg，0.63mmol)在無水DMF(1.6mL)中結合。於氮氣條件下將該混合物加熱至65℃並攪拌整夜。將所得溶液冷卻至室溫，用H2O淬滅並用EtOAc萃取。藉由鹽水清洗合併之有機層，藉由Na2SO4乾燥，過濾，並濃縮。經層析法(ISCO(4g矽膠管柱)使用100% 己烷-100%EtOAc的梯度)純化產出化合物3e(202mg，55%產率)。
步驟6，實例3：4-(4-((4-(1-(4-羧基吡啶-2-基)-4-羥基哌啶-4-基)-3-氯苯氧基)甲基)-5-環丙基異噁唑-3-基)-3,5-二氯吡啶1-氧化物(3)
於室溫下向3,5-二氯-4-(4-((3-氯-4-(4-羥基-1-(4-(甲氧羰基)吡啶-2-基)哌啶-4-基)苯氧基)甲基)-5-環丙基異噁唑-3-基)吡啶1-氧化物(3e)(111mg，0.18mmol)含於THF(1.4mL)及H2O(0.2mL)之溶液添加LiOH．H2O(15mg，0.36mmol)。攪拌16小時後，添加H2O及二氯甲烷。添加1N HCl水溶液以便將混合物酸化至pH=3至4，其隨後用二氯甲烷萃取。藉由鹽水清洗合併之有機層，藉由無水Na2SO4乾燥，過濾，並濃縮。用二氯甲烷研磨固體並乾燥以便獲得化合物3(114mg，57%產率)。1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ 13.34(s,1H),8.72(s,2H),8.24(d,J=5.1Hz,1H),7.66(d,J=8.7Hz,1H),7.24(s,1H),6.98(dd,J=5.1,1.1Hz,1H),6.90-6.77(m,2H),5.24(s,1H),4.95(s,2H),4.22(br d,J=12.3Hz,2H),3.45-3.26(m,2H),2.49-2.35(m,3H),1.55(br d,J=13.1Hz,2H),1.26-1.03(m,4H)。MS(ESI+)m/z 633.0(M+H)。
一般合成法4
步驟1：4-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-羧酸第三丁酯
向配備有磁力攪拌棒及氮氣三通(nitrogen tee)之圓底燒瓶添加4- ((4-溴-3-氯苯氧基)甲基)-5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑(0.5g，1.06mmol)及THF(19mL)。將混合物於丙酮/液N2浴中冷卻至-78℃。一滴一滴地添加n-BuLi(1.6M含於己烷中，0.86ml，1.37mmol)，並將所得混合物於此溫度下攪拌30分鐘。一滴一滴地添加4-氧基哌啶-1-羧酸第三丁酯(210mg，1.06mmol)之THF(5.3mL)溶液並攪拌反應30分鐘。利用水(10mL)及乙酸乙酯(30mL)淬滅該反應混合物並溫熱至室溫。添加更多乙酸乙酯(170mL)並用水(20mL X 2)、鹽水(20mL)清洗該混合物，藉由Na2SO4乾燥，過濾並濃縮。使殘餘物通過矽膠管柱以提供期望產物(478mg)。
步驟2：4-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)哌啶-4-醇鹽酸鹽
向配備有磁力攪拌棒之圓底燒瓶添加4-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-羧酸第三丁酯(558mg，0.94mmol)及二氯甲烷(56mL)。添加含於二噁烷之HCl(4N，9.4ml，38mmol)後，將該混合物於室溫下攪拌1.5小時。在真空中移除揮發物以便產生產物(406mg)。
實例4：外消旋2-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基-8-氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-基)異菸鹼酸
根據針對實例2所述之步驟合成此化合物，取代去甲基托品醇(2000mg，15.7mmol)作為起始材料。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ 13.31(s,1H),8.22(dd,J=5.1，0.7Hz,1H),7.67-7.44(m,5H),7.10(t,J=1.1Hz,1H),6.91(dd,J=5.1,1.3Hz,1H),6.73(dd,J=8.9,2.6Hz,1H),6.57(d,J=2.6Hz,1H), 5.18(s,1H),4.80(s,2H),4.58(s,2H),2.66(dd,J=14.2,4.0Hz,2H),2.46-2.31(m,3H),1.94(d,J=5.4Hz,2H),1.45(d,J=14.0Hz,2H),1.20-0.98(m,4H)。MS(M+H)：640.00。
實例5：外消旋2-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基-8-氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-基)異菸鹼酸
根據針對實例4所述之步驟，使用適宜起始材料合成此化合物。 1H NMR(300MHz,DMSO-d 6)δ 13.31(s,1H),8.22(dd,J=5.1,0.7Hz,1H),7.70-7.41(m,5H),7.10(t,J=1.1Hz,1H),6.91(dd,J=5.1,1.3Hz,1H),6.78(dd,J=8.9,2.6Hz,1H),6.64(d,J=2.6Hz,1H),5.19(s,1H),4.84(s,2H),4.59(s,2H),2.67(dd,J=14.1,4.0Hz,2H),2.47-2.23(m,3H),1.98-1.91(m,2H),1.47(d,J=14.1Hz,2H),1.18-0.99(m,4H)。(M+H)：656.10。
實例6：外消旋6-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯啶-1-基)菸鹼酸
根據針對實例2所述之步驟合成此化合物，取代2-溴-5-氰基吡啶(1000mg，5.46mmol)作為起始材料。
1H NMR(300MHz,DMSO-d 6)δ 12.38(s,1H),8.65-8.58(m,1H),7.90(dd,J=8.9,2.3Hz,1H),7.67-7.46(m,4H),6.91(d,J=2.6Hz,1H),6.79(dd,J=8.8,2.7Hz,1H),6.50(d,J=8.9Hz,1H),5.50 (s,1H),4.92(s,2H),3.83(d,J=11.3Hz,1H),3.75(s,1H),3.61-3.54(m,1H),2.64(q,J=10.7,9.9Hz,1H),2.50-2.38(m,1H),2.24(d,J=9.7Hz,1H),1.27-1.06(m,4H)。
(M+H)：600.20。隨後使此材料接受對掌性拆分(Chiralpak AD-H；庚烷：IPA)以便產生單一異構物：實例6a及實例6b。
實例6a：6-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯啶-1-基)菸鹼酸，對映異構物1
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ 12.41(s,1H),8.61(d,1H),7.90(dd,J=8.9,2.3Hz,1H),7.75-7.42(m,4H),6.90(d,J=2.6Hz,1H),6.79(dd,J=8.8,2.6Hz,1H),6.49(d,J=8.9Hz,1H),5.50(s,1H),4.92(s,2H),3.83(d,J=11.3Hz,1H),3.73(s,1H),3.62-3.52(m,1H),2.73-2.55(m,1H),2.50-2.38(m,1H),2.31-2.18(m,1H),1.25-1.06(m,4H)。(M+H)：600.17。
實例6b：6-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯啶-1-基)菸鹼酸，對映異構物2
1H NMR(300MHz,DMSO-d 6)δ 12.38(s,1H),8.61(d,J=2.3Hz,1H),7.90(dd,J=8.9,2.3Hz,1H),7.67-7.48(m,4H),6.91(d,J=2.6Hz,1H),6.79(dd,J=8.8,2.6Hz,1H),6.49(d,J=8.9Hz,1H),5.50(s,1H),4.92(s,2H),3.88-3.69(m,1H),3.57(d,J=9.2Hz,1H),2.64(q,J=10.3,9.8Hz,1H),2.50-2.38(m,1H),2.26(s,1H),1.25-1.08 (m,4H)。(M+H)：600.18。
實例7：外消旋5-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯啶-1-基)菸鹼酸
步驟1b：5-(3-羥基吡咯啶-1-基)菸鹼腈(2ab)
於具有冷凝器之乾燥3-頸燒瓶中放置5-溴-3-氰基吡啶(560mg，3.06mmol)、碳酸銫(1994.03mg，6.12mmol)、Pd(dba)3(123.82mg，0.15mmol)及氧雜蒽膦(141.65mg，0.24mmol)，隨後將燒瓶抽空並用N2填充三次。經注射器添加3-吡咯啶醇(0.32ml，3.98mmol)含於1,4-二噁烷(6ml)之溶液並於100℃(油浴)加熱該混合物整夜。將該混合物冷卻，用水及EtOAc處理，通過矽藻土墊過濾，並分離。藉由鹽水清洗水層，藉由Na2SO4將有機物乾燥，過濾，並濃縮。經層析法(ISCO 40g矽0-100% EtOAc/已烷)純化產生產物(310mg，54%)。
步驟2：5-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯啶-1-基)菸鹼酸(7)
根據針對實例2所述之步驟合成此化合物，使用替代步驟1b以便產生材料2ab。1H NMR(300MHz,DMSO-d 6)δ 13.19(s,1H),8.33(d,J=1.7Hz,1H),8.12(d,J=2.9Hz,1H),7.67-7.46(m,4H),7.27(dd,J=2.9,1.7Hz,1H),6.91(d,J=2.6Hz,1H),6.79(dd,J=8.8,2.7Hz,1H),5.50(s,1H),4.92(s,2H),3.84(d,J=10.5Hz,1H),3.66-3.41(m,3H),2.71-2.53(m,1H),2.51-2.38(m,1H),2.31-2.19(m,1H),1.26-1.06(m,4H)。(M+H)：600.21。隨後使此材料接受對掌性拆分 (Chiralpak AD-H；庚烷：IPA)以便產生單一異構物：實例7a及實例7b。
實例7a：5-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯啶-1-基)菸鹼酸，對映異構物1
1H NMR(300MHz,DMSO-d 6)δ 13.14(s,1H),8.31(d,J=1.5Hz,1H),8.10(d,J=2.8Hz,1H),7.70-7.45(m,4H),7.24(s,1H),6.88(d,J=2.5Hz,1H),6.76(dd,J=8.6,2.7Hz,1H),5.47(s,1H),4.89(s,2H),3.81(d,J=10.5Hz,1H),3.63-3.38(m,3H),2.69-2.55(m,1H),2.45-2.37(m,1H),2.29-2.16(m,1H),1.43-0.96(m,4H)。 (M+H)：600.22。
實例7b：5-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯啶-1-基)菸鹼酸，對映異構物2
1H NMR(300MHz,DMSO-d 6)δ 13.14(s,1H),8.31(d,J=1.5Hz,1H),8.10(d,J=2.8Hz,1H),7.64-7.45(m,4H),7.28-7.20(m,1H),6.88(d,J=2.6Hz,1H),6.76(dd,J=8.8,2.6Hz,1H),5.47(s,1H),4.89(s,2H),3.81(d,J=10.5Hz,1H),3.63-3.38(m,3H),2.68-2.55(m,1H),2.50-2.35(m,1H),2.29-2.16(m,1H),1.23-0.96(m,4H)。(M+H)：600.22。
實例8：外消旋5-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2-(二氟甲氧基)苯基)異噁唑-4-基)苯基)-3-羥基吡咯啶-1-基)菸鹼酸
根據實例12所述之步驟，使用適宜起始材料合成此化合物。1H NMR(300MHz,DMSO-d 6)δ 13.14(s,1H),8.32(d,J=1.7Hz,1H),8.11(d,J=2.9Hz,1H),7.64-7.22(m,6H),7.20(t,J=76.5,73.5Hz,1H),6.92(d,J=2.6Hz,1H),6.81(dd,J=8.8,2.6Hz,1H),5.49(s,1H),4.95(s,2H),3.83(d,J=10.5Hz,1H),3.69-3.40(m,3H),2.78-2.53(m,1H),2.45-2.31(m,1H),2.31-2.16(m,1H),1.26-0.95(m,4H)。(M+H)：598.31。隨後使此材料接受對掌性拆分(SFC AD-H,30% MeOH/氨水)以便產生單一異構物：實例8a及實例8b。
實例8a：5-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2-(二氟甲氧基)苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯啶-1-基)菸鹼酸，對映異構物1
1H NMR(300MHz,DMSO-d 6)δ 8.30(s,1H),8.05(s,1H),7.69-7.51(m,2H),7.52-7.41(m,1H),7.40-7.22(m,3H),7.20(t,J=73.5Hz,1H),6.92(d,J=2.6Hz,1H),6.80(dd,J=8.8,2.6Hz,1H),5.48(s,1H),4.95(s,2H),3.82(d,J=10.4Hz,1H),3.64-3.42(m,3H),2.70-2.56(m,1H),2.46-2.31(m,1H),2.28-2.17(m,1H),1.41-0.93(m,4H)。(M+H)：598.33。
實例8b：5-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2-(二氟甲氧基)苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯啶-1-基)菸鹼酸，對映異構物2
1H NMR(300MHz,DMSO-d 6)δ 8.31(s,1H),8.07(s,1H),7.63-7.39(m,3H),7.39-7.28(m,2H),7.28-7.22(m,1H),7.20(t,J=73.2Hz,1H),6.92(d,J=2.6Hz,1H),6.80(dd,J=8.8,2.7Hz,1H),5.49(s,1H),4.95(s,2H),3.82(d,J=10.4Hz,1H),3.64-3.42(m,3H),2.70-2.56(m,1H),2.46-2.31(m,1H),2.31-2.07(m,1H),1.24-1.00(m,4H)。(M+H)：598.33。
實例9：外消旋6-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2-(二氟甲氧基)苯基)異噁唑-4-基)苯基)-3-羥基吡咯啶-1-基)菸鹼酸
根據針對實例2所述之步驟，使用適宜起始材料合成此化合物。1H NMR(300MHz,DMSO-d 6)δ 12.35(s,1H),8.60(dd,J=2.4,0.7Hz,1H),7.89(dd,J=8.9,2.3Hz,1H),7.63-7.41(m,3H),7.39-7.27(m,2H),7.20(t,J=73.2Hz,0H),6.92(d,J=2.6Hz,1H),6.80(dd,J=8.8,2.6Hz,1H),6.48(d,J=9.0Hz,1H),5.49(s,1H),4.94(s,2H),3.82(d,J=11.4Hz,1H),3.79-3.36(m,2H),2.68-2.58(m,1H),2.46-2.30(m,1H),2.24(t,J=1.8Hz,1H),2.32-2.15(m,1H),1.24-0.97(m,4H)。(M+H)：598.33。隨後使此材料接受對掌性拆分(Chiralpak AD-H；庚烷：IPA)以便產生單一異構物：實例9a及實例9b。
實例9a：6-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2-(二氟甲氧基)苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯啶-1-基)菸鹼酸，對映異構物1
1H NMR(300MHz,DMSO-d 6)δ 12.32(s,1H,w),8.59(d,1H),7.88(dd,J=8.9,2.3Hz,1H),7.63-7.41(m,3H),7.39-7.27(m,2H),7.20(t,J=73.5Hz,1H),6.92(d,J=2.7Hz,1H),6.80(dd,J=8.8,2.7Hz,1H),6.47(d,J=8.9Hz,1H),5.49(s,1H),4.94(s,2H),3.82(d,J=11.1Hz,1H),3.75-3.68(m,1H),3.60-3.51(m,1H),2.68-2.51(m,1H),2.49-2.30(m,1H),2.31-2.16(m,1H),1.24-1.00(m,4H)。(M+H)：598.37。
實例9b：6-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2-(二氟甲氧基)苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯啶-1-基)菸鹼酸，對映異構物2
1H NMR(300MHz,DMSO-d 6)δ 12.33(s,1H,w),8.59(d,J=2.3Hz,1H),7.88(dd,J=8.9,2.4Hz,1H),7.63-7.41(m,3H),7.39-7.27(m,2H),7.20(t,J=73.5Hz,1H),6.92(d,J=2.6Hz,1H),6.80(dd,J=8.8,2.7Hz,1H),6.47(d,J=8.9Hz,1H),5.49(s,1H),4.94(s,2H),3.82(d,J=11.0Hz,1H),3.74-3.68(m,1H),3.61-3.51(m,1H),2.73-2.55(m,1H),2.46-2.30(m,1H),2.32-2.13(m,1H),1.24-1.00(m,4H)。(M+H)：597.96
實例10：2-(4-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)-6-(三氟甲基)異菸鹼酸
根據針對實例1所述之步驟，使用2-氯-6-(三氟甲基)異菸鹼腈(120mg，0.58mmol)作為起始材料合成此化合物。1H NMR(300MHz,DMSO-d 6)δ 13.81(s,1H,w),7.67-7.45(m,5H),7.25(s,1H),6.81-6.72(m,2H),5.29(s,1H),4.86(s,2H),4.26(d,J=13.0Hz,2H),3.54-3.32(m,2H),2.54-2.34(m,2H),1.57(d,J=13.2Hz,2H),1.25-1.03(m,5H)。MS(M+H)：682.03。
實例11：2-(4-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)-6-(三氟甲基)異菸鹼酸
根據針對實例1所述之步驟，使用2-氯-6-(三氟甲基)異菸鹼腈作為起始材料合成此化合物。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ 7.70-7.43(m,6H),7.26(d,J=0.7Hz,1H),6.87-6.75(m,2H),5.28(s,1H),4.90(s,2H),4.23(d,J=13.0Hz,2H),3.47-3.30(m,2H),2.45-2.30(m,2H),1.56(d,J=13.2Hz,2H),1.25-1.01(m,5H)。MS(M+H)：698.09。
實例12：3-(4-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2-(三氟甲氧基)苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)-5-氟苯甲酸
根據針對實例1所述之步驟，使用3,5-二氟苯甲腈作為起始材料合成此化合物。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ 13.07(s,1H),7.70-7.44(m,5H),7.30(dd,J=2.4,1.3Hz,1H),7.03(dt,J=12.7,2.4Hz,1H),6.93(ddd,J=8.8,2.3,1.1Hz,1H),6.88-6.76(m,2H),5.20(s, 1H),4.90(s,2H),3.68(d,J=12.6Hz,2H),3.28-3.15(m,2H),2.59-2.48(m,1H),2.38(tt,J=8.1,5.2Hz,1H),1.56(d,J=13.1Hz,2H),1.20-1.01(m,4H)。MS(M+H)：647.16。
實例13：3-(4-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)-5-氟苯甲酸
根據針對實例1所述之步驟，使用3,5-二氟苯甲腈作為起始材料合成此化合物。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ 13.07(s,1H),7.66-7.44(m,5H),7.30(dd,J=2.4,1.3Hz,1H),7.02(dt,J=12.6,2.4Hz,1H),6.93(ddd,J=8.9,2.3,1.2Hz,1H),6.81-6.70(m,1H),5.19(s,1H),4.87(s,2H),3.67(d,J=12.0Hz,2H),3.22(t,J=11.9Hz,2H),2.50(d,J=6.1Hz,1H),2.46-2.34(m,2H),1.55(d,J=13.1Hz,2H),1.27-1.03(m,5H)。MS(M+H)：631.06
實例14：5-(4-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)菸鹼酸
步驟1ab：5-(1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷-8-基)菸鹼腈(1ab)
於具有磁力攪拌棒及隔膜帽之乾燥瓶中放置5-溴-3-氰基吡啶(500mg，2.73mmol)、碳酸銫(1780.38mg，5.46mmol)、Pd(dba)3(110.56mg，0.14mmol)及氧雜蒽膦(126.47mg，0.22mmol)，並將瓶密封及抽空，並用N2填充三次。經注射器添加1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷(0.46ml，3.55mmol)含於1,4-二噁烷(5ml)之溶液並於110℃(油浴)加 熱該混合物整夜。將該混合物冷卻，隨後用水及EtOAc處理，通過矽藻土墊過濾，並分離。藉由鹽水清洗有機相，藉由Na2SO4乾燥，過濾，並濃縮。經層析法(ISCO 40g矽，0-100% EtOAc/已烷)純化產生產物(605mg，92%)。
步驟2：5-(4-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)菸鹼酸
根據針對實例1所述之步驟合成此化合物，使用替代步驟1ab以便產生材料1ab。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ 12.41(s,1H),8.62(d,J=2.4Hz,1H),7.90(dd,J=9.0,2.4Hz,1H),7.68-7.46(m,4H),6.89(d,J=9.1Hz,1H),6.81-6.72(m,2H),5.29(s,1H),4.87(s,2H),4.34(d,J=12.7Hz,2H),3.40-3.26(m,2H),2.48-2.35(m,3H),1.54(d,J=13.2Hz,2H),1.26-1.04(m,4H)。MS(M+H)：614.12。
實例15：4-(4-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)苯甲酸
根據針對實例14所述之步驟，使用4-碘苯甲腈(100mg，0.44mmol)作為起始材料合成此化合物。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ 12.19(s,1H),7.75(d,J=8.9Hz,2H),7.67-7.47(m,4H),6.97(d,J=9.1Hz,2H),6.78(s,1H),5.22(s,1H),4.88(s,2H),3.79(d,J=13.0Hz,2H),3.31-3.20(m,3H),2.55(s,0H),2.49-2.35(m,1H),1.54(d,J=13.1Hz,2H),1.26-1.04(m,4H)。MS(M+H)：613.32。
實例16：6-(4-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)菸鹼酸
根據針對實例2所述之步驟，使用6-溴菸鹼腈(600mg，3.28mmol)作為起始材料合成此化合物。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ 13.27(s,1H),8.52(d,J=2.9Hz,1H),8.42(d,J=1.6Hz,1H),7.73-7.47(m,6H),6.82-6.71(m,2H),5.21(s,1H),4.88(s,2H),3.72(d,J=12.5Hz,2H),3.27-3.16(m,3H),2.63-2.51(m,1H),2.49-2.36(m,1H),1.57(d,J=13.1Hz,2H),1.27-1.04(m,4H)。MS(M+H)：614.15。
實例17：2-(4-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)異菸醯胺
向實例1(12mg，0.02mmol)含於DMF(0.2ml)之溶液先後添加含於二噁烷之0.5M氨水(0.2ml，0.098mmol)，及BOP(17mg，0.39mmol)及DIEA(0.01ml，0.06mmol)。將該混合物於室溫下攪拌整夜，用EtOAc及水處理，分離，並用EtOAc萃取1X。藉由鹽水清洗合併之有機相，藉由Na2SO4乾燥，過濾並濃縮。經層析法(ISCO C18反相，0-70%水/乙腈/0.1%TFA)純化以便產生期望產物(5.5mg，46%產率)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ 8.34(d,J=5.1Hz,1H),8.23(s,1H),7.85-7.63(m,5H),7.39(s,1H),7.11(d,J=5.3Hz,1H),6.97-6.88(m,2H),5.38(s,1H),5.04(s,2H),4.39(d,J=12.6Hz,2H),3.53 -3.36(m,3H),2.65-2.45(m,2H),1.69(d,J=13.2Hz,2H),1.37-1.21(m,4H)。MS(M+H)：613.56。
實例18：外消旋2-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯啶-1-基)異菸醯胺
向實例2(40mg，0.067mmol)含於DMF(0.6ml)之溶液先後添加於二噁烷之有0.5M氨水(0.6ml，0.333mmol)，BOP(59mg，0.133mmol)及DIEA(0.012ml，0.067mmol)。將該混合物於室溫下攪拌整夜，用EtOAc及水處理，分離，並用EtOAc萃取1X。藉由鹽水清洗合併之有機相，藉由Na2SO4乾燥，過濾並濃縮。經層析法(ISCO C18反相，0-70%水/乙腈/0.1%TFA)純化以便產生產物(25mg，62%產率)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ 8.31(d,J=5.2Hz,1H),8.22(s,1H),7.84-7.65(m,5H),7.12-7.03(m,2H),7.03-6.90(m,2H),5.61(s,1H),5.08(s,2H),3.97(d,J=11.2Hz,2H),3.91-3.78(m,1H),3.79-3.63(m,1H),2.81(q,J=10.7,9.5Hz,1H),2.64-2.50(m,1H),2.39(dd,J=12.7,6.5Hz,1H),1.44-1.23(m,4H)。MS(M+H)：599.19。
實例19：外消旋2-(2-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯啶-1-基)異菸醯胺基)乙烷-1-磺酸
根據針對實例18所述之步驟，使用牛磺酸(12.5mg，0.1mmol)作為起始材料合成此化合物。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ 9.03(s,1H),8.28(d,J=6.2Hz,1H),7.84-7.65(m,4H),7.39(s,1H),7.21(d, J=6.2Hz,1H),7.10(d,J=2.6Hz,1H),6.98(dd,J=8.9,2.6Hz,1H),5.86(s,1H),5.10(s,2H),4.16-4.09(m,2H),4.06-3.91(m,1H),3.96-3.74(m,2H),3.66-3.36(m,2H),2.90-2.76(m,3H),2.57-2.50(m,1H),1.55-1.08(m,5H).)。MS(M+H)：707.20。
實例20：外消旋2-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯啶-1-基)異菸鹼醯基)甘胺酸乙酯
將甘胺酸乙酯鹽酸鹽(10.22mg，0.07mmol)、EDCI(11.37mg，0.07mmol)、HOBt(9.89mg，0.07mmol)及DIEA(0.02ml，0.13mmol)添加至實例2(40mg，0.07mmol)含於二氯甲烷(0.5ml)之溶液並將該混合物於室溫下攪拌整夜，用EtOAc及水處理，分離，並用EtOAc萃取一次。藉由鹽水清洗合併之有機相，藉由Na2SO4乾燥，過濾並濃縮。經層析法(ISCO 12g金二氧化矽，0-100% EtOAc/已烷)純化產生產物(46mg)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ 9.21(t,J=5.9Hz,1H),8.36(d,J=5.2Hz,1H),7.85-7.66(m,4H),7.13-7.04(m,2H),7.04-6.92(m,2H),5.64(s,1H),5.10(s,2H),4.29(q,J=7.1Hz,2H),4.16(d,J=5.8Hz,2H),4.02(s,2H),3.90-3.84(m,1H),3.81-3.68(m,1H),2.82(t,J=10.4Hz,1H),2.62(dd,J=8.0,5.1Hz,1H),2.41(dd,J=12.3,6.2Hz,1H),1.51-1.23(m,7H)。MS(M+H)：685.33。
實例21：外消旋2-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯啶-1-基)異菸鹼醯基)甘胺酸
將1M氫氧化鋰(0.16ml，0.16mmol)添加至含有實例20(37mg，0.05mmol)及THF(0.3ml)之瓶中並將該混合物於室溫下攪拌4小時。添加EtOAc及水並用1M HCl將pH調節至約6。將各相分離，用鹽水將合併之有機物清洗，藉由Na2SO4乾燥，過濾並濃縮及於真空下乾燥(29mg，82%)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ 12.65(s,1H,w),8.89(t,J=5.9Hz,1H),8.15(d,J=5.2Hz,1H),7.66-7.47(m,5H),6.93-6.86(m,2H),6.82(s,1H),6.78(dd,J=8.8,2.7Hz,1H),5.45(s,1H),4.91(s,2H),3.89(d,J=5.7Hz,2H),3.81(d,J=10.9Hz,2H),3.72-3.65(m,1H),3.62-3.47(m,1H),2.70-2.56(m,1H),2.49-2.37(m,1H),2.26-2.15(m,1H),1.20-1.05(m,4H)。MS(M+H)：657.25。
實例22f及22g：3-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基環丙基)苯甲酸
步驟1：3-(3-溴苯基)環戊烷-1-酮(22a)
在N2條件下向乾燥3-頸燒瓶中添加1-溴-3-碘苯(0.44ml，2.56mmol)含於THF(4mL)之溶液，隨後於乾冰/乙腈浴中將該混合物冷卻至-40℃。隨後一滴一滴地添加含於2-MeTHF(1.01ml)之2.9M異丙基溴化鎂及將所得混合物於-40℃攪拌1小時。將氯化鋰(21mg，0.49mmol)注入另一個燒瓶中並置於真空下，隨後用噴燈點燃。在冷卻至室溫後，添加碘化銅(I)(46mg，0.24mmol)並將燒瓶抽空並用N2填充三次。隨後依序經注射器添加THF(6ml)、氯三甲矽烷(0.31ml，2.44mmol)及環戊-2-烯酮(0.2ml，2.44mmol)，因此形成澄清黃色溶液。隨後經注射器一滴一滴地將所得溶液添加至第一燒瓶並於-40℃額外攪拌反應一小時，隨後用NH4Cl水溶液淬滅，用醚稀釋，隨後用1N HCl酸化至pH 1並攪拌0.5小時同時加熱至室溫。將各相分離，用鹽水清洗有機層，藉由Na2SO4乾燥，過濾並濃縮。藉由閃火層析法(ISCO，40g GOLD，EtOAc/己烷)純化殘餘物以便產生產物。
步驟2：3-(3-溴苯基)-1-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)環戊-1-醇(22b)、(22c)
依據一般合成法2步驟3中所述之一般步驟合成此材料。經管柱層析法(ISCO 24g金二氧化矽0-100% EtOAc/已烷)純化產生兩種異構物：(22b)及(22c)。
步驟3：3-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基環戊基)苯甲腈(22d)
將(22b)(160mg，0.25mmol)、氰化鋅(36mg，0.3mmol)、Pd2(DBA)3(23mg，0.03mmol)、及氧雜蒽膦(15mg，0.03mmol)放置於微波瓶中。將該瓶密封並隨後抽空並用N2填充三次，隨後添加DMF(10ml)。將反應混合物於100℃微波反應器中照射30分鐘。將該混合物冷卻至室溫，於減壓條件下濃縮以便移除大部分DMF，隨後用EtOAc及水稀釋，並通過矽藻土過濾。將各相分離，用鹽水將有機層清洗三次，藉由Na2SO4乾燥，過濾並濃縮。經層析法(ISCO 12g金二氧化矽，0-70% EtOAc/已烷)純化產生產物(22d)(66mg，45%產率)。
步驟4，實例22f：3-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基環戊基)苯甲酸(22f)
根據一般合成法2步驟4所述之步驟合成此化合物，使用(22d)(55mg，0.095mmol)作為起始材料。1H NMR(300MHz,DMSO-d 6)δ 12.88(s,1H),7.92(t,J=1.8Hz,1H),7.74(dt,J=7.6,1.4Hz,1H),7.65-7.47(m,5H),7.40(t,J=7.7Hz,1H),6.85(d,J=2.6Hz,1H),6.74(dd,J=8.8,2.7Hz,1H),5.15(s,1H),4.88(s,2H),3.52-3.38(m,1H),2.83-2.71(m,1H),2.49-2.30(m,1H),2.14-1.75(m,3H),1.36-1.04(m,4H),0.89-0.75(m,2H)。MS(M+H)：580.14。
實例22g，3-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基環戊基)苯甲酸(22g)
根據針對實例22f所示之步驟，使用(22c)作為起始材料合成此化合物。1H NMR(300MHz,DMSO-d 6)δ 12.90(s,1H),7.86(t,1H),7.76(dt,J=7.6,1.4Hz,1H),7.67-7.48(m,5H),7.41(t,J=7.6Hz,2H),6.85(d,J=2.6Hz,1H),6.74(dd,J=8.8,2.6Hz,1H),5.13(s,1H),4.88(s,2H),3.63-3.56(m,1H),2.47-2.36(m,2H),2.29(dd,J=8.3,4.3Hz,1H),2.12-1.98(m,2H),1.93-1.77(m,1H),1.27-1.02(m,5H)。MS(M+H)：580.21。
實例23：2-(4-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)噻唑-5-羧酸
根據一般步驟2中所述之步驟製備實例23以便提供標題化合物(105mg，86%產率)。1H NMR(300MHz,DMSO-d 6)δ 13.31(s,1H),8.32(s,1H),7.32-7.65(m,5H),7.10(t,J=1.1Hz,1H),6.91(dd,J=5,1.2Hz,1H),6.73(dd,J=8.9,2.6Hz,1H),6.57(d,J=2.6Hz,1H),5.22(s,1H),4.80(s,2H),4.58(s,2H),2.66(dd,J=14.2,4.0Hz,2H),2.46-2.32(m,3H),1.94(d,J=5.4Hz,2H),1.45(d,J=14.0Hz,2H),1.20-0.98(m,4H)；(M+H)：620.2。
實例24：2-(4-(4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-2-甲基苯基)-4-羥基哌啶-1-基)異菸鹼酸
步驟1：4-((4-溴-3-甲基苯氧基)甲基)-5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑(24a)
依實例3/步驟5中所述之步驟，藉由結合4-(氯甲基)-5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑(如WO2013/007387中所述製備)與4-溴-3-甲基酚以91%產率獲得化合物24a。
步驟2：2-(4-(4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-2-甲基苯基)-4-羥基吡啶-1-基)異菸鹼腈(24b)
將n-BuLi(1.6M含於己烷中，0.18ml，0.29mmol)緩慢添加至4-((4-溴-3-甲基苯氧基)甲基)-5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑(24a)(100mg，0.22mmol)含於THF(4mL)之冰冷(-78℃)溶液中。在10分鐘後，添加2-(4-氧基哌啶-1-基)異菸鹼腈(44mg，0.22mmol)含於THF(1.1mL)之溶液。在另外20分鐘後，將反應混合物用H2O淬滅，用EtOAc萃取，用鹽水將合併之有機物清洗，藉由Na2SO4乾燥並濃縮。藉由層析法(ISCO(4g矽膠管柱)使用100%己烷-2：1己烷/EtOAc的 梯度)純化殘餘物產出化合物24b(130mg，43%產率)。
步驟3，實例24：2-(4-(4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)-2-甲基苯基)-4-羥基哌啶-1-基)異菸鹼酸(24)
依於實例1/步驟4中所述之步驟，自2-(4-(4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-2-甲基苯基)-4-羥基哌啶-1-基)異菸鹼腈(24b)以81%產率獲得實例24。1H NMR(300MHz,DMSO-d 6)δ 8.37(d,J=5.3Hz,1H),7.83-7.64(m,3H),7.47(s,1H),7.39-7.29(m,1H),7.17(d,J=5.4Hz,1H),6.71(dd,J=4.6,2.1Hz,2H),4.97(s,2H),4.33(d,J=12.7Hz,2H),3.67-3.52(m,2H),2.60(s,3H),2.59-2.40(m,1H),2.05(s,4H),1.3601.24(m,4H)。MS(ESI+)m/z 596.1(M+H)。
實例25：2-(4-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(3,5-二氯吡啶-4-基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)異菸鹼酸
步驟1：2-(4-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(3,5-二氯吡啶-4-基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)異菸鹼腈(25a)
依實例3/步驟5中所述之步驟，藉由結合4-(氯甲基)-5-環丙基-3-(3,5-二氯吡啶-4-基)異噁唑(如WO2011/020615中所述製備)與2-(4-(2- 氯-4-羥基苯基)-4-羥基吡啶-1-基)異菸鹼腈以74%產率獲得化合物25a。
步驟2，實例25：2-(4-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(3,5-二氯吡啶-4-基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)異菸鹼酸(25)
依於實例1/步驟4中所述之步驟，自2-(4-(4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)-2-甲基苯基)-4-羥基哌啶-1-基)異菸鹼腈以81%產率獲得實例25。1H NMR(300MHz,DMSO-d 6)δ 13.36(s,1H),8.80(s,1H),8.24(d,J=5.1Hz,1H),7.64(d,J=8.6Hz,1H),7.24(s,1H),6.98(dd,J=5.0,1.0Hz,1H),6.81-6.69(m,2H),5.25(s,1H),4.96(s,2H),4.22(d,J=12.7Hz,2H),3.37-3.21(m,2H),2.52-2.40(m,2H),1.54(d,J=13.1Hz,2H),1.22-109(m,4H)。MS(ESI+)m/z 616.9(M+H)。
實例26：2-(4-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)菸鹼酸
步驟1：2-(1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷-8-基)菸鹼腈(26a)
依於實例1/步驟1中所述之步驟，藉由結合2-氯菸鹼腈與1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷以94%產率獲得化合物26a。
步驟2：2-(4-氧基哌啶-1-基)菸鹼腈(26b)
依於實例1/步驟2中所述之步驟，自2-(1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷-8-基)菸鹼腈以85%產率獲得化合物26b。
步驟3：2-(4-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基吡啶-1-基)菸鹼腈(26c)
依於實例1/步驟3中所述之步驟，自2-(4-氧基哌啶-1-基)菸鹼腈(26b)以61%產率獲得化合物26c。
步驟4，實例26：2-(4-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)菸鹼酸(26)
於微波瓶中合併2-(4-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)異菸鹼腈(100mg，0.17mmol)、10M氫氧化鈉水溶液(0.29ml)及乙醇(0.8mL)並在微波反應器中於120℃加熱15分鐘。將該混合物冷卻並用1M HCl水溶液將pH調至5。將所得混合物過濾，並用水及Et2O沖洗不溶性固體，並於真空下乾燥並產生實例26(23mg，22%)。1H NMR(300MHz,DMSO-d 6)δ 8.24(dd,J= 4.8,2.0Hz,1H),7.98(s,1H),7.77(dd,J=7.4,2.0Hz,1H),7.68-7.48(m,6H),6.94-6.72(m,3H),5.14(s,1H),4.89(s,3H),3.57(d,J=12.6Hz,2H),3.37-3.20(m,1H),2.69-2.55(m,2H),2.50-2.40(m,1H),1.53(d,J=12.9Hz,2H),1.27-1.00(m,4H)。MS(ESI+)m/z 615.2(M+H)。
實例27：2-(4-(2-氯-4-((4-環丙基-1-(2-(三氟甲氧基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-5-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)異菸鹼酸
步驟1：1-疊氮基-2-(三氟甲氧基)苯(27a)
於0℃將濃縮HCl(7.9mL)添加至2-(三氟甲氧基)苯胺(1.1ml，7.9mmol)含於EtOAc(26mL)之溶液中。在10分鐘後，5分鐘內緩慢添加亞硝酸鈉(1.6g，23.7mmol)之水溶液(4.6mL)。將該混合物攪拌30分鐘，並在5分鐘內用疊氮化鈉(1.5g，23.7mmol)之水溶液(5.3mL)緩慢處理。攪拌反應達1小時，隨後用磷酸鹽緩衝鹽水(pH 7.4，50mL)處理。用EtOAc萃取混合物，用鹽水清洗有機物，藉由Na2SO4乾燥並濃縮以便產生化合物27a。
步驟2：(4-環丙基-1-(2-(三氟甲氧基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-5-基)甲醇(27b)
於110℃在氮氣氛圍下攪拌1-疊氮基-2-(三氟甲氧基)苯(27a，2.0g，9.8mmol)及3-環丙基丙-2-炔-1-醇(1.2ml，9.8mmol)含於甲苯(20mL)之溶液。在16小時後，將該溶液冷卻至室溫，並添加水及EtOAc。將該混合物分割並用EtOAc萃取有機物，用鹽水清洗，藉由Na2SO4乾燥並濃縮。藉由層析法(ISCO，24g矽膠管柱，使用100%己烷-100%EtOAc的梯度)純化殘餘物產出極性較低異構物之化合物27b(230mg，8%產率)。自H1及H2至H3之nOe相關性證實化合物27b之結構。
步驟4：5-(氯甲基)-4-環丙基-1-(2-(三氟甲氧基)苯基)-1H-1,2,3-三唑(27c)
於室溫下向(4-環丙基-1-(2-(三氟甲氧基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-5-基)甲醇(27b)(52mg，0.17mmol)含於二氯甲烷(1mL)之溶液添加亞硫醯氯(0.038ml，0.52mmol)。將該混合物加熱至回流達15分鐘並冷卻至室溫，隨後於真空下濃縮。添加額外的二氯甲烷(5mL)並將該混合物再次濃縮。第三次重複此過程以便移除過量亞硫醯氯。粗製殘餘物無需任何另外純化即可用於下一步驟。
步驟5：2-(4-(2-氯-4-((4-環丙基-1-(2-(三氟甲氧基)苯基)-1H- 1,2,3-三唑-5-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)異菸鹼腈(27d)
依實例3/步驟5中所述之步驟，藉由結合2-(4-(2-氯-4-((4-環丙基-1-(2-(三氟甲氧基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-5-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)異菸鹼腈與2-(4-(2-氯-4-羥基苯基)-4-羥基哌啶-1-基)異菸鹼腈以75%產率獲得化合物27d。
步驟6，實例27：2-(4-(2-氯-4-((4-環丙基-1-(2-(三氟甲氧基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-5-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)異菸鹼酸(27)
依於實例1/步驟4中所述之步驟，自2-(4-(2-氯-4-((4-環丙基-1-(2-(三氟甲氧基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-5-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)異菸鹼腈(27d)以62%產率獲得實例27。1H NMR(300MHz,DMSO-d 6)δ 13.35(s,1H),8.22(d,J=5.0Hz,1H),7.77-7.51(m,5H),7.23(s,1H),6.97(d,J=5.0Hz,1H),6.86-6.74(m,2H),5.24(s,1H),5.12(s,2H),4.20(d,J=12.7Hz,2H),3.24(s,1H),2.42(d,J=9.9Hz,2H),1.97(s,1H),1.52(d,J=13.2Hz,2H),1.16(t,J=7.1Hz,1H),1.05-0.85(m,4H)。MS(ESI+)m/z 616.9(M+H)。
實例28：2-(4-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)苯并[d]噻唑-6-羧酸
步驟1：2-(4-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)苯并[d]噻唑-6-甲腈
向配備有磁力攪拌棒之密封管中添加4-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)哌啶-4-醇鹽酸鹽(一般合成法4，步驟2)(100mg，0.19mmol)、2-氯苯并[d]噻唑-6-甲腈(54.1mg，0.23mmol)、碳酸鉀(234mg，3.8mmol)及DMF(2mL)。將管密封並將該混合物於80℃加熱40分鐘。添加水(20mL)並將所得混合物用EtOAc(50mL X 3)萃取，用鹽水(20mL)清洗合併的有機相，藉由Na2SO4乾燥、過濾、並於真空下濃縮。矽膠管柱層析法產生期望產物(37mg，30%產率)。
2-(4-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)苯并[d]噻唑-6-羧酸
向配備有磁力攪拌棒之密封管，添加2-(4-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)苯并[d]噻唑-6-甲腈(37mg，0.06mmol)、EtOH(0.6mL)及30% NaOH(0.36ml，2.73mmol)。將管密封並將該混合物於80℃加熱整夜。在用4N HCl將pH調至約4後，添加乙酸乙酯(200mL)，用水(10mL X 2)、鹽水(20mL)清洗該混合物，藉由Na2SO4乾燥、過濾、並在真空下濃縮。矽膠管柱層析法產生期望產物(7.1mg，19%產率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.36(d,J=1.6Hz,1 H),7.96(d,J=11.2Hz,1 H),7.85(dd,J=11.6z,J=2.6Hz,1 H),7.64(m,1 H),7.46(m,1 H),7.23(m,1 H),6.95(dd,J=10.4Hz,J=2.2Hz,1 H),6.86(m,1 H),6.72(m,1 H),4.89(m,2 H),4.02(dm,J=13.2Hz,2 H),2.43(m,1 H),1.70(m,2 H),1.09-1.23(m,6 H)ppm；MS m/z 670.19[M+H]+。
實例29：2-(4-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)-6-甲氧基異菸鹼酸
步驟1：2-(4-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)甲氧基異菸鹼腈
向配備有磁力攪拌棒之密封管中添加4-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)哌啶-4-醇鹽酸鹽(一般合成法4，步驟2)(95mg，0.18mmol)、2-氯-6-甲氧基異菸鹼腈(36.2mg，0.22mmol)、碳酸鉀(222mg，3.6mmol)及DMF(2mL)。將管密封並將該混合物於80℃加熱整夜。添加水(20mL)並將所得混合物用EtOAc(50mL X 3)萃取，用鹽水(20mL)清洗合併的有機相，藉由Na2SO4乾燥、過濾、並於真空下濃縮。矽膠管柱層析法產生期望產物(97mg，86%產率)。
步驟2：2-(4-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)-6-甲氧基異菸鹼酸(實例29)
向配備有磁力攪拌棒之密封管中添加2-(4-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)-6-甲氧基異菸鹼腈(90mg，0.14mmol)、EtOH(2.0mL)及30% NaOH(0.92ml，6.9mmol)。將管密封並將該混合物於80℃加熱6小時。在用4N HCl將pH調至約4後，添加乙酸乙酯(200mL)。用水(10mL X 2)、鹽水(20mL)清洗該混合物，藉由Na2SO4乾燥，過濾並於真空下濃縮。矽膠管柱層析法產生期望產物(4.6mg，5%產率)。1H NMR(400MHz, DMSO-d 6)δ 7.96(dm,J=11.2Hz,1 H),7.61(m,2 H),7.22(m,1 H),6.94(m,1 H),6.69-6.84(m,2 H),6.37(s,1 H),5.76(s,1 H),4.88(m,2 H),4.21(m,2 H),3.81(s,3 H),2.44(m,1 H),1.56(m,2 H),1.12-1.23(m,6 H)ppm；MS m/z 644.13[M+H]+。
實例30：1-(4-(1H-四唑-5-基)吡啶-2-基)-4-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)哌啶-4-醇
向配備有磁力攪拌棒之密封管中添加2-(4-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)異菸鹼腈(實例1c，40mg，0.07mmol)、疊氮化鈉(56.7mg，0.87mmol)、三乙胺鹽酸鹽(277mg，2.01mmol)及甲苯(2mL)。將管密封並將該混合物於115℃加熱8小時。出現一些沉澱。將沉澱物過濾並用乙酸乙酯(5mL X 4)清洗，將所收集之可溶性相用更多乙酸乙酯(180mL)處理，藉由Na2SO4乾燥，並於真空下濃縮。矽膠管柱層析法產生期望產物(3.8mg，9%產率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 8.21(d,J=6.4Hz,1 H),7.97(d,J=12.4Hz,1 H),7.63(m,1 H),7.60(m,1 H),7.43(m,1 H),7.19(m,2 H),6.91(d,J=9.6Hz,1 H),6.85(m,1 H),6.69(m,1 H),5.57(s,1 H),4.79-4.90(m,2 H),4.25(dm,J=12.1Hz,2 H),2.42(m,1 H),1.57(m,2 H),1.11-1.24(m,6 H)ppm；MS m/z 637.91[M+H]+。
實例31：2-(4-(2-氯-4-((4-環丙基-1-(2,6-二氯苯基)-1H-吡唑-5-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)異菸鹼酸
步驟1：5-(氯甲基)-4-環丙基-1-(2,6-二氯苯基)-1H-吡唑
向配備有磁力攪拌棒之圓底燒瓶中添加(4-環丙基-1-(2,6-二氯苯基)-1H-吡唑-5-基)甲醇(200mg，0.71mmol)及DCM(3.5mL)。添加亞硫醯氯(588mg，4.94mmol)之後，將該混合物於室溫下攪拌整夜。於真空下濃縮該混合物並產生可直接用於下一步驟之粗製品(212.9mg)。
步驟2：5-((4-溴-3-氯苯氧基)甲基)-4-環丙基-1-(2,6-二氯苯基)-1H-吡唑
向配備有磁力攪拌棒之圓底燒瓶中添加5-(氯甲基)-4-環丙基-1-(2,6-二氯苯基)-1H-吡唑(212.9mg，0.71mmol)、4-溴-3-氯苯酚(189.8mg，0.92mmol)、碳酸鉀(617.3mg，4.47mmol)、NaI(183.6mg，1.23mmol)、及DMF(4.0mL)。將該混合物於60℃加熱3.5小時。添加水(20mL)並將所得混合物用EtOAc(50mL X 3)萃取，用鹽水(20mL)清洗合併的有機相，藉由Na2SO4乾燥、過濾、並於真空下濃縮。矽膠管柱層析法產生期望產物(388mg)。
步驟3：2-(4-(2-氯-4-((4-環丙基-1-(2,6-二氯苯基)-1H-吡唑-5-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)異菸鹼腈
於配備有磁力攪拌棒及氮氣三通之圓底燒瓶中添加5-((4-溴-3-氯苯氧基)甲基)-4-環丙基-1-(2,6-二氯苯基)-1H-吡唑(100mg，0.21mmol)及THF(3.9mL)。於丙酮/液N2浴中將混合物冷卻至-78℃。一滴 一滴地添加n-BuLi(1.6M含於己烷中，0.17ml，0.28mmol)，並將所得混合物於此溫度下攪拌30分鐘。一滴一滴地添加2-(4-氧基哌啶-1-基)異菸鹼腈(1b，42.6mg，0.21mmol)含於THF(1.0mL)之溶液。30分鐘後，用水(10mL)及乙酸乙酯(30mL)淬滅該反應混合物並溫熱至室溫。添加更多乙酸乙酯(170mL)並用水(20mL X 2)、鹽水(20mL)清洗該混合物，藉由Na2SO4乾燥，過濾並於真空下濃縮。將殘餘物通過矽膠管柱以提供期望產物(14mg，11%產率)。
步驟4，實例31：2-(4-(2-氯-4-((4-環丙基-1-(2,6-二氯苯基)-1H-吡唑-5-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)異菸鹼酸
向配備有磁力攪拌棒之密封管中添加2-(4-(2-氯-4-((4-環丙基-1-(2,6-二氯苯基)-1H-吡唑-5-基)甲氧基)苯基)-4-羥基哌啶-1-基)-6-異菸鹼腈(14mg，0.02mmol)、EtOH(0.6mL)及30% NaOH(0.15ml，1.13mmol)。將管密封並將該混合物於80℃加熱1小時。在用4N HCl將pH調至約4後，出現一些沉澱。將沉澱過濾並用冷水清洗(1mL X 3)並於真空下乾燥以便提供期望產物(2.4mg，17%產率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 13.4(寬s,1H),8.24(d,J=6.0Hz,1 H),7.95(d,J=11.6Hz,1 H),7.65(d,J=11.6Hz,1 H),7.42(s,1 H),7.26(s,1 H),7.22(m,1 H),6.96(m,2 H),6.86(s,1 H),6.71(d,J=11.2Hz,1 H),5.61(s,1 H),5.00(m,1 H),4.85(m,1 H),4.23(d,J=12.4Hz,2 H),3.16(s,2 H),1.86(m,1 H),1.52(m,2 H),1.22(s,1 H),0.91(m,2 H),0.63(m,2 H)ppm；MS m/z 613.3[M+H]+。
實例32：外消旋2-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯啶-1-基)異菸鹼酸
根據一般步驟2中所述之步驟製備實例32以便提供外消旋標題化合物(18mg，35%)。1H NMR(300MHz,DMSO-d 6)δ 13.28(s,1H),8.25-8.48(m,1H),7.80(m,1H),7.44-7.68(m,4H),6.91(d,J=2.6Hz,1H),6.79(dd,J=8.8,2.7Hz,1H),6.51(d,J=9Hz,1H),5.50(s,1H),4.92(s,2H),3.83(d,J=11.3Hz,1H),3.75(s,1H),3.51-3.58(m,1H),2.64(q,J=10.7,9.9Hz,1H),2.20-2.38(m,2H),2.24(d,J=9.1Hz,2H),1.27-1.06(m,4H)；(M+H)：614.3。
實例33：6-(3-(2-氯-4-((3-(2,6-二氯苯基)-5-(2-氟丙烷-2-基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯啶-1-基)菸鹼酸
步驟1：2-(4-(氯甲基)-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-5-基)丙-2-醇(33a)
於0℃向2-(3-(2,6-二氯苯基)-4-(羥基甲基)異噁唑-5-基)丙-2-醇(6.8g，226mmol)含於二氯甲烷(120mL)之溶液添加SOCl2(17.2ml，237mmol)。將該混合物於室溫下攪拌15分鐘，用飽和NaCO3水溶液淬滅並用EtOAc(3 x 150mL)萃取。用鹽水清洗合併之有機層，藉由Na2SO4乾燥，濃縮並藉由管柱層析法(PE/EtOAc=30：1)純化以便產生2-(4-(氯甲基)-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-5-基)丙-2-醇33a。1H-NMR(CDCl3,300MHz)：δ 7.47-7.37(m,3H),4.51(s,2H),2.43(s,1H),1.75 (s,6H)。
步驟2：4-(氯甲基)-3-(2,6-二氯苯基)-5-(2-氟丙烷-2-基)異噁唑(33b)
向2-(4-(氯甲基)-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-5-基)丙-2-醇(33a，2.80g，9.1mmol)含於二氯甲烷(80mL)之溶液中添加DAST(1.5ml，11.4mmol)。將該混合物於0℃攪拌1.5小時，用NaHCO3飽和水溶液淬滅並用EtOAc(3 x 100mL)萃取。用鹽水清洗合併之有機層，藉由Na2SO4乾燥，濃縮並藉由管柱層析法(PE/EtOAc=30：1)純化以便產生4-(氯甲基)-3-(2,6-二氯苯基)-5-(2-氟丙烷-2-基)異噁唑33b。1H-NMR(CDCl3,300MHz)：δ 7.47-7.37(m,3H),4.43(s,2H),1.87(d,J=22.2Hz,6H)。MS(ESI+)m/z 321.9(M+H)。
步驟3：6-(3-(2-氯-4-((3-(2,6-二氯苯基)-5-(2-氟丙烷-2-基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯啶-1-基)菸鹼腈(33c)
於室溫下向6-(3-(2-氯-4-羥基苯基)-3-羥基吡咯啶-1-基)菸鹼腈(100mg，0.32mmol)及4-(氯甲基)-3-(2,6-二氯苯基)-5-(2-氟丙烷-2-基)異噁唑(33b，112mg，0.35mmol)含於DMF(10mL)之溶液中添加K2CO3(48mg，0.35mmol)。將該混合物於70℃攪拌整夜，用水(30mL)淬滅並用EtOAc(3 x 50mL)萃取。用鹽水清洗(100mL)合併之有機層，藉由Na2SO4乾燥並於真空下濃縮以便產生粗製6-(3-(2-氯-4-((3-(2,6-二氯苯基)-5-(2-氟丙烷-2-基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡 咯啶-1-基)菸鹼腈33c(191mg)MS(ESI+)m/z 600.9(M+H)。
步驟4，實例33：外消旋6-(3-(2-氯-4-((3-(2,6-二氯苯基)-5-(2-氟丙烷-2-基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯啶-1-基)菸鹼酸(33)
於室溫下向6-(3-(2-氯-4-((3-(2,6-二氯苯基)-5-(2-氟丙烷-2-基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯啶-1-基)菸鹼腈(33c，191mg，0.32mmol)含於EtOH(10mL)及水(5mL)之溶液中添加KOH(179mg，3.2mmol)。於回流條件下攪拌反應整夜，於真空下濃縮並用1N HCl酸化至pH=6，過濾並藉由製備型-HPLC純化得到外消旋6-(3-(2-氯-4-((3-(2,6-二氯苯基)-5-(2-氟丙烷-2-基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯啶-1-基)菸鹼酸33(34mg，17%)。1H NMR(CD3OD,300MHz)：δ 8.69(d,J=1.8Hz,1H),8.05(dd,J=2.1,8.7Hz,1H),7.56-7.45(m,4H),6.77(d,J=2.4Hz,1H),6.71(dd,J=2.6,9.0Hz,1H),6.53(d,J=9.0Hz,1H),4.99(s,2H),4.04-3.95(m,2H),3.79-3.70(m,2H),2.85-2.77(m,1H),2.37-2.31(m,1H),1.88(d,J=22.2Hz,6H)。MS(ESI+)m/z 620.1(M+H)。
實例34：外消旋6-(3-(2-氯-4-((3-(2,6-二氯苯基)-5-(2-羥基丙烷-2-基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯啶-1-基)菸鹼酸
根據針對實例33所述之步驟合成此化合物，使用2-(4-(氯甲基)-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-5-基)丙-2-醇33a作為起始材料。1H NMR (CD3OD,300MHz)：δ 8.68(d,J=2.1Hz,1H),8.05(dd,J=2.1,9.0Hz,1H),7.55-7.44(m,4H),6.78(d,J=2.4Hz,1H),6.71(dd,J=2.4,9.0Hz,1H),6.55(d,J=9.0Hz,1H),5.14(s,2H),4.06-3.94(m,2H),3.78-3.70(m,2H),2.85-2.77(m,1H),2.37-2.31(m,1H),1.69(s,6H)。MS(ESI+)m/z 618.0(M+H)。
實例35：外消旋6-(3-(2-氯-4-((4-環丙基-1-(2,6-二氯苯基)-1H-1,2,3-三唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯啶-1-基)菸鹼酸
根據針對實例33所述之步驟合成此化合物，使用適宜起始材料。1H NMR(CD3OD,300MHz)：δ 8.68(d,J=2.1Hz,1H),8.05(dd,J=2.1,9.0Hz,1H),7.66-7.57(m,4H),6.91(d,J=2.4Hz,1H),6.81(dd,J=2.7,9.0Hz,1H),6.51(d,J=8.7Hz,1H),5.16(s,2H),4.04-3.94(m,2H),3.77-3.69(m,2H),2.87-2.76(m,1H),2.36-2.30(m,1H),2.15-2.09(m,1H),1.11-1.05(m,4H)。MS(ESI+)m/z 600.0(M+H)。
實例36：外消旋6-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二甲基苯氧基)甲基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯啶-1-基)菸鹼酸
步驟1：2-(第三-丁氧基)-N-羥基乙醯亞胺醯基氯化物(36a)
於0℃將N-氯代琥珀醯亞胺(23.7g，184mmol)添加至2-(第三-丁氧基)乙醛肟(24.1g，184mmol；如WO2009/005998中所述製備)含於DMF(600mL)之溶液。將該混合物攪拌1小時，倒入Et2O(800mL)並用鹽水(450mL)清洗。藉由MgSO4將有機層乾燥並濃縮以便產生粗製2-(第三-丁氧基)-N-羥基乙醯亞胺醯基氯化物36a，其直接用於下一步驟。
步驟2：3-(第三-丁氧基甲基)-5-環丙基異噁唑-4-羧酸乙酯(36b)
於0℃將NaOCH3(0.5M,10.9g，203mmol)含於MeOH之溶液添加至3-環丙基-3-氧基丙酸乙酯(31.6g，203mmol)含於THF(600mL)之溶液。在攪拌5分鐘後，一滴一滴地添加2-(第三-丁氧基)-N-羥基乙醯 亞胺醯基氯化物(36a，27.9g，169mmol)含於THF(200mL)之溶液。容許將該混合物加熱至室溫並攪拌整夜，倒入Et2O(800mL)中，用鹽水清洗(450mL)並濃縮以便產生粗製3-(第三-丁氧基甲基)-5-環丙基異噁唑-4-羧酸乙酯36b，其可直接用於下一步驟。
步驟3：5-環丙基-3-(羥基甲基)異噁唑-4-羧酸乙酯(36c)
於室溫下將TFA(100mL)添加至3-(第三-丁氧基甲基)-5-環丙基異噁唑-4-羧酸乙酯(36b，38.4g，144mmol)含於二氯甲烷(600mL)之溶液。於室溫下將該混合物攪拌2小時，濃縮並用NaHCO3水溶液調至鹼性pH。用EtOAc(3 x 300mL)萃取該混合物。用鹽水(400mL)清洗合併之有機層，藉由MgSO4乾燥，濃縮並藉由管柱層析法(PE/EtOAc=10：1)純化以便產生5-環丙基-3-(羥基甲基)異噁唑-4-羧酸乙酯36c。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)：δ 4.64(s,2H),4.26(q,J=7.2Hz,2H),2.79-2.70(m,1H),1.29(t,J=7.2Hz,3H),1.23-1.13(m,4H)。
步驟4：5-環丙基-3-((2,6-二甲基苯氧基)甲基)異噁唑-4-羧酸乙酯(36d)
於0℃將DIAD(15.4g，76.3mmol)添加至5-環丙基-3-(羥基甲基)異噁唑-4-羧酸乙酯(36c，16.1g，76.3mmol)、2,6-二甲基酚(9.3g，76.3mmol)及PPh3(20g，76.3mmol)含於甲苯(500mL)之溶液。將該混合物於90℃攪拌2小時，冷卻，濃縮並藉由管柱層析法(PE/EtOAc=15：1)純化以便產生5-環丙基-3-((2,6-二甲基苯氧基)甲基)異噁唑-4-羧 酸乙酯36d。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)：δ 7.03(d,J=7.8,Hz,2H),6.96-6.87(m,1H),5.03(s,2H),4.25(q,J=7.2Hz,2H),2.82-2.76(m,1H),2.18(s,6H),2.14(s,3H),1.28-1.17(m,4H)。
步驟5：(5-環丙基-3-((2,6-二甲基苯氧基)甲基)異噁唑-4-基)甲醇(36e)
於0℃將5-環丙基-3-((2,6-二甲基苯氧基)甲基)異噁唑-4-羧酸乙酯(36d，16.3g，51.7mmol)添加至LiAlH4(2.9g，77.6mmol)含於THF(250mL)之溶液。將該混合物於室溫下攪拌1小時，用水(100mL)稀釋並用EtOAc(3 x 100mL)萃取。用鹽水(200mL)清洗合併之有機層，藉由MgSO4乾燥，濃縮並藉由管柱層析法(PE/EtOAc=8：1)純化以便產生(5-環丙基-3-((2,6-二甲基苯氧基)甲基)異噁唑-4-基)甲醇36e。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)：δ 7.04(d,J=7.5,Hz,2H),6.97-6.92(m,1H),5.07(br s,1H),4.85(s,2H),4.46(s,2H),2.30-2.26(m,1H),2.22(s,6H),1.10-0.96(m,4H)。MS(ESI+)m/z 256.1(M-H2O+H)。
步驟6，實例36：外消旋6-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二甲基苯氧基)甲基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯啶-1-基)菸鹼酸(36)
根據針對實例33所述之步驟合成此化合物，使用(5-環丙基-3-((2,6-二甲基苯氧基)甲基)異噁唑-4-基)甲醇36e作為起始材料。1H NMR(CD3OD,300MHz)：δ 8.69(d,J=1.5Hz,1H),8.05(dd,J=1.5,6.9Hz,1H),7.66(d,J=6.6Hz,1H),7.12(d,J=1.8Hz,1H),6.99-6.89(m,4H),6.56(d,J=6.9Hz,1H),5.06(s,2H),4.91(s,2H),4.14-4.00(m,2H),3.79-3.71(m,2H),2.88-2.81(m,1H),2.43-2.39(m,1H),2.28-2.24(1H),2.18(s,6H),1.16-1.09(m,4H)。MS(ESI+)m/z 589.7(M+H)。
實例37：外消旋6-(3-(2-氯-4-((4-(2,6-二氯苯基)-1-異丙基-1H-1,2,3-三唑-5-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯啶-1-基)菸鹼酸(35)
根據針對實例33所述之步驟合成此類似物，使用(4-(2,6-二氯苯基)-1-異丙基-1H-1,2,3-三唑-5-基)甲醇(如WO2011/020615中所述製備)作為起始材料。1H NMR(CD3OD,300MHz)：δ 8.68(d,J=2.1Hz,1H),8.04(dd,J=2.1,8.7Hz,1H),7.60-7.43(m,4H),6.88(d,J=2.4Hz,1H),6.80(dd,J=2.4,8.7Hz,1H),6.55(d,J=9.0Hz,1H),5.19(s,2H),5.00-4.92(m,1H),4.01(br s,2H),3.81-3.70(m,2H),2.89-2.77(m,1H),2.37-2.30(m,1H),1.70(d,J=6.9Hz,6H)。MS(ESI+)m/z 601.6(M+H)。
實例38：外消旋6-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)-2-側氧基-2,3-二氫噁唑-4基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯啶-1-基)菸鹼酸(36)
步驟1：5-環丙基噁唑-4-羧酸甲酯(38a)
於5℃將環丙基甲酸酐(112g，729mmol)含於THF(100mL)之溶液逐份添加至2-異氰酸甲酯(72.7g，729mmol)及DBU(111g，729mmol)含於THF(1L)之溶液。將該混合物於室溫下攪拌整夜，濃縮並藉由閃火層析法(PE/EtOAc=5：1)純化以便產生5-環丙基噁唑-4-羧酸甲酯38a。1H-NMR(CDCl3,300MHz)：δ 1.04-1.18(m,4H),2.74-2.79(m,1H),3.91(s,3H),7.60(s,1H)。
步驟2：5-環丙基-2-側氧基-2,3-二氫噁唑-4-羧酸甲酯(38b)
將5-環丙基噁唑-4-羧酸甲酯(36a，36.4g，218mmol)及TsOH．H2O(82.9g，436mmol)含於MeOH(600mL)之溶液加熱至回流整夜。將該混合物冷卻至室溫並於真空下濃縮。用Et2O濕磨殘餘物並 過濾以便產生粗製2-胺基-3-環丙基-3-氧代丙酸甲酯(62.8g，191mmol)，其可溶解於THF(1.5L)及TEA(77.2g，764mmol)。隨後於-50℃將三光氣(19.9g，67mmol)添加至混合物達1小時。用Et2O(500mL)稀釋該溶液並添加NH4Cl(300mL)飽和水溶液。分離水相並用Et2O(3 x 1L)萃取。用鹽水(500mL)清洗合併之有機萃取物，藉由Na2SO4乾燥，濃縮並藉由閃火層析法(PE/EtOAc=5：1)純化以便產生5-環丙基-2-側氧基-2,3-二氫噁唑-4-羧酸甲酯38b。1H-NMR(CDCl3,300MHz)：δ 0.99-1.11(m,4H),2.41-2.50(m,1H),3.84(s,3H),8.57(s,1H)。
步驟3：甲烷磺酸2,6-二氯苯乙酯(38c)
於0℃將MsCl(26.9g,235mmol)一滴一滴地添加至2-(2,6-二氯苯基)乙醇(37.3g，195mmol)及TEA(32.7g，235mmol)含於DCM(700mL)之溶液。添加後，將該溶液於室溫下攪拌整夜，用水(200mL)稀釋並用DCM(3 x 400mL)萃取。將合併之有機層藉由Na2SO4乾燥，過濾，濃縮並藉由閃火層析法(PE/EtOAc=5：1)純化以便產生甲烷磺酸2,6-二氯苯乙酯38c。1H-NMR(300MHz,CDCl3)：δ 2.95(s,3H),3.43(t,J=7.5Hz,2H),4.41(t,J=7.5Hz,2H),7.12-7.17(m,1H),7.31(d,J=8.4Hz,2H)。
步驟4：5-環丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)-2-側氧基-2,3-二氫噁唑-4-羧酸甲酯(38d)
於0℃氮氣下將NaH(5.7g，142mmol；60%含於礦物油中)添加至5-環丙基-2-側氧基-2,3-二氫噁唑-4-羧酸甲酯(38b，23.5g，129mmol)含於DMF(800mL)之溶液。將該混合物攪拌15分鐘，隨後於0℃一滴一滴地添加甲烷磺酸2,6-二氯苯乙酯(38c，41.5g，154mmol)含於DMF(400mL)之溶液。在添加後，將該混合物於100℃攪拌整夜，冷卻，用水(1500mL)稀釋並用EtOAc(3 x 700mL)萃取。藉由水(2 x 200mL)及鹽水(300mL)清洗合併之有機層，藉由Na2SO4乾燥，過濾，並於真空下濃縮。用PE/EtOAc(5：1)清洗殘餘物以便產生5-環丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)-2-側氧基-2,3-二氫噁唑-4-羧酸甲酯38d。1H-NMR(300MHz,CDCl3)：δ 0.97-1.08(m,4H),2.44-2.49(m,1H),3.31(t,J=4.8Hz,2H).3.73(s,3H),4.26(t,J=4.8Hz,2H),7.08-7.12(m,1H),7.26-7.28(m,2H)。
步驟5：5-環丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)-4-(羥基甲基)噁唑-2(3H)-酮(38e)
於0℃氮氣下將LiAlH4(16.3ml，39mmol)含於THF之溶液添加至5-環丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)-2-側氧基-2,3-二氫噁唑-4-羧酸甲酯(38d，13.9g，39mmol)含於THF(400mL)之溶液。在添加後，將該溶液於0℃攪拌30分鐘，依序用H2O(2mL)、1M NaOH(2mL)及H2O(6mL)稀釋，過濾並於真空下濃縮。用PE/EtOAc(2：1)將該殘餘物清洗以便產生5-環丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)-4-(羥基甲基)噁唑-2(3H)-酮38e。1H-NMR(CD3OD,300MHz)：δ 0.73-0.77(m,2H),0.83-0.88(m,2H),1.75-1.79(m,1H),3.30-3.38(m,2H),3.95(t,J=6.6Hz,2H).4.10(s, 2H),7.20-7.25(m,1H),7.37(d,J=8.1Hz,2H)，未分辨羥基質子。LC/MS(ESI)：m/z 328.0(M+H)+。
步驟6：(預示實例)4-(氯甲基)-5-環丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)噁唑-2(3H)-酮(38f)
若類似地如以上針對實例33，步驟1所述處理5-環丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)-4-(羥基甲基)噁唑-2(3H)-酮38e，則將獲得4-(氯甲基)-5-環丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)噁唑-2(3H)-酮。
步驟7：6-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)-2-側氧基-2,3-二氫噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯啶-1-基)菸鹼酸甲酯(36g)
若類似地如上所述處理4-(氯甲基)-5-環丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)噁唑-2(3H)-酮38f及6-(3-(2-氯-4-羥基苯基)-3-羥基吡咯啶-1-基)菸鹼酸甲酯，則將獲得6-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)-2-側氧基-2,3-二氫噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯啶-1-基)菸鹼酸甲酯38g。
步驟8，實例38：外消旋6-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)-2-側氧基-2,3-二氫噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯啶-1-基)菸鹼酸(38)
若類似地如上所述處理6-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)-2-側氧基-2,3-二氫噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯啶-1-基)菸鹼酸甲酯38g，則將獲得6-(3-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯乙基)-2-側氧基-2,3-二氫噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基吡咯啶-1-基)菸鹼酸38。
實例39：5-(4-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基吡啶-1-基)-1-異丙基-1H-吡唑-3-羧酸(39)
步驟1：(Z)-2-羥基-4-側氧基-4-(1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷-8-基)丁-2-烯酸乙酯(39a)
於-78℃將t-BuLi(25mL，1.3M，32.4mmol)一滴一滴地添加至1-(1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷-8-基)乙酮(4.0g，21.6mmol)含於無水THF(100ml)之懸浮液中。隨後將該反應混合物加熱至室溫，另外攪拌5小時，用NH4Cl飽和水溶液淬滅。用EtOAc(100mL x 2)萃取混合物，用H2O(80mL)及鹽水(80mL)清洗該有機層，藉由Na2SO4乾燥，過濾，濃縮並藉由矽膠柱(PE：EtOAc=5：1至2：1)純化殘餘物以便產生標題化合物(4.6g)。
步驟2：1-異丙基-5-(1,4-二氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷-8-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(39b)
於室溫下將勞森試劑(Lawesson’s reagent；5.7g，14mmol)逐份添加至中間物39a(2.0g，7.0mmol)、異丙基肼鹽酸鹽(1.0g，9.1 mmol)及吡啶(3mL)含於THF(40ml)之懸浮液。將所得混合物加熱至60℃並攪拌16小時。隨後添加EtOAc(50mL)並用飽和NaHCO3(50m x 2)、HCl水溶液(1M，50mL)及鹽水(50mL)清洗該混合物。用Na2SO4乾燥有機相，過濾，濃縮並用矽膠柱(PE：EA=5：1至2：1)純化殘餘物以便產生標題化合物(0.7g)。
步驟3：1-異丙基-5-(4-氧基哌啶-1-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(39c)
將中間物39b(0.70g，2.3mmol，粗製)含於THF(10ml)及H2SO4(10%，10mL)之懸浮液攪拌16小時。用EtOAc(50mL)稀釋該混合物，用飽和NaHCO3(50mL x 2)、HCl水溶液(1M，50mL)及鹽水(50mL)清洗。用Na2SO4乾燥有機相，過濾，濃縮並用矽膠柱(PE：EA=5：1至2：1)純化該殘餘物以便產生標題化合物(0.61g)。
步驟4：5-(4-(4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-氯苯基)-4-羥基吡啶-1-基)-1-異丙基-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(39d)
於N2下，將LiCl(265mg，6.3mmol)、室溫無水THF(10ml)及i-PrMgCl(1.9ml，2.0M，3.8mmol)添加至圓底燒瓶。將該混合物於室溫下攪拌10分鐘，隨後一滴一滴地添加(4-溴-3-氯苯氧基)第三丁基)二甲基矽烷(1.1g，3.2mol)含於無水THF(2ml)之溶液並於室溫下另外持續攪拌1小時。於此之後，於N2下，將以上反應混合物添加至中間物39c(0.8g，2.9mmol)含於無水THF(10ml)之溶液，並於室溫下攪拌該混合物一小時。用H2O(20mL)淬滅該反應混合物，用EtOAc(30mL x 3)萃取。用鹽水(20mL)清洗有機層，藉由Na2SO4乾燥，過濾並藉由矽膠管柱層析法(EA/PE=1/20)純化以便產生標題化合物(350mg)。
步驟5：5-(4-(2-氯-4-羥基苯基)-4-羥基哌啶-1-基)-1-異丙基-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(39e)
於室溫下，將TBAF(277mg，1.01mmol)添加至39d(0.3g，0.67 mmol)含於THF(5ml)之懸浮液並將該混合物於室溫下攪拌30分鐘。隨後用水(20mL)淬滅該混合物，用EtOAc(20mL x 3)萃取。用鹽水(20mL)清洗有機相，藉由Na2SO4乾燥，過濾並濃縮以獲得標題化合物，其無需另外純化即可直接用於下一個步驟中(0.23g)。
步驟6：5-(4-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基吡啶-1-基)-1-異丙基-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(39f)
於0℃下，一滴一滴地將DIAD(226mg，1.1mmol)添加至中間物39e(230mg，0.56mol)、(5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲醇(158mg，0.56mol)及PPh3(239mg，1.1mmol)含於甲苯(10ml)之懸浮液中。將所得混合物於室溫下攪拌4小時。用H2O稀釋該反應混合物，用EtOAc(20mL x 3)萃取並將有機層濃縮至乾燥。藉由製備型TLC(EtOAc/PE=1/1)純化該殘餘物以便產生標題化合物(220mg)。
步驟7，實例39：5-(4-(2-氯-4-((5-環丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-4-羥基吡啶-1-基)-1-異丙基-1H-吡唑-3-羧酸(39)
將中間物39f(180mg，0.267mmol)含於MeOH(10mL)及NaOH(10%，10mL)水溶液之懸浮液於30℃攪拌4小時。於減壓下濃縮該混合物，添加HCl(1M)直至pH=2至3，並將所得沉澱物濾出並於真空下乾燥以便產生實例39(100mg)。1H-NMR(400MHz,CD3Cl)：δ ppm 7.43-7.39(m,3H),7.36-7.31(m,1H),6.83(d,J=2.0Hz,1H),6.72(dd,J=8.8Hz,2.0Hz,1H),6.51(s,1H),4.81(s,2H),4.71-4.65(m,1H),3.29-3.25(m,2H),2.98-2.93(m,2H),2.2.45-2.37(m,2H),2.17-2.05(m,3H),1.47(d,J=6.0Hz,6H),1.32-1.25(m,2H),1.18-1.12(m,2H)。MS-ESI：m/z 645.3/647.3[M+H]+ 667.3/669.3[M+Na]+。
分析法
FRET活性分析法
如下進行配體介導之輔因子胜肽交互作用之測量，以定量結合至核受體FXR的配體：製備人類FXR α配體結合區：人類FXRα LBD在大腸桿菌株BL21(DE3)中表現為N-終端GST標記的融合蛋白質。將編碼該FXR配體結合區的DNA選殖進入載體pDEST15(Invitrogen)中。表現係在IPTG可誘導的T7啟動子之控制下。配體結合區的胺基酸界限係資料庫登記NM_005123(RefSeq)的胺基酸187-472。FXR-LBD之表現及純化：以1：20將經轉化的大腸桿菌株之過夜預培養物稀釋於LB-胺苄西林(Ampicillin)培養基中，及在30℃下生長至光學密度OD600=0.4至0.6。然後，藉由加入0.5mM IPTG誘發基因表現。在30℃，180rpm下額外培養細胞6小時。藉由離心(7000 x g，7分鐘，室溫)收集細胞。每升的原始細胞培養液，將細胞再懸浮於10mL溶解緩衝液(50mM葡萄糖，50mM Tris pH 7.9，1mM EDTA及4mg/mL溶菌酶)中且留在冰上30分鐘。然後，使細胞接受超音波及經由離心(22000 x g，30分鐘，4℃)移除細胞碎物。每10mL的上層液加入0.5mL預清洗的麩胱甘肽4B瓊脂糖凝膠料漿(Qiagen)並將懸浮液保持在4℃下慢慢旋轉1小時。藉由離心(2000 x g，15秒，4℃)將麩胱甘肽4B瓊脂糖凝膠小珠製成丸粒並用清洗緩衝液(25mM Tris，50mM KCl，4mM MgCl2及1M NaCl)清洗兩次。將該丸粒再懸浮於每升原始培養液3毫升洗脫緩衝液(洗脫緩衝液：20mM Tris，60mM KCl，5mM MgCl2及80mM麩胱甘肽，在使用前作為粉末立即加入)中。讓該懸浮液留在4℃下旋轉15分鐘，將小珠製成丸粒及再次以第一次的一半體積之洗脫緩衝液洗脫。混合該等洗脫物，及在包含60mM KCl、5mM MgCl2和1mM二硫蘇糖醇及10%(v/v)甘油之20mM Hepes緩衝液(pH 7.5)中透析過夜。藉由SDS-Page分析蛋白質。
該方法測量推定配體調節經純化的細菌表現的FXR配體結合區 (LBD)與以SRC-1的殘基676-700(LCD2，676-700)為基準之合成生物素化胜肽間之交互作用的能力。所使用的胜肽之序列為B-CPSSHSSLTERHKILHRLLQEGSPS-COOH，其中該N-終端係經生物素化(B)。FXR的配體結合區(LBD)使用載體pDEST15在BL-21細胞中表現為含有GST的融合蛋白質。細胞藉由超音波溶解，及根據製造商用法說明，在麩胱甘肽瓊脂糖凝膠(Pharmacia)上純化該等融合蛋白質。為了篩選化合物對FXR-胜肽交互作用的影響，應用Perkin Elmer LANCE技術。此方法依賴該從供體轉移至附著至所欲結合伙伴之受體螢光體的結合相依能量。為了便於處理及減低來自化合物的螢光背景，LANCE技術利用一般螢光團標籤及在384孔板中之以Tris基緩衝液(20mM Tris-HCl pH 7.5；60mM KCl，5mM MgCl 2；35ng/μL BSA)中，以25μL的最後體積進行時差式檢測分析，其包含20-60ng/孔融合至GST之重組表現FXR-LBD、200-600nM N-終端生物素化胜肽(代表SRC1胺基酸676-700)、200ng/孔抗生蛋白鏈菌素-xlAPC結合物(Prozyme)及6-10ng/孔Eu W1024-抗GST(Perkin Elmer)。將樣品的DMSO含量保持在1%。在產生分析混合物及稀釋潛在FXR調節配體後，於室溫下，在暗室中，於FIA-板黑色384孔(Greiner)中平衡該分析1小時。藉由Perkin Elmer VICTOR2VTM多標籤計數器偵測LANCE訊號。結果藉由繪製在665與615奈米間之發射光的比率而具體化。在缺乏加入的配體下觀察FXR-胜肽形成的基礎水平。促進複合物形成的配體引起時差螢光訊號出現濃度相依性增加。相等充分結合至單體FXR及FXR-胜肽複合物二者的化合物預計將不使訊號發生變化，然而優先結合至該單體受體的配體預計將引起觀察的訊號中出現濃度相依性減少。
為了評估該等化合物的促效潛力，測量如列在下表1中的實例化合物之EC50值(FRET EC50)。
哺乳動物單雜交(M1H)分析法
如下進行配體介導之Ga14啟動子驅動轉活化之測量來定量FXR的配體結合介導之活化：在CMV啟動子之控制下，將編碼FXR配體結合區的cDNA部分作為融合物選殖進入載體pCMV-BD(Stratagene)中之酵母菌GAL4 DNA結合區。配體結合區的胺基酸界限係資料庫登記NM_005123(RefSeq)的胺基酸187-472。使用質體pFR-luc(Stratagene)作為報導質體，其包括具有五個酵母菌GAL4結合位置之串聯重複序列的合成啟動子，驅動北美螢火蟲(Photinus pyralis)(美國螢火蟲)螢光素酶基因(作為報導基因)的表現。為了改善實驗準確性，共轉染(cotransfected)質體pRL-CMV(Promega)。pRL-CMV包括組成性CMV啟動子，控制海腎(Renilla reniformis)螢光素酶的表現。全部Gal4報導基因分析皆在HEK293細胞(獲自DSMZ，Braunschweig，Germany)中完成，該等細胞在37℃，5% CO2下，於含有L-麩胺醯胺及Earle's BSS的MEM中生長，以10%胎牛血清、0.1mM非必需胺基酸、1mM丙酮酸鈉及每毫升100單位盤尼西林(Penicilin)/抗生蛋白鏈菌素補充。培養基及補充品係獲自Invitrogen。對該分析來說，在96孔板中以每孔5x105細胞平板接種，使用每孔100μL MEM無酚紅及L-麩胺醯胺及含有Earle's BSS，以10%經活性碳/葡萄聚糖處理的FBS(HyClone,South Logan,Utah)、0.1mM非必需胺基酸、2mM麩胺醯胺、1mM丙酮酸鈉及每毫升100單位盤尼西林/抗生蛋白鏈菌素補充，在37℃，5%CO2下培養。第二天，該細胞之匯合度>90%。移除培養基，及細胞使用每孔20μL包含三種上述質體之以OptiMEM-聚伸乙基亞胺為基底的轉染劑(OptiMEM，Invitrogen；聚伸乙基亞胺，Aldrich Cat No.40,827-7)短暫轉染。在加入轉染混合物後2-4小時，加入具有與使用於平板接種細胞相同的組成之MEM。然後，加入在MEM中預稀釋的儲備化合物(最後媒劑濃度不超過0.1%)。在使用雙光螢光素酶分析系 統，於相同細胞萃取物中相繼地測量螢火蟲及海腎螢光素酶(Renilla luciferase)活性前，額外培養細胞16小時(Dyer等人，Anal.Biochem.2000,282,158-161)。全部實驗以一式三份進行。
為了評估實例化合物的FXR促效效力，在M1H分析中測量效力，如下表1(M1H EC50)中所列。
<110> 美商基利科學股份有限公司
<120> 新穎FXR(NR1H4)調節化合物
<130> EP98221KG030pau
<140> 14004260.7
<141> 2014-12-17
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 25
<212> PRT
<213> 人造序列
<220>
<223> 以SRC-1的殘基676-700(LCD2，676-700)為基準合成的生物素化胜肽
<400> 1

Claims (15)

  1. 一種根據以下式(1)之化合物，其對映異構物、非對映異構物、互變異構物、溶劑化物、前藥或醫學上可接受之鹽 其中R係選自下列組成之群：氫、鹵素、C1-6-烷基、C2-6-烯基、C2-6-炔基、鹵基-C1-6-烷基、C0-6-伸烷基-R7、C0-6-伸烷基-O-R7、C0-6-伸烷基-CN、C0-6-伸烷基-NR7R8、O-C3-10-環烷基、O-C1-6-伸烷基-O-R7、O-C3-10-雜環烷基、C0-6-伸烷基-CO2R7、C0-6-伸烷基-C(O)R7、C0-6-伸烷基-C(O)NR7R8、C0-6-伸烷基-C(O)NR7SO2R7、C0-6-伸烷基-N(R7)C(O)R7、C0-6-伸烷基-SOx-R7、C0-6-伸烷基-SO3H、C0-6-伸烷基-SO2-NR7R8、C0-6-伸烷基-SO2-NR8COR7、C0-6-伸烷基-N(R7)SO2-R8、及C0-6-伸烷基-SO2-C3-10-雜環烷基，其中伸烷基、環烷基、雜環烷基及5員或6員雜芳基未經取代或經1個至4個獨立選自下列組成之群之取代基取代：鹵素、CN、C1-3-烷基、鹵基-C1-3-烷基、OH、側氧基(oxo)、CO2H、SO3H、O-C1-3-烷基及O-鹵基-C1-3-烷基；R7係獨立選自下列組成之群：氫、C1-6-烷基、鹵基-C1-6-烷基、C0-6-伸烷基-C3-8-環烷基、C0-6-伸烷基-C3-8-雜環烷基、5員或6員雜芳基及苯基，其中烷基、伸烷基、環烷基、雜環烷基、苯基及雜芳基未經取代或經1個至6個獨立選自下列組成之群之取代基取代：鹵素、CN、OH、側氧基、CO2H、C1-3-烷基、鹵基-C1-3-烷基、O-C1-3-烷基、O-鹵基-C1-3-烷基、SO3H及SO2-C1-3-烷 基；R8係獨立選自下列組成之群：氫、C1-6-烷基、鹵基-C1-6-烷基及C3-6-環烷基；或R7及R8連同其等所連接之氮一起可完成含有碳原子及視情況含有1個或2個選自O、S或N之雜原子的3員至8員環，其中該環未經取代或經1個至4個獨立選自下列組成之群之取代基取代：氟、OH、側氧基、C1-4-烷基及鹵基-C1-4-烷基；A為6員至10員單或雙環芳基或5員至10員含有1個至5個獨立選自N、O及S組成之群之雜原子的單或雙環雜芳基，其中芳基及雜芳基未經取代或經一個或兩個獨立選自下列組成之群之基團取代：OH、鹵素、CN、O-C1-6-烷基、O-鹵基-C1-6-烷基、C1-6-烷基、鹵基-C1-6-烷基、C3-6-環烷基及鹵基-C3-6-環烷基；B為C5-8-環烷基環或，若Y為N，則B為含有一個氮原子的C4-8-雜環烷基或橋聯的C4-8-雜環烷基，且其中取代基Q不直接與取代基A相鄰；Q係選自下列組成之群：苯基、吡啶基、噻唑基、苯硫基(thiophenyl)、嘧啶基、噁唑基、吡唑基、咪唑基及三唑基，各未經取代或經一個或兩個獨立選自下列組成之群之基團取代：鹵素、C1-4-烷基、鹵基-C1-4-烷基、C1-4-烷氧基或鹵基-C1-4-烷氧基；Y係選自N、CH或CF；Z係選自 其中 L係選自下列組成之群：鍵、C1-3-伸烷基及C1-3-伸烷基-O-；Y'係選自苯基、吡啶基、吡啶基-N-氧化物、嘧啶基、吡啶酮基、嘧啶酮基、C4-8-環烷基、及C4-8-雜環烷基，其中苯基、吡啶基、吡啶基-N-氧化物、嘧啶基、吡啶酮基、嘧啶酮基、C4-8-環烷基及C4-8-雜環烷基係經R2及R3取代及視情況經選自氟、氯、CN、NH2、NH(C1-3-烷基)、N(C1-3-烷基)2、C1-3-烷基、氟-C1-3-烷基、OH、C1-3-烷氧基、氟-C1-3-烷氧基、C3-6-環烷基及氟-C3-6-環烷基之基團取代一次或兩次；R1係選自下列組成之群：C1-4-烷基及C3-6-環烷基，其中C1-4-烷基係未經取代或經1個至3個獨立選自下列組成之群之取代基取代：氟、羥基、C1-3-烷氧基及氟-C1-3-烷氧基，及C3-6-環烷基係未經取代或經1個至3個獨立選自下列組成之群之取代基取代：氟、羥基、C1-3-烷基、氟-C1-3-烷基、C1-3-烷氧基及氟-C1-3-烷氧基；R2及R3係獨立選自下列組成之群：氫、鹵素、C1-3-烷基、鹵基-C1-3-烷基、C1-3-烷氧基、鹵基-C1-3-烷氧基、環丙基及氟-環丙基；R4係獨立選自鹵素、C1-3-烷基、鹵基-C1-3-烷基、C1-3-烷氧基、鹵基-C1-3-烷氧基、C3-6-環烷基、及氟-C3-6-環烷基；R5係選自下列組成之群：氫、氟、CH3、CHF2及CF3；n係選自0、1、2、3及4；及x係選自0、1及2。
  2. 如請求項1之化合物，其中R係選自下列組成之群：CO2H、SO3H、CONR7R8、四唑基、1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮-3-基及SO2NHCOR7；R7係選自下列組成之群：氫、C1-6-烷基、鹵基-C1-6-烷基、 C1-6-伸烷基-R9、SO2-C1-3-烷基；R8係選自下列組成之群：氫、C1-6-烷基、鹵基-C1-6-烷基；及R9係選自下列組成之群：COOH、OH及SO3H。
  3. 如請求項1或2之化合物，其中A係選自下列組成之群：苯基、吡啶基、嘧啶基、吡唑基、吲哚基、噻吩基、苯并噻吩基、吲唑基、苯并異噁唑基、苯并呋喃基、苯并三唑基、呋喃基、苯并噻唑基、噻唑基、噁二唑基、噁唑基、萘基、喹啉基、異喹啉基、苯并咪唑基，各未經取代或經一個或兩個獨立選自下列組成之群之基團取代：OH、鹵素、CN、O-C1-6-烷基、O-鹵基-C1-6-烷基、C1-6-烷基、鹵基-C1-6-烷基、C3-6-環烷基及鹵基-C3-6-環烷基。
  4. 如請求項1或2之化合物，其中R-A係選自
  5. 如請求項1或2之化合物，其中Z係選自 其中L係選自下列組成之群：鍵、C1-3-伸烷基及C1-3-伸烷基-O-；X係選自下列組成之群：CH、CF、N及NO；R1係選自下列組成之群：C1-4-烷基及C3-6-環烷基，其中C1-4-烷基係未經取代或經1個至3個獨立選自下列組成之群之取代基取代：氟、羥基、C1-3-烷氧基及氟-C1-3-烷氧基，及C3-6-環烷基係未經取代或經1個至3個獨立選自下列組成之群之取代基取代：氟、羥基、C1-3-烷基、氟-C1-3-烷基、C1-3-烷氧基及氟-C1-3-烷氧基；R2及R3係獨立選自下列組成之群：氫、鹵素、C1-3-烷基、鹵基-C1-3-烷基、C1-3-烷氧基、鹵基-C1-3-烷氧基、環丙基及氟-環丙基；及R5係選自下列組成之群：氫、氟、CH3、CHF2及CF3。
  6. 如請求項1或2之化合物，其中Z係選自 其中X係選自下列組成之群：CH、CF、N及NO；R1係選自下列組成之群：CF3、CHF2、異丙基及環丙基，其中異丙基及環丙基係未經取代或經一個或兩個氟或一個羥基取 代；R2係選自下列組成之群：氟、氯、CH3、CHF2、CF3、OCHF2及OCF3；R3係選自下列組成之群：氫、氟、氯、CH3、CHF2、CF3、OCHF2及OCF3；及R5係選自下列組成之群：氫、氟、CH3、CHF2及CF3。
  7. 如請求項1或2之化合物，其中係選自
  8. 如請求項1或2之化合物，其具有式(2) 其中A係選自下列組成之群：苯基、吡啶基、嘧啶基、吡唑基、吲哚基、噻吩基、苯并噻吩基、吲唑基、苯并異噁唑基、苯并呋喃基、苯并三唑基、呋喃基、苯并噻唑基、噻唑基、噁二唑基、噁唑基、萘基、喹啉基、異喹啉基、苯并咪唑基，各未經取代或經一個或兩個獨立選自下列組成之群之基團取代：OH、鹵素、CN、O-C1-6-烷基、O-鹵基-C1-6-烷基、C1-6-烷基、鹵基-C1-6-烷基、C3-6-環烷基及鹵基-C3-6-環烷基；R係選自下列組成之群：CO2H、SO3H、CONR7R8、四唑基、1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮-3-基及SO2NHCOR7，其中 R7係選自下列組成之群：氫、C1-6-烷基、鹵基-C1-6-烷基、C1-6-伸烷基-R9、SO2-C1-6-烷基；R8係選自下列組成之群：氫、C1-6-烷基、鹵基-C1-6-烷基；及R9係選自下列組成之群：COOH、OH及SO3H；Q係選自下列組成之群：苯基、吡啶基、噻唑基、苯硫基及嘧啶基，各未經取代或經一個或兩個獨立選自下列組成之群之基團取代：氟、氯、CH3、CHF2及CF3；Z係選自 X係選自下列組成之群：CH、N及NO；R1係選自下列組成之群：異丙基及環丙基，其中異丙基及環丙基係未經取代或經一個或兩個氟或一個羥基取代；R2係選自下列組成之群：氟、氯、CH3、CHF2、CF3、OCHF2及OCF3；及R3係選自下列組成之群：氫、氟、氯、CH3、CHF2、CF3、OCHF2及OCF3。
  9. 如請求項1或2之化合物，其具有式(3) 其中A係選自下列組成之群：苯基、吡啶基、嘧啶基、吡唑基、吲哚基、噻吩基、苯并噻吩基、吲唑基、苯并異噁唑基、苯并呋喃基、苯并三唑基、呋喃基、苯并噻唑基、噻唑基、噁二唑 基、噁唑基、萘基、喹啉基、異喹啉基、苯并咪唑基，各未經取代或經一個或兩個獨立選自下列組成之群之基團取代：OH、鹵素、CN、O-C1-6-烷基、O-鹵基-C1-6-烷基、C1-6-烷基、鹵基-C1-6-烷基、C3-6-環烷基及鹵基-C3-6-環烷基；R係選自下列組成之群：CO2H、SO3H、CONR7R8、四唑基、1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮-3-基及SO2NHCOR7，其中R7係選自下列組成之群：氫、C1-6-烷基、鹵基-C1-6-烷基、C1-6-伸烷基-R9、SO2-C1-6-烷基；R8係選自下列組成之群：氫、C1-6-烷基、鹵基-C1-6-烷基；及R9係選自下列組成之群：COOH、OH及SO3H；Q係選自下列組成之群：苯基、吡啶基、噻唑基、苯硫基及嘧啶基，各未經取代或經一個或兩個獨立選自下列組成之群之基團取代：氟、氯、CH3、CHF2及CF3；Z係選自 X係選自下列組成之群：CH、N及NO；R1係選自下列組成之群：異丙基及環丙基，其中異丙基及環丙基係未經取代或經一個或兩個氟或一個羥基取代；R2係選自下列組成之群：氟、氯、CH3、CHF2、CF3、OCHF2及OCF3；及R3係選自下列組成之群：氫、氟、氯、CH3、CHF2、CF3、OCHF2及OCF3。
  10. 一種化合物，其係選自下列組成之群： 或其對映異構物、非對映異構物、互變異構物、溶劑化物、前藥或醫學上可接受之鹽。
  11. 一種如請求項1至10中任一項之化合物之用途，其係用於製造藥劑。
  12. 一種如請求項1至10中任一項之化合物之用途，其係用於製造用 於預防及/或治療由FXR介導之疾病的藥劑。
  13. 如請求項12之用途，其中該疾病係選自慢性肝內或一些形式之肝外膽汁鬱積性病狀；肝纖維化；肝阻塞性或慢性炎症；肝硬化；肝脂肪變性(steatosis)及相關症候群、與酒精誘發的硬化或病毒媒介(viral-borne)形式肝炎相關之膽汁鬱積性或纖維化效應；重大肝切除術(major liver resection)後之肝衰竭或肝缺血；化學治療相關之脂肪肝炎(chemotherapy associated steatohepatitis；CASH)；急性肝衰竭；及發炎性腸病。
  14. 如請求項12之用途，其中該疾病係選自脂質及脂蛋白病症；II型糖尿病，以及I型及II型糖尿病之臨床併發症，包括糖尿病性腎病、糖尿病性神經病、糖尿病性視網膜病，及臨床表現長期糖尿病之其他觀察效應；因強灌脂質及特定甘油三酸酯強制累積及後續促纖維變性(pro-fibrotic)途徑活化導致器官之慢性脂肪及纖維變性造成之病狀及疾病，諸如非酒精性脂肪肝病(NAFLD)，或非酒精性脂肪肝炎(NASH)；肥胖症或代謝症候群(異常血脂症、糖尿病或異常高身體質量指數之合併病狀)；及急性心肌梗塞、急性中風，或慢性阻塞性動脈粥狀硬化之終點發生的血栓。
  15. 如請求項12之用途，其中該疾病係選自非惡性過度增生性疾病及惡性過度增生性疾病，特別是肝細胞癌、結腸腺瘤及息肉症、結腸腺癌、乳癌、胰腺癌、巴雷特氏(Barrett's)食道症，或胃腸道及肝之其他形式之腫瘤病。
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