TW201625294A

TW201625294A - 包含纖維蛋白溶酶原之醫藥組合物及其用途

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Publication number: TW201625294A
Application number: TW104142776A
Authority: TW
Inventors: 戴維達布萊克曼; 史戴西普朗; 羅德里格斯威廉加爾松; 馬丁羅比泰利; 貝蒂余
Original assignee: 波麥堤克生物治療股份有限公司
Priority date: 2014-12-19
Filing date: 2015-12-18
Publication date: 2016-07-16
Also published as: CO2017007137A2; RU2017125931A; MX2017008189A; AR103215A1; MY202111A; US20170360902A1; BR112017012972A2; WO2016095013A8; EP3233111A1; WO2016095013A1; EP3233111A4; US20200023043A1; US20210106657A1; CL2017001605A1; KR20170096178A; PH12017501118A1; UY36467A; UA123496C2; JP2018505209A; AU2015367185A1

Abstract

本發明揭示包含纖維蛋白溶酶原或其生物活性變異體之醫藥組合物。在一實施例中，該組合物包含張力調節劑、增積劑及穩定劑，且具有約3.0至約10.0之pH值。在另一實施例中，該組合物含有低於每100ml 6000個粒子且較佳低於每100ml 2000個粒子之量的等於或大於10μm的呈懸浮形式之粒子。涵蓋此等組合物作為藥劑之用途。亦涵蓋此等醫藥組合物之各種治療用途。

Description

包含纖維蛋白溶酶原之醫藥組合物及其用途

本發明係關於醫學領域。更特定而言，本發明係關於一種包含纖維蛋白溶酶原之醫藥組合物及其治療用途。

纖維蛋白溶酶原為如圖1A中所示之纖維蛋白溶酶的酶原。人類纖維蛋白溶酶原前驅體之胺基酸序列展示於圖1B中。人類纖維蛋白溶酶原含有791個胺基酸(前驅體=810個胺基酸)，且分子量為約90kD且pI為約7.0，不過差異糖基化及/或N端活化肽之移除可產生6.2至8.0之pI範圍。具有24個鏈內二硫鍵、5個環狀結構域(kringle domain)(結合於纖維蛋白及α2-抗纖維蛋白溶酶抑制劑時所涉及)、絲胺酸蛋白酶結構域(P)及活化肽(AP)的單鏈蛋白質組成頭77個胺基酸。存在一個N-鍵聯糖基化位點及一個O-鍵聯位點，不過已識別出第二O-鍵聯位點(Goldberg,2006)。循環中之纖維蛋白溶酶原約70%僅含有O-鍵聯糖基化，而其餘部分含有N-鍵聯糖與O-鍵聯糖兩者。

天然纖維蛋白溶酶原係以兩種主要形式產生，即Glu-纖維蛋白溶酶原(Glu-Pg)及Lys-纖維蛋白溶酶原(Lys-Pg)，其係針對麩胺酸或離胺酸之N端胺基酸加以命名。Glu-Pg由藉由基因序列命名之整個胺基酸序列(排除活化肽)組成，而Lys-Pg為Glu-Pg在Lys-77與Lys-78(在圖1B中加下劃線)之間裂解的結果。Lys-Pg之循環半衰期明顯短於Glu-Pg(Glu-Pg為2-2.5天，Lys-Pg為0.8天)。Glu-Pg為存在於血漿中之Pg的主導形式，且在循環中偵測到極少的Lys-Pg(Violand,B.N.,Byrne,R.,Castellino F.J.(1978)The effect of α-,ω-Amino Acids on Human Plasminogen Structure and Activation.J Biol Chem.253(10)：5395-5401；Collen D,Ong EB,Johnson AJ. (1975)Human Plasminogen：In Vitro and In Vivo Evidence for the Biological Integrity of NH₂-Terminal Glutamic Acid Plasminogen.Thrombosis Research.7：515-529)。

纖維蛋白溶酶原係在肝臟中合成且分泌至血漿中。纖維蛋白溶酶原分佈於整個身體中且當存在活化之條件時，纖維蛋白溶酶原(Plasminogen pro-enzyme)由纖維蛋白溶酶原活化劑(t-PA)或由尿激酶纖維蛋白溶酶原活化劑(u-PA)轉化為活性酶纖維蛋白溶酶。然後，纖維蛋白溶酶降解纖維蛋白且將潛伏性基質金屬蛋白酶(pro-MMP)轉化成活性MMP，其又進一步降解細胞外基質(ECM)作為組織癒合/重建過程之一部分。纖維蛋白穩態中主要涉及由t-PA介導的纖維蛋白溶酶原激活，而經由u-PA產生纖維蛋白溶酶，從而與其受體u-PAR形成複合物在組織重建中起作用。

現在或曾經研究了纖維蛋白溶酶用於清除人造裝置及血液透析移植物中之血栓性阻塞及用於治療玻璃體後脫離(PVD)之潛在用途(US 6,969,515；US 2010/0104551)。

研究了纖維蛋白溶酶原在治療適應症，諸如傷口癒合、鼓膜穿孔癒合、牙周傷口癒合、傳染性疾病、口腔健康、糖尿病性潰瘍、溶栓適應症(諸如冠狀動脈血栓形成)、組織之再灌注損傷、缺血、梗塞、腦水腫；改良微循環及調節補體途徑中之用途(US 8,637,010；US 8,679,482；US 8,318,661；WO 95/12407；EP 0,631,786)。迄今為止，當前醫藥市場上仍沒有作為藥物之纖維蛋白溶酶原。

歷史上，Lys-Pg因血液學目的而在醫藥學上商業化了一段時間，而自從2000年以來一直未在科學上或醫學上使用。Lys-纖維蛋白溶酶原之調配物描述於Schott等人，1998,The New England Journal of Medicine,第339卷，第23期，第1679-1686頁)中。同時，臨床上使用了可獲得的Lys-Pg且針對木樣結膜炎(基礎病狀低纖維蛋白溶酶原血症(纖維蛋白溶酶原缺乏I型)之臨床表現)之治療進行了研究。因此，已測試Lys-Pg濃縮物之全身性投與。Kraft等人(Kraft J,Lieb W,Zeitler P,Schuster V.(2000)Ligneous conjunctivitis in a girl with severe type I plasminogen deficiency.Graefe’s Arch Clin Exp Ophthalmol.238(9)：797-800)報導，在具有嚴重低纖維蛋白溶酶原血症之兒童中每天輸注Lys-Pg使得結膜假膜部分溶解。Schott等人(1998)報導，在6月齡兒童中，以連續輸注形式且隨後以每天快速注射形式用Lys-Pg製劑治療在4週內使得木樣結膜炎完全消退且使呼吸道中之高黏分泌正常化並且使皮膚傷口癒合。Schuster等人(2007)報導，同合子型或複合性異合子型(在特定基因座存在兩種不同突變異體等位基因，各自位於一對染色體之各染色體上)低纖維蛋白溶酶原血症患者中之纖維蛋白溶酶原含量為纖維蛋白溶酶原抗原血漿含量在<1至9mg/dL範圍內且功能性Pg活性在<1%至51%範圍內。重要的是，注意到此等患者中大部分具有一定程度之殘餘纖維蛋白溶酶原活性。因此，纖維蛋白溶酶原置換預期為有效的，因為其為內源性蛋白質且預期不具有免疫原性或纖維蛋白溶解活性問題。雖然文獻已明確記錄全身性或局部纖維蛋白溶酶原濃縮物為有效治療，其引起病變之消退且使其再形成停止(Watts,2002；Heidemann,2003；及Schott,1998)，但不可商購獲得用於局部或用於全身性治療之純化的纖維蛋白溶酶原產品。

僅在最近，才進行了利用Glu-Pg來治療I型纖維蛋白溶酶原缺乏(Clinical Trials.gov Identifier：NCT02312180)及使用Glu-Pg局部滴眼液治療其臨床表現之一(木樣結膜炎)(ClinicalTrials.gov Identifier：NCT01554956)的臨床試驗。

蛋白質可藉由改變其結構特徵(內部)及/或藉由控制與其接觸之組分(外部)而得以穩定。一些蛋白質歸因於其物理化學特性往往不幸地引起結構不穩定而在處理及醫藥調配物之性能方面提出特定挑戰。其可實際上經歷如下所例示之各種類型之降解：1)化學方法導致形成相關雜質，其可涉及水解、氧化反應、脫醯胺基作用或結構重排，諸如異asp或分子內截短；或2)物理方法引起聚集/聚合，由此產生結構變化，其可影響生物活性且潛在地增強免疫原性。

調配物研製泛指在足夠的程度上表徵活性醫藥成分(API)，使其可轉化為醫藥學上可接受之原料藥的過程。必須進行原料藥之生物物理學表徵以證實存在恰當折疊且具生物活性之結構。若干光譜技術(螢光、CD、DSC、DLS等)可用於檢驗溶液中之蛋白質三級結構且評估不同調配物之穩定性及不同調配條件對蛋白質結構之影響。(Volkin,D.B.等人「Prefor mulation studies as an essential guide to formulation developmert and manufacture of protein pharmaceutical.」Development and manufacture of protein pharmaceuticals.Steve L.Nail及Michael J.Akers編，Kluwer Academic 2002第1章，第1-39頁；Cheng,W.等人「Comparison of High-Throughput Biophysical Methods to Identify Stabilizing Excipients for a Model IgG2 Monoclonal Antibody：Conformational Stability and Kinetic Aggregation Measurements」Journal of Pharmaceutical Sciences，第101卷，第5期，第1701-1720頁，2012)。此外，醫藥行業往往藉由針對原料藥之釋放進行生物分析來證實API之結構完整性。總的來說，他們確認尚未因調配而無意中改變較佳調配物。纖維蛋白溶酶原為一種蛋白質，其主要用於製備纖維蛋白溶酶，從而用於溶栓適應症(諸如冠狀動脈血栓形成)、清除人造裝置及血液透析移植物中之血栓性阻塞且用於組織之再灌注損傷、治療缺血、梗塞、腦水腫，或用於改良微循環(WO 95/12407；US 6,969,515；EP 0,631,786)。

亦已發現投與纖維蛋白溶酶原適合用於許多治療適應症(諸如溶栓適應症，諸如冠狀動脈血栓形成)、治療組織之再灌注損傷、治療缺血、梗塞、腦水腫或用於改良微循環、傷口癒合、鼓膜穿孔癒合、牙周傷口癒合、傳染性疾病、口腔健康、糖尿病性潰瘍、纖維蛋白溶酶原缺陷型個體及調節補體途徑(WO 95/12407；EP 0,631,786；US 8,637,010；US 8,679,482；US 8,318,661)。

在調配纖維蛋白溶酶原時遇到若干挑戰。一些問題起因於纖維蛋白溶酶原調配物之纖維蛋白溶酶污染，其降解纖維蛋白溶酶原。已使用多種方法來避免纖維蛋白溶酶原之降解，包括添加抑肽酶、離胺酸、苯基甲磺醯氟、大豆胰蛋白酶抑制劑或絲胺酸蛋白酶抑制劑(US 4,177,262；US 4,361,653；US 5,304,383)。

其他困難由當纖維蛋白溶酶原溶解於水性溶劑中時之濁度或存在絲狀物質代表。為克服此缺點，已提出將纖維蛋白溶酶原與例如非離子界面活性劑或與蔗糖、胺基酸及白蛋白之混合物組合(WO 94/15631)。

不存在已知用於人類治療用途之Glu-Pg商業調配物。僅有的已知Glu-Pg調配物僅用於研究。

對研製纖維蛋白溶酶原之醫藥組合物存在需要。

本說明書提及許多文獻，其內容以全文引用之方式併入本文中。

本發明係關於一種包含纖維蛋白溶酶原之醫藥組合物及其用途。

本發明係關於以下第1項至第64項：

1.一種醫藥組合物，其包含：- 纖維蛋白溶酶原，或其生物活性變異體；- 張力調節劑；- 增積劑；及- 穩定劑；其中該組合物具有約3.0至約10.0之pH值。

2.如第1項之醫藥組合物，其中該pH值為5.0至8.0；或6.0至8.0；或6.5至7.5。

3.如第1項之醫藥組合物，其中該纖維蛋白溶酶原或其生物活性變異體之濃度為約0.01mg/ml至約80mg/ml，或約5mg/ml至約40mg/ml。

4.如第3項之醫藥組合物，其中該纖維蛋白溶酶原或其生物活性變異體之濃度為約40、30、20、10或5mg/ml。

5.如第1項至第4項中任一項之醫藥組合物，其中該纖維蛋白溶酶原或其生物活性變異體佔該組合物之總蛋白含量之至少80%或該組合物之總蛋白含量之超過90%。

6.如第5項之醫藥組合物，其中該纖維蛋白溶酶原或其生物活性變異體佔該組合物之總蛋白含量之超過95或98%。

7.如第1項至第6項中任一項之醫藥組合物，其中該張力調節劑為氯化鈉、氯化鈣、氯化鎂、蔗糖、海藻糖、山梨糖醇、甘露糖醇、甘油、乳糖、山梨糖醇、右旋糖、環糊精、棉子糖、聚乙二醇、羥乙基澱粉、甘胺酸麩胺酸、丙胺酸、右旋糖酐、PVP(聚乙烯吡咯啶酮)或其任何組合。

8.如第7項之醫藥組合物，其中該張力調節劑為氯化鈉。

9.如第1項至第8項中任一項之醫藥組合物，其中該張力調節劑係以約30mM至約250mM之濃度存在。

10.如第9項之醫藥組合物，其中該張力調節劑係以約35mM之濃度存在。

11.如第1項至第10項中任一項之醫藥組合物，其中該增積劑為甘胺酸、麩胺酸、丙胺酸、甘露糖醇、山梨糖醇、羥乙基澱粉、右旋糖酐、PVP(聚乙烯吡咯啶酮)、甘露糖醇、聚乙二醇、山梨糖醇或其任何組合。

12.如第11項之醫藥組合物，其中該增積劑為甘露糖醇或山梨糖醇。

13.如第1項至第12項中任一項之醫藥組合物，其中該增積劑呈約50mM至約300mM之濃度。

14.如第13項之醫藥組合物，其中該增積劑呈約54或約108mM之濃度。

15.如第1項至第14項中任一項之醫藥組合物，其中該穩定劑包含(i)胺基酸，(ii)胺基酸鹽，(ii)胺基酸類似物，或(iv)(i)、(ii)及/或(iii)之任何混合物，其中該胺基酸、胺基酸鹽或胺基酸類似物為精胺酸鹽酸鹽、脯胺酸、麩胺酸、天冬胺酸、甘胺酸、丙胺酸、半胱胺酸、離胺酸鹽酸鹽、離胺酸類似物或ε-胺基已酸。

16.如第15項之醫藥組合物，其中該穩定劑為精胺酸鹽酸鹽。

17.如第1項至第16項中任一項之醫藥組合物，其中該穩定劑呈約20mM至約200mM之濃度。

18.如第17項之醫藥組合物，其中該穩定劑呈約25mM至約75mM之濃度。

19.如第1項至第17項中任一項之醫藥組合物，其進一步包含還原糖。

20.如第19項之醫藥組合物，其中該還原糖為果糖、甘露糖、麥芽糖、乳糖、阿拉伯糖、木糖、核糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖、蔗糖或其任何組合。

21.如第1項至第20項中任一項之醫藥組合物，其進一步包含非還原糖。

22.如第21項之醫藥組合物，其中該非還原糖為蔗糖、海藻糖、山梨糖、蜜三糖、棉子糖或其任何組合。

23.如第1項至第22項中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物具有約180mOsm與約350mOsm之間的滲透壓。

24.如第1項至第23項中任一項之醫藥組合物，其進一步包含抗氧化劑。

25.如第24項之醫藥組合物，其中該抗氧化劑為甲硫胺酸、氧化型麩胱甘肽(Glu-Cys-Gly)₂(613kDa)、抗壞血酸或其任何組合。

26.如第24項或第25項之醫藥組合物，其中該抗氧化劑之濃度為約10mM至約200mM。

27.如第1項至第26項中任一項之醫藥組合物，其進一步包含界面活性劑。

28.如第27項之醫藥組合物，其中該界面活性劑為Polysorbate® 80、Polysorbate® 20、Pluronic® F-68或Brij® 35、泊洛沙姆(poloxamer)、泊洛沙姆188、Pluronic® F-68、Triton®；十二烷基硫酸鈉(SDS)；月桂基硫酸鈉；辛基糖苷鈉；月桂基-磺基甜菜鹼、肉豆寇基-磺基甜菜鹼、亞油烯基-磺基甜菜鹼或硬脂基-磺基甜菜鹼；月桂基-肌胺酸、肉豆寇基-肌胺酸、亞油烯基-肌胺酸或硬脂基-肌胺酸；亞油烯基-甜菜鹼、肉豆寇基-甜菜鹼或鯨蠟基-甜菜鹼；月桂醯胺丙基-甜菜鹼、椰油醯胺丙基-甜菜鹼、亞油醯胺丙基-甜菜鹼、肉豆蔻醯胺丙基-甜菜鹼、棕櫚醯胺丙基-甜菜鹼或異硬脂醯胺丙基-甜菜鹼(例如月桂醯胺丙基)；肉豆蔻醯胺丙基-二甲胺、棕櫚醯胺丙基-二甲胺或異硬脂醯胺丙基-二甲胺；甲基椰油醯基-牛磺酸鈉或甲基油烯基-牛磺酸二鈉；MONAQUAT^TM系列之界面活性劑(Mona Industries,Inc.,Paterson,N.J.)、聚乙二醇、聚丙二醇或乙二醇及丙二醇之共聚物或其任何組合。

29.如第27項或第28項之醫藥組合物，其中該界面活性劑係以約0.002%至約0.02%(w/v)之濃度存在於該組合物中。

30.如第1項至第29項中任一項之醫藥組合物，其進一步包含聚合穩定劑。

31.如第30項之醫藥組合物，其中該聚合穩定劑為肝素(6至30kDa)；聚胺基酸(2至100kDa)，諸如聚(Glu)、聚(Asp)及聚(Glu，Phe)；環糊精；或右旋糖酐硫酸鹽。

32.如第30項或第31項之醫藥組合物，其中該聚合穩定劑之濃度為約0.001%至約0.50%。

33.如第1項至第32項中任一項之醫藥組合物，其進一步包含聚乙二醇。

34.如第33項之醫藥組合物，其中該聚乙二醇為PEG 200、PEG 400、PEG 1000、PEG 4000、PEG 8000、PEG 10 000或其任何組合。

35.如第33項或第34項之醫藥組合物，其中該聚乙二醇之濃度為約0.5%至約10%(w/w)。

36.如第1項至第35項中任一項之醫藥組合物，其進一步包含防腐劑。

37.如第36項之醫藥組合物，其中該防腐劑為間甲酚、苯甲醇、甲醇、乙醇、異丙醇、對羥基苯甲酸丁酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸甲酯、苯酚、甘油、木糖醇、間苯二酚、兒茶酚、2,6-二甲基環己醇、2-甲基-2,4-戊二醇、右旋糖酐、聚乙烯吡咯啶酮、2-氯酚、苄索氯銨、硫柳汞(硫汞撒(thimersosal))、苯甲酸(對羥苯甲酸丙酯)MW 180.2、苯甲酸MW 122.12、苯紮氯銨、氯丁醇、苯甲酸鈉、丙酸鈉、氯化十六烷吡啶或其任何組合。

38.如第36項或第37項之醫藥組合物，其中該防腐劑之濃度為約0.005至約10%(w/v)。

39.如第1項至第38項中任一項之醫藥組合物，其中該組合物包含纖維蛋白溶酶原。

40.如第1項至第39項中任一項之醫藥組合物，其中該纖維蛋白溶酶原為人類纖維蛋白溶酶原且超過90%由Glu-纖維蛋白溶酶原構成。

41.如第1項至第40項中任一項之醫藥組合物，其中該組合物含有低於每100ml 6000個粒子之量的等於或大於10μm的粒子。

42.如第41項之醫藥組合物，其中該組合物含有低於每100ml 2000或1000個粒子之量的等於或大於10μm的粒子。

43.如第1項至第42項中任一項之醫藥組合物，其適合用於靜脈內、皮下、局部、真皮內、眼部及/或肌肉內投與。

44.如第1項至第43項中任一項之醫藥組合物，其為液體組合物、適合於凍幹之液體組合物、適合於冷凍之液體組合物、凍幹組合物、冷凍組合物或複水組合物。

45.如第1項至第44項中任一項之醫藥組合物，其為液體、凝膠、乳膏或軟膏。

46.如第1項至第45項中任一項之醫藥組合物，其中纖維蛋白溶酶原或其生物活性變異體為Glu-纖維蛋白溶酶原。

47.如第1項至第45項中任一項之醫藥組合物，其係用作藥劑。

48.一種包含纖維蛋白溶酶原或其生物活性變異體之醫藥組合物，其含有低於每100ml 6000個粒子之量的等於或大於10μm的呈懸浮形式之粒子。

49.如第48項之醫藥組合物，其中該組合物含有低於每100ml 2000或1000個粒子之量的等於或大於10μm的呈懸浮形式之粒子。

50.如第48項或第49項之醫藥組合物，其進一步包含穩定劑，該穩定劑包含(i)胺基酸，(ii)胺基酸鹽，(ii)胺基酸類似物，或(iv)(i)、(ii)及/或(iii)之任何混合物，其中該胺基酸、胺基酸鹽或胺基酸類似物為精胺酸鹽酸鹽、脯胺酸、麩胺酸、天冬胺酸、甘胺酸、丙胺酸、半胱胺酸、離胺酸鹽酸鹽、離胺酸類似物或ε-胺基已酸。

51.如第50項之醫藥組合物，其中該穩定劑為精胺酸鹽酸鹽。

52.如第50項或第51項之醫藥組合物，其中該穩定劑呈約25mM至約75mM之濃度。

53.如第48項至第52項中任一項之醫藥組合物，其中該纖維蛋白溶酶原或其生物活性變異體之濃度為約5mg/ml至約40mg/ml。

54.如第48項至第53項中任一項之醫藥組合物，其中該纖維蛋白溶酶原或其生物活性變異體佔該組合物之總蛋白含量之超過95或98%。

55.如第48項至第54項中任一項之醫藥組合物，其進一步包含張力調節劑，該張力調節劑為氯化鈉、氯化鈣、氯化鎂、蔗糖、海藻糖、山梨糖醇、甘露糖醇、甘油、乳糖、山梨糖醇、右旋糖、棉子糖、聚乙二醇、羥乙基澱粉、甘胺酸麩胺酸、丙胺酸、右旋糖酐、PVP(聚乙烯吡咯啶酮)或其任何組合。

56.如第55項之醫藥組合物，其中該張力調節劑為氯化鈉。

57.如第55項或第56項之醫藥組合物，其中該張力調節劑以約30mM至約250mM之濃度存在。

58.如第48項至第57項中任一項之醫藥組合物，其進一步包含增積劑，該增積劑為甘胺酸、麩胺酸、丙胺酸、甘露糖醇、山梨糖醇、羥乙基澱粉、右旋糖酐、PVP(聚乙烯吡咯啶酮)、甘露糖醇、聚乙二醇、山梨糖醇或其任何組合。

59.如第58項之醫藥組合物，其中該增積劑為甘露糖醇或山梨糖醇。

60.如第58項或第59項之醫藥組合物，其中該增積劑呈約50mM至約300mM之濃度。

61.如第48項至第60項中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物具有約180mOsm與約350mOsm之間的滲透壓。

62.如第48項至第61項中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物具有約6.5至約7.5之pH值。

63.如第48項至第62項中任一項之醫藥組合物，其中纖維蛋白溶酶原或其生物活性變異體為Glu-纖維蛋白溶酶原。

64.如第48項至第63項中任一項之醫藥組合物，其係用作藥劑。

由以下描述、申請專利範圍及本文之概述本發明之其他態樣對熟習此項技術者而言將顯而易見。

圖1A為纖維蛋白溶酶原之一級結構之示意圖，顯示其環狀結構域、纖維蛋白溶酶裂解位點及鏈激酶結合位點。

圖1B顯示人類纖維蛋白溶酶原前驅體之胺基酸序列。成熟形式之序列以粗體顯示，且存在裂解以產生Lys-Pg之兩個離胺酸殘基加下劃線。

圖2為含有凍幹之後的調配物1之安慰劑之小瓶的圖片。

圖3為含有凍幹之後的調配物1之小瓶的圖片。

圖4為含有凍幹之後的調配物2之安慰劑之小瓶的圖片。

圖5為含有凍幹之後的調配物2之小瓶的圖片。

圖6為含有凍幹之後的調配物3之安慰劑之小瓶的圖片。

圖7為含有凍幹之後的調配物3之小瓶的圖片。

圖8為含有凍幹之後的調配物4之安慰劑之小瓶的圖片。

圖9為含有凍幹之後的調配物4之小瓶的圖片。

圖10為含有凍幹之後的調配物5之安慰劑之小瓶的圖片。

圖11為含有凍幹之後的調配物5之小瓶的圖片。

圖12為在0.02、20、100、800NTU之濁度標準液旁邊的分別含有於水(樣品0)、10mM檸檬酸鈉緩衝液(pH 6.5)(樣品1)、10mM磷酸鈉緩衝液(pH 7.2)(樣品2)及10mM Tris-HCl緩衝液(Ph 8.0)(樣品3)中之5mg/ml纖維蛋白溶酶原之小瓶的圖片。

圖13為與圖12中所示相同的小瓶的圖片，除了已向樣品1、2及3中添加35mM NaCl及28.5mM(0.5%)Arg。

本文揭示一種包含纖維蛋白溶酶原或其生物活性變異體之醫藥組合物。

本文亦揭示一種包含以下組分之醫藥組合物：- 纖維蛋白溶酶原，或其生物活性變異體；- 張力調節劑；- 穩定劑；及- 增積劑；組合物具有約3.0至約10.0；較佳約5.0至約8.0；更佳約6.0至約8.0；且進一步較佳約6.5至約7.5之pH值。

如本文所用之術語「纖維蛋白溶酶原」係指來自任何動物(例如哺乳動物，例如人類)之任何形式之天然纖維蛋白溶酶原多肽(例如Glu-纖維蛋白溶酶原或Lys-纖維蛋白溶酶原)。纖維蛋白溶酶原為由組織型纖維蛋白溶酶原活化劑(t-PA)或由尿激酶纖維蛋白溶酶原活化劑(u-PA)轉化為活性酶纖維蛋白溶酶之酶原。然後，纖維蛋白溶酶降解纖維蛋白且將潛伏性基質金屬蛋白酶(pro-MMP)轉化成活性MMP，其又進一步降解細胞外基質 (ECM)作為組織癒合/重建過程之一部分。如本文所用之術語「生物活性變異體」係指保留天然纖維蛋白溶酶原之生物活性(亦即轉化為能夠降解纖維蛋白且將潛伏性基質金屬蛋白酶(pro-MMP)轉化成活性MMP之纖維蛋白溶酶多肽(由t-PA及或u-PA)之能力)的突變纖維蛋白溶酶原多肽。變異體可包含一或多個胺基酸取代、缺失/截短(N端、C端及/或內部胺基酸缺失/截短)、添加(N端、C端及/或內部胺基酸添加)。生物活性變異體可展現更低、更高或類似於天然纖維蛋白溶酶原多肽之生物活性(例如所得纖維蛋白溶酶之酶活性)。在實施例中，變異體與天然纖維蛋白溶酶原多肽具有至少60、70、75、80、85、90或95%胺基酸序列一致性。生物活性纖維蛋白溶酶原變異體描述於例如WO2012/093132、WO2013/024074及Wang等人(1995,Protein Science 4,1758-1767)中，且包括通常稱為「中型纖維蛋白溶酶原(midiplasminogen)」、「小型纖維蛋白溶酶原(miniplasminogen)」、「微型纖維蛋白溶酶原(microplasminogen)」及「δ-纖維蛋白溶酶原」纖維蛋白溶酶原之缺少一或多個環狀結構域及/或其部分的截短變異體。在一實施例中，纖維蛋白溶酶原為人類纖維蛋白溶酶原。在另一實施例中，組合物包含天然人類纖維蛋白溶酶原。纖維蛋白溶酶原可獲自若干來源。其可藉由重組合成獲得，或自血液、血漿或血液衍生溶液萃取/純化。纖維蛋白溶酶原可藉由科恩分級分離(Cohn fractionation)或藉由沈澱自血液或血漿萃取。纖維蛋白溶酶原可藉由結合親和層析(諸如WO 2006/120423中所描述之方法)自血漿或血液衍生溶液純化，或者重組產生。

在一實施例中，纖維蛋白溶酶原或其生物活性變異體以約0.01mg/ml至約80mg/ml；較佳約1mg/ml至約40mg/ml；較佳約5mg/ml至約40mg/ml；較佳約2mg/ml至約30mg/ml，更佳約2mg/ml至約20mg/ml且進一步較佳約80、70、60、50、40、30、25、20、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1、0.5、0.1、0.05或0.01mg/ml之濃度存在。

在本發明之一實施例中，醫藥組合物中所含之纖維蛋白溶酶原或其生物活性變異體具有約90%或更高、較佳約95%或更高且更佳約98%或更高之純度。

本發明組合物之pH值可為約3.0至約10.0；約5.0至約8.0；約6.0至約8.0；或約6.5至約7.5。在實施例中，本發明組合物之pH值為約3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、8.0、8.5、9.0或10.0。為使組合物維持在此類pH值，本發明組合物較佳包含緩衝液。視所需pH值而定，在本發明範疇內可使用許多緩衝液，包括以下緩衝液：

在一實施例中，緩衝液包含兩種緩衝液之組合；諸如檸檬酸鹽/磷酸鹽、檸檬酸鹽/組胺酸、乙酸鹽/組胺酸或丁二酸鹽/組胺酸。在本發明之一實施例中，緩衝液不包含檸檬酸鹽緩衝液。在另一實施例中，緩衝液為檸檬酸鹽、磷酸鹽(K₂HPO₄/NaHPO₄)、組胺酸或丁二酸鹽。在另一實施例中，緩衝液為磷酸鹽(K₂HPO₄/NaHPO₄)、組胺酸或丁二酸鹽。

在一實施例中，緩衝液之濃度為約10mM至約50mM，或約10mM至約30mM，例如約2mM或約10mM。

如本文所用，「張力調節劑」係指用於調節醫藥組合物之張力的化合物。在一實施例中，張力調節劑以使得組合物等張之量存在。在另一實施例中，張力調節劑以使得組合物高張或低張之量存在。在一實施例中，張力調節劑為氯化鈉、氯化鈣、氯化鎂、氯化鉀、Na₂SO₄、ZnCl₂、硼酸鹽、醫藥學上可接受之單價鹽、醫藥學上可接受之二價鹽、醫藥學上可接受之三價鹽、醫藥學上可接受之四價鹽、蔗糖、海藻糖、山梨糖醇、甘露糖醇、甘油、乳糖、山梨糖醇、右旋糖、環糊精、棉子糖、糖醇、聚乙二醇、羥乙基澱粉、甘胺酸麩胺酸、丙胺酸、右旋糖酐、PVP(聚乙烯吡咯啶酮)或其任何組合。「等張」意謂本發明之組合物具有與人類血液之滲透壓基本上相同之滲透壓。等張組合物通常具有約250至約330mOsm之滲透壓。滲透壓可使用例如蒸氣壓或冰凍型滲透壓計來量測。在一實施例中，醫藥組合物包含兩種張力調節劑之混合物。在另一實施例中，醫藥組合物包含三種張力調節劑之混合物。在一實施例中，張力調節劑為糖或包含糖，或為糖之混合物。在一實施例中，張力調節劑為氯化鈉。在一實施例中，張力調節劑濃度之濃度為約30mM至約250mM，或約20mM至約150mM，或約30mM至約100mM。在一實施例中，張力調節劑濃度之濃度為約約34mM，或約35mM，或約68mM，或約75mM。在一實施例中，調節張力調節劑之濃度，使得組合物之所得滲透壓屬於所需範圍內。

如本文所用，「增積劑」係指增加組合物之體積量(bulk mass)的化合物/試劑。增積劑之實例包括但不限於甘胺酸、麩胺酸、丙胺酸、甘露糖醇、羥乙基澱粉、右旋糖酐、PVP(聚乙烯吡咯啶酮)、甘露糖醇、山梨糖醇、聚乙二醇、蔗糖、葡萄糖、麥芽糖、山梨糖醇、NaCl或其任何組合。此等試劑亦可充當張力調節劑。在實施例中，增積劑之濃度為約50mM至約300mM；或約100mM至約200mM，或約150mM，或約50mM至約150mM，或約108mM，或約54mM。

在實施例中，張力調節劑及增積劑呈使得張力調節劑/增積劑比率為約1.0至約15.0(wt/wt)；約1.0至約10.0、約3.0至約10.0、約5.0至約10.0(例如約5.0、約8.0或約10.0)之濃度。在一實施例中，基於張力調節劑之濃度調節增積劑之濃度，使得張力調節劑/增積劑比率在所需範圍內。

在實施例中，組合物進一步包含一或多種其他醫藥學上可接受之成分，諸如載劑、賦形劑、稀釋劑、穩定劑、緩衝液及類似物。

在一實施例中，醫藥組合物包含糖，例如還原及/或非還原糖。如本文所用，「還原糖」為含有可還原金屬離子或與蛋白質中之離胺酸及其他胺基共價反應之半縮醛基的糖，而「非還原糖」為不具有還原糖之此等性質的糖。在一實施例中，還原糖為果糖、甘露糖、麥芽糖、乳糖、阿拉伯糖、木糖、核糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖、蔗糖或其任何組合。在一實施例中，非還原糖為蔗糖、海藻糖、山梨糖、蜜三糖、棉子糖或其任何組合。在一實施例中，將本發明之醫藥組合物在還原糖存在下凍幹。在一實施例中，將本發明之醫藥組合物在非還原糖存在下凍幹。

在實施例中，本發明之醫藥組合物具有約180mOsm至約350mOsm；或約250mOsm至約350mOsm或約200mOsm至約300mOsm之滲透壓。在某些實施例中，例如當製備本發明組合物用於凍幹時，其可具有高於350mOsm之滲透壓。在此類情況下，複水溶液可具有超過組合物之體積的體積，以稀釋組分且降低滲透壓。另外，當將組合物設計成用於小體積投與時，組合物之滲透壓可為高於350mOsm。

如本文所用，「穩定劑」係指使溶液中之纖維蛋白溶酶原穩定的試劑。在一實施例中，穩定劑包含胺基酸、胺基酸鹽、胺基酸類似物或其任何混合物。在另一實施例中，胺基酸、胺基酸鹽、胺基酸類似物或其混合物為精胺酸鹽酸鹽、脯胺酸、麩胺酸、天冬胺酸、甘胺酸、丙胺酸、半胱胺酸、離胺酸鹽酸鹽、離胺酸類似物(諸如ε-胺基已酸)或其任何組合。在一實施例中，醫藥組合物包含兩種胺基酸、胺基酸鹽及/或胺基酸類似物。在另一實施例中，醫藥組合物包含三種胺基酸、胺基酸鹽及/或胺基酸類似物。在實施例中，胺基酸之濃度為約10mM至約300mM、約20mM至約200mM或約10mM至約100mM或約25mM至約75mM或約10mM或約25mM或約50mM或約75mM或約100mM、約150mM、約200mM、約250mM或約300mM。

在另一實施例中，本發明之醫藥組合物進一步包含抗氧化劑。在一實施例中，抗氧化劑為甲硫胺酸、氧化型麩胱甘肽(Glu-Cys-Gly)₂(613kDa)、抗壞血酸、N-乙醯基-L-半胱胺酸/高半胱胺酸、麩胱甘肽、6-羥基-2,5,7,8-四甲基色滿-2-甲酸(Trolox®)、硫辛酸、硫代硫酸鈉、鉑、甘胺酸-甘胺酸-組胺酸(三肽)、丁基化羥基甲苯(BHT)或其任何組合。在實施例中，抗氧化劑之濃度為約10mM至約200mM，例如約10mM、約50mM、約100mM、約150mM或約200mM。

在另一實施例中，本發明之醫藥組合物進一步包含抗界面活性劑。如本文所用，「界面活性劑」係指降低液體與固體(當溶解於溶液中時)之間的界面張力的化合物/試劑。在一實施例中，界面活性劑為Polysorbate® 80、Polysorbate® 20、Pluronic® F-68或Brij® 35；泊洛沙姆(例如泊洛沙姆188或Pluronic® F-68)；Triton®；十二烷基硫酸鈉(SDS)；月桂基硫酸鈉；辛基糖苷鈉；月桂基-磺基甜菜鹼、肉豆寇基-磺基甜菜鹼、亞油烯基-磺基甜菜鹼或硬脂基-磺基甜菜鹼；月桂基-肌胺酸、肉豆寇基-肌胺酸、亞油烯基-肌胺酸或硬脂基-肌胺酸；亞油烯基-甜菜鹼、肉豆寇基-甜菜鹼或鯨蠟基-甜菜鹼；月桂醯胺丙基-甜菜鹼、椰油醯胺丙基-甜菜鹼、亞油醯胺丙基-甜菜鹼、肉豆蔻醯胺丙基-甜菜鹼、棕櫚醯胺丙基-甜菜鹼或異硬脂醯胺丙基-甜菜鹼(例如月桂醯胺丙基)；肉豆蔻醯胺丙基-二甲胺、棕櫚醯胺丙基-二甲胺或異硬脂醯胺丙基-二甲胺；甲基椰油醯基-牛磺酸鈉或甲基油烯基-牛磺酸二鈉；及MONAQUAT^TM系列(Mona Industries,Inc.,Paterson,N.J.)、聚乙二醇、聚丙二醇或乙二醇及丙二醇之共聚物或其任何組合。在一實施例中，調節界面活性劑之濃度以減少纖維蛋白溶酶原、其生物活性變異體或片段之聚集及/或使組合物中粒子之形成降至最低程度及/或減少吸附。在一實施例中，界面活性劑以約0.001-1%(w/v)、約0.002%至約0.02%(w/v)或約0.002%至約0.006%(w/v)之濃度存在於組合物中。在一些實施例中，組合物包含界面活性劑，其為泊洛沙姆。在一些實施例中，組合物包含Pluronic® F68。在特定實施例中，組合物包含約0.01%(w/v)至約1%(w/v)之Pluronic® F68，例如約0.1%(w/v)之Pluronic® F68。在一實施例中，組合物實質上不含或不含非離子界面活性劑，例如組合物包含低於約0.02%、0.01%、0.006%或0.004%(w/v)之非離子界面活性劑。

在另一實施例中，本發明之醫藥組合物進一步包含聚合穩定劑。在一實施例中，聚合穩定劑為肝素(6至30kDa)；聚胺基酸(2至100kDa)，諸如聚(Glu)、聚(Asp)及聚(Glu，Phe)；羧甲基纖維素(10-800cp)環糊精；右旋糖酐硫酸鹽或其任何組合。在實施例中，聚合穩定劑之濃度為約0.001%至約0.50%，或約0.001%至約0.25%。

在另一實施例中，本發明之醫藥組合物進一步包含聚乙二醇，例如PEG 200、PEG 400、PEG 1000、PEG 4000、PEG 8000、PEG 10 000或其任何組合。在一實施例中，聚乙二醇之濃度為約0.5%至約10%(w/w)。

在一實施例中，本發明之醫藥組合物進一步包含防腐劑。如本文所用，「防腐劑」係指可添加至醫藥組合物中以使其中之細菌活性基本上降低，由此促進例如多用途醫藥組合物之製備的化合物/試劑。防腐劑之實例包括間甲酚、苯甲醇、甲醇、乙醇、異丙醇、對羥基苯甲酸丁酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸甲酯、苯酚、甘油、木糖醇、間苯二酚、兒茶酚、2,6-二甲基環己醇、2-甲基-2,4-戊二醇、右旋糖酐、聚乙烯吡咯啶酮、2-氯酚、苄索氯銨、硫柳汞(硫汞撒)、苯甲酸(對羥苯甲酸丙酯)MW 180.2、苯甲酸MW 122.12、苯紮氯銨、氯丁醇、苯甲酸鈉、丙酸鈉或氯化十六烷吡啶。選擇與緩衝液及醫藥組合物之其他組分相容(亦即溶液透明)之防腐劑。舉例而言，當緩衝液為乙酸鈉或磷酸鈉時，相容防腐劑包括甲醇、乙醇、異丙醇、甘油、間苯二酚、2-甲基-2,4-戊二醇、硫柳汞(硫汞撒)、苯紮氯銨、苯甲酸鈉或氯化十六烷吡啶。本發明組合物中所用之防腐劑之濃度可根據熟習此項技術者之判斷來確定。在一些實施例中，防腐劑之濃度為約0.005至約10%(w/v)、約0.1至約1.0%(w/v)或約0.3至約0.7%(w/v)。在一些實施例中，防腐劑之濃度為約0.005、0.1、0.3、0.5、0.7或1.0%(w/v)。

在另一實施例中，本發明之醫藥組合物不含防腐劑。

一或多種其他醫藥學上可接受之載劑、賦形劑或穩定劑，諸如描述於Remington's Pharmaceutical Sciences第19版，Genarro,A.編(1995) 中之彼等可包括於本發明組合物中，前提條件是其不顯著不利影響本發明之醫藥組合物的所需特徵。本發明之組合物的其他組成元素可包括水(例如注射用水)、植物油、增稠劑(諸如甲基纖維素)、抗吸附劑、潤濕劑、抗氧化劑(包括抗壞血酸及甲硫胺酸)、螯合劑(諸如EDTA)、金屬錯合物(例如Zn-蛋白質錯合物)、可生物降解聚合物(諸如聚酯)及/或鹽形成相對離子(諸如鈉)等。可接受之載劑、賦形劑或穩定劑以使得其在所使用之劑量及濃度下對個體無毒之量存在。

在一實施例中，本發明之醫藥組合物在凍幹時具有約3.5%至約8%、較佳約3.5%至約6%且更佳約3.8%至約5.5%之固體總重量。增加本發明之醫藥組合物中之組分的濃度使得凍幹組合物中之總固體百分比增加且改良凍幹組合物之餅狀物外觀。

本發明之一實施例為包含纖維蛋白溶酶原或其變異體之醫藥組合物，其中組合物中除纖維蛋白溶酶原或其變異體以外之蛋白質總量小於約10%，小於約5%或小於約2%。本發明之一實施例為包含纖維蛋白溶酶原或其變異體之醫藥組合物，其中組合物不包含或實質上不含另一蛋白質(亦即除纖維蛋白溶酶原或其變異體之外)。在本發明之一實施例中，組合物不包含或實質上不含白蛋白。在本發明之一實施例中，組合物不包含或實質上不含抑肽酶。在本發明之一實施例中，組合物不包含或實質上不含胰蛋白酶抑制劑。在本發明之一實施例中，組合物不包含或實質上不含絲胺酸蛋白酶抑制劑。在本發明之一實施例中，組合物不包含或實質上不含纖維蛋白溶酶。在本發明之一實施例中，組合物實質上不含或不含界面活性劑，亦即界面活性劑之濃度小於0.01mM。

在一實施例中，纖維蛋白溶酶原或其變異體為Lys-纖維蛋白溶酶原或Glu-纖維蛋白溶酶原。在另一實施例中，纖維蛋白溶酶原或其變異體為Glu-纖維蛋白溶酶原。在一實施例中，纖維蛋白溶酶原或其變異體由各種類型之纖維蛋白溶酶原及/或變異體組成。較佳地，Glu-纖維蛋白溶酶原之含量佔纖維蛋白溶酶原或其變異體之總含量的超過50%，或超過60%，或超過70%，或超過80%，或超過90%。

本文所描述之組分的所有組合(pH、緩衝液、張力調節劑、增積劑、穩定劑等)及其在本發明之醫藥組合物中的相應濃度係由本發明特定地設想。根據本發明之纖維蛋白溶酶原(Pg)之醫藥組合物之代表性實例呈現於表1A中。

根據本發明之醫藥組合物之其他代表性實例呈現於下表1B中，其係關於具有約0.01mg/ml至約80mg/ml且較佳50至40mg/ml之纖維蛋白溶酶原或其變異體且具有6.5至7.5之pH值的組合物。在所有此等實例中，纖維蛋白溶酶原之含量較佳主要由Glu-纖維蛋白溶酶原組成，且纖維蛋白溶酶原或變異體之總含量為5mg/mL至40mg/mL。

在一實施例中，本發明之包含纖維蛋白溶酶原之醫藥組合物適合用於靜脈內、皮下、局部、真皮內、眼部及/或肌肉內投與。

在實施例中，包含纖維蛋白溶酶原之醫藥組合物為液體組合物、適合於凍幹之液體組合物、適合於冷凍之液體組合物、凍幹組合物、冷凍組合物或複水組合物。

在一實施例中，本發明之包含纖維蛋白溶酶原之醫藥組合物在室溫下穩定至少2小時、24小時、一週或一個月。

在一實施例中，本發明之包含纖維蛋白溶酶原之醫藥組合物在低於0℃之溫度下穩定至少3個月、至少6個月、至少12個月或至少24個月。該低下0℃之溫度為約-20℃、約-30℃、約-60℃、約-70℃或約-80℃。

根據一實施例，本發明之醫藥組合物係用於在人類個體中投與。較佳地，本發明之醫藥組合物係用於靜脈內、皮下、局部、肌肉內或眼部投與。在一實施例中，本發明之組合物呈液體、凝膠、乳膏或軟膏形式。

術語「醫藥組合物」命名用於醫藥、醫療或治療目的之組合物。

調配於本發明之組合物中的纖維蛋白溶酶原可獲自若干來源。其可藉由重組合成獲得，或自血液、血漿或血液衍生溶液萃取/純化。纖維蛋白溶酶原可藉由科恩分級分離或藉由沈澱自血液或血漿萃取。纖維蛋白溶酶原可藉由結合親和層析(諸如WO 2006/120423中所描述之方法)自血漿或血液衍生溶液純化。纖維蛋白溶酶原之變異體包括但不限於對胺基酸序列之任何修飾或向其添加任何基團或向其添加任何胺基酸或胺基酸序列。纖維蛋白溶酶原之片段包括但不限於其胺基酸或胺基酸序列之任何缺失。

如本文所用，術語「約」旨在覆蓋對應值+或-10%。

術語「個體」包括可受益於纖維蛋白溶酶原、其變異體或其片段之投與的活有機體。術語「個體」包括諸如哺乳動物或鳥之動物。較佳地，個體為哺乳動物。更佳地，個體為人類。最佳地，個體為需要治療之人類患者。

如本文所用，「預防(preventing/prevention)」旨在指至少降低獲得疾病或病症之風險的可能性(或對疾病或病症之敏感性)(亦即使得在可能暴露於或傾向於患該疾病但尚末經歷或展現該疾病之症狀的患者中該疾病之臨床症狀中之至少一者不發生)。用於識別此類患者之生物及生理參數提供於本文中且亦為醫師熟知的。

術語「治療(treatment/treating)」個體包括向個體投與或投與本發明之組合物(或向個體之組織或器官投與或投與本發明之組合物)，目的為延遲、穩定、治癒、癒合、緩解、減輕、改變、得到補救、更少惡化、改善、改良或影響疾病或病狀、疾病或病狀之症狀或疾病或病狀之風險(或對疾病或病狀的敏感性)。術語「治療」係指在治療或改善外傷、病變或病狀時成功之任何指示，包括任何客觀或主觀參數，諸如消除；緩解；惡化速率減小；疾病嚴重性減輕；症狀穩定、削弱或使得損傷、使個體更能耐受病變或病狀；退變或衰退速率減慢；使得退變終點衰弱程度更低；或改良個體之身體或心理健康。在一些實施例中，術語「治療」可包括增加個體之預期壽命及/或延遲對其他治療之需要。

如本文所用，術語「治療有效量」意謂化合物在向個體投與以治療或預防特定病症、疾病或病狀時足以實現對病症、疾病或病狀之此類治療或預防作用的量。如本文所用，術語「治療有效量」進一步意謂在個體中纖維蛋白溶酶原、其變異體或其片段有效癒合傷口、癒合鼓膜穿孔、癒合牙周傷口、治療傳染性疾病、提高或維持口腔健康、治療玻璃體後脫離(PVD)、糖尿病性潰瘍及纖維蛋白溶酶原缺陷型個體溶栓適應症(諸如冠狀動脈血栓形成)、治療組織之再灌注損傷、治療缺血、梗塞、腦水腫、用於改良微循環、治療纖維蛋白溶酶原缺陷型個體及調節補體途徑之量。劑量及治療有效量可例如視包括以下之多種因素而不同：之活性個體之年齡、體重、總體健康、性別及膳食；投藥次數、投藥途徑、排泄速率及任何藥物組合(若適用)、從業者希望化合物對個體具有之作用及個體罹患之特定病症。此外，治療有效量可取決於個體之血液參數(例如脂質型態、胰島素含量、血糖)、疾病狀態之嚴重性、器官功能或基礎疾病或併發症。此類適當劑量可使用包括本文所描述之分析的任何可獲得之分析來確定。當向人類投與本發明之醫藥組合物時，醫師可例如首先開出相對低劑量，隨後增加劑量直至獲得適當反應。所要投與之劑量將最終由醫師決定。

套組

可將本發明之化合物作為視情況包括容器(例如包裝、盒子、小瓶等)之套組的一部分加以包裝。套組可在商業上根據本文所描述之方法加以使用且可包括關於在本發明之方法中使用之說明。

本發明之組合物可能或可能不與另一活性成分同時、在其之前或之後且藉由相同投藥途徑或藉由另一投藥途徑向患者投與。因此，本發明亦涵蓋套組，該等套組當執業醫師使用時可使向患者單獨或與另一活性成分組合投與適當量之本發明組合物簡化。

本發明之套組可進一步包含用於凍幹組合物之複水的醫藥學上可接受之液體。舉例而言，若活性成分係以在非經腸投與時必須加以複水的固體形式提供，則套組可包含密封可溶解活性成分以形成適合用於非經腸投與之不含粒子之無菌溶液的適合的醫藥學上可接受之液體的容器。

在某些實施例中，本發明組合物含於用於單次或多次投與之小瓶、瓶子、管子、注射器或其他容器中。此類容器可例如由玻璃或諸如以下之聚合物材料製成：聚丙烯、聚乙烯、聚氯乙烯或聚烯烴。在一些實施例中，容器可包括密封件，或其他閉合系統，諸如針可穿透之橡膠塞，以抽出單次劑量且然後在針移除後再密封。所有此類用於可注射液體、凍幹組合物、複水凍幹組合物或此項技術中已知用於複水及注射之粉末的容器均預期用於目前所揭示之組合物及方法中。在一特定實施例中，容器為包含單次劑量或多次劑量之筆型傳送設備。此類筆型遞送設備可為永久性的，例如容納含有單次劑量或多次劑量之拋棄式藥筒的永久性筆，或者整個設備可為拋棄式的，例如含有單次劑量或多次劑量之拋棄式筆。在某些實施例中，其中筆型遞送設備包含多次劑量，劑量可為預置的，亦即，固定的。在其他實施例中，劑量可為靈活劑量，亦即，由用戶撥入。在一些實施例中，筆型遞送設備包含魯爾鎖(luer-lock)、魯爾錐(luer-cone)或促進連接拋棄式針頭之其他針頭配合連接件。在其他實施例中，筆型遞送設備包含押針(staked needle)，亦即永久性針頭。在另一特定實施例中，容器為注射器。在一些實施例中，注射器包含魯爾鎖、魯爾錐或促進連接拋棄式針頭之其他針頭配合連接件。在其他實施例中，注射器包含押針，亦即永久性針頭。在一些實施例中，注射器預裝填有單次劑量或多次劑量。

穩定性分析

「穩定」組合物包括如下組合物，在該等組合物中在儲存後其中之蛋白質(纖維蛋白溶酶原或其變異體)基本上保留其物理穩定性及/或化學穩定性及/或生物活性。用於量測蛋白質穩定性之各種分析技術為此項技術中可獲得的且綜述於例如Lee,V.,1991,Peptide and Protein Drug Delivery,247-301(Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.)及Jones,A.1993,Adv.Drug Delivery Rev.10：29-90中。穩定性可在所選溫度下在所選時間段內加以量測。在一實施例中，組合物在室溫(約25℃)下或在40℃下穩定至少1、2、3、4、5或6個月及/或在約2-8℃下穩定至少1、2、3、4、5或6個月。此外，在某些實施例中，組合物在冷凍(例如-30℃)後穩定。在某些實施例中，穩定性準則如下：(1)藉由目視分析組合物保留透明；(2)組合物之濃度、pH值及滲透壓改變不超過約±10%；(3)如藉由SEC-HPLC所量測，不超過約10%、不超過約5%或不超過約1%之聚集物形成；及(4)如藉由此項技術中已知且沿用已久之分析法所量測，不超過10%、不超過約5%或不超過3%之纖維蛋白溶酶原分解。

熱變性：針對纖維蛋白溶酶原或其變異體或其片段對HTS調配物進行篩選之熱變性實驗可使用來自Pall之Optim 2^TM；或用於監測蛋白質之去折疊的其他替代生物物理學技術(標準PCR(具有加熱塊)、螢光計或CD分光光度計(具有溫度控制件)來進行。作為實例，Optim 2系統同時量測一系列蛋白質穩定性指示參數，包括去折疊轉變溫度(Tm)、聚集發生溫度(Tagg)及聚集速率。

賦形劑對熱穩定性之影響：在更高熔融溫度(Tm)及聚集發生溫度(Tagg)情況下在最佳pH值範圍內確定窄pH值。若在6.5-7.5之生理範圍內獲得更高Tm；則接下來的測試為使用至少3種緩衝系統進行篩檢。

另外，可測試IEF(等電聚焦)或cIEF(毛細管等電聚焦)以評估溶液中纖維蛋白溶酶原之物理構象。

穩定化百分比基於在60℃下孵育1-8小時之後針對各緩衝液/賦形劑且針對僅含有纖維蛋白溶酶原之參比溶液的纖維蛋白溶酶原酶活性量測。在另一測試中，穩定化可在37℃下在1-8小時內加以評估。穩定化之百分比為如下計算：穩定化之百分比=100 x[S-T]/[T]

其中S為在600C下1-3天之後具有所要測試之賦形劑的酶溶液(TBD)之殘餘酶活性；且T為在相同條件下儲存之在不存在任何賦形劑情況下的參考值。

聚集及粒子量測計數(PMC)：PMC係藉由光線遮蔽粒子計數測試(Light Obscuration Particle Count Test)來計算。分析員應使用適合的儀器，其係基於光阻斷原理且其允許自動測定粒度及粒子數目。所選傳感器必須適合於預期粒度範圍及預期粒子計數。標準粒度範圍通常在2與100mm之間。分析員應使用分散於適當體積之不含粒子之水中的USP粒子計數RS驗證設備之效能。必須小心操作以避免在校準製程中在分散期間發生粒子聚結。

方法：將產物樣品以最適當代表遞送(例如排出之注射器內容物)之方式進行測試。對於具有足夠之體積(亦即體積大到足以促進測試)的非經腸物，測試個別單元往往有助於判斷。對於不具有足夠之體積的非經腸產物，小心且徹底地混合各單元，然後將適當數目之單元的內容物組合於單獨的容器中以獲得為單一測試所需之體積(通常0.2-5.0mL)。若進行稀釋，則確保空白容器具有對於產物及稀釋劑來說足夠的體積且在該製程中引進極少(如果有的話)粒子。小心打開各單元，移除密封閉合件，且在取樣、稀釋或(必要時)彙集之前避免污染內容物。當指定產物溶劑時，例如對於用於非經腸用途之凍幹固體或粉末，必須用適當量之指定溶劑進行複水或稀釋。在此情況下，可測試溶劑本身以確保其不為顯著粒子來源。不允許自總計數中扣除溶劑粒子計數。消除氣泡為關鍵步驟，尤其對於容易夾帶氣體之蛋白質產物而言。建議使用兩種方法：要麼允許產物流忍受環境壓力，要麼施加溫和(例如75托(Torr))真空。當被證實適合時，亦可使用其他方法。應避免超音處理。一旦樣品已脫氣，必須藉由適當手段(例如用手緩慢攪動容器)輕輕地但充分地混合樣品之內容物來將其輕輕地再混合以懸浮所有粒子。任何時候均不建議倒置混合產物流。在混合之後，立即抽出不少於四個等分試樣，各自之體積適合於儀器之容量(通常0.2-5.0mL)。計數所選尺寸範圍內之粒子的數目，包括等於或大於10及25mm之粒子。不管第一等分試樣所獲得之結果，且計算正在測試之製劑的剩餘等分試樣在各尺寸範圍內之平均粒子數目。皮體積亦可適用於對照取樣，其應代表傳感器動態範圍及針頭體積。

評估：FDA關於液體製劑中可接受之濁度水準之要求如下。對於作為供應於標稱含量小於或等於100mL之容器中的用於輸注或注射之治療性蛋白質注射劑之非經腸產品：存在於所測試單元中之平均粒子數目不應超過每個容器6000個等於或大於10μm，且不應超過每個容器600個等於或大於25μm。對於供應於標稱含量超過100mL之容器中的治療性蛋白質注射劑，及標稱含量超過100mL之非經腸輸注製劑或注射劑：存在於所測試單元中之平均粒子數目不應超過每毫升25個等於或大於10μm，且不應超過每毫升3個等於或大於25μm。另外，總粒子負荷不應超過每個容器6000個等於或大於10μm，且不應超過每個容器600個等於或大於25μm。在投與期間在最終過濾器(串聯)情況下使用之產品免於受此等要求限制，條件是可獲得科學資料證明免於受限制。然而，期望濾液符合該準則。對於所供應或首先於<100mL中複水且然後於>100mL之體積中稀釋以用於輸注之產品，應在稀釋之前與之後均評估粒子含量且基於其最終體積進行評估。

使用Optim-2^TM在476nm 600nm下藉由光散射或藉由標準UV分光光度計在UV下在350nm下量測之動力學研究：選擇諸如高溫(65℃)及酸性溶液pH值(4.5)或鹼性溶液pH值(9.5)之加速條件以更快速地篩選不同穩定化賦形劑。組合物之組分被評估為在1至4小時內在固定溫度(55-60℃)下隨時間變化增加Tagg。纖維蛋白溶酶原溶液之聚集動力學性質係在55-60℃下在長達4h內量測，裝備有溫度控制件(測定發生Tm)。針對賦形劑對如藉由光散射在267nm、467nm或350nm下所量測之纖維蛋白溶酶原聚集之抑制的影響對賦形劑進行篩選(Cheng,W.等人「Comparison of High-Throughput Biophysical Methods to Identify Stabilizing Excipients for a Model IgG2 Monoclonal Antibody：Conformational Stability and Kinetic Aggregation Measurements」Journal of Pharmaceutical Sciences，第101卷，第5期，第1701-1720頁，2012)。

蛋白質濃度對熱穩定性之影響：Optim-2^TM或雙重掃描螢光計(DSF，使用Sypro染料)之優點之一為在高度濃縮之蛋白質溶液中進行Tm及Tagg量測之能力。無論是研究潛在候選物之相對穩定性還是針對蛋白質穩定化對不同調配條件進行篩選，在可獲得之表徵方法的數量有限之情況下，識別在高濃度下蛋白質溶液之性質均可能為重要的。

調配組合物對最終滲透壓之影響：在最終醫藥組合物中，緩衝液、賦形劑及鹽濃度歸因於親本注射劑之實際限制而較佳不非常高。替代地，為獲得在240至400mOsm範圍內之滲透壓，更適度之濃度(諸如更生理)為較佳的。因此，計算滲透壓以在最初確定此範圍；然而，對於靜脈注射，若在複水之後纖維蛋白溶酶原或其變異體或片段由用於複水之溶液稀釋，則在開發冷凍乾燥方法期間亦可使用更高滲透壓濃度。

應注意，術語「調配物」及「組合物」可在本文中替換使用，且旨在命名相同對象。

本文中包括標題供參考且用於幫助定位某些部分。此等標題不旨在限制其中所描述概念之範疇，且此等概念可在整個說明書通篇中之其他部分中具適用性。因此，本發明不旨在限於本文所示之實施例，而是與符合本文所揭示之原理及新穎特徵的最寬範疇相一致。

除非上下文另外明確指示，否則單數形式「一(a/an)」及「該」包括相應複數參考物。

除非另外指出，否則本說明書及申請專利範圍中所用之所有表示成分之量、反應條件、濃度、性質等之數字應理解為在所有情況下由術語「約」修飾。最低限度地，各數值參數至少應根據具有所報導有效數位之數字且藉由應用一般舍入技術來理解。因此，除非指示為相反，否則本說明書及所附申請專利範圍中所闡述之數值參數為近似值，其可視設法獲得之性質而變化。儘管闡述實施例之廣泛範疇之數值範圍及參數為近似值，但特定實例中所闡述之數值為盡可能精確報導的。然而，任何數值固有地含有因實驗、測試量測、統計分析及此類因素之變化而產生之某些誤差。

應瞭解，本文所描述之實例及實施例僅用於說明性目的，且將向熟習此項技術者建議對其作出之各種修改或變化，且其應包括在本發明及隨附申請專利範圍之範疇內。

實例

以下實例進一步說明對本發明之實踐，但不旨在限制本發明。

實例1：冷凍調配物中之纖維蛋白溶酶原的穩定性

包含根據WO 2006/120423中所描述之結合親和力技術自血漿萃取之5mg/ml人類纖維蛋白溶酶原、10mM檸檬酸鹽、150mM NaCl之在pH 6.5下之醫藥組合物(批號：2002.pc02_Pg140210.01)的穩定性測試結果係儲存於-20℃、-30℃及-80℃持續長達6個月。穩定性資料表明纖維蛋白溶酶原在此等冷凍條件下穩定。纖維蛋白溶酶原批號：2002.pc02_Pg140210.01係在-20℃、-30℃及-80℃下測試。聚集水準係藉由SEC-HPLC研究，純度水準在還原以及非還原條件下藉由SDS-PAGE研究，活性水準藉由BCS活性研究，且蛋白質濃度藉由在280nm下之吸光度(ABS₂₈₀)研究。6個月之後的穩定性資料之結果證實所有穩定性指示分析均達成所需規格。

實例2：滲透壓分析及總固體百分比分析

調配物1至6之滲透壓及調配物1-9在凍幹之後的總固體百分比報導於表2中。調配物1-9之內容物規定於表1A中。

滲透壓在240-400mOsm之生理範圍內。所測試組合物之所得滲透壓有利地屬於或非常接近於生理範圍之滲透壓。對於所有組合物及安慰劑而言，總固體餅狀物百分比(每100ml凍幹前液體組合物在凍幹之後的固體組合物的公克數)為約4%，其在3.5至8%之較佳範圍內。

實例3：纖維蛋白溶酶原之分子量

經純化且調配於本發明之醫藥組合物中之纖維蛋白溶酶原之分子量具有87,000(MW)之分子量，其係藉由計算纖維蛋白溶酶原之一級胺基酸序列來確定且藉由質譜法加以驗證。

實例4：凍幹之後的餅狀物的外觀研究

已遵循表5中詳述之循環製程將調配物1至5凍幹。調配物1-5之內容物規定於表1中。

圖2至11為分別含有12.5ml調配物1至5或其相應安慰劑(在不存在纖維蛋白溶酶原之情況下)之小瓶的圖片。因此，已研究了纖維蛋白溶酶原之存在對組合物穩定性之影響。對已藉由凍幹製程形成之餅狀物的外觀的物理檢查。所有餅狀物均一直維持均勻密度，沒有任何變色。調配物2、3及5之安慰劑的測試小瓶之小於10%已提供熔融回縮。調配物1之安慰劑的測試小瓶之小於10%已崩潰。調配物1-5之安慰劑及調配物4之安慰劑的測試小瓶之小於10%已顯示底部收縮。餅狀物之外觀總體令人滿意。

組合物之內容物指示崩潰溫度。各純無定形賦形劑具有特徵Tg’及崩潰溫度；調配物之崩潰溫度為無定形相中所有組合物之質量平均溫度。設計一種具有最高崩潰溫度之調配物是重要的，因為在凍幹期間乾燥速率與樣品溫度成正比。

最後，若鹽(NaCl)及賦形劑未最大限度地結晶，則崩潰溫度將降低。舉例而言，甘胺酸具有-45℃之Tg’，且其對無定形相之貢獻可使崩潰溫度降至低得不適當的值。

實例5：胺基酸對溶液中之纖維蛋白溶酶原聚集的影響

單獨纖維蛋白溶酶原於水中產生FDA不可接受之大量纖維蛋白溶酶原聚集物，亦即10μm或更大者高於每100mL組合物6000個粒子(參見表6中之樣品F0406)。已研製出各種基於蔗糖之調配物來調配纖維蛋白溶酶原。雖然此等調配物大多數繼續達到每100mL組合物6000個10μm或更大之粒子的閾值，但已研製出含有更低粒子含量之調配物且本文中研究了胺基酸穩定纖維蛋白溶酶原之作用。此等其他調配物含有10mg之纖維蛋白溶酶原及35mM NaCl，且已測試三種緩衝液/pH值，亦即10mM檸檬酸鈉(pH值6.5)、10mM磷酸鈉(pH值7.2)及10mM Tris HCl(pH值8.0)。已比較存在與不存在0.5%濃度之選自精胺酸、丙胺酸、及甘胺酸之按基酸的情況。所測試調配物為新鮮的，亦即在凍幹之前。胺基酸之存在已證實穩定作用有助於降低聚集水準。

實例6：甘露糖醇與胺基酸組合對纖維蛋白溶酶原聚集之影響

已測試在存在及不存在胺基酸(0.5%精胺酸鹽酸鹽、丙胺酸或甘胺酸)之情況下，增積劑(0.5%甘露糖醇)之存在對含有10mg纖維蛋白溶酶原及35mM NaCl加上10mM檸檬酸鈉(pH 6.5)、10mM磷酸鈉(pH 7.2)或10mM Tris HCL(pH 8.0)之調配物且報導於表7中。在此研究中測試新鮮調配物(凍幹之前)。一般而言，甘露糖醇之存在使粒子計數降低。一般而言，甘露糖醇與胺基酸之組合有助於降低粒子計數，且尤其在精胺酸與甘露糖醇組合之情況下。

實例7：防腐劑對纖維蛋白溶酶原聚集之影響

已在含有9或10mg纖維蛋白溶酶原及35mM NaCl加上10mM檸檬酸鈉(pH 6.5)、10mM磷酸鈉(pH 7.2)或10mM Tris HCL(pH 8.0)加上0.5%精胺酸鹽酸鹽或0.5%精胺酸鹽酸鹽與0.5%甘露糖醇之組合的調配物中測試了防腐劑(諸如0.1%苯酚)之存在。在此研究中測試新鮮調配物(凍幹之前)。粒子計數(PMC)已報導於表8中。有利地，苯酚之存在未顯著影響粒子計數。

比較了若干防腐劑。表9報導對在含有10mg纖維蛋白溶酶原及35mM NaCl加上10mM檸檬酸鈉(pH 6.5)、10mM磷酸鈉(pH 7.2)或10mM Tris HCL(pH 8.0)及0.5%精胺酸鹽酸鹽之調配物內之0.5% CMC、0.1%苯酚及0.5%右旋糖酐之比較。在此研究中測試新鮮調配物(凍幹之前)。右旋糖酐或苯酚之存在未顯著影響聚集。然而，CMC使聚集顯著增加。此不令人驚訝，因為CMC已知增加溶液之黏度且經常用於製備滴眼劑調配物。

實例8：胺基酸及其濃度對纖維蛋白溶酶原聚集之影響

在纖維蛋白溶酶原10mg/mL、35mM NaCl、10mM磷酸鈉(NaPi)(pH7.2)之調配物中在凍幹及複水之後測試了0.5%及1%之精胺酸。粒子計數(PMC)報導於表10中，其表明兩種濃度之精胺酸用於維持低PMC值非常好。

在纖維蛋白溶酶原10mg/mL、35mM NaCl、10mM磷酸鈉(NaPi)(pH值7.2)之調配物中在凍幹及複水之後，對1%之精胺酸、甘胺酸及丙胺酸進行了比較。粒子計數(PMC)報導於表11中，其表明精胺酸在測試條件下用於維持低PMC值優於丙胺酸及甘胺酸，不過所有此等三種胺基酸均提供可接受之PMC值，亦即每10mL不到6000個等於或大於10μm之粒子。

實例9：總固體百分比及滲透壓

10mg/mL纖維蛋白溶酶原之若干調配物之滲透壓及用於製備該等調配物之固體物質的百分比報導於表12中。20mg/mL纖維蛋白溶酶原之若干調配物之滲透壓及用於製備該等調配物之固體物質的百分比報導於表13中。所測試調配物之所得滲透壓有利地屬於或非常接近於生理範圍之滲透壓。總固體物質百分比係由纖維蛋白溶酶原、其中之張力調節劑及增積劑之含量來計算，且為凍幹之後所得餅狀物之尺寸的良好指示。

實例10：粒子計數(PMC)

表12中所描述之調配物的關於等於或大於10μm之粒子的粒子計數(PMC)報導於表14中；且表13中所描述之調配物的關於等於或大於10μm之粒子的粒子計數(PMC)報導於表15中。

實例10：可逆纖維蛋白溶酶原聚集

如由此研究所證實，纖維蛋白溶酶原聚集為可逆的。將於dH2O中滲析且嚴重沈澱之冷凍纖維蛋白溶酶原樣品(Pg原液)5mg/ml解凍，經由1.2μm注射器過濾器過濾，且用作對照(Pg對照對照)之起始物質。將2ml Pg對照之等分試樣添加至玻璃小瓶中，分別預先外加1M檸檬酸鈉pH6.5(樣品1)、0.5M磷酸鈉pH7.2(樣品2)或1M Tris-HCl pH8.0(樣品3)緩衝儲備液以在各pH值下獲得最終10mM緩衝液濃度。樣品1、2及3顯示於圖13中，其中未外加Pg對照為樣品0。樣品1、2及3進一步外加5M NaCl及0.8M精胺酸之儲備溶液，以在各樣品中獲得35mM NaCl及28.5mM(0.5%)Arg之最終濃度且顯示於圖14中。在圖13及14中分別使用0.02、20、100、800NTU之濁度標準液作為參考。由圖13可注意到pH值調節已溶解大量聚集物。在圖14中，藉由添加精胺酸及NaCl使得樣品1、2及3透明，且視覺不可偵測到聚集物。

圖14之樣品0、1、2及3之濁度係藉由讀出550nm下之光密度(OD)來量測。濁度係以比濁法濁度單位(Nephelometric Turbidity Unit，NTU)報導於表16中。在對樣品1、2及3外加緩衝液、NaCl及精胺酸之前(T=0)及之後在0.1小時、17小時及24小時時量測1ml各樣品之等分試樣。解聚作用為快速的，因為其僅可在外加之後0.1小時時被注意到，且其維持歷時24小時。

實例11：纖維蛋白溶酶原活性

對本文所例示之各調配物之纖維蛋白溶酶原活性進行測試且與初始製劑或原液製劑(Pg原液)之纖維蛋白溶酶原活性相比較。已注意到纖維蛋白溶酶原活性不受此等調配物中之任一者影響。

Claims

一種醫藥組合物，其包含：- 纖維蛋白溶酶原，或其生物活性變異體；- 張力調節劑；- 增積劑；及- 穩定劑；其中該組合物具有約3.0至約10.0之pH值。
如請求項1之醫藥組合物，其中該pH值為5.0至8.0；或6.0至8.0；或6.5至7.5。
如請求項1之醫藥組合物，其中該纖維蛋白溶酶原或其生物活性變異體之濃度為約0.01mg/ml至約80mg/ml，或約5mg/ml至約40mg/ml。
如請求項3之醫藥組合物，其中該纖維蛋白溶酶原或其生物活性變異體之濃度為約40、30、20、10或5mg/ml。
如請求項1至4中任一項之醫藥組合物，其中該纖維蛋白溶酶原或其生物活性變異體佔該組合物之總蛋白含量之至少80%或該組合物之總蛋白含量之超過90%。
如請求項5之醫藥組合物，其中該纖維蛋白溶酶原或其生物活性變異體佔該組合物之總蛋白含量之超過95或98%。
如請求項1至6中任一項之醫藥組合物，其中該張力調節劑為氯化鈉、氯化鈣、氯化鎂、蔗糖、海藻糖、山梨糖醇、甘露糖醇、甘油、乳糖、山梨糖醇、右旋糖、環糊精、棉子糖、聚乙二醇、羥乙基澱粉、甘胺酸麩胺酸、丙胺酸、右旋糖酐、PVP(聚乙烯吡咯啶酮)或其任何組合。
如請求項7之醫藥組合物，其中該張力調節劑為氯化鈉。
如請求項1至8中任一項之醫藥組合物，其中該張力調節劑係以約30mM至約250mM之濃度存在。
如請求項9之醫藥組合物，其中該張力調節劑係以約35mM之濃度存在。
如請求項1至10中任一項之醫藥組合物，其中該增積劑為甘胺酸、麩胺酸、丙胺酸、甘露糖醇、山梨糖醇、羥乙基澱粉、右旋糖酐、PVP(聚乙烯吡咯啶酮)、甘露糖醇、聚乙二醇、山梨糖醇或其任何組合。
如請求項11之醫藥組合物，其中該增積劑為甘露糖醇或山梨糖醇。
如請求項1至12中任一項之醫藥組合物，其中該增積劑呈約50mM至約300mM之濃度。
如請求項13之醫藥組合物，其中該增積劑呈約54或約108mM之濃度。
如請求項1至14中任一項之醫藥組合物，其中該穩定劑包含(i)胺基酸，(ii)胺基酸鹽，(ii)胺基酸類似物，或(iv)(i)、(ii)及/或(iii)之任何混合物，其中該胺基酸、胺基酸鹽或胺基酸類似物為精胺酸鹽酸鹽、脯胺酸、麩胺酸、天冬胺酸、甘胺酸、丙胺酸、半胱胺酸、離胺酸鹽酸鹽、離胺酸類似物或ε-胺基已酸。
如請求項15之醫藥組合物，其中該穩定劑為精胺酸鹽酸鹽。
如請求項1至16中任一項之醫藥組合物，其中該穩定劑呈約20mM至約200mM之濃度。
如請求項17之醫藥組合物，其中該穩定劑呈約25mM至約75mM之濃度。
如請求項1至17中任一項之醫藥組合物，其進一步包含還原糖。
如請求項19之醫藥組合物，其中該還原糖為果糖、甘露糖、麥芽糖、乳糖、阿拉伯糖、木糖、核糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖、蔗糖或其任何組合。
如請求項1至20中任一項之醫藥組合物，其進一步包含非還原糖。
如請求項21之醫藥組合物，其中該非還原糖為蔗糖、海藻糖、山梨糖、蜜三糖、棉子糖或其任何組合。
如請求項1至22中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物具有約180mOsm與約350mOsm之間的滲透壓。
如請求項1至23中任一項之醫藥組合物，其進一步包含抗氧化劑。
如請求項24之醫藥組合物，其中該抗氧化劑為甲硫胺酸、氧化型麩胱甘肽(Glu-Cys-Gly)₂(613kDa)、抗壞血酸或其任何組合。
如請求項24或25之醫藥組合物，其中該抗氧化劑之濃度為約10mM至約200mM。
如請求項1至26中任一項之醫藥組合物，其進一步包含界面活性劑。
如請求項27之醫藥組合物，其中該界面活性劑為Polysorbate® 80、Polysorbate® 20、Pluronic® F-68或Brij® 35、泊洛沙姆、泊洛沙姆188、Pluronic® F-68、Triton®；十二烷基硫酸鈉(SDS)；月桂基硫酸鈉；辛基糖苷鈉；月桂基-磺基甜菜鹼、肉豆寇基-磺基甜菜鹼、亞油烯基-磺基甜菜鹼或硬脂基-磺基甜菜鹼；月桂基-肌胺酸、肉豆寇基-肌胺酸、亞油烯基-肌胺酸或硬脂基-肌胺酸；亞油烯基-甜菜鹼、肉豆寇基-甜菜鹼或鯨蠟基-甜菜鹼；月桂醯胺丙基-甜菜鹼、椰油醯胺丙基-甜菜鹼、亞油醯胺丙基-甜菜鹼、肉豆蔻醯胺丙基-甜菜鹼、棕櫚醯胺丙基-甜菜鹼或異硬脂醯胺丙基-甜菜鹼(例如月桂醯胺丙基)；肉豆蔻醯胺丙基-二甲胺、棕櫚醯胺丙基-二甲胺或異硬脂醯胺丙基-二甲胺；甲基椰油醯基-牛磺酸鈉或甲基油烯基-牛磺酸二鈉；MONAQUAT^TM系列之界面活性劑(Mona Industries,Inc.,Paterson,N.J.)、聚乙二醇、聚丙二醇或乙二醇及丙二醇之共聚物或其任何組合。
如請求項27或28之醫藥組合物，其中該界面活性劑係以約0.002%至約0.02%(w/v)之濃度存在於該組合物中。
如請求項1至29中任一項之醫藥組合物，其進一步包含聚合穩定劑。
如請求項30之醫藥組合物，其中該聚合穩定劑為肝素(6至30kDa)；聚胺基酸(2至100kDa)，諸如聚(Glu)、聚(Asp)及聚(Glu，Phe)；環糊精；或右旋糖酐硫酸鹽。
如請求項30或31之醫藥組合物，其中該聚合穩定劑之濃度為約0.001%至約0.50%。
如申請專利範圍第1項至第32項中任一項之醫藥組合物，其進一步包含聚乙二醇。
如請求項33之醫藥組合物，其中該聚乙二醇為PEG 200、PEG 400、PEG 1000、PEG 4000、PEG 8000、PEG 10 000或其任何組合。
如請求項33或34之醫藥組合物，其中該聚乙二醇之濃度為約0.5%至約10%(w/w)。
如請求項1至35中任一項之醫藥組合物，其進一步包含防腐劑。
如請求項36之醫藥組合物，其中該防腐劑為間甲酚、苯甲醇、甲醇、乙醇、異丙醇、對羥基苯甲酸丁酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸甲酯、苯酚、甘油、木糖醇、間苯二酚、兒茶酚、2,6-二甲基環己醇、2-甲基-2,4-戊二醇、右旋糖酐、聚乙烯吡咯啶酮、2-氯酚、苄索氯銨、硫柳汞(硫汞撒)、苯甲酸(對羥苯甲酸丙酯)MW 180.2、苯甲酸MW 122.12、苯紮氯銨、氯丁醇、苯甲酸鈉、丙酸鈉、氯化十六烷吡啶或其任何組合。
如請求項36或37之醫藥組合物，其中該防腐劑之濃度為約0.005至約10%(w/v)。
如請求項1至38中任一項之醫藥組合物，其中該組合物包含纖維蛋白溶酶原。
如請求項1至39中任一項之醫藥組合物，其中該纖維蛋白溶酶原為人類纖維蛋白溶酶原且超過90%由Glu-纖維蛋白溶酶原構成。
如請求項1至40中任一項之醫藥組合物，其中該組合物含有低於每100ml 6000個粒子之量的等於或大於10μm的粒子。
如請求項41之醫藥組合物，其中該組合物含有低於每100ml 2000或1000個粒子之量的等於或大於10μm的粒子。
如請求項1至42中任一項之醫藥組合物，其適合用於靜脈內、皮下、局部、真皮內、眼部及/或肌肉內投與。
如請求項1至43中任一項之醫藥組合物，其為液體組合物、適合於凍幹之液體組合物、適合於冷凍之液體組合物、凍幹組合物、冷凍組合物或複水組合物。
如請求項1至44中任一項之醫藥組合物，其為液體、凝膠、乳膏或軟膏。
如請求項1至45中任一項之醫藥組合物，其中纖維蛋白溶酶原或其生物活性變異體為Glu-纖維蛋白溶酶原。
如請求項1至45中任一項之醫藥組合物，其係用作藥劑。
一種包含纖維蛋白溶酶原或其生物活性變異體之醫藥組合物，其含有低於每100ml 6000個粒子之量的等於或大於10μm的呈懸浮形式之粒子。
如請求項48之醫藥組合物，其中該組合物含有低於每100ml 2000或1000個粒子之量的等於或大於10μm的呈懸浮形式之粒子。
如請求項48或49之醫藥組合物，其進一步包含穩定劑，該穩定劑包含(i)胺基酸，(ii)胺基酸鹽，(ii)胺基酸類似物，或(iv)(i)、(ii)及/或(iii)之任何混合物，其中該胺基酸、胺基酸鹽或胺基酸類似物為精胺酸鹽酸鹽、脯胺酸、麩胺酸、天冬胺酸、甘胺酸、丙胺酸、半胱胺酸、離胺酸鹽酸鹽、離胺酸類似物或ε-胺基已酸。
如請求項50之醫藥組合物，其中該穩定劑為精胺酸鹽酸鹽。
如請求項50或51之醫藥組合物，其中該穩定劑呈約25mM至約75mM之濃度。
如請求項48至52中任一項之醫藥組合物，其中該纖維蛋白溶酶原或其生物活性變異體之濃度為約5mg/ml至約40mg/ml。
如請求項48至53中任一項之醫藥組合物，其中該纖維蛋白溶酶原或其生物活性變異體佔該組合物之總蛋白含量之超過95或98%。
如請求項48至54中任一項之醫藥組合物，其進一步包含張力調節劑，該張力調節劑為氯化鈉、氯化鈣、氯化鎂、蔗糖、海藻糖、山梨糖醇、甘露糖醇、甘油、乳糖、山梨糖醇、右旋糖、棉子糖、聚乙二醇、羥乙基澱粉、甘胺酸麩胺酸、丙胺酸、右旋糖酐、PVP(聚乙烯吡咯啶酮)或其任何組合。
如請求項55之醫藥組合物，其中該張力調節劑為氯化鈉。
如請求項55或56之醫藥組合物，其中該張力調節劑以約30mM至約250mM之濃度存在。
如請求項48至57中任一項之醫藥組合物，其進一步包含增積劑，該增積劑為甘胺酸、麩胺酸、丙胺酸、甘露糖醇、山梨糖醇、羥乙基澱粉、右旋糖酐、PVP(聚乙烯吡咯啶酮)、甘露糖醇、聚乙二醇、山梨糖醇或其任何組合。
如請求項58之醫藥組合物，其中該增積劑為甘露糖醇或山梨糖醇。
如請求項58或59之醫藥組合物，其中該增積劑呈約50mM至約300mM之濃度。
如請求項48至60中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物具有約180mOsm與約350mOsm之間的滲透壓。
如請求項48至61中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物具有約 6.5至約7.5之pH值。
如請求項48至62中任一項之醫藥組合物，其中纖維蛋白溶酶原或其生物活性變異體為Glu-纖維蛋白溶酶原。
如請求項48至63中任一項之醫藥組合物，其係用作藥劑。