TW201536774A - 經取代之四氫咔唑及咔唑甲醯胺化合物 - Google Patents

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Abstract

本發明揭示式(I)化合物， □其中：兩個虛線表示兩個單鍵或兩個雙鍵；Q係： □ R1係F、Cl、-CN或-CH3；R2係Cl或-CH3；R3係-C(CH3)2OH或-CH2CH2OH；Ra係H或-CH3；各Rb獨立地係F、Cl、-CH3及/或-OCH3；且n係0、1或2。本發明亦揭示使用該等化合物作為布魯頓氏酪胺酸激酶(Bruton's tyrosine kinase，Btk)之抑制劑之方法，及包含該等化合物之醫藥組合物。該等化合物可用於治療、預防各種治療領域中之疾病或病症(例如自體免疫疾病及血管疾病)或減緩其進展。

Description

經取代之四氫咔唑及咔唑甲醯胺化合物
本發明概言之係關於可用作激酶抑制劑之經取代之四氫咔唑及咔唑甲醯胺化合物，包括調節布魯頓氏酪胺酸激酶(Bruton's tyrosine kinase，Btk)及其他Tec家族激酶(例如Itk)。本文提供經取代之四氫咔唑及咔唑甲醯胺化合物，包含該等化合物之組合物，及其使用方法。本發明進一步係關於可用於治療與激酶調節相關之病況之含有至少一種本發明化合物之醫藥組合物及抑制哺乳動物之激酶(包括Btk及其他Tec家族激酶(例如Itk))之活性之方法。
蛋白激酶(人類酶之最大家族)涵蓋大大超過500種蛋白質。Btk係酪胺酸激酶之Tec家族之成員，且其係早期B細胞發育以及成熟B細胞活化、信號傳導及存活之調控劑。
藉助B細胞受體(BCR)之B細胞信號傳導引起廣泛的生物學輸出，該等輸出又依賴於B細胞之發育階段。必須精確調控BCR信號之量值及持續時間。異常BCR介導之信號傳導可造成B細胞活化失調及/或病原自體抗體形成，從而導致多種自體免疫及/或發炎性疾病。人類Btk之突變可造成X連鎖無γ球蛋白血症(X-linked agammaglobulinaemia，XLA)。此疾病與在BCR刺激時B細胞成熟受損、免疫球蛋白產生減少、T細胞非依賴性免疫反應受損及持續鈣信號顯著衰減相關。
已在Btk缺陷型小鼠模型中確立Btk在過敏病症及/或自體免疫疾 病及/或發炎性疾病中之作用之證據。例如，在標準鼠類全身性紅斑狼瘡(SLE)臨床前模型中，Btk缺陷已顯示可顯著改善疾病進展。此外，Btk缺陷小鼠亦抵抗發生膠原蛋白誘導型關節炎且其較不易於發生葡萄球菌(Staphylococcus)誘導型關節炎。
許多證據支援B細胞及體液免疫系統在自體免疫及/或發炎性疾病之發病機制中之作用。經研發以耗竭B細胞之基於蛋白質之治療(例如RITUXAN®)代表用於治療多種自體免疫及/或發炎性疾病之重要方式。由於Btk在B細胞活化中之作用，故Btk之抑制劑可用作B細胞介導之病原活性(例如自體抗體產生)之抑制劑。
Btk亦在肥大細胞及單核球中表現且其已顯示對於該等細胞之功能係重要的。例如，小鼠中之Btk缺陷與IgE介導之肥大細胞活化受損(TNF-α及其他發炎細胞因子釋放顯著減少)相關，且人類中之Btk缺陷與藉由單核球活化而使TNF-α之產生減少非常相關。
因此，對Btk活性之抑制可用於治療過敏病症及/或自體免疫及/或發炎性疾病，包括(但不限於)：SLE、類風濕性關節炎、多發性血管炎、特發性血小板減少性紫癜(ITP)、重症肌無力、過敏性鼻炎、多發性硬化(MS)、移植排斥、I型糖尿病、膜性腎炎、發炎性腸病、自體免疫溶血性貧血、自體免疫甲狀腺炎、冷凝集素及溫凝集素疾病、伊文氏症候群(Evans syndrome)、溶血性尿毒候群/栓塞性血小板減少性紫癜(HUS/TTP)、類肉瘤病、修格連氏症候群(Sjögren's syndrome)、周邊神經病變(例如，格林-巴利症候群(Guillain-Barre syndrome))、尋常性天皰瘡及氣喘。
此外，已報導Btk在某些B細胞癌症中控制B細胞之存活起作用。例如，已顯示Btk對於BCR-Abl陽性B細胞急性淋巴母細胞性白血病細胞之存活係重要的。因此，對Btk活性之抑制可用於治療B細胞淋巴瘤及白血病。
鑒於預計藉由涉及蛋白激酶之調節之治療而受益之多種病況，可立即明瞭能夠調節蛋白激酶(例如Btk)之新化合物及使用該等化合物之方法應為多種患者提供實質治療益處。
美國專利第8,084,620號及WO 2011/159857揭示可用作激酶抑制劑之三環甲醯胺化合物，包括調節Btk及其他Tec家族激酶。
業內仍需要可用作Btk抑制劑而具有超過Jak2酪胺酸激酶之選擇性之化合物。另外，業內仍需要具有超過Jak2酪胺酸激酶之選擇性且亦已在全血BCR刺激之CD69表現分析中改良效能之可用作Btk抑制劑之化合物。
申請者已發現作為Btk抑制劑具有活性之有效化合物。另外，申請者已發現作為Btk抑制劑具有活性且具有超過Jak2酪胺酸激酶之選擇性之化合物。另外，申請者已發現作為Btk抑制劑具有活性、具有超過Jak2酪胺酸激酶之選擇性且已在全血BCR刺激之CD69表現分析中改良效能之化合物。該等化合物經提供可用作具有合意之穩定性、生物利用度、治療指數及毒性值之醫藥，該等性質對其可藥性至關重要。
本發明提供經取代之四氫咔唑及咔唑化合物，該等化合物可用作Btk之抑制劑且可用於治療增殖性疾病、過敏疾病、自體免疫疾病及發炎性疾病，包括其前藥。
本發明亦提供包含至少一種式(I)化合物及醫藥上可接受之載劑之醫藥組合物。
本發明亦提供抑制Btk活性之方法，其包含向有需要之哺乳動物投與至少一種式(I)化合物。
本發明亦提供治療過敏病症及/或自體免疫及/或發炎性疾病之方法，其包含向有需要之哺乳動物投與至少一種式(I)化合物。
本發明亦提供治療增殖性疾病(例如癌症)之方法，其包含向有需要之哺乳動物投與至少一種式(I)化合物。
本發明亦提供治療與Btk活性相關之疾病或病症之方法，該方法包含向有需要之哺乳動物投與至少一種式(I)化合物。
本發明亦提供用於製備式(I)化合物之製程及中間體。
本發明亦提供式(I)化合物，其用於療法中。
本發明亦提供式(I)化合物之用途，其用於製造用以治療或預防Btk相關性病況(例如增殖性疾病、過敏疾病、自體免疫疾病及發炎性疾病)之醫藥。
本發明亦提供式(I)化合物之用途，其用於製造用以治療癌症之醫藥。
式(I)化合物及包含式(I)化合物之組合物可用於治療、預防或治癒各種Btk相關性病況。包含該等化合物之醫藥組合物可用於治療、預防各種治療領域中之疾病或病症(例如增殖性疾病、過敏疾病、自體免疫疾病及發炎性疾病)或減緩其進展。
隨著本揭示內容之繼續，可以展開形式闡述本發明之該等及其他特徵。
藉由參照下文所闡述之附圖來闡釋本發明。
圖1顯示中間體30乙醯乙酸溶劑合物之絕對立體化學。
圖2顯示中間體35之絕對立體化學。
圖3顯示實例2甲醇合物晶體形式M-1之絕對立體化學。
圖4顯示實例11甲醇合物晶體形式M-1之絕對立體化學。
圖5顯示實例28二甲醇合物晶體形式M2-1之絕對立體化學。
圖6顯示實例33二甲醇合物晶體形式M2-1之絕對立體化學。
圖7顯示實例11單水合物晶體形式H-1在室溫下之實驗及模擬 PXRD圖案(Cu Kα輻射λ=1.5418Å)。
圖8顯示實例11之晶體形式N-2在室溫下之模擬PXRD圖案(Cu Kα輻射λ=1.5418Å)。
圖9顯示實例11甲醇合物晶體形式M-1在室溫下之實驗及模擬PXRD圖案(Cu Kα輻射λ=1.5418Å)。
圖10顯示實例28二甲醇合物晶體形式M2-1在173K下之模擬PXRD圖案(Cu Kα輻射λ=1.5418Å)。
圖11顯示實例33二甲醇合物晶體形式M2-1在室溫下之實驗PXRD圖案及在173K下之模擬PXRD圖案(Cu Kα輻射λ=1.5418Å)。
本發明之第一態樣提供至少一種式(I)化合物：
其中：兩個虛線表示兩個單鍵或兩個雙鍵；Q係：、、或；R1係F、Cl、-CN或-CH3；R2係Cl或-CH3； R3係-C(CH3)2OH或-CH2CH2OH；Ra係H或-CH3；每一Rb獨立地係F、Cl、-CH3及/或-OCH3；且n為0、1或2。
構型異構物係得自關於單鍵軸之位阻旋轉之立體異構物，其中旋轉障壁高至足以允許分離個別旋轉異構物。(LaPlante等人，J.Med.Chem.,54：7005-7022(2011))。
式(A)化合物：
具有兩個立體軸：三環四氫咔唑/咔唑基團與苯基之間之鍵(a)；及不對稱雜環二酮基團Q與苯基之間之鍵(b)。由於藉由標記a及b之單鍵連接之環上之取代具有不對稱性質，且由於藉由位阻造成之關於該等鍵之旋轉受限，故式(A)化合物可形成旋轉異構物。若旋轉能量障壁足夠高，則關於鍵(c)及/或鍵(b)之位阻旋轉係以慢至足以使所分離構型異構物分離為不同化合物之速率發生。因此，式(A)化合物可形成四種旋轉異構物，可在某些條件下(例如在對掌性固定相上進行層析)將該等異構物分離為個別構型異構物。在溶液中，式(A)化合物可作為四種非鏡像異構物之混合物或兩對非鏡像異構物之混合物或單一構型異構物提供。
對於式(A)化合物，藉由關於立體軸(a)之位阻旋轉形成之旋轉異 構物對可藉由具有以下結構之式(I)化合物及式(B)化合物來表示：
發現式(I)化合物及式(B)化合物係可分離的且其在環境溫度及生理溫度下在溶液中係穩定的。另外，藉由關於立體軸(b)之位阻旋轉形成旋轉異構物。亦發現式(I)化合物之該兩種構型異構物係可分離的且其在環境溫度及生理溫度下在溶液中係穩定的。
可藉由各種技術(包括超臨界流體層析(SFC))分離諸如式(A)化合物等對掌性化合物。SFC係呈正相HPLC形式，其係使用超臨界/次臨界流體CO2及極性有機改質劑(例如醇)作為流動相之分離技術。(White等人，J.Chromatography A,1074：175-185(2005))。
其中Q係之式(I)化合物可藉由式(II)之結構表示：
其中Q係之式(A)化合物之四種旋轉異構物可藉由具有式(II-1)及(II-2)之結構之式(II)化合物：
及具有式(B-1)及(B-2)之結構之式(B)化合物表示：
其中Q係之式(I)化合物可藉由式(III)之結構表示：
其中Q係之式(A)化合物之四種旋轉異構物可藉由具有式(III-1)及(III-2)之結構之式(III)化合物：
及具有式(B-3)及(B-4)之結構之式(B)化合物表示：
其中Q係之式(I)化合物可藉由式(IV)之結構表示：
其中Q係之式(A)化合物之四種旋轉異構物可藉由具有式(IV-1)及(IV-2)之結構之式(IV)化合物：
及具有式(B-5)及(B-6)之結構之式(B)化合物表示：
其中Q係之式(I)化合物可藉由式(V)之結構表示：
其中Q係之式(A)化合物之四種旋轉異構物可藉由具有式(V-1)及(V-2)之結構之式(V)化合物：
及具有式(B-7)及(B-8)之結構之式(B)化合物表示：
可藉由單一晶體x射線結晶學確定構型異構物之絕對空間組態。
式(I)化合物可作為個別構型異構物或作為包含式(I)之兩種構型異構物呈任何比例之混合物提供。式(I)之兩種構型異構物之混合物可視情況含有呈任何比例之式(B)之一或兩種構型異構物。
其中R1係F、Cl或-CH3之式(I)化合物對應於相對於鍵(a)形成之立體軸之(R)-構型異構物。其中R1係F、Cl或-CH3之式(B)化合物對應於相對於鍵(a)形成之立體軸之(S)-構型異構物。
其中R1係-CN之式(I)化合物對應於相對於鍵(a)形成之立體軸之(S)-構型異構物。其中R1係-CN之式(B)化合物對應於相對於鍵(a)形成之立體軸之(R)-構型異構物。
如本文所使用，片語「兩個虛線表示兩個單鍵或兩個雙鍵」係指其中兩個虛線同時為單鍵或兩個虛線同時為雙鍵之式(A)、(B)、(I)、(II)、(III)、(IV)及(V)之化合物。例如，其中兩個虛線同時為單鍵之式(I)化合物係具有式(IA)之結構之四氫咔唑化合物，且其中兩個虛線同時為雙鍵之式(I)化合物係具有式(IB)之結構之咔唑化合物：
藉由式(IA)表示之四氫咔唑化合物亦在附接取代基R3之碳原子處具有對掌性中心，且因此其可作為於此對掌性中心處之S-異構物及R-異構物存在。
該等異構物係可分離的且係穩定的。一個實施例提供作為S-異構物之具有附接R3取代基之碳對掌性中心之式(IA)化合物。一個實施例提供作為R-異構物之具有附接R3取代基之碳對掌性中心之式(IA)化合物。
一個實施例提供式(I)化合物，其中R3係-C(CH3)2OH；且R1、R2及Q係如第一態樣中所定義。其中Q係：或且Ra、Rb及n係如第一態樣所定義之化合物包括在此實施例內。式(IA)化合物亦包括在此實施例內。式(IB)化合物係包括在 此實施例內之其他化合物。
一個實施例提供式(II)化合物，其中R3係-C(CH3)2OH；且R1、R2、Ra、Rb及n係如第一態樣中所定義。其中Ra係-CH3(包括-CD3)之化合物包括在此實施例內。
一個實施例提供式(III)化合物，其中R3係-C(CH3)2OH；且R1、R2、Rb及n係如第一態樣中所定義。其中每一Rb獨立地係F或Cl之化合物包括在此實施例內。
一個實施例提供式(IV)化合物，其中R3係-C(CH3)2OH；且R1及R2係如第一態樣中所定義。其中R1係F、Cl或-CH3之化合物包括在此實施例內。
一個實施例提供式(V)化合物，其中R3係-C(CH3)2OH；且R1及R2係如第一態樣中所定義。其中R1係F、Cl或-CH3之化合物包括在此實施例內。
一個實施例提供其中R1係F之式(I)化合物。式(IA)化合物包括在此實施例內。式(IB)化合物係包括在此實施例內之其他化合物。
一個實施例提供其中R1係Cl之式(I)化合物。式(IA)化合物包括在此實施例內。式(IB)化合物係包括在此實施例內之其他化合物。
一個實施例提供其中R1係F或Cl之式(I)化合物。式(IA)化合物包括在此實施例內。式(IB)化合物係包括在此實施例內之其他化合物。
一個實施例提供其中R1係-CH3之式(I)化合物。式(IA)化合物包括在此實施例內。式(IB)化合物係包括在此實施例內之其他化合物。
一個實施例提供其中R1係-CN之式(I)化合物。式(IA)化合物包括在此實施例內。式(IB)化合物係包括在此實施例內之其他化合物。
一個實施例提供其中R1係F、Cl或-CN之式(I)化合物。式(IA)化合物包括在此實施例內。式(IB)化合物係包括在此實施例內之其他化合物。
一個實施例提供其中R1係-CH3或-CN之式(I)化合物。式(IA)化合物包括在此實施例內。式(IB)化合物係包括在此實施例內之其他化合物。
一個實施例提供其中R1係F、Cl或-CH3之式(I)化合物。式(IA)化合物包括在此實施例內。式(IB)化合物係包括在此實施例內之其他化合物。
一個實施例提供其中R2係Cl之式(I)化合物。式(IA)化合物包括在此實施例內。式(IB)化合物係包括在此實施例內之其他化合物。另外，其中R3係-C(CH3)2OH之化合物包括在此實施例內。
一個實施例提供其中R2係-CH3之式(I)化合物。式(IA)化合物包括在此實施例內。式(IB)化合物係包括在此實施例內之其他化合物。另外，其中R3係-C(CH3)2OH之化合物包括在此實施例內。
一個實施例提供其中R3係-C(CH3)2OH之式(I)化合物。式(IA)化合物包括在此實施例內。式(IB)化合物係包括在此實施例內之其他化合物。
一個實施例提供其中每一Rb獨立地係F及/或Cl之式(I)化合物。其中n係1或2之化合物包括在此實施例內。其中n係2且每一Rb係F之化合物亦包括在此實施例內。
一個實施例提供其中n係1且Rb係-CH3或-OCH3之式(I)化合物。
一個實施例提供其中n係0之式(I)化合物。式(IA)化合物包括在此實施例內。式(IB)化合物係包括在此實施例內之其他化合物。
一個實施例提供式(II)化合物，其中兩個虛線同時為單鍵且R1、R2、R3、Ra、Rb及n係如第一態樣中所定義。此實施例之化合物具有式(IIA)之結構：
式(IIA)化合物之兩種旋轉異構物係藉由式(IIA-1)及(IIA-2)之結構表示：
其中R3係-C(CH3)2OH之式(IIA)、(IIA-1)及(IIA-2)之化合物包括在此實施例內。
一個實施例提供式(II)化合物，其中兩個虛線同時為雙鍵且R1、R2、R3、Ra、Rb及n係如第一態樣中所定義。此實施例之化合物具有式(IIB)之結構：
式(IIB)化合物之兩種旋轉異構物係藉由式(IIB-1)及(IIB-2)之結構 表示：
其中R3係-C(CH3)2OH之式(IIB)、(IIB-1)及(IIB-2)之化合物包括在此實施例內。
一個實施例提供其中Ra係H之式(II)化合物。式(IIA)化合物包括在此實施例內。式(IIB)化合物係包括在此實施例內之其他化合物。
一個實施例提供其中Ra係-CH3之式(II)化合物。其中Ra係-CD3之化合物包括在此實施例內。另外，式(IIA)化合物包括在此實施例內。式(IIB)化合物係包括在此實施例內之其他化合物。
一個實施例提供式(III)化合物，其中兩個虛線同時為單鍵且R1、R2、R3、Rb及n係如第一態樣中所定義。此實施例之化合物具有式(IIIA)之結構：
式(IIIA)化合物之兩種旋轉異構物係藉由式(IIIA-1)及(IIIA-2)之結構表示：
其中R3係-C(CH3)2OH之式(IIIA)、(IIIA-1)及(IIIA-2)之化合物包括在此實施例內。
一個實施例提供式(III)化合物，其中兩個虛線同時為雙鍵且R1、R2、R3、Rb及n係如第一態樣中所定義。此實施例之化合物具有式(IIIB)之結構：
式(IIIB)化合物之兩種旋轉異構物係藉由式(IIIB-1)及(IIIB-2)之結構表示：
其中R3係-C(CH3)2OH之式(IIIB)、(IIIB-1)及(IIIB-2)之化合物包括在此實施例內。
一個實施例提供式(IV)化合物，其中兩個虛線同時為單鍵且R1、 R2及R3係如第一態樣中所定義。此實施例之化合物具有式(IVA)之結構：
式(IVA)化合物之兩種旋轉異構物係藉由式(IVA-1)及(IVA-2)之結構表示：
其中R3係-C(CH3)2OH之式(IVA)、(IVA-1)及(IVA-2)之化合物包括在此實施例內。
一個實施例提供式(IV)化合物，其中兩個虛線同時為雙鍵且R1、R2及R3係如第一態樣中所定義。此實施例之化合物具有式(IVB)之結構：
式(IVB)化合物之兩種旋轉異構物係藉由式(IVB-1)及(IVB-2)之結構表示：
其中R3係-C(CH3)2OH之式(IVB)、(IVB-1)及(IVB-2)之化合物包括在此實施例內。
一個實施例提供式(V)化合物，其中兩個虛線同時為單鍵且R1、R2及R3係如第一態樣中所定義。此實施例之化合物具有式(VA)之結構：
式(VA)化合物之兩種旋轉異構物係藉由式(VA-1)及(VA-2)之結構 表示：
其中R3係-C(CH3)2OH之式(VA)、(VA-1)及(VA-2)之化合物包括在此實施例內。
一個實施例提供式(V)化合物，其中兩個虛線同時為雙鍵且R1、R2及R3係如第一態樣中所定義。此實施例之化合物具有式(VB)之結構：
式(VB)化合物之兩種旋轉異構物係藉由式(VB-1)及(VB-2)之結構表示：
其中R3係-C(CH3)2OH之式(VB)、(VB-1)及(VB-2)之化合物包括在此實施例內。
一個實施例提供具有以下結構之式(I)化合物：
其中R1係Cl或F；且Ra係-CH3(包括-CD3)。
一個實施例提供具有以下結構之式(I)化合物：
其中R1係Cl或F；且Ra係-CH3(包括-CD3)。
一個實施例提供具有以下結構之式(I)化合物：
其中R1係Cl或F；且Ra係-CH3(包括-CD3)。
一個實施例提供具有以下結構之式(I)化合物：
一個實施例提供具有以下結構之式(I)化合物：
一個實施例提供具有以下結構之式(I)化合物：
一個實施例提供選自在第一態樣之範圍內之例示實例之化合物。
一個實施例提供選自在第一態樣或上述實施例中之任一者之範圍內之化合物之任一子集列表之化合物。
一個實施例提供式(II)化合物，其中該化合物係：3-氯-4-(R)-(3-(R)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(1)；3-氯-4-(R)-(3-(S)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(2)；3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-4-(R)-(2-甲基-3-(1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(3)；3-氯-4-(R)-(3-(1,8-二甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(4)；3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-4-(R)-(3-(R)-(7-甲氧基-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(5)；3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-4-(R)-(3-(S)-(7-甲氧基-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(6)；3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-4-(R)-(3-(8-甲氧基-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(7)；3-氯-4-(R)-(3-(6-氟-1- 甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(8)；3-氯-4-(R)-(3-(7-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(9)；3-氯-4-(R)-(3-(6,8-二氟-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(10)；3-氯-4-(R)-(3-(S)-(8-氟-1-甲基(d3)-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(11)；3-氯-4-(R)-(3-(R)-(8-氟-1-甲基(d3)-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(12)；3-氯-4-(R)-(3-(8-氟-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(13)；3-氯-4-(R)-(3-(R)-(8-氟-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(14)；3-氰基-4-(S)-(3-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(15及16)；3-氟-4-(R)-(3-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(17)；3-氟-4-(R)-(3-(S)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(18)；3-氟-4-(R)-(3-(S)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(19)；3-氟-4-(R)-(3-(8-氟-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(20)；3-氟-4-(R)-(3-(R)-(8-氟-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(21)；3-氟-4-(R)-(3-(S)-(8-氟-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(22)；6-氯-5-(R)-(3-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2- 甲基苯基)-2-(S)-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(25)；6-氯-5-(R)-(3-(S)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-2-(S)-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(26)；6-氟-5-(R)-(3-(S)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-2-(R)-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(27)；6-氟-5-(R)-(3-(S)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-2-(S)-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(28)；4-(R)-(3-(S)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-3-甲基-9H-咔唑-1-甲醯胺(29)；3-氯-4-(2-氯-3-(1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(42)；3-氯-4-(R)-(2-氯-3-(R)-(1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(43)；3-氯-4-(2-氯-3-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(44)；3-氯-4-(R)-(2-氯-3-(R)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(45)；4-(2-氯-3-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)苯基)-3-氟-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(46)；3-氯-4-(R)-(2-氯-3-(8-氟-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(47)；
一個實施例提供式(III)化合物，其中該化合物係：3-氯-4-(R)-(3-(3-(4-氟苯基)-2,6-二側氧基-2,3-二氫嘧啶-1(6H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(23)；4-(R)-(3-(5-氯-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-3-氟-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(30及31)；3-氯-4-(R)-(3-(R)-(5-氯-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(32)；3-氯-4-(R)-(3-(S)-(5-氯-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(33)；3-氯-4-(R)-(3-(5-氟-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(34)；3-氯-4-(R)-(3-(5-氟-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(35及36)；3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-4-(R)-(3-(5-甲氧基-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶- 2(3H)-基)-2-甲基苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(37)；3-氟-4-(R)-(3-(5-氟-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(40及41)；
一個實施例提供式(IV)化合物，其中該化合物係：3-氯-4-(R)-(3-(5,7-二側氧基-5H-噻唑并[3,2-c]嘧啶-6(7H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(38及39)。
一個實施例提供式(V)化合物，其中該化合物係：3-氯-4-(R)-(3-(3-(4-氟苯基)-2,6-二側氧基-2,3-二氫嘧啶-1(6H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(24)。
在一個實施例中，提供包含式(I)化合物之組合物。包含(i)式(I)化合物及(ii)式(B)化合物呈任一比例之混合物之組合物包括在此實施例內。
在一個實施例中，提供基於式(I)化合物及其構型異構物式(B)化合物之總當量重量包含至少98當量重量%之式(I)化合物之組合物。基於式(I)化合物及其構型異構物式(B)化合物之總當量重量包含99當量重量%、99.5當量重量%、99.8當量重量%及99.9當量重量%之式(I)化合物之組合物包括在此實施例內。此實施例之組合物包括醫藥組合物。
在一個實施例中，提供包含式(II)化合物之組合物。包含(i)式(II)化合物及(ii)其構型異構物式(B-1)及(B-2)之化合物中之一或兩者呈任一比例之混合物之組合物包括在此實施例內。
在一個實施例中，提供基於式(II)化合物及其構型異構物式(B-1)及(B-2)之化合物之總當量重量包含至少98當量重量%之式(II)化合物 之組合物。基於式(II)化合物及其構型異構物式(B-1)及(B-2)之化合物之總當量重量包含99當量重量%、99.5當量重量%、99.8當量重量%及99.9當量重量%之式(II)化合物之組合物包括在此實施例內。此實施例之組合物包括醫藥組合物。
在一個實施例中，提供包含式(III)化合物之組合物。包含(i)式(III)化合物及(ii)其構型異構物式(B-3)及(B-4)之化合物中之一或兩者呈任一比例之混合物之組合物包括在此實施例內。
在一個實施例中，提供基於式(III)化合物及其構型異構物式(B-3)及(B-4)之化合物之總當量重量包含至少98當量重量%之式(III)化合物之組合物。基於式(III)化合物及其構型異構物式(B-3)及(B-4)之化合物之總當量重量包含99當量重量%、99.5當量重量%、99.8當量重量%及99.9當量重量%之式(III)化合物之組合物包括在此實施例內。此實施例之組合物包括醫藥組合物。
在一個實施例中，提供包含式(IV)化合物之組合物。包含(i)式(IV)化合物及(ii)其構型異構物式(B-5)及(B-6)之化合物中之一或兩者呈任一比例之混合物之組合物包括在此實施例內。
在一個實施例中，提供基於式(IV)化合物及其構型異構物式(B-5)及(B-6)之化合物之總當量重量包含至少98當量重量%之式(IV)化合物之組合物。基於式(IV)化合物及其構型異構物式(B-5)及(B-6)之化合物之總當量重量包含99當量重量%、99.5當量重量%、99.8當量重量%及99.9當量重量%之式(IV)化合物之組合物包括在此實施例內。此實施例之組合物包括醫藥組合物。
在一個實施例中，提供包含式(V)化合物之組合物。包含(i)式(V)化合物及(ii)其構型異構物式(B-7)及(B-8)之化合物中之一或兩者呈任一比例之混合物之組合物包括在此實施例內。
在一個實施例中，提供基於式(V)化合物及其構型異構物式(B-7) 及(B-8)之化合物之總當量重量包含至少98當量重量%之式(V)化合物之組合物。基於式(V)化合物及其構型異構物式(B-7)及(B-8)之化合物之總當量重量包含99當量重量%、99.5當量重量%、99.8當量重量%及99.9當量重量%之式(V)化合物之組合物包括在此實施例內。此實施例之組合物包括醫藥組合物。
在一個實施例中，提供包含式(II-1)化合物之組合物。包含(i)式(II-1)化合物及(ii)其構型異構物式(II-2)、式(B-1)及(B-2)之化合物中之一或多者呈任一比例之混合物之組合物包括在此實施例內。
在一個實施例中，提供基於式(II-1)、(II-2)、(B-1)及(B-2)之化合物之總當量重量包含至少98當量重量%之式(II-1)化合物之組合物。基於式(II-1)、(II-2)、(B-1)及(B-2)之化合物之總當量重量包含99當量重量%、99.5當量重量%、99.8當量重量%及99.9當量重量%之式(II-1)化合物之組合物包括在此實施例內。此實施例之組合物包括醫藥組合物。
在一個實施例中，提供包含式(II-2)化合物之組合物。包含(i)式(II-2)化合物及(ii)其構型異構物式(II-1)、式(B-1)及(B-2)之化合物中之一或多者呈任一比例之混合物之組合物包括在此實施例內。
在一個實施例中，提供基於式(II-1)、(II-2)、(B-1)及(B-2)之化合物之總當量重量包含至少98當量重量%之式(II-2)化合物之組合物。基於式(II-1)、(II-2)、(B-1)及(B-2)之化合物之總當量重量包含99當量重量%、99.5當量重量%、99.8當量重量%及99.9當量重量%之式(II-2)化合物之組合物包括在此實施例內。此實施例之組合物包括醫藥組合物。
在一個實施例中，提供包含式(III-1)化合物之組合物。包含(i)式(III-1)化合物及(ii)其構型異構物式(III-2)、式(B-3)及(B-4)之化合物中之一或多者呈任一比例之混合物之組合物包括在此實施例內。
在一個實施例中，提供基於式(III-1)、(III-2)、(B-3)及(B-4)之化合物之總當量重量包含至少98當量重量%之式(III-1)化合物之組合物。基於式(III-1)、(III-2)、(B-3)及(B-4)之化合物之總當量重量包含99當量重量%、99.5當量重量%、99.8當量重量%及99.9當量重量%之式(III-1)化合物之組合物包括在此實施例內。此實施例之組合物包括醫藥組合物。
在一個實施例中，提供包含式(III-2)化合物之組合物。包含(i)式(III-2)化合物及(ii)其構型異構物式(III-1)、式(B-3)及(B-4)之化合物中之一或多者呈任一比例之混合物之組合物包括在此實施例內。
在一個實施例中，提供基於式(III-1)、(III-2)、(B-3)及(B-4)之化合物之總當量重量包含至少98當量重量%之式(III-2)化合物之組合物。基於式(III-1)、(III-2)、(B-3)及(B-4)之化合物之總當量重量包含99當量重量%、99.5當量重量%、99.8當量重量%及99.9當量重量%之式(III-2)化合物之組合物包括在此實施例內。此實施例之組合物包括醫藥組合物。
在一個實施例中，提供包含式(IV-1)化合物之組合物。包含(i)式(IV-1)化合物及(ii)其構型異構物式(IV-2)、式(B-5)及(B-6)之化合物中之一或多者呈任一比例之混合物之組合物包括在此實施例內。
在一個實施例中，提供基於式(IV-1)、(IV-2)、(B-5)及(B-6)之化合物之總當量重量包含至少98當量重量%之式(IV-1)化合物之組合物。基於式(IV-1)、(IV-2)、(B-5)及(B-6)之化合物之總當量重量包含99當量重量%、99.5當量重量%、99.8當量重量%及99.9當量重量%之式(IV-1)化合物之組合物包括在此實施例內。此實施例之組合物包括醫藥組合物。
在一個實施例中，提供包含式(IV-2)化合物之組合物。包含(i)式(IV-2)化合物及(ii)其構型異構物式(IV-1)、式(B-5)及(B-6)之化合物中 之一或多者呈任一比例之混合物之組合物包括在此實施例內。
在一個實施例中，提供基於式(IV-1)、(IV-2)、(B-5)及(B-6)之化合物之總當量重量包含至少98當量重量%之式(IV-2)化合物之組合物。基於式(IV-1)、(IV-2)、(B-5)及(B-6)之化合物之總當量重量包含99當量重量%、99.5當量重量%、99.8當量重量%及99.9當量重量%之式(IV-2)化合物之組合物包括在此實施例內。此實施例之組合物包括醫藥組合物。
在一個實施例中，提供包含式(V-1)化合物之組合物。包含(i)式(V-1)化合物及(ii)其構型異構物式(V-2)、式(B-7)及(B-8)之化合物中之一或多者呈任一比例之混合物之組合物包括在此實施例內。
在一個實施例中，提供基於式(V-1)、(V-2)、(B-7)及(B-8)之化合物之總當量重量包含至少98當量重量%之式(V-1)化合物之組合物。基於式(V-1)、(V-2)、(B-7)及(B-8)之化合物之總當量重量包含99當量重量%、99.5當量重量%、99.8當量重量%及99.9當量重量%之式(V-1)化合物之組合物包括在此實施例內。此實施例之組合物包括醫藥組合物。
在一個實施例中，提供包含式(V-2)化合物之組合物。包含(i)式(V-2)化合物及(ii)其構型異構物式(V-1)、式(B-7)及(B-8)之化合物中之一或多者呈任一比例之混合物之組合物包括在此實施例內。
在一個實施例中，提供基於式(V-1)、(V-2)、(B-7)及(B-8)之化合物之總當量重量包含至少98當量重量%之式(V-2)化合物之組合物。基於式(V-1)、(V-2)、(B-7)及(B-8)之化合物之總當量重量包含99當量重量%、99.5當量重量%、99.8當量重量%及99.9當量重量%之式(V-2)化合物之組合物包括在此實施例內。此實施例之組合物包括醫藥組合物。
晶體形式
在一個實施例中，實例2之化合物係作為包含形式M-1之結晶物質提供。實例2之化合物之此結晶形式包含甲醇溶劑合物結晶形式，其在本文中稱作實例2之「形式M-1」或「M-1形式」。實例2之M-1形式對於每一實例2之分子包含一個甲醇分子。
在一個實施例中，實例2之化合物之M-1形式之特徵在於約等於以下之晶胞參數：
晶胞尺寸：
a=9.75Å
b=14.21Å
c=21.26Å
α=90.0°
β=90.0°
γ=90.0°
空間群：P212121
實例2之分子/不對稱單位：1
體積/晶胞中之分子數=736Å3
密度(經計算)=1.391g/cm3，其中形式M-1之晶胞參數係在約203K之溫度下測得。
在又一實施例中，實例2之M-1形式之特徵在於實質上如表2中所列示之分數原子坐標。
在一個實施例中，實例11之化合物係作為包含形式H-1之結晶物質提供。實例11之化合物之此結晶形式包含甲醇合物結晶形式，其在本文中稱作實例11之「形式H-1」或「H-1形式」。實例11之H-1形式對於每一實例11之分子包含一個水分子。
在一個實施例中，實例11之化合物之H-1形式之特徵在於約等於以下之晶胞參數：
晶胞尺寸：
a=9.41Å
b=14.51Å
c=21.12Å
α=90.0°
β=90.0°
γ=90.0°
空間群：P212121
實例11之分子/不對稱單位：1
體積/晶胞中之分子數=721Å3
密度(經計算)=1.396g/cm3，其中形式H-1之晶胞參數係在室溫下測得。
在另一實施例中，實例11之H-1形式之特徵在於實質上根據顯示於圖7中之圖案之模擬粉末x射線繞射(PXRD)圖案及/或實質上根據顯示於圖7中之圖案之實驗PXRD圖案。
在又一實施例中，實例11之H-1形式之特徵在於實質上如表3中所列示之分數原子坐標。
在一個實施例中，實例11之化合物係作為包含形式N-2之結晶物質提供。實例11之化合物之此結晶形式包含純淨結晶形式，其在本文中稱作實例11之「形式N-2」或「N-2形式」。
在一個實施例中，實例11之化合物之N-2形式之特徵在於約等於以下之晶胞參數：
晶胞尺寸：
a=10.89Å
b=9.47Å
c=14.28Å
α=90.0°
β=105.5°
γ=90.0°
空間群：P21
實例11之分子/不對稱單位：1
體積/晶胞中之分子數=710Å3
密度(經計算)=1.369g/cm3，其中形式N-2之晶胞參數係在室溫下測得。
在另一實施例中，實例11之N-2形式之特徵在於實質上根據顯示於圖8中之圖案之模擬粉末x射線繞射(PXRD)圖案。在又一實施例中，實例11之N-2形式之特徵在於實質上如表4中所列示之分數原子坐標。
在一個實施例中，實例11之化合物係作為包含形式M-1之結晶物質提供。實例11之化合物之此結晶形式包含甲醇溶劑合物結晶形式，其在本文中稱作實例11之「形式M-1」或「M-1形式」。實例11之M-1形式對於每一實例11之分子包含一個甲醇分子。
在一個實施例中，實例11之化合物之M-1形式之特徵在於約等於以下之晶胞參數：
晶胞尺寸：
a=9.78Å
b=14.26Å
c=21.38Å
α=90.0°
β=90.0°
γ=90.0°
空間群：P212121
實例11之分子/不對稱單位：1
體積/晶胞中之分子數=746Å3
密度(經計算)=1.381g/cm3，其中形式M-1之晶胞參數係在室溫下測得。
在另一實施例中，實例11之M-1形式之特徵在於實質上根據顯示 於圖9中之圖案之模擬粉末x射線繞射(PXRD)圖案及/或實質上根據顯示於圖9中之圖案之實驗PXRD圖案。
在又一實施例中，實例11之M-1形式之特徵在於實質上如表5中所列示之分數原子坐標。
在一個實施例中，實例28之化合物係作為包含形式M2-1之結晶物質提供。實例28之化合物之此結晶形式包含甲醇溶劑合物結晶形式，其在本文中稱作實例28之「形式M2-1」或「M2-1形式」。實例28之M2-1形式對於每一實例28之分子包含兩個甲醇分子。
在一個實施例中，實例28之化合物之M2-1形式之特徵在於約等於以下之晶胞參數：
晶胞尺寸：
a=9.24Å
b=7.97Å
c=22.12Å
α=90.0°
β=94.1°
γ=90.0°
空間群：P21
實例28之分子/不對稱單位：1
體積/晶胞中之分子數=813Å3
密度(經計算)=1.301g/cm3， 其中形式M2-1之晶胞參數係在約173K之溫度下測得。
在另一實施例中，實例28之M2-1形式之特徵在於實質上根據顯示於圖10中之圖案之模擬粉末x射線繞射(PXRD)圖案。
在又一實施例中，實例28之M2-1形式之特徵在於實質上如表6中所列示之分數原子坐標。
在一個實施例中，實例33之化合物係作為包含形式M2-1之結晶物質提供。實例33之化合物之此結晶形式包含甲醇溶劑合物結晶形式，其在本文中稱作實例33之「形式M2-1」或「M2-1形式」。實例33之M2-1形式對於每一實例33之分子包含兩個甲醇分子。
在一個實施例中，實例33之化合物之M2-1形式之特徵在於約等於以下之晶胞參數：
晶胞尺寸：
a=7.41Å
b=9.74Å
c=44.55Å
α=90.0°
β=90.0°
γ=90.0°
空間群：P212121
實例33之分子/不對稱單位：1
體積/晶胞中之分子數=3214Å3
密度(經計算)=1.346g/cm3，其中形式M2-1之晶胞參數係在約173K之溫度下測得。
在另一實施例中，實例33之M2-1形式之特徵在於實質上根據顯示於圖11中之圖案之模擬粉末x射線繞射(PXRD)圖案及/或實質上根據顯示於圖11中之圖案之實驗PXRD圖案。
在又一實施例中，實例33之M2-1形式之特徵在於實質上如表7中所列示之分數原子坐標。
本發明可以其他特定形式體現，而並不背離其精神或本質屬性。本發明涵蓋本文所闡述之本發明之態樣及/或實施例之所有組合。應瞭解，本發明之任何及所有實施例可結合一或多個任何其他實施例來闡述其他實施例。亦應瞭解，實施例之每一個別要素意欲與來 自任一實施例之任何及所有其他元素組合來闡述另一實施例。
定義
熟悉此項技術者在閱讀以下詳細闡述後可更易於瞭解本發明之特性及優點。應瞭解，亦可將上下文出於清楚原因在單獨實施例之情況下闡述之本發明之某些特性組合，以形成單一實施例。相反，亦可將出於簡短原因在單一實施例之情況下闡述之本發明之各種特性組合，以便形成其子組合。在本文中鑒定為例示者或較佳者之實施例意欲具有闡釋性而並非進行限制。
除非本文另有明確說明，否則以單數提及之內容亦可包括複數。例如，「一(a及an)」可指一個或一或多個。
如本文所使用，相「化合物」係指至少一種化合物。例如，式(I)化合物包括式(I)化合物及兩種或更多種式(I)化合物。
除非另有說明，否則假定具有未滿足化合價之任一雜原子具有足以滿足該等化合價之氫原子。
本文所闡述之定義優先於在以引用方式併入本文中之任一專利、專利申請案及/或專利申請公開案中所闡述之定義。
下文列示用於闡述本發明之各個術語之定義。除非在特定情況下另有限制，否則當在整個本說明書中個別地或作為較大基團之一部分使用該等術語時，該等定義適用於該等術語。
在整個本說明書中，熟悉此項技術者可選擇基團及其取代基以提供穩定部分及化合物。
根據業內所用慣例，在本文結構式中用於繪示為部分或取代基與核心或主鏈結構之附接點之鍵。
本文所用之片語「醫藥上可接受」係指彼等在合理醫學判斷範 圍內適於與人類及動物之組織接觸使用而無過度毒性、刺激性、過敏反應或其他問題或併發症且與合理益處/風險比相應之化合物、材料、組合物及/或劑型。
式(I)化合物可以非晶形固體或結晶固體提供。可採用凍乾法提供呈非晶形固體之式(I)化合物。
應進一步瞭解，式(I)化合物之溶劑合物(例如，水合物)亦在本發明之範圍內。術語「溶劑合物」意指式(I)化合物與一或多種溶劑分子(有機或無機)之物理締合。此物理締合包括氫鍵結。在某些情況中，例如在一或多種溶劑分子納入結晶固體之晶格中時，溶劑合物能夠分離。「溶劑合物」涵蓋溶液相及可分離之溶劑合物。例示性溶劑合物包括水合物、乙醇合物、甲醇合物、異丙醇合物、乙腈溶劑合物及乙酸乙酯溶劑合物。業內已知溶劑化方法。
各種形式之前藥為業內所熟知且闡述於以下文獻中：a)Wermuth,C.G.等人，The Practice of Medicinal Chemistry，第31章，Academic Press(1996)；b)Bundgaard,H.編輯，Design of Prodrugs,Elsevier(1985)；c)Bundgaard,H.，第5章，「Design and Application of Prodrugs」,A Textbook of Drug Design and Development，第113頁至第191頁，Krogsgaard-Larsen,P.等人編輯，Harwood Academic Publishers(1991)；及d)Testa,B.等人，Hydrolysis in Drug and Prodrug Metabolism,Wiley-VCH(2003)。
此外，在製備式(I)化合物後可對其實施分離及純化，以獲得含有等於或大於99重量%之量之式(I)化合物(「實質上純的」)之組合物，然後如本文所闡述對其進行使用或調配。本文亦涵蓋該等「實質上純的」式(I)化合物作為本發明之一部分。
「穩定化合物」及「穩定結構」意欲指示化合物強健至足以自反應混合物分離出達到可用純度，且可將其調配成有效治療劑。本發明意欲體現穩定化合物。
「治療有效量」意欲包括有效充當Btk之抑制劑或有效治療或預防自體免疫及/或發炎性疾病狀態(例如多發性硬化及類風濕性關節炎)之單獨的本發明化合物之量或所主張化合物之組合之量或本發明化合物與其他活性成份之組合之量。
如本文所使用，「治療(treating或treatment)」涵蓋哺乳動物(尤其人類)中之疾病狀態之治療，且包括：(a)在哺乳動物中、尤其在該哺乳動物易患有疾病狀態但尚未診斷出患有該疾病狀態時預防該疾病狀態發生；(b)抑制疾病狀態，即阻止其發展；及/或(c)緩解疾病狀態，即使疾病狀態減退。
本發明化合物意欲包括在本發明化合物中出現之原子之所有同位素。同位素包括彼等具有相同原子序數但具有不同質量數的原子。概括例如但不加以限制，氫之同位素包括氘(D)及氚(T)。碳之同位素包括13C及14C。同位素標記之本發明化合物通常可藉由彼等熟習此項技術者已知之習用技術來製備，或可藉由與本文所闡述製程類似之製程使用適當同位素標記試劑代替原本採用之未標記試劑來製備。例如，甲基(-CH3)亦包括氘化甲基(例如-CD3)。
可藉由適於欲治療病況之任一方式投與式(I)化合物，此可端視位點特異性治療之需要或欲遞送式(I)化合物之數量而定。
包含式(I)化合物及一或多種無毒、醫藥上可接受之載劑及/或稀釋劑及/或佐劑(本文中統稱為「載劑」材料)及(若期望)其他活性成份之一類醫藥組合物亦涵蓋於本發明內。式(I)化合物可藉由任一適宜途徑投與，較佳以適於此一途徑之醫藥組合物形式且以對預期治療有效之劑量投與。本發明化合物及組合物可(例如)經口、經黏膜或非經腸 (包括血管內、靜脈內、腹膜腔內、皮下、肌內及胸骨內)以含習用醫藥上可接受之載劑、佐劑及媒劑之劑量單位調配物投與。例如，醫藥載劑可含有甘露醇或乳糖及微晶纖維素之混合物。該混合物可含有其他組份，例如潤滑劑(例如硬脂酸鎂)及崩解劑(例如交聚維酮(crospovidone))。可將載劑混合物填充至明膠膠囊中或將其壓製為錠劑。可以(例如)口服劑型或輸注投與醫藥組合物。
對於經口投與而言，醫藥組合物可呈(例如)錠劑、膠囊、液體膠囊、懸浮液或液體形式。醫藥組合物較佳地製成含有具體量活性成份之劑量單元形式。例如，醫藥組合物可作為包含在約0.1mg至1000mg、較佳地約0.25mg至250mg且更佳地約0.5mg至100mg範圍內之量之活性成份之錠劑或膠囊提供。適於人類或其他哺乳動物之日劑量可端視患者之病況及其他因素在很大範圍內變化，但其可使用常規方法來確定。
涵蓋於本文中之任一醫藥組合物可(例如)經由任何可接受且適宜之口服製劑經口遞送。例示性口服製劑包括(但不限於)例如錠劑、口含錠，菱形錠劑、水性及油性懸浮液、可分散粉末或顆粒、乳液、硬膠囊及軟膠囊、液體膠囊、糖漿及酏劑。意欲經口投與之醫藥組合物可根據業內已知用於製造意欲經口投與之醫藥組合物之任何方法來製備。為提供醫藥上適口之製劑，本發明醫藥組合物可含有至少一種選自甜味劑、矯味劑、著色劑、緩和劑、抗氧化劑及防腐劑之藥劑。
可藉由(例如)將至少一種式(I)化合物與至少一種適於製造錠劑之無毒的醫藥上可接受之賦形劑混合來製備錠劑。例示性賦形劑包括(但不限於)例如惰性稀釋劑，例如，碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣及磷酸鈉；製粒劑及崩解劑，例如，微晶纖維素、交聯羧甲纖維素鈉、玉米澱粉及海藻酸；黏合劑，例如，澱粉、明膠、聚乙烯吡咯啶酮及阿拉伯膠；及潤滑劑，例如，硬脂酸鎂、硬脂酸及滑石粉。另 外，錠劑可未經包覆或藉由已知技術進行包覆以遮蓋口味令人不愉快的藥物之差味道，或延遲活性成份在胃腸道中之崩解及吸收藉此將活性成份之效應保持較長時段。例示性水可溶性遮味材料包括(但不限於)羥丙基-甲基纖維素及羥丙基纖維素。例示性延時材料包括(但不限於)乙基纖維素及乙酸丁酸纖維素。
可藉由(例如)將至少一種式(I)化合物與至少一種惰性固體稀釋劑(例如，碳酸鈣、磷酸鈣及高嶺土)混合製備硬明膠膠囊。
可藉由(例如)將至少一種式(I)化合物與至少一種水可溶性載劑(例如，聚乙二醇)及至少一種油介質(例如，花生油、液體石蠟及橄欖油)混合製備軟明膠膠囊。
可藉由(例如)將至少一種式(I)化合物與至少一種適於製造水性懸浮液之賦形劑混合製備水性懸浮液。適於製造水性懸浮液之例示性賦形劑包括(但不限於)例如，懸浮劑，例如，羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、海藻酸鈉、海藻酸、聚乙烯吡咯啶酮、黃耆樹膠、及阿拉伯樹膠；分散劑或潤濕劑，例如，天然磷脂、例如，卵磷脂；環氧烷與脂肪酸之縮合產物，例如，聚氧乙烯硬脂酸酯；環氧乙烷與長鏈脂肪族醇之縮合產物，例如十七乙烯氧基鯨臘醇；環氧乙烷與衍生自脂肪酸及己糖醇之偏酯之縮合產物，例如，聚氧乙烯山梨醇單油酸酯；及環氧乙烷與衍生自脂肪酸及己糖醇酐之偏酯之縮合產物，例如，聚乙烯山梨醇酐單油酸酯。水性懸浮液亦可含有至少一種防腐劑，例如，對羥基苯甲酸乙酯及對羥基苯甲酸正丙基酯；至少一種著色劑；至少一種矯味劑；及/或至少一種甜味劑，包括(但不限於)例如蔗糖、糖精及阿斯巴甜(aspartame)。
可藉由(例如)將至少一種式(I)化合物懸浮於植物油(例如，花生油、橄欖油、芝麻油及椰子油)或礦物油(例如，液體石蠟)中製備油性懸浮液。油性懸浮液亦可含有至少一種增稠劑，例如，蜂蠟；硬石 蠟；及鯨蠟醇。為提供適口油性懸浮液，可將上文已闡述之至少一種甜味劑及/或至少一種矯味劑添加至油性懸浮液中。油性懸浮液可進一步含有至少一種防腐劑，包括(但不限於)例如抗氧化劑，例如，丁基化羥基茴香醚及α-生育酚。
可藉由(例如)將至少一種式(I)化合物與至少一種分散劑及/或潤濕劑、至少一種懸浮劑及/或至少一種防腐劑混合製備可分散粉末及顆粒。適宜分散劑、潤濕劑及懸浮劑係如上文已闡述。例示性防腐劑包括(但不限於)例如抗氧化劑，例如，抗壞血酸。此外，可分散粉末及顆粒亦可含有至少一種賦形劑，包括(但不限於)例如甜味劑；矯味劑；及著色劑。
可將其至少一種式(I)化合物之乳液製備為(例如)水包油乳液。可以已知方式自已知成份構造包含式(I)化合物之乳液之油相。油相可藉由但不限於例如以下之油來提供：植物油，例如，橄欖油及花生油；礦物油，例如，液體石蠟；及其混合物。儘管該相可僅包含乳化劑，但其可包含至少一種乳化劑與脂肪或油或與脂肪及油二者之混合物。適宜乳化劑包括(但不限於)例如天然磷脂，例如，大豆卵磷脂；衍生自脂肪酸及己糖醇酐之酯或偏酯，例如，山梨醇酐單油酸酯；及偏酯與環氧乙烷之縮合產物，例如，聚氧乙烯山梨醇酐單油酸酯。較佳地，包括親水性乳化劑連同充當穩定劑之親脂性乳化劑。亦較佳者係包括油及脂肪。乳化劑與穩定劑一起或不與穩定劑構成所謂的乳化蠟，且蠟與油及脂肪一起構成所謂的乳化軟膏基質從而形成乳霜調配物之油性分散相。乳液亦可含有甜味劑、矯味劑、防腐劑及/或抗氧化劑。適用於本發明調配物中之乳化劑及乳液穩定劑包括吐溫(Tween)60、司盤(Span)80、鯨蠟硬脂醇、肉豆蔻醇、單硬脂酸甘油酯、月桂基硫酸鈉、單獨的二硬脂酸甘油酯或帶有蠟之二硬脂酸甘油酯，或業內熟知之其他材料。
亦可(例如)經由任一醫藥上可接受且適宜之可注射形式以靜脈內、皮下及/或肌內方式遞送式(I)化合物。例示性可注射形式包括(但不限於)例如包含可接受之媒劑及溶劑(例如，水、林格氏溶液(Ringer's solution)及等滲氯化鈉溶液)之無菌水溶液；無菌水包油微乳液；及水性或油性懸浮液。
用於非經腸投與之調配物可呈水性或非水性等滲無菌注射溶液或懸浮液形式。該等溶液及懸浮液可由無菌粉末或顆粒使用用於針對經口投與之調配物中所提及之載劑或稀釋劑中之一或多者或藉由使用其他適宜分散劑或潤濕劑及懸浮劑來製備。可將該等化合物溶解於水、聚乙二醇、丙二醇、乙醇、玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、苯甲醇、氯化鈉、黃蓍膠及/或各種緩衝液中。醫藥界熟知且廣泛已知其他佐劑及投與模式。亦可藉由注射以具有適宜載劑(包括鹽水、右旋糖或水)或具有環糊精(即，CAPTISOL®)、共溶劑增溶劑(即，丙二醇)或微胞增溶劑(即，吐溫80)之組合物投與活性成份。
無菌可注射製劑亦可為存於無毒非經腸可接受之稀釋劑或溶劑中之無菌可注射溶液或懸浮液，例如作為存於1,3-丁二醇中之溶液。可用之可接受媒劑及溶劑尤其係水、林格氏溶液及等滲氯化鈉溶液。此外，通常採用無菌不揮發性油作為溶劑或懸浮介質。就此目的而言，可使用任一溫和不揮發性油，包括合成甘油單酯或甘油二酯。此外，在可注射製劑中可使用諸如油酸等脂肪酸。
可藉由例如以下之方式製備無菌可注射水包油微乳液：1)將至少一種式(I)化合物溶解於油相(例如，大豆油及卵磷脂之混合物)中；2)將含有式(I)之油相與水及甘油之混合物合併；及3)處理該組合以形成微乳液。
可根據業內已知之方法製備無菌水性或油性懸浮液。例如，可利用無毒非經腸可接受之稀釋劑或溶劑(例如，1,3-丁二醇)製備無菌 水溶液或懸浮液；且可利用無菌無毒之可接受之溶劑或懸浮介質(例如，無菌不揮發性油，例如，合成之甘油單酯或甘油二酯；及脂肪酸(例如，油酸))製備無菌油性懸浮液。
可用於本發明醫藥組合物中之醫藥上可接受之載劑、佐劑及媒劑包括(但不限於)離子交換劑、氧化鋁、硬脂酸鋁、卵磷脂、自乳化藥物遞送系統(SEDDS)(例如d-α生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯、用於醫藥劑型中之表面活性劑(例如吐溫)、聚乙氧基化蓖麻油(例如CREMOPHOR®表面活性劑(BASF))或其他類似聚合物遞送基質)、血清蛋白(例如人類血清白蛋白)、緩衝物質(例如磷酸鹽)、甘胺酸、山梨酸、山梨酸鉀、飽和植物脂肪酸之偏甘油脂混合物、水、鹽或電解質(例如硫酸魚精蛋白、磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽、膠體二氧化矽、三矽酸鎂、聚乙烯吡咯啶酮、基於纖維素之物質、聚乙二醇、羧甲基纖維素鈉、聚丙烯酸酯、蠟、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段共聚物、聚乙二醇及羊毛脂。環糊精(例如α環糊精、β環糊精及γ環糊精或化學改質之衍生物(例如羥基烷基環糊精，包括2-羥丙基-環糊精及3-羥丙基-環糊精)或其他增溶性衍生物亦可有利地用於增強本文所闡述之各式之化合物之遞送。
本發明之醫藥活性化合物可根據習用製藥方法處理以產生投與給患者(包括人類及其他哺乳動物)之醫學藥劑。可使醫藥組合物經受習用醫藥操作(例如滅菌)及/或其可含有習用佐劑(例如防腐劑、穩定劑、潤濕劑、乳化劑、緩衝劑等)。另外可利用腸溶衣包衣製備錠劑及丸劑。該等組合物亦可包含佐劑，例如潤濕劑、甜味劑、矯味劑及芳香劑。
所投與化合物之量及利用本發明化合物及/或組合物治療疾病病狀之劑量方案取決於各種因素，包括個體之年齡、重量、性別及醫學病況、疾病類型、疾病之嚴重程度、投與之途徑及頻率及所用具體化 合物。因此，劑量方案可在很大範圍內變化，但其可使用標準方法常規地確定。約0.001mg/kg體重至100mg/kg體重、較佳地介於約0.0025mg/kg體重與約50mg/kg體重之間且最佳地介於約0.005mg/kg體重至10mg/kg體重之間之日劑量可係適當的。日劑量可每天1次至4次投藥來投與。其他投藥方案包括每週一次投藥及每兩天循環一次投藥。
出於治療目的，本發明之活性化合物通常與一或多種適於所指示投與途徑之佐劑組合。若經口投與，則化合物可與乳糖、蔗糖、澱粉粉末、鏈烷酸之纖維素酯、纖維素烷基酯、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸鎂、氧化鎂、磷酸及硫酸之鈉鹽及鈣鹽、明膠、阿拉伯樹膠、海藻酸鈉、聚乙烯吡咯啶酮及/或聚乙烯醇混合，且然後進行製錠或囊封以方便投與。該等膠囊或錠劑可含有控制釋放調配物，其可以活性化合物存於羥丙基甲基纖維素中之分散液提供。
本發明醫藥組合物包含至少一種式(I)化合物及視情況選自任一醫藥上可接受之載劑、佐劑及媒劑之另一藥劑。本發明之替代組合物包含本文所闡述之式(I)化合物或其前藥及醫藥上可接受之載劑、佐劑或媒劑。
效用
本發明化合物調節激酶活性，包括調節Btk。可藉由本發明化合物調節之其他類型激酶活性包括(但不限於)Tec家族化合物，例如BMX、Btk、ITK、TXK及Tec及其突變體。
因此，式(I)化合物可用於治療與調節激酶活性及尤其選擇性抑制Btk活性相關之病況。該等病況包括B細胞介導之疾病，其中細胞因子含量得以調節係作為細胞內信號傳導之結果。
如本文所使用，術語「治療(treating或treatment)」涵蓋反應性及預防性措施中之一者或兩者，例如，經設計以抑制或延遲疾病或病症 之發作，完全或部分減少症狀或疾病狀態，及/或減輕、改善、減弱或治癒疾病或病症及/或其症狀。
鑒於式(I)化合物作為Btk之選擇性抑制劑之活性，故該等式(I)化合物可分別用於治療細胞因子相關性病況，包括(但不限於)發炎性疾病，例如克羅恩氏結腸炎(Crohn's colitis)及潰瘍性結腸炎、氣喘、移植物抗宿主病、慢性阻塞性肺病；自體免疫疾病，例如格雷氏病(Graves' disease)，類風濕性關節炎、全身性紅斑狼瘡、牛皮癬；破壞性骨病症，例如骨再吸收疾病、骨關節炎、骨質疏鬆症、多發性骨髓瘤相關性骨病症；增殖性病症，例如急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病；血管生成性病症，例如血管生成性病症，包括實體腫瘤、眼部新生血管形成及嬰兒血管瘤；感染性疾病，例如敗血症、敗血性休克及志賀桿菌病；神經變性性疾病，例如阿茲海默氏病(Alzheimer's disease)、帕金森氏病(Parkinson's disease)、大腦局部缺血或由創傷性損傷造成之神經變性性疾病，腫瘤及病毒性疾病，例如轉移性黑色素瘤、卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、多發性骨髓瘤及HIV感染及CMV視網膜炎、AIDS。
更尤其地，可利用本發明化合物治療之特定病況或疾病包括(但不限於)胰臟炎(急性或慢性)、氣喘、過敏、成年呼吸窘迫症候群、慢性阻塞性肺病、腎小球性腎炎、類風濕性關節炎、全身性紅斑狼瘡、硬皮病、慢性甲狀腺炎、格雷氏病、自體免疫胃炎、糖尿病、自體免疫溶血性貧血、自體免疫嗜中性球減少症、血小板減少症、異位性皮膚炎、慢性活動性肝炎、重症肌無力、多發性硬化、發炎性腸病、潰瘍性結腸炎、克羅恩氏疾病、牛皮癬、移植物抗宿主病、藉由內毒素誘導之發炎反應、肺結核、動脈粥樣硬化、肌肉變性、惡病質、牛皮癬性關節炎、賴特氏症候群(Reiter's syndrome)、痛風、創傷性關節炎、風疹關節炎、急性滑膜炎、胰臟β細胞疾病；以大量嗜中性球浸 潤為特徵之疾病；類風濕性脊椎炎、痛風性關節炎及其他關節炎性病況、川崎病(Kawasaki disease)、慢性發炎脫髓鞘性多發性神經病變(CIDP)、皮肌炎、眼色素層炎、抗因子VIII疾病、關節黏連性脊椎炎、重症肌無力、古德帕斯丘氏病(Goodpasture's disease)、抗磷脂症候群、ANCA相關性血管炎、皮肌炎/多發性肌炎、腦型瘧、慢性肺發炎性疾病、矽肺病、肺類肉瘤病、骨再吸收疾病、同種異體移植物排斥、感染引起之發熱及肌痛、繼發於感染之惡病質、骨髓形成、瘢痕組織形成、潰瘍性結腸炎、熱病(pyresis)、流行性感冒、骨質疏鬆症、骨關節炎、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、轉移性黑色素瘤、卡波西氏肉瘤、多發性骨髓瘤、敗血症、敗血性休克，及志賀桿菌病；阿茲海默氏病、帕金森氏病、大腦局部缺血或藉由創傷性損傷造成之神經變性性疾病；血管生成性病症，包括實體腫瘤、眼部新生血管形成及嬰兒血管瘤；病毒性疾病，包括急性肝炎感染(包括A型肝炎、B型肝炎及C型肝炎)、HIV感染及CMV視網膜炎、AIDS、ARC或惡性腫瘤及皰疹；中風、心肌局部缺血，中風心臟病發作中之局部缺血、器官缺氧、血管增生、心臟及腎再灌注損傷、血栓形成、心肥大、凝血酶誘導型血小板凝集、內毒血症及/或中毒性休克症候群、與前列腺素內過氧化酶合成酶-2相關之病況及尋常性天皰瘡。較佳治療方法係其中病況係選自以下者：克羅恩氏結腸炎及潰瘍性結腸炎、同種異體移植物排斥、類風濕性關節炎、牛皮癬、關節黏連性脊椎炎、牛皮癬性關節炎及尋常性天皰瘡。另一選擇為，較佳治療方法係其中病況係選自以下者：局部缺血再灌注損傷，包括中風引起之大腦局部缺血再灌注損傷及心肌梗塞引起之心臟局部缺血再灌注損傷。另一較佳治療方法係病況係多發性骨髓瘤者。
此外，本發明之Btk抑制劑抑制可誘導促發炎蛋白質(例如前列腺素內過氧化物合成酶-2(PGHS-2)，亦稱作環氧合酶-2(COX-2))之表 現。因此，其他Btk相關病況包括水腫、痛覺缺失、發熱及疼痛(例如神經肌肉疼痛、頭痛、癌症造成之疼痛、牙痛及關節炎疼痛)。本發明化合物亦可用於治療獸醫病毒性感染，例如慢病毒感染，包括(但不限於)馬感染性貧血病毒；或逆轉錄病毒感染，包括貓免疫缺陷病毒、牛免疫缺陷病毒及犬免疫缺陷病毒。
當本文使用術語「Btk相關性病況」或「Btk相關性疾病或病症」時，其各自意欲涵蓋上文所鑒定如同詳細地重複一般之所有病況，以及藉由Btk激酶活性影響之任何其他病況。
「治療有效量」意欲包括在單獨或組合投與時可有效抑制Btk之本發明化合物之量。
一個實施例提供用於治療該等Btk激酶相關性病況之方法，其包含向有需要之個體投與至少一種式(I)化合物。可投與治療有效量用於治療該等病況。可採用本發明實施例之方法來治療Btk激酶相關性病況，例如治療過敏病症及/或自體免疫及/或發炎性疾病，包括(但不限於)SLE、類風濕性關節炎、多發性血管炎、特發性血小板減少性紫癜(ITP)、重症肌無力、過敏性鼻炎、多發性硬化(MS)、移植排斥、I型糖尿病、膜性腎炎、發炎性腸病、自體免疫溶血性貧血、自體免疫甲狀腺炎、冷凝集素及溫凝集素疾病、伊文氏症候群、溶血性尿毒候群/栓塞性血小板減少性紫癜(HUS/TTP)、類肉瘤病、修格連氏症候群、周邊神經病變(例如，格林-巴利症候群)、尋常性天皰瘡及氣喘。
治療Btk激酶相關性病況之方法可包含單獨或與彼此及/或可用於治療該等病況之其他適宜治療劑組合投與至少一種式(I)化合物。可投與治療有效量之至少一種式(I)化合物及其他適宜治療劑用於治療該等病況。因此，「治療有效量」亦意欲包括可有效治療Btk激酶相關性病況之所主張化合物之組合之量。化合物之組合較佳地係協同組合。當化合物在組合投與時之效應(在此情形下，抑制Btk)大於化合物在以 單一藥劑單獨投與時之加性效應時，發生如(例如)Chou等人，Adv.Enzyme Regul.,22：27-55(1984)所闡述之協同。一般而言，在化合物之次佳濃度下最明確說明協同效應。協同可為以下方面的：與個別組份相比，細胞毒性降低，抗Btk效應增加或組合之一些其他有益效應。
該等其他治療劑之例示包括皮質類固醇、咯利普蘭(rolipram)、卡弗他丁(calphostin)、細胞因子抑制性消炎藥物(CSAID)、如揭示於美國專利第4,200,750號中之4-經取代之咪唑并[1,2-A]喹喔啉；介白素-10、糖皮質素、水楊酸鹽、一氧化氮及其他免疫抑制劑；核轉位抑制劑，例如脫氧精胍菌素(deoxyspergualin，DSG)；非類固醇消炎藥物(NSAID)，例如布洛芬(ibuprofen)、塞來昔布(celecoxib)及羅非昔布(rofecoxib)；類固醇，例如潑尼松(prednisone)或地塞米松；抗病毒劑，例如阿巴卡韋(abacavir)；抗增殖劑，例如胺甲喋呤(methotrexate)、來氟米特(leflunomide)、FK506(他克莫司(tacrolimus)、PROGRAF®)；細胞毒性藥物，例如硫唑嘌呤(azathiprine)及環磷醯胺；TNF-α抑制劑，例如替尼達普(tenidap)、抗TNF抗體或可溶性TNF受體，及雷帕黴素(rapamycin)(西羅莫司(sirolimus)或RAPAMUNE®)或其衍生物。
上述其他治療劑在與本發明化合物組合採用時可加以使用，例如，以醫師桌上參考手冊(Physicians' Desk Reference，PDR)中所指示或如熟悉此項技術者以其他方式確定之量使用。在本發明方法中，可在投與本發明化合物之前、與其同時或在其之後投與該一或多種其他治療劑。本發明亦提供能夠治療如上文所闡述之Btk激酶相關性病況(包括IL-1、IL-6、IL-8、IFNγ及TNF-α介導之病況)之醫藥組合物。
本發明組合物可含有如上文所闡述之其他治療劑，且其可根據(例如)醫藥調配物業內熟知之技術藉由(例如)採用習用固體或液體媒 劑或稀釋劑以及適於期望投與模式之類型之醫藥添加劑(例如，賦形劑、黏合劑、防腐劑、穩定劑、香料等)來調配。
另一實施例提供式(I)化合物以用於療法中。在本發明實施例中，於療法中之使用可包括投與治療有效量之式(I)化合物。
本發明亦提供式(I)化合物之用途，其用於製造用以治療或預防過敏病症及/或自體免疫及/或發炎性疾病之醫藥。在本發明實施例中，用於製造醫藥之使用可包括投與治療有效量之式(I)化合物用於治療或預防過敏病症及/或自體免疫及/或發炎性疾病。
本發明亦提供式(I)化合物之用途，其用於製造用以治療癌症之醫藥。本發明實施例可包括用於製造醫藥之用途，其包括投與治療有效量之式(I)化合物用於治療或預防過敏病症及/或自體免疫及/或發炎性疾病。
因此，本發明進一步包括包含一或多種式(I)化合物及醫藥上可接受之載劑之組合物。
「醫藥上可接受之載劑」係指通常為業內所接受用於向動物、具體而言哺乳動物遞送生物學活性劑之介質。根據熟習此項技術者範圍內之多種因素來調配醫藥上可接受之載劑。該等因素包括(但不限於)所調配活性劑之類型及性質；含有藥劑之組合物欲投與之個體；組合物之預期投與途徑；及所靶向之治療適應症。醫藥上可接受之載劑包括水性及非水性液體介質以及各種固體及半固體劑型。該等載劑除活性劑外亦可包括多種不同成份及添加劑，該等其他成份出於熟習此項技術者熟知之各種原因(例如，穩定活性劑、黏合劑等)而包括於調配物中。對適宜醫藥上可接受之載劑及其選擇中所涉及之因素的闡述可參見各種容易獲得之來源，例如，Remington's Pharmaceutical Sciences，第17版(1985)，其係以全文引用方式併入本文中。
可藉由適於欲治療病況之任一方式投與式(I)化合物，此可端視 位點特異性治療之需要或欲遞送藥物之數量而定。局部投與對於皮膚相關性疾病通常較佳，且系統性治療對於癌性或癌前病況較佳，儘管涵蓋其他遞送模式。例如，該等化合物可以(例如)錠劑、膠囊、顆粒、粉末或液體調配物(包括糖漿)形式以經口方式遞送；以(例如)溶液、懸浮液、凝膠或軟膏形式以局部方式遞送；以舌下方式遞送；以經頰方式遞送；以非經腸方式(例如藉由皮下、靜脈內、肌內或胸骨內注射或輸注技術)(例如，作為無菌可注射水性或非水性溶液或懸浮液)遞送；以經鼻方式(例如藉由吸入噴霧劑)遞送；以(例如)乳霜或軟膏形式以局部方式遞送；以(例如)栓劑形式以經直腸方式遞送；或以脂質體方式遞送。可投與含有無毒的醫藥上可接受之媒劑或稀釋劑之劑量單元調配物。該等化合物可以適於立即釋放或延長釋放之形式投與。立即釋放或延長釋放可利用適宜醫藥組合物或尤其在延長釋放之情形下利用皮下植入物或滲透幫浦等器件達成。
用於局部投與之例示性組合物包括局部載劑(例如Plastibase(利用聚乙烯膠凝之礦物油))。
用於經口投與之例示性組合物包括懸浮液，其可含有(例如)微晶纖維素用於獲得容積，海藻酸或海藻酸鈉作為懸浮劑，甲基纖維素作為黏度增強劑，及甜味劑或矯味劑(例如業內已知者)；及立即釋放錠劑，其可含有(例如)微晶纖維素、磷酸二鈣、澱粉、硬脂酸鎂及/或乳糖及/或其他賦形劑、黏合劑、增量劑、崩解劑、稀釋劑及潤滑劑(例如業內已知者)。本發明化合物亦可藉由舌下及/或經頰投與以(例如)模製、壓製或冷凍乾燥之錠劑經口遞送。例示性組合物可包括快速溶解型稀釋劑(例如甘露醇、乳糖、蔗糖及/或環糊精)。亦包括於該等調配物中者可為高分子量賦形劑，例如纖維素(AVICEL®)或聚乙二醇(PEG)；用於輔助黏膜黏著之賦形劑，例如羥丙基纖維素(HPC)、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、羧甲基纖維素鈉(SCMC)及/或馬來酸酐共 聚物(例如，Gantrez)；及用於控制釋放之藥劑，例如聚丙烯酸共聚物(例如，Carbopol 934)。為便於製作及使用亦可添加潤滑劑、助流劑、香料、著色劑及穩定劑。
用於鼻用氣溶膠或吸入投與之例示性組合物包括可含有例如以下物質之溶液：苯甲醇或其他適宜防腐劑、用於增強吸收及/或生物利用度之吸收促進劑及/或其他增溶劑或分散劑(例如業內已知者)。
用於非經腸投與之例示性組合物包括可注射溶液或懸浮液，其可含有(例如)適宜無毒的非經腸可接受之稀釋劑或溶劑，例如甘露醇、1,3-丁二醇、水、林格氏溶液、等滲氯化鈉溶液或其他適宜分散劑或潤濕劑及懸浮劑，包括合成之甘油單酯或甘油二酯及脂肪酸(包括油酸)。
用於直腸投與之例示性組合物包括栓劑，其可含有(例如)適宜的非刺激性賦形劑，例如可可脂、合成之甘油酯或聚乙二醇，該等在常溫下為固體但在直腸腔中液化及/或溶解以釋放藥物。
熟悉此項技術者可決定本發明化合物之治療有效量，且對於哺乳動物包括每天約0.05mg/kg體重至1000mg/kg體重、1mg/kg體重至1000mg/kg體重、1mg/kg體重至50mg/kg體重、5mg/kg體重至250mg/kg體重、250mg/kg體重至1000mg/kg體重之例示劑量之活性化合物，該活性化合物可以單一劑量或以個別分割劑量形式(例如每天1次至4次)投與。應瞭解，對於任一特定個體，特定劑量及劑量頻率可變化且視各種因素而定，包括所用特定化合物之活性；該化合物之代謝穩定性及作用時間長度；個體之物種、年齡、體重、整體健康狀況、性別及飲食；投與模式及時間；排泄速率；藥物組合；特定病況之嚴重程度。用於治療之較佳個體包括動物，最佳為哺乳動物物種，例如人類及家畜，例如狗、貓、馬及諸如此類。因此，當本文使用術語「患者」時，此術語意欲包括所有個體，最佳為哺乳動物物種，其受 Btk酶含量介導所影響。
在下文所述分析之一或多者中已測試下文「實例」章節中所說明之式(I)化合物之實例。
在一個實施例中，式(I)化合物抑制Btk酶之IC50值為6nM或更小，例如0.001nM至6nM，如藉由人類重組Btk酶分析所量測。較佳地，式(I)化合物抑制Btk酶之IC50值為2nM及更小，例如0.001nM至2nM。其他較佳化合物抑制Btk酶之IC50值為1.0nM及更小，例如0.001nM至1.0nM。
在一個實施例中，式(I)化合物減少對Jak2激酶之抑制，其特徵在於IC50值高於50nM，例如大於250nM，如藉由Jak2酪胺酸激酶分析所量測。較佳地，式(I)化合物抑制Jak2酶之IC50值大於400nM，例如IC50值大於700nM。
在一個實施例中，式(I)化合物具有Btk抑制活性超過Jak2抑制活性之激酶選擇性比率，其特徵在於Jak2 IC50抑制值(如藉由Jak2酪胺酸激酶分析所量測)對Btk IC50抑制值(如藉由人類重組Btk酶分析所量測)之比率為150及更大，例如比率為300及更大。較佳地，式(I)化合物之Jak2 IC50抑制值對Btk IC50抑制值之比率為400及更大，例如比率為500及更大。
在一個實施例中，式(I)化合物在全血BCR刺激之CD69表現分析中具有改良之效能，且IC50值為250nM或更小，例如，0.1nM至250nM。更佳地，式(I)化合物在全血BCR刺激之CD69表現分析中具有效能，且IC50值為160nM或更小，例如，0.1nM至160nM；及IC50值為100nM或更小，例如，0.1nM至100nM。
製備方法
可使用方案1中所顯示之方法製備式(I)化合物。
方案1
可使經取代之酸酯1(其中Z表示經取代之單環或稠合二環雜環(式(I)化合物中之取代基Q))與經取代之咔唑甲醯胺或四氫咔唑甲醯胺2(其中Y係適當基團，例如Br、Cl或三氟甲烷磺醯基氧基)反應，從而得到化合物3。此反應可藉由使用適宜鹼(例如碳酸鉀、碳酸銫或磷酸三鉀)及適宜觸媒(例如四(三苯基膦)鈀、1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵氯化鈀(II)或1,1'-雙(二-第三丁基膦基)二茂鐵氯化鈀(II))在適宜溶劑(例如二噁烷或四氫呋喃)中視情況利用適宜共溶劑(例如水)來實施。該等偶合反應通常稱為鈴木-宮浦(Suzuki-Miyaura)偶合反應，且其在化學文獻中為人熟知(例如參見Heravi,M.M.等人，Tetrahedron,68：9145(2012)及其中引用之參考文獻)。
由於方案1中藉由標記為a及b之單鍵連接之環具有不對稱性質，且由於藉由位阻造成之關於該等鍵之旋轉受限，故本發明化合物展現稱為構型異構物現象之對掌性。因此，在某些條件下，例如在對掌性固定相上進行層析，可在層析圖中觀察到四種非鏡像異構構型異構物 (由關於兩個立體軸之旋轉受限引起)作為四個單獨峰。可將式(I)化合物分離為兩種至四種非鏡像異構構型異構物之穩定混合物或單一穩定構型異構物。
由於1係外消旋的，通常將故化合物3分離為四種非鏡像異構構型異構物之混合物。另一選擇為，可使用業內已知之方法(例如在對掌性固定相上實施製備型層析)將外消旋化合物1轉化為具有所顯示絕對組態之單一構型異構物1a及1b,。然後，如上文所闡述之鈴木-宮浦偶合反應可將1a轉化為化合物3a，或將1b轉化為3b，其具有關於鍵b所顯示之絕對組態但具有關於鍵a之兩種組態之混合物，只要鈴木-宮浦偶合反應之條件不會使得發生關於鍵b之異構化即可。因此，化合物3a及3b將作為兩種非鏡像異構構型異構物之混合物存在。
如方案2中所顯示，可使用業內已知之方法(例如在對掌性固定相上實施層析)將為四種非鏡像異構構型異構物之混合物之化合物3分離為四種單一穩定非鏡像異構構型異構物3c、3d、3e及3f。另一選擇為，可將化合物3a(兩種非鏡像異構構型異構物之混合物)分離為單一穩定的構型異構物3c及3d，且同樣可將化合物3b(兩種非鏡像異構構型異構物之混合物)分離為單一穩定的構型異構物3e及3f。
在2係經取代之四氫咔唑甲醯胺(其中虛線表示單鍵)之情形下，2亦含有對掌性中心，且因此其可作為外消旋物存在。在此情形下，自該等化合物2製得之化合物3將存在作為八種非鏡像異構物之混合物，3a及3b中之每一者將作為四種非鏡像異構物之混合物存在，且3c、3d、3e及3f中之每一者將作為兩種非鏡像異構物之混合物存在。亦可使用業內已知之方法(例如在對掌性固定相上實施層析)將該等混合物 中之任一者分離為單一穩定的非鏡像異構物。另一選擇為，可使用業內已知之方法(例如在對掌性固定相上實施層析)將化合物2轉化為兩種經分離鏡像異構物。
在方案1中之偶合中間體1或2中之一者為非外消旋之一些情形下，可在方案1中顯示之鈴木-宮浦偶合反應期間發生對掌性誘導。在該等情形下，可獲得非等莫耳混合物之非鏡像異構物混合物；亦即，產物3可為非鏡像異構物之混合物，其中具有一種絕對組態之鍵a之一或多種非鏡像異構物之存在程度大於具有相反絕對組態之鍵a之一或多種非鏡像異構物。
方案3中顯示合成某些式(I)化合物之替代方法。經適宜取代之4-芳基亞胺基-1H-苯并[d][1,3]噁嗪-2(4H)-酮4可在如上文所闡述之鈴木-宮浦偶合反應之條件下與2反應，從而得到具有結構5之式(I)化合物。在該反應過程中，存在於4中之4-芳基亞胺基-1H-苯并[d][1,3]噁嗪-2(4H)-酮部分重排成存在於反應產物5中之3-芳基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮部分。
可藉由各種方法製備用於製備式(I)化合物之方案1之化合物1。方案4中顯示一些該等方法。靛紅酸酐6可與經取代之苯胺7(其中Y'係適當基團，例如Br、Cl或三氟甲烷磺醯基氧基)反應，從而產生醯胺8。該等反應可在各種條件下實施，例如藉由在適宜溶劑中加熱實施，或藉由在輔助試劑(例如三甲鋁)存在下加熱實施。可藉由(例如) 在適宜溶劑中利用光氣或三光氣進行處理將化合物8轉化成經取代之喹唑啉二酮9。視情況，可使用化學文獻中熟知之方法(例如參見，Ishiyama,T.等人，Tetrahedron,57：9813(2001)，及其中引用之參考文獻)將9轉化成相應的酸酯10(其係方案1之化合物1之實例)。該等方法之實例係使9與酸酯化試劑(例如4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼)或5,5,5',5'-四甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼雜環己烷))在適宜溶劑中在鹼(例如乙酸鉀)及適宜觸媒(例如1,1′-雙(二苯基膦基)二茂鐵氯化鈀(II))存在下反應。
另一選擇為，可使用化學文獻中熟知之方法視情況將化合物9轉化成化合物11(其中Ra係烷基)，例如藉由在適宜鹼(例如碳酸銫)存在下利用烷基化劑(例如碘甲烷或三氘代碘甲烷)進行處理。然後，可使用上文所闡述之相同方法將化合物11轉化成相應的酸酯12(其係方案1之化合物1之實例)。亦可藉由與針對9至11之轉化所闡述之方法類似之方法視情況將化合物10轉化成相應的化合物12。
由於關於將經取代之苯基環連接至喹唑啉二酮部分之單鍵之位阻旋轉，故化合物10及12展現對掌性。若期望，可藉由(例如)在對掌性固定相上進行層析將該等化合物拆分成單獨的鏡像異構構型異構物。然後，可將所分離之鏡像異構構型異構物10視情況轉化成如上文所闡述之穩定的鏡像異構構型異構物12，從而得到方案1之化合物1a或1b之某些實例。同樣，亦可將外消旋喹唑啉二酮12拆分成單獨的鏡像異構構型異構物。
方案5中顯示方案4之中間體化合物8之替代合成。可使用熟知之醯胺鍵形成反應將經取代之2-硝基苯甲酸13轉化成化合物14，例如藉由將8轉化成相應的羧醯氯並與經取代之苯胺7發生反應，或藉由使用文獻中熟知之方法在適宜偶合試劑(例如六氟磷酸O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓(HATU)或1-[3-(二甲基胺基)丙基]-3-乙基-碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC)與1-羥基苯并三唑水合物(HOBT)之混合物)存在下使13與7直接反應。然後，可使用文獻中已知之多種方法中之一者還原14之硝基，從而得到方案4之化合物8。
可使用方案6中所顯示之方法製備方案3之化合物4。可使N-經取代之靛紅酸酐15(其中Ra係烷基)與經取代之苯胺7反應，從而產生醯胺16。該等反應可在如上文所闡述之各種條件下實施，例如藉由在適宜溶劑中加熱實施，或藉由在輔助試劑(例如三甲鋁)存在下加熱實施。可藉由(例如)在適宜溶劑中利用光氣或三光氣進行處理將化合物16轉化成經取代之芳基亞胺基苯并噁嗪酮17。然後，可使用與上文針對化合物10或化合物11至化合物12之轉化所闡述之方法(參見方案4)類似之方法將化合物17轉化成相應的酸酯4。
方案7中顯示可用於製備用於製備式(I)化合物中之某些化合物1之一些其他方法。可在各種化學文獻中熟知之方法下使經取代之吡啶基-2-乙酸18或經取代之吡啶基-2-乙酸之鹽(例如鈉鹽)(其係市售的或可藉由化學文獻中熟知之方法製備)與苯胺7反應，從而得到醯胺19。例如，可在偶合試劑(例如六氟磷酸O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓(HATU)或1-[3-(二甲基胺基)丙基]-3-乙基-碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC)與1-羥基苯并三唑水合物(HOBT)之混合物)存在下實施該反應。可藉由在適當溶劑(例如甲苯)中與諸如羰基二咪唑等試劑一起加熱將醯胺19轉化成相應的經取代之1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-1,3(2H)-二酮20。可使用先前所闡述之方法(參見方案4)將化合物20轉化成相應的酸酯21(其係方案1之中間體1之實例)。另一選擇為，可使用先前所闡述之方法(參見方案4)將化合物19轉化成相應的酸酯22，隨後藉由與諸如羰基二咪唑等試劑一起加熱將22轉化成21。
在方案7中，亦可利用另一氮雜環(例如噻唑)置換所顯示結構中之吡啶基環。在此情形下，相應化合物20及21將代替所顯示之1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-1,3(2H)-二酮部分而含有5H-噻唑并[3,2-c]嘧啶-5,7(6H)-二酮部分。
由於關於結合經取代之苯基環與經取代之1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-1,3(2H)-二酮部分之單鍵之位阻旋轉，故化合物21展現對掌性。若期望，可藉由(例如)在對掌性固定相上進行層析將該等外消旋化合物拆分成單獨的鏡像異構構型異構物，從而得到方案1之中間體1a及1b之 某些實例。
可使用方案8中顯示之方法遵循Cao,J.等人，(Synthetic Commun.,39：205(2009))報導之一般程序製備方案1之化合物1(其中Z表示經取代之嘧啶-1,3-二酮部分)。可藉由使對甲氧基苄基胺、丙烯酸甲酯與苯基溴化硒反應製備化合物23。可使此物質與適當芳基異氰酸酯24(其可使用化學文獻中熟知之方法自方案4中顯示之苯胺7製得)反應，從而得到經取代之二氫嘧啶-1,3-二酮25。利用氧化劑(例如過氧化氫) 處理此化合物可得到經取代之嘧啶-1,3-二酮26。可使用化學文獻中報導之多種方法去除26之對甲氧基苄基，例如藉由利用三氟甲烷磺酸及三氟乙酸之混合物進行處理(如藉由Wu,F.等人，J.Org.Chem.,69：9307(2004)所報導)。可使用(例如)藉由Jacobsen,M.F.等人(J.Org.Chem.,71：9183(2006))所闡述之條件使所得嘧啶-1,3-二酮27與芳基酸(例如4-氟苯酸)反應，從而得到28(其中Ar表示4-氟苯基)。然後，可使用與上文所闡述方法類似之方法將此化合物轉化成酸酯29，該酸酯係方案1之化合物1之實例。
可使用方案9中顯示之程序製備用於製備式(I)化合物之顯示於方案1中之化合物2。可使用文獻中熟知之方法將經取代之2-胺基苯甲酸30(在文獻中已知，或使用文獻中已知之程序製得)轉化成相應的2-肼基苯甲酸31之鹽酸鹽，例如藉由在鹽酸水溶液中用亞硝酸鈉進行處理轉化成相應重氮鹽，隨後用氯化錫(II)進行還原。在具有適當觸媒之適宜溶劑中(例如具有鹽酸之乙醇，具有對甲苯磺酸或三氟乙酸之甲苯，或乙酸(在該情形下，溶劑亦可用作觸媒))使31與3-側氧基環己烷甲酸乙酯32(其可自3-羥基苯甲酸乙酯製得；例如參見Hirsch,J.等人，J.Org.Chem.,51：2218(1986))反應，可得到相應的四氫咔唑衍生物33。此反應通常稱為費歇爾吲哚合成(Fischer indole synthesis)，且其在化學文獻中為人熟知(例如，參見Kamata,J.等人，Chem.Pharm.Bull.,52：1071(2004))。另一選擇為，可在兩個連續步驟中實施費歇爾吲哚合成：可使31與32在適宜條件(例如在適當溶劑(例如乙醇或甲苯)中，其視情況具有適宜觸媒(例如對甲苯磺酸))下反應，從而形成中間體腙，可對該中間體實施分離，且然後使其在適宜條件(例如，具有鹽酸之乙醇，具有氯化鋅之乙酸，或具有三氟乙酸之甲苯)下發生進一步反應，從而得到33。
可使用化學文獻中熟知之方法將羧酸33轉化成相應甲醯胺34，例如藉由用草醯氯或亞硫醯氯處理、隨後用氨處理；或藉由在偶合試劑(例如碳化二亞胺，或N-(3-二甲基胺基丙基)-N'-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽與1-羥基苯并三唑或1-羥基-7-氮雜苯并三唑之混合物)存在下利用氨處理33，將33轉化成醯氯。可使用化學文獻中熟知之方法實施四氫咔唑34至相應的咔唑35之轉化，例如藉由在適宜溶劑中用氧化劑(例如2,3-二氯-5,6-二氰基苯醌)處理34實施。
另一選擇為，可顛倒醯胺形成及氧化步驟之順序以將33轉化成35。因此，可使用上文所闡述程序或類似程序氧化化合物33，從而得到相應化合物36。然後，可再次使用上文所闡述之程序或類似程序將此化合物之羧酸轉化成相應的一級醯胺，從而得到相應化合物35。
可使用化學文獻中熟知之方法實施35至相應的三級甲醇取代之 咔唑甲醯胺37(其係方案1中之化合物2之實例)之轉化，例如藉由用諸如甲基鋰、甲基溴化鎂或甲基氯化鎂等試劑處理35。另一選擇為，可使用類似程序實施34至相應的三級甲醇取代之四氫咔唑甲醯胺38(其係方案1中之化合物2之另一實例)之轉化。
化合物33、34及38含有對掌性中心，且因此其作為兩種鏡像異構物存在。製備如方案9中所顯示之33、34及38得到外消旋產物，該等產物可用於製備如方案1中所顯示之式(I)化合物。另一選擇為，可使用熟知之方法(例如在對掌性固定相上實施層析)將33、34及38拆分成經分離鏡像異構物。
亦可使用方案10中所顯示之程序製備用於製備式(I)化合物之方案1之某些化合物2。可用適當鹵化試劑處理化合物39(自如方案9中所顯示之適當2-肼基苯甲酸製得(參見美國專利第8,084,620號，中間體48-1))，從而得到40，其中R1係鹵素原子。例如，利用氯化試劑(例如N-氯琥珀醯亞胺)處理39可得到其中R1係Cl之40，且用氟化試劑(例如1-(氯甲基)-4-氟-1,4-重氮化二環[2.2.2]辛烷-雙(四氟硼酸酯)[SELECTFLUOR®])處理39可得到其中R1係F之40。然後，利用如針對方案9所闡述之甲基鋰或甲基鹵化鎂處理40可得到其中R1係F或Cl之化合物37(其係方案1中之化合物2之實例)。
可藉由方案10中亦顯示之替代程序製備其中R1係CN之化合物37。處理化合物41(其可自化合物39製得(參見美國專利第8,084,620號，實例73-2))可用碘化試劑(例如)N-碘琥珀醯亞胺，從而得到其中R1係I之37。可將此化合物轉化成其中R1係CN之37(方案1中之化合物2之實例)，例如藉由在觸媒(例如四(三苯基膦)鈀)存在下用氰化鋅處理。
方案11中顯示製備方案1之化合物2之另一實例。使用方案9中所闡述之程序及類似程序，可使酮42(其可使用文獻中所報導之多種方法使丙二酸二乙酯與環己-2-烯酮反應製得)與肼基苯甲酸31反應，從而得到化合物43，然後，可使用上文針對方案9所闡述之方法將43轉化成化合物44且隨後轉化成化合物45。使用文獻中已知之方法，例如在適宜溶劑(例如二甲基亞碸)中與氯化鈉及水一起加熱，可將化合物45轉化成化合物46。然後，可使用文獻中已知之程序藉由(例如)用硼氫化鋰處理將化合物46之酯部分還原成甲醇，從而得到化合物47，其係方案1之化合物2之實例。
實例
可使用以下實例中所顯示之程序及相關程序製備本發明化合物及用於製備本發明化合物之中間體。該等實例中所用之方法及條件以及該等實例中製得之實際化合物並非意欲限制，而意欲說明可如何製備本發明化合物。該等實例中所使用之起始材料及試劑在非藉由本文闡述之程序製備時通常係市售的，或在化學文獻中報導，或可藉由使用化學文獻中所闡述之程序製備。以下實例進一步定義本發明。應瞭解，該等實例僅以闡釋方式給出。根據上述論述及實例，熟習此項技術者可確定本發明之基本特徵，且可在不背離其精神及範圍下作各種改變及修改以使本發明適用於各種用途及條件。因此，本發明不限於下文所述之闡釋性實例，而由隨附申請專利範圍界定。
在所給實例中，片語「乾燥並濃縮」通常係指在有機溶劑中之溶液經硫酸鈉或硫酸鎂乾燥，隨後過濾並自濾液去除溶劑(通常在減 壓下並在適於所製備物質穩定性之溫度下)。
通常如下實施管柱層析：使用急驟層析技術(Still,W.C.等人，J.Org.Chem.,43：2923(1978))，或用預填充之矽膠筒柱使用Isco中壓層析裝置(Teledyne Corporation)，用所指示溶劑或溶劑混合物洗脫。如下實施製備型高效液相層析(HPLC)：使用適於所分離物質數量之大小之反相管柱(Waters SunFire C18,Waters XBridge C18,PHENOMENEX ® Axia C18,YMC S5 ODS或諸如此類)，通常用漸增濃度之甲醇或乙腈於水(亦含有0.05%或0.1%三氟乙酸或10mM乙酸銨)中之梯度，以適於管柱大小及欲達成之分離之洗脫速率進行洗脫。使用針對個別情形闡述之條件實施鏡像異構物或構型異構物之對掌性超臨界流體層析分離。藉由液相層析-質譜使用電噴霧離子化獲得質譜數據。
在Bruker-AXS APEX2 CCD系統上使用Cu Kα輻射(λ=1.5418Å)收集單一晶體x射線繞射數據。利用APEX2軟體包/程式套件(參見the APEX2 User Manual,v1.27；Bruker AXS公司，WI 53711 USA)指標化及處理所量測強度數據。當指示時，在數據收集期間在Oxford Cryosystems cryostream冷卻器(Cosier,J.等人，J.Appl.Cryst.,19：105(1986))之冷流中冷卻晶體。藉由直接方法解析結構且基於觀察到之反射使用結晶學包SHELXTL(參見APEX2 User Manual,v1.27；Bruker AXS公司，WI 53711 USA)進行精修。經由全矩陣最小平方來精修推導原子參數(坐標及溫度因子)。在精修中最小化之函數為Σw(|Fo|-|Fc|)2。R定義為Σ||Fo|-|Fc||/Σ|Fo|，而Rw=[Σw(|Fo|-|Fc|)2/Σw|Fo|2]1/2，其中w係基於所觀察強度中之誤差之適當加權函數。在所有精修階段檢驗差異圖。將氫引入具有各向同性溫度因子之理想位置中，但氫參數未發生變化。根據Stout等人，X-Ray Structure Determination：A Practical Guide,MacMillan(1968)中所闡述之程序獲得晶胞參數。
使用CHEMDRAW® Ultra第9.0.5版(CambridgeSoft)確定化學名稱。使用以下縮寫：
縮寫
CDI 羰基二咪唑
DCM 二氯甲烷
DIEA 二異丙基乙胺
DMF N,N-二甲基甲醯胺
DMSO 二甲基亞碸
dppf 1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵
DSC 差示掃描量熱
DTT 二硫蘇糖醇
EDC 1-[3-(二甲基胺基)丙基]-3-乙基-碳化二亞胺鹽酸鹽
EDTA 乙二胺四乙酸鹽
EtOAc 乙酸乙酯
EtOH 乙醇
g 克
h 小時
HATU 六氟磷酸O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓
HOBT 1-羥基苯并三唑水合物
HPLC 高壓液相層析
IPA 異丙醇
MeCN 乙腈
MeOH 甲醇
min 分鐘
mmol 毫莫耳
NBS N-溴琥珀醯亞胺
NCS N-氯琥珀醯亞胺
NMP N-甲基吡咯啶酮
t-丁基 第三丁基
TEA 三乙胺
TFA 三氟乙酸
THF 四氫呋喃
中間體1
3-(3-溴-2-甲基苯基)-8-氟喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮
中間體1A：2-胺基-N-(3-溴-2-甲基苯基)-3-氟苯甲醯胺
方法1：將8-氟-1H-苯并[d][1,3]噁嗪-2,4-二酮(2.00g,11.04mmol)及3-溴-2-甲基苯胺(4.11g,22.08mmol)於二噁烷(20mL)中之溶液在密封反應器皿中在110℃下加熱4天。用10% K2CO3水溶液處理冷卻混合物並在室溫下攪拌30min。用DCM將混合物萃取3次，並用水洗滌合併之有機相，乾燥並濃縮。用乙醚研磨殘餘物，從而得到灰色固體(2.50g)。濃縮母液並用乙醚再次研磨殘餘物，從而得到灰色固體(230mg)。合併兩種固體，從而得到灰色固體狀2-胺基-N-(3-溴-2-甲基苯基)-3-氟苯甲醯胺(2.73g,78%產率)。質譜m/z 323,325(M+H)+。
方法2. 用3-溴-2-甲基苯胺(3.08g,16.6mmol)處理8-氟-1H-苯并[d][1,3]噁嗪-2,4-二酮(3.00g,16.6mmol)於二甲苯(50mL)中之懸浮液並加熱至回流。6h後，使混合物過夜冷卻至室溫。用己烷稀釋所得懸浮液並藉由過濾收集沈澱物，用己烷沖洗並進行風乾，從而得到白色固體狀2-胺基-N-(3-溴-2-甲基苯基)-3-氟苯甲醯胺(4.50g,84%產率)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 7.69(d,J=7.9Hz,1H),7.65(br.s.,1H),7.50-7.46(m,1H),7.32(d,J=8.1Hz,1H),7.19-7.11(m,2H),6.73-6.64(m,1H),5.69(br.s.,2H),2.44(s,3H)。
中間體1：
在室溫下用碳酸雙(三氯甲基)酯(三光氣)(6.28g,21.2mmol)處理2-胺基-N-(3-溴-2-甲基苯基)-3-氟苯甲醯胺(5.70g,17.6mmol)於THF(100mL)中之溶液並攪拌15min。用EtOAc稀釋混合物，用飽和NaHCO3水溶液小心處理並在室溫下攪拌直至終止氣體排放為止。依次用飽和NaHCO3水溶液、水及鹽水洗滌經分離有機相，並乾燥並濃縮。用乙醚研磨殘餘物，從而得到灰白色固體狀3-(3-溴-2-甲基苯基)-8-氟喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(6.00g,97%產率)。質譜m/z 349,351(M+H)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 8.59(d,J=17.6Hz,1H),7.99(d,J=8.1Hz,1H),7.70(dd,J=7.8,1.2Hz,1H),7.54-7.43(m,1H),7.28-7.21(m,2H),7.21-7.17(m,1H),2.28(s,3H)。
中間體2
8-氟-1-甲基-3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮
中間體2A：3-(3-溴-2-甲基苯基)-8-氟-1-甲基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮
用Cs2CO3(13.4g,41.2mmol)處理3-(3-溴-2-甲基苯基)-8-氟喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體1](4.80g,13.8mmol)於DMF(25mL)中之溶液。在室溫下攪拌懸浮液並用碘甲烷(4.30mL,68.7mmol)進行逐滴處理(但迅速)並在室溫下快速攪拌1h。用EtOAc及水(200mL)稀釋混合物。分離有機相並依次用水及鹽水洗滌，然後進行乾燥並濃縮，從而得到淺棕色玻璃狀泡沫狀3-(3-溴-2-甲基苯基)-8-氟-1-甲基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(4.80g,96%產率)。質譜m/z 363,365(M+H)+。
中間體2：
將3-(3-溴-2-甲基苯基)-8-氟-1-甲基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(4.80g,13.2mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼)(4.36g,17.2mmol)、乙酸鉀(3.89g,39.6mmol)及PdCl2(dppf)DCM加合物(0.540g,0.661mmol)於二噁烷(65mL)中之混合物加熱至回流並保持2h。在冷卻至室溫後，藉助CELITE®過濾混合物並用EtOAc沖洗固體。用EtOAc稀釋濾液，用水洗滌，並乾燥並濃縮。使殘餘物在矽膠 (80g)上經受管柱層析，用EtOAc-己烷(20%至50%之梯度)洗脫，從而得到白色固體狀8-氟-1-甲基-3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(4.61g,85%產率)。質譜m/z 411(M+H)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 8.14-8.08(m,1H),7.93(dd,J=7.5,1.3Hz,1H),7.48(ddd,J=14.0,8.0,1.5Hz,1H),7.34(t,J=7.6Hz,1H),7.27-7.20(m,2H),3.88(d,J=7.9Hz,3H),2.36(s,3H),1.36(s,12H)。
中間體3
4-溴-3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
中間體3A：5-溴-8-胺甲醯基-6-氯-9H-咔唑-2-甲酸乙酯
將5-溴-8-胺甲醯基-9H-咔唑-2-甲酸乙酯[根據美國專利第8,084,620號中所闡述之程序合成，中間體48-1](0.100g,0.277mmol)及NCS(自甲苯重結晶；0.037g,0.277mmol)於CCl4(10mL)及DMF(2mL)中之混合物在室溫下攪拌112h。過濾混合物，並用CCl4洗滌所收集沈澱物並在真空下乾燥過夜。藉由在矽膠(40g)上管柱層析純化殘餘物，用己烷然後用EtOAc-己烷(30%，然後50%)洗脫，從而得到絨毛狀白色固體狀5-溴-8-胺甲醯基-6-氯-9H-咔唑-2-甲酸乙酯(0.071g,65%產率)。質譜m/z 395,397,(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6) δ 12.13(s,1H),8.77(d,J=8.6Hz,1H),8.53(d,J=1.1Hz,1H),8.36(br.s.,1H),8.29(s,1H),7.89(dd,J=8.4,1.5Hz,1H),7.74(br.s.,1H),4.38(q,J=7.0Hz,2H),1.38(t,J=7.0Hz,3H)。
中間體3A之替代製備：
向5-溴-8-胺甲醯基-9H-咔唑-2-甲酸乙酯(90g,249mmol)、CCl4(2900mL)及NMP(600mL)之混合物中添加NCS(36.1g,271mmol)。將反應混合物在45℃下攪拌2h。在冷卻至室溫後，藉由真空過濾收集固體。將固體在甲醇(1L)中在60℃下攪拌2h且然後冷卻至室溫。收集固體並乾燥，從而得到5-溴-8-胺甲醯基-6-氯-9H-咔唑-2-甲酸乙酯(69.5g,167mmol,67%產率)(95%純度)。
在減壓下濃縮濾液以去除CCl4。然後，向NMP殘餘物中添加水(2L)。收集所得沈澱物並乾燥，從而得到另外13.7g產物(25%產率，75%純度)。
中間體3：
經30min用存於己烷中之1.6M甲基鋰(45.8mL,73.2mmol)逐份處理於無水冰丙酮浴中冷卻之5-溴-8-胺甲醯基-6-氯-9H-咔唑-2-甲酸乙酯(4.14g,10.5mmol)於THF(200mL)中之溶液。將混合物在-78℃下攪拌60min，然後用飽和NH4Cl水溶液進行逐份處理。添加水並用EtOAc將混合物萃取2次。用水將合併之有機相洗滌兩次。合併所有水相並用DCM萃取，並用水洗滌此有機相。合併所有有機相，乾燥並濃縮。使殘餘物自EtOAc結晶，從而得到固體。藉由在矽膠(330g)層析上純化來自濃縮母液之殘餘物，用EtOAc-己烷(0至100%之梯度)洗脫，從而得到額外固體。合併兩批固體，從而得到淺黃色固體狀4-溴-3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(3.13g,78%產率)。質譜m/z363,365,(M+H-H2O)+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.71(s,1H),8.56(d,J=8.6Hz,1H),8.29(br.s.,1H),8.17(s,1H),7.97(d,J=1.3Hz, 1H),7.66(br.s.,1H),7.42(dd,J=8.6,1.8Hz,1H),1.52(s,6H)。
中間體3之替代製備：
將5-溴-8-胺甲醯基-6-氯-9H-咔唑-2-甲酸乙酯(58.56g,148mmol)於THF(700mL)中之懸浮液在丙酮-乾冰浴中在氮下冷卻至-15℃。用存於THF中之3M甲基氯化鎂(395mL,1.19mol)以內部溫度保持介於-15℃與-10℃之間之速率逐滴處理混合物。5h後，將混合物傾倒至3個器皿中，每一器皿含有約1.5L碎冰及500mL飽和NH4Cl水溶液。用EtOAc萃取所得混合物，並乾燥合併之有機相並濃縮。將殘餘物與來自兩個其他批次之物質合併，一個批次始於146mmol 5-溴-8-胺甲醯基-6-氯-9H-咔唑-2-甲酸乙酯且另一批次始於142mmol 5-溴-8-胺甲醯基-6-氯-9H-咔唑-2-甲酸乙酯，並將其在丙酮(250mL)中攪拌1h。藉由過濾收集沈澱物，用己烷洗滌並乾燥，從而得到固體狀4-溴-3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(134.56g)。濃縮濾液並將殘餘物在丙酮中再攪拌1h，從而形成沈澱物，藉由過濾收集該沈澱物，用己烷洗滌並乾燥，從而得到額外固體狀4-溴-3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(7.36g)，總共141.92g(88%產率)。將來自第二次過濾之濾液與來自其他批次之不純物質合併，並使其在矽膠(2×1.5kg)上經受管柱層析，用EtOAc-己烷(40%至100%之梯度)洗脫，從而得到額外產物。
中間體4
1-甲基-3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮
中間體4A：2-胺基-N-(3-溴-2-甲基苯基)苯甲醯胺
方法1. 將2-胺基苯甲酸(5.00g,36.5mmol)及亞硫醯氯(8.68g,72.9mmol)於甲苯(50mL)中之溶液在回流下加熱60min。在真空中濃縮混合物，並將殘餘物懸浮於THF(50mL)中，在冰水浴中冷卻並用3-溴-2-甲基苯胺(20.35g,109mmol)處理。將所得懸浮液在回流下加熱2h。用10% K2CO3水溶液(50mL)處理冷卻混合物，劇烈攪拌15min，並用EtOAc萃取。乾燥有機相並濃縮。藉由在矽膠上管柱層析純化殘餘物，從而得到淺黃色固體狀2-胺基-N-(3-溴-2-甲基苯基)苯甲醯胺(4.70g,42%產率)。質譜m/z 305,307(M+H)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 7.72(d,J=7.9Hz,1H),7.67(br.s.,1H),7.54(dd,J=8.3,1.2Hz,1H),7.48(dd,J=7.9,0.9Hz,1H),7.36-7.31(m,1H),7.15(t,J=8.0Hz,1H),6.81-6.73(m,2H),5.59(br.s.,2H),2.45(s,3H)。
方法2. 將1H-苯并[d][1,3]噁嗪-2,4-二酮(5.00g,30.7mmol)及3-溴-2-甲基苯胺(5.70g,30.7mmol)於二甲苯(50mL)中之懸浮液在回流下加熱8h。藉由蒸餾去除溶劑並藉由管柱層析在矽膠(120g)上純化 殘餘物，用EtOAc-己烷(0至50%之梯度)洗脫，從而得到灰白色固體狀2-胺基-N-(3-溴-2-甲基苯基)苯甲醯胺(2.30g,24%產率)。
方法3.用3-溴-2-甲基苯胺(13.69g,73.6mmol)處理1H-苯并[d][1,3]噁嗪-2,4-二酮(10.00g,61.3mmol)於DMF(150mL)中之懸浮液並加熱至回流過夜。用水稀釋冷卻混合物並用EtOAc萃取。過濾整個混合物以去除灰色固體並分離濾液之各層。用水洗滌有機相，乾燥並濃縮。藉由在矽膠(330g)上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(0至50%之梯度)洗脫，從而得到淺棕色固體狀2-胺基-N-(3-溴-2-甲基苯基)苯甲醯胺(1.1g,6%產率)。來自管柱之另一洗脫液得到淺棕色固體狀3-(3-溴-2-甲基苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體4B](3.4g,17%產率)。
中間體4B：3-(3-溴-2-甲基苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮
用碳酸雙(三氯甲基酯[三光氣](2.92g,9.83mmol)處理2-胺基-N-(3-溴-2-甲基苯基)苯甲醯胺(2.00g,6.55mmol)於THF(50mL)中之溶液並在回流下加熱60min。用飽和NaHCO3水溶液處理冷卻混合物，用EtOAc萃取，並用飽和NaHCO3、然後用水將合併之有機相洗滌兩次，乾燥並濃縮。用DCM研磨殘餘物，從而得到白色固體，其係藉由過濾收集。用DCM研磨來自濃縮濾液之殘餘物，從而得到額外白色固體，其係藉由過濾收集。合併兩種固體，從而得到白色固體狀3-(3-溴-2-甲基苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(2.10g,97%產率)。質譜m/z 331,333(M+H)+。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ 8.07(dd,J=7.92,1.32Hz,1H),7.65-7.75(m,2H),7.21-7.32(m,4H),2.20(s, 3H)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 9.38(br.s.,1H),8.19(dd,J=7.9,1.1Hz,1H),7.76-7.69(m,1H),7.69-7.60(m,1H),7.35-7.17(m,3H),7.04-6.97(m,1H),2.28(s,3H)。
中間體4C：3-(3-溴-2-甲基苯基)-1-甲基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮
用碘甲烷(5.22mL,83mmol)逐份處理於冰水浴中冷卻之3-(3-溴-2-甲基苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(23.02g,69.5mmol)及Cs2CO3(34.0g,104mmol)於DMF(70mL)中之懸浮液。使混合物升溫至室溫並攪拌30min。過濾混合物並濃縮濾液。將殘餘物分配於EtOAc與水之間。藉由過濾收集所形成之沈澱物。用水洗滌所收集固體並在真空下乾燥過夜，從而得到白色固體。分離濾液之有機相，用10% LiCl水溶液洗滌3次，然後用水洗滌兩次，乾燥並濃縮，從而得到額外固體。合併兩種固體，從而得到白色固體狀3-(3-溴-2-甲基苯基)-1-甲基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(15.56g,92%產率)。質譜m/z 345,347(M+H)+。
中間體4：
將3-(3-溴-2-甲基苯基)-1-甲基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(36.39g,105mmol)、4,4,4,4",5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼)(40.2g,158mmol)、PdCl2(dppf)DCM加合物(4.30g,5.27mmol)及乙酸鉀(31.0g,316mmol)於二噁烷(500mL)及DMSO(50mL)中之混合物在回流下加熱24h。添加額外PdCl2(dppf)DCM加合物(1.47g)並將混合物在回流下再加熱6h。藉助CELITE®過濾冷卻混合物，並濃縮濾液。用EtOAc稀釋殘餘物，利用水振盪，且藉助CELITE®過濾兩個相以去除 黑色沈澱物。分離濾液之有機相，依次用水及鹽水洗滌，乾燥並濃縮。藉由在矽膠上管柱層析(兩個330g管柱)純化殘餘物，用EtOAc-己烷(20%至100%之梯度)洗脫。用EtOAc研磨所得固體，從而得到固體，其係藉由過濾收集。濃縮濾液並自EtOAc結晶，從而得到額外固體。濃縮來自此結晶之母液並藉由在矽膠(330g)上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(20%至50%之梯度)洗脫，從而得到額外固體。合併三批固體，從而得到白色固體狀1-甲基-3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(21.2g,51%產率)。質譜m/z 393(M+H)+。1H NMR(400MHz,)δ 8.35(d,J=7.9Hz,1H),7.64(ddd,J=8.5,7.3,1.5Hz,1H),7.59(dd,J=7.4,1.4Hz,1H),7.33-7.27(m,1H),7.24-7.17(m,1H),7.12(d,J=8.1Hz,2H),3.55(s,3H),1.59(s,3H),1.39(s,12H)。
中間體5
8-氯-1-甲基-3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮
中間體5A：2-胺基-N-(3-溴-2-甲基苯基)-3-氯苯甲醯胺
將8-氯-1H-苯并[d][1,3]噁嗪-2,4-二酮(4.00g,20.3mmol)及3-溴-2-甲基苯胺(5.65g,30.4mmol)於二甲苯(20mL)中之懸浮液在回流下加熱2.5h。冷卻混合物形成黃色沈澱物。用己烷稀釋混合物，並藉由過濾收集沈澱物，用己烷洗滌並乾燥，從而得到黃色固體狀2-胺基-N-(3-溴-2-甲基苯基)-3-氯苯甲醯胺(6.28g,91%產率)。質譜m/z 339,341(M+H)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 7.68(d,J=8.1Hz,1H),7.61(br.s.,1H),7.52-7.43(m,3H),7.15(t,J=8.0Hz,1H),6.70(t,J=7.8Hz,1H),6.12(br.s.,2H),2.44(s,3H)。
中間體5B：3-(3-溴-2-甲基苯基)-8-氯喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮
用碳酸雙(三氯甲基)酯(1.02g,3.45mmol)處理中2-胺基-N-(3-溴-2-甲基苯基)-3-氯苯甲醯胺(780mg,2.30mmol)於THF(20mL)之溶液並將該溶液在室溫下攪拌21h。用DCM稀釋混合物並依次用飽和NaHCO3水溶液、水及鹽水洗滌。乾燥有機相並濃縮。藉由在矽膠(80g)上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(25%至50%之梯度)洗脫，從而得到白色固體狀3-(3-溴-2-甲基苯基)-8-氯喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(800mg,95%產率)。質譜m/z 365,367(M+H)+。
中間體5C：3-(3-溴-2-甲基苯基)-8-氯-1-甲基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮
用Cs2CO3(3.88g,11.9mmol)及碘甲烷(2.48mL,39.7mmol)處理3-(3-溴-2-甲基苯基)-8-氯喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(1.45g,3.97mmol)於DMF(15mL)中之溶液並在室溫下攪拌1.5h。用水及EtOAc與己烷之混合物稀釋混合物。用水洗滌有機相，乾燥並濃縮。藉由在矽膠(80g)上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(5%至40%之梯度)洗脫，從而得到白色固體狀3-(3-溴-2-甲基苯基)-8-氯-1-甲基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(1.3g,81%產率)。質譜m/z 379,391(M+H)+。
中間體5：
用4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼)(0.915g,3.60mmol)、乙酸鉀(0.884g,9.01mmol)及PdCl2(dppf)DCM加合物(0.123g,0.150mmol)處理3-(3-溴-2-甲基苯基)-8-氯-1-甲基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(1.14g,3.00mmol)於二噁烷(20mL)中之溶液。在壓力反應小瓶中密封混合物並在110℃下加熱4h。用EtOAc稀釋冷卻混合物，藉助CELITE®過濾，並用水洗滌濾液，乾燥並濃縮。藉由在矽膠(80g)上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(20%至50%之梯度)洗脫，從而得到白色固體狀8-氯-1-甲基-3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(1.00g,78%產率)。質譜m/z 427(M+H)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 8.23(dd,J=7.8,1.7Hz,1H),7.93(dd,J=7.5,1.3Hz,1H),7.76(dd,J=7.9,1.5Hz,1H),7.37-7.31(m,1H),7.27-7.20(m,2H),3.94(s,3H),2.36(s,3H),1.36(s,15H)。
中間體6及7
8-氯-1-甲基-3-(S)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(I-6)，及8-氯-1-甲基-3-(R)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(I-7)
藉由如下之對掌性超臨界流體層析分離外消旋8-氯-1-甲基-3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體5]之試樣：管柱：Regis WHELK-O® R,R(3×25cm,5μm)；流動相：CO2-MeOH(60：40)，85mL/min；試樣製備：17mg/mL，存於MeOH-MeCN(1：1)中。自管柱洗脫之第一峰得到S鏡像異構物8-氯-1-甲基-3-(S)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體6]。自管柱洗脫之第二峰得到R鏡像異構物8-氯-1-甲基-3-(R)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體7]。每一鏡像異構構型異構物之質譜及1H NMR與中間體5相同。
中間體8
8-氯-3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮
將3-(3-溴-2-甲基苯基)-8-氯喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體5B] (1.00g,2.74mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼)(0.833g,3.28mmol)、乙酸鉀(0.805g,8.21mmol)及PdCl2(dppf)DCM加合物(0.112g,0.137mmol)於二噁烷(20mL)中之混合物在90℃下加熱8h。過濾冷卻混合物，濃縮，並將殘餘物分配於DCM與水之間。乾燥有機相並濃縮，並藉由在矽膠(120g)上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-DCM(0至10%之梯度)洗脫，從而得到8-氯-3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(782mg,58%產率)。質譜m/z 413(M+H)+。
中間體9
1,8-二甲基-3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮
中間體9A：2-胺基-N-(3-溴-2-甲基苯基)-3-甲基苯甲醯胺
將亞硫醯氯(3.15g,26.5mmol)及2-胺基-3-甲基苯甲酸(2.00g,13.23mmol)於THF(50mL)中之混合物在回流下加熱2h。濃縮冷卻混合物並將殘餘物與存於THF(50mL)中之3-溴-2-甲基苯胺(4.92g,26.5mmol)合併並在回流下加熱5h。使混合物冷卻至室溫，用10% K2CO3 水溶液處理並在室溫下攪拌30min。用DCM將所得混合物萃取3次，並用水洗滌合併之有機相，乾燥並濃縮。藉由在矽膠(330g)上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(0至20%之梯度)洗脫，從而得到黃色固體狀2-胺基-N-(3-溴-2-甲基苯基)-3-甲基苯甲醯胺(1.71g,40%產率)。質譜m/z 319,321(M+H)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 7.70(d,J=7.9Hz,1H),7.64(br.s.,1H),7.50-7.40(m,2H),7.24(d,J=7.3Hz,1H),7.14(t,J=8.0Hz,1H),6.70(t,J=7.6Hz,1H),5.67(br.s.,2H),2.44(s,3H),2.23(s,3H)。
中間體9B：3-(3-溴-2-甲基苯基)-8-甲基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮
將2-胺基-N-(3-溴-2-甲基苯基)-3-甲基苯甲醯胺(1.71g,5.36mmol)及三光氣(2.07g,6.96mmol)於THF(20mL)中之溶液在回流下加熱1h。在冰水浴上冷卻混合物並用飽和NaHCO3水溶液處理。繼續攪拌直至停止氣體排放為止。用DCM將所得混合物萃取3次。用水洗滌合併之有機相，乾燥並濃縮。用乙醚研磨殘餘物，從而得到白色固體，藉由過濾收集。第二次研磨濃縮濾液得到額外固體，藉由過濾收集。濃縮來自此操作之濾液並藉由在矽膠(40g)上管柱層析純化，用EtOAc-己烷(0至100%之梯度)洗脫，從而得到額外固體。合併三批固體，從而得到白色固體狀3-(3-溴-2-甲基苯基)-8-甲基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(1.69g,91%產率)。質譜m/z 345,347(M+H)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)：δ 8.07(d,J=7.9Hz,1H),7.70(dd,J=7.9,1.3Hz,1H),7.54(d,J=7.3Hz,1H),7.27-7.17(m,3H),2.41(s,3H),2.28(s,3H)。
中間體9C：3-(3-溴-2-甲基苯基)-1,8-二甲基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮
用碘甲烷(0.85mL,13.6mmol)處理3-(3-溴-2-甲基苯基)-8-甲基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(470mg,1.36mmol)及Cs2CO3(1.33g,4.08mmol)於DMF(8mL)中之混合物並在室溫下攪拌1.5h。用EtOAc稀釋混合物，依次用水及兩份10% LiCl水溶液洗滌。用EtOAc萃取合併之水相。依次用10% LiCl水溶液及水洗滌合併之有機相，乾燥並濃縮，從而得到不純的白色固體狀3-(3-溴-2-甲基苯基)-1,8-二甲基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(510mg)，其未經進一步純化即使用。質譜m/z 359,361(M+H)+。
中間體9：
使用與針對中間體2之製備所闡述相同之程序，將3-(3-溴-2-甲基苯基)-1,8-二甲基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(489mg,1.36mmol)轉化成白色固體狀1,8-二甲基-3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(410mg,74%產率)。質譜m/z 407(M+H)+。
中間體10及11
8-氟-1-甲基-3-(S)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(I-10)，及8-氟-1-甲基-3-(R)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(I-11)
藉由如下之對掌性超臨界流體層析分離外消旋8-氟-1-甲基-3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體2]之試樣：管柱：(R,R)-WHELK-O® 1(3×25cm,5μm)；流動相：CO2-MeOH(70：30)，200mL/min,100巴，30℃；試樣製備：97.3mg/mL，存於MeOH：DCM(1：1)中；注入；4mL。自管柱洗脫之第一峰得到(S)異構物白色固體狀8-氟-1-甲基-3-(S)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體10]。質譜m/z 411(M+H)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 8.14-8.08(m,1H),7.93(dd,J=7.5,1.3Hz,1H),7.48(ddd,J=14.0,8.0,1.5Hz,1H),7.34(t,J=7.6Hz,1H),7.27-7.20(m,2H),3.88(d,J=7.9Hz,3H),2.36(s,3H),1.36(s,12H)。
自管柱洗脫之第二峰得到(R)異構物白色固體狀8-氟-1-甲基-3-(R)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體11]。質譜m/z 411(M+H)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 8.13-8.08(m,1H),7.93(dd,J=7.5,1.3Hz,1H),7.48(ddd,J=13.9,8.1,1.5Hz,1H),7.37-7.31(m,1H),7.27-7.20(m,2H),3.88(d,J=7.9Hz,3H),2.36(s,3H),1.36(s,12H)。
中間體10之替代製備：
用碳酸銫(99g,303mmol)及碘甲烷(12.6mL,202mmol)處理8-氟-3-(2-甲基-3-(S)-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉- 2,4(1H,3H)-二酮[中間體19](40g,101mmol)於四氫呋喃(400mL)中之溶液。將所得渾濁溶液在室溫下攪拌過夜。添加水(300mL)並用EtOAc(3×150mL)萃取反應混合物。依次用鹽水及水洗滌合併之有機相，並乾燥並濃縮。藉由自EtOAc重結晶純化殘餘物，從而得到白色固體狀8-氟-1-甲基-3-(S)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(38g,92%產率)。
中間體12
3-(3-溴-2-甲基苯基)-8-甲氧基-1-甲基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮
中間體12A：2-胺基-N-(3-溴-2-甲基苯基)-3-甲氧基苯甲醯胺
在0℃下用存於甲苯中之2M三甲鋁(3.24mL,6.47mmol)處理3-溴-2-甲基苯胺(482mg,2.59mmol)及8-甲氧基-1H-苯并[d][1,3]噁嗪-2,4-二酮(500mg,2.59mmol)於甲苯(20mL)中之混合物。將混合物在室溫下攪拌10分鐘，然後在70℃下加熱過夜。使混合物冷卻至室溫，用1N HCl水溶液處理並用EtOAc萃取3次。依次用飽和NaHCO3水溶液及水洗滌合併之有機相，乾燥並濃縮。使殘餘物在矽膠(40g)上經受管柱層析，用EtOAc-己烷(0至100%之梯度)洗脫，從而得到白色固體狀2-胺基-N-(3-溴-2-甲基苯基)-3-甲氧基苯甲醯胺(302mg,35%產率)。質譜m/z 335,337(M+H)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 7.72 (d,J=7.3Hz,2H),7.46(dd,J=8.0,0.8Hz,1H),7.17-7.10(m,2H),6.90(dd,J=7.9,0.9Hz,1H),6.72-6.66(m,1H),5.88(br.s.,2H),3.92(s,3H),2.43(s,3H)。
中間體12B：3-(3-溴-2-甲基苯基)-8-甲氧基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮
將2-胺基-N-(3-溴-2-甲基苯基)-3-甲氧基苯甲醯胺(302mg,0.901mmol)及三光氣(321mg,1.081mmol)於THF(20mL)中之溶液在室溫下攪拌2h。用飽和NaHCO3水溶液小心處理混合物並攪拌直至停止氣體排放為止。用DCM將混合物萃取兩次，並用水洗滌合併之有機相，乾燥並濃縮，從而得到3-(3-溴-2-甲基苯基)-8-甲氧基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(339mg)，其未經進一步純化即使用。質譜m/z 361,363(M+H)+。
中間體12C：3-(3-溴-2-甲基苯基)-8-甲氧基-1-甲基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮
將3-(3-溴-2-甲基苯基)-8-甲氧基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(535mg,1.48mmol)、碘甲烷(0.185mL,2.96mmol)及Cs2CO3(965mg,2.96mmol)於THF(20mL)中之混合物在室溫下攪拌過夜。過濾混合物並濃縮。將殘餘物溶解於DCM中，依次用飽和NaHCO3水溶液及水洗滌，乾燥並濃縮。藉由在矽膠(40g二氧化矽)上管柱層析純化殘餘物，用 EtOAc-己烷(0至100%之梯度)洗脫，從而得到3-(3-溴-2-甲基苯基)-8-甲氧基-1-甲基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(442mg)。質譜m/z 375,377(M+H)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 7.90(dd,J=7.2,2.3Hz,1H),7.66(dd,J=8.0,1.2Hz,1H),7.31-7.22(m,2H),7.22-7.19(m,1H),7.17-7.13(m,1H),3.97(s,3H),3.89(s,3H),2.23(s,3H)。
中間體12
將3-(3-溴-2-甲基苯基)-8-甲氧基-1-甲基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(380mg,1.01mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼)(309mg,1.22mmol)、乙酸鉀(298mg,3.04mmol)及PdCl2(dppf)DCM加合物(41.4mg,0.051mmol)於二噁烷(20mL)中之混合物在90℃下加熱過夜。過濾冷卻混合物並濃縮濾液。藉由在矽膠(24g)上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(20%至55%之梯度)洗脫，從而得到8-甲氧基-1-甲基-3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(純度為75%，其未經進一步純化即使用)(486mg,85%產率)。質譜m/z 423(M+H)+。
中間體13
3-(3-溴-2-甲基苯基)-6-氟-1-甲基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮
中間體13A：2-胺基-N-(3-溴-2-甲基苯基)-5-氟苯甲醯胺
在冰水浴上冷卻3-溴-2-甲基苯胺(1.50g,8.06mmol)及6-氟-1H-苯并[d][1,3]噁嗪-2,4-二酮(1.46g,8.06mmol)於甲苯(40mL)中之混合物並用存於甲苯中之2M三甲鋁(10.1mL,20.2mmol)進行逐份處理。將混合物在室溫下攪拌30min，然後在70℃下加熱過夜。使混合物冷卻至0℃，用1M HCl水溶液小心處理，並用EtOAc萃取3次。依次用飽和NaHCO3水溶液及水洗滌合併之有機相，乾燥並濃縮。使殘餘物在矽膠(120g)上經受管柱層析，用EtOAc-己烷(5%至40%之梯度)洗脫，從而得到2-胺基-N-(3-溴-2-甲基苯基)-5-氟苯甲醯胺(0.893g,87%純度，30%產率)。質譜m/z 323,325(M+H)+。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ 7.54(1 H,dd,J=8.03,0.99Hz),7.48(1 H,dd,J=9.68,3.08Hz),7.33(1 H,d,J=7.26Hz),7.16(1 H,t,J=7.92Hz),7.04-7.12(1 H,m),6.83(1 H,dd,J=9.02,4.62Hz),2.39(3 H,s)。
中間體13B：3-(3-溴-2-甲基苯基)-6-氟喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮
將2-胺基-N-(3-溴-2-甲基苯基)-5-氟苯甲醯胺(0.893g,2.76mmol)及三光氣(0.984g,3.32mmol)於THF(30mL)中之溶液在室溫下攪拌2h，用飽和NaHCO3水溶液小心處理混合物並攪拌直至停止氣體排放為止。用DCM將混合物萃取兩次。用水洗滌合併之有機相，乾燥並濃縮。用DCM研磨殘餘物，從而得到白色固體，藉由過濾進行分離。濃縮濾液並使其在矽膠(40g)上經受管柱層析，用EtOAc-己烷(0至80%之梯度)洗脫，從而得到額外固體。合併兩種固體，從而得到白色固體狀3-(3-溴-2-甲基苯基)-6-氟喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(845mg,87%產率)。質譜m/z 349,351(M+H)+。
中間體13C：3-(3-溴-2-甲基苯基)-6-氟-1-甲基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮
將3-(3-溴-2-甲基苯基)-6-氟喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(742mg,2.13mmol)、碘甲烷(0.159mL,2.55mmol)及Cs2CO3(1.039g,3.19mmol)於THF(20mL)中之混合物在室溫下攪拌過夜。過濾混合物並濃縮。將殘餘物溶解於DCM中並依次用飽和NaHCO3水溶液及水洗滌，乾燥並濃縮，從而得到3-(3-溴-2-甲基苯基)-6-氟-1-甲基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(742mg,96%產率)。質譜m/z 363,365(M+H)+。
中間體13：
將3-(3-溴-2-甲基苯基)-6-氟-1-甲基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(742mg,2.04mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼)(623mg,2.45mmol)、乙酸鉀(602mg,6.13mmol)及PdCl2(dppf)DCM加合物(83mg,0.102mmol)於二噁烷(20mL)中之混合物在90℃下加熱過夜。過濾冷卻混合物並濃縮濾液。藉由在矽膠(120g)上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(0至40%之梯度)洗脫，從而得到6-氟-1-甲基-3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(866mg)，其未經進一步純化即使用。質譜m/z 411(M+H)+。
中間體14
7-甲氧基-1-甲基-3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮
中間體14A：2-胺基-N-(3-溴-2-甲基苯基)-4-甲氧基苯甲醯胺
在0℃下用存於甲苯中之2M三甲鋁(3.24mL,6.48mmol)處理3-溴-2-甲基苯胺(482mg,2.59mmol)7-甲氧基-1H-苯并[d][1,3]噁嗪-2,4-二酮(500mg,2.59mmol)於甲苯(20mL)中之混合物。將混合物在室溫下攪拌10min，然後在70℃下加熱過夜。用1M HCl水溶液處理冷卻混合物，用EtOAc萃取3次，並依次用飽和NaHCO3水溶液及水洗滌合併之有機相，乾燥並濃縮。藉由在矽膠(40g)上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(0至100%之梯度)洗脫，從而得到2-胺基-N-(3-溴-2-甲基苯基)-4-甲氧基苯甲醯胺與3-(3-溴-2-甲基苯基)-7-甲氧基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮之4：1混合物(592mg)。質譜m/z 335,337(M+H)+。
中間體14B：3-(3-溴-2-甲基苯基)-7-甲氧基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮
將2-胺基-N-(3-溴-2-甲基苯基)-4-甲氧基苯甲醯胺(596mg,1.78mmol)及三光氣(633mg,2.13mmol)於THF(30mL)中之溶液在室溫下攪拌2h。用飽和NaHCO3水溶液處理混合物並攪拌直至停止氣體排放 為止。用DCM將所得混合物萃取兩次，並用水洗滌合併之有機相，乾燥並濃縮。藉由在矽膠(40g)上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(0至100%之梯度)洗脫，從而得到白色固體狀3-(3-溴-2-甲基苯基)-7-甲氧基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(440mg,68%產率)。質譜m/z 361,363(M+H)+。
中間體14C：3-(3-溴-2-甲基苯基)-7-甲氧基-1-甲基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮
在室溫下用碘甲烷(303mg,2.13mmol)及Cs2CO3(869mg,2.67mmol)處理3-(3-溴-2-甲基苯基)-7-甲氧基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(440mg,1.22mmol)於THF(30mL)中之溶液。將混合物在室溫下攪拌過夜，然後過濾並濃縮。將殘餘物溶解於DCM中並依次用飽和NaHCO3水溶液及水洗滌，乾燥並濃縮，從而得到3-(3-溴-2-甲基苯基)-7-甲氧基-1-甲基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(502mg)，其未經進一步純化即使用。質譜m/z 375,377(M+H)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 8.21(d,J=8.8Hz,1H),7.67(dd,J=7.9,1.3Hz,1H),7.24-7.18(m,1H),7.17-7.13(m,1H),6.88(dd,J=8.8,2.2Hz,1H),6.72(d,J=2.2Hz,1H),3.99(s,3H),3.64(s,3H),2.24(s,3H)。
中間體14：
將3-(3-溴-2-甲基苯基)-7-甲氧基-1-甲基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(390mg,1.04mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼)(317mg,1.25mmol)、乙酸鉀(306mg,3.12mmol)及PdCl2(dppf)DCM加合物(42.4mg,0.052mmol)於二噁烷(20mL)中之混合物在90℃ 下加熱過夜。過濾冷卻混合物並濃縮。藉由在矽膠(40g)上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(10%至55%之梯度)洗脫，從而得到7-甲氧基-1-甲基-3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(504mg,76%純度，87%產率)，其未經進一步純化即使用。質譜m/z 423(M+H)+。
中間體15
7-氟-1-甲基-3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮
中間體15A：2-胺基-N-(3-溴-2-甲基苯基)-4-氟苯甲醯胺
將7-氟-1H-苯并[d][1,3]噁嗪-2,4-二酮(5.00g,27.6mmol)及3-溴-2-甲基苯胺(5.14g,27.6mmol)於二甲苯(50mL)中之混合物在回流下加熱8h。過濾冷卻混合物。用DCM將所收集固體洗滌3次並濃縮合併之濾液。藉由在矽膠(330g)上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(0至45%之梯度)洗脫，從而得到2-胺基-N-(3-溴-2-甲基苯基)-4-氟苯甲醯胺(3.65g,41%產率)。質譜m/z 323,325(M+H)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 7.65(1 H,d,J=8.14Hz),7.45-7.57(3 H,m),7.14(1 H,t,J=8.03Hz),6.39-6.50(2 H,m),5.80(2 H,br.s.),2.43(3 H,s)。
中間體15B：3-(3-溴-2-甲基苯基)-7-氟喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮
在室溫下用三光氣(3.69g,12.4mmol)處理2-胺基-N-(3-溴-2-甲基苯基)-4-氟苯甲醯胺(3.65g,11.3mmol)於THF(50mL)中之溶液。將溶液在室溫下攪拌2h，然後用飽和NaHCO3水溶液緩慢處理並攪拌直至不再觀察到氣體排放為止。用EtOAc將所得混合物萃取兩次。用水、然後用鹽水將合併之有機相洗滌兩次，乾燥並濃縮，從而得到3-(3-溴-2-甲基苯基)-7-氟喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(4.20g)，其未經進一步純化即使用。質譜m/z 349,351(M+H)+。
中間體15C：3-(3-溴-2-甲基苯基)-7-氟-1-甲基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮
將3-(3-溴-2-甲基苯基)-7-氟喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(2.70g,7.73mmol)、碘甲烷(0.580mL,9.28mmol)及Cs2CO3(3.78g,11.6mmol)於THF(20mL)中之混合物在室溫下攪拌3h。過濾混合物並用DCM稀釋濾液並用水洗滌。用DCM萃取水相，並乾燥合併之有機相並濃縮，從而得到3-(3-溴-2-甲基苯基)-7-氟-1-甲基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(2.85g)，其未經進一步純化即使用。質譜m/z 363,365(M+H)+,385,387(M+Na)+。
中間體15：
將3-(3-溴-2-甲基苯基)-7-氟-1-甲基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(2.81g,7.74mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼)(2.36g,9.28mmol)、乙酸鉀(1.52g,15.5mmol)及PdCl2(dppf)DCM加合物(0.190g,0.232mmol)於二噁烷(20mL)中之混合物在90℃下加熱8h。添加額外PdCl2(dppf)DCM加合物(0.190g,0.232mmol)及乙酸鉀(0.80g)並將混合物在90℃下再加熱7h。用EtOAc稀釋冷卻混合物並依次用飽和NaHCO3水溶液及水洗滌。用EtOAc萃取合併之水相。藉助CELITE®過濾合併之有機相並濃縮。藉由在矽膠(220g)上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(0至40%之梯度)洗脫，從而得到7-氟-1-甲基-3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(1.76g,56%產率)。質譜m/z 411(M+H)+。
中間體16
6,8-二氟-3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮
中間體16A：N-(3-溴-2-甲基苯基)-3,5-二氟-2-硝基苯甲醯胺
用草醯氯(0.337mL,3.86mmol)然後用DMF(3滴)處理3,5-二氟-2-硝基苯甲酸(522mg,2.57mmol)於DCM(10mL)中之溶液。將所得溶 液在室溫下攪拌60min。濃縮混合物並自無水DCM將殘餘物再濃縮兩次。將殘餘物溶解於DCM(10mL)中並用3-溴-2-甲基苯胺(478mg,2.57mmol)逐滴處理，隨後逐滴添加TEA(0.537mL,3.86mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌過夜。用飽和NaHCO3水溶液處理混合物，從而形成白色沈澱物。分離有機相，並用DCM將水相及白色固體萃取兩次，然後過濾。用水洗滌所收集固體並亁燥。乾燥合併之有機相並濃縮，並用DCM研磨殘餘物，從而得到額外固體。將兩批固體與DCM及MeOH合併並濃縮，從而得到N-(3-溴-2-甲基苯基)-3,5-二氟-2-硝基苯甲醯胺(821mg,86%產率)。質譜m/z 371,373(M+H)+ 393,395(M+Na)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 10.65(s,1H),7.98-7.90(m,1H),7.81(d,J=8.1Hz,1H),7.55(d,J=7.9Hz,1H),7.40(d,J=7.7Hz,1H),7.21(t,J=7.9Hz,1H),2.32(s,3H)。
中間體16B：2-胺基-N-(3-溴-2-甲基苯基)-3,5-二氟苯甲醯胺
將N-(3-溴-2-甲基苯基)-3,5-二氟-2-硝基苯甲醯胺(821mg,2.21mmol)、NH4Cl(1.18g,22.1mmol)及鋅(1.45g,22.1mmol)於MeOH(10mL)中之混合物在室溫下攪拌60min。過濾混合物並濃縮濾液。將殘餘物懸浮於DCM中並用飽和NaHCO3水溶液洗滌。使有機相(具有不可溶性沈澱物)與水相分離並濃縮，從而得到2-胺基-N-(3-溴-2-甲基苯基)-3,5-二氟苯甲醯胺(760mg)，其未經進一步純化即使用。質譜m/z 341,343(M+H)+,363,365(M+Na)+。
中間體16C：3-(3-溴-2-甲基苯基)-6,8-二氟喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮
用三光氣(722mg,2.43mmol)逐份處理2-胺基-N-(3-溴-2-甲基苯基)-3,5-二氟苯甲醯胺(760mg,2.23mmol)於THF(10mL)中之溶液。將溶液在室溫下攪拌60min，然後用飽和NaHCO3水溶液逐滴處理並攪拌直至不再觀察到氣體排放為止。分離有機相，用水洗滌，乾燥並濃縮。藉由在矽膠(40g)上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(0至100%之梯度)洗脫，從而得到3-(3-溴-2-甲基苯基)-6,8-二氟喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(820mg)，其未經進一步純化即使用。質譜m/z 367,369(M+H)+,389,391(M+Na)+。
中間體16：
將3-(3-溴-2-甲基苯基)-6,8-二氟喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(1.43g,3.89mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼)(1.29g,5.06mmol)、乙酸鉀(0.956g,9.74mmol)及PdCl2(dppf)DCM加合物(0.159g,0.195mmol)於二噁烷(20mL)中之混合物在100℃下加熱5h。過濾冷卻混合物並濃縮濾液。藉由在矽膠(40g+12g堆疊管柱)上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(0至100%之梯度)洗脫，從而得到6,8-二氟-3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(1.20g,74%產率)。質譜m/z 415(M+H)+。
中間體17
8-氟-3-(RS)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮
用氮將3-(3-溴-2-甲基苯基)-8-氟喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體1](0.349g,1.00mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼)(0.305g,1.20mmol)、PdCl2(dppf)DCM加合物(0.041g,0.050mmol)及乙酸鉀(0.245g,2.50mmol)於二噁烷(20mL)及DMSO(4mL)中之攪拌混合物鼓泡5min，然後在90℃下加熱過夜。將冷卻混合物分配於EtOAc與水之間。依次用飽和NaHCO3水溶液、水及鹽水洗滌有機相，並乾燥並濃縮。藉由在矽膠上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(20：80)洗脫，從而得到白色固體狀8-氟-3-(RS)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(0.326g,82%產率)。質譜m/z 397(M+H)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 11.78(s,1H),7.80(d,J=7.2Hz,1H),7.72(dd,J=7.4,1.5Hz,1H),7.71-7.56(m,1H),7.45-7.35(m,1H),7.35-7.29(m,1H),7.29-7.16(m,1H),2.22(s,3H),1.33(s,12H)。
中間體18及19
8-氟-3-(R)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(18)，及8-氟-3-(S)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(19)
藉由如下之超臨界流體層析分離8-氟-3-(RS)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體17]之試樣：管柱：對掌性CEL® OD-H(5×25cm,5μm)；流動相：CO2-MeOH(70：30)，300mL/min,100巴，40℃；試樣製備：103mg/mL，存於DCM-MeOH(44：56)中；注入：5.0mL。自管柱洗脫之第一峰得到R鏡像異構物白色固體狀8-氟-3-(R)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體18]。自管柱洗脫之第二峰得到S鏡像異構物白色固體狀8-氟-3-(S)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體19]。每一鏡像異構構型異構物之質譜及1H NMR與中間體17相同。
中間體20
8-氟-1-甲基(d3)-3-(RS)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮
中間體20A：3-(3-溴-2-甲基苯基)-8-氟-1-甲基(d3)喹唑啉- 2,4(1H,3H)-二酮
用碘甲烷-d3(0.80mL,12.9mmol)處理3-(3-溴-2-甲基苯基)-8-氟喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體1](3.00g,8.59mmol)及Cs2CO3(5.60g,17.2mmol)於DMF(45mL)中之混合物，並將混合物在室溫下攪拌1.75h。將混合物傾倒至快速攪拌之水(400mL)中並在室溫下攪拌，從而形成懸浮固體。藉由過濾收集沈澱物，用水洗滌並在真空下乾燥，從而得到灰白色固體狀3-(3-溴-2-甲基苯基)-8-氟-1-甲基(d3)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(3.05g,97%產率)。質譜m/z 366,368(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 7.93(dt,J=7.9,0.7Hz,1H),7.82-7.63(m,2H),7.45-7.18(m,3H),2.12(s,3H)。
中間體20：
在音波處理下用氬將3-(3-溴-2-甲基苯基)-8-氟-1-甲基(d3)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(3.00g,8.19mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼)(2.70g,10.7mmol)及乙酸鉀(2.41g,24.6mmol)於二噁烷(40mL)中之混合物鼓泡約2min，然後用PdCl2(dppf)DCM加合物(0.335g,0.410mmol)處理。將混合物在90℃下加熱15.75h。用EtOAc稀釋冷卻混合物，藉助CELITE®過濾，並用EtOAc沖洗固體。濃縮合併之濾液，並藉由在矽膠(330g)上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(0至40%之梯度)洗脫，從而得到灰白色固體狀8-氟-1-甲基(d3)-3-(RS)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(3.23g,95%產率)。質譜m/z 414(M+H)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 8.14-8.07(m,1H),7.93(dd,J=7.4,1.4Hz,1H), 7.48(ddd,J=13.9,8.1,1.5Hz,1H),7.37-7.31(m,1H),7.27-7.19(m,2H),2.36(s,3H),1.36(s,12H)。
中間體21及22
8-氟-1-甲基(d3)-3-(S)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(21)，及8-氟-1-甲基(d3)-3-(R)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(22)
藉由如下之超臨界流體層析分離8-氟-1-甲基(d3)-3-(RS)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體20]之試樣：管柱：WHELK-O® R,R(3×25cm,5μm)；流動相：CO2-MeOH(70：30)，200mL/min,100巴，30℃；試樣製備：97.3mg/mL，存於MeOH：DCM(1：1)中；注入：4mL。自管柱洗脫之第一峰得到S鏡像異構物白色固體狀8-氟-1-甲基(d3)-3-(S)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體21]。自管柱洗脫之第二峰得到R鏡像異構物白色固體狀8-氟-1-甲基(d3)-3-(R)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體22]。每一鏡像異構構型異構物之質譜及1H NMR與中間體20相同。
8-氟-1-甲基(d3)-3-(S)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體21]之替代合成：
在冰水浴上攪拌8-氟-3-(S)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體19](5.42g,13.7mmol)於THF(100mL)中之溶液並用Cs2CO3(6.24g,19.2mmol)然後用碘甲烷-d3(1.02mL,16.4mmol)處理，並將混合物在室溫下攪拌16.25h。過濾混合物，用EtOAc沖洗固體，並濃縮合併之濾液。將殘餘物溶解於EtOAc中並依次用水及鹽水洗滌，乾燥並濃縮，從而得到白色固體狀8-氟-1-甲基(d3)-3-(S)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(5.538g,98%產率)。質譜m/z 414(M+H)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 8.11(dq,J=7.8,0.8Hz,1H),7.93(dd,J=7.5,1.3Hz,1H),7.48(ddd,J=13.9,8.1,1.5Hz,1H),7.38-7.30(m,1H),7.27-7.20(m,2H),2.36(s,3H),1.36(s,12H)。
中間體23
3-4-溴-3-氰基-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
中間體23A：4-溴-7-(2-羥基丙-2-基)-3-碘-9H-咔唑-1-甲醯胺
將4-溴-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[根據美國專利第8,084,620號中所闡述之程序合成，實例73-2](2.00g,5.76mmol)、N-碘琥珀醯亞胺(1.69g,7.49mmol)及吡啶(1.9mL,23.0mmol)於DMF(20mL)中之混合物在65℃下加熱2天。用EtOAc稀釋冷卻混合物，用10% LiCl水溶液且然後用鹽水洗滌兩次。用EtOAc萃取水層。乾燥合 併之有機層並濃縮，並藉由在矽膠上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(50%至65%之梯度)洗脫，從而得到黃色固體狀4-溴-7-(2-羥基丙-2-基)-3-碘-9H-咔唑-1-甲醯胺(0.609g,23%產率)。質譜m/z 473,475(M+H-H20)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 11.66(s,1H),8.49(d,J=8.6Hz,1H),8.38(s,1H),8.26(br.s.,1H),7.94(d,J=1.1Hz,1H),7.58(br.s.,1H),7.40(dd,J=8.6,1.4Hz,1H),5.09(s,1H)，及1.51(s,6H)。
中間體23：
使4-溴-7-(2-羥基丙-2-基)-3-碘-9H-咔唑-1-甲醯胺(0.609g,1.29mmol)及氰化鋅(0.076g,0.644mmol)於DMF(7mL)中之混合物經受三次利用氮之抽真空-填充循環。用四(三苯基膦)鈀(0.074g,0.064mmol)處理混合物並在95℃下加熱過夜。用EtOAc稀釋冷卻混合物，用10% LiCl水溶液然後用鹽水洗滌兩次。用EtOAc萃取水層。乾燥合併之有機層並濃縮。用DCM研磨且音波處理殘餘物，並藉由過濾收集沈澱物，從而得到淺黃色固體狀4-溴-3-氰基-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(0.400g,83%產率)。質譜m/z 372,374(M+H-H2O)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 12.12(s,1H),8.55(d,J=8.6Hz,1H),8.38(s,1H),8.31(br.s.,1H),8.03(s,1H),7.74(br.s.,1H),7.49(dd,J=8.6,1.1Hz,1H)及1.52(s,6H)。
中間體24
5-溴-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(外消旋)
中間體24A：4-溴-2,5-二氟苯甲酸
用存於己烷中之2.5M正丁基鋰(1.04mL,2.59mmol)逐滴處理於無水冰丙酮浴中冷卻之1,4-二溴-2,5-二氟苯(640mg,2.35mmol)於無水乙醚(10mL)中之溶液。將溶液在-78℃下攪拌30min，然後用一片乾冰處理。5min後去除冷卻浴，並將混合物再攪拌30min同時升溫至室溫。用EtOAc及水稀釋混合物。分離有機相並用飽和NaHCO3水溶液洗滌兩次。用1M HCl水溶液酸化合併之水相，用DCM萃取兩次，並乾燥合併之有機相並濃縮，從而得到白色固體狀4-溴-2,5-二氟苯甲酸(297mg,53%產率)。
中間體24B：4-溴-5-氟-2-肼基苯甲酸鹽酸鹽
將4-溴-2,5-二氟苯甲酸(2.50g,10.6mmol)及肼(3.81mL,121mmol)於N-甲基-2-吡咯啶酮(2mL)中之混合物在95℃下加熱4h。將冷卻混合物傾倒至於NaCl冰浴中冷卻之劇烈攪拌之6M HCl水溶液(400mL)中。藉由過濾收集所得沈澱物，用6M HCl水溶液(200mL)洗滌並在真空下乾燥，從而得到黃色固體狀4-溴-5-氟-2-肼基苯甲酸鹽酸鹽(1.88g,71%純度，44%產率)，其未經進一步純化即使用。
4-溴-5-氟-2-肼基苯甲酸鹽酸鹽之替代合成：
用亞硝酸鈉(3.24g,47.0mmol)於水(15.7mL)中之溶液逐滴處理經NaCl冰浴冷卻之2-胺基-4-溴-5-氟苯甲酸(10.0g,42.7mmol)於37% HCl水溶液(42.7mL)與水(14.3mL)之混合物中之懸浮液。當完成添加時，將混合物再攪拌30min。添加逐滴氯化錫(II)二水合物(28.9g,128mmol)於37% HCl水溶液(27.5mL)中之溶液。去除冷卻浴並將混合物在室溫下攪拌45min。過濾濃稠懸浮液並用水充分洗滌所收集沈澱物，並在減壓下乾燥過夜。在音波處理下用MeOH研磨固體，並藉由過濾收集沈澱物，用MeOH洗滌並乾燥。濃縮濾液，並用DCM研磨殘餘物。藉由過濾收集所得固體，乾燥並與其他固體合併，從而得到白色固體狀4-溴-5-氟-2-肼基苯甲酸鹽酸鹽(5.37g,44%產率)。質譜m/z 249,251(M+H)+。
中間體24C：5-溴-2-(乙氧基羰基)-6-氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲酸
將4-溴-5-氟-2-肼基苯甲酸鹽酸鹽(5.37g,18.8mmol)、3-側氧基環己烷甲酸乙酯(3.52g,20.7mmol)及乙酸(3.23mL,56.4mmol)於甲苯(90mL)中之混合物在110℃下加熱20h。在減壓下去除溶劑，並用甲苯(43mL)及三氟乙酸(11mL)稀釋殘餘物。將混合物在90-94℃下攪拌過夜。用EtOAc稀釋冷卻混合物，進行音波處理，並藉由過濾收集沈澱物。濃縮濾液並在音波處理下再懸浮於EtOAc中，從而得到另一沈澱物，其亦藉由過濾收集並用EtOAc洗滌。用MeOH將合併之固體研磨兩次，從而得到固體。濃縮合併之濾液並用MeOH研磨殘餘物，從而得到額外固體。合併固體，從而得到淺黃色固體狀5-溴-2-乙氧基羰基-6-氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲酸(3.38g)。質譜m/z 384,386(M+H)+。
中間體24D：5-溴-8-胺甲醯基-6-氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-甲酸乙酯
將5-溴-2-(乙氧基羰基)-6-氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲酸(0.513g,1.34mmol)、EDC(0.384g,2.00mmol)及HOBT(0.307g,2.00mmol)於THF(10mL)及DCM(1.65mL)中之混合物在室溫下攪拌20min。添加氫氧化銨(0.078mL,2.00mmol)，並將混合物在室溫下攪拌60min。用EtOAc稀釋混合物並用飽和NaHCO3水溶液然後用鹽水洗滌兩次。用EtOAc萃取水層，並乾燥合併之有機層並濃縮。在MeOH中在音波處理下研磨殘餘物，從而得到黃色固體狀5-溴-8-胺甲醯基-6-氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-甲酸乙酯(0.432g,84%產率)。質譜m/z 383,385(M+H)+。
中間體24：
在-78℃下經30min利用於乙醚中之1.6M甲基鋰(49mL,78mmol)逐滴處理5-溴-8-胺甲醯基-6-氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-甲酸乙酯(10.0g,26.1mmol)於THF(200mL)中之溶液。將混合物在-78℃下攪拌45min，然後經25min用額外甲基鋰溶液(33mL)處理。將混合物在-78℃下再攪拌90min，然後用飽和NH4Cl水溶液處理並使其升溫至室溫。用EtOAc稀釋混合物並依次用水及鹽水洗滌。用EtOAc萃取水層。乾燥合併之有機層並濃縮。將殘餘物溶解於EtOAc(約100mL)中並藉助頂部具有矽膠墊之CELITE®墊過濾，用EtOAc(約1000mL)進一步洗滌。濃縮濾液，得到淺黃色固體狀外消旋5-溴-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(9.24g,96%產率)。質譜m/z 369,371(M+H)+。
中間體24之替代合成：
在-78℃下經30min向5-溴-8-胺甲醯基-6-氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-甲酸乙酯(10.0g,26.1mmol)於四氫呋喃(200mL)中之溶液中逐滴添加甲基鋰(1.6M，於乙醚中)(3當量；49mL,78mmol)。將反應混合物在-78℃下攪拌45分鐘。經25min添加另外2當量甲基鋰(33mL)，並將反應混合物在-78℃下再攪拌1.5h。在-78℃下用飽和氯化銨水溶液淬滅反應並使其升溫至室溫。用乙酸乙酯稀釋混合物，用水洗滌，並用鹽水洗滌。收集有機層，並依次用乙酸乙酯萃取水層。將合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥，並在減壓下濃縮。將殘餘物溶解於約100mL乙酸乙酯中並在600mL多孔漏斗中使用乙酸乙酯(約1L)藉助頂部具有矽膠墊之CELITE®墊進行過濾。在減壓下濃縮，得到淺黃色固體狀5-溴-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-3-甲醯亞胺(9.24g,25.03mmol,96%產率)。
中間體25及26
(R)-5-溴-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(I-25)，及(S)-5-溴-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(I-26)
藉由如下之對掌性超臨界流體層析分離外消旋5-溴-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺[中間體24]之試樣：管柱：對掌性PAK® OD-H(3×25cm,5μm)；流動相：CO2-MeOH(70：30)， 150mL/min,40℃。自管柱洗脫之第一峰得到(R)-5-溴-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺[中間體25]。自管柱洗脫之第二峰得到(S)-5-溴-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺[中間體26]。兩種鏡像異構物之質譜及1H NMR光譜相同。質譜m/z 369,371(M+H)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 10.96(s,1H),8.07(br.s.,1H),7.55(d,J=10.3Hz,1H),7.50(br.s.,1H),4.24(s,1H),3.26(dd,J=15.8,4.4Hz,1H),2.93(dd,J=17.1,4.6Hz,1H),2.72(t,J=11.7Hz,1H),2.48-2.40(m,1H),2.12(d,J=9.2Hz,1H),1.70-1.62(m,1H)，及1.32(qd,J=12.4,5.3Hz,1H)。
所得中間體26之替代SFC分離：
對掌性PAK® AD-H(3×25cm,5μm)；流動相：CO2-MeOH(55：45)，150mL/min,40℃。自管柱洗脫之第一峰得到(S)-5-溴-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺[中間體26]。自管柱洗脫之第二峰得到(R)-5-溴-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺[中間體25]。
中間體27
4-溴-3-氟-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
中間體27A：4-溴-7-乙氧基羰基-3-氟-9H-咔唑-1-甲酸
將5-溴-2-(乙氧基羰基)-6-氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲酸(2.87g, 7.47mmol)及2,3-二氯-5,6-二氰基苯醌(3.73g,16.4mmol)於THF(45mL)中之溶液在60℃下加熱90min。用EtOAc(約50mL)稀釋冷卻混合物並攪拌60min。藉由過濾收集所得沈澱物，用EtOAc洗滌並乾燥。濃縮濾液，並用MeOH在音波處理下研磨殘餘物，過濾，並用MeOH洗滌沈澱物並乾燥。合併兩批沈澱物，從而得到淺黃色固體狀4-溴-7-乙氧基羰基-3-氟-9H-咔唑-1-甲酸(2.39g,84%產率)。質譜m/z 380,382(M+H)+。
中間體26B：5-溴-8-胺甲醯基-6-氟-9H-咔唑-2-甲酸乙酯
將4-溴-7-(乙氧基羰基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲酸(2.39g,6.29mmol)、EDC(1.81g,9.43mmol)及HOBT(1.44g,9.43mmol)於THF(30mL)及DCM(5mL)中之混合物在室溫下攪拌20min。添加氫氧化銨(0.367mL,9.43mmol)，並將混合物在室溫下攪拌4h。用EtOAc稀釋混合物，用飽和NaHCO3水溶液然後用鹽水洗滌兩次。用EtOAc萃取水層，並乾燥合併之有機層並濃縮。用MeOH在音波處理下研磨殘餘物，從而得到淺黃色固體狀5-溴-8-胺甲醯基-6-氟-9H-咔唑-2-甲酸乙酯(2.26g,95%產率)。質譜m/z 379,381(M+H)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 12.02(s,1H),8.70(d,J=8.3Hz,1H),8.51(d,J=1.1Hz,1H),8.29(br.s.,1H),8.10(d,J=10.3Hz,1H),7.87(dd,J=8.5,1.5Hz,1H),7.74(br.s.,1H),4.37(q,J=6.9Hz,2H)，及1.37(t,J=7.1Hz,3H)。1H NMR(500MHz,MeOH-d4)δ 8.77(d,J=8.2Hz,1H),8.36(d,J=0.9Hz,1H),7.83(d,J=8.2Hz,1H),7.46(d,J=8.2Hz,1H),4.12(q,J=7.0Hz,2H),1.58-1.36(m,4H)，及1.26(t,J=7.2Hz,3H)。
5-溴-8-胺甲醯基-6-氟-9H-咔唑-2-甲酸乙酯之替代合成：
將5-溴-8-胺甲醯基-9H-咔唑-2-甲酸乙酯[根據中所闡述之程序合成美國專利第8,084,620號，中間體48-1](0.100g,0.277mmol)及1-(氯甲基)-4-氟-1,4-重氮化二環[2.2.2]辛烷雙(四氟硼酸酯)[SELECTFLUOR®](0.100g,0.554mmol)於THF(2mL)及MeCN(2mL)中之混合物在60℃下加熱過夜。過濾冷卻混合物並濃縮濾液。使用反相製備型HPLC純化殘餘物，從而得到淺棕色固體狀5-溴-8-胺甲醯基-3-氟-9H-咔唑-2-甲酸乙酯(0.035g)。
中間體27：
在-78℃下經10min利用存於乙醚中之1.6M甲基鋰(2.47mL,3.96mmol)逐滴處理5-溴-8-胺甲醯基-6-氟-9H-咔唑-2-甲酸乙酯(0.500g,1.32mmol)於THF(9.0mL)中之溶液。將混合物在-78℃下攪拌30min，然後用額外甲基鋰溶液(1.65mL,2.64mmol)處理並將混合物在-78℃下攪拌45min以上。用飽和NH4Cl水溶液處理混合物並使其升溫至室溫。用EtOAc稀釋混合物並依次用水及鹽水洗滌。用EtOAc萃取水層並乾燥合併之有機層並濃縮，從而得到淺黃色固體，其係藉由反相製備型HPLC純化。用飽和NaHCO3水溶液中和適當流份並濃縮。將殘餘物分配於EtOAc與水之間，並用鹽水洗滌有機層。用EtOAc萃取水層，並乾燥合併之有機層並濃縮，從而得到淺黃色固體狀4-溴-3-氟-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(0.240g,50%產率)。質譜m/z 347,349(M+H-H2O)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 11.58(s,1H),8.50(d,J=8.6Hz,1H),8.22(br.s.,1H),7.96(d,J=10.3Hz,1H),7.94(d,J=1.1Hz,1H),7.65(br.s.,1H),7.39(dd,J=8.5,1.5Hz,1H),5.09(s,1H)，及1.51(s,6H)。
4-溴-3-氟-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺之替代合成：
在冰水浴中冷卻5-溴-8-胺甲醯基-6-氟-9H-咔唑-2-甲酸乙酯(10g, 26.4mmol)於THF(300mL)中之溶液並用存於THF中之3.0M甲基氯化鎂(70.3mL,211mmol)逐滴處理。將溶液在0℃下攪拌18h。將混合物傾倒至1000mL於冰水浴中冷卻之充分攪拌之飽和NH4Cl水溶液中。用水稀釋所得混合物並用EtOAc萃取兩次。用水然後用鹽水將合併之有機相洗滌兩次，並乾燥並濃縮。藉由在矽膠(330g)上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-DCM(20%至100%之梯度)洗脫，從而得到4-溴-3-氟-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(6.36g,65%產率)。
中間體28
4-溴-7-(2-羥基丙-2-基)-3-甲基-9H-咔唑-1-甲醯胺
中間體28A：5-溴-2-碘-4-甲基苯胺
將3-溴-4-甲基苯胺(5.00g,26.9mmol)、N-碘琥珀醯亞胺(4.53g,20.2mmol)及四氟硼酸雙(吡啶)碘鎓(2.70g,7.26mmol)於DCM(100mL)中之溶液在室溫下攪拌過夜。用DCM稀釋混合物，依次用飽和NaHSO3水溶液及水洗滌，並乾燥並濃縮。藉由在矽膠上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(依次為1%、2%及3%)洗脫，從而得到黃色固體狀5-溴-2-碘-4-甲基苯胺(5.27g,63%產率)。質譜m/z 312,314(M+H)+。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ 7.49(d,J=0.6Hz,1H),6.94(s,1H),4.17-3.91(br.s,2H)，及2.25(s,3H)。
中間體28B：2-胺基-4-溴-5-甲基苯甲腈
使5-溴-2-碘-4-甲基苯胺(5.25g,16.8mmol)及氰化鋅(0.988g,8.41mmol)於DMF(80mL)中之混合物經受三次利用氮之抽真空-填充循環。用四(三苯基膦)鈀(0.972g,0.841mmol)處理混合物並在90℃下加熱過夜。用EtOAc稀釋冷卻混合物並依次用10% LiCl水溶液(兩次)及鹽水洗滌。用EtOAc萃取水層，並乾燥合併之有機層並濃縮。藉由在矽膠上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(依次為1%、2.5%、5%及50%)洗脫，從而得到褐色固體。藉由用MeOH研磨進一步純化殘餘物，從而得到三批固體。藉由在矽膠上管柱層析再次純化濾液，用EtOAc-己烷(5%，然後10%)洗脫。將所得固體與其他批次合併，從而得到淺棕色固體狀2-胺基-4-溴-5-甲基苯甲腈(2.95g,83%產率)。質譜m/z 211,213(M+H)+。
中間體28C：2-胺基-4-溴-5-甲基苯甲酸
將2-胺基-4-溴-5-甲基苯甲腈(2.95g,14.0mmol)於EtOH(21mL)及2M NaOH水溶液(34.9mL,69.9mmol)之混合物中之混合物在回流下加熱過夜。在冷卻至室溫後，在減壓下去除乙醇，並用水稀釋水性殘餘物。在利用濃HCl水溶液將pH調節至約5後，將混合物攪拌30min並藉由過濾收集沈澱物並用水洗滌。將所得濕潤固體溶解於EtOAc中，用鹽水洗滌，乾燥並濃縮，從而得到淺黃色固體狀2-胺基-4-溴-5-甲基苯甲酸(2.92g,91%產率)。質譜m/z 212,214(M+H)+。
中間體28D：4-溴-2-肼基-5-甲基苯甲酸鹽酸鹽
用亞硝酸鈉(0.963g,14.0mmol)於水(4.5mL)中之溶液緩慢逐滴處理於NaCl冰浴中冷卻之2-胺基-4-溴-5-甲基苯甲酸(2.92g,12.7mmol)於37% HCl水溶液(12.7mL)與水(4.3mL)之混合物中之懸浮液，。將所得混合物攪拌45min，然後用氯化錫(II)二水合物(8.59g,38.1mmol)於37% HCl水溶液(8.2mL)中之溶液緩慢逐滴處理。去除冷卻浴，並將混合物在室溫下攪拌60min。過濾混合物，並用水洗滌所收集沈澱物並乾燥。在MeOH中研磨並音波處理固體，並濃縮混合物。用DCM研磨且音波處理殘餘物，並藉由過濾收集沈澱物並用DCM洗滌，從而得到白色固體狀4-溴-2-肼基-5-甲基苯甲酸鹽酸鹽(2.17g,61%產率)。質譜m/z 245,247(M+H)+。
中間體28E：5-溴-2-(乙氧基羰基)-6-甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲酸
將4-溴-2-肼基-5-甲基苯甲酸鹽酸鹽(2.17g,7.71mmol)、3-側氧基環己烷甲酸乙酯(1.44g,8.48mmol)及乙酸(1.32mL,23.1mmol)於甲苯(40mL)中之混合物在油浴中在117℃下加熱5h。濃縮混合物並在真空下乾燥，並用甲苯(18mL)及TFA(4.5mL)稀釋殘餘物。將混合物於90℃下加熱過夜。用EtOAc稀釋冷卻混合物，進行音波處理，並藉由過濾收集沈澱物並用EtOAc洗滌，從而得到黃色固體。濃縮濾液並 在音波處理下將殘餘物懸浮於EtOAc中。藉由過濾收集沈澱物並將且與第一批沈澱物合併。用MeOH研磨固體，從而得到淺黃色固體狀5-溴-2-(乙氧基羰基)-6-甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲酸(1.60g,55%產率)。質譜m/z 380,382(M+H)+。
中間體28F：4-溴-7-(乙氧基羰基)-3-甲基-9H-咔唑-1-甲酸
將5-溴-2-(乙氧基羰基)-6-甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲酸(1.60g,4.21mmol)及2,3-二氯-5,6-二氰基苯醌(2.10g,9.26mmol)於THF(45mL)中之溶液在60℃下加熱60min。用EtOAc(約70mL)稀釋冷卻混合物，攪拌15min，並藉由過濾收集沈澱物，用EtOAc洗滌並乾燥。濃縮濾液，並用MeOH研磨殘餘物，過濾，並用MeOH洗滌所收集沈澱物。合併兩批固體，從而得到淺黃色固體狀4-溴-7-(乙氧基羰基)-3-甲基-9H-咔唑-1-甲酸(1.40g,88%0產率)。質譜m/z 376,378(M+H)+。
中間體28G：5-溴-8-胺甲醯基-6-甲基-9H-咔唑-2-甲酸乙酯
將4-溴-7-(乙氧基羰基)-3-甲基-9H-咔唑-1-甲酸(1.40g,3.72mmol)、EDC(1.070g,5.58mmol)及HOBT(0.855g,5.58mmol)於THF(30mL)與DCM(5mL)之混合物中之混合物在室溫下攪拌60min。添加氫氧化銨(0.217mL,5.58mmol)，並將混合物在室溫下攪拌過夜。用EtOAc稀釋混合物，並用飽和NaHCO3水溶液洗滌。不可達成相分離，因此過濾混合物，並依次用水及EtOAc洗滌所收集固體，用 MeOH研磨並乾燥。分離EtOAc-水濾液並用鹽水洗滌有機相，乾燥並濃縮。用MeOH研磨殘餘物，並將所得固體與第一批固體合併，從而得到灰白色固體狀5-溴-8-胺甲醯基-6-甲基-9H-咔唑-2-甲酸乙酯(1.27g,91%產率)。質譜m/z 375,377(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.88(s,1H),8.77(d,J=8.6Hz,1H),8.48(d,J=0.9Hz,1H),8.20(br.s.,1H),7.84(dd,J=8.5,1.4Hz,1H),7.59(br.s.,1H),4.37(q,J=7.0Hz,2H),2.55(s,3H)，及1.37(t,J=7.0Hz,3H)。
中間體28：
在-78℃下經10min用存於乙醚中之1.6M甲基鋰(2.50mL,4.00mmol)逐滴處理5-溴-8-胺甲醯基-6-甲基-9H-咔唑-2-甲酸乙酯(0.500g,1.33mmol)於THF(12mL)中之溶液。將混合物在-78℃下攪拌30min，然後用額外甲基鋰溶液(1.67mL,2.67mmol)處理。超過30min後，添加額外甲基鋰溶液(1.67mL,2.67mmol)並繼續攪拌45min。然後，用飽和NH4Cl水溶液處理混合物並使其升溫至室溫。用EtOAc稀釋混合物並依次用水及鹽水洗滌。用EtOAc萃取水層，並乾燥合併之有機層並濃縮，從而得到灰白色固體。用MeOH研磨並音波處理固體並藉由過濾收集。藉由反相製備型HPLC純化濾液。用飽和NaHCO3水溶液處理適當流份並濃縮。將殘餘物分配在EtOAc與水之間。用鹽水洗滌有機相，並用EtOAc萃取水層。乾燥合併之有機層並濃縮，並將殘餘物與第一批固體合併，從而得到淺棕色固體狀4-溴-7-(2-羥基丙-2-基)-3-甲基-9H-咔唑-1-甲醯胺(0.409g,85%產率)。質譜m/z 343,345(M+H-H2O)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 11.42(s,1H),8.56(d,J=8.6Hz,1H),8.12(br.s.,1H),7.91-7.89(m,2H),7.48(br.s.,1H),7.36(dd,J=8.3,1.7Hz,1H),5.06(s,1H),2.53(s,3H)，及1.51(s,6H)。
中間體29
5-溴-6-氯-2-(RS)-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(外消旋混合物)
中間體29A：4-溴-5-氯-2-肼基苯甲酸鹽酸鹽
將亞硝酸鈉(3.03g,43.9mmol)於水(14.8mL)中之溶液以溫度不超過0℃之速率逐滴添加至2-胺基-4-溴-5-氯苯甲酸(10.0g,39.9mmol)於37% HCl水溶液(39.9mL)及水(13.3mL)中之冷卻(-10℃,NaCl冰浴)懸浮液中。將所得懸浮液在0℃下攪拌15min，然後用氯化錫(II)水合物(22.7g,120mmol)於37% HCl水溶液(17mL)中之溶液處理。將所得混合物升溫至室溫並攪拌60min。藉由過濾收集沈澱物，用水洗滌並過夜風乾，從而得到灰白色固體狀4-溴-5-氯-2-肼基苯甲酸鹽酸鹽(12.86g,96%產率)。質譜m/z 365,267(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 9.05(br.s.,1H),7.95(s,1H),7.55(s,1H)。
中間體29B：5-溴-6-氯-2-(乙氧基羰基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲酸
將4-溴-5-氯-2-肼基苯甲酸鹽酸鹽(12.89g,37.6mmol)、3-側氧基 環己烷甲酸乙酯(7.03g,41.3mmol)及乙酸(6.45mL,113mmol)於甲苯(188mL)中之懸浮液在105℃下加熱過夜。16h後，添加更多乙酸(6mL)及3-側氧基環己烷甲酸乙酯(2.00g)，並將混合物在110℃下加熱4.5h。濃縮混合物，並將殘餘物與甲苯(100mL)及TFA(20mL)合併。將懸浮液在90℃下加熱過夜。濃縮冷卻混合物，並用EtOAc懸浮殘餘物。藉由過濾收集所得固體，用EtOAc洗滌並風乾，從而得到黃色固體狀5-溴-6-氯-2-(乙氧基羰基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲酸(11.0g,73%產率)。質譜m/z 400,402(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 13.44(br.s.,1H),11.24(s,1H),7.69(s,1H),4.12(qd,J=7.1,2.3Hz,2H),3.23-2.81(m,5H),2.23-2.09(m,1H),1.91-1.75(m,1H),1.22(t,J=7.0Hz,3H)。
中間體29C：5-溴-8-胺甲醯基-6-氯-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-甲酸乙酯
遵循用於製備中間體24D之程序，將5-溴-6-氯-2-(乙氧基羰基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲酸轉化成淺褐色固體狀5-溴-8-胺甲醯基-6-氯-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-甲酸乙酯(8.54g,78%產率)。質譜m/z 399,401(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 13.44(br.s.,1H),11.24(s,1H),7.69(s,1H),4.12(qd,J=7.1,2.3Hz,2H),3.23-2.81(m,5H),2.23-2.09(m,1H),1.91-1.75(m,1H),1.22(t,J=7.0Hz,3H)。
中間體29：
在無水冰丙酮浴中冷卻5-溴-8-胺甲醯基-6-氯-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-甲酸乙酯(7.03g,17.6mmol)於THF(200mL)中之溶液並經40 min用存於THF中之1.6M甲基鋰(66.0mL,106mmol)逐份處理。60min後，在-78℃下用飽和NH4Cl水溶液緩慢處理混合物並攪拌10min同時升溫至室溫。用DCM將混合物萃取3次，並依次用水及鹽水洗滌合併之有機相，並乾燥並濃縮。藉由在矽膠(120g)上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(0至100%之梯度)洗脫，從而得到黃色固體狀5-溴-6-氯-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(4.66g)。質譜m/z 385,387(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.08(s,1H),8.13(br.s.,1H),7.76(s,1H),7.50(br.s.,1H),3.28(d,J=5.5Hz,1H),2.94(dd,J=17.1,4.7Hz,1H),2.79-2.66(m,1H),2.49-2.39(m,1H),2.14(d,J=9.5Hz,1H),1.66(td,J=11.4,4.1Hz,1H),1.33(qd,J=12.4,5.2Hz,1H),1.15(s,6H)。
中間體30及31
(R)-5-溴-6-氯-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(I-30)，及(S)-5-溴-6-氯-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(I-31)
藉由如下之對掌性超臨界流體層析分離外消旋5-溴-6-氯-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺[中間體29]之試樣(2.35g)：管柱：對掌性PAK® IA(3×25cm,5μm)；流動相：CO2-MeOH(50：50)，124mL/min,100巴，45℃；試樣製備：39mg/mL，存於MeOH-DMSO(4：1)中；注入：2.33mL。自管柱洗脫之第一峰得到(R)異構物黃色固體狀(R)-5-溴-6-氯-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H- 咔唑-8-甲醯胺[中間體30](1.15g)。質譜m/z 385,387(M+H)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 11.07(s,1H),8.12(br.s.,1H),7.75(s,1H),7.57-7.45(m,1H),4.23(s,1H),3.27(d,J=4.7Hz,1H),2.93(dd,J=17.2,4.7Hz,1H),2.78-2.67(m,1H),2.48-2.39(m,1H),2.16-2.08(m,1H),1.69-1.59(m,1H),1.37-1.26(m,1H),1.14(s,6H)。
自管柱洗脫之第二峰得到(S)異構物灰白色固體狀(S)-5-溴-6-氯-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺[中間體31](0.92g)。質譜m/z 385,387(M+H)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 11.06(s,1H),8.12(br.s.,1H),7.74(s,1H),7.49(br.s.,1H),4.23(s,1H),3.27(d,J=5.0Hz,1H),2.93(dd,J=17.1,4.6Hz,1H),2.72(t,J=11.8Hz,1H),2.48-2.37(m,1H),2.12(d,J=9.2Hz,1H),1.69-1.59(m,1H),1.38-1.24(m,1H),1.14(s,6H)。
藉由將化合物溶解於過量1,2-二氯乙烷/EtOAc/乙酸中並在室溫下緩慢蒸發溶劑從而得到二乙酸溶劑合物製得之晶體之單一晶體x射線分析證實中間體30之絕對組態。晶胞尺寸：a=11.690(2)Å，b=7.0901(9)Å，c=14.427(3)Å，α=90°，β=110.607(5)°，γ=90°；體積=1119.2(3)Å3；體積/晶胞中之分子數=560Å3；空間群：P21；中間體30之分子/不對稱單位(Z')：1；密度(經計算，g-cm-3)：1.501。室溫下之分數原子坐標係於表8中給出，且結構之繪示係於圖1中給出。
中間體32
5-甲氧基-2-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-1,3(2H)-二酮
中間體32A：2-(3-甲氧基吡啶-2-基)乙酸乙酯
在0℃下用存於己烷中之1.6M正丁基鋰(1.69mL,2.70mmol)緩慢處理二異丙基胺(0.385mL,2.70mmol)於THF(2mL)中之攪拌溶液。將混合物攪拌15min，然後在-78℃下經5min添加至3-甲氧基-2-甲吡啶(0.133g,1.08mmol)及碳酸二乙酯(0.262mL,2.16mmol)於THF(5mL)中之攪拌溶液中。在攪拌超過45min後，去除冷卻浴並在室溫下繼續攪拌過夜。用飽和NH4Cl水溶液處理混合物並用EtOAc稀釋。分離有機相，依次用飽和NaHCO3水溶液及鹽水洗滌，並乾燥並濃縮。藉由在矽膠(12g)上管柱層析純化殘餘物，用50% EtOAc-己烷洗脫，從而得到油狀2-(3-甲氧基吡啶-2-基)乙酸乙酯(0.17g,81%產率)。質譜m/z 196(M+H)+。
中間體32B：2-(3-甲氧基吡啶-2-基)乙酸鈉
在室溫下用3M NaOH水溶液(0.581mL,1.74mmol)處理2-(3-甲氧基吡啶-2-基)乙酸乙酯(0.17g,0.871mmol)於THF(2.5mL)中之攪拌溶液。7h後，濃縮混合物以去除THF並在乾冰上冷凍水性殘餘物並凍乾，從而得到白色固體狀2-(3-甲氧基吡啶-2-基)乙酸鈉。假定定量 產率且該物質未經進一步純化即使用。質譜m/z 168(M+H)+。
中間體32C：N-(3-溴-2-甲基苯基)-2-(3-甲氧基吡啶-2-基)乙醯胺
在室溫下攪拌2-(3-甲氧基吡啶-2-基)乙酸鈉(0.166g,0.871mmol)、3-溴-2-甲基苯胺(0.118mL,0.958mmol)、DIEA(0.608mL,3.48mmol)及HATU(0.397g,1.05mmol)於DMF(4.0mL)中之混合物。1h後，用EtOAc稀釋混合物並用10% LiCl水溶液然後用鹽水洗滌兩次，乾燥並濃縮。藉由在矽膠上管柱層析純化殘餘物，從而得到淺黃色固體狀N-(3-溴-2-甲基苯基)-2-(3-甲氧基吡啶-2-基)乙醯胺(0.213g,73%產率)。質譜m/z 335,337(M+H)+。
中間體32D：2-(3-甲氧基吡啶-2-基)-N-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)乙醯胺
用氬將N-(3-溴-2-甲基苯基)-2-(3-甲氧基吡啶-2-基)乙醯胺(4.00g,11.9mmol)及4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼)(3.48g,13.7mmol)於DMSO(7mL)及二噁烷(35mL)中之混合物鼓泡5min，然後用乙酸鉀(2.93g,29.8mmol)處理。繼續鼓泡2min，然後用PdCl2(dppf)DCM加合物(0.487g,0.597mmol)處理混合物。密封反應器皿並在90℃下加熱過夜。用EtOAc稀釋冷卻混合物且依次用水及鹽 水洗滌。用EtOAc萃取合併之水層，並乾燥合併之有機層並濃縮。藉助矽膠塞用60% EtOAc-己烷過濾殘餘物，並濃縮濾液。藉由在矽膠上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷洗脫，從而得到淺棕色固體狀2-(3-甲氧基吡啶-2-基)-N-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)乙醯胺(5.1g,82%產率)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 9.65(br.s.,1H),8.20(dd,J=4.3,1.7Hz,1H),8.14(d,J=8.1Hz,1H),7.54(d,J=7.3Hz,1H),7.24-7.17(m,3H),4.01(s,2H),3.88(s,3H),2.45(s,3H),1.35(s,12H)。
中間體32：
將2-(3-甲氧基吡啶-2-基)-N-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)乙醯胺(1.45g,3.78mmol)及CDI(2.45g,15.1mmol)於甲苯(19mL)中之混合物在110℃下加熱3h。將冷卻混合物分配於EtOAc與水之間。依次用水及鹽水洗滌有機層，乾燥並濃縮。藉由在矽膠上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷洗脫，從而得到黃色固體狀5-甲氧基-2-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-1,3(2H)-二酮(0.571g,37%產率)。質譜m/z 409(M+H)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 7.96(d,J=7.0Hz,1H),7.91(dd,J=7.4,1.2Hz,1H),7.33(t,J=7.6Hz,1H),7.22(dd,J=7.8,1.2Hz,1H),6.39-6.30(m,2H),6.24(s,1H),3.93(s,3H),2.34(s,3H),1.34(s,12H)。
中間體33
5-氯-2-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-1,3(2H)-二酮(外消旋混合物)
中間體33A：2-(3-氯吡啶-2-基)丙二酸二乙酯
將3-氯-2-氟吡啶(5.00g,38.0mmol)、丙二酸二乙酯(14.6g,91mmol)及Cs2CO3(29.7g,91mmol)於DMSO(42mL)中之混合物在100℃下加熱7h。在室溫下攪拌過夜後，用EtOAc稀釋混合物，用水然後用鹽水洗滌兩次。用EtOAc萃取合併之水層，並乾燥合併之有機相並濃縮，從而得到無色油狀粗製2-(3-氯吡啶-2-基)丙二酸二乙酯，其未經進一步純化即使用。質譜m/z 272(M+H)+。
中間體33B：2-(3-氯吡啶-2-基)乙酸乙酯
將2-(3-氯吡啶-2-基)丙二酸二乙酯(10.32g,38mmol)、氯化鈉(5.55g,95mmol)及水(3.42mL,190mmol)於DMSO(40mL)中之混合物在145℃下加熱8h。使混合物冷卻至室溫，用EtOAc稀釋並用水然後用鹽水洗滌兩次。乾燥有機相並濃縮，從而得到粗製2-(3-氯吡啶-2-基)乙酸乙酯，其未經進一步純化即使用。質譜m/z 200(M+H)+。
中間體33C：2-(3-氯吡啶-2-基)乙酸鈉
在室溫下用3M NaOH水溶液(25.3mL,76mmol)處理2-(3-氯吡啶-2-基)乙酸乙酯(7.59g,38mmol)於THF(76mL)中之溶液。將混合物在室溫下攪拌過夜並濃縮以去除THF。在乾冰上冷凍水性殘餘物並凍乾，從而得到灰白色固體狀2-(3-氯吡啶-2-基)乙酸鈉，其未經進一步純化即使用。質譜m/z 172(M+H)+。
中間體33D：N-(3-溴-2-甲基苯基)-2-(3-氯吡啶-2-基)乙醯胺
在室溫下攪拌2-(3-氯吡啶-2-基)乙酸鈉(7.39g,38mmol)、3-溴-2-甲基苯胺(4.7mL,38.4mmol)、DIEA(13.3mL,76mmol)及HATU(14.6g,38.4mmol)於DMF(127mL)中之混合物。90min後，用EtOAc稀釋混合物並用10% LiCl然後用鹽水洗滌兩次。用EtOAc萃取合併之水層，並乾燥合併之有機相並濃縮至小體積。用來自早前批次之晶體對溶液加晶種並使其靜置過夜，從而得到沈澱物，其係藉由過濾收集並用50% EtOAc-己烷洗滌，從而得到白色固體。濃縮濾液並以類似方式重結晶3次，從而得到額外固體。合併固體，從而得到白色固體狀N-(3-溴-2-甲基苯基)-2-(3-氯吡啶-2-基)乙醯胺(11.43g,89%產率)。質譜m/z 339,341(M+H)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 9.76(br.s.,1H),8.52(d,J=3.5Hz,1H),7.92(d,J=7.9Hz,1H),7.80(dd,J=8.1,1.1Hz,1H),7.36(d,J=7.9Hz,1H),7.32-7.23(m,1H),7.06(t,J=8.0Hz, 1H),4.16(s,2H),2.39(s,3H)。
中間體33E：2-(3-氯吡啶-2-基)-N-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)乙醯胺
用氬將N-(3-溴-2-甲基苯基)-2-(3-氯吡啶-2-基)乙醯胺(4.0g,11.78mmol)及4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼)(3.29g,12.96mmol)於DMSO(5mL)及二噁烷(25mL)中之混合物鼓泡7min，隨後添加乙酸鉀(2.89g,29.4mmol)。將氬鼓泡繼續7min，之後添加PdCl2(dppf)DCM加合物(0.481g,0.589mmol)。將混合物在90℃下加熱7h。用EtOAc稀釋冷卻混合物並藉助CELITE®過濾。依次用水及鹽水洗滌濾液。用EtOAc萃取合併之水層，並乾燥合併之有機相並濃縮。自EtOAc重結晶殘餘物，從而得到白色固體。濃縮母液並自EtOAc重結晶殘餘物。合併兩批固體，從而得到白色固體狀2-(3-氯吡啶-2-基)-N-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)乙醯胺(3.88g,85%產率)。質譜m/z 387(M+H)+。
中間體33：
在110C下加熱2-(3-氯吡啶-2-基)-N-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)乙醯胺(0.192g,0.497mmol)及CDI(0.322g,1.986mmol)於甲苯(2mL)中之混合物。5h後，用EtOAc稀釋冷卻混合物並依次用水及鹽水洗滌。用EtOAc萃取合併之水層，並乾燥合 併之有機相並濃縮。藉由在矽膠上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷洗脫，從而得到亮黃色固體狀外消旋5-氯-2-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-1,3(2H)-二酮(0.133g,65%產率)。質譜m/z 413(M+H)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 8.26(dt,J=7.6,0.9Hz,1H),7.94(dd,J=7.5,1.3Hz,1H),7.36(t,J=7.6Hz,1H),7.27-7.18(m,2H),6.36(t,J=7.3Hz,1H),6.31(s,1H),1.57(s,3H),1.36(s,12H)。
中間體34及35
5-氯-2-(R)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-1,3(2H)-二酮(I-34)，及5-氯-2-(S)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-1,3(2H)-二酮(I-35)
藉由如下之對掌性超臨界流體層析分離外消旋5-氯-2-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-1,3(2H)-二酮[中間體33]之試樣：管柱：WHELK-O® R,R(3×25cm,5μm)；流動相：CO2-MeOH(55：45)，200mL/min,100巴，35℃；試樣製備：96mg/mL，存於MeCN-DCM(1：4)中；注入：5mL。自管柱洗脫之第一峰得到5-氯-2-(R)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-1,3(2H)-二酮[中間體34]。自管柱洗脫之第二峰得到5-氯-2-(S)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼- 2-基)苯基)-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-1,3(2H)-二酮[中間體35]。每一鏡像異構構型異構物之質譜及1H NMR與中間體33相同。
另一選擇為，藉由如下之對掌性超臨界流體層析分離外消旋5-氯-2-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-1,3(2H)-二酮[中間體33]之試樣：管柱：WHELK-O® R,R(3×25cm,5μm)；流動相：CO2-CH3CN(55：45)，200mL/min,100巴，35℃；試樣製備：96mg/mL，存於MeCN-DCM(1：4)中；注入：5mL。自管柱洗脫之第一峰得到5-氯-2-(S)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-1,3(2H)-二酮[中間體35]。可藉由以下進一步純化該物質：將其溶解於THF中，用己烷稀釋並藉由過濾收集沈澱物。
藉由將化合物溶解於過量丙酮中並在室溫下緩慢蒸發溶劑製得之晶體之單一晶體x射線分析證實中間體35之絕對組態。晶胞尺寸：a=19.6161(8)Å，b=9.1411(4)Å，c=12.7541(6)Å，α=90°，β=113.165(2)°，γ=90°；空間群：C2；中間體35之分子/不對稱單位(Z')：1；密度(經計算，g-cm-3)：1.304。室溫下之分數原子坐標係於表9中給出，且結構之繪示係於圖2中給出。
中間體36
6-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-5H-噻唑并[3,2-c]嘧啶-5,7(6H)-二酮
中間體36A：N-(3-溴-2-甲基苯基)-2-(噻唑-2-基)乙醯胺
用HATU(2.36g,6.20mmol)處理3-溴-2-甲基苯胺(0.764mL,6.20mmol)、1,3-噻唑-2-基乙酸(0.74g,5.17mmol)及DIEA(1.63mL,9.30mmol)於DMF(15mL)中之混合物。在攪拌過夜後，用EtOAc稀釋混合物，用10% LiCl水溶液隨後鹽水洗滌兩次，並用EtOAc萃取合併之水層。乾燥合併之有機層並濃縮，並藉由在矽膠上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷洗脫，從而得到白色固體狀N-(3-溴-2-甲基苯基)-2-(噻唑-2-基)乙醯胺(0.681g,42%產率)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 9.84-9.65(m,1H),7.91(d,J=7.9Hz,1H),7.84(d,J=3.3Hz,1H),7.42-7.35(m,2H),7.07(t,J=8.0Hz,1H),4.18(s,2H),2.38(s,3H)。
中間體36B：N-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯 基)-2-(噻唑-2-基)乙醯胺
用氮將N-(3-溴-2-甲基苯基)-2-(噻唑-2-基)乙醯胺(0.53g,1.70mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼)(0.476g,1.87mmol)及乙酸鉀(0.418g,4.26mmol)於DMSO(1.6mL)及二噁烷(8mL)中之混合物鼓泡5min，隨後添加PdCl2(dppf)DCM加合物(0.070g,0.085mmol)。在用氮再鼓泡5min後，將混合物在90℃下加熱7h。用EtOAc稀釋冷卻混合物並藉助CELITE®過濾。依次用水及鹽水洗滌濾液，並乾燥並濃縮。藉由在矽膠(40g)上管柱層析純化殘餘物，用50% EtOAc-己烷洗脫，從而得到灰白色固體狀N-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-2-(噻唑-2-基)乙醯胺(0.45g,74%產率)。質譜m/z 359(M+H)+。
中間體36：
將N-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-2-(噻唑-2-基)乙醯胺(0.45g,1.26mmol)及CDI(0.815g,5.02mmol)於甲苯(6.5mL)中之混合物在110℃下加熱2h。將冷卻混合物分配於EtOAc與水之間。用鹽水洗滌有機層，並用EtOAc萃取合併至水層。乾燥合併之有機層並濃縮。藉由在矽膠(40g)上管柱層析純化殘餘物，用70% EtOAc-己烷洗脫，從而得到稍微不純的淺棕色固體狀6-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-5H-噻唑并[3,2-c]嘧啶-5,7(6H)-二酮(34%產率)。該材料未經進一步純化即使用。質譜m/z 385(M+H)+。
中間體37
外消旋5-氟-2-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-1,3(2H)-二酮
中間體37A：2-(3-氟吡啶-2-基)丙二酸二乙酯
將2,3-二氟吡啶(2.00g,17.4mmol)、Cs2CO3(13.59g,41.7mmol)及丙二酸二乙酯(6.68g,41.7mmol)於DMSO(19mL)中之混合物在100℃下加熱4.5h。將混合物傾倒於冰上，用EtOAc稀釋，並分離有機相，依次用水及鹽水洗滌，並乾燥並濃縮。藉由在矽膠(80g)上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(依次為10%,20%及30%)洗脫，從而得到淺色油狀2-(3-氟吡啶-2-基)丙二酸二乙酯(2.68g,60%產率)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 8.42(dt,J=4.6,1.3Hz,1H),7.43(ddd,J=9.4,8.3,1.4Hz,1H),7.30(dt,J=8.5,4.3Hz,1H),5.09(d,J=1.1Hz,1H),4.30(q,J=7.0Hz,4H),1.33-1.26(m,6H)。
中間體37B：2-(3-氟吡啶-2-基)乙酸乙酯
將2-(3-氟吡啶-2-基)丙二酸二乙酯(2.68g,10.5mmol)、氯化鈉(0.675g,11.6mmol)及水(0.378mL,21.0mmol)於DMSO(15mL)中之混合物加熱在145℃下4.5h。使混合物冷卻，用EtOAc稀釋並依次用水及鹽水洗滌。乾燥有機相並濃縮，從而得到淺色油狀2-(3-氟吡啶-2-基)乙酸乙酯(1.90g,99%產率)，其未經進一步純化即使用。質譜m/z 184(M+H)+。
中間體37C：2-(3-氟吡啶-2-基)乙酸鈉
用3M NaOH水溶液(6.9mL,20.7mmol)處理2-(3-氟吡啶-2-基)乙酸乙酯(1.90g,10.4mmol)於THF(26mL)中之攪拌溶液並在室溫下攪拌過夜。濃縮混合物以去除THF，並冷凍殘餘水溶液並凍乾，從而得到白色固體狀2-(3-氟吡啶-2-基)乙酸鈉(假定100%產率)，其未經進一步純化即使用。質譜m/z 156(M+H)+。
中間體37D：N-(3-溴-2-甲基苯基)-2-(3-氟吡啶-2-基)乙醯胺
將2-(3-氟吡啶-2-基)乙酸鈉(1.847g,10.37mmol)、3-溴-2-甲基苯胺(1.41mL,11.4mmol)、DIEA(5.4mL,31.1mmol)及HATU(4.73g,12.4mmol)於DMF(30mL)中之混合物在室溫下攪拌1.25h。用EtOAc稀釋混合物並用10% LiCl水溶液然後用鹽水洗滌兩次。用EtOAc萃取合併之水層，並乾燥合併之有機相並濃縮。將殘餘物溶解於熱EtOAc 中，使其冷卻，並藉由過濾收集所得白色固體並用60% EtOAc-己烷洗滌。濃縮合併之濾液並使用相同程序使殘餘物重結晶兩次。藉由在矽膠上管柱層析純化來自最終濾液之濃縮之殘餘物，用EtOAc-己烷洗脫，從而得到固體，將該固體與重結晶批次合併，從而得到白色固體狀N-(3-溴-2-甲基苯基)-2-(3-氟吡啶-2-基)乙醯胺(2.03g,61%產率)。質譜m/z 323,325(M+H)+。
中間體37E：2-(3-氟吡啶-2-基)-N-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)乙醯胺
用氮將N-(3-溴-2-甲基苯基)-2-(3-氟吡啶-2-基)乙醯胺(4.20g,13.6mmol)及4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼)(3.80g,14.9mmol)於二噁烷(40mL)中之混合物鼓泡10min。將乙酸鉀(3.33g,34.0mmol)添加至混合物中，再繼續鼓泡5min，並添加PdCl2(dppf)DCM加合物(0.555g,0.679mmol)。將混合物於100℃下加熱過夜。用EtOAc稀釋冷卻混合物，依次用水及鹽水洗滌，乾燥並濃縮。藉由在矽膠上管柱層析純化殘餘物，用DCM-甲基第三丁基醚洗脫，從而得到白色固體狀2-(3-氟吡啶-2-基)-N-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)乙醯胺(3.80g,76%產率)。質譜m/z 371(M+H)+。
中間體37：
將2-(3-氟吡啶-2-基)-N-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)乙醯胺(9.01g,24.3mmol)及CDI(15.78g,97mmol)於甲苯 (97mL)中之混合物在120℃下加熱7h。用EtOAc稀釋冷卻混合物並依次用水及鹽水洗滌。用EtOAc萃取合併之水層，並乾燥合併之有機相並濃縮。藉由在矽膠(220g)上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(20%至100%之梯度)洗脫，從而得到黃色固體狀5-氟-2-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-1,3(2H)-二酮(6.26g,55%產率)。質譜m/z 397(M+H)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 8.11(dd,J=7.6,0.8Hz,1H),7.94(dd,J=7.5,1.3Hz,1H),7.35(t,J=7.5Hz,1H),7.23(dd,J=7.8,1.4Hz,1H),6.85-6.76(m,1H),6.35(td,J=7.4,5.0Hz,1H),6.09(s,1H),2.36(s,3H),1.36(s,12H)。
中間體38及39
5-氟-2-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-1,3(2H)-二酮(單一構型異構物)
藉由如下之對掌性超臨界流體層析分離外消旋5-氟-2-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-1,3(2H)-二酮[中間體37]之試樣(7.5g)：管柱：對掌性CEL® OD-H(5×25cm,5μm)；流動相：CO2-MeOH(76：24)，280mL/min,100巴，40℃；試樣製備：62.5mg/mL，存於DCM-MeOH(1：1)中；注入：0.83mL。自管柱洗脫之第一峰得到黃色固體狀5-氟-2-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-1,3(2H)-二酮之一種構型異構物[中間體38](3.2g，對掌性純度為99.3%)。自管 柱洗脫之第二峰得到黃色固體狀5-氟-2-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-1,3(2H)-二酮之另一構型異構物[中間體39](2.98g，對掌性純度為98.6%)。兩種鏡像異構物之質譜及1H NMR與中間體37相同。
中間體40
(Z)-4-((2-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)亞胺基)-1-甲基-1H-苯并[d][1,3]噁嗪-2(4H)-酮
中間體40A：N-(3-溴-2-氯苯基)-2-(甲基胺基)苯甲醯胺
在0℃下用存於甲苯中之2M三甲鋁(0.99mL,1.98mmol)緩慢處理3-溴-2-氯苯胺[根據美國專利第8,242,260號中闡述之程序製得](240mg,1.162mmol)及甲苯(10mL)之混合物。使混合物升溫至室溫並攪拌15min。緩慢添加1-甲基-1H-苯并[d][1,3]噁嗪-2,4-二酮(300mg,1.52mmol)於甲苯(4mL)中之部分懸浮液。將所得混合物在50℃下加熱4h，冷卻至0℃，並用1M HCl水溶液逐滴處理直至不再觀察到氣體排放為止。將混合物攪拌2h while升溫至室溫，然後was萃取用 EtOAc。依次用NaHCO3及鹽水洗滌有機相，乾燥並濃縮。藉由在矽膠(80g)上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(0至30%之梯度)洗脫，從而得到黃色固體狀N-(3-溴-2-氯苯基)-2-(甲基胺基)苯甲醯胺(110mg,28%產率)。質譜m/z 339,341(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 10.00(s,1H),7.78(dd,J=7.9,1.5Hz,1H),7.67(dd,J=8.1,1.5Hz,1H),7.57(dd,J=8.0,1.4Hz,1H),7.53(d,J=1.3Hz,1H),7.38(ddd,J=8.4,7.1,1.4Hz,1H),7.32(t,J=8.0Hz,1H),6.70(d,J=8.4Hz,1H),6.68-6.61(m,1H),2.79(d,J=5.1Hz,3H)。
中間體40B：(Z)-4-((3-溴-2-氯苯基)亞胺基)-1-甲基-1H-苯并[d][1,3]噁嗪-2(4H)-酮
將N-(3-溴-2-氯苯基)-2-(甲基胺基)苯甲醯胺(150mg,0.442mmol)於THF(15mL)中之溶液冷卻至0℃並用三光氣(197mg,0.663mmol)處理。將混合物在室溫下攪拌1h，然後使其冷卻至0℃並用水處理直至停止氣體排放為止。濃縮混合物，並將殘餘物溶解於EtOAc中並依次用飽和NaHCO3水溶液、水及鹽水洗滌，乾燥並濃縮。藉由在矽膠上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(0至50%之梯度)洗脫，從而得到灰棕色固體狀(Z)-4-((3-溴-2-氯苯基)亞胺基)-1-甲基-1H-苯并[d][1,3]噁嗪-2(4H)-酮(130mg,81%產率)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 8.33(dd,J=7.8,1.4Hz,1H),7.72-7.61(m,1H),7.41(dd,J=7.9,1.5Hz,1H),7.36-7.28(m,1H),7.16-7.08(m,2H),7.07-7.01(m,1H),3.55(s,3H)。
中間體40：
用氮將(Z)-4-((3-溴-2-氯苯基)亞胺基)-1-甲基-1H-苯并[d][1,3]噁嗪-2(4H)-酮(130mg,0.356mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼)(117mg,0.462mmol)及乙酸鉀(87mg,0.889mmol)於二噁烷(4mL)中之混合物鼓泡10min。用PdCl2(dppf)DCM加合物(14.5mg,0.018mmol)處理混合物，並在90℃下加熱過夜。將冷卻混合物分配在EtOAc與水之間。乾燥有機相並濃縮並藉由在矽膠上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(0至50%之梯度)洗脫，從而得到黃色固體狀(Z)-4-((2-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)亞胺基)-1-甲基-1H-苯并[d][1,3]噁嗪-2(4H)-酮(120mg,82%產率)。質譜m/z 413(M+H)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 8.40-8.30(m,1H),7.67-7.58(m,1H),7.48-7.44(m,1H),7.27(s,4H),7.16-7.07(m,2H),3.55-3.47(m,3H),1.40-1.37(m,12H)。
中間體41
3-(2-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-8-氟-1-甲基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮
中間體41A：2-胺基-N-(3-溴-2-氯苯基)-3-氟苯甲醯胺
使3-溴-2-氯苯胺[根據美國專利第8,242,260號中闡述之程序製得](600mg,2.91mmol)與甲苯(10mL)之混合物冷卻至0℃並用存於甲苯中之2M三甲鋁(2.47mL,4.94mmol)緩慢處理。使混合物升溫至室溫並攪拌15min。用8-氟-1H-苯并[d][1,3]噁嗪-2,4-二酮(684mg,3.78mmol)處理混合物並在50℃下加熱16h。使混合物冷卻至0℃並用1M HCl水溶液逐滴處理直至終止氣體排放為止，並攪拌2h同時使其升溫至室溫。用EtOAc將混合物萃取三次。依次用飽和NaHCO3水溶液及鹽水洗滌合併之有機相，乾燥並濃縮。藉由在矽膠(24g)上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(0至30%之梯度)洗脫，從而得到淺黃色固體狀2-胺基-N-(3-溴-2-氯苯基)-3-氟苯甲醯胺(350mg,35%產率)。質譜m/z 343,345(M+H)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 8.46(dd,J=8.4,1.3Hz,1H),8.42(br.s.,1H),7.43(dd,J=8.0,1.4Hz,1H),7.34(d,J=8.1Hz,1H),7.22(t,J=8.3Hz,1H),7.15(ddd,J=11.0,8.0,1.2Hz,1H),6.69(td,J=8.0,5.1Hz,1H),5.72(br.s.,2H)。
中間體41B：3-(3-溴-2-氯苯基)-8-氟喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮
在0℃下將三光氣(453mg,1.53mmol)一次性添加至胺基-N-(3-溴-2-氯苯基)-3-氟苯甲醯胺(350mg,1.019mmol)於THF(10mL)中之溶液中。將混合物在室溫下攪拌1h，然後冷卻至0℃並用水處理直至不再觀察到氣體排放為止。濃縮混合物並將殘餘物溶解於EtOAc中，用飽和NaHCO3水溶液、水及鹽水依次洗滌，並乾燥並濃縮。藉由在矽膠(24g)上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(0至50%之梯度)洗 脫，從而得到黃色固體狀3-(3-溴-2-氯苯基)-8-氟喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(320mg,85%產率)。質譜m/z 369,371(M+H)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 8.54(br.s.,1H),7.97(d,J=8.1Hz,1H),7.77(dd,J=6.8,2.6Hz,1H),7.46(ddd,J=9.8,8.3,1.2Hz,1H),7.36-7.29(m,2H),7.24(td,J=8.0,4.8Hz,1H)。
中間體41C：3-(3-溴-2-氯苯基)-8-氟-1-甲基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮
將碘甲烷(0.102mL,1.62mmol)緩慢添加至3-(3-溴-2-氯苯基)-8-氟喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(300mg,0.812mmol)、DMF(5mL)與Cs2CO3(529mg,1.62mmol)之混合物中。將混合物在室溫下攪拌2h，然後用EtOAc稀釋，依次用水及鹽水洗滌，並乾燥並濃縮。藉由在矽膠(24g)上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(0至30%之梯度)洗脫，從而得到黃色固體狀3-(3-溴-2-氯苯基)-8-氟-1-甲基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(280mg,90%產率)。質譜m/z 383,385(M+H)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 8.09(dq,J=7.8,0.8Hz,1H),7.79-7.71(m,1H),7.49(ddd,J=13.9,8.1,1.5Hz,1H),7.32-7.29(m,2H),7.29-7.22(m,2H),3.88(s,1.5 H),3.86(s,1.5H)。
中間體41：
用氮將3-(3-溴-2-氯苯基)-8-氟-1-甲基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(150mg,0.391mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼)(129mg,0.508mmol)、乙酸鉀(96mg,0.978mmol)與二噁烷(8 mL)之混合物鼓泡10min並用PdCl2(dppf)DCM加合物(16mg,0.020mmol)處理。將混合物在90℃下加熱16h，然後冷卻，並將其分配於EtOAc與水之間。乾燥有機相並濃縮，並藉由在矽膠(12g)上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(0至50%之梯度)洗脫，從而得到白色玻璃狀固體狀3-(2-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-8-氟-1-甲基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(52mg,31%產率)。質譜m/z 431(M+H)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 8.14-8.05(m,1H),7.90-7.82(m,1H),7.51-7.35(m,3H),7.26-7.19(m,1H),3.86(d,J=8.1Hz,3H),1.36(s,12H)。
中間體42
3-(2-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-8-氟喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮
用氮將3-(3-溴-2-氯苯基)-8-氟喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體41B](990mg,2.68mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼)(884mg,3.48mmol)及乙酸鉀(657mg,6.70mmol)於二噁烷(8mL)中之混合物鼓泡10min。添加PdCl2(dppf)DCM加合物(109mg,0.134mmol)並將混合物在90℃下加熱過夜。用EtOAc稀釋冷卻混合物，過濾，並濃縮濾液。藉由在矽膠上管柱層析純化殘餘物，用MeOH-DCM(0至5%之梯度)洗脫，從而得到褐色固體狀3-(2-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-8-氟喹唑啉-2,4(1H,3H)-二 酮(710mg,64%產率)。質譜m/z 416(M+H)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 8.55-8.38(m,1H),8.06-7.93(m,1H),7.90-7.75(m,1H),7.51-7.38(m,3H),7.26-7.13(m,1H),1.26(br.s.,12H)
中間體43
7-氟-3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮
使用用於製備中間體8之程序，將3-(3-溴-2-甲基苯基)-7-氟喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體15B]轉化成7-氟-3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮。質譜m/z 397(M+H)+。
中間體44
1-(4-氟苯基)-3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮
中間體44A：3-(4-甲氧基苄基胺基)-2-(苯基硒基)丙酸甲酯
用丙烯酸甲酯(2.09mL,23.2mmol)處理苯基溴化硒(5.54g,23.5mmol)及氯化鋅(II)(1.27g,9.29mmol)於DCM(116mL)中之懸浮液。將混合物在室溫下攪拌30min，然後用(4-甲氧基苯基)甲胺(6.4mL,48.8mmol)處理，從而形成濃稠懸浮液。在攪拌16h後，過濾混合物，用EtOAc洗滌所收集沈澱物，並濃縮合併之濾液。藉由在矽膠(120g)上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(0至50%之梯度)洗脫，從而得到淺褐色油狀3-(4-甲氧基苄基胺基)-2-(苯基硒基)丙酸甲酯(3.68g,42%產率)。質譜m/z 380(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 7.53-7.49(m,2H),7.39-7.28(m,3H),7.18(d,J=8.6Hz,2H),6.88-6.82(m,2H),3.89(dd,J=8.8,5.9Hz,1H),3.73(s,3H),3.61(s,2H),3.55(s,3H),2.93-2.78(m,2H)。
中間體44B：1-溴-3-異氰酸基-2-甲基苯
用3-溴-2-甲基苯胺(3.00g,16.1mmol)及DIEA(5.6mL,32.2mmol)於甲苯(5.4mL)中之溶液緩慢處理於冰水浴中冷卻之三光氣(2.25g,7.58mmol)於甲苯(27mL)中之溶液。將所得懸浮液在室溫下攪拌2h。藉由過濾去除沈澱物並用EtOAc洗滌。用EtOAc稀釋合併之濾液，用鹽水洗滌，乾燥並濃縮，從而得到褐色油狀1-溴-3-異氰酸基-2-甲基苯(3.68g,98%產率)，其未經純化即使用。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 7.49(dd,J=8.1,0.9Hz,1H),7.31(dd,J=7.9,0.7Hz,1H), 7.15(td,J=8.0,0.7Hz,1H),2.38(s,3H)。
中間體44C：3-(3-溴-2-甲基苯基)-1-(4-甲氧基苄基)-5-(苯基硒基)二氫嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮
將3-((4-甲氧基苄基)胺基)-2-(苯基硒基)丙酸甲酯(3.68g,9.73mmol)、1-溴-3-異氰酸基-2-甲基苯(2.27g,10.7mmol)及K2CO3(0.672g,4.86mmol)於DMF(49mL)中之混合物在65℃下加熱5h。將冷卻混合物分配於水與EtOAc之間。且用鹽水洗滌有機相，乾燥並濃縮，從而得到淺褐色固體狀3-(3-溴-2-甲基苯基)-1-(4-甲氧基苄基)-5-(苯基硒基)二氫嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(5.43g)，其未經進一步純化即使用。質譜m/z 557,559,561(M+H)+。
中間體44D：3-(3-溴-2-甲基苯基)-1-(4-甲氧基苄基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮
用30%過氧化氫水溶液(5.0mL,48.6mmol)處理3-(3-溴-2-甲基苯基)-1-(4-甲氧基苄基)-5-(苯基硒基)二氫嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(5.43g,9.73mmol)於THF(97mL)中之溶液，並將混合物在室溫下攪拌30min。添加水並用EtOAc萃取混合物。用鹽水洗滌有機相，乾燥並濃縮。藉由在矽膠(220g)上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(25% 至70%之梯度)洗脫，從而得到白色固體狀3-(3-溴-2-甲基苯基)-1-(4-甲氧基苄基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(2.10g,54%產率)。質譜m/z 401,403(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 7.95(d,J=7.9Hz,1H),7.70-7.65(m,1H),7.32-7.28(m,2H),7.25-7.22(m,2H),6.96-6.91(m,2H),5.86(d,J=7.9Hz,1H),4.89(d,J=2.4Hz,2H),3.74(s,3H),2.02(s,3H)。
中間體44E：3-(3-溴-2-甲基苯基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮
用三氟甲烷磺酸(0.55mL)處理3-(3-溴-2-甲基苯基)-1-(4-甲氧基苄基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(0.87g,2.17mmol)於TFA(5.5mL)中之溶液並將混合物在室溫下攪拌過夜。將混合物緩慢傾倒於冰上並攪拌同時升溫至室溫。藉由過濾收集沈澱物，用水洗滌並乾燥，從而得到紫色固體狀3-(3-溴-2-甲基苯基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(0.62g,96%產率)。質譜m/z 281,283(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.36(d,J=4.4Hz,1H),7.67(dd,J=6.5,2.8Hz,1H),7.60(dd,J=7.7,5.9Hz,1H),7.27-7.21(m,2H),5.72(dd,J=7.7,1.3Hz,1H),2.07(s,3H)。
中間體44F：3-(3-溴-2-甲基苯基)-1-(4-氟苯基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮
用吡啶(0.363mL,4.48mmol)處理乙酸銅(II)(0.543g,2.99 mmol)、3-(3-溴-2-甲基苯基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(0.42g,1.49mmol)、(4-氟苯基)酸(0.418g,2.99mmol)及經活化分子篩(750mg)於無水DCM(25mL)中之攪拌懸浮液並在室溫下攪拌過夜。用DCM稀釋混合物，藉助CELITE®過濾，並用DCM及THF洗滌固體。用水洗滌合併之濾液，乾燥並濃縮。藉由在矽膠(40g)上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(20%至40%之梯度)洗脫，從而得到黃色玻璃狀固體狀3-(3-溴-2-甲基苯基)-1-(4-氟苯基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(0.36g,43%產率)。質譜m/z 375,377(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 7.91(d,J=7.9Hz,1H),7.68(dd,J=7.9,1.3Hz,1H),7.60-7.51(m,2H),7.40-7.22(m,4H),5.95(d,J=7.9Hz,1H),2.21-2.12(m,3H)。
中間體44：
在110℃下加熱3-(3-溴-2-甲基苯基)-1-(4-氟苯基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(250mg,0.666mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼)(186mg,0.733mmol)、乙酸鉀(131mg,1.33mmol)及PdCl2(dppf)DCM加合物(16mg,0.020mmol)於二噁烷(4.4mL)中之混合物。3h後，添加額外PdCl2(dppf)DCM加合物並將混合物在110℃下加熱超過6h。用EtOAc稀釋冷卻混合物，藉助CELITE®過濾並用EtOAc洗滌固體。依次用飽和NaHCO3水溶液及鹽水洗滌合併之濾液，並乾燥並濃縮。藉由在矽膠(24g)上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(25%至100%之梯度)洗脫，從而得到不純的黃色玻璃狀固體狀1-(4-氟苯基)-3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(217mg)，其未經進一步純化即使用。質譜m/z 423(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 7.90(d,J=7.9Hz,1H),7.69(dd,J=7.0,1.8Hz,1H),7.61-7.52(m,2H),7.40-7.26(m,4H),5.94(d,J=7.9Hz,1H),2.24(s,3H),1.32(s,12H)。
中間體45
4-溴-3-氟-7-(2-羥基乙基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
中間體45A：2-(3-側氧基環己基)丙二酸二乙酯
用1,8-二氮雜二環[5.4.0]十一-7-烯(4.52mL,30.0mmol)處理環己-2-烯酮(3.05mL,30mmol)及丙二酸二乙酯(4.58mL,30.0mmol)於THF(30mL)中之溶液並在50℃下加熱16h。將冷卻混合物傾倒至EtOAc中並依次用1M HCl水溶液及鹽水洗滌。用EtOAc萃取合併之水層，並乾燥合併之有機相並濃縮，從而得到油狀2-(3-側氧基環己基)丙二酸二乙酯(8.0g)，其未經進一步純化即使用。質譜m/z 257(M+H)+。
中間體45B：5-溴-2-(1,3-二乙氧基-1,3-二側氧基丙-2-基)-6-氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲酸
將2-(3-側氧基環己基)丙二酸二乙酯(15.26g,59.5mmol)及4-溴-5-氟-2-肼基苯甲酸鹽酸鹽[中間體24B](17.0g,59.5mmol)於乙酸(120mL)中之溶液在回流下加熱2h，然後在室溫下攪拌過夜。藉由過濾收集形成之沈澱物，從而得到白色固體。濃縮濾液並藉由在矽膠(80g)上管柱層析純化，用EtOAc-己烷(0至100%之梯度)洗脫。使所得油狀 產物自EtOAc、乙醚與己烷之混合物結晶，從而得到額外固體，將該固體與第一批固體合併，從而得到白色固體狀5-溴-2-(1,3-二乙氧基-1,3-二側氧基丙-2-基)-6-氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲酸(10.5g,49%產率)。質譜m/z 470,472(M+H)+。
中間體45C：2-(5-溴-8-胺甲醯基-6-氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-基)丙二酸二乙酯
將5-溴-2-(1,3-二乙氧基-1,3-二側氧基丙-2-基)-6-氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲酸(0.981g,2.09mmol),EDC(0.600g,3.13mmol)及HOBT(0.383g,2.50mmol)於THF(5mL)中之混合物在室溫下攪拌60min。用NH4OH(1.74mL,12.5mmol)處理混合物並在室溫下攪拌過夜。用EtOAc稀釋混合物，依次用飽和Na2CO3水溶液及鹽水洗滌。用EtOAc萃取合併之水層，並乾燥合併之有機相並濃縮。藉由在矽膠(40g)上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(0至100%之梯度)洗脫，從而得到微黃色固體狀2-(5-溴-8-胺甲醯基-6-氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-基)丙二酸二乙酯(440mg,45%產率)。質譜m/z 469,471(M+H)+。
中間體45D：2-(5-溴-8-胺甲醯基-6-氟-9H-咔唑-2-基)丙二酸二乙酯
將2-(5-溴-8-胺甲醯基-6-氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-基)丙二酸二 乙酯(2.26g,4.82mmol)及2,3-二氯-5,6-二氰基苯醌(2.30g,10.1mmol)於THF(30mL)中之溶液在回流下加熱3h。用EtOAc稀釋冷卻混合物並依次用飽和水性Na2CO3及鹽水洗滌。用EtOAc萃取合併之水層，並乾燥合併之有機相並進行部分濃縮。藉由過濾收集形成之白色固體。使濾液穿過矽膠墊，用EtOAc洗脫，並濃縮流出物，從而得到額外固體。合併兩批固體，從而得到白色固體狀2-(5-溴-8-胺甲醯基-6-氟-9H-咔唑-2-基)丙二酸二乙酯(1.86g,83%產率)。質譜m/z 465,467(M+H)+。
中間體45E：2-(5-溴-8-胺甲醯基-6-氟-9H-咔唑-2-基)乙酸乙酯
將2-(5-溴-8-胺甲醯基-6-氟-9H-咔唑-2-基)丙二酸二乙酯(1.30g,2.80mmol)、氯化鈉(0.28g,7.01mmol)及水(0.25mL,14.01mmol)於DMSO(6mL)中之混合物在150℃下加熱20h。將冷卻混合物傾倒至水中，從而形成沈澱物。藉由過濾收集沈澱物並乾燥，然後用DCM研磨。藉由過濾收集固體並乾燥，從而得到灰色固體狀2-(5-溴-8-胺甲醯基-6-氟-9H-咔唑-2-基)乙酸乙酯(930mg,84%產率)。質譜m/z 393,395(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.70(s,1H),8.54(d,J=8.4Hz,1H),8.25(br.s.,1H),8.00(d,J=10.1Hz,1H),7.72(s,1H),7.69(br.s.,1H),7.19(dd,J=8.4,1.5Hz,1H),4.11(q,J=7.0Hz,2H),3.82(s,2H),1.21(t,J=7.2Hz,3H)。
中間體45：
用硼氫化鋰(139mg,6.36mmol)處理2-(5-溴-8-胺甲醯基-6-氟-9H-咔唑-2-基)乙酸乙酯(500mg,1.27mmol)於THF(10mL)中之溶液 並在室溫下攪拌過夜。用飽和NH4Cl水溶液處理混合物並攪拌15min。用水稀釋混合物並用EtOAc萃取兩次。乾燥合併之有機相並濃縮，並藉由在矽膠(40g)上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(30%至100%之梯度)洗脫，從而得到白色固體狀4-溴-3-氟-7-(2-羥基乙基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(310mg,69%產率)。質譜m/z 351,353(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.58(s,1H),8.50(d,J=8.4Hz,1H),8.24(br.s.,1H),7.98(d,J=10.3Hz,1H),7.72-7.63(m,2H),7.15(dd,J=8.4,1.3Hz,1H),4.68(t,J=5.3Hz,1H),3.73-3.64(m,2H),2.90(t,J=7.0Hz,2H)。
實例1及2
3-氯-4-(R)-(3-(R)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(1)，及3-氯-4-(R)-(3-(S)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(2)
製備1A：3-氯-4-(3-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(四種構型異構物之混合物)
將4-溴-3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[中間體3](100mg,0.262mmol)、8-氟-1-甲基-3-(RS)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體2](161mg, 0.393mmol)、四(三苯基膦)鈀(15mg,0.013mmol)及2M K3PO4水溶液(0.26mL,0.524mmol)於THF(2mL)中之混合物在壓力反應小瓶中在90℃下加熱2.5h。濃縮冷卻混合物，並藉由在矽膠(40g)上管柱層析純化殘餘物，用DCM-MeOH-NH4OH(90：9：1至97：2.7：0.3之梯度)洗脫。藉由在矽膠(40g)上管柱層析再次純化所得不純的產物，用EtOAc-己烷(50%至100%之梯度)洗脫，從而得到白色固體狀3-氯-4-(3-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(四種構型異構物之混合物)(110mg,68%產率)。質譜m/z 567(M+H-H2O)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 10.46(s,1H),8.17-8.10(m,1H),7.76(s,1H),7.69(d,J=1.1Hz,1H),7.59-7.53(m,1H),7.48(ddt,J=13.9,8.1,1.8Hz,1H),7.39(dd,J=12.4,7.8Hz,2H),7.28-7.19(m,2H),6.97(t,J=8.5Hz,1H),3.87-3.93(m,3H),1.87(d,J=1.8Hz,3H),1.65(s,3H),1.65(s,3H)。
實例1及2：
藉由如下之對掌性超臨界流體層析分離3-氯-4-(3-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺之四種構型異構物之混合物之試樣(90mg)：管柱：對掌性PAK® AD-H(3×25cm,5μm)；流動相：CO2-IPA(55：45)，120mL/min；試樣製備：10mg/mL；注入：1mL。自管柱洗脫之第二峰得到白色固體狀3-氯-4-(R)-(3-(R)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[實例1]。異構物純度經測定為97.7%。質譜m/z 567(M+H-H2O)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 10.46(s,1H),8.15(d,J=7.3Hz,1H),7.75(s,1H),7.69(d,J=1.1Hz,1H),7.59-7.54(m,1H),7.49(ddd,J=13.9,8.0,1.7Hz,1H),7.43-7.36(m,2H),7.28-7.19(m,2H),6.97(d,J=8.4Hz,1H),3.89(d,J=7.9Hz,3H),1.88(s,3H),1.65 (s,6H)。
自管柱洗脫之第四峰得到白色固體狀3-氯-4-(R)-(3-(S)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[實例2]。異構物純度經測定為99.5%。質譜m/z 567(M+H-H2O)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 10.46(s,1H),8.13(d,J=7.3Hz,1H),7.75(s,1H),7.69(d,J=1.3Hz,1H),7.59-7.53(m,1H),7.48(ddd,J=13.9,8.0,1.7Hz,1H),7.39(dd,J=11.1,7.8Hz,2H),7.27-7.21(m,2H),6.99(d,J=8.4Hz,1H),3.91(d,J=7.9Hz,3H),1.88(s,3H),1.66(s,6H)。
藉由將化合物溶解於過量甲醇中並在室溫下緩慢蒸發溶劑而得到甲醇溶劑合物(結晶形式M-1)而製得之晶體之單一晶體x射線分析證實實例2之絕對組態。晶胞尺寸：a=9.75Å，b=14.21Å，c=21.26Å，α=90.0°，β=90.0°，γ=90.0°；空間群：P212121；實例2之分子/不對稱單位：1；體積/晶胞中之分子數=736Å3；密度(經計算)=1.391g/cm3。203K下之分數原子坐標係於表2中給出，且結構之繪示係於圖3中給出。
實例3
3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-4-(R)-(2-甲基-3-(1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(單一構型異構物)
製備3A：3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-4-(2-甲基-3-(1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(四種構型異構物之混合物)
將4-溴-3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[中間體3](100mg,0.262mmol),1-甲基-3-(RS)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體4](154mg,0.393mmol),2MK3PO4水溶液(0.26mL,0.524mmol)及四(三苯基膦)鈀(15mg,0.013mmol)於THF(2mL)中之混合物在壓力反應小瓶中在90℃下加熱4h。濃縮冷卻混合物並藉由在矽膠(40g)上管柱層析純化殘餘物，用DCM：MeOH：NH4OH(90：9：1至97：2.7：0.3之梯度)洗脫。藉由在矽膠(40g)上管柱層析再次純化所得不純的產物，用EtOAc-己烷(50%至100%之梯度)洗脫，從而得到白色固體狀3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-4-(2-甲基-3-(1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(四種構型異構物之混合物)(105mg,68%產率)。質譜m/z 549(M+H-H2O)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 10.46(s,1H),8.33(ddd,J=11.8,7.9,1.4Hz,1H),7.80-7.74(m,2H),7.69(t,J=1.7Hz,1H),7.58-7.52(m,1H),7.41(d,J=7.5Hz,1H),7.38-7.30(m,3H),7.24(ddd,J=13.9,8.4,1.7Hz,1H),6.98(dd,J=12.8,8.4Hz,1H),3.67-3.76(m,3H),1.88(d,J=1.8Hz,3H),1.65(s,3H),1.65(s,3H)。
實例3：
藉由如下之對掌性超臨界流體層析分離3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-4-(2-甲基-3-(1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺之四種構型異構物之混合物之試樣：管柱：對掌性PAK® IB(2×25cm,5μm)；流動相：CO2-MeOH(65：35)，55mL/min。自管柱洗脫之第三峰得到白色固體狀3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-4-(R)-(2-甲基-3-(1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基) 苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺之單一構型異構物。對掌性純度經測定為97.7%。質譜m/z 549(M+H-H2O)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 10.45(s,1H),8.32(dd,J=8.0,1.7Hz,1H),7.80-7.73(m,2H),7.69(d,J=1.1Hz,1H),7.59-7.53(m,1H),7.44-7.31(m,4H),7.26(dd,J=8.4,1.5Hz,1H),7.01(d,J=8.4Hz,1H),3.72(s,3H),1.89(s,3H),1.66(s,6H)
實例4
3-氯-4-(R)-(3-(1,8-二甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
(單一構型異構物)
製備4A：3-氯-4-(3-(1,8-二甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(四種構型異構物之混合物)
將4-溴-3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[中間體3](100mg,0.262mmol)、1,8-二甲基-3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體9](138mg,0.341mmol)、Cs2CO3(171mg,0.524mmol)及PdCl2(dppf)DCM加合物(10.7mg,0.013mmol)於THF(2mL)及水(500μl)中之混合物在60℃下加熱18h。濃縮冷卻混合物，並藉由在矽膠(40g)上管柱層析純化殘餘 物，用EtOAc-己烷(30%至100%之梯度)洗脫，從而得到淺黃色固體狀3-氯-4-(RS)-(3-(RS)-(1,8-二甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(四種構型異構物之混合物)(97mg,57%產率)。質譜m/z 563(M+H-H2O)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 10.45(s,1H),8.21-8.15(m,1H),7.75(d,J=0.9Hz,1H),7.69(d,J=1.5Hz,1H),7.59-7.51(m,2H),7.44-7.40(m,1H),7.36(dd,J=7.7,1.1Hz,1H),7.26-7.19(m,2H),6.98(t,J=7.9Hz,1H),3.80(d,J=9.9Hz,3H),2.70(d,J=5.7Hz,3H),1.88(s,3H),1.64-1.66(m,6H)。
實例4：
藉由如下之對掌性超臨界流體層析分離3-氯-4-(3-(1,8-二甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺之四種構型異構物之混合物之試樣(90mg)：管柱：對掌性PAK® AD-H(3×25cm,5μm)；流動相：CO2-IPA(55：45)，85mL/min；試樣製備：18mg/mL，存於MeOH中；注入：2.5mL。自管柱洗脫之第四峰得到白色固體狀3-氯-4-(R)-(3-(1,8-二甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺之單一構型異構物(17mg)。對掌性純度經測定大於99%。質譜m/z 563(M+H-H2O)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 10.45(s,1H),8.17(dd,J=7.8,1.2Hz,1H),7.75(s,1H),7.69(d,J=1.1Hz,1H),7.58-7.51(m,2H),7.42(dd,J=7.9,1.1Hz,1H),7.36(dd,J=7.7,1.1Hz,1H),7.27-7.19(m,2H),6.99(d,J=8.4Hz,1H),3.81(s,3H),2.71(s,3H),1.87(s,3H),1.65(s,6H)。
實例5及6
3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-4-(R)-(3-(R)-(7-甲氧基-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺，及 3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-4-(R)-(3-(S)-(7-甲氧基-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
(單一構型異構物)
將4-溴-3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[中間體3](200mg,0.524mmol)、7-甲氧基-1-甲基-3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體14](221mg,0.524mmol)、Cs2CO3(512mg,1.57mmol)及PdCl2(dppf)DCM加合物(21.4mg,0.026mmol)於THF(3mL)及水(0.50mL)中之混合物在60℃下加熱過夜，然後在90℃下加熱4h。濃縮冷卻混合物，並藉由在矽膠(40g)上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(50%至100%之梯度)洗脫，從而得到3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-4-(3-(7-甲氧基-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(四種構型異構物之混合物)(164mg,92%產率)。藉由如下之對掌性超臨界流體層析分離此物質：管柱：對掌性PAK® AD-H(3×25cm,5μm)；流動相：CO2-IPA(60：40)，85mL/min；試樣製備：20.3mg/mL，存於MeOH中；注入：0.75mL。
自管柱洗脫之第三峰得到3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-4-(R)-(3-(7-甲氧基-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺之單一構型異構物[實例5](14mg)。對掌性純度經測定大於99%。質譜m/z 579(M+H-H2O)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 10.43(s,1H),8.24(d,J=8.8Hz,1H),7.73(s,1H),7.65(d,J=1.1Hz,1H),7.55-7.49(m,1H),7.44-7.34(m,1H),7.35-7.31(m,1H),7.19(dd,J=8.5,1.7Hz,1H),6.94(d,J=8.4Hz,1H),6.85(dd,J=8.8,2.2Hz,1H),6.69(d,J=2.2Hz,1H),3.95(s,3H),3.63(s,3H),1.85(s,3H),1.62(s,6H)。
自管柱洗脫之第四峰得到3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-4-(R)-(3-(7-甲氧基-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺之另一單一構型異構物[實例6](28mg)。對掌性純度經測定大於99%。質譜m/z 579(M+H-H2O)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 10.41(s,1H),8.21(d,J=8.8Hz,1H),7.71(s,1H),7.66(d,J=1.1Hz,1H),7.55-7.49(m,1H),7.41-7.36(m,1H),7.35-7.31(m,1H),7.22(dd,J=8.4,1.5Hz,1H),6.97(d,J=8.4Hz,1H),6.84(dd,J=9.0,2.2Hz,1H),6.70(d,J=2.2Hz,1H),3.95(s,3H),3.65(s,3H),1.85(s,3H),1.63(s,6H)。
實例7
3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-4-(R)-(3-(8-甲氧基-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
(單一構型異構物)
將4-溴-3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[中間體3](200mg,0.524mmol)、8-甲氧基-1-甲基-3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2- 二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體12](221mg,0.524mmol)、Cs2CO3(512mg,1.57mmol)、PdCl2(dppf)DCM加合物(21.4mg,0.026mmol)於THF(3mL)及水(0.50mL)中之混合物在壓力反應小瓶中在60℃下加熱過夜，然後在90℃下加熱4小時。用DCM及MeOH稀釋冷卻混合物，並濃縮。藉由在矽膠(24g)上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(20%至55%之梯度)洗脫，從而得到3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-4-(3-(8-甲氧基-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺之四種構型異構物之混合物(136mg,41%產率)。藉由如下之對掌性超臨界流體層析分離此物質：管柱：對掌性PAK® AD-H(3×25cm,5μm)；流動相：CO2-IPA(55：45)，85mL/min；試樣製備：17mg/mL，存於MeOH中；注入：1.0mL。自管柱洗脫之第四峰得到3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-4-(R)-(3-(8-甲氧基-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺之單一構型異構物(26mg,20%產率)。對掌性純度經測定大於99%。質譜m/z 579(M+H-H2O)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 10.42(s,1H),7.90(dd,J=7.2,2.3Hz,1H),7.71(s,1H),7.66(d,J=1.1Hz,1H),7.55-7.49(m,1H),7.40-7.36(m,1H),7.35-7.31(m,1H),7.25-7.19(m,3H),6.97(d,J=8.4Hz,1H),3.94(s,3H),3.91(s,3H),1.85(s,3H),1.63(s,6H)。
實例8
3-氯-4-(R)-(3-(6-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
(單一構型異構物)
將4-溴-3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[中間體3](200mg,0.524mmol),6-氟-1-甲基-3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體13](215mg,0.524mmol)、Cs2CO3(512mg,1.57mmol)及PdCl2(dppf)DCM加合物(21.4mg,0.026mmol)於THF(3mL)及水(1mL)中之混合物在60℃下加熱過夜，然後在90℃下加熱4h。濃縮冷卻混合物並藉由在矽膠(40g)上管柱層析將純化殘餘物兩次，用EtOAc-己烷(50%至100%之梯度)洗脫，從而得到3-氯-4-(3-(6-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺之四種構型異構物之混合物(129mg,39%產率)。藉由如下之對掌性超臨界流體層析分離此物質：管柱：對掌性PAK® AD-H(3×25cm,5μm)；流動相：CO2-MeOH-MeCN(65：17.5：17.5)，85mL/min；試樣製備：15.4mg/mL，存於MeOH中；注入：0.5mL。自管柱洗脫之第三峰得到3-氯-4-(R)-(3-(6-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺之單一構型異構物(33mg)。異構物純度經測定大於98%。質譜m/z 567(M+H-H2O)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 10.44(br.s.,1H),8.29(dd,J=8.1,6.4Hz,1H),7.73(s,1H),7.66(s,1H),7.56-7.49(m,1H),7.36(dd,J=15.2,7.3Hz,2H),7.22(d,J=6.8Hz,1H),7.04-6.92(m,3H),3.65(s,3H),1.84 (s,3H),1.63(s,6H)。
實例9
3-氯-4-(R)-(3-(7-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
(單一構型異構物)
將4-溴-3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[中間體3](200mg,0.524mmol),7-氟-1-甲基-3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體15](215mg,0.524mmol)、Cs2CO3(512mg,1.57mmol)及PdCl2(dppf)DCM加合物(21.4mg,0.026mmol)於THF(3mL)及水(0.50mL)中之混合物在90℃下加熱4h。濃縮冷卻混合物，並藉由在矽膠(220g)上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(0至40%之梯度)洗脫，從而得到3-氯-4-(3-(7-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺之四種構型異構物之混合物(164mg,53%產率)。藉由如下之對掌性超臨界流體層析分離該物質：管柱：Lux Cel2(3×25cm,5μm)；流動相：CO2-MeOH-MeCN(62：19：19)，85mL/min；試樣製備：30mg/mL，存於MeOH中；注入：0.5mL。藉由如下之對掌性超臨界流體層析再次分離自管柱洗脫之第三峰分離之物質：管柱：對掌性PAK® AS(3×25cm,5μm)；流動相：CO2-MeOH- MeCN(68：16：16)，85mL/min；試樣製備：11.4mg/mL，存於MeOH中；注入：3.5mL。自管柱洗脫之第一峰得到白色固體狀3-氯-4-(R)-(3-(7-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺之單一構型異構物(25mg,15%產率)。異構物純度經測定大於98%。質譜m/z 567(M+H-H2O)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 10.46(s,1H),8.31(dd,J=8.6,6.2Hz,1H),7.76(s,1H),7.68(d,J=1.1Hz,1H),7.58-7.52(m,1H),7.38(ddd,J=14.1,7.8,1.0Hz,2H),7.24(dd,J=8.4,1.5Hz,1H),7.06-6.95(m,3H),3.67(s,4H),1.86(s,3H),1.65(s,6H)。
實例10
3-氯-4-(RS)-(3-(RS)-(6,8-二氟-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
(四種構型異構物之混合物)
在反應小瓶中用2M K3PO4水溶液(0.039mL,0.079mmol)處理4-溴-3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[中間體3](10mg,0.026mmol)、6,8-二氟-3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體16](14.1mg,0.034mmol)、1,1'-雙(二-第三丁基膦基)二茂鐵氯化鈀(II)(12.8mg,0.020mmol)與THF(2mL)之混合物。密封小瓶並使其經受三次利用氮之抽真空-填充循環。將混合物在室溫下攪拌過夜。分離混合物之各相，用EtOAc將水相萃 取兩次，並乾燥合併之有機相並濃縮。藉由在矽膠(40g)上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(80%至100%之梯度)洗脫。用MeOH研磨所分離物質，從而在過濾後得到固體。濃縮濾液並使其在二氧化矽(40g)上經受管柱層析，用DCM-MeOH-NH4OH(90：9：1至97：2.7：0.3之梯度)洗脫，從而得到額外固體。合併兩批固體，從而得到淺黃色固體狀3-氯-4-(3-(6,8-二氟-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(四種構型異構物之混合物)(164mg,71%產率)。質譜m/z 571(M+H-H2O)+。1H NMR(500MHz,MeOH-d4)δ 8.04(d,J=2.0Hz,1H),7.70-7.68(m,1H),7.65(dd,J=7.2,3.2Hz,1H),7.57-7.52(m,1H),7.43-7.34(m,3H),7.18-7.07(m,1H),6.90(dd,J=8.4,3.0Hz,1H),1.84(s,3H),1.62-1.56(m,6H)。
實例11
3-氯-4-(R)-(3-(S)-(8-氟-1-甲基(d3)-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
(單一構型異構物)
用2M K3PO4水溶液(8.25mL,16.5mmol)處理4-溴-3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[中間體3](3.08g,8.07mmol)及8-氟-1-甲基(d3)-3-(S)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體21](4.00g,9.68mmol)於THF(33mL)中 之溶液。用氬將混合物鼓泡約4min，同時在超音波浴上攪動，然後用1,1'-雙(二-第三丁基膦基)二茂鐵氯化鈀(II)(447mg,0.686mmol)處理。密封反應器皿並使其經受六次利用氬之抽真空-填充循環。將混合物在50℃下攪拌16.5h，然後冷卻至室溫。用EtOAc稀釋混合物並用水洗滌。用EtOAc將水相萃取兩次並用鹽水洗滌合併之有機相，乾燥並濃縮。藉由在矽膠(330g)上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(40%至100%之梯度)洗脫，從而得到淺黃色-淺棕色固體狀3-氯-4-(3-(S)-(8-氟-1-甲基(d3)-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(兩種非鏡像異構物之混合物)(3.877g,78%產率)。
藉由如下之對掌性超臨界流體層析分離藉由此方法製得之物質(5.01g)：管柱：對掌性PAK® AS-H(3×25cm,5μm)；流動相：CO2-MeOH(70：30)，160mL/min,40℃；試樣製備：22.75mg/mL，存於2：1 MeOH-二氯甲烷中；注入：1.4mL。濃縮含有自管柱洗脫之第一峰之經彙集流份，並在少量甲醇中音波處理殘餘物。藉由過濾收集沈澱物，用甲醇沖洗並乾燥，從而得到白色固體狀3-氯-4-(R)-(3-(S)-(8-氟-1-甲基(d3)-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(2.029g)。質譜m/z 570(M+H-H2O)+,610(M+Na)+。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ 8.12-8.03(m,2H),7.74(d,J=1.1Hz,1H),7.67-7.53(m,2H),7.46(dd,J=7.9,1.1Hz,1H),7.39-7.29(m,2H),7.17(dd,J=8.5,1.7Hz,1H),6.96-6.87(m,1H),1.81(s,3H),1.61(d,J=1.3Hz,6H)。[α]D：+85.1°(c 2.38,CHCl3)。DSC熔點起始溫度=255.6℃(加熱速率=10℃/min)。
藉由將化合物溶解於1：1：1甲醇/乙腈/丙酮中並在室溫下緩慢蒸發溶劑而得到甲醇溶劑合物(結晶形式M-1)而製得之晶體之單一晶體x射線分析證實實例11之絕對組態。晶胞尺寸：a=9.78Å，b=14.26 Å，c=21.38Å，α=90.0°，β=90.0°，γ=90.0°；空間群：P212121；實例11之分子/不對稱單位：1；體積/晶胞中之分子數=746Å3；密度(經計算)=1.381g/cm3。室溫下之分數原子坐標係於表5中給出，且結構之繪示係於圖4中給出。藉由將實例11溶解於過量丙酮水溶液中並在室溫下緩慢蒸發溶劑而得到單水合物(結晶形式H-1)而製得之晶體之單一晶體x射線分析進一步證實絕對組態。晶胞尺寸：a=9.41Å，b=14.51Å，c=21.12Å，α=90.0°，β=90.0°，γ=90.0°；空間群：P212121；實例11之分子/不對稱單位：1；體積/晶胞中之分子數=721Å3；密度(經計算)=1.396g/cm3。室溫下之分數原子坐標係於表3中給出。
實例12
3-氯-4-(R)-(3-(R)-(8-氟-1-甲基(d3)-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
(單一構型異構物)
在小瓶中在音波處理下用氬將4-溴-3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[中間體3](76mg,0.20mmol)、8-氟-1-甲基(d3)-3-(R)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體22](75mg,0.18mmol)，並Cs2CO3(118mg,0.363mmol)於THF(1.6mL)與水(0.40mL)之混合物鼓泡1min。用PdCl2(dppf) DCM加合物(7.4mg,0.009mmol)處理混合物並密封小瓶並在45℃下加熱19h。用EtOAc及水稀釋冷卻混合物。分離各層且用EtOAc再次萃取水層。用鹽水洗滌合併之有機層，乾燥並濃縮。使殘餘物在矽膠(12g)上經受管柱層析，用EtOAc-己烷(60%至100%之梯度)洗脫。藉由反相HPLC(Luna Axia 5μ C18 30×100mm)純化所得不純的產物，用含有0.1% TFA之MeCN-水(10%至100%之梯度，30mL/min)洗脫。用飽和NaHCO3水溶液處理適當流份並濃縮成水性懸浮液。藉由過濾收集沈澱物，用水洗滌並在真空下乾燥，從而得到白色固體狀3-氯-4-(3-(R)-(8-氟-1-甲基(d3)-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺之兩種構型異構物之混合物(60.9mg,57%產率)。藉由如下之對掌性超臨界流體層析分離此物質：管柱：對掌性PAK® AD-H(5×25cm,5μm)；流動相：CO2-IPA(60：40)，250mL/min,35℃；試樣製備：7.5mg/mL，存於MeOH中；注入：2.5mL。藉由在矽膠上(4g)管柱層析進一步純化自管柱洗脫之第二峰之濃縮獲得之殘餘物，用EtOAc-己烷(40%至100%之梯度)洗脫，從而得到白色固體狀3-氯-4-(R)-(3-(R)-(8-氟-1-甲基(d3)-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(19.7mg,68%產率)。質譜m/z 570(M+H-H2O)+,610(M+Na)+。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ 8.11-8.04(m,2H),7.74(d,J=1.1Hz,1H),7.66-7.53(m,2H),7.46(dd,J=7.9,1.1Hz,1H),7.38-7.28(m,2H),7.14(dd,J=8.5,1.7Hz,1H),6.90(d,J=8.6Hz,1H),1.80(s,3H),1.60(d,J=0.9Hz,6H)。
實例13
3-氯-4-(3-(8-氟-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(四種構型異構物之混合物)
將4-溴-3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[中間體3](0.360g,0.943mmol)、8-氟-3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體17](0.392g,0.990mmol)、PdCl2(dppf)DCM加合物(0.039g,0.047mmol)及Cs2CO3(0.615g,1.89mmol)於二噁烷(10mL)及水(2.5mL)之混合物在100℃下加熱過夜。用EtOAc稀釋冷卻混合物並用水洗滌，乾燥並濃縮。藉由在矽膠上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(0至50%然後至70%(含有1% MeOH)之梯度)洗脫，從而得到白色固體狀3-氯-4-(3-(8-氟-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(四種構型異構物之混合物)(0.361g,67%產率)。質譜m/z 354(M+H-H2O)+,394(M+Na)+。1H NMR(500MHz,MeOH-d4)δ 8.09(d,J=1.1Hz,1H),7.95(d,J=8.0Hz,1H),7.81-7.69(m,1H),7.64-7.54(m,2H),7.48(dd,J=7.8,1.1Hz,1H),7.43-7.29(m,1H),7.31-7.24(m,1H),7.18(dd,J=8.3,1.7Hz,1H),7.16-7.07(m,1H),6.92(dd,J=8.6,5.3Hz,1H),1.94-1.71(m,3H),1.65-1.50(m,6H)。
實例14
3-氯-4-(R)-(3-(R)-(8-氟-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
(單一構型異構物)
藉由如下之對掌性超臨界流體層析分離3-氯-4-(3-(8-氟-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺之四種構型異構物之混合物[實例13]之試樣(250mg)：管柱：對掌性PAK® AD-H(5×25cm,5μm)；流動相：CO2-IPA(60：40)，220mL/min,35℃,100巴；試樣製備：21mg/mL，存於MeOH中；注入：3.0mL。自管柱洗脫之第三峰得到白色固體狀3-氯-4-(R)-(3-(R)-(8-氟-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(單一構型異構物)(24mg)。對掌性純度經測定大於95%。質譜m/z 553(M+H-H2O)+,593(M+Na)+。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ 8.09(s,1H),7.95(d,J=7.9Hz,1H),7.74(d,J=1.1Hz,1H),7.60-7.54(m,2H),7.54-7.43(m,1H),7.37(d,J=7.5Hz,1H),7.28(d,J=4.6Hz,1H),7.11(dd,J=8.6,1.5Hz,1H),6.91(d,J=8.6Hz,1H),2.00-1.76(m,3H),1.69-1.52(m,6H)。
實例15及16
3-氰基-4-(S)-(3-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
(單一構型異構物)
製備15A：3-氰基-4-(3-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(4種構型異構物之混合物)
使4-溴-3-氰基-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[中間體23](0.400g,1.08mmol)、8-氟-1-甲基-3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體2](0.573g,1.40mmol)、Cs2CO3(0.700g,2.15mmol)及二噁烷(5mL)之混合物經受3次利用氮之抽真空-填充循環。用PdCl2(dppf)DCM加合物(0.053g,0.064mmol)處理混合物並使其再經受2次利用氮之抽真空-填充循環。將混合物在88℃下加熱2天。用EtOAc稀釋冷卻混合物，依次用水及鹽水洗滌，並乾燥並濃縮。藉由在矽膠上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(依次為50%、75%、85%及100%)洗脫。藉由反相製備型HPLC純化所得不純的產物，從而得到白色固體狀3-氰基-4-(3-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(四種構型異構物之混合物)(0.200g,32%產率)。質譜m/z 576(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.96(s,1H),8.45(s,1H),8.35(br.s.,1H),8.00-7.94(m,1H),7.92(s,1H),7.77-7.68(m,2H),7.60-7.52(m,2H),7.41(dd,J=6.6,2.2Hz,1H),7.38-7.29(m,1H),7.13(t,J=10.1Hz,1H),6.85(t,J=8.1Hz,1H),5.05 (d,J=2.0Hz,1H),3.74(dd,J=8.1,2.6Hz,3H),1.73(s,3H)，及1.48-1.43(m,6H)。
實例15及16
藉由如下之對掌性超臨界流體層析分離3-氰基-4-(3-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(4種構型異構物之混合物)之試樣：管柱：對掌性PAK® AD-H(3×25cm,5μm)；流動相：CO2-IPA(65：35)，150mL/min,45℃。自管柱洗脫之第二峰得到3-氰基-4-(S)-(3-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺之一種單一構型異構物[實例15]。對掌性純度經測定大於94%。自管柱洗脫之第四峰得到3-氰基-4-(S)-(3-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺之另一單一構型異構物[實例16]。對掌性純度經測定為99%。每一單一構型異構物之質譜與四種構型異構物之混合物之質譜相同。
實例17
3-氟-4-(3-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
(四種構型異構物之混合物)
將4-溴-3-氟-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[中間體27] (0.080g,0.219mmol)、8-氟-1-甲基-3-(S)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體2](0.094g,0.230mmol)、PdCl2(dppf)DCM加合物(9.0mg,11.0μmol)及Cs2CO3(0.143g,0.438mmol)於二噁烷(8.0mL)及水(2.0mL)中之混合物在100℃下加熱過夜。用EtOAc稀釋冷卻混合物並進行過濾。用水洗滌濾液，乾燥並濃縮。藉由反相製備型HPLC純化殘餘物，隨後藉由在矽膠上管柱層析純化，用EtOAc-己烷(50%至100%之梯度)洗脫，從而得到灰白色固體狀3-氟-4-(3-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(四種構型異構物之混合物)(0.018g,15%產率)。質譜m/z 551(M+H-H2O)+。1H NMR(500MHz,MeOH-d4)δ 7.66(d,J=10.4Hz,1H),7.51(s,1H),7.47-7.34(m,3H),7.29(t,J=7.2Hz,2H),7.22-7.11(m,1H),7.09-6.97(m,1H),6.90(t,J=8.1Hz,1H),3.81-3.63(m,3H),2.06(br.s.,3H)，及1.77-1.58(m,6H)。
實例18
3-氟-4-(3-(S)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
(兩種構型異構物之混合物)
使4-溴-3-氟-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[中間體27](0.100g,0.274mmol)、8-氟-1-甲基-3-(S)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基- 1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體10](0.146g,0.356mmol)、2MK3PO4水溶液(0.41mL,0.821mmol)及THF(2.0mL)之混合物經受3次利用氮之抽真空-填充循環。用1,1'-雙(二-第三丁基膦基)二茂鐵氯化鈀(II)(8.9mg,0.014mmol)處理混合物，並使其再經受2次利用氮之抽真空-填充循環。將混合物在室溫下攪拌過夜。用EtOAc稀釋混合物，依次用水及鹽水洗滌，並乾燥並濃縮。藉由在矽膠上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(依次為50%、62%、75%及85%)洗脫，從而得到灰白色固體狀3-氟-4-(3-(S)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(兩種構型異構物之混合物)(0.084g,53%產率)。質譜m/z 551(M+H-H2O)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 11.39(s,1H),8.21(br.s.,1H),7.99-7.92(m,3H),7.84(s,1H),7.73(ddt,J=14.4,8.0,1.4Hz,1H),7.59(br.s.,1H),7.54-7.47(m,3H),7.40(dd,J=7.2,1.7Hz,1H),7.34(tt,J=7.9,4.0Hz,1H),7.04(ddd,J=11.5,8.6,1.5Hz,1H),6.88(t,J=8.0Hz,1H),4.99(d,J=2.2Hz,1H),3.74(dd,J=8.2,1.0Hz,3H),1.77(s,3H)，及1.49-1.42(m,6H)。
3-氟-4-(3-(S)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(兩種構型異構物之混合物)之替代合成：
使4-溴-3-氟-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[中間體27](0.050g,0.137mmol)、8-氟-1-甲基-3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體10](0.073g,0.178mmol)、Cs2CO3(0.089g,0.274mmol)及二噁烷(0.8mL)之混合物經受3次利用氮之抽真空-填充循環。用PdCl2(dppf)DCM加合物(6.7mg,8.21μmol)處理混合物，使且再經受2次利用氮之抽真空-填充循環，並在52℃下加熱過夜。用EtOAc稀釋冷卻混合物，依次用水及 鹽水洗滌，並乾燥並濃縮。藉由在矽膠上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(依次為50%、62%及75%)洗脫，從而得到白色固體狀3-氟-4-(3-(S)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(兩種構型異構物之混合物)(0.034g,42%產率)。
實例19
3-氟-4-(R)-(3-(S)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
(單一構型異構物)
藉由如下之對掌性超臨界流體層析分離3-氟-4-(3-(S)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(兩種構型異構物之混合物)[實例18]之試樣：管柱：對掌性PAK® AS-H(3×25cm,5μm)；流動相：CO2-MeOH(70：30)，120mL/min,40℃,100巴；試樣製備：3.6mg/mL，存於MeOH中；注入：2.0mL。自管柱洗脫之第一峰得到3-氟-4-(R)-(3-(S)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺。對掌性純度經測定大於99.4%。質譜m/z 551(M+H-H2O)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 11.39(s,1H),8.21(br.s.,1H),8.00-7.92(m,2H),7.84(s,1H),7.73 (ddd,J=14.4,8.0,1.4Hz,1H),7.59(br.s.,1H),7.55-7.47(m,2H),7.40(dd,J=7.2,1.4Hz,1H),7.33(td,J=8.0,4.0Hz,1H),7.05(dd,J=8.3,1.4Hz,1H),6.89(d,J=8.3Hz,1H),4.99(s,1H),3.74(d,J=8.0Hz,3H),3.17(d,J=5.3Hz,3H),1.77(s,3H)，及1.46(d,J=4.2Hz,6H)。
實例20
3-氟-4-(3-(8-氟-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(4種構型異構物之混合物)
使4-溴-3-氟-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[中間體27](0.104g,0.285mmol)、8-氟-3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體17](0.147g,0.370mmol)、Cs2CO3(0.186g,0.570mmol)及二噁烷(1.6mL)之混合物經受3次利用氮之抽真空-填充循環。用PdCl2(dppf)DCM加合物(14mg,0.017mmol)處理混合物，並使其再經受兩次利用氮之抽真空-填充循環。將混合物於88℃下加熱過夜。用EtOAc稀釋冷卻混合物，依次用水及鹽水洗滌，並乾燥並濃縮。藉由反相製備型HPLC純化殘餘物。用飽和NaHCO3水溶液處理適當流份並濃縮成水性殘餘物，其係用EtOAc萃取。用鹽水洗滌有機層。用EtOAc萃取合併之水層，並乾燥合併之有機層並濃縮。藉由在矽膠上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(依次為50%、65%及75%)洗脫，從而得到白色固體狀3-氟-4-(3-(8-氟-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基 丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(四種構型異構物之混合物)(0.029g,18%產率)。質譜m/z 537(M+H-H2O)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 11.81(br.s.,1H),11.39(d,J=1.4Hz,1H),8.21(br.s.,1H),7.95(dd,J=10.7,2.1Hz,1H),7.86-7.80(m,2H),7.64(t,J=9.2Hz,1H),7.59(br.s.,1H),7.53-7.50(m,2H),7.42-7.38(m,1H),7.26-7.20(m,1H),7.07-6.99(m,1H),6.97-6.88(m,1H),4.98(d,J=9.7Hz,1H),1.81-1.75(m,3H)，及1.48-1.41(m,6H)。
實例21及22
3-氟-4-(R)-(3-(R)-(8-氟-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺，及3-氟-4-(R)-(3-(S)-(8-氟-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
(單一構型異構物)
藉由如下之對掌性超臨界流體層析分離3-氟-4-(3-(8-氟-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(4種構型異構物之混合物)[實例20]之試樣：管柱：對掌性PAK® AD-H(3×25cm,5μm)；流動相：CO2-IPA(75：25)，180mL/min,40℃,100巴。自管柱洗脫之第三峰得到3-氟-4-(R)-(3-(R)-(8-氟-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[實例21]。對掌性純度經測定為98%。質譜 m/z 537(M+H-H2O)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 11.83(br.s.,1H),11.38(s,1H),8.21(br.s.,1H),7.95(d,J=10.8Hz,1H),7.83(d,J=1.1Hz,1H),7.81(d,J=8.0Hz,1H),7.65-7.57(m,2H),7.54-7.47(m,2H),7.39(dd,J=6.7,1.9Hz,1H),7.20(br.s.,1H),7.03-6.99(m,1H),6.99-6.94(m,1H),4.97(s,1H),1.77(s,3H)，及1.44(d,J=5.3Hz,6H)。
自管柱洗脫之第四峰得到3-氟-4-(R)-(3-(S)-(8-氟-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[實例22]。對掌性純度經測定為95%。質譜m/z 537(M+H-H2O)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 11.80(br.s.,1H),11.39(s,1H),8.21(br.s.,1H),7.95(d,J=10.8Hz,1H),7.85-7.78(m,2H),7.59(br.s.,2H),7.54-7,46(m,2H),7.38(d,J=6.1Hz,1H),7.19(br.s.,1H),7.05(dd,J=8.5,1.5Hz,1H),6.90(d,J=8.3Hz,1H),4.99(s,1H),1.77(s,3H)，及1.46(d,J=4.7Hz,6H)。
製備3-氟-4-(R)-(3-(R)-(8-氟-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[實例21]之替代程序：
使4-溴-3-氟-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[中間體27](0.118g,0.323mmol)、8-氟-3-(R)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體18](0.166g,0.420mmol)、2M K3PO4水溶液(0.485mL,0.969mmol)及THF(2.0mL)之混合物經受3次利用氮之抽真空-填充循環。用1,1'-雙(二-第三丁基膦基)二茂鐵氯化鈀(II)(11mg,0.016mmol)處理混合物並使其再經受2次利用氮之抽真空-填充循環。將混合物在室溫下攪拌過夜，用EtOAc稀釋，依次用水及鹽水洗滌，並乾燥並濃縮。藉由在矽膠上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(依次為50%、62%、75%及85%)洗脫，從而 得到灰白色固體狀3-氟-4-(3-(R)-(8-氟-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(兩種構型異構物之混合物)(0.117g,65%產率)。藉由如下之對掌性超臨界流體層析分離此物質之試樣：管柱：對掌性PAK® AD-H(3×25cm,5μm)；流動相：CO2-MeOH(70：30)，180mL/min,45℃；試樣製備：30mg/mL；注入：1.0mL。自管柱洗脫之第二峰得到3-氟-4-(R)-(3-(R)-(8-氟-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺。對掌性純度經測定大於99.9%。質譜m/z 537(M+H-H2O)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 11.83(br.s.,1H),11.38(s,1H),8.21(br.s.,1H),7.95(d,J=10.8Hz,1H),7.83(d,J=1.1Hz,1H),7.81(d,J=8.0Hz,1H),7.65-7.57(m,2H),7.54-7.47(m,2H),7.39(dd,J=6.7,1.9Hz,1H),7.20(br.s.,1H),7.03-6.99(m,1H),6.99-6.94(m,1H),4.97(s,1H),1.77(s,3H)，及1.44(d,J=5.3Hz,6H)。
製備3-氟-4-(R)-(3-(S)-(8-氟-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[實例22]之替代程序：
遵循與用於替代製備實例21之程序相同之程序，將4-溴-3-氟-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[中間體27](0.118g,0.323mmol)及8-氟-3-(S)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體19](0.166g,0.420mmol)轉化成灰白色固體狀3-氟-4-(3-(S)-(8-氟-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(兩種構型異構物之混合物)(0.119g,66%產率)。藉由如下之對掌性超臨界流體層析分離此物質之試樣：管柱：對掌性PAK® AS-H(3×25cm,5μm)；流動相：CO2-MeOH(75：25)，180mL/min,45℃；試樣製備：10mg/mL；注 入：1.0mL。自管柱洗脫之第二峰得到3-氟-4-(R)-(3-(S)-(8-氟-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺。對掌性純度經測定大於99.9%。
實例23
3-氯-4-(3-(3-(4-氟苯基)-2,6-二側氧基-2,3-二氫嘧啶-1(6H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
(四種構型異構物之混合物)
用氬將4-溴-3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[中間體3](135mg,0.354mmol),1-(4-氟苯基)-3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮[中間體44](164mg,0.389mmol)及四(三苯基膦)鈀(20mg,0.018mmol)於甲苯(5.3mL)及乙醇(1.8mL)中之混合物鼓泡若干min。用2M Na2CO3水溶液(354μl,0.707mmol)處理混合物，用氬再次鼓泡，並在90℃下加熱16h。將冷卻混合物分配於EtOAc與水之間。乾燥有機相並濃縮。藉由在矽膠(24g)上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(25%至100%之梯度)洗脫，從而得到白色固體狀3-氯-4-(3-(3-(4-氟苯基)-2,6-二側氧基-2,3-二氫嘧啶-1(6H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(四種構型異構物之混合物)(103mg,49%產率)。質譜m/z 579(M+H-H2O)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 11.52(d,J=4.5Hz,1H),8.29(br.s.,1H),8.13(d,J=2.5Hz,1H),7.91(dd,J=7.9,6.4Hz,1H),7.85-7.80(m, 1H),7.64-7.54(m,3H),7.53-7.45(m,2H),7.36(dt,J=11.9,8.7Hz,2H),7.25(ddd,J=7.3,4.3,1.2Hz,1H),7.03-6.83(m,1H),6.73-6.47(m,1H),5.97(dd,J=7.9,3.5Hz,1H),5.04-4.92(m,1H),1.75(d,J=1.5Hz,3H),1.47-1.33(m,6H)。
實例24
3-氯-4-(R)-(3-(3-(4-氟苯基)-2,6-二側氧基-2,3-二氫嘧啶-1(6H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
(單一構型異構物)
藉由如下之對掌性超臨界流體層析分離3-氯-4-(3-(3-(4-氟苯基)-2,6-二側氧基-2,3-二氫嘧啶-1(6H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(四種構型異構物之混合物)[實例23]之試樣(103mg)：管柱：對掌性PAK® AD-H(3×25cm,5μm)；流動相：CO2-IPA(60：40)，85mL/min；試樣製備：6.1mg/mL，存於1：1 MeCN-MeOH中；注入：1.0mL。藉由在矽膠上(4g)管柱層析進一步純化自管柱洗脫之第四峰，用EtOAc-己烷(60%至80%之梯度)洗脫，從而得到灰白色固體狀3-氯-4-(R)-(3-(3-(4-氟苯基)-2,6-二側氧基-2,3-二氫嘧啶-1(6H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺之單一構型異構物(16mg,13%產率)。質譜m/z 579(M+H-H2O)+。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ 8.06(s,1H),7.78(d,J=7.9Hz,1H),7,73(d,J=1.1Hz,1H),7.57-7.50(m,3H),7.47-7.43(m,1H),7.32(dd,J=7.5, 1.1Hz,1H),7.27(t,J=8.7Hz,2H),7.11(dd,J=8.5,1.7Hz,1H),6.88(d,J=8.4Hz,1H),6.01(d,J=7.9Hz,1H),1.84(s,3H),1.58(d,J=3.1Hz,6H)。
實例25
6-氯-5-(3-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-2-(S)-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(四種構型異構物之混合物)
將(S)-5-溴-6-氯-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺[中間體31](100mg,0.259mmol)、8-氟-1-甲基-3-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體2](112mg,0.272mmol)、Cs2CO3(169mg,0.519mmol)及PdCl2(dppf)DCM加合物(16.9mg,0.021mmol)於THF(4.3mL)及水(1.1mL)中之混合物在50℃下加熱17.5h。用EtOAc稀釋冷卻混合物，依次用水及鹽水洗滌，乾燥並濃縮。藉由在矽膠(24g)上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(50%至80%之梯度)洗脫。藉由製備型HPLC進一步純化不純的產物，從而得到6-氯-5-(3-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-2-(S)-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(四種構型異構物之混合物)(76mg,50%產率)。質譜m/z 589(M+H)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 10.89(s,1H),8.13(br.s.,1H),7.94(d,J=7.9Hz,1H),7.76-7.68(m, 2H),7.46(br.s.,1H),7.40-7.28(m,3H),7.22-7.16(m,1H),4.21-4.13(m,1H),3.77-3.64(m,3H),2.95-2.82(m,1H),2.40(d,J=16.3Hz,1H),1.94-1.70(m,3H),1.70-1.61(m,3H),1.58-1.48(m,1H),1.16-1.02(m,7H)。
實例26
6-氯-5-(R)-(3-(S)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-2-(S)-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(單一構型異構物)
藉由如下之對掌性超臨界流體層析分離6-氯-5-(3-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-2-(S)-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(四種構型異構物之混合物)[實例25]之試樣(76mg)：管柱：對掌性PAK® OD-H(3×25cm,5μm)；流動相：CO2-MeOH(70：30)，180mL/min,35℃,100巴；試樣製備：8.35mg/mL，存於MeOH-DCM(4：1)中；注入：3.0mL。藉由在矽膠上(4g)管柱層析進一步純化自管柱洗脫之第一峰，用EtOAc-己烷(50%至80%之梯度)洗脫，從而得到白色固體狀6-氯-5-(R)-(3-(S)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-2-(S)-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(33.6mg,47%產率)。質譜m/z 589(M+H)+。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ 8.06-7.99(m, 1H),7.69(s,1H),7.60(ddd,J=14.3,8.1,1.4Hz,1H),7.40(d,J=7.5Hz,1H),7.34-7.27(m,2H),7.24(dd,J=7.5,1.1Hz,1H),3.85(d,J=7.9Hz,3H),2.90(dd,J=16.5,5.1Hz,1H),2.56(dd,J=16.4,12.0Hz,1H),2.10-2.02(m,1H),2.00-1.84(m,2H),1.77(s,3H),1.75-1.68(m,1H),1.28(d,J=3.1Hz,1H),1.22(d,J=2.2Hz,6H)。
實例27
6-氟-5-(R)-(3-(S)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-2-(R)-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(單一構型異構物)
製備27A：6-氟-5-(3-(S)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-2-(R)-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(2種構型異構物之混合物)
使(R)-5-溴-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(單一鏡像異構物)[中間體25](5.00g,13.5mmol)、8-氟-1-甲基-3-(S)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體10](6.94g,16.9mmol)、2M K3PO4水溶液(20.3mL,40.6mmol)及THF(60mL)之混合物經受三次利用氮之抽真空-填充循環。用1,1'-雙(二-第三丁基膦基)二茂鐵氯化鈀(II)(441mg,677μmol)處理混合物並使其再經受2次利用氮之抽真空-填充循 環。將混合物在室溫下攪拌過夜。用EtOAc稀釋混合物，依次用水及鹽水洗滌，並乾燥並濃縮。藉由在矽膠上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(依次為50%、62%、75%及85%)洗脫，從而得到灰白色固體狀6-氟-5-(3-(S)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-2-(R)-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(兩種構型異構物之混合物)(6.77g,87%產率)。質譜m/z 573(M+H)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 10.79-10.74(m,1H),8.05(br.s.,1H),7.98-7.93(m,1H),7.76-7.69(m,1H),7.57-7.51(m,1H),7.43(br.s.,1H),7.40-7.26(m,4H),4.19-4.13(m,1H),3.74-3.68(m,3H),2.94-2.84(m,1H),2.49-2.35(m,2H),1.92-1.80(m,3H),1.76-1.68(m,3H),1.62-1.52(m,1H)，及1.12-1.06(m,6H)。
實例27：
藉由如下之對掌性超臨界流體層析分離6-氟-5-(3-(S)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-2-(R)-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(兩種構型異構物之混合物)之試樣：管柱：對掌性PAK® AS-H(3×25cm,5μm)；流動相：CO2-MeOH(70：30)，120mL/min,35℃,100巴；試樣製備：9mg/mL，存於MeOH中；注入：1.7mL。自管柱洗脫之第一峰得到6-氟-5-(R)-(3-(S)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-2-(R)-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺。對掌性純度經測定大於99.5%。質譜m/z 573(M+H)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 10.76(s,1H),8.05(br.s.,1H),7.96(d,J=7.8Hz,1H),7.72(ddd,J=14.3,8.0,1.2Hz,1H),7.55(d,J=10.8Hz,1H),7.44(br.s.,1H),7.40-7.36(m,1H),7.35-7.28(m,3H),4.18(s,1H),3.72(d,J=8.0Hz,3H),2.89(dd,J=16.9,4.4Hz,1H),2.45-2.37(m,1H),2.02-1.93(m,1H),1.91-1.82(m,2H),1.57(td,J=11.7,3.6Hz,1H)，及1.15- 1.11(m,1H)。
實例28
6-氟-5-(R)-(3-(S)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-2-(S)-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(單一構型異構物)
遵循用於製備實例27之程序，將(S)-5-溴-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(單一鏡像異構物)[中間體26](0.045g,0.122mmol)及8-氟-1-甲基-3-(S)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體10](0.065g,0.158mmol)轉化成黃色固體狀6-氟-5-(3-(S)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-2-(S)-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(兩種構型異構物之混合物)(0.035g,49%產率)。藉由對掌性超臨界流體層析使用用於分離實例27之條件分離此物質之試樣，得到(作為自管柱洗脫之第一峰)6-氟-5-(R)-(3-(S)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-2-(S)-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺。對掌性純度經測定大於99.5%。藉由x射線結晶學確定相對組態及絕對組態。質譜m/z 573(M+H)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 10.77(s,1H),8.05(br.s.,1H),7.94(dd,J=7.9,1.2Hz,1H),7.56-7.52(m,1H),7.43(br.s.,1H),7.40-7.36(m,1H),7.35-7.30(m,2H),7.28(dd,J=7.5,1.4 Hz,1H),4.15(s,1H),3.75-3.70(m,3H),2.90(dd,J=16.8,4.6Hz,1H),2.47-2.39(m,1H),1.93-1.82(m,3H),1.74(s,3H),1.57(td,J=11.7,4.2Hz,1H),1.16-1.11(m,1H)，及1.10(d,J=1.9Hz,6H)。[α]D：+63.8°(c 2.1,CHCl3)。DSC熔點起始溫度=202.9℃(加熱速率=10℃/min)。
藉由將化合物溶解於過量甲醇中並在室溫下緩慢蒸發溶劑而得到二甲醇溶劑合物(結晶形式M2-1)而製得之晶體之單一晶體x射線分析證實實例28之絕對組態。晶胞尺寸：a=9.24Å，b=7.97Å，c=22.12Å，α=90.0°，β=94.1°，γ=90.0°；空間群：P21；實例28之分子/不對稱單位：1；體積/晶胞中之分子數=813Å3；密度(經計算)=1.301g/cm3。173K下之分數原子坐標係於表6中給出，且結構之繪示係於圖5中給出。
實例28之替代合成：
使(S)-5-溴-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺[中間體11](5.00g,13.54mmol)、8-氟-1-甲基-3-(S)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體10](6.67g,16.25mmol)、磷酸三鉀(2M水溶液)(20.31mL,40.6mmol)及四氫呋喃(25mL)中之混合物經受3次利用氮之抽真空-填充循環。用1,1'-雙(二-第三丁基膦基)二茂鐵二氯化鈀(0.441g,0.677mmol)處理混合物並使混合物再經受2次利用氮之抽真空-填充循環。將混合物在室溫下攪拌過夜，然後用EtOAc稀釋，依次用水及鹽水洗滌，並乾燥並濃縮。藉由在矽膠上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(依次為50%、62%、75%及85%)洗脫，從而得到白色固體狀6-氟-5-(3-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3-(S)-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-2-(S)-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(6.58g,85%產率)。
藉由對掌性超臨界流體層析分離藉由此方法製得之物質(40.03g, 69.9mmol)，從而得到(2S,5R)-6-氟-5-(3-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-2-(S)-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺。藉由以下達成進一步純化：將此物質懸浮於甲醇中，音波處理5min，藉由過濾收集固體，用甲醇沖洗所收集固體並在室溫下在減壓下乾燥，從而得到白色固體(22.0g,90%產率)。
實例29
4-(R)-(3-(S)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-3-甲基-9H-咔唑-1-甲醯胺
(單一構型異構物)
使4-溴-7-(2-羥基丙-2-基)-3-甲基-9H-咔唑-1-甲醯胺[中間體28](0.091g,0.252mmol)、8-氟-1-甲基-3-(S)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體10](0.134g,0.327mmol)、2M K3PO4水溶液(0.378mL,0.756mmol)及THF(2.0mL)之混合物經受三次利用氮之抽真空-填充循環。用1,1'-雙(二-第三丁基膦基)二茂鐵氯化鈀(II)(8.2mg,0.013mmol)處理混合物並使其經受兩次額外的利用氮之抽真空-填充循環。將混合物在室溫下攪拌過夜，然後用EtOAc稀釋，依次用水及鹽水洗滌，並乾燥並濃縮。藉由在矽膠上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(依次為50%、62%、75%及85%)洗脫，從而得到淺黃色固體狀4-(3-(S)-(8-氟-1-甲基-2,4-二 側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-3-甲基-9H-咔唑-1-甲醯胺(兩種構型異構物之混合物)(0.087g,59%產率)。質譜m/z 547(M+H-H2O)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 11.20(s,1H),8.10(br.s.,1H),7.97(ddd,J=7.9,7.2,1.0Hz,1H),7.90(s,1H),7.78(s,1H),7.76-7.68(m,1H),7.53-7.48(m,1H),7.44(dd,J=7.9,1.2Hz,1H),7.40(br.s.,1H),7.36-7.30(m,1H),7.23(dd,J=7.4,1.2Hz,1H),6.98(ddd,J=12.0,8.4,1.5Hz,1H),6.68(t,J=7.9Hz,1H),4.94(d,J=3.1Hz,1H),3.73(dd,J=8.2,3.5Hz,3H),2.17(s,3H),1.66(s,3H)，及1.48-1.41(m,6H)。
藉由如下之對掌性超臨界流體層析分離此物質之試樣：管柱：對掌性PAK® AD-H(3×25cm,5μm)；流動相：CO2-MeOH(65：35)，150mL/min,40℃；試樣製備：15mg/mL，存於MeOH中；注入：1.5mL。自管柱洗脫之第二峰得到4-(R)-(3-(S)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-3-甲基-9H-咔唑-1-甲醯胺。對掌性純度經測定大於99%。質譜m/z 547(M+H-H2O)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 11.19(s,1H),8.10(br.s.,1H),7.97(dd,J=7.9,1.0Hz,1H),7.90(s,1H),7.78(d,J=1.1Hz,1H),7.72(ddd,J=14.3,8.0,1.5Hz,1H),7.53-7.48(m,1H),7.44(dd,J=7.8,1.1Hz,1H),7.40(br.s.,1H),7.33(td,J=8.0,4.2Hz,1H),7.23(dd,J=7.5,1.1Hz,1H),6.99(dd,J=8.5,1.5Hz,1H),6.69(d,J=8.6Hz,1H),4.94(s,1H),2.20-2.14(m,3H),1.66(s,3H)，及1.45(d,J=3.6Hz,6H)。
實例30及31
4-(R)-(3-(5-氯-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-3-氟-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(單一構型異構物)
製備30A：4-(3-(5-氯-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-3-氟-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(四種構型異構物之混合物)
使4-溴-3-氟-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[中間體27](0.098g,0.268mmol)、5-氯-2-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-1,3(2H)-二酮[中間體33](0.144g,0.349mmol)、Cs2CO3(0.175g,0.537mmol)及二噁烷(1.6mL)之混合物經受三次利用氮之抽真空-填充循環。用PdCl2(dppf)DCM加合物(0.013g,0.016mmol)處理混合物並使其再經受2次利用氮之抽真空-填充循環。將混合物於52℃下加熱過夜。用EtOAc稀釋冷卻混合物，依次用水及鹽水洗滌，並乾燥並濃縮。藉由反相製備型HPLC純化殘餘物。用飽和NaHCO3水溶液處理適當流份並濃縮。將殘餘物分配在EtOAc與水之間，並用鹽水洗滌有機層。用EtOAc萃取水層，並乾燥合併之有機層並濃縮。藉由在矽膠上管柱層析將殘餘物純化兩次，用EtOAc-己烷(依次為50%、65%及75%)洗脫，從而得到黃色固體狀4-(3-(5-氯-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-3-氟-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(四種構型異構物之混合物)(0.013g,8%產率)。質譜m/z 571,573(M+H)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 11.39(d,J=5.3Hz,1H),8.30-8.24(m,1H),8.21(br.s., 1H),7.95(dd,J=10.5,1.7Hz,1H),7.84(s,1H),7.60(d,J=7.2Hz,2H),7.55-7.47(m,2H),7.42-7.39(m,1H),7.04-6.99(m,1H),6.93(d,J=8.6Hz,0.6H),6.84(d,J=8.6Hz,0.4H),6.57(td,J=7.3,3.5Hz,1H),6.00(d,J=8.6Hz,1H),4.98(s,1H),1.78(d,J=1.9Hz,3H)，及1.45(d,J=3.9Hz,6H)。
實例30及31
藉由如下之對掌性超臨界流體層析分離4-(3-(5-氯-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-3-氟-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(4種構型異構物之混合物)之試樣：管柱：對掌性PAK® AD-H(3×25cm,5μm)；流動相：CO2-IPA(55：45)，120mL/min,45℃,100巴；試樣製備：5.6mg/mL，存於MeOH中；注入：1.7mL。自管柱洗脫之第二峰得到4-(R)-(3-(5-氯-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-3-氟-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺之一種單一構型異構物[實例30]。對掌性純度經測定大於97.5%。質譜m/z 571(M+H)+。自管柱洗脫之第四峰得到4-(R)-(3-(5-氯-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-3-氟-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺之另一單一構型異構物[實例31]。對掌性純度經測定大於99.5%。質譜m/z 553(M+H-H2O)+。
實例32及33
3-氯-4-(R)-(3-(R)-(5-氯-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(32)，及3-氯-4-(R)-(3-(S)-(5-氯-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(33)
(單一構型異構物)
用氬將4-溴-3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[中間體3](1.11g,2.91mmol)、5-氯-2-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-1,3(2H)-二酮[中間體33](1.00g,2.42mmol)及Cs2CO3(1.58g,4.85mmol)於THF(8mL)及水(2mL)中之混合物鼓泡3min。用PdCl2(dppf)DCM加合物(0.099g,0.121mmol)處理混合物並在60℃下加熱過夜。用EtOAc稀釋冷卻混合物並依次用水及鹽水洗滌。用含有少量MeOH之DCM萃取合併之水層。乾燥合併之有機層並濃縮直至形成淺棕色沈澱物為止，藉由過濾去除該沈澱物。濃縮濾液並藉由在矽膠(120g)上管柱層析純化，用EtOAc-DCM(依次為70%、80%及100%)洗脫，從而得到黃色固體狀3-氯-4-(3-(5-氯-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(四種構型異構物之混合物)(993mg,69%產率)。藉由如下之對掌性超臨界流體層析分離該物質：管柱：對掌性PAK® AD-H(3×25cm,5μm)；流動相：CO2-IPA(50：50)，150mL/min,45℃,100巴；試樣製備：5.6mg/mL，存於MeOH-DCM(1：1)中；注入：3mL。自管柱洗脫之第二峰得到3-氯-4-(R)-(3-(R)-(5-氯-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[實例32]。質譜m/z 587(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.50(s,1H),8.27(s,2H),8.14(s,1H),7.84(d,J=1.1Hz,1H),7.59(d,J=6.8Hz,1H),7.56-7.46(m,2H),7.29(dd, J=7.4,1.2Hz,1H),7.01(dd,J=8.4,1.5Hz,1H),6.64(d,J=8.6Hz,1H),6.55(t,J=7.3Hz,1H),5.98(s,1H),5.75(s,1H),4.98(s,1H),1.71(s,3H),1.46-1.42(m,6H)。
自管柱洗脫之第四峰得到3-氯-4-(R)-(3-(S)-(5-氯-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[實例33]。質譜m/z 569(M+H-H2O)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.49(s,1H),8.34-8.24(m,2H),8.14(s,1H),7.84(d,J=1.1Hz,1H),7.60(d,J=6.6Hz,1H),7.56-7.46(m,2H),7.28(dd,J=7.4,1.4Hz,1H),6.99(dd,J=8.5,1.7Hz,1H),6.72(d,J=8.4Hz,1H),6.57(t,J=7.3Hz,1H),5.99(s,1H),5.75(s,1H),4.98(s,1H),1.71(s,3H),1.45-1.42(m,6H)。[α]D：+332.34°(c 2.0,CHCl3)。
實例33之替代製備：
用氮將4-溴-3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[中間體3](50.5g,132mmol),5-氯-2-(S)-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-1,3(2H)-二酮[中間體35](60.1g,146mmol)及Cs2CO3(86g,265mmol)於THF(342mL)及水(85mL)中之混合物鼓泡5min，然後用PdCl2(dppf)DCM加合物(11.9g,14.57mmol)處理。繼續用氮再鼓泡5min，然後將混合物在62℃下在氮下加熱20h。使混合物冷卻至室溫，在攪拌下添加MeOH(300mL)，15min後添加水(2L)，從而得到鏽褐色膠狀物。去除上清液，用水將膠狀殘餘物洗滌兩次且然後在攪拌下於EtOAc(2L)中懸浮1h。過濾混合物，將濾液濃縮成約1-1.5L並用庚烷(3L)處理。將混合物攪拌2天，藉由過濾收集沈澱物，用庚烷洗滌並在真空下乾燥，從而得到黃色固體(104g)。將固體溶解於THF中，吸收於CELITE®上，在真空下乾燥，置於矽膠塞上並用庚烷/EtOAc(10：90)洗脫，從而得到橙黃色油狀物(74.87g)。使該物質在矽膠(3kg)上經受管柱層析，用EtOAc- 己烷(40%至90%之梯度)洗脫，從而得到黃色泡沫狀3-氯-4-(3-(S)-(5-氯-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(兩種構型異構物之混合物)(44g,51%產率)。為去除殘餘鈀，將殘餘物溶解於EtOAc(約300mL)中，並用10%之N-乙醯基-L-半胱胺酸水溶液(500mL)攪拌過夜。用10%之N-乙醯基-L-半胱胺酸溶液(500mL)將有機層再次處理6h，然後依次用5% NH4OH(兩次)及鹽水洗滌，乾燥並濃縮成黃色泡沫狀物(43g)。藉由如下之對掌性超臨界流體層析分離該物質：管柱：對掌性PAK® AS-H(2×50cm,10μm)；流動相：CO2-MeOH(55：45)，140mL/min,40℃,100巴；試樣製備：56mg/mL，存於MeOH-DCM(1：1)中；注入：3.33mL。自管柱洗脫之第一峰得到黃色固體狀3-氯-4-(R)-(3-(S)-(5-氯-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[實例33](18.3g,24%產率)。
藉由將化合物溶解於過量甲醇中並在室溫下緩慢蒸發溶劑而得到二甲醇溶劑合物(結晶形式M2-1)而製得之晶體之單一晶體x射線分析證實實例33之絕對組態。晶胞尺寸：a=7.41Å，b=9.74Å，c=44.55Å，α=90.0°，β=90.0°，γ=90.0°；空間群：P212121；實例33之分子/不對稱單位：1；體積/晶胞中之分子數=3214Å3；密度(經計算)=1.346g/cm3。173K下之分數原子坐標係於表7中給出，且結構之繪示係於圖6中給出。
實例34
3-氯-4-(3-(5-氟-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
(四種構型異構物之混合物)
用氮將4-溴-3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[中間體3](0.076g,0.200mmol)、5-氟-2-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-1,3(2H)-二酮[中間體37](0.072g,0.182mmol)及Cs2CO3(0.118g,0.363mmol)於THF(3mL)及水(0.75mL)中之混合物鼓泡2min，然後用PdCl2(dppf)DCM加合物(7.4mg,9.09μmol)處理。用氮繼續鼓泡30sec並密封反應器皿。將混合物在室溫下攪拌過夜，然後用EtOAc稀釋並依次用水及鹽水洗滌。用DCM萃取合併之水層。乾燥合併之有機層並濃縮。藉由在矽膠上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷洗脫，從而得到黃色固體狀3-氯-4-(3-(5-氟-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(四種構型異構物之混合物)(0.049g,43%產率)。質譜m/z 571(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.52-11.48(m,1H),8.27(br.s.,1H),8.15-8.09(m,2H),7.84(s,1H),7.59(br.s.,1H),7.56-7.46(m,2H),7.30-7.26(m,1H),7.03-6.97(m,1H),6.72(d,J=8.4Hz,1H),6.60-6.51(m,2H),5.85(s,1H),4.98(s,1H),1.71(s,3H),1.46-1.42(m,6H)。
實例35及36
3-氯-4-(R)-(3-(5-氟-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
(單一構型異構物)
藉由如下之對掌性超臨界流體層析分離3-氯-4-(3-(5-氟-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(四種構型異構物之混合物)[實例34]之試樣(690mg)：管柱：對掌性PAK® IB(2 x 25cm,5μm)；流動相：CO2-MeOH(63：37)，50mL/min,45℃,100巴。自管柱洗脫之第一峰得到3-氯-4-(R)-(3-(5-氟-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺之一種單一構型異構物[實例35]。質譜m/z 571(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.50(s,1H),8.27(br.s.,1H),8.14(s,1H),8.11(d,J=7.5Hz,1H),7.84(d,J=1.1Hz,1H),7.59(br.s.,1H),7.56-7.51(m,1H),7.49-7.46(m,1H),7.29(dd,J=7.5,1.3Hz,1H),7.23(dd,J=10.3,7.5Hz,1H),7.01(dd,J=8.4,1.5Hz,1H),6.65(d,J=8.6Hz,1H),6.54(td,J=7.4,5.2Hz,1H),5.85(s,1H),4.98(s,1H),1.71(s,3H),1.48-1.41(m,6H)。
自管柱洗脫之第三峰得到3-氯-4-(R)-(3-(5-氟-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺之另一單一構型異構物[實例36]。質譜m/z 553(M+H-H2O)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.49(s,1H),8.27(br.s.,1H),8.14(s,1H),8.10(d,J=7.7Hz,1H),7.83(s,1H),7.59(br.s.,1H),7.56-7.45(m,2H),7.30-7.20(m,2H),6.99(d,J=8.6Hz,1H),6.72(d,J=8.6Hz,1H),6.56(td,J=7.5,5.3Hz,1H),5.85(s,1H),4.98(s,1H), 1.71(s,3H),1.45-1.42(m,6H)。
實例37
3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-4-(3-(5-甲氧基-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
(四種構型異構物之混合物)
用氮將4-溴-3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[中間體3](0.051g,0.135mmol)、5-甲氧基-2-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-1,3(2H)-二酮[中間體32](0.050g,0.122mmol)及Cs2CO3(0.080g,0.245mmol)於THF(2mL)及水(0.5mL)中之混合物鼓泡2min，然後用PdCl2(dppf)DCM加合物(5.0mg,6.12μmol)處理。用氮繼續鼓泡30sec並密封反應器皿。將混合物於60℃下加熱過夜。用DCM及MeOH稀釋冷卻混合物，乾燥並濃縮。藉由在矽膠上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷洗脫，從而得到黃色固體狀3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-4-(3-(5-甲氧基-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(四種構型異構物之混合物)(32.8mg,44%產率)。質譜m/z 583(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.51-11.47(m,1H),8.27(br.s.,1H),8.14(d,J=1.5Hz,1H),7.93(d,J=7.5Hz,1H),7.83(s,1H),7.59(br.s.,1H),7.55-7.45(m,3H),7.30-7.25(m,1H),7.03-6.97(m,1H),6.71(d,J=8.1Hz,1H),6.56(q,J=7.6Hz,1H),5.90(s,1H),4.98(s,1H),3.91 (s,3H),1.69(s,3H),1.45-1.42(m,6H)。
實例38及39
3-氯-4-(R)-(3-(5,7-二側氧基-5H-噻唑并[3,2-c]嘧啶-6(7H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(單一構型異構物)
用氬將4-溴-3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[中間體3](0.139g,0.364mmol)、6-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-5H-噻唑并[3,2-c]嘧啶-5,7(6H)-二酮[中間體36](0.127g,0.331mmol)及Cs2CO3(0.215g,0.661mmol)於THF(3.0mL)及水(0.75mL)中之混合物鼓泡3min，然後用PdCl2(dppf)DCM加合物(0.013g,0.017mmol)處理。用氬將混合物鼓泡30sec more及密封反應器皿。將混合物在50℃下攪拌5h。用EtOAc稀釋冷卻混合物並依次用水及鹽水洗滌。用EtOAc萃取合併之水層，並乾燥合併之有機層並濃縮。藉由在矽膠(80g)上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(90%，然後100%)洗脫，從而得到淺棕色固體狀3-氯-4-(3-(5,7-二側氧基-5H-噻唑并[3,2-c]嘧啶-6(7H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(四種構型異構物之混合物)(62.7mg,32%產率)。藉由如下之對掌性超臨界流體層析分離此物質：管柱：對掌性PAK® AD-H(3×25cm,5μm)；流動相：CO2-MeOH(60：40)，85mL/min；試樣製備：9mg/mL，存於MeOH-DMSO中；注入：2mL。自管柱洗脫之第三峰得到3-氯-4-(R)-(3-(5,7-二側氧基-5H-噻唑并[3,2-c]嘧啶-6(7H)-基)-2-甲 基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺之一種單一構型異構物[實例38]。質譜m/z 559(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.50(s,1H),8.27(br.s.,1H),8.14(s,1H),7.83(d,J=0.9Hz,1H),7.69(dd,J=4.6,0.7Hz,1H),7.59(br.s.,1H),7.54-7.49(m,1H),7.47-7.43(m,1H),7.26(dd,J=7.4,1.2Hz,1H),7.03(d,J=4.6Hz,1H),6.99(dd,J=8.6,1.5Hz,1H),6.62(d,J=8.4Hz,1H),6.28(s,1H),4.98(s,1H),1.70(s,3H),1.45-1.42(m,6H)。
自管柱洗脫之第四峰得到3-氯-4-(R)-(3-(5,7-二側氧基-5H-噻唑并[3,2-c]嘧啶-6(7H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺之另一單一構型異構物[實例39]。質譜m/z 541(M+H-H2O)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.49(s,1H),8.27(br.s.,1H),8.13(s,1H),7.83(d,J=0.9Hz,1H),7.73-7.65(m,2H),7.59(br.s.,1H),7.54-7.43(m,2H),7.26(dd,J=7.5,1.3Hz,1H),7.05(d,J=4.6Hz,1H),6.98(dd,J=8.5,1.7Hz,1H),6.71(d,J=8.6Hz,1H),6.28(s,1H),1.70(s,3H),1.43(d,J=2.9Hz,6H)。
實例40及41
3-氟-4-(R)-(3-(5-氟-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
(單一構型異構物)
製備40A：3-氟-4-(R)-(3-(5-氟-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧 啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(兩種構型異構物之混合物)
用氮將4-溴-3-氟-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[中間體27](0.200g,0.548mmol),5-氟-2-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-1,3(2H)-二酮[中間體37](0.260g,0.657mmol)及Cs2CO3(0.357g,1.10mmol)於二噁烷(4mL)及水(1mL)中之混合物鼓泡2min，然後用PdCl2(dppf)DCM加合物(0.022g,0.027mmol)處理。用氮繼續鼓泡30sec並密封反應器皿。將混合物於60℃下加熱過夜。用EtOAc稀釋冷卻混合物並依次用水及鹽水洗滌。用EtOAc萃取合併之水層，並乾燥合併之有機層並濃縮。藉由在矽膠上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷洗脫，從而得到黃色固體狀3-氟-4-(3-(5-氟-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(四種構型異構物之混合物)(0.194g,63%產率)。
實例40及41：
藉由如下之對掌性超臨界流體層析分離3-氟-4-(3-(5-氟-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(四種構型異構物之混合物)之試樣：管柱：對掌性PAK® OD-H(5×25cm,5μm)；流動相：CO2-IPA(55：45)，120mL/min,50℃,100巴；試樣製備：6.8mg/mL，存於MeOH-CHCl3(1：1)中；注入：1mL。自管柱洗脫之第一峰得到3-氟-4-(R)-(3-(5-氟-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺之一種單一構型異構物[實例40]。質譜m/z 555(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.40(s,1H),8.21(br.s.,1H),8.12(d,J=7.5Hz,1H),7.95(d,J=10.8Hz,1H),7.84(d,J=1.1Hz,1H),7.60(br.s.,1H),7.56-7.46(m,2H),7.41(dd,J=7.4,1.4Hz, 1H),7.23(dd,J=10.2,7.4Hz,1H),7.02(dd,J=8.6,1.5Hz,1H),6.88-6.82(m,1H),6.56(td,J=7.4,5.2Hz,1H),5.86(s,1H),4.98(s,1H),1.77(s,3H),1.47-1.42(m,6H)。
自管柱洗脫之第三峰得到3-氟-4-(R)-(3-(5-氟-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺之另一單一構型異構物[實例41]。質譜m/z 537(M+H-H2O)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.41(s,1H),8.29-8.17(m,1H),8.13(d,J=7.3Hz,1H),7.96(d,J=10.8Hz,1H),7.85(d,J=1.1Hz,1H),7.65-7.57(m,1H),7.57-7.47(m,2H),7.43(d,J=1.5Hz,1H),7.28-7.21(m,1H),7.02(d,J=1.5Hz,1H),6.90-6.83(m,1H),6.64-6.53(m,1H),5.87(s,1H),4.99(s,1H),1.78(s,3H),1.48-1.44(m,6H)。
3-氟-4-(R)-(3-(5-氟-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(單一構型異構物)[實例41]之替代製備：
使4-溴-3-氟-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[中間體27](6.00g,16.4mmol)、5-氟-2-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-1,3(2H)-二酮(單一鏡像異構物)[中間體38](7.81g,19.7mmol)、2M K3PO4水溶液(24.6mL,49.3mmol)及THF(70mL)之混合物經受三次利用氮之抽真空-填充循環。用1,1'-雙(二-第三丁基膦基)二茂鐵氯化鈀(II)(0.535g,0.821mmol)處理混合物，並使其再經受兩次利用氮之抽真空-填充循環。將混合物在室溫下攪拌過夜。用EtOAc稀釋混合物，依次用水及鹽水洗滌，並乾燥。過濾水層並將所收集固體添加至有機層中。濃縮有機層，並藉由在矽膠上管柱層析純化殘餘物，用EtOAc-己烷(依次為50%、62%、75%、85%及100%)洗脫，從而得到黃色固體狀3-氟-4-(3-(5-氟-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H- 咔唑-1-甲醯胺(兩種構型異構物之混合物)(8.55g,94%產率)。藉由如下之對掌性超臨界流體層析分離此物質之試樣(與其他批次之相同物質合併)：管柱：對掌性PAK® IC(3×25cm,5μm)；流動相：CO2-MeOH(50：50)，165mL/min,45℃,100巴；試樣製備：55mg/mL，存於MeOH-THF-DMSO(2：1：1)中；注入：3mL。自管柱洗脫之第一峰得到3-氟-4-(R)-(3-(5-氟-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺之單一構型異構物[實例41]。
實例42
3-氯-4-(2-氯-3-(1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(四種構型異構物之混合物)
用氮將4-溴-3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[中間體3](36mg,0.094mmol)、(Z)-4-((2-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)亞胺基)-1-甲基-1H-苯并[d][1,3]噁嗪-2(4H)-酮[中間體40](42.8mg,0.104mmol)、EtOH(1mL)、甲苯(1mL)及2M Na2CO3水溶液(0.16mL,0.311mmol)之混合物鼓泡5min。用四(三苯基膦)鈀(8.7mg,7.55μmol)處理混合物，並密封反應器皿並在90℃下加熱16h。將冷卻混合物分配於EtOAc與水之間，並乾燥有機相並濃縮。藉由在矽 膠上(4g)管柱層析純化殘餘物，用含有1% TEA之MeOH-DCM(0至5%之梯度)洗脫。使用製備型HPLC(PHENOMENEX® Axia C18 30×100mm)進一步純化所得物質，用含有0.1% TFA之MeCN-水(20%至100%之梯度，30mL/min)洗脫。用飽和NaHCO3水溶液處理適當流份並濃縮。將殘餘物分配於EtOAc與水之間，並用鹽水洗滌有機相，乾燥並濃縮，從而得到白色固體狀3-氯-4-(2-氯-3-(1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(四種構型異構物之混合物)(2.5mg,4%產率)。質譜m/z 569(M+H-H2O)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 8.38-8.23(m,1H),7.73(d,J=1.5Hz,2H),7.70-7.66(m,1H),7.64(s,1H),7.60-7.55(m,1H),7.51-7.45(m,1H),7.37-7.28(m,2H),7.26-7.20(m,1H),7.10-6.78(m,1H),3.70(s,2H),3.67(s,1H),1.65(s,4H),1.64(s,2H)。
實例43
3-氯-4-(R)-(2-氯-3-(1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(單一構型異構物)
藉由如下之對掌性超臨界流體層析分離3-氯-4-(2-氯-3-(1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(四種構型異構物之混合物)[實例42]之試樣(110mg)：管柱：Lux Cel-4(3×25cm,5μm)；流動相：CO2-MeOH(60：40)，85 mL/min；試樣製備：6.7mg/mL，存於MeOH-丙酮(9：1)中；注入：3.0mL。自管柱洗脫之第四峰得到黃色固體狀3-氯-4-(R)-(2-氯-3-(1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺之單一構型異構物(20mg,18%產率)。質譜m/z 569(M+H-H2O)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 10.44(s,1H),8.41-8.17(m,1H),7.78-7.72(m,2H),7.68(s,1H),7.65-7.60(m,1H),7.59-7.54(m,1H),7.46(d,J=7.5Hz,1H),7.34-7.28(m,2H),7.25(s,1H),7.01(d,J=8.6Hz,1H),3.70(s,3H),1.64(s,6H)。
實例44
3-氯-4-(2-氯-3-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
(四種構型異構物之混合物)
用氮將4-溴-3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[中間體3](30mg,0.079mmol)、3-(2-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-8-氟-1-甲基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體41](40.6mg,0.094mmol)、EtOH(1mL)、甲苯(1mL)及2M Na2CO3水溶液(0.13mL,0.26mmol)之混合物鼓泡5min。用四(三苯基膦)鈀(7.3mg,6.29μmol)處理混合物，並密封反應器皿並在90℃下加熱16h。將冷卻混合物分配於EtOAc與水之間，並乾燥有機相並濃縮。藉由在矽膠(12g)上管柱層析純化殘餘物，用含有1% TEA之MeOH-DCM(0至5%之梯 度)洗脫。使用製備型HPLC(PHENOMENEX® Axia C18 30×100mm)進一步純化所得物質，用含有0.1% TFA之MeCN-水(20%至100%之梯度，10min,30mL/min)洗脫。用飽和NaHCO3水溶液處理適當流份並濃縮。將殘餘物分配於EtOAc與水之間，並用鹽水洗滌有機相，乾燥並濃縮，從而得到白色固體狀3-氯-4-(2-氯-3-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(四種構型異構物之混合物)(6mg,11%產率)。質譜m/z 587(M+H-H2O)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 10.46(s,1H),7.74(s,1H),7.68(s,1H),7.66-7.61(m,1H),7.59-7.54(m,1H),7.51-7.46(m,2H),7.27-7.17(m,2H),7.06-6.88(m,1H),3.88(dd,J=11.6,8.0Hz,3H),1.64(s,6H)。19F NMR(400MHz，氯仿-d)δ -121.34。
實例45
3-氯-4-(R)-(2-氯-3-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(單一構型異構物)
藉由如下之對掌性超臨界流體層析分離3-氯-4-(2-氯-3-(1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(四種構型異構物之混合物)[實例44]之試樣(100mg)：管柱：Lux Cel-4(3×25cm,5μm)；流動相：CO2-MeOH(60：40)，85mL/min,50℃,100巴；試樣製備：6.7mg/mL，存於MeOH-丙酮(1：1) 中；注入：3.0mL。自管柱洗脫之第四峰得到黃色固體狀3-氯-4-(R)-(2-氯-3-(1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺之單一構型異構物(9.3mg)。質譜m/z 569(M+H-H2O)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 10.45(s,1H),8.11(d,J=7.3Hz,1H),7.73(s,1H),7.72(d,J=9.0Hz,1H),7.68(d,J=1.1Hz,1H),7.67-7.61(m,1H),7.56(dd,J=7.9,1.8Hz,1H),7.54-7.52(m,1H),7.51-7.42(m,2H),7.26-7.19(m,2H),7.00(d,J=8.6Hz,1H),3.90(d,J=8.1Hz,3H),1.64(s,6H)。19F NMR(376MHz，氯仿-d)δ -121.33。
實例46
4-(2-氯-3-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)苯基)-3-氟-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
(四種構型異構物之混合物)
用氮將4-溴-3-氟-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[中間體27](40mg,0.110mmol)、3-(2-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-8-氟-1-甲基喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體41](47mg,0.110mmol)、Cs2CO3(107mg,0.329mmol)、二噁烷(8mL)及水(2mL)之混合物鼓泡10min。用PdCl2(dppf)DCM加合物(7.2mg,8.76μmol)處理混合物，並在60℃下加熱過夜。將冷卻混合物分配在EtOAc與水之 間。乾燥有機相並濃縮。藉由在矽膠上管柱層析純化殘餘物，用MeOH-DCM(0至5%之梯度)洗脫，從而得到白色固體狀4-(2-氯-3-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)苯基)-3-氟-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(四種構型異構物之混合物)(20mg,31%產率)。質譜m/z 569(M+H-H2O)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 10.46(s,1H),7.74(s,1H),7.68(s,1H),7.66-7.61(m,1H),7.59-7.54(m,1H),7.51-7.46(m,2H),7.27-7.17(m,2H),7.06-6.88(m,1H),3.88(dd,J=11.6,8.0Hz,3H),1.64(s,6H)。19F NMR(400MHz，氯仿-d)δ -121.34,-127.34。
實例47
3-氯-4-(R)-(2-氯-3-(8-氟-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(單一構型異構物)
用氮將4-溴-3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[中間體3](103mg,0.269mmol)、3-(2-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-8-氟喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮[中間體42](140mg,0.336mmol)、THF(5mL)、2M K3PO4水溶液(0.504mL,1.01mmol)之混合物鼓泡15min。用1,1'-雙(二-第三丁基膦基)二茂鐵氯化鈀(II)(17.5mg,0.027mmol)處理混合物並在室溫下攪拌過夜。濃縮混合物，並將殘餘物在EtOAc與水之間分配。乾燥有機相並濃縮。藉由製備型HPLC純化殘餘物。用飽和NaHCO3水溶液處理適當流份並濃縮。用 EtOAc萃取水性殘餘物。依次用水及鹽水洗滌有機相，並乾燥並濃縮，從而得到3-氯-4-(2-氯-3-(8-氟-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(四種構型異構物之混合物)(30mg,15%產率)。藉由如下之對掌性超臨界流體層析分離此物質：管柱：對掌性CEL® OJ-H(3×25cm,5μm)；流動相：CO2-MeOH-MeCN(65：17.5：17.5)，85mL/min；試樣製備：6.8mg/mL，存於MeOH-CHCl3(1：1)中；注入：3.0mL。自管柱洗脫之第一峰得到3-氯-4-(R)-(2-氯-3-(8-氟-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺之單一構型異構物。質譜m/z 573(M+H-H2O)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 11.63-11.48(m,1H),8.39-8.25(m,1H),8.17-8.12(m,1H),7.99-7.92(m,1H),7.88-7.85(m,1H),7.85-7.81(m,1H),7.81-7.76(m,1H),7.76-7.70(m,1H),7.70-7.62(m,2H),7.57-7.46(m,1H),7.32-7.20(m,1H),7.13-6.99(m,1H),6.77-6.63(m,1H),5.10-4.98(m,1H),1.47-1.45(m,6H)。19F NMR(400MHz，氯仿-d)δ -129.63。
表10中之化合物係藉由類似於上文所闡述者之程序使用所闡述之中間體製備或藉由類似於所闡述者之方法製備。
比較實例75
7-(2-羥基丙-2-基)-4-(2-甲基-3-(4-側氧基喹唑啉-3(4H)-基)苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
比較實例75係作為實例76-15揭示於美國專利第8,084,620號中且其係根據其中所闡述之程序來製備。
比較實例76
7-(2-羥基丙-2-基)-3-甲基-4-(2-甲基-3-(4-側氧基喹唑啉-3(4H)-基)苯基)-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-甲醯胺
比較實例76係作為實例38揭示於WO 2011/159857中且其係根據其中所闡述之程序來製備。
生物學分析
本發明化合物之藥理學性質可藉由多種生物學分析來證實。已利用本發明化合物實施以下例示生物學分析。
人類重組Btk酶分析
向V形底384孔板中添加測試化合物、人類重組Btk(1nM,Invitrogen公司)、螢光肽(1.5μM)、ATP(20μM)及分析緩衝劑(20mM HEPES pH 7.4,10mM MgCl2,0.015% Brij 35表面活性劑及4mM DTT，於1.6% DMSO中)，且最終體積為30μL。在室溫下培育60min後，藉由將45μL 35mM EDTA添加至每一試樣中終止反應。在Caliper LABCHIP® 3000(Caliper,Hopkinton,MA)上藉由電泳分離螢光受質及磷酸化產物分析反應混合物。藉由與無酶對照反應(100%抑制)及無抑制劑對照(0%抑制)進行比較計算抑制數據。生成劑量反應曲線以確定抑制50%之激酶活性所需之濃度(IC50)。以10mM將化合物溶解於DMSO中並在11個濃度下進行評估。
Ramos FLIPR分析
將於不含酚紅之RPMI(Invitrogen 11835-030)及含有0.1% BSA(Sigma A8577)之50mM HEPES(Invitrogen 15630-130)中之密度為2×106個細胞/mL之Ramos RA1 B細胞(ATCC CRL-1596)添加至一半體積 之鈣負載緩衝劑(用於丙磺舒(probenecid)敏感性分析之BD批次套組，編號640177)，並在室溫下在黑暗中培育1小時。將負載有染料之細胞沈澱(Beckmann GS-CKR,1200rpm，室溫，5min)並在室溫下將其再懸浮於不含酚紅之RPMI以及50mM HEPES及10% FBS中至1×106個細胞/mL之密度。將150μL等份試樣(150,000個細胞/孔)平鋪於96孔聚-D-離胺酸塗覆之分析板(BD 35 4640)中並進行短暫離心(Beckmann GS-CKR 800rpm,5min，無制動)。接下來，將於0.4% DMSO/不含酚紅之RPMI+50mM HEPES+10% FBS中之50μL化合物稀釋液添加至各孔中，並將板在室溫下在黑暗中培育1小時。如上所述對分析板實施短暫離心，之後量測鈣含量。
使用FLIPR1(Molecular Devices)，藉由添加山羊抗人類IgM(Invitrogen AHI0601)至2.5μg/mL來刺激細胞。將細胞內鈣濃度之改變量測180秒，並相對於在僅存在刺激下觀察到之峰鈣含量確定抑制百分比。
Jak2酪胺酸激酶分析
已觀察到具有抵抗Jak2酪胺酸激酶活性之化合物在臨床試驗中可在人類患者中造成血小板減少症、貧血及嗜中性球減少症(例如參見，Pardanani,A.,Leukemia,26：1449-1451(2012))。藉助EPO及TPO發生Jak2信號傳導，該EPO及TPO分別控制紅血球及血小板之增殖。因此，抑制Jak2酪胺酸激酶可在臨床學中潛在地導致副效應。期望具有超過Jak2酪胺酸激酶之改良選擇性之Btk抑制劑以便最小化與Jak2酪胺酸激酶之抑制相關之脫靶副效應。
該等分析係在V形底384孔板中實施。最終分析體積為30μL，其係自將15μl酶及受質(螢光肽及ATP)及測試化合物添加於分析緩衝劑(100mM HEPES pH 7.4,10mM MgCl2,25mM β-甘油磷酸酯，0.015% Brij 35表面活性劑及4mM DTT)製得。藉由Jak2酪胺酸激酶與受質及 測試化合物之組合起始反應。將反應混合物在室溫下培育60分鐘，且藉由將45μL 35mM EDTA添加至每一試樣中進行終止。在Caliper LABCHIP® 3000上藉由電泳分離螢光受質及磷酸化產物來分析反應混合物。藉由與無酶對照反應(100%抑制)及僅媒劑反應(0%抑制)進行比較計算抑制數據。分析中試劑之最終濃度為ATP,30μM；Jak2螢光肽，1.5μM；Jak2,1nM；及DMSO,1.6%。生成劑量反應曲線以確定抑制50%之激酶活性所需之濃度(IC50)。以10mM將化合物溶解於DMSO中，並在11個濃度下進行評估，每一者係以一式兩份進行。藉由非線性回歸分析推導IC50值。
對B細胞上之BCR刺激之CD69表現之全血分析
全血分析中Btk抑制劑化合物在抑制人類B細胞上之CD69表現中之功效可用於預測臨床學中之有效劑量並最小化潛在副效應。預計全血CD69表現分析中具有較高活性之Btk抑制劑化合物所需要之劑量低於具有較低活性之化合物，且預計其會造成更少不期望之副效應。(Uetrecht,Chem.Res.Toxicol.,12：387-395(1999)；Nakayama,Drug Metabolism and Disposition,37(9)：1970-1977(2009)；Sakatis,Chem.Res.Toxicol.(2012))。
為量測BCR刺激之B細胞，用各種濃度之測試化合物處理ACD-A人類全血並在37℃以及攪動下用30μg/mL AffiniPure F(ab')2片段山羊抗人類IgM(Jackson 109-006-1299-內毒素經清除)及10ng/mL人類IL-4(PeproTech 200-04)刺激18h。用人類γ球蛋白(Jackson 009-000-002)封阻細胞，並用FITC共軛之小鼠抗人類CD20(BD Pharmingen 555622)及PE共軛之小鼠抗人類CD69單株抗體(BD Pharmingen 555531)染色，溶解並固定，然後進行洗滌。在對CD20陽性B細胞群體實施門控後，藉由平均螢光強度(MFI)對CD69表現之量進行定量，如藉由FACS分析所量測。
在B細胞上之BCR刺激之CD69表現之全血分析中，CD69 IC50值降低指示Btk抑制劑化合物之功效增加。
已將如藉由實例1至74所例示之本發明化合物與分別揭示於美國專利第號8,084,620及WO 2011/159857中之比較實例75及76進行比較，且已發現該等本發明化合物係有利的。本發明化合物之令人驚訝的優點在於可組合Btk抑制活性且可改良Btk抑制活性超過Jak2抑制活 性之激酶選擇性。如表11中所顯示，在所報告測試中，實例1至74顯示之令人驚訝的優點在於可組合Btk抑制活性之功效且可改良Btk抑制活性超過Jak2抑制活性之激酶選擇性，如藉由Jak2/Btk IC50值之比率所描述。Jak2/Btk IC50值之比值增大指示Btk激酶超過Jak2激酶之選擇性增加。實例1至74之Btk IC50值小於5nM且Jak2/Btk IC50值之比率為150及更大。相比之下，比較實例75及76分別具有分別2.6nM及6.9nM之Btk IC50值及92及29之Jak2/Btk IC50值之比率。
另外，與比較實例75相比，如藉由實例1至74所例示之本發明化合物在全血BCR刺激之CD69表現分析中亦可改良效能。如表11中所顯示，在所報告測試中，實例1至74顯示之令人驚訝之優點在於可組合Btk抑制活性之功效，改良Btk抑制活性超過Jak2抑制活性之激酶選擇性，且在全血BCR刺激之CD69表現分析中改良效能。實例1至74之Btk IC50值小於5nM，Jak2/Btk IC50值之比率為150及更大，且CD69 IC50值為260nM及更小。相比之下，比較實例75之Btk IC50值為2.6nM，Jak2/Btk IC50值之比率為92，且CD69 IC50值為650nM。

Claims (15)

  1. 一種式(I)化合物， 其中：兩個虛線表示兩個單鍵或兩個雙鍵；Q係：、、或；R1係F、Cl、-CN或-CH3；R2係Cl或-CH3；R3係-C(CH3)2OH或-CH2CH2OH；Ra係H或-CH3；各Rb獨立地係F、Cl、-CH3及/或-OCH3；及n為0、1或2。
  2. 如請求項1之化合物，其具有式(IA)之結構：
  3. 如請求項2之化合物，其中：Q係：或。
  4. 如請求項1至3中任一項之化合物，其具有式(IIA-1)之結構： 其中R3係-C(CH3)2OH。
  5. 如請求項1之化合物，其具有式(IB)之結構：
  6. 如請求項5之化合物，其中： Q係：或。
  7. 如請求項1及5至6中任一項之化合物，其具有式(IIB-1)之結構： 其中R3係-C(CH3)2OH。
  8. 如請求項1及5至6中任一項之化合物，其具有式(IIIB-2)之結構： 其中R3係-C(CH3)2OH。
  9. 如請求項1之化合物，其中該化合物係選自：3-氯-4-(R)-(3-(R)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(1)；3-氯-4-(R)-(3-(S)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(2)； 3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-4-(R)-(2-甲基-3-(1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(3)；3-氯-4-(R)-(3-(1,8-二甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(4)；3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-4-(R)-(3-(R)-(7-甲氧基-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(5)；3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-4-(R)-(3-(S)-(7-甲氧基-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(6)；3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-4-(R)-(3-(8-甲氧基-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(7)；3-氯-4-(R)-(3-(6-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(8)；3-氯-4-(R)-(3-(7-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(9)；3-氯-4-(R)-(3-(6,8-二氟-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(10)；3-氯-4-(R)-(3-(S)-(8-氟-1-甲基(d3)-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(11)；3-氯-4-(R)-(3-(R)-(8-氟-1-甲基(d3)-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(12)；3-氯-4-(R)-(3-(8-氟-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(13)；3-氯-4-(R)-(3-(R)-(8-氟-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(14)；3-氰基-4-(S)-(3-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(15及16)；3-氟-4-(R)-(3-(8-氟-1-甲基-2,4- 二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(17)；3-氟-4-(R)-(3-(S)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(18)；3-氟-4-(R)-(3-(S)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(19)；3-氟-4-(R)-(3-(8-氟-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(20)；3-氟-4-(R)-(3-(R)-(8-氟-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(21)；3-氟-4-(R)-(3-(S)-(8-氟-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(22)；3-氯-4-(R)-(3-(3-(4-氟苯基)-2,6-二側氧基-2,3-二氫嘧啶-1(6H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(23)；3-氯-4-(R)-(3-(3-(4-氟苯基)-2,6-二側氧基-2,3-二氫嘧啶-1(6H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(24)；6-氯-5-(R)-(3-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-2-(S)-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(25)；6-氯-5-(R)-(3-(S)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-2-(S)-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(26)；6-氟-5-(R)-(3-(S)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-2-(R)-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(27)；6-氟-5-(R)-(3-(S)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-2-(S)-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(28)；4-(R)-(3-(S)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-3-甲基-9H-咔唑-1-甲醯 胺(29)；4-(R)-(3-(5-氯-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-3-氟-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(30及31)；3-氯-4-(R)-(3-(R)-(5-氯-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(32)；3-氯-4-(R)-(3-(S)-(5-氯-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(33)；3-氯-4-(R)-(3-(5-氟-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(34)；3-氯-4-(R)-(3-(5-氟-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(35及36)；3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-4-(R)-(3-(5-甲氧基-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(37)；3-氯-4-(R)-(3-(5,7-二側氧基-5H-噻唑并[3,2-c]嘧啶-6(7H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(38及39)；3-氟-4-(R)-(3-(5-氟-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(40及41)；3-氯-4-(R)-(2-氯-3-(1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(42)；3-氯-4-(R)-(2-氯-3-(R)-(1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(43)；3-氯-4-(R)-(2-氯-3-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(44)；3-氯-4-(R)-(2-氯-3-(R)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(45)；4-(R)-(2-氯-3-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)苯基)-3-氟-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(46)；3-氯-4-(R)-(2-氯-3-(8-氟-2,4-二側 氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(47)；
  10. 如請求項1之化合物，其中該化合物係：3-氯-4-(R)-(3-(S)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(2)呈晶體形式M-1；3-氯-4-(R)-(3-(S)-(8-氟-1-甲基(d3)-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(11)呈晶體形式H-1；3-氯-4-(R)-(3-(S)-(8-氟-1-甲基(d3)-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑- 1-甲醯胺(11)呈晶體形式M-1；6-氟-5-(R)-(3-(S)-(8-氟-1-甲基-2,4-二側氧基-1,2-二氫喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-2-(S)-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺呈晶體形式M2-1；或3-氯-4-(R)-(3-(S)-(5-氯-1,3-二側氧基-1H-吡啶并[1,2-c]嘧啶-2(3H)-基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(33)呈晶體形式M2-1。
  11. 如請求項1之化合物，其具有以下結構：
  12. 如請求項1之化合物，其具有以下結構：
  13. 如請求項1至3、5、6及9至12中任一項之化合物，其用於療法中用於治療自體免疫疾病或慢性發炎疾病。
  14. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至12中任一項之化合物及醫藥上可接受之載劑。
  15. 一種如請求項1至12中任一項之化合物之用途，其用於製造用以治療自體免疫疾病或慢性發炎疾病之醫藥。
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