TW201533042A - αvβ整合素拮抗劑 - Google Patents

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Abstract

本發明係關於一種式(I)化合物或其鹽： □R1表示氫原子、甲基或乙基；R2表示氫原子或氟原子；R3表示氫原子、甲基或乙基。

Description

α v β 6 整合素拮抗劑
本發明係關於一種為αvβ6整合素拮抗劑的吡咯啶化合物、包含該等化合物之醫藥組合物及其於治療(尤其在治療其中需要αvβ6整合素拮抗劑的病症中)上之用途、化合物於製造用於治療其中需要αvβ6整合素拮抗劑的病症的藥物上之用途及一種用於治療或預防人類中之其中需要αvβ6整合素拮抗劑的失調症的方法、及可用作用於製造該等化合物之中間物的化合物。
整合素超家族蛋白係由α及β亞單位組成的異二聚體細胞表面受體。已報告18個α及8個β亞單位，已證實其等形成24種不同的α/β異二聚體。各鏈均包含一個大型細胞外結構域(>640個胺基酸，就β亞單位而言；>940個胺基酸，就α亞單位而言)，每條鏈具有約20個胺基酸的跨膜區且每條鏈通常具有30-50個胺基酸的短細胞質尾。已顯示不同整合素參與眾多的細胞生理，包括對細胞外基質的細胞黏附、細胞間相互作用、及對細胞遷移、增殖、分化及生存的影響(Barczyk等人，Cell and Tissue Research,2010,339,269)。
整合素受體經由短蛋白-蛋白結合界面與結合蛋白與配體相互作用，且整合素家族可分成在該等配體中擁有相似結合識別基元的亞家族。一個主要的亞家族係RGD-整合素，其識別蛋白質序列內包含RGD(精胺酸-甘胺酸-天冬胺酸)基元的配體。此亞家族中存在8種整合 素，亦即αvβ1、αvβ3、αvβ5、αvβ6、αvβ8、αIIbβ3、α5β1、α8β1，其中命名法顯示αvβ1、αvβ3、αvβ5、αvβ6及αvβ8擁有相同V亞單位及不同β亞單位，及αvβ1、α5β1及α8β1擁有相同β1亞單位及不同α亞單位。已顯示β1亞單位配對11種不同的α亞單位，其中僅上述3種共同識別RGD肽基元。(Humphries等人，Journal of Cell Science,2006,119,3901)。
該等8種RGD-結合整合素具有不同結合親和力且對不同的含RGD配體具有特異性。配體包括蛋白質(例如，纖連蛋白、玻璃連結蛋白、骨橋蛋白)及轉形生長因子β1及β3(TGFβ1及TGFβ3)之潛在相關肽(LAP)。已在若干系統中顯示對TGFβ1及TGFβ3之LAP之結合可實現啟動TGFβ1及TGFβ3生物作用及後續TGFβ-驅動的生物作用(Worthington等人，Trends in Biochemical Sciences,2011,36,47)。RGD整合素對該等配體之特異性結合取決於諸多因數，取決於細胞表現型。該等配體的多樣性加上RGD-結合整合素的表現模式為疾病干預提供諸多機會。該等疾病包括纖維變性疾病(Margadant等人，EMBO報告，2010,11,97)、炎症性疾病、癌症(Desgrosellier等人，Nature Reviews Cancer,2010,10,9)、再狹窄症及涉及血管生成成分的其他疾病(Weis等人，Cold Spring.Harb.Perspect.Med. 2011,1,a006478)。
文獻中已揭示相當數量的αv整合素拮抗劑(Goodman等人，Trends in Pharmacological Sciences,2012,33,405)，包括拮抗劑抗體、小肽及化合物。就抗體而言，此等包括泛αv拮抗劑英妥木單抗(Intetumumab)、選擇性αvβ3拮抗劑埃達珠單抗(Etaracizumab)及選擇性αvβ6拮抗劑STX-100。西侖吉肽(Cilengitide)係一種抑制αvβ3及αvβ5的環肽拮抗劑，及SB-267268係抑制αvβ3及αvβ5的化合物實例(Wilkinson-Berka等人，Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.,2006,47,1600)。作為αv整合素之不同組合之拮抗劑之本發明化合物可實現產生專用於特異性疾病適應症的新穎試劑。
肺纖維化表示若干種間質性肺病(包括特發性間質性肺炎)之末期，且以肺間質內的細胞外基質的過度沉積為特徵。在特發性間質性肺炎中，特發性肺纖維化(IPF)表示最普遍且最致命的病症且在診斷後具有3至5年的中值存活。IPF中的纖維化通常係進行性、耐受當前醫藥干預且因功能肺泡單元的阻塞而不可避免地導致呼吸衰竭。IPF在美國及歐洲影響約500,000人。此病症因此表示未滿足的重大醫療需求，其亟需新穎治療途徑(Datta A等人，Novel therapeutic approaches for pulmonary fibrosis,British Journal of Pharmacology 2011 163：141-172)。
活體外實驗動物及IPF患者免疫組織化學數據有力地支持受限於上皮細胞的整合素αvβ6在活化TGF-β1中之重要作用。此整合素之表現在正常上皮組織中較低及在損傷及發炎的上皮細胞(包括IPF中的經活化上皮細胞)中顯著上調。因此，靶向此整合素會降低干擾更較寬廣的TGF-β穩態作用的理論可能性。已顯示藉由抗體阻斷而部分抑制αvβ6整合素可防止肺纖維化而不加重炎症(Horan GS等人Partial inhibition of integrin αvβ6 prevents pulmonary fibrosis without exacerbating inflammation.Am J Respir Crit Care Med 2008 177：56-65)。
諸多細胞類型(包括血管內皮細胞)表現αvβ3整合素，在該等細胞中，其特徵係作為屏障電阻的調節器。急性肺損傷及敗血症之動物模型中之數據已證實此整合素於血管滲漏中之重要作用，因為基因敲除小鼠顯示顯著增強的血管滲漏並導致肺水腫或死亡。此外，可抑制αvβ3功能的抗體引起人體肺動脈及人臍靜脈內皮細胞中響應多種生長因子的單層通透性顯著增加。此等數據意味著αvβ3於血管刺激後保持血管內皮完整性之保護作用且此功能之該抑制可在慢性疾病狀態中驅動致病反應(Su等人Absence of integrin αvβ3 enhances vascular leak in mice by inhibiting endothelial cortical actin formation Am J Respir Crit Care Med 2012 185：58-66)。因此，對αvβ6勝過對αvβ3的選擇性可提供安全優勢。
本發明之目標係提供αvβ6拮抗劑。
在本發明之第一態樣中，提供一種式(I)化合物或其鹽，更特定言之式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽：
其中R1表示氫原子、甲基或乙基；R2表示氫原子或氟原子；R3表示氫原子、甲基或乙基。
式(I)化合物及其鹽具有αvβ6拮抗劑活性且據信於治療或預防某些失調症中具有潛在用途。
在本發明之第二態樣中，提供一種醫藥組合物，其包含式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽及一或多種醫藥上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。
在本發明之第三態樣中，提供一種式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽，其用於治療，特定言之用於治療其中需要αvβ6整合素受體拮抗劑的疾病或病症。
在本發明之第四態樣中，提供一種在有此需要的人類中治療或預防其中需要αvβ6整合素受體拮抗劑的疾病或病症的方法，其包括對 有此需要的人類中投與治療上有效量的式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽。
在本發明之第五態樣中，提供一種式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽於製造用於治療其中需要αvβ6整合素受體拮抗劑的疾病或病症的藥物上之用途。
在本發明之第一態樣中，提供一種式(I)化合物或其鹽：
其中R1表示氫原子、甲基或乙基；R2表示氫原子或氟原子；R3表示氫原子、甲基或乙基。
在一些實施例中，該式(I)化合物具有以下構型：
應明白本發明涵蓋上文所述之特定及較佳基團之所有組合。
在一些實施例中，R1表示甲基，R2表示氫原子且R3表示甲基。
在一些實施例中，R1表示甲基，R2表示氫原子且R3表示氫原子。
在一些實施例中，R1表示甲基，R2表示氟基團且R3表示甲基。
在一些實施例中，R1表示氫原子，R2表示氫原子且R3表示氫原子。
在一些實施例中，R1表示乙基，R2表示氫原子且R3表示甲基。
在一些實施例中，R1表示乙基，R2表示氫原子且R3表示乙基。
在一些實施例中，R1表示氫原子，R2表示氫原子且R3表示甲基。
在一個實施例中，該化合物係選自：3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸；3-(3-(5-甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸；3-(3-(5-乙基-3-甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸；3-(3-(1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸；3-(3-(3,5-二乙基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸；3-(3-(4-氟-3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸；3-(3-(3-甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸；或其醫藥上可接受之鹽。
在一個實施例中，該化合物係：3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸；或其醫藥上可接受之鹽。
將明白，本發明涵蓋呈游離鹼及其鹽形式(例如呈其醫藥上可接 受之鹽形式)的式(I)化合物。在一個實施例中，本發明係關於式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽。
有關適宜的鹽的論述參見Berge等人，J.Pharm.Sci.,66：1-19,(1977)。適宜的醫藥上可接受之鹽係列於編者P H Stahl及C G Wermuth,Handbook of Pharmaceutical Salts；Properties,Selection and Use,Weinheim/Surich：Wiley-VCH/VHCA,2002中。適宜的醫藥上可接受之鹽可包括與無機酸(如例如鹽酸、氫溴酸、正磷酸、硝酸、磷酸或硫酸)或與有機酸(如例如甲磺酸、乙磺酸、對甲苯磺酸、乙酸、丙酸、乳酸、檸檬酸、富馬酸、蘋果酸、琥珀酸、水楊酸、馬來酸、甘油磷酸、酒石酸、苯甲酸、榖胺酸、天冬胺酸、苯磺酸、萘磺酸(例如2-萘磺酸)、己酸或乙醯水楊酸)之酸加成鹽。通常，醫藥上可接受之鹽可容易藉由視需要使用所需酸或鹼來製備。該所得鹽可自溶液沉澱並可藉由過濾作用收集或可藉由蒸發溶劑來回收。
例如，在式(I)化合物之單離中，可使用其他非醫藥上可接受之鹽(例如甲酸鹽、草酸鹽或三氟乙酸鹽)，且包括在本發明之範圍內。
醫藥上可接受之鹼加成鹽可藉由使式(I)化合物與適宜的無機或有機鹼(例如，三乙胺、乙醇胺、三乙醇胺、膽鹼、精胺酸、離胺酸或組胺酸)視需要在適宜溶劑中反應以獲得鹼加成鹽(其通常經單離，例如藉由結晶作用及過濾作用)來形成。醫藥上可接受之鹼鹽包括銨鹽、鹼金屬鹽(例如鈉鹽及鉀鹽)、鹼土金屬鹽(例如鈣鹽及鎂鹽)及與有機鹼之鹽(包括一級、二級及三級胺(例如異丙胺、二乙胺、乙醇胺、三甲胺、二環己基胺及N-甲基-D-葡糖胺)之鹽)。
在一個實施例中，該式(I)化合物係呈游離鹼之形式，例如，3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸。
在另一實施例中，該式(I)化合物係鹽酸鹽，例如，3-(3-(3,5-二 甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸鹽酸鹽。
本發明範圍包括該等式(I)化合物之鹽之所有可能的化學計量形式及非化學計量形式。
將明白，諸多有機化合物可與溶劑形成複合物，該等有機化合物在該等溶劑中反應或自該等溶劑沉澱或結晶。此等複合物係稱作「溶劑化物」。例如，與水之複合物係稱作「水合物」。可使用具有高沸點及/或可形成氫鍵之溶劑(例如，水、二甲苯、N-甲基吡咯啶酮、甲醇及乙醇)以形成溶劑化物。鑑定溶劑化物之方法包括(但不限於)NMR及微量分析。該等式(I)化合物之溶劑化物係位於本發明之範圍內。
該等式(I)化合物可呈結晶或非晶態形式。此外，該等式(I)化合物之一些結晶形式可以多晶型物形式存在，該等多晶型物包括在本發明之範圍內。可使用諸多習知分析技術來表徵及區分式(I)化合物之多晶態形式，該等習知分析技術包括(但不限於)X射線粉末繞射(XRPD)圖案、紅外(IR)光譜、拉曼(Raman)光譜、差示掃描量熱法(DSC)、熱解重量分析(TGA)及固態核磁共振(SSNMR)。
將明白，結晶形式可視需要經水合化或溶劑化。本發明範圍包括式(I)化合物化學計量水合物以及包含不同水量的式(I)化合物。適宜的溶劑化物包括醫藥上可接受之溶劑化物，例如水合物。溶劑化物包括化學計量溶劑化物及非化學計量溶劑化物。
文中所述化合物包含兩個非對稱中心，因此可形成光學異構體(例如非對映異構體)。因此，本發明涵蓋式(I)化合物之異構體，不論呈經單離以實質上不含其他異構體的個別異構體(即，純正)的形式還是呈混合物形式。經單離以實質上不含其他異構體的個別異構體(即，純正)可經單離使得存在小於10%，特定言之小於約1%，例如小 於約0.1%的其他異構體。
熟習此項技術者將明白某些非對映異構體可比其他者具有更低活性及個別非對映異構體之活性可降至選定的限值以下。
在一個實施例中，該式(I)化合物係(S)-3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸：
在另一實施例中，該式(I)化合物係(S)-3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸鹽酸鹽。
異構體之分離可藉由熟習此項技術者已知的習知技術(例如分級結晶、層析或HPLC)來達成。
式(I)化合物可以若干互變形式中之一者存在。將明白本發明涵蓋式(I)化合物之所有互變異構體，不論呈個別互變異構體形式還是其混合物形式。
自前述內容將明白該等式(I)化合物及其鹽之溶劑化物、異構體及多晶態形式均包括在本發明範圍內。
化合物製法
本發明化合物可藉由包括標準化學法在內的各種方法來達成。除非另有指示，否則任何前述變量均將仍具有前述定義。說明性一般合成方法係描述於下文中且隨後本發明之具體化合物係在工作實例中製備。
結構式(I)化合物可藉由涉及結構式(II)化合物之第一去保護作用(即，酯基的裂解)，接著轉化成鹽之方法來製備：
其中R1、R2及R3係如上文所定義，且R4係C1至C6烷基，例如第三丁基、異丙基、乙基或甲基。
本發明之第六態樣提供式(II)化合物。
在一個實施例中，該式(II)化合物具有以下構型：
其中R4為第三丁基的結構式(II)化合物之去保護作用可利用例如鹽酸、氫溴酸、硫酸或三氟乙酸於惰性溶劑(例如DCM、2-甲基四氫呋喃、四氫呋喃、1,4-二噁烷或環戊基甲基醚)中藉由酸水解來完成。
或者，其中R4為甲基的結構式(II)化合物之去保護作用可利用例如氫氧化鈉或氫氧化鉀溶液於適宜溶劑(例如甲醇)中藉由鹼水解來完成。
裂解酯基後，可藉由熟習此項技術者熟知的方法使所得產物轉化成所需鹽。
在一個實施例中，使游離鹼轉化至鹽酸鹽係藉由利用鹽酸水溶液處理游離鹼之乙腈溶液，濃縮該所得鹽溶液及自乙腈結晶來達成。
結構式(II)化合物係可藉由於觸媒(例如碳載鈀或碳載銠)上進行其中R1、R2、R3及R4為上文所述的結構式(III)化合物之催化氫化來獲得。該氫化作用可在大氣壓或略高的氫氣壓(例如2至10個大氣壓)下於適宜溶劑(例如EtOH、MeOH或兩者之混合物)中進行。
結構式(III)化合物可藉由涉及使結構式(IV)化合物與結構式(V)酸在適宜觸媒之存在下，視需要在掌性配體之存在下，在高溫下及在鹼之存在下反應之方法來製備。
其中R1、R2、R3及R4係如上文所定義，且該雙鍵之幾何結構可係(E)或(E)及(Z)異構體之混合物，較佳為純(E)異構體。
其中R1、R2、R3係如上文所定義且R5表示氫或C1至C6烷基(例如2,3-二甲基丁烷-2,3-二醇(頻哪醇))的結構式(V)化合物。
結構式(V)化合物可以醇酸(R5=H)或酸酯(R5=烷基)(其可在水及鹼(例如氫氧化鉀)之存在下原位轉化成酸)的形式使用。
縮合結構式(IV)及(V)化合物之方法係在適宜觸媒(例如銠觸媒， 較佳約5%的氯(1,5-環辛二烯)銠(I)二聚體)之存在下及於水可混溶惰性溶劑(例如1,4-二噁烷)中，於鹼(氫氧化鉀)之存在下，於高溫(例如50至90℃)下進行。該縮合方法係在嚴格厭氧條件下進行，在該條件中，該反應混合物係經惰性氣體(例如氮氣)吹掃且於減壓下經抽空，重複該抽空方法及利用氮氣吹掃若干次(例如三次)。
此縮合方法產生約1：1比例的兩種非對映異構體，其等可藉由結晶、層析或HPLC來分離。較佳的分離方法係基於掌性支撐體(例如Chiralpak管柱)之掌性HPLC。所形成的非對映異構體的比例在10%添加劑(例如掌性配體)之存在下可實質上增加至例如約80：20。該等添加劑包括對映體上純正膦配體例如(R)-(+)-2,2'-雙(二苯基膦基)-1,1'-聯萘[(R)-BINAP]，其提供更具生物活性的非對映異構體作為主要異構體。
發現該非對映異構體比例取決於烷基R4的大小。因此，當R4係第三丁基時，則獲得更高比例的所需主要異構體。較佳的烷基R4係第三丁基，其產生高達95：5的非對映異構體比例。該非對映異構體比例可藉由掌性HPLC或藉由結晶作用進一步增加至例如大於99：1。當烷基R4係甲基時，則獲得90：10的較大規模的非對映異構體比例。
結構式(IV)化合物可藉由使(R)-2-(2-(吡咯啶-3-基)乙基)-1,8-萘啶[結構式(VI)化合物]與結構式(VII)化合物，在約10%適宜鈀觸媒之存在下，於適宜惰性溶劑(例如DCM)中，於三級胺鹼(例如三乙胺或二異丙基乙胺)之存在下，及於環境溫度下反應來製備。適宜的鈀觸媒較佳具有雙齒配體，例如兩個二苯基膦基團，例如，1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)[Pd(dppf)Cl2]。結構式(VI)化合物可呈游離鹼的形式使用或自鹽(例如二鹽酸鹽)在三級胺鹼之存在下原位生成。
結構式(VI)化合物[(R)-2-(2-(吡咯啶-3-基)乙基)-1,8-萘啶]可藉由文中所述方法來製備。以說明的方式，(R)-2-(2-(吡咯啶-3-基)乙基)-1,8-萘啶可藉由流程圖1中所述方法來製備。
試劑及條件：(a)碘、咪唑、三苯基膦、DCM、0℃；(b)2-甲基-[1,8]-萘啶、LiN(TMS)2、THF、0℃；(c)4M HCl的二噁烷溶液。
(R)-3-(羥甲基)吡咯啶-1-羧酸第三丁酯係自Fluorochem或BePharm Ltd購得，及2-甲基-[1,8]-萘啶係自例如Manchester Organics Ltd、Aldrich或Alfa Aesar購得。
結構式(VII)化合物可藉由文中所述方法來製備。以說明的方式，其中R4為第三丁基且雙鍵具有(E)幾何結構的結構式(VII)化合物可藉由流程圖2中所述方法來製備。
試劑及條件：(a)異丁烯、濃H2SO4、乙醚、24h；(b)乙酸鉀、乙腈、60℃、4h。
(E)-4-溴丁-2-烯酸係根據文獻步驟[T.Den Hartog,D.J.Van Dijken,A.J.Minnaard,B.L.Feringa Tetrahedron：Asymmetry 2010,21,1574-1584]來製備。
其中R4為甲基的結構式(VII)化合物可藉由文中所述方法來製備。例如，(E)-4-乙醯氧基丁-2-烯酸甲酯可藉由市售(E)4-溴丁-2-烯酸甲酯與乙酸鹽(例如乙酸鉀或乙酸鈉)在適宜溶劑(例如乙腈)中及在高溫(例如45-55℃)下反應來製備。
結構式(V)化合物可自結構式(VIII)化合物(其中R1、R2及R3係如前文所定義)來製備。
其中R5為H的結構式(V)化合物可藉由三個步驟方法來製備，該三個步驟方法涉及使結構式(VIII)化合物與有機鋰試劑(例如正丁基鋰)在惰性溶劑(例如THF或2-甲基四氫呋喃)在低溫(例如在-60與-78℃之間)下及於氮氣或氬氣之惰性氣氛中反應，接著與硼酸三烷基酯(例如硼酸三(異丙酯))反應，及最後水解。
或者，其中R5為頻哪醇的結構式(V)化合物可藉由使結構式(VIII)化合物與雙(頻哪醇根基)二硼(購自Aldrich)，在鈀觸媒(例如叁(二亞苄基丙酮)二鈀(購自Aldrich))之存在下，及在膦配體(例如2-二環己基膦基-2',4',6'-三異丙基聯苯(X-PHOS)(購自Aldrich))之存在下，及在乙酸鉀之存在下，於惰性溶劑(例如1,4-二噁烷)中，在高溫(例如110℃)下，及在惰性氣氛(例如氮氣)中反應來製備。在反應結束時向該反應混合物添加水導致所得頻哪醇酯的水解，以提供所需酸(V)。
(3-(1H-吡唑-1-基)苯基)酸(即，其中R1、R2及R3各表示氫的化 合物(V))係購自例如ABCR GmbH。
結構式(VIII)化合物可藉由文中所述方法於實驗階段中自(3-溴苯基)肼(購自Aldrich)或(3-溴苯基)肼鹽酸鹽(購自Amatek or Reddy & Reddy)並與適當二羰基化合物(例如，戊烷-2,4-二酮、庚烷-3,5-二酮、3-氟-戊烷-2,4-二酮)、或遮蔽二酮(例如(E)-4-(二甲基胺基)丁-3-烯-2-酮)、或炔酮(例如己-3-炔-2-酮)加熱來製備。
將明白，在上述途徑中之任一者中，可有利地保護一或多個官能基。保護基之實例及其移除方式可參見T.W.Greene「Protective Groups in Organic Synthesis」(第3版，J.Wiley and Sons,1999)中。適宜的胺保護基包括醯基(例如乙醯基)、胺基甲酸酯基(例如2’,2’,2’-三氯乙氧基羰基、苄氧基羰基或第三丁氧基羰基)及芳基烷基(例如苄基)，其等可視需要藉由水解(例如使用酸，例如鹽酸的二噁烷溶液或三氟乙酸的二氯甲烷溶液)或還原方式(例如苄基或苄氧基羰基之氫解或使用鋅之乙酸溶液還原移除2’,2’,2’-三氯乙氧基羰基)來移除。其他適宜的胺保護基包括三氟乙醯基(-COCF3)，其可藉由鹼催化水解來移除。
將明白，在上述途徑中之任一者中，將各種基團及部分引入分子中的合成步驟的確切順序可變化。確保在該方法之一個階段下引入的基團或部分將不受後續轉形及反應的影響及因此選擇合成步驟的順序將在此項技術的醫師的技能範圍內。
亦據信式(V)至(VIII)之某些化合物係新穎且因此形成本發明之又一態樣。
根據獨立的對映選擇性非對稱合成法，獲得其中R1表示甲基，R2表示氫原子且R3表示甲基的化合物(I)之絕對構型(實例1)，提供已知的絕對構型的普通中間物，及比較源自兩種合成途徑的普通中間物之光譜、旋光度及分析型掌性HPLC。該普通中間物係藉由利用氫化鋰 鋁還原實例1之羧酸基團以獲得醇中間物33異構體1(流程圖3)來獲得。中間物33之另一非對映異構體(異構體2)係自中間物13之次要產物(異構體2)藉由氫化鋰鋁還原及於碳載5%Rh上催化氫化所得萘啶醇來獲得。
藉由使用2-溴乙酸第三丁酯、二乙酸鈀、三(鄰甲苯基)膦及磷酸三鉀(流程圖4)使中間物9轉化成中間物35來開始該獨立合成法。利用TFA移除該第三丁酯以獲得中間物36，其隨後經甲醇酯化以獲得中間物37。後者經2-溴乙酸第三丁酯烷基化以獲得消旋中間物38。消旋物38藉由製備型掌性HPLC拆分成其兩種對映體(異構體1及異構體2)。中間物38之異構體1在CHCl3中具有+81的旋光度，而異構體2具有-82 的旋光度。使用氫氧化鋰及過氧化氫選擇性水解中間物38之各對映體之甲酯，以獲得中間物39異構體1及異構體2。異構體1具有+42的旋光度，而異構體2具有-41的旋光度。
中間物39之各對映體之絕對構型係藉由利用埃文斯(Evans)方法的獨立非對稱合成法來獲得。因此，使用市售(S)-4-苄基噁唑啶-2-酮，使中間物36轉化成中間物40(流程圖5)。在-78℃下，使用六甲基二矽疊氮化鋰使中間物40首先烯醇化及隨後利用2-溴乙酸第三丁酯來烷基化，以獲得呈非對映異構體形式的中間物41(主要異構體)，其藉由使該烯醇化物自低受阻側烷基化而得到。次要組分係使該烯醇化物自高受阻側烷基化而得到的異構體(中間物42)。主要異構體(中間物41)與氫氧化鋰及過氧化氫之水解獲得中間物39之預期(S)-對映體，其具有+65的旋光度。因此，中間物39異構體1具有(S)-構型。
隨後，利用中間物39之(S)-對映體(異構體1)使中間物3在EDC、N-羥基苯并三唑及N-甲基嗎啉之存在下乙醯基化，以獲得中間物43，其藉由於5%Rh/C上進行催化氫化而轉化成中間物44(流程圖6)。利用TFA使該44之第三丁酯裂解，以獲得中間物45，其先後經硼烷-THF複合物及氫化鋰鋁還原，以獲得中間物46。中間物46之主要組分之600MHz 1H NMR光譜、旋光度及分析型掌性HPLC係與針對中間物33異構體1所生成的數據相同。因此，中間物33異構體1之苄型非對稱中心具有(S)-構型。
使用的方法
據信該等式(I)化合物及其鹽為整合素受體活性(特定言之αvβ6受體活性)之抑制劑，且因此在治療其中需要αvβ6化合物的疾病或病症中具有潛在效用。
本發明因此提供一種治療用式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽。該式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽可用於治療其中需要αvβ6受體拮抗劑的疾病或病症。
本發明因此提供一種式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽，其用於治療其中需要αvβ6受體拮抗劑的疾病或病症。
本發明亦提供一種式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽於製造用於治療其中需要αvβ6受體拮抗劑的疾病或病症之藥物之用途。
本發明亦提供一種在有此需要的主體中治療其中需要αvβ6受體拮抗劑的疾病或病症之方法，其包括投與治療上有效量的式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽。
適宜地，該有此需要的主體係哺乳動物，特定言之為人類。
如文中所使用，術語「有效量」意指(例如)研究者或臨床醫師尋求的將引起組織、系統、動物或人類之生物或醫療反應之藥物或藥劑的用量。此外，術語「治療上有效量」意指與尚未接受該等用量的對應主體相比，導致疾病、失調症或副反應之改良之治療、治癒、預防或改善，或疾病或失調症之進展速度的降低的任何用量。該術語之範圍亦包括有效增強正常生理功能之用量。
纖維化疾病涉及在修復或反應過程中於器官或組織中形成過量的纖維結締組織。據信αvβ6拮抗劑可用於治療各種該等疾病或病症，該等疾病或病症包括彼等依賴於αvβ6整合素功能及依賴於經由αv整合素活化轉形生長因子β者。疾病可包括(但不限於)肺纖維化，例如特發性肺纖維化、非特異性間質性肺炎(NSIP)、普通型間質性肺炎(UIP)、Hermansky-Pudlak症候群、進行性大塊肺纖維化(煤工肺塵病之併發症)、結締組織病相關肺纖維化、哮喘及COPD中的氣道纖維化、急性呼吸窘迫症候群(ARDS)相關纖維化、急性肺損傷、輻射誘發性纖維化、家族性肺纖維化、肺動脈高壓；腎纖維化(糖尿病性腎病、IgA腎病、狼瘡性腎炎；局部區段性腎小球硬化(FSGS)、移植性腎病、自體免疫性腎病、藥物誘發性腎病、高血壓相關腎病、腎源性系統性纖維化)；肝纖維化(病毒誘發性纖維化(例如肝炎C或B)、自體免疫性腎炎、原發性膽汁性肝硬化、酒精性肝病、非酒精性脂肪肝疾病(包括非酒精性脂肪肝炎(NASH))、先天性肝纖維化、原發性硬化性 膽管炎、藥物誘發性肝炎、肝硬變)；皮膚纖維化(肥厚性瘢痕、硬皮病、瘢痕疙瘩、皮肌炎、嗜酸性筋膜炎、迪皮特朗攣縮症(Dupytrens contracture)、埃勒斯-當洛二氏症候群(Ehlers-Danlos syndrome)、佩羅尼氏病萎縮性大佨性表皮鬆解(Peyronie’s disease epidermolysis bullosa dystrophica)、口腔黏膜下纖維化)；眼部纖維化(AMD、糖尿病性黃斑水腫、乾眼、青光眼)；心肌纖維化(充血性心臟衰竭、心內膜心肌纖維化、肥厚性心肌病(HCM)、擴張型心肌病(DCM)、致心律失常性右室心肌病(ARVC)、高血壓性心臟病、心臟結節病及心臟衰竭之其他形式)及其他雜項纖維變性病症(縱膈纖維化、骨髓纖維化、腹膜後纖維化、克羅恩氏病(Crohn's disease)、神經纖維瘤病、子宮肌瘤(纖維瘤)、慢性器官移植排斥)。αvβ5或αvβ8之額外拮抗作用可具有其他益處。
此外，亦可治療與αvβ6整合素有關的癌前損傷或癌症(此等可包括(但不限於)子宮內膜癌、基底細胞癌、肝癌、結腸癌、子宮頸癌、口腔癌、胰腺癌、乳腺癌及卵巢癌、卡波西氏肉瘤(Kaposi’s sarcoma)、巨細胞瘤及癌症相關基質)。亦可有益於可受益於對血管再生的影響的病症(例如實體腫瘤)。
術語「其中需要αvβ6抑制劑的疾病或病症」意欲包括上述疾病狀態之任何一者或全部。
在一個實施例中，該其中需要αvβ6抑制劑的疾病或病症係選自特發性肺纖維化。
組合物
雖然就用於治療而言，式(I)化合物以及其醫藥上可接受之鹽可呈原料化學劑的方式投與，但通常以醫藥組合物的方式呈現活性組分。
在另一態樣中，本發明因此提供一種醫藥組合物，其包含式(I) 化合物或醫藥上可接受之鹽及一或多種醫藥上可接受之載劑、稀釋劑及/或賦形劑。該等式(I)化合物及醫藥上可接受之鹽係如上文所述。該(等)載劑、稀釋劑或賦形劑就與該組合物之其他組分相容的意義而言必須可接受且不有害於其接受者。
根據本發明之另一態樣，提供一種製備醫藥組合物之方法，其包括混合式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽與一或多種醫藥上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。該醫藥組合物可用於治療文中所述病症中之任何一者。
另外提供一種用於治療其中需要αvβ6受體抑制劑的疾病或病症的醫藥組合物，其包含式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽。
另外提供一種醫藥組合物，其包含0.05至1000mg的式(I)化合物或其醫藥鹽及0.1至2g一或多種醫藥上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。
由於該等式(I)化合物意欲用於醫藥組合物，將容易明白其等各較佳呈實質上純正形式(例如，至少60%純正、更適宜至少75%純正及較佳至少85%純正，尤其至少98%純正(針對基重的重量%))提供。
醫藥組合物可以每單位劑量包含預定量活性組分的單位劑量形式存在。較佳的單位劑量組合物係彼等包含日常劑量或子劑量或其適當分數的活性組分者。該等單位劑量可因此一天投與多於一次。較佳的單位劑量組合物係彼等包含日常劑量或子劑量(用於一天投與多於一次)(如上文所述)或其適當分數的活性組分者。
醫藥組合物可經調適以用於任何適當途徑的投與，例如，藉由經口(包括口腔或舌下)、直腸、吸入、鼻內、局部(包括口腔、舌下或經皮)、陰道或非經腸(包括皮下、肌肉內、靜脈內或皮內)途徑。該等組合物可藉由藥學技術中已知的任何方法(例如藉由該活性組分與該(等)載劑或賦形劑締合)來製備。
在一個實施例中，該醫藥組合物係經調適以用於鼻腔或吸入投與。
習知而言，用於鼻腔或吸入投與之劑型可調配成氣溶膠、溶液、懸浮液、凝膠或乾粉。
就適用於及/或經調適以用於吸入投與的組合物而言，較佳地，本發明組合物係呈小粒度形式，及更佳地，該小粒度形式藉由或可藉由微粉化獲得。該小粒度(例如經微粉化)化合物或鹽之較佳粒度係藉由約0.5至約10微米(例如使用雷射繞射測得)的D50值來界定。
氣溶膠調配物(例如用於吸入投與)可包含該活性物質於醫藥上可接受之水性或非水性溶劑中之溶液或精細懸浮液。氣溶膠調配物可以單一或多劑量的用量以無菌形式存在於密封容器中，該密封容器可呈與霧化裝置或吸入器一起使用的濾筒或補充器的形式。或者，該密封容器可為單一分配裝置(例如單一劑量鼻腔吸入器)或配備定劑量閥(定劑量吸入器)的氣溶膠分配器，一旦該容器的量已經耗盡時，其用於處理。
在該劑型包含氣溶膠分配器的情況下，其較佳包含在壓力下的適宜推進劑，例如壓縮空氣、二氧化碳或有機推進劑(例如氫氟烴(HFC))。適宜的HFC推進劑包括1,1,1,2,3,3,3-七氟丙烷及1,1,1,2-四氟乙烷。該氣溶膠劑型亦可採用泵噴霧器的形式。該經加壓氣溶膠可包含該活性組合物之溶液或懸浮液。此可能需要併入額外賦形劑例如共溶劑及/或界面活性劑以改良懸浮液調配物之分散特徵及均勻性。溶液調配物亦可需要添加共溶劑(例如乙醇)。亦可併入其他賦形劑改質劑以改良該調配物之例如安定性及/或味道及/或精細顆粒質量特徵(用量及/或輪廓)。
就適用於及/或經調適以用於吸入投與的醫藥組合物而言，該醫藥組合物可為乾粉可吸入組合物。該組合物可包含基劑粉末(例如乳 糖、葡萄糖、海藻糖、甘露糖或澱粉)、式(I)化合物或其鹽(較佳呈小粒度形式，例如呈微粉化形式)及視需要性能改質劑(例如L-白胺酸或另一胺基酸及/或硬脂酸之金屬鹽(例如硬脂酸鎂或硬脂酸鈣))。較佳地，該乾粉可吸入組合物包含乳糖及式(I)化合物或其鹽之乾粉摻合物。該乳糖較佳係乳糖水合物例如乳糖單水合物及/或較佳係吸入級及/或精細級乳糖。較佳地，乳糖之粒度係藉由90%或更多(以重量計或以體積計)的乳糖顆粒的直徑小於1000微米(例如10-1000微米，例如30-1000微米)，及/或50%或更多的乳糖顆粒的直徑小於500微米(例如10-500微米)來界定。更佳地，乳糖之粒度係藉由90%或更多的乳糖顆粒的直徑小於300微米(例如10-300微米，例如50-300微米)，及/或50%或更多的乳糖顆粒的直徑小於100微米來界定。視需要地，乳糖之粒度係藉由90%或更多的乳糖顆粒的直徑小於100-200微米，及/或50%或更多的乳糖顆粒的直徑小於40-70微米來界定。最重要地，較佳約3至約30%(例如約10%)(以重量計或以體積計)的乳糖顆粒的直徑係小於50微米或小於20微米。例如，但不限制，適宜的吸入級乳糖係E9334乳糖(10%細粉)(Borculo Domo Ingredients,Hanzeplein 25,8017 JD Zwolle,Netherlands)。
視需要地，特定言之對於乾粉可吸入組合物而言，可將用於吸入投與之醫藥組合物併入條帶式或帶狀式縱向安裝在適宜吸入裝置內部的複數個密封劑量容器(例如包含該乾粉組合物)中。該容器可視需要可破壞或可剝開且例如該乾粉組合物之劑量可經由諸如DISKUS TM裝置(由GlaxoSmithKline出售)的裝置藉由吸入作用來投與。該DISKUS TM吸入裝置係例如描述於GB 2242134 A中，且在該裝置中，用於呈粉末形式的該醫藥組合物的至少一個容器(該容器或該等容器較佳為縱向條帶式或帶狀式安裝的複數個密封劑量容器)係界定在兩個彼此以可剝離方式固定的元件之間；該裝置包含：一個為該容 器或該等容器界定開口平臺的構件；一個用於在該開口平臺處剝開該等元件以打開該容器的構件；及一個連通該經打開容器的出口，通過該出口，使用者可自該經打開容器吸入呈粉末形式的醫藥組合物。
由此，本發明化合物可調配成流體調配物以自流體分配器(例如，具有分配噴嘴或分配孔的流體分配器)遞送，當使用者所施加的力施加至該流體分配器的泵機制時，即經由該分配噴嘴或分配孔分配定劑量的該流體調配物。
該等流體分配器通常提供具有多份定劑量的該流體調配物的貯存槽，在後續泵致動時即可分配該等劑量。該分配噴嘴或孔之組態可使其插入使用者鼻孔內，以將該流體調配物噴霧至鼻腔中。前述類型的流體分配器係說明及例示於WO-A-2005/044354中，該案之全部內容以引用之方式併入本文中。該分配器具有護罩，其罩著具有安裝在用於容納流體調配物之容器上的壓縮泵之流體釋放裝置。該護罩具有至少一個手指可操作邊桿，其相對該護罩可向內移動，以使該容器在該護罩中向上凸行時引起泵壓縮，使定劑量的該調配物經由該護罩的鼻腔噴嘴泵出泵桿。特別佳的通用型流體分配器係顯示於WO-A-2005/044354之圖30-40中。
用於吸入或鼻內投與之組合物亦可藉由噴霧作用而投藥至肺及呼吸道之其他區域。該等組合物可係水溶液或懸浮液。可利用添加如：酸或鹼、緩衝鹽、等滲調節劑、界面活性劑或抗微生物劑(如：氯苄烷胺(BAC))之製劑來調配噴霧吸入型溶液。該組合物可係無菌且不含抗微生物防腐劑。其等可經除菌，例如，藉由過濾或於高壓釜中加熱。其等可呈無菌溶液的形式存在。單一單位劑量的治療上有效量的本發明化合物可呈預混合預定量調配物的形式提供於單一容器中。
在另一實施例中，該醫藥組合物係經調適以用於口服。
經調適以用於口服的醫藥組合物可呈離散型單元的形式呈現， 例如膠囊或錠劑；粉末或顆粒；於水性或非水性液體中之溶液或懸浮液；可食用泡沫狀體或發泡體；或水包油液體乳液或油包水液體乳液。
例如，呈錠劑或膠囊形式經口投藥時，該活性藥物組分可組合口服用無毒性醫藥上可接受之惰性載劑(例如乙醇、甘油、水及類似物)。適用於併入錠劑或膠囊中之粉末製法為將該化合物縮減至適宜精細大小(例如藉由微粉化)並與依類似方式製得之醫藥載劑(例如可食用碳水化合物(例如澱粉或甘露醇))混合。亦可包含調味劑、防腐劑、分散劑及著色劑。
膠囊製法可為如上所述製備粉末混合物及填入成形的明膠殼。可在填充操作之前，將助流劑及潤滑劑(例如膠態矽石、滑石、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣或固體聚乙二醇)添加至該粉末混合物中。亦可添加崩解劑或增溶劑(例如瓊脂、碳酸鈣或碳酸鈉)以在膠囊被攝取時提高該藥物的利用率。
此外，當需要或必要時，亦可將適宜的黏結劑、助流劑、潤滑劑、甜味劑、調味劑、崩解劑及著色劑)併入該混合物中。適宜的黏結劑包括澱粉、明膠、天然糖(例如葡萄糖或β-乳糖)、玉米甜味劑、天然及合成膠(例如阿拉伯樹膠、黃蓍膠或海藻酸鈉、羧甲基纖維素、聚乙二醇、蠟)及類似物。
此等劑型中使用的潤滑劑包括油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯甲酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉及類似物。
崩解劑包括(但不限制)澱粉、甲基纖維素、瓊脂、膨潤土、黃原膠及類似物。錠劑係經調配，例如藉由製備粉末混合物，製粒或重壓，添加潤滑劑及崩解劑並壓製成錠劑。乾粉混合物係如上所述藉由混合經適當粉碎的該化合物與上述稀釋劑或鹼及視需要與黏結劑(例如羧甲基纖維素)、藻酸鹽、明膠或聚乙烯吡咯啶酮、溶液阻滯劑(例 如石蠟)、吸收加速劑(例如四級鹽)及/或吸收劑(例如膨潤土、高嶺土或磷酸二鈣)來製備。該粉末混合物可藉由利用黏結劑(例如糖漿、澱粉糊、阿拉伯樹膠或纖維素質或聚合物材料之溶液)潤濕並施力通過篩網來製粒。就替代製粒而言，可使該粉末混合物通過打錠機且得到一種破碎成顆粒的不完全成形錠塊。可藉由添加硬脂酸、硬脂酸鹽、滑石或礦物油來潤滑該等顆粒以防止黏附至錠劑成形模具。隨後，將經潤滑混合物壓縮成錠劑。本發明化合物亦可組合自由流動的惰性載劑並在不經歷製粒或重壓步驟的情況下直接壓縮成錠劑。可提供由蟲膠密封層組成的清晰或透明保護塗層、糖或聚合物材料塗層及蠟拋光塗層。可將染料添加至此等塗層以區分不同單位劑量。
口服流體(例如溶液、糖漿及酏劑)可以劑量單位形式存在，因此既定量包含預定量的該化合物。糖漿可藉由將該化合物溶解於適宜的經調味水溶液中來製備，而酏劑通過使用非毒性酒精媒劑來製備。懸浮液可藉由將該化合物分散於非毒性媒劑中來調配。亦可添加增溶劑及乳化劑(例如乙氧基化異硬脂醇及聚氧伸乙基山梨糖醇醚)、防腐劑、調味添加劑(例如薄荷油或天然甜味劑或糖精或其他人工甜味劑)及類似物。
在適當的情況下，可微囊封裝用於口服的劑量單位組合物。該調配物亦可經製備以延長或維持釋離，例如藉由塗佈或包埋顆粒材料於聚合物、蠟或類似物中。
本發明化合物亦可呈脂質體遞送系統(例如小型單層微脂粒、大型單層微脂粒及多層微脂粒)的形式投與。脂質體可自各種磷脂(例如膽固醇、硬脂胺或磷脂醯膽鹼)形成。
經調適以用於經皮投與之醫藥組合物可以離散型貼片的形式呈現，該離散型貼片意欲維持與接受者之表皮密切接觸一段更長時間。
經調適以用於局部投與之醫藥組合物可調配成軟膏、乳膏、懸 浮液、洗劑、粉末、溶液、糊膏、凝膠、噴劑、氣溶膠或油。
就處理眼睛或其他外部組織(例如嘴及皮膚)而言，該等組合物較佳係以局部軟膏或乳膏的形式施用。當調配成軟膏時，可將該活性組分與石蠟族或水混溶性軟膏基質一起使用。或者，可將該活性組分與水包油乳膏基質或油包水基質一起調配成乳膏。
經調適以用於局部投與至眼睛之醫藥組合物包括其中該活性組分溶解在或懸浮在適宜載劑(尤其水性溶劑)中之滴眼劑。
經調適以用於局部投與至嘴中之醫藥組合物包括含片、片劑及漱口水。
經調適以用於直腸投與之醫藥組合物可以栓劑或灌腸劑的形式呈現。
經調適以用於陰道投與之醫藥組合物可以子宮帽、衛生止血棉塞、乳膏、凝膠、糊膏、泡劑或噴霧調配物的形式呈現。
經調適以用於非經腸投與之醫藥組合物包括用於皮下、靜脈內或肌肉內投與之水性及非水性無菌注射液，其可包含使該組合物與預定接受者之血液等滲的抗氧化劑、緩衝劑、抑菌劑及溶質；及可包括懸浮劑及增稠劑的水性及非水性無菌懸浮液。該等組合物可存在於單位劑量或多劑量容器(例如密封安瓿及小瓶)中，且可在使用前立即儲存在僅需添加無菌液體載劑(例如，注射用水)的凍乾(低壓凍乾)條件下。臨時配製的注射液及懸浮液可自無菌粉末、顆粒及錠劑來製備。
治療上有效量的本發明化合物將取決於諸多因素，包括例如主體的年齡及重量、需要治療的確切病症及其嚴重度、調配物的性質及投與途徑，及最終主治醫師或獸醫的判斷。在該醫藥組合物中，用於口服或非經腸投與之各劑量單位較佳包含經計算的0.01至3000mg，更佳0.5至1000mg本發明化合物作為游離鹼。
用於鼻腔或吸入投與之各劑量單位較佳包含經計算的0.001至50 mg，更佳0.01至50mg，又更佳1至50mg式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽作為游離鹼。
就投與霧化溶液或懸浮液而言，劑量單位通常包含1至15mg，例如，2mg至10mg或4mg至6mg，適宜地，其可遞送每天一次、每天兩次或多於每天兩次。本發明化合物可呈乾燥或低壓凍乾的粉末形式提供以於藥房中或由患者進行復水，或可(例如)呈鹽水溶液的形式提供。
本發明醫藥上可接受之化合物可以經計算的日劑量(對於成人患者而言)(例如，0.01mg至3000mg/天或0.5至1000mg/天的口服或非經腸劑量或0.001至50mg/天或0.01至50mg/天或10至50mg的鼻腔或吸入劑量的式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽)的形式投與作為游離鹼。此用量可以單次劑量/每天或更通常諸多(例如兩次、三次、四次、五次或六次)的子劑量/天的形式給予，使得總日劑量相同。有效量的其鹽可根據有效量的式(I)化合物本身的比例來確定。
本發明化合物可單獨或與其他治療劑組合使用。本發明組合物療法因此包括投與至少一種式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽，及使用至少一種其他醫藥活性劑。較佳地，本發明組合療法包括投與至少一種式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽，及至少一種其他醫藥活性劑。該(等)本發明化合物及該(等)其他醫藥活性劑可以單一醫藥組合物的形式一起投與或分開投與，且當分開投與時，此可同時或以任何順序連續發生。該(等)本發明化合物及該(等)其他醫藥活性劑之用量及投與之相對時序將經選擇以達成所需組合治療效應。
因此在另一態樣中，提供一種組合物，其包含本發明化合物及至少一種其他醫藥活性劑。
因此在一態樣中，本發明化合物及醫藥組合物可與一或多種其他治療劑組合使用或包括該一或多種其他治療劑。將明白，當本發明 化合物組合藉由吸入、靜脈內、經口、鼻內或其他途徑正常投與的一或多種其他治療活性劑投與時，該所得醫藥組合物可藉由相同途徑投與。或者，該組合物之個別組分可藉由不同途徑投與。
該式(I)化合物及其醫藥上可接受之鹽可組合一或多種可用於預防或治療過敏性疾病、炎症性疾病、自體免疫性疾病的其他作用劑使用；例如，抗原免疫療法、抗組胺藥、皮質類固醇(例如，氟替卡松丙酸酯(fluticasone propionate)、酸氟替卡松(fluticasone furoate)、二丙酸倍氯米松(beclomethasone dipropionate)、布地縮松(budesonide)、環索奈德(ciclesonide)、康酸莫米他松(mometasone furoate)、曲安西龍(triamcinolone)、氟尼縮松(flunisolide))、NSAID、白三烯調節劑(例如孟魯司特(montelukast)、紥魯司特(zafirlukast)、普侖司特(pranlukast))、iNOS抑制劑、類胰蛋白酶抑制劑、IKK2抑制劑、p38抑制劑、Syk抑制劑、彈性蛋白酶抑制劑、β-2整合素拮抗劑、腺苷a2a促效劑、趨化細胞素拮抗劑(例如CCR3拮抗劑或CCR4拮抗劑)、介體釋放抑制劑(例如色甘酸鈉、5-脂質氧合酶抑制劑(zyflo)、DP1拮抗劑、DP2拮抗劑、pI3K δ抑制劑、ITK抑制劑、LP(溶血磷脂酸)抑制劑或FLAP(5-脂質氧合酶活化蛋白)抑制劑(例如3-(3-(第三丁基硫基)-1-(4-(6-乙氧基吡啶-3-基)苄基)-5-((5-甲基吡啶-2-基)甲氧基)-1H-吲哚-2-基)-2,2-二甲基丙酸鈉)、甲胺喋呤及類似作用劑)、單株抗體療法(例如抗IgE、抗TNF、抗IL-5、抗IL-6、抗IL-12、抗IL-1及類似作用劑)、受體療法(例如依那西普(etanercept)及類似作用劑)、抗原非特異性免疫療法(例如干擾素或其他細胞活素/趨化細胞素、細胞活素/趨化細胞素受體調節劑、細胞活素促效劑或拮抗劑、TLR促效劑及類似作用劑)、TGFβ合成抑制劑(例如吡非尼酮(Pirfenidone)、靶向血管內皮生長因子(VEGF)、血小板源生長因子(PDGF)及成纖維細胞生長因子(FGF)受體激酶的酪胺酸激酶抑制劑(例如尼達尼布(Intedanib)(BIBF- 1120)及甲磺酸伊馬替尼(Gleevec))、內皮素受體拮抗劑(例如安貝生坦(Ambrisentan)或馬西替坦(Macitentan))、抗氧化劑(例如N-乙醯基半胱胺酸(NAC或Fluimucil))、廣譜抗生素(例如四環素，例如米諾環素(Minocycline)鹽酸鹽)、磷酸二酯酶5(PDE5)抑制劑(例如威爾剛(sildenafil))。或者，可組合使用抗αvβ6抗體(例如單株抗體，例如彼等描述於WO2003100033A2中者)。
熟習此項技術者將明白，在適當的情況下，可使用呈鹽形式(例如呈鹼金屬鹽或胺鹽或呈酸加成鹽或前藥或呈酯(例如低碳數烷基酯)或呈溶劑化物(例如水合物))的其他治療成分，以使該治療成分之活性及/或安定性及/或物理特性(例如溶解度)最佳化。亦將明白，在適當情況下，可使用呈光學上純正形式的治療成分。
上述組合可合宜地以醫藥組合物的形式呈現使用且因此包含上述與醫藥上可接受之稀釋劑或載劑一起之組合之醫藥組合物表示本發明之另一態樣。
該等組合之個別化合物可以獨立或合併的醫藥組合物形式連續或同時投與。較佳地，該等個別化合物將以合併的醫藥組合物形式同時投與。熟習此項技術者將容易明白適當劑量的已知治療劑。
縮寫
以下清單提供文中使用的某些縮寫的定義。將明白，該清單並非詳盡，但熟習此項技術者將容易明白彼等未在下文中定義的縮寫之意義。
Ac(乙醯基)
BCECF-AM(2',7'-雙-(2-羧乙基)-5-(及-6)-羧基螢光素AM酯)
Bu(丁基)
CHAPS(3-[(3-膽醯胺基丙基)二甲基銨基]-1-丙烷磺酸酯)
CV(管柱體積)
DCM(二氯甲烷)
DMF(N,N-二甲基甲醯胺)
DMSO(二甲亞碸)
DSC(差示掃描量熱法)
Et(乙基)
EtOH(乙醇)
EtOAc(乙酸乙酯)
h(小時)
HCl(鹽酸)
HEPES(4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙磺酸)
L(升)
M(莫耳)
MDAP(質量導向之自動製備型HPLC)
Me(甲基)
MeOH(甲醇)
min(分鐘)
MTBE(甲基第三丁基醚)
Ph(苯基)
iPr(異丙基)
(R)-BINAP(R)-(+)-2,2'-雙(二苯基膦基)-1,1'-聯萘
Si(矽石)
SPE(固相萃取)
TEA(三乙胺)
TFA(三氟乙酸)
THF(四氫呋喃)
TLC(薄層層析)
XRPD(X射線粉末繞射)
所有涉及鹽水的內容均係指氯化鈉之飽和水溶液。
實驗細節 分析性LCMS
於以下系統A、B或C中之一者上進行分析性LCMS。
對所有系統之UV偵測係來自220nm至350nm波長的平均訊號並於質譜儀上使用交替掃描正及負模型電噴霧電離作用記錄質譜。
文中提到的LCMS系統A-B的實驗細節係如下：
系統A
管柱：50mm×2.1mm ID，1.7μm Acquity UPLC BEH C18管柱
流率：1mL/min
溫度：40℃
溶劑：A：利用氨溶液調整至pH10的10mM碳酸氫銨水溶液
B：乙腈
系統B
管柱：50mm×2.1mm ID，1.7μm Acquity UPLC BEH C18
流率：1mL/min
溫度：40℃
溶劑：A：0.1%體積/體積三氟乙酸之水溶液
B：0.1%體積/體積三氟乙酸之乙腈溶液
梯度：時間(分鐘) A% B%
系統C
管柱：50mm×2.1mm ID，1.7μm Acquity UPLC BEH C18管柱
流率：1mL/min
溫度：40℃
溶劑：A：0.1%體積/體積甲酸之水溶液
B：0.1%體積/體積甲酸之乙腈溶液
質量導向之自動製備型HPLC
藉由以下方法A至C中之一者藉由MDAP HPLC純化粗製產物。除非另有規定，否則運行時間為15分鐘。所有方法之UV偵測均係來自210nm至350nm波長的平均訊號並於質譜儀上使用交替掃描正及負模型電噴霧電離作用記錄質譜。
方法A：
方法A係在XBridge C18管柱(通常100mm×30mm內徑5μm封裝直徑)上於環境溫度下進行。所使用的溶劑係：A=利用氨溶液調整至pH10的10mM碳酸氫銨水溶液。
B=乙腈。
所使用的梯度係：
方法B：
方法B係在X Bridge C18管柱(通常100mm×30mm內徑5μm封裝直徑)於環境溫度下進行。所使用的溶劑係：A=利用氨溶液調整至pH10的10mM碳酸氫銨水溶液。
B=乙腈。
所使用的梯度係：
方法C：
方法C係在XBridge C18管柱(通常150mm×30mm內徑5μm封裝直徑)上於環境溫度下進行。
所用的溶劑係：A=0.1%體積/體積甲酸之水溶液。
B=0.1%體積/體積甲酸之乙腈溶液。
所用的梯度係：
該UV偵測係來自210nm至350nm波長的平均訊號。
中間物之製法 中間物1：(R)-3-(碘甲基)吡咯啶-1-羧酸第三丁酯
依序將DCM(2L)、三苯基膦(339g，1.29mol)及咪唑(88g，1.29mol)添加至5L真空夾套玻璃反應器(Radley’s LARA)中，及將溫度降低至0℃。隨後，歷時30分鐘滴加碘(328g，1.29mol)，同時保持溫度在0-5℃之間以控制放熱。在添加期間，形成棕色稠狀沉澱物。歷時15分鐘，使該沉澱物升溫至室溫及隨後於室溫下再攪拌30分鐘。歷時15分鐘，滴添(R)-3-(羥甲基)吡咯啶-1-羧酸第三丁酯(200g，994mmol)(購自Fluorochem或BePharm Ltd)之DCM(200mL)溶液，同時保持該反應溫度在24-30℃之間。攪拌該反應混合物2h，隨後用TBME(8L)稀釋，及過濾。於減壓下濃縮濾液，並於冰水浴中於乙醚(2L)中濕磨殘餘物(700g)，以獲得333g粗製產物。歷時30分鐘，藉由層析法於矽石管柱(100g)上用0-50%乙酸乙酯-環己烷的梯度洗脫來純化27g份量的粗製產物。合併適當的溶離份並於真空中蒸發，以獲得呈黃色油的該標題化合物(16.33g，5%)。藉由層析法於矽石管柱(1.5kg)上用0-30%乙酸乙酯-環己烷的梯度(9.5份管柱體積)洗脫來純化剩餘的粗製材料(~306g)。合併適當的溶離份並於真空中蒸發，以獲得呈淺黃色油的該標題化合物(233.94g，76%)：LCMS(系統 A)RT=1.19min，100%，ES+ve m/z 312(M+H)+；[α]D 20=+23(c 1.00，EtOH)。
中間物2：(R)-3-(2-(1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-羧酸第三丁酯
使2-甲基-1,8-萘啶(57.5g，399mmol)(購自Manchester Organics)及(R)-3-(碘甲基)吡咯啶-1-羧酸第三丁酯(124.2g，399mmol)(中間物1)之THF(1L)攪拌溶液冷卻至0℃並歷時20分鐘於氮氣下用雙(三甲基甲矽烷基)醯胺鋰之THF溶液(1M，399mL，399mmol)處理並於0℃下攪拌該反應混合物3h。用飽和氯化銨溶液(500mL)淬滅該反應並添加水(500mL)及乙酸乙酯(1L)。使該等層分離並再用乙酸乙酯(1L)萃取水相。乾燥(MgSO4)合併的有機層，過濾並於真空中蒸發。藉由層析法於矽石管柱(750g)上用0-100%[乙酸乙酯/(5%MeOH-95%乙酸乙酯)]的梯度(8份管柱體積)洗脫來純化殘餘的棕色油(162g)。合併適當的溶離份並於真空中蒸發，以獲得呈橙色固體的該標題化合物(46.65g，36%)：LCMS(系統A)RT=0.99min，97%，ES+ve m/z 328(M+H)+，[α]D 20=+22(e 1.00，EtOH)。
中間物3：(R)-2-(2-(吡咯啶-3-基)乙基)-1,8-萘啶二鹽酸鹽
在室溫下，用HCl(4M之1,4-二噁烷溶液(200mL，800mmol))緩慢處理(R)-3-(2-(1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-羧酸第三丁酯(104.71g，320mmol)之DCM(500mL)溶液。於室溫下過夜攪拌該混合物，此後在燒瓶中形成大型固體簇。添加MeOH(~100mL)以助於溶解該固體並繼續攪拌。該LCMS指示~72%產物及~25%初始材料。添加額外用量的4M HCl之1,4-二噁烷溶液(100mL)並繼續攪拌1h。於真空中蒸發溶劑，以獲得呈紫色固體的該標題化合物(89.66g，93%)：LCMS(系統B)RT=0.34min，100%，ES+ve m/z 228(M+H)+。
中間物4：(E)-4-溴丁-2-烯酸第三丁酯
在鋼製高壓釜中，在-40℃下，將異丁烯氣體(363mL，3.82mol) 鼓入通過(E)-4-溴丁-2-烯酸(210g，1.27mmol)[T.Den Hartog,D.J.Van Dijken,A.J.Minnaard,B.L.Feringa Tetrahedron Asymmet. 2010,21,1574-1584]及濃H2SO4(20.35mL，382mmol)之乙醚(1L)之攪拌溶液30分鐘。將該混合物密封於高壓釜中並於室溫下攪拌該混合物24h。使該反應冷卻至0℃，隨後用三乙胺(250mL)鹼化並用DCM(3×200mL)萃取。乾燥有機層並於真空中濃縮。於正戊烷(200mL)中濕磨殘餘物，以獲得呈棕色糖漿的該標題化合物(140g，50%)。1H NMR δ(CDCl3,400MHz)6.89(dt,J=15,7.5Hz,1H),5.95(dt,J=15,1Hz,1H),3.99(dd,J=7.5,1Hz,2H),1.48(s,9H)。用2M HCl將水層酸化至pH 2，並用EtOAc(2×250mL)萃取，用水(2×500mL)沖洗合併的有機層，於Na2SO4上乾燥，於真空中蒸發，以獲得呈灰白色固體的未反應初始材料(50g)。
中間物5：(E)-4-乙醯氧基丁-2-烯酸第三丁酯
在室溫下，用乙酸鉀(186g，1.9mol)處理(E)-4-溴丁-2-烯酸第三丁酯(280g，1.27mol)之乙腈(1.2L)攪拌溶液。於60℃下攪拌該混合物4h並藉由TLC(10%乙醚-石油醚，Rf=0.4，藉由UV偵測)監測該反應。使該反應混合物冷卻至室溫，藉由過濾移除固體並用乙醚(600mL)沖洗。於減壓下濃縮濾液，並藉由急驟管柱層析於矽膠上用10%乙醚-石油醚洗脫來純化殘餘物。合併適當的溶離份並蒸發，以獲得呈淺黃色液體的該標題化合物(148g，58%產率)。1H NMR δ(CDCl3,400MHz)6.82(dt,J=15.5,5Hz,1H),5.94(dt,J=15.5,2Hz,1H),4.71(dd,J=5,2Hz,2H),2.11(s,3H),1.49(s,9H)。
中間物6：1-(3-溴苯基)-5-甲基-1H-吡唑
依序用二異丙基乙胺(234mL，1.34mol)及(E)-4-(二甲基胺基)丁-3-烯-2-酮(購自Acros)(152g，1.34mol)處理(3-溴苯基)肼鹽酸鹽(購自Amatek)(300g，1.34mol)之乙酸(2.2L)溶液，並於90℃下加熱該反應 混合物2h。於減壓下，濃縮反應混合物，將殘餘物倒入飽和NaHCO3溶液中，並用乙酸乙酯(2×1L)萃取。分離有機層並於Na2SO4上乾燥。於真空中蒸發濾液並藉由急驟矽膠(100-200網目)管柱層析使用0-4.5%乙酸乙酯-石油醚純化殘餘物。收集適當的溶離份並於減壓下濃縮，以獲得1-(3-溴苯基)-3-甲基-1H-吡唑(中間物29)(40g，13%)。用20-40%乙酸乙酯-石油醚再洗脫管柱，獲得呈黃色液體的該標題化合物(205g，64%)：1H NMR δ(CDCl3；600MHz)7.67(t,J=1.9Hz,1H),7.59(d,J=1.5Hz,1H),7.54-7.49(m,1H),7.43-7.40(m,1H),7.37-7.32(m,1H),6.21(d,J=0.7Hz,1H),2.38(s,3H)。
中間物7：(3-(5-甲基-1H-吡唑-1-基)-苯基) 酸
用硼酸三異丙酯(購自Avra)(294mL，1.265mol)緩慢處理1-(3-溴苯基)-5-甲基-1H-吡唑(中間物6)(200g，844mmol)之THF(2L)溶液，隨後冷卻至-78℃並於-78℃下歷時30分鐘添加正BuLi(844mL，2109mmol)。於-78℃下攪拌混合物2h。藉由TLC(流動相：30%EtOAc-石油醚)監測反應。將反應混合物倒入2M HCl中並於減壓下移除THF。用2M NaOH鹼化殘餘物並用乙酸乙酯(2×700mL)萃取。用2M HCl中和(pH~7)水層並用乙酸乙酯(2×1L)萃取。合併有機層，於無水Na2SO4上乾燥並於真空中蒸發，以獲得呈白色固體的標題化合物(120g，69%)。MS ES+ve m/z 203(M+H)+。
中間物8：1-(3-溴苯基)-3,5-二甲基-1H-吡唑
用濃H2SO4(1.073mL，20.13mmol)逐滴處理(3-溴苯基)肼鹽酸鹽(購自Reddy & Reddy)(45g，200mmol)及戊烷-2,4-二酮(Aldrich)(30.2g，302mmol)之DCM(225mL)溶液並於室溫下於氮氣下攪拌16h。用DCM(500mL)稀釋反應混合物，並用水(2×250mL)沖洗。於Na2SO4上乾燥有機層並於減壓下濃縮。藉由管柱層析於矽膠(100-200網目)上用5%乙酸乙酯-己烷洗脫來純化殘餘物，以獲得呈淡棕色液體的該標 題化合物(30g，59%)：1H NMR δ(CDCl3,400MHz)7.71(t,J=2Hz,1H),7.57-7.49(m,2H),7.46-7.40(t,J=8Hz,1H),6.07(s,1H),2.31(s,3H),2.18(s,3H)。
中間物9：(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基) 酸
用硼酸三異丙酯(購自Avra)(41.6mL，179mmol)處理1-(3-溴苯基)-3,5-二甲基-1H-吡唑(中間物8)(30g，119mmol)之THF(500mL)溶液，冷卻至-78℃，於氬氣下，歷時1h用2.5M正BuLi(119mL，299mmol)逐滴處理，並於-78℃下攪拌2h。用HCl水溶液(2M，150mL)淬滅反應混合物，用2M NaOH溶液中和，並用乙酸乙酯(2×300mL)萃取。於Na2SO4上乾燥合併的有機溶液並於減壓下濃縮。用戊烷及乙醚(1：1)濕磨殘餘物並藉由過濾收集固體，以獲得呈灰白色固體的該標題化合物(15g，57%)：MS ES+ve m/z 217(M+H)+。
中間物10：1-(3-溴苯基)-5-乙基-3-甲基-1H-吡唑
簡單攪拌(3-溴苯基)肼鹽酸鹽(購自Anichem)(2.0g，8.9mmol)及三乙胺(1.25mL，8.9mmol)之EtOH(20mL)懸浮液，直至均勻，及隨後添加己-3-炔-2-酮(購自MP Biomedicals或Alfa Aesar)(0.887g，8.9mmol)並將混合物加熱至50℃，持續10min。用濃HCl(12M，2.5mL)處理混合物，加熱至100℃，持續20min。於減壓下濃縮混合物，並將殘餘物分配在乙酸乙酯與碳酸氫鈉水溶液之間。用水性NaHCO3、鹽水沖洗有機溶液，乾燥(MgSO4)並於減壓下蒸發。藉由層析於矽石(330g)管柱上用0-100%DCM-環己烷的梯度(10份CV)洗脫來純化殘餘物。合併適當的溶離份並於減壓下蒸發，以獲得呈橙色油的該標題化合物(1.95g，82%)：1H NMR δ(DMSO-d 6,400MHz)7.67(t,J=2Hz,1H),7.58(dt,J=8,2Hz,1H),7.49(m,1H),7.47-7.42(m,1H),6.11(s,1H),2.66(q,J=7.5Hz,2H),2.19(s,3H),1.13(t,J=7.5Hz,3H)。
中間物11：(3-(5-乙基-3-甲基-1H-吡唑-1-基)苯基) 酸
於-78℃下，利用正BuLi(1.6M，13.2mL)逐滴處理1-(3-溴苯基)-5-乙基-3-甲基-1H-吡唑(中間物10)(2.795g，10.54mmol)及硼酸三異丙酯(購自Aldrich)(2.4g，12.7mmol)之混合物並使溫度保持低於-60℃。使該混合物過夜升溫至室溫。隨後用2M HCl溶液(11mL，至pH 7)淬滅混合物並用乙酸乙酯分配。用鹽水沖洗有機溶液並乾燥(MgSO4)。於減壓下濃縮濾液，並用環己烷-石油醚(40-60°)濕磨殘餘油，直至獲得固體。藉由過濾收集固體，依序用石油醚、少量水沖洗，空氣乾燥，及隨後於60℃真空中乾燥，以獲得呈黃色固體的標題化合物(623mg，26%)：MS ES+ve m/z 231(M+H)+。
中間物12：(R,E)-4-(3-(2-(1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁-2-烯酸第三丁酯
於氮氣下，攪拌(E)-4-乙醯氧基丁-2-烯酸第三丁酯(中間物5)(14.20g，70.9mmol)及1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)[Pd(dppf)Cl2](4.72g，6.45mmol)之DCM(100mL)混合物15min，接著添加(R)-2-(2-(吡咯啶-3-基)乙基)-1,8-萘啶二鹽酸鹽(中間物3)(17g，57mmol)之二異丙基乙胺(56.3mL，322mmol)及DCM(200mL)溶液。獲得澄清紅色溶液，於氮氣下攪拌24小時。將混合物分配在DCM與水(3×170mL)之間。使有機相穿過相分離管柱並於減壓下濃縮濾液。將殘餘油(27g)載入DCM中至胺基丙基管柱(900g)並藉由層析於CombiFlash Companion XL上使用0至100%乙酸乙酯-環己烷的梯度(10份管柱體積)洗脫來純化。合併適當的溶離份並於真空中蒸發，以獲得呈棕色油的該標題化合物(17.62g，85%)，其於靜置時固化。LCMS(系統A)RT=1.05min，100%；ES+ve m/z 368(M+H)+。
中間物13：4-((R)-3-(2-(1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)丁酸第三丁酯
用(R,E)-4-(3-(2-(1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁-2-烯酸第三 丁酯(中間物12)(40g，103mmol)之1,4-二噁烷(300mL)溶液處理3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)酸(中間物9)(44.7g，207mmol)之KOH溶液(3.8M，54.4mL，207mmol)並歷時5min使用真空及氮氣除氣若干次。依序添加氯(1,5-環辛二烯)銠(I)二聚體(2.55g，5.17mmol)及(R)-BINAP(6.44g，10.3mmol)，並再除氣混合物5min。於90℃下加熱溶液60min。冷卻後，將反應混合物分配在DCM(250mL)與水(200mL)之間。用DCM(200mL)再萃取水相並於真空中蒸發合併的有機相。將殘餘油(95g)溶解於DCM中並藉由層析於胺基丙基管柱KPNH(900g)上用0-50%乙酸乙酯-環己烷的梯度(10份CV)洗脫來純化。合併適當的溶離份並於真空中蒸發，以獲得棕色油(39g)。於Chiralpak AD-H管柱(250mm×4.6mm)上進行分析型掌性HPLC，用20% EtOH(包含0.2%異丙胺)-庚烷等濃度洗脫，流率=1.0mL/min，於215nm下偵測，指示該油係兩種非對映異構體之混合物：峰1 RT=7.87min，90.4%；峰2 RT=9.78min，9.6%。藉由掌性製備型HPLC於Chiralpak AD管柱(50mm×200mm)上用20%乙醇(包含0.2%異丙胺)-庚烷洗脫(流率=50mL/min)來分離該混合物，在240nm下偵測，收集該主要組分之溶離份，RT=11-16min。於減壓下蒸發合併的溶離份，以獲得呈棕色油之該標題化合物之主要異構體(異構體1)(25.1g，45%)：LCMS(系統A)RT=1.25min，ES+ve m/z 540(M+H)+；於Chiralpak AD-H管柱上進行分析型掌性HPLC，RT=7.87min，>99.5%；1H NMR(CDCl3；600MHz)9.07(dd,J=4.2,2.0Hz,1H),8.15(dd,J=8.0,1.9Hz,1H),8.08(d,J=8.4Hz,1H),7.43(dd,J=8.0,4.3Hz,1H),7.37(d,J=8.3Hz,1H),7.37-7.33(m,1H),7.27(d,J=1.1Hz,1H),7.27-7.25(m,1H),7.21(d,J=7.7Hz,1H),5.98(s,1H),3.31(d,J=5.3Hz,1H),3.10-2.95(m,2H),2.85(dd,J=15.4,5.7Hz,1H),2.84-2.79(m,1H),2.78-2.71(m,1H),2.75-2.67(m,1H), 2.55-2.47(m,1H),2.48-2.41(m,1H),2.43-2.35(m,1H),2.30(s,3H),2.27(s,3H),2.26-2.18(m,1H),2.23-2.13(m,1H),2.02-1.95(m,1H),1.98-1.91(m,2H),1.50-1.42(m,1H),1.30(s,9H)。合併包含次要組分之溶離份(RT=19-25min)並於減壓下濃縮，以獲得呈棕色油之該標題化合物異構體2(2.03g,4%)：LCMS(系統A)RT=1.25min，ES+ve m/z 540(M+H)+；於Chiralpak AD-H管柱上進行分析型掌性HPLC，RT=9.78min，>99.5%。
中間物14：3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸第三丁酯
於氫氣氣氛及室溫下，於10%Pd/C(1.58g)上，快速攪拌4-((R)-3-(2-(1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)丁酸第三丁酯(異構體1)(中間物13)(8.0g，14.8mmol)之乙醇(200mL)溶液過夜。該觸媒係藉由濾過矽藻土來移除並用乙醇沖洗。於減壓下蒸發合併的濾液及沖洗物，以獲得呈棕色油的該標題化合物(7.19g，89%)。LCMS(系統A)RT=1.44min，ES+ve m/z 544(M+H)+。
中間物15：4-((R)-3-(2-(1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(5-甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)丁酸第三丁酯
用(R,E)-4-(3-(2-(1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁-2-烯酸第三丁酯(中間物12)(11.4g，27.9mmol)之1,4-二噁烷(196mL)溶液處理(3-(5-甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)酸(中間物7)(12.53g，55.8mmol)之KOH水溶液(3.8M，14.69mL，55.8mmol)並使用真空除氣該溶液若干次及氮氣5分鐘。將氯(1,5-環辛二烯)銠(I)二聚體(0.688g，1.396mmol)及(R)-BINAP(1.738g，2.79mmol)添加至混合物中並再除氣該溶液5min。於90℃下加熱該反應混合物60min。冷卻後，於真空中蒸發反應混合物並將該殘餘物分配在DCM與水之間。用DCM進一步 萃取水相並於真空中蒸發合併的有機溶液。將殘餘油(21.53g)溶解於DCM中並藉由層析於CombiFlash Companion XL胺基丙基管柱(375g)上用0至100%乙酸乙酯-環己烷的梯度(12份管柱體積)洗脫來純化。合併適當的溶離份並於真空中蒸發，以獲得棕色油(13.56g)。於Chiralpak OD-H管柱(250mm×4.6mm)上進行分析型掌性HPLC，用20% EtOH-庚烷等濃度洗脫，流率=1.0mL/min，於215nm下偵測，指示該油係兩種非對映異構體的混合物：峰1 RT=15.1min，8.2%；峰2 RT=22.6min，91.8%。藉由掌性製備型HPLC於Chiralpak AD管柱(50mm×200mm)上用30%乙醇-庚烷洗脫(流率50mL/min)來分離該混合物，在215nm下偵測，收集該主要組分之溶離份，RT=37-50min。於減壓下蒸發合併的溶離份，並於胺基丙基管柱(375g)上用0-100%乙酸乙酯-環己烷的梯度(12份管柱體積)洗脫來進一步純化殘餘物。合併適當的溶離份並於真空中蒸發，以獲得呈棕色油之該標題化合物之異構體1(9.06g，62%)：LCMS(系統A)RT=1.20min，97%，ES+ve m/z 526(M+H)+。於減壓下蒸發其他適當的溶離份，以獲得該標題化合物之次要異構體(異構體2)(1.83g，12%)：LCMS(系統A)RT=1.21min，ES+ve m/z 526(M+H)+。
中間物16：3-(3-(5-甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸第三丁酯
於室溫下，於10% Pd/C(1.834g)上，氫化4-((R)-3-(2-(1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(5-甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)丁酸第三丁酯(異構體1)(中間物15)(9.06g，17.2mmol)之乙醇(250mL)溶液達48h。該觸媒係藉由濾過矽藻土來移除並用乙醇沖洗。於真空中蒸發合併的濾液及沖洗物，以獲得呈黃色油的該標題化合物(7.68g，84%)：LCMS(系統A)RT=1.40min，95%，ES+ve m/z 530(M+H)+。
中間物17：4-((R)-3-(2-(1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3- (5-乙基-3-甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)丁酸第三丁酯
在95℃下，加熱(R,E)-4-(3-(2-(1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁-2-烯酸第三丁酯(中間物12)(360mg，0.980mmol)、(3-(5-乙基-3-甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)酸(中間物10)(676mg，2.94mmol)、KOH水溶液(3.8M，0.516mL，1.96mmol)、氯(1,5-環辛二烯)銠(I)二聚體(48.3mg，0.098mmol)、(R)-BINAP(122mg，0.196mmol)之1,4-二噁烷(15mL)混合物達3h。於真空中濃縮反應混合物並分配在DCM(25mL)與水(25mL)之間。分離水層並再用DCM(25mL)萃取並於真空中濃縮合併的有機溶液。將殘餘物溶解於DCM中並藉由層析於矽石管柱(50g)上用0-25% MeOH-DCM洗脫來純化。合併適當的溶離份並於真空中蒸發，以獲得呈橙色油的該標題化合物(158mg，29%)：LCMS(系統A)RT=1.31min，81%，ES+ve m/z 554(M+H)+；分析型掌性HPLC Chiralpak AD(250mm×4.6mm)，15% EtOH-庚烷，等濃度，流率1mL/min，於215nm下偵測。RT=10.5min，92.6%(主要異構體)及14.8min，7.4%(次要異構體)；1H NMR δ(CDCl3；600MHz)9.10(dd,J=4.2,2.0Hz,1H),8.17(dd,J=8.1,2.2Hz,1H),8.11(d,J=8.4Hz,1H),7.46(dd,J=8.1,4.4Hz,1H),7.41-7.34(m,2H),7.31-7.21(m,3H),6.03(s,1H),3.74(q,J=7.0Hz,1H),3.33(br.S.,1H),3.11-2.97(m,2H),2.91-2.70(m,4H),2.63(q,J=7.7Hz,2H),2.56-2.38(m,3H),2.33(s,3H),2.27-2.14(m,2H),2.06-1.92(m,3H),1.51-1.45(m,1H),1.36-1.31(m,9H),1.19(t,J=7.5Hz,3H)。
中間物18：3-(3-(5-乙基-3-甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸第三丁酯
於乙醇(10mL)中，於10% Pd/C(30mg)上，氫化4-((R)-3-(2-(1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(5-乙基-3-甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)丁酸第三丁酯(中間物17)(158mg，0.285mmol)達18h。該觸媒係 藉由濾過矽藻土(10g)來移除，並用乙醇沖洗。於真空中蒸發合併的濾液及沖洗物，以獲得呈橙色油的該標題化合物(130mg，82%)：LCMS(系統A)RT=1.49min，ES+ve m/z 558(M+H)+。
中間物19：4-((R)-3-(2-(1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(1H-吡唑-1-基)苯基)丁酸第三丁酯
在95℃下，加熱(R,E)-4-(3-(2-(1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁-2-烯酸第三丁酯(中間物12)(333mg，0.906mmol)、(3-(1H-吡唑-1-基)苯基)酸(購自ABCR GmbH)(511mg，2.72mmol)、KOH水溶液(3.8M，0.477mL，1.81mmol)、氯(1,5-環辛二烯)銠(I)二聚體(44.7mg，0.091mmol)、(R)-BINAP(113mg，0.196mmol)之1,4-二噁烷(15mL)混合物3h。於真空中濃縮反應混合物並分配在DCM(25mL)與水(25mL)之間。分離水層並再用DCM(25mL)萃取，並於真空中濃縮合併的有機溶液。將殘餘物溶解在DCM中並藉由層析於矽石管柱(50g)上用0-25% MeOH-DCM洗脫來純化。合併適當的溶離份並於真空中蒸發，以獲得呈橙色油的該標題化合物(128mg，28%)：LCMS(系統A)：RT=1.22min,ES+ve m/z 512(M+H)+；分析型掌性HPLC Chiralpak AD(250mm×4.6mm)，用包含0.1%異丙胺的30% EtOH-庚烷等濃度洗脫，流率1mL/min，於235nm下偵測：RT=7.05min，95%(主要異構體)及12.2min，5%(次要異構體)。
中間物20：3-(3-(1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸第三丁酯
於乙醇(10mL)中，於10% Pd/C(53mg)上，氫化4-((R)-3-(2-(1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(1H-吡唑-1-基)苯基)丁酸第三丁酯(中間物19)(128mg，0.25mmol)達18h。該觸媒係藉由濾過矽藻土(10g)來移除，並用乙醇沖洗。於真空中蒸發合併的濾液及沖洗物，以獲得呈橙色油的該標題化合物(100mg，78%)：LCMS(系統A)RT= 1.45min,ES+ve m/z 516(M+H)+。
中間物21：1-(3-溴苯基)-3,5-二乙基-1H-吡唑
將庚烷-3,5-二酮(購自Aldrich)(3.60g，28.1mmol)、(3-溴苯基)肼(購自Anichem Inc)(3.50g，18.7mmol)溶解於DCM(20mL)中。添加濃H2SO4(18M，0.100mL，1.8mmol)並於室溫下攪拌反應18h。於真空中濃縮反應混合物並分配在DCM(25mL)與水(25mL)之間，分離水相並再用DCM(25mL)萃取。於真空中濃縮合併的有機相，以獲得標題化合物(3.64g，70%)：LCMS(系統A)：RT=1.31min，ES+ve m/z 279/281(M+H)+。
中間物22：(3-(3,5-二乙基-1H-吡唑-1-基)苯基) 酸
將1-(3-溴苯基)-3,5-二乙基-1H-吡唑(中間物21)(3.637g，13.03mmol)、2-二環己基膦基-2',4',6'-三異丙基聯苯(X-PHOS)(購自Aldrich)(298mg，0.625mmol)、叁(二亞苄基丙酮)二鈀(購自Aldrich)(179mg，0.195mmol)、乙酸鉀(3.20g，32.6mmol)及雙(頻哪醇根基)二硼(購自Aldrich)(3.64g，14.3mmol)之1,4-二噁烷(75mL)混合物加熱至110℃，持續4h。將水及乙酸乙酯添加至反應混合物並分離各層。用EtOAc進一步萃取水相兩次。使合併的有機萃取物穿過疏水性玻璃料並於真空中蒸發濾液。將殘餘物溶解在乙腈中並藉由反相層析(100g)用包含0.1%甲酸的25-85%乙腈-水的梯度(10份CV)洗脫來純化。合併適當的溶離份並於真空中蒸發，以獲得該標題化合物(1.055g，33%)：LCMS(系統A)RT=0.86min，ES+ve m/z 245(M+H)+。
中間物23：4-((R)-3-(2-(1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(3,5-二乙基-1H-吡唑-1-基)苯基)丁酸第三丁酯
在95℃下，加熱(R,E)-4-(3-(2-(1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁-2-烯酸第三丁酯(中間物12)(210mg，0.571mmol)、(3-(3,5-二乙基-1H-吡唑-1-基)苯基)酸(中間物22)(283mg，1.16mmol)、KOH水溶 液(3.8M，0.3mL，1.14mmol)、氯(1,5-環辛二烯)銠(I)二聚體(14.1mg，0.03mmol)、(R)-BINAP(35.6mg，0.06mmol)之1,4-二噁烷(5mL)混合物4h。於真空中濃縮反應混合物並分配在EtOAc(100mL)與水(100mL)之間。分離水層並再用EtOAc(100mL)萃取，並於真空中濃縮合併的有機溶液。藉由層析於胺基丙基SPE管柱(50g)上用0-100% EtOAc-環己烷洗脫1h來純化殘餘物。合併適當的溶離份並於真空中蒸發，以獲得呈橙色油的該標題化合物(130mg，40%)：LCMS(系統C)：RT=0.97min,ES+ve m/z 568(M+H)+；分析型掌性HPLC Chiralpak AD(250mm×4.6mm)，用包含0.1%異丙胺的10% EtOH-庚烷等濃度洗脫，流率1mL/min，在215nm下偵測：RT=10.5min，86%(主要異構體)及13.7min，13%(次要異構體)。藉由製備型掌性HPLC於Chiralpak AD(250mm×30mm)上用包含0.2%異丙胺的10% EtOH-庚烷等濃度洗脫(流率30mL/min)分離該等非對映異構體，並於215nm下偵測。合併適當的溶離份並於減壓下蒸發，以獲得該標題化合物之主要異構體(異構體1)(53mg，41%)：LCMS(系統C)RT=0.95min，ES+ve m/z 568(M+H)+；1H NMR δ(CDCl3；400MHz)9.08(dd,J=4,2Hz,1H),8.15(dd,J=8,2Hz,1H),8.09(d,J=8Hz,1H),7.44(dd,J=8,4Hz,1H),7.38(d,J=8Hz,1H),7.37-7.34(m,1H),7.27-7.24(m,2H),7.22(br.d,J=8Hz,1H),6.05(s,1H),3.37-3.25(br,1H),3.09-2.97(m,2H),2.86(dd,J=15,5.5Hz,1H),2.83-2.79(m,1H),2.78-2.71(m,1H),2.70(q,J=7Hz,2H),2.75-2.67(m,1H),2.62(q,J=7Hz,2H),2.55-2.35(m,3H),2.30-2.13(m,2H),2.05-1.92(m,2H),1.72-1.58(m,1H),1.50-1.42(m,1H),1.31(s,9H),1.29(t,J=7Hz,3H),1.19(t,J=7Hz,3H)。蒸發其他適當的溶離份，獲得該標題化合物之次要非對映異構體(異構體2)(5mg，4%)：LCMS(系統C)RT=0.96min，ES+ve m/z 568(M+H)+。
中間物24：3-(3-(3,5-二乙基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸第三丁酯
於乙醇(10mL)中，於10% Pd/C(27mg)上，氫化4-((R)-3-(2-(1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(3,5-二乙基-1H-吡唑-1-基)苯基)丁酸第三丁酯(異構體1)(中間物23)(144mg，0.25mmol)達18h。該觸媒係藉由濾過矽藻土(10g)來移除，並用乙醇沖洗。於真空中蒸發合併的濾液及沖洗物，以獲得呈橙色油的該標題化合物(116mg，80%)：LCMS(系統A)RT=1.61min，ES+ve m/z 572(M+H)+。
中間物25：1-(3-溴苯基)-4-氟-3,5-二甲基-1H-吡唑
將3-氟戊烷-2,4-二酮(購自Fluorochem)(2.84g，24.1mmol)、(3-溴苯基)肼(購自Anichem Inc)(3.0g，16mmol)溶解於DCM(20mL)中。添加濃H2SO4(0.171mL，3.21mmol)並於室溫下攪拌反應18h。於真空中濃縮反應混合物並分配在DCM(25mL)與水(25mL)之間，分離水相並再用DCM(25mL)萃取。隨後，於真空中濃縮合併的有機相，以獲得該標題化合物(2.61g，60%)：LCMS(系統A)RT=1.22min，ES+ve m/z 269/271(M+H)+。
中間物26：(3-(4-氟-3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基) 酸
將1-(3-溴苯基)-4-氟-3,5-二甲基-1H-吡唑(中間物25)(2.61g，9.70mmol)、2-二環己基膦基-2',4',6'-三異丙基聯苯(X-PHOS)(購自Aldrich)(222mg，0.466mmol)、叁(二亞苄基丙酮)二鈀(購自Aldrich)(133mg，0.146mmol)、乙酸鉀(2.38g，24.3mmol)及雙(頻哪醇根基)二硼(購自Aldrich)(2.71g，10.67mmol)之1,4-二噁烷(75mL)混合物加熱至110℃，持續4h。將水及乙酸乙酯添加至反應混合物並分離各層。用EtOAc進一步萃取水層。使合併的有機萃取物穿過疏水玻璃料並於真空中蒸發濾液。將殘餘物溶解於乙腈中並藉由反相層析(100g管柱)使用包含0.1%甲酸的25-85%乙腈-水的梯度(10份CV)洗 脫來純化。合併適當的溶離份並於真空中蒸發，以獲得該標題化合物(400mg，18%)：LCMS(系統A)RT=0.77min，ES+ve m/z 235(M+H)+。
中間物27：4-((R)-3-(2-(1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(4-氟-3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)丁酸第三丁酯
於氮氣下，於環境溫度下，攪拌(3-(4-氟-3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)酸(中間物26)(382mg，1.63mmol)、環辛二烯氯化銠(I)二聚體(121mg，0.245mmol)、KOH水溶液(3.8M，0.430mL，1.63mmol)之1,4-二噁烷(6mL)之溶液達5分鐘，接著添加(R,E)-4-(3-(2-(1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁-2-烯酸第三丁酯(中間物12)(300mg，0.82mmol)。在95℃下，加熱反應混合物1h，及隨後分配在水(20mL)與EtOAc(20mL)之間。於減壓下濃縮有機層，溶解於MeOH(5mL)中並裝載至10g胺基丙基SPE管柱上，該管柱經MeOH(1份CV)預處理。用MeOH(3份CV)沖洗該管柱並於減壓下濃縮溶離份。藉由反相層析於C18(30g)管柱上用50-80%乙腈(包含0.1%氨)之10mM碳酸氫銨水溶液洗脫來純化殘餘物(385mg)。於減壓下濃縮適當的溶離份，以獲得呈非對映異構體之混合物形式的該標題化合物(70mg，15%)：LCMS(系統A)RT=1.34min，ES+ve m/z 558(M+H)+。
中間物28：3-(3-(4-氟-3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸第三丁酯
於乙醇(4mL)中，於10%Pd/C(13.4mg)上，氫化4-((R)-3-(2-(1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(4-氟-3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)丁酸第三丁酯(中間物27)(70mg，0.063mmol)達4h。該觸媒係藉由濾過矽藻土來移除，並用乙酸乙酯沖洗。於減壓下濃縮合併的濾液及沖洗物，以獲得呈黃色油的該標題化合物(70mg，35%)：LCMS(系統A)RT=1.50min，ES+ve m/z 562(M+H)+。
中間物29：1-(3-溴苯基)-3-甲基-1H-吡唑
用濃HCl(0.680mL，22.4mmol)處理丁-3-炔-2-酮(1.75mL，22.4mmol)、(3-溴苯基)肼鹽酸鹽(5.0g，22.4mmol)之MeOH(20mL)溶液並於120℃下，於密封微波小瓶中加熱該反應2min。於真空中濃縮反應混合物並分配在DCM(25mL)與水(25mL)之間，分離水層並再用DCM(25mL)萃取。濃縮合併的有機溶液並藉由層析於矽石SPE管柱(100g)上用0-100% DCM-環己烷的梯度洗脫來純化。合併適當的溶離份並於真空中蒸發，以獲得該標題化合物(2.39g，45%)：LCMS(系統A)RT=1.15min，ES+ve m/z 237/239(M+H)+；1H NMR δ(CDCl3；600MHz)7.85(t,J=2.0Hz,1H),7.75(d,J=2.4Hz,1H),7.54(ddd,J=8.2,2.1,0.9Hz,1H),7.35-7.31(m,1H),7.26-7.21(m,1H),6.23(d,J=2.4Hz,1H),2.35(s,3H)，及其區域異構體1-(3-溴苯基)-5-甲基-1H-吡唑(中間物6)(1.7g，32%)：LCMS(系統A)RT=1.05min，ES+ve m/z 237/239(M+H)+。
中間物30：(3-(3-甲基-1H-吡唑-1-基)-苯基) 酸
以與針對中間物26之製備所述方法類似的方法來製備，自中間物29(2.39g，10.1mmol)開始，以提供該標題化合物(2.23g，100%)：LCMS(系統A)RT=0.60min，ES+ve m/z 203(M+H)+。
中間物31：4-((R)-3-(2-(1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(3-甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)丁酸第三丁酯
以與針對中間物27之製備所述方法類似的方法來製備，自中間物12(336mg，0.914mmol)及中間物30(554mg，2.74mmol)開始，以提供該標題化合物(212mg，44%)：LCMS(系統A)RT=1.26min，ES+ve m/z 526(M+H)+；分析型掌性HPLC Chiralcel OD(250mm×4.6mm)，用40%EtOH-庚烷等濃度洗脫，流率1mL/min，於215nm下偵測：RT=10.1min，16.7%(次要異構體)及14.1min，83.3%(主要異 構體)。
中間物32：3-(3-(3-甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸第三丁酯
於Pd/C(42.9mg)上，氫化4-((R)-3-(2-(1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(3-甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)丁酸第三丁酯(中間物31)(212mg，0.403mmol)之EtOH(10mL)溶液達18h。該觸媒係藉由濾過矽藻土來收集，並用EtOH沖洗。於真空中濃縮合併的濾液及沖洗物，以獲得呈橙色油的該標題化合物(171mg，80%)：LCMS(系統A)：RT=1.46min，ES+ve m/z 530(M+H)+。
實例之製法 實例1：3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸
用濃HCl(12M，0.077mL，0.92mmol)處理3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸第三丁酯(中間物14)(100mg，0.184mmol)之2-甲基THF(0.5mL)溶液並於40℃下攪拌2h。於真空中蒸發溶劑並將殘餘油溶解在乙醇(2mL)中並施加至SCX-2離子交換管柱(5g)中，用乙醇(2份CV)及隨後2M氨MeOH溶液(2份CV)洗脫。合併氨性溶離份並於真空中蒸發，以獲得呈灰白色固體的該標題化合物(79mg，88%)：LCMS(系統A)RT=0.86min，100%，ES+ve m/z 488(M+H)+；1H NMR δ(CDCl3；600MHz)：7.42-7.37(m,1H),7.31(d,J=1.5Hz,1H),7.29(d,J=0.9 Hz,1H),7.23(d,J=7.7Hz,1H),7.21(d,J=7.3Hz,1H),6.31(d,J=7.3Hz,1H),5.99(s,1H),3.55(br.s.,1H),3.60-3.52(m,1H),3.45(t,J=5.4Hz,2H),3.27(t,J=10.6Hz,1H),3.09(br.s.,1H),2.93-2.86(m,1H),2.82(d,J=10.1Hz,1H),2.86-2.75(m,2H),2.72(t,J=6.2Hz,1H),2.74-2.67(m,2H),2.75(d,J=9.0Hz,1H),2.61-2.50(m,1H),2.31(s,3H),2.29(s,3H),2.33-2.26(m,1H),2.24-2.11(m,1H),1.94-1.86(m,2H),1.94-1.84(m,1H),1.78-1.66(m,1H),1.65-1.51(m,1H)。
實例1係藉由下文所述方法鑑定為(S)-3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸。
實例2：3-(3-(5-甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸
用濃HCl(12M，3.96mL，47.6mmol)處理3-(3-(5-甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸第三丁酯(中間物16)(2.80g，5.29mmol)之2-甲基THF(15mL)溶液並在40℃下攪拌2h。於真空中蒸發溶劑並將殘餘物(3.8g)溶解於乙醇(2mL)中並藉由離子交換層析於SCX-2管柱(70g)上用乙醇(1份CV) 及隨後2M氨MeOH溶液(1份CV)洗脫來純化。於真空中蒸發氨性溶離份並將殘餘物溶解於DCM中並於胺基丙基管柱(100g)上用0-25% MeOH-DCM的梯度洗脫30分鐘進一步純化。合併適當的溶離份並於真空中蒸發，以獲得呈白色發泡體的該標題化合物(2.01g，80%)：LCMS(系統A)RT=0.83min，100%，ES+ve m/z 474(M+H)+；1H NMR δ(DMSO-d 6；600MHz)7.55(d,J=1.5Hz,1H),7.47-7.41(m,1H),7.38(s,1H),7.34(d,J=8.1Hz,1H),7.30(d,J=7.7Hz,1H),7.02(d,J=7.0Hz,1H),6.32-6.22(m,3H),3.35-3.26(m,2H),3.26-3.20(m,2H),2.92-2.75(m,3H),2.73-2.65(m,1H),2.63-2.52(m,4H),2.47(dd,J=15.8,7.3Hz,1H),2.41(t,J=7.7Hz,2H),2.33(s,3H),2.28(dd,J=9.0,7.5Hz,1H),2.10-1.96(m,1H),1.94-1.85(m,1H),1.79-1.71(m,2H),1.68-1.54(m,2H),1.34(dd,J=12.3,7.9Hz,1H)。
實例3：3-(3-(5-乙基-3-甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸
將3-(3-(5-乙基-3-甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸第三丁酯(中間物18)(130mg，0.233mmol)溶解於1,4-二噁烷(5mL)中，添加濃HCl(37%，0.038mL，0.466mmol)，並於室溫下攪拌反應混合物18h。於真空中濃縮混合物並將樣品溶解於DMSO(1mL)中並藉由質量導向之自動製備型HPLC(方法B)於Xbridge管柱上使用乙腈-水及碳酸銨緩衝劑來純化。於Radley氏放氣裝置中於氮物流下移除溶劑，以獲得該標題化合物(20mg，17%)：LCMS(系統A)RT=0.90min，95%，ES+ve m/z 502(M+H)+；1H NMR δ(CD3OD；400MHz)7.48(t,J=8Hz,1H),7.39- 7.32(m,2H),7.30(br d,J=8Hz,1H),7.14(d,J=7.5Hz,1H),6.38(d,J=7.5Hz,1H),6.10(s,1H),3.62-3.45(m,2H),3.39-3.32(m,4H),3.25(dd,J=12,3Hz,1H),3.08(br.t,J=9Hz,1H),2.86(dd,J=16,10Hz,1H),2.71-2.53(m,7H),2.38-2.26(m,1H),2.25(s,3H),2.24-2.16(m,1H),1.90-1.63(m,5H),1.16(t,J=7.5Hz,3H)。
實例4：3-(3-(1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸
將3-(3-(1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸第三丁酯(中間物20)(100mg，0.19mmol)溶解於1,4-二噁烷(5mL)中，添加濃HCl(37%，0.032mL，0.39mmol)，並於室溫下攪拌反應混合物18h。於真空中濃縮混合物並將樣品溶解於DMSO-MeOH(1：1；1mL)中，並藉由質量導向之自動製備型HPLC(方法A)於Xbridge管柱上使用乙腈-水及碳酸銨緩衝劑來純化。於Radley氏放氣裝置中於氮物流下移除溶劑，以獲得該標題化合物(10mg，11%)：LCMS(系統A)RT=0.82min，98.6%，ES+ve m/z 460(M+H)+；1H NMR δ(CD3OD；400MHz)8.23(d,J=2.5Hz,1H),7.72(br.d,J=2Hz,1H),7.68(m,1H),7.63(br.d,J=8Hz,1H),7.46(t,J=8Hz,1H),7.25(br.d,J=7.5Hz,1H),7.15(d,J=7.5Hz,1H),6.52(m,1H),6.38(d,J=7.5Hz,1H),3.64-3.45(m,2H),3.39-3.32(m,4H),3.26(被CHD2OD遮蓋，1H),3.15-3.06(m,1H),2.88(dd,J=16.5,10Hz,1H),2.71-2.61(m,3H),2.56(t,J=8Hz,2H),2.40-2.28(m,1H),2.26-2.16(m,1H),1.90-1.61(m,5H)。
實例5：3-(3-(3,5-二乙基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2- (5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸
將3-(3-(3,5-二乙基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸第三丁酯(116mg，0.203mmol)溶解於1,4-二噁烷(5mL)中且隨後用濃HCl(0.033mL，0.406mmol)處理並於室溫下攪拌反應18h。於真空中濃縮反應並將殘餘物溶解於DMSO(1mL)中，並藉由質量導向之自動製備型HPLC(方法A)於Xbridge管柱上使用乙腈-水及碳酸銨緩衝劑來純化。於Radleys放氣裝置中於氮物流下乾燥溶劑，以獲得該標題化合物(27mg，26%)：LCMS(系統A)RT=0.94min，ES+ve m/z 516(M+H)+：1H NMR δ(CD3OD；600MHz)7.49(t,J=8.0Hz,1H),7.37(d,J=8.0Hz,1H),7.34(br.s,1H),7.31(br.d,J=8.0Hz,1H),7.14(d,J=7.3Hz,1H),6.38(d,J=7.3Hz,1H),6.14(s,1H),3.57(dd,J=12.5,9.4Hz,1H),3.53-3.47(m,1H),3.39-3.33(m,3H),3.32-3.29(m,2H),3.25(dd,J=12.6,3.6Hz,1H),3.10-3.01(m,1H),2.86(dd,J=16.4,10.4Hz,1H),2.68(t,J=6.2Hz,2H),2.67-2.61(m,1H),2.66-2.58(m,4H),2.56(t,J=7.8Hz,2H),2.38-2.28(m,1H),2.21(d,J=6.8Hz,1H),1.88-1.83(m,2H),1.83-1.72(m,2H),1.67(dd,J=13.0,8.4Hz,1H),1.25(t,J=7.7Hz,3H),1.17(t,J=7.6Hz,3H)。
實例6：3-(3-(4-氟-3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸
將3-(3-(4-氟-3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸第三丁酯(中間物28)(70mg，0.125mmol)溶解於乙腈(1mL)中並添加4M HCl之二噁烷(0.093mL，0.37mmol)溶液。於環境溫度下攪拌反應混合物2h。此刻的LCMS顯示對產物的極低轉化率及添加更多4M HCl之二噁烷(0.093mL，0.37mmol)並攪拌反應混合物另外8h。於減壓下濃縮反應混合物，溶解於MeOH-DMSO(1：1；2mL)中並藉由MDAP(方法A)純化。合併適當的溶離份並於放氣單元中於氮物流下濃縮，以獲得呈橙色膠的該標題化合物(30mg，48%)：LCMS(系統A)RT=0.90min，98.5%，ES+ve m/z 506(M+H)+；1H NMR δ(CD3OD；400MHz)7.49(t,J=8Hz,1H),7.40-7.31(m,3H),7.13(t,J=8Hz,1H),6.38(m,1H),3.61-3.46(m,3H),3.44-3.32(m,4H),3.28-3.21(m,2H),2.90-2.80(m,2H),2.74-2.50(m,5H),2.41-2.28(m,1H),2.25(d,J=9Hz,6H),2.22-2.14(m,1H),1.90-1.66(m,4H)。
實例7：3-(3-(3-甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸
將3-(3-(3-甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸第三丁酯(中間物32)(92mg，0.17 mmol)溶解於1,4-二噁烷(5mL)中且隨後用濃HCl(0.029mL，0.35mmol)處理並於室溫下攪拌反應18h。於真空中濃縮反應並將殘餘物溶解於DMSO(1mL)中，並藉由質量導向之自動製備型HPLC(方法A)純化。合併適當的溶離份並於Radleys放氣裝置中於氮氣流下蒸發，以獲得該標題化合物(18mg，22%)：LCMS(系統A)RT=0.84min，ES+ve m/z 474(M+H)+；1H NMR δ(CD3OD；400MHz)9.15(d,J=2.5Hz,1H),8.46(t,J=1.5Hz,1H),8.40(dd,J=8,1.5Hz,1H),8.16(t,J=8Hz,1H),7.93(br d,J=8Hz,1H),7.81(d,J=7.5Hz,1H),7.11(d,J=2Hz,1H),7.09-7.06(m,1H),7.04(d,J=7.5Hz,1H),4.11-4.00(m,3H),3.72-3.57(m,3H),3.54-3.46(m,1H),3.45-3.32(m,4H),3.29-3.16(m,3H),3.15-3.09(m,1),3.07(s,3H),2.87-2.77(m,1H),2.75-2.65(m,1H),2.58-2.50(m,2H),2.46-2.35(m,2H),2.19-2.09(m,1H)。
實例8：(S)-3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸鹽酸鹽
藉由製備型掌性HPLC進一步純化3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸(實例1)(37.89g，78mmol)。將其溶解於乙醇(4mL)中並用庚烷(6mL)稀釋溶液。使該溶液靜置30分鐘且隨後過濾。將濾液注射(每次注射1g)至Chiralpak AD管柱(20微米，75mm×250mm)上並用30%乙醇(包含0.1%異丙胺)-70%庚烷(包含0.1%異丙胺)等濃度洗脫。合併適當的溶離份並於真空中蒸發，以獲得呈灰白色發泡體的純實例1(31.87g)。以類似方式純化各種其他批料並大規模製備實例8：(S)-3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸鹽酸鹽
實例8之大規模製法係概述於以下流程圖中：
中間物1 (R)-3-(碘甲基)吡咯啶-1-羧酸第三丁酯階段1及2(替代方法)
於氮氣下，向反應器添加2-甲基四氫呋喃(145kg)、N,N-二異丙基乙胺(16.6kg)及(R)-3-(羥甲基)吡咯啶-1-羧酸第三丁酯(16.5kg)。使該批料冷卻至0-10℃並依序添加甲磺醯氯(11.6kg)及2-甲基四氫呋喃(8kg)，並攪拌反應約5小時。再依序添加甲磺醯氯(2.4kg)及2-甲基四氫呋喃(5.2kg)，並攪拌反應約4.5小時。用10%氫氧化鈉水溶液(80kg)、水(85kg)、1N氯化銨水溶液(101kg)、水(100kg)及25%NaCl水溶液(100kg)連續沖洗反應混合物。將有機相於減壓下蒸餾至2-3體 積並用乙醇(78kg)稀釋。將混合物於減壓下蒸餾至2-3體積並用乙醇(72kg)稀釋。將混合物於減壓下蒸餾至2-3體積並用乙醇(77kg)稀釋。將乙醇(72kg)及碘化鉀(70kg)添加至該混合物，並將該反應混合物加熱至70-80℃，持續16小時，接著冷卻至40-50℃。將該反應混合物加熱至70-80℃，持續8小時，接著冷卻至40-50℃。將該反應混合物加熱至70-80℃，持續4小時，接著冷卻至40-50℃。將混合物於減壓下蒸餾至2-3體積。將水(180kg)及乙酸乙酯(80kg)添加至該濃縮物並用水(90kg)及25%氯化鈉水溶液(98kg)連續沖洗有機層。將剩餘有機相於減壓下蒸餾至1-3體積並用THF(76kg)稀釋。將混合物於減壓下蒸餾至1-3體積並用THF(76kg)稀釋。將混合物於減壓下蒸餾至1-3體積並用THF(33kg)稀釋。將混合物於減壓下蒸餾至1-3體積並用THF(34kg)稀釋。用THF(31kg)稀釋混合物，以獲得該產物之溶液，其可直接用於下一步驟中(89.6kg，22.4%重量/重量分析，80%理論值)。
HPLC RT=15.15min，86.1%
管柱：150mm×4.6mm ID，3.5μm Agilent Zorbax SB-C8
流率：1.0mL/min.
溫度：40℃
偵測波長：210nm
溶劑：A：0.05%體積/體積三氟乙酸之水溶液
B：0.05%體積/體積三氟乙酸之乙腈溶液
中間物2.(R)-3-(2-(1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-羧酸第三丁酯階段3
溶液1之製法：將(R)-3-(碘甲基)吡咯啶-1-羧酸第三丁酯(中間物1)(89.6kg，22.4%分析值，20.1kg活性物)之溶液於減壓下蒸餾至1-2體積並用THF(180kg)稀釋，及添加2-甲基萘啶(9.2kg)並於氮氣下使該溶液冷卻至5-7℃。
溶液2之製法：於氮氣下，使雙(三甲基甲矽烷基)醯胺鋰之THF(59.2kg)溶液冷卻至5-7℃。
該反應係根據以下條件藉由泵送上述製得的溶液1及2通過靜態混合物及流動反應器來進行，並使該輸出反應混合物淬滅至水(80kg)及乙酸(42kg)之溶液中。
處理：
用2N NaOH溶液(347kg)處理混合物並用MTBE(160kg)萃取。在0-10℃下，用1N HCl溶液(196kg)處理MTBE相，並棄除有機層。用MTBE沖洗酸性水層兩次(142kg及146kg)及隨後藉由添加2N NaOH水溶液(80kg)調整至pH5-6。用乙酸乙酯(162kg)萃取水相並藉由添加NaOH(14kg)調整水相至pH5-6。用乙酸乙酯(166kg)萃取水相並藉由 添加NaOH(10kg)調整水相至pH5-6。用乙酸乙酯(176kg)萃取水相並用水(210kg)及25%氯化鈉水溶液(210kg)沖洗合併的EtOAc相。將有機溶液於減壓下蒸餾至2-4體積並用MTBE(80kg)稀釋。將混合物於減壓下蒸餾至2-4體積並用正庚烷(80kg)稀釋。將混合物於減壓下蒸餾至2-4體積並用正庚烷(80kg)稀釋。將混合物於減壓下蒸餾至2-4體積並用MTBE(16kg)稀釋。使混合物冷卻至5-10℃並用正庚烷(40kg)處理。藉由過濾(離心機)收集固體產物，用正庚烷(10kg)沖洗並於50-60℃下於真空下乾燥，以獲得呈固體的產物(4.3kg)。
用EtOAc(203kg)處理濾液並於減壓下蒸餾至100-150L。用MTBE(80kg)稀釋混合物並於減壓下蒸餾至80L。用正庚烷(60kg)稀釋混合物並於減壓下蒸餾至60L。用正庚烷(23kg)稀釋混合物並於減壓下蒸餾至60L。用MTBE(16kg)稀釋混合物並於減壓下蒸餾至80L。用MTBE(8kg)稀釋混合物並於減壓下蒸餾至60-80L。用MTBE(8kg)稀釋混合物並於氮氣下冷卻至5-10℃。用正庚烷(21kg)處理混合物並攪拌約1小時。藉由過濾(離心機)收集固體產物，用正庚烷(5kg)沖洗，並於50-60℃下於真空下乾燥，以獲得第二收穫量的呈固體的該標題產物(3.65kg)。
總共7.95kg，36%理論值，HPLC第1收穫量RT=9.33min，97.6%，HPLC第2收穫量RT=9.27min，99.1%，管柱：150mm×4.6mm ID，3.5μm Agilent Zorbax SB-C8
流率：1.0mL/min
溫度：40℃
偵測波長：210nm
溶劑：A：0.05%體積/體積三氟乙酸之水溶液
B：0.05%體積/體積三氟乙酸之乙腈溶液
Chiral HPLC合併的RT=28.95min，98.8%，管柱：250mm×4.6mm ID，Chiralpak IC
流率：1.0mL/min.
溫度：30℃
偵測波長：218nm
溶劑：A：0.1%體積/體積異丁胺之正庚烷溶液
B：0.1%體積/體積異丁胺之乙醇溶液
中間物51.(E)-4-乙醯氧基丁-2-烯酸甲酯階段10
向反應器添加乙腈(140kg)、乙酸鉀(10kg)、(E)-4-溴丁-2-烯酸甲酯(18kg，1重量)及乙腈(3kg)。於45-55℃下攪拌混合物約12.5h並冷卻至20-30℃。過濾混合物並用乙酸乙酯(14kg)沖洗濾餅。於減壓下濃縮濾液至2-3體積並用乙酸乙酯(90kg)稀釋。用水沖洗溶液4次(2x91kg，2x92kg)及用11%氯化鈉水溶液(99kg)沖洗。於減壓下濃縮有機相至1-2體積並添加DCM(80kg)。於減壓下濃縮有機相至1-2體積並添加DCM(80kg)。於減壓下濃縮有機相至1-2體積，以獲得該標題化合物(14.8kg，53.4%分析值，78%理論值)之DCM溶液。
HPLC RT=10.37min，83.9%，管柱：150mm×4.6mm ID，3.5μm Agilent Zorbax SB-C8
流率：1.0mL/min.
溫度：40℃
偵測波長：210nm
溶劑：A：0.05%體積/體積三氟乙酸之水溶液
B：0.05%體積/體積三氟乙酸之乙腈溶液
中間物47.(R,E)-4-(3-(2-(1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁-2-烯酸甲酯。步驟4及5
在-10至0℃下，藉由將HCl氣體噴射至甲醇(40kg)中，直至達到4.6mol/L的濃度來製備HCl之MeOH溶液。向此溶液添加中間物2(8kg，1重量)之MeOH(24kg)溶液並於氮氣下加熱至35-45℃，持續約4.5小時。將該反應於減壓下蒸餾至2-3體積。添加MeOH(21kg)並於減壓下濃縮混合物至2-3體積。添加MeOH(24kg)並於減壓下濃縮混合物至2-3體積。添加DCM(64kg)並於減壓下濃縮混合物至2-3體積。添加DCM(64kg)並於減壓下濃縮混合物至2-3體積。添加DCM(64kg)並將混合物調整至10-20℃並用N,N-二異丙基乙胺(20kg)逐滴處理且保持溫度<30℃，以獲得(R)-2-(2-(吡咯啶-3-基)乙基)-1,8-萘啶二鹽酸鹽(中間物3)溶液。向另一反應器添加DCM(61kg)、(E)-4-乙醯氧基丁-2-烯酸甲酯(中間物51)(53%重量/重量之DCM溶液，8.8kg，4.7kg活性物)及1,1’-[雙(二苯基膦基)二茂鐵]氯化鈀(II)(2.1kg)且用氮氣吹掃反應器頂部空間並於20-30℃下攪拌30min。向此混合物添加上述製得的(R)-2-(2-(吡咯啶-3-基)乙基)-1,8-萘啶二鹽酸鹽(中間 物3)溶液，並於20-30℃下攪拌混合物約22h。用水(85kg)處理反應混合物並濾過矽藻土(6kg；經DCM(22kg)預潤濕)並用DCM(19kg)沖洗。用水(80kg)沖洗有機相，冷卻至5-10℃並用0.5N HCl(204kg)酸化。用DCM(60kg)沖洗水層，用DCM(123kg)稀釋並用1N NaOH溶液(78kg)中和。用DCM(59kg)萃取水層。用25%NaCl溶液(46kg)沖洗合併的DCM相，並於減壓下濃縮至1-2體積。添加甲苯(34kg)並於減壓下濃縮混合物至35-45L，以獲得該標題化合物(42.15kg，13.4%分析值，76%理論產率)之溶液。此處因材料不安定而未進行分析，因此其直接用於下一步驟中。
中間物9 (3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基) 酸。階段11及12
向反應器添加3-溴苯基肼鹽酸鹽(6kg)、乙醯丙酮(4031.7g)及冰乙酸(18L)並將混合物加熱至90-100℃並攪拌3-4h。將反應混合物濃縮成油，用水(20L)稀釋，用5.5M NaOH水溶液(10L)調整至pH~7，並用MTBE(20L)萃取。用水(15L)及鹽水(10L)沖洗MTBE層並濃縮以獲得油。向該油添加硼酸異丙酯(B(OiPr)3)(6058.6g)及THF(40L)並使混合物冷卻至-75至-60℃。於-70至-60℃下滴加正BuLi(2.5M，12.9L)並攪拌過夜。將該反應升溫至-10至0℃並依序添加水(添加24L)及濃HCl(4L)，並攪拌混合物10min並分離。用1N NaOH溶液將水相調整至pH5-6並用EtOAc(2x10L)萃取。用NaHCO3溶液及鹽水沖洗合併的有機物並濃縮以獲得油。用庚烷(20L)稀釋此油並冷卻至0-10℃，以獲得白色固體，其藉由過濾單離，以獲得該標題化合物(4530g，71%理論值)。
HPLC RT=6.53min，98.7%，管柱：150mm×4.6mm ID，3.5μm Agilent Zorbax Bonus RP
流率：1.0mL/min
溫度：40℃
偵測波長：220nm
溶劑：A：0.05%體積/體積三氟乙酸之水溶液
B：0.05%體積/體積三氟乙酸之乙腈溶液
中間物48. 4-((R)-3-(2-(1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)丁酸甲酯。階段6
向反應器添加甲苯(25kg)、(R,E)-4-(3-(2-(1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁-2-烯酸甲酯(中間物47之甲苯溶液(42.15kg，13.4%分析值，5.6kg(1重量)活性物)、17%重量/重量KOH水溶液(10kg)、(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)酸(中間物9)(8.4kg)、氯-(1,5-環辛二烯)銠(I)二聚體(0.433kg)及(R)-(+)-2,2'-雙(二苯基膦基)-1,1'-聯萘(1.3kg)。用氮氣吹掃反應器，加熱至75-85℃並於氮氣下攪拌約5h。於減壓下濃縮該混合物至1-3體積並冷卻至20-30℃。用DCM(166kg)與水(57kg)處理混合物，攪拌並棄除水相。用0.5N HCl水溶液(141kg)酸化有機相，分離並用DCM(45及43kg)沖洗水相兩次。將乙酸乙酯(57kg)添加至水相中並用1N NaOH水溶液(56kg)將混合物中和至pH7-8。收集有機層並用乙酸乙酯(2x28kg)萃取水層兩次。用25%NaCl水溶液(32kg)沖洗合併的EtOAc萃取物並於減壓下蒸餾至1-2體積。用MeOH(25kg)稀釋混合物並於減壓下蒸餾至1-2體積。用MeOH(29kg)蒸餾殘餘物，以獲得該標題之MeOH溶液(~9：1dr，49.4kg，9.0%分析值，51%理論產率)。
HPLC RT=11.68min，90.9%， 管柱：150mm×4.6mm ID，3.5μm Agilent Zorbax SB-C8
流率：1.0mL/min
溫度：40℃
偵測波長：210nm
溶劑：A：0.05%體積/體積三氟乙酸之水溶液
B：0.05%體積/體積三氟乙酸之乙腈溶液
掌性HPLC RT=10.27min，90.0%，管柱：250mm×4.6mm ID，5μm CHIRALPAK AD-H
流率：1.0mL/min
溫度：40℃
偵測波長：248nm
溶劑：A：0.1%體積/體積二乙胺之正己烷溶液
B：0.1%體積/體積二乙胺之乙醇溶液
中間物49. 3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸甲酯。階段7
向氫化容器添加4-((R)-3-(2-(1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)丁酸甲酯(中間物48)之MeOH溶液 (49.4kg，9.0%分析值，4.4kg(1重量)活性物)及Rh/C(1.1kg)，並用氮氣吹掃該容器。於氫氣氛(0.3MPa)下進行該反應並於35-45℃下攪拌約26h。用氮氣代替該反應氣氛並冷卻至20-30℃。過濾反應混合物並用MeOH(3x13kg)沖洗固體殘餘物。將合併的濾液於減壓下濃縮至100-200L，過濾，用MeOH(20kg)沖洗並進一步濃縮，以獲得該標題化合物之甲醇溶液(27.2kg)。
HPLC RT=23.63min，85.4%，管柱：150mm×4.6mm ID，2.5μm Waters XSELECT HSS C18
流率：0.6mL/min
溫度：40℃
偵測波長：245nm
溶劑：A：0.2%體積/體積三氟乙酸之水溶液
B：0.2%體積/體積三氟乙酸之乙腈溶液
中間物50. 3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸。階段8
將於階段7中獲得之3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸甲酯(中間物50)之甲醇溶液(27.2kg，4.4kg(1重量)活性物)於減壓下蒸餾至1-2體積並用MeOH(26kg)稀釋。向此溶液添加矽石硫醇(0.5kg)並用HCl/MeOH(3.5M，8kg)將該混合物之pH調整至~1。於60-70℃下攪 拌混合物10h，冷卻至20-30℃並過濾。用甲醇(4kg，隨後2x5kg)沖洗濾餅。將該濾液濃縮至~6-8體積，用MeOH(4kg)稀釋並添加矽石硫醇(0.5kg)。用HCl/MeOH(3.5M，2kg)調整pH至~1後，於60-70℃下攪拌溶液10h。使混合物冷卻至20-30℃，過濾並用甲醇(5kg，隨後2x4kg)沖洗濾餅，在45℃下在減壓下將該濾液濃縮至~6-8體積。用MeOH(13kg)稀釋殘餘物並在45℃下在減壓下進一步濃縮至1-2體積。用MeOH(13kg)稀釋殘餘物並添加2M NaOH水溶液(2 2kg)，以獲得pH>14的混合物，於30-40℃下攪拌11h，接著用MeOH(4kg)稀釋並在45℃下在減壓下濃縮至4-5體積。用HCl(3M水溶液，6kg)將pH調整至8-9並用DCM(20kg)處理混合物，並藉由添加NaOH(2M水溶液，5.7kg)將水相之pH調整至pH 8-9。用DCM(2x30kg，31kg，30kg)萃取水相四次。用水(10kg)及HCl(3M水溶液，6kg)之混合物沖洗合併的有機相並用DCM(30kg，31kg)萃取水相兩次。在40℃下在減壓下，將合併的有機相濃縮至1-2體積並用DCM(10kg)稀釋，以獲得該標題化合物之DCM溶液(16.8kg，22.4%分析值，87%理論值，兩個步驟)。
HPLC RT=20.69min，87.8%，管柱：150mm×4.6mm ID，2.5μm Waters XSELECT HSS C18
流率：0.6mL/min
溫度：40℃
偵測波長：245nm
溶劑：A：0.2%體積/體積三氟乙酸之水溶液
B：0.2%體積/體積三氟乙酸之乙腈溶液
掌性分離
於減壓下濃縮自階段8製得的3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸(中間物50)之DCM溶液並添加MeOH以製備100mg/mL溶液，過濾。對該溶液施加超臨界流體層析(SFC)以用於掌性分離。該等SFC分離參數係如下：
於30℃下於減壓下，濃縮包含所需異構體之溶離份，以獲得(S)-3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸(實例1)之MeOH/二乙胺溶液(12.2kg，22.9%分析值，74%理論值)。
實例9. (S)-3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸鹽酸鹽。階段9
用DCM(3kg)稀釋(S)-3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸(實例1)之甲醇溶液(12.1kg，22.9%分析值，2.8kg(1重量)活性物)並在35℃下在減壓下濃縮至1-3體積。用DCM(36kg)稀釋所得溶液並用33%氯化銨水溶液沖洗兩次(14kg x 2)，直至殘餘二乙胺為<0.5%。用DCM(4kg)稀釋有機相，於Na2SO4(2.8kg)上乾燥，過濾並用DCM(5kg x 3)沖洗濾餅。在55℃下在減壓下，將合併的濾液濃縮至1-3體積。添加乙腈(6kg)，並在45℃下在減壓下，將混合物蒸餾至1-3體積，以移除殘餘甲醇。用乙腈(20kg)稀釋殘餘物，及隨後添加HCl水溶液(3M，1.9kg)。在35℃下攪拌40分鐘後，經由管柱過濾器將混合物過濾至結晶容器中，用MeCN(3kg)沖洗。在45℃下在減壓下，將溶液蒸餾至~4體積，以提供該標題化合物之乙腈溶液。添加四份乙腈(8kg x 2，14kg，19kg)並在45℃下在減壓下蒸餾至3-5體積，以移除殘餘水。添加乙腈(17kg)以稀釋粗製產物並在50-55℃下於氮氣保護下攪拌所得溶液16小時。使該批料於5h內冷卻至0-5℃並於0-5℃下於氮氣下攪拌~4h。將該批料加熱至50-55℃並於50-55℃下於氮氣下攪拌~4h。使該批料於6h內冷卻至-10--8℃並於-10--8℃下於氮氣下攪拌~23h。藉由XRPD及DSC證實該形式後，過濾懸浮液並於氮氣下用乙腈(6kg)沖洗濾餅。於20-35℃下於減壓下乾燥濕的固體20h，隨後將溫度增加至45-55℃，再持續50h。篩選材料後，於45-55℃下再乾燥20h，以獲得該標題化合物(1.966kg，66%理論值)。
Mpt：197-202℃
1H NMR(DMSO-d 6；500MHz)δ ppm 13-11(br.s.,1 H),7.43-7.51(m,2 H),7.35-7.41(m,2 H),7.18(d,J=7.2Hz,1 H),7.02(br.s., 1 H),6.35(d,J=7.3Hz,1 H),6.07(s,1 H),3.54-3.64(m,1 H),3.47(dd,J=12.8,7.2Hz,1 H),3.25-3.37(m,4 H),3.18(br.s.,1 H),3.05-3.13(m,1 H),3.00(dd,J=16.3,5.6Hz,1 H),2.86(t,J=9.5Hz,1 H),2.56-2.68(m,3 H),2.41-2.49(m,2 H),2.30(s,3 H),2.14-2.27(m,1 H),2.18(s,3 H),1.98-2.10(m,1 H),1.72-1.81(m,2 H),1.61-1.72(m,2 H),1.56(dq,J=12.7,8.2Hz,1 H)。
HPLC RT=20.56min，99.4%，管柱：150mm×4.6mm ID，2.5μm Waters XSELECT HSS C18
流率：0.6mL/min
溫度：40℃
偵測波長：245nm
溶劑：A：0.2%體積/體積三氟乙酸之水溶液
B：0.2%體積/體積三氟乙酸之乙腈溶液
掌性HPLC RT=34.8min，100% a/a，管柱：250mm×4.6mm ID，5μm CHIRALPAK AS-H
流率：1.0mL/min
溫度：40℃
偵測波長：319nm
溶劑：A：0.2%體積/體積三乙胺之正庚烷溶液
B：0.2%體積/體積三乙胺之乙醇溶液
實例1之絕對構型之測定 實例1及其非對映異構體之還原 中間物33：異構體1. 3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁-1-醇
在20℃下，用LiAlH4乙醚溶液(1M，1.5mL)處理3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸鹽酸鹽(實例8，其係實例1之鹽酸鹽)(238mg，0.454mmol)之THF(5mL)懸浮液並在氮氣下攪拌混合物1.5h。LCMS指示反應完成。藉由添加2M NaOH溶液(0.8mL)及乙酸乙酯淬滅該反應。分配混合物並用NaHCO3溶液、鹽水沖洗有機溶液，乾燥(MgSO4)並於減壓下蒸發。將殘餘物溶解於1：1 MeOH-DMSO(2mL)中並藉由MDAP(方法A)純化，並收集溶離份，RT=6.6-9.4min。於減壓下移除溶劑，以獲得呈無色油的該標題化合物(157mg，73%)：NMR δ(DMSO-d 6,600MHz)δ 7.40-7.36(m,1H),7.28-7.26(m,1H),7.28-7.25(m,1H),7.20(d,J=7.7Hz,1H),6.99(d,J=7.3Hz,1H),6.22(d,J=7.2Hz,1H),6.20(br.s.,1H),6.05(s,1H),3.32-3.28(m,1H),3.25-3.21(m,1H),3.24-3.18(m,2H),2.97-2.90(m,1H),2.71(t,J=8.2Hz,1H),2.64(dd,J=11.8,7.8Hz,1H),2.59(t,J=6.2Hz,2H),2.57-2.53(m,1H),2.54-2.50(m,1H),2.39-2.34(m,2H),2.37-2.32(m,1H),2.26(s,3H),2.17(s,3H),2.07-2.01(m,1H),1.94(dd,J=13.1,7.4Hz,1H),1.97-1.88(m,1H),1.87-1.79(m,1H),1.74(dt,J=11.5,6.0Hz,2H),1.67-1.59(m,1H),1.60-1.53(m,2H),1.31-1.24(m,1H)；[α]D 20=+17(c=1.56， CHCl3)。
中間物34. 4-((R)-3-(2-(1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)丁-1-醇
使4-((R)-3-(2-(1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)丁酸第三丁酯(中間物13，異構體2)(155mg，0.287mmol)之2-Me-THF(3mL)溶液於冰中冷卻至5℃及隨後用氫化鋰鋁THF溶液(1M，1.5mL)小心處理。於氮氣下攪拌混合物2h，LCMS指示完成。藉由添加2M NaOH溶液(0.3mL)淬滅該反應並攪拌混合物0.5h。添加乙酸乙酯及固體硫酸鈉並攪拌混合物5分鐘，過濾，用乙酸乙酯沖洗固體，並於減壓下蒸發。將殘餘物溶解於DMSO-MeOH(1：1，2mL)中並藉由MDAP(方法A)純化並收集溶離份，RT=5.09min。於減壓下蒸發溶劑，將殘餘物溶解於MeOH中並於減壓下再蒸發，以獲得兩種摻雜溶離份。合併該兩種溶離份(31mg)並藉由MDAP進行25min(高pH)以再純化並收集溶離份，RT=6.41min，m/z 470，於減壓下蒸發，以獲得呈無色油的該標題化合物(16.4mg，12%)：LCMS(方法A)RT=0.94min，91%，ES+ve m/z 470(M+H)+；[α]D 20=-14(c=1.64，CHCl3)。
中間物33 異構體2. 3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁-1-醇
於5%Rh/C濕觸媒(5mg)上氫化4-((R)-3-(2-(1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)丁-1-醇(中間物34)(8mg，0.02mmol)之乙醇(5mL)溶液2.5天。使該反應混合物濾過矽藻土並用乙醇沖洗觸媒。於減壓下蒸發濾液及沖洗物，以獲得呈無色油的該標題化合物(7mg，87%)：NMR δ(DMSO-d6,600MHz)：7.37(t,J=7.8Hz,1H),7.26-7.28(m,1H),7.24-7.27(m,1H),7.20(d,J=7.7Hz,1H),6.99(d,J=7.3Hz,1H),6.21(d,J=7.2Hz,1H),6.19(br.s., 1H),6.04(s,1H),4.61(br.s.,1H),3.27-3.30(m,1H),3.21-3.23(m,2H),3.19-3.25(m,1H),2.90-2.98(m,1H),2.68(t,J=8.1Hz,1H),2.57-2.61(m,2H),2.56-2.61(m,2H),2.51-2.56(m,1H),2.35-2.41(m,1H),2.32-2.39(m,2H),2.26(s,3H),2.17(s,3H),2.03(dd,J=8.5,7.1Hz,1H),1.88-1.99(m,2H),1.78-1.87(m,1H),1.73(quin,J=5.9Hz,2H),1.60-1.66(m,1H),1.51-1.58(m,2H),1.24-1.30(m,1H)；[α]D 20=-19(c=0.689，CHCl3)。
中間物39異構體1及異構體2之製造 中間物35. 2-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)乙酸第三丁酯
於氮氣/真空循環下，除氣(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)酸(中間物9)(10.8g，50mmol)、2-溴乙酸第三丁酯(14.6g，75mmol)、三鄰甲苯基膦(1.5g，4.93mmol)、Pd(OAc)2(700mg，3.12mmol)、磷酸三鉀粉末(42.5g，200mmol)及四氫呋喃(100mL)之混合物並在回流下加熱16h。LCMS分析顯示~70%轉化率。再添加乙酸鈀(300mg)及2-溴乙酸第三丁酯(3g)並使混合物回流6h。LCMS顯示無初始材料及存在產物。將混合物分配在水(200mL)與EtOAc(2×200mL)之間並乾燥(MgSO4)。蒸發有機相並藉由層析於矽石管柱(330g)上用0-40%乙酸乙酯-環己烷(15份CV)洗脫來純化殘餘物，以獲得呈黃色油的該標題化合物(10.4g，72%)：LCMS(方法C)RT=1.18min，ES+ve m/z 287(M+H)+。
中間物36. 2-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)乙酸
用TFA(20mL，260mmol)緩慢處理2-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)乙酸第三丁酯(中間物35)(10g，28mmol)之二氯甲烷(10mL)溶液並於室溫下攪拌2h。LCMS分析顯示反應完成。於減壓下蒸發該溶液並將殘餘物溶解於2N NaOH(100mL)中並用乙醚(2 x 100mL)沖洗。用2N HCl酸化水相並用EtOAc(2 x 150mL)萃取冷卻的懸浮液。乾燥(MgSO4)有機溶液並蒸發。用乙醚(40mL)濕磨殘餘物(~7g)並藉由過濾收集，以獲得呈灰棕色固體的該標題化合物(5.2g，81%)：LCMS(方法C)RT=0.76min，100%，ES+ve m/z 231(M+H)+；NMR δ(CDCl3,400MHz)7.51-7.44(1H,m),7.41-7.30(3H,m),6.08(1H,s),3.70(2H,s),2.29(3H,s),2.26(3H,s)。
中間物37. 2-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)乙酸甲酯
將2-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)乙酸(中間物36)(460mg，2mmol)之溶液溶解於MeOH(70mL)中並用氯化氫之環戊基甲基醚溶液(3M，10mL)處理並將混合物加熱至回流，持續2h。於減壓下濃縮混合物，並將殘餘物分配在乙酸乙酯與與碳酸氫鈉之間。用鹽水沖洗有機相，於MgSO4上乾燥並於減壓下蒸發。藉由層析於矽石管柱(20g)上用0-25%乙酸乙酯-環己烷的梯度洗脫20分鐘來純化殘餘物。合併包含主要組分的適當溶離份並蒸發以獲得呈無色油的該標題化合物(251mg，51%)：NMR δ(CDCl3)7.43-7.37(2H,m),7.33(1H,br d,J 8Hz),7.29-7.24(1H,m，被CHCl3遮蓋)，5.99(1H,s),3.70(3H,s),3.68 (2H,s),2.31(3H,s)及2.30(3H,s)。
中間物38. 2-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)琥珀酸4-第三丁酯1-甲酯
將六甲基二矽疊氮化鋰之THF(1M，1.85mL)溶液冷卻至-78℃並用2-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)乙酸甲酯(中間物37)(453mg，1.85mmol)之THF(2mL)溶液處理。用2-溴乙酸第三丁酯(0.82mL，5.6mmol)之THF(2mL)溶液處理反應混合物5分鐘後及於-78℃下30分鐘後，使該混合物升溫至室溫。攪拌混合物2.5h及隨後用HCl水溶液(0.2M，10mL)淬滅及用乙酸乙酯萃取。用NaHCO3水溶液、0.2M HCl、鹽水沖洗有機溶液，乾燥(MgSO4)並於減壓下蒸發。藉由層析於50g矽石管柱上用0-25%EtOAc-環己烷洗脫來純化殘餘物。合併包含主峰之溶離份並於減壓下蒸發，以獲得無色油(780mg)，其藉由層析於70g矽石管柱上用0-50%TBME-環己烷洗脫來進一步純化，以獲得呈無色油的該標題化合物(479mg，72%)：NMR δ(CDCl3)7.43-7.33(3H,m),7.29-7.25(1H,m),6.00(1H,s),4.09(1H,dd,J 10.0,5.5Hz),3.69(3H,s),3.13(1H,dd,J 16.7,10.0Hz),2.64(1H,dd,J 16.7,5.5Hz),2.30(6H,s),1.42(9H,s)。藉由製備型掌性HPLC於Chiralcel OD-H管柱(30mm×250mm)上用5% IPA-己烷洗脫(流率=20mL/min)來拆分此化合物之兩種對映體，以獲得呈無色油的異構體1(267mg)：[α]D 22+81(c=1.028，CHCl3)；於Chiralcel OJ-H管柱(4.6mm內徑×250mm)上進行分析型掌性HPLC，RT=7.75min，99.3%(包含另一種對映體，RT=9.35min，0.7%)，及呈無色油的異構體2(230 mg)：[α]D 22-82(c=1.016，CHCl3)；分析型掌性HPLC RT=9.35min，98.6%(包含另一種對映體，RT=7.75min，1.4%)。
中間物39 異構體1. 4-(第三丁氧基)-2-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-側氧基丁酸
將2-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)琥珀酸4-第三丁酯1-甲酯異構體1(中間物38，異構體1)(257mg，0.72mmol)溶液溶解於THF(2mL)中並冷卻至0℃(冰冷卻)，接著添加30%過氧化氫(0.366mL，3.6mmol)及1M LiOH水溶液(1M，2.15mL)。在冷凍機中靜置過夜後，用偏亞硫酸氫鈉水溶液(1M，3mL)處理反應混合物且隨後用2M HCl溶液酸化至pH 1。用乙酸乙酯萃取反應混合物三次並於MgSO4上乾燥有機溶液。於減壓下蒸發溶液並藉由MDAP(方法C)純化殘餘白色發泡體。於減壓下蒸發適當的溶離份，以獲得呈無色油的該標題化合物(140mg，57%)：1H NMR δ(400MHz；CDCl3)7.38-7.32(2H,m),7.30-7.24(2H,m),5.98(1H,s),4.05(1H,dd,J 9.5,6Hz),3.09(1H,dd,J 16.5,9.5Hz),2.63(1H,dd,J 16.5,6Hz),2.31(3H,s),2.24(3H,s),1.38(9H,s).[α]D 20+42(c=1.037，CHCl3)。
中間物39 異構體2. 4-(第三丁氧基)-2-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-側氧基丁酸
將2-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)琥珀酸4-第三丁酯1-甲酯 異構體2(中間物38，異構體2)(220mg，0.61mmol)溶液溶解於2-Me-THF(5mL)中並冷卻至0℃(冰冷卻)，接著添加30%過氧化氫(0.313mL，3.1mmol)及0.2M LiOH水溶液(0.2M，9.21mL，1.84mmol)。LCMS指示6天後完成反應。用硫代硫酸鈉溶液(1M，3mL)及碳酸氫鈉溶液(0.5M，8mL)處理反應混合物，並攪拌混合物(pH 8)10分鐘，及隨後用6M HCl溶液酸化至pH 1。用乙酸乙酯萃取反應混合物三次並於MgSO4上乾燥有機溶液。於減壓下蒸發獲得白色固體，其藉由MDAP(方法C)純化。於減壓下蒸發適當的溶離份獲得呈無色油的該標題化合物(105mg，50%)：1H NMR δ(400MHz；CDCl3)7.38-7.32(2H,m),7.30-7.22(2H,m),5.99(1H,s),4.05(1H,dd,J 9.5,6Hz),3.09(1H,dd,J 16.5,9.5Hz),2.63(1H,dd,J 16.5,6Hz),2.31(3H,s),2.24(3H,s),1.38(9H,s).[α]D 20-41(c=1.482，CHCl3)。
測定中間物39異構體1之絕對構型為(S) (埃文斯方法) 中間物40. (S)-(+)-4-苄基-3-(2-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)乙醯基)噁唑啶-2-酮
將2-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)乙酸(中間物36)(2.3g，9.99mmol)溶解於THF(70mL)中並用DIPEA(2.268mL，12.99mmol)處理。於氮氣下，經由注射器向該攪拌溶液添加特戊醯氯(1.229mL，9.99mmol)。於0℃下攪拌混合物45分鐘，及隨後再冷卻至-78℃，此獲得白色漿體。
同時，在一獨立燒瓶中，將(S)-4-苄基噁唑啶-2-酮(3.19g，17.98 mmol)溶解於THF(50mL)中並攪拌冷卻至-78℃。向此溶液添加1.6M正BuLi之己烷溶液(11.24mL，17.98mmol)並於-78℃下攪拌混合物0.5h。使用套管將金屬化的噁唑啶酮添加至經混合的酐中。於-78℃下攪拌所得漿體1h及隨後使其在週末內升溫至室溫。
用飽和氯化銨水溶液(40mL)淬滅反應混合物，用水(10mL)稀釋並用乙酸乙酯萃取。用鹽水沖洗有機相，乾燥(MgSO4)，過濾並於真空中濃縮。將殘餘油溶解於DCM中並藉由層析於100g矽石管柱上用0-50%乙酸乙酯-環己烷的梯度洗脫40分鐘來純化。合併包含主要組分的溶離份並於真空中濃縮，以產出呈無色油的該標題化合物(2.1g，54%)：1H NMR δ(600MHz,DMSO-d 6)7.48-7.44(m,1H),7.43(s,1H),7.41-7.38(m,1H),7.29(d,J=8.3Hz,1H),7.28-7.25(m,2H),7.25-7.21(m,1H),7.17-7.13(m,2H),6.07(s,1H),4.69(tt,J=7.8,3.0Hz,1H),4.36(t,J=8.5Hz,1H),4.36-4.32(m,1H),4.26-4.20(m,1H),4.23-4.18(m,1H),3.03-2.97(m,1H),2.95-2.90(m,1H),2.29(s,3H),2.18(s,3H)；[α]D 20=+49(c 1.64，CHCl3)。
中間物41 (S)-4-((S)-4-苄基-2-側氧基噁唑啶-3-基)-3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-側氧基丁酸第三丁酯，及中間物42 (R)-4-((S)-4-苄基-2-側氧基噁唑啶-3-基)-3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-側氧基丁酸第三丁酯
在-78℃下，將六甲基二矽疊氮化鋰之THF溶液(1M，5.7mL)添加至(S)-4-苄基-3-(2-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)乙醯基)噁唑啶-2-酮(中間物40)(2.0g，5.14mmol)之THF(10mL)溶液並在-78℃下 攪拌混合物60分鐘，接著添加2-溴乙酸第三丁酯(2.3mL，15mmol)。在-78℃下攪拌混合物3h及隨後允許升溫至室溫並攪拌2天，接著藉由添加飽和氯化銨水溶液淬滅反應。用乙酸乙酯分配混合物，分離有機相，用鹽水沖洗(兩次)，於MgSO4上乾燥並於減壓下蒸發。藉由層析於矽石(100g)管柱上用0-50%乙酸乙酯-環己烷洗脫1h來純化殘餘物，以獲得呈黃色油的產物(1.2g，46%)，其係兩種非對映異構體之混合物：LCMS(方法C)RT=1.32min，11%，ES+ve m/z 504及RT=1.36min，53%，ES+ve m/z 504(M+H)+。藉由MDAP(方法C)進一步純化非對映異構體混合物之預期產物部分(200mg)，並收集主要溶離份，RT=9.56min，以獲得呈無色油的(S)-4-((S)-4-苄基-2-側氧基噁唑啶-3-基)-3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-側氧基丁酸第三丁酯(中間物41)(69mg)：LCMS(方法C)RT=1.36min，ES+ve m/z 504(M+H)+；1H NMR δ(400MHz,CDCl3)7.47(1H,br s),7.43-7.28(8H,m),6.00(1H,s),5.56(1H,dd,J 11,4Hz),4.67-4.59(1H,m),4.15-4.06(2H,m),3.42-3.30(2H,m),2.83(1H,dd,J 13,10Hz),2.67(1H,dd,J 17,4Hz),2.32(3H,s),2.30(3H,s),1.46(9H,s)；[α]D 20=+102(c=1.20，CHCl3)。於放氣單元中於氮氣流下蒸發來自MDAP純化之具有RT=9.2之次要溶離份，以獲得(R)-4-((S)-4-苄基-2-側氧基噁唑啶-3-基)-3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-側氧基丁酸第三丁酯(中間物42)(7mg)：LCMS(方法C)RT=1.32min，ES+ve m/z 504(M+H)+；1H NMR δ(400MHz,CDCl3)7.51(1H,br s),7.46-7.38(3H,m),7.21-7.15(3H,m),6.99-6.94(2H,m),5.97(1H,s),5.46(1H,dd,J 11,4Hz),4.81-4.73(1H,m),4.24(1H,t,J 8.5Hz),4.10(1H,dd,J 9,3Hz),3.33(1H,dd,J 17,11Hz),3.08(1H,dd,J 13.5,3Hz),2.66-2.59(2H,m),2.29(3H,s),2.28(3H,s),1.43(9H,s)；[α]D 20=-37(c=0.71，CHCl3)。
中間物39 異構體1(S)-(+)-4-(第三丁氧基)-2-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-側氧基丁酸
在4℃下，依序用30%過氧化氫(8.8M，0.078mL，0.68mmol)及氫氧化鋰水溶液(1M，0.411mL)處理(S)-4-((S)-4-苄基-2-側氧基噁唑啶-3-基)-3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-側氧基丁酸第三丁酯(中間物41)(69mg，0.14mmol)之THF(1mL)溶液，並於冰浴中攪拌混合物2h。於冷凍器中靜置反應混合物過夜及隨後藉由添加偏亞硫酸氫鈉水溶液，10分鐘後添加2M HCl淬滅。2h後，用乙酸乙酯萃取混合物及用更多EtOAc萃取水層。用鹽水沖洗合併的有機溶液，乾燥(MgSO4)並於減壓下蒸發。將殘餘物溶解於DMSO(1mL)中並藉由MDAP(方法C)純化並收集峰，RT=8.3-9.9min，m/z 345。於放氣單元中於氮氣流中蒸發適當的溶離份，以獲得呈無色油的該標題化合物(22mg，47%)：1H NMR δ(CDCl3)7.36-7.31(2H,m),7.28-7.23(2H,m),5.96(1H,s),4.04(1H,dd,J 9.5,6Hz),3.08(1H,dd,J 16.5,9.5Hz),2.62(1H,dd,J 16.5,6Hz),2.29(3H,s),2.23(3H,s),1.37(9H,s)；[α]D 20=+65(c=2.08，CHCl3)。
中間物46及中間物33異構體1之合成並顯示其等係相同異構體 中間物43 (S)-(+)-4-((R)-3-(2-(1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-側氧基丁酸第三丁酯
用N-[3-(二甲基胺基)丙基]-N-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(77mg，0.40mmol)及N-羥基苯并三唑水合物(62mg，0.40mmol)處理2-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)琥珀酸4-第三丁酯1-甲酯(中間物39異構體1)(107mg，0.31mmol)之DCM(1mL)溶液。攪拌反應混合物10分鐘，接著添加(R)-2-(2-(吡咯啶-3-基)乙基)-1,8-萘啶(中間物3)(100mg，0.44mmol)之DCM(3mL)及N-Me-嗎啉(0.102mL，0.93mmol)溶液。於室溫下，攪拌混合物2h。用水稀釋混合物並於相分離器玻璃料中分離各相，並於減壓下蒸發有機相。藉由MDAP(方法C)純化殘餘物並收集具有m/z 554的溶離份。於減壓下移除溶劑以獲得呈無色油的該標題化合物(160mg，93%)：LCMS(方法C)RT=0.99min，98.5%，ES+ve m/z 554(M+H)+；[α]D 20=+41(c=1.720，CHCl3)；分析型掌性HPLC Chiralcel OD-H(4.6mm×250mm)，用包含0.1%異丙胺的10% EtOH-庚烷洗脫，於235nm下偵測，流率=1mL/min，RT=30.4min，77.3%及RT=37.6min，22.7%。
中間物44. (S)-3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-側氧基-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸第三丁酯
於5%Rh/C(28mg)上氫化(S)-4-((R)-3-(2-(1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-側氧基丁酸第三丁酯(中間物43)(107mg，0.19mmol)之乙醇(20mL)溶液4天。添加更多的觸媒(5mg)並再氫化混合物一天。該觸媒係藉由濾過矽藻土來移除並用乙醇沖洗。於減壓下濃縮合併的濾液及沖洗物，以獲得該標題化 合物(101mg，94%)：LCMS(方法C)RT=0.86min，98%，ES+ve m/z 558(M+H)+。
中間物45 (S)-(+)-3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-側氧基-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸
在室溫下，用TFA(3mL)處理(S)-3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-側氧基-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸第三丁酯(中間物44)(101mg，0.18mmol)之CHCl3(5mL)溶液2h。於減壓下蒸發反應混合物並將殘餘物溶解於DCM中並於減壓下再蒸發三次。將殘餘物(200mg)溶解於乙腈中並向下穿過經MeCN預處理之SCX-2管柱(10g)。用MeCN沖洗化合物並用2M氨MeOH溶液洗脫。於減壓下蒸發氨性溶離份，以獲得呈白色發泡體的該標題化合物(80mg，88%)：LCMS(方法A)RT=0.82min，90%，ES+ve m/z 502(M+H)+；[α]D 20=+34(c=0.88，CHCl3)。
中間物46 (S)-(+)-3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁-1-醇
於室溫下，於氮氣下，用含於THF中之硼烷-THF溶液(1M，2mL)處理(S)-3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-側氧基-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸(中間物45)(65mg，0.13mmol)之THF(1mL)溶液。於環境溫度下攪拌混合物過夜。 在早晨，添加AcOH(0.5mL)以淬滅過量的硼烷，接著添加2M NaOH溶液(1mL)以破壞硼烷複合物。用醚稀釋混合物並依序用2M NaOH及鹽水沖洗兩次，乾燥(MgSO4)並於減壓下蒸發。將粗製產物(100mg)溶解於THF(1mL)中並在20℃下在氮氣下用LiAlH4乙醚溶液(1M，1.5mL)處理。在20℃下保持混合物30分鐘及隨後加熱至50℃，持續2h。添加更多的LiAlH4溶液(1M，0.7mL)並將混合物加熱至60℃，持續45分鐘。LCMS(方法A)顯示產物具有RT=1.12min，58%，m/z 474(M+H)+及醯胺具有RT=1.23min，27%，m/z 488(M+H)+。將溫度提升至80℃，再持續1h，然而，該反應似乎已停止。藉由添加2M NaOH溶液(1mL)及醚淬滅反應混合物。藉由過濾收集白色固體，用醚及乙酸乙酯沖洗。於減壓下蒸發濾液及沖洗物。藉由MDAP(方法A)純化殘餘物(58mg)，以獲得呈黃色膠的該標題化合物(30mg，49%)：LCMS(方法A)RT=1.10min，93%，ES+ve m/z 474(M+H)+；[α]D 20=+7.0(c=0.859，CHCl3)；1H NMR(DMSO-d 6,600MHz)δ 7.40-7.36(m,1H),7.28-7.26(m,1H),7.28-7.25(m,1H),7.20(d,J=7.7Hz,1H),6.99(d,J=7.3Hz,1H),6.22(d,J=7.2Hz,1H),6.20(br.s.,1H),6.05(s,1H),3.32-3.28(m,1H),3.25-3.21(m,1H),3.24-3.18(m,2H),2.97-2.90(m,1H),2.71(t,J=8.2Hz,1H),2.64(dd,J=11.8,7.8Hz,1H),2.59(t,J=6.2Hz,2H),2.57-2.53(m,1H),2.54-2.50(m,1H),2.39-2.34(m,2H),2.37-2.32(m,1H),2.26(s,3H),2.17(s,3H),2.07-2.01(m,1H),1.94(dd,J=13.1,7.4Hz,1H),1.97-1.88(m,1H),1.87-1.79(m,1H),1.74(dt,J=11.5,6.0Hz,2H),1.67-1.59(m,1H),1.60-1.53(m,2H),1.31-1.24(m,1H)。1H NMR光譜顯示具有密切相關訊號的~3：1混合物，此與該標題化合物之非對映異構體之混合物一致。主要組分匹配中間物33異構體1及次要組分匹配中間物33異構體2。分析型掌性HPLC(4.6×250mm Chiralpakl AD)，用包含0.1%異 丙胺的10%EtOH-庚烷洗脫，流率=1mL/min，注射15μL，於235nm下偵測，RT=22.5min，78.9%及RT=26.9min，21.1%。
溶解度
根據N.Bhattachar等人J.Pharm.Biomed.Anal. 2006,41,152-157來測量化學發光氮偵測(CLND)動態溶解度且實測值為：就實例1而言，504μM；就實例2而言，249μM；就實例3而言，276μM；就實例4而言，388μM；就實例5而言，470μM；就實例6而言，437μM；就實例7而言，349μM。
生物分析
黏附分析： 所用試劑及方法係如(Ludbrook等人，Biochem.J. 2003,369,311)所述並澄清以下幾點。使用以下具有括號內配體的細胞系：K562-α5β1(纖連蛋白)、K562-αvβ3(LAP-b1)、K562-αvβ5(玻璃連結蛋白)、K562-αvβ6(LAP-b1)、K562-αvβ8(LAP-b1)。用於促進黏附的二價陽離子係2mM MgCl2。藉由細胞標記利用螢光染料BCECF-AM(生命技術)定量黏附，其中在37℃下，用0.66mL/mL 30mM BCECF-AM培養6x106個細胞/mL的細胞懸浮液10分鐘，接著分配至分析板中。分析結束後，使用50μL/孔的0.5% Triton X-100之H2O溶液溶解黏附的細胞，以釋放螢光。使用Envision®板閱讀器(Perkin Elmer)偵測螢光強度。就分析中的活性拮抗劑而言，將數據擬合至4參數邏輯斯方程以用於IC50測定。
藉由螢光偏振分析使人類可溶α v β 6 蛋白結合至含RGD的肽： 使用桿狀病毒表現系統自pFastBac雙構造共表現αv及β6之細胞外結構域。該表現蛋白質包含αv之胺基酸31-987(後接Tev切割位點、Fos抗原決定基標籤及6His標籤)、β6之胺基酸21-707(後接Prescission蛋白酶位點、Jun抗原決定基標籤及FLAG標籤)。該蛋白質分泌至培養基中；其使用滲濾作用純化，接著依序使用His標籤及FLAG標籤及尺寸排除層析 進行純化。此產生具有大於95%純度的材料。以化學方式合成基於LAPβ3的螢光結合肽，其具有序列Ac-GRRGDLGRLK(Cy3B)-NH2。使用25mM HEPES pH7.4、150mM NaCl、1mM CHAPS及400mM MgCl2的分析緩衝劑。向黑色低容積384孔板添加0.1mL/孔的測試化合物之100% DMSO溶液，接著添加3mL/孔的10nM αvβ6蛋白質。於室溫下培養板15分鐘，接著添加3mL/孔的4nM螢光含RGD肽。於室溫下培養板60分鐘，並使用Envision®板閱讀器(Perkin Elmer)利用在531nm下的激發偵測螢光偏振並在590nm下測量發射。就分析中的活性拮抗劑而言，將數據擬合至4參數邏輯斯方程以用於IC50測定。
就實例1而言，人類αvβ6蛋白質在螢光偏振分析中之親和力(pIC50)係8.1，而其在細胞黏附分析中之親和力係：αvβ6 pIC50=8.4；αvβ3 pIC50=6；αvβ5 pIC50=6.9；αvβ8 pIC50=7.7。
就實例2而言，人類αvβ6蛋白質在螢光偏振分析中之親和力(pIC50)係7.8，而其在細胞黏附分析中之親和力係：αvβ6 pIC50=8.4；αvβ3 pIC50=6；αvβ5 pIC50=6.8；αvβ8 pIC50=7.7。
就實例3而言，人類αvβ6蛋白質在螢光偏振分析中之親和力(pIC50)係8.2，而其在細胞黏附分析中之親和力係：αvβ6 pIC50=8.2；αvβ3 pIC50=6；αvβ5 pIC50=6.9；αvβ8 pIC50=7.7。
就實例4而言，人類αvβ6蛋白質在螢光偏振分析中之親和力(pIC50)係8.2，而其在細胞黏附分析中之親和力係：αvβ6 pIC50=8.6；αvβ3 pIC50=6.9；αvβ5 pIC50=7.5；αvβ8 pIC50=7.8。
就實例5而言，人類αvβ6蛋白質在螢光偏振分析中之親和力(pIC50)係7.8，而其在細胞黏附分析中之親和力係αvβ6 pIC50=8.1；αvβ3 pIC50=6.1；αvβ5 pIC50=6.6；αvβ8 pIC50=7.4。
就實例6而言，人類αvβ6蛋白質在螢光偏振分析中之親和力(pIC50)係7.7，而其在細胞黏附分析中之親和力係：αvβ6 pIC50=8.1； αvβ3 pIC50=5.8；αvβ5 pIC50=6.6；αvβ8 pIC50=7.3。
就實例7而言，人類αvβ6蛋白質在螢光偏振分析中之親和力(pIC50)係7.8，而其在細胞黏附分析中之親和力係：αvβ6 pIC50=8.4；αvβ3 pIC50=6.7；αvβ5 pIC50=7.4；αvβ8 pIC50=7.3。

Claims (29)

  1. 一種式(I)化合物或其鹽， 其中R1表示氫原子、甲基或乙基；R2表示氫原子或氟原子；R3表示氫原子、甲基或乙基。
  2. 如請求項1之化合物或其鹽，其中R1表示甲基，R2表示氫原子且R3表示甲基。
  3. 如請求項1之化合物或其鹽，其中R1表示甲基，R2表示氫原子且R3表示氫原子。
  4. 如請求項1之化合物或其鹽，其中R1表示甲基，R2表示氟原子且R3表示甲基。
  5. 如請求項1之化合物或其鹽，其中R1表示氫原子，R2表示氫原子且R3表示氫原子。
  6. 如請求項1之化合物或其鹽，其中R1表示乙基，R2表示氫原子且R3表示甲基。
  7. 如請求項1之化合物或其鹽，其中R1表示乙基，R2表示氫原子且R3表示乙基。
  8. 如請求項1之化合物或其鹽，其中R1表示氫原子，R2表示氫原子且R3表示甲基。
  9. 一種式(I)化合物， 其中R1表示氫原子、甲基或乙基；R2表示氫原子或氟原子；R3表示氫原子、甲基或乙基。
  10. 如請求項9之化合物，其係選自：3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸；3-(3-(5-甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸；3-(3-(5-乙基-3-甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸；3-(3-(1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸；3-(3-(3,5-二乙基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸；3-(3-(4-氟-3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸；3-(3-(3-甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸。
  11. 如請求項1之化合物，其係：3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫 -1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸：
  12. 如請求項1之化合物，其係(S)-3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酶：
  13. 如請求項1之化合物，其係：3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸鹽酸鹽。
  14. 如請求項1之化合物，其係(S)-3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸鹽酸鹽。
  15. 如請求項1至14中之任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其係用於治療。
  16. 如請求項1至14中之任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其係用於治療其中需要αvβ6受體拮抗劑的疾病或病症。
  17. 如請求項1至14中之任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其係用於治療特發性肺纖維化。
  18. 一種如請求項1至14中之任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽於製造用於治療人類中可因拮抗αvβ6受體而受益之病變的藥物上之用途。
  19. 一種如請求項1至14中之任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽於製造用於預防人類中可因拮抗αvβ6受體而受益之病變的藥物上之用途。
  20. 一種如請求項1至14中之任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽於製造用於治療人類的纖維變性疾病的藥物上之用途。
  21. 一種如請求項1至14中之任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽於製造用於預防人類的纖維變性疾病的藥物上之用途。
  22. 一種如請求項1至14中之任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽於製造用於治療人類特發性肺纖維化的藥物上之用途。
  23. 一種如請求項1至14中之任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽於製造用於預防人類特發性肺纖維化的藥物上之用途。
  24. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至14中之任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽及一或多種醫藥上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。
  25. 一種如請求項1至14中之任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽於製造用於治療其中需要αvβ6受體拮抗劑的疾病或病症的藥物上之用途。
  26. 一種式(II)化合物或其鹽， 其中R1表示氫原子、甲基或乙基；R2表示氫原子或氟原子；R3表示氫原子、甲基或乙基；且R4係C1至C6烷基。
  27. 如請求項26之化合物，其中R4表示第三丁基、異丙基、乙基或甲基。
  28. 如請求項27之化合物，其係3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸甲酯。
  29. 如請求項27之化合物，其係3-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-1-基)苯基)-4-((R)-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁酸第三丁酯。
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