TW201532628A - 玻尿酸合成促進劑、HAS2mRNA表現促進劑、具有玻尿酸合成促進作用的醫藥品、食品或化妝料及具有HAS2mRNA表現促進作用的醫藥品、食品或化妝料 - Google Patents

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Abstract

本發明的課題為提供[使用由安全性高的千張紙得到的分劃物或成分之玻尿酸合成促進劑]、[使用由安全性高的千張紙得到的分劃物或成分之HAS2mRNA表現促進劑]、[含有本發明的玻尿酸合成促進劑，具有玻尿酸合成促進作用的醫藥品、食品或化妝料]及[含有本發明的HAS2mRNA表現促進劑，具有HAS2mRNA表現促進作用的醫藥品、食品或化妝料]。 本發明的解決手段為一種玻尿酸合成促進劑或HAS2mRNA表現促進劑，含有以由千張紙的種子藉由水性有機溶劑萃取的分劃物，且至少包含金黃酮之第一分劃物，將第一分劃物精製而得的其他的分劃物或金黃酮為有效成分。而且，一種醫藥品、食品或化妝料含有本發明的玻尿酸合成促進劑或HAS2mRNA表現促進劑。       【代表圖】

Description

玻尿酸合成促進劑、HAS2mRNA表現促進劑、具有玻尿酸合成促進作用的醫藥品、食品或化妝料及具有HAS2mRNA表現促進作用的醫藥品、食品或化妝料
本發明是關於玻尿酸合成促進劑(hyaluronic acid synthesis promoter)、HAS2mRNA表現促進劑(HAS2mRNA expression promoter)、具有玻尿酸合成促進作用的醫藥品、食品或化妝料及具有HAS2mRNA表現促進作用的醫藥品、食品或化妝料。
玻尿酸(也稱為透明質酸(hyaluronan))為由N-乙醯葡萄胺糖(N‐acetylglucosamine)及葡萄糖醛酸(glucuronic acid)構成的高分子(醣胺聚多醣 (glycosaminoglycan))，具有高的水分保持能力。玻尿酸已知是當作含有水的凝膠(gel)狀的物質廣見於活體內的細胞外基質(extracellular matrix)，參與生物組織(biological tissue)(特別是皮膚組織)的黏彈性(viscoelasticity)保持、生物組織的保濕、關節部軟骨的功能維持等。而且，玻尿酸也具有阻止高分子物質由細胞外進入到細胞內、調節細胞的移動或增殖、成為訊息傳遞(signal transduction)的場所等的功能。
可是，活體內的玻尿酸的量因各種壓力、紫外線、老化(aging)等而降低。已知有活體內的玻尿酸的量一減少，就發生因乾燥造成的皮膚的不正常(皺紋、鬆弛及乾燥粗糙)或關節痛等的症狀。活體內的玻尿酸的量減少的直接的原因可舉出：由於玻尿酸酶(hyaluronidase)(玻糖醛酸酶：hyaluronidase)或紫外線而使玻尿酸被分解，或活體內的玻尿酸的產生量減少。
因此，若能補充或增加活體內的玻尿酸的量，則可期待皮膚的不正常或關節痛等的症狀的預防、抑制及改善或正常化。
以往作為活體內的具有玻尿酸的合成促進作用的成分，在表皮中視網酸(retinoic acid)，在真皮中TGF-β1廣為人知。而且，活體內的具有玻尿酸的合成促進作用之物已知有各式各樣的天然產物及其分劃物(fraction)(例如來自蘑菇(Agaricus)的萃取物)(例如參照引用文獻1)。
另一方面，已知有含有以來自千張紙(Oroxylum indicum，有時也被稱為玉蝴蝶或木蝴蝶，詳細於後述。)的萃取物為有效成分的抗氧化劑(例如參照引用文獻2)。此外，千張紙為在原產地有時也被當作食用而被使用之安全的天然產物。
可是，就含有以如下為有效成分的玻尿酸合成促進劑仍未知：來自千張紙的萃取物或其精製物，特別是由千張紙的種子藉由水性有機溶劑(aqueous organic solvent)萃取的分劃物、由該分劃物分劃的規定的分劃物、或包含於千張紙的金黃酮(chrysin)。
而且，已知有在活體內(特別是細胞表面)進行玻尿酸的合成的酵素之HAS2(玻尿酸合成酵素2)。HAS2是藉由HAS2mRNA表現而被合成。也就是說，為了補充或增加活體內的玻尿酸的量，促進HAS2mRNA的表現有效。
與玻尿酸合成促進劑的情形一樣，就含有以如下為有效成分的HAS2mRNA表現促進劑也未知：由千張紙的種子藉由水性有機溶劑萃取的分劃物、由該分劃物分劃的規定的分劃物、或包含於千張紙的金黃酮。
[專利文獻1] 日本國特開2013-035835號公報  [專利文獻2] 日本國特開2006-321730號公報
本發明其目的是提供[使用由安全性高的千張紙得到的分劃物或成分之玻尿酸合成促進劑]。而且，其目的也是提供[使用由安全性高的千張紙得到的分劃物或成分之HAS2mRNA表現促進劑]。而且，其目的也是提供[含有本發明的玻尿酸合成促進劑，具有玻尿酸合成促進作用的醫藥品、食品或化妝料]。進而，其目的也是提供[含有本發明的HAS2mRNA表現促進劑，具有HAS2mRNA表現促進作用的醫藥品、食品或化妝料]。
本發明的發明者們專心致力研究的結果，判明了來自千張紙的萃取物或其精製物之中，[由千張紙的種子藉由水性有機溶劑萃取的分劃物]、[由該分劃物分劃的規定的分劃物]及[金黃酮]具有玻尿酸合成促進作用。而且，由針對其機制(mechanism)的研究，也判明了上述各分劃物及成分具有HAS2mRNA表現促進作用。 本發明的發明者們由以上的知識達到了完成本發明。本發明由下列的事項構成。
[1]、一種玻尿酸合成促進劑，含有以由千張紙的種子藉由水性有機溶劑萃取的分劃物，且至少包含金黃酮之第一分劃物為有效成分。
[2]、一種玻尿酸合成促進劑，含有以藉由水及乙酸乙酯(ethyl acetate)對由千張紙的種子藉由水性有機溶劑萃取的第一分劃物進行液液分配(liquid-liquid partition)時，被分配於前述乙酸乙酯側的分劃物，且至少包含金黃酮之第二分劃物為有效成分。
[3]、一種玻尿酸合成促進劑，含有以藉由水及乙酸乙酯對由千張紙的種子藉由水性有機溶劑萃取的第一分劃物進行液液分配，藉由90%甲醇(methanol)及己烷(hexane)進一步對被分配於前述乙酸乙酯側的第二分劃物進行液液分配時，被分配於前述90%甲醇側的分劃物，且至少包含金黃酮之第三分劃物為有效成分。
[4]、一種玻尿酸合成促進劑，含有以藉由水及乙酸乙酯對由千張紙的種子藉由水性有機溶劑萃取的第一分劃物進行液液分配，藉由90%甲醇及己烷進一步對被分配於前述乙酸乙酯側的第二分劃物進行液液分配，藉由矽膠層析法(silica gel chromatography)對被分配於前述90%甲醇側的第三分劃物進行分劃時，藉由氯仿(chloroform)：甲醇為9：1的混合溶劑由矽膠溶析(elution)的分劃物，且至少包含金黃酮之第四分劃物為有效成分。
[5]、一種玻尿酸合成促進劑，含有以金黃酮為有效成分。
[6]、一種HAS2mRNA表現促進劑，含有以由千張紙的種子藉由水性有機溶劑萃取的分劃物，且至少包含金黃酮之第一分劃物為有效成分。
[7]、一種HAS2mRNA表現促進劑，含有以藉由水及乙酸乙酯對由千張紙的種子藉由水性有機溶劑萃取的第一分劃物進行液液分配時，被分配於前述乙酸乙酯側的分劃物，且至少包含金黃酮之第二分劃物為有效成分。
[8]、一種HAS2mRNA表現促進劑，含有以藉由水及乙酸乙酯對由千張紙的種子藉由水性有機溶劑萃取的第一分劃物進行液液分配，藉由90%甲醇及己烷進一步對被分配於前述乙酸乙酯側的第二分劃物進行液液分配時，被分配於前述90%甲醇側的分劃物，且至少包含金黃酮之第三分劃物為有效成分。
[9]、一種HAS2mRNA表現促進劑，含有以藉由水及乙酸乙酯對由千張紙的種子藉由水性有機溶劑萃取的第一分劃物進行液液分配，藉由90%甲醇及己烷進一步對被分配於前述乙酸乙酯側的第二分劃物進行液液分配，藉由矽膠層析法對被分配於前述90%甲醇側的第三分劃物進行分劃時，藉由氯仿：甲醇為9：1的混合溶劑由矽膠溶析的分劃物，且至少包含金黃酮之第四分劃物為有效成分。
[10]、一種HAS2mRNA表現促進劑，含有以金黃酮為有效成分。
[11]、一種具有玻尿酸合成促進作用的醫藥品、食品或化妝料，含有上述[1]~[5]中任一項之玻尿酸合成促進劑。
[12]、一種具有HAS2mRNA表現促進作用的醫藥品、食品或化妝料，含有上述[6]~[10]中任一項之HAS2mRNA表現促進劑。
依照本發明，如由後述的試驗例也得知，可提供[使用由安全性高的千張紙得到的分劃物或成分之玻尿酸合成促進劑]、[使用由安全性高的千張紙得到的分劃物或成分之HAS2mRNA表現促進劑]、[含有本發明的玻尿酸合成促進劑，具有玻尿酸合成促進作用的醫藥品、食品或化妝料]以及[含有本發明的HAS2mRNA表現促進劑，具有HAS2mRNA表現促進作用的醫藥品、食品或化妝料]。
此外，在本說明書及各圖面中，就濃度僅記載為[%]時是表示以體積/體積(V/V)算出的百分濃度。 而且，在本說明書及各圖面中，混合溶劑的成分比率(例如上述的[9：1])是表示溶劑的體積的比率。
本發明中的金黃酮(chrysin，5,7-dihydroxy-2-phenyl-4H-chromen-4-one)是下列的式（1）所記載的化合物， [化學式1]。
以下，就本發明的玻尿酸合成促進劑、HAS2mRNA表現促進劑、具有玻尿酸合成促進作用的醫藥品、食品或化妝料及具有HAS2mRNA表現促進作用的醫藥品、食品或化妝料根據實施形態進行說明。
[實施形態] 圖1是用以說明實施形態1~5中的第一分劃物~第四分劃物及金黃酮而顯示之流程圖。此外，在圖1中第四分劃物與金黃酮之間以虛線連結如後述，是為了實施形態5中的金黃酮不被限定於由第四分劃物單離(isolation)者。
本發明的玻尿酸合成促進劑及HAS2mRNA表現促進劑含有以上述[1]~[10]所記載的第一分劃物、第二分劃物、第三分劃物、第四分劃物或金黃酮為有效成分。 以下就上述的各有效成分藉由圖1及實施形態1~5進行說明。而且，就上述的含有玻尿酸合成促進劑或HAS2mRNA表現促進劑的醫藥品、食品或化妝料藉由實施形態6進行說明。
[實施形態1] 與實施形態1有關的玻尿酸合成促進劑及HAS2mRNA表現促進劑含有以由千張紙的種子藉由水性有機溶劑萃取的分劃物，且至少包含金黃酮之第一分劃物為有效成分。
千張紙(Oroxylum indicum)為紫葳科(Bignoniaceae)千張紙屬(Oroxylum)，樹高7m~12m的落葉高木植物。原產地為東南亞、印度及中國，在該等地域中自然生長於山的斜面或沿著溪流自然生長。千張紙的開花期為7~8月，種子在10月~12月可採集。千張紙的種子為可在該等地域中得到的一般流通品。
此外，在東南亞等千張紙的果實、新葉、花苞等當作食用品被使用。而且，千張紙被視為具有藥效，被使用於聲音嘶啞或語言障礙的治療、傷害的治療(止血)、健胃、止咳等。
千張紙的種子除了胚芽、胚乳(endosperm)之外也具有翼狀的薄膜(用以使種子飛散到遠方的部位)，整體上成薄的片狀體。 為了得到第一分劃物所使用的千張紙的種子為附有上述薄膜者也可以，且除去上述薄膜者也可以。在本說明書及各圖面中，[千張紙的種子]包含附有上述薄膜者與除去上述薄膜者的兩方。
為了得到與實施形態1有關的玻尿酸合成促進劑及HAS2mRNA表現促進劑，例如可使用將由千張紙採集的種子弄乾使其自然乾燥的乾燥物。而且，也能使用千張紙的種子的無加工物、加熱乾燥物、冷凍乾燥物、冷凍物等。
當進行萃取時，例如原封不動使用千張紙的種子也可以，且切碎使用也可以，且做成粉末狀使用也可以。
在本說明書中，[水性有機溶劑]是指以親水性的有機溶劑為主成分的溶劑。[親水性的有機溶劑]是指不與水分離而混合的有機溶劑。親水性的有機溶劑可舉例說明低級脂族醇(lower aliphatic alcohol)及丙酮(acetone)。低級脂族醇可舉例說明甲醇、乙醇(ethanol)、丙醇(propanol)、丁醇(butanol)等的一元醇(monohydric alcohol)，或1,3-丁二醇(1,3-butylene glycol)、丙二醇(propylene glycol monoacetate)、1,3-丙二醇(1, 3-propanediol)、戊二醇(pentylene glycol)、異戊二醇(isoprene glycol)等的多元醇(polyhydric alcohol)。 水性有機溶劑含有兩種類以上的有機溶劑也可以。
水性有機溶劑含有水也可以。此外，當水性有機溶劑含有水時，親水性的有機溶劑是否為主成分是考慮去掉構成成分之中的水。也就是說，即使是水比親水性的有機溶劑多的情形，若有機溶劑之中親水性的有機溶劑為主成分，則為在本說明書中所謂的[水性有機溶劑]。 當水性有機溶劑含有水時，水性有機溶劑含有30%以上的上述親水性的有機溶劑較佳，含有50%以上更佳。
第一分劃物的具體例可舉出由千張紙的種子藉由使用水性有機溶劑的萃取而得到的萃取液，該萃取液的稀釋液或濃縮液，將該萃取液乾燥而得到的乾燥物及萃取液、萃取液的稀釋液或濃縮液、乾燥物的粗精製物或精製物。
此外，如後述的試驗例所示，在由千張紙的種子使用水性有機溶劑而萃取的分劃物包含有金黃酮。因此，只要不進行像由萃取液、濃縮液、稀釋液、乾燥物、粗精製物、精製物等除去金黃酮的處理，[包含金黃酮]之條件就滿足。此點就後述的第二分劃物~第四分劃物也一樣。
萃取只要能將包含於千張紙的種子的可溶性的分劃物溶析於水性有機溶劑，就未被特別限定，可依照習用方法進行。在萃取時無須採用特殊的方法或裝置，可採用任意的方法或裝置。
萃取的方法的例子可舉出在常溫萃取的方法，或加熱到水性有機溶劑的沸點以下的溫度而萃取的方法，在加熱回流下萃取的方法。此時，僅浸漬千張紙的種子也可以，且與溶劑一起攪拌也可以。水性有機溶劑的量例如能以萃取原料的5~50倍量(重量比)。萃取時間例如能以1~72小時。萃取溫度例如能以室溫~95℃。
在進行利用水性有機溶劑的萃取前，進行使用戊烷(pentane)、己烷(hexane)、庚烷(heptane)、辛烷(octane)、石油醚(petroleum ether)等的非極性溶劑(nonpolar solvent)的脫脂處理也可以。
可藉由在使可溶性的分劃物溶析出後，施以過濾、離心分離等的處理去掉萃取殘渣(extraction residue)得到萃取液。為了由所得到的萃取液得到該萃取液的稀釋液、濃縮液、乾燥物、粗精製物、精製物等，依照習用方法更進一步進行稀釋、濃縮、乾燥、精製等的處理也可以。
進行以脫色、脫臭等為目的的精製當作第一分劃物的精製也可以。該精製可使用例如各種吸附處理或各種分離處理(例如使用活性碳、吸附樹脂、離子交換樹脂、矽膠、凝膠過濾材的處理)。此點在後述的第二分劃物~第四分劃物中也一樣。
[實施形態2] 與實施形態2有關的玻尿酸合成促進劑及HAS2mRNA表現促進劑含有以藉由水及乙酸乙酯對由千張紙的種子藉由水性有機溶劑萃取的第一分劃物進行液液分配時，被分配於乙酸乙酯側的分劃物，且至少包含金黃酮之第二分劃物為有效成分。
第一分劃物可藉由上述實施形態1所記載的方法得到。
液液分配只要可由第一分劃物分離第二分劃物就未被特別限定，可依照習用方法進行。液液分配的實施無須採用特殊的方法或裝置，可採用任意的方法或裝置。
[實施形態3] 與實施形態3有關的玻尿酸合成促進劑及HAS2mRNA表現促進劑含有以藉由水及乙酸乙酯對由千張紙的種子藉由水性有機溶劑萃取的第一分劃物進行液液分配，藉由90%甲醇及己烷進一步對被分配於乙酸乙酯側的第二分劃物進行液液分配時，被分配於90%甲醇側的分劃物，且至少包含金黃酮之第三分劃物為有效成分。
第一分劃物可藉由上述實施形態1所記載的方法得到。第二分劃物可藉由上述實施形態2所記載的方法得到。
液液分配只要可由第二分劃物分離第三分劃物就未被特別限定，可依照習用方法進行。液液分配的實施無須採用特殊的方法或裝置，可採用任意的方法或裝置。
[實施形態4] 與實施形態4有關的玻尿酸合成促進劑及HAS2mRNA表現促進劑含有以藉由水及乙酸乙酯對由千張紙的種子藉由水性有機溶劑萃取的第一分劃物進行液液分配，藉由90%甲醇及己烷進一步對被分配於乙酸乙酯側的第二分劃物進行液液分配，藉由矽膠層析法對被分配於90%甲醇側的第三分劃物進行分劃時，藉由氯仿：甲醇為9：1的混合溶劑由矽膠溶析的分劃物，且至少包含金黃酮之第四分劃物為有效成分。
第一分劃物可藉由上述實施形態1所記載的方法得到。第二分劃物可藉由上述實施形態2所記載的方法得到。第三分劃物可藉由上述實施形態3所記載的方法得到。
矽膠層析法只要可由第三分劃物分離第四分劃物就未被特別限定，可依照習用方法進行。進行矽膠層析法時無須採用特殊的方法或裝置，可採用任意的方法或裝置。
[實施形態5] 與實施形態5有關的玻尿酸合成促進劑及HAS2mRNA表現促進劑含有以金黃酮為有效成分。
金黃酮是下列的式（1）所記載的化合物， [化學式1]。
金黃酮如後述的試驗例所示，包含於上述的第一分劃物~第四分劃物。玻尿酸合成促進劑及HAS2mRNA表現促進劑所使用的金黃酮由千張紙的種子得到者(參照後述的試驗例)也可以，且由千張紙的種子以外的天然產物，且含有金黃酮的天然產物得到者也可以，且為市售品或合成品也可以。
在由千張紙的種子得到金黃酮的情形下，例如可由實施形態4所記載的第四分劃物單離。金黃酮的單離、精製可適合使用矽膠層析法及凝膠過濾層析法(gel filtration chromatography)，惟本發明不是被限定於此。
矽膠層析法及凝膠過濾層析法只要可將金黃酮單離、精製就未被特別限定，可依照習用方法進行。進行矽膠層析法及凝膠過濾層析法時無須採用特殊的方法或裝置，可採用任意的方法或裝置。
與上述實施形態1~5有關的玻尿酸合成促進劑及HAS2mRNA表現促進劑可透過其玻尿酸合成促進作用及HAS2mRNA表現促進作用補充或增加活體內的玻尿酸的量，其結果，可期待皮膚的不正常或關節痛等的症狀的預防、抑制及改善或正常化。但是，與本發明有關的玻尿酸合成促進劑及HAS2mRNA表現促進劑除了該等用途以外，也能使用於對於發揮玻尿酸合成促進作用及HAS2mRNA表現促進作用具有意義的所有的用途。
[實施形態6] 與實施形態6有關的醫藥品、食品或化妝料，含有上述實施形態1~5中任一實施形態之玻尿酸合成促進劑或HAS2mRNA表現促進劑。
當與實施形態6有關的醫藥品為內用醫藥品時，給藥方法未被特別限定，例如能以：口服給藥、直腸內給藥等的經腸給藥、經鼻給藥等的黏膜給藥、靜脈內給藥、皮下給藥等的注射給藥。本發明的內用醫藥品的劑型能以適合給藥方法的形態，例如能以:錠劑(tablet)、散劑、細粒劑、顆粒劑、膠囊劑、粉末、丸劑、錠劑(troche)等的固體劑；溶液、懸浮液、乳劑、糖漿劑、注射劑等的液劑；凝膠狀的製劑。將實施形態1~5中任一實施形態之玻尿酸合成促進劑或HAS2mRNA表現促進劑的純品、精製物、粗精製物等原封不動地給藥當作與實施形態6有關的醫藥品也可以，也可與藥理上被容許的賦形劑(excipient)一起給藥。可使用單醣(monosaccharide)類、雙醣(disaccharide)類、多醣(polysaccharide)類、無機鹽類、油脂、蒸餾水等當作賦形劑，可使用通常可使用者當作製劑。在將與實施形態6有關的內用醫藥品製劑化時，也可使用黏結劑、潤滑劑、分散劑、懸浮劑、乳化劑、稀釋劑、緩衝劑、抗氧化劑、細菌抑制劑等的添加劑。
當與實施形態6有關的醫藥品為外用醫藥品時，其形態未被特別限定，例如能以：軟膏劑、膏劑、泥罨劑(cataplasm)、膠帶劑、外用劑。與實施形態6有關的外用醫藥品，除了實施形態1~5中任一實施形態之玻尿酸合成促進劑或HAS2mRNA表現促進劑之外，也可依照需要含有其他的醫藥成分或賦形劑等。在製造與實施形態6有關的外用醫藥品時也可使用黏結劑、分散劑、懸浮劑、乳化劑、稀釋劑、緩衝劑、抗氧化劑、細菌抑制劑等的添加劑。
與實施形態6有關的醫藥品係玻尿酸合成促進劑或HAS2mRNA表現促進劑的含有的量可依照各種資料(例如內用醫藥品的話為給藥方法、劑型，玻尿酸合成促進劑或HAS2mRNA表現促進劑本身的有效給藥量、作為製劑的有效給藥量等的資料)設定最佳的量。
與實施形態6有關的食品的形態例如能以實施形態1~5中任一實施形態之玻尿酸合成促進劑或HAS2mRNA表現促進劑的純品、實施形態1~5中任一實施形態之玻尿酸合成促進劑或HAS2mRNA表現促進劑的部分精製品、含有玻尿酸合成促進劑或HAS2mRNA表現促進劑的漿糊(paste)、摻合玻尿酸合成促進劑或HAS2mRNA表現促進劑的一般食品。具體的形態可舉出保健飲料、果凍、餅乾、茶、錠劑、丸劑、軟膠囊劑、硬膠囊劑、散劑、細粒劑、顆粒劑，惟若是可作為食品提供的形態，則任何形態都能使用。在製造與實施形態6有關的食品時，副原料也可使用賦形劑、黏結劑、潤滑劑、分散劑、懸浮劑、乳化劑、稀釋劑、緩衝劑、抗氧化劑、細菌抑制劑等的添加劑。
與實施形態6有關的化妝料的形態例如能以化妝水、美容液、乳液、乳霜(cream)、凝膠、面膜(pack)、美容粉餅、洗面乳、浴用劑等，惟若是可作為化妝料使用的形態，則任何形態都能使用。與實施形態6有關的化妝料除了實施形態1~5中任一實施形態之玻尿酸合成促進劑或HAS2mRNA表現促進劑之外，也可依照需要含有摻合於化妝料的各種摻合成分。摻合成分例如可使用固體油、半固體油、液體油、低分子保濕劑、高分子保濕劑、脂溶性保濕劑、潤滑劑(emollient)、界面活性劑(surface active agent)、防腐劑、抗氧化劑(antioxidant)、pH調節劑(pH adjuster)、乙醇、水。
與上述實施形態6有關的醫藥品、食品及化妝料可透過與實施形態1~5有關的玻尿酸合成促進劑及HAS2mRNA表現促進劑所具有的玻尿酸合成促進作用及HAS2mRNA表現促進作用補充或增加活體內的玻尿酸的量，其結果，可期待皮膚的不正常或關節痛等的症狀的預防、抑制及改善或正常化。但是，與實施形態6有關的醫藥品、食品及化妝料除了該等用途以外，也能使用於對於發揮玻尿酸合成促進作用及HAS2mRNA表現促進作用具有意義的所有的用途。
此外，雖然實施形態1~6所記載的玻尿酸合成促進劑、HAS2mRNA表現促進劑、醫藥品、食品及化妝料為對人類適合被適用，但只要可達成各個作用效果，也能適用於人類以外的動物。
[試驗例] 以下舉出[1、將第一分劃物~第四分劃物及金黃酮分劃、單離的試驗例]、[2、用以確認玻尿酸合成促進作用的試驗例]及[3、用以確認HAS2mRNA表現促進作用的試驗例]當作試驗例而更詳細地說明本發明。此外，以下的試驗例是就分劃等的方法或作用顯示確認的結果，本發明絲毫不被以下的試驗例限制。
1、將第一分劃物~第四分劃物及金黃酮分劃、單離的試驗例 圖2是用以說明試驗例1~5中的試樣a~e而顯示之流程圖。此外，因試驗例6中的試樣f是與試樣a~e不同系統的試樣，故在圖2未記載。 以下藉由試驗例1~試驗例6就第一分劃物~第四分劃物及金黃酮的分劃、單離進行說明。 此外，在以下的試驗例中，水使用蒸餾水，甲醇、乙酸乙酯及己烷使用山一化學工業股份有限公司的日本生產一級的甲醇、乙酸乙酯及己烷。而且，實驗器具使用一般品(例如100mL錐形瓶(Erlenmeyer flask)及30mL錐形瓶，岩城硝子股份有限公司的錐形瓶)
[試驗例1] 試驗例1是用以得到由千張紙的種子藉由水性有機溶劑萃取的分劃物，且至少包含金黃酮的第一分劃物的試驗例。如圖2所示，以在試驗例1被分劃的第一分劃物當作試樣a。 在試驗例1中使用甲醇當作水性有機溶劑。
首先，準備千張紙(Oroxylum indicum)的種子1kg。千張紙的種子使用一般流通品的乾燥物(附有翼狀的薄膜者)。 其次，以剪刀將千張紙的種子剪裁弄碎，將其浸在甲醇進行了萃取。萃取在不鏽鋼製的容器之中進行。萃取方法以冷浸(cold extraction)(室溫、甲醇20L、萃取時間24小時)，合計進行了3次萃取。
然後，在室溫下進行自然過濾，得到萃取液(螢光黃綠色的透明的液體)。進而對該萃取液減壓濃縮(40℃、60mmHg)，得到黑色的固體之試樣a(第一分劃物)31.2g。以千張紙的種子的重量(1kg)為基準的固體收率(solid yield)為3.12%。
此外，雖然不進行試樣a是否包含金黃酮的試驗，但如後述的試驗例5所示，因重複試樣a的分劃、精製的結果得到了金黃酮，故顯然試樣a包含金黃酮。此點在後述的試驗例2~試驗例4中的試樣b~試樣d也一樣。
[試驗例2] 試驗例2是用以得到藉由水及乙酸乙酯對由千張紙的種子藉由水性有機溶劑萃取的第一分劃物進行液液分配時，被分配於乙酸乙酯側的分劃物，且至少包含金黃酮之第二分劃物的試驗例。以在試驗例2被分劃的第二分劃物當作試樣b。
首先，將水800mL加到在試驗例1得到的試樣a(第一分劃物)31.2g當作懸浮液，對該懸浮液合計進行了3次利用乙酸乙酯的萃取(室溫、乙酸乙酯1000mL)。萃取使用分液漏斗進行。 然後回收乙酸乙酯，進行減壓濃縮(40℃、75mmHg)，得到黑色的固體之試樣b(第二分劃物)11.8g。以千張紙的種子的重量為基準的固體收率為1.18%。
[試驗例3] 試驗例3是用以得到藉由水及乙酸乙酯對由千張紙的種子藉由水性有機溶劑萃取的第一分劃物進行液液分配，藉由90%甲醇及己烷進一步對被分配於乙酸乙酯側的第二分劃物進行液液分配時，被分配於90%甲醇側的分劃物，且至少包含金黃酮之第三分劃物的試驗例。以在試驗例3被分劃的第三分劃物當作試樣c。
首先，將90%甲醇300mL加到在試驗例2得到的試樣b(第二分劃物)11.8g當作懸浮液，對該懸浮液合計進行了3次利用己烷的萃取(室溫、己烷300mL)。萃取使用分液漏斗進行。 然後回收90%甲醇，進行減壓濃縮(40℃、75mmHg)，得到黑色的固體之試樣c(第三分劃物)4.0g。以千張紙的種子的重量為基準的固體收率為0.40%。
[試驗例4] 試驗例4是用以得到藉由水及乙酸乙酯對由千張紙的種子藉由水性有機溶劑萃取的第一分劃物進行液液分配，藉由90%甲醇及己烷進一步對被分配於乙酸乙酯側的第二分劃物進行液液分配，藉由矽膠層析法對被分配於90%甲醇側的第三分劃物進行分劃時，藉由氯仿：甲醇為9：1的混合溶劑由矽膠溶析的分劃物，且至少包含金黃酮之第四分劃物的試驗例。以在試驗例4被分劃的第四分劃物當作試樣d。
首先，以少量(數十mL左右)的氯仿及甲醇的混合溶劑使在試驗例3得到的試樣c(第三分劃物)4.0g溶解當作溶液。其次，將該溶液放在填充了矽膠(和光純藥股份有限公司的Wakosil C-200)的管柱(column)(25mmφ×290mm)。 接著，藉由氯仿：甲醇=9：1的混合溶劑300mL進行溶析，得到部分A-1。然後，藉由氯仿：甲醇=4：1的混合溶劑300mL、氯仿：甲醇=1：1的混合溶劑300mL、甲醇300mL依次進行溶析，依序得到部分A-2、部分A-3、部分A-4。 其中對部分A-1進行減壓濃縮(40℃、60mmHg)，得到咖啡色~黑綠色萃取物狀的試樣d(第四分劃物)2.32g。以千張紙的種子的重量為基準的固體收率為0.232%。
[試驗例5] 試驗例5是用以得到金黃酮的試驗例。以在試驗例5被單離的金黃酮當作試樣e。 此外，在試驗例5中的矽膠層析法及凝膠過濾層析法中，由各部分(fraction)採取少量(20~30mL左右)的樣品，以TLC確認了點(spot)。點是藉由對顏色或UV燈的反應而進行了確認。就點的樣子一樣的部分(fraction)係彙整成一個，當作一個部分處理。每一個部分(fraction)的溶液的量未必一定，也有一邊看溶液的顏色等，一邊區分部分(fraction)的情形。
首先，以少量的氯仿及甲醇的混合溶劑使在試驗例4得到的試樣d(第四分劃物)之中由後半的部分(fraction)得到的份之2.27g溶解當作溶液。其次，將該溶液放在填充了矽膠(和光純藥股份有限公司的Wakosil C-200)的管柱(25mmφ×340mm)。 接著，藉由氯仿：甲醇=9：1的混合溶劑500mL進行溶析，由前半的3部分(fraction)得到部分B-1，由後半的2部分(fraction)得到部分B-2。然後，藉由甲醇300mL進行溶析，得到部分B-3。 其中對部分B-1進行減壓濃縮(40℃、60mmHg)，得到來自部分B-1的分劃物1.04g。
進而，以少量的氯仿及甲醇的混合溶劑使來自部分B-1的分劃物1.04g溶解當作溶液。其次，將該溶液放在填充了矽膠(和光純藥股份有限公司的Wakosil C-200)的管柱(25mmφ×275mm)。 接著，藉由氯仿500mL進行溶析，由前半的1部分(fraction)得到部分C-1，由後半的3部分(fraction)得到部分C-2。然後，藉由氯仿：甲醇=19：1的混合溶劑300mL、甲醇300mL依次進行溶析，依序得到部分C-3、部分C-4。其中對部分C-2進行減壓濃縮(40℃、60mmHg)，得到來自部分C-2的分劃物0.35g。
進而，以少量的氯仿及甲醇的混合溶劑使來自部分C-2的分劃物0.35g溶解當作溶液。其次，將該溶液放在填充了矽膠(和光純藥股份有限公司的Wakosil C-200)的管柱(25mmφ×280mm)。 接著，藉由氯仿500mL進行溶析，由前半的1部分(fraction)得到部分D-1，由後半的3部分(fraction)得到部分D-2。然後，藉由甲醇300mL進行溶析，得到部分D-3。 其中對部分D-2進行減壓濃縮(40℃、60mmHg)，得到來自部分D-2的分劃物0.31g。
進而，以少量的氯仿及甲醇的混合溶劑使來自部分D-2的分劃物0.31g溶解當作溶液。其次，將該溶液放在填充了層析用的凝膠過濾材(Sigma-Aldrich公司的Sephadex LH-20)的管柱(25mmφ×250mm)。 接著，藉由氯仿：甲醇=1：1的混合溶劑500mL進行溶析，由最初的2部分(fraction)得到部分E-1，由下一個1部分(fraction)得到部分E-2，由再下一個1部分(fraction)得到部分E-3。 其中對部分E-3進行減壓濃縮(40℃、60mmHg)，得到來自部分E-3的分劃物0.07g。
進而，以少量的氯仿及甲醇的混合溶劑使來自部分E-3的分劃物0.07g溶解當作溶液。其次，將該溶液放在填充了層析用的凝膠過濾材(Sigma-Aldrich公司的Sephadex LH-20)的管柱(25mmφ×220mm)。 接著，藉由氯仿：甲醇=1：1的混合溶劑500mL進行溶析，由最初的1部分(fraction)得到部分F-1，由下一個3部分(fraction)得到部分F-2，由再下一個1部分(fraction)得到部分F-3。 其中對部分F-2進行減壓濃縮(40℃、60mmHg)，得到試樣e(金黃酮)約10mg。以千張紙的種子的重量為基準的固體收率為約0.001%。
就如上述被單離的試樣e(金黃酮)藉由核磁共振光譜法取得1H-NMR光譜資料(spectral data)。該資料的取得使用了JEOL RESONANCE股份有限公司的JNM-ECA500。 其結果以下的尖峰(peak)(以概略值，僅記載主要的尖峰)被觀測到，與一般已知的金黃酮的1H-NMR光譜資料大致一致。
1H-NMR(acetone-d6 )：δ(ppm)=6.29(1H，d，J=1.7Hz，H-6)、6.58(1H，d，J=1.7Hz，H-8)、6.79(1H，s，H-3)、7.60(2H，m，H-3’，H-5’)、7.61(1H，m，H-4’)、8.07(2H，dd，J=8.1，1.7Hz，H-2’，H-6’)
而且，就試樣e進行了利用高效液相層析法(high performance liquid chromatography)的分析。該分析使用了島津製作所股份有限公司的二極體陣列偵檢器(diode array detector)SPD-M20A、供給單元(liquid feeding unit)LC-20AB、管柱烘箱(column oven)CTO-20A及資生堂股份有限公司的HPLC管柱CAPCELL PAK MG II 4.6mm I.D.×250mm。在分析中，以A液為磷酸鹽緩衝劑(phosphate buffer)(pH6.5)，以B液為100%甲醇，直線梯度以A：B=95：5到20：80(60分)，管柱溫度(column temperature)以40℃。檢測方法使用了二極體陣列(190-800nm)。
首先，就金黃酮標準品(購自東京化成工業股份有限公司)以上述的條件進行分析，確認了在53.7分產生最大的尖峰。其次，就試樣e以相同的條件進行分析，確認了在52.6分產生最大的尖峰。而且，確認了金黃酮標準品及試樣e的最大尖峰的光譜一致。
如上述，藉由核磁共振光譜法及高效液相層析法可確認了試樣e主要由金黃酮構成。 而且，因試樣e是由試樣a~d分劃、單離，故可確認了試樣a~d也包含金黃酮。
[試驗例6] 試驗例6是用以得到由千張紙的種子藉由水性有機溶劑萃取的分劃物，且至少包含金黃酮的第一分劃物的另一試驗例。以在試驗例6被分劃的第一分劃物當作試樣f。 在試驗例6中使用50%乙醇當作水性有機溶劑。
首先，準備千張紙(Oroxylum indicum)的種子10kg。千張紙的種子使用一般流通品的乾燥物(附有翼狀的薄膜者)。 其次，將千張紙的種子切碎，將其浸在50%乙醇進行了萃取。萃取方法以在加熱回流下的萃取(80℃、50%乙醇150L、萃取時間2小時)。 然後，在室溫下進行自然過濾得到萃取液，進而對該萃取液減壓濃縮(加溫、但是60℃以下)，得到試樣f(第一分劃物)。
2、用以確認玻尿酸合成促進作用的試驗例 [試驗例7] 試驗例7是就本發明中的第一分劃物、第三分劃物、第四分劃物及金黃酮用以確認玻尿酸合成促進作用的試驗例，進行了玻尿酸合成促進作用的測定。
首先，就試驗方法進行說明。 使用含有10%(V/V)胎牛血清(fetal bovine serum)(FBS、購自NICHIREI生物科學股份有限公司(NICHIREI BIOSCIENCE INC.)、CCB公司)最低必需培養基(minimum essential medium)α(MEMα、購自GIBCO、Cat.No.11900-024)當作播散(disseminate)繼代用培養基(medium for subculture)。使用該培養基，將人類新生兒皮膚纖維母細胞(neonatal human dermal fibroblasts)(NB1RGB、購自理研生物資源中心(Riken BioResource Center)、Resource. No. RBRC-RCB022)播散於96井板(well plate)以成為2×104 cells/well。確認在24小時後細胞黏著，為了除去培養基中的血清以無FBS的最低必需培養基α進行了兩次清洗。然後，將化驗(assay)用的培養基之含有0.5%(V/V)胎牛血清最低必需培養基α添加於全井，以成為100μL/well。然後，添加100μL/well的包含各種試樣的培養基(以化驗用的培養基進行調製，以成為終濃度(final concentration)的倍的濃度)及不包含試樣的培養基(對照(control)用)，更進一步進行了72小時培養。
培養結束後，就培養上清使用ELISA測定套件之Quantikine ELISA Hyaluronan Immunoassay (R&D Systems公司)及吸光微盤分析儀之Multiskan Spectrum(Thermo Fisher Scientific股份有限公司(Thermo Fisher Scientific K.K.))，測定了玻尿酸量。而且，藉由中性紅法(neutral red method)測定了細胞生存率。設定以細胞生存率80%為大致的標準，以試樣的濃度不更進一步給予細胞生存率影響的範圍進行了評價。藉由ELISA法進行的玻尿酸量的測定及藉由中性紅法進行的細胞生存率的測定因各自依照測定套件或機器的使用方法藉由習用方法進行，故詳細的說明省略。
試樣係使用試驗例6的試樣f當作第一分劃物，使用試驗例3的試樣c當作第三分劃物，使用試驗例4的試樣d當作第四分劃物，使用試驗例5的試樣e當作金黃酮。
其次，就試驗結果進行說明。 表1是表示試驗例7的結果(各試樣所產生的玻尿酸合成促進作用)的表。此外，在表1中[濃度]是表示培養時的各試樣的濃度，單位為μg/mL。而且，[活性量]是以對照(control)中的玻尿酸產生量為100的情形的玻尿酸產生量，單位為%。進而，[細胞生存率]是以對照中的細胞生存率為100的情形的細胞生存率，單位為%。
[表1] 各試樣所產生的玻尿酸合成促進作用試樣        濃度(μg/mL)   活性量(%)  細胞生存率(%) 試樣f(第一分劃物)  0.78         124         91 試樣f(第一分劃物)  1.56         119         90 試樣f(第一分劃物)  3.13         109         88 試樣f(第一分劃物)  6.25         115         74 試樣c(第三分劃物)  0.20         134         97 試樣c(第三分劃物)  0.39         136         95 試樣c(第三分劃物)  0.78         111         99 試樣c(第三分劃物)  1.56         131         86 試樣d(第四分劃物)  1.56         126         89 試樣d(第四分劃物)  3.13         115         84 試樣e(金黃酮)      0.20         142         96 試樣e(金黃酮)      0.39         138         94 試樣e(金黃酮)      0.78         149         89試樣e(金黃酮)      1.56         119         85
如表1所示，就本發明中的第一分劃物、第三分劃物、第四分劃物及金黃酮，可確認了對人類新生兒皮膚纖維母細胞顯示玻尿酸合成促進作用。而且，於在試驗例7使用的試樣之中，可確認了有試樣c(第三分劃物)及試樣e(金黃酮)顯示高的玻尿酸合成促進作用的傾向。 此外，雖然在試驗例7中未進行關於第二分劃物的試驗，但因就其他的分劃物及金黃酮的全部可確認了玻尿酸合成促進作用，因此可考慮為第二分劃物也當然具有玻尿酸合成促進作用。
3、用以確認HAS2mRNA表現促進作用的試驗例 [試驗例8] 試驗例8是就本發明中的第一分劃物及金黃酮用以確認HAS2mRNA表現促進作用的試驗例，進行了HAS2mRNA表現促進作用的測定。
首先，就試驗方法進行說明。 播散繼代用培養基及化驗用的培養基係使用與上述試驗例7一樣者。使用播散繼代用培養基，將人類新生兒皮膚纖維母細胞(與上述試驗例7一樣者)播散於12井板以成為1×105 cells/well，在24小時後以1×PBS(-)溶液進行了一次清洗。然後，將化驗用的培養基添加於全井，以成為700μL/well。然後，添加700μL/well的包含各種試樣的培養基(以化驗用的培養基進行調製，以成為終濃度的倍的濃度)及不包含試樣的培養基(對照用)。培養時間是就同一試樣分成4、8、12、16、20、24小時的6階段而進行。培養結束後，清除各井的上清，以1×PBS(-)溶液1mL進行了清洗。
就RNA的萃取，使用totalRNA精製套件之NucleoSpinRNA(寶生物股份有限公司(TAKARA BIO INC.))而進行。 在以1×PBS(-)溶液的清洗後，將Buffer RA1(totalRNA精製套件的細胞溶解緩衝液)與2-巰基乙醇(2-mercaptoethanol)的混合試藥(mixed reagent)加到各井。Buffer RA1及2-巰基乙醇的量是以每2井350μL及3.5μL。自各井回收混合試藥，移至樣品分別管(RNA用的殺菌1.5mL管)，每一管施以旋渦混合器(vortex mixer)並攪拌。由管子的內容物使用精製套件萃取totalRNA，在-80℃保管。因RNA的萃取依照精製套件的協定(protocol)藉由習用方法進行，故詳細的說明省略。
就如此萃取的totalRNA使用SmartSpec Plus 分光光度計(spectrophotometer)(Bio-Rad公司)，由吸光度(absorbance)(260nm)測定了RNA濃度。逆轉錄反應(reverse transcription reaction)使用PrimeScript RT Master Mix(Perfect Real Time)(寶生物股份有限公司)，藉由熱塊(heat block)在37℃培養(incubate)15分鐘、在85℃培養5秒鐘的500ng的totalRNA，得到cDNA10μL。其次，將各基因的正義及反義引子(sense and antisense primer)(10μM)各1μL、SYBR Premix EX Taq II(寶生物股份有限公司)12.5μ、作為平衡(balance)的RNase Free H2 O加到所調製的cDNA2μL，全量以25μL。使用5'-GACAGGCATCTCACGAACCG-3'當作HAS2的正義引子，5'-CAACGGGTCTGCTGGTTTAGC-3'當作反義引子。內部標準使用glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH)。Thermal Cycler Dice Real Time System II(寶生物股份有限公司)進行即時PCR，測定了HAS2mRNA的表現量。 而且，在試驗例8中也藉由與試驗例7一樣的方法進行了細胞生存率的測定。
試樣係使用試驗例6的試樣f當作第一分劃物，使用試驗例5的試樣e當作金黃酮。
其次，就試驗結果進行說明。 表2是表示試驗例8的結果(各試樣所產生的HAS2mRNA表現促進作用)的表。此外，在表2中[濃度]是表示培養時的各試樣的濃度，單位為μg/mL。而且，[促進率]是以對照(control)中的HAS2mRNA表現量為1的情形的HAS2mRNA表現量的倍率，單位為倍。此外，包含試樣的培養基的培養時間分成4~24小時的6階段已於上述，在表2中記載關於促進率最大的培養時間的結果。促進率的數值之後以括弧表示者為培養時間。[細胞生存率]是以對照中的細胞生存率為100的情形的細胞生存率，單位為%。
[表2] 各試樣所產生的HAS2mRNA表現促進作用試樣        濃度(μg/mL)   促進率(倍)  細胞生存率(%) 試樣f(第一分劃物)     50.00                 9.0(20小時)        90 試樣f(第一分劃物)     100.00                21.7(20小時)       90 試樣e(金黃酮)          3.13                  1.7(8小時)          106試樣e(金黃酮)          6.25                  2.0(8小時)          91
如表2所示，就本發明中的第一分劃物及金黃酮，可確認了對人類新生兒皮膚纖維母細胞顯示HAS2mRNA表現促進作用。 此外，雖然在試驗例7中未進行關於第二分劃物~第四分劃物的試驗，但因就第一分劃物及金黃酮的全部可確認了HAS2mRNA表現促進作用，因此可考慮為第二分劃物~第四分劃物也當然具有HAS2mRNA表現促進作用。
[實施例] 實施例1、軟膏的製作 使用依照上述的試驗例1所記載的方法調製的第一分劃物，藉由以下的處方以習用方法製作軟膏(100g)。 （油相(oil phase)成分） 第一分劃物                                      0.01g 白色凡士林                                      20.00g　　　　　　　　　　　   礦油(mineral oil)                                20.00g 硬脂醇(stearyl alcohol)                        5.00g　　　　　  硬脂醇聚醚-2(steareth-2)                     3.00g 對羥苯甲酸丙酯(propylparaben)            0.10g 天然維生素E                                    0.10g （水相(aqueous phase)成分） 1，3-丁二醇(1,3-butylene glycol) 5.00g　　　　　　　　          苯氧乙醇(phenoxyethanol)                    0.40g　　　　　　              聚山梨醇酯60(polysorbate 60)              4.50g 淨化水                                             適量　 全體的重量               100g
（調製法） 將油相成分及水相成分分別加熱到80℃並使其均勻，藉由一邊攪拌一邊將水相加到油相，乳化後冷卻製作了軟膏。
實施例2、膠帶劑的製作 使用依照上述的試驗例2所記載的方法調製的第二分劃物，藉由以下的處方以習用方法製作膠帶劑（100g）。 （黏著劑溶劑） 苯乙烯-異丙烯-苯乙烯嵌段共聚物(styrene-isopropylene-styrene block copolymer)7.00g                                Piccolyte                                          25.00g 異丙烯橡膠                                      5.00g 甲苯(toluene)                                    15.00g 乙酸乙酯                                         14.20g 己烷                                                25.00g (藥效成分) 第二分劃物                                      0.01g 乙醇                                                7.99g (經皮吸收促進劑) 油醇(oleyl alcohol)                             0.80g 全體的重量               100g
（調製法） 分別使黏著劑溶劑及藥效成分均勻，將藥效成分及經皮吸收促進劑加到黏著劑溶劑，在室溫下攪拌製作組成物。將該組成物延展於進行了矽處理(silicone treatment)的聚酯膜(polyester film)上，在120℃使其乾燥冷卻後，使黏著劑層轉印到聚乙烯膜(polyethylene film)，製作膠帶劑。
實施例3、化妝水(lotion)的製作 使用依照上述的試驗例3所記載的方法調製的第三分劃物，藉由以下的處方以習用方法製作化妝水（100g）。 （油相成分） 聚氧乙烯(polyoxyethylene)（60莫耳）氫化蓖麻油(hydrogenated castor oil)                           1.0g 鯊烷(squalene)                                   0.05g        　　 （水相成分） 第三分劃物                                      0.1g 1，3-丁二醇                                     5.0g 甘油                                                5.0g 苯氧乙醇                                         0.3g　　　　　　　　　　　　　　    檸檬酸(citric acid)                             0.1g 檸檬酸鈉(sodium citrate)                     0.2g　　　　　　　　        乙醇                                                2.0g 淨化水                                             適量　 全體的重量               100g
（調製法） 分別使油相成分及水相成分均勻溶解。將油相加熱，一邊攪拌一邊加到水相的一部分而進行調製，將該調製液加到剩下的水相，製作化妝水。
實施例4、乳液的製作 使用依照上述的試驗例4所記載的方法調製的第四分劃物，藉由以下的處方以習用方法製作乳液（100g）。 聚氧乙烯（40莫耳）氫化蓖麻油          3.0g 鯊烷                                                5.0g 羧乙烯基聚合物(carboxyvinyl polymer)   0.1g 氫氧化鉀                                         0.05g 山崳醇(behenyl alcohol)                       1.0g 檸檬酸                                             0.1g 檸檬酸鈉                                         0.2g 第四分劃物                                      1.5g 1，3-丁二醇                                     4.0g 甘油                                                5.0g 對羥基苯甲酸酯                                0.1g 乙二胺四乙酸二鈉(edetate disodium)      0.01g 淨化水                                             適量　 全體的重量               100g
（調製法） 將上述原料攪拌、混合而製作乳液。
實施例5、美容液的製作 使用依照上述的試驗例5所記載的方法調製的金黃酮，藉由以下的處方以習用方法製作美容液(100g)。 金黃酮                                             1.0g 羧基乙烯聚合物                                0.1g 聚甘油-10異硬脂酸酯(polyglyceryl-10 isostearate) 2.0g    甘油                                               6.5g    1,3-丁二醇                                       7.5g    苯氧乙醇                                         0.3g　    氫氧化鉀                                         0.05g    玻尿酸鈉(hyaluronate sodium)              0.1g    鯊烷                                               1.0g    維生素E醋酸酯(vitamin E acetate)        0.05g    硬脂酸                                            0.20g    淨化水                                            適量　 全體的重量               100g
（調製法） 將上述原料攪拌、混合、溶解而製作美容液。
實施例6、錠劑的製作 使用依照上述的試驗例6所記載的方法調製的第一分劃物，藉由以下的處方製作錠劑（每一錠500mg）。 第一分劃物                                      10mg 乳糖                                                470mg 乾燥玉米澱粉                                   10mg 滑石(talc)                                         9mg 硬脂酸鈣                                         1mg
（調製法） 將第一分劃物（2g）、乾燥玉米澱粉（2g）、滑石（1.8g）、硬脂酸鈣（0.2g）添加於乳糖（94g）並進行混合。接著，使用單衝打錠機(single stroke tablet press)並以習用方法製作錠劑。
實施例7、硬膠囊劑的製作 使用依照上述的試驗例6所記載的方法調製的第一分劃物，藉由以下的處方製作硬膠囊劑（每一膠囊360mg）。 第一分劃物                                      5mg 乳糖                                                220mg 玉米澱粉                                         110mg 羥丙基纖維素(hydroxypropyl cellulose)   25mg
（調製法） 將乳糖（220g）及玉米澱粉（110g）添加於第一分劃物（5g）並進行混合，將羥丙基纖維素（25g）的水溶液添加於其中並進行捏合(kneading)。接著，使用擠壓造粒機藉由習用方法製造顆粒。透過將該顆粒填充到明膠硬膠囊(gelatin hard capsule)製作硬膠囊劑。
實施例8、軟膠囊劑的製作 使用依照上述的試驗例6所記載的方法調製的第一分劃物，藉由以下的處方製作軟膠囊劑（每一膠囊170mg）。 第一分劃物                                      5mg 大豆油                                             165mg
（調製法） 將第一分劃物（5g）添加於大豆油（165g）並進行混合。接著，藉由使用旋轉模式(rotary die)自動成型機依照習用方法填充到軟膠囊製作軟膠囊劑。
實施例9、丸劑的製作 使用依照上述的試驗例6所記載的方法調製的第一分劃物，藉由以下的處方製作丸劑（每一粒100mg）。 第一分劃物                                      0.5mg 台灣黃麻(corchorus olitorius)粉末         20.0mg　　　　　　　　　　　   澱粉                                                30.0mg 糖蜜                                                20.0mg 茶萃取物                                         15.0mg 大豆纖維                                         14.0mg 蟲膠(shellac)                                     0.5mg
（調製法） 以上述摻合(matching)混合原料，適量加水後，以捏合機製造均質的捏合物，將得到的捏合物壓延，使用製丸機(pelletizer)製丸後進行乾燥製作丸劑。
實施例10、果凍的製作 使用依照上述的試驗例6所記載的方法調製的第一分劃物，藉由以下的處方以習用方法製作果凍（100g）。 第一分劃物                                      0.02g 明膠                                                2.00g 柳橙汁                                             20.00g 水                                                   77.98g
（調製法） 混合上述成分，加熱到90℃。在確認明膠的溶解後填充到容器，進行冷卻。藉由使明膠固化製作果凍。
圖1是用以說明實施形態1~5中的第一分劃物~第四分劃物及金黃酮而顯示之流程圖。 圖2是用以說明試驗例1~5中的試樣a~e而顯示之流程圖。

Claims (12)

  1. 一種玻尿酸合成促進劑，含有以由千張紙的種子藉由水性有機溶劑萃取的分劃物，且至少包含金黃酮之第一分劃物為有效成分。
  2. 一種玻尿酸合成促進劑，含有以藉由水及乙酸乙酯對由千張紙的種子藉由水性有機溶劑萃取的第一分劃物進行液液分配時， 被分配於該乙酸乙酯側的分劃物，且至少包含金黃酮之第二分劃物為有效成分。
  3. 一種玻尿酸合成促進劑，含有以藉由水及乙酸乙酯對由千張紙的種子藉由水性有機溶劑萃取的第一分劃物進行液液分配，藉由90%甲醇及己烷進一步對被分配於該乙酸乙酯側的第二分劃物進行液液分配時， 被分配於該90%甲醇側的分劃物，且至少包含金黃酮之第三分劃物為有效成分。
  4. 一種玻尿酸合成促進劑，含有以藉由水及乙酸乙酯對由千張紙的種子藉由水性有機溶劑萃取的第一分劃物進行液液分配，藉由90%甲醇及己烷進一步對被分配於該乙酸乙酯側的第二分劃物進行液液分配，藉由矽膠層析法對被分配於該90%甲醇側的第三分劃物進行分劃時， 藉由氯仿：甲醇為9：1的混合溶劑由矽膠溶析的分劃物，且至少包含金黃酮之第四分劃物為有效成分。
  5. 一種玻尿酸合成促進劑，含有以金黃酮為有效成分。
  6. 一種HAS2mRNA表現促進劑，含有以由千張紙的種子藉由水性有機溶劑萃取的分劃物，且至少包含金黃酮之第一分劃物為有效成分。
  7. 一種HAS2mRNA表現促進劑，含有以藉由水及乙酸乙酯對由千張紙的種子藉由水性有機溶劑萃取的第一分劃物進行液液分配時， 被分配於該乙酸乙酯側的分劃物，且至少包含金黃酮之第二分劃物為有效成分。
  8. 一種HAS2mRNA表現促進劑，含有以藉由水及乙酸乙酯對由千張紙的種子藉由水性有機溶劑萃取的第一分劃物進行液液分配，藉由90%甲醇及己烷進一步對被分配於該乙酸乙酯側的第二分劃物進行液液分配時， 被分配於該90%甲醇側的分劃物，且至少包含金黃酮之第三分劃物為有效成分。
  9. 一種HAS2mRNA表現促進劑，含有以藉由水及乙酸乙酯對由千張紙的種子藉由水性有機溶劑萃取的第一分劃物進行液液分配，藉由90%甲醇及己烷進一步對被分配於該乙酸乙酯側的第二分劃物進行液液分配，藉由矽膠層析法對被分配於該90%甲醇側的第三分劃物進行分劃時， 藉由氯仿：甲醇為9：1的混合溶劑由矽膠溶析的分劃物，且至少包含金黃酮之第四分劃物為有效成分。
  10. 一種HAS2mRNA表現促進劑，含有以金黃酮為有效成分。
  11. 一種具有玻尿酸合成促進作用的醫藥品、食品或化妝料，含有申請專利範圍第1項至第5項中任一項之玻尿酸合成促進劑。
  12. 一種具有HAS2mRNA表現促進作用的醫藥品、食品或化妝料，含有申請專利範圍第6項至第10項中任一項之HAS2mRNA表現促進劑。
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