TW201511769A - 消炎劑 - Google Patents

Abstract

一種消炎劑，其含有乳凝集素(lactadherin)及/或乳凝集素經蛋白質分解酵素處理所得之分解物作為有效成分。消炎劑由於係以哺乳類之乳汁為原料，可簡便且經濟地製造，並可在日常中安全地攝取。

Description

消炎劑

本發明係有關於抑制發炎性細胞激素的產生之效果優異、可改善生物體中過度的發炎，有用於膠原病或過敏性疾病、代謝疾病、傳染病等的預防或治療，且穩定性及安全性優良的消炎劑。本發明進一步有關於含有消炎劑的消炎用飲食品、消炎用營養組成物或消炎用飼料。

「發炎性細胞激素」係指由淋巴球或巨噬細胞等所產生，參與伴隨細菌或病毒感染、腫瘤、組織損傷而生之發炎反應的物質，已知有例如介白素-1(IL-1)或介白素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子(TNF-α)、GM-CSF等。周知此等發炎性細胞激素除了在生物體內作用於肝臟，誘導急性期蛋白質的合成與分泌、或使嗜中性球向內皮細胞之附著亢進外，尚有藉由誘導介白素-8(IL-8)、MCP-1等趨化素使嗜中性球、單核球、或淋巴球遊走於發炎部位而引起發炎之作用。另一方面，因該發炎性細胞激素過量產生所引起之症狀有全身性發炎反應症候群、慢性風濕性關節炎等膠原病或過敏性疾病；以及動脈硬化或胰島素抗性、糖尿病等代謝疾病；多發性硬化症或移植物抗宿主病、病毒性肝炎、HIV感染等傳染病等；經報導，抑制發炎性細胞激素的產生對於此等症狀的預防或治療、改善、復發防止極為有益。此外，作為供抑制生物體內過度的發炎之醫藥，已知有抗組織胺劑或類固醇劑等，惟，使用此等醫藥品時，有時會伴有耳鳴、頭痛、食慾不振等副作用。甚而，此等物質，由安全性及成本等方面而言，目前尚無法添加至飲食品中。因此，便有待開發出一種在日常中可安全地攝取，並可抑制發炎性細 胞激素過量產生之類的飲食品或飼料。

乳凝集素為構成乳之脂肪球膜的糖蛋白之一，在牛乳中，係占有脂肪球膜所含之蛋白質的約10%。其分子量為43kDa~53kDa、等電點為7.0，具有類表皮生長因子的兩個分域。又，乳凝集素在牛亦稱為PAS-VI-VII(PAS6/7)，小鼠的乳汁所含之乳凝集素亦表現為「MFG-E8」。更者，乳凝集素被認為可擔負調整新生兒消化道機能之作用，以防止新生兒被輪狀病毒感染為目的摻混於育嬰用人工奶粉中。

迄今，作為抑制發炎性細胞激素過量產生的食品成分，已知有神經鞘磷脂或乳過氧化酶、酸性木寡糖。然而，乳凝集素及/或其分解物抑制發炎性細胞激素的產生之效果優異並可改善生物體中過度的發炎尚未為人所知悉。

【先前技術文獻】

【專利文獻】

【專利文獻1】日本特開2007-112793

【專利文獻2】日本特開2007-223910

【非專利文獻】

【非專利文獻1】Journal of Nutritional Science and Vitaminology, 56, 54-59, 2010

本發明係以提供一種具有顯著的發炎性細胞激素的產生抑制效果，改善生物體中過度的發炎藉此有用於膠原病或過敏性疾病、代謝疾病、傳染病等的預防或治療之消炎劑、及摻混有消炎劑之消炎用飲食品、消炎用營養組成物或消炎用飼料為課題。

本案發明人等為解決上述課題而致力進行研究的結果發現，乳凝集素及/或其分解物有優良的發炎性細胞激素的產生抑制效果。

即，本發明包含以下態樣：

(1)一種消炎劑，其係以乳凝集素及/或其分解物為有效成分。

(2)如(1)之消炎劑，其中，乳凝集素及/或其分解物係源自於牛乳。

(3)如(1)或(2)之消炎劑，其中，乳凝集素分解物係將乳凝集素使用蛋白質分解酵素予以分解而得。

(4)如(3)之消炎劑，其中，蛋白質分解酵素係選自於由胰蛋白酶、胰酶、胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜酶構成之群組中的至少1種。

(5)一種消炎用飲食品、消炎用營養組成物或消炎用飼料，其含有如(1)至(4)中任一項之消炎劑。

(6)一種生物體之發炎改善方法，其係藉由經口攝取如(1)至(4)中任一項之消炎劑。

(7)一種消炎劑之使用方法，其係將以乳凝集素及/或其分解物為有效成分的消炎劑應用於發炎患者。

本發明之消炎劑其抑制發炎性細胞激素的產生之效果顯著，係有用於膠原病或過敏性疾病、代謝疾病、傳染病等的預防或治療。

作為消炎劑之有效成分的乳凝集素可藉由例如對(A)屬由生乳製造黃油(butter)時所生成之水相成分的酪乳(butter milk)、(B)將生乳其藉分離器分離所得之脂肪分40~50%的乳油(cream)再度以分離器分離而得之60%以上的高脂肪乳油，進行加熱處理或者剪切處理，並對高脂肪乳油相轉換時所排 出的水相成分、或(C)屬將黃油加熱溶解時所分離之水相成分的黃油乳清，使用超過濾(UF)膜或微過濾(MF)膜、逆滲透膜(RO)膜、離子交換樹脂等進行脫鹽或濃縮而得。此外，可藉由對乳酪乳清添加鹽酸將pH調整成4.4後，添加氯化鈣，於50℃保持30分鐘而分離出沉澱物，將其再度溶解或懸浮於水等之後，使用超過濾(UF)膜或微過濾(MF)膜、逆滲透膜(RO)膜、離子交換樹脂等進行脫鹽或濃縮而得。更且，作為消炎劑之有效成分的乳凝集素分解物可將上述乳凝集素以任意蛋白質分解酵素予以分解而得。作為蛋白質分解酵素，除Protease A「Amano」SD(商品名)、THERMOASE PC10F(商品名)、PROTIN SD-AY10(商品名)等市售之食品‧工業用蛋白酶劑外，尚可列示胰蛋白酶、胰酶、胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜酶等，且亦可將使此多種組合使用。如上述所調製的乳凝集素及/或其分解物亦可藉由冷凍乾燥或噴霧乾燥等乾燥。

乳凝集素及/或其分解物可使用取自人類、牛、水牛、山羊、綿羊等哺乳類之乳汁所調製者、藉基因工程方法所生產者、由血液或內臟器官所精製者等。其原因在於可簡便且經濟地製造，並可在日常中安全地攝取之故。其中，較佳為源自於牛乳者。又，亦可使用經精製且於市售的乳凝集素及/或其分解物之試劑。

乳凝集素及/或其分解物可直接作為消炎劑使用，惟亦可視需求，依循常用方法，製劑化成粉末劑、顆粒劑、錠劑、膠囊劑、飲料劑等而使用。又，以藉由冷凍乾燥或噴霧乾燥等經乾燥的乳凝集素及/或其分解物而言，亦可直接作為消炎劑使用，也可依循常用方法，經製劑化而使用。

更且，將此等製劑化後，亦可將其摻混於營養劑或優格、飲料、鬆餅等飲食品、營養組成物或飼料中。

消炎用飲食品、消炎用營養組成物及消炎用飼料，除該乳凝集素及/或其分解物外，尚可含有安定劑或糖類、脂質、香料、維生素、礦物質、類黃酮、多酚等其他飲食品、飼料通常所含有的原料等。又，除作為有效成分的乳凝集素及/或其分解物外，尚可與顯示消炎作用的成分，例如神經鞘 磷脂或乳過氧化酶、酸性木寡糖等一齊使用。

對於消炎用飲食品、消炎用營養組成物及消炎用飼料中之乳凝集素及/或其分解物的摻混量，不特別限制，為發揮本發明中抑制發炎性細胞激素的產生之效果，係以按成人每人每日經口攝取5mg以上之乳凝集素及/或其分解物的方式來調整對醫藥品或飲食品、飼料之摻混量為較佳。

消炎劑可藉由對作為有效成分的乳凝集素及/或其分解物添加適當的助劑而製劑化成任意形態。於製劑化之際，可採用通常使用的填充劑、增量劑、黏結劑、崩解劑、界面活性劑、潤滑劑等稀釋劑或賦形劑。作為賦形劑，可添加例如蔗糖、乳糖、澱粉、結晶性纖維素、甘露醇、輕質矽酸酐、鋁酸鎂、合成矽酸鋁、偏矽酸鎂鋁、碳酸鈣、碳酸氫鈉、磷酸氫鈣、羧甲基纖維素鈣等的1種或組合2種以上。

諸如上述，本發明係以實施形態記載，惟構成該揭示一部分的論述不應理解為將本發明加以限定。由該揭示，本領域具有通常知識者可明瞭各種替代實施形態、實施例及運用技術。

舉例言之，茲提供一種將以實施形態中所說明之乳凝集素及/或其分解物為有效成分的消炎劑應用於發炎患者的消炎劑之使用方法。此時，作為乳凝集素及/或其分解物，可使用例如如後述實施例欄所說明之自原料分離、精製而成者。又，消炎劑亦可應用於人類以外的哺乳類，諸如犬、猴、貓、牛、馬、豬、雞、羊等家畜。

以下示出實施例、試驗例對本發明詳細加以說明，惟此等僅供列示，本發明不受此等任何限定。

【實施例1】

對10kg經冷凍乾燥的未殺菌之酪乳粉末添加100kg丙酮後，以夸克分離器(Quark separator)施予處理，藉此將沉澱物完全去除而得到上清液。利用蒸發器自上清液中去除丙酮並再度予以溶解於去離子水後，以區分分子量 60kDa之超過濾膜加以處理，並回收透過液。其次，將該透過液以區分分子量30kDa之超過濾膜去除雜質，並進行脫鹽、濃縮後，予以冷凍乾燥而得到68g乳凝集素之粉末(實施例品1)。該乳凝集素之粉末中含有78%乳凝集素。如此所得乳凝集素可直接作為消炎劑使用。

【實施例2】

將500mg實施例1中調製之乳凝集素之粉末溶解於100ml精製水，並使用小蘇打將pH調整至8。其後，添加作為蛋白質分解酵素的胰蛋白酶(SIGMA公司製)使最終濃度成為0.01%，於37℃實施1小時酵素處理。接著，於85℃實施10分鐘加熱處理使酵素去活化後，予以冷凍乾燥而得到463mg乳凝集素分解物之粉末(實施例品2)。如此所得乳凝集素分解物之分子量為5kDa以下，可直接作為消炎劑使用。

【實施例3】

將10g實施例1中調製之乳凝集素之粉末溶解於200ml精製水後，予以保持於45℃，加入2g之Protease A「Amano」SD(Amano Enzyme公司製)，實施2小時酵素處理。接著，於80℃實施10分鐘加熱處理使酵素去活化後，予以冷凍乾燥而得到8.2g乳凝集素分解物之粉末(實施例品3)。如此所得乳凝集素分解物之分子量為5kDa以下，可直接作為消炎劑使用。

[試驗例1]

茲探討實施例1中所得之乳凝集素及實施例2中所得之乳凝集素分解物抑制屬發炎性細胞激素之IL-6與IL-8的產生之效果。將顯示類小腸表皮細胞特徵的人類結腸腺癌細胞株Caco-2播種於24孔之微孔板(microtiter plate)，並以含有10%胎牛血清的達爾伯克氏改良伊格爾培養基(DMEM)培養2週後，添加實施例1中所得之乳凝集素之粉末(最終濃度：以乳凝集素計為0.5,5,50,500μg/ml)或實施例2中所得之乳凝集素分解物之粉末(最終濃度：以乳凝集素分解物計為0.5,5,50,500μg/ml)，培養12小時。再者，添加作為陽性對照的乳過氧化酶(最終濃度：以乳過氧化酶計為5,50,500μg/ml)，培養12小時。其後，對各者添加IL-1β(終濃度0.2ng/ml)並培養24小時後，回收培養上 清液，以ELISA法測定培養上清液中所含之IL-6濃度與IL-8濃度。將其結果示於表1及表2。

【表2】

據表1、表2之結果，當分別添加以最終濃度計為5μg/ml以上的乳凝集素及其分解物時，培養上清液中的IL-6濃度與IL-8濃度顯著下降。又，就其效果，比起同樣添加之乳過氧化酶顯著更高。由此結果可知，乳凝集素及其分解物有其消炎效果。

[試驗例2]

依據日本特開2007-112793所載方法，採用紅藻膠(carrageenan)誘發大鼠足部水腫模型來探討乳凝集素及乳凝集素分解物之消炎效果。亦即，對韋斯(Wistar)系公大鼠(體重：110~130g；1群：10隻)，將實施例1所得之乳凝集素之粉末與實施例3中所得之乳凝集素分解物之粉末，分別以按每1kg體重，使乳凝集素或乳凝集素分解物成為5mg或50mg的方式予以懸浮於0.5重量%之羧甲基纖維素水溶液並進行經口投予。又，作為陽性對照，係以同樣方法，將乳過氧化酶以按每1kg體重成為50mg的方式進行經口投予。自此1 小時後，將作為發炎物質而懸浮於生理食鹽水成為1重量%的λ-紅藻膠，以0.1ml皮下注入至大鼠之右後肢足底致引發水腫。於λ-紅藻膠注入前以及注入5小時後，分別測定右後肢足底的面積，求出足底容量之增加率(V1)。作為陰性對照，係對僅經口投予不含乳凝集素或其分解物、乳過氧化酶的0.5重量%之羧甲基纖維素水溶液的大鼠，測定將作為發炎物質而懸浮於生理食鹽水成為1重量%的λ-紅藻膠，以0.1ml皮下注入至大鼠之右後肢足底時足底容量之增加率(V0)，並以(V0-V1)/V0×100之計算式，算出紅藻膠水腫抑制率。因此，此值愈大，表示消炎效果愈高。將其結果示於表3。

據表3之結果，當分別每1kg體重經口投予5mg以上的乳凝集素及其分解物時，紅藻膠水腫抑制率增加；就其效果，比起同樣經口投予之乳過氧化酶顯著更高。由此結果可知，乳凝集素及其分解物有其消炎效果。

【實施例4】

(消炎用膠囊劑的調製)

以表4所示摻混量混合原料後，依常用方法進行造粒並予以填充於膠囊中，製成消炎用膠囊劑。

【表4】

【實施例5】

(消炎用錠劑的調製)

以表5所示摻混量混合原料後，依常用方法成型為1g，並進行打錠而製成消炎用錠劑。

【實施例6】

(消炎用液狀營養組成物的調製)

將50g之實施例品1溶解於4,950g之去離子水，予以加熱至50℃後，利用TK HOMO MIXER(TK ROBO MICS；特殊機化工業公司製)，以6,000rpm攪拌混合30分鐘而得到乳凝集素含量39g/5kg之乳凝集素溶液。對5.0kg該乳凝集素溶液，摻混5.0kg乾酪素、5.0kg大豆蛋白質、1.0kg魚油、3.0kg紫蘇油、17.0kg糊精、6.0kg礦物質混合物、1.95kg維生素混合物、2.0kg乳化劑、4.0kg安定劑、0.05kg香料，予以填充至200ml之蒸煮袋，並利用殺菌釜滅菌機(第1種壓力容器；TYPE：RCS-4CRTGN；日阪製作所製)以121℃、20分鐘進行殺菌，製成50kg消炎用液狀營養組成物。

【實施例7】

(消炎用飲料的調製)

將300g脫脂奶粉溶解於409g之去離子水後，溶解1g實施例品3並予以加熱至50℃後，利用ULTRA DISPERSER(ULTRA-TURRAXT-25；IKA JAPAN公司製)，以9,500rpm攪拌混合30分鐘。添加100g麥芽糖醇、2g酸味料、20g還原糖漿、2g香料、166g去離子水後，予以填充至100ml之玻璃瓶，以95℃、15秒鐘進行殺菌後予以密封，而調製成消炎用飲料10瓶(內容量100ml)。

【實施例8】

(犬用消炎用飼料的調製)

將2kg之實施例品1溶解於98kg之去離子水，予以加熱至50℃後，利用TK HOMO MIXER(MARK II 160型；特殊機化工業製)，以3,600rpm攪拌混合40分鐘而得到乳凝集素含量1.56g/100g之乳凝集素溶液。對10kg該乳凝集素溶液摻混12kg大豆粕、14kg脫脂奶粉、4kg大豆油、2kg玉米油、23.2kg棕櫚油、14kg玉米澱粉、9kg小麥粉、2kg米糠、5kg維生素混合物、2.8kg纖維素、2kg礦物質混合物，以120℃、4分鐘進行殺菌，製成100kg消炎用飼料。

Claims (7)

1. 一種消炎劑，其係以乳凝集素及/或其分解物為有效成分。
2. 如申請專利範圍第1項之消炎劑，其中，該乳凝集素及/或其分解物係源自於牛乳。
3. 如申請專利範圍第1或2項之消炎劑，其中，該乳凝集素分解物係將乳凝集素使用蛋白質分解酵素予以分解而得。
4. 如申請專利範圍第3項之消炎劑，其中，該蛋白質分解酵素係選自於由胰蛋白酶、胰酶、胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜酶構成之群組中的至少1種。
5. 一種消炎用飲食品、消炎用營養組成物或消炎用飼料，其含有如申請專利範圍第1至4項中任一項之消炎劑。
6. 一種生物體之發炎改善方法，其係藉由經口攝取如申請專利範圍第1至4項中任一項之消炎劑。
7. 一種消炎劑之使用方法，其係將以乳凝集素及/或其分解物為有效成分的消炎劑應用於發炎患者。