TW201502127A - （ｓ）－啶－３－基（２－（２－（４－氟苯基）噻唑－４－基）丙－２－基）胺基甲酸酯之鹽類型式 - Google Patents

Abstract

本發明係關於(S)-□啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯之新穎鹽類型式用作為葡糖苷醯鞘胺醇(glucosylceramide)合成酶(GCS)之抑制劑及用於治療代謝疾病，例如溶酶體貯積病，無論以單獨或與酵素替代療法組合，及用於癌症之治療。

Description

(S)- 啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯之鹽類型式

本發明係關於(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯之新穎鹽類型式用作為葡糖苷醯鞘胺醇合成酶(GCS)之抑制劑及用於治療代謝疾病，例如溶酶體貯積病，無論以單獨或與酵素替代療法組合，及用於癌症之治療。

本發明係關於(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯之新穎鹽類型式用作為葡糖苷醯鞘胺醇合成酶(GCS)之抑制劑及用於治療代謝疾病，例如溶酶體貯積病，無論以單獨或與酵素替代療法組合，及用於癌症之治療。

於以葡糖苷醯鞘胺醇為主之糖鞘脂類(glycosphingolipids)(GSLs)之生物合成中，葡糖苷醯鞘胺醇合成酶(GCS)係為催化起始糖基化步驟之關鍵性酶，亦即，由UDP-葡萄糖(UDP-Glc)經由關鍵性葡萄糖轉移至神經醯胺(ceramide)而形成葡糖苷醯鞘胺醇。GCS為一種跨膜，位於順式/高基氏體中間膜囊(medial Golgi)內之III型整合蛋白質。糖鞘脂類(GSLs)被認為於許多細胞膜事件之動態，包括細胞相互作用，發信號及販運(trafficking)上是必要的。GSL結構之合成已顯示(參見，山下等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1999，96(16)，9142-9147)對胚胎發育及對某些組織之分化很重要。神經醯胺於神經鞘脂代謝中扮演重要的角色且GCS活性之下調已於糖鞘脂表達減弱之神經鞘脂圖案上顯示出具有顯著的效力。神經鞘脂(SLs)於生理以及病理性心血管病症中具有生物調節的作用。特別，神經鞘脂及 其等之調控酵素於初生之大鼠心臟中似乎對慢性缺氧適應性反應扮演一個角色(參見，艾爾歐瓦尼特等，前列腺素&其他脂質介體2005，78(1-4)，249-263)。

GCS抑制劑已被建議用於多種疾病之治療(參見例如，WO2005068426)。此等治療包括治療糖脂貯積病(例如，戴薩克斯氏症(Tay Sachs)、山德霍夫氏症(Sandhoffs)、GM2活化劑缺乏症、GM1神經節苷脂貯積症(gangliosidosis)及法布里氏疾病(Fabry disease))、與糖脂累積相關之疾病(例如，高雪氏疾病(Gaucher disease)；米古魯斯達(Miglustat)(Zavesca)，一種GCS抑制劑，已核准用於治療1型高雪氏症病患，參見，特雷柏等，共生學月刊(Xenobiotica)2007，37(3)，298-314)、導致腎臟肥大或增生如糖尿病性腎臟病之疾病；導致高血糖症或高胰島素血症之疾病；癌症其中糖脂合成異常、由生物體使用細胞表面糖脂作為受體所引起之感染性疾病、感染性疾病其中葡糖苷醯鞘胺醇之合成是必要或重要者、疾病其中葡糖苷醯鞘胺醇之合成是必要或重要者、疾病其中發生過度糖脂合成者(例如，動脈粥樣硬化、多囊腎臟病，及腎臟肥大)、神經元障礙、神經元損傷、伴隨著巨噬細胞浸潤與活化之發炎性疾病或障礙(例如，風濕性關節炎、克隆氏病(Crohn’s disease)，氣喘及敗血症)及糖尿病與肥胖症(參見，WO2006053043)中。

特別，業已顯示GCS過渡表達涉及多重藥物抗性且阻斷由神經醯胺-所誘發之細胞凋亡。例如，特桑斯基等，(實驗血液學2005，33(1)，62-72已顯示神經醯胺於急性骨髓性白血病(AML)細胞中誘發細胞凋亡且P-糖朊(p-gp)對神經醯胺所誘發之細胞凋亡賦予抗性，於TF-1細胞中調節該神經醯胺-葡糖苷醯鞘胺醇途徑對於該抗性具有顯著的貢獻。因此，GCS抑制劑可於生病之細胞中藉由誘發細胞凋亡而有用於治療增殖性疾病。

發明摘述

本發明係關於(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯蘋果酸鹽之晶形A，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuK_α輻射線所測量之下列2-θ峰：18.095。

本發明進一步關於(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯蘋果酸鹽之晶形A，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuK_α輻射線所測量之下列2-θ峰：18.095及17.493。

本發明進一步關於(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯蘋果酸鹽之晶形A，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuK_α輻射線所測量之下列2-θ峰：18.095及19.516。

本發明進一步關於(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯蘋果酸鹽之晶形A，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuK_α輻射線所測量之下列2-θ峰：18.095、17.493，及19.516。

本發明進一步關於(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯蘋果酸鹽之晶形A，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuK_α輻射線所測量之下列2-θ峰：18.095、17.493、19.516及20.088。

本發明進一步關於(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯蘋果酸鹽之晶形A，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuK_α輻射線所測量之下列2-θ峰：18.095、17.493、19.516與20.088及17.125。

本發明進一步關於(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯蘋果酸鹽之晶形B，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuK_α輻射線所測量之下列2-θ峰：24.355。

本發明進一步關於(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯蘋果酸鹽之晶形B，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuK_α輻射線所測量之下列2-θ峰：24.355及21.167。

本發明進一步關於(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯蘋果酸鹽之晶形B，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuK_α輻射線所測量之下列2-θ峰：24.355、21.167及27.343。

本發明進一步關於(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯蘋果酸鹽之晶形B，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuK_α輻射線所測量之下列2-θ峰：24.355、21.167、27.343及16.111。

本發明進一步關於(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯蘋果酸鹽之晶形B，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuK_α輻射線所測量之下列2-θ峰：24.355、21.167、27,343、16.111及17.185。

本發明進一步關於(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯蘋果酸鹽之晶形B，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuK_α輻射線所測量之下列2-θ峰：24.355、21.167、27,343、16.111、17.185及20.243。

本發明進一步關於(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯(S)-2-羥基琥珀酸鹽之晶形，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuK_α輻射線所測量之下列2-θ峰：17.162。

本發明進一步關於(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯(S)-2-羥基琥珀酸鹽之晶形A，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuK_α輻射線所測量之下列2-θ峰：17.162及18.028。

本發明進一步關於(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯(S)-2-羥基琥珀酸鹽之晶形A，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuK_α輻射線所測量之下列2-θ峰：17.162及14.280。

本發明進一步關於(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯(S)-2-羥基琥珀酸鹽之晶形A，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuK_α輻射線所測量之下列2-θ峰：17.162、18.028及14.280。

本發明進一步關於(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯(S)-2-羥基琥珀酸鹽之晶形A，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuK_α輻射線所測量之下列2-θ峰：17.162、18.028、14.280及18.153。

本發明進一步關於(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯(S)-2-羥基琥珀酸鹽之晶形A，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuK_α輻射線所測量之下列2-θ峰：17.162、18.028、14.280、18.153及23.422。

本發明進一步關於(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯HCl鹽之晶形，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuK_α輻射線所測量之下列2-θ峰：18.087。

本發明進一步關於(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯HCl鹽之晶形A，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuK_α輻射線所測量之下列2-θ峰：12.818。

本發明進一步關於(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯HCl鹽之晶形A，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuK_α輻射線所測量之下列2-θ峰：25.722。

本發明進一步關於(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯HCl鹽之晶形A，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuK_α輻射線所測量之下列2-θ峰：12.818及25.722。

本發明進一步關於(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯HCl鹽之晶形A，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuK_α輻射線所測量之下列2-θ峰：12.818、25.722及13.040。

本發明進一步關於(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯HCl鹽之晶形A，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuK_α輻射線所測量之下列2-θ峰：12.818、25.722、13.040及28.910。

發明之詳細說明

本發明之第一方面係針對(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯蘋果酸鹽之晶形A，其特徵在於下列之x-射線粉末衍射圖案係依據該2-θ及具有相對強度>0.52%之相對強度(表1)而表現。該測量進行如下：儀器：布魯克(Bruker)D8-高級衍射儀，類型：Bragg-Brentano；來源CuK_α1，波長=1.5406Å；發電機：35kV-40mA；偵查器：PSD/Vantec；安東帕TTK450室(Anton Paar TTK450 chamber)；矽樣品支架；角度範圍：2°至40°以2-θ布拉格(Bragg)計；可變發散狹縫：4毫米(V4)；階距(step size)：0.033°；脈衝時間(step time)：1秒鐘。

本發明之第二方面係針對(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯蘋果酸鹽之晶形B，其特徵在於下列之x-射線粉末衍射圖案係依據該2-θ及具有相對強度>8%之相對強度(表2)而表現。該測量進行如下：儀器：布魯克D8-高級衍射儀，類型：Bragg-Brentano；來源CuK_α1，波長=1.5406Å；發電機：35kV-40mA；偵查器：PSD/Vantec；安東帕TTK450室；矽樣品支架；角度範圍：2°至40°以2-θ布拉格計；可變發散狹縫：4毫米(V4)；階距：0.033°；脈衝時間：1秒鐘。

本發明之第三方面係針對(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯(S)-2-羥基琥珀酸鹽之晶形，其特徵在於下列之x-射線粉末衍射圖案係依據該2-θ及具有相對強度>8%之相對強度(表3)而表現。該測量進行如下：儀器：布魯克D8-高級衍射儀，類型： Bragg-Brentano；來源CuK_α1，波長=1.5406Å；發電機：35kV-40mA；偵查器：PSD/Vantec；安東帕TTK450室；矽樣品支架；角度範圍：2°至40°以2-θ布拉格計；可變發散狹縫：4毫米(V4)；階距：0.033°；脈衝時間：1秒鐘。

本發明之第四方面係針對(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯HCl鹽之晶形，其特徵在於下列之x-射線粉末衍射圖案係依據該2-θ及具有相對強度>0.96%之相對強度(表4)而表現。該測量進行如下：儀器：布魯克(Bruker)D8-高級衍射儀，類型：Bragg-Brentano；來源CuK_α1，波長=1.5406Å；發電機：35kV-40mA；偵查器：PSD/Vantec；安東帕TTK450室；矽樣品支架；角度範圍：2°至40°以2-θ布拉格(Bragg)計；可變發散狹縫：4毫米(V4)；階距：0.033°；脈衝時間：1秒鐘。

於LSDs治療正使用或實行之幾種方法中，其中大部分係集中於酵素替代療法，單獨使用於疾病管理中。市售可得之許多經核准的酵素替代療法係用來治療LSDs(例如，Myozyme®用於龐貝氏疾病(Pompe disease)、Aldurazyme®用於黏多糖貯積症(Mucopolysaccharidosis)I、Cerezyme®用於高雪氏疾病及Fabrazyme®用於法布里氏疾病。此外，本案發明人已確定以一些小分子單獨使用於LSDs之管理中。本文中所說明之本發明之治療方法係為了面臨各種溶酶體貯積病管理之醫生提供治療選擇，如詳述於下者。

於本發明之特定方面中，本發明之化合物可用於治療代謝疾病，如溶酶體貯積病(LSD)，無論以單獨或以與酵素替代療法之組合療法。 於本發明之其他方面中，本發明之化合物可於經診斷具有代謝疾病，如LSD之患者中用來抑制或降低GCS活性，無論以單獨或以與酵素替代療法之組合療法。於本發明之其他方面中，本發明之化合物可於經診斷具有代謝疾病，如LSD之患者中用來減少及/或抑制存儲物質累積(例如，溶酶體作用物)。於前述方面之特定具體例中，該LSD為高雪氏症(1型、2型或3型)，法布里氏症，G_M1-神經節苷脂貯積症或G_M2-神經節苷脂貯積症(gangliosidoses)(例如，GM2活化劑缺乏症、戴薩克斯氏症及山德霍夫氏症)。表1列舉許多LSDs及確認可於本發明之前述方面中用作為ERT之對應缺乏酵素。

於其他情況中，可能需要提供SMT至病症需要降低大腦中被酶作用物之病患，且因此不能以全身性給藥ERT來治療。雖然直接腦室內或鞘膜內給藥可降低大腦中被酶作用物之含量，全身性給藥ERT不適用於具有中樞神經系統(CNS)涉入之LSD患者，由於其沒有穿越腦血管障壁(BBB)的能力且SMT於CNS中具有殘留酵素活性之病患中證明有利。

根據本發明，將SMT提供至病患用來治療癌症及/或代謝疾病，例如，溶酶體貯積病。該SMT可包括一種或多種小分子。該SMT包括投遞本發明之化合物至病患。於特別具體例中，該化合物為(S)-啶-3- 基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯或啶-3-基 (2-(4'-氟-[1,1'-聯苯基]-3-基)丙-2-基)胺基甲酸酯，或其組合物。

於特定具體例中，本發明之化合物，例如，(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯及啶-3-基 (2-(4'-氟-[1,1'-聯苯基]-3-基)丙-2-基)胺基甲酸酯可用於治療幾乎任何於糖鞘脂途徑中由缺陷所引起之存儲疾病(例如高雪氏症(亦即，1型、2型、3型)，法布里氏症，G_M1-神經節苷脂貯積症，G_M2-神經節苷脂貯積症(例如，GM2活化劑缺乏症，戴薩克斯氏症及山德霍夫氏症))。於特別佳之具體例中，(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯或其製藥可接受的鹽或前藥係於法布里氏症之病患中用於抑制及/或減少Gb3及/或lyso-Gb3累積，無論以單獨或以與酵素替代療法之組合療法(參見實例)。於較佳之具體例中，該酵素替代療法包括投遞α-半乳糖苷酶A至法布里氏症病患。實際上，如下實例證明本發明之GCS抑制劑有效於減少法布里氏病小鼠模型中Gb3及lyso-Gb3存儲，因而支持其用作為治療法布里氏病之可行方法。此外，於該實例中所提供之體內組合療法數據強力地表明經組合之治療方法可加成且互補。

於特定具體例中，本發明之化合物，例如，(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯及啶-3-基 (2-(4'-氟-[1,1'-聯苯基]-3-基)丙-2-基)胺基甲酸酯可用於經診斷具有神經性高雪氏疾病之患者降低大腦中之GluCer及GluSph含量，無論以單獨或與ERT合併(例如，投遞葡糖腦苷脂酶(glucocerebrosidase))。

用於本發明組合療法之小分子療法組份之劑量攝取法通常係由熟練的臨床醫生決定，且預期係依所要治療之特別貯積症及特別受影響患者之臨床狀態而明顯變化。於本發明之給定SMT用來治療任何貯積症時，用於確定劑量攝取法之一般原則係已知於熟練的技術人員。劑量攝取法指南可由此方面技藝中於該主題上之任何許多熟知之參考中獲得。進一步之指南，尤其，可得自於本文中所引用之特定參考的評論。於特定具體例中，此等劑量可包括由約0.5毫克/公斤至約300毫克/公斤，較佳由約5毫克/公斤至約60毫克/公斤(例如，5毫克/公斤、10毫克/公斤、15毫克/公斤、20毫克/公斤、25毫克/公斤、30毫克/公斤、35毫克/公斤、40毫克/ 公斤、45毫克/公斤、50毫克/公斤、55毫克/公斤及60毫克/公斤)，每日由一至五次藉由腹腔內、口服或等效給藥。此等劑量可包括由約5毫克/公斤至約5克/公斤，較佳由約10毫克/公斤至約1克/公斤，每日由一至五次藉由口服、腹腔內或等效給藥。於一個具體例中，劑量範圍係由約10毫克/天至約500毫克/天(例如，10毫克/天、20毫克/天、30毫克/天、40毫克/天、50毫克/天、60毫克/天、70毫克/天、80毫克/天、90毫克/天、100毫克/天、110毫克/天、120毫克/天、130毫克/天、140毫克/天、150毫克/天、160毫克/天、170毫克/天、180毫克/天、190毫克/天、200毫克/天、210毫克/天、220毫克/天、230毫克/天、240毫克/天、250毫克/天、260毫克/天、270毫克/天、280毫克/天、290毫克/天、300毫克/天)。特別佳之口服劑量範圍係由約50毫克至約100毫克，其中，該劑量係每日投遞二次。特別之口服劑量範圍於本發明之化合物時係由約5毫克/公斤/天至約600毫克/公斤/天。於特別之口服劑量範圍中，於本發明之化合物時係由約1毫克/公斤/天至約120毫克/公斤/天，例如，1毫克/公斤/天、5毫克/公斤/天、10毫克/公斤/天、15毫克/公斤/天、20毫克/公斤/天、25毫克/公斤/天、30毫克/公斤/天、35毫克/公斤/天、40毫克/公斤/天、45毫克/公斤/天、50毫克/公斤/天、55毫克/公斤/天或60毫克/公斤/天、65毫克/公斤/天、70毫克/公斤/天、75毫克/公斤/天、80毫克/公斤/天、85毫克/公斤/天、90毫克/公斤/天、95毫克/公斤/天、100毫克/公斤/天、105毫克/公斤/天、110毫克/公斤/天、115毫克/公斤/天或120毫克/公斤/天。

於特定具體例中，本發明係關於使用本發明化合物之SMT組合療法及ERT療法用於治療溶酶體貯積病。可根據本發明治療之已知溶酶體貯積病之部分名單，包括常見病名、存儲物質，及對應酵素缺乏(改編自克勞德尼等，1998，同前(Id.)，表38-4)係列述於表5中。

已知於熟練技術人員之任何方法可用來監控疾病狀態及本發明組合療法之有效性。疾病狀態之臨床監控可包括但非侷限於器官體積(例如肝臟、脾臟)、血紅朊、紅血球計數、血細胞比容、血小板減少、惡病質(虛勞)，及血漿幾丁質酶含量(例如，殼三糖酶)。殼三糖酶，一種幾丁質酶家族的酶，已知係於具有溶酶體貯積病之患者中由高濃度巨噬細胞所產生(參見郭氏等，1995，遺傳代謝疾病期刊(J.Inherit.Metab.Dis.)18，717-722；丹坦特等，1996，遺傳代謝疾病期刊19，344-350；多德森德克 雷默等，1997，醫學設備(布宜諾斯艾利斯)57，677-684；薩妥利斯卡等，2000，臨床生物化學(Clin.Biochem.)33，147-149；薩妥利斯卡等，1998，臨床生物化學31，417-420；米斯崔等，1997，臨床血液學壁障(Baillieres Clin.Haematol.)10，817-838；楊氏等，1997，遺傳代謝疾病期刊20，595-602；賀拉克等，1994，臨床研究期刊(J.Clin.Invest.)93，1288-1292)。殼三糖酶宜與血管緊縮素轉化酶及非酒石酸鹽抗性酸性磷酸酯酶結合而測量，以監測高雪氏症病患之治療反應。

用於投遞本發明組合療法之方法與配製物係包括於此方面技藝中所熟知之所有的方法與配製物(參見，例如，雷明頓藥物科學，1980及隨後幾年，第16版及後續版本，A.奧斯陸主編，Easton Pa.；藥物控制釋放，1987，第2次修訂，約瑟夫R.羅賓遜&李文森H.L.合編，馬塞爾德克爾，ISBN：0824775880；藥物控釋百科全書，1999，伊迪絲馬西威滋，約翰威利父子公司，ISBN：0471148288；美國專利案號6,066,626且引用其中之參考；亦參見，於下面章節中所引用之參考)。

根據本發明，下列一般方法係提供治療溶酶體貯積病之組合療法。各個一般方法係包括以與優化臨床利益一致，同時減少單獨使用各治療相關不利之方式組合酵素替代療法與小分子療法。

於本發明之一個具體例中，酵素替代療法(單獨或與小分子療法組合)係投遞至起始之治療(亦即，該患者進行去除巨塊手術(to de-bulk))，且小分子療法係於減小腫瘤體積(de-bulking)階段之後給藥，以達到且維持穩定之長期治療效果，而無需頻繁的靜脈ERT注射。例如，酵素替代療法可經靜脈給藥(例如，於一至二小時期間)，以每週一次為基準，每二週一次，或每二個月一次，達數週或幾個月，或更久(例如，直到所涉及之指標器官如脾臟或肝臟顯示尺寸減小)。此外，起始去除巨塊手術治療之ERT階段可單獨或與小分子療法合併進行。當該小分子與口服給藥相容時，小分子療法組份為特別佳，因而提供進一步緩解頻繁的靜脈注射介入。

於ERT及SMT中交替，或根據需要補充SMT與ERT，係提供同時利用優勢之策略，且解決單獨使用各治療法時之相關弱點。ERT之優點，無論是用於減小腫瘤體積及/或用於更長期之護理，其為可用於通知醫生決定之更廣泛的臨床經驗。此外，患者可於去除巨塊手術階段，藉 由，例如，監控尿液或其他身體樣本中之生化代謝物，或藉由測量受影響之器官體積而有效地用ERT滴定。但是，ERT之缺點係，由於作用物不斷的再堆積而需要頻繁的給藥，通常包括每週或每兩週為基礎之靜脈注射。於病患中使用小分子療法降低或抑制被酶作用物累積之數量反而可降低ERT之給藥次數。例如，雙週酵素替代療法之給藥攝取法可提供"ERT假期"(例如，使用SMT)，因此頻繁的酵素注射不是所需要的治療法。此外，用組合療法治療溶酶體貯積病可提供互補的治療方法。實際上，如於下之實例中所證明者，SMT與ERT之組合療法可提供顯著的改善，超過單獨之治療平台。此等數據表明，使用SMT與ERT之組合療法可具有加成且互補二者。於一個具體例中，ERT可用作為去除巨塊手術(de-bulking)策略(亦即，用來啟動治療)，接著使用本發明之化合物或同時補充SMT。於另一個具體例中，首先使用本發明之化合物以SMT治療病患，接著藉由或同時補充ERT。於其他具體例中，SMT係用於具有溶酶體貯積病之病患中抑制或減少作用物進一步累積(或作用物再累積，若於用ERT去除巨塊手術後使用)，且根據需要，可任意地提供ERT以減少任何被酶作用物進一步累積。於一個具體例中，本發明係提供組合療法之方法用於治療經診斷為具有溶酶體貯積病之患者，其包括於酵素替代療法與小分子療法之間交替投遞。於另一個具體例中，本發明係提供組合療法之方法用於治療經診斷具有溶酶體貯積病之患者，其包括同時投遞酵素替代療法及小分子療法。於本發明之多種組合療法中，應理解投遞小分子療法可能於之前、同時或之後，發生投遞酵素替代療法。類似地，投遞酵素替代療法可能於之前、同時，或之後，發生投遞小分子療法。

於本發明之任何具體例中，該溶酶體貯積病係選自於下列之群組，包括：高雪氏症(1、2及3型)、尼曼匹克氏症(Niemann-Pick)、法柏氏症(Farber)、G_M1-神經節苷脂貯積症、G_M2-神經節苷脂貯積症(例如，GM2活化劑缺乏症、戴薩克斯氏症及山德霍夫氏症)、克拉貝氏症(Krabbe)、胡勒-謝伊氏症(Hurler-Scheie)(MPS I)、杭特氏症(Hunter)(MPS II)、聖菲利波氏症(Sanfilippo)(MPS III)A型、聖菲利波氏症(MPS III)B型、聖菲利波氏症(MPS III)C型、聖菲利波氏症(MPS III)D型、毛奇歐氏症(Marquio)(MPS IV)A型，毛奇歐氏症(MPS IV)B型、馬洛托-拉米氏症(Maroteaux-Lamy) (MPS VI)、Sly(MPS VII)、黏液腦硫脂病(mucosulfatidosis)、唾液酸酶(sialidoses)、黏脂症II、黏脂症III、黏脂症IV、法布里氏症(Fabry)、辛德勒氏症(Schindler)、龐貝氏症(Pompe)、唾液酸貯積病、岩藻糖苷貯積病(fucosidosis)、甘露糖苷貯積病(mannosidosis)、門冬醯葡糖胺尿症(aspartylglucosaminuria)、沃爾曼氏症(Wolman)，及神經元蠟樣脂褐質貯積症(neuronal ceroid lipofucsinoses)。

此外，該ERT提供有效數量之至少一種下列之酵素：葡糖腦苷脂酶、神經鞘磷脂酶、神經醯胺酶、G_M1-神經節苷脂-β-半乳糖苷酶、己糖胺酶A、己糖胺酶B、β-半乳糖腦苷脂酶、α-L-艾杜糖苷酸酶、艾杜糖醛酸硫酸酯酶(iduronate sulfatase)、乙醯肝素-N-硫酸酯酶、N-乙醯-α-胺基葡糖苷酶、乙醯CoA：α-胺基葡糖苷乙醯-轉移酶、N-乙醯-α-葡糖胺-6-硫酸酯酶、半乳糖胺-6-硫酸酯酶、β-半乳糖苷酶、半乳糖胺-4-硫酸酯酶(芳基硫酸酯酶B)、β-葡糖苷酸酶、芳基硫酸酯酶A、芳基硫酸酯酶C、α-神經胺糖酸苷酶(neuraminidase)、N-乙醯-葡糖胺-1-磷酸鹽轉移酶、α-半乳糖苷酶A、α-N-乙醯胺基半乳糖苷酶(galactosaminidase)、α-葡糖甙酶、α-岩藻糖苷酶(fucosidase)、α-甘露糖苷酶、門冬胺醯葡糖胺醯胺酶、酸性脂肪酶、棕櫚醯-蛋白質硫酯酶(CLN-1)、PPT1、TPP1、CLN3、CLN5、CLN6、CLN8、NPC1或NPC2。

根據本發明，該SMT及/或ERT係以至少一種下列之存儲物質：葡糖腦苷脂、神經鞘髓磷脂、神經醯胺、G_M1-神經節苷脂、G_M2-神經節苷脂、紅細胞糖苷酯、半乳糖醯基鞘胺醇、硫酸軟骨素、乙醯肝素硫酸酯、硫酸角質素(keratan sulfate)、硫脂、黏多糖、唾液酸寡糖、糖朊、唾液酸寡糖、糖脂、球形三醯神經醯胺(Globotriaosylceramide)、O-連接之糖肽、糖原、無水唾液酸、岩藻糖脂、岩藻糖基寡糖(fucosyloligosaccharide)、甘露糖基寡糖(mannosyloligosaccharide)、門冬胺醯葡糖胺、膽固醇酯、甘油三酸酯、顆粒嗜高滲沉積物-皂角苷A及D、ATP合成酶子群c、NPC1或NPC2產生縮減。

於本發明之特定具體例中，該小分子療法包括投遞有效數量之(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯至患者(參見圖2A)。於其他具體例中，該小分子療法包括投遞有效數量之啶-3-基 (2-(4'-氟-[1,1'-聯苯基]-3-基)丙-2-基)胺基甲酸酯至患者(參見圖2B)。該小分子療法可包括投遞一種或多種化合物至患者。於特定具體例中，至少一種該化合物為本發明之化合物，如那些顯示於圖2A及/或2B中者。

酵素替代療法可引起不想要的免疫反應。因此，免疫遏抑劑可與本發明組合療法之酵素替代療法組份一起使用。此等試劑亦可與小分子療法組份一起使用，但需要干預這一點一般是不太可能。已知於此方面技術人員之任何免疫遏抑劑可與本發明之組合療法一起使用。此等免疫遏抑劑包括但非侷限於環孢黴素(cyclosporine)、FK506、雷帕黴素(rapamycin)、CTLA4-Ig，及抗-TNF劑如伊納西普(etanercept)(參見例如，莫德，2000，過敏性氣喘免疫學年鑑(Ann.Allergy Asthma Immunol.)84，280-284；尼凡斯，2000，小兒科時論(Curr.Opin.Pediatr.)12，146-150；科柏格等，2000，Scand.J.Immunol.51，224-230；伊丹口等，2000，神經科學95，217-226；波特等，1999，Ann.N.Y.Acad.Sci.875，159-174；斯拉維克等，1999，免疫學研究(Immunol.Res.)19，1-24；迦薩耶夫等，1999，骨髓移植25，689-696；亨利，1999，臨床移植(Clin.Transplant.)13，209-220；古莫特等，1999，美國腎臟病學會雜誌(J.Am.Soc.Nephrol.)10，1366-1380；齊氏等，2000，移植，69，1275-1283)。抗-IL2受體(α-子群)抗體達利珠單抗(daclizumab)(例如，桑納帕(Zenapax).TM.)，於移植病患中已證明有效，亦可用作為免疫遏抑劑(參見例如，懷斯曼等，1999，藥物58，1029-1042；斑尼明諾夫滋等，2000，新英格蘭醫藥期刊(N.Engl J.Med.)342，613-619；龐帝塞利等，1999，藥物R.D.1，55-60；貝拉爾等，1999，藥物療法19，1127-1137；克霍夫等，2000，移植法69，1867-1872；貝格等，2000，Transpl.Int.13，151-159)。另外的免疫遏抑劑包括但非侷限於抗-CD2(布朗科等，1999，移植法68，1588-1596；派塞皮歐卡等，1998，血液92，4066-4071)、抗-CD4(馬里諾瓦-慕塔齊瓦等，2000，關節炎風濕病(Arthritis Rheum.)43，638-644；費斯維德等，1999，臨床免疫學(Clin.Immunol.)92，138-152)、及抗-CD40配體(洪氏等，2000，Semin.Nephrol.20，108-125；奇慕爾等，2000，J.Virol.74，3345-3352；伊妥等，2000，免疫學期刊(J.Immunol.)164，1230-1235)。

已知於熟練技術人員之任何免疫遏抑劑組合物可與本發明之組合療法一起使用。特別有用之一種免疫遏抑劑組合為他克莫司(tacrolimus)(FK506)加上西羅莫司(sirolimus)(雷帕黴素)加上達利珠單抗(抗-IL2受體α-子群抗體)。該組合經證明有效作為對類固醇及環孢鰴素之替代物，且當特定目標於肝臟時。此外，該組合最近已顯示使胰島細胞移植可能成功。參見丹尼斯格雷迪，紐約時報，週六，5月27日，2000，A1及A11頁。亦參見A.M.沙皮洛等，7月27日，2000，"胰島移植於具有1型糖尿病之七位病患中使用不含腎上腺糖皮質激素之免疫遏抑攝取法"，新英格蘭醫藥期刊(N.Engl.J.Med.)343，230-238；雷恩等，2001，糖尿病50，710-719。藉由已知於此方面技藝中任何方法之血漿除去法(Plasmaphoresis)亦可用於去除或耗盡可發展對抗組合療法多種組份之抗體。

使用於本發明之免疫狀態指標包括但非侷限於抗體及任何已知於熟練技術人員之細胞素，例如，白血球間素、CSFs及干擾素(通常參見，里奧納德等，2000，過敏症臨床免疫學期刊(J.Allergy Clin.Immunol.)105，877-888；歐柏賀塞等，2000，臨床照護醫學(Crit.Care Med.)28(4 Suppl.)，N3-N12；魯賓斯坦等，1998，細胞素生長因子，第9修訂版，175-181)。例如，可監控特定於替代酵素免疫反應之抗體，以測定該患者之免疫狀態。於二十幾種白血球間素之中，已知特別佳之免疫狀態指標為IL-1.α.、IL-2、IL-4、IL-8及IL-10。於群落刺激因子(CSFs)之中，特別佳之免疫狀態指標為G-CSF、GM-CSF及M-CSF。於干擾素之中，一種或多種α、β或γ干擾素宜作為免疫狀態指標。

於以下之章節中係提供可使用於八種特定溶酶體貯積病(亦即，高雪氏症(包括1、2及3型)、法布里氏症、尼曼匹克氏症B、杭特氏症、毛奇歐氏症、洛托-拉米氏症、龐貝氏症，及胡勒-謝伊氏症)之多種組份。於之後的章節中，係提供進一步能夠揭示用於本發明之組合療法之其他酵素替代療法及小分子療法組份。

高雪氏症

如上所述，高雪氏疾病係由缺乏酵素葡糖腦苷脂酶(ββ-D-葡糖基-N-醯基鞘胺醇葡萄糖苷酶，EC 3.2.1.45)及葡糖腦苷脂(葡糖苷醯鞘胺醇)累積所產生。於本發明組合療法之酵素替代療法組份用於治療高雪氏疾病時，可取得很 多闡明滿意之劑量攝取法參考資料及其他關於治療之有用資訊(參見莫拉爾斯，1996，高雪氏疾病：回顧，藥物治療年鑑(The Annals of Pharmacotherapy)30，381-388；羅森塔爾等，1995，用於高雪氏疾病之酵素替代療法：對巨噬細胞-目標之葡糖腦苷脂酶之框架性反應，小兒科96，629-637；巴頓等，1991，於高雪氏疾病時用於遺傳性酵素缺乏--巨噬細胞-目標之葡糖腦苷脂酶的替代療法，新英格蘭醫學期刊324，1464-1470；葛包斯基等，1995，於1型高雪氏疾病中之酵素療法：來自於天然與重組體來源之甘露糖-終止之葡糖腦苷脂酶的比較效果，內科醫學年鑑122，33-39；帕斯妥雷斯等，1993，於高雪氏疾病1型中之酵素療法：於33位病患中治療達6至24個月之劑量功效與不良效應，血液82，408-416)；及韋恩雷等，美國醫藥期刊(Am.J.Med.)；113(2)：112-9(2002)。

於一個具體例中係提供由每公斤2.5單位(U/kg)一週三次至60單位/公斤每二週一次之ERT劑量攝取法，其中，該酵素係藉1-2小時之靜脈注射浸劑投遞。葡糖腦苷脂酶之單位係定義為酵素於37℃每分鐘催化水解一微莫耳合成被酶作用物，對-硝基苯基-對-D-吡喃葡萄糖苷(glucopyranoside)之數量。於另一個具體例中係提供由1單位/公斤一週三次至120單位/公斤每二週一次之劑量攝取法。於還有另一個具體例中係提供由每日或一週三次0.25單位/公斤至每二至六週一次600單位/公斤之劑量攝取法。

自1991年以來，阿糖腦苷酶(alglucerase)(Ceredase®)已可得自於健贊公司(Genzyme Corporation)。阿糖腦苷酶為葡糖腦苷脂酶由胎盤(placentally)-所導生之改質形式。於1994年，伊米苷酶(imiglucerase)(Cerezyme®)亦變成可得自於健贊公司。伊米苷酶為於哺乳類細胞培養系統中(中國倉鼠卵巢細胞)由重組體DNA表現所導生之葡糖腦苷脂酶的改質形式。伊米苷酶為具有四個N-鍵結之糖基化作用部位之497個胺基酸之單體糖朊。伊米苷酶具有理論上無限供應且降低有關由胎盤-所導生之阿糖腦苷酶(aglucerase)之生物污染物機率之優點。此等酵素係於其等之糖基化作用部位上改質而曝露甘露糖殘基，其係一種經由甘露糖-6-磷酸鹽受體改善溶酶體目標之操作法。伊米苷酶係以一個於位置495之胺基酸，其中組胺酸被精胺酸所取代，而與胎盤葡糖腦苷脂酶不同。此等產品之一些劑量攝取法 係已知有效(參見莫拉爾斯，1996，同前；洛桑塞等，1995，同前；巴頓等，1991，同前；葛包斯基等，1995，同前；帕斯妥雷斯等，1993，同前)。例如，每兩週一次60單位/公斤(U/kg)之劑量攝取法臨床上受益於具有中度至嚴重疾病之患者。上述所引用之參考資料及此等產品之藥品說明書(package inserts)應由此方面技藝之從業者進行諮詢另外的劑量攝取法及給藥訊息。亦參見美國專利案號5,236,838及5,549,892指定給健贊公司。

如上所述，高雪氏疾病係由溶酶體酵素葡糖腦苷脂酶(GC)缺乏所引起。於高雪氏疾病(1型)最常見之表型中，病理限於網狀內皮組織與骨骼系統且無神經病性症狀。參見巴蘭吉，葡糖苷醯鞘胺醇脂質沉積：高雪氏症。於：斯克里佛CR BA，Sly WS，威爾D，主編，遺傳疾病之代謝基礎，紐約：麥克勞希爾，3635-3668頁(2001)中。於神經病性高雪氏症(nGD)中，係分為高雪氏病2型及3型，葡糖腦苷脂酶(GC)缺乏引起葡糖苷醯鞘胺醇(GluCer；GL-1)及葡糖鞘胺醇(GluSph)積聚於大腦中導致神經功能缺損。2型高雪氏症之特徵在於早發性，快速進展，於內臟及中樞神經系統中之廣泛性病理，且死亡通常於2歲的年齡。3型高雪氏症，亦稱為亞急型nGD，其為具有不同發病年齡及不同嚴重度及進展速度之中間表型。郭克-阿潘等，兒科期刊143：273-276(2003)。最新發展已產生2型高雪氏症之K14 lnl/lnl小鼠模型(以下簡稱，“K14小鼠”)；該小鼠模型非常接近模似之人類疾病，其顯示運動失調、癲癇發作、痙攣狀態及只有14天之降低的平均壽命。安奎斯特等，PNAS 104：17483-17488(2007)。

如於具有nGD之病患中者，由於GC活性缺乏，幾個該疾病之小鼠模型於大腦中GluCer與GluSph之含量已增加。劉氏等，PNAS 95：2503-2508(1998)及尼爾森，神經化學期刊(J.Neurochem)39：709-718(1982)。該“K14”小鼠顯示神經性表型與2型高雪氏疾病共有許多病理特點，如神經變性、星狀纖維增生、微神經膠質增生，且GluCer與GluSph於特定大腦區中之含量增加。安奎斯特等(2007)。

受nGD影響之病患，因為2型疾病之嚴重性且當前之療法不能越過腦血管障壁(BBB)，其之臨床管理對於治療醫生造成挑戰。現在之非-nGD治療係依賴靜脈注射傳送重組體人類葡糖腦苷脂酶(伊米苷酶；Cerezyme^TM)來替代缺少的酵素或投遞葡糖苷醯鞘胺醇合成酶抑制劑以減弱 被酶作用物(GL-1)產生。然而，此等藥物不穿越腦血管障壁，且因此預期不會對nGD病患提供治療利益。目前小分子葡糖苷醯鞘胺醇合成酶抑制劑於臨床上不太可能解決nGD之神經性表型。本發明之化合物，啶-3-基 (2-(4'-氟-[1,1'-聯苯基]-3-基)丙-2-基)胺基甲酸酯(以下簡稱，“Gz161”)之評價，於2型高雪氏疾病之K14小鼠模型中證明其確實可降低大腦GluCer及GluSph(參見實例122-125)。其亦減少大腦神經病理且延長該模型之壽命。此外，使用酵素替代與小分子作用物減少二者之合併方法可代表用於2型高雪氏疾病之卓越療法。

法布瑞氏症

如前所述，法布里氏疾病係由缺乏溶酶體酵素α-半乳糖苷酶A(α-galactosidase)所引起。該酵素不足導致全身性沉積具有末端α-半乳糖基部分之鞘糖脂，主要為球形三醯神經醯胺(GL3或Gb3)，且使半乳糖二糖基神經醯胺(galabiosylceramide)及血型B鞘糖脂之含量較小。

幾個驗定法可用來監控疾病進展及用來確定何時由一種治療模式轉換至另一種。於一個具體例中，可使用用來測定組織樣品中α-半乳糖苷酶A之特定活性驗定法。於另一個具體例中，可使用用來測定Gb3累積之驗定法。於另一個具體例中，專業人可測定糖鞘脂作用物於體液中及於血管之內血管、末梢及平滑肌細胞之溶酶體中之沉積。其他臨床表現可作為有用的疾病管理指標者，包括蛋白尿，或腎功能不全之其他徵象，如尿液中之紅細胞或脂質小球體，及紅血球沉積速率提高。人們亦可監控貧血、血清鐵濃度降低、高濃度之β-血栓球蛋白，及網狀紅血球計數升高或血小板凝集。實際上，可使用已知於熟練技術人員中用來監控疾病進展之任何方法(通常參見，迪斯尼克RJ等，1995，α-A-半乳糖苷酶A缺乏症：法布里氏疾病，於：遺傳疾病之代謝與分子基礎，史克里佛等，編輯，麥克勞-希爾，N.Y.，7.sup.th ed.，2741-2784頁)中。用於監控法布里氏疾病管理之較佳替代指標為疼痛。其他較佳之方法包括由體液或活檢標本測量該酵素及/或被酶作用物之總廓清率。於法布里氏疾病中，用於酵素替代療法之較佳劑量攝取法為每隔一天靜脈注射1-10毫克/公斤。可使用以由每隔一天至每週或每二週一次之頻率，由0.1至100毫克/公斤靜脈注射的劑量攝取法。

尼曼匹克氏症B

如前所述，尼曼匹克氏症B病係由該溶酶體酵素酸性神經鞘磷脂酶之活性降低及膜脂質累積，主要是神經鞘髓磷脂所引起。所要傳送之替代酸性神經鞘磷脂酶的有效劑量可於由約0.01毫克/公斤至約10毫克/公斤體重之範圍，以由每隔一天至每週，每二週一次，或每二個月一次之頻率。於其他具體例中，有效劑量可於由約0.03毫克/公斤至約1毫克/公斤；由約0.03毫克/公斤至約0.1毫克/公斤；及/或由約0.3毫克/公斤至約0.6毫克/公斤之範圍。於特別之具體例中，酸性神經鞘磷脂酶係以疊加高劑量(escalating dose)攝取法，按下列之順序劑量：0.1毫克/公斤；0.3毫克/公斤；0.6毫克/公斤；及1.0毫克/公斤投遞至病患，其中，酸性神經鞘磷脂酶之各個劑量係投遞至少二次，且各劑量係以二週間隔投遞，且其中於劑量提高至下一級之前，將該病患監控毒性副作用(參見美國專利申請公開案號2011/0052559。

胡勒-謝伊氏症(MPS I)

胡勒氏、謝伊氏，及胡勒-謝伊氏疾病，亦稱為MPS I，係由α-艾杜糖苷酸酶(α-iduronidase)鈍化及硫酸軟骨素與乙醯肝素硫酸酯累積所造成。幾個驗定法可用來監測MPS I疾病進展。例如，可於組織活檢標本或得自於末梢血液之培養細胞中監控α-艾杜糖苷酸酶酵素活性。此外，於MPS I及其他黏多糖貯積症中，方便的疾病發展測定為胺基葡聚糖(glycosaminoglycans)硫酸軟骨素與乙醯肝素硫酸酯之尿排泄(參見諾費爾德等，1995，同前)。於特別之具體例中，α-艾杜糖苷酸酶酵素係每週一次，如靜脈注射浸劑，以體重之0.58毫克/公斤之劑量給藥。

杭特氏症(MPS II)

杭特氏疾病(a.k.a.MPS II)係由艾杜糖醛酸硫酸酯酶鈍化及硫酸軟骨素與乙醯肝素硫酸酯累積所造成。杭特氏疾病臨床上係以嚴重及輕微的形式呈現。治療酵素之劑量攝取法係以由每二週1.5毫克/公斤至每週50毫克/公斤為佳。

毛奇歐氏症(Morquio)(MPS IV)

毛奇歐氏症候群(a.k.a.MPS IV)係由於二種酵素鈍化，由硫酸角質素累積所造成。於MPS IVA中，該鈍化酵素為半乳糖胺-6-硫酸酯酶且於MPS IVB 中，該鈍化酵素為β-半乳糖苷酶。治療酵素之劑量攝取法係以由每二週1.5毫克/公斤至每週50毫克/公斤為佳。

馬洛托-拉米氏症(MPS VI)

洛托-拉米氏症候群(a.k.a.MPS VI)係由半乳糖胺(alactosamine)-4-硫酸酯酶(芳基硫酸酯酶B)鈍化及硫酸軟骨素累積所造成。由每二週1.5毫克/公斤至每週50毫克/公斤之劑量攝取法為ERT所提供之有效治療酵素之較佳範圍。任意地，所採用之劑量係低於或等於每週10毫克/公斤。用於MPS VI疾病進展之較佳的替代指標為蛋白聚糖(roteoglycan)含量。

龐貝氏症

龐貝氏疾病係由酸性α-葡糖甙酶酵素鈍化及糖原累積所造成。該酸性α-葡糖甙酶基因位於人類染色體17上且命名為GAA。賀斯H.G.根據他這種疾病的研究首先提出先天性溶酶體疾病的概念，他稱其為II型糖原貯積病(GSD II)且現今其亦稱為酸性麥芽糖酶缺乏症(AMD)(參見賀斯，1965，胃腸病學48，625)。於特別具體例中，GAA係每兩週以20毫克/公斤體重之劑量作為靜脈注射浸劑給藥。

幾種驗定法可用來監控龐貝氏疾病進展。可使用已知於熟練技術人員之任何驗定法。例如，人們可測定糖原顆粒之內-溶酶體累積，特別於由切片檢查法所獲得之心肌、肝臟及骨骼肌纖維。α-葡糖甙酶酵素活性亦可於活檢標本中或得自於末梢血液之培養細胞中監控。可監控肌酸激酶(CK)之血清提升作為疾病進展之指示。血清CK，於嬰兒發作型病患中可升高多至10倍且於成人發作型中通常升高至較小的程度。參見赫胥宏R，1995，糖原貯積病II型：酸性α-葡糖甙酶(酸性麥芽糖酶)缺乏，於：遺傳疾病之代謝與分子基礎，斯克里佛等，主編，麥克勞希爾，紐約，7.sup.th ed.，2443-2464頁中。

酵素替代療法

下列之章節係闡述可用於本發明組合療法之酵素替代療法組份之特定揭示內容及替代具體例。通常，用於本發明組合療法之酵素替代療法組份之劑量攝取法一般係由熟練的臨床醫生來決定。用葡糖腦苷脂酶治療高雪氏疾病之劑量攝取法的幾個實例係提供於前。本發明組合療法任何給定之ERT組份用於治療任何LSD時，決定劑量攝取法之一般原則，由公開可取得之 資料，例如，於各特定LSD之章節中所引用之特定參考回顧對於熟練技術人員係顯而易知的。ERT可藉由靜脈注射浸劑投遞至病患。腦室注射及/或鞘內注射浸劑可用於(例如，除了靜脈注射浸劑)給藥ERT至經診斷具有CNS現象之溶酶體貯積病之病患。

已知於此方面技藝中之任何方法可用於製造所要使用於本發明組合療法之酵素替代療法組份中之酵素。很多此等方法係已知且包括但非侷限於由希爾製藥集團(Shire plc)開發之基因活化技術(參見美國專利案號5,968,502及5,272,071)。

小分子療法

下列之章節亦闡述可用於本發明組合療法之小分子療法組份之特定具體例及替代具體例。用於本發明組合療法之小分子療法組份之劑量攝取法通常係由熟練的臨床醫生來決定，且預期係依所要治療之特別貯積症及特別受影響患者之臨床狀況而顯著變化。於本發明之任何組合療法之給定SMT組份用於治療任何貯積症時，用於確定劑量攝取法之一般原則係熟知於熟練技術人員。劑量攝取法之指南可由任何此方面技藝中於該主題上之許多已知參考中獲得。進一步之指南，尤其，可得自於本文中所引用之特定參考的評論。

通常，本發明之化合物，例如，(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯及啶-3-基 (2-(4'-氟-[1,1'-聯苯基]-3-基)丙-2-基)胺基甲酸酯可使用於本發明之組合療法中，用於治療於糖鞘脂途徑中實質上由病灶所造成之任何貯積症(例如高雪氏症、法布里氏症、G_M1-神經節苷脂貯積症及G_M2-神經節苷脂貯積症(例如，GM2活化劑缺乏症，戴薩克斯氏症及山德霍夫氏症))。同樣，胺基糖苷(例如健大黴素(gentamicin)，G418)可使用於本發明之組合療法中，使用於具有提前停止-密碼子突變之任何貯積症患者(亦即，無意義突變)。此等突變特別普遍存在於胡勒氏症候群中。本發明組合療法之小分子療法組份，當對所要治療之貯積症有中樞神經系統表現者為特別佳(例如，山德霍夫氏症，戴薩克斯氏症，尼曼匹克氏症A型，及高雪氏症2及3型)，因為當與其他療法相較時，小分子通常可輕鬆穿越腦血管障壁。

使用於本發明組合療法中之作用物抑制劑之較佳劑量可容易地由熟練的技術人員來確定。於特定具體例中，此等劑量可於由約0.5毫克/公斤至約300毫克/公斤之範圍，宜由約5毫克/公斤至約60毫克/公斤(例如，5毫克/公斤、10毫克/公斤、15毫克/公斤、20毫克/公斤、25毫克/公斤、30毫克/公斤、35毫克/公斤、40毫克/公斤、45毫克/公斤、50毫克/公斤、55毫克/公斤及60毫克/公斤)藉由腹腔內、口服或等效給藥每日由一至五次。此等劑量可由約5毫克/公斤至約5克/公斤之範圍，較佳由約10毫克/公斤至約1克/公斤，藉由口服、腹腔內或等效給藥每日由一至五次。於一個具體例中，劑量範圍係由約10毫克/天至約500毫克/天(例如，10毫克/天、20毫克/天、30毫克/天、40毫克/天、50毫克/天、60毫克/天、70毫克/天、80毫克/天、90毫克/天、100毫克/天、110毫克/天、120毫克/天、130毫克/天、140毫克/天、150毫克/天、160毫克/天、170毫克/天、180毫克/天、190毫克/天、200毫克/天、210毫克/天、220毫克/天、230毫克/天、240毫克/天、250毫克/天、260毫克/天、270毫克/天、280毫克/天、290毫克/天、300毫克/天)。特別佳之口服劑量範圍為由約50毫克至約100毫克，其中該劑量係每日給藥二次。特別之口服劑量範圍用於本發明之化合物時係由約5毫克/公斤/天至約600毫克/公斤/天。於特別之口服劑量範圍用於本發明之化合物時係由約1毫克/公斤/天至約100毫克/公斤/天，例如，1毫克/公斤/天、5毫克/公斤/天、10毫克/公斤/天、15毫克/公斤/天、20毫克/公斤/天、25毫克/公斤/天、30毫克/公斤/天、35毫克/公斤/天、40毫克/公斤/天、45毫克/公斤/天、50毫克/公斤/天、55毫克/公斤/天或60毫克/公斤/天、65毫克/公斤/天、70毫克/公斤/天、75毫克/公斤/天、80毫克/公斤/天、85毫克/公斤/天、90毫克/公斤/天、95毫克/公斤/天或100毫克/公斤/天。

以轉換組合之治療平台(亦即，酵素替代與小分子療法)為佳。然而，亦可根據需要藉由重疊兩種方法來治療患者，如由熟練之臨床醫生決定。治療程序之實例可包括但非侷限於：(1)SMT接著ERT；(2)ERT接著SMT；且(3)ERT及SMT於大約相同的時間提供。如前所述，亦可根據需要進行時間重疊之治療平台，於給定之患者中依給定貯積症之臨床病程演變而定。

於各種組合療法之治療間隔可廣泛地變化，且依如何積極地存積所累積之產物而定，於不同之貯積症及不同的患者中通常為不同。例如，相較於龐貝氏症中快速存儲產物累積，法布里氏症存儲產物累積可能較慢。於特別患者中，特定貯積症之滴定係由熟練的技術人員藉由監控疾病進展之臨床徵象及治療獲得成功而進行。

累積於溶酶體貯積病中之多種大分子並非均勻地分佈，而是於各個疾病時，沉積於特定較佳之組織部位中。然而，外因性提供之酵素一般係藉網狀內皮組織系統之細胞提取且被分類至進行水解累積作用物之溶酶體隔層。此外，治療酵素之細胞吸收可藉由特定之動作來增加溶酶體目標而增加(參見例如美國專利案號5,549,892由弗里德曼等，指定給健贊公司，其說明具有改良藥物代謝動力之重組體葡糖腦苷脂酶，由於經改造之寡糖側鏈被細胞表面甘露糖受體認出將其胞吞，且運送到溶酶體中)。

有些治療形態標的一些受影響的器官比其他者好。於法布里氏症中，例如，若ERT未到達腎臟相當滿意的臨床效果，SMT可用於降低腎臟中被酶作用物的含量。如於實例112及圖6B中所證實者，SMT於法布里氏症小鼠模型之尿中有效地減少Gb3含量(亦即，該被酶作用物於法布里氏症病患中累積)比ERT至更大的程度。腎臟被認為是尿Gb3之主要來源。相反的，圖6B顯示ERT有效地降低血漿中之Gb3含量比SMT至更大的程度。此等結果證明ERT之組合療法及SMT利用這種優勢且針對單獨採用各治療法相關之弱點提供互補的治療策略。SMT能夠穿越BBB，當與ERT合併用於治療具有CNS表現之LSDs時，如尼曼皮克氏A型及神經病性高雪氏疾病(nGD)，係提供有力的方法。此外，藉由SMT與酵素替代療法合併減少作用物時，以分開及不同之介入點可提高臨床效果而解決存儲問題。

應可理解的是參考同時或並行投遞二種或多種治療法並不需要將其等同時給藥，只是其等於患者中同時作用。

圖1：於布魯克D8-高級衍射儀上進行之(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯蘋果酸鹽之晶形A衍射圖。

圖2：於布魯克D8-高級衍射儀上進行之(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯蘋果酸鹽之晶形B衍射圖。

圖3：於布魯克D8-高級衍射儀上進行之(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯(S)-2-羥基琥珀酸鹽之結晶衍射圖。

圖4：於布魯克D8-高級衍射儀上進行之(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯HCl鹽之晶形衍射圖。

實例1

(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯

步驟1：用甲基碘之二甲基化作用

方法：將3N RB燒瓶裝配溫度計、附加漏斗及氮氣入口。將該燒瓶用氮沖洗且將第三丁醇鉀(MW 112.21，75.4毫莫耳，8.46克，4.0當量，白色粉末)稱重且經由漏粉斗加至該燒瓶，接著添加THF(60毫升)。大多數第三丁醇鉀溶解而得到混濁溶液。將該混合物於冰-水浴中冷卻至0-2℃(內部溫度)。於單獨的燒瓶中，將啟動酯(MW 265.3，18.85毫莫耳，5.0克，1.0當量)溶解於THF(18毫升+2毫升作為沖洗劑)中且轉移至該附加漏斗。將該溶液於25-30分鐘期間逐滴加至該冷卻的混合物，於添加過程中內部溫度保持低於5℃。將該反應混合物冷卻回到0-2℃。於單獨的燒瓶中，製備含有甲基碘(MW 141.94，47.13毫莫耳，6.7克，2.5當量)於THF(6毫升)中之溶液且轉移至該附加漏斗。然後將含有甲基碘溶液之燒瓶用THF(1.5毫升)漂洗，然後將其轉移至業已含有甲基碘於THF中之澄清無色溶液之附加漏斗。將該溶液小心地於30-40分鐘期間逐滴加至深褐色反應混合 物，於添加時內部溫度保持低於10℃。於添加完成後，將微混濁之混合物再攪拌1小時，於此期間，該內部溫度下降至0-5℃。於0-5℃下攪拌1小時後，將該反應混合物於5-7分鐘期間緩緩逐滴添加5.0M水性HCl(8毫升)予以驟冷。於添加過程中內部溫度應保持低於20℃。於添加後，將水(14毫升)加入且將該混合物攪拌達2-3分鐘。停止攪拌且讓該2層分開。然後將該2層轉移至250毫升1N RB燒瓶且將該THF於真空中儘可能蒸發而得到THF/產物與水之雙相層。將該2層分開。將該步驟1產物之THF溶液使用於下一個反應中。

步驟2：以LiOH一水合物水解乙酯

方法：將含粗酯於THF中加至反應燒瓶。另外，將LiOH.H₂O(MW 41.96，75.0毫莫耳，3.15克，2.2當量)稱量於100毫升加入攪拌棒之燒杯中。添加水(40毫升)且將該混合物攪拌直到所有的固體溶解而得到澄清無色溶液。然後將該水溶液加到含該酯於四氫呋喃(THF)之溶液的250毫升RB燒瓶中。將冷凝器附著於燒瓶之頸且氮氣入口附著於該冷凝器之頂部。將該混合物回流加熱16小時。於16小時後停止加熱且將該混合物冷卻至室溫。將該THF於真空中蒸發而得到褐色溶液。於該乙酯完全水解時，將等份量褐色水溶液藉由HPLC及LC/MS予以分析。添加水(15毫升)且將該鹼性水溶液用TBME(2 x 40毫升)萃取以去除第三丁酯。將該鹼性水溶液於冰-水浴中冷卻至0-10℃且用攪拌逐滴添加濃HCl予以酸化至pH~1。於含該膠狀固體於酸性水溶液中加入TBME(60毫升)且將該混合物搖動且然後劇烈攪拌至所有的酸溶解於該TBME層中。將該2層轉移至分液漏斗且將TBME層分離出來。將淡黃色酸性水溶液用TBME(40毫升)再萃取且將TBME層分離且與前面的TBME層合併。將該含水酸層丟棄。將合併的TBME層於無水Na₂SO₄上乾燥，過濾且於真空中蒸發以去除TBME且得到呈橙色/暗黃色油之粗酸，其於高真空下固化成骯髒黃色著色的固體。將該 粗酸稱量且藉著將其於庚烷/TBME(3：1，5毫升/克粗的)中加熱而得到呈黃色固體之酸。

步驟3：以NH ₂ OH.HCl生成異羥肟酸

方法：將羧酸(MW 265.3，18.85毫莫耳，5.0克，1.0當量)稱重且於氮下轉移至25毫升1N RB燒瓶。添加THF(5.0毫升)且該酸容易溶解而得到澄清暗黃色至褐色溶液。將該溶液於冰浴中冷卻至0-2℃(浴溫)且將N,N’-羰基二咪唑(CDI；MW 162.15，20.74毫莫耳，3.36克，1.1當量)以小部分於10-15分鐘期間緩緩加入。將該冰浴移除且將該溶液於室溫攪拌達1小時。於攪拌1小時後，將該溶液再次於冰-水浴中冷卻至0-2℃(浴溫)。將羥基胺氫氯化物(NH₂OH.HCl；MW 69.49，37.7毫莫耳，2.62克，2.0當量)以小部分作為固體於3-5分鐘期間緩緩加入，因為該添加是放熱反應。於添加完成後，將水(1.0毫升)於2分鐘期間逐滴加至該不均勻混合物且將該反應混合物於0-10℃冰/水浴中攪拌達5分鐘。將該冷卻浴去除且將該反應混合物於氮下於室溫攪拌過夜達20-22小時。由於所有的NH₂OH.HCl溶解，該溶液變得清澈。於20-22小時後，將等份量之該反應混合物藉由高壓液體色層分離法(HPLC)予以分析。然後將該THF於真空中蒸發且將殘質於二氯甲烷(120毫升)及水(60毫升)中提取。將該混合物轉移至振盪中之分液漏斗且讓該2層分開。將水層丟棄且將該二氯甲烷層用1N氫氯化物(HCl；60毫升)清洗。將酸層丟棄。將該二氯甲烷層於無水Na₂SO₄上乾燥，過濾且溶劑於真空中蒸發而得到呈淡黃色固體之粗異羥肟酸，將其於高真空下乾燥過夜。

步驟3繼續：異羥肟酸成環狀中間體之轉化作用(不單離)

方法：將該粗異羥肟酸(MW 280.32，5.1克)轉移至具有氮氣入口之250毫升1N RB燒瓶。加入攪拌棒，接著添加乙腈(50毫升)。該固體不溶於乙腈中。將該黃色不均勻混合物於氮下攪拌達2-3分鐘且於室溫以單批計量加入CDI(MW 162.15，20.74毫莫耳，3.36克，1.1當量)。沒有觀察到放熱。該固體立刻溶解且將該澄清黃色溶液於室溫攪拌2-2.5小時。於2-2.5小時後，將等份量藉由HPLC及LC/MS予以分析，其顯示該異羥肟酸轉化為想要的環狀中間體。

然後將該乙腈於真空中蒸發而得到呈微紅色厚油之粗環狀中間體。將該油於甲苯(60毫升)中提取且將微紅色混合物加熱至回流2小時，於此期間，該環狀中間體釋放CO₂且重新排列至該異氰酸酯(參見下文)。

步驟3繼續：異氰酸酯成游離鹼之轉化作用

將該反應混合物溶解至50-60℃且將(S)-(+)-奎寧環醇(MW 127.18，28.28毫莫耳，3.6克，1.5當量)作為固體以批次計量加至該混合物。 將該混合物再加熱至回流達18小時。於18小時後，將等份量藉由HPLC及LC/MS予以分析，其顯示該異氰酸酯轉化至所想要的產物。將該反應混合物轉移至分液漏斗且添加甲苯(25毫升)。將該混合物用水(2 x 40毫升)清洗且將該水層分離。將該合併的水層用甲苯(30毫升)再萃取且將該水層丟棄。將該合併之甲苯層用1N HCl(2 x 60毫升)萃取且將該甲苯層(含有O-醯基雜質)丟棄。將該合併的HCl層轉移至500毫升配置攪拌棒之錐形燒瓶。將該攪拌之澄清黃/紅橙色溶液藉由逐滴添加50%重量/重量水性NaOH予以鹼化至pH 10-12。所想要之游離鹼由溶液中沉澱出來，呈骯髒黃色膠狀固體，其可卡住攪拌棒。於該混合物加入醋酸異丙酯(100毫升)且當該膠狀固體進入醋酸異丙酯時，將該混合物劇烈攪拌達5分鐘。停止攪拌且讓該2層分離。將黃色醋酸異丙酯層分離且將該鹼性含水層用醋酸異丙酯(30毫升)萃取。將鹼性含水層丟棄且將合併的醋酸異丙酯層於無水Na₂SO₄上乾燥，過濾於預先稱重之RB燒瓶中且將該溶劑於真空中蒸發而得到呈米色至棕褐色固體之粗游離鹼，將其於高真空下乾燥過夜。

步驟3繼續：粗游離鹼之再結晶作用

將該米色至棕褐色之粗游離鹼稱重且由庚烷/醋酸異丙酯再結晶(3：1，9.0毫升溶劑/粗游離鹼)。將適量庚烷/醋酸異丙酯與攪拌棒一起加至該粗游離鹼且將該混合物(游離鹼起始係部份溶解，但當加熱至回流時溶解而得到澄清微紅橙色溶液)加熱至回流達10分鐘。將熱源移除且當白色沉澱物形成時，用攪拌讓該混合物冷卻至室溫。於室溫攪拌達3-4小時後，將該沉澱物於真空軟管下使用瓷漏斗過濾出來，用庚烷(20毫升)清洗且於真空軟管下瓷漏斗上乾燥過夜。將該沉澱物轉移至結晶皿且於55℃真空烘箱中乾燥過夜。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ 8.04-7.83(m，2H)，7.20-6.99(m，3H)，5.53(s，1H)，4.73-4.55(m，1H)，3.18(dd，J=14.5，8.4Hz，1H)，3.05-2.19(m，5H)，2.0-1.76(m，11H)。¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)δ 166.38，165.02，162.54，162.8-155.0(d，C-F)，130.06，128.43，128.34，116.01，115.79，112.46，71.18，55.70，54.13，47.42，46.52，27.94，25.41，24.67，19.58。

實例2

(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯蘋果酸鹽之晶形A

將(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯(20克)之游離鹼於室溫溶解於IPA(140毫升)且過濾。將該濾液加至裝配懸臂式攪拌機及氮氣入/出口之1升r.b.燒瓶中。將L-蘋果酸(6.89克)於室溫溶解於IPA(100+30毫升)中且過濾。將該濾液加至上述1升燒瓶中。將產生之溶液於室溫(含或不含接種)於氮氣下攪拌達4-24小時。於此期間結晶出現。將該產物藉由過濾法收集起來且用少量IPA(30毫升)清洗。將該固體於真空烘箱中於55℃乾燥達72小時(23克，產量：)。

H¹ NMR CDCl3

實例3

(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯HCl鹽

將含(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯(0.78克，2毫莫耳)於IPA(8毫升)中於室溫攪拌。添加HCl(2M於IPA中，1毫升)。將該溶液接種且於室溫攪拌達18小時。將該產物藉由過濾法收集起來且於真空下乾燥產物(0.7克)。¹H NMR(400MHz，CDCl3)δ 12.(br，s，1H)，7.9-8.0(m，2H)，7.1-7.2(m，3H)，5.9(br，s，1H)，4.9-5.0(m，1H)，3.2-3.6(m，6H)，1.7-2.4(m，11H)。

實例4

(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯(S)-2-羥基琥珀酸鹽

將琥珀酸(0.15克)溶解於IPA(5毫升)中且於50℃攪拌。將含(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯(0.5克)於IPA(8毫升)中加入。將該溶液接種且於室溫攪拌達20小時。將該產物藉由過濾法收集起來且於真空下乾燥產物(0.4克)。¹H NMR(400MHz，CDCl3)δ 7.9(m，2H)，7.1-7.2(m，3H)，5.8(br，s，1H)，4.9(m，1H)，3.1-3.5(m，6H)，2.6(s，4H)，1.7-2.4(m，11H)。

Claims (24)

1. 一種(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯蘋果酸鹽之晶形A，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuK_α輻射線所測量之下列2-θ峰：18.095。
2. 一種(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯蘋果酸鹽之晶形A，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuKα輻射線所測量之下列2-θ峰：18.095及17.493。
3. 一種(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯蘋果酸鹽之晶形A，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuKα輻射線所測量之下列2-θ峰：18.095及19.516。
4. 一種(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯蘋果酸鹽之晶形A，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuKα輻射線所測量之下列2-θ峰：18.095、17.493，及19.516。
5. 一種(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯蘋果酸鹽之晶形A，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuKα輻射線所測量之下列2-θ峰：18.095、17.493、19.516及20.088。
6. 一種(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯蘋果酸鹽之晶形A，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuKα輻射線所測量之下列2-θ峰：18.095，17.493，19.516及20.088及17.125。
7. 一種(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯蘋果酸鹽之晶形B，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuKα輻射線所測量之下列2-θ峰：24.355。
8. 一種(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯蘋果酸鹽之晶形B，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuKα輻射線所測量之下列2-θ峰：24.355及21.167。
9. 一種(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯蘋果酸鹽之晶形B，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuKα輻射線所測量之下列2-θ峰：24.355、21.167及27.343。
10. 一種(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯蘋果酸鹽之晶形B，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuKα輻射線所測量之下列2-θ峰：24.355、21.167、27.343及16.111。
11. 一種(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯蘋果酸鹽之晶形B，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuKα輻射線所測量之下列2-θ峰：24.355、21.167、27,343、16.111及17.185。
12. 一種(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯蘋果酸鹽之晶形B，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuKα輻射線所測量之下列2-θ峰：24.355、21.167、27,343、16.111、17.185及20.243。
13. 一種(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯(S)-2-羥基琥珀酸鹽之晶形，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuKα輻射線所測量之下列2-θ峰：17.162。
14. 一種(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯(S)-2-羥基琥珀酸鹽之晶形A，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuKα輻射線所測量之下列2-θ峰：17.162及18.028。
15. 一種(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯(S)-2-羥基琥珀酸鹽之晶形，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuKα輻射線所測量之下列2-θ峰：17.162及14.280。
16. 一種(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯(S)-2-羥基琥珀酸鹽之晶形，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuKα輻射線所測量之下列2-θ峰：17.162、18.028及14.280。
17. 一種(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯(S)-2-羥基琥珀酸鹽之晶形，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuKα輻射線所測量之下列2-θ峰：17.162、18.028、14.280及18.153。
18. 一種(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯(S)-2-羥基琥珀酸鹽之晶形，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuKα輻射線所測量之下列2-θ峰：17.162、18.028、14.280、18.153及23.422。
19. 一種(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯HCl鹽之晶形，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuKα輻射線所測量之下列2-θ峰：18.087。
20. 一種(S)-啶-3-基(2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯HCl鹽之晶形，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuKα輻射線所測量之下列2-θ峰：12.818。
21. 一種(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯HCl鹽之晶形，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuKα輻射線所測量之下列2-θ峰：25.722。
22. 一種(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯HCl鹽之晶形，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuKα輻射線所測量之下列2-θ峰：12.818及25.722。
23. 一種(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯HCl鹽之晶形，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuKα輻射線所測量之下列2-θ峰：12.818、25.722及13.040。
24. 一種(S)-啶-3-基 (2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺基甲酸酯HCl鹽之晶形，其中該x-射線粉末衍射含有使用CuKα輻射線所測量之下列2-θ峰：12.818、25.722、13.040及28.91。