TW201429487A - 活化輔助ｔ細胞的方法 - Google Patents
活化輔助ｔ細胞的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- TW201429487A TW201429487A TW102146368A TW102146368A TW201429487A TW 201429487 A TW201429487 A TW 201429487A TW 102146368 A TW102146368 A TW 102146368A TW 102146368 A TW102146368 A TW 102146368A TW 201429487 A TW201429487 A TW 201429487A
- Authority
- TW
- Taiwan
- Prior art keywords
- hla
- molecule
- peptide
- drb1
- cells
- Prior art date
Links
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 102
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 title claims abstract description 39
- 238000000034 method Methods 0.000 title abstract description 85
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 255
- 101150084041 WT1 gene Proteins 0.000 claims abstract description 186
- 102000040856 WT1 Human genes 0.000 claims abstract description 185
- 108700020467 WT1 Proteins 0.000 claims abstract description 185
- 102100040485 HLA class II histocompatibility antigen, DRB1 beta chain Human genes 0.000 claims abstract description 159
- 108010039343 HLA-DRB1 Chains Proteins 0.000 claims abstract description 159
- 108010065026 HLA-DQB1 antigen Proteins 0.000 claims abstract description 101
- 102100036241 HLA class II histocompatibility antigen, DQ beta 1 chain Human genes 0.000 claims abstract description 50
- 102210026621 HLA-DRB1*13 Human genes 0.000 claims abstract description 50
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 claims abstract description 50
- 108010027412 Histocompatibility Antigens Class II Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 102000018713 Histocompatibility Antigens Class II Human genes 0.000 claims abstract description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 204
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 67
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 62
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 62
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 62
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 62
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 51
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 45
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 45
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 39
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 29
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 27
- PFBPIHUEFUNOIS-DVQPEGLTSA-N (2S)-2-[[(2S)-6-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-6-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-carbamimidamido-2-[[(2S)-2,6-diaminohexanoyl]amino]pentanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]hexanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-4-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-4-yl)propanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]hexanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-4-yl)propanoic acid Chemical compound CSCC[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](Cc1c[nH]cn1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](Cc1ccccc1)NC(=O)[C@H](Cc1ccc(O)cc1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]cn1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]cn1)C(O)=O PFBPIHUEFUNOIS-DVQPEGLTSA-N 0.000 claims description 19
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 12
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 11
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 11
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 7
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 33
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 33
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 33
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 28
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 21
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 19
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 17
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 15
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 14
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 13
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 13
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 13
- 101001100327 Homo sapiens RNA-binding protein 45 Proteins 0.000 description 12
- 102100038823 RNA-binding protein 45 Human genes 0.000 description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 12
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 11
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 11
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 10
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 10
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 10
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 10
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 10
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 9
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 9
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 210000000447 Th1 cell Anatomy 0.000 description 8
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 8
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 7
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 7
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 7
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 7
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 7
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 7
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 6
- 102100031618 HLA class II histocompatibility antigen, DP beta 1 chain Human genes 0.000 description 6
- 108010045483 HLA-DPB1 antigen Proteins 0.000 description 6
- 108010033222 HLA-DRB1*04 antigen Proteins 0.000 description 6
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 5
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 5
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 4
- 101100284398 Bos taurus BoLA-DQB gene Proteins 0.000 description 4
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 4
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 4
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 4
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 4
- 201000003793 Myelodysplastic syndrome Diseases 0.000 description 4
- 208000034176 Neoplasms, Germ Cell and Embryonal Diseases 0.000 description 4
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 4
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 208000002495 Uterine Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 4
- 201000003115 germ cell cancer Diseases 0.000 description 4
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 4
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 4
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 4
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 4
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 4
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 4
- 206010046766 uterine cancer Diseases 0.000 description 4
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 3
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 201000002313 intestinal cancer Diseases 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 102210010092 DQB1*03:01 Human genes 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102100040482 HLA class II histocompatibility antigen, DR beta 3 chain Human genes 0.000 description 2
- 102100028636 HLA class II histocompatibility antigen, DR beta 4 chain Human genes 0.000 description 2
- 108010010378 HLA-DP Antigens Proteins 0.000 description 2
- 102000015789 HLA-DP Antigens Human genes 0.000 description 2
- 108010062347 HLA-DQ Antigens Proteins 0.000 description 2
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 2
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 2
- 108010029657 HLA-DRB1*04:01 antigen Proteins 0.000 description 2
- 102210059845 HLA-DRB1*15:01 Human genes 0.000 description 2
- 108010061311 HLA-DRB3 Chains Proteins 0.000 description 2
- 108010040960 HLA-DRB4 Chains Proteins 0.000 description 2
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 2
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000599940 Homo sapiens Interferon gamma Proteins 0.000 description 2
- 101800000324 Immunoglobulin A1 protease translocator Proteins 0.000 description 2
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 2
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 2
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 2
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 2
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 2
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 2
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 2
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 2
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 2
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000002826 magnetic-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- -1 pcDNA3.1 Proteins 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 210000002706 plastid Anatomy 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 2
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 2
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 101100297345 Caenorhabditis elegans pgl-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 102210047211 DPB1*04:01 Human genes 0.000 description 1
- 102210047287 DQB1*03:02 Human genes 0.000 description 1
- 102210048109 DRB1*01:01 Human genes 0.000 description 1
- 102210047784 DRB1*13:02 Human genes 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 102100028976 HLA class I histocompatibility antigen, B alpha chain Human genes 0.000 description 1
- 102210053891 HLA-DPB1*03:01 Human genes 0.000 description 1
- 208000002250 Hematologic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- FHKZHRMERJUXRJ-DCAQKATOSA-N His-Ser-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 FHKZHRMERJUXRJ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- 108010088652 Histocompatibility Antigens Class I Proteins 0.000 description 1
- 101000621309 Homo sapiens Wilms tumor protein Proteins 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 208000005016 Intestinal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- AXZGZMGRBDQTEY-SRVKXCTJSA-N Leu-Gln-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O AXZGZMGRBDQTEY-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- ADJWHHZETYAAAX-SRVKXCTJSA-N Leu-Ser-His Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N ADJWHHZETYAAAX-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- NPBGTPKLVJEOBE-IUCAKERBSA-N Lys-Arg Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N NPBGTPKLVJEOBE-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- 108700019961 Neoplasm Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000048850 Neoplasm Genes Human genes 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 208000002151 Pleural effusion Diseases 0.000 description 1
- 230000006819 RNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 208000015634 Rectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 108010083312 T-Cell Antigen Receptor-CD3 Complex Proteins 0.000 description 1
- 102100034922 T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Human genes 0.000 description 1
- 102100036407 Thioredoxin Human genes 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- PSALWJCUIAQKFW-ACRUOGEOSA-N Tyr-Phe-Lys Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)N PSALWJCUIAQKFW-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 1
- 108700025700 Wilms Tumor Genes Proteins 0.000 description 1
- 208000008383 Wilms tumor Diseases 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 238000009098 adjuvant therapy Methods 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 description 1
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 description 1
- 239000012752 auxiliary agent Substances 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000002619 cancer immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000009566 cancer vaccine Methods 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 208000016661 childhood malignant kidney neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000001728 clone cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 239000000412 dendrimer Substances 0.000 description 1
- 229920000736 dendritic polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 1
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 125000004383 glucosinolate group Chemical group 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000026030 halogenation Effects 0.000 description 1
- 238000005658 halogenation reaction Methods 0.000 description 1
- 201000005787 hematologic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000019691 hematopoietic and lymphoid cell neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000024200 hematopoietic and lymphoid system neoplasm Diseases 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000046004 human WT1 Human genes 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000013411 master cell bank Methods 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 239000011325 microbead Substances 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000008026 nephroblastoma Diseases 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 229940043274 prophylactic drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 206010038038 rectal cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000001275 rectum cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 1
- 108060008226 thioredoxin Proteins 0.000 description 1
- 229940094937 thioredoxin Drugs 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 108010027345 wheylin-1 peptide Proteins 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/10—Peptides having 12 to 20 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/15—Cells of the myeloid line, e.g. granulocytes, basophils, eosinophils, neutrophils, leucocytes, monocytes, macrophages or mast cells; Myeloid precursor cells; Antigen-presenting cells, e.g. dendritic cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001152—Transcription factors, e.g. SOX or c-MYC
- A61K39/001153—Wilms tumor 1 [WT1]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
- A61K39/464452—Transcription factors, e.g. SOX or c-MYC
- A61K39/464453—Wilms tumor 1 [WT1]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/70539—MHC-molecules, e.g. HLA-molecules
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5154—Antigen presenting cells [APCs], e.g. dendritic cells or macrophages
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Virology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本發明係關於活化輔助T細胞的方法，其包含經由添加WT1肽至抗原呈現細胞而活化輔助T細胞之步驟，其中該WT1肽具有結合第二型MHC分子之能力，而該第二型MHC分子係選自HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子。
Description
本發明係關於活化輔助T細胞的方法，其包含經由添加WT1肽至抗原呈現細胞而活化輔助T細胞之步驟，其中該WT1肽具有結合第二型MHC分子(MHC class II molecule)之能力，而該第二型MHC分子係選自HLA-DRB1*08：02分子、HLA- DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子，及包含用於此方法之組合物、活化細胞毒殺性T細胞之方法、細胞毒殺性T細胞(CTL)之活化誘導物、經由活化輔助T細胞及/或細胞毒殺性T細胞而治療及/或預防癌症之醫藥組成物等。此專利申請案要求2012年12月17日提交的日本專利申請案第2012-274494號的優先權，通過引用將其全部內容併入本文中。
已確認WT1基因(Wilms腫瘤基因1)為小兒腎臟癌症Wilms腫瘤之致病基因，該基因編碼具有鋅指(zinc finger)結構之轉錄因子(非專利文獻1及2，以引用方式併入本文中)。後續研究說明上述基因係作為造血器官腫
瘤或實質固態瘤之癌症基因(非專利文獻3至6，以引用方式併入本文中)。
結果顯示，使用具有編碼WT1蛋白之一部分胺基酸序列之肽經由活體外刺激周邊血液單核細胞，而誘導細胞毒殺性T細胞(CTLs)對該肽具有專一性，而這些CTLs傷害內源性表達WT1之造血器官腫瘤或實質固態瘤之癌細胞。CTLs辨識上述肽與第一型MHC(MHC class I molecule)分子結合之複合體形式，如此該肽隨著第一型MHC之亞型而不同(專利文獻1至4，及非專利文獻7，以引用方式併入本文中)。
另一方面，為了有效誘導CTLs，對癌症抗原具有專一性之輔助T細胞的存在是重要的(非專利文獻8，以引用方式併入本文中)。輔助T細胞係經由辨識抗原呈現細胞上之第二型MHC分子與抗原肽之複合體而被誘導並活化。活化之輔助T細胞經由產生細胞介素諸如IL-2、IL-4、IL-5、IL-6或干擾素，而有助於B細胞之增殖、分化及成熟。因為此種輔助T細胞具有經由促進B細胞及T細胞之增殖及活化而活化免疫系統之功能，所以其被認為在癌症免疫療法中透過與第二型MHC結合之抗原肽而加強輔助T細胞功能，對加強癌症疫苗之效用是有用的(非專利文獻9，以引用方式併入本文中)。
最近已表明在具有編碼WT1蛋白之一部分胺基酸序列之特別肽中係存在可結合多種第二型MHC分子並活化輔助T細胞之通用型輔助肽(promiscuous helper
peptide)(於本說明書下文中亦稱為WT1肽)(專利文獻5及6，以引用方式併入本文中)。然而，因為有很多種第二型MHC分子，所以很難證明是否WT1肽對其他第二型MHC分子亦具有作用。
專利文獻1：國際公開WO 2003/106682號
專利文獻2：國際公開WO 2005/095598號
專利文獻3：國際公開WO 2007/097358號
專利文獻4：國際公開PCT/JP2007/074146號
專利文獻5：WO 2005/045027號
專利文獻6：國際公開WO 2008/105462號
非專利文獻1：Daniel A. Haber et al., Cell. 1990 Jun 29; 61(7): 1257-69
非專利文獻2：Call KM et al., Cell. 1990 Feb 9; 60(3): 509-20
非專利文獻3：Menke AL et al., Int Rev Cytol. 1998; 181: 151-212. Review
非專利文獻4：Yamagami T et al., Blood. 1996 Apr 1; 87(7): 2878-84
非專利文獻5：Inoue K et al., Blood. 1998 Apr 15;
91(8): 2969-76
非專利文獻6：Tsuboi A et al., Leuk Res. 1999 May; 23(5): 499-505
非專利文獻7：Oka Y et al., Immunogenetics. 2000 Feb; 51(2): 99-107
非專利文獻8：Gao FG et al., Cancer Res. 2002 Nov 15; 62(22): 6438-41
非專利文獻9：Zeng G, J Immunother. 2001 May; 24(3): 195-204
據此，本發明要達到之目標為經由施用特定之WT1肽於範圍廣泛之第二型MHC分子-陽性對象而提供活化輔助T細胞的方法、活化細胞毒殺性T細胞的方法，以及提供細胞毒殺性T細胞之活化誘導物、治療/預防癌症之醫藥組成物等。
在這種情況下，本發明者等經深入研究並發現一種肽，該肽具有胺基酸序列：Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His，並結合HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子，且活化輔助T細胞及/或細胞毒殺性T細胞。因而完成本發明。
本發明提供：(1)一種活化輔助T細胞的方法，其包含經由添加WT1肽至抗原呈現細胞而活化輔助T細胞之步驟，其中該WT1肽具有結合第二型MHC分子之能力，而該第二型MHC分子係選自HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子；(2)根據(1)之方法，其中該WT1肽具有結合至少兩個第二型MHC分子之能力，而該第二型MHC分子為HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子；(3)根據(1)或(2)之方法，其中該WT1肽另外具有結合第二型MHC分子之能力，而該第二型MHC分子係選自HLA-DRB1*01：01分子、HLA-DRB1*04：01分子、HLA-DRB1*04：03分子、HLA-DRB1*04：05分子、HLA-DRB1*04：06分子、HLA-DRB1*08：03分子、HLA-DRB1*09：01分子、HLA-DRB1*11：01分子、HLA-DRB1*15：01分子、HLA-DRB1*15：02分子、HLA-DRB3*02：02分子、HLA-DRB4*01：01分子、HLA-DPB1*02：01分子、HLA-DPB1*03：01分子、HLA-DPB1*05：01分子及HLA-DPB1*09：01分子；(4)根據(1)至(3)之任何一項的方法，其中經由添加WT1肽、編碼WT1肽之多核苷酸、含有該多核苷酸之表現載
體、或含有該表現載體之細胞而進行添加WT1肽至抗原呈現細胞；(5)根據(1)至(4)之任何一項的方法，其中該WT1肽為含有胺基酸序列：Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His(SEQ ID NO：2)之肽、其變異體或修飾物；(6)一種含有用於活化輔助T細胞之WT1肽的組成物，其係經由添加WT1肽至抗原呈現細胞而活化輔助T細胞，其中該WT1肽具有結合第二型MHC分子之能力，而該第二型MHC分子係選自HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子；(7)根據(6)之組成物，其中該WT1肽具有結合至少2個第二型MHC分子之能力，而該第二型MHC分子為HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子；(8)根據(6)或(7)之組成物，其中該WT1肽另外具有結合第二型MHC分子之能力，而該第二型MHC分子係選自HLA-DRB1*01：01分子、HLA-DRB1*04：01分子、HLA-DRB1*04：03分子、HLA-DRB1*04：05分子、HLA-DRB1*04：06分子、HLA-DRB1*08：03分子、HLA-DRB1*09：01分子、HLA-DRB1*11：01分子、
HLA-DRB1*15：01分子、HLA-DRB1*15：02分子、HLA-DRB3*02：02分子、HLA-DRB4*01：01分子、HLA-DPB1*02：01分子、HLA-DPB1*03：01分子、HLA-DPB1*05：01分子及HLA-DPB1*09：01分子；(9)根據(6)至(8)中任何一項的組成物，其中經由添加WT1肽、編碼WT1肽之多核苷酸、含有該多核苷酸之表現載體、或含有該表現載體之細胞而進行添加WT1肽至抗原呈現細胞；(10)根據(6)至(9)中任何一項之組成物，其中該WT1肽為含有胺基酸序列：Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His(SEQ ID NO：2)之肽、其變異體或修飾物；(11)一種抗原呈現細胞，該抗原呈現細胞呈現含有WT1肽之抗原肽與第二型MHC分子之複合體，其中該第二型MHC分子為選自HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子之第二型MHC分子；(12)一種輔助T細胞，該輔助T細胞辨識含有WT1肽之抗原肽與第二型MHC分子之複合體，其中該第二型MHC分子為選自HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子之第二型MHC分子；
(13)一種細胞毒殺性T細胞，該細胞毒殺性T細胞係經根據(12)之輔助T細胞活化；(14)一種治療或預防癌症之醫藥組成物，其包含任何根據(6)至(10)中任何一項之組成物、根據(11)之抗原呈現細胞、根據(12)之輔助T細胞或根據(13)之細胞毒殺性T細胞作為活性成分；(15)一種用於活化細胞毒殺性T細胞之醫藥組成物，其包含任何WT1肽、編碼WT1肽之多核苷酸、含有該多核苷酸之表現載體、或含有該表現載體之細胞，以作為活性成分，並將該醫藥組成物給藥於具有第二型MHC分子之對象，而該第二型MHC分子係選自HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子；(16)一種專一性結合WT1肽之抗體，其中該WT1肽具有結合第二型MHC分子之能力，而該第二型MHC分子係選自HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子；(17)一種測定有關第二型MHC分子陽性之對象之WT1-專一性輔助T細胞之存在或量的方法，而第二型MHC分子係選自HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子，該方
法包含下列步驟：(a)使用WT1肽刺激得自對象之試樣，及(b)測定細胞介素或輔助T細胞之存在或量，其中細胞介素或輔助T細胞之存在或量之增加顯示WT1-專一性輔助T細胞之存在或量。
根據本發明，係經由將WT1肽施用於具有第二型MHC分子之對象而得到活化輔助T細胞的方法、用於活化輔助T細胞之組成物、活化細胞毒殺性T細胞的方法、用於活化細胞毒殺性T細胞之組成物、細胞毒殺性T細胞之活化誘導物、經由活化輔助T細胞及細胞毒殺性T細胞而治療及/或預防癌症之醫藥組成物等，而該第二型MHC分子係選自HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子，如此使具有此種第二型MHC分子之對象在活體內或活體外之輔助T細胞及細胞毒殺性T細胞能活化，並治療及預防癌症等。
第1圖顯示殖株(Clone)R82-1之HLA限制性。橫軸顯示添加WT1-332(黑色柱狀圖)或溶劑(白色柱狀圖)後之IFN-γ產量(pg/ml)。縱軸顯示抗原呈現B-LCL細胞之類型。數據表示平均值±SD(3重複)。$：數據包含外推值
(extrapolated value)。
第2圖顯示殖株R132-1之HLA限制性。橫軸顯示添加WT1-332(黑色柱狀圖)或溶劑(白色柱狀圖)後之IFN-γ產量(pg/ml)。縱軸顯示抗原呈現B-LCL細胞之類型。數據表示平均值±SD(3重複)。$：數據包含外推值。
第3圖顯示殖株R143-1之HLA限制性。橫軸顯示添加WT1-332(黑色柱狀圖)或溶劑(白色柱狀圖)後之IFN-γ產量(pg/ml)。縱軸顯示抗原呈現B-LCL細胞之類型。數據表示平均值±SD(3重複)。$：數據包含外推值。
第4圖顯示殖株R145-2之HLA限制性。橫軸顯示添加WT1-332(黑色柱狀圖)或溶劑(白色柱狀圖)後之IFN-γ產量(pg/ml)。縱軸顯示抗原呈現B-LCL細胞之類型。數據表示平均值±SD(3重複)。$：數據包含外推值。
第5圖顯示殖株Q32-1之HLA限制性。橫軸顯示添加WT1-332(黑色柱狀圖)或溶劑(白色柱狀圖)後之IFN-γ產量(pg/ml)。縱軸顯示抗原呈現B-LCL細胞之類型。數據表示平均值±SD(3重複)。$：數據包含外推值。
第6圖顯示殖株Q41-1之HLA限制性。橫軸顯示添加WT1-332(黑色柱狀圖)或溶劑(白色柱狀圖)後之IFN-γ產量(pg/ml)。縱軸顯示抗原呈現B-LCL細胞之類型。數據表示平均值±SD(3重複)。$：數據包含外推值。
一方面，本發明提供一種活化輔助T細胞或細胞毒殺性T細胞的方法，其包含經由將WT1肽加至抗
原呈現細胞而活化輔助T細胞或細胞毒殺性T細胞之步驟，其中該WT1肽具有結合第二型MHC分子之能力。本發明中，可透過活化輔助T細胞之步驟進行活化細胞毒殺性T細胞之步驟。而且，本發明所使用之WT1肽係具有結合第二型MHC分子之能力者，而該第二型MHC分子係選自HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子。並且，本發明所使用之WT1肽可為具有結合至少兩個或更多個上述之第二型MHC分子之能力者。而且，本發明所使用之WT1肽可具有結合任何第二型MHC分子(例如，HLA-DR、HLA-DQ及HLA-DP分子)之能力。
本發明中，WT1肽可為具有SEQ ID NO：1所示之人類WT1蛋白之一部分胺基酸序列之肽。本發明之肽之胺基酸序列及長度沒有特別限制，只要該肽具有上述特性。然而，太長的肽易受蛋白酶作用，而太短的肽不能很好地與肽容納槽(accommodating grove)結合。本發明之肽長度較佳為10至25個胺基酸，更佳為15至21個胺基酸，再更佳為16至20個胺基酸，例如，16個胺基酸、17個胺基酸、18個胺基酸或19個胺基酸。本發明之肽之具體例為含有胺基酸序列：Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His(SEQ ID NO：2)者。
此外，本發明所使用之WT1肽包含上述肽之變異體。該變異體可包含，例如，選自由具有下述胺基
酸序列之肽所組成之群組之肽，該胺基酸序列為SEQ ID NO：2所示之胺基酸序列之幾個胺基酸，例如，1至9個，較佳為1至5個、1至4個、1至3個，更佳為1至2個胺基酸，再更佳為1個胺基酸經取代、刪除或添加者。可於任何位置及用任何類型之胺基酸進行肽中胺基酸之取代，及保守性胺基酸(conservative amino acid)取代為較佳。保守性胺基酸取代之實例包含用Asp殘基取代Glu殘基、用Tyr殘基取代Phe殘基、用Ile殘基取代Leu殘基、用Ser殘基取代Ala殘基、用Arg殘基取代His殘基等。較佳地，可在肽之N端及C端進行胺基酸之添加或刪除，但可在內部序列中進行。本發明之肽之較佳具體例為具有SEQ ID NO：2者。就此而論，上述之任一肽必須具有結合第二型MHC分子之能力，而此第二型MHC分子係選自HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子，及必須活化輔助T細胞或細胞毒殺性T細胞(本文中，亦稱為CTL)。而且，人類MHC分子一般稱為HLA分子，因此，本說明書中使用MHC作為HLA之同義字。
此外，本發明之肽可為經由修飾上述胺基酸序列而得到者。可用已知方法修飾上述胺基酸序列中之胺基酸殘基。此種修飾可為，例如，在胺基酸殘基側鏈之官能基上之酯化、烷化、鹵化、磷酸化等。而且，使各種不同物質與含有上述胺基酸序列之肽的N端及/或C端結
合是可能的。例如，可使胺基酸、肽、其類似物等與肽結合。例如，可添加組胺酸標籤，或與蛋白質諸如硫氧還蛋白(thioredoxin)一起形成融合蛋白。或者，將可偵測之標記與WT1肽結合。假如這些物質與本發明之肽結合，彼等可經由，例如，活體內酵素等處理，或經由諸如細胞內加工之製程處理而最後產生由上述胺基酸序列所組成之肽，而此肽係以與第二型MHC分子所成之複合體存在於細胞表面，因而能得到對輔助T細胞及/或細胞毒殺性T細胞之誘導作用。這些物質可為調控本發明之肽之溶解性者、改進肽之穩定性諸如蛋白酶抗性者、使得本發明之肽專一性傳遞至，例如，特定之組織或器官者、或具有抗原呈現細胞攝取效能之加強作用或其他作用者。而且，這些物質可為增加誘導CTL之能力者，例如，本發明之肽以外的輔助肽。
可使用本發明所屬領域中通常使用之方法或其修改之方法來合成本發明所使用之WT1。此種合成方法揭露於，例如，Peptide Synthesis,Interscience,New York,1966；The Proteins,Vol.2,Academic Press Inc.,New York,1976；Peptide Synthesis,Maruzen Co.,Ltd.,1975；Basis and Experiments of Peptide Synthesis,Maruzen Co.,Ltd.,1985；Development of Medicines(continuation),Vol.14,Peptide Synthesis,Hirokawa Shoten Co.,1991等(這些參考文獻係以引用方式併入本文中)。而且，可以編碼肽之核苷酸序列之信息為基礎使用遺傳工程技術而製備本發明所使用之肽。本發明所屬領域中熟練之技術人員均熟知此種遺傳工程技
術。可根據諸如文獻(Molecular Cloning,T.Maniatis et al.,CSH Laboratory(1983)；DNA Cloning,DM.Glover,IRL PRESS(1985))所述之方法來進行此種技術(這些參考文獻係以引用方式併入本文中)。
而且，本發明係關於編碼上述WT1肽之多核苷酸序列。該編碼WT1肽之多核苷酸序列可為DNA序列或RNA序列。本發明中，可使用此種多核苷酸序列取代WT1肽。可經由整合至適當之載體而使用此種多核苷酸序列。該載體包含質體、噬菌體載體、病毒載體等，例如，pUC118、pUC119、pBR322、pCR3、pYES2、pYEUra3、pKCR、pCDM8、pGL2、pcDNA3.1、pRc/RSV、pRc/CMV、pAcSGHisNT-A、λ ZAPII、λ gt11等。如需要，載體可含有諸如可誘導表現之啟動子、編碼訊息序列之基因、篩選用之標記基因及終止子之因子。本發明所屬領域中熟練之技術人員均熟知將這些基因導入細胞或活體之方法、表現其等之方法等。
本發明所使用之抗原呈現細胞為可將含有上述WT1肽之抗原肽與第二型MHC分子一起呈現於輔助T細胞者，及意指，例如，樹突細胞、周邊血液單核細胞等。據此，衍生為本發明所使用之抗原呈現細胞之對象必須具有與添加之WT1肽能與其結合之第二型MHC分子相同之分子(例如，任何一個或多個下列第二型MHC分子：HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、
HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子)。
本發明中，可直接由添加WT1肽，或間接由添加編碼WT1肽之多核苷酸或含有編碼WT1肽之多核苷酸之表現載體、或經由添加含有該表現載體之細胞而進行添加WT1肽至抗原呈現細胞。具體地，經由使抗原呈現細胞與WT1肽接觸，或將編碼WT1肽之多核苷酸或含有該多核苷酸之表現載體導入抗原呈現細胞，可進行添加WT1肽至抗原呈現細胞。可經由本發明所屬領域中熟知之方法進行上述之添加。可經由本發明所屬領域中熟練之技術人員熟知之技術得到上述編碼WT1肽之多核苷酸、含有編碼WT1肽之多核苷酸之表現載體、及含有該表現載體之細胞。具體地，可以上述WT1肽之胺基酸序列(例如，SEQ ID NO：2所示之胺基酸序列)為基礎而決定本發明所使用之多核苷酸。可經由，例如，DNA或RNA合成、PCR方法等而製備上述多核苷酸。而且，可取決於導入表現載體之宿主之目的、類型等而恰當地選擇含有上述多核苷酸、除了上述多核苷酸序列之外所含有之序列等之表現載體類型。表現載體包含質體、噬菌體載體、病毒載體等。可經由，例如，轉殖宿主細胞而製備含有表現載體之細胞。宿主細胞包含大腸桿菌(Escherichia coli)細胞、酵母菌細胞、昆蟲細胞、動物細胞等。轉殖宿主細胞之方法可為常用之方法，且可使用，例如，磷酸鈣法、DEAE-聚葡萄糖(dextran)法、電穿孔法及用於基因轉殖之脂質。
一般而言，當T細胞表面之TCR-CD3複合
體透過抗原呈現細胞表面之第二型MHC分子辨識抗原肽時即活化輔助T細胞，且抗原呈現細胞表面之整合素(integrin)配體刺激T細胞表面之整合素。本說明書中輔助T細胞之活化不僅包含輔助T細胞之活化而且包含輔助T細胞之誘導及增殖。而且，本發明中經活化之輔助T細胞可為未分化T細胞(例如，原始T細胞)等。經活化之輔助T細胞具有經由促進B細胞及細胞毒殺性T細胞之誘導、增殖及活化而活化免疫系統之功能。據此，本發明之方法可用作為治療癌症等之輔助療法。而且，使用本發明之方法在活體外活化之輔助T細胞可用於治療或預防癌症等，或作為用於治療或預防癌症之輔助劑。可經由，例如，測量細胞介素諸如干擾素(例如，干擾素-γ等)及白介素之產生及分泌而評估輔助T細胞之活化。
另一方面，本發明提供一種經由添加WT1肽至抗原呈現細胞而活化輔助T細胞或細胞毒殺性T細胞之組成物。本發明中，可透過輔助T細胞之活化而進行細胞毒殺性T細胞之活化。雖然本發明之組成物可以WT1肽、編碼WT1肽之多核苷酸、含有該多核苷酸之表現載體、及含有該載體之細胞為示例，但是可使用任何分子，該分子為能於抗原呈現細胞上呈現如抗原肽之WT1肽之因子。可經由如上述之本發明所屬領域中熟練之技術人員熟知之方法而得到這些因子。
如上述，本發明所使用之WT1具有結合任何下列分子之能力：HLA-DRB1*08：02分子、
HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子。而且，本發明所使用之WT1可具有結合至少兩個或更多個上述第二型MHC分子之第二型MHC分子之能力。另外，本發明所使用之WT1可具有結合任何HLA-DR、HLA-DQ或HLA-DP分子之第二型MHC分子之能力。
將本發明之組成物給藥於具有任何一種或多種HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子之第二型MHC分子之對象時，該對象之免疫系統經輔助T細胞及/或細胞毒殺性T細胞之活化而活化。而且，WT1基因高度表現於各種不同癌症及腫瘤，例如，惡性血液病諸如白血病、骨髓化生不良症候群(myelodysplastic syndrome)、多發性骨髓瘤及惡性淋巴瘤，以及實質固態瘤諸如胃癌、直腸癌、肺癌、乳癌、生殖細胞癌、肝癌、皮膚癌、膀胱癌、攝護腺癌、子宮癌、子宮頸癌及卵巢癌，因此，可使用本發明之組成物作為治療或預防癌症之輔助劑。或者，可使用以本發明組成物活化之輔助T細胞、細胞毒殺性T細胞等作為，例如，治療上述癌症之輔助劑。
除上述WT1肽、編碼WT1肽之多核苷酸、含有該多核苷酸之表現載體、及含有該載體之細胞之外，本發明之組成物可含有，例如，載劑、賦形劑及添加物等。
上述本發明之組成物所含有之WT1肽等以WT1肽-專一性之方式活化輔助T細胞及/或細胞毒殺性T細胞，因此，該組成物可含有已知之第一型MHC-限制性WT1肽，或可與此種肽一起施用。
可取決於諸如輔助T細胞及/或細胞毒殺性T細胞所需之活化程度及抗原呈現細胞之狀態之條件而恰當地選擇施用本發明之組成物之方法。施用方法包含，例如，經由皮內給藥、皮下給藥、肌肉內給藥、靜脈給藥、經鼻給藥、口服給藥等給藥於對象，或添加至抗原呈現細胞之培養液，但不限於此。可取決於諸如輔助T細胞及/或細胞毒殺性T細胞所需之活化程度、及抗原呈現細胞之狀態之條件而恰當地選擇本發明之組成物所含有之上述WT1肽等之量、組成物形態、組成物施用次數等。
再另一方面，本發明提供一種治療或預防對象之癌症的方法，其包含經由添加WT1肽至抗原呈現細胞而活化輔助T細胞或細胞毒殺性T細胞之步驟，其中該WT1肽具有結合第二型MHC分子之能力，而該第二型MHC分子係選自HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子。本發明之方法經由活化對象之輔助T細胞及/或細胞毒殺性T細胞而活化免疫系統，因而治療或預防該對象之癌症。本發明之方法中，可透過活化輔助T細胞之步驟而進行活化細胞毒殺性T細胞之步驟。可直接由添加WT1肽，或間接
由添加編碼WT1肽之多核苷酸或含有編碼WT1肽之多核苷酸之表現載體、或經由添加含有該表現載體之細胞而進行添加WT1肽至抗原呈現細胞。如上述，可經由本發明所屬領域中熟練之技術人員熟知之方法而得到上述編碼WT1肽之多核苷酸、含有編碼WT1肽之多核苷酸之表現載體、及含有該表現載體之細胞。可施用本發明之方法之對象為有關第二型MHC分子為陽性者，而該第二型MHC分子係選自HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子。可施用本發明之癌症可為任何癌症，且包含，例如，造血器官腫瘤諸如白血病、骨髓化生不良症候群、多發性骨髓瘤及惡性淋巴瘤，以及實質固態瘤諸如胃癌、腸癌、肺癌、乳癌、生殖細胞癌、肝癌、皮膚癌、膀胱癌、攝護腺癌、子宮癌、子宮頸癌及卵巢癌。而且，本發明之方法可與使用第一型MHC分子-限制性WT1肽或用於治療或預防癌症之醫藥組成物而治療或預防癌症之方法一起使用。
再另一方面，本發明提供一種用於製備上述組成物之WT1肽、編碼WT1肽之多核苷酸、含有該多核苷酸之載體、及含有該載體之細胞之用途。
再更另一方面，本發明係關於一種含有上述WT1肽、編碼WT1肽之多核苷酸、含有該多核苷酸之載體、或含有該載體之細胞之套組，此套組係用於經添加WT1肽至抗原呈現細胞而活化輔助T細胞及/或細胞毒殺
性T細胞，其中該WT1肽具有結合第二型MHC分子之能力，而該第二型MHC分子係選自HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子、及HLA-DQB1*04：01分子。較佳地，該套組係用於上述活化輔助T細胞或細胞毒殺性T細胞之方法。除WT1肽之外，本發明之套組可含有，例如，得到抗原呈現細胞之手段、評估輔助T細胞及/或細胞毒殺性T細胞之活性之手段等。一般，套組附有使用手冊。使用本發明之套組可有效地活化輔助T細胞或細胞毒殺性T細胞。
另一方面，本發明提供一種呈現含有WT1肽之抗原肽與第二型MHC分子之複合體之抗原呈現細胞。在此情況下，該第二型MHC分子可為任何HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子之分子，或可為至少兩個或更多個上述第二型MHC分子之分子。可使用本發明所屬領域中熟練之技術人員熟知之技術製備本發明之抗原呈現細胞。例如，自癌症患者分離具有抗原呈現能力之細胞而製備抗原呈現細胞，然後用上述WT1肽(例如，具有SEQ ID NO：2所示胺基酸序列之肽)或編碼WT1肽之多核苷酸脈衝(pulse)該分離之細胞，或將含有該多核苷酸之表現載體導入該細胞，因而使得含有WT1肽之抗原肽與第二型MHC分子之複合體存在於細胞表面
(Cancer Immunol.Immunother.46：82,1998,J.Immunol.,158：p1796,1997,Cancer Res.,59：p1184,1999,CancerRes.,56：p5672,1996,J.Immunol.,161：p5607,1998,J.Exp.Med.,184：p465,1996)(這些參考文獻係以引用方式併入本文中)。本說明書中，具有抗原呈現能力之細胞並無限制，只要彼等表現能於細胞表面呈現WT1肽之第二型MHC分子，而具有高抗原呈現能力之周邊血液單核細胞或樹突細胞為較佳。而且，如實施例中所示，本發明之抗原呈現細胞之存在係經細胞毒殺性T細胞之活性增加而確定，而細胞毒殺性T細胞之活性增加係經干擾素-γ之量的增加而確定。在細胞療法(例如，樹突細胞療法)中係有效地使用本發明之抗原呈現細胞作為醫藥組成物之活性成分。
再另一方面，本發明提供一種辨識含有WT1肽之抗原肽與第二型MHC分子之複合體之輔助T細胞。在此情況，該第二型MHC分子可為HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子中之任何分子，或可為至少兩個或更多個上述第二型MHC分子之分子。本發明之輔助T細胞包含，例如，辨識含有SEQ ID NO：2所示之胺基酸序列所組成之肽之抗原肽與第二型MHC分子之複合體者，而該第二型MHC分子係選自HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及
HLA-DQB1*04：01分子。很容易經由本發明所屬領域中熟練之技術人員使用本發明所屬領域中熟知之技術來製備並得到本發明之輔助T細胞。(Iwata,M.et al.,Eur.J.Immunol,26,2081(1996))(該參考文獻係以引用方式併入本文中)。
再另一方面，本發明提供一種經由辨識含有WT1肽之抗原肽與第二型MHC分子之複合體之輔助T細胞而活化之細胞毒殺性T細胞。本發明之細胞毒殺性T細胞包含，例如，經輔助T細胞活化者，而該輔助T細胞辨識含有SEQ ID NO：2所示之胺基酸序列所組成之肽之抗原肽與第二型MHC分子之複合體，而該第二型MHC分子係選自HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子。很容易經由本發明所屬領域中熟練之技術人員使用已知技術來製備本發明之細胞毒殺性T細胞。例如，經由分離自患者之周邊血液淋巴細胞而製備，並於活體外用肽(例如，具有SEQ ID NO：2所示胺基酸序列之肽)、編碼該肽之多核苷酸、或含有該多核苷酸之表現載體刺激周邊血液淋巴細胞(Journal of Experimental Medicine 1999,190：1669)(該參考文獻係以引用方式併入本文中)。可使用所製備的細胞毒殺性T細胞作為治療或預防癌症等之醫藥組成物之活性成分。
再另一方面，本發明提供一種具有上述含WT1肽之抗原肽及第二型MHC分子的HLA四聚體。該第
二型MHC分子可為HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子中之任何分子，或可為至少兩個或更多個上述第二型MHC分子之分子。本說明書中，HLA四聚體意指四聚化產物，該四聚化產物係經生物素化複合體(HLA單體)然後結合該生物素化產物與抗生物素蛋白(avidin)而得到，該複合體係得自HLA蛋白與肽之聯合。含有各種抗原肽之HLA四聚體可購自市售，且可以很容易地製備本發明之四聚體(Science 279：2103-2106(1998),Science 274：94-96(1996))(該參考文獻係以引用方式併入本文中)。較佳為用螢光標記本發明之四聚體以便可使用已知測定手段，諸如流式細胞儀及螢光顯微鏡，而方便地篩選或檢測結合之本發明輔助T細胞及細胞毒殺性T細胞。本發明之HLA四聚體不限於四聚體，如需要亦可使用多聚體諸如五聚體及樹狀體(dendrimer)。本說明書中，多聚體意指多聚化產物，該多聚化產物係經由結合兩個或更多個複合體(HLA單體)而得到，而該複合體係經由使用已知技術聯合HLA蛋白與肽而得到。
另一方面，本發明提供一種用於活化輔助T細胞或細胞毒殺性T細胞之醫藥組成物，該醫藥組成物含有任何上述組成物、抗原呈現細胞、輔助T細胞、細胞毒殺性T細胞或四聚體作為活性成分。本發明之醫藥組成物可含有任何一種或多種之上述組成物、抗原呈現細胞、輔
助T細胞、細胞毒殺性T細胞或四聚體作為活性成分。本發明之醫藥組成物可使用於治療或預防癌症。本發明之醫藥組成物可施用於表現WT1之各種癌症及腫瘤，例如，施用於造血器官腫瘤諸如白血病、骨髓化生不良症候群、多發性骨髓瘤及惡性淋巴瘤，以及實質固態瘤諸如胃癌、腸癌、肺癌、乳癌、生殖細胞癌、肝癌、皮膚癌、膀胱癌、攝護腺癌、子宮癌、子宮頸癌及卵巢癌。而且，本發明之醫藥組成物可使用於給藥具有第二型MHC分子之對象，而該第二型MHC分子係選自HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子。本發明之醫藥組成物可與治療或預防癌症之其他方法或與用於該等其他方法之醫藥組成物一起使用。另外，本發明之醫藥組成物可含有輔助T細胞或細胞毒殺性T細胞之活化劑、增殖劑、誘導劑等，或可含有已知第一型MHC-限制性WT1肽。
除活性成分之外，本發明之醫藥組成物可含有，例如，載劑、賦形劑等。可取決於諸如疾病之類型、對象之狀況及目標位置之條件而恰當地選擇本發明之醫藥組成物之給藥方法。該方法包含，例如，皮內給藥、皮下給藥、肌肉內給藥、靜脈給藥、經鼻給藥、口服給藥等，但不限於此。可取決於諸如疾病之類型、對象之狀況及目標位置等之條件而恰當地選擇本發明之醫藥組成物所含有的上述活性成分量、組成物之劑型、組成物給藥之次數等。
再另一方面，本發明提供一種治療或預防癌症之方法，該方法包含將有效量之任何上述組成物、抗原呈現細胞、輔助T細胞、細胞毒殺性T細胞或四聚體給藥於對象之步驟，其中該對象具有第二型MHC分子，而該第二型MHC分子係選自HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子。本發明之方法可治療或預防之癌症為表現WT1之各種癌症及腫瘤，例如，造血器官腫瘤諸如白血病、骨髓化生不良症候群、多發性骨髓瘤及惡性淋巴瘤，以及實質固態瘤諸如胃癌、腸癌、肺癌、乳癌、生殖細胞癌、肝癌、皮膚癌、膀胱癌、攝護腺癌、子宮癌、子宮頸癌及卵巢癌。可將本發明方法與其他治療或預防癌症之方法一起使用，例如，使用已知第一型MHC-限制性WT1肽治療或預防癌症之方法。
再另一方面，本發明提供一種任何上述組成物、抗原呈現細胞、輔助T細胞、細胞毒殺性T細胞或四聚體用於作為製備上述醫藥組成物之用途。
一方面，本發明係關於一種專一性結合上述WT1肽或編碼WT1肽之多核苷酸之抗體(下文中，該抗體亦稱為抗WT1抗體)。本發明之抗體可為多株抗體(polyclonal antibody)或單株抗體(monoclonal antibody)。具體地，可提及的為專一性結合具有SEQ ID NO：2所示胺基酸序列之肽的抗體等。已知製備此種抗體的方法，也可
根據此種常用之方法製備本發明之抗體(Current protocols in Molecular Biology,Ausubel et al.(ed.),1987,John Wiley and Sons(pub.),Section 11.12-11.13,Antibodies；A Laboratory Manual,Lane,H.D.et al.(ed.),Cold Spring Harber Laboratory Press(pub.),New York,1989)(這些參考文獻係以引用方式併入本文中)。例如，使用具有SEQ ID NO：2所示胺基酸序列之肽作為抗原而使非人類動物諸如家兔免疫，並可經由常用之方法自動物血清得到多株抗體。另一方面，在單株抗體之情況，使用本發明所用之肽(具有SEQ ID NO：2所示胺基酸序列之肽)使非人類動物諸如小鼠免疫，將所得脾臟細胞及骨髓瘤細胞融合而製備融合瘤細胞，從該融合瘤細胞可得到單株抗體(Current protocols in Molecular Biology,Ausubel et al.(ed.),1987,John Wiley and Sons(pub.),Section 11.4-11.11)(該參考文獻係以引用方式併入本文中)。而且，可取決於宿主使用各種佐劑來增強免疫反應而進行本發明抗WT1抗體之製備。此種佐劑包含礦物膠(例如，佛氏佐劑(Freund’s adjuvant)、氫氧化鋁等)、界面活性劑、人類佐劑等。本發明之抗WT1抗體可用於親和性層析法、免疫診斷等。可從免疫墨點法、放射免疫分析法(RIA)、酵素結合免疫吸附分析法(ELISA)、螢光或發光測量法等恰當地選擇免疫診斷之方法。
另一方面，本發明提供一種測定有關第二型MHC分子陽性之對象之WT1肽之存在或量的方法，而該第二型MHC分子係選自HLA-DRB1*08：02分子、
HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子，該方法包含下列步驟：(a)使得自對象之試樣與上述抗WT1抗體反應，然後(b)測定該試樣中所含有之上述抗WT1抗體之存在或量。
可使用得自具有第二型MHC分子之對象之試樣作為上述步驟(a)使用之試樣，而該第二型MHC分子係選自HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子。上述步驟(a)使用之試樣包含，例如，體液及組織諸如血液及淋巴球。本發明所屬領域中熟練之技術人員可使用已知技術恰當地取得試樣、使試樣與抗體反應及進行其他步驟。本發明之步驟(b)包含，例如，測定上述抗WT1抗體之區域、部位及量等，因此，本發明可用於癌症之診斷、預測等。可標記上述抗WT1抗體。可使用已知標記諸如螢光標記及放射性標記作為標記。經由標記，而使簡單且快速地進行WT1肽存在及量之測定成為可能。
再另一方面，本發明係關於一種測定WT1肽存在或量之套組，該套組含有上述抗WT1抗體作為主要組分。本發明之套組除上述抗WT1抗體以外，可含有，例如，取得抗WT1抗體之手段及評估抗WT1抗體之手段等。一般而言，該套組附有使用手冊。使用本發明之套組，而
使得以上述測定WT1肽存在或量之方法簡單且快速地測定WT1肽存在及量成為可能。
再另一方面，本發明提供一種測定有關第二型MHC分子陽性之對象之WT1-專一性輔助T細胞或WT1-專一性細胞毒殺性T細胞之存在或量的方法，而該第二型MHC分子係選自HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子，該方法包含下列步驟：(a)使用WT1肽刺激得自對象之試樣，及(b)測定細胞介素、輔助T細胞或細胞毒殺性T細胞之存在或量，其中細胞介素、輔助T細胞或細胞毒殺性T細胞之存在或量之增加顯示WT1-專一性輔助T細胞或WT1-專一性細胞毒殺性T細胞之存在或量。
本發明之試樣可為任何試樣只要彼等含有抗原呈現細胞，及包含，例如，周邊血液單核細胞、侵襲性淋巴球、腫瘤細胞、腹水中之細胞、胸膜積液中之細胞、腦脊液細胞、骨髓細胞、淋巴結細胞等。本發明所使用之試樣可取自健康之提供者或癌症患者。使用取自健康之提供者之該等細胞，例如，使得診斷該提供者是否罹患癌症，或該提供者是否易患癌症，或其他因素(predisposition)，成為可能。使用取自癌症患者之該等細胞，例如，使得預測WT1免疫療法是否對癌症患者具有作用，或其他狀況，成為可能。本發明方法中，可在用WT1肽刺激之前及之後培養所
得試樣，並可由本發明之所屬領域中熟練之技術人員恰當地決定培養之條件。可使用已知技術諸如電穿孔法進行用WT1肽對此等細胞之刺激，且可在活體外或活體內進行。可用已知方法測定細胞介素之產生、輔助T細胞或細胞毒殺性T細胞反應之存在、細胞介素產生量或輔助T細胞或細胞毒殺性T細胞之反應量。
再另一方面，本發明係關於一種測定WT1肽存在或量之套組，該套組含有上述WT1肽作為必要組分。本發明之套組除上述WT1肽之外，可含有，例如，取得試樣之手段、評估手段諸如細胞介素。一般而言，該套組附有使用手冊。使用本發明之套組，而使得以上述測定WT1肽存在或量之方法簡單且快速地測定WT1肽存在及量成為可能。
本發明亦提供：一種包括WT1肽之組成物，該WT1肽經由添加WT1肽至抗原呈現細胞而活化輔助T細胞，其中該輔助T細胞辨識WT1肽與第二型MHC分子之複合體，而該第二型MHC分子係選自HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子，及包括該組成物作為活性成分之治療或預防癌症之醫藥組成物；一種治療或預防癌症之醫藥組成物，包括任何WT1肽、編碼WT1肽之多核苷酸、含有該多核苷酸之表現載
體、或含有該表現載體之細胞，以作為活性成分，其係經給藥於具有第二型MHC分子之對象，而該第二型MHC分子係選自HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子；及一種活化輔助T細胞的方法，其包括經由添加WT1肽至抗原呈現細胞而活化輔助T細胞之步驟，其中輔助T細胞辨識WT1肽與第二型MHC分子之複合體，而該第二型MHC分子係選自HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子。
本發明亦提供下列者：
(1)用於活化輔助T細胞之組成物，該組成物包括WT1肽、編碼WT1肽之多核苷酸、含有該多核苷酸之表現載體、或含有該表現載體之細胞，其中輔助T細胞辨識WT1肽與第二型MHC分子之複合體，而該第二型MHC分子係選自HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子。
(2)用於活化細胞毒殺性T細胞之組成物，該組成物包括WT1肽、編碼WT1肽之多核苷酸、含有該多核苷酸之表現載體、或含有該表現載體之細胞，其中該組成物經給藥於具有第二型MHC分子之對象，而該第二型MHC分子係選
自HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子。
(3)治療或預防癌症之醫藥組成物，該組成物包括WT1肽、編碼WT1肽之多核苷酸、含有該多核苷酸之表現載體、或含有該表現載體之細胞，其中該組成物經給藥具有第二型MHC分子之對象，而該第二型MHC分子係選自HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子。
(4)根據(1)至(3)中任一項之組成物，其包括WT1肽。
(5)根據(1)至(4)中任一項之組成物，其中該WT1肽為含有胺基酸序列：Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His(SEQ ID NO：2)之肽、其變異體或修飾物。
(6)根據(5)之組成物，其中該WT1肽為含有胺基酸序列：Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His(SEQID NO：2)之肽。
(7)呈現含有WT1肽之抗原肽與第二型MHC分子之複合體之抗原呈現細胞，其中該第二型MHC分子為選自HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子之第二型MHC分子。
(8)根據(7)之抗原呈現細胞，其中該WT1肽為含有胺基酸序列：Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His(SEQ ID NO：2)之肽、其變異體或修飾物。
(9)根據(8)之抗原呈現細胞(8)，其中該WT1肽為含有胺基酸序列：Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His(SEQ ID NO：2)之肽。
(1(0)辨識含有WT1肽之抗原肽與第二型MHC分子之複合體之輔助T細胞，其中該第二型MHC分子為選自HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子之第二型MHC分子。
(11)根據(10)之輔助T細胞，其中該WT1肽為含有胺基酸序列：Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His(SEQ ID NO：2)之肽、其變異體或修飾物。
(12)根據(11)之輔助T細胞，其中該WT1肽為含有胺基酸序列：Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His(SEQ ID NO：2)之肽。
(13)經由根據(12)之輔助T細胞活化之細胞毒殺性T細胞。
(14)治療或預防癌症之醫藥組成物，其包括任何根據(7)至(9)中任一項之抗原呈現細胞、根據(10)至(12)中任一項之輔助T細胞或根據(13)之細胞毒殺性T細胞作為活性成分。
本發明亦提供下列者：
(1)活化輔助T細胞的方法，其包括經由添加WT1肽至抗原呈現細胞而活化輔助T細胞之步驟，其中輔助T細胞辨識WT1肽與第二型MHC分子之複合體，而該第二型MHC分子係選自HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子。
(2)根據(1)之方法，其中經由使抗原呈現細胞與WT1肽接觸，或導入編碼WT1肽之多核苷酸或含有該多核苷酸之表現載體至抗原呈現細胞而進行添加WT1肽至抗原呈現細胞。
(3)活化細胞毒殺性T細胞的方法，該方法包括將WT1肽、編碼WT1肽之多核苷酸、含有該多核苷酸之表現載體、或含有該表現載體之細胞給藥於具有第二型MHC分子之對象，而該第二型MHC分子係選自HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子。
(4)治療或預防癌症之方法，該方法包括將WT1肽、編碼WT1肽之多核苷酸、含有該多核苷酸之表現載體、或含有該表現載體之細胞給藥於具有第二型MHC分子之對象，而該第二型MHC分子係選自HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子。
(5)根據(1)至(4)中任一項之方法，其中該WT1肽為含有胺基酸序列：Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His SerArg Lys His(SEQID NO：2)之肽、其變異體或修飾物。
(6)根據(5)之方法，其中該WT1肽為含有胺基酸序列：Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His (SEQ ID NO：2)之肽。
本發明亦提供下列者：
(1)WT1肽、編碼WT1肽之多核苷酸、含有該多核苷酸之表現載體、或含有該表現載體之細胞用於製備活化輔助T細胞之藥物的用途，其中輔助T細胞辨識WT1肽與第二型MHC分子之複合體，而該第二型MHC分子係選自HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子。
(2)WT1肽、編碼WT1肽之多核苷酸、含有該多核苷酸之表現載體、或含有該表現載體之細胞用於製備活化細胞毒殺性T細胞之藥物之用途，其中該藥物係經給藥於具有第二型MHC分子之對象，而該第二型MHC分子係選自HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子。
(3)WT1肽、編碼WT1肽之多核苷酸、含有該多核苷酸之表現載體、或含有該表現載體之細胞用於製備治療或預防癌症之藥物之用途，其中該藥物係經給藥於具有第二型
MHC分子之對象，而該第二型MHC分子係選自HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子。
(4)根據(1)至(3)中任一項之用途，係用於製備包括WT1肽之藥物。
(5)根據(1)至(4)中任一項之用途，其中該WT1肽為含有胺基酸序列：Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His(SEQ ID NO：2)之肽、其變異體或修飾物。
(6)根據(5)之用途，其中該WT1肽為含有胺基酸序列：Lys ArgTyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His(SEQ ID NO：2)之肽。
將透過實施例詳細且具體地說明本發明，但這些實施例不應當解釋為限制本發明之範疇。
實施例1：WT1肽(SEQ ID NO：2)-專一性Th1選殖細胞(clone cell)之建立
如以下說明建立WT1肽(SEQ ID NO：2)(下文中稱為WT1-332)-專一性Th1選殖細胞(下文中稱為“Th1選殖細胞”)。
(1)試驗材料
以下表明所使用之主要材料。
試驗化合物之製備
將WT1-332以20mg/mL溶於10mM乙酸。該溶液經過濾滅菌並貯存於預設於-30℃之冷凍箱。
周邊血液單核細胞(PBMC)作為餵養細胞(feeder cells)
1)細胞名稱：PBMC
2)來源：來自健康成年人類提供者之周邊血液
在個人資料管理程式控制下進行可連接匿名並得到知情同意書後，從提供者得到血液並於此實驗中操作。
3)試樣條件：任何餵養者(feeders)均與選殖試樣不同。
4)血液收集：40mL之肝素化(heparinized)周邊血液
B-LCL細胞系作為餵養細胞
5)細胞名稱：B-LCL細胞株
6)來源：人周邊血液
7)供應商：RIKEN CELL BANK或IHWG CELL BANK
群組
試劑
將試驗中使用之重要試劑列表於下。
培養基之製備
使用失活且通過0.2μm過濾器過濾之人類AB血清及胎牛血清(FBS)。分別使用20U/mL肝素HBSS、10% FBS/RPMI-1640(100單位/mL青黴素、100μg/mL鏈黴素)及10%含人類AB血清之AIM-V(Invitrogen)於PBMC分離、B-LCL細胞培養及其他培養。在37℃-5% CO2培養箱中進
行各培養基之細胞培養。
(2)試驗方法
從健康自願者之周邊血液經由密度離心製備PBMC且使用部分該等PBMC誘導WT1-332-專一性T細胞。將剩餘細胞冷凍保存於細胞凍存液(cell banker)(Juji Field Inc.)並作為再刺激用之餵養細胞或抗原呈現細胞。
WT1-332-專一性T細胞之誘導
將如此製備之PBMC以1.5×106個細胞/孔於24孔盤接種10孔，並添加最終濃度為20μg/mL之WT1-332及最終濃度為10ng/mL之IL-7，並開始培養(第0天，總培養基容積：2mL/孔)。
1星期後，再次刺激細胞。首先，將調整為3.0×106個細胞/孔或較少而作為抗原呈現用之PBMC與最終濃度為20μg/mL之WT1-332培養2小時，再與絲裂黴素C(MMC)(最終濃度=50μg/mL)培養45分鐘，然後，用AIM-V洗滌後，使用該細胞作為抗原呈現細胞。接下來，收集培養之PBMC並去除附著細胞後，以1.15至1.43×106個細胞/孔接種剩餘之細胞，再次與相同數量之WT1/MMC-處理之抗原呈現細胞培養(第7天)，並添加最終濃度為10ng/ml之IL-7。2天後，將一半的培養基換成含40U/mL IL-2之培養基，再將細胞培養1星期，同時每隔一天將一半的培養基換成含20U/mL IL-2之培養基。
細胞內細胞介素染色(ICS)
第14天時，收集培養之細胞並以2.0×105個細胞/孔於96孔圓底盤接種2孔，然後於一孔添加20μg/mL WT1-332並於另一孔添加溶劑培養4小時，2孔添加1x布雷菲德菌素(Brefeldin)(最終濃度)再培養2小時。收集細胞，添加PE-標記之抗人類CD4抗體及FITC-標記之抗人類CD8抗體，並於4℃培養15分鐘。用染色緩衝液洗滌後，將Cytofix Cytoperm Fix/Perm加至細胞，並於4℃處理20分鐘。用Perm./Wash緩衝液洗滌後，將PerCP-標記之抗人類IFN-γ抗體加至細胞，於4℃培養30分鐘。用Perm./Wash緩衝液洗滌細胞並用FACS分析。
解凍、接種及繼代培養B-LCL細胞作為餵養細胞
將冷凍保存之細胞解凍並以3×105個細胞/孔開始培養，然後於生長的時候(subconfluent)繼代培養。使用如此所得之B-LCL細胞作為PHA刺激用之餵養細胞。
經由MACS之CD4+細胞之分離
根據製造商之建議方案，使用MACS微珠經由陽性篩選自培養之細胞分離CD4+細胞。
經由限制稀釋法之WT1-332-專一性Th1細胞之選殖及增殖
於CO2培養箱中，用絲裂黴素C溶液(最終濃度=50μg/mL)處理B-LCL餵養細胞及PBMC(3×106/mL或較少)45分鐘。用AIM-V洗滌後，將兩種類型之B-LCL細胞及兩種類型之PBMC，共4種類型之細胞混合(最終濃度：PBMC為
2.5×105個細胞/mL及B-LCL細胞為2.5×104個細胞/mL)。根據欲選殖試樣之數目而製備整組混合物，並添加最終濃度為200ng/mL之PHA而製作含PHA之餵養細胞液體混合物。
接下來，從分次之CD4+細胞試樣篩選出在ICS中顯示高CD4+IFN-γ +細胞比率之試樣，並用所製備之含PHA之餵養細胞液體混合物將CD4+細胞濃度調整至10個細胞/m1，並以100μL/孔將細胞接種於96孔盤(總數為PBMC：5.0×104個細胞/孔；B-LCL細胞：5.0×103個細胞/孔；PHA：200ng/mL；CD4+細胞：一個細胞/孔)並開始培養。5天後，添加等量之含80U/mL IL-2之培養基至該培養基，之後，每隔一天將一半的培養基換成含80U/mL IL-2之培養基。培養期間，將顯示清楚增殖之孔中的細胞放大(scale up)至48孔盤，並繼續培養。
從選殖開始之第10天及再隔14天後，如上述施用PHA刺激用於增殖，只是培養盤、PBMC總數、B-LCL細胞總數、PHA最終濃度及欲增殖之Th1選殖細胞數係分別改為24孔盤、1.0×106個細胞/孔、1.0×105個細胞/孔、50ng/ml及2.0×105個細胞/孔或較少。而且，從培養開始之第3天添加IL-2，且再添加之培養基之IL-2濃度設定於200U/mL。
Th1選殖細胞之肽刺激
為檢查選殖及增殖後之Th1選殖細胞之抗原反應性，將收集之Th1選殖細胞接種於96孔圓底盤之1孔或3孔。添加10μM乙酸乙酯或20μg/mL肽至孔中，並開始培養
(總培養基量為：200μL/孔)。約24小時後收集培養上清液。
ELISA
將培養上清液以Assay Diluent(Becton Dickinson)稀釋4倍後測量各培養上清液中之IFN-γ濃度。除了抗體經稀釋500倍、校準曲線範圍改成18.75至1200pg/mL、以及呈色反應時間改為5分鐘之外，係根據製造商之方案，使用BD OptEIA ELISA組(人類IFN-γ，Becton Dickinson)測量IFN-γ濃度。而且，當測量值超出測量範圍時使用外推值，及當吸光率小於0時測量值視為0。
Th1選殖細胞之種源細胞庫(master cell bank)之製備
將已確定抗原反應性之Th1選殖細胞冷凍保存於細胞凍存液，並用作為種源細胞庫。
評估
為評估在WT1-332刺激下，在培養14天之CD4+細胞中是否明顯誘導出WT1-332-專一性Th1細胞，根據下列公式計算WT1-332-專一性Th1細胞比率(%)及WT1-332-非專一性Th1細胞比率(%)。
WT1-332-專一性Th1細胞比率(%)=(用WT1-332刺激之CD4+-細胞內IFN-γ +細胞數/存活細胞總數)×(分離(fractionation)後之CD4+細胞比率/分離前之CD4+細胞比率)×100
WT1-332-非專一性Th1細胞比率(%)
=(用AcOH刺激之CD4+-細胞內IFN-γ +細胞數/存活細胞總數)×100×(分離後之CD4+細胞比率/分離前之CD4+細胞比率)×100
選殖6至7個試樣，係將WT1-332-專一性Th1比率減去WT1-332-非專一性Th1比率而得到之值較高者。
經由ELISA測量各群組之培養上清液之IFN-γ濃度，當添加WT1-332之IFN-γ產量比添加溶劑者高500pg/mL或較多及為1.2倍或較多時，則認為該群組維持抗原反應性並使用於隨後之實驗。
(3)結果
建立各種Th1選殖細胞。分型法(typin)之結果確定一些得到之殖株具有新限制性對偶基因。結果示於表4。實施例2中，使用那些殖株，而測定WT1-332是否能以限制於特定HLA類型之方式活化Th1細胞。
實施例2：建立之WT1-332-專一性Th1選殖細胞之限制性對偶基因之測定
使用實施例1中建立之WT1-332-專一性Th1選殖細胞(下文中稱為“Th1選殖細胞”)，測定WT1-332是否能以限制於特定HLA類型之方式活化Th1細胞及確定限制性對偶基因。
(1)試驗化合物
(2)試驗方法
使用失活且通過0.2μm過濾器過濾之人類AB血清及FBS。分別使用20U/mL肝素HBSS、含10% FBS及1%P/S(100單位/mL青黴素、100μg/mL鏈黴素)之RPMI-1640及10%含人類AB血清之AIM-V(Invitrogen)於PBMC分離、B-LCL細胞培養及其他培養。在37℃-5% CO2培養箱中進行各培養基之細胞培養。
實驗方法
使用具有適當對偶基因之WT1-332-脈衝B-LCL細胞作為抗原呈現細胞並測量IFN-γ產生量，而測定Th1選殖細胞之HLA限制性。
具體地，在PHA刺激下使用餵養B-LCL細胞及自周邊血液製備之異種PBMC作為餵養細胞，培養Th1選殖細胞。
接下來，使用WT1-332或溶劑處理之B-LCL細胞作為抗原呈現細胞而與收集之Th1選殖細胞培養。測量IFN-γ產生量而測定WT1-332-專一性抗原刺激是否存在。基於各Th1殖株之第二型HLA(HLA class II)之類型，使用具有幾種不同HLA類型之B-LCL細胞作為抗原呈現細胞，從而測定Th1殖株之第二型HLA限制性。
解凍並接種(seeding)B-LCL細胞作為餵養細胞
於第0天解凍冷凍保存細胞並以1×105個細胞/孔開始培養。於第3天時收集細胞並用作為PHA刺激之餵養細胞。
PBMC之製備
第2天從健康自願者之周邊血液經由密度離心製備PBMC。計算過細胞數目後，收集細胞沉澱團塊(pellets)並再懸浮於細胞凍存液中(Mitsubishi Chemical Medience Corporation)，然後分裝至冷凍保存管並冷凍保存於設定為-80℃之冷凍箱。PHA刺激時，解凍冷凍保存細胞以供作餵養PBMCs。
解凍並接種Th1選殖細胞
於第2天解凍冷凍保存細胞並以2×106個細胞/孔或較少個開始培養於含20U/mL IL-2之培養基。於第3天收集細胞並用作為PHA刺激之Th1選殖細胞。
Th1選殖細胞之PHA刺激
第3天，於CO2培養箱，用絲裂黴素C溶液(最終濃度=50μg/mL)處理B-LCL餵養細胞及PBMC經45分鐘。用AIM-V洗滌後，將兩種類型之PBMC及兩種類型之B-LCL，共4種類型之細胞混合(最終濃度：PBMC為1.0×106個細胞/mL及B-LCL細胞為1.0×105個細胞/mL)。根據欲接種之Th1選殖細胞之數目而製備整套之混合物，並以最終濃度100ng/mL添加PHA，以製作含PHA之餵養細胞液體混合物。接下來，將培養之Th1選殖細胞以0.5mL/孔接種於24孔盤(細胞濃度為4.0×105個細胞/mL)，並再以0.5mL/孔添加含PHA之餵養細胞液體混合物，並培養細胞。第6天，添加等量的含200U/mL IL-2之培養基至該培養基，並於第8天、第10天、第12天及第14天將一半的培養基換成含
40U/mL IL-2之培養基。第15天時，將細胞用於限制性分析。培養期間當細胞達長滿(confluent)時，則使用含20U/mL IL-2之培養基繼代培養細胞。
解凍並接種B-LCL細胞作為用於限制性分析之抗原呈現細胞
第11天，解凍冷凍保存之細胞並以1×105個細胞/孔開始培養。第15天時，收集細胞並用於限制性分析。
限制性分析
第15天時，收集Th1選殖細胞，並根據收集細胞之數目以1.0至2.5×104個細胞/100μL/孔於96孔圓底盤接種3孔。將調整為1×106個細胞/mL之作為抗原呈現細胞之B-LCL細胞以4至7mL分裝入兩支錐形管，一支添加乙酸至最終濃度10μM及另一支添加WT1-332至最終濃度20μg/ml。培養2小時後，用AIM-V洗滌細胞並加至已接種2.5x104個細胞/100μL/孔Th1選殖細胞之96孔盤上，然後培養16小時或更久。為了確定WT1-332之反應性，在相同盤上製備添加WT1-332或溶劑而取代B-LCL細胞之孔。
ELISA
將培養上清液以Assay Diluent(Becton Dickinson)稀釋100倍後測量各培養上清液中之IFN-γ濃度。除了校準曲線範圍改成5至640pg/mL、及呈色反應時間改為10分鐘之外，係根據製造商之方案，使用BD OptEIA ELISA組(人類IFN-γ，Becton Dickinson)測量IFN-γ濃度。而且，當測量值超出測量範圍時使用外推值，而當吸光率小於0時
測量值視為0。
評估
各培養上清液之IFN-γ量。
(3)結果
(i)Th1選殖細胞殖株R82-1之HLA限制性分析(DRB1*08：02/14：03、DPB1*02：01、DQB1*03：01/03：02)
經由WT1-332-脈衝DRB1*08：02(+)B-LCL(HEV#0052及HEV#0324)之刺激而檢測出殖株R82-1之IFN-γ產量(第1圖)。因此，顯示殖株R82-1為WT1-332-專一性之HLA-DRB1*08：02-限制性Th1殖株。
(ii)Th1選殖細胞殖株R132-1之HLA限制性分析(DRB1*01：01/13：02、DPB1*04：01/04：02)
經由WT1-332-脈衝DRB1*13：02(+)B-LCL(HEV#0046)之刺激而檢測出殖株R132-1之IFN-γ產量(第2圖)。因此，顯示殖株R132-1為WT1-332-專一性之HLA-DRB1*13：02-限制性Th1殖株。
(iii)Th1選殖細胞殖株R143-1之HLA限制性分析(DRB1*14：03/15：02、DPB1*02：01/03：01)
經由WT1-332-脈衝DRB1*14：03(+)B-LCL(HEV#0052)之刺激而檢測出殖株R143-1之IFN-γ產量(第3圖)。因此，顯示殖株R132-1為WT1-332-專一性之HLA-DRB1*14：03-限制性Th1殖株。
(iv)Th1選殖細胞殖株R145-2之HLA限制性分析(DRB1*04：05/14：05、DPB1*05：01)
經由WT1-332-脈衝DRB1*14：05(+)B-LCL(ISH5)之刺激而檢測出殖株R145-2之IFN-γ產量(第4圖)。因此，顯示殖株R145-2為WT1-332-專一性之HLA-DRB1*14：05-限制性Th1殖株。
(v)Th1選殖細胞殖株Q32-1之HLA限制性分析(DRB1*08：02/14：03、DPB1*02：01、DQB1*03：01/03：02)
經由WT1-332-脈衝DQB1*03：02(+)B-LCL(HEV#0052及HEV#0238)之刺激而檢測出殖株Q32-1之IFN-γ產量(第5圖)。因此，顯示殖株Q32-1為WT1-332-專一性之HLA-DQB1*03：02-限制性Th1殖株。
(vi)Th1選殖細胞殖株Q41-1之HLA限制性分析(DRB1*04：05/15：01、DPB1*05：01、DQB1*04：01/06：02)
經由WT1-332-脈衝之各種抗原呈現細胞(HEV#0174、HEV#0013、HEV#0035及HEV#0050)之刺激而檢測出殖株Q41-1之IFN-γ產量，但是經WT1-332-脈衝之HEV#0201及HEV#0073則否(第6圖)。DQB1*04：01只表現於HEV#0174、HEV#0013、HEV#0035及HEV#0050。因此，顯示殖株Q41-1為WT1-332-專一性之DQB1*04：01-限制性Th1殖株。
本發明提供一種使用具有結合第二型MHC分子之能力的WT1肽而活化輔助T細胞及/或細胞毒殺性T
細胞的方法，而該第二型MHC分子係選自HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子，及用於此方法之組成物、經由活化輔助T細胞及/或細胞毒殺性T細胞而治療及/或預防癌症之醫藥組成物等。因此，本發明可應用於製藥領域等，例如，各種高度表現WT1基因之造血器官腫瘤及實質固態瘤之預防藥物或治療藥物之發展及生產領域。
<110> 大塚製藥股份有限公司國立大學法人大阪大學
<120> 活化輔助T細胞的方法
<130>
<150> JP 2012-274494
<151> 2012-12-17
<160> 2
<170> PatentIn version 3.2
<210> 1
<211> 449
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 1
<210> 2
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 合成肽
<400> 2
本案圖式均為表示本案實施例之實驗結果的數據圖，因此本案並無指定代表圖。
Claims (14)
- 一種用於活化輔助T細胞之組成物，其包括WT1肽、編碼WT1肽之多核苷酸、含有該多核苷酸之表現載體、或含有該表現載體之細胞，其中輔助T細胞辨識WT1肽與第二型MHC分子之複合體，而該第二型MHC分子係選自HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子。
- 一種用於活化細胞毒殺性T細胞之組成物，其包括WT1肽、編碼WT1肽之多核苷酸、含有該多核苷酸之表現載體、或含有該表現載體之細胞，其中該組成物經給藥於具有第二型MHC分子之對象，而該第二型MHC分子係選自HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子。
- 一種治療或預防癌症之醫藥組成物，其包括WT1肽、編碼WT1肽之多核苷酸、含有該多核苷酸之表現載體、或含有該表現載體之細胞，其中該組成物經給藥於具有第二型MHC分子之對象，而該第二型MHC分子係選自HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子。
- 如申請專利範圍第1至3項中任一項所述之組成物，其包括WT1肽。
- 如申請專利範圍第1至4項中任一項所述之組成物，其中該WT1肽為含有胺基酸序列：Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His(SEQ ID NO：2)之肽、其變異體或修飾物。
- 如申請專利範圍第5項所述之組成物，其中該WT1肽為含有胺基酸序列：Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His(SEQ ID NO：2)之肽。
- 一種抗原呈現細胞，其呈現含有WT1肽之抗原肽與第二型MHC分子之複合體，其中該第二型MHC分子為選自HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子之第二型MHC分子。
- 如申請專利範圍第7項所述之抗原呈現細胞，其中該WT1肽為含有胺基酸序列：Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His(SEQID NO：2)之肽、其變異體或修飾物。
- 如申請專利範圍第8項所述之抗原呈現細胞，其中該WT1肽為含有胺基酸序列：Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His(SEQ ID NO：2)之肽。
- 一種輔助T細胞，其辨識含有WT1肽之抗原肽與第二 型MHC分子之複合體，其中該第二型MHC分子為選自HLA-DRB1*08：02分子、HLA-DRB1*13：02分子、HLA-DRB1*14：03分子、HLA-DRB1*14：05分子、HLA-DQB1*03：02分子及HLA-DQB1*04：01分子之第二型MHC分子。
- 如申請專利範圍第10項所述之輔助T細胞，其中該WT1肽為含有胺基酸序列：Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His(SEQ ID NO：2)之肽、其變異體或修飾物。
- 如申請專利範圍第11項所述之輔助T細胞，其中該WT1肽為含有胺基酸序列：Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His(SEQ ID NO：2)之肽。
- 一種細胞毒殺性T細胞，其係經由申請專利範圍第12項所述之輔助T細胞活化者。
- 一種治療或預防癌症之醫藥組成物，其包括任何申請專利範圍第7至9項中任一項所述之抗原呈現細胞、申請專利範圍第10至12項中任一項所述之輔助T細胞或申請專利範圍第13項所述之細胞毒殺性T細胞作為活性成分。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2012274494 | 2012-12-17 | ||
| JP2012-274494 | 2012-12-17 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| TW201429487A true TW201429487A (zh) | 2014-08-01 |
| TWI646970B TWI646970B (zh) | 2019-01-11 |
Family
ID=50978342
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| TW102146368A TWI646970B (zh) | 2012-12-17 | 2013-12-16 | 活化輔助ｔ細胞的方法 |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US9833493B2 (zh) |
| EP (1) | EP2933261B1 (zh) |
| JP (1) | JP6530192B2 (zh) |
| KR (1) | KR102158225B1 (zh) |
| CN (2) | CN110195040A (zh) |
| AR (1) | AR094026A1 (zh) |
| AU (1) | AU2013365067B2 (zh) |
| BR (1) | BR112015013697A2 (zh) |
| CA (1) | CA2892660C (zh) |
| EA (1) | EA201591168A1 (zh) |
| ES (1) | ES2805337T3 (zh) |
| HK (1) | HK1216755A1 (zh) |
| IL (1) | IL239056A0 (zh) |
| MX (1) | MX2015007745A (zh) |
| MY (1) | MY175935A (zh) |
| NZ (1) | NZ708990A (zh) |
| PH (1) | PH12015501361A1 (zh) |
| SG (2) | SG10201705028WA (zh) |
| TW (1) | TWI646970B (zh) |
| UA (1) | UA118962C2 (zh) |
| WO (1) | WO2014098012A1 (zh) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100513563C (zh) | 2003-11-05 | 2009-07-15 | 株式会社国际癌症免疫研究所 | Wt1衍生的hla-dr-结合抗原肽 |
| CA2626238C (en) | 2005-10-17 | 2015-10-06 | Sloan Kettering Institute For Cancer Research | Wt1 hla class ii-binding peptides and compositions and methods comprising same |
| US9265816B2 (en) | 2006-04-10 | 2016-02-23 | Sloan Kettering Institute For Cancer Research | Immunogenic WT-1 peptides and methods of use thereof |
| AU2008220031B2 (en) | 2007-02-27 | 2013-06-13 | International Institute Of Cancer Immunology, Inc. | Method for activation of helper T cell and composition for use in the method |
| AU2011313327B2 (en) | 2010-10-05 | 2015-10-22 | International Institute Of Cancer Immunology, Inc. | Method for activating helper T cell |
| US20150104413A1 (en) | 2012-01-13 | 2015-04-16 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Immunogenic wt-1 peptides and methods of use thereof |
| SG10201705028WA (en) | 2012-12-17 | 2017-07-28 | Otsuka Pharma Co Ltd | Method for activating helper t cell |
| EP3769782A1 (en) | 2013-01-15 | 2021-01-27 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Immunogenic wt-1 peptides and methods of use thereof |
| US10815273B2 (en) | 2013-01-15 | 2020-10-27 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Immunogenic WT-1 peptides and methods of use thereof |
| KR20170092660A (ko) | 2014-12-11 | 2017-08-11 | 인터내셔널 인스티튜트 오브 캔서 이무놀로지 인코퍼레이티드 | 혈관 신생병의 면역 요법 |
| CN111647066B (zh) * | 2020-07-01 | 2020-12-18 | 维肽瀛(上海)生物技术有限公司 | Wt1多肽肿瘤抑制剂 |
| JPWO2023017836A1 (zh) | 2021-08-12 | 2023-02-16 |
Family Cites Families (30)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5726288A (en) | 1989-11-13 | 1998-03-10 | Massachusetts Institute Of Technology | Localization and characterization of the Wilms' tumor gene |
| WO2000006602A1 (fr) | 1998-07-31 | 2000-02-10 | Haruo Sugiyama | Antigenes contre le cancer a base d'un produit du gene suppresseur de tumeur wt1 |
| US20030235557A1 (en) | 1998-09-30 | 2003-12-25 | Corixa Corporation | Compositions and methods for WT1 specific immunotherapy |
| IL142216A0 (en) | 1998-09-30 | 2002-03-10 | Corixa Corp | A polypeptide containing an immunogenic portion of a native wti and pharmaceutical compositions containing the same |
| US7063854B1 (en) | 1998-09-30 | 2006-06-20 | Corixa Corporation | Composition and methods for WTI specific immunotherapy |
| CA2401070A1 (en) | 2000-02-22 | 2001-08-30 | Corixa Corporation | Compositions and methods for diagnosis and therapy of malignant mesothelioma |
| BRPI0208183B8 (pt) | 2001-03-22 | 2021-05-25 | Sugiyama Haruo | peptídeo antígeno de câncer modificado por wt1 e vacinas para câncer |
| GB0108491D0 (en) | 2001-04-04 | 2001-05-23 | Gendaq Ltd | Engineering zinc fingers |
| EP2014300B1 (en) | 2001-06-29 | 2011-01-12 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Cancer vaccine comprising a cancer antigen based on the product of a tumor suppressor gene WT1 and a cationic liposome |
| US8735357B2 (en) | 2001-09-28 | 2014-05-27 | International Institute Of Cancer Immunology, Inc. | Method of inducing antigen-specific T cells |
| US20050002951A1 (en) | 2001-09-28 | 2005-01-06 | Haruo Sugiyama | Novel method of inducing antigen-specific t cells |
| AU2003242305A1 (en) | 2002-06-12 | 2003-12-31 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Hla-a24-restricted cancer antigen peptide |
| EP1550453B1 (en) | 2002-09-12 | 2015-05-27 | International Institute of Cancer Immunology, Inc. | Cancer antigen peptide preparation |
| WO2004026897A1 (ja) | 2002-09-20 | 2004-04-01 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Ｗｔ１置換型ペプチド |
| AU2004204031B2 (en) | 2003-01-15 | 2010-03-04 | International Institute Of Cancer Immunology, Inc. | Dimerized peptide |
| KR101292971B1 (ko) | 2003-06-27 | 2013-08-12 | 인터내셔널 인스티튜트 오브 캔서 이무놀로지 인코퍼레이티드 | Ｗｔ1 백신 적응 환자의 선택 방법 |
| CN100513563C (zh) | 2003-11-05 | 2009-07-15 | 株式会社国际癌症免疫研究所 | Wt1衍生的hla-dr-结合抗原肽 |
| WO2005095598A1 (ja) | 2004-03-31 | 2005-10-13 | International Institute Of Cancer Immunology, Inc. | Ｗｔ１由来の癌抗原ペプチド |
| JP4719876B2 (ja) | 2005-04-04 | 2011-07-06 | 国立大学法人愛媛大学 | Ｈｌａクラスｉｉ拘束性ｗｔ１抗原ペプチド |
| CA2626238C (en) | 2005-10-17 | 2015-10-06 | Sloan Kettering Institute For Cancer Research | Wt1 hla class ii-binding peptides and compositions and methods comprising same |
| AU2006319892B2 (en) | 2005-11-30 | 2012-05-10 | International Institute Of Cancer Immunology, Inc. | Novel peptide compound |
| US7420880B2 (en) | 2005-12-29 | 2008-09-02 | Timex Group B.V. | Multimode electronic device with calibrating/setting mechanism |
| DK1988163T3 (da) | 2006-02-22 | 2012-08-20 | Int Inst Cancer Immunology Inc | Hla-a*3303-begrænset wt1 peptid og farmaceutisk sammensætning omfattende det samme |
| US9265816B2 (en) * | 2006-04-10 | 2016-02-23 | Sloan Kettering Institute For Cancer Research | Immunogenic WT-1 peptides and methods of use thereof |
| ES2629578T3 (es) * | 2006-12-28 | 2017-08-11 | International Institute Of Cancer Immunology, Inc. | Péptido WT1 restringido a HLA-A*1101 y una composición farmacéutica que comprenden el mismo |
| AU2008220031B2 (en) * | 2007-02-27 | 2013-06-13 | International Institute Of Cancer Immunology, Inc. | Method for activation of helper T cell and composition for use in the method |
| MX343633B (es) | 2007-03-05 | 2016-11-11 | Int Inst Cancer Immunology Inc | Gen receptor de celulas t especificas de antigeno cancerigeno, peptido codificado por el gen, y uso de los mismos. |
| AR076349A1 (es) * | 2009-04-23 | 2011-06-01 | Int Inst Cancer Immunology Inc | Peptido auxiliar del antigeno del cancer |
| AU2011313327B2 (en) * | 2010-10-05 | 2015-10-22 | International Institute Of Cancer Immunology, Inc. | Method for activating helper T cell |
| SG10201705028WA (en) | 2012-12-17 | 2017-07-28 | Otsuka Pharma Co Ltd | Method for activating helper t cell |
-
2013
- 2013-12-16 SG SG10201705028WA patent/SG10201705028WA/en unknown
- 2013-12-16 NZ NZ708990A patent/NZ708990A/en unknown
- 2013-12-16 BR BR112015013697A patent/BR112015013697A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2013-12-16 ES ES13864968T patent/ES2805337T3/es active Active
- 2013-12-16 EA EA201591168A patent/EA201591168A1/ru unknown
- 2013-12-16 CN CN201910520821.0A patent/CN110195040A/zh active Pending
- 2013-12-16 MX MX2015007745A patent/MX2015007745A/es unknown
- 2013-12-16 AU AU2013365067A patent/AU2013365067B2/en active Active
- 2013-12-16 US US14/652,298 patent/US9833493B2/en active Active
- 2013-12-16 SG SG11201504530VA patent/SG11201504530VA/en unknown
- 2013-12-16 WO PCT/JP2013/083580 patent/WO2014098012A1/ja active Application Filing
- 2013-12-16 CN CN201380065804.3A patent/CN104995203B/zh active Active
- 2013-12-16 UA UAA201507132A patent/UA118962C2/uk unknown
- 2013-12-16 JP JP2014553122A patent/JP6530192B2/ja active Active
- 2013-12-16 AR ARP130104756A patent/AR094026A1/es unknown
- 2013-12-16 MY MYPI2015701777A patent/MY175935A/en unknown
- 2013-12-16 CA CA2892660A patent/CA2892660C/en active Active
- 2013-12-16 TW TW102146368A patent/TWI646970B/zh active
- 2013-12-16 EP EP13864968.6A patent/EP2933261B1/en active Active
- 2013-12-16 KR KR1020157018417A patent/KR102158225B1/ko active IP Right Grant
-
2015
- 2015-05-28 IL IL239056A patent/IL239056A0/en unknown
- 2015-06-16 PH PH12015501361A patent/PH12015501361A1/en unknown
-
2016
- 2016-04-20 HK HK16104510.5A patent/HK1216755A1/zh unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2892660C (en) | 2022-02-15 |
| JP6530192B2 (ja) | 2019-06-12 |
| KR20150096697A (ko) | 2015-08-25 |
| IL239056A0 (en) | 2015-07-30 |
| ES2805337T3 (es) | 2021-02-11 |
| AR094026A1 (es) | 2015-07-08 |
| UA118962C2 (uk) | 2019-04-10 |
| BR112015013697A2 (pt) | 2017-11-14 |
| SG11201504530VA (en) | 2015-07-30 |
| JPWO2014098012A1 (ja) | 2017-01-12 |
| EA201591168A1 (ru) | 2016-05-31 |
| MY175935A (en) | 2020-07-15 |
| CN104995203A (zh) | 2015-10-21 |
| EP2933261B1 (en) | 2020-06-10 |
| HK1216755A1 (zh) | 2016-12-02 |
| TWI646970B (zh) | 2019-01-11 |
| US20150328278A1 (en) | 2015-11-19 |
| AU2013365067B2 (en) | 2017-10-05 |
| WO2014098012A1 (ja) | 2014-06-26 |
| EP2933261A1 (en) | 2015-10-21 |
| SG10201705028WA (en) | 2017-07-28 |
| EP2933261A4 (en) | 2016-07-06 |
| CN104995203B (zh) | 2019-06-28 |
| CN110195040A (zh) | 2019-09-03 |
| CA2892660A1 (en) | 2014-06-26 |
| NZ708990A (en) | 2020-03-27 |
| KR102158225B1 (ko) | 2020-09-21 |
| PH12015501361B1 (en) | 2015-09-02 |
| PH12015501361A1 (en) | 2015-09-02 |
| AU2013365067A1 (en) | 2015-07-09 |
| MX2015007745A (es) | 2015-12-15 |
| US9833493B2 (en) | 2017-12-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| TWI646970B (zh) | 活化輔助ｔ細胞的方法 | |
| JP6298101B2 (ja) | ヘルパーｔ細胞の活性化方法 | |
| KR101391561B1 (ko) | Ｈｌａ-ａ*3303 구속성 ｗｔ1 펩티드, 및 그것을 포함하는 의약 조성물 | |
| TWI517859B (zh) | 癌抗原輔助肽 | |
| KR101598228B1 (ko) | 헬퍼 ｔ 세포의 활성화 방법 및 그를 위한 조성물 | |
| KR20090102772A (ko) | Ｈｌａ-ａ*1101 구속성 ｗｔ1 펩티드 및 이를 포함하는 의약 조성물 |