CN110195040A - 辅助性t细胞的活化方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及辅助性T细胞的活化方法。本发明提供一种方法，其为包含将WT1肽添加于抗原呈递细胞而将辅助性T细胞活化的工序的辅助性T细胞的活化方法，该WT1肽具有与选自HLA‑DRB1*08:02分子、HLA‑DRB1*13:02分子、HLA‑DRB1*14:03分子、HLA‑DRB1*14:05分子、HLA‑DQB1*03:02分子、和HLA‑DQB1*04:01分子中的任意一种MHC II类分子结合的能力。
Description
本申请是原案申请日为2013年12月16日、原案申请号为201380065804.3 (国际申请号为PCT/JP2013/083580)、发明名称为“辅助性T细胞的活化方法”的专利申请的分案申请。
技术领域
本发明涉及辅助性T细胞的活化方法、用于其的组合物、细胞毒性T细胞的活化方法、细胞毒性T细胞(CTL)的活化诱导剂、以及通过将辅助性T细胞和/或细胞毒性T细胞活化来实现的癌的治疗和/或预防用药物组合物等，所述辅助性T细胞的活化方法，包含将WT1肽添加于抗原呈递细胞而将辅助性T细胞活化的工序，该WT1肽具有与选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的任意一种MHC II类分子结合的能力。需要说明的是，本申请对于2012年12月17日申请的日本国专利申请第2012-274494号主张优先权，通过参照将该日本国专利申请的内容与本申请一体化。
背景技术
WT1基因(Wilms’ tumor 1 gene)，被鉴定为作为幼儿肾癌的威尔姆氏肿瘤的原因基因，编码具有锌指结构的转录因子(非专利文献1和2、通过引用而包含于本说明书)。通过此后的研究，示出在造血器官肿瘤、实体癌中作为癌基因发挥作用(非专利文献3～6、通过引用而包含于本说明书)。
通过使用具有编码WT1蛋白质的氨基酸序列的一部分的肽、体外刺激外周血单核细胞，诱导肽特异性的细胞毒性T细胞(CTL)，示出这些CTL损伤内源性地表达WT1的造血器官肿瘤、实体癌的癌细胞。CTL，由于以前述肽与MHC I类分子结合而成的复合体的形式识别，上述肽根据MHC I类的亚型不同而不同(专利文献1～4、和非专利文献7，通过引用而包含于本说明书)。
另一方面，为了有效地诱导CTL，癌抗原特异性的辅助性T细胞的存在是重要的(非专利文献8、通过引用而包含于本说明书)。辅助性T细胞识别抗原呈递细胞的MHC II类分子与抗原肽的复合体而被诱导、活化。活化了的辅助性T细胞，通过产生IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、或干扰素等细胞因子，而辅助B细胞的增殖、分化、成熟。上述辅助性T细胞由于具有通过促进B细胞、T细胞的增殖、活化而将免疫系统活化的机能，暗示了在癌免疫疗法中，介由MHCII类结合性的抗原肽增强辅助性T细胞的机能，增强癌疫苗的效果是有用的(非专利文献9、通过引用而包含于本说明书)。
近年示出了，具有编码WT1蛋白质的氨基酸序列的一部分的特定的肽(以下本说明书中也称为WT1肽)存在与多个MHC II类分子结合、可以活化辅助性T细胞的广宿性(promiscuous)辅助性肽(专利文献5和6、通过引用而包含于本说明书)。但是，由于MHC II类分子的种类多，验证该WT1肽对于其它的MHC II类分子是否也具有效果是极其困难的。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：国际公开2003/106682号公报
专利文献2：国际公开2005/095598号公报
专利文献3：国际公开2007/097358号公报
专利文献4：国际申请PCT/JP2007/074146
专利文献5：国际公开2005/045027号公报
专利文献6：国际公开2008/105462号公报
非专利文献
非专利文献1：Daniel A. Haber et al., Cell. 1990 Jun 29;61(7):1257-69
非专利文献2：Call KM et al., Cell. 1990 Feb 9;60(3):509-20
非专利文献3：Menke AL et al., Int Rev Cytol. 1998;181:151-212. Review
非专利文献4：Yamagami T et al., Blood. 1996 Apr 1;87(7):2878-84
非专利文献5：Inoue K et al., Blood. 1998 Apr 15;91(8):2969-76
非专利文献6：Tsuboi A et al., Leuk Res. 1999 May;23(5):499-505
非专利文献7：Oka Y et al., Immunogenetics. 2000 Feb;51(2):99-107
非专利文献8：Gao FG et al., Cancer Res. 2002 Nov 15;62(22):6438-41
非专利文献9：Zeng G, J Immunother. 2001 May;24(3):195-204。
发明内容
发明要解决的问题
因此，本发明的目的在于，提供通过使用特定的WT1肽，适用于宽范围的MHC II类分子阳性对象而将辅助性T细胞活化的方法、将细胞毒性T细胞活化的方法、细胞毒性T细胞的活化诱导剂以及癌的治疗/预防用药物组合物等。
用于解决问题的方案
本发明人等鉴于上述问题而进行深入研究，结果发现，具有氨基酸序列：Lys Arg TyrPhe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His的肽与HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02、和HLA-DQB1*04:01分子结合，将辅助性T细胞活化和/或将细胞毒性T细胞活化，从而完成了本发明。
即，本发明提供：
(1)一种方法，其为包含将WT1肽添加于抗原呈递细胞而将辅助性T细胞活化的工序的辅助性T细胞的活化方法，该WT1肽具有与选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的任意一种MHC II类分子结合的能力。
(2)根据(1)所述的方法，其中，WT1肽具有与HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的至少两种MHC II类分子结合的能力。
(3)根据(1)或(2)所述的方法，其中，WT1肽还具有与选自HLA-DRB1*01:01分子、HLA-DRB1*04:01分子、HLA-DRB1*04:03分子、HLA-DRB1*04:05分子、HLA-DRB1*04:06分子、HLA-DRB1*08:03分子、HLA-DRB1*09:01分子、HLA-DRB1*11:01分子、HLA-DRB1*15:01分子、HLA-DRB1*15:02分子、HLA-DRB3*02:02分子、HLA-DRB4*01:01分子、HLA-DPB1*02:01分子、HLA-DPB1*03:01分子、HLA-DPB1*05:01分子、和HLA-DPB1*09:01分子中的任意一种HLA II类分子结合的能力。
(4)根据(1)～(3)中任一项所述的方法，其中，WT1肽向抗原呈递细胞的添加通过WT1肽、编码WT1肽的多核苷酸、含有该多核苷酸的表达载体、或含有该表达载体的细胞的添加来进行。
(5)根据(1)～(4)中任一项所述的方法，其中，WT1肽为含有氨基酸序列：Lys ArgTyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His(序列号2)的肽、其突变体或修饰体。
(6)一种组合物，其为用于将WT1肽添加于抗原呈递细胞而将辅助性T细胞活化的含有WT1肽的组合物，该WT1肽具有与选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的任意一种MHC II类分子结合的能力。
(7)根据(6)所述的组合物，其中，WT1肽具有与HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的至少两种MHC II类分子结合的能力。
(8)根据(6)或(7)所述的组合物，其中，WT1肽还具有与选自HLA-DRB1*01:01分子、HLA-DRB1*04:01分子、HLA-DRB1*04:03分子、HLA-DRB1*04:05分子、HLA-DRB1*04:06分子、HLA-DRB1*08:03分子、HLA-DRB1*09:01分子、HLA-DRB1*11:01分子、HLA-DRB1*15:01分子、HLA-DRB1*15:02分子、HLA-DRB3*02:02分子、HLA-DRB4*01:01分子、HLA-DPB1*02:01分子、HLA-DPB1*03:01分子、HLA-DPB1*05:01分子、和HLA-DPB1*09:01分子中的任意一种HLA II类分子结合的能力。
(9)根据(6)～(8)中任一项所述的组合物，其中，WT1肽向抗原呈递细胞的添加通过WT1肽、编码WT1肽的多核苷酸、含有该多核苷酸的表达载体、或含有该表达载体的细胞的添加来进行。
(10)根据(6)～(9)中任一项所述的组合物，其中，WT1肽为含有氨基酸序列：LysArg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His(序列号2)的肽、其突变体或修饰体。
(11)一种抗原呈递细胞，其呈递含有WT1肽的抗原肽与MHC II类分子的复合体，前述MHC II类分子为选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的任意一种MHC II类分子。
(12)一种辅助性T细胞，其识别含有WT1肽的抗原肽与MHC II类分子的复合体，前述MHC II类分子为选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的任意一种MHC II类分子。
(13)一种细胞毒性T细胞，其通过(11)所述的辅助性T细胞活化。
(14)一种用于治疗或预防癌的药物组合物，其含有(6)～(10)中任一项所述的组合物、(11)所述的抗原呈递细胞、(12)所述的辅助性T细胞、或(13)所述的细胞毒性T细胞中的任意一种作为有效成分。
(15)一种药物组合物，其为含有WT1肽、编码WT1肽的多核苷酸、含有该多核苷酸的表达载体、或含有该表达载体的细胞中的任意一种作为有效成分的用于将细胞毒性T细胞活化的药物组合物，其用于给予具有选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的任意一种MHC II类分子的对象。
(16)一种抗体，其与WT1肽特异性结合，该WT1肽具有与选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的任意一种MHC II类分子结合的能力。
(17)一种方法，其确定选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01中的任意一种MHC II类分子阳性对象中的WT1特异性辅助性T细胞的存在或量，其包含：
(a)使用WT1肽刺激由前述对象获得的试样，
(b)调查细胞因子或辅助性T细胞的存在或量
的工序，细胞因子或辅助性T细胞的存在或量的增大表示WT1特异性辅助性T细胞的存在或量。
发明的效果
根据本发明，得到通过使用WT1肽，适用于具有HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子的对象而将辅助性T细胞活化的方法、用于其的组合物、将细胞毒性T细胞活化的方法、用于其的组合物、细胞毒性T细胞的活化诱导剂、以及通过将辅助性T细胞和细胞毒性T细胞活化实现的癌的治疗和/或预防用药物组合物等，因此能够实现具有上述MHC II类分子的对象的体内和体外的辅助性T细胞和细胞毒性T细胞的活化、进而癌的治疗和预防等。
附图说明
图1为表示Clone R82-1的HLA限制性的图。横轴表示通过WT1-332(涂黑柱)或溶剂(空心柱)添加实现的IFN-γ产生量(pg/mL)。纵轴表示抗原呈递B-LCL细胞的种类。数据为平均值±SD(Triplicate)。＄：包含外推值的数据。
图2为表示Clone R132-1的HLA限制性的图。横轴表示通过WT1-332(涂黑柱)或溶剂(空心柱)添加实现的IFN-γ产生量(pg/mL)。纵轴表示抗原呈递B-LCL细胞的种类。数据为平均值±SD(Triplicate)。＄：包含外推值的数据。
图3为表示Clone R143-1的HLA限制性的图。横轴表示通过WT1-332(涂黑柱)或溶剂(空心柱)添加实现的IFN-γ产生量(pg/mL)。纵轴表示抗原呈递B-LCL细胞的种类。数据为平均值±SD(Triplicate)。＄：包含外推值的数据。
图4为表示Clone R145-2的HLA限制性的图。横轴表示通过WT1-332(涂黑柱)或溶剂(空心柱)添加实现的IFN-γ产生量(pg/mL)。纵轴表示抗原呈递B-LCL细胞的种类。数据为平均值±SD(Triplicate)。＄：包含外推值的数据。
图5为表示Clone Q32-1的HLA限制性的图。横轴表示通过WT1-332(涂黑柱)或溶剂(空心柱)添加实现的IFN-γ产生量(pg/mL)。纵轴表示抗原呈递B-LCL细胞的种类。数据为平均值±SD(Triplicate)。＄：包含外推值的数据。
图6为表示Clone Q41-1的HLA限制性的图。横轴表示通过WT1-332(涂黑柱)或溶剂(空心柱)添加实现的IFN-γ产生量(pg/mL)。纵轴表示抗原呈递B-LCL细胞的种类。数据为平均值±SD(Triplicate)。＄：包含外推值的数据。
具体实施方式
本发明在一方式中提供一种方法，其为包含将WT1肽添加于抗原呈递细胞而将辅助性T细胞或细胞毒性T细胞活化的工序的辅助性T细胞或细胞毒性T细胞的活化方法，前述WT1肽具有与MHC II类分子结合的能力。本发明中，将细胞毒性T细胞活化的工序可以通过经过将辅助性T细胞活化的工序来进行。另外，本发明中使用的WT1肽具有与选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的任意一种MHC II类分子结合的能力。另外，本发明中使用的WT1肽可以具有与上述MHC II类分子中的至少两种或更多种的MHC II类分子结合的能力。另外，本发明中使用的WT1肽例如可以具有与HLA-DR分子、HLA-DQ和HLA-DP分子中的任意一种MHC II类分子结合的能力。
本发明中，WT1肽可以为具有序列号1所示的人WT1蛋白质的氨基酸序列的一部分的肽。本发明的肽，只要具有上述特征则对该氨基酸序列和长度没有特别限定，但是若肽过长则容易受到蛋白分解酶的作用，若过短则不能顺利地与肽结合槽结合。本发明的肽的长度优选为10～25个氨基酸，更优选为15～21个氨基酸，进一步优选为16～20个氨基酸，例如16个氨基酸、17个氨基酸、18个氨基酸、或19个氨基酸。本发明的肽的具体例包含氨基酸序列：Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His(序列号2)。
进而，本发明中使用的WT1肽也包含上述肽的突变体。突变体例如可以含有选自由具有序列号2所示的氨基酸序列中数个例如1～9个、优选1～5个、1～4个、1～3个、更优选1～2个、进一步优选1个氨基酸经替换、缺失或添加而成的氨基酸序列的肽组成的组中的肽。肽中的氨基酸的替换可以在任意位置、在与任意氨基酸之间进行，优选为保守性氨基酸替换。作为保守性氨基酸替换的例子，可列举出Glu残基替换为Asp残基、Phe残基替换为Tyr残基、Leu残基替换为Ile残基、Ala残基替换为Ser残基、His残基替换为Arg残基等。氨基酸的添加或缺失优选在肽中的N末端和C末端进行，但是也可以在序列内部进行。本发明的肽的优选具体例，为具有序列号2的肽，但是即使是上述任意一种肽，条件也在于，具有与选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的任意一种MHC II类分子结合的能力，将辅助性T细胞或细胞毒性T细胞(本说明书中，也称为CTL)活化。通常，人MHC分子也称为HLA分子，因此本说明书中将MHC作为与HLA的同义语使用。
另外，本发明的肽可以为上述氨基酸序列的修饰体。上述氨基酸序列中的氨基酸残基可以通过公知的方法修饰。这种修饰体，例如可以为对氨基酸残基的侧链中的官能团实施酯化、烷基化、卤化、磷酸化等而得到的修饰体。另外，在含有上述氨基酸序列的肽的N末端和/或C末端可以结合各种物质。例如可以结合氨基酸、肽、它们的类似物等。例如可以添加组氨酸标签，可以与硫氧还蛋白等蛋白一起形成融合蛋白。或者可以在WT1肽结合能够检出的标记。在本发明肽结合这些物质的情况下，这些物质例如可以通过生物体内酶等或者通过细胞内处理等过程进行处理，最终产生由上述氨基酸序列组成的肽，通过作为与MHCII类分子的复合体呈递于细胞表面，可以得到辅助性T细胞和/或细胞毒性T细胞诱导效果。这些物质可以为调节本发明的肽的溶解性的物质，也可以为提高耐蛋白酶作用等其稳定性的物质，另外例如也可以为向规定的组织、器官特异性传递本发明的肽的物质，或者也可以为具有增强抗原呈递细胞的摄取效率的作用等的物质。另外，这些物质也可以为增大CTL诱导能力的物质，例如本发明的肽以外的辅助性肽。
本发明中使用的WT1肽，可以使用该技术领域中通常使用的方法或者它们改良方法合成。上述合成方法例如记载于Peptide Synthesis, Interscience, New York, 1966；The Proteins, Vol 2, Academic Press Inc., New York, 1976；ペプチド合成、丸善(株),1975；ペプチド合成の基础と实验、丸善(株),1985；医药品の开发 续 第14卷･ペプチド合成、广川书店,1991等(这些文献通过引用而包含于本说明书)。另外，本发明中使用的肽也可以基于编码该肽的核苷酸序列信息、使用基因工学的手法制造。上述基因工学的手法对于本领域技术人员而言是周知的。这些手法可以根据文献中记载的方法等进行(Molecular Cloning, T.Maniatis et al., CSH Laboratory(1983)、DNA Cloning,DM.Glover, IRL PRESS(1985))(这些文献通过引用而包含于本说明书)。
本发明也涉及编码以上说明的WT1肽的多核苷酸序列。编码WT1肽的多核苷酸序列可以为DNA序列，也可以为RNA序列。本发明中，也可以使用这些多核苷酸序列来替代使用WT1肽。也可以将这些多核苷酸序列整合到适当的载体来使用。作为载体，可列举出质粒、噬菌体载体、病毒载体等，可列举出例如pUC118、pUC119、pBR322、pCR3、pYES2、pYEUra3、pKCR、pCDM8、pGL2、pcDNA3.1、pRc/RSV、pRc/CMV、pAcSGHisNT-A、λZAPII、λgt11等。载体可以适当具有能够表达诱导的启动子、编码信号序列的基因、选择用标记基因、终止子等基因。这些基因向细胞、生物体的导入方法、表达方法等对于本领域技术人员而言是公知的。
本发明中使用的抗原呈递细胞为可以与MHC II类分子一起将含有上述WT1肽的抗原肽呈递于辅助性T细胞的细胞，例如指的是树突状细胞、外周血单核细胞等。因此，本发明中使用的抗原呈递细胞由来的对象必须具有与可以结合所添加的WT1肽的MHC II类分子相同的分子(例如HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的任意一种或更多种的MHC II类分子)。
本发明中，WT1肽向抗原呈递细胞的添加，可以通过添加WT1肽直接进行，或者通过编码WT1肽的多核苷酸或含有编码WT1肽的多核苷酸的表达载体的添加，或者通过含有该表达载体的细胞的添加间接进行。具体而言，WT1肽向抗原呈递细胞的添加，可以通过使得WT1肽与抗原呈递细胞接触，或者通过将编码WT1肽的多核苷酸或含有该多核苷酸的表达载体导入到抗原呈递细胞来进行。这些添加可以通过该技术领域中公知的方法实施。前述编码WT1肽的多核苷酸、含有编码WT1肽的多核苷酸的表达载体、和含有该表达载体的细胞可以通过本领域技术人员熟知的手法获得。具体而言，本发明中使用的多核苷酸，可以基于上述WT1肽的氨基酸序列(例如序列号2所示的氨基酸序列)确定。前述多核苷酸例如可以通过DNA或RNA合成方法、PCR法等制造。另外，上述含有多核苷酸的表达载体的种类、上述多核苷酸序列以外种含有的序列等可以根据导入该表达载体的宿主的种类、目的等适当选择，可列举出质粒、噬菌体载体、病毒载体等。含有表达载体的细胞例如可以通过转化宿主细胞来制作。作为宿主细胞，可列举出大肠杆菌、酵母、昆虫细胞、动物细胞等。向宿主细胞的导入方法，可以使用通常的方法例如磷酸钙法、DEAE-葡聚糖法、电穿孔法、基因导入用脂质。
通常，辅助性T细胞，通过T细胞表面的TCR･CD3复合体介由抗原呈递细胞表面的MHC II类分子识别抗原肽、T细胞表面的整联蛋白被抗原呈递细胞表面的整联蛋白配体刺激而被活化。本说明书中的辅助性T细胞的活化，不仅包含辅助性T细胞的活化、还包含辅助性T细胞的诱导、增殖。进而，本发明中被活化的辅助性T细胞也可以为未分化的T细胞(例如纯真T细胞)等。被活化的辅助性T细胞具有通过促进B细胞和细胞毒性T细胞的诱导、增殖、活化而将免疫系统活化的机能。因此，本发明的方法也可以用作癌等的治疗的辅助疗法。另外，体外中，也可以将使用本发明的方法活化了的辅助性T细胞用于癌等的治疗或预防、或者作为用于它们的辅助剂使用。辅助性T细胞的活化可以通过测定干扰素(例如干扰素γ等)、白细胞介素等细胞因子的产生、分泌量等来评价。
本发明在另外的方式中提供用于将WT1肽添加于抗原呈递细胞而将辅助性T细胞或细胞毒性T细胞活化的组合物。本发明中，细胞毒性T细胞的活化可以通过经过辅助性T细胞的活化来进行。作为本发明的组合物中含有的有效成分，可例示出WT1肽、编码WT1肽的多核苷酸、含有前述多核苷酸的载体、含有前述载体的细胞，但只要是可以将WT1肽作为抗原肽在抗原呈递细胞表面呈递的因子，则可以为任意的分子。这些因子可以如上所述通过本领域技术人员熟知的方法得到。
本发明中使用的WT1肽，如上所述，具有与HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的任意一种结合的能力。进而，本发明中使用的WT1肽，可以具有与上述MHC II类分子中至少两种或更多种的MHC II类分子结合的能力。另外，本发明中使用的WT1肽，也可以具有与HLA-DR分子、HLA-DQ、HLA-DP分子中任意一种MHC II类分子结合的能力。
若对具有HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的任意一种或更多种的MHC II类分子的对象给予本发明的组合物，则通过将对象中的辅助性T细胞和/或细胞毒性T细胞活化而将免疫系统活化。另外，WT1基因在各种癌、肿瘤例如白血病、骨髓增生异常综合征、多发性骨髓瘤、恶性淋巴瘤等造血器官肿瘤，胃癌、大肠癌、肺癌、乳癌、生殖细胞癌、肝癌、皮肤癌、膀胱癌、前列腺癌、子宮癌、子宫颈癌、卵巢癌等实体癌中高表达，因此本发明的组合物也可以用作癌的治疗或预防的辅助剂。或者，使用本发明的组合物活化了的辅助性T细胞、细胞毒性T细胞等例如也可以用作上述癌的治疗的辅助剂。
本发明的组合物，除了上述WT1肽、编码WT1肽的多核苷酸、含有前述多核苷酸的载体、或含有前述载体的细胞之外，例如还可以含有载体、赋形剂、或添加剂等。本发明的组合物中含有的上述WT1肽等由于将WT1肽特异性辅助性T细胞和/或细胞毒性T细胞活化，因此可以含有公知的MHC I类限制性WT1肽或者与它们一起适用。
本发明的组合物的适用方法，可以根据所希望的辅助性T细胞和/或细胞毒性T细胞的活化程度、抗原呈递细胞的状态等条件适当选择。该适用方法，可列举出例如通过皮内给药、皮下给药、肌肉内给药、静脉内给药、经鼻给药、经口给药等给予对象，或者添加于抗原呈递细胞培养液等，但是不限于它们。本发明的组合物中含有的上述WT1肽等的量、组合物的形态、适用次数等可以根据所希望的辅助性T细胞和/或细胞毒性T细胞的活化程度、抗原呈递细胞的状态等条件适当选择。
本发明在进而另外的方式中提供一种方法，其为包含将WT1肽添加于抗原呈递细胞而将辅助性T细胞或细胞毒性T细胞活化的工序的对象中的癌的治疗或预防方法，该WT1肽具有与选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的任意一种MHC II类分子结合的能力。本发明的方法为通过将辅助性T细胞和/或细胞毒性T细胞活化而将对象的免疫系统活化，从而治疗或预防对象中的癌的方法。本发明的方法中，将细胞毒性T细胞活化的工序可以通过经过将辅助性T细胞活化的工序来进行。WT1肽向抗原呈递细胞的添加，可以通过添加WT1肽直接进行，或者通过编码WT1肽的多核苷酸或含有编码WT1肽的多核苷酸的表达载体的添加，或者通过含有该表达载体的细胞的添加间接进行。前述编码WT1肽的多核苷酸、含有编码WT1肽的多核苷酸的表达载体、和含有该表达载体的细胞如上所述可以通过本领域技术人员熟知的方法获得。可以适用本发明的方法的对象，为选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的任意一种MHC II类分子阳性对象。可以适用本发明的癌可以为任意一种，可列举出例如白血病、骨髓增生异常综合征、多发性骨髓瘤、恶性淋巴瘤等造血器官肿瘤，胃癌、大肠癌、肺癌、乳癌、生殖细胞癌、肝癌、皮肤癌、膀胱癌、前列腺癌、子宮癌、子宫颈癌、卵巢癌等实体癌。另外，本发明的方法可以与使用了MHC I类分子限制性WT1肽的癌的治疗或预防方法或者用于其的药物组合物组合使用。
本发明在进而另外的方式中提供WT1肽、编码WT1肽的多核苷酸、含有前述多核苷酸的载体、或含有前述载体的细胞在制造上述组合物中的使用。进而，本发明提供为了将辅助性T细胞或细胞毒性T细胞活化而使用的WT1肽、编码WT1肽的多核苷酸、含有前述多核苷酸的载体、或含有前述载体的细胞。
本发明在进而另外的方式中涉及一种试剂盒，其为含有用于将WT1肽添加于抗原呈递细胞而将辅助性T细胞和/或细胞毒性T细胞活化的上述WT1肽、编码WT1肽的多核苷酸、含有前述多核苷酸的载体、含有前述载体的细胞的试剂盒，该WT1肽具有与选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的任意一种MHC II类分子结合的能力。优选该试剂盒用于上述辅助性T细胞或细胞毒性T细胞的活化方法。本发明的试剂盒，除了WT1肽之外例如还可以含有抗原呈递细胞的获得手段、辅助性T细胞和/或细胞毒性T细胞的活性的评价手段等。通常试剂盒随附操作说明书。使用本发明的试剂盒，可以将辅助性T细胞或细胞毒性T细胞有效地活化。
本发明在另外的方式中提供一种抗原呈递细胞，其呈递含有WT1肽的抗原肽与MHCII类分子的复合体。在此，前述MHC II类分子可以为HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的任意一种，进而，可以为上述MHC II类分子中的至少两种或更多种。本发明的抗原呈递细胞可以使用本领域技术人员之间已知的手法制造。例如可以通过由癌患者分离具有抗原呈递能力的细胞，对于所分离的细胞，用上述WT1肽(例如具有序列号2所示的氨基酸序列的肽)或编码WT1肽的多核苷酸进行脉冲，或者将含有前述多核苷酸的表达载体导入到细胞内、将含有WT1肽的抗原肽与MHC II类分子的复合体呈递于细胞表面来制作(CancerImmunol.Immunother. 46:82, 1998、J.Immunol.,158: p1796,1997、Cancer Res.,59:p1184, 1999 Cancer Res.,56:p5672,1996、J.Immunol.,161: p5607,1998、J.Exp.Med.,184: p465,1996)(这些文献通过引用而包含于本说明书)。本说明书中，具有抗原呈递能力的细胞若为将可以呈递WT1肽的MHC II类分子表达于细胞表面的细胞则没有限定，但是优选为抗原呈递能力高的外周血单核细胞或树突状细胞。另外，本发明的抗原呈递细胞如实施例所示，通过利用干扰素γ量的增加确认的细胞毒性T细胞活性的升高来确认其存在。本发明的抗原呈递细胞作为药物组合物的有效成分有效地用于细胞疗法(例如树突状细胞疗法)。
本发明在进而另外的方式中提供一种辅助性T细胞，其识别含有WT1肽的抗原肽与MHC II类分子的复合体。在此，前述MHC II类分子可以为HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的任意一种，进而，可以为上述MHC II类分子中的至少两种或更多种。作为本发明的辅助性T细胞，可列举出例如识别含有由序列号2所示的氨基酸序列组成的肽的抗原肽与选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的任意一种MHC II类分子的复合体的辅助性T细胞。对于本发明的辅助性T细胞而言，本领域技术人员可以使用该技术领域中公知的手法来容易地制造、获得(Iwata, M. et al., Eur. J. Immunol, 26,2081(1996))(本文献通过引用而包含于本说明书)。
本发明在进而另外的方式中提供一种细胞毒性T细胞，其通过识别含有WT1肽的抗原肽与MHC II类分子的复合体的辅助性T细胞活化。作为本发明的细胞毒性T细胞，可列举出例如通过识别含有由序列号2所示的氨基酸序列组成的肽的抗原肽与选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的任意一种MHC II类分子的复合体的辅助性T细胞活化的细胞毒性T细胞。对于本发明的细胞毒性T细胞而言，本领域技术人员可以通过公知的手法来容易地制造。例如通过分离患者的外周血淋巴细胞，体外将其用肽(例如具有序列号2所记载的氨基酸序列的肽)、编码前述肽的多核苷酸、或含有其的表达载体刺激来制作(Journal of Experimental Medicine 1999, 190: 1669)(本文献通过引用而包含于本说明书)。如上所述制造的细胞毒性T细胞可以用作癌等的治疗或预防用药物组合物的有效成分。
本发明在进而另外的方式中提供一种HLA四聚物，其具有含有上述WT1肽的抗原肽和MHC II类分子。前述MHC II类分子可以为HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的任意一种，也可以为上述MHC II类分子中的至少两种或更多种。本说明书中，HLA四聚物指的是通过将HLA蛋白质与肽聚集而成的复合体(HLA单体)进行生物素化、与抗生朊结合而四聚物化得到的四聚物。作为HLA四聚物，市售含有各种抗原肽的HLA四聚物，本发明的HLA四聚物可以容易地制作(Science 279: 2103-2106(1998)、Science 274: 94-96(1996))(本文献通过引用而包含于本说明书)。本发明的四聚物优选进行荧光标记，从而可以通过流式细胞计、荧光显微镜等公知的检出手段来容易地选择或检出所结合的本发明的辅助性T细胞、细胞毒性T细胞。本发明中的HLA四聚物，不限于四聚物，根据需要也可以使用五聚物、树状聚物等多聚体。本说明书中，多聚体指的是通过使用公知的手法、将HLA蛋白质与肽聚集而成的复合体(HLA单体)结合两个或更多而进行多聚体化得到的多聚体。
本发明在另外的方式中提供一种药物组合物，其含有上述组合物、抗原呈递细胞、辅助性T细胞、细胞毒性T细胞或四聚物中的任意一种作为有效成分，用于活化辅助性T细胞或细胞毒性T细胞。本发明的药物组合物可以含有上述组合物、抗原呈递细胞、辅助性T细胞、细胞毒性T细胞或四聚物中的任意一种或更多作为有效成分。本发明的药物组合物可以用于治疗或预防癌。本发明的药物组合物可以适用于表达WT1的各种癌以及肿瘤例如白血病、骨髓增生异常综合征、多发性骨髓瘤、恶性淋巴瘤等造血器官肿瘤，胃癌、大肠癌、肺癌、乳癌、生殖细胞癌、肝癌、皮肤癌、膀胱癌、前列腺癌、子宮癌、子宫颈癌、卵巢癌等实体癌。另外，本发明的药物组合物，可以用于给予具有选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的任意一种MHC II类分子的对象。本发明的药物组合物，可以与其它的癌的治疗或预防方法或用于其的药物组合物组合使用。进而，本发明的药物组合物可以含有辅助性T细胞或细胞毒性T细胞的活化剂、增殖剂、诱导剂等，或者也可以含有公知的MHC I类分子限制性WT1肽。
本发明的药物组合物除了有效成分之外，例如还可以含有基质、赋形剂等。本发明的药物组合物的给药方法可以根据疾病种类、对象状态、标的部位等条件适当选择。该方法，可列举出例如皮内给药、皮下给药、肌肉内给药、静脉内给药、经鼻给药、经口给药等，但是不限于此。本发明的药物组合物中含有的上述有效成分的量、药物组合物的剂型、给药次数等可以根据疾病种类、对象状态、标的部位等条件适当选择。
本发明在进而另外的方式中提供一种方法，其为包含向对象给予上述组合物、抗原呈递细胞、辅助性T细胞、细胞毒性T细胞或四聚物中的任意一种的有效量的工序的用于治疗或预防癌的方法，对象具有选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的任意一种MHC II类分子。通过本发明方法可以治疗或预防的癌，为表达WT1的各种癌以及肿瘤例如白血病、骨髓增生异常综合征、多发性骨髓瘤、恶性淋巴瘤等造血器官肿瘤，胃癌、大肠癌、肺癌、乳癌、生殖细胞癌、肝癌、皮肤癌、膀胱癌、前列腺癌、子宮癌、子宫颈癌、卵巢癌等实体癌。本发明的方法，可以与其它的癌的治疗或预防方法例如使用了公知的MHC I类分子限制性WT1肽的癌的治疗或预防方法组合使用。
本发明在进而另外的方式中提供上述组合物、抗原呈递细胞、辅助性T细胞、细胞毒性T细胞或四聚物中的任意一种在制造上述药物组合物中的使用。进而，本发明提供为了将辅助性T细胞或细胞毒性T细胞活化而使用的上述组合物、抗原呈递细胞、辅助性T细胞、细胞毒性T细胞或四聚物。进而本发明提供用于癌的治疗或预防的上述组合物、抗原呈递细胞、辅助性T细胞、细胞毒性T细胞或四聚物。
本发明在1方式中涉及与上述WT1肽或编码该WT1肽的多核苷酸特异性结合的抗体(以下也称为抗WT1抗体)。本发明的抗体可以为多克隆抗体、单克隆抗体中的任意一种。具体而言，可列举出与具有序列号2所示的氨基酸序列的肽特异性结合的抗体等。这些抗体的制造方法已经周知，本发明的抗体也可以根据这些常规方法制造(Current protocols inMolecular Biology edit. Ausubel et al. (1987) Publish. John Wiley and Sons.Section 11.12～11.13、Antibodies; A Laboratory Manual, Lane, H, D.等编, ColdSpring Harber Laboratory Press 出版 New York 1989)(这些文献通过引用而包含于本说明书)。例如可以使用具有序列号2所示的氨基酸序列的肽作为免疫原，将家兔等非人动物免疫，由该动物的血清利用常规方法得到。另一方面，单克隆抗体的情况下，可以将本发明中使用的肽(具有序列号2所示的氨基酸序列的肽)免疫于小鼠等非人动物，将所得到的脾细胞和骨髓瘤细胞进行细胞融合，制造杂交瘤细胞，由该杂交瘤细胞中得到(Currentprotocols in Molecular Biology edit. Ausubel et al. (1987) Publish. JohnWiley and Sons. Section 11.4～11.11)(本文献通过引用而包含于本说明书)。另外，本发明的抗WT抗体的制作，也可以通过根据宿主使用各种佐剂、提高免疫学反应来进行。作为上述佐剂，可列举出矿物质凝胶(例如弗氏佐剂、氢氧化铝等)、表面活性物质、人佐剂等。本发明的抗WT抗体可以用于亲和色谱、免疫学诊断等。免疫学诊断可以由免疫印迹法、放射免疫测定法(RIA)、酶免疫测定法(ELISA)、荧光或发光测定法等适当选择。
本发明在另外的方式中提供一种方法，其确定选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01中的任意一种MHC II类分子阳性对象中的WT1肽的存在或量，其包含：
(a)使得由前述对象获得的试样与上述抗WT抗体反应，接着
(b)调查前述试样中含有的上述抗WT抗体的存在或量
的工序。作为前述工序(a)中使用的试样，可以使用由具有选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01中的任意一种MHC II类分子的对象获得的试样。前述工序(a)中使用的试样，可列举出例如血液、淋巴细胞等体液、组织等。试样的获得、与抗体的反应等若为本领域技术人员则可以使用公知的手法适当进行。本发明中的工序(b)例如包含确定上述抗WT抗体的局部存在、部位、量等，因此可以用于癌的诊断、预后诊断等。上述抗WT抗体可以被标记。作为标记，可以使用荧光标记、放射性标记等公知的标记。通过进行标记，能够简便且迅速地进行WT1肽的存在或量的确定。
本发明在进而另外的方式中涉及一种试剂盒，其含有上述抗WT抗体作为必须构成成分，用于确定WT1肽的存在或量。本发明的试剂盒，除了上述抗WT抗体之外，例如还可以含有抗WT抗体的获得手段、评价手段等。通常试剂盒随附操作说明书。通过使用本发明的试剂盒，在确定上述WT1肽的存在或量的方法中能够简便且迅速地确定WT1肽的存在或量。
本发明在进而另外的方式中提供一种方法，其确定选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01中的任意一种MHC II类分子阳性对象中的WT1特异性辅助性T细胞或WT1特异性细胞毒性T细胞的存在或量，其包含：
(a)使用WT1肽刺激由前述对象获得的试样，
(b)调查细胞因子、辅助性T细胞或细胞毒性T细胞的存在或量
的工序，细胞因子、辅助性T细胞或细胞毒性T细胞的存在或量的增大表示WT1特异性辅助性T细胞或WT1特异性细胞毒性T细胞的存在或量。本发明的试样若含有抗原呈递细胞则可以任意，可列举出例如外周血单核细胞、浸润性淋巴细胞、肿瘤细胞、腹水中的细胞、胸水中的细胞、脑脊髓液中的细胞、骨髄细胞、或淋巴结细胞等。本发明中使用的试样可以源自健康人或源自癌患者。通过使用源自健康人的这些细胞，例如能够诊断是否患有癌或者是否具有其病原等。通过使用源自癌患者的这些细胞，例如能够预测对于癌患者而言，WT1免疫疗法是否具有效果等。本发明的方法中，所获得的试样可以在利用WT1肽刺激的前后培养，对于前述培养条件而言，本领域技术人员可以适当确定。使用了WT1肽的这些细胞的刺激可以使用电穿孔等公知的手法进行，可以在体外或体内中的任意一种中进行。细胞因子产生、辅助性T细胞、细胞毒性T细胞的反应是否存在、或者细胞因子产生量、辅助性T细胞、或细胞毒性T细胞的反应量可以通过已知方法调查。
本发明在进而另外的方式中涉及一种试剂盒，其含有上述WT1肽作为必须构成成分，用于确定WT1肽的存在或量。本发明的试剂盒，除了上述WT1肽之外，例如还可以含有试样的获得手段、细胞因子等评价手段等。通常试剂盒随附操作说明书。通过使用本发明的试剂盒，在确定上述WT1肽的存在或量的方法中能够简便且迅速地确定WT1肽的存在或量。
另外，本发明提供以下：
一种组合物以及含有前述组合物作为有效成分的用于治疗或预防癌的药物组合物，所述组合物为用于将WT1肽添加于抗原呈递细胞而将辅助性T细胞活化的含有WT1肽的组合物，该辅助性T细胞识别选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的任意一种MHC II类分子与该WT1肽的复合体；
一种药物组合物，其为含有WT1肽、编码WT1肽的多核苷酸、含有该多核苷酸的表达载体、或含有该表达载体的细胞中的任意一种作为有效成分的用于治疗或预防癌的药物组合物，其用于给予具有选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的任意一种MHCII类分子的对象；以及
一种方法，其为包含将WT1肽添加于抗原呈递细胞而将辅助性T细胞活化的工序的辅助性T细胞的活化方法，该辅助性T细胞识别选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的任意一种MHC II类分子与该WT1肽的复合体。
另外，本发明提供以下：
(1)一种组合物，其为用于将辅助性T细胞活化的含有WT1肽、编码WT1肽的多核苷酸、含有该多核苷酸的表达载体、或含有该表达载体的细胞的组合物，该辅助性T细胞识别选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的任意一种MHC II类分子与该WT1肽的复合体。
(2)一种组合物，其为用于将细胞毒性T细胞活化的含有WT1肽、编码WT1肽的多核苷酸、含有该多核苷酸的表达载体、或含有该表达载体的细胞的组合物，其被给予具有选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的任意一种MHC II类分子的对象。
(3)一种组合物，其为用于治疗或预防癌的含有WT1肽、编码WT1肽的多核苷酸、含有该多核苷酸的表达载体、或含有该表达载体的细胞的组合物，其被给予具有选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的任意一种MHC II类分子的对象。
(4)根据上述(1)～(3)中任一项所述的组合物，其含有WT1肽。
(5)根据上述(1)～(4)中任一项所述的组合物，其中，WT1肽为含有氨基酸序列：Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His(序列号2)的肽、其突变体或修饰体。
(6)根据上述(5)所述的组合物，其中，WT1肽为含有氨基酸序列：Lys Arg Tyr PheLys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His(序列号2)的肽。
(7)一种抗原呈递细胞，其呈递含有WT1肽的抗原肽与MHC II类分子的复合体，前述MHC II类分子为选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的任意一种MHC II类分子。
(8)根据上述(7)所述的抗原呈递细胞，其中，WT1肽为含有氨基酸序列：Lys ArgTyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His(序列号2)的肽、其突变体或修饰体。
(9)根据上述(8)所述的抗原呈递细胞，其中，WT1肽为含有氨基酸序列：Lys ArgTyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His(序列号2)的肽。
(10)一种辅助性T细胞，其识别含有WT1肽的抗原肽与MHC II类分子的复合体，前述MHC II类分子为选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的任意一种MHC II类分子。
(11)根据上述(10)所述的辅助性T细胞，其中，WT1肽为含有氨基酸序列：Lys ArgTyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His(序列号2)的肽、其突变体或修饰体。
(12)根据上述(11)所述的辅助性T细胞，其中，WT1肽为含有氨基酸序列：Lys ArgTyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His(序列号2)的肽。
(13)一种细胞毒性T细胞，其通过上述(12)所述的辅助性T细胞活化。
(14)一种用于治疗或预防癌的药物组合物，其含有上述(7)～(9)中任一项所述的抗原呈递细胞、上述(10)～(12)中任一项所述的辅助性T细胞或上述(13)所述的细胞毒性T细胞中的任意一种作为有效成分。
另外，本发明提供以下：
(1)一种方法，其为包含将WT1肽添加于抗原呈递细胞而将辅助性T细胞活化的工序的辅助性T细胞的活化方法，该辅助性T细胞识别选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的任意一种MHC II类分子与该WT1肽的复合体。
(2)根据上述(1)所述的方法，其中，WT1肽向抗原呈递细胞的添加通过使得WT1肽与抗原呈递细胞接触、或者通过将编码WT1肽的多核苷酸或含有该多核苷酸的表达载体导入到抗原呈递细胞来进行。
(3)一种方法，其为细胞毒性T细胞的活化方法，其包含向具有选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的任意一种MHC II类分子的对象给予WT1肽、编码WT1肽的多核苷酸、含有该多核苷酸的表达载体、或含有该表达载体的细胞。
(4)一种方法，其为用于治疗或预防癌的方法，其包含向具有选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的任意一种MHC II类分子的对象给予WT1肽、编码WT1肽的多核苷酸、含有该多核苷酸的表达载体、或含有该表达载体的细胞。
(5)根据上述(1)～(4)中任一项所述的方法，其中，WT1肽为含有氨基酸序列：LysArg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His(序列号2)的肽、其突变体或修饰体。
(6)根据上述(5)所述的方法，其中，WT1肽为含有氨基酸序列：Lys Arg Tyr PheLys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His(序列号2)的肽。
另外，本发明提供以下：
(1)WT1肽、编码WT1肽的多核苷酸、含有该多核苷酸的表达载体、或含有该表达载体的细胞在用于将辅助性T细胞活化的药物的制造中的使用，该辅助性T细胞识别选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的任意一种MHC II类分子与该WT1肽的复合体。
(2)WT1肽、编码WT1肽的多核苷酸、含有该多核苷酸的表达载体、或含有该表达载体的细胞在用于将细胞毒性T细胞活化的药物的制造中的使用，该药物被给予具有选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的任意一种MHC II类分子的对象。
(3)WT1肽、编码WT1肽的多核苷酸、含有该多核苷酸的表达载体、或含有该表达载体的细胞在用于治疗或预防癌的药物的制造中的使用，该药物被给予具有选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的任意一种MHC II类分子的对象。
(4)在含有WT1肽的药物的制造中的上述(1)～(3)中任一项所述的使用。
(5)根据上述(1)～(4)中任一项所述的使用，其中，WT1肽为含有氨基酸序列：LysArg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His(序列号2)的肽、其突变体或修饰体。
(6)根据上述(5)所述的使用，其中，WT1肽为含有氨基酸序列：Lys Arg Tyr PheLys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His(序列号2)的肽。
以下示出实施例对本发明进行具体且详细的说明，但是实施例不能解释成限定本发明。
实施例
实施例1：WT1肽(序列号2)特异性Th1克隆细胞的建立
为了建立WT1肽(序列号2)(以后记载为WT1-332)特异性Th1克隆细胞(以下Th1克隆细胞)，进行了以下的研究。
(1)试验材料
主要的试验材料如下所述。
被试验物质
[表1]
保存条件：设定于-30℃的冷库
＊WT1-332：Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His(序列号2)。
被试验物质的制造
用10mM乙酸溶解到20mg/mL，过滤灭菌，并进行冷冻保存(设定于-30℃)。
饲养细胞用外周血单核细胞(PBMC)
1)细胞名：PBMC
2)源自：健康成人血液提供者外周血
在个人信息管理者的管理下，进行能够连接的匿名化以及利用文件的手术同意书，通过本试验采血、制造。
3)样本条件：饲养细胞中，任意一种与克隆实施样本不同。
4)采集条件：加肝素钠采血40mL
饲养细胞用B-LCL细胞株
5)细胞株名：B-LCL细胞株
6)源自：人外周血
7)获得地点：理研细胞库或IHWG细胞库。
组构成
[表2]
*细胞内细胞因子染色(ICS)以及克隆后，在1孔仅进行第一次的ELISA试验。
试剂类
该试验中使用的试剂类之中特别重要的试剂如下所示。
[表3]
培养基类的制造
人AB型血清以及胎牛血清(FBS)，灭活处理后，利用0.2μm过滤器过滤来使用。对于培养基而言，PBMC分离用使用20U/mL肝素 HBSS，B-LCL细胞用使用10% FBS/RPMI-1640(100units/mL青霉素(penicillin)，100μg/mL链霉素(streptomycin))培养基，其它的培养使用10%人AB型血清/AIM-V(Invitrogen)培养基。细胞的培养，在各培养基中、37℃-5%CO2培养箱中进行。
(2)试验方法
PBMC的制造
由健康志愿者外周血，通过比重离心法制造PBMC，其一部分用于WT1-332特异性T细胞的诱导。剩余的细胞冷冻保存于CELLBANKER(十慈フィールド株式会社)中，用作再刺激时的抗原呈递细胞或饲养细胞。
WT1-332特异性T细胞的诱导
将所制造的PBMC以1.5×106个/孔×10孔接种于24孔板，添加最终浓度20μg/mL的WT1-332和最终浓度10ng/mL的IL-7，开始培养(Day0、培养基总量：2 mL/孔)。
1周后进行再刺激。再刺激中。首先向细胞浓度调整为3.0×106个/mL以下的抗原呈递细胞用PBMC添加最终浓度20μg/mL的WT1-332，培养2小时，进而添加丝裂霉素C(MMC)溶液(最终浓度=50μg/mL)，培养45分钟，用AIM-V洗涤，作为抗原呈递细胞。接着，回收所培养的PBMC后，去除粘接细胞，以1.15-1.43×106个/孔接种，与相同数的WT1/MMC处理完的抗原呈递细胞一起，添加最终浓度10ng/mL的IL-7，重新进行培养(Day7)。2天后用含有40U/mLIL-2的培养基进行培养液的半量交换，进而隔日用含有20U/mL IL-2的培养基进行培养液的半量交换的同时，继续培养1周。
细胞内细胞因子染色(ICS)
在Day14回收培养细胞，在96孔圆底板，各2.0×105个接种于2孔，另一方面，将20μg/mLWT1-332另外添加溶剂培养4小时后，进而添加最终浓度1×的Brefeldin A培养2小时。回收细胞，添加PE标记抗人CD4抗体、FITC标记抗人CD8抗体，4℃下反应15分钟，用StainingBuffer洗涤，添加Cytofix Cytoperm Fix/Perm，4℃下处理20分钟。用Perm./Wash Buffer洗涤，添加PerCP标记抗人IFN-γ抗体，4℃下反应30分钟，用Perm./Wash Buffer洗涤后，通过FACS解析。
饲养细胞用B-LCL细胞的融解、接种、以及传代
由冷冻保存细胞以约3×105个/mL开始培养，近汇合时进行传代操作，作为PHA刺激时的饲养细胞用B-LCL细胞。
利用MACS的CD4+细胞的分离
根据厂商的推荐流程，由培养细胞使用MACS Microbeads进行阳性选择，分离CD4+细胞。
利用有限稀释法的WT1-332特异性Th1细胞的克隆以及扩增
将各饲养细胞用B-LCL细胞和PBMC(细胞浓度3×106/mL以下)，利用丝裂霉素C溶液(最终浓度=50μg/mL)在CO2培养箱中处理45分钟，用AIM-V洗涤后，将两种PBMC和两种B-LCL细胞的总计四种细胞混合(各PBMC的最终浓度2.5×105个/mL、各B-LCL细胞的最终浓度2.5×104个/mL)。根据克隆其的样本数，制造需要组数，以最终浓度200ng/mL添加PHA，形成含有PHA的饲养细胞混合液。
接着，在所分离的CD4+细胞内，由ICS结果选择CD4+IFN-γ+细胞比率高的样本，利用所准备的含有PHA的饲养细胞混合液，将CD4+细胞浓度调整成10个/mL，在96孔板以100μL/孔(PBMC总量：5.0×104cells/孔、B-LCL细胞：5.0×103个/孔、PHA：200ng/mL、CD4+细胞：1个/孔)接种，开始培养。5天后添加与培养液等量的含有80 U/mL IL-2的培养基，然后隔日通过含有80 U/mL IL-2的培养基进行培养液的半量交换。期间，观察到明显细胞扩增的孔放大到48孔板，继续培养。
由开始克隆，以10天～14天的间隔，与上述同样地施加利用PHA刺激进行的扩增刺激，接种时，培养皿变更为24孔板、PBMC总量变更为1.0×106 个/孔、B-LCL细胞总量变更为1.0×105个/孔、PHA最终浓度变更为50ng/mL、扩增的Th1克隆细胞数变更为2.0×105个/孔以下。另外，IL-2添加的时机为从开始培养起3天后，进而所添加的培养基的IL-2含量为200U/mL。
Th1克隆细胞的肽刺激
为了确认克隆、扩增的Th1克隆细胞的抗原反应性，将所回收的Th1克隆细胞以1孔或3孔接种于96孔圆底板。向其中添加10μM乙酸或20μg/mL的各肽，开始培养(总培养液量：200μL/孔)，约24小时后回收培养上清。
ELISA
各培养上清中的IFN-γ浓度，用Assay Diluent(Becton Dickinson公司)将各培养上清稀释4倍后测定。IFN-γ浓度的测定，使用BD OptEIA ELISA set(human IFN-γ、BectonDickinson公司)，根据随附文件测定，但是抗体的稀释浓度变更为500倍、标准曲线的范围变更为18.75-1200pg/mL，另外显色反应时间变更为5分钟，超过测定区域的情况下，作为外推值进行处理，吸光度低于0的情况下作为0进行处理。
Th1克隆细胞主细胞库的制成
将确认了抗原反应性的Th1克隆细胞在CELLBANKER中冷冻保存，作为主细胞库。
评价项目
为了在WT1-332刺激下进行了14天培养的CD4+细胞中，评价WT1-332特异性Th1细胞是否显著诱导，根据下式算出WT1-332特异性Th1细胞比率(%)和WT1-332非特异性Th1比率(%)。
WT1-332特异性Th1细胞比率(%)=WT1-332刺激时的CD4+细胞内IFN-γ+细胞数/总存活细胞数×分离后CD4+细胞比率/分离前CD4+细胞比率×100
WT1-332非特异性Th1细胞比率(%)=AcOH添加时的CD4+细胞内IFN-γ+细胞数/总存活细胞数×100×分离后CD4+细胞比率/分离前CD4+细胞比率×100
对于各实验中、由WT1-332特异性Th1比率除去WT1-332非特异性Th1比率得到的值高的6～7样本实施克隆。
各组的培养上清中IFN-γ浓度通过ELISA测定，相对于添加溶剂时，添加WT1-332时的IFN-γ产生量多500pg/mL以上、高1.2倍以上的情况下判断维持抗原反应性，进行此后的操作。
(3)结果
可以进行各种Th1克隆细胞的建立。所得到的克隆的一部分，分型的结果确认了具有新型的限制等位基因。结果如表4所示。使用这些克隆，在实施例2中进行WT1-332是否可以以特定的HLA限制性活化Th1细胞的研究。
[表4]
*下划线表示新型的限制等位基因。
*没有实施HLA分型的HLA位点记载为N.T.。
实施例2：所建立的特异性Th1克隆细胞的限制等位基因的确定
对于实施例1中通过WT1-332添加而建立的特异性Th1克隆细胞(以下Th1克隆细胞)而言，进行WT1-332是否可以以特定的HLA限制性活化T细胞的研究，另外，确认其限制等位基因。
(1)试验物质
B-LCL细胞株
(2)试验方法
培养基类的制造
人AB型血清以及FBS，灭活处理后，利用0.2μm过滤器过滤来使用。对于培养基而言，PBMC分离用使用20U/mL肝素 HBSS，B-LCL细胞用使用含有10% FBS及10% P/S(100 units/mL青霉素(penicillin)，100μg/mL链霉素(streptomycin))的RPMI-1640，其它的培养使用含有10%人AB型血清的AIM-V培养基。细胞的培养，在各培养基中、37℃-5%CO2培养箱中进行。
试验概要
对于具有适当的HLA II类等位基因的B-LCL细胞进行WT1-332脉冲，作为抗原呈递细胞，与Th1克隆细胞共培养后，测定所产生的IFN-γ量，由此评价Th1克隆细胞的HLA限制性。
具体而言，使用饲养细胞用B-LCL细胞以及通过外周血制造的另外的PBMC作为饲养细胞，在PHA刺激下培养Th1克隆细胞。接着用WT1-332或溶剂处理的B-LCL细胞作为抗原呈递细胞，与所回收的Th1克隆细胞共培养，测定所产生的IFN-γ量，评价WT1-332特异性抗原刺激的有无。基于各Th1克隆细胞的HLA II类，使用具有一部分不同类型的各种B-LCL细胞作为抗原呈递细胞，由此评价各Th1克隆细胞的HLA II类限制性。
饲养细胞用B-LCL细胞的融解以及接种
在Day 0由冷冻保存细胞以1×105个/mL开始培养，在Day 3回收，作为PHA刺激时的饲养细胞用B-LCL细胞。
PBMC的制造
直至Day 2为止由健康志愿者外周血，通过比重离心法制造，测定细胞数后，回收细胞颗粒，再悬浮于CELLBANKER(三菱化学メディエンス株式会社)后，分注到低温保存管(cryotube)，在设定于-80℃的冷库中冷冻保存。PHA刺激时将冷冻保存PBMC随时融解，作为饲养细胞用PBMC供给。
Th1克隆细胞的融解以及接种
在Day 2由冷冻保存细胞在含有20 U/mL IL-2的培养基中以2×106cells/mL以下开始培养，在Day 3回收，作为PHA刺激时的Th1克隆细胞。
Th1克隆细胞的PHA刺激
在Day 3，将各饲养细胞用B-LCL细胞和PBMC，利用丝裂霉素C溶液(最终浓度=50μg/mL)在CO2培养箱中处理45分钟，用AIM-V洗涤后，将两种PBMC和两种B-LCL细胞的总计四种细胞混合(各PBMC的最终浓度1.0×106个/mL、各B-LCL细胞的最终浓度1.0×105个/mL)。将其相对于所接种的Th1克隆细胞制造需要组数，以最终浓度100ng/mL添加PHA，形成含有PHA的饲养细胞混合液。接着，将所培养的Th1克隆细胞以0.5mL/个(细胞浓度4.0×105个/mL)接种于24孔板，进而以0.5 mL/孔接种含有PHA的饲养细胞混合液，进行培养。在Day 6添加与培养液等量的含有20U/mL IL-2的培养基，在Day 8、Day 10、Day 12、Day14利用含有40U/mLIL-2的培养基进行培养液的半量交换，在Day 15供于限制性评价试验。需要说明的是，培养中途细胞达到汇合的情况下，利用含有20U/mL IL-2的培养基进行传代培养。
限制性评价用抗原呈递B-LCL细胞的融解以及接种
在Day 11由冷冻保存细胞以约1×105个/mL开始培养，在Day 15回收细胞，用于限制性评价试验。
限制性评价试验
在Day 15回收Th1克隆细胞，根据回收细胞数，在96孔圆底板以1.0-2.5×104cells/100μL/孔、3孔接种。将细胞浓度调整为1×106个/mL的抗原呈递用B-LCL细胞各4-7mL分注到两根圆锥管，另一方面，以最终浓度10μM添加乙酸，另一方面以最终浓度20μg/mL添加WT1-332，培养2小时后，用AIM-V洗涤，向接种有Th1克隆细胞的96孔板以2.5×104cells/100μL/孔添加，培养16小时以上。需要说明的是，为了确认WT1-332反应性，在相同的板，准备替代B-LCL细胞而添加有WT1-332或溶剂的孔。
ELISA
各培养上清中的IFN-γ浓度，用Assay Diluent(Becton Dickinson公司)将各培养上清稀释100倍后测定。IFN-γ浓度的测定，使用BD OptEIA ELISA set(human IFN-γ、Becton Dickinson公司)，根据随附文件测定，但是标准曲线的范围变更为5-640pg/mL，另外显色反应时间变更为10分钟，超过测定区域的情况下，作为外推值进行处理，吸光度低于0的情况下作为0进行处理。
评价项目
各培养上清中的IFN-γ量
(3)结果
(i)Th1克隆细胞CloneR82-1 (DRB1*08:02/14:03、DPB1*02:01、DQB1*03:01/03:02)的HLA限制性评价试验
CloneR82-1的IFN-γ产生通过WT1-332脉冲DRB1*08:02(+) B-LCL (HEV#0052以及HEV#0324)的刺激而检出(图1)。因此判明CloneR82-1为WT1-332特异性HLA-DRB1*08:02-限制性Th1克隆。
(ii)Th1克隆细胞CloneR132-1 (DRB1*01:01/13:02、DPB1*04:01/04:02)的HLA限制性评价试验
CloneR132-1的IFN-γ产生仅通过WT1-332脉冲DRB1*13:02(+) B-LCL (HEV#0046)的刺激而检出(图2)。因此判明CloneR132-1为WT1-332特异性HLA-DRB1*13:02-限制性Th1克隆。
(iii)Th1克隆细胞CloneR143-1(DRB1*14:03/15:02、DPB1*02:01/03:01)的HLA限制性评价试验
CloneR143-1的IFN-γ产生仅通过WT1-332脉冲DRB1*14:03(+) B-LCL (HEV#0052)的刺激而检出(图3)。因此确认CloneR143-1为WT1-332特异性HLA-DRB1*14:03-限制性Th1克隆。
(iv)Th1克隆细胞CloneR145-2(DRB1*04:05/14:05、DPB1*05:01)的HLA限制性评价试验
CloneR145-2的IFN-γ产生仅通过WT1-332脉冲DRB1*14:05(+) B-LCL (ISH5)的刺激而检出(图4)。因此判明CloneR145-2为WT1-332特异性HLA-DRB1*14:05-限制性Th1克隆。
(v)Th1克隆细胞CloneQ32-1(DRB1*08:02/14:03、DPB1*02:01、DQB1*03:01/03:02)的HLA限制性评价试验
CloneQ32-1的IFN-γ产生通过WT1-332脉冲DQB1*03:02(+) B-LCL (HEV#0052以及HEV#0238)的刺激而检出(图5)。因此确认CloneQ32-1为WT1-332特异性HLA-DQB1*03:02限制性Th1克隆。
(vi)Th1克隆细胞CloneQ41-1 (DRB1*04:05/15:01、DPB1*05:01、DQB1*04:01/06:02)的HLA限制性评价试验
CloneQ41-1的IFN-γ产生通过脉冲WT1-332的各种抗原呈递细胞(HEV#0174、HEV#0013、HEV#0035、和HEV#0050)的刺激而检出，但是对于脉冲WT1-332的HEV#0201和HEV#0073而言没有检出(图6)。DQB1*04:01仅在HEV#0174、HEV#0013、HEV#0035、和0050中表达。因此确认CloneQ41-1为WT1-332特异性HLA-DQB1*04:01限制性Th1克隆。
产业上的可利用性
通过本发明，提供一种方法及用于其的组合物、以及通过将辅助性T细胞和/或细胞毒性T细胞活化实现的癌的治疗和/或预防用药物组合物等，所述方法，其使用具有与选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的任意一种MHC II类分子结合的能力的WT1肽，将辅助性T细胞和/或细胞毒性T细胞活化，因此，能够利用于药物等领域例如高表达WT1基因的各种造血器官肿瘤、实体癌的预防药或治疗药的开发、制造领域中。
序列表自由文本
序列号2：合成肽
序列表
<110> Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.
Osaka University
<120> 辅助性T细胞的活化方法
<130> 671805
<150> JP 2012-274494
<151> 2012-12-17
<160> 2
<170> PatentIn 版本 3.2
<210> 1
<211> 449
<212> PRT
<213> 智人
<400> 1
Met Gly Ser Asp Val Arg Asp Leu Asn Ala Leu Leu Pro Ala Val Pro
1 5 10 15
Ser Leu Gly Gly Gly Gly Gly Cys Ala Leu Pro Val Ser Gly Ala Ala
20 25 30
Gln Trp Ala Pro Val Leu Asp Phe Ala Pro Pro Gly Ala Ser Ala Tyr
35 40 45
Gly Ser Leu Gly Gly Pro Ala Pro Pro Pro Ala Pro Pro Pro Pro Pro
50 55 60
Pro Pro Pro Pro His Ser Phe Ile Lys Gln Glu Pro Ser Trp Gly Gly
65 70 75 80
Ala Glu Pro His Glu Glu Gln Cys Leu Ser Ala Phe Thr Val His Phe
85 90 95
Ser Gly Gln Phe Thr Gly Thr Ala Gly Ala Cys Arg Tyr Gly Pro Phe
100 105 110
Gly Pro Pro Pro Pro Ser Gln Ala Ser Ser Gly Gln Ala Arg Met Phe
115 120 125
Pro Asn Ala Pro Tyr Leu Pro Ser Cys Leu Glu Ser Gln Pro Ala Ile
130 135 140
Arg Asn Gln Gly Tyr Ser Thr Val Thr Phe Asp Gly Thr Pro Ser Tyr
145 150 155 160
Gly His Thr Pro Ser His His Ala Ala Gln Phe Pro Asn His Ser Phe
165 170 175
Lys His Glu Asp Pro Met Gly Gln Gln Gly Ser Leu Gly Glu Gln Gln
180 185 190
Tyr Ser Val Pro Pro Pro Val Tyr Gly Cys His Thr Pro Thr Asp Ser
195 200 205
Cys Thr Gly Ser Gln Ala Leu Leu Leu Arg Thr Pro Tyr Ser Ser Asp
210 215 220
Asn Leu Tyr Gln Met Thr Ser Gln Leu Glu Cys Met Thr Trp Asn Gln
225 230 235 240
Met Asn Leu Gly Ala Thr Leu Lys Gly Val Ala Ala Gly Ser Ser Ser
245 250 255
Ser Val Lys Trp Thr Glu Gly Gln Ser Asn His Ser Thr Gly Tyr Glu
260 265 270
Ser Asp Asn His Thr Thr Pro Ile Leu Cys Gly Ala Gln Tyr Arg Ile
275 280 285
His Thr His Gly Val Phe Arg Gly Ile Gln Asp Val Arg Arg Val Pro
290 295 300
Gly Val Ala Pro Thr Leu Val Arg Ser Ala Ser Glu Thr Ser Glu Lys
305 310 315 320
Arg Pro Phe Met Cys Ala Tyr Pro Gly Cys Asn Lys Arg Tyr Phe Lys
325 330 335
Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His Thr Gly Glu Lys Pro
340 345 350
Tyr Gln Cys Asp Phe Lys Asp Cys Glu Arg Arg Phe Ser Arg Ser Asp
355 360 365
Gln Leu Lys Arg His Gln Arg Arg His Thr Gly Val Lys Pro Phe Gln
370 375 380
Cys Lys Thr Cys Gln Arg Lys Phe Ser Arg Ser Asp His Leu Lys Thr
385 390 395 400
His Thr Arg Thr His Thr Gly Lys Thr Ser Glu Lys Pro Phe Ser Cys
405 410 415
Arg Trp Pro Ser Cys Gln Lys Lys Phe Ala Arg Ser Asp Glu Leu Val
420 425 430
Arg His His Asn Met His Gln Arg Asn Met Thr Lys Leu Gln Leu Ala
435 440 445
Leu
<210> 2
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 合成肽
<400> 2
Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His
1 5 10 15
Claims (14)
1. 一种组合物，其为用于将辅助性T细胞活化的含有WT1肽、编码WT1肽的多核苷酸、含有该多核苷酸的表达载体、或含有该表达载体的细胞的组合物，该辅助性T细胞识别选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的任意一种MHC II类分子与该WT1肽的复合体。
2. 一种组合物，其为用于将细胞毒性T细胞活化的含有WT1肽、编码WT1肽的多核苷酸、含有该多核苷酸的表达载体、或含有该表达载体的细胞的组合物，其对具有选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的任意一种MHC II类分子的对象给药。
3. 一种组合物，其为用于治疗或预防癌的含有WT1肽、编码WT1肽的多核苷酸、含有该多核苷酸的表达载体、或含有该表达载体的细胞的组合物，其对具有选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的任意一种MHC II类分子的对象给药。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的药物组合物，其含有WT1肽。
5. 根据权利要求1～4中任一项所述的组合物，其中，WT1肽为含有氨基酸序列：LysArg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His(序列号2)的肽、其突变体或修饰体。
6. 根据权利要求5所述的组合物，其中，WT1肽为含有氨基酸序列：Lys Arg Tyr PheLys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His(序列号2)的肽。
7. 一种抗原呈递细胞，其呈递含有WT1肽的抗原肽与MHC II类分子的复合体，所述MHCII类分子为选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的任意一种MHC II类分子。
8. 根据权利要求7所述的抗原呈递细胞，其中，WT1肽为含有氨基酸序列：Lys Arg TyrPhe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His(序列号2)的肽、其突变体或修饰体。
9. 根据权利要求8所述的抗原呈递细胞，其中，WT1肽为含有氨基酸序列：Lys Arg TyrPhe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His(序列号2)的肽。
10. 一种辅助性T细胞，其识别含有WT1肽的抗原肽与MHC II类分子的复合体，所述MHCII类分子为选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、HLA-DRB1*14:03分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-DQB1*03:02分子、和HLA-DQB1*04:01分子中的任意一种MHC II类分子。
11. 根据权利要求10所述的辅助性T细胞，其中，WT1肽为含有氨基酸序列：Lys ArgTyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His(序列号2)的肽、其突变体或修饰体。
12. 根据权利要求11所述的辅助性T细胞，其中，WT1肽为含有氨基酸序列：Lys ArgTyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His(序列号2)的肽。
13.一种细胞毒性T细胞，其通过权利要求12所述的辅助性T细胞活化。
14.一种用于治疗或预防癌的药物组合物，其含有权利要求7～9中任一项所述的抗原呈递细胞、权利要求10～12中任一项所述的辅助性T细胞或权利要求13所述的细胞毒性T细胞中的任意一种作为有效成分。
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20080070835A1 (en) | 2003-11-05 | 2008-03-20 | International Institute Of Cancer Immunology, Inc | Hla-Dr-Binding Antigen Peptide Derived From Wt1 |
| US8765687B2 (en) | 2005-10-17 | 2014-07-01 | Sloan Kettering Institute For Cancer Research | WT1 HLA class II-binding peptides and compositions and methods comprising same |
| CA2645766A1 (en) | 2006-04-10 | 2007-10-25 | Sloan Kettering Institute For Cancer Research | Immunogenic wt-1 peptides and methods of use thereof |
| PT2119778E (pt) | 2007-02-27 | 2016-02-15 | Int Inst Cancer Immunology Inc | Método para ativação de célula t auxiliar e composição para utilização no método |
| AR083295A1 (es) | 2010-10-05 | 2013-02-13 | Univ Osaka | Metodo para activar celulas t auxiliares |
| EP3520810A3 (en) | 2012-01-13 | 2019-11-06 | Memorial Sloan-Kettering Cancer Center | Immunogenic wt1 peptides and use thereof |
| WO2014098012A1 (ja) | 2012-12-17 | 2014-06-26 | 大塚製薬株式会社 | ヘルパーt細胞の活性化方法 |
| US9919037B2 (en) | 2013-01-15 | 2018-03-20 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Immunogenic WT-1 peptides and methods of use thereof |
| US10815273B2 (en) | 2013-01-15 | 2020-10-27 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Immunogenic WT-1 peptides and methods of use thereof |
| EP3231438B1 (en) | 2014-12-11 | 2020-06-17 | International Institute of Cancer Immunology, Inc. | Wt1 immunotherapy for intraocular angiogenic disease |
| AU2022327884A1 (en) | 2021-08-12 | 2024-02-22 | International Institute Of Cancer Immunology, Inc. | Pharmaceutical composition and method for treatment or prevention of cancer |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005095598A1 (ja) * | 2004-03-31 | 2005-10-13 | International Institute Of Cancer Immunology, Inc. | Ｗｔ１由来の癌抗原ペプチド |
| WO2012046730A1 (ja) * | 2010-10-05 | 2012-04-12 | 国立大学法人大阪大学 | ヘルパーｔ細胞の活性化方法 |
| CN102803487A (zh) * | 2009-04-23 | 2012-11-28 | 株式会社癌免疫研究所 | 癌抗原辅助肽 |
Family Cites Families (27)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5726288A (en) | 1989-11-13 | 1998-03-10 | Massachusetts Institute Of Technology | Localization and characterization of the Wilms' tumor gene |
| AU4932199A (en) | 1998-07-31 | 2000-02-21 | Haruo Sugiyama | Cancer antigens based on tumor suppressor gene wt1 product |
| US7063854B1 (en) | 1998-09-30 | 2006-06-20 | Corixa Corporation | Composition and methods for WTI specific immunotherapy |
| MXPA01003344A (es) | 1998-09-30 | 2004-04-21 | Corixa Corp | Composiciones y metodos para inmunoterapia especifica de wt1. |
| US20030235557A1 (en) | 1998-09-30 | 2003-12-25 | Corixa Corporation | Compositions and methods for WT1 specific immunotherapy |
| EP1261711A2 (en) | 2000-02-22 | 2002-12-04 | Corixa Corporation | Compositions and methods for diagnosis and therapy of malignant mesothelioma |
| US20040097703A1 (en) | 2001-03-22 | 2004-05-20 | Haruo Sugiyama | Wt1 modified peptide |
| GB0108491D0 (en) | 2001-04-04 | 2001-05-23 | Gendaq Ltd | Engineering zinc fingers |
| CA2451846A1 (en) | 2001-06-29 | 2003-01-09 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Cancer vaccine comprizing a cancer antigen based on the product of a tumor suppressor gene wt1 and a cationic liposome |
| US8735357B2 (en) | 2001-09-28 | 2014-05-27 | International Institute Of Cancer Immunology, Inc. | Method of inducing antigen-specific T cells |
| US20050002951A1 (en) | 2001-09-28 | 2005-01-06 | Haruo Sugiyama | Novel method of inducing antigen-specific t cells |
| WO2003106682A1 (ja) | 2002-06-12 | 2003-12-24 | 中外製薬株式会社 | Ｈｌａ−ａ２４拘束性癌抗原ペプチド |
| US7342092B2 (en) | 2002-09-12 | 2008-03-11 | International Institute Of Cancer Immunology, Inc. | Cancer antigen peptide formulations |
| DE60329201D1 (de) | 2002-09-20 | 2009-10-22 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Substituierte wt1-peptide |
| KR20120054644A (ko) | 2003-01-15 | 2012-05-30 | 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 | 이량체화 펩티드 |
| EP2343083B1 (en) | 2003-06-27 | 2014-01-15 | International Institute of Cancer Immunology, Inc. | Method of diagnosing cancer comprising the measurement of WT1-specific CTL precursor cells |
| US20080070835A1 (en) * | 2003-11-05 | 2008-03-20 | International Institute Of Cancer Immunology, Inc | Hla-Dr-Binding Antigen Peptide Derived From Wt1 |
| JP4719876B2 (ja) | 2005-04-04 | 2011-07-06 | 国立大学法人愛媛大学 | Ｈｌａクラスｉｉ拘束性ｗｔ１抗原ペプチド |
| US8765687B2 (en) | 2005-10-17 | 2014-07-01 | Sloan Kettering Institute For Cancer Research | WT1 HLA class II-binding peptides and compositions and methods comprising same |
| JP4394724B2 (ja) | 2005-11-30 | 2010-01-06 | 株式会社癌免疫研究所 | 新規ペプチド化合物 |
| US7420880B2 (en) | 2005-12-29 | 2008-09-02 | Timex Group B.V. | Multimode electronic device with calibrating/setting mechanism |
| CA2886551A1 (en) | 2006-02-22 | 2007-08-30 | Haruo Sugiyama | Hla-a*3303-restricted wt1 peptide and pharmaceutical composition comprising the same |
| CA2645766A1 (en) * | 2006-04-10 | 2007-10-25 | Sloan Kettering Institute For Cancer Research | Immunogenic wt-1 peptides and methods of use thereof |
| AU2007340679B2 (en) | 2006-12-28 | 2013-09-12 | International Institute Of Cancer Immunology, Inc. | HLA-A*1101-restricted WT1 peptide and pharmaceutical composition comprising the same |
| PT2119778E (pt) | 2007-02-27 | 2016-02-15 | Int Inst Cancer Immunology Inc | Método para ativação de célula t auxiliar e composição para utilização no método |
| KR101669279B1 (ko) | 2007-03-05 | 2016-10-26 | 인터내셔널 인스티튜트 오브 캔서 이무놀로지 인코퍼레이티드 | 암 항원 특이적 ｔ 세포의 수용체 유전자 및 그것에 따라 코드되는 펩티드 및 이들의 사용 |
| WO2014098012A1 (ja) | 2012-12-17 | 2014-06-26 | 大塚製薬株式会社 | ヘルパーt細胞の活性化方法 |
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2015
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2016
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Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005095598A1 (ja) * | 2004-03-31 | 2005-10-13 | International Institute Of Cancer Immunology, Inc. | Ｗｔ１由来の癌抗原ペプチド |
| CN102803487A (zh) * | 2009-04-23 | 2012-11-28 | 株式会社癌免疫研究所 | 癌抗原辅助肽 |
| WO2012046730A1 (ja) * | 2010-10-05 | 2012-04-12 | 国立大学法人大阪大学 | ヘルパーｔ細胞の活性化方法 |
| TW201217525A (en) * | 2010-10-05 | 2012-05-01 | Univ Osaka | Method for activating helper T cells |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| FUMIHIRO 等: "A WT1 protein-derived, naturally processed 16-mer peptide, WT1332，is a promiscuous helper peptide for induction of WT1-specific Th1-type CD4+ T cells", 《MICROBIOL IMMUNOL》 * |
| FUMIHIRO 等: "A WT1 protein-derived, naturally processed 16-mer peptide, WT1332，is a promiscuous helper peptide for induction of WT1-specific Th1-type CD4+ T cells", 《MICROBIOL IMMUNOL》, no. 52, 31 December 2008 (2008-12-31), pages 593 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111647066A (zh) * | 2020-07-01 | 2020-09-11 | 维肽瀛(上海)生物技术有限公司 | Wt1多肽肿瘤抑制剂 |
| CN111647066B (zh) * | 2020-07-01 | 2020-12-18 | 维肽瀛(上海)生物技术有限公司 | Wt1多肽肿瘤抑制剂 |
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