TW201400130A - 包含抗－ｄｌｌ４抗體的穩定化調配物 - Google Patents

Abstract

本發明提供包含特異性地結合至人類delta樣配體4(Dll4)之抗體的醫藥調配物。除了抗-Dll4抗體以外，該等調配物可含有磷酸鹽緩衝劑、有機共溶劑、雙醣以及鹽。本發明之醫藥調配物在儲存數個月之後以及在歷經熱壓力以及其他物理性壓力之後表現相當程度的抗體穩定性。

Description

包含抗-DLL4抗體的穩定化調配物

本發明是有關於治療性抗體調配物的領域。更具體而言，本發明是有關於包含特異性地結合至delta樣配體4(Dll4)之抗體的醫藥調配物的領域。

序列表

依據37 C.F.R § 1.821(e)，隨本說明書同時一起申請的是序列表的ST.25相容性電腦可讀取文字檔。文字檔的內容併入本文做為參考文件。序列表的紙本複印本係依據37 C.F.R § 1.821(f)與ST.25相容性電腦可讀取文字檔的內容完全相同，其納入作為本說明的一部分且併入本文做為參考文件。

Notch-信號傳遞路徑是一種關於細胞對細胞溝通的系統，被廣泛的真核生物用於數種生物過程，諸如分化、增殖及恆定。Delta樣(Delta-like)4(Dl4)或delta樣配體4(Dll4)(下文”Dll4”)是Notch配體delta家族的一個成員，其依據血管內皮展現高度選擇性表現(Shutter et al.(2000)Genes Develop.14：1313-1318)。Dll4是Notch受體(包括Notch1及Notch4)的一個配體。關於人類Dll4的胺基酸序列顯示於SEQ ID NO：9中。若Dll4-Notch信號傳遞路徑在調節血管新生中扮演重要角色且其牽涉人類健 康與醫學，則發展及開展以Dll4為基礎的藥劑是需要的。一個這樣以Dll4為基礎的藥劑為對Dll4具有特異性的治療性抗體。

製造可用作為人類治療劑的抗體的方法包括產生嵌合抗體及人類化抗體(參見，例如U.S.6,949,245)。參見，例如WO 94/02602(Abgenix)及U.S.6,596,541(Regeneron Pharmaceuticals)描述產生能夠生產人類抗體之非人類基因轉殖小鼠的方法。美國專利第7,488,806號、第7,534,868號與第7,919,593號，以及美國專利申請案第U.S.2011-0150905A1號揭示針對人類Dll4的抗體。

治療性抗體必須以不僅使抗體適於投與給患者的方式，還要以在儲存以及後續使用期間維持其穩定性的方式來調配。舉例而言，例如除非適當地調配溶液，否則液體溶液中的治療性抗體傾向於分解、沉澱、團聚或非所要的化學修飾。抗體在液體調配物中的穩定性不僅取決於調配物中所使用的賦形劑種類，還有賦形劑相對於彼此的數量和比例。此外，除了穩定性以外，在製備液體抗體調配物時必須納入其他考量。此等其他考量的實例包括液體的黏度與特定調配物所能包含的抗體濃度，以及調配物的視覺品質或訴求。因此，在調配治療性抗體時，必須非常小心以使得調配物維持穩定、含有適當濃度的抗體，以及具有適當黏度與使調配物方便投與給患者的其他特性。

針對Dll4的抗體是需要適當調配的治療相關大分子的一個實例。儘管已知一些抗-Dll4抗體，但在技藝中對於含有足夠穩定且適於投與給患者之抗-Dll4抗體的新穎醫藥調配物仍存在有需要。

本發明藉由提供含有特異性地結合至人類delta樣配體4(Dll4)之人類抗體的醫藥調配物來滿足上述需求。

在一個態樣中，提供一種液體醫藥調配物，其包含：(i)特 異性地結合至Dll4的抗體；(ii)緩衝劑；(iii)有機共溶劑；以及(iv)熱穩定劑。

在一個具體例中，以約20±3 mg/mL至約75±11.25 mg/mL的濃度提供抗體。在另一個具體例中，以約25 mg/mL±3.75 mg/mL的濃度提供抗體。在另一個具體例中，以約50 mg/mL±7.5 mg/mL的濃度提供抗體。

在一個具體例中，本發明的例示性抗-Dll4抗體包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3結構域，具有個別胺基酸序列SEQ ID NO：2、3、4、6、7及8(例如REGN421)。在一個具體例中，該抗體含有包含在具有胺基酸序列SEQ ID NO：1之HCVR，以及具有胺基酸SEQ ID NO：5之LCVR的CDR序列中。

在一個具體例中，液體調配物的pH為約pH 5.0至約pH 6.6；pH 6.0±0.5、pH 6.0±0.4、pH 6.0±0.3、pH 6.0±0.2、pH 6.0±0.1、pH 6.0±0.05、pH 6.0±0.01，或pH 6.0。在一個特定具體例中，液體調配物的pH為約pH 6.0±0.5。在一個具體例中，緩衝劑具有約pH 5.8至約pH 8.0；或約pH 6.0至約7.5的有效緩衝範圍。在一個具體例中，緩衝劑具有約6.0至約7.5的pKa。在一個具體例中，緩衝劑具有6.0的pKa。在一個具體例中，緩衝劑具有6.4的pKa。在一個具體例中，緩衝劑具有6.5的pKa。在一個具體例中，緩衝劑具有7.2的pKa。

在一個具體例中，緩衝劑為磷酸鹽緩衝劑。在一個具體例中，磷酸鹽濃度為5 mM±0.75 mM至50 mM±7.5 mM。在一個具體例中，磷酸鹽濃度為5 mM±0.75 mM或約5 mM。在一個具體例中，磷酸鹽濃度為10 mM±1.5 mM或約10 mM。在一個具體例中，磷酸鹽濃度為15 mM±2.25 mM或約15 mM。在一個具體例中，磷酸鹽濃度為20 mM±3 mM或約20 mM。在一個具體例中，磷酸鹽濃度為25 mM±3.75 mM或約25 mM。在一個具體例中，磷酸鹽濃度為30 mM±4.5 mM或約30 mM。在 一個具體例中，磷酸鹽濃度為35 mM±5.25 mM或約35 mM。在一個具體例中，磷酸鹽濃度為40 mM±6 mM或約40 mM。在一個具體例中，磷酸鹽濃度為45 mM±6.75 mM或約45 mM。在一個具體例中，磷酸鹽濃度為50 mM±7.5 mM或約50 mM。

在一個具體例中，有機共溶劑為含有聚氧乙烯部分的非離子性聚合物。在一些具體例中，有機共溶劑為聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、帕洛沙姆188及聚乙二醇3350中的任一者或多者。在一個特定具體例中，有機共溶劑為聚山梨醇酯20。

在一個具體例中，有機共溶劑濃度為約0.005%±0.00075%至約1%±0.15%”重量對體積”或”w/v”，其中，例如0.1 g/ml=10%而0.01 g/ml=1%。在一個具體例中，有機共溶劑為聚山梨醇酯20，其濃度為0.2%±0.03% w/v，或約0.2% w/v。在另一個具體例中，有機共溶劑為聚山梨醇酯20，其濃度為0.01%±0.0015% w/v或約0.01% w/v。

在一個具體例中，穩定劑為糖、鹽、胺基酸，或其任一或多者的組合。在一個具體例中，糖是選自於由蔗糖、山梨醇、甘露醇、甘油以及海藻糖組成之群；鹽為氯化鈉；而胺基酸為甘胺酸。在一個具體例中，穩定劑包含蔗糖與氯化鈉的組合。

在一個具體例中，蔗糖濃度為約5%至約40%，w/v；且氯化鈉為約50 mM至約250 mM。在一個特定具體例中，調配物包含10%±1.5%、約10%，或10%蔗糖；以及150 mM±22.5 mM、約150 mM，或150 mM氯化鈉。在另一個具體例中，調配物包含20%±3%，約20%或20%蔗糖。

在一個具體例中，調配物的黏度為約1厘泊至約5厘泊。在一個具體例中，調配物的黏度為1.5厘泊±0.23厘泊，或約1.5厘泊或1.5厘泊。

在一個具體例中，調配物的滲透度接近或在生理範圍內。 在一個具體例中，調配物具有約300毫滲透度摩耳/kg(mOsm)至約700 mOsm的滲透度。在一個具體例中，調配物的滲透度為650 mOsm±98 mOsm，約650 mOsm或650 mOsm。

在一個具體例中，至少95%於-80℃下儲存24個月後由該液體醫藥調配物回收而來的抗-Dll4抗體是非團聚且未分解的，如藉由尺寸排除層析所測定。在一個具體例中，至少57%於-80℃下儲存24個月後由該液體醫藥調配物回收而來的抗-Dll4抗體是非鹼性及非酸性形式(亦即，主峰或主要電荷形式或”區2峰”)，如藉由離子交換層析所測定。在一個具體例中，相對於儲存前的抗體結合活性，抗-Dll4平均於-80℃下儲存24個月後維持其結合活性約65%至約135%。

在一個具體例中，至少95%於-30℃下儲存18個月後由該液體醫藥調配物回收而來的抗-Dll4抗體是非團聚且未分解的，如藉由尺寸排除層析所測定。在一個具體例中，至少57%於-30℃下儲存18個月後由該液體醫藥調配物回收而來的抗-Dll4抗體是主要電荷形式，如藉由離子交換層析所測定。在一個具體例中，相對於儲存前的抗體結合活性，抗-Dll4抗體平均於-30℃下儲存18個月後維持其結合活性約65%至約135%。

在一個具體例中，至少95%於-20℃下儲存6個月後由該液體醫藥調配物回收而來的抗-Dll4抗體是非團聚且未分解的，如藉由尺寸排除層析所測定。在一個具體例中，至少60%於-20℃下儲存6個月後由該液體醫藥調配物回收而來的抗-Dll4抗體是主要電荷形式，如藉由離子交換層析所測定。在一個具體例中，相對於儲存前的抗體結合活性，抗-Dll4抗體平均於-20℃下儲存6個月後維持其結合活性約65%至約135%。

在一個具體例中，至少95%於5℃下儲存6個月後由該液體醫藥調配物回收而來的抗-Dll4抗體是非團聚且未分解的，如藉由尺寸 排除層析所測定。在一個具體例中，至少61%於5℃下儲存6個月後由該液體醫藥調配物回收而來的抗-Dll4抗體是主要電荷形式，如藉由離子交換層析所測定。在一個具體例中，相對於儲存前的抗體結合活性，抗-Dll4抗體平均於5℃下儲存6個月後維持其結合活性約65%至約135%。

在一個具體例中，至少97%於25℃下熱壓力6個月後由該液體醫藥調配物回收而來的抗-Dll4抗體是非團聚且未分解的，如藉由尺寸排除層析所測定。在一個具體例中，至少53%於25℃下儲存6個月後由該液體醫藥調配物回收而來的抗-Dll4抗體是主要電荷形式，如藉由離子交換層析所測定。在一個具體例中，相對於儲存前的抗體結合活性，抗-Dll4抗體平均於25℃下儲存6個月後維持其結合活性約65%至約135%。

在一個具體例中，至少94%於45℃下熱壓力28天後由該液體醫藥調配物回收而來的抗-Dll4抗體是非團聚且未分解的，如藉由尺寸排除層析所測定。在一個具體例中，至少45%於45℃下熱壓力28天後由該液體醫藥調配物回收而來的抗-Dll4抗體是主要電荷形式，如藉由離子交換層析所測定。在一個具體例中，相對於施加熱壓力條件前的抗體結合活性，抗-Dll4抗體平均於45℃下熱壓力28天後維持其結合活性約65%至約135%。

在一個具體例中，至少96%於37℃下熱壓力28天後由該液體醫藥調配物回收而來的抗-Dll4抗體是非團聚且未分解的，如藉由尺寸排除層析所測定。在一個具體例中，至少51%於37℃下熱壓力28天後由該液體醫藥調配物會收而來的抗-Dll4抗體是主要電荷形式，如藉由離子交換層析所測定。在一個具體例中，相對於施加熱壓力條件前的抗體結合活性，抗-Dll4抗體平均於37℃下熱壓力28天後維持其結合活性約65%至約135%。

在一個具體例中，至少97%於25℃下熱壓力28天後由該液體醫藥調配物回收而來的抗-Dll4抗體是非團聚且未分解的，如藉由尺 寸排除層析所測定。在一個具體例中，至少57%於25℃下熱壓力28天後由該液體醫藥調配物回收而來的抗-Dll4抗體是主要電荷形式，如藉由離子交換層析所測定。在一個具體例中，相對於施加熱壓力條件前的抗體結合活性，抗-Dll4抗體平均於25℃下熱壓力28天後維持其結合活性約65%至約135%。

在一個具體例中，至少98%於振盪壓力下120分鐘後由該液體醫藥調配物回收而來的抗-Dll4抗體是非團聚且未分解的，如藉由尺寸排除層析所測定。在一個具體例中，至少59%於振盪壓力120分鐘後由該液體醫藥調配物回收而來的抗-Dll4抗體是主要電荷形式，如藉由離子交換層析所測定。在一個具體例中，相對於施加振盪壓力條件前的抗體結合活性，抗-Dll4抗體平均於振盪壓力120分鐘後維持其結合活性約65%至約135%。

在一個具體例中，至少98%於八個冷凍/解凍循環後由該液體醫藥調配物回收而來的抗-Dll4抗體是非團聚且未分解的，如藉由尺寸排除層析所測定。在一個具體例中，至少58%於八個冷凍/解凍循環後由該液體醫藥調配物回收而來的抗-Dll4抗體是主要電荷形式，如藉由離子交換層析所測定。在一個具體例中，相對於施加冷凍/解凍條件前的抗體結合活性，抗-Dll4平均於八個冷凍/解凍循環後維持其結合活性約65%至約135%。

在一個態樣中，提供一種液體醫藥調配物，其包含：(i)20±3 mg/ml至75±11.25 mg/ml特異性地結合至人類Dll4之人類抗體；(ii)5 mM±0.75 mM至50 mM±7.5 mM磷酸鹽；(iii)0.005%±.000075%至1%±0.15%(w/v)聚山梨醇酯20；(iv)5%±0.75%至40%±6%(w/v)蔗糖；以及(v)50 mM±7.5 mM至250 mM±37.5 mM氯化鈉，pH為約5.5至約6.5。此態樣的抗-Dll4抗體含有一重鏈可變區(HCVR)以及一輕鏈可變區(LCVR)，以使得HCVR/LCVR組合含有重鏈與輕鏈互補決定區 (HCDR1-HCDR2-HCDR3/LCDR1-LCDR2-LCDR3)，其分別具有SEQ ID NO：2-3-4/SEQ ID NO：6-7-8的胺基酸序列。在一個特定具體例中，抗-Dll4抗體含有一重鏈可變區(HCVR)以及輕鏈可變區(LCVR)，其分別具有SEQ ID NO：1與SEQ ID NO：5的胺基酸序列(美國專利案第7,488,806號、第7,534,868號及第7,919,593號，與美國專利申請公開案第2011-0150905號的抗體REGN421)。

在一個具體例中，液體調配物含有(i)25±3.75 mg/mL的抗體REGN421；(ii)10±1.5 mM磷酸鹽；(iii)0.2%±0.03%(w/v)聚山梨醇酯20；(iv)10%±1.5%(w/v)蔗糖；以及(v)150 mM±22.5氯化鈉，pH為6.0±0.5。在一個具體例中，調配物於45℃下28天的熱壓力後，94%的抗體維持天然構形，45%的抗體為主要電荷形式，且98%的抗體維持其結合活性。在另一個具體例中，調配物於37℃下28天的熱壓力後，97%的抗體為天然的及59%的抗體為主要電荷形式，且約100%的抗體維持其結合活性。在一個具體例中，調配物於25℃下28天的熱壓力後，97%的抗體為天然的及57%的抗體為主要電荷形式，且約100%的抗體維持其結合活性。在一個具體調配物的具體例中，調配物於八個冷凍接著解凍的循環後，98%的抗體為天然的及59%的抗體為主要電荷形式，且約100%的抗體維持其結合活性。在本具體調配物的一個具體例中，於120分鐘振盪壓力後，98%的抗體為天然的及58%的抗體為主要電荷形式，且至少約98%的抗體維持其效力。

在一個態樣中，在一容器中提供任一前述態樣的液體醫藥調配物。在一個具體例中，容器為聚碳酸酯小瓶。在另一個具體例中，容器為玻璃小瓶，其在一些具體例中為第1型硼矽酸玻璃小瓶，具有塗覆氟碳化物的丁基橡膠瓶塞。在又另一個具體例中，容器為袋，諸如靜脈內滴注(IV)袋，其在一些具體例中是由聚氯乙烯或聚烯烴製成。在另一個具體例中，容器為注射裝置，諸如微輸注器或注射器。

在一個態樣中，提供一種含有下列的醫藥調配物：(a)25±3.75 mg/mL的抗-Ang-2抗體、(b)10 mM±1.5 mM磷酸鹽，pH 6.0±0.5、(c)0.2%±0.03%聚山梨醇酯20、(d)10% w/v±1.5%蔗糖，以及(e)150 mM±22.5 mM氯化鈉，其中(a)該抗體含有SEQ ID NO：1的HCVD以及SEQ ID NO：5的LCVD、(b)抗體具有約146 kDa、約147 kDa或約150 kDa的分子量、(c)約82%至約87%的抗體含經岩藻醣基化的寡醣鏈，及(d)抗體的重鏈缺少C端離胺酸。

在一個具體例中，提供一種由下列組成的醫藥調配物：(a)25±3.75 mg/mL的抗-Ang-2抗體、(b)10 mM±1.5 mM磷酸鹽，pH 6.0±0.5、(c)0.2%±0.03%聚山梨醇酯20、(d)10% w/v±1.5%蔗糖，以及(e)150 mM±22.5 mM氯化鈉，其中(a)該抗體含有SEQ ID NO：1的HCVD以及SEQ ID NO：5的LCVD、(b)抗體具有約146 kDa、約147 kDa或約150 kDa的分子量、(c)約82%至約87%的抗體含經岩藻醣基化的寡醣鏈，及(d)抗體的重鏈缺少C端離胺酸。

在一個態樣中，提供一種套組，其含有前述態樣中任一者之醫藥組合物、容器以及使用說明。在一個具體例中，容器為預充填注射器。在一個具體例中，容器為硼矽酸小瓶，配有塗覆FLUROTEC的4023/50的橡膠瓶塞。

本發明的其他具體例將透過參閱之後的詳細說明而清楚明瞭。

說明

在說明本發明前，應了解，本發明不受限於所述的特定方法及實驗條件，因為該等方法以及條件可能會改變。亦應了解，本文所用術語僅是供說明特定具體例之用，而不意欲為限制性的，因為本發明的範圍將僅受到隨附申請專利範圍所囿限。

除非另有定義，否則本文所用全部技術與科學術語和本發明所屬技藝中具有通常技藝者一般所理解的意思相同。如本文所用，術語"約"，當提及特定引用的數值或數值範圍時，表示該數值可相對於引用的數值改變不超過5%。例如，如本文所用，詞句"約100"包括95與105，以及其間的所有數值(例如95.0、95.01、95.02、95.03、95.04...104.96、104.97、104.98、104.99、105.00)。

儘管任何與本文所述方法和材料類似或等效者可用於實施或測試本發明，現將說明較佳方法與材料。

醫藥調配物

如本文所用，詞句"醫藥調配物"意指至少一種活性成分(例如，小分子、大分子、化合物等，其能夠在人類或非人類動物體內展現生物效用)以及至少一種非活性成分(其與活性成分或一或多種其他非活性成分組合時，適於治療性投藥給人類或非人類動物)的組合。除非另有具體指明，否則術語"調配物"，如本文所用，表示"醫藥調配物"。本發明提供包含至少一種治療性多肽的醫藥調配物。依據本發明的某些具體例，該治療性多肽為抗體或其抗原-結合片段，其特異性地結合至人類delta樣配體-4(Dll4)蛋白。更具體而言，本發明包括含有下列的醫藥調配物：(i)特異性地結合至人類Dll4的人類抗體；(ii)磷酸鹽緩衝劑；(iii)為非離子性界面活性劑之有機共溶劑；以及(iv)為碳水化合物或無機鹽，或碳水化合物與無機鹽的組合之穩定劑。本發明所包括的特定例示性組分與調配物詳述於下文。

特異性地結合至Dll4的抗體

本發明醫藥調配物可包含人類抗體或其抗原-結合片段，其特異性地結合至人類Dll4。如本文所用，術語”Dll4”表示人類delta樣配體 4，其為Notch的血管特異性配體。Dll4-Notch信號傳遞路徑一般理解為藉由阻斷血管分支並促進血管成熟來調控血管生成(Dll4作為分支的負向調節劑；在Sainsin and Harris,Trends in Molecular Medicine,Vol.13(9)：389-395,Sep.2007中回顧)。拮抗Dll4-Notch路徑的藥劑已顯示會藉由”引起過度但非功能性血管生成”抑制腫瘤生長速率(參見Sainsin at 389)。Dll4受VEGF向上調節並咸信會促進功能性新血管的組織化發展。例示性人類Dll4胺基酸序列描述於SEQ ID NO：9中。針對人類Dll4的抗體描述於專利案第7,488,806號、第7,534,868號及第7,919,593號中。

術語"抗體"，如本文所用，通常欲意指免疫球蛋白分子，其含有4個多狀鏈：藉由雙硫鍵交互連結的2個重(H)鏈以及2個輕(L)鏈，及其多聚體(例如IgM)；然而，僅由單獨重鏈所構成的免疫球蛋白分子(亦即缺乏輕鏈)亦含括在術語"抗體"的定義內。各個重鏈含有一個重鏈可變區(此處縮寫為HCVR或V_H)以及一個重鏈恆定區。重鏈恆定區含有三個結構域，CH1、CH2以及CH3。各個輕鏈含有一個輕鏈可變區(此處縮寫為LCVR或V_L)以及一個輕鏈恆定區。輕鏈恆定區含有一個結構域(CL1)。V_H與V_L區可進一步分為具有超變異性的區域(命名為互補決定區(complementarity determining regions,CDR))，散佈有較為守恆的區域(命名為骨架區(FR))。各個V_H與V_L由三個CDR以及四個FR所構成，以下列順序從胺基端往羧基端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。

除非另有特別指明，否則術語"抗體"，如本文所用，應理解為含括完整抗體分子以及其抗原-結合片段。術語抗體之"抗原-結合部分"或"抗原-結合片段"(或單單"抗體部分"或"抗體片段")，如本文所用，意指抗體的一或多個片段，其保有特異性地結合至人類Dll4或其抗原決定位的能力。

術語"分離抗體"，如本文所用，欲意指基本上不含具有不 同抗原特異性之其他抗體的抗體(例如，一個特異性地結合人類Dll4的分離抗體基本上不含特異性地結合人類Dll4以外之抗原的抗體)，其中要注意的例外為一方面特異性地結合Dll4，而另一方面結合另一抗原決定位的雙特異性(或多特異性)抗體。

術語"特異性地結合"或類似者，意指抗體或其抗原-結合片段與抗原形成在生理條件下相對穩定的複合物。特異性地結合的特徵在於解離常數為至少約1x10^-6 M或更高。用於測定兩個分子是否特異性地結合的方法為技藝中已知的，且包括例如平衡透析、表面電漿共振及類似方法。但是，特異性地結合人類Dll4的分離抗體與其他抗原(諸如其他物種的Dll4分子(同源物))具有交叉反應性。在本發明的上下文中，結合至人類Dll4以及一或多種其他抗原的多特異性(例如雙特異性)抗體被視為"特異性地結合"人類Dll4。

可含括在本發明醫藥調配物中的例示性抗-人類Dll4抗體述於美國專利案第7,488,806號、第7,534,868號、第7,919,593號及美國專利申請案第2011-0150905號。

依據本發明的某些具體例，抗-人類Dll4抗體為人類IgG1，其含有重鏈可變區(為IGHV3-33.01亞型)以及輕鏈可變區(為IGKV3-11.01亞型)(參見Barbie and Lefranc,The Human Immunoglobulin Kappa Variable(IGKV)Genes and Joining(IGKJ)Segments,Exp.Clin.Immunogenet.1998；15：171-183；與Scaviner,D.et al.,Protein Displays of the Human Immunoglobulin Heavy,Kappa and Lambda Variable and Joining Regions,Exp.Clin.Immunogenet.,1999；16：234-240)。本文中出現的生殖系IGHV3-33與IGKV3-11序列，以及胺基酸位置分派數與國際免疫遺傳學(IMGT)資訊系統一致，如Lefranc,M.-P.,et al.,IMGT®,the international ImMunoGeneTics information system®,Nucl.Acids Res,37,D1006-D1012(2009)中所述。

在一些具體例中，抗-人類Dll4抗體在一或多個骨架區相對於正統重鏈可變區含有一或多個胺基酸置換，合理預期造成抗體整個露出表面的電荷分布改變，並因此影響其與周圍溶劑和賦形劑的交互作用。在一些具體例中，胺基酸置換包含分別在IGHV3-33的IMGT位置54、86及90處絲胺酸置換丙胺酸、甲硫胺酸置換蘇胺酸，及/或麩胺酸置換麩醯胺酸。

在一些具體例中，抗-人類Dll4抗體在一或多個CDR中相對於正統輕鏈可變區含有一或多個胺基酸置換，合理預期造成抗體整個露出表面的電荷分布改變，並因此影響其與溶劑環境的交互作用。在一些具體例中，胺基酸置換包含在IGKV3-11的IMGT位置106處組胺酸置換麩醯胺酸。

依據本發明的某些具體例，抗-人類Dll4抗體或其抗原-結合片段包含SEQ ID NO：2的重鏈互補決定區(HCDR)1、SEQ ID NO：3之HCDR2及SEQ ID NO：4之HCDR3。在某些具體例中，抗-人類Dll4抗體或其抗原-結合片段包含SEQ ID NO：1的HCVD。

依據本發明的某些具體例，抗-人類Dll4抗體或其抗原-結合片段包含SEQ ID NO：6的輕(κ)鏈互補決定區(LCDR)1、SEQ ID NO：7之LCDR2及SEQ ID NO：8之LCDR3。在某些具體例中，抗-人類Dll4抗體或其抗原-結合片段包含SEQ ID NO：5的LCVD。

本文實施例中所用非限制性例示性抗體意指REGN421，如在US 7,488,806、US 7,534,868、US 7,919,593及US 2011-0150905中。該抗體包含HCVR/LCVR胺基酸序列對，其具有SEQ ID NO：1/5，及由SEQ ID NO：2-3-4/SEQ ID NO：6-7-8所表示的HCDR1-HCDR2-HCDR3/LCDR1-LCDR2-LCDR3結構域。

本發明醫藥調配物中所包含的抗體或其抗原-結合片段之數量可隨著調配物所要的特定特性以及特定環境與要使用調配物之目的 而改變。在某些具體例中，醫藥調配物為液體調配物，其可含有20 mg/mL±3 mg/mL至75 mg/mL±11.25 mg/mL抗體；25±3.75 mg/mL至70±10.5 mg/mL抗體；30±4.5 mg/mL至65±9.75 mg/mL抗體；35±5.25 mg/mL至60±9 mg/mL抗體；40±6 mg/mL至55±8.25 mg/mL抗體；45±6.75 mg/mL至50±7.5 mg/mL抗體；25 mg/mL±3.75 mg/mL；約25 mg/mL；25 mg/mL；50 mg/mL±7.5 mg/mL；約50 mg/mL；或50 mg/mL特異性地結合至人類Dll4的抗體或其抗原-結合片段。

賦形劑與pH

本發明醫藥調配物包含一或多種賦形劑。術語"賦形劑"，如本文所用，意指任一種被添加至調配物以提供所要稠度、黏度或穩定效用的非治療劑。

在某些具體例中，本發明醫藥調配物包含至少一種在粗略操作或振盪(諸如渦捲)的條件下呈穩定人類Dll4抗體之類型與數量的有機共溶劑。在一些具體例中，"穩定"表示在粗略操作過程中維持Dll4抗體的至95%呈其天然狀態(亦即未斷裂或團聚)，粗略操作為渦捲抗體-有機共溶劑的溶液歷時約60分鐘或約120分鐘。

在某些具體例中，有機共溶劑為非離子性界面活性劑，諸如烷基聚(氧化乙烯)。可包括在本發明調配物中的特定非離子性界面活性劑包括，例如聚山梨醇酯，諸如聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯28、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯81及聚山梨醇酯85；帕洛沙姆，諸如帕洛沙姆181、帕洛沙姆188、帕洛沙姆407；或聚乙二醇(PEG)。聚山梨醇酯20亦已知為TWEEN 20、山梨醇單月桂酸酯及聚氧乙烯去水山梨醇單月桂酯。帕洛沙姆188亦已知為普朗尼克(PLURONIC)F68。

本發明醫藥調配物中所含之非離子性界面活性劑數量可 隨調配物所需的特定特性，以及要使用調配物之特定環境與目的而改變。在某些具體例中，調配物可含有0.01%±0.0015%至1%±0.15%界面活性劑。例如，本發明調配物可含有約0.0085%；約0.01%；約0.02%；約0.03%；約0.04%；約0.05%；約0.06%；約0.07%；約0.08%；約0.09%；約0.1%；約0.11%；約0.12%；約0.13%；約0.14%；約0.15%；約0.16%；約0.17%；約0.18%；約0.19%；約0.20%；約0.21%；約0.22%；約0.23%；約0.24%；約0.25%；約0.3%；約0.4%；約0.5%；約0.6%；約0.7%；約0.8%；約0.9%、約1%；約1.1%；約1.15%：或約1.2%聚山梨醇酯20或帕洛沙姆188。

本發明之醫藥調配物亦可包含一或多種呈在熱壓力條件下穩定人類Dll4抗體之類型及數量的穩定劑。在一些具體例中，"穩定"表示當含有抗體及熱穩定劑之溶液在約45℃下持續至高約28天時，超過約94%的抗體維持其天然構形。在一些具體例中，"穩定"表示當含有抗體及熱穩定劑之溶液在約37℃下持續至高約28天時，超過約96%的抗體維持其天然構形。如本文所用，"天然"表示依據尺寸排除的主要抗體形式，其通常為抗體的完整單體。

在某些具體例中，熱穩定劑為糖或糖醇，選自於蔗糖、山梨醇、甘油、海藻糖及甘露醇或其任何組合，調配物中所含數量可隨著特定環境及要使用調配物之目的而改變。在某些具體例中，調配物可含有約5%至約40%糖或糖醇；約1%至約20%糖或糖醇；約5%至約15%糖或糖醇；約7.5%至約12.5%糖或糖醇；約10%糖或糖醇；約10%±1.5%糖或糖醇；或10%糖或糖醇。例如，本發明醫藥調配物可含有4%±0.6%；5%±0.75%；6%±0.9%；7%±1.05%；8%±1.2%；9%±1.35%；10%±1.5%；11%±1.65%；12%±1.8%；13%±1.95%；或約14%±2.1%糖或糖醇(例如，蔗糖、海藻糖或甘露醇)。

本發明之醫藥調配物亦可含有緩衝劑或緩衝系統，其作為 維持穩定pH並有助於穩定人類Dll4抗體。在一些具體例中，"穩定"表示當含有抗體及緩衝劑的溶液在45℃下維持至高約28天時，至少94%抗體呈其自然構型，如同藉由尺寸排除層析所測定。"天然"或"天然構形"表示未團聚或分解的抗體溶離份。這通常是藉由測量抗體實體的相對大小之分析(諸如尺寸排除層析分析)來決定。非團聚及非分解抗體在與天然抗體相同的溶離份處洗脫出來，且通常是主要溶離份。團聚抗體在表示尺寸大於天然抗體的溶離份處洗脫出來。分解抗體在表示尺寸小於天然抗體的溶離份處洗脫出來。

在一些具體例中，"穩定"表示當含有抗體及緩衝劑的溶液在45℃下維持至高約28天時，至少45%抗體呈其主要電荷形式，如同藉由陽離子交換層析所測定。"主要電荷"或"主要電荷形式"表示抗體在主峰中從離子交換樹脂洗脫出來的溶離份，其通常一側為更"鹼性"峰而另一側為更"酸性"峰。

本發明醫藥調配物可具有約5.5至約6.5的pH。例如，本發明調配物具有約5.5；約5.6；約5.7；約5.8；約5.9；約6.0；約6.1；約6.2；約6.3；約6.4；或約6.5的pH。在一些具體例中，pH為6.0±0.5；6.0±0.4；6.0±0.3；6.0±0.2；6.0±0.1；約6.0；或6.0。

在一些具體例中，緩衝劑或緩衝系統包含至少一種具有完全含括pH 5.5-7.4或pH 5.5-7.4之一部分的緩衝範圍，諸如，例如具有可用緩衝範圍pH 4.8至pH 8.8的緩衝劑。在一個具體例中，緩衝劑具有約7.21的pKa。在某些具體例中，緩衝劑具有磷酸鹽緩衝劑。在某些具體例中，磷酸鹽以5 mM±0.75 mM至15 mM±2.25 mM；6 mM±0.9 mM至14 mM±2.1 mM；7 mM±1.05 mM至13 mM±1.95 mM；8 mM±1.2 mM至12 mM±1.8 mM；9 mM±1.35 mM至11 mM±1.65 mM；10 mM±1.5 mM；或約10 mM的濃度存在。在某些具體例中，緩衝系統包含10 mM±1.5 mM，pH為6.0±0.5的磷酸鹽。

例示性調配物

依據本發明的一個態樣，液體調配物具有低黏度(例如少於10厘泊或約1.5厘泊)且滲透度介於600至700 mOsm或約650 mOsm)，且含有：(i)25 mg/mL±3.75 mg/mL，或50 mg/mL±7.5 mg/mL特異性地結合至人類Dll4的人類抗體(例如REGN421)；(ii)緩衝系統，在約pH 6.0±0.5下緩衝；(iii)包含糖及鹽的熱穩定劑，其作為；以及(iv)有機共溶劑。

依據一個具體例，醫藥調配物包含：(i)20±3 mg/mL至60±9 mg/mL特異性地結合至人類Dll4的人類IgG1抗體，且其含有經取代IGHV3-33型重鏈可變區及經取代IGKV3-11型輕鏈可變區；(ii)磷酸鹽緩衝劑，其在pH 6.0±0.5緩衝；(iii)蔗糖與氯化鈉；及(iv)非離子性清潔劑，諸如聚山梨醇酯。

依據一個具體例，醫藥調配物包含：(i)25 mg/mL±3.75 mg/mL特異性地結合至人類Dll4的人類IgG1抗體，且其具有SEQ ID NO：2之HCDR1、SEQ ID NO：3之HCDR2、SEQ ID NO：4之HCDR3、SEQ ID NO：6之LCDR1、SEQ ID NO：7之LCDR2及SEQ ID NO：8之LCDR3；(i)10 mM±1.5 mM磷酸鹽，pH 6.0±0.5；(iii)10%±1.5%蔗糖；(iv)150 mM±22.5 mM氯化鈉；以及(v)0.2%±0.03%聚山梨醇酯20。

依據一個具體例，醫藥調配物包含：(i)50 mg/mL±7.5 mg/mL特異性地結合至人類Dll4的人類IgG1抗體，且其具有SEQ ID NO：2之HCDR1、SEQ ID NO：3之HCDR2、SEQ ID NO：4之HCDR3、SEQ ID NO：6之LCDR1、SEQ ID NO：7之LCDR2及SEQ ID NO：8之LCDR3；(i)10 mM±1.5 mM磷酸鹽，pH 6.0±0.5；(iii)10%±1.5%蔗糖；(iv)150 mM±22.5 mM氯化鈉；以及(v)0.2%±0.03%聚山梨醇酯20。

依據一個具體例，醫藥調配物包含：(i)25 mg/mL±3.75 mg/mL特異性地結合至人類Dll4的人類IgG1抗體，且其具有SEQ ID NO： 1之重鏈可變域，與SEQ ID NO：5之輕鏈可變域，濃度為；(i)10 mM±1.5 mM磷酸鹽，pH 6.0±0.5；(iii)10%±1.5%蔗糖；(iv)150 mM±22.5 mM氯化鈉；以及(v)0.2%±0.03%聚山梨醇酯20。

依據一個具體例，醫藥調配物包含：(i)50 mg/mL±7.5 mg/mL特異性地結合至人類Dll4的人類IgG1抗體，且其具有SEQ ID NO：1之重鏈可變域，與SEQ ID NO：5之輕鏈可變域；(ii)10 mM±1.5 mM磷酸鹽，pH 6.0±0.5；(iii)10%±1.5%蔗糖；(iv)150 mM±22.5 mM氯化鈉；以及(v)0.2%±0.03%聚山梨醇酯20。

本發明所含括的醫藥調配物之其他非限制性實例在本文他處說明，包括下文所示工作例。

醫藥調配物的穩定性與黏度

本發明醫藥調配物通常表現出高度穩定性。術語"穩定"，如本文所用，在提及醫藥調配物時，表示醫藥調配物中的抗體在儲存於特定條件下之後保有可接受程度之化學結構或生物功能。調配物可以是穩定的，儘管其中所含抗體在儲存特定時間總數之後並未維持其100%化學結構或生物功能。在某些情況下，在儲存特定時間總數之後維持至少約90%、95%、96%、97%、98%或99%的抗體結構或功能被認為是"穩定"。

穩定性尤其可於特定溫度下儲存特定時間總數之後藉由測定調配物中剩餘之天然抗體百分率來決定。天然抗體的百分率尤其可以藉由尺寸排除層析(例如尺寸排除高效液相層析[SE-HPLC])來測定，天然表示非團聚者及非分解者。"可接受程度的穩定性"，當這個片語用於本文中時，表示至少90%的天然形式抗體可於特定溫度下儲存特定時間總數之後在調配物中偵測到。在某些具體例中，至少約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的天然形式抗體可於特定溫度下儲存特定時間總數之後在調配物中偵測到。在其後測量穩定性之特定 時間總數可為至少14天、至少28天、至少1個月、至少2個月、至少3個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少7個月、至少8個月、至少9個月、至少10個月、至少11個月、至少12個月、至少18個月、至少24個月或更久。當評估穩定性時，醫藥調配物儲存的特定溫度可為下列的任一溫度：約-80℃至約45℃，例如儲存於約-80℃下、約-30℃下、約-20℃下、約0℃下、約4℃-8℃下、約5℃下。熱壓力包括，例如維持調配物在約25℃下、約35℃下、約37℃下或約45℃下歷時約14天或約28天。

例如，若在儲存於5℃下6個月之後，藉由SE-HPLC偵測到至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、98.5%、99%或99.5%天然抗體，則醫藥調配物可被視為是穩定的。若在儲存於25℃下6個月之後，藉由SE-HPLC偵測到至少97%、97.5%、98%、98.5%、99%或99.5%天然抗體，則醫藥調配物亦可被視為是穩定的。若在儲存於37℃下28天之後，藉由SE-HPLC偵測到至少96%、96.5%、97%、97.5%、98%、98.5%、99%或99.5%天然抗體，則醫藥調配物亦可被視為是穩定的。若在儲存於45℃下28天之後，藉由SE-HPLC偵測到至少94%、95%、96%、97%、98%或99%天然抗體，則醫藥調配物亦可被視為是穩定的。若在儲存於-20℃下6個月之後，藉由SE-HPLC偵測到超過約96%、96.5%、97%、97.5%、98%、98.5%、99%或99.5%天然抗體，則醫藥調配物亦可被視為是穩定的。若在儲存於-30℃下18個月之後，藉由SE-HPLC偵測到至少99%或99.5%天然抗體，則醫藥調配物亦可被視為是穩定的。在儲存於-80℃下6個月之後，藉由SE-HPLC偵測到至少99%或99.5%天然抗體，則醫藥調配物亦可被視為是穩定的。

穩定性尤其可藉由測定抗體在離子交換期間相對於總合併峰面積移至抗體主要溶離份("主要電荷部分)的百分率來測量，其中穩定性與呈主要電荷形式之抗體溶離份呈正比。儘管不希望受到理論所囿限， 抗體之去醯胺化可使得抗體變為更加帶負電並因而相對於非去醯胺化抗體更為酸性(參見，例如Robinson,N.,Protein Deamidation,PNAS,April 16,2002,99(8)：5283-5288)。"可接受程度的穩定性"，當這個片語用於本文中時，表示於特定溫度下儲存特定時間總數之後在調配物中偵測到至少53%抗體呈主要電荷形式。在某些具體例中，可接受程度的穩定性表示於特定溫度下儲存特定時間總數，或在熱、冷凍/解凍或振盪壓力下至少約53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%抗體可偵測到呈主要電荷形式。其後測量穩定性之特定時間總數可為至少2週、至少28天、至少1個月、至少2個月、至少3個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少7個月、至少8個月、至少9個月、至少10個月、至少11個月、至少12個月、至少18個月、至少24個月或更久。當評估穩定性時，儲存醫藥調配物的溫度可為約-80℃至約45℃的任一溫度，例如儲存於約-80℃下、約-30℃下、約-20℃下、約0℃下、約4℃-8℃下、約5℃下、約25℃下、約37℃下或約45℃下。例如，若在儲存於-80℃、-30℃或-20℃下3個月之後，不少於約57%、58%、59%、60%或61%抗體呈主要電荷形式，則醫藥調配物可被視為是穩定的。若在儲存於5℃下6個月之後，不少於約59%、59.1%、59.2%、59.3%、59.4%、59.5%、59.6%、59.7%、59.8%、59.9%、60%、60.1%、60.2%、60.3%、60.4%、60.5%、60.6%、60.7%、60.8%、60.9%、61%或61.1%抗體呈主要電荷形式，則醫藥調配物亦可被視為是穩定的。若在儲存於25℃下6個月後，不少於約53%抗體呈主要電荷形式，則醫藥調配物亦可被視為是穩定的。若在儲存於37℃下28天之後，不少於約50%、50.5%、51%或51.5%抗體呈主要電荷形式，則醫藥調配物亦可被視為是穩定的。若在儲存於45℃下28天之後，偵測到不少於約45%、45.1%、45.2%、45.3%、45.4%、45.5%、45.6%、45.7%、45.8%、45.9%或50%抗體呈主要電荷形式，則醫藥調配物亦可被視為是穩定的。

測量抗體對其目標之結合親和力亦可用於評估穩定性。例如，若在儲存於例如-80℃、-30℃、-20℃、5℃、25℃、37℃、45℃等溫度下特定時間總數(例如14天至24個月)之後，調配物中所含抗-Dll4抗體維持以測量為儲存前該抗體結合親和力的至少50%到至高約150%效力，本發明調配物可被視為是穩定的。結合親和力可藉由，例如ELISA或電漿共振來測定。生物活性可藉由Dll4活性分析(諸如，例如使表現Dll4的細胞與包含抗Dll4抗體之調配物接觸)來測定。抗體結合至此一細胞可直接藉由諸如，例如經由FACS分析來測定。或者，Dll4/Notch訊號傳遞路徑的下游活性可在抗體存在時測量，並且與抗體不存在時Dll4/Notch訊號傳遞路徑之活性相比較。在一些具體例中，Dll4對細胞來說是內生性的。在其他具體例中，Dll4在細胞中異位(異源)地表現。

用於評估調配物中的抗體穩定性的其他方法在下面所示實例中證實。

容器及投藥方法

本發明醫藥調配物可包含在任一種適於儲存或投與藥品及其他治療性組成物的容器中。例如，醫藥調配物可包含在密封與經滅菌之具有預定體積的塑膠或玻璃容器中，例如小瓶、安瓿、注射器、藥匣、瓶或IV袋中。不同類型的小瓶可用於容納本發明調配物，包括，例如透明與不透明(例如琥珀色)玻璃或塑膠小瓶。同樣地，任何類型的注射器可用於容納或投與本發明醫藥調配物。

本發明醫藥調配物可包含在"標準鎢"注射器或"低鎢"注射器中。如習於本技藝者所知，製造玻璃注射器的製程通常涉及使用高鎢桿(其作用為刺穿玻璃)，從而由其產生一個液體可被抽出並排出注射器的孔洞。此製程使微量鎢沉積在注射器的內表面上。之後的洗滌與其他加工步驟可用於降低鎢在注射器中的數量。如本文所用，術語"標準鎢"表示注射 器含有超過或等於500 ppb的鎢。術語"低鎢"表示注射器含有少於500 ppb的鎢。例如，依據本發明，低鎢注射器可含有少於約490、480、470、460、450、440、430、420、410、390、350、300、250、200、150、100、90、80、70、60、50、40、30、20、10或更低ppb的鎢。

注射器中所使用的橡膠塞蓋，以及用於密封小瓶開口的橡膠瓶蓋可經塗層以防止注射器或小瓶的醫藥內容物汙染，或維持其穩定性。因此，依據某些具體例，本發明醫藥調配物可包含在具有經塗覆塞蓋之注射器內，或在以經塗覆橡膠瓶蓋密封之小瓶內。例如，塞蓋或瓶蓋可塗覆有氟碳化物膜。適用於與含有本發明醫藥調配物之小瓶及注射器一起使用的經塗覆塞蓋或瓶蓋的實例述於，例如美國專利第4,997,423號；第5,908,686號；第6,286,699號；第6,645,635號及第7,226,554號。可用於本發明上下文內的特定例示性經塗覆橡膠瓶蓋與塞蓋可在商業上以商標名"FluroTec®"由West Pharmaceutical Services,Inc.(Lionville,PA)取得。FluroTec®是一種用於使藥品盡可能不附著於橡膠表面或防止藥品附著於橡膠表面的氟碳化物塗層。

依據本發明的某些具體例，醫藥調配物可包含於具有經氟碳化物塗覆之塞蓋之低鎢注射器內。

醫藥調配物可以藉由非經腸途徑投藥給患者，諸如注射(例如皮下、靜脈內、肌肉內、腹膜內等)，或經皮、黏膜、鼻、肺或口服投藥。許多可重複使用筆型或自動注射遞送裝置可用於皮下遞送本發明之醫藥調配物。實例包括，但不限於AUTOPEN^TM(Owen Mumford,Inc.,Woodstock,UK)、DISETRONIC^TM pen(Disetronic Medical Systems,Bergdorf,Switzerland)、HUMALOG MIX 75/25^TM pen、HUMALOG^TM pen、HUMALIN 70/30^TM pen(Eli Lilly and Co.,Indianapolis,IN)、NOVOPEN^TM I、II與III(Novo Nordisk,Copenhagen,Denmark)、NOVOPEN JUNIOR^TM(Novo Nordisk,Copenhagen,Denmark)、BD^TM pen(Becton Dickinson, Franklin Lakes,NJ)、OPTIPEN^TM、OPTIPEN PRO^TM、OPTIPEN STARLET^TM及OPTICLIK^TM(sanofi-aventis,Frankfurt,Germany)。應用在皮下遞送本發明醫藥組成物之拋棄式筆型或自動注射遞送裝置的實例包括，但不限於SOLOSTAR^TM pen(sanofi-aventis)、FLEXPEN^TM(Novo Nordisk)以及KWIKPEN^TM(Eli Lilly)、SURECLICK^TM Autoinjector(Amgen,Thousand Oaks,CA)、PENLET^TM(Haselmeier,Stuttgart,Germany)、EPIPEN(Dey,L.P.)與HUMIRA^TM Pen(Abbott Labs,Abbott Park,IL)。

在本文中亦預期使用微輸注器遞送本發明醫藥調配物。如本文所用，術語"微輸注器"表示被設計成在一段長時間內(例如約10、15、20、25、30或更多分鐘)緩慢地投與大量(例如多達約2.5 mL或更多)治療性調配物的皮下遞送裝置。參見，例如U.S.6,629,949；US 6,659,982以及Meehan et al.,J.Controlled Release 46：107-116(1996)。微輸注器尤其可用於遞送大劑量的治療性蛋白(具有高濃度，例如，約100、125、150、175、200或更多mg/mL)或黏性溶液。

在一個具體例中，醫藥調配物是經IV滴注投與，使得調配物稀釋於含有生理學上可接受溶液中的IV袋中。在一個具體例中，醫藥調配物在靜脈內輸注袋的複合無菌製劑中，使得單劑量藥品稀釋至100 mL、250 mL(或適於靜脈內滴注投遞的其他可行量)的生理緩衝液(例如0.9%食鹽水)中。在一些具體例中，輸注袋是由聚氯乙烯(例如VIAFLEX,Baxter,Deerfield,Illinois)製成。在一些具體例中，輸注袋是由聚烯烴(EXCEL IV Bags.Braun Medical Inc.,Bethlechem,Pennsylvania)製成。

醫藥調配物的治療用途

本發明之醫藥調配物尤其可用於治療、預防或改善與Dll4活性有關的任何疾病或病症，包括由Dll4或Notch訊號傳遞路徑所媒介的疾病或病症。可經由投與本發明醫藥調配物而治療或預防的例示性、非 限制性疾病與病症包括各種涉及血管新生的疾病，而血管新生為新血管形成的生物過程。異常的血管新生與數種疾病病況有關，包括(例如)增生性視網膜病變、類風溼性關節炎與牛皮癬。另外，已證實血管新生對於腫瘤生長與維持至關重要。

實施例

提出下列實施例俾以將如何製造與使用本發明方法和組成物之完整揭示內容以及發明說明提供給技藝中具有通常技術者，且不欲限制發明人就其發明所視為的範疇。已盡力確保所用數字的正確性(例如數量、溫度等)，但可能產生某些實驗誤差與偏差。除非另有指明，否則份為以莫耳計的份，分子量為平均分子量，濃度百分比表示以公克計的溶質質量除以以毫升計的溶液體積成以100%(例如，10%蔗糖表示0.1公克蔗糖/毫升溶液)，溫度為攝氏度，而壓力為大氣壓或近乎大氣壓。

初始調配物發展行動涉及篩選抗-Dll4抗體之液體與凍乾調配物中的有機共溶劑、熱穩定劑與緩衝劑，以鑑別與蛋白質相容且增強其穩定性，同時維持相近的生理滲透度與低黏度供靜脈內和皮下注射用的賦形劑。亦檢驗緩衝條件以測定最高蛋白質穩定性的最佳pH。

實施例1：例示性抗-Dll4調配物

調配物發展行動包括篩選抗-Dll4抗體之液體調配物中的緩衝劑、有機共溶劑與熱穩定劑，以鑑別會增強蛋白質穩定性的賦形劑。亦檢驗緩衝條件以決定最高蛋白質穩定性的最佳pH。由此等研究所產生的結果用於發展穩定的臨床用液體調配物。抗Dll4(例如REGN421)被調配 成25±3.75 mg/ml或50±7.5 mg/ml。在一個具體例中，抗-Dll4抗體被調配於10±1.5 mM磷酸鹽(pH 6.0±0.5)、0.2%±0.03%聚山梨醇酯20、10%±1.5%蔗糖，及150 mM±22.5 mM氯化鈉中。磷酸二氫鹽與磷酸氫二鹽組合的磷酸鹽緩衝劑是因為其對於抗-Dll4穩定性與低團聚率的最佳pH下的緩衝力而選定。觀察到抗-Dll4抗體REGN421具有最佳穩定性與最低團聚率，並且在pH 6.0下形成電荷變體。選定聚山梨醇酯20作為振盪穩定劑，其在抗體振盪或以其他方式操作時降低團聚及沉澱率。選定被觀察到會降低抗體在溶液中的團聚率的蔗糖作為熱穩定劑的一個組分。選定被觀察到會降低抗體在溶液中形成帶電物質的氯化鈉作為熱穩定劑的另一個組分。

實施例2：壓力穩定性研究方法學

在發展研究中使用光學密度(405 nm)與逆相高效液相層析(RP-HPLC)以評估調配抗-Dll4抗體的物理穩定性。物理穩定性定義為抗體在溶液中的可溶形式的回收率。喪失抗體可能是因為沉澱或吸附。可以藉由視覺觀察或在405 nm下的光學密度(OD)測量(濁度測量)來偵測顆粒形成，其中OD增加表示濁度因為形成顆粒而增加。藉由視覺或藉由OD測量所測定的顆粒形成表示樣品無法維持穩定性。藉由RP-HPLC或藉由UV分光光度法在280 nm下測量抗-Dll4抗體的回收率。相比於使用限定濃度之抗體所產生的標準曲線，由洗脫抗體峰的面積來測定各測試樣品的濃度。

尺寸排除HPLC(SE-HPLC)用來評估抗-Dll4抗體的純度並提供在分子大小上與主體抗-Dll4抗體有所不同之抗體團聚物、片段或雜質相對數量的測量法。經純化抗-Dll4抗體通常如小團聚物峰與大天然雙體峰，接著小分子量峰被洗脫出。這個方法採用高解析度矽基尺寸排除管柱及磷酸鹽-氯化鈉緩衝劑。記錄在215 nm下的吸光度並積分供純度測定 之用。抗-Dll4抗體依據SE-HPLC的純度規定必須是主峰面積90.0%總峰面積。關於高分子量峰面積與低分子量峰面積的總峰面積百分率報導於表格中。

藉由陽離子交換層析使用Dionex的弱陽離子交換管柱(PROPAC® WCX-10,4 x 250 mm)在一段窄的鹽梯度中於pH 6.0的磷酸鹽緩衝劑(40 mM至120 mM NaCl在44分鐘內，以1mL/分)中進行陽離子交換層析來分析抗體電荷變體。紀錄在215 nm下的吸光度並積分以評估電荷不均勻性。藉由將峰分成三個主要電荷群組來對抗-Dll4抗體的層析圖進行積分：酸性、主要與鹼性。首先洗脫出來的峰群組已被命名為酸性形式(這是藉由分析暴露於高pH與溫度的物質所決定)。層析圖中的主峰已命名為主峰、主峰形式或主要電荷變體。峰的最後一個群組報導為鹼性形式。依據管柱滯留延長來命名，因為高度的正電荷。抗體測試樣品的峰型態被拿來與參考標準品的峰型態進行比較，且報導酸性、主要與鹼性形式的峰面積百分率。

使用結合分析評估抗-Dll4抗體的活性或效力。使用特異性及敏感性ELISA測量抗體阻斷生物素化-hDll4-hFc結合至Notch1的能力。ELISA在由生物素-hDll4-hFc與抗-Dll4抗體之混合物組成的溶液中測量未結合的生物素化hDll4-hFc。混合物被添加至經人類Notch1塗覆的微量盤。以不同量的抗體滴定固定量的生物素-hDll4-hFc；洗去抗體：生物素hDLL hFc複合物。使用接合至辣根過氧化酶(HRP)的卵白素偵測仍結合至盤的生物素-hDll4-hFc數量。比較分析樣品與參考標準品以決定相對效力。HRP比色受質用於偵測並測量OD450 nm。OD450 nm數值相對抗體在溶液中的濃度作圖並使用非線性迴歸分析決定IC₅₀。IC₅₀定義為阻斷50%生物素-hDLL4-hFc對hNotch1-hFc塗覆盤之最大結合所需的抗體濃度，且此等數值反映抗體對hDLL4的阻斷效力。藉由比較參考標準品樣品在相同盤上操作來決定效力並表示為參考標準品IC₅₀值的百分率。

實施例3：緩衝劑與pH

考量pH與緩衝劑類型對於抗-Dll4穩定性的影響。當使用10 mM磷酸鹽緩衝劑或10 mM組胺酸緩衝劑調配時，REGN421抗體(“REGN421”)最為穩定。已選定磷酸鹽作為調配用緩衝劑，因為考量到在以液態儲存期間組胺酸氧化的潛在風險。當所有賦形劑與REGN421抗體加在一起時，磷酸二氫鹽與磷酸氫二鹽的混合物產生pH為6.0。

以升高溫度培育的經緩衝REGN421的分析揭示，主要蛋白質分解路徑為形成團聚物、切割產物及電荷變體。因此，為評估pH與緩衝劑對REGN421穩定性的影響，在45℃下以pH值範圍5.0至8.0的各種緩衝劑來培育REGN421測試樣品，以鑑別會增加蛋白質熱穩定性的條件(表1)。當蛋白質在pH 6.0下調配時，REGN421具有最大穩定性，如藉由SE-HPLC與陽離子交換-高效液相層析(CEX-HPLC)分析所測定。相較於在pH 6.0下於琥珀酸鹽或檸檬酸鹽緩衝劑中調配，在pH 6.0的磷酸鹽或組胺酸緩衝劑中調配REGN421產生較高的蛋白質穩定性。選定磷酸鹽用於REGN421調配，因為考量到在液態中長期儲存期間組胺酸氧化的潛在風險。

關於顯示在表1中的結果，在45下測試具有經Fluro Tec®塗覆之4432/50丁基橡膠檔塞之2 mL第1型硼矽酸玻璃小瓶中於10 mM測試緩衝劑(含有0.2%聚山梨醇酯20)中的0.3 mL 25 mg/mL REGN421歷時28天。濁度被報導為相對比較於起始材料在OD₄₀₅的變化。起始材料結果為所有14種調配物的起始材料的平均結果。OD=光學密度；RP-HPLC=逆相高效液相層析；SE-HPLC=尺寸排除高效液相層析；CEX-HPLC=陽離子交換高效液相層析。

表1：在45℃下培育28天，緩衝劑與pH對於REGN421穩定性的影響

實施例4：篩選對抗振盪壓力之保護劑

選定0.2%聚山梨醇酯20作為有機共溶劑，因為當在液態中振盪時其使REGN421穩定。起初實施以監測REGN421在有機共溶劑不存在下於振盪後之穩定性的研究產生不同的結果。經由SE-HPLC的振盪REGN421分析證實在某個特定研究中抗體團聚增加，但在大多數對REGN421施行的其他振盪研究中觀察到團聚沒有顯著增加。來自兩個代表性穩定性研究的結果顯示於表2中。仍採用添加聚山梨醇酯20至REGN421調配物中的保守方法防止可能的振盪依賴性蛋白質不穩定性，其可能在製造、運輸和處理REGN421期間發生。選定聚山梨醇酯20甚 於其他有機共溶劑，因為它不會改變REGN421的熱穩定性。

就表2中所示的抗體穩定性結果，0.3 mL的25 mg/mL REGN421於10 mM磷酸鹽、pH 6.0在具有經FluroTec®塗覆之4432/50丁基橡膠檔塞之2 mL第1型硼矽酸玻璃小瓶中與有機共溶劑合併並進行120分鐘渦捲。濁度被報導為相對較於起始材料在OD₄₀₅上的變化。起始材料結果表示所有9種調配物的起始材料的平均結果。OD=光學密度；RP-HPLC=逆相高效液相層析；SE-HPLC=尺寸排除高效液相層析。

實施例5：篩選對抗熱壓力的保護劑

檢驗穩定劑(諸如糖、胺基酸及無機鹽)關於其增加REGN421之熱穩定性的能力。所檢驗的熱穩定劑的歸納結果呈現於表3中。含有蔗糖及海藻糖的調配物顯示最低量的REGN421團聚物形成，如藉由SE-HPLC分析所測定。添加氯化鈉至調配物中顯示減少電荷變體形成(CEX-HPLC)，但使得團聚物形成數量增加(SE-HPLC)。實施後續研究以檢驗REGN421在與10%蔗糖和150 mM氯化鈉(NaCl)組合調配後的熱 穩定性。這個研究目的在於藉由在調配物中納入蔗糖，從而維持NaCl在調配物中對於電荷變體形成的保護效力，降低NaCl引起的團聚。將蔗糖濃度從20%(無NaCl)調整至10%(有NaCl)以控制調配物的滲透度。在這個調配物中，如藉由CEX-HPLC分析所測定的REGN421熱穩定性(電荷變體形成)類似於使用NaCl做為單一穩定劑的結果(表3)，證明NaCl對於電荷變體形成的保護效力。此外，相較於使用NaCl做為單一穩定劑的調配物，團聚物形成的速率明顯降低，證明蔗糖對於調配物的穩定效用。依據這些結果，使用10%蔗糖及150 mM NaCl來調配REGN421。

就表3中所示的抗體穩定性結果，0.3 mL的10 mM磷酸鹽、pH 6.0、0.2%聚山梨醇酯20與25 mg/mL REGN421加上指定熱穩定劑在具有經FluroTec®塗覆之4432/50丁基橡膠檔塞之2 mL第1型硼矽酸玻璃小瓶中45℃下28天。濁度被報導為相對較於起始材料在OD₄₀₅上的相對變化。起始材料結果表示所有10種調配物的起始材料未在45℃下培育的平均結果。OD=光學密度；RP=逆相高效液相層析；SE=尺寸排除高效液相層析；CEX=陽離子交換高效液相層析。

實施例6：壓力穩定性研究或REGN421調配物

藉由將REGN421維持在25℃下6個月來施行增速研究。在這個增速條件下，藉由陽離子交換層析(CEX-HPLC)觀察到電荷變體型態往兩個更為酸性形式轉移。在儲存6個月後藉由SDS PAGE觀察到純度降低2%至5%，藉由SE-HPLC偵測到純度降低1.6%而高分子量團聚物形成增加1.2%。如藉由結合分析在25℃下儲存6個月後所測定，REGN421效力沒有喪失。

對REGN421抗體施行的其他增速與壓力穩定性研究指出，當渦捲60分鐘或120分鐘、冷凍和從-80℃解凍至環境溫度歷經8個循環、培育在45℃下28天、培育在37℃下28天，或培育在25℃下28天時，蛋白質為物理穩定的(表4)。在這些研究期間，在壓力之後，溶液在視覺上保持澄清，沒有觀察到有蛋白質喪失，且在pH方面沒有發生改變。但是，當蛋白質在25℃下培育28天時，藉由尺寸排除HPLC與陽離子交換HPLC偵測到REGN421純度降低，表示當REGN421暴露於壓力條件時，分子量與電荷變體發生改變。當蛋白質在37℃下培育時，相較於在45℃下培育偵測到較小程度的化學分解。在25℃下的14天評估期間，以及在振盪與冷凍/解凍循環之後，REGN421為在物理上與化學上穩定的。沒有 觀察到任一遭受壓力的樣品有明顯喪失效力，如使用Dll4/Notch結合分析所測定。

就表4中所示的抗體穩定性結果，0.3 mL的10 mM組胺酸(pH 6.0)、0.2%聚山梨醇酯20、10%蔗糖、150 mM NaCl及25 mg/mL H1H658P與有機共溶劑組合在具有經FluroTec®塗覆之4432/50丁基橡膠檔塞之2 mL第1型硼矽酸玻璃小瓶中並遭遇各種指定壓力28天。濁度被報導為相對較於起始材料OD在405 nm下的相對變化。結合分析的接受標準為參考標準品的50-150%。OD=光學密度；RP=逆相高效液相層析；SE=尺寸排除高效液相層析；CEX=陽離子交換高效液相層析。

實施例7：經調配抗-Dll4抗體的儲存穩定性

藉由UV分光光度計或如藉由SDS-PAGE測定，於-80℃、 -30℃或-20℃下儲存24個月後觀察到REGN421沒有明顯喪失。在5℃下儲存24個月後，藉由SE-HPLC偵測到純度降低0.8%而團聚物形成增加0.4%。在測試條件下儲存24個月後，如藉由CEX HPLC偵測，電荷變體沒有明顯改變。如藉由在儲存結束時的結合分析測定，效力沒有改變。在5℃下儲存24個月後，就所有分析而言REGN421仍符合接受標準。參見表5。

實施例8：使用IV投遞裝置的相容性

將25 mg/mL REGN421調配物稀釋在含有生理食鹽的靜脈內(IV)袋(由聚氯乙烯(PVC)與二-(乙基己基)-酞酸酯(DEHP))中。在本研究中檢驗三種不同劑量的REGN421，包括低劑量(0.1 mg/kg與40 kg患者)、中等劑量(4 mg/kg與40 kg患者)以及高劑量(16 mg/kg與120 kg患者)。關 於低劑量，添加額外的”安慰劑”至袋中有助於使REGN421穩定對抗振盪。

含有稀釋REGN421的IV袋首先在5℃下靜置24小時，接著在25℃下靜置又24小時。在完成這些培育之後，將IV袋連接至輸注組，接上稀釋抗體，並在環境溫度下靜置1小時。將稀釋抗體以25 mL/hr至500 mL/hr的速率泵過輸注組。在本研究中使用三個輸注泵以及三個輸注組(代表主要供應商Alaris、Baxter與Hospira)。這些輸注組代表所有基礎材料(PVC與DEHP、PVC與三辛基-三蜜蠟酸酯(TOTM)及聚烯烴)，其含有輸注組與線上過濾器。所有輸注組含有0.2 μm聚醚碸過濾器。

當以各種輸注組在5℃下靜置24小時、在25℃下靜置24小時(參見表6)、在環境溫度下靜置1小時，並使用各種輸注泵以25 mL/hr或500 mL/hr的速率泵過輸注組時，REGN421為物理上穩定的。藉由視覺檢驗或濁度未偵測到沉澱，溶液pH穩定，且如藉由RP-HPLC在任一測試樣品中偵測所測定，蛋白質濃度沒有降低。蛋白質在化學上亦為穩定的。如在這個相容性研究中分別藉由SE-HPLC與CEX-HPLC所測定，沒有觀察到分子量形式或電荷變體增加。

這個數據支持以下結論：(a)在4 mg REGN421稀釋於含有食鹽水的50 mL IV袋或1920 mg REGN421稀釋於食鹽水的250 mL IV袋之後，REGN421為穩定的。含有食鹽水的食鹽水IV袋由含DEHP的PVC組成。(b)在IV袋中培育於5℃下至多24小時或於25℃下24小時之後，稀釋的REGN421是穩定的。(c)可使用輸注泵投與稀釋的REGN421。(d)可使用由含DEHP的PVC、含TOTM的PVC或聚烯烴組成的輸注組投與稀釋的REGN421。(e)使用線上0.2μm聚醚碸過濾器與REGN421是相容的。(f)可以範圍在25 mL/hr至500 mL/hr的速率投與稀釋的REGN421。

實施例9：分子量測定

鑑別經調配REGN421的蛋白質結構及活性。不帶有醣基化的天然REGN421的預測蛋白質分子量約146 kDa。實施非還原SDS-PAGE來確認異四聚體分子的分子量並檢驗與完整抗體一起共純化之高分子量與低分子量蛋白質形式的數量。在樣品製備期間添加烷基化試劑防止雙硫洗牌並使抗體因加熱分解減至最低。觀察在電泳以及考瑪斯藍染色之後測定之醣基化抗體的觀察分子量大約為150 kDa。亦使用SDS-PAGE在還原條件下檢驗REGN421的質量。在電泳之前將樣品還原並加熱，並透過使用考瑪斯藍染色偵測蛋白質帶。REGN421偵測為兩條主要帶，對應於抗體重鏈(約50 kDa)及輕鏈(約25 kDa)。

亦採用毛細電泳-SDS-(CE-SDS)來評估REGN421的質量。CE-SDS能夠依據尺寸解析經還原IgG多肽鏈並容許定量不均勻性和存在REGN421抗體中的變體。非醣基化重鏈的百分率是由非醣基化重鏈經校 正峰面積相對於對應非醣基化與醣基化重鏈之經校正峰面積總和的比率算出。在REGN421抗體的CE-SDS還原電泳中觀察到兩個主峰。藥物批次的兩個主峰以兩個在IgG對照標準品中鑑別為還原輕鏈(LC)及醣基化重鏈(HC)的兩個主峰校準。標記為REGN421及IgG對照標準品的HC及LC之峰的分子量大約分別為60 kDa及25 kDa。藉由這個方法測定之重鏈與輕鏈分子量略大於人類IgG1預期者，暗示這個技術可能略為高估重鏈及輕鏈的分子量。測試批次REGN421的非醣基化重鏈(NGHC)形式的相對含量相當於偵測到之總峰面積的約1.5%。

實施例10：岩藻糖基化分析

以PNGase F處理REGN421藥物批次以從抗體重鏈釋放出N-連結寡醣形式。游離寡醣接而在還原端以螢光試劑鄰胺苯甲酸予以衍生化。藉由逆相HPLC及MALDI-TOF質譜儀分析經修飾的寡醣。HPLC層析的檢驗揭示，經修飾的寡醣分成兩個主要群組，非岩藻醣基化雙觸形式以及岩藻醣基化雙觸形式。在各群組(岩藻醣基化對非岩藻醣基化)中，寡醣進一步分成雙半乳糖基(G2)、單半乳糖基(G1)或無半乳糖基(G0)形式。寡醣結構分派是透過各分離寡醣使用MALDI-TOF質譜儀的質量分析而達到。依據對應峰在層析圖中的積分，所分析的REGN421批次含有82.4至87.0%(84.6%±1.47%；av±SD)的岩藻醣基化寡醣鏈(表7)。成群寡醣的質量分析證實，岩藻醣基化雙觸寡醣為主要形式，其與HPLC分析一致。在N-連結糖鏈中的半乳糖基化數量在REGN421的不同測試批次間有觀察到差異，反映了在抗體製造期間可能發生不均勻性。

實施例11：重鏈C-端離胺酸分析

使用肽測繪(mapping)來確認RENG421的C-端序列。在6.0 M尿素、100 mM Tris、pH 7.5中使REGN421變性，以5 mM DTT還原並以12.5 mM碘乙醯胺烷基化。接著將蛋白質稀釋6倍，使尿素濃度降至1.0 M，並接著在37℃下使用胰蛋白酶(1：20酵素對受質比率)消化3小時。藉由HPLC分離肽，並藉由質譜儀分析。做為用於鑑別來自REGN421之天然C-端肽的標準品，產生三個對應於三個推測最有可能之C-端肽序列(SLSLSP、SLSLSPG，及SLSLSPGK；分別為SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11，及SEQ ID NO：12)的合成肽並藉由HPLC使用相同溶劑洗脫梯度相比於用來洗脫REGN421胰蛋白酶消化之肽所用梯度來分析，而有助於鑑別REGN421之胰蛋白酶測繪的實際C-端肽。預期胰蛋白酶衍生的C-端肽SLSLSPGK(SEQ ID NO：12)未在任一測試REGN421批次的胰蛋白酶測繪中發現到，表示C端Lys移除了。在胰蛋白酶測繪中，僅有一個肽(在46.60分處洗脫)與合成肽中之一者(SLSLSPG；SEQ ID NO：11)共同 洗脫出來。透過質量分析，這個肽對應於REGN421重鏈的C-端肽(預期質量為659.69，觀察質量為660.2)。結果暗示，轉譯後修飾加工使得預期Lys完全從重鏈C端移除。

<110> 再生元醫藥公司

<120> 包含抗-DLL4抗體的穩定化調配物

<130> 7400P

<160> 12

<170> 用於Windows第4.0版的FastSEQ

<210> 1

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 1

<210> 2

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 2

<210> 3

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 3

<210> 4

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 4

<210> 5

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 5

<210> 6

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 6

<210> 7

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 7

<210> 8

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 8

<210> 9

<211> 685

<212> PRT

<213> 智人

<400> 9

<210> 10

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 10

<210> 11

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 11

<210> 12

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成

<400> 12

Claims (40)

1. 一種醫藥調配物，其包含：(i)特異性地結合至人類delta樣配體4(Dll4)的抗體；(ii)緩衝劑，pH在6.0±0.5；(iii)有機共溶劑；以及(iv)兩種熱穩定劑。
2. 如申請專利範圍第1項之醫藥調配物，其中該抗體含有SEQ ID NO：2之HCDR1、SEQ ID NO：3之HCDR2、SEQ ID NO：4之HCDR3、SEQ ID NO：6之LCDR1、SEQ ID NO：7之LCDR2及SEQ ID NO：8之LCDR3。
3. 如申請專利範圍第1項或第2項之醫藥調配物，其中該抗體具有SEQ ID NO：1之HCVD，以及SEQ ID NO：5之LCVD。
4. 如申請專利範圍第1至3項中任一項之醫藥調配物，其中(a)該抗體具有約150 kDa的分子量；以及(b)約82%至約87%的抗體經岩藻醣基化。
5. 如申請專利範圍第1至4項中任一項之醫藥調配物，其中抗體濃度為25 mg/mL±3.75 mg/mL。
6. 如申請專利範圍第1至5項中任一項之醫藥調配物，其中該緩衝劑為磷酸鹽。
7. 如申請專利範圍第6項之醫藥調配物，其中磷酸鹽濃度為10 mM±1.5 mM。
8. 如申請專利範圍第1至7項中任一項之醫藥調配物，其中有機共溶劑為聚山梨醇酯20。
9. 如申請專利範圍第8項之醫藥調配物，其中聚山梨醇酯20濃度為0.2% w/v±0.03%。
10. 如申請專利範圍第1至9項中任一項之醫藥調配物，其中該穩定劑由蔗糖與氯化鈉組成。
11. 如申請專利範圍第10項之醫藥調配物，其中蔗糖濃度為10%±1.5%(w/v)而氯化鈉濃度為150 mM±22.5 mM。
12. 如申請專利範圍第1至11項中任一項之醫藥調配物，其包含25 mg/mL±3.75 mg/mL抗體、10 mM±1.5 mM磷酸鹽，pH 6.0±0.5、0.2% w/v±0.03%聚山梨醇酯20、10% w/v±1.5%蔗糖，及150 mM±22.5 mM氯化鈉。
13. 如申請專利範圍第1至12項中任一項之醫藥調配物，其中至少94%的抗體儲存在45℃下28天後具有天然構形。
14. 如申請專利範圍第1至13項中任一項之醫藥調配物，其中至少45%的抗體儲存在45℃下28天後為抗體的主要電荷形式。
15. 如申請專利範圍第1至14項中任一項之醫藥調配物，其中至少97%的抗體儲存在25℃下28天後具有天然構形。
16. 如申請專利範圍第1至15項中任一項之醫藥調配物，其中至少57%的抗體儲存在25℃下28天後為抗體的主要電荷形式。
17. 如申請專利範圍第1至16項中任一項之醫藥調配物，其中至少97%的抗體儲存在37℃下28天後具有天然構形。
18. 如申請專利範圍第1至17項中任一項之醫藥調配物，其中至少51%的抗體儲存在37℃下28天後為抗體的主要電荷形式。
19. 如申請專利範圍第1至18項中任一項之醫藥調配物，其中至少98%的抗體儲存在5℃下6個月後具有天然構形。
20. 如申請專利範圍第1至19項中任一項之醫藥調配物，其中至少61%的抗體儲存在5℃下6個月後為抗體的主要電荷形式。
21. 如申請專利範圍第1至20項中任一項之醫藥調配物，其中儲存在5℃下6個月後抗體的相對效力百分率為儲存前抗體效力的至少100%。
22. 如申請專利範圍第1至21項中任一項之醫藥調配物，其中至少 99%的抗體儲存在-80℃下6個月後具有天然構形。
23. 如申請專利範圍第1至22項中任一項之醫藥調配物，其中至少57%的抗體儲存在-80℃下6個月後為抗體的主要電荷形式。
24. 如申請專利範圍第1至23項中任一項之醫藥調配物，其中儲存在-80℃下6個月後抗體的相對效力百分率為儲存前抗體效力的至少100%。
25. 如申請專利範圍第1至24項中任一項之醫藥調配物，其中至少99%的抗體儲存在-30℃下6個月後具有天然構形。
26. 如申請專利範圍第1至25項中任一項之醫藥調配物，其中至少57%的抗體儲存在-30℃下6個月後為抗體的主要電荷變體。
27. 如申請專利範圍第1至26項中任一項之醫藥調配物，其中儲存在-30℃下6個月後抗體的相對效力百分率為儲存前抗體效力的至少65%。
28. 如申請專利範圍第1至27項中任一項之醫藥調配物，其中至少98%的抗體儲存在-20℃下6個月後具有天然構形。
29. 如申請專利範圍第1至28項中任一項之醫藥調配物，其中至少60%的抗體儲存在-20℃下6個月後為抗體的主要電荷變體。
30. 如申請專利範圍第1至29項中任一項之醫藥調配物，其中儲存在-20℃下6個月後抗體的相對效力百分率為儲存前抗體效力的至少100%。
31. 一種醫藥調配物，其含有(a)25 mg/mL±3.75 mg/mL的抗-Dll4抗體、(b)10 mM±1.5 mM磷酸鹽，pH 6.0±0.3、(c)0.2%±0.03%聚山梨醇酯20、(d)150 mM±22.5 mM氯化鈉，及(d)10%±1.5%蔗糖，其中：(a)該抗體含有SEQ ID NO：1的HCVD以及SEQ ID NO：5的LCVD；(b)該抗體具有約150 kDa的分子量；及 (c)約82%至約87%的抗體經岩藻醣基化。
32. 如申請專利範圍第31項之醫藥調配物，其在水中由下列所組成：(a)25 mg/mL±3.75 mg/mL的抗體、(b)10 mM±3 mM磷酸鹽，pH 6.0±0.5、(c)0.2%±0.03%聚山梨醇酯20、(d)150 mM±22.5 mM氯化鈉，及(e)10%±1.5%蔗糖。
33. 如申請專利範圍第1至32項中任一項之醫藥組成物，其中該組成物包含在一容器中。
34. 如申請專利範圍第33項之醫藥組成物，其中該容器為小瓶。
35. 如申請專利範圍第34項之醫藥組成物，其中該小瓶為玻璃。
36. 如申請專利範圍第33項之醫藥組成物，其中該容器為IV滴注袋。
37. 如申請專利範圍第36項之醫藥組成物，其中該袋是由聚氯乙烯製成。
38. 如申請專利範圍第36項之醫藥組成物，其中該袋是由聚烯烴製成。
39. 一種套組，其包含如申請專利範圍第1至32項中任一項之醫藥組成物、容器以及使用說明。
40. 如申請專利範圍第39項之套組，其中該容器為玻璃小瓶，配有塗覆FLUROTEC的4023/50的橡膠瓶塞。