TW201302242A - 膠原產生促進劑、玻尿酸產生促進劑、纖維母細胞增殖促進劑及抗皺紋劑 - Google Patents

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Abstract

本發明提供一種膠原產生促進效果、玻尿酸產生促進效果、纖維母細胞增殖促進效果、及皺紋改善效果優異之植物種子有機溶劑萃取物的處理物。本發明之膠原產生促進劑之特徵在於：將所屬為柏木科側柏屬之植物的種子，使用有機溶劑進行萃取而得到包含油性成分的萃取物，將該萃取物之溶劑的一部分或全部餾除之後，添加濃度0.5至15N之鹼性水溶液並混合，接著進行酸處理後水洗而得。

Description

膠原產生促進劑、玻尿酸產生促進劑、纖維母細胞增殖促進劑及抗皺紋劑
本發明係關於膠原產生促進劑、玻尿酸產生促進劑、纖維母細胞增殖促進劑、及抗皺紋劑，特別是關於膠原產生促進效果等為優異之植物種子的有機溶劑萃取物的處理物。
[相關申請案]
本案係依據於2010年10月27日申請之日本國發明專利申請2010-240674號而主張優先權，並將其內容於此援用。
皮膚從外層開始係由角質層、表皮層、基底膜、及真皮所構成。
真皮為其中領域最為廣的部分，不像表皮般細胞密佈。反之，細胞外的空間多，被稱作「細胞外基質」的巨大分子之網狀構造所填充。該細胞外基質係真皮內的纖維母細胞等所產生，係以玻尿酸或硫酸皮膚素(Dermatan sulfate)等稱作酸性黏多醣之多醣類；膠原、彈性蛋白等纖維性蛋白質所構成。細胞外基質直接關係到皮膚的彈性、緊緻、水嫩度、新陳代謝等。若纖維母細胞等細胞外基質的產生變差，則皮膚將喪失彈性或水嫩度，而變得容易發生肌膚粗糙，為致使肌膚老化的原因之一。
上述纖維性蛋白質主要由膠原所構成，其中，I型膠原佔整體的80%。I型膠原之外，已知有III、V、XII及XIV型膠原的存在。可見於老化皮膚之鬆弛的成因之一，係因皮膚組織隨著增齡而薄化所致。已老化的皮膚中，真皮主要的基質成分之膠原纖維顯著減少，此者極可能為皮膚的厚度變薄的主要原因。因此，促進膠原的產生並維持膠原量，被認為有效於鬆弛的預防/改善。
此外，促進膠原的產生在上述以外，除改善皮膚創傷的治癒，亦對骨質疏鬆症、關節炎、腱鞘炎等之治療、防止高血壓等為有效。
至今之膠原產生促進劑，已知有包含僅以水作為萃取溶劑而從柏子仁(經乾燥之側柏種子)所萃取的生藥萃取物之膠原產生促進劑(例如參照專利文獻1)。然而，該生藥萃取物的膠原產生促進效果尚有改善餘地。
另一方面，上述多醣類中的玻尿酸係具有對細胞間隙水分的保持、以於組織內形成膠狀的基質為基礎之細胞的保持、組織的潤滑性與柔軟性的保持、對於機械性障礙等外力的抵抗、以及細菌感染的防止等多種功能。近來，則多為與癌轉移之相關研究。
此外，玻尿酸除了皮膚外，在生物體中廣為分布在關節液、玻璃體、韌帶等。因此，玻尿酸的產生促進，除了提升保濕效果，對於治療關節痛(退化性關節炎)、改善皮膚鬆弛、以亁眼症為主之角膜結膜上皮障礙治療、白內障/角膜移植手術時的前房保持等亦為有效。
至今之玻尿酸產生促進劑，已知有含有公牛藻(Durvillaea)科公牛藻(Durvillaea)屬所屬之海藻的萃取物作為有效成分之玻尿酸產生促進劑(例如參照專利文獻2)。
如此之膠原、玻尿酸可適用於肌膚的鬆弛、粗糙等之改善/防止，而除了防止皮膚的老化之外，可適用於膝關節疾病的改善劑或眼科手術用製劑等。因此，若發現具有膠原、玻尿酸兩者的產生促進效果之物質，即有可廣泛適用於上述症狀的改善或預防/治療等之優點。
另一方面，專利文獻3中，已知將選自崖柏屬(Thuja)植物、懸鉤子屬(Rubus)植物、越橘屬(Vaccinium)植物、獼猴桃屬(Actinidia)植物及紫蘇屬(Perilla)植物之中的植物種子萃取成為植物萃取物，接著對該植物萃取物施予鹼處理而得到植物性美白劑的製造方法。
然而，未得知為具有較側柏有機溶劑萃取物之處理物優異的膠原產生促進效果及玻尿酸產生促進效果者。
[先前技術文獻] [專利文獻]
[專利文獻1]日本特開2010-235482號公報
[專利文獻2]日本特開平9-176036號公報
[專利文獻3]日本特開2007-223944號公報
本發明為有鑒於前述以往技術所成者，目的在於提供一種植物種子的有機溶劑萃取物的處理物，其係膠原產生促進效果及玻尿酸產生促進效果等優異者。
為解決前述課題，本發明者等進行積極檢討，結果係發現將所屬為柏木科(Cupressaceae)側柏屬(Platycladus)之植物的種子使用有機溶劑進行萃取而得到含有油性成分的萃取物，將該萃取物進行鹼處理及酸處理後，經水洗的處理物係具有優異的膠原產生促進效果，遂完成本發明。
亦即，本發明之膠原產生促進劑的特徵在於：將所屬為柏木科側柏屬之植物的種子，使用有機溶劑進行萃取而得到含有油性成分的萃取物，將該萃取物之溶劑的一部分或全部餾除之後，添加濃度0.5至15N之鹼性水溶液並混合，接著進行酸處理後水洗而得。
本發明之玻尿酸產生促進劑的特徵在於：將所屬為柏木料側柏屬之植物的種子，使用有機溶劑進行萃取而得到含有油性成分的萃取物，將該萃取物之溶劑的一部分或全部餾除之後，添加濃度0.5至15N之鹼性水溶液並混合，接著進行酸處理後水洗而得。
本發明之纖維母細胞增殖促進劑的特徵在於：將所屬為柏木料側柏屬之植物的種子，使用有機溶劑進行萃取而得到含有油性成分的萃取物，將該萃取物之溶劑的一部分或全部餾除之後，添加濃度0.5至15N之鹼性水溶液並混合，接著進行酸處理後水洗而得。
本發明之抗皺紋劑的特徵在於：將所屬為柏木料側柏屬之植物的種子，使用有機溶劑進行萃取而得到含有油性成分的萃取物，將該萃取物之溶劑的一部分或全部餾除之後，添加濃度0.5至15N之鹼性水溶液並混合，接著進行酸處理後水洗而得。
前述促進劑或抗皺紋劑中，添加的純鹼量以100至300g/L萃取物為合適者。
前述促進劑或抗皺紋劑中，柏木料側柏屬之植物以東洋側柏(Platycladus orientalis)為合適者。
本發明之膠原產生促進方法之特徵在於塗佈前述膠原產生促進劑。
本發明之玻尿酸產生促進方法之特徵在於塗佈前述玻尿酸產生促進劑。
本發明之纖維母細胞增殖促進方法之特徵在於塗佈前述纖維母細胞增殖促進劑。
本發明之皺紋改善方法之特徵在於塗佈前述抗皺紋劑。
本發明之膠原產生促進方法之特徵在於經口攝取前述膠原產生促進劑。
本發明之玻尿酸產生促進方法之特徵在於經口攝取前述玻尿酸產生促進劑。
本發明之纖維母細胞增殖促進方法之特徵在於經口攝取前述纖維母細胞增殖促進劑。
本發明之皺紋改善方法之特徵在於經口攝取前述抗皺紋劑。
依據本發明，係可提供一種作為膠原產生促進劑、玻尿酸產生促進劑、纖維母細胞增殖促進劑、及抗皺紋劑為有用的植物種子的有機溶劑萃取物的處理物。
本發明之膠原產生促進劑的特徵在於：將所屬為柏木料側柏屬之植物的種子使用有機溶劑進行萃取而得到含有油性成分的萃取物，而將該萃取物之溶劑的一部分或全部餾除之後，添加濃度0.5至15N之鹼性水溶液並混合，接著進行酸處理後水洗而得。
本發明所使用之植物的種子，係所屬為柏木料側柏屬之植物的種子。此中，較佳為使用東洋側柏的種子。
東洋側柏原產於中國、朝鮮半島，在約250年前引進至日本，目前為栽植於各地而為樹高5至15m的常見灌木或小喬木。
東洋側柏的種子為黑褐色的橢圓卵型，亦稱為「柏子仁(Baiziren)」。廣泛使用於中醫學上，係用於滋養強健或消炎等。
萃取物之具體萃取方法、鹼處理法、酸處理法係可例如使用以下的方法。
以相對於柏木科植物的種子之質量為1至100倍，較佳為1至30倍左右質量的有機溶劑進行一定期間的萃取。所使用的種子雖可依所需而適度進行粉碎，惟在過濾時會發生堵塞問題等情形下，亦可未經粉碎直接使用。
此外，亦可以少量的有機溶劑重複進行萃取，使用如索司勒萃取器(Soxhlet extraction)之回流裝置亦為佳。
用於萃取之有機溶劑，只要是一般用於萃取之有機溶劑即無特別限定，惟較佳為揮發性有機溶劑。
有機溶劑例如甲醇、乙醇等醇類；含水醇類、丙酮、醋酸乙基酯、己烷、醚等極性/非極性有機溶媒，可將此等單獨或是組合2種以上使用。其中，丙酮、醋酸乙酯、己烷以價格低廉、減壓濃縮容易之點而為特佳。其他係可藉由氣態超臨界二氧化碳(Supercritical Carbon Dioxide)進行萃取或壓榨種子，亦可用於搾汁。
對此，包含水之萃取溶劑因活性成分的萃取受到抑制，故為不佳。
如上述進行，將所得之萃取物從有機溶劑去除之後進行鹼處理。鹼處理的方法並無特別限定，例如可藉由將有機溶劑萃取物之溶劑的一部分或全部餾除之後，添加濃度0.5至15N，較佳為1至10N之鹼性水溶液並混合之方法而得。
更具體而言，可舉例如對於餾除溶劑後的萃取物，添加了0.2至2倍容量的濃鹼水溶液後，充分攪拌混合，並進行30分鐘至數天左右的熟成。濃鹼水溶液為0.5至15N，較佳為1至10N濃度的NaOH，KOH等所成之水溶液。又，較佳係添加濃鹼水溶液使純鹼量成為100至300g/L萃取物。
混合時的溫度較佳為室溫至70℃之範圍，更佳為30至60℃之範圍。理想為在熟成時不使親水性成分與親油性成分分離，而適宜進行攪拌。
對經上述之經鹼處理的處理物施予酸處理。
酸處理的方法並無特別限定，可舉例如添加濃度0.5至15N的酸溶液，使pH下降至0.5至2左右之方法。
施予酸處理後，液狀(油狀)物質將進行分離。此液狀物質具有極高的膠原產生促進效果，同時對於肌膚亦表現出高安全性。
為促進液狀物質回收，係進行水洗。之後依所需而進行脫色、脫臭、脫鹽、蒸餾等操作亦為佳。
如上述從所屬為柏木料側柏屬之植物的種子所萃取/處理的成分，除了膠原產生促進效果，係具有表皮細胞的玻尿酸合成促進效果、纖維母細胞增殖促進效果、皺紋改善效果。
因此，本發明之膠原產生促進劑亦可使用作為玻尿酸產生促進劑、纖維母細胞增殖促進劑、抗皺紋劑。
本發明之膠原產生促進方法、玻尿酸產生促進方法、纖維母細胞增殖促進方法、皺紋改善方法特徵在於塗佈本發明之膠原產生促進劑、玻尿酸產生促進劑、纖維母細胞增殖促進劑、抗皺紋劑。
上述促進方法或皺紋改善方法亦可為塗佈包含本發明之促進劑或抗皺紋劑之皮膚外用組成物。
皮膚外用組成物應用範圍極廣，可應用於各種領域(例如包含準藥品之化妝品、醫藥品、顯微操作用針(Microneedle)注入劑)。其製品型態為任意，可列舉例如：軟膏、乳霜、乳液、化妝水、精華液、凝膠、敷顏料(Pack)、敷面膜(Mask)、粉底、顯微操作用針等。
調製皮膚外用組成物時，作為有效成分之促進劑或抗皺紋劑之液狀成分，較佳為調配0.0001至20質量%，特佳為調配0.001至2質量%。
經調配本發明之促進劑或抗皺紋劑的皮膚外用組成物係可依照慣常方法製造。皮膚外用組成物中，除了在作為必須成分之促進劑或抗皺紋劑以外，可於不損及本發明的效果之範圍內，適宜調配可用於一般皮膚外用組成物之任意成分。
可調配於皮膚外用組成物之任意成分可列舉例如：胺基酸、脂質、糖、荷爾蒙、酵素、核酸等生理活性物質等。
此外，亦可適宜調配水(精製水、溫泉水、深層水等)、油劑、界面活性劑、金屬皂、膠化劑、粉體、醇類、水溶性高分子、膜形成劑、樹脂、晶籠化合物、香料、脫臭劑、鹽類、pH調整劑、清涼劑、取自動物/微生物之萃取物、血液循環促進劑、收斂劑、抗脂漏劑、螫合劑(Chelate agent)、角質溶解劑、酵素、荷爾蒙類、維生素類、其他的植物萃取物等。
其他，亦可適宜調配乙二胺四乙酸二鈉(Edetate disodium)、乙二胺四乙酸三鈉(Edetate trisodium)、檸檬酸鈉、聚磷酸鈉、偏磷酸鈉、葡萄糖酸等金屬螫隔劑(Metal sequestering agent)；咖啡因、單寧、維拉帕米(Verapamil)、傳明酸及其衍生物、甘草萃取物、光甘草定(Glabridin)、火棘果實的熱水萃取物、各種生藥、醋酸生育酚、甘草酸及其衍生物或其鹽等藥劑；葡萄糖、果糖、阿洛酮糖(Psicose)、阿洛糖(Allose)、塔格糖(Tagatose)、甘露糖、蔗糖、海藻糖、木糖醇等糖類；β丙胺酸、甘胺酸、GABA、肌胺酸(Sarcosine)等離子通道調控物質；肌肽(Carnosine)、類視色素(Retinoid)等。
此外，亦可藉由將本發明之促進劑或抗皺紋劑與一種或兩種以上的其他藥效劑進行組合調配，而調製各項效果為更高，或者是各項效果與另外的藥效一同奏效之皮膚外用組成物。
前述藥效劑可列舉例如：美白劑、抗紫外線劑、抗菌劑、消炎劑、血液循環促進劑、各種藥效成分、活性氧去除劑、保濕劑、其他促進劑、其他抗皺紋劑等，惟不限定於此等。
經調配本發明之促進劑或抗皺紋劑之皮膚外用組成物之劑型，只要是可發揮本發明效果者即無特別限定。皮膚外用組成物之劑型為任意者，可列舉例如：溶液系、可溶化系、乳化系、粉末分散系、水-油雙層系、水-油-粉末三層系、軟膏、凝膠、噴霧等。
此外，本發明之膠原產生促進方法、玻尿酸產生促進方法、纖維母細胞增殖促進方法、皺紋改善方法，亦適合為經口攝取本發明之膠原產生促進劑、玻尿酸產生促進劑、纖維母細胞增殖促進劑、抗皺紋劑。
上述促進方法或皺紋改善方法亦可為經口攝取包含本發明之促進劑或抗皺紋劑之飲用食用品。
當將本發明之膠原產生促進劑、玻尿酸產生促進劑、纖維母細胞增殖促進劑及抗皺紋劑調配於飲用食用品時，促進劑或抗皺紋劑的調配量(乾燥質量)可因應該等之種類、目的、形態、利用方法等進行適當決定。例如：調配量較佳為飲食品的總量中0.0001至50質量%左右。特別是在調配於特定的保健用食品時，較佳係調配為使本發明之促進劑或抗皺紋劑充分發揮效果的量。
飲食品之型態可例如任意地成形為：顆粒狀、糊狀、凝膠狀、固狀、液體狀等。
飲食品可適宜地含有被認可調配於飲用食用品等之公知的各種物質，例如：結合劑、崩解劑、增黏劑、分散劑、再吸收促進劑、風味劑(Flavoring agent)、緩衝劑、界面活性劑、助溶劑、保存劑、乳化劑、等張化劑、安定劑或pH調製劑等賦形劑。
(實施例)
本發明係舉出以下實施例進行進一步的詳細說明，惟本發明並非以此所限定者。調配量若無特別記載即為質量%。
首先，本發明者等將柏木料側柏屬植物(東洋側柏)種子的有機溶劑萃取物及其處理物(A)以下述調配方法進行調製。接著，對於萃取物及其處理物之纖維母細胞增殖促進效果及纖維母細胞所致之I型膠原產生促進效果進行以下所示之試驗。
將未添加萃取物及其處理物之情形設為100，結果示於表1。
東洋側柏種子的有機溶劑萃取物之調製方法
將東洋側柏的種子(未經粉碎)分別浸漬於5倍量(v/w)的有機溶劑(丙酮)，於室溫進行萃取10天。以尼龍網(網眼數100)再次去除殘渣，並且以濾紙進行過濾。以旋轉蒸發器(Rotary Evaporator)從濾液中去除溶劑。藉由進行此操作，得到萃取物。
東洋側柏種子的有機溶劑萃取物的處理物之調製方法A
將進行如上述操作所得之萃取物以攪拌翼一面攪拌，一面將0.5至15N的NaOH溶液以純NaOH成為100至300g/L之範圍內而添加至萃取物(溫度50℃)。以200rpm一面攪拌，一面進行處理5小時。之後，徐緩地添加5N的H2SO4，一面攪拌一面使pH降至接近1，將分離出的液狀(油狀)物質進行回收。於所回收的液狀(油狀)物質加入等容量的水進行水洗，去除雜質/鹽/過剩的酸。將液狀(油狀)物質進行減壓乾燥，得到液狀的處理物(A)。
[細胞活化試驗]
將源自人類新生兒的纖維母細胞HF0K接種於含有10%胎牛血清(FBS)的貝科改良伊戈之MEM培養基(DMEM(Dulbecco’s Modified Eagle Medium)，日水公司製)中，接著播種於24孔板，靜置於37℃、二氧化碳濃度5體積%的環境中。細胞附著後，將培養基交換為包含低濃度血清(0.5%)的培養基，持續培養1晝夜。之後，添加檢體調製液並混合，使萃取物或其處理物相對於培養基成為0、0.5×10-4、1×10-4、2×10-4、3×10-4體積%。於培養第3日，使用Hoechst 33342(同仁化學股份有限公司製)測定並求出各檢體調製液中所培育出的纖維母細胞的細胞數，將萃取物或其處理物對照未添加者，評估細胞活化度。
收集細胞培養上清液，評估I型膠原產生量。
[I型膠原產生的測定]
使用Procollagen Type I C-peptide(PIP) EIA套組(TAKARA公司製)，依照套組中所附的說明手冊(Manual)對所收集的細胞培養上清液I的型膠原進行培養基上清液中的I型膠原C-末端肽(C-terminal peptidec)進行測定，作為I型膠原產生量的指標。使用Hoechst 33342求得之DNA量作為每1孔之細胞量，評估每單位細胞藉由萃取物或其處理物所合成促進之I型膠原量。
經由表1可知，藉由對東洋側柏種子的有機溶劑萃取物施予處理，係具有相對於源自人類新生兒之纖維母細胞HF0K高的細胞活化能。
此外，東洋側柏種子的有機溶劑萃取物雖未見I型膠原產生促進效果，惟藉由施予處理，可確認到I型膠原的產生有極低濃度的提高。
因此，本發明之膠原產生促進劑及纖維母細胞增殖促進劑，需將東洋側柏種子的有機溶劑萃取物進行鹼處理及酸處理。
接著，使用與上述試驗之東洋側柏不同的種子，對I型膠原的產生促進效果進行進一步檢討。
本發明者等將東洋側柏種子大致分為3等份，並將該種子的水(10℃及20℃)萃取物及有機溶劑萃取物的處理物(B)藉由下述方法進行調製。然後，藉由上述試驗，測定水萃取物及處理物(B)之每單位細胞的I型膠原的生產量。將未添加水萃取物及處理物(B)之情形(對照組)設為100，結果示於第1圖。
又，第1圖表示有平均值±SD。此外，藉由Student t檢定(顯著水準*p＜0.1、**p＜0.05)進行統計處理，顯示為可確認到相對於對照組之顯著差異或傾向差異者。
東洋側柏種子的水萃取物的調製方法
將東洋側柏的種子浸漬於5倍量(v/w)的水，於10℃或20℃進行萃取24小時。以尼龍網(網眼數100)再次去除殘渣，並且以濾紙進行過濾。藉由進行此操作，得到水萃取物。
東洋側柏種子的有機溶劑萃取物的處理物之調製方法B
將東洋側柏的種子浸漬於5倍量(v/w)的有機溶劑，於20℃進行萃取24小時。以尼龍網(網眼數100)再次去除殘渣，並且以濾紙進行過濾。藉由旋轉蒸發器從濾液中去除溶劑。
將所得之萃取物以攪拌翼一面攪拌，一面將0.5至15N的NaOH溶液以純NaOH成為100至300g/L之範圍內而添加至萃取物(溫度50℃)。以200rpm一面攪拌，一面進行處理5小時。之後，徐緩地添加5N的H2SO4，一面攪拌一面使pH降至接近1，將分離出的液狀(油狀)物質進行回收。於所回收的液狀(油狀)物質加入等容量的水進行水洗，去除雜質/鹽/過剩的酸。將液狀(油狀)物質進行減壓乾燥，得到液狀的處理物(B)。
由第1圖可確認到，有機溶劑萃取物的處理物係具有依附於濃度之顯著的膠原產生促進效果者。
然而，水萃取物無論為何條件皆幾乎無效果，而未能確認到顯著的膠原產生促進效果。
因此，本發明之膠原產生促進劑，於東洋側柏種子的萃取乃需使用不含水之有機溶劑。
接著，使用上述試驗之東洋側柏的不同種子，對該種子的處理物之玻尿酸合成促進效果進行檢討，並對I型膠原的產生促進效果及纖維母細胞增殖促進效果進行確認。
亦即，以上述方法A所調製的東洋側柏種子的處理物，係藉由以下所示之試驗來測定表皮細胞之玻尿酸合成促進效果，且經由上述試驗測定了纖維母細胞增殖促進效果、纖維母細胞所致之I型膠原產生促進效果。將未添加處理物之情形設為100，結果示於表2。
[表皮細胞之玻尿酸合成促進試驗]
將源自人類表皮細胞之角質細胞HaCaT播種至96孔盤(6000個/孔)後，以包含15%Humedia-KG2(KURABO股份有限公司製)與85%Humedia-KB2之培養基進行培養24小時。之後，將培養基交換為包含低濃度血清(0.5%)的培養基，持續培養1晝夜。之後，交換為包含所調製的東洋側柏種子的處理物之100%Humedia-KB2培養基。繼續培養2天，收集細胞培養上清液。
使用玻尿酸測定套組(Mitsubishi Chemical Medience股份有限公司製)以測定上清液中所包含之玻尿酸的量。使用Hoechst 33342(同仁化學股份有限公司製)求得之DNA量作為每1孔之細胞量。評估每單位細胞之藉由東洋側柏種子的處理物所合成促進之玻尿酸量。
由表2可確認到，本發明之東洋側柏的種子，亦即柏子仁的處理物，係具有表皮細胞之玻尿酸合成促進效果者。
此外，亦可再次確認到柏子仁之處理物係具有纖維母細胞增殖促進效、I型膠原產生促進效果。
[皺紋改善效果試驗]
接著，使用與上述試驗之東洋側柏不同的種子，確認以上述調製方法A所調製的東洋側柏種子的處理物之皺紋改善效果。
亦即，經調配(Active；藥效劑)及未調配(Placebo；安慰劑)0.35%之東洋側柏種子的有機溶劑萃取物的處理物，係表示下述表3之調配組成的皮膚外用劑(乳霜)。而且，令28名專業官能檢查員(Panelist)於兩個月內，1日兩次地將各皮膚外用劑分別塗佈於左右眼尾，並對何者之細小皺紋變得不顯眼進行評估。結果示於第2圖。
(製法)
將羧基乙烯聚合物與丙烯酸甲基丙烯酸烷基酯聚合物均勻地溶解於離子交換水，另一方面，將東洋側柏種子之處理物、甲基聚矽氧烷、甲基苯基聚矽氧烷溶解於烯烴寡聚物後，添加至水相中。接著，加入其他成份後，以苛性鈉使中和並增黏而製造。
經由第1圖可明瞭到，半數以上的官能檢查員認同調配東洋側柏種子處理物者之皺紋改善效果。
因此，本發明之東洋側柏種子，亦即柏子仁之處理物係被認同為具有皺紋改善效果者。
以下係表示作為本發明之膠原產生促進劑、玻尿酸產生促進劑、纖維母細胞增殖促進劑、抗皺紋劑的調配例之皮膚外用組成物及食品。本發明並不為此調配例所限定者。又，任一柏子仁之有機溶劑萃取物之處理物進行與上述實施例相同的試驗，皆具有優異的膠原產生促進效果、玻尿酸產生促進效果、纖維母細胞增殖促進效果、皺紋改善效果。
調配例1：乳霜
硬脂酸　5.0質量%
硬脂醇　4.0
肉豆蔻酸異丙酯　18.0
甘油單硬脂酸酯(Glycerin monostearic acid ester) 3.0
丙二醇　10.0
原膠原產生促進劑(柏子仁丙酮萃取物之處理物)　1.0
苛性鉀　0.2
亞硫酸氫鈉　0.01
防腐劑　適量
香料　適量
離子交換水　餘量
(製法)
將丙二醇與苛性鉀加入並溶解於離子交換水中，並加熱保持於70℃(水相)。與其他成分進行混合並加熱熔解保持於70℃(油相)。將油相徐緩加至水相中，全部加入後暫時保持其溫度以使反應發生。之後以均質混合機(Homomixer)均勻地乳化，並一面仔細攪拌一面冷卻至30℃而製造。
調配例2：乳霜
硬脂酸　6.0質量%
山梨醇酐單硬脂酸酯　2.0
聚氧伸乙基(20莫耳)山梨醇酐單硬脂酸酯　1.5
丙二醇　10.0
原膠原產生促進劑(柏子仁醋酸乙酯萃取物之處理物)　0.1
三辛酸甘油酯　10.0
角鯊烯　5.0
亞硫酸氫鈉　0.01
對羥基苯甲酸乙酯　0.3
香料　適量
離子交換水　餘量
(製法)
將丙二醇加入並溶解於離子交換水中，並加熱保持於70℃(水相)。與其他成分進行混合並加熱熔解保持於70℃(油相)。將油相加至水相中，進行預乳化，以均質混合機均勻地乳化後，一面仔細攪拌一面冷卻至30℃而製造。
調配例3：乳霜
硬脂醇　7.0質量%
硬脂酸　2.0
氫化羊毛脂　2.0
角鯊烷　5.0
2-辛基十二烷醇　6.0
聚氧乙烯(25莫耳)鯨臘醇醚　3.0
甘油單硬脂酸酯(Glycerin monostearic acid ester)2.0
丙二醇　5.0
原纖維母細胞增殖促進劑(柏子仁己烷萃取物之處理物)1.0
香料　適量
亞硫酸氫鈉　0.03
對羥基苯甲酸乙酯　0.3
離子交換水　餘量
(製法)
將丙二醇加入並溶解於離子交換水中，並加熱保持於70℃(水相)。與其他成分進行混合並加熱熔解保持於70℃(油相)。將油相加至水相中，進行預乳化，以均質混合機均勻地乳化後，一面仔細攪拌一面冷卻至30℃而製造。
調配例4：乳液
硬脂酸　2.5質量%
鯨臘醇　1.5
凡士林　5.0
液體石臘　10.0
聚氧伸乙基(10莫耳)單油酸酯　2.0
聚乙二醇1500　3.0
三乙醇胺　1.0
原膠原產生促進劑(柏子仁丙酮萃取物之處理物)　0.04
肌肽(Carnosine)　3.5
菸鹼醯胺(Nicotinic acid amide)　1.0
亞硫酸氫鈉　0.01
對羥基苯甲酸乙酯　0.3
羧基乙烯聚合物　0.05
香料　適量
離子交換水　餘量
(製法)
將羧基乙烯聚合物溶解於少量的離子交換水中(A相)。於剩餘的離子交換水中加入聚乙二醇1500、三乙醇胺、肌肽、與菸鹼醯胺並加熱熔解而保持於70℃(水相)。混合其他的成分並加熱熔解而保持於70℃(油相)。將油相加至水相中進行預乳化，加入A相後以均質混合機均勻地乳化，乳化後一面仔細攪拌一面冷卻至30℃而製造。
調配例5：乳液 (油相部)
硬脂醇　1.5質量%
角鯊烯　2.0
凡士林　2.5
脫臭液狀羊毛脂　1.5
月見草油　2.0
肉豆蔻酸異丙酯　5.0
甘油單油酸酯　2.0
聚氧伸乙基(60莫耳)硬化蓖麻油　2.0
醋酸生育酚　0.05
原玻尿酸產生促進劑(柏子仁丙酮萃取物之處理物)　0.01
對羥基苯甲酸乙酯　0.2
對羥基苯甲酸丁酯　0.1
乙甘胺酸　1.0
香料　適量
(水相部)
亞硫酸氫鈉　0.01
菸鹼醯胺　0.05
甘油　5.0
玻尿酸鈉　0.01
羧基乙烯聚合物　0.2
氫氧化鉀　0.2
精製水　餘量
(製法)
將油相部以70℃進行溶解。將水相部以70℃進行溶解後，將油相部混合至水相部，並以乳化機乳化後，以換熱機冷卻至30℃而製造。
調配例6：凝膠狀美容液
95%乙醇　10.0質量%
二丙二醇　15.0
聚氧伸乙基(50莫耳)油醇醚　2.0
羧基乙烯聚合物　1.0
苛性鈉　0.15
原纖維母細胞增殖促進劑(柏子仁醋酸乙酯萃取物之處理物)　2.0
視網醇(retinol)　0.04
L-精胺酸　0.1
肌胺酸　1.0
對羥基苯甲酸甲酯　0.2
香料　適量
離子交換水　餘量
(製法)
將羧基乙烯聚合物均勻地溶解於離子交換水中，另一方面，將柏子仁醋酸乙酯萃取物的處理物、聚氧伸乙基(50莫耳)油醇醚溶解於95%乙醇中，加至水相。接著，加入其他成分之後，以苛性鈉、L-精胺酸使中和，進行增黏而製造。
調配例7：美容液 (A相)
乙醇(95%)　10質量%
聚氧伸乙基(20莫耳)辛基十二醇　1.0
原膠原產生促進劑(柏子仁丙酮萃取物之處理物)　0.3
對羥基苯甲酸甲酯　0.15
泛醯基乙基醚(Pantothenyl Ethyl Ether)　0.1
(B相)
氫氧化鉀　0.1
(C相)
甘油　5.0
肌肽　3.0
菸鹼醯胺　3.0
二丙二醇　10.0
亞硫酸氫鈉　0.03
羧基乙烯聚合物　0.2
精製水　餘量
(製法)
將A相、C相分別均勻地溶解後，將A相加至C相進行可溶化。接著，加入B相後進行填充而製造。
調配例8：敷顏料 (A相)
二丙二醇　5.0質量%
聚氧伸乙基(60莫耳)硬化篦麻油　5.0
(B相)
橄欖油　5.0
原玻尿酸產生促進劑(柏子仁丙酮萃取物之處理物)　1.0
醋酸生育酚　0.2
對羥基苯甲酸乙酯　0.2
香料　0.2
(C相)
亞硫酸氫鈉　0.03
肌肽　0.1
聚乙烯醇(膠化度90，聚合度2000)　13.0
乙醇　7.0
精製水　餘量
(製法)
將A相、B相、C相分別均勻地溶解後，將B相加至A相進行可溶化。接著，將此加入C相後進行填充而製造。
調配例9：軟膏
聚氧伸乙基(30莫耳)鯨臘醚　2.0質量%
甘油單硬脂酸酯(Glycerin monostearate)　10.0
液體石臘　10.0
凡士林　40.0
鯨臘醇　6.0
對羥基苯甲酸甲酯　0.1
對羥基苯甲酸丁酯　0.1
甘油單硬脂酸酯(Glycerin monostearic acid ester)2.0
原纖維母細胞增殖促進劑(柏子仁丙酮萃取物之處理物)　5.0
丙二醇　10.0
離子交換水　餘量
香料　適量
(製法)
將丙二醇加入離子交換水，溶解加熱並保持於70℃(水相)。將其他的成分於70℃進行混合溶解(油相)。將油相加至上述水相中，以均質混合機均勻地乳化，冷卻後進行填充而製造。
以下，進行相同操作而製造調配例10至13之乳霜。
調配例10：乳霜
液體石臘　8.0質量%
凡士林　3.0
二甲基聚矽氧烷　2.0
硬脂醇　3.0
山萮醇　2.0
甘油　5.0
二丙二醇　4.0
海藻糖　1.0
新戊四醇四(2-乙基己酸酯)　4.0
單異硬酯酸聚氧伸乙基甘油酯　2.0
單硬酯酸聚氧伸乙基甘油酯　1.0
親油型單硬酯酸甘油酯　2.0
檸檬酸　0.05
檸檬酸鈉　0.05
氫氧化鉀　0.015
油溶性甘草精萃物　0.1
軟脂酸視網酯(Retinyl palmitate)(100萬單位)　0.25
原膠原產生促進劑(柏子仁醋酸乙酯萃取物之處理物)　0.3
肌肽　3.5
菸鹼醯胺　2.0
醋酸生育酚　0.1
對羥基苯甲酸甲酯　適量
苯氧乙醇　適量
二丁基羥基甲苯　適量
乙二胺四乙酸三鈉(Edetate trisodium)　0.05
4-第三丁基-4’-甲氧基二苯甲醯甲烷　0.01
對甲氧基桂皮酸-2-乙基己基酯　0.1
β-胡蘿蔔素　0.01
聚乙烯醇　0.5
羥乙基纖維素　0.5
羧基乙烯聚合物　0.05
精製水　餘量
香料　適量
調配例11：乳霜
凡士林　2.0質量%
二甲基聚矽氧烷　2.0
乙醇　5.0
山萮醇　0.5
鯊肝醇　0.2
甘油　7.0
1,3-丁二醇　5.0
聚乙二醇20000　0.5
荷荷芭油　3.0
角鯊烷　2.0
植物甾醇羥基硬脂酸酯　0.5
新戊四醇四(2-乙基己酸酯)　1.0
聚氧伸乙基硬化蓖麻油　1.0
氫氧化鉀　0.1
焦亞硫酸鈉　0.01
六偏磷酸鈉　0.05
甘草酸硬脂酯　0.1
泛醯乙基醚　0.1
熊果苷　7.0
傳明酸甲醯胺鹽酸鹽　11.0
原玻尿酸產生促進劑(柏子仁丙酮萃取物之處理物)　0.001
肌肽　3.5
醋酸生育酚　0.1
玻尿酸鈉　0.05
對羥基苯甲酸甲酯　適量
乙二胺四乙酸三鈉　0.05
4-第三丁基-4’-甲氧基二苯甲醯甲烷　0.1
對甲氧基桂皮酸單-2-乙基己酸甘油酯　0.1
黃色氧化鐵　適量
三仙膠　0.1
羧基乙烯聚合物　0.2
精製水　餘量
調配例12：乳霜
凡士林　2.0質量%
二甲基聚矽氧烷　2.0
乙醇　5.0
山萮醇　0.5
鯊肝醇　0.2
甘油　7.0
1,3-丁二醇　5.0
聚乙二醇20000　0.5
荷荷芭油　3.0
角鯊烷　2.0
植物甾醇羥基硬脂酸酯　0.5
新戊四醇四(2-乙基己酸酯)　1.0
聚氧伸乙基硬化蓖麻油　1.0
氫氧化鉀　0.1
焦亞硫酸鈉　0.01
六偏磷酸鈉　0.05
甘草酸硬脂酯　0.1
泛醯乙基醚　0.1
熊果苷　7.0
傳明酸甲醯胺鹽酸鹽　11.0
原抗皺紋劑(柏子仁丙酮萃取物之處理物)　1.0
醋酸生育酚　0.1
玻尿酸鈉　0.05
對羥基苯甲酸甲酯　適量
乙二胺四乙酸三鈉　0.05
4-第三丁基-4’-甲氧基二苯甲醯甲烷　0.1
二對甲氧基桂皮酸單-2-乙基己酸甘油酯　0.1
黃色氧化鐵　適量
三仙膠　0.1
羧基乙烯聚合物　0.2
精製水　餘量
調配例13：乳霜
凡士林　2.0質量%
二甲基聚矽氧烷　2.0
乙醇　5.0
山萮醇　0.5
鯊肝醇　0.2
甘油　7.0
1,3-丁二醇　5.0
聚乙二醇20000　0.5
荷荷芭油　3.0
角鯊烷　2.0
植物甾醇羥基硬脂酸酯　0.5
新戊四醇四(2-乙基己酸酯)　1.0
聚氧伸乙基硬化蓖麻油　1.0
氫氧化鉀　0.1
焦亞硫酸鈉　0.01
六偏磷酸鈉　0.05
甘草酸硬脂酯　0.1
泛醯乙基醚　0.1
4甲氧基苯甲酸　3.0
傳明酸甲醯胺鹽酸鹽　11.0
原膠原產生促進劑(柏子仁丙酮萃取物之處理物)　1.0
肌肽　3.5
醋酸生育酚　0.1
玻尿酸鈉　0.05
對羥基苯甲酸甲酯　適量
乙二胺四乙酸三鈉　0.05
4-第三丁基-4’-甲氧基二苯甲醯甲烷　0.1
二對甲氧基桂皮酸單-2-乙基己酸甘油酯　0.1
黃色氧化鐵　適量
三仙膠　0.1
羧基乙烯聚合物　0.2
精製水　餘量
調配例14：顯微操作用針
依照日本特開2005-152180所記載的方法作為製造方法，組成如以下。
麥芽糖(Maltose)　94.5質量%
葡聚糖(Dextran)　5.0
氯沙坦(Losartan)　0.1
原膠玻尿酸產生促進劑(柏子仁醋酸乙酯萃取物之處理物)　1.0
調配例15：軟膠囊(1,500mg/日)
食用大豆油　530mg
杜仲精萃物　50
蘿蔔精萃物　50
原膠原產生促進劑(柏子仁含水乙醇萃取物之處理物)　100
蜂王漿　50
瑪卡(Maca)　30
γ-胺基丁酸(GABA)　30
蜜臘　60
明膠　375
甘油　120
甘油脂肪酸酯　105
第1圖表示比較東洋側柏種子的水萃取物與該種子之有機溶劑萃取物的處理物之膠原產生促進效果之圖。
第2圖表示東洋側柏種子的有機溶劑萃取物的處理物之皺紋改善效果之圖。
由於本案的圖為實驗數據圖，並非本案的代表圖。故本案無指定代表圖。

Claims (10)

  1. 一種膠原產生促進劑，其特徵在於：將所屬為柏木料(Cupressaceae)側柏屬(Platycladus)之植物的種子，使用有機溶劑進行萃取而得到含有油性成分的萃取物，將該萃取物之溶劑的一部分或全部餾除之後，添加濃度0.5至15N之鹼性水溶液並混合，接著進行酸處理後水洗而得。
  2. 一種玻尿酸產生促進劑，其特徵在於：將所屬為柏木料側柏屬之植物的種子，使用有機溶劑進行萃取而得到含有油性成分的萃取物，將該萃取物之溶劑的一部分或全部餾除之後，添加濃度0.5至15N之鹼性水溶液並混合，接著進行酸處理後水洗而得。
  3. 一種纖維母細胞增殖促進劑，其特徵在於：將所屬為柏木科側柏屬之植物的種子，使用有機溶劑進行萃取而得到含有油性成分的萃取物，將該萃取物之溶劑的一部分或全部餾除之後，添加濃度0.5至15N之鹼性水溶液並混合，接著進行酸處理後水洗而得。
  4. 一種抗皺紋劑，其特徵在於：將所屬為柏木科側柏屬之植物的種子，使用有機溶劑進行萃取而得到含有油性成分的萃取物，將該萃取物之溶劑的一部分或全部餾除之後，添加濃度0.5至15N之鹼性水溶液並混合，接著進行酸處理後水洗而得。
  5. 如申請專利範圍第1項至第4項中任一項所述之促進劑或抗皺紋劑，其中，添加的純鹼量為100至300g/L萃取物者。
  6. 如申請專利範圍第1項至第5項中任一項所述之促進劑或抗皺紋劑，其中，所屬為柏木料側柏屬之植物為東洋側柏(Platycladus orientalis)者。
  7. 一種膠原產生促進方法，其特徵在於塗佈申請專利範圍第1項所述之膠原產生促進劑。
  8. 一種玻尿酸產生促進方法，其特徵在於塗佈申請專利範圍第2項所述之玻尿酸產生促進劑。
  9. 一種纖維母細胞增殖促進方法，其特徵在於塗佈申請專利範圍第3項所述之纖維母細胞增殖促進劑。
  10. 一種皺紋改善方法，其特徵在於塗佈申請專利範圍第4項所述之抗皺紋劑。
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