TW201244733A - Hot flash suppressant - Google Patents

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201244733 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於-種因更年期障礙而產生之臉潮紅之抑制 劑，進而係關於一種臉潮紅之改善方法。 【先前技術】 更年期障礙之一之臉潮紅（體表溫度之局部上升及伴隨 於此之上火、潮熱、臉紅及多汗）為停經期/停經後症候群 (P〇Stmenopausal syndrome)之通常症狀。一般認為女性激 素（雌激素等）之下降係以臉潮紅為代表之更年期障礙之原 因，有時於青年人之女性中亦由於過度之壓力或節食等而 激素失衡’呈現出與更年期障礙同樣之症狀。有時進行女 性激素之補充作為该荨更年期障礙及與更年期障礙同樣之 症狀的治療法。然而，已知女性激素之補充療法會產生乳 癌、子宮内膜癌等之發癌風險上升的副作用，長期之女性 激素補充療法欠佳。迄今為止，為代替女性激素補充療法 之臉潮紅之預防或治療，確定有成為針對具有血管擴張特 性之CGRP(Calcitonin Gene-Related Peptide，降弼素基因 相關肽）之拮抗劑（日本專利特開2008-5255 10號公報）、及 參與臉潮紅之性腺刺激激素釋放素之拮抗劑（日本專利特 表2002-512976號公報、日本專利特開2008-195728號公報） 的化合物。 愛帕琳（apelin)係於1998年作為針對長期之孤兒受體即7次 跨膜型之G蛋白共軛型受體即APJ之結合因子而自牛之胃之 細胞萃取液中單離出的分子。愛帕琳之cDNA(complementary 163543.doc 201244733

Deoxyribonucleic acid，互補型去氧核糖核酸）編碼77個胺 基酸’由其前驅物形成長型（42〜77個胺基酸）與短型（65〜77 個胺基酸）。已知任一種愛帕琳均會誘導Apj之活化。迄今 為止，報告有於心血管系統或中梅神經系統中之Apj之表 現’並且暗示有於心臟中控制心肌收縮作用、於神經系統 中控制血管加壓素之表現等參與體液之調節機制的情況。 又，APJ係作為愛滋病病毒之受體亦參與感染因此作為出 於各種觀點之藥物開發之目標而突然備受注目的受體。一 般認為APJ之表現係於血管系統中，於血管内皮細胞或壁 細胞中表現，於使用非洲爪蟾之基因弱化之實驗中，顯示 愛帕琳/APJ系統對血管發育發揮必需之作用，又，關於小 白鼠或人，亦於内皮細胞中確認到本受體之表現，因此預 測其於哺乳類體中參與金管形成（實驗醫學v〇l 26，n〇.9 (2008)，ΡΡ· 138〇_1383)。又，近年來，藉由愛帕琳基因剔 除小白鼠之解析或試管内之血管系統解析，報告有血管内 皮細胞因Angl而受到刺激時所分泌之愛帕琳會控制血管徑

temporal role of the apelin/APJ (Kidoya et al, (2008) Spatial and during ，關於 system in the caliber size regulation of blood vessels angiogenesis. EMB0 j 27 : 522_534)。然而迄今為止 愛帕琳參與臉潮紅之抑制或改善的情況完全不明。 【發明内容】 [發明所欲解決之問題] 關於更年期障礙之一之臉潮紅的抑制或改善，迄今為止 未報告有可充分地滿足臨床需求之醫藥品。因此，本發明 163543.doc 201244733 之課題在於提供一種臉潮紅之抑制劑、及用以改善臉潮紅 之方法。再者，於本發明中’所謂抑制劑，係指包含治療 劑、預防劑及改善劑者，改善方法係指包括治療方法、預 防方法及抑制方法者。 • [解決問題之技術手段] • 本發明者等人為研究愛帕琳與因更年期障礙所導致之體 表溫度之局部上升及伴隨於此之潮熱的關係，關於實施過 印巢摘除之導入有使愛帕琳於表皮中高效表現之基因的小 白鼠（更年期愛帕琳高效表現小白鼠）及野生型小白鼠（更年 期野生型小白鼠)’比較投予血管擴張劑後之尾部溫度。 子更年期野生型小白鼠投予血管擴張劑後之尾部溫度之變 化的測疋確立為更年期障礙之臉潮紅之樣本M， Yamauchi A, Tominaga K, Koga A, Kai H, Kataoka Y： Soybean isoflavones eliminate nifedipine induced flushing skin in ovariectomized mice, J Pharmacol Sci 2004, 95: 476-478)。於該實驗中，本發明者等人確認：於更年 期野生型小白鼠中’上升之皮膚溫度長時間持續，另一方 面，於更年期愛帕琳高效表現小白鼠中，與更年期野生型 小白鼠相比，尾部溫度於較早時期降低至正常值。該結果 顯示’愛帕琳有助於臉潮紅之抑制或改善。 本發明者等人基於上述見解，提供一種筛選臉潮紅之抑 制劑之方法。該方法之特徵在於：選定亢進皮膚細胞中之 内因性愛帕琳之表現之藥劑或活化愛帕琳受體之藥劑作為 臉潮紅抑制劑。内因性愛帕琳之表現之亢進例如可藉由直 163543.doc 201244733 接測定皮膚細胞中之愛帕琳之董而決定，又，愛帕琳受體 之活化可藉由測定皮膚細胞中之鈣離子濃度、 cAMP(Cyclic Adenosine monophosphate，環鱗酸腺苷）濃度 等而決定。如此決定之活化愛帕琳受體之藥劑，即愛帕琳 受體之促效劑較佳為具有類愛帕琳之作用之物質。 如此’本發明者等人開發利用愛帕琳/APJ訊息系統之筛 選，並對各種物質進行篩選，結果獲得如下令人震驚之見 解：作為類愛帕琳藥劑，即具有與愛帕琳同樣之功能之藥 劑，寒莓、紫苑、野木瓜、中南懸鉤子、馬蘭、石櫟、楊 梅、蒲桃及抱櫟之植物體或其萃取物、進而番紅花萃取 物、松樹萃取物、金雞納萃取物及康福利草萃取物、黃答 根萃取物、迷迭香萃取物、杏仁粒、龍膽萃取物、百里香 萃取物、薄何末、大棗萃取物、啤酒花萃取物、奇異果萃 取物、羅馬洋甘菊萃取物、蘋果萃取物 '山楂萃取物及薑 黃萃取物使APJ活化’具有與愛帕琳同樣之功能。因此， 該等物質與愛帕琳同樣地用於臉潮紅之抑制、改善、治療 及/或預防。 本申請案包括以下發明： (1) 一種臉潮紅之抑制劑，其係含有愛帕琳或愛帕琳受體 之促效劑而成。 (2) 如上述（1)之臉潮紅抑制劑，其中上述愛帕琳為如下 之： (a) 包含序列號1所示之胺基酸序列之蛋白質，或 (b) 包含於序列號1之胺基酸序列中缺失、取代或加成 163S43.doc 201244733 有1個或數個胺基酸之胺基酸序列、且具有愛帕琳活性之 蛋白質。 (3) 如上述（1)之臉潮紅抑制劑，其中上述愛帕琳受體之促 效劑係選自由寒莓、紫苑、野木瓜、中南懸鉤子、馬蘭、 石櫟、楊梅、蒲桃及抱櫟之植物體或其萃取物、進而番紅 花萃取物、松樹萃取物、金雞納萃取物及康福利草萃取 物、黃芩根萃取物、迷迭香萃取物、杏仁粒、龍膽萃取 物、百里香萃取物、薄荷末、大棗萃取物、哞酒花萃取 物、奇異果萃取物、羅馬洋甘菊萃取物、蘋果萃取物、山 楂萃取物及薑黃萃取物所組成之群中。 (4) 一種臉潮紅之治療 '改善或預防方法，其包括對需要 改善臉潮紅之對象者投予愛帕琳或愛帕琳受體之促效劑。 (5) 如上述（4)之臉潮紅之治療、改善或預防方法，其中上 述愛帕琳係如下之： 0)包含序列號1所示之胺基酸序列之蛋白質，或 (b)包含於序列號1之胺基酸序列中缺失、置換或加成 有1個或數個胺基酸之胺基酸序列、且具有愛帕琳活性之 蛋白質》 (6) 如上述（4)之臉潮紅之治療、改善或預防方法，其中上 述愛帕琳受體之促效劑係選自由寒莓、紫苑、野木瓜、中 南懸鉤子、馬籣、石櫟、楊梅、蒲桃及抱櫟之植物體或其 萃取物、進而番紅花萃取物、松樹萃取物、金雞納萃取物 及康福利草萃取物、黃芩根萃取物、迷迭香萃取物、杏仁 粒、龍膽萃取物、百里香萃取物、薄荷末、大棗萃取物、 163543.doc 201244733 啤酒彳b萃取物、奇異果萃取物、羅馬洋甘菊萃取物、蘋果 萃取物、山揸萃取物及薑黃萃取物所組成之群中。 (7) —種用以抑制臉潮紅之用途，其係愛帕琳或愛帕琳受 體之促效劑之用途。 (8) 如上述（7)之用以抑制臉潮紅之用途，其中上述愛帕琳 係如下之： (a) 包含序列號1所示之胺基酸序列之蛋白質，或 (b) 包含於序列號1之胺基酸序列中缺失、取代或加成 有1個或數個胺基酸之胺基酸序列、且具有愛帕琳活性之 蛋白質。 (9) 如上述（7)之用以抑制臉潮紅之用途，其中上述愛帕琳 受體之促效劑係選自由寒莓、紫苑、野木瓜、野木瓜、馬 蘭、石櫟、楊梅、蒲桃及抱櫟之植物體或其萃取物、進而 番紅ib萃取物、松樹萃取物、金雞納萃取物及康福利草萃 取物、黃芩根萃取物 '迷迭香萃取物、杏仁粒、龍膽萃取 物、百里香萃取物、薄荷末、大棗萃取物、啤酒花萃取 物、奇異果萃取物、羅馬洋甘菊萃取物、蘋果萃取物、山 揸萃取物及薑黃萃取物所組成之群中。 (10) —種愛帕琳或愛帕琳受體之促效劑之用途，其係用 於製造用以抑制臉潮紅之製劑。 (11) 如上述（7)之用途’其中上述愛帕琳係如下之： (a) 包含序列號1所示之胺基酸序列之蛋白質，或 (b) 包含於序列號1之胺基酸序列中缺失、取代或加 成有1個或數個胺基酸之胺基酸序列、且具有愛帕琳活性 I63543.doc 201244733 之蛋白質。 (12) 如上述（7)之用途，其中上述愛帕琳受體之促效劑係 選自由寒莓、紫苑、野木瓜、中南懸鉤子、馬蘭、石櫟、 揚梅、蒲桃及抱櫟之植物體或其萃取物、進而番紅花萃取 物、松樹萃取物、金雞納萃取物及康福利草萃取物、黃芩 根萃取物、迷迭香萃取物、杏仁粒、龍膽萃取物、百里香 萃取物、薄荷末、大棗萃取物、啤酒花萃取物、奇異果萃 取物、羅馬洋甘菊萃取物、蘋果萃取物、山揸萃取物及薑 黃萃取物所組成之群中。 (13) —種愛帕琳受體之促效劑，其係選自由寒莓、紫 苑、野木瓜、中南懸鉤子、馬蘭、石櫟、揚梅、蒲桃及抱 櫟之植物體或其萃取物、進而番紅花萃取物、松樹萃取 物、金雞納萃取物及康福利草萃取物、黃芩根萃取物、迷 迭香萃取物、杏仁粒、龍膽萃取物、百里香萃取物、薄荷 末、大棗萃取物、啤酒花萃取物、奇異果萃取物、羅馬洋 甘菊萃取物、蘋果萃取物、山楂萃取物及薑黃萃取物所組 成之群中。 (14) -種臉潮紅抑制劑之筛選方法，其係、以愛帕琳受體 之活性或愛帕琳之表現為指標。 (15) —種臉潮紅抑制劑，其係藉由如上述（14)之篩選方法 而獲得。 (16) —種臉潮紅之抑制劑，其包含含有編碼愛帕琳之基 因而成之載體。 [發明之效果] 163543.doc 201244733 藉由使用本發明之包含愛帕琳或愛帕琳受體之促效劑的 臉潮紅抑制劑，可抑制、治療、預防或改善更年期障礙之 一之臉潮紅，即體表溫度之局部上升及伴隨於此之潮熱、 上火、臉紅、多汗等症狀。 【實施方式】 於本發明之1之態樣中，本發明係關於一種含有愛帕琳 或愛帕琳受體之促效劑而成的臉潮紅之抑制劑。 報告有人類愛帕琳於心臟、肺、腎臟、脂肪、胃、腦、 腎上腺、内皮等各種部位中之表現，且其作為包含源自77 個胺基酸之則驅蛋白質之36個胺基酸的愛帕琳apj受體之 配體而為人所知（Kawamata Y et al, (2001) Molecular properties

of apelin. tissue distribution and receptor binding. BIOCHMICA ET BIOPHYSICA ACTA. 2-3: 162-171)。又，於愛帕琳中，亦 已知其胺基酸缺少N末端及/或C末端之變異體，例如愛帕 琳-13(包含愛帕琳之第24〜3 6號胺基酸序列之多肽）等，因 此，於本說明書中，於稱為「愛帕琳」之情形時，並不限 定於包含序列號1所表示之36個胺基酸之全長人類愛帕 琳’只要具有愛帕琳之活性，則亦包括缺失、取代或加成 有其1個或數個胺基酸之愛帕琳變異體，以及該等之片 段。缺失、取代或加成之胺基酸之數較佳為丨〜5、丨〜3或 1〜2個。又，於愛帕琳中，不僅包括源自人類者，亦包括 源自人類以外之靈長類、或大白鼠、小白氣、兔子等键齒 動物者。進而於愛帕琳中，亦包括相對於含有序列號i所 表示之36個胺基酸之全長人類愛帕琳具有至少70%、較佳 163543.doc -10- 201244733 為至少80%、 、進而較佳為至少90%之序列同源性

為超過99% 〇 之序列的 t態樣中，上述愛帕琳變異體 ’進而較佳為超過98°/〇，®估 進而，所謂本說明書中所說之編碼愛帕琳之基因 進而， 碼愛帕琳之基因以外，亦包括缺失、 ，除編 取代或加成有其1個 或數個核㈣且編碼具有愛帕琳活性之多肽的基因，進而 包括對於編碼愛帕琳之基因於嚴格度較高之條件下使其雜 交、且編碼具有愛帕琳活性之多肽的基因。此處，所謂 愛帕琳活性」，係定義為藉由愛帕琳與其受體即結合 而使細胞内訊息傳遞分子即A k t (絲胺酸/蘇胺酸蛋白激酶） 磷酸化，或降低細胞内之cAMP濃度，再者，所謂嚴格度 較南之雜父條件，係指包括例如納濃度為約1 〇〜4〇、 較佳為約20 mM，溫度為約50〜70t、較佳為約6〇〜65°C之 條件。 APJ受體亦稱為AGTRL1(類血管收縮素受體1)，為〇蛋白 共輕型受體（GPCR(Guanosine-binding Protein Coupled Receptor))之1，包含380個胺基酸》該跨膜區顯示與血管 收縮素（AT1)受體40〜50%之同源性。報告有愛帕琳/APJ訊 息於血管中為ANG1/Tie2之下游訊息，且參與心肌之收 縮、或血壓及血流以及血管形成（Kidoya et al，（2008)， Spatial and temporal role of the apelin/APJ system in the caliber size regulation of blood vessels during angiogenesis. EMBO J 27: 522-534)。已知APJ受體與包含α次單元（約40〜50 163543.doc 201244733 kDa)、β次單元（約35 kDa)及γ次單元（約10 kDa)之異型三 聚物G蛋白共軛，並與訊息傳遞（訊息）級聯相關《於APJ受 體未活化之狀態下，α、β、γ之各次單元牢固地結合，但 藉由愛帕琳結合於APJ受體上，而使APJ受體活化，並弓丨 起與α次單元結合之GDP(Guanosine Diphosphate，鳥苦二 填酸）與GTP(Guanosine Triphosphate，鳥苷三填酸）之交換 反應’而解離成GTP結合型α次單元與βγ次單元《該等次 單元中，使各標靶蛋白質、酵素活化，並將訊息向下游傳 遞。其後’結合於α次單元上之GTP藉由α次單元之 GTPase(GTP酵素）活性而分解形成GDP，GDP結合型α次單 元與βγ次單元結合’再次形成不活潑型之三聚物e三聚物 G蛋白根據α次單元之功能及基因之不同，分類為Gs、

Gi、Go、Gq、Gt、Golf 等子族（subfamily)。〇s與 Gi分別亢 進或抑制腺苦酸環化酵素之活性，Go與神經組織之訊息傳 遞系統相關，Gq使磷脂酵素CP活化，且Gt與G〇if*別對視 細胞（網膜）與嗅覺細胞之訊息傳遞系統發揮重要作用。於 APJ受體與愛帕琳結合之情形時，經由⑴路徑抑制腺苦酸 環化酵素之活性，因此其結果為細胞内之cAMp濃度下 降0 於本發明中，所謂愛帕琳受體促效劑，係指與發揮與愛 帕琳同樣之作用之物質即類愛㈣藥劑相同意義地使用， 且經由愛帕琳受體而發揮與愛帕琳同樣之作用的物質。作 為愛帕琳受體促效劑，於本說明書中雖確定有各種物質， 但並不限定於該等。 I63543.doc •12· 201244733 於本發明中，所謂臉潮紅，係由隨著女性激素之減少而 控制腦之下丘腦之自主神經紊亂、體溫調節機能下降所弓丨 起的症狀，指體表溫度之局部上升及伴隨於此之潮熱、上 火、臉紅及多汗之症狀。本發明之臉潮紅尤其指表現為更 年期障礙之臉潮紅。 於本發明中，所謂臉潮紅之抑制劑，係指對臉潮紅之症 狀即體表溫度之局部上升及伴隨於此之潮熱、上火、臉 紅、及多汗之症狀進行抑制、緩解、治療、改善、或預防 藥齊I本發明之臉潮紅抑制劑係包含愛帕琳或愛帕琳受 體之促效劑者，亦可單獨或組合複數種成分含有該等成 分。於本發明中，所謂抑制劑，係指包括治療劑、預防 劑、及改善劑者。 本發明之臉潮紅抑制劑可單獨使用，亦可結合盆使用目 的而組合溶劑、賦形劑或其他成分，並適當決定用量、用 法1型。例如，本發明之抑制劑之投予形態可為經口、 非經口、外用等。作為製劑之劑型，例如可列舉：片劑、 粉劑、膠囊劑、顆粒劑、浸膏劑、糖襞劑等經口投予劑’ 或注射劑、點滴劑、或栓齊 霜、乳液、洗劑、洛㈣等外用^ ^予劑'軟f、乳 體:::::潮紅抑制劍中本發明之愛帕琳等或愛帕琳受 製劑中AO W劑的§周配量可視用途而適當決定，通常於 Γ 1〜2G.Gff%，較佳為~〇質量 除愛帕琳或愛帕琳受 又於本發明之臉潮紅抑制劑中 I63543.doc -J3. 201244733 體促效劑以外’例如亦可視需要而適當調配通常用於食。 或醫藥品中之賦形劑、乾燥劑、防腐劑、強化劑、增： 劑、乳化劑、抗氧化劑、甜味劑、酸味劑、調味料、^色 料'香料等，通常用於化妝品等中之美白劑、保濕劑、油 性成分、紫外線吸收劑、界面活性劑、增黏劑、醇類、粉 末成分、色料、水性成分、水、各種皮膚營養劑等。 於本發明之另一態樣中，本發明係關於一種包括投予愛 帕琳或愛帕琳受體之促效劑的臉潮紅之改善方法。於該情 形時，對患有臉潮、红之症狀即體表溫度之局部上升及伴= 於此之上火、潮熱、臉紅或多汗中之任一種或其组合的人 投予愛帕琳或愛帕琳受體之促效劑。所謂本發明之改善方 法’係指包括治療方法、預防方〉去、及抑制方法者。愛帕 琳或愛帕琳受體之促效劑係藉由經口、非經口(靜脈内、 動脈内、經皮、經黏膜）投予而投予。 於本發明之另—態樣中’本發明係關於—種筛選臉潮紅 之抑制劑之方法。該方法係藉由以愛帕琳受體之活性或愛 帕琳之表現為指標而進行。 以愛帕琳受體之活性為指標之筛選臉潮紅之抑制劑的方 法可藉由測定皮膚細胞中之㈣子濃度、cAM^度等而 以愛帕琳受體之活化為指標。此處，活化愛帕琳受：之藥 劑係愛帕琳受體促效劑，因此本發明亦關於一種篩選愛帕 琳受體促效劑之方法。於候補藥劑可降低皮膚細胞中之鈣 離子遭度、eAMP之情形時，可將該等候補藥劑決定為愛 帕琳受體促效劑或臉潮紅之抑制劑。進而於將愛帕琳受體 163543.doc •14· 201244733 之中和抗體與如此選擇之候補藥劑一起使用進行二次篩選 而使鈣離子/農度或c AMP濃度某種程度地恢復的情形時， 可將該候補藥劑決定為愛帕琳受體促效劑或臉湖紅之抑制 劑。如此決定之活化愛帕琳受體之藥劑，即愛帕琳受體之 促效劑只要使愛帕琳受體活化則可為任意物質，例如為化 合物、萃取物，較佳為類愛帕琳之肽。 更具體而言’本發明之類愛帕琳藥劑之篩選如下：首 先，作為1次筛選，將轉染有eAMp螢光素酵素報告载體之 單離細胞（例如NIH_3T3細胞）播種於96孔板上，向其中添 加候補藥劑加以預培養，於利用佛司可林使腺苦酸環化酵 素活化後’對螢光素酵素之發光利用照度計（例如 G刚’ ％麻_咖匕-咖…仍__測定 CAMP濃度’而選定抑制由佛司可林所導致之cAMP濃度上 升之樂劑。並且，繼而，為確認CAMP濃度之下降係經由 AP:之活化，而作為2次筛選’一併添加於1次筛選令選定 之樂劑與愛帕琳中和抗體（例如為4G5)，而進行與1次筛選 冋樣之榮光素酵素分析。其結果為，藉由中和抗體之添 加’可選定抑制cAMP濃度之下降，並使cAMp濃度之 恢復至8G%以上、較佳為9_上、最佳為1嶋的藥劑作 為類愛帕琳藥劑。 ,、關於以内因性愛帕琳為指標之篩選臉潮紅之抑制劑的方 特徵在於.其係以皮膚細胞中之内因性愛帕琳之表 為^ ^並選疋定進皮膚細胞中之内因性愛帕琳之表現 的藥劑作為臉潮紅抑制劑。關於筛選臉潮紅之抑制劑之方 I63543.doc 201244733 法的一態樣即内因性愛帕琳之表現之抗進，例如可藉由直 接測定皮膚細胞中之愛帕琳之量而決定。皮膚細胞中之愛 帕琳之量的測定可利用對愛帕琳利特異之抗體，並藉由於 該業界中周知之方法，例如利用螢光物質、色素、酵素等 之免疫染色法’西方墨點法，免疫測定法，例如 ELISA(Enzyme Linked Immunosorbent Assay，酵素結合免 疫吸附分析）法、RIA(Radio Immuno Assay，放射免疫分 析）法等各種方法而實施。又，亦可藉由自皮膚細胞中萃 取RNA(Ribonucleic Acid，核糖核酸）並對編碼愛帕琳之 mRNA之量進行測定而決定。mRNA之萃取及其量之測定 亦於業界中周知，例如rNA之定量亦可藉由定量聚合酵素 鏈式反應法（PCR，Polymerase Chain Reaction)而進行。除 上述以外’亦可藉由測定愛帕琳之已知之生物活性而測定 愛帕琳之表現量》除此以外，愛帕琳之表現可藉由in situ(原位）雜交法或其生物活性之測定而決定◊例如，若 皮膚細胞中之内因性愛帕琳之表現與對照值相比抗進3〇0/〇 以上' 較佳為50%以上、更佳為70%以上、最佳為1 〇〇%以 上’則可判斷為「臉潮紅之抑制劑」。作為對照值，並無 限疋’例如只要為統計學上有意義之數（例如丨〇人份以 上較佳為1 〇〇人扮以上）之健康人於對應之部位之皮膚細 胞中内因性愛帕琳之表現量的平均值即可。 於本說明書中，皮膚細胞中包括表皮細胞、纖維母細 胞、血管/淋巴管内皮細胞、脂肪細胞，尤其是表皮細胞 中包括角化細胞、顆粒細胞、有棘細胞等，可源自人類， 163543.doc -16- 201244733 亦可源自其他動物，例如大白鼠、小白鼠'兔子等。 一於較佳之態樣中，上述篩選方法進而包括··將具有上述 亢進能力之候補藥劑應用於投予有血管擴張劑之更年期樣 本動物’例如去除印巢之動物’並確認於可排除内臟溫度 :影響之部位中的體溫下降效果。可較佳排除内臟溫度之 影響之部位為尾部’尾部之體溫可使用熱影像分析儀進行 測定。 本發明者此次藉由以愛帕琳受體之活性為指標之篩選方 法而獲得如下見解：包括寒葛、紫苑、野木瓜、中南懸鉤 子、馬蘭、石櫟、楊梅、蒲桃及抱櫟之植物體或其萃取 物、進而番紅花萃取物、松樹萃取物、金雞納萃取物及康 福利草萃取物、黃芩根萃取物、迷迭香萃取物杏仁粒、 龍膽萃取物、百里香萃取物、薄荷末、大棗萃取物、啤酒 粑萃取物、奇異果萃取物、羅馬洋甘菊萃取物、蘋果萃取 物、山楂萃取物及薑黃萃取物之植物體或其萃取物使愛帕 琳受體即APJ活化’據此，具有與愛帕琳同樣之功能之可 能性極高。因此，根據本發明，提供一種含有選自由寒 莓、紫苑、野木瓜、中南懸鉤子、馬蘭、石櫟、楊梅、蒲 桃及抱櫟之植物體或其萃取物、進而番紅花萃取物、松樹 萃取物、金雞納萃取物及康福利草萃取物、黃芩根萃取 物、迷迭香萃取物、杏仁粒、龍膽萃取物、百里香萃取 物、薄荷末、大棗萃取物、啤酒花萃取物、奇異果萃取 物、羅馬洋甘菊萃取物、蘋果萃取物、山楂萃取物及薑黃 萃取物所組成之群中之1種或複數種成分而成的愛帕琳受 163543.doc •17· 201244733 體促效劑。 進而’本發明者等人如上所述般發現 解：於更年期障礙之臉潮紅之樣本中，顯：：人震驚之見 臉潮紅之抑制、改善、預防…。不愛帕琳有助於 方法而n β /α 。因此，藉由上述篩選 ==活化愛帕琳受體之愛帕琳受體促效劑係用於 Γ=Γ善、預防或治療。因此，提供-種含有 成的臉如受體促效劑之群中之1種或複數種成分而 成的臉潮紅之抑制劑。 寒每（Rubus buergeri)係分類為薔薇科草㈣之植物之一 種，為常綠蔓性小灌木。分佈於曰本之九州 '四國、關東 以西之本州或中國中南部、臺灣、朝鮮半島南部，果實於 π月至1月成熟，為所謂木苺之形狀，可食用。 紫苑（Aster yomena)係菊科之多年生草本植物，分佈於 曰本之中部地方以西之本州、四國、九州。通常係作為野 菊之一種而為人所知，於秋季開淡紫色或白色之菊花。嫩 芽可食用。 野木瓜（Stauntonia hexaphylla)係木通科野木瓜屬之常綠 蔓性木本植物，亦稱為常葉木通。分佈於日本之本州 '關 東以西’臺灣，中國。果實可食用，又，莖或根具有利尿 作用，可用作天然藥材。 中南懸鉤子（Rubus grayana)係分類為薔薇科木莓屬之植 物之一種，為落葉灌木。亦稱為中南懸鉤子（Rubus grayanus Maxim)，分佈於日本之種子島、屋久島以南至琉 球各島沿岸之山地、臺灣之暖帶、亞熱帶。於4月〜5月開 163543.doc • 18 - 201244733 花，果實為橙色，可食用。 馬蘭（Kalimeris indica)係分類為菊科冑苑屬之植物之一 種，為常綠之多年生草本植物。原產於南亞，於日本分佈 於四國、九州南部以南之沖繩等。高度為30⑽左右，於 秋季開花°由於較紫苑小1，因此亦稱為小紫苑。與紫 苑相同’嫩芽可食用。 石櫟（Uth〇carpus eduiis)係山毛棒科之常綠喬木分佈 ;自日本之本州之房總半島之南端、紀伊半島、九州至西 南諸島之溫暖之沿海地區。由於果實幾乎不含鞣酸，故而 無需去除料，可直接炒製食用。亦可粉碎成粉狀與曲奇 之麵團混合而食用。 楊梅（Myrica rubra)係原產於中國大陸或日本之揚梅目楊 梅科之常綠樹，果實除生食以外，可利用於果醬或果酒等 飲食品中。又，亦報告有可用作脂肪分解促進劑。 蒲桃（SyZygium jambos)係原產於東南亞之蒲桃科之常綠 喬木，果實味道較淡，但有如薔薇之芳香，可食用。又， 亦報告有可用作抗肥胖劑。 抱櫟（Quercus serrate)係分佈於北海道、本州、四國、 九州、朝鮮半島、中國之山毛櫸目山毛櫸科抱櫟屬之落葉 闊葉樹，木材可用作木炭之原料或香菇之原木，果實藉由 去除澀味亦可食用》報告有可用作肥胖預防劑。 該等9種植物亦廣泛分佈於日本，且亦有栽培，因此為 可谷易地獲得之植物。 番紅花萃取物係源自原產於地中海沿岸或小亞細亞之水 I63543.doc 201244733 1蒲科之多年生草本植物番紅花（Cr0cus sativus L.)的萃取 物，可將該植物之球根、根、葉、莖 '花、花柱、整個植 物用作原材料’較佳為花柱。已知，番紅花萃取物含有類 胡蘿g素糖苦即藏花素、藏紅花苦武、番紅花酸等成分， 具有血流促進作用或皮膚細胞活性作用。 松樹萃取物係源自廣泛地分佈於西伯利亞、歐洲、亞 洲，於日本亦被視為通常之植被之黑松、 赤权（Pinus densiflora)等常綠針葉樹即松樹屬（pinus)植物 的萃取物’可將該植物之根、葉、樹皮、毬果、整個植物 用作原材料’較佳為樹皮。6知，松樹萃取物含有多糖類 或胺基酸等成分，具有保濕作用或柔軟作用。 金雞納萃取物係源自原產於熱帶地區之常綠樹即金雞納 屬（Cinchona)植物的萃取物，可將該植物之根、葉樹 皮、花、整個植物用作原材料，較佳為樹皮。已知，金雞 納萃取物含有奎尼丁、奎寧、辛可甯等成分，具有保濕作 用或血流促進作用。 康福利草萃取物係源自原產於歐洲，於日本亦廣泛栽培 之多年生草木即聚合草（英文名：c〇mfrey)(Symphytum officinale)的萃取物’可將根、葉、莖、花、整個植物用 作原材料，較佳為葉。已知，康福利草萃取物含有尿囊 素、鞣酸、維生素類等成分，具有消炎作用或保濕作用。 黃芩根萃取物係源自紫蘇科黃芩屬之多年生草本植物、 且為原產於中國大陸北部之黃芩（SciUe丨丨baicalensis)之 根（黃芩根）的萃取物，已知具有抗老化作用，可用作生活 163543.doc •20· 201244733 習慣疾病等之治療藥或化妝品等之有效成分。 迷送香萃取物係源自原產於地中海沿岸之紫蘇科之常綠 灌木即迷迭香（Rosmarinus officinalis)的芳香性萃取物，可 將該植物之根、葉、莖、花、整個植物用作原材料。已知 具有交感神經活化作用或痩身作用，可用作醫藥品、食 品、化妝品等之有效成分。 杏仁粒係將原產於中國大陸北部之苦杏仁（prunus armeniaca l.)或其親緣植物之種子之内果皮粉碎而製作的 粒狀之原料。杏仁粒亦可直接粉碎或將經乾燥者粉碎而製 成乾燥粉末’或者利用溶劑萃取該等原料，製成萃取物而 使用。已知杏仁粒或其萃取物具有脂肪分解促進作用或痩 身作用’可用作醫藥品或化妝品等之有效成分。 龍膽萃取物係源自原產於歐洲之龍膽科之多年生草本植 物即龍膽（Gentiana lutea)的萃取物，可將該植物之根、 葉、莖、花、整個植物用作原材料。已知具有脂肪分解作 用或痩身作用’可用作醫藥品或化狀品等之有效成分。 百里香萃取物係源自原產於歐洲 '北非、亞洲之屬於紫 蘇科百里香屬（Thymus)之植物 '尤其是百里香（__ thyme)的萃取物，可將該植物之根、葉、莖、花、整個植 物用作原材料。已知具有脂肪分解作用，可用作醫藥品或 食品、化妝品等之成分。 薄荷末係將原產於地中海沿岸、歐洲、亞洲東部之紫蘇 科薄荷屬（Mentha)之多年生草本植物的全草乾燥而製成粉 末者。已知具有脂肪燃燒作用，可廣泛地用作醫藥品或食 163543.doc 201244733 品、化妝品等之成分。 大棗萃取物係源自原產於歐洲之鼠李科棗（ziziphus jujuba)之萃取物，可將該植物之植物全株尤其是未成熟 果實用作原材料。已知具有痩身作用，可用作醫藥品或食 品、化妝品等之成分。 皁酒花萃取物係源自原產於歐洲之桑樹科植物啤酒花 (Humulus lupulus)的萃取物，可將該植物之植物全株尤 其是雌花穗用作原材料。已知具有脂肪細胞分化抑制作用 及抗炎症作用，可用作與肥胖或伴隨肥胖之疾病 '炎症反 應相關之病理學狀態的治療藥，或食品 '化妝品之成分。 奇異果萃取物係源自原產於中國之獼猴桃科獼猴桃屬之 雌雄異株之奇異果（Actinidia deliciosa)的萃取物，可將該 植物之植物全株、尤其是果實用作原材料。報告有具有抗 肥胖作用，可用作高血壓症、高脂血症、肥胖症等之治療 藥，或食品、化妝品之成分。 羅馬洋甘菊萃取物係源自原產於歐洲之菊科春黃菊屬之 羅馬洋甘菊（Chamaemelum nobile)的萃取物，可將該植物 之植物全株、尤其是花用作原材料。報告稱已知具有去氫 表雄固酮（DHEA，Dehydroepiandrosterone)產生促進作 用，可用作皮膚改善劑等抗衰老劑、免疫賦活劑 '抗糖尿 病劑、抗骨質疏鬆症劑、抗肥胖劑 '睡眠促進劑、抗中柩 神經劑等醫藥品。 蘋果萃取物係源自原產於中亞之薔薇科蘋果屬之顧果 (Malus domestica)的萃取物，可將該植物之植物全株、尤 I63543.doc -22- 201244733 其是果實用作原材料。報告稱含有原花青素成分可用作 抗肥胖劑。 山植萃取物係源自薔薇科山檀屬之山楂（Cmaegus cuneata)之萃取物，可將該植物之花、葉、果實 '植物全 株用作原材料。已知具有脂肪燃燒促進作用，可用作飲食 品之成分。 薑黃萃取物係源自姜目薑科之薑黃屬之薑黃（(：11^1111^ longa)的萃取物，已知具有脂質代謝改善作用或脂質分解 促進作用，可廣泛地用作醫藥品或食品、化妝品等之成 分。 該等植物萃取物之萃取方法並無特別限定，較佳為使用 溶劑之萃取法。於進行萃取時，亦可直接使用上述原材 料’但粉碎、切碎成粉末狀而供給至萃取，可於平穩之條 件下，於短時間内以較高之萃取效率進行有效成分之萃 取。 再者，所謂本發明中使用之各植物之植物體或其萃取 物，係指將各植物體之各部位（花、花穗、果皮、果實、 莖、葉、枝、枝葉、樹乾、樹皮、根莖、根皮、根、種子 或全草等）直接粉碎或將經乾燥者粉碎而製成乾燥粉末 者，或直接或於乾燥、粉碎後利用溶劑萃取者。 作為上述植物體之萃取部位，亦可使用上述植物體之任 一部位，較佳為，對於寒莓，使用葉；對於紫苑，使用葉 或莖，對於野木瓜，使用莖或根；對於中南懸鉤子，使用 葉；對於馬蘭，使用葉或莖；對於石櫟，使用果實；對於 I63543.doc -23- 201244733 楊梅，使用例如樹皮、黏液、果實、種子、花、枝、葉、 根等，尤其是葉或枝；對於蒲桃，使用例如樹皮、黏液、 果實、種子、花、枝、葉、根等，尤其是葉或枝；對於抱 櫟，使用例如樹皮、黏液、果實、種子、花、枝、葉、根 等’尤其是葉、樹皮、枝、根。 萃取溫度並無特別限定，只要視原材料之粉碎物之大小 或溶劑之種類等而適當設定即可。通常，於自室溫至溶劑 之沸點之範圍内進行設定。又，萃取時間亦並無特別限 定，只要視原材料之粉碎物之大小、溶劑之種類、萃取溫 度等而適當設定即可。進而，於萃取時，可進行攪拌， 可不攪拌而靜置，亦可施加超音波。 例如’上述植物萃取物可將原材料浸潰於溶劑中，並於 室溫或m：〜uhtc下進行萃取。可於將藉由萃取處理而獲 得之萃取液過據後’直接用作活性成分，或將視需要加以 濃縮或乾燥者用作活性成分。再者，於該萃取處理時，亦 可使用將原材料切碎或粉碎者^ χ，可使用未加卫之原材 料或’、呈乾燥之原材料，或者亦可使用經烘賠之原材料。烘 培方法並無特別限定，可列舉於贼，。口供培… 時〜2小時之方法。 卒取中所使用之溶劑之種類並無特別限定，較佳為水 (包括熱水等）、醇（例如甲醇、乙醇、卜丙醇、2_丙醇、卜 丁醇、2_丁醇），二醇（例如1，3-丁二醇、丙二醇）、甘油、 鲷(例如丙鲷、甲基乙基酮(例如二乙醚、二呤院四 氮夫南丙秘）〔猜、賴（例如乙酸乙酷、乙酸丁醋）、脂 163543.doc •24· 201244733 =族fe(例如己烧、庚院、液體石蝶）、芳香族烴（例如甲 苯、二甲苯）、函化烴（例如氣仿），或該等中之2種以上之 滿#合溶劑。 藉由如此之萃取操作’自原材料中萃取有效成分，溶解 於溶劑中。包含萃取物之溶劑可直接使用，亦可靜置數日 使其熟成後使用。進而亦可施加殺菌、洗淨、過滤、脫 色、脫臭等慣用之純化處理後而使用。又，亦可視需要加 以濃縮或稀釋後使用。進而，可使溶劑全部揮發而製成固 體狀（乾燥物）後使用，亦可使該乾燥物再溶解於 中而使用。 進而，於將本發明之臉潮紅抑制劑或愛帕琳受體促效劑 用作皮膚外用劑之情形時，亦可於皮膚外㈣中適當調配 慣用之助齊卜例如：乙二胺四乙酸二鈉、乙二胺四乙酸三 納、檸檬酸納、聚鱗酸納、偏麟酸納、葡萄糖酸等金屬封 阻劑咖啡因、鞣酸、維拉帕米(Verapami】)、傳明酸及其 衍生物、甘草萃取物、光甘草咬、木瓜之果實之熱水萃取 物 '各種天_材、乙酸維生素_、甘草酸及其衍生物 或其鹽等藥劑’維生素c、抗壞血酸破酸鎮、抗壞血酸葡 糖芽、熊果苦、曲酸等美白劑，葡萄糖、果糖、甘露糖、 嚴糖、海藻糖等糖類，視黃酸、維生素A、維生素A乙酸 酉曰' 維生素A標櫚酸酯等維生素a類等。 本發明之臉潮紅抑制劑或愛帕琳受體促效劑亦可用於針 對患有臉潮紅之人 < 目的在於改善臉潮紅的4容學方法 中。該美容學方法例如，可藉由將本發明之臉潮紅抑制劑 163543.doc -25- 201244733 應用於呈現臉潮紅之部位而進行 於該方法中呈現臉潮紅 之部分可列舉全身之所有部位 尤佳為面部。 於本發明之另-態樣中，係關於一種含有包含組入有愛 帕琳基因之載體之載體的臉潮紅之抑制劑。該抑制劑係用 於在被試驗體中之編碼愛帕琳之基因（愛帕琳基因）處於不 活潑狀態或沈默狀態而其結果為細胞處於愛帕琳缺損狀態 的情形時’將愛帕琳基因本身導人至細胞内。於該載體 中，較佳為將充進愛帕琳基因之表現之調節序列，例如將 啟動子或促進子配置於可對愛帕琳基因作用之位置。 作為將愛帕琳基因導入至細胞内之方法，亦可應用利用 病毒載體之基因導入方法、或非病毒性之基因導入方法 (Nikkei Science，1994年4月號，2〇 45頁’實驗醫學增 千J ’ 12(15)(1994);及實驗醫學附冊.「基因治療之基礎技 術」羊土社（1996))之任—種方法。作為病毒載體之基因 導入方法’例如可列舉：於反轉錄病毒、腺病毒、腺相關 病毒疮療病毒 '牛癌病毒、癌病毒、脊髓灰白質炎病 毒、新培斯病毒等口财病毒或RNA(Rib〇se Νμ—八以， 核糖核酸)病毒令組入編碼愛帕琳之職而導入的方法。 二 中尤佳為使用反轉錄病毒' 腺病毒、腺相關病 毋牛痘病毒之方法。作為非病毒性之基因導入方法可 列舉.將表現質體直接投予至肌肉内之方法(DNA疫苗 法）、核糖體法、微脂體法、顯微注射法、碗_法、電 穿=法等，尤佳為DNA疫苗法、脂質體法。又，使上述基 因貫際上作為醫藥而發揮作用時’有將直接導入至體 I63543.doc -26 - 201244733 内之in vivo法（活體法）’及自人體取出某種細胞並於體外 將DNA導入至該細胞中再將該細胞回輸至體内的ex viv〇法 (活體外法）(Nikkei Science，1994年4月號，20-45頁，實驗 醫學增刊，12(15)(1994);及月刊藥事，36(1)，23- 48(1994))»更佳為in vivo法β於藉由in viv〇法投予之情形 時，可利用對應疾病、症狀等之適當之投予路徑而投予。 例如’可投予至靜脈、動脈、皮下、皮内、肌肉内等。於 藉由in vivo法投予之情形時，通常製成注射劑等，亦可視 需要而添加慣用之載體。又，於形成脂質體或膜融合脂質 體（仙台病毒（HVJ，Hemagglutinating Virus Japan)-脂質體 等）之形態之情形時，可製成懸浮劑、冷凍劑、離心分離 濃縮冷凍劑等脂質體製劑。 因此，於本發明之進一步之實施態樣中，提供一種用以 抑制或改善臉潮紅之包含含有編碼愛帕琳之基因而成的載 體或者愛帕琳受體促效劑的抑制劑。於該情形時，較佳為 編碼愛帕琳之基因與亢進愛帕琳基因之表現之調節序列可 作用地連結。 製劑中本發明之含有編碼愛帕琳之基因而成之載體（本 發明之抑制劑）的調配量可視用途而適當決定，通常於製 劑中為0.00001〜20.0質量％，較佳為0.00001〜10.0質量〇/〇。 藉由以下之實施例，進一步具體地說明本發明。再者， 本發明並不限定於此。 [實施例] · 實施例1 :愛帕琳之臉潮紅抑制作用 163543.doc -27· 201244733 對使愛帕琳於ΚΙ 4啟動子之控制下於表皮中高效表現的 C57/BL6小白鼠（以下為愛帕琳高效表現小白鼠、愛帕琳 TG或TG)及對應之野生型小白鼠（C57/BL6)(N = 5，均為 8〜10週大）實施卵巢摘除手術，而形成更年期愛帕琳高效 表現小白鼠、更年期野生型小白鼠。再者，使用實施過假 手術之野生型小白鼠作為對照。4週後，將作為血管擴張 劑之硝苯地平（Nifedipine)(50 pg/kg)投予至腹腔内，並於 投予之10分鐘後、30分鐘後、45分鐘後，使用熱影像分析 儀（紅外熱像儀 TH9100MR，NEC/Avio Infrared Technologies) 解析尾部之溫度變化。 結果 於對照之野生型小白鼠（shamWT)中，於血管擴張劑投 予10分鐘後上升之皮膚溫度於30分鐘後恢復至穩定狀態， 其後亦保持一定之狀態（圖1)。另一方面，於更年期野生型 小白鼠（OVXWT)及更年期愛帕琳高效表現小白鼠 (OVXTG)中，10分鐘後於血管擴張劑投予後與對照 (shamWT)相比體溫顯著升高，於OVXWT中，無論於30分 鐘後或於45分鐘後，相對於shamWT及OVXTG之任一者體 溫均顯著較高。另一方面，於OVXTG中，於30分鐘後與 OVXWT相比體溫下降，於45分鐘後體溫下降至與對照之 shamWT相同程度。測量經投予血管擴張劑之更年期小白 鼠之尾部的溫度，藉此可將更年期之臉潮紅樣本化（Kai M， Yamauchi A, Tominaga K, Koga A, Kai H，Kataoka Y: Soybean isoflavones eliminate nifedipine induced flushing 163543.doc -28 - 201244733 of tail skin in ovariectomized mice, J Pharmacol Sci 2004, 95: 476-478)。因此，根據上述結果，顯示愛帕琳可於短 時間内抑制或改善由臉潮紅所導致之暫時性體溫上升。 實施例2.類愛帕琳藥劑之篩選系統之確立 APJ表現細胞之培養 於NIH3T3細胞中使愛帕琳受體APJ高效表現，並對利用 潮黴素選擇之穩定株（由大阪大學微生物病研究所高倉伸 幸教授提供）轉染cAMP螢光素酵素報告載體，將其用於以 下之cAMP螢光素酵素分析。培養係於含有200 pg/ml之潮 黴素之含有10%F'BS(Fetal Bovine Serum，胎牛血清）的 DMEM培養基（Invitrogen)中進行。於分析前曰，於96孔培 養板上每1孔播種2.0χ105個細胞，並於含有10%FBS與200 pg/ml潮黴素之DMEM培養基中進行培養。 cAMP螢光素酵素分析 於培養一晚後，利用抽氣器去除培養基，並更換成每1 孔100 μΐ之不含添加劑之DMEM培養基。3小時後，每1孔 各添加4 μΐ之GloS(;nsorTM cAMP試劑（Promega)，進行遮光 並於室溫下使其平衡化2小時。其後，以使愛帕琳13 (PEPTIDE研究所）成為0.4 pg/ml之方式利用不含添加劑之 DMEM培養基進行稀釋，並將其於每1孔中各添加50 μΐ(最 終濃度為0.1 pg/ml)，於室溫下預培養5分鐘。進而，各添 加50 μΐ調整成40 μΜ之佛司可林（Sigma)(最終濃度為10 μΜ)，並處理 15分鐘。其後，使用 GloMaxTM 96 Microplate Luminometer(Promega)測定發光。又，一併添加愛帕琳及 163543.doc •29· 201244733 愛帕琳中和抗體即4G5(由大阪大學提供）而進行與上述同 樣之螢光素酵素分析《於該情形時，以成為5 pg/ml之方式 利用不含中和抗體之DMEM培養基加以稀釋，每丨孔各添 加50 μΐ(最終濃度為〇 5 pg/ml)。同樣地，製備最終濃度成 為1.5、5、15及50 pg/ml之中和抗體，並分別添加至孔 中。作為對照，不添加愛帕琳，而每1孔添加1〇〇 4之2〇 μΜ之佛司可林。 將上述CAMP螢光素酵素分析之結果示於圖3中。根據圖 3可知，由於愛帕琳使cAMP濃度下降，另一方面，隨著因 愛帕琳中和抗體所導致之愛帕琳活性之消失而cAMp濃度 之下降得到抑制❶即，於上述cAMP螢光素酵素分析中， 首先，於添加候補藥劑代替愛帕琳之情形時，探尋降低 cAMP濃度之藥劑（1次篩選），繼而，於與愛帕琳中和抗體 一同添加之情形時，自該等藥劑中進而篩選顯著抑制 cAMP濃度之下降之藥劑（2次篩選），藉此可短時間且有效 地選定經由愛帕琳受體即APJ之活化而降低cAMP濃度之藥 劑（即類愛帕琳藥劑）。 實施例3.類愛帕琳藥劑之篩選（j) 作為候補藥劑，使用約250種化妝品素材（資生堂股份有 限公司），並利用於實施例2中確立之篩選系統進行類愛帕 琳藥劑之選定。 具體而言，將候補藥劑製備成4〇〇 pg/mi，並代替於實施 例2之cAMP螢光素酵素分析中使用之愛帕琳，每1孔各添 加50 μΐ(最終濃度為100 pg/m]l)，而進行與實施例2同樣之 163543.doc •30· 201244733 分析。 如圖4所示，番紅花萃取物、松樹萃取物、金雞納萃取 物及康福利草萃取物、黃芩根萃取物、迷迭香萃取物、杏 仁粒、龍膽萃取物、百里香萃取物、薄荷末、大棗萃取 . 物、啤酒花萃取物、奇異果萃取物、羅馬洋甘菊萃取物、 蘋果萃取物、山植萃取物及薑黃萃取物顯著降低細胞内之 eAMP濃度，又’於與愛帕琳中和抗體（4G5)—併添加之情 形時，因愛帕琳活性之消失而顯著抑制camp濃度之下 降’因此顯示該等植物萃取物具有與愛帕琳同樣之功能。 實施例4.類愛帕琳藥劑之篩選（2) 作為候補藥劑，使用約110種食品素材（資生堂股份有限 公司），並利用於實施例2中確立之篩選系統進行類愛帕琳 藥劑之選定。 具體而言，將候補藥劑製備成4〇〇 gg/m丨，並代替於實施 例2之CAMP螢光素酵素分析中使用之愛帕琳，每丨孔各添 加50 μΐ(最終濃度為1〇〇 gg/mi)，而進行與實施例2同樣之 分析。 如圖5所示，寒華、紫苑、野木瓜、中南懸釣子、馬 . 帛、石櫟、楊梅、蒲桃及抱櫟之萃取物顯著降低細胞内之 • °ΑΜΡ濃度’又’於與愛帕琳中和抗體（4G5)-併添加之情 形時目愛帕琳活性之消失而顯著抑制eAMp濃度之下 降因此顯不5亥等植物萃取物具有與愛帕琳同樣之功能。 【圖式簡單說明】 圖1係表示於血管擴張劑（石肖笨地平）投予後更年期野生 I63543.doc 31 201244733 型小白鼠（OVXWT) '更年期愛帕琳高效表現小白氣 (OVXTG)、及假手術野生型小白鼠（sharnWT)之各小白鼠 之尾部的溫度變化。 圖2係表示人類愛帕琳之胺基酸序列（序列號丨）及dna序 列（序列號2)。 圖3係表不抑制由愛帕琳所導致之細胞内^ amp濃度之下 降、及由愛帕琳中和抗體所導致之細胞内cAMP濃度之下 降的圖表。 圖4係表示於單獨添加類愛帕琳藥劑（番紅花萃取物、松 樹萃取物、金雞納萃取物、康福利草萃取物、黃芩根萃取 物、迷迭香萃取物、杏仁粒 '龍膽萃取物、百里香萃取 物、4荷末 '薑黃萃取物、山楂萃取物、大棗萃取物、啤 酒铯萃取物、蘋果萃取物、羅馬洋甘菊萃取物、及奇異果 萃取物）(條形圖左）、及添加類愛帕琳藥劑+愛帕琳中和抗 體（條形圖右）之情形時細胞内cAMp濃度上升相對於對照之 佛司可林添加群之比例的圖表。 圖5係表示於單獨添加類愛帕琳藥劑（寒莓、紫苑、野木 瓜、石櫟 '中南懸鉤子、馬蘭、抱櫟、楊梅、及蒲桃之萃 取物)(條形圖左）、及添加類愛帕琳藥劑+愛帕琳中和抗體 (條形圖右）之情形時細胞内cAMp濃度上升相對於對照之佛 司可林添加群之比例的圖表。 163543.doc •32· 201244733 序列表 <110>日商資生堂股份有限公司 <120>臉潮紅之抑制劑 <130〉 1113352 <140> 101111630 <141〉2012-03-30 <150> 2011-080428 <151> 2011-03-31 <160> 2 <170〉Patentln3.3 版 <210> 1 <211> 36 <212> PRT <213〉人 <4〇〇> 1

Leu Yal Gin Pro Arg Gly Ser Arg Asn Gly Pro Gly Pro Trp Gin Gly 15 10 15

Gly Arg Arg Lys Phe Arg Arg Gin Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly 20 25 30

Pro Met Pro Phe 35 <210> 2 <211> 108 <212〉 DNA <213〉人 163543-序列表.doc 60 201244733 <400〉 2 108 ctggtgcagc ccagagggtc aaggaatggg ccagggccct ggcagggagg tcggaggaaa ttccgccgcc agcggccccg cctctcccat aagggaccca tgcctttc 163543-序列表.doc 2-

Claims (1)

1. 201244733 七、申請專利範圍： 1. 一種臉潮紅抑制劑，其包含愛帕琳（apelin)或愛帕琳受體 之促效劑。 2_如請求項1之臉潮紅抑制劑，其中上述愛帕琳為如下之 蛋白質： (a) 包含序列號1所示之胺基酸序列之蛋白質，或 (b) 包含於序列號1之胺基酸序列中缺失、取代或加 成有1個或數個胺基酸之胺基酸序列、且具有愛帕琳活 性之蛋白質。 3. 如請求項1之臉潮紅抑制劑，其中上述愛帕琳受體之促 效劑係選自由寒莓、紫苑、野木瓜、申南懸釣子、馬 蘭、石櫟、楊梅、蒲桃及抱櫟之植物體或其萃取物、進 而番紅化萃取物、松樹萃取物、金雞納萃取物及康福利 草萃取物、黃芩根萃取物、逑迭香萃取物、杏仁粒 '龍 膽萃取物、百里香萃取物、薄荷末、大棗萃取物、啤酒 花萃取物、奇異果萃取物、羅馬洋甘菊萃取物、蘋果萃 取物、山楂萃取物及薑黃萃取物所組成之群中。 4. 一種臉潮紅之治療、改善或預防方法，其包括投予愛帕 琳或愛帕琳受體之促效劑。 5·如請求項4之臉潮紅之治療、改善或預防方法，其中上 述愛帕琳係如下之蛋白質： (a) 包含序列號1所示之胺基酸序列之蛋白質，或 (b) 包含於序列號1之胺基酸序列中缺失、取代或加 成有1個或數個胺基酸之胺基酸序列、且具有愛帕琳活 I63543.doc 201244733 性之蛋白質。 6.如請求項4之臉潮紅之治療、改善或預防方法，其中上 述愛帕琳受體之促效劑係選自由寒莓、紫苑、中南懸鉤 子、野木痕’馬蘭、石櫟、楊梅、蒲桃及抱櫟之植物體 或其萃取物、進而番紅花萃取物、松樹萃取物、金雞納 萃取物及康福利草萃取物、黃芩根萃取物、迷迭香萃取 物、杏仁粒、龍膽萃取物、百里香萃取物、薄荷末、大 棗萃取物、啤酒花萃取物、奇異果萃取物、羅馬洋甘菊 萃取物、蘋果萃取物、山楂萃取物及薑黃萃取物所組成 之群中。 7· 一種臉潮紅抑制劑之篩選方法，其係以愛帕琳受體之活 性或愛帕琳之表現為指標。 163543.doc -2-