CN103458910A - 潮热抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明的课题是提供潮热抑制剂和用于改善潮热的药剂的筛选方法，所述潮热抑制剂包含爱帕琳肽或爱帕琳肽受体的激动剂，爱帕琳肽受体的激动剂选自：寒莓、嫁菜、野木瓜、中南悬钩子、马兰、可食柯、杨梅、蒲桃和枹栎的植物体或其提取物、以及藏红花提取物、松树提取物、金鸡纳树提取物和聚合草提取物、黄芩提取物、迷迭香提取物、杏仁粒、龙胆提取物、百里香提取物、薄荷末、大枣提取物、啤酒花提取物、猕猴桃提取物、果香菊提取物、苹果提取物、山楂提取物和姜黄提取物。

Description

潮热抑制剂
技术领域
本发明涉及由更年期障碍产生的潮热的抑制剂以及潮热的改善方法。
背景技术
作为更年期障碍之一的潮热(体表温度的局部性上升、和与此相伴的头晕、发热、潮红、多汗)为绝经期/绝经后综合征的一般性症状。雌性激素(雌激素等)的降低可以认为是以潮热为代表的更年期障碍的原因，在年轻的女性中有时也由于过度的压力、饮食等而激素平衡崩溃，呈现与更年期障碍同样的症状。作为这些更年期障碍和与更年期障碍同样的症状的治疗方法，有时进行雌性激素的补充。然而已知雌性激素的补充疗法会产生乳癌、子宫内膜癌等患癌风险上升这样的副作用，长期的雌性激素补充疗法不优选。迄今为止，用于代替雌性激素补充疗法的潮热的预防或治疗，特定了成为对具有血管扩张特性的CGRP的拮抗剂(日本特开2008－525510号公报)、与潮热相关的促性腺激素释放激素的拮抗剂(日本特表2002－512976号公报、日本特开2008－195728号公报)的化合物。
爱帕琳肽(Apelin)是在1998年，作为对作为长期为孤儿受体的7次跨膜型的G蛋白质偶联型受体的APJ的结合因子而从牛的胃的细胞提取液中离析出的分子。爱帕琳肽的cDNA编码77个氨基酸，但由其前体形成长型(42～77个氨基酸)和短型(65～77个氨基酸)。已知任何爱帕琳肽都可以诱导APJ的活化。迄今为止，报告了在心血管系统、中枢神经系统中APJ的表达，暗示了其在心脏中控制心肌收缩作用、在神经系统中控制加压素的表达等与体液的调节机制相关。此外，APJ也作为艾滋病毒的受体而与感染相关，因此是作为从各种观点考虑的药物研发的目标而突然备受关注的受体。一般认为APJ的表达，在血管系统中，在血管内皮细胞、壁细胞中表达，在使用了爪蟾的基因敲除的实验中，显示出爱帕琳肽/APJ系统在血管生成时发挥必须的作用，此外在小鼠、人中本受体的表达也在内皮细胞中得到确认，因此预料到在哺乳类中也与血管形成相关(实验医学Vol.26,No.9(2008),pp.1380-1383)。此外，近年来，报告了通过爱帕琳肽的敲除小鼠的解析、试管内的血管系统解析，血管内皮细胞由于Ang1而受到刺激时所分泌的爱帕琳肽可控制血管直径(Kidoya et al,(2008)Spatialand temporal role of the apelin/APJ system in the caliber size regulation ofblood vessels during angiogenesis.EMBO J27:522-534)。然而，迄今为止，对于爱帕琳肽与潮热的抑制、改善相关，还完全不清楚。
发明内容
发明所要解决的课题
关于作为更年期障碍之一的潮热的抑制或改善，迄今为止在临床上可以充分地令人满意的药品还没有报告。因此，本发明的课题是提供潮热抑制剂和用于改善潮热的方法。另外，在本发明中，所谓抑制剂，包括治疗剂、预防剂和改善剂，改善方法包括治疗方法、预防方法和抑制方法。
用于解决课题的方法
本发明人等为了研究爱帕琳肽与由更年期障碍引起的体表温度的局部性上升、和与此相伴的发热之间的关系，在实施了卵巢摘除的、导入了使爱帕琳肽在表皮高表达的基因的小鼠(更年期爱帕琳肽高表达小鼠)和野生型小鼠(更年期野生型小鼠)中，对施与血管扩张剂后的尾部温度进行了比较。向更年期野生型小鼠施与血管扩张剂后的尾部温度的变化的测定中，作为更年期障碍的潮热的模型而被确立(Kai M,Yamauchi A,Tominaga K,Koga A,Kai H,Kataoka Y:Soybean isoflavones eliminate nifedipineinduced flushing of tail skin in ovariectomized mice,J Pharmacol Sci2004,95:476-478)。在该实验中，本发明人等确认了，对于更年期野生型小鼠，上升的皮肤温度长时间持续，另一方面，对于更年期爱帕琳肽高表达小鼠，与更年期野生型小鼠相比，在早的时期尾部温度减少至正常值。该结果显示爱帕琳肽有助于潮热的抑制或改善。
本发明人等基于上述认识，提供筛选潮热抑制剂的方法。该方法的特征在于，选定增强皮肤细胞中的内源性爱帕琳肽的表达的药剂、或活化爱帕琳肽受体的药剂作为潮热抑制剂。内源性爱帕琳肽的表达的增强可以通过例如直接测定皮肤细胞中的爱帕琳肽的量来确定，此外，爱帕琳肽受体的活化可以通过测定皮肤细胞中的钙离子浓度、cAMP浓度等来确定。由此确定的活化爱帕琳肽受体的药剂，即爱帕琳肽受体的激动剂优选为具有爱帕琳肽样的作用的物质。
由此，本发明人等开发了利用爱帕琳肽/APJ信号系统的筛选，并对各种物质进行了筛选，结果获得了以下令人震惊的认识：作为爱帕琳肽样药剂，即具有与爱帕琳肽同样的功能的药剂，寒莓、嫁菜、野木瓜、中南悬钩子、马兰、可食柯、杨梅、蒲桃和枹栎的植物体或其提取物、以及藏红花提取物、松树提取物、金鸡纳树提取物和聚合草提取物、黄芩提取物、迷迭香提取物、杏仁粒、龙胆提取物、百里香提取物、薄荷末、大枣提取物、啤酒花提取物、猕猴桃提取物、果香菊提取物、苹果提取物、山楂提取物和姜黄提取物活化APJ，具有与爱帕琳肽同样的功能。因此，这些物质与爱帕琳肽同样地对于潮热的抑制、改善、治疗和/或预防是有用的。
本申请包含以下发明：
(1)一种潮热抑制剂，其包含爱帕琳肽、或爱帕琳肽受体的激动剂。
(2)根据(1)的潮热抑制剂，上述爱帕琳肽为以下的蛋白质：
(a)包含序列号1所示的氨基酸序列的蛋白质，或者
(b)包含在序列号1的氨基酸序列中缺失、置换或添加了一个或数个氨基酸的氨基酸序列，并且具有爱帕琳肽活性的蛋白质。
(3)根据(1)所述的潮热抑制剂，上述爱帕琳肽受体的激动剂选自：寒莓、嫁菜、野木瓜、中南悬钩子、马兰、可食柯、杨梅、蒲桃和枹栎的植物体或其提取物、以及藏红花提取物、松树提取物、金鸡纳树提取物和聚合草提取物、黄芩提取物、迷迭香提取物、杏仁粒、龙胆提取物、百里香提取物、薄荷末、大枣提取物、啤酒花提取物、猕猴桃提取物、果香菊提取物、苹果提取物、山楂提取物和姜黄提取物。
(4)潮热的治疗、改善或预防方法，其包括将爱帕琳肽、或爱帕琳肽受体的激动剂施与需要改善潮热的对象。
(5)根据(4)所述的潮热的治疗、改善、或预防方法，上述爱帕琳肽为以下的蛋白质：
(a)包含序列号1所示的氨基酸序列的蛋白质，或者
(b)包含在序列号1的氨基酸序列中缺失、置换或添加了一个或数个氨基酸的氨基酸序列，并且具有爱帕琳肽活性的蛋白质。
(6)根据(4)所述的潮热的治疗、改善或预防方法，上述爱帕琳肽受体的激动剂选自：寒莓、嫁菜、野木瓜、中南悬钩子、马兰、可食柯、杨梅、蒲桃和枹栎的植物体或其提取物、以及藏红花提取物、松树提取物、金鸡纳树提取物和聚合草提取物、黄芩提取物、迷迭香提取物、杏仁粒、龙胆提取物、百里香提取物、薄荷末、大枣提取物、啤酒花提取物、猕猴桃提取物、果香菊提取物、苹果提取物、山楂提取物和姜黄提取物。
(7)爱帕琳肽、或爱帕琳肽受体的激动剂用于抑制潮热的应用。
(8)根据(7)所述的用于抑制潮热的应用，上述爱帕琳肽为以下的蛋白质：
(a)包含序列号1所示的氨基酸序列的蛋白质，或者
(b)包含在序列号1的氨基酸序列中缺失、置换或添加了一个或数个氨基酸的氨基酸序列，并且具有爱帕琳肽活性的蛋白质。
(9)根据(7)所述的用于抑制潮热的应用，上述爱帕琳肽受体的激动剂选自：寒莓、嫁菜、野木瓜、中南悬钩子、马兰、可食柯、杨梅、蒲桃和枹栎的植物体或其提取物、以及藏红花提取物、松树提取物、金鸡纳树提取物和聚合草提取物、黄芩提取物、迷迭香提取物、杏仁粒、龙胆提取物、百里香提取物、薄荷末、大枣提取物、啤酒花提取物、猕猴桃提取物、果香菊提取物、苹果提取物、山楂提取物和姜黄提取物。
(10)用于制造用于抑制潮热的制剂的爱帕琳肽、或爱帕琳肽受体的激动剂的应用。
(11)根据(7)的应用，上述爱帕琳肽为以下的蛋白质：
(a)包含序列号1所示的氨基酸序列的蛋白质，或者
(b)包含在序列号1的氨基酸序列中缺失、置换或添加了一个或数个氨基酸的氨基酸序列，并且具有爱帕琳肽活性的蛋白质。
(12)根据(7)所述的应用，上述爱帕琳肽受体的激动剂选自：寒莓、嫁菜、野木瓜、中南悬钩子、马兰、可食柯、杨梅、蒲桃和枹栎的植物体或其提取物、以及藏红花提取物、松树提取物、金鸡纳树提取物和聚合草提取物、黄芩提取物、迷迭香提取物、杏仁粒、龙胆提取物、百里香提取物、薄荷末、大枣提取物、啤酒花提取物、猕猴桃提取物、果香菊提取物、苹果提取物、山楂提取物和姜黄提取物。
(13)一种爱帕琳肽受体的激动剂，其选自：寒莓、嫁菜、野木瓜、中南悬钩子、马兰、可食柯、杨梅、蒲桃和枹栎的植物体或其提取物、以及藏红花提取物、松树提取物、金鸡纳树提取物和聚合草提取物、黄芩提取物、迷迭香提取物、杏仁粒、龙胆提取物、百里香提取物、薄荷末、大枣提取物、啤酒花提取物、猕猴桃提取物、果香菊提取物、苹果提取物、山楂提取物和姜黄提取物。
(14)一种潮热抑制剂的筛选方法，其将爱帕琳肽受体的活性或爱帕琳肽的表达作为指标。
(15)一种潮热抑制剂，其是通过(14)所述的筛选方法得到的。
(16)一种潮热抑制剂，其含有载体，所述载体是包含编码爱帕琳肽的基因而成的。
发明的效果
通过使用本发明的包含爱帕琳肽、或爱帕琳肽受体的激动剂的潮热抑制剂，从而可以抑制、治疗、预防或改善作为更年期障碍之一的潮热，即体表温度的局部性上升、和与此相伴的发热、头晕、潮红、多汗等症状。
附图说明
图1表示施与血管扩张剂(硝苯地平(Nifedipine))后的更年期野生型小鼠(OVXWT)、更年期爱帕琳肽高表达小鼠(OVXTG)和假手术野生型小鼠(shamWT)的各小鼠中的尾部的温度变化。
图2表示人爱帕琳肽的氨基酸序列(序列号1)和DNA序列(序列号2)。
图3为表示由爱帕琳肽带来的细胞内cAMP浓度的减少、和由爱帕琳肽中和抗体带来的细胞内cAMP浓度的减少的抑制的图。
图4为表示添加有爱帕琳肽样药剂(藏红花提取物、松树提取物、金鸡纳树提取物、聚合草提取物、黄芩提取物、迷迭香提取物、杏仁粒、龙胆提取物、百里香提取物、薄荷末、姜黄提取物、山楂提取物、大枣提取物、啤酒花提取物、苹果提取物、果香菊提取物、和猕猴桃提取物)单独(棒图左)、和爱帕琳肽样药剂＋爱帕琳肽中和抗体(棒图右)的情况下的相对于作为细胞内cAMP浓度上升的对照的佛司可林添加组的比例的图。
图5为表示添加有爱帕琳肽样药剂(寒莓、嫁菜、野木瓜、可食柯、中南悬钩子、马兰、枹栎、杨梅、和蒲桃的提取物)单独(棒图左)、和爱帕琳肽样药剂＋爱帕琳肽中和抗体(棒图右)的情况下的相对于作为细胞内cAMP浓度上升的对照的佛司可林添加组的比例的图。
具体实施方式
本发明的一方式中，本发明涉及包含爱帕琳肽、或爱帕琳肽受体的激动剂而成的潮热抑制剂。
报告了人爱帕琳肽在心脏、肺、肾脏、脂肪、胃、脑、肾上腺、内皮等各种部位中的表达，已知作为由来源于77个氨基酸的前体蛋白质的36个氨基酸构成的爱帕琳肽APJ受体的配体(Kawamata Y et al,(2001)Molecular properties of apelin:tissue distribution and receptor binding.BIOCHMICA ET BIOPHYSICA ACTA.2-3:162-171)。此外，在爱帕琳肽中，还已知其氨基酸的N末端和/或C末端缺失了的突变体，例如爱帕琳肽-13(包含爱帕琳肽的第24～36号的氨基酸序列的多肽)等，由此在本说明书中在称为“爱帕琳肽”的情况下，不限于序列号1所示的包含36个氨基酸的全长人爱帕琳肽，只要具有爱帕琳肽的活性，也包含其缺失、置换或添加了一个或数个氨基酸的爱帕琳肽突变体、以及它们的片段。缺失、置换或添加的氨基酸的数目优选为1～5、1～3、或1～2个。此外，爱帕琳肽中，不仅包含来源于人的爱帕琳肽，而且还包含来源于除了人以外的灵长类、大鼠、小鼠、兔等那样的啮齿动物的爱帕琳肽。此外爱帕琳肽中，还包含由相对于序列号1表示的包含36个氨基酸的全长人爱帕琳肽，具有至少70%、优选为至少80%、进一步优选为至少90%的序列同一性的序列构成的爱帕琳肽突变体。在进一步优选的方式中，上述爱帕琳肽突变体的序列同一性至少超过95%，进一步优选为超过98%，更优选为超过99%。
此外，本说明书中所谓编码爱帕琳肽的基因，除了编码爱帕琳肽的基因以外，还包含编码其缺失、置换或添加了一个或数个核苷酸且具有爱帕琳肽活性的多肽的基因，以及编码相对于编码爱帕琳肽的基因在高严格条件下进行杂交且具有爱帕琳肽活性的多肽的基因。这里所谓“爱帕琳肽活性”，定义为通过爱帕琳肽与作为其受体的APJ结合，从而将作为细胞内信号传递分子的Akt进行磷酸化、使细胞内的cAMP浓度减少。另外，所谓高严格的杂交条件，是指例如包含钠浓度为约10～40mM、优选为约20mM，温度为约50～70℃、优选为约60～65℃的条件。
APJ受体也被称为AGTRL1(血管紧张素受体样1)，为G蛋白质偶联型受体(GPCR)之一，由380个氨基酸构成。其跨膜区域与血管紧张素(AT1)受体显示40～50%的相同性。报告了爱帕琳肽/APJ信号在血管中为ANG1/Tie2的下游信号，与心肌的收缩、血压和血流、以及血管形成相关(Kidoya et al,(2008)Spatial and temporal role of the apelin/APJ system inthe caliber size regulation of blood vessels during angiogenesis.EMBO J27:522-534)。已知APJ受体与包含α亚基(约40～50kDa)、β亚基(约35kDa)和γ亚基(约10kDa)的异三聚体G蛋白质偶联，与信息传递(信号)级联放大相关。在APJ受体未活化的状态下，α、β、γ的各个亚基强地结合，但由于爱帕琳肽结合于APJ受体，因此APJ受体活化，结合于α亚基的GDP与GTP的交换反应发生，解离成GTP结合型α亚基与βγ亚基。这些亚基活化各自的靶蛋白质、酶，将信号向下游传递。然后，结合于α亚基的GTP通过α亚基的GTPase活性被分解而成为GDP，GDP结合型α亚基与βγ亚基结合，再次形成非活性型的三聚体。三聚体G蛋白质根据α亚基的功能和基因的不同，而分类成Gs、Gi、Go、Gq、Gt、Golf等亚科。Gs与Gi分别增强或抑制腺苷酸环化酶的活性，Go与神经组织的信号传递系统有关，Gq活化磷脂酶Cβ，而Gt与Golf分别对视细胞(网膜)和嗅细胞的信号传递系统发挥重要的作用。在APJ受体与爱帕琳肽结合了的情况下，介由Gi途径而抑制腺苷酸环化酶的活性，因此其结果是细胞内的cAMP浓度减少。
在本发明中，所谓爱帕琳肽受体激动剂，以与作为发挥与爱帕琳肽同样的作用的物质的爱帕琳肽样药剂相同含义使用，是指介由爱帕琳肽受体而发挥与爱帕琳肽同样的作用的物质。作为爱帕琳肽受体激动剂，特定本说明书中的各种物质，但不限定于此。
在本发明中，所谓潮热，是随着雌性激素的减少，由脑的下丘脑所控制的自主神经紊乱，体温调节功能降低所引起的症状，是指体表温度的局部性上升、和与此相伴的发热、头晕、潮红和多汗等症状。本发明的潮热特别是指作为更年期障碍而出现的潮热。
在本发明中，所谓潮热抑制剂，是抑制、减轻、治疗、改善或预防作为潮热的症状的体表温度的局部性上升、和与此相伴的发热、头晕、潮红和多汗等症状的药剂。本发明的潮热抑制剂包含爱帕琳肽、或爱帕琳肽受体的激动剂，这些成分可以单独包含，或可以多个成分组合包含。在本发明中，所谓抑制剂，是指包含治疗剂、预防剂和改善剂。
本发明的潮热抑制剂可以单独使用，此外可以根据其使用目的而与溶剂、赋型剂、其它成分进行组合，适宜确定用量、用法、剂型。例如，本发明的抑制剂的施与形态可以为经口、非经口、外用等。作为制剂的剂型，可举出例如片剂、粉剂、胶囊剂、颗粒剂、浸膏剂、糖浆剂等经口施与剂、或注射剂、点滴剂、或栓剂等非经口施与剂软膏、乳膏、乳液、洗剂、浴用剂等外用剂。
本发明的潮热抑制剂中的本发明的爱帕琳肽等、或爱帕琳肽受体激动剂等的抑制剂的配合量可以根据用途而适宜确定，但一般在制剂中为0.00001～20.0质量%，优选为0.00001～10.0质量%。
此外，本发明的潮热抑制剂中，除了爱帕琳肽或爱帕琳肽受体激动剂以外，可以根据需要适宜配合例如通常的食品、药品所使用的赋形剂、防湿剂、防腐剂、增强剂、增稠剂、乳化剂、抗氧化剂、甜味料、酸味料、调味料、着色料、香料等、化妆品等中通常所使用的美白剂、保湿剂、油性成分、紫外线吸收剂、表面活性剂、增稠剂、醇类、粉末成分、色剂、水性成分、水、各种皮肤营养剂等。
本发明的其它方式中，本发明涉及包括施与爱帕琳肽或爱帕琳肽受体的激动剂的潮热的改善方法。在该情况下，爱帕琳肽或爱帕琳肽受体的激动剂对患有作为潮热的症状的体表温度的局部性上升、和与此相伴的头晕、发热、潮红、多汗中的任一种或其组合的人进行施与。所谓本发明的改善方法，是指包括治疗方法、预防方法和抑制方法的方法。爱帕琳肽或爱帕琳肽受体的激动剂通过经口、非经口(静脉内、动脉内、经皮、经粘膜)施与来施与。
在本发明的其它方式中，本发明涉及筛选潮热抑制剂的方法。该方法通过将爱帕琳肽受体的活性或爱帕琳肽的表达作为指标来进行。
将爱帕琳肽受体的活性作为指标的、筛选潮热抑制剂的方法可以通过测定皮肤细胞中的钙离子浓度、cAMP浓度等来将爱帕琳肽受体的活化作为指标。这里，活化爱帕琳肽受体的药剂由于是爱帕琳肽受体激动剂，因此本发明还涉及筛选爱帕琳肽受体激动剂的方法。在候选药剂可以降低皮肤细胞中的钙离子浓度、cAMP的情况下，可以将这些候选药剂确定为爱帕琳肽受体激动剂或潮热抑制剂。进而与由此选择出的候选药剂一起使用爱帕琳肽受体的中和抗体来进行二次筛选，在钙离子浓度、cAMP浓度一定程度恢复的情况下，可以将这样的候选药剂确定为爱帕琳肽受体激动剂或潮热抑制剂。由此确定的活化爱帕琳肽受体的药剂，即爱帕琳肽受体的激动剂只要活化爱帕琳肽受体，就可以为任意的物质，例如为化合物、提取物，优选为爱帕琳肽样的肽。
更具体而言，本发明的爱帕琳肽样药剂的筛选中，首先，作为1次筛选，将转染了cAMP荧光素酶报告载体的分离细胞(例如，NIH－3T3细胞)接种于96孔板，在其中添加候选药剂进行预孵育，通过佛司可林使腺苷酸环化酶活化后，对于荧光素酶的发光，通过发光计(例如，GloMaxTM96微孔板发光测定仪(Promega))来测定cAMP浓度，选定抑制由佛司可林引起的cAMP浓度上升的药剂。而且，接下来，为了确认cAMP浓度的减少介由APJ的活化，作为2次筛选，将1次筛选中所选定的药剂与爱帕琳肽中和抗体(例如，4G5)一起添加，进行与1次筛选同样的荧光素酶测定。其结果是通过中和抗体的添加，可抑制cAMP浓度的减少，可以将恢复cAMP浓度的减少直至80%以上、优选为90%以上、最优选为100%的药剂选定为爱帕琳肽样药剂。
将内源性爱帕琳肽作为指标的、筛选潮热抑制剂的方法的特征在于，将皮肤细胞中的内源性爱帕琳肽的表达作为指标，选定增强皮肤细胞中的内源性爱帕琳肽的表达的药剂作为潮热抑制剂。作为筛选潮热抑制剂的方法的一方式的内源性爱帕琳肽的表达的增强，可以通过例如直接测定皮肤细胞中的爱帕琳肽的量来确定。皮肤细胞中的爱帕琳肽的量的测定可以利用对爱帕琳肽特异性的抗体，通过本领域中周知的方法，例如利用荧光物质、色素、酶等的免疫染色法、蛋白质印迹法、免疫测定方法例如ELISA法、RIA法等各种方法来实施。此外，还可以通过从皮肤细胞中提取RNA，测定编码爱帕琳肽的mRNA的量来进行确定。mRNA的提取、其量的测定在本领域中也是周知的，例如RNA的定量也可以通过定量聚合酶链反应法(PCR)来进行。除了以上以外，还可以通过测定爱帕琳肽的已知的生物活性，来测定爱帕琳肽的表达量。此外，爱帕琳肽的表达可以通过原位杂交法、其生物活性的测定来确定。例如如果皮肤细胞中的内源性爱帕琳肽的表达与对照值相比增强30%以上、优选为50%以上、更优选为70%以上、最优选为100%以上，则可以判断为“潮热抑制剂”。作为对照值，没有限定，可以为例如统计学上显著的数目(例如10人以上，优选为100人以上)的健康人的对应部位中的皮肤细胞的内源性爱帕琳肽的表达量的平均值。
本说明书中，皮肤细胞中包含表皮细胞、成纤维细胞、血管/淋巴管内皮细胞、脂肪细胞，特别是表皮细胞中包含角质形成细胞、颗粒细胞、鳞状细胞等，可以来源于人，也可以是其它动物，例如大鼠、小鼠、兔等。
在优选的方式中，上述筛选方法进一步包括：将上述具有增强能力的候选药剂应用于施与了血管扩张剂的更年期模型动物，例如卵巢去除动物，确认可以排除内脏温度影响的部位中的体温降低效果。优选可以排除内脏温度影响的部位为尾部，尾部的体温可以使用温度记录法进行测定。
本发明人这次获得了以下认识：通过将爱帕琳肽受体的活性作为指标的筛选方法，包含寒莓、嫁菜、野木瓜、中南悬钩子、马兰、可食柯、杨梅、蒲桃和枹栎的植物体或其提取物、以及藏红花提取物、松树提取物、金鸡纳树提取物和聚合草提取物、黄芩提取物、迷迭香提取物、杏仁粒、龙胆提取物、百里香提取物、薄荷末、大枣提取物、啤酒花提取物、猕猴桃提取物、果香菊提取物、苹果提取物、山楂提取物和姜黄提取物的植物体或其提取物，使作为爱帕琳肽的受体的APJ活化，由此，具有与爱帕琳肽同样的功能的可能性极其高。因此，通过本发明，提供包含选自寒莓、嫁菜、野木瓜、中南悬钩子、马兰、可食柯、杨梅、蒲桃和枹栎的植物体或其提取物、以及藏红花提取物、松树提取物、金鸡纳树提取物和聚合草提取物、黄芩提取物、迷迭香提取物、杏仁粒、龙胆提取物、百里香提取物、薄荷末、大枣提取物、啤酒花提取物、猕猴桃提取物、果香菊提取物、苹果提取物、山楂提取物和姜黄提取物中的一个或多个成分的爱帕琳肽受体激动剂。
此外，本发明人等，如上所述，发现在更年期障碍的潮热的模型中，显示出爱帕琳肽有助于潮热的抑制、改善、预防或治疗这样的令人震惊的认识。因此，通过上述筛选方法获得的活化爱帕琳肽受体的爱帕琳肽受体激动剂对于潮热的抑制、改善、预防或治疗是有用的。因此，可提供包含选自上述爱帕琳肽受体激动剂的组中的一个或多个成分的潮热抑制剂。
寒莓(Rubus buergeri)为分类至蔷薇科草莓属的植物的一种，为常绿的攀缘性小灌木。分布于日本的九州、四国、关东以西的本州、中国中南部、台湾、朝鲜半岛南部，果实从11月至1月前后成熟，以所谓木莓的形式被食用。
嫁菜(Aster yomena)为菊科的多年生草本，分布于日本的中部地方以西的本州、四国、九州。一般而言，已知为野菊的一种，在秋季开出淡紫或白色的菊花。嫩芽被食用。
野木瓜(Stauntonia hexaphylla)为木通科野木瓜属的常绿攀缘性木本植物，也被称为常磐木通。分布于日本的本州、关东以西、台湾、中国。果实被食用，此外茎、根具有利尿作用，作为生药使用。
中南悬钩子(Rubus grayana)为分类至蔷薇科悬钩子属的植物的一种，为落叶灌木。也被称为中南悬钩子(シマアワイチゴ)，分布于从日本的种子岛、屋久岛以南至琉球各岛沿岸的山区、台湾的热带、亚热带。在4月～5月开花。果实在橙色时被食用。
马兰(Kalimeris indica)为分类至菊科马兰属的植物的一种，为常绿的多年生草本。为南亚原产，在日本，分布于四国、九州南部以南的冲绳等。高度为30cm左右，秋季开花。由于与嫁菜相比小一圈，因此也被称为小嫁菜。与嫁菜同样，嫩芽被食用。
可食柯(Lithocarpus edulis)为壳斗科的常绿乔木，分布于日本的本州的房总半岛的南端、纪伊半岛、九州至南西各岛的温暖的沿岸地。果实不太包含丹宁，因此不需要去除涩味，直接炒而被食用。还可以粉碎成粉状与饼干的坯料混合并食用。
杨梅(Myrica rubra)为以中国大陆、日本作为原产的杨梅目杨梅科的常绿树，果实除了生食用以外，还被用于果酱、果酒等饮品食品中。此外，还报告了可以作为脂肪分解促进剂使用。
蒲桃(Syzygium jambos)为将东南亚作为原产的桃金娘科的常绿乔木，果实味淡但有蔷薇那样的芳香而被食用。此外，还报告了可以作为抗肥胖剂使用。
枹栎(Quercus serrata)为分布于北海道、本州、四国、九州、朝鲜半岛、中国的壳斗目壳斗科栎属的落叶阔叶树，木材被使用于木炭的原料、香菇的原木，果实还可以通过去除涩味来食用。报告了可以作为肥胖预防剂使用。
这9种植物也在日本广泛分布，此外也进行了栽培，因此是能够容易获得的植物。
藏红花提取物为来源于将地中海沿岸、小亚细亚作为原产的作为鸢尾科的多年生草本的藏红花(Crocus sativus L.)的提取物，可以将该植物的球根、根、叶、茎、花、花柱、植物整体，优选花柱作为原材料使用。已知藏红花提取物包含作为类胡萝卜素糖苷的藏花素、苦藏花素、藏花酸等作为成分，具有血液循环促进作用、皮肤细胞活性作用。
松树提取物为来源于在西伯利亚、欧洲、亚洲广泛分布，在日本也作为一般的植被而可见的黑松(Pinus thunbergii)、赤松(Pinus densiflora)等常绿针叶树的松属(Pinus)植物的提取物，可以将该植物的根、叶、树皮、球果、植物整体，优选树皮作为原材料使用。已知松树提取物包含多糖类、氨基酸等作为成分，具有保湿作用、柔软作用。
金鸡纳树提取物为来源于将热带地域作为原产的作为常绿树的金鸡纳属(Cinchona)植物的提取物，可以将该植物的根、叶、树皮、花、植物整体，优选树皮作为原材料使用。已知金鸡纳树提取物包含奎尼丁、奎宁、辛可宁等作为成分，具有保湿作用、血液循环促进作用。
聚合草提取物为来源于将欧洲作为原产，在日本也被广泛栽培的作为多年生草木的鳍针草(英名：聚合草)(Symphytum officinale)的植物，可以将根、叶、茎、花、植物整体，优选叶作为原材料使用。已知聚合草提取物包含尿囊素、丹宁、维生素类等作为成分，具有消炎作用、保湿作用。
黄芩提取物为来源于唇形科黄芩属的多年生草本，将中国大陆北部作为原产的黄芩(Scutellaria baicalensis)的根(黄芩)的提取物，已知具有老化防止作用，可作为生活习惯病等的治疗药、化妆品等的有效成分使用。
迷迭香提取物为来源于将地中海沿岸作为原产的作为唇形科的常绿灌木的迷迭香(Rosmarinus officinalis)的芳香性的提取物，可以将该植物的根、叶、茎、花、植物整体作为原材料使用。已知具有交感神经活化作用、瘦身作用，可作为药品、食品、化妆品等的有效成分使用。
杏仁粒为将中国大陆北部作为原产的杏(Prunus armeniaca L.)或其近缘植物的种子的内果皮进行粉碎而制作的粒子状的原料。杏仁粒可以直接粉碎或干燥后粉碎而制成干燥粉末，或将这些原料用溶剂提取，作为提取物使用。已知杏仁粒或其提取物具有脂肪分解促进作用、瘦身作用，可作为药品、化妆品等的有效成分使用。
龙胆提取物为来源于将欧洲作为原产的作为龙胆科的多年生草本的龙胆(Gentiana lutea)的提取物，可以将该植物的根、叶、茎、花、植物整体作为原材料使用。已知具有脂肪分解作用、瘦身作用，可作为药品、化妆品等的有效成分使用。
百里香提取物为来源于将欧洲、北非、亚洲作为原产的属于唇形科百里香属(Thymus)的植物，特别是百里香(common thyme)的提取物，可以将该植物的根、叶、茎、花、植物整体作为原材料使用。已知具有脂肪分解作用，可作为药品、食品、化妆品等的成分使用。
薄荷末为使以地中海沿岸、欧洲、亚洲东部作为原产的唇形科薄荷属(Mentha)的多年生草本植物的全植株干燥而制成粉末的物质。已知具有脂肪燃烧作用，可作为药品、食品、化妆品等的成分广泛使用。
大枣提取物为来源于将欧洲作为原产的鼠李科枣(Ziziphus jujuba)的提取物，该植物的植物整体，特别是未成熟果实作为原材料使用。已知具有瘦身作用，可作为药品、食品、化妆品等的成分使用。
啤酒花提取物为来源于将欧洲作为原产的桑科植物的啤酒花(Humulus lupulus)的提取物，该植物的植物整体，特别是雌花穗作为原材料使用。已知具有脂肪细胞分化抑制作用、抗炎症作用，可作为肥胖、伴随肥胖的疾病、与炎症反应相关的病理学状态的治疗药、食品、化妆品的成分使用。
猕猴桃提取物为来源于将中国作为原产的猕猴桃科猕猴桃属的雌雄异株的猕猴桃水果(Actinidia deliciosa)的提取物，该植物的植物整体，特别是果实作为原材料使用。报告了具有抗肥胖作用，可作为高血压症、高脂血症、肥胖症等的治疗药、食品、化妆品的成分使用。
果香菊提取物为来源于将欧洲作为原产的菊科黄春菊属的果香菊(Chamaemelum nobile)的提取物，该植物的植物整体，特别是花作为原材料使用。已知具有脱氢表雄酮(DHEA)产生促进作用，报告了可作为皮肤改善剂等的抗衰老剂、免疫活化剂、抗糖尿病剂、抗骨质疏松症剂、抗肥胖剂、睡眠促进剂、抗中枢神经剂等药品使用。
苹果提取物为来源于将中亚作为原产的蔷薇科苹果属的苹果(Malusdomestica)的提取物，该植物的植物整体，特别是果实作为原材料使用。报告了包含原花青素作为成分，可以作为抗肥胖剂使用。
山楂提取物为来源于蔷薇科山楂属的山楂(Crataegus cuneata)的提取物，可以将该植物的花、叶、果实、植物整体作为原材料使用。已知具有脂肪燃烧促进作用，可作为饮品食品的成分使用。
姜黄提取物为来源于姜目姜科的姜黄属的姜黄(Curcuma longa)的提取物，已知具有脂质代谢改善作用、脂质分解促进作用，广泛作为药品、食品、化妆品等的成分使用。
这些植物提取物的提取方法没有特别限定，优选为使用了溶剂的提取法。在进行提取时，也可以将上述原材料直接使用，但粉碎、细断成粉末状而供于提取时，可以在温和的条件下在短时间以高提取效率进行有效成分的提取。
另外，本发明中所使用的各植物的植物体或其提取物，是指将各自的植物体的各种部位(花、花穗、果皮、果实、茎、叶、枝、枝叶、干、树皮、根茎、根皮、根、种子或全植株等)直接粉碎或干燥后粉碎而制成干燥粉末的物质，或者直接或干燥、粉碎后用溶剂提取而得到的物质。
作为上述植物体的提取部位，可以使用上述植物体的任一部位，但关于寒莓优选为叶，关于嫁菜优选为叶、茎，关于野木瓜优选为茎、根，关于中南悬钩子优选为叶，关于马兰优选为叶、茎，关于可食柯优选为果实，关于杨梅优选为例如树皮、粘液、果实、种子、花、枝、叶、根等，特别优选为叶、枝，关于蒲桃优选为例如树皮、粘液、果实、种子、花、枝、叶、根等，特别优选为叶、枝，关于枹栎优选为例如树皮、粘液、果实、种子、花、枝、叶、根等，特别优选为叶、树皮、枝、根。
提取温度没有特别限定，只要根据原材料的粉碎物的大小、溶剂的种类等进行适宜设定即可。通常在从室温至溶剂的沸点的范围内进行设定。此外，提取时间也没有特别限定，只要根据原材料的粉碎物的大小、溶剂的种类、提取温度等进行适宜设定即可。此外，提取时可以进行搅拌，也可以不搅拌而静置，可以施加超声波。
例如，上述植物提取物可以将原材料浸渍在溶剂中，在室温或80℃～100℃进行提取。可以将通过提取处理获得的提取液过滤后，直接或根据需要进行浓缩或干燥固化而得的产物作为活性成分使用。另外，该提取处理时，原材料可以使用细断或粉碎而得的物质。此外，可以使用未加工的原材料或干燥过的原材料，或可以使用烘烤过的原材料。烘烤方法没有特别限定，可举出在80℃～120℃烘烤0.5小时～2小时的方法。
提取时所使用的溶剂的种类没有特别限定，优选为水(包含热水等)、醇(例如甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1-丁醇、2-丁醇)、二醇(例如1,3-丁二醇、丙二醇)、甘油、酮(例如丙酮、甲基乙基酮)、醚(例如乙醚、二烷、四氢呋喃、丙醚)、乙腈、酯(例如乙酸乙酯、乙酸丁酯)、脂肪族烃(例如己烷、庚烷、液体石蜡)、芳香族烃(例如甲苯、二甲苯)、卤代烃(例如氯仿)、或它们中的2种以上的混合溶剂。
通过这样的提取操作，从原材料提取有效成分，溶入溶剂中。包含提取物的溶剂可以直接使用，也可以静置数日而使其熟化后使用。此外可以进行灭菌、洗涤、过滤、脱色、脱臭等惯用的精制处理后使用。此外，可以根据需要进行浓缩或稀释后使用。此外，可以使溶剂全部挥发而制成固体状(干燥物)后使用，可以将该干燥物再溶解于任意的溶剂中而使用。
此外，在将本发明的潮热抑制剂、爱帕琳肽受体激动剂作为皮肤外用剂使用的情况下，还可以适宜配合皮肤外用剂中惯用的助剂，例如乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸三钠、柠檬酸钠、多磷酸钠、偏磷酸钠、葡糖酸等金属螯合剂、咖啡因、丹宁、维拉帕米、凝血酸及其衍生物、甘草提取物、光甘草定、木瓜的果实的热水提取物、各种生药、生育酚乙酸酯、甘草酸及其衍生物或其盐等药剂、维生素C、抗坏血酸磷酸镁、抗坏血酸葡糖苷、熊果苷、曲酸等美白剂、葡萄糖、果糖、甘露糖、蔗糖、海藻糖等糖类、视黄酸、视黄醇、乙酸视黄醇酯、棕榈酸视黄醇酯等维生素A类等。
本发明涉及的潮热抑制剂、爱帕琳肽受体激动剂还用于以对患有潮热的人改善潮热作为目的的美容学方法。该美容学方法可以通过例如将本发明涉及的潮热抑制剂应用于呈现潮热的部位来进行。该方法中的呈现潮热的部分中可举出全身的所有部位，特别优选为面部。
本发明的其它方式中，涉及含有载体的潮热抑制剂，所述载体包含插入有爱帕琳肽基因的载体。该抑制剂是为了在被检体中的编码爱帕琳肽的基因(爱帕琳肽基因)处于非活性状态或沉默状态，其结果细胞处于爱帕琳肽缺损状态的情况下，将爱帕琳肽基因本身导入至细胞内而使用的。在该载体中，优选将使爱帕琳肽基因的表达增强的调节序列，例如启动子、增强子配置于对爱帕琳肽基因可操作的位置。
作为将爱帕琳肽基因导入至细胞内的方法，可举出利用了病毒载体的基因导入方法、或非病毒性的基因导入方法(日经サイエンス，1994年4月号，20-45页，实验医学增刊，12(15)(1994)，和实验医学别册“遺伝子治療の基礎技術”，羊土社(1996))的任一方法都可以应用。作为通过病毒载体进行的基因导入方法，可举出例如在反转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒、牛痘病毒、痘病毒、脊髓灰质炎病毒、辛德毕斯病毒等DNA病毒、或RNA病毒中插入编码爱帕琳肽的DNA进行导入的方法。其中，特别优选使用了反转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、牛痘病毒的方法。作为非病毒性的基因导入方法，可举出将表达质粒直接施与肌肉内的方法(DNA疫苗法)、脂质体法、脂质体转染法、显微注射法、磷酸钙法、电穿孔法等，特别优选为DNA疫苗法、脂质体法。此外，为了使上述基因实际上作为药物起作用，有将DNA直接导入至体内的体内法；和从人中取出某种细胞而在体外将DNA导入至该细胞，将该细胞返还至体内的体外法(日经サイエンス，1994年4月号，20-45页，实验医学增刊，12(15)(1994)，和月刊药事，36(1),23-48(1994))。更优选为体内法。在通过体内法进行施与的情况下，可以通过与疾病、症状等对应的适当给药途径来施与。例如，可以施与至静脉、动脉、皮下、皮内、肌肉内等。在通过体内法进行施与的情况下，一般而言采用注射剂等，可以根据需要添加惯用的担载体。此外，在制成脂质体或膜融合脂质体(仙台病毒(HVJ)－脂质体等)的形态的情况下，可以制成悬浮剂、冷冻剂、离心分离浓缩冷冻剂等脂质体制剂。
因此，本发明的进一步的实施方式中，提供用于潮热的抑制或改善的、包含载体、或爱帕琳肽受体激动剂的抑制剂，所述载体是包含编码爱帕琳肽的基因而成的。在该情况下，编码爱帕琳肽的基因优选与使爱帕琳肽基因的表达增强的调节序列可操作地连接。
制剂中的本发明的包含编码爱帕琳肽的基因的载体(本发明的抑制剂)的配合量可以根据用途进行适宜确定，一般而言在制剂剂中为0.00001～20.0质量%，优选为0.00001～10.0质量%。
通过以下的实施例，进一步具体地说明本发明。另外，本发明不限定于此。
实施例
实施例1：爱帕琳肽的潮热抑制作用
对在K14启动子的控制下使爱帕琳肽在表皮高表达的C57/BL6小鼠(以下，称为爱帕琳肽高表达小鼠、爱帕琳肽TG、或TG)和对应的野生型小鼠(C57/BL6)(N＝5，都为8～10周龄)，实施卵巢摘除手术，制成更年期爱帕琳肽高表达小鼠、更年期野生型小鼠。另外，作为对照，使用实施了假手术的野生型小鼠。4周后，将作为血管扩张剂的硝苯地平(50μg/kg)进行腹腔内施与，在施与10分钟后、30分钟后、45分钟后，使用温度记录法(サーモトレーサTH9100MR，NEC/Avio红外线技术)来解析尾部的温度变化。
结果
对于对照的野生型小鼠(shamWT)，血管扩张剂施与10分钟后上升的皮肤温度在30分钟后恢复成稳定状态，然后也为一定的状态(图1)。另一方面，对于更年期野生型小鼠(OVXWT)和更年期爱帕琳肽高表达小鼠(OVXTG)，10分钟后血管扩张剂施与后与对照(shamWT)相比，体温显著地上升，OVXWT在30分钟后、45分钟后，相对于shamWT和OVXTG的任一者，体温都显著地高。另一方面，对于OVXTG，30分钟后与OVXWT相比，体温降低，45分钟后体温降低直至与对照的shamWT相同程度。通过计测施与了血管扩张剂的更年期小鼠的尾部的温度，从而可以将更年期的潮热模型化(Kai M,Yamauchi A,Tominaga K,Koga A,Kai H,Kataoka Y:Soybean isoflavones eliminate nifedipine induced flushing oftail skin in ovariectomized mice,J Pharmacol Sci2004,95:476-478)。因此，由上述结果显示，爱帕琳肽可以在短期间抑制或改善由潮热引起的暂时的体温上升。
实施例2.爱帕琳肽样药剂的筛选体系的确立
APJ表达细胞的培养
在NIH3T3细胞中使爱帕琳肽受体APJ高表达，在由潮霉素选择出的稳定株(由大阪大学微生物病研究所高仓伸幸教授提供)中转染cAMP荧光素酶报告载体，将其用于以下的cAMP荧光素酶测定。培养采用包含200μg/ml的潮霉素的含有10%FBS的DMEM培养基(Invirtogen)进行。在测定前一天，在96孔板中每1孔接种2.0×105个细胞，用包含10%FBS和200μg/ml潮霉素的DMEM培养基进行培养。
cAMP荧光素酶测定
培养一晚后，将培养基用吸液器除去，更换为每1孔100μl的不含添加剂的DMEM培养基。3小时后，将GloSensorTM cAMP试剂(Promega)每1孔各添加4μl，遮光，在室温平衡化2小时。然后，用不含添加剂的DMEM培养基稀释以使爱帕琳肽13(ペプチド研究所)为0.4μg/ml，将其每1孔各添加50μl(最终浓度为0.1μg/ml)，在室温预孵育5分钟。然后，添加调整至40μM的佛司可林(Sigma)各50μl(最终浓度为10μM)，处理15分钟。然后，使用GloMaxTM96微孔板发光测定仪(Promega)来测定发光。此外，与爱帕琳肽一起添加作为爱帕琳肽中和抗体的4G5(由大阪大学提供)进行与上述同样的荧光素酶测定。在该情况下，以成为5μg/ml的方式用不含中和抗体的DMEM培养基稀释，每1孔各添加50μl(最终浓度0.5μg/ml)。同样地，调制最终浓度成为1.5、5、15和50μg/ml那样的中和抗体，分别添加至孔中。作为对照，不添加爱帕琳肽，每1孔添加100μl的20μM的佛司可林。
将上述cAMP荧光素酶测定的结果示于图3中。由图3可知，通过爱帕琳肽而使cAMP浓度减少，另一方面，随着由爱帕琳肽中和抗体引起的爱帕琳肽活性的消失，cAMP浓度的减少被抑制。即，在上述cAMP荧光素酶测定中，首先，在代替爱帕琳肽而添加候选药剂的情况下，寻找使cAMP浓度减少的药剂(1次筛选)，接下来，从这些药剂中，进一步挑选与爱帕琳肽中和抗体一起添加的情况下显著地抑制cAMP浓度的减少的药剂(2次筛选)，从而能够短时间并且有效率地选定介由作为爱帕琳肽受体的APJ的活化而使cAMP浓度减少的药剂(即爱帕琳肽样药剂)。
实施例3.爱帕琳肽样药剂的筛选(1)
作为候选药剂，使用约250种化妆品原材料(株式会社资生堂)，通过在实施例2中确立的筛选体系来进行爱帕琳肽样药剂的选定。
具体而言，将候选药剂调制为400μg/ml，代替实施例2的cAMP荧光素酶测定中所使用的爱帕琳肽，每1孔各添加50μl(最终浓度100μg/ml)，进行与实施例2同样的测定。
如图4所示，藏红花提取物、松树提取物、金鸡纳树提取物和聚合草提取物、黄芩提取物、迷迭香提取物、杏仁粒、龙胆提取物、百里香提取物、薄荷末、大枣提取物、啤酒花提取物、猕猴桃提取物、果香菊提取物、苹果提取物、山楂提取物和姜黄提取物，使细胞内的cAMP浓度显著地减少，此外在与爱帕琳肽中和抗体(4G5)一起添加的情况下，通过爱帕琳肽活性的消失而显著地抑制cAMP浓度的减少，因此这些植物提取物显示具有与爱帕琳肽同样的功能。
实施例4.爱帕琳肽样药剂的筛选(2)
作为候选药剂，使用约110种食品原材料(株式会社资生堂)，通过实施例2中确立的筛选体系进行爱帕琳肽样药剂的选定。
具体而言，将候选药剂调制为400μg/ml，代替实施例2的cAMP荧光素酶测定中所使用的爱帕琳肽，每1孔各添加50μl(最终浓度100μg/ml)，进行与实施例2同样的测定。
如图5所示，寒莓、嫁菜、野木瓜、中南悬钩子、马兰、可食柯、杨梅、蒲桃和枹栎的提取物，使细胞内的cAMP浓度显著地减少，此外在与爱帕琳肽中和抗体(4G5)一起添加的情况下，通过爱帕琳肽活性的消失而显著地抑制cAMP浓度的减少，因此这些植物提取物显示具有与爱帕琳肽同样的功能。
Figure IDA0000390638020000011

Claims (7)

1.一种潮热抑制剂，其包含：爱帕琳肽、或爱帕琳肽受体的激动剂。
2.根据权利要求1所述的潮热抑制剂，所述爱帕琳肽为以下的蛋白质：
(a)包含序列号1所示的氨基酸序列的蛋白质，或者
(b)包含在序列号1的氨基酸序列中缺失、置换或添加了一个或数个氨基酸的氨基酸序列，并且具有爱帕琳肽活性的蛋白质。
3.根据权利要求1所述的潮热抑制剂，所述爱帕琳肽受体的激动剂选自：寒莓、嫁菜、野木瓜、中南悬钩子、马兰、可食柯、杨梅、蒲桃和枹栎的植物体或其提取物，以及藏红花提取物、松树提取物、金鸡纳树提取物和聚合草提取物，黄芩提取物、迷迭香提取物、杏仁粒、龙胆提取物、百里香提取物、薄荷末、大枣提取物、啤酒花提取物、猕猴桃提取物、果香菊提取物、苹果提取物、山楂提取物和姜黄提取物。
4.潮热的治疗、改善或预防方法，其包括施与爱帕琳肽、或爱帕琳肽受体的激动剂。
5.根据权利要求4所述的潮热的治疗、改善或预防方法，所述爱帕琳肽为以下的蛋白质：
(a)包含序列号1所示的氨基酸序列的蛋白质，或者
(b)包含在序列号1的氨基酸序列中缺失、置换或添加了一个或数个氨基酸的氨基酸序列，并且具有爱帕琳肽活性的蛋白质。
6.根据权利要求4所述的潮热的治疗、改善、或预防方法，所述爱帕琳肽受体的激动剂选自：寒莓、嫁菜、野木瓜、中南悬钩子、马兰、可食柯、杨梅、蒲桃和枹栎的植物体或其提取物，以及藏红花提取物、松树提取物、金鸡纳树提取物和聚合草提取物，黄芩提取物、迷迭香提取物、杏仁粒、龙胆提取物、百里香提取物、薄荷末、大枣提取物、啤酒花提取物、猕猴桃提取物、果香菊提取物、苹果提取物、山楂提取物和姜黄提取物。
7.一种潮热抑制剂的筛选方法，其将爱帕琳肽受体的活性或爱帕琳肽的表达作为指标。
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