TW201237174A - Method for measuring resistance or sensitivity to Docetaxel - Google Patents

Method for measuring resistance or sensitivity to Docetaxel Download PDF

Info

Publication number
TW201237174A
TW201237174A TW101120202A TW101120202A TW201237174A TW 201237174 A TW201237174 A TW 201237174A TW 101120202 A TW101120202 A TW 101120202A TW 101120202 A TW101120202 A TW 101120202A TW 201237174 A TW201237174 A TW 201237174A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
sirna
docetaxel
rna
cells
mrna
Prior art date
Application number
TW101120202A
Other languages
English (en)
Inventor
Dorre Grueneberg
Xi Huang
Sridaran Natesan
Paul August
Original Assignee
Aventis Pharma Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Aventis Pharma Inc filed Critical Aventis Pharma Inc
Publication of TW201237174A publication Critical patent/TW201237174A/zh

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/5308—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for analytes not provided for elsewhere, e.g. nucleic acids, uric acid, worms, mites
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/106—Pharmacogenomics, i.e. genetic variability in individual responses to drugs and drug metabolism
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/178—Oligonucleotides characterized by their use miRNA, siRNA or ncRNA

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

201237174 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 發明領域 本發明涉及某些新穎、有效且在此之前是未知的方法’ 這些方法通過測量特定遺傳標記物較對照物的增加或減 少’可預測或監測患者對於紫杉醇類(taxoid)化合物分子的反 應。本發明還提供了某些套組，這些套組通過測量特定遺傳 標記物的核酸或蛋白水平並與對照物或參照標記物比較，可 預測或監測患者對於紫杉醇類化合物分子的反應。 【先前技術】 本發明之背景 多西紫杉醇(D0cetaxel)是一種抗有絲分裂藥物，廣泛地 f於乳癌、肺癌和印巢癌的治療，其次，還用於頭部、頸部、 胃部和前列腺的癌症治療(Hong，〜⑺/哪16 : 9，2002)。 多西紫杉醇通過與P·微管蛋白結合以及阻止α·和β·微管蛋 白雜二聚物的分解來抑制微管動力學過程，從而終止腫瘤的 生長(Rmgel and Η〇πνίΐζ，/細 細 83 ·挪，1991)。 多西紫杉醇和-種相關紫杉烧細㈣即太平洋紫杉醇 iaditaXd)的抗腫瘤活性，起因於乾向有絲分裂紡錘體的微 隔，阻止二胞週期性進S並激二 壯途郵vang c_ 88 ·•聊， P53/P2lwafl/Cipl、Γ砂阳和有絲分 ;=^/及 (MAPK,細胞信號事件’太平洋 ：:： 的蛾酸化和失活被聯與 201237174 2619，2000)。雖然多西紫杉醇是一種比太平洋紫杉醇更有 效的抗癌劑，但涉及其細胞毒性的途徑卻尚未很好地確定 (Katsumata，89 : S9, 2003)。在某些細胞係中觀察 到了多西紫杉醇通過一種涉及Bcl-2填酸化和胱冬裂酶 -3(caspase-3)活化的機制所誘發的凋亡(K〇ifsch〇ten β α/， Biochem Pharmacol 63 : 733,2002)。在各種培養的細胞係内 調節紫杉烷誘發的細胞殺傷作用的其它蛋白包括HeLa細胞 内的 Aurora-A(Anand ei a/.，Cimcer Ce" 3 : 51，2003)、乳腺 癌細胞内的 HER-2(Tanabe β α/.，/相22 : 875, 2003)、 膠質母細胞瘤細胞内的p21wafl/Cipl(Li β α/·, 伽/ aem 277 : 11352, 2002)以及卵巢癌細胞内的 jNK/MKKl(Lee β α/.，《/所〇/ 273 : 28253，1998)。 在本領域内存在著一種需要，即需要鑑別某些可誘發對 於多西紫杉醇的抗藥性的藥用蛋白，這種抗藥性使這些蛋白 在藥物開發過程中可用於鑑別那些可消除其活體内功能並 能提高細胞對於抗腫瘤藥物化療敏感性的藥劑（小分子、 siRNA等）。在本領域内還需要一種測定方法，用於在化療 前可靠地預測哪些患者在接受基於多西紫杉醇抗腫瘤藥物 的化療之後會有起色，而哪些患者則不會。申請人在本文中 描述了 一種新穎的測定方法，該測定方法能預测對於多西紫 杉醇的抗藥性和/或敏感性，並為能消除癌症抗荜性 法的發展提供了某些驗方法。 ^ 【發明内容】 本發明之概述 4 201237174 依照本發明提供了某些新穎和有效的方法，通過比較患 者和對照物體内特定遺傳標記物的活化和/或表達的水平Γ 監測和/或預測患者對紫杉醇類化合物分子的反應。 在一具體實施例中，本發明提供了一種預測或監測癌症 患者對紫杉醇類化合物分子的反應的方法，其包括以下步 a) 從上述患者的癌症部位採取試驗樣本； b) 採取對照樣本； c) 測量一種或一種以上遺傳標記物的水平；以及 d) 在試驗樣本和對照樣本之間比較所測的上述一種 或一種以上遺傳標記物的水平； 分子抗藥性的增強 其中，與對照樣本比較，在試驗樣本内所測的上述一種 或-種以上遺傳標記物水平的下降表明對紫杉醇類化合物 在本發明之這-方面所提供的特定遺傳標記物包括：
Mad2 :智人 MAD2 AJ000186)；
BubR1 .智人，類似於蛋白激酶(BUBRl)mRNA，完全 cds(互補DNA)(基因庫檢索號·· AF〇46〇79); 蛋白mRNA(基因庫檢索號： 蛋白激酶(TTK)，mRNA(基因庫檢索
Mpsl :智人 TTK 號：NM—003318);
Racl/CDC42 的 GEFT : (GEFT) ’轉錄變異體2， NM—133483); 智人RAC/CDC42交換因子 mRNA(基因庫檢索號： 5 201237174
Bubl :智人BUB1(苯并咪唑1同系物解除抑制芽殖)(酵 母)(BUB1) ’ mRNA(基因庫檢索號：NM_004336); hSepharase ··智人額外紡錘極樣ι(釀酒酵母)(EspL1)， mRNA(基因庫檢索號：NM_012291);
CamKIId :智人約/辦調素依賴性蛋白激酶(CaM激酶)工工 5(CAMK2D)，轉錄變異體3，mRNA(基因庫檢索號： NM_001221)； CDK6 :智人週期蛋白依賴性蛋白激酶6(CDK6)， mRNA(基因庫檢索號：NM_001259); GRB2 :智人生長因子受體結合蛋白2(GRB2)，轉錄變 異體1，mRNA(基因庫檢索號：NM_002086); 在另一具體實施例中，本發明涉及一種預測或監測癌症 患者對紫杉醇類化合物分子的反應的方法，其包括以下步 驟： a) 從上述患者的癌症部位採取試驗樣本； b) 採取對照樣本； c) 測量一種或一種以上遺傳標記物的水平；以及 d) 在試驗樣本和對照樣本之間比較所測的上述一種 或一種以上遺傳標記物的水平； 其中，與對照樣本比較，在試驗樣本内所測的上述一種 或一種以上遺傳標記物水平的下降表明對紫杉醇類化合物 分子敏感性的增強。 在本發明的這一具體方面，一種或一種以上遺傳標記物 可選自以下一組遺傳標記物： 6 201237174 P21(Wafl):智人週期蛋白依賴性蛋白激酶抑制劑 1Α(ρ2卜Cipl)(CDKNlA) ’轉錄變異體;i ’ mRNA(基因庫檢 索號：NM_000389);
Pim-1 :智人pim-1致癌基因(PIM1)，mRNA(基因庫檢 索號：NM_002648); GBP-1 .智人鳥皆酸結合蛋白1，干擾素可誘導， 67kDa(GBPl)，mRNA(基因庫檢索號：NM_002053); RXRA :智人類視黃醇X受體，a (RXRA)，mRNA(基 因庫檢索號：NM_002957); SPF45:智人RNA結合基序蛋白i7(RBM17)，mRNA(基 因庫檢索號：NM_032905);
Heel :智人著絲粒相關2(KNTC2)，mRNA(基因庫檢索 號：NM_006101);
Rafl :智人raf致癌基因的mRNA(基因庫檢索號： X03484)；
Aurora A :智人aurora_相關激酶，完全 cds(基因庫檢索號：AF008551); TACC3 :智人轉化、含酸性捲曲螺旋的蛋白 3(TACC3) ’ mRNA(基因庫檢索號：NM_006342);
RdB :智人v-rel網狀内皮組織增生病毒致癌基因同系 物B ’ B-細胞3(鳥類）的κ輕多肽基因增強子的核因子 (RELB) ’ mRNA(基因庫檢索號：ΝΜ_〇〇65〇9); PRKCD :智人蛋白激酶c，s(prkCD)，轉錄變異體卜 mRNA(基因庫檢索號：NM_〇〇6254); 201237174 BRAF35 ··智人高遷移率族 20B(HMG2〇B)，mRNA(基 因庫檢索號·· NM_006339); HSPA1L :智人熱休克 70kDa 蛋白 1A(HSPA1A)， mRNA(基因庫檢索號：NM_〇〇5345); STK11 :智人絲胺酸/蘇胺酸激酶u(黑斑息肉综合 征XSTK11)，mRNA(基因庫檢索號：NM_000455); MKK3 :智人MAP激酶激酶3(MKK3)mRNA，完全 cds(基因庫檢索號：L36719)。 在一更進一步的具體實施例中，本發明涉及一種預測或 監測癌症患者對紫杉醇類化合物分子的反應的方法，其包括 以下步驟： a) 從上述患者的癌症部位採取試驗樣本； b) 測量選自以下一組遺傳標記物的一種或一種以上遺 傳標記物的水平：
BubRl :智人，類似於蛋白激酶(BUBR1)mRNA，完全 cds(互補DNA)(基因庫檢索號：AF046079);
Mad2 :智人MAD2蛋白mRNA(基因庫檢索號： AJ000186)；
Mpsl :智人TTK蛋白激酶(TTK)，mRNA(基因庫檢索 號：NM—003318);
Racl/CDC42 的 GEFT :智人 RAC/CDC42 交換因子 (GEFT) ’轉錄變異體2，mRNA(基因庫檢索號： NM—133483); )
Bubl :智人BUB1(苯并咪唑i同系物解除抑制芽殖)(酵 8 201237174 母)(BUB1)，mRNA(基因庫檢索號：NM_〇〇4336); hSepharase ··智人額外紡鐘極樣1(釀酒酵母)(espli)， mRNA(基因庫檢索號：NM_012291);
CamKIId :智人鈣/i弓調素依賴性蛋白激酶(CaM激酶)π 3(CAMK2D)，轉錄變異體3，mRNA(基因庫檢索號： NM_001221)； CDK6 :智人週期蛋白依賴性蛋白激酶6(CDK6)， mRNA(基因庫檢索號：NM_001259); GRB2 :智人生長因子受體結合蛋白2(GRB2)，轉錄變 異體1，mRNA(基因庫檢索號：NM_002086); c) 測量選自以下一組遺傳標記物的一種或一種以上參照 遺傳標記物的水平： GAPDH :智人3-磷酸甘油醛脫氫酶(GAPD)，mRNA(基 因庫檢索號：NM_002046); RPS9 :智人 cDNA 克隆 IMAGE:6647283，部份 cds(基 因庫檢索號：BC071941); d) 比較試驗樣本中所測的上述一種或一種以上遺傳標 記物的水平和上述一種或一種以上參照遺傳標記物的水平； 其中’與上述一種或一種以上參照遺傳標記物的水平比 較’在上述一種或一種以上遺傳標記物水平的下降表明對紫 杉醇類化合物分子抗藥性的增強。 本發明的另一個進一步的具體實施例涉及一種預測或 監測癌症患者對紫杉醇類化合物分子的反應的方法，其包括 以下步驟： 201237174 a) 從上述患者的癌症部位採取試驗樣本； b) 測量選自以下一組遺傳標記物的一種或一種以上遺 傳標記物的水平： P21(Wafl):智人週期蛋白依賴性蛋白激酶抑制劑 1Α(ρ21，CiPl)(CDKNlA)，轉錄變異體卜mRNA(基因庫檢 索號：NM_000389);
Pim-1 :智人pim-1致癌基因(PIM1)，mRNA(基因庫檢 索號：NM_002648); GBP-1 :智人鳥苷酸結合蛋白1，干擾素可誘導， 67kDa(GBPl)，mRNA(基因庫檢索號：NM—002053); RXRA :智人類視黃醇X受體，o^rxra)，mRNA(基因 庫檢索號：NM_002957); SPF45:智人RNA結合基序蛋白n(RBM17)’mRNA(基 因庫檢索號：NM_032905);
Heel :智人著絲粒相關2(KNTC2)，mRNA(基因庫檢索 號：NM—006101);
Rafl :智人raf致癌基因的mRNA(基因庫檢索號： X03484)；
Aurora A :智人 aurora-相關激酶 i(ARKl)mRNA，完全 cds(基因庫檢索號：AF008551); TACC3 :智人轉化、含酸性捲曲螺旋的蛋白 3(TACC3)，mRNA(基因庫檢索號：ΝΜ—〇〇6342);
RelB :智人v-rel網狀内皮組織增生病毒致癌基因同系 物B ’ B-細胞3(鳥類）的κ輕多肽基因增強子的核因子 201237174 (RELB) ’ mRNA(基因庫檢索號：NM一006509); PRKCD :智人蛋白激酶c，s(PRKCD)，轉錄變異體1， mRNA(基因庫檢索號：nm_006254); BRAF35 :智人高遷移率族2〇b(HMG2〇b)，mRNA(基 因庫檢索號：NM_〇〇6339> ; HSPA1L :智人熱休克 7〇kDa 蛋白 1A(HSPA1A)， mRNA(基因庫檢索號：nm_〇〇5345); STK11 :智人絲胺酸/蘇胺酸激酶u(黑斑息肉綜合 征)(STK11)，mRNA(基因庫檢索號：NM_000455); MKK3 :智人MAP激酶激酶3(MKK3)mRNA，完全 cds(基因庫檢索號：L36719)。 c) 測量選自以下一組遺傳標記物的一種或一種以上參照 遺傳標記物的水平： GAPDH :智人3-磷酸甘油醛脫氫酶(GAPD)，mRNA(基 因庫檢索號：NM_002046); RPS9 :智人 cDNA 克隆 IMAGE:6647283，部份 cds(基 因庫檢索號：BC071941); d) 比較试驗樣本中所測的上述一種或一種以上遺傳標 記物的水平和上述一種或一種以上參照遺傳標記物的水平； 其中，與上述一種或一種以上參照遺傳標記物的水平比 較，上述一種或一種以上遺傳標記物水平的下降表明對紫杉 醇類化合物分子易感性的增強。 本發明涉及預測或監測癌症患者對紫杉醇類化合物分 子的反應的各種方法。因此’本發明的—個進一步具體實施 201237174 例包括紫杉醇類化合物分子太平洋紫杉醇、多西紫杉醇 XRP9881 和 XRP6258。 通過採用下文中詳述的各種技術來測量RKa、DNA或 蛋白的水平，可評估本發明所述的各種遺傳標記物。本發明 的另一些具體實施例則涉及預測或監測患者對紫杉醇類化 合物分子的反應的各種套組。 通過以下結合附圖所作的詳細說明，對本發明的上述方 面和其它方面、特點和優點將能更好地理解。 本發明之詳細說明 本發明以申請者對基因標記物的鑒定為充分依據，該基 因標記物可預測受試者對紫杉醇(taxoid)類藥物是否具有抗 性或敏感性。採用以細胞為基礎的⑽八干擾(RNAi)篩檢， 申。月者觀察到對多西紫杉醇(docetaxel)的抗藥性或敏感性與 特定基因標記物相關。 本專利說明及專利權要求中使用了許多術語及短語。這 些術語及短語之定義如下： 在本文中’預後」這個術語，是指關於因癌症而引起 1死亡或疾病進程的預測或可能性，其中包括抗藥性以及復 發、轉移擴展和贅生性疾病。 f本文中’「預測」這個術語，是指病患對一種藥物或 組樂物反應良好或不良的可能性以及這些反應的程度，例 2病患於手術摘除原發性腫瘤後及/或化療 一段時間後是 月b子活而無癌症復發j翻所預見的綱方法可在臨床 12 201237174 上使用’透過為任何特定病患選 是紫杉醇類藥物的化療方法：二二療尤其 止化療或其他法是否反應良好’或在停 ^括採用—種給定藥物或藥物組合的化療及/或放射治 ^本文中’「腫瘤」這個術語是指所有良性及惡性的資 施生長和增殖，並指財的前雜細胞和癌性細胞與組 5«\ ° 在本文癌」和癌性」是指哺乳動物的某種生理 病狀其典型特徵為無節制細胞生長。癌症的例子包括但不 限於以下各種癌症：乳腺癌、結腸癌、肺癌、前列腺癌、肝 細胞癌、胃癌、騰腺癌、宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、 尿道癌、癌、黑素瘤、腦癌（包括成勝質細胞瘤和成神經管 細胞瘤）、膽道癌、絨膜癌、食道癌、胃癌.、血液腫瘤（包括 急性淋巴細胞性和髓性白血病）、多發性骨髓瘤、愛滋病相 關白血病和成人T-細胞白血病/淋巴瘤、上皮内瘤樣病變（包 括鮑溫病和帕哲氏病）、淋巴瘤（包括何傑金氏病和淋巴細胞 性淋巴瘤）、成神經細胞瘤、口腔癌（包括鱗狀細胞癌;)、肉瘤 (包括平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、脂肪肉瘤、纖維肉瘤和骨 肉瘤）、皮膚癌（包括黑素瘤、卡波西肉瘤、基底細胞性癌和 鱗狀細胞癌）、睾丸癌[包括胚組織瘤如精原細胞瘤、非精原 細胞瘤(畸胎瘤、絨膜癌）、間質瘤以及生殖細胞腫瘤]、甲狀 腺癌(包括甲狀腺腺癌和髓樣癌）、腎癌（包括腺癌和維爾姆斯 13 201237174 瘤）。 在本文中，「病患」這個術語主要是指人，但也可包括 非人類靈長類動物、牛、馬、豬、解、山羊、狗、猶和喃 齒類動物。、受試者最好是人，其疑似患有雜，或已維診患 有癌症’或屬於患癌高危人群，例如有家族癌症史。在本發 明一個首選的實關巾’癌為乳腺癌。#定疑似患有癌症的 受試者的方法包括手檢、活組織切片檢查、受試者家族病 史、受試者病史或若干成像技術，包括乳房X線照相、磁共 振成像、磁共減譜或正電子魏_掃描。癌症的診斷方 法和癌症診斷的臨床特性為醫療領域專業人士所熟知。 在本文中，「樣本」這個術語是指採用相關醫療領域内 一般專業人士熟知的方法所取得的組織。活喊切片檢查等 各種方法包括用解剖贿敝織塊、顯微解剖、以鋪為基 礎的顯微解剖或本領_熟知的其他細胞分離方法。由於病 變組織活檢㈣巾細胞麵的可變性和骑方法靈敏 度的可變性，分析所需樣本的細胞數量可從1、10、50、100、 =〇、300、500、1000、5_、1〇，_ 至 5〇，_ 或更多不等。 合適的樣本大小取決於細馳成和活檢狀況，確定細胞組成 和活檢狀科的標準製備步驟及其後在本發明情採用的 核酸分離方法為本賴内—般專業人士職知。例如，取自 活檢的樣本可能足以評價j^A表達而無冑擴增。反之，若 J、型活檢區域巾細胞數量未達合適的數量，則f要採用RNA 轉換方法和/或擴财法，或_其他提高滅分子解析度 的方法。上述允許制有限活檢材料的方法為本領域内一般 14 201237174 專業人士賴知。有_子包括但孫 ，反轉錄W擴增或生成放射性標記:分 于0 在本文中，「測試」這個術語，在與樣本翻的情況下， 自，變區域的樣本，或採自顯示某階段癌變或癌 鍵特徵的身體區域的樣本。 s在本文中，「對照」這個術語’在與樣本連㈣情況下， 是指用於比較目的的樣本。最理想的航是，所謂這些樣本 具有對知、」作用，是指該樣本未顯示或據信未患有任何影 響基因表達的赫或病症，在以這些樣本作為參照標準的疾 病方面尤其如此。也可以這樣認為：疾病和病症的不同階段 可以加以比較’在此情況下，「對照」樣本相當於該疾病或 病症的較早階段。例如，對照樣本可以是採自身體上非癌變 但可比較部位的樣本。此外，對照樣本可採自同一個受試者 的可比較部位，或與該第一個受試者實質上相似的第二個受 試者(物種、年齡、體重、性別等相同或相似)的非癌變部位。 最後，對照樣本亦可採自對紫杉醇類分子治療產生良好反應 的第二個受試者的癌變部位。 「核酸分子」是指核苷(腺嗓吟核苷、鳥嘴吟核苷、尿 嘧啶核苷或胞嘧啶核苷，簡稱「RNA分子」）或脫氧核苷(腺 °票呤脫氧核苷、鳥嘌呤脫氧核苷、胸腺嘧啶脫氧核苷或胞嘧 °定脫氧核苷，簡稱「DNA分子」）的磷酸酯聚合體形式或其 磷酸酯類似物(比如硫代磷酸酯和硫酯）’可為單鏈形式或雙 鏈螺旋形式。也可能是雙鏈DNA-DNA、DNA-RNA和 15 201237174 RNA-RNA螺旋。核酸分子(特別是DNA或四八分子)這個 術語僅指該分子的一級和二級結構，並不限於任何特定的三 級結構。因此該術語包括雙鏈DNA分子，其形式可為直= 或環形DNA分子(如限制片段）、質粒和染色體。在討論特 定雙鍵DNA分子的結構時，可根據僅給出順5，端至3，端的 方向沿著非轉錄DNA鏈(即含有與mRNA同源序列的鏈)的 序列的慣例來描述序列。「重組DNA分子」是指已經過分子 生物加工的DNA分子。 在本文中，為特定蛋白質編碼的、單個核酸分子的「部 份」這個術語’是指由足馳量為肽❹肽編碼的相鄰核苦 酸所組成的單個核酸分子的部份或片段。自然、，單個核酸分 子的-個「部份」不止—個核，而由這個部份編碼的肽 或多肽含有許多胺級殘基，如下文肽和多肽的定義所述。 在本文中’「肽」這個術語，是指由肽鍵共價連接的兩 個或兩個社絲酸。在—特定實_巾，—個肽包含至少 10個胺基酸’較佳的是至少20個、更佳的是3〇個、更為 佳的是40個、最佳的是50個或更多。 在本文中，「多肽」這個術語，是指由多個相鄰胺基酸 組成的直鏈聚合物’特別是多肽的分子量可高於1()0kD。 在本文中’遺傳標έ己物」這個術語，是指一生理組合 物:可用其在樣本巾測定的讓、DNA或蛋白f水平來預 測受試者對紫杉_麵枝魏性或敏H此外，遺傳 標記物可編碼特定蛋白質，也可用作蛋白質的「替代」標記 物，該蛋白質的活性與身體標本中遺傳標記物的水平相關。 201237174 正比關係，即蛋白質活性水平的下降對應於 逍熱祕水平的獨。或者，軸·也可以是反比關 係，、即蛋白質活性水平的下降對應於遺傳標記物水平的上 升這種生理、且5物包括(但畲然不限於)細胞(例如其前體幹 細胞)蛋白質、多肽、DNA、職、碳水化合物或脂肪酸， 在此僅舉數例。在本發明的—個特定實施射，根據已測定 的基因標記物水平’可顆受試者對紫轉鋪物是否有抗 性或敏感性。此類遺傳標記物的例子包括但*限於下列各 項：
BubRl .智人，類似於蛋白激酶(BUBR1)mRNA，完全 cds(互補DNA)(基因庫檢索號：AF〇46〇79);
Mad2 .智人MAD2蛋白mRNA(基因庫檢索號： AJ000186)；
Mpsl :智人TTK蛋白激酶(TTK)，mRNA(基因庫檢索 號：NM_003318); ’、
Racl/CDC42 的 GEFT :智人 RAC/CDC42 交換因子 (GEFT) ’轉錄變異體2 ’ mRNA(基因庫檢索號： NM_133483);
Bubl :智人BUB1(苯并咪唑1同系物解除抑制芽殖)(酵 母)(BUB1)，mRNA(基因庫檢索號：NM_004336); hSepharase :智人額外紡錘極樣1(釀酒酵母)(ESPU)， mRNA(基因庫檢索號：NM_012291);
CamKIId :智人鈣/J弓調素依賴性蛋白激酶(caM激酶）η S(CAMK2D)，轉錄變異體 3 ’ mRNA(基因庫檢索號： 201237174 NM_001221)； CDK6:智人周赃自依雛蛋自㈣6(a)K6) mRNA (基因庫檢索號：NM_001259); GRB2 :智人生長因子受體結合蛋自ye·)，轉錄變 異體1，mRNA(基因庫檢索號：nm_〇〇2_); P21(Wafl):智人周期蛋白依賴性蛋白激酶抑制劑 1Α(ρ2卜Cipl)(CDKNlA)，轉錄變異體卜mRNA(基因庫檢 索號：NM_000389);
Pim-1 :智人pim-1致癌基因(PIM1)，mj^A(基因庫檢 索號：NM_002648); GBP-1 :智人鳥苷酸結合蛋白丨，干擾素可誘導， 67kDa(GBPl) ’ mRNA(基因庫檢索號：nm_002053); RXRA :智人類視黃醇X受體，(基因 庫檢索號：NM_002957); SPF45 :智人RNA結合基序蛋白· i7(RBM17)，mRNA(基 因庫檢索號：NM_032905);
Heel :智人著絲粒相關2(KNTC2)，mRNA(基因庫檢索 號：NM—006101);
Rafl :智人raf致癌基因的mRNA(基因庫檢索號： X03484)；
Aurora A :智人 aurora-相關激酶 l(ARKl)mRNA，完全 cds(基因庫檢索號：AF008551); TACC3 :智人轉化、含酸性捲曲螺旋的蛋白 3(TACC3)，mRNA(基因庫檢索號：NM_006342); 18 201237174
RelB :智人v_rel網狀内皮組織增生病毒致癌基因同系 物B，B-細胞3(鳥類）的κ輕多肽基因增強子的核因子 (RELB) ’ mRNA(基因庫檢索號：ΝΜ 〇〇65〇9); PRKCD :智人蛋白激酶C，5(PRKCD)，轉錄變異體}， mRNA(基因庫檢索號：NM_〇〇6254); BRAF35 :智人高遷移率族20B(HMG2〇B)，mRNA(基 因庫檢索號：NM__〇〇6339> ; HSPA1L :智人熱休克 70kDa 蛋白 1A(HSPA1A)， mRNA(基因庫檢索號：NM_005345); stkii :智人絲胺酸/蘇胺酸激酶ι1(黑斑息肉綜合 征)(STK11)，mRNA(基因庫檢索號：NM_000455); MKK3 :智人MAP激酶激酶3(MKK3) mRNA，完全 cds(基因庫檢索號：L36719)。 在本文中，「參照遺傳標記物」這個術語，是指所測定 的RNA、DNA或蛋白質水平在服用紫杉醇類藥物之前、期 間或之後保持不變的生理組合物。「參照遺傳標記物」被稱 為看家基因。這些基因的選擇以其在諸如癌症之類的被檢驗 系統中相對不變的表達水平為基礎。看家基因用於使表達的 結果正常化。此類遺傳標記物的例子包括但當然不限於以下 兩項： GAPDH:智人3-磷酸甘油醛脫氫酶(GAPD)，mRNA(基 因庫檢索號：NM_002046); RPS9:智人 cDNA 克隆 IMAGE:6647283,部份 cds (基 因庫檢索號：BC071941)。 201237174 在本文中，「紫杉醇類分子」這個術語，是指屬於紫杉 烷(taxane)族的一類化療化合物。紫杉醇類的具體成員^ 括但不限於太平洋紫杉醇（紫杉醇）、多西紫杉醇(对癌易) 及其類似物（即XRP9881和XRP6258 ;參見〇jima和 Gpmey，Drwgs 4:737，2〇〇4)。由於此 類分子為β-微管蛋白結合物，可穩定類似於多西紫杉^ 的聚合形式的微管’因此可以預期，此處所描述的^物 標記物的臨床表達將反映對這些藥物的類似反應狀況。 在本文中，「分子」、「化合物」或「藥劑」等術語，是 指現在已知或以後發現的任何組合物。本專利中應用的化人 物或藥劑的例子包括有機化合物(例如人造的、天然的和^ 活性化合物）、肽(例如人造的、天然的和光活性化合物即 D型或L型胺基酸）、碳水化合物、核酸分子等。 在本文中’「雜交嚴格度」或「嚴格條件下的雜交」，是 指本領域内一般專業人士能夠輕易判定的條件，通常是一種 取決於探針長度、洗滌溫度和鹽濃度的經驗性計算。通常， 較長的探針需要較高的溫度，以便進行適當的退火，而較短 的探針需要較低的溫度。雜交通常取決於當互補鏈處於低於 其熔化溫度的環境時變性DNA的重退火能力。探針與可雜 交序列之間所要達到的同系性越高，所能採用的相對溫度越 南。於是’較高的相對溫度往往使反應條件更嚴格，而在較 低的溫度下’則嚴格度較低。關於雜交反應嚴格度的進一步 細節和解釋，可參閱Ausubel et al., Current Protocols in
Molecular Biology, Wiley Interscience Publishers，（1995)。 20 201237174 在本文中，「嚴格條件」或「高度嚴格條件」是指下列 參數：⑴洗務時採用低離子強度和高溫，例如5〇。c下的 0.015 Μ氯化納/0.0015 M #檬酸鈉/〇 1%十二烧基硫酸 納；（2)雜交時採用甲酿胺等變性劑，例如42。c下5〇%(v/v) 甲醯胺加0.1%牛血清白蛋白/〇1%阶〇11液/〇1%聚乙稀 吼洛細/pH 6.5的5G mM磷酸納緩衝液以及，福氯 化納、75 mM棒檬酸納；或(3)在一溶液中的過夜雜交該 溶液在42。C下含50%曱醯胺，5χ ssc(〇 75 M氣化納，〇 〇75 Μ擰檬酸納）、50 mM磷酸納肿6 8)、〇 1%焦屬酸納、& Denhardt’s溶液、經聲波處理的鮭魚精子 DNA(50 十二烷酸磺酸鈉和1〇%硫酸葡聚 糖’然後在0.2y SSC(氣化納/擰檬酸納)中於42°c洗務1〇分 鐘，再以含有EDTA的O.lx SSC於55。c進行高嚴格度洗 務。適度嚴格條件可按Sambrook等在【分子克隆：實驗室 手冊】（Molecular Cloning: A Laboratory Maniial，New York:
Cold Spring Harbor Press, 1989)中的描述加以鑒定，該適度嚴 格條件包括採用嚴格度低於以上描述的洗滌溶液和雜交條 件(如溫度、離子強度和十二烷酸續酸鈉百分率）。適度嚴格 條件的一個例子為37°C下在一溶液中進行過夜雜交，該溶 液含20%曱醯胺、5x SSC(150 mM氣化納、15 mM檸檬酸 三納）、50 m]V[填酸鈉(pH 7·6)、5x Denhardt’s 溶液、l〇〇/0硫 酸葡聚糖、和20 mg/ml變性的片段化鞋:魚精子DNA，然後 於37-50°C在lx SSC中洗滌濾膜。專業人士將會根據探針 長度等因素調節溫度、離子強度等。雜交核酸時的適當嚴格 21 201237174 度取決於核酸分子長度和互補程度，以及其他本領域内眾所 周知的變數。兩個核苷酸序列之間的相似性或同系性越大， 則含有這些序列的雜種核酸的Tm越大。核酸雜交的相對穩 定性（對應於較高的Tm)以下列順序遞減：RNA.RNA、 DNA:RNA、DNA:DNA。較理想的情況是，可雜交核酸的最 低長度至少約為12個核苷酸，較佳的是至少約為16個、更 佳的是至少約為24個、最佳的是至少約為36個。 在本文中’「標記」或「可檢測標記」是指一種可檢測 標記化合物或組合物，它直接或間接與一種抗體、寡肽或其 他有機分子配對，而生成「標記的」抗體、寡肽或其他有機 分子。該標記本身可被檢測到(如放射性同位素標記或螢光 標記），或者，如果該標記為酶標記，則可催化可檢測的底 物化合物或組合物的化學變異。 在本文中，「直接標記」是指在其自然狀態下輕易可見 的物體，可為肉眼所見，或在藉助濾光器和/或輔加刺激(如 以紫外光激發螢光)的情況下可見。其例子包括但不限於加 色標記、金屬溶膠顆粒、染粒溶膠顆粒、染色乳膠或染料外 包月曰質體(見第4,313,734號美國專利、第4,373,932號美國 專利、WO 88/08534、EP-A 0 280 559、0 281 327、第 4,703,017 號美國專利所描述）。其他的直接標記包括放射性核苷酸、 不透射線物、螢光成份或發光成份。 在本文中，「間接標記」是指可依照本發明加以使用的 酶。與免疫測定相關的各種類型的酶為本領域内所熟知，例 如，鹼性磷酸酶和辣根過氧化物酶、溶菌酶、6_蛾酸葡萄糖 22 201237174 脫氫酶、乳酸脫氫酶和尿素酶，EvaEngvall在【酶免疫測定 --ELISA 與 EMIT(Enzyme Imrmmoassay ELISA and EMIT)】 一文（Methods in Enzymology，70:419-439(1980))和第 4’857,453號美國專利中詳細地討論了這些酶以及其他一些 酶。 在本文中，「套組」這個術語是指由一個或多個容器以 及與谷态相關的標籤或說明書組成的一種產品。在一首選的 貫把例中’此類容器可包含可檢測標記抗體、可檢測標記抗 體片段、或可檢測標記募核苷酸。在另一實施例中，此類容 器提供各種手段，以便從身體樣本獲得總RNA，反轉錄總 RNA以獲得cDNA，以及使用一套引子使cdna經歷聚合 酶鏈反應，這套引子中的一個或兩個均具有可檢測標記。套 組可包括其他容器，這些容器包含諸如稀釋液和緩沖劑、對 照抗體、寡肽、或小型有機分子。該標籤或說明書可提供組 份描述’以及關於貯藏和預期體外用途或診斷用途的說明。 再則，按照本發明，可運用本領域的常規分子生物學、 微生物學和重組DNA技術。這些技術在文獻中得到充分解 釋。參見·· Sambrook，Fritsch&Maniatis的【分子克隆：實 驗室手冊1 (Molecular Cbning: A Laboratory Manual)，第二 版(1989)，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor ’ New York(本文簡稱「Sambrook et al., 1989」）；【DNA 免修··實踐^ 方法 Ί (DNA Cloning: A Practical Approach， Volumes I和II(D.N. Glover編，1985));【寡核苷酸合成】 ⑽wc/e加We办扣Gait編，1984);【核酸雜交】 23 201237174 (TViwc/ez’c Jc/i/ /fy厶rzifc如o«)[B.D. Hames 和 S.J. Higgins 編 (1985)];【轉錄和翻譯】（7hwwcrzj!7如如《)[B.D· Hames和S.J. Higgins編(1984)];【動物細胞培養】（Jmmfl/ O// CM/iwre)[R.I. Freshney 編(1986)];【固定化細胞和酶】 {Immobilized Cells And Enzymes)[lRL Press » (1986)]； B. Perbal【分子克隆實用指南】（d /Vaci/ca/ GwzV/e 7b Molecular Cloning)(\9S4) ； F.M. Ausubel 等編【最新分子生 物學實驗方法集編 1 (Current Protocols in Molecular 5io/ogy)，John Wiley & Sons，Inc.(l994) 〇 通常，RNAi技術使用合成的或載體生成的雙鏈rnA以 誘導含有同系序列的mRNA的降解(McManus和Sharp， ieev ge似3:737 ’ 2002)。RNAi篩選已被用來闡明許多生物 體中的基因功能，例如線蟲(Caenorhabditis elegansXSimmei· et αί.，P!〇S Bio! 1:EU, 2〇〇3)，果織(Lum et αί·, Science 299:2039，2003)和哺乳動物細胞(Aza-Blanc ei α/., Μ?/ O// 12:627, 2003)。 在本發明中，針對大多數爲激酶族成員的1〇1種與癌相 關的基因，將HCT116結腸癌細胞用於篩選siRNAs，並以 高解析度的劑量-效應曲綫量化多西紫杉醇的殺傷作用。採 用此方法’申請者已經顯示9個基因（包括BubRl、Bubl， Mad2、Mpsl和GEFTRac/CDC)的低水平表達可抑制多西紫 杉醇的殺傷作用，而降低15個其他基因（包括piml、p21、 TACC3和AUrora-A)的表達可加強多西紫杉醇所誘導的細胞 死亡。 24 201237174 因此，廣而言之，本發明擴展至某些診斷方法和套組， 可將這些診斷方法和套組用於鑒定正在服用多西紫杉醇或 考慮服用該藥物的個體對該藥物是否會有抗性或敏感性。 申請者已經觀察到對多西紫杉醇的抗藥性，抗藥性與喪 失一組廣泛的檢查點控制基因相關，這些基因包括BubR1、 Bubl、Mad2、Mspl 和 GEFTRac/CD。 對多西紫杉醇的敏感性增加與若干基因之一的喪失有 關’這些基因包括GBP-卜STKU、RXRA、Hec卜SPF45、
Rafl、RELB、MKK3、PRKCD ' HSPA1A、BRAF35、 Aurora-A、Pim-1、TACC3 和 p21wafl/Cipl，抑制這些基因 的抑制劑可在多西紫杉醇療法中用作有價值的輔助藥。 有絲分裂的檢查點基因可透過抑制Cdc20-APC(細胞分 裂後期促進複合體)作為延遲細胞分裂後期的可靠機制，直 至姐妹染色單體的著絲粒適當地附著於有絲分裂紡錘體 上’並在赤道板上排列(Zhou ei α/., Ce// 5W 115:3547, 2002) ’從而使細胞可靠地退出有絲分裂，並以精確的DNA 互補進入另外的細胞周期。如有微管抑制劑存在，退出有絲 分裂的細胞不再能妥善地分隔其染色體，通常立即凋亡或在 若干細胞周期後凋亡(Taylor和McKe〇n，Ce// 89:727， 1997)。微管抑制劑與有絲分裂檢查點基因(如BubRl)喪失這 兩種因素的結合可使細胞避免有絲分裂阻滯，而不經歷細胞 凋亡’從而導致染色體不穩定性(CIN)和非整倍性(Shin β乂， C^cer Ce//4:483, 2003)。近來’在將微管抑制劑太平洋紫杉 醇用於處理其BubRl和Mad2下調的MCF-7細胞時，產生 25 201237174 了抗藥性資料(Sudo 以 a/·, 64:2502, 2004)。
Pim-1基因編碼一種屬於相關激酶小家族的絲胺酸/蘇 胺酸激酶。Pim-1的功能一直與增殖、分化、細胞凋亡，腫 瘤發生、組織缺氧，血管生成和有絲分裂聯繫在一起(Wan g以 aL，Biochim Biophys Acta 1593:45, 2002)。顯微成像資料以及 AKT次填酸化資料和升高的胱冬裂酶_3 (Caspase 3)活性測 篁值顯示’透過滅活為細胞生存起介導作用的AKT信號， Pim-1的向下調節增強了多西紫杉醇誘導的細胞凋亡。pimj 和p21在使HCT116細胞對多西紫杉醇敏化中具備極為相似 的特點；與顯示p21為Pim-i的磷酸化底物這一報告一致 (Wang et a!” Biochim Biophys Acta 1593A5, 2002)。在不存在 多西紫杉醇的情況下，Pim-1的向下調節誘導了一定程度的 細胞凋亡，但當該藥物存在時效力則更高；然而在多西紫杉 醇不存在時向下調節轉化酸性捲曲螺旋蛋白質TACC3並不 誘導細胞死亡，表明僅RNAi技術本身對細胞增殖沒有影 響。上述結果表明不同蛋白質的損耗可引起細胞對多西紫杉 醇敏化的不同機制。 因此，在本發明的一個方面，可根據表j和表π中所述 的一個或多個基因的活化以及這些基因的蛋白質水平來選 擇治療策略，並監測所選治療策略的有效性。 在一特定的實施例中，我們提供了一種方法，監測化療 過程中表I和表II巾所示的—域多個基_活化水平以 評價和預測化療對病患的有效性。對採自腫瘤(如乳腺瘤、 結腸瘤、非小細胞肺瘤和胃瘤)的活檢材料、或採自未確診 26 201237174 癌症病患或正接受治療的病患的腫瘤活檢材料的短期培養 物進行處理’以便分離出DNACHafnereifl/.^rc/i/^/zo/i^ Med 127:1221, 2003 ； Rodriguez et al., Clin Cell Res 10:5785, 2004)、信使 RNA(Chang ei fl/.，Lancet· 362:340, 2003)和/或蛋 白質(Espina ei a/.，290:121，2004)，以評價 表I和表II中所描述的基因或其亞群的活化水平或蛋白質水 平。基因轉錄和蛋白質表達圖譜可用於診斷和預測可能的治 療策略的療效，並可作為監測病患治療反應的有用工具。 按照本發明，可用本領域常用的任何現有方法從腫瘤樣 本中分離 RNA(Ullmann ei β/.，*7 所〇則/ 如卿 9:95, 2004 ; 及沾ee ei fl/.，5从c历〇攸/^/3:23, 2003)。從受試者身上獲取 一個或多個細胞，並從細胞中分離出RNA。例如，可從受 试者身上獲得外周血白細胞(PBL)，亦可能獲得一細胞樣本 後，針對需要的細胞類型使該樣本強化。可採用各種技術將 細胞從細胞混合體中分離出來，例力，採用與所需細胞類型 的特疋抗原决疋基結合的抗體來分離細胞。如果所需的細胞 疋在固體組織中，則可使用顯微切割或鐳射捕獲顯微切割 (M)之類的方法分割特定細胞(B〇nner以⑼π 278.1481, 1997 ； Fended/. > Am J Path 154:61, 1999) ° 各種方法從組織或細胞樣本中提取RNA，例如硫氰酸胍溶 ^^i^H^blfe^^(Chirgwin et al., Biochemistry 18:5294, 1979) °可從單個細胞獲取’如從單個細胞製備濃a 文庫的方法所述(Dulac，Curr Top Dev Biol. 36:245, 1998)。 RNA樣本可針對特定麵進—步加以強化。例如，在一實 27 201237174 施例中’可從RNA樣本中分離出p〇iy(A)+RNA。特別是， poly-T寡核苷酸可作為mRNA的親合配體被固定於固體載 體上。用於該目的的套組已有市售，如MessageMaker套組 (Life Technologies，Grand Island，N.Y·)。該強化過程可透過 引子特異性cDNA合成、或以dDNA合成為基礎進行多輪線 性擴增以及模板指導的體外轉錄等方法實現(Wang β β/， 尸USA 86:9717, 1989 ; Dulacetal.，同上）。 有多種擴增方法適用於本發明之方法，包括聚合酶鏈反 應(PCR)、連接酶鏈反應(LCR)(Wu和Wallace，
4:560，1989)、自主序列複製(SSR)(Guatelli β AM C/似87:1874, 1990)、基於核酸的序列擴增(NASBA) 和轉錄擴增(Kwoh ei α/.，Proc #扣/ aSd 86:1173, 1989) 〇PCR技術專用方法為本領域内所熟知[例如參見 【PCR技術：DNA擴增的原理和應用】（PCR Technology : Principles and Applications for DNA Amplification)(H. A.
Erlich 編，Freeman Press，N.Y.，N.Y·，1992);【PCR 規程： 方法和應用指南】(A Guide to Methods and Applications)(Innis， 編，Academic Press，San Diego，Calif.，1990)]。 可採用本領域技術人士瞭解的方法標記RNA以進行檢 測。例如，採用由Affymetrix公司等生產的蛋白質微陣列。 採用任何常用方法進行雜交以標記和檢測RNA，例如直接 RNA染料標記’如用Cyanine-3(青藍3)或Cyanine-5(青藍 5)(Perkin Elmer MPS544001KT)。其他方法包括透過核苷酸 的反轉錄而實現的直接cDNA標記’而該核苷酸則用青藍3 28 201237174 或青藍 5(Badiee A 2003)、螢光素、Alexa 染料(Molecular
Probes)或其他螢光團加以標記。再則，還可利用間接的 cDNA標記，如FairPlay™/胺基烯丙基標記(stratagene目錄 说.252002)、3DNA樹枝狀南分子標記(Genisphere Inc)或酶 4 號擴增標記(MICROMAX TS A，Perkin Elmer)。另外，可 藉RNA探針量化RNA，這些探針可藉酶、螢光、放射性或 發光專方法檢測。 在本發明的一個方面，RNA取自腫瘤樣本，並運用 Taqman技術檢測遺傳標記物。生成引子以檢測表I和表I】 中標明的特定RNA或其亞群，並用反轉錄酶來擴增引子。 籍由反轉錄擴增的特定片段的檢測可透過以下方式完成：凝 膠電泳、聚合物電泳、直接DNA定序、光檢測、螢光信號 的喪失、酶反應或經由對互補RNA的雜交進行檢測。 在本發明的另一方面，利用實時PCR來檢測寡核苷酸。 將取自腫瘤樣本的mRNA反向翻譯為cDNA。生成引子以 藉聚合δ#鏈反應技術來擴增表I和表II中標明的特定反^八 或其亞群。可透過凝膠電泳和溴化乙啶或CYBR綠染色，或 透過測量聚合酶所釋放的螢光團標記序列特定探針發出的 螢光強度來完成mRNA水平的檢測。 在本發明的又一個方面，採用了北方印跡法(N〇rthem blotting)。RNA取自腫瘤樣本，後以凝膠電泳加以分離，並 轉移至一膜上。透過採用P32等放射性同位素標記探針的雜 父，或透過基於酶的顯色法或發光法，來確定反j^A豐度。 在本發明的另一方面，基因劑量可作為轉錄水平的替代 29 201237174 指標。表i和表π中的轉錄物或其亞群的基因劑量可以定量 地確定，從而評價腫瘤對多西紫杉醇療法是否有反應 (Rodriguez β α/·，Cimcer Res 10:5785, 2004)。由於此評 價在新輔助治療(手術前的治療)之前進行，所以，如果病患 屬於有反應之列，則可用多西紫杉醇治療，如果屬於無反應 之列，則可施用另一種化療藥劑。 從病患腫瘤活檢材料中提取DNA，並以本領域專業人 士所用方法對其純化以去除雜質。用來確定腫瘤DNA中的 基因劑量的方法包括但不限於定量PCR、基因組DNA晶 片、原位雜交或南方印跡法(S〇uthem)(Hafner扣a/.，々c/z Pathol Lab Med 127:1221, 2003 ； Rodriguez ei al, Clin 10:5785, 2004)。因此，這些方法可用於確定表j 和表II中個基因或多個基因的副本數，並將其與對照樣本 或參照標記物相比較。 在本發明的又一個方面，蛋白質水平可用作轉錄水平的 替代測量標I蛋自質水平6齡與轉錄水平的抑制或提高 相關。因而，本發明包括用來測量蛋白f水平的技術，該ς 白質水平與由表1和表11中轉錄物編碼的多肽產品相關。 白質作為對多西紫杉醇的酬反應的標記物加以檢測 用°蛋白質檢财法為本領域職知。例如，免疫 用抗體檢測乾蛋白表達的方法。 運 特定實施财，免疫測定被用來檢測表1和表II戶斤 所列任Γ❹個基因的蛋白質產品。另外，對抗表1和表II 可一種蛋白質的抗體可用於若干其他檢測方法。這此 201237174 =方，旦不限於下列各項：西方印跡法，加 :)，SA測定和夾心ELISA。另外，亦考慮採用其他不 if❺觀法’包細3些制DNA雜魏類或多肽 =化a物的方法’從而識別由表！和表π所列轉錄物(如適 &體)編碼的蛋白質。亦可制生物樣本的質譜分析方法， 透過確定蛋自水解分織肽服_確分子量，來確定多肽 的組份。 本發明進一步包含合適的標記，其中包括酶、螢光團， 如異硫氰酸螢光素(FITC)、藻紅蛋白㈣、德克薩斯紅(τ_ red ’ TR)、羅丹明、自由或螯合的鑭系鹽、發色團、放射性 同位素、螯合劑、染料、膠體金、乳膠顆粒、配體(如生物 素)和化學發光劑。 在本發明的一個方面，所用放射性標記可為同位素，如 3H、14C、32P、35S、36 C1、51 Cr、57Co、58Co、59Fe、 90Y、125 I、1311、和186Re等。可透過目前已知和已有的 计异規程進行放射活性水平的量化。反之，亦可採用不透射 線的物質。在以酶為標記的實施例中，可採用目前利用的比 色法、分光光度法、螢光分光光度法、電流測量法或本領域 熟知的氣體定1分析法等任何一種技術。 本發明的又一個方面是採用肽結合劑，例如抗體或抗體 片段。抗體包括按照常規方法製備的多克隆抗體和單克隆抗 體。僅抗體分子的一小部份，即抗體補位元，參與該抗體與 其抗原決定基的結合(一般内容參見，Clark，W. R.(1986)【現 代免疫學的試驗基礎】（The Experimental Foundations of 31 201237174
Modem Immunology)，Wiley & Sons，Inc.，New York; Roitt， 1.(1991)【基礎免疫學】第 7 版(Essential Immunology，7th Ed.)，Blackwell Scientific Publications，Oxford)。例如，pFc， 和Fc區域為補體級聯的效應因子，但不參與抗原結合。其 pFc’區域已被酶裂，或生成時缺失pFc，區域的一個抗體，被 稱為F(ab’)2片段’它保留完整抗體的兩個抗原結合位點。 因此’本發明的一個實施例採用一個可檢測標記抗體片段， 如F(ab’)2。同樣，其Fc區域已被酶裂，或其生成時缺失fc 區域的一個抗體，被稱為Fab片段’它保留完整抗體分子的 抗原結合位點之一。Fab片段由一個共價結合的抗體輕鏈和 被稱為Fd的抗體重鏈的一部份組成》Fd片段為抗體特異性 的主要決定子(一單個Fd片段可與多達1〇個不同的輕鏈相 聯而不改變抗體特異性），單獨存在的Fd片段保留抗原決定 基的結合能力。 正如本領域所熟知的，在抗體的抗原結合部份内，有互 補決定區(CDR)，而互補決定區直接與抗原的決定基和框架 區域(FRs)發生交互作用，框架區域維持抗體決定基的三級 結構(一般内容參見Clark，1986 ; Roitt，1991)。在IgG免疫 球蛋白的重鏈Fd片段和輕鏈，有4個框架區域(fri至 FR4) ’它們分別被3個互補決定區(CDR1至CDR3)分隔 開。這些CDR，特別是CD3區域’尤其是重鏈CDR3，在 很大权度上疋造成抗體特異性的原因。哺乳動物抗體的非 CDR區域可為同種或異種抗體的相似區域所替代，同時保 留原抗體的抗原決定基特異性，這已為本領域所公認。這在 32 201237174 「人類化」抗體的研發和利用中得到極為清楚的證明，在該 「人類化」抗體中非人類CDR與人類的FR和/或Fc/pFc， 區域共價結合’以生成功能抗體（參見第4,816,567、 5,225,539、5,585,089、5,693,762 和 5,859,205 號美國專利）。 完全人類單克隆抗體亦可透過對轉基因小鼠進行免疫 處理來製備’這些轉基因小鼠在很大部份基因位置上具有人 類免疫球蛋白重鏈和輕鏈。對這些小鼠（如
XenoMouse(Abgenix) ’ HuMAb mice(Medarex/GenPharm；))做 免疫處理後，可按照標準的雜種瘤技術製備單克隆抗體。這 些單克隆抗體將具備人類免疫球蛋白胺基酸序列，因而，應 用於人類時不會引起人類抗小鼠抗體(HAMA)反應。 因此，對本領域一般專業人士顯而易見的是，本發明亦 包括F(ab’)2、Fab、Fv和Fd片段；嵌合抗體；嵌合F(ab，)2 片段抗體；嵌合Fab片段抗體以及嵌合Fd片段抗體。在嵌 合抗體中，Fc和/或FR和/或CDR1和/或CDR2和/或輕鏈 CDR3區域已被同系人類或非人類序列所替代；在嵌合 F(ab’)2片段抗體中，FR和/或CDR1和/或CDR2和/或輕鏈 CDR3區域已被同系人類或非人類序列所替代；在嵌合祕 片段抗體中，FR和/或CDR1和/或CDR2和/或輕鏈CDR3 區域已被同系人類或非人類序列所替代；在嵌合Fd片段抗 體中，FR和/或CDR1和/或CDR2區域已被同系人類或非人 類序列所替代。本發明亦包括所謂單鏈抗體。 透過參考下列非限制性實例可更好地理解本發明，這些 實例係作為本發明之示範提供β列出以下實例是為了更充分 33 201237174 地說明本發明之首選的實施例，而決不應以任何方式將其解 釋為限定本發明之廣泛範圍。 實例 實例1 : siRNA篩選 為了鑑別能增加細胞對多西紫杉醇的抗藥性或敏感性 的基因’針對101種基因在HCT116細胞内進行了 siRNA 筛選’同時使用一系列多西紫杉醇濃度以產生劑量效應曲 線。人的結腸癌細胞係HCT116獲自ATCC，並在37〇c與 95% C〇2和5% 〇2的條件下在補加100單位/ml青黴素、 100 pg/ml鏈黴素、4 mM L-榖醯胺和10%胎牛血清的 McCoy 5A中培養。上述siRNA均為與癌相關的基因，其中 包括在對多西紫杉醇具有抗藥性的乳房腫瘤中過度表達的 那些基因，正如基因表達圖譜實驗所顯示(Chang扣fl/， Zimcei 362:362, 2003)。其他的準則是，該目標可隨著藥物開 發的過私加以修正。總的方案概括如下。第一天，將Hctii6 細胞按每孔5,000個細胞接種在96孔培養板上，第二天按 每基因用3-4 siRNA轉染。所用siRNA的代表性樣本如表工 和表 II 所示。用脂質體試劑 Lipofectamine 2000f[nvitlOgen> 在96孔培養板上將siRNA(Dharmacon)轉染至fjCT 116細 胞内。第三天，將siRNA除去並加入濃度範圍為〇到4〇 nM 的多西紫杉醇。第六天，使用WST-1測定法定量測定細胞 存活率。這是一種監測存活細胞内線粒體脫氫酶活性的測定 法，該活性導致了四唑鹽WST-丨的裂解而形成甲臢 34 201237174 (formazan)。在測定當天，將培養基從96孔培養板上除去。 將WST-1試劑(R0Che)在McCoy 5A培養基中稀釋1〇倍並 於每孔内加入l〇〇ul。然後將培養板於37°C培養40 · 80分 鐘’再在 SpectroMax(Molecular Devices)上於 450nm 讀數。 通過計算實驗值與對照siRNA數值的比率，將WST-1值按 等級分組，結果共15個基因被鑒定為可增加敏感性，9個 基因可增加抗藥性，如下文的表m所示。增加敏感性和抗 藥性的基因可進一步劃分為以下兩種類型：丨)在多西紫杉醇 濃度較低時(1_6 nM)觀察到siRNA改變IC50的效應，或2) 在較高濃度時(>6nM)觀察到顯著的效應和較小的IC5〇變 化。 與 Mad2、BubRl 和 Mpsl 的 siRNA 相比，以 Grb2、 CDK6、Sepharase ’以及鈣/鈣調素依賴性蛋白激酶π S(CamKIID)為目標的siRNA在較低的多西紫杉醇濃度範圍 (1-6nM)内顯示了更顯著的效應和典型的IC5〇變化。總之， 這一分組顯示了比有絲分裂檢查點基因較弱的抗藥性，而且 CamKIID siRNA形成了最高程度的保護，比對照細胞高出 兩倍。這些數據顯示，四個有絲分裂檢查點基因以及其他幾 個基因的喪失可在不同程度上增加對多西紫杉醇的抗藥 性。圖1的數據顯示了幾條典型的劑量效應曲線，對應於用 siRNA轉染隨後又接觸各種濃度多西紫杉醇的細胞。對抗四 種有絲分裂檢查點基因，包括BubRi、Bubl、Mad2和 Mpsl(Bubl的數據未顯示)以及Rac/Cdc42的鳥嘌呤核苷酸 交換因子(GEFT)的siRNA，顯示了對多西紫杉醇的顯著抗藥 35 201237174
’在較高的多西紫杉醇濃度範圍(>6 nM)此效應更為顯 著。對於Mad2顯示了抗藥性的最高水平，其細胞存活率比 對照siRKA轉染的細胞増加五倍。在筛檢中大多數siRNA 沒有得分，作為一個代表性實例，我們在此處顯示了人的成 視網膜細胞瘤1(RB1)。 综上所述，這些結果顯示，siRNA篩選可幫助人們瞭解 基因表達的向下調節是如何敏化細胞或在用多西紫杉醇處 理時如何保護細胞，以及根據不同的濃度而產生不同的作用 機制以減緩多西紫杉醇引起的細胞死亡。 表I :增加對多西紫杉醇的敏感性的siRNA序列: 基因名 稱 siRNA序列 序列識 別號 siRNA序列 ------ 序列識 別號^ P21(W GCGAUGGAACU 1 AGACCAUGUGG -----1 3 afl) UCGACUUU ACCUGUCA UGGAACUUCGA 2 CUUUGUCA Pim-1 CCUUCGAAGAA 4 UAUUCCUUUCG 6 AUCCAGAA* AGCAUGAC UGGUGUGUGGA 5 GAUAUUCC GBP-1 CGAAAGGCAUG 7 GAACAGGAGCA 9 UACCAUAA ACUACUAA ____ GAUACAGGCUG 8 36 201237174 AAGAGAUU RXRA GCAAGGACCUG 10 GACCCUGUCACC 12 ACCUACAC AACAUUU GCAAGGACCGG 11 AACGAGAA SPF45 CAAAUCCGCUG 13 GACCCUAUGUU 15 ACUGAAAU UCCUAAUG GAACAAGACAG 14 ACCGAGAU Heel GUGUAUUCGAC 16 GUACUCAGUUG 18 AACUCUGU CAGACAUU GAUUGCAAGAU 17 GUAUCACAAAU 19 UGGAACAA UGGCUAGA Rafl GCACGGAGAUG 20 GACAUGAAAUC 22 UUGCAGUA CAACAAUA GCAAAGAACAU 21 GGAAUGAGCUU 23 CAUCCAUA GCAUGACU Aurora GAGAACUGCUA 24 GAAGGUCGGAU 26 A CUUAUAUA GCAUGAUG GAAUAUGCACC 25 GUAAAGGAAAG 27 ACUUGGAA UUUGGUAA TACC3 GCACCUCGCUUC 28 GAACGAAGAGU 30 CCACAAG CACUGAAG GAGCGGACCUG 29 37 201237174 UAAAACUA RelB GCAGAAAGAGG 31 GCCCGUCUAUG 33 ACAUAUCA ACAAGAAA GCAGCGAGCCA 32 UUGCCUUU PRKC GGACGUGGAUU 34 GAAAGAACGCU 36 D GCAAACAA UCAACAUC GCAUGAAUGUG 35 CACCAUAA BRAF3 GGGCGUACCAG 37 GUCUGAAGCCU 39 5 CAGUCUGA AUAAGAUG GCUCUGGGCUC 38 AUGAACAC HSPA1 GAGAUCGACUC 40 GAUCAACGACG 42 L CCUGUUUG GAGACAAG UGGAGGAGUUC 41 AAGAGAAA STK11 GAAGAAGGAAA 43 GAAACAUCCUC 45 UUCAACUA CGGCUGAA GAGAAGCGUUU 44 CCCAGUGU MKK3 GGUGGAGGCUG 46 GGAGGGCCAUG 48 AUGACUUG UGAAGAUG GGAGAUUGCUG 47 GAUGUGAAGCC 49 38 201237174 UGUCUAUC - CUCCAAUG *各序列顯示了良好的抑制作用
表II :降低對多西紫杉醇的敏感性的siRNA序列： 基因 siRNA序列 序列識 siRNA序列 序列識 名稱 別號 別號 BubRl GCAAUGAGCCU 50 GGAAGAAGAUC 52 UUGGAUAU* UAGAUGUA GGAACAACCUC 51 AUUCUAAA Mad2 GAAAUCGUGGC 53 GCCGAGUUCUU 55 CGAGUUCU CUCAUUCG GUGGCAUAUAU 54 GGAACAACUGA 56 CCAUCUGA AAGAUUGG Mpsl GUCGUUACAGU 57 GAUGAACUAAG 59 CAAGCAAU* CUUGAAUA GCACGUGACUA 58 GAGCAGUACCA 60 CUUUCAAA CUAGAAAU GEFT GAACACAGCCU 61 GGAUGAAGAUG 63 GGAUAUGU AGCUGUAA GCACCGAGACU 62 GCAUGUGGCUC 64 AUUUCUUG AGAUCUUG Bubl GUACAACAGUG 65 GCUUGUGAUAA 67 ACCUCCA AGAGUCAA 39 201237174 GAUGCUGGAUG 66 GAUCCACCAGA 68 UGUGAAUA UGCUAUUG hSepar GCUGUCAGAUA 69 GUGGACAGUUG 71 ase GUUGAUUU UAAAUCUA GCCUACAGCUUC 70 GAAGAUCGUUU 72 UAUAGUC CCUAUACA CamKI GCACGAAAGCA 73 GCUAGAAUCUG 75 ID AGAGAUUA CCGUCUUU GAAGAAACCAG 74 GAUCAAGGCUG 76 AUGGAGUA GAGCUUAU CDK6 GAACAUGUCGA 77 GAGUAGUGCAU 79 UCAAGACU CGCGAUCU GUUUGUAACAG 78 GUAACAGAUAU 80 AUAUCGAU CGAUGAAC GRB2 GAACGAAGAAU 81 GGUACAAGGCA 83 GUGAUCAG GAGCUUAA GUGGAUUAUCA 82 GUGCCACAGCA 84 CAGAUCUA GCCGACAU 對照序列： GUCGACCAUUA 85 GGAUUCGUAAC 86 UGUACCGGAU GUGAUUAGCG 不影響對多西紫杉醇反應的siRNA序列： 40 201237174 RB1 GAAACAGAAGA ACCUGAUU 87 GUACAUCUCAG AAUCUUGA 89 GAAAGGACAUG UGAACUUA 88 *各序列顯示了良好的抑制作用 表III :影響對多西紫杉醇反應的基因 增加對多西紫杉醇敏感性的siRNA : 基因名稱 1 一 — 序列識 別號 檢索號 IC50 比率 p(IC50 比率） 最小 比率 P(最小 比率） P21(Wafl) 90 NM—000389 0.70 0.0004 0.25 0.0000 Pim-1 91 NM 002648 0.80 0.0011 0.30 0.0000 GBP-1 92 NM 一002053 0.59 0.0000 0.25 0.0000 RXRA 93 NM_002957 0.64 0.0011 0.36 0.3098 SPF45 94 NM—032905 0.72 0.0000 0.47 0.0000 Heel 95 NM 006101 0.64 0.0000 0.31 0.0121 Rafl 96 X03484 0.90 0.0059 0.30 0.0000 Aurora A 97 AF008551 0.73 0.0000 1.37 0.0018 TACC3 98 NM 006342 0.29 0.0000 0.85 0.0077 RelB 99 NM 一006509 0.56 0.0000 0.77 0.0052 PRKCD 100 NM 006254 0.46 0.0683 0.59 1.0000 BRAF35 101 NM—006339 0.44 0.0000 1.29 0.1361 41 201237174 HSPA1L 102 NM_005345 0.60 0.0404 1.08 1.0000 STK11 103 NM—000455 0.94 0.4544 0.27 0.0000 MKK3 104 L36719 0.51 0.0000 0.82 0.0553 增加對多西紫杉醇抗藥性的siRNA:: 基因名稱 序列識 別號 檢索號 IC50 比率 p(IC50 比率） 最小 比率 p(最小 比率） BubRl 105 AF046079 1.88 0.2207 3.01 0.5663Λ Mad2 106 AJ000186 3.22 0.0076 5.06 1.0000Λ Mpsl 107 NM_003318 3.55 0.0008 2.92 1_0000Λ Racl/CDC42 的 GEFT 108 NM—133483 3.50 1.0000 2.42 1.0000Λ Bubl 109 NM 一0043 3 6 1.38 0.0007 2.45 0.0000 hSeparase 110 NM一012291 1.99 0.0000 0.88 1.0000 CamKIID 111 NM_001221 2.03 0.0016 1.29 1.0000 CDK6 112 NM_001259 1.99 0.0000 1.14 1.0000 GRB2 113 NM_002086 1.97 0.0000 1.16 1.0000 不影響對多西紫杉醇的反應的siRNA : 基因名稱 序列識 別號 檢索號 IC50 比率 p(IC50 比率） 最小 比率 P(最小 比率） RBI 114 NM—000321 0.87 0.0061 1.03 0.4863 42 201237174 GAPDH 115 NM 002046 nd nd nd nd RPS9 W BC071941 nd nd nd nd 注： 最小比率.多西紫杉醇劑量最高處siRNA與對照物的比率。 p值越小’樣本和對照物之間的差異就越顯著。 “有付號Λ的p值很高，因為劑量效應曲線的曲線擬合程度差， 即使該差異很顯著且可再現。Nd=尚未痛定 實例2 :交叉檢驗可增強對多西紫杉醇抗藥性的一類siRNA siRNA篩檢法一個潛在的缺點在於這樣一種觀察，即 siRNA可復原為具有部份同一性的轉錄物或引發微 RNA(miRNA)翻譯阻滞，使得目標特異性作用和非特異性(偏離 位點的）作用難以區分(jackson et ai，Nat Biotechnol 21:635, 2003)。為了以一種獨立的方法用第二種序列來證實抗藥性，用 種反轉錄病毒載體感染HCT116細胞，產生了 BubRl和 Mpsl穩定的抑制細胞係，該載體載有為一種短髮夾(sh)RNA 編碼的DNA低聚核苷酸。該S_A含有一個不同於siRNA 的序列，對準開放項框的一個獨特的區域。反轉錄病毒包農的 、、田胞係GP2-293獲自Clontech。將細胞保存在補加了 1⑻單位 /ml月黴素、100 pg/ml鏈黴素、4 mML L-穀酿胺和1〇%胎牛 血清的DMEM内。經瞬時轉染GP2-293細胞而產生病毒。在 轉染前24小時在一 1〇 cm培養皿上總共接種了 3 6 X 1〇6個 43 201237174 細胞。在用含有10%FBS但不含抗生素的DMEM轉染前4小 時，更換培養基。用6 pg载體DNA、6 pg包膜質粒 VSV-G(Clontech)以及 72 μΐ 脂質體試劑 Lipofectamine-2000 轉 染細胞。在14-16小時後更換培養基；24小時之後收穫病毒上 清液，通過一 0.45 μΜ過濾器過濾，並用於在8 pg/ml溴化己 二曱胺存在的條件下感染HCT116細胞，感染複數(M.O.I)為 5。在感染後48小時在0.5 pg/ml嘌呤黴素中選擇細胞達7天 或直至背景細胞死亡。以BubRl和Mpsl抑制細胞係產生的 劑量效應曲線再次顯示抗藥性增加，在較高的多西紫杉醇濃度 下更為顯著(圖2)，與經siRNA瞬間轉染所獲的結果相似。為 了檢驗shRNA是否降低了 mRNA水平，我們採用了實時PCR 來檢測内源性轉錄物’並證實與載體對照物的穩定的細胞係(圖 3)相比’BubRl和Mpsl穩定的抑制細胞係内RNA水平降低。 將細胞溶解並用RNAqueous -96(Ambion)提取RNA。用 Primer Express™ 軟體（英國 PE Applied Biosystems)設計 TaqmanTM探針及正向引子和反相引子。除了所測試的特定基 因’對於探針和引子序列的BLAST檢索未顯示與其它序列顯 著的同一性。為了進行實時PCR，為每孔製備了 20 μΐ TaqManTM 主混合物· 4.825 μΐ 無 RNA 酶的水、12.5 μΐ 2x Universal PCR 主混合物和0.625 μΐ 40x MultiscribeTM和RNA酶抑制劑混合 物(Applied Biosystems)、0.9 μΐ 正向和反向引子(100 μΜ)、0.25 μΐ探針(100 μΜ)。每孔加入了 5 μΐ樣本RNA(約1 ng/ml)。在 TaqManT ABI Prism 7700 Sequence Detector™(英國 Perkin-Elmer)上分析培養板。循環參數為於48 循環3〇分 201237174 在里’於95 C循環i〇分鐘，再於95 °C循環15秒計40個週 期’以及於60 °C循環1分鐘。從標準曲線外推測試基因mRNA 值並表示為剩餘百分數。 實例3 :透過避免有絲分裂阻滯，Mad2、BubRl和Mpsl的向 下調節可保護細胞避免多西紫杉醇誘發的死亡，並產 生非整倍性 正如WST-1測定所確定的，在多西紫杉醇存在的情況下， 有絲分裂檢查點基因的喪失與意味著抗藥性的細胞存活率上 升相關（圖1)。為了進一步測試WST_i測量有效性，進行了細 胞學實驗以觀察細胞形態學和存活率(圖4)。使用共焦點顯微 鏡追縱細胞並使用鈣黃綠素_AM(一種因細胞内酯酶而發出綠 色螢光的活體染料)作為新陳代謝活性細胞指示劑。圖4顯示 加入多西紫杉醇後16小時，Mad2、BubRl及Mpsl siRNA轉 染的細胞過早地退出了有絲分裂而進入一種明顯的分裂間期 狀悲，並呈現一種平坦的細胞形態，而大多數對照siRNA轉染 的細胞則處於有絲分裂阻滞狀態，並呈現一種圓形的細胞形 態。以前對於其它微管抑制劑已經描述過平坦的細胞表型，並 述及細胞财齡餘雜態退出、實際上並沒有完成有絲分 裂而進入一種明顯的分裂間期狀態的能力(Kung β a/., Prac Natl Acad Sci 87:9553, 1990; Lanni and Jacks, Mol Cell Biol 18.1055, 1998)在處理後 72 小時，關於 Mac|2、BubRl 或 Mpsl siRNA向下調節細胞最狀注目的祕絲是增加了許多細胞 以及非常大的細胞粒度，⑽照siRNA㈣的細誠之相比， 45 201237174 由於多西紫杉醇處理的結果它們已被實質上消滅。在多西紫杉 醇不存在的情況下，在兩個不同的時刻，有絲分裂檢查點向下 調節的細胞看起來與對照物細胞相似，處理後72小時細胞數 量的增加提示，在siRNA存在的情況下細胞在活躍地增長。 繼微管抑制劑如秋水仙驗（C〇lCemid)、洛可達cr坐 (nocodazole)和太平洋紫杉醇處理之後’有絲分裂檢查點受損的 細胞夠繞過有絲分裂阻滞並過早地退出有絲分裂(Tayl〇r an(j McKeon, Cell 89:727, 1997; Shin et al., Cancer Cell 4:483, 2003; Masuda et al, Am JPathol 163:1109, 2003; Sudo et al., Cancer
Aes 64:2502, 2004)。為了確定經多西紫杉醇處理的HCTl 16細 胞經三種特定的檢查點基因Mad2、BubRl或Mpsl抑制之後 是否過早地退出有絲分裂，我們測量了被轉染細胞的有絲分裂 指數。將siRNA轉染的Mad2、BubRl或Mpsl細胞未經處 理(0)或在經多西紫杉醇處理後8、μ、24、36、48和72小時 收穫，然後加以固定並與多克隆抗體一起培養，該多克隆抗體 檢測組蛋白H3的磷酸化作為有絲分裂的跡象(有絲分裂指數套 組，Cellomics)。圖5以曲線顯示了所有時刻的情況。有絲分裂 指數在處理後16小時和24小時之間達到高峰，表明在所有情 況下均發生了有絲分裂阻滯。對於用對照siRNA轉染的細胞， 有絲分裂指數達到了最高值，但用Mad2和BubR1 siRNA轉染 的細胞則顯7F 了有絲分裂指數的顯著下降。Μ〆的效 應不象Mad2和BubRl那樣顯著。這些結果清楚地顯示，有 絲分裂檢查點受損的細胞能繞過多西紫杉醇誘發的有絲分裂 阻滯狀態，而且BubRl siRNA是繼Mad2和Mpsl之後最有效 46 201237174 的0 為了排除有絲分裂指數的變化與抑制效率的重 β 們：實時PCR來測量有絲分裂檢查點轉: 千圖6所不的貫驗顯不，mRNA的水平降低到了鱼
BubRl和Mpsl siRNA轉染的細胞相當的水平，提示有a 指數的差異更能反映基因的功能。 、、’v、刀4 ，顯微鏡觀察獲得的數據看來，上述顆粒非常大的細胞也 h有異常的DNA含量。為了進—步職這些有絲分裂檢查 點d貝的細胞是否能夠克服多西紫杉醇誘發的細胞週期阻 滯，重新進入s P皆段而產生非整倍細胞，我們進行了 facs分 析以測量DNA含量。分別在多西紫杉醇存在私存在的條^ 下培養、固定Mps卜Bubiu、Mad2和對照咖八轉染的細 胞’並用蛾化丙咬染色’再進行FACS分析。在加入多西紫杉 醇後的幾個不同時刻收集數據(數據未顯示），圖7 ^ 後W小時的分佈圖。多西紫杉醇加入後72小時:用、^、 BubRl、Mad2和siRNA的轉染導致了細胞的積聚，其DNA含 量分別為8N、蘭以及32N(BUbRl的情況）。在僅使用對照 siRNA的情況下，當多西紫杉醇存在時，檢測出了(dna含量' 為庫的細胞群，但對於有絲分裂檢查點向下調節的細胞，此 8N細胞群的數量要大得多。在加入多西紫杉醇後一個較早的 時刻(數據未顯示），大多數對照細胞被阻滯在4N，而用Mpsl、 BubRl和Mad2 siRNA轉染的細胞則從4N前進到8N。這些結 果表明，有絲为裂檢查點基因的抑制使得細胞能更迅速地積累 至異常的DNA水平，*域野生型細胞比較，越過了更高的 47 201237174 倍數性閾值。我們的結果顯示了 Mad2、BubRl和Mpsl在用 以前未表徵的微管抑制劑多西紫杉醇調節有絲分裂指數和細 胞週期性進化過程中的作用。 ' 實例4 : BubRl向下調節細胞内多西紫杉醇抗藥性細胞群的形 成 假定與抗微管劑結合的BubRl表達不足與非整倍性相 關’而且BubRl的恢復與激活檢查點和非整倍細胞的〉周亡相 關，那麼BubRl的凋亡作用對於染色體保真性的調節似乎是 很重要的(Shin Cimcer Ce//4:483, 2〇〇3)。為了確定有絲分 裂檢查點基因的永久性向下調節是否能使細胞以更大的增殖 能力增長，測試了 BubRl和Mpsl穩定的抑制細胞係(圖4)在 多西紫杉醇持續存在的條件下增殖和建立細胞群的能力。由於 Mad2的損傷對於細胞是致命的，故咖2穩定的抑制細胞係 無法產生(Michel ei a/.，iVoc Udozi/制 ιοί:4459, 2004)。用 5 nM多西紫杉醇處理BubR1、Mpsl和對照shRNA穩定的抑制 .、’田胞係達1G天之後’用結晶紫染色。圖8顯示，與對照細胞 係相比，BubRl抑制細胞係產生了多得多的大細胞群。在5 _ ^西紫杉醇存在時’ Mpsl抑制細胞係不能產生細胞群。當將 这些培養板培養17天后，在對照培養板上可觀察到細胞群， 但其數量與BubRl抑制細胞係相比仍然較少。這些結果將
BubRl(但不是Mpsl)的低水平與化療藥物多西紫杉醇存在時細 胞的快速生長相關聯。 48 201237174 實例5 .對於能增加對多西紫杉醇敏感性的siRNA的交叉檢驗 除了鑑別能保護細胞免遭多西紫杉醇誘發的殺傷的 siRNA之外，此筛檢過程也鑑別了能使細胞對殺傷作用更敏感 的 siRNA。在表 ΠΙ 中，pim心 p2lWafl/cipl、GBp i、、
He小SPF45、Rafl代表了 —組在較高多西紫杉醇濃度下(>6 nM) 顯不了顯著的殺傷作用而IQo只有很小變化的siRNA。致癌絲 胺酸/蘇胺酸激酶Pim-丨和細胞週期抑制劑p2lwafi/ciPi的siRNA 劑罝效應曲線是非常相似的（圖9)，這可能反映了信號通路内 的疊加或協力作用；而且先前的報導顯示，p2lWafi/ciPi是pim_l 的底物(Wang β α/.，历历〇/?/吸 J伽 1593:45, 2002)。更令 人感興趣的是Pim-Ι在前列腺上皮細胞内過度表達的數據，這 種過度表達導致了有絲分裂檢查點的干擾和基因的不穩定性 (Roh ei a/.，Cimcer 及烈 63:8079, 2003)。這些結果與 Mad2、
BubRl和Mpsl的表達不足的數據是一致的，顯示了一種具有 相反表達水平的可比表型(參見圖1)。可增加對多西紫杉醇敏 感性的另一種siRNA是Heel。 在表 III 中，TACC3、RELB、Aurora-A、PRKCD(PKC)、 HSPA1A以及BRAF35代表了 一組在較低多西紫杉醇濃度(丨_ 6 nM)下增加敏感性且IC50發生典型變化的siRNA。Aurora-A是 在有絲分裂發生時起作用並涉及中心體成熟和紡錘體集合的 絲胺S复/棘胺酸激每(參閱 Meraldi ei a/.，Cwrr OpzTi Gewei Dev 14:29, 2004)。很令人感興趣的是某些公開的數據顯示， Aurora-A在HeLa細胞内的過度表達保護了細胞免遭太平洋紫 杉醇的殺傷’這與我們的Aurora-A表達不足增強了多西紫杉醇 49 201237174 叙傷作用的結果是一致的(Anancj故α/.，Cimcer Ce// 3:51， 2003)。誠然，這是Aurora-A的IC50小幅度的下降，代表了存 活率下降25% ;但是，通過用shRNA反轉錄病毒的傳輸造成 HCT116細胞内Aurora-A穩定的抑制(將圖9與圖1〇和圖u 比較）’該結果得以完全重現。 實例6:Piml在多西紫杉醇不存在時可抑制HCTn6細胞的增 殖 θ 為了進一步評估該篩檢過程的優點，重要的是要將在多西 紫杉醇不存在時影響細胞存活率的siRNA和那些與多西紫杉 醇共同起作用而增強殺傷能力的siRNA加以區別。為了區別各 種可能性，我們研究了 siRNA轉染對增殖的影響，使用錐蟲 藍排除分析法和細胞計數來確定轉染後24、48、72小時6孔 培養板上存活細胞的數量。我們的結果顯示，pim l ^⑽八可 抑制HCT116細胞内的增殖，而TACC3 siRNA對.增殖則沒有 影響(圖12 ;圖13顯示了量化的抑制），儘管兩種siRNA均能 提高多西紫杉醇誘發的細胞死亡(圖9)。 實例7 :使用Live/Dead分析對抗藥性基因和敏感性基因進行 驗證 為了直觀地味能對乡西紫杉醇產生敏雜和抗藥性的 s^RNA，伽了臟麟來確定活細胞與死細胞的比率，用飼 κ綠素-a將活細胞祕m料化㈣(ΡΙ)·細胞核染成 紅色。在加入多西紫杉醇之後(72小時)，siRNA#染的脑u 201237174 細胞含有的存活細胞最多，而siRNA轉染的pjm_i和tacC3 含有的死細胞最多，對照細胞則介於兩者之間(數據未顯示）。 雖然在72小時之前BubRl siRNA單獨顯示了細胞死亡的增 加，但最終該細胞變得對多西紫杉醇具有抗藥性。在24小時 之前Pim-1 siRNA單獨造成了細胞死亡，而TACC3 siRNA則 未造成死亡。這些結果顯示，BubRl的向下調節與上升的細胞 存活率和抗藥性相關，而Pim-1和TACC3的向下調節則與上 升的細胞死亡率和藥物敏感性相關。pim_丨和TACC3均顯示在 多西紫杉醇存在時其殺傷作用增強，但這一分析不能區別疊加 作用和協力殺傷作用之間的差異。 貫例8 :多西紫杉醇誘發的胱冬裂酶-3活性因BubRl的向下調 節降低但因Pim-1的向下調節而增強 多西紫杉醇能誘發凋亡而造成細胞的死亡(Kim et aly Int /M?/施3 11:799, 2003)。為 了確定 pim-i 和 BubR1 siRNA 在 多西紫杉醇存在和不存在的情況下是否能調節一條標準的凋 亡途徑，我們(使用一種bi〇plex分析)研究了 HCTU6細胞内 的激活胱冬裂酶_3水平(圖14)。在用4〇nM多西紫杉醇處理48 小時後’在對照細胞内誘發了胱冬裂酶_3活性’這種誘發因 Pim-1的向下調節而進一步增強，但因BubRi的向下調節而降 低(中圖和下圖）。在多西紫杉醇不存在的情況下，pim l的向下 調節導致了處理後24小時胱冬裂酶_3活性略有增加，但在處 理後48小時和72小時則回到了對照水平(上圖），這表明其它 的凋亡機制已被激活以維持籍由wsT—丨和UVE/DEAD分析法 201237174 於處理後72小時所觀察到的增強殺傷作用。在多西紫杉醇不 存在的情況下’BubRl的向下調節導致了胱冬裂酶_3活性很輕 微的增加’這與以下觀察結果是一致的：在LIVE/DEAD分析 中’ BubRl的抑制在處理後72小時最初造成了細胞的死亡。 這些結果進一步提示，Pimd和BubR1通過胱冬裂酶_3活性的 調節是多西紫杉醇殺傷作用的效應子。 實例9 :涉及多西紫杉醇誘發的Pim 1相關敏感性和BubRl相 關抗藥性的信號通路
Pim-Ι引起的活性有力地提示，pim l在阻止導致細胞死 亡的信號事件而促進有利於細胞存活的信號事件過程中起著 關鍵的作用。為了定義與Pim_l的抑制相關的細胞死亡增加的 分子基礎’我們研究了涉及細胞存活的關鍵細胞通路的活化狀 態’ AKT °將HCT116按每孔4 X 105細胞接種在6孔培養板 上並於-人日使用脂質體試劑Lip〇fectamine 2〇〇〇(invitr〇gen) 以16 nM siRNA轉染。24小時之後，以5 nM和40 nM多西 紫杉醇處理細胞或不加處理。在加入多西紫杉醇後24、48和 72小時，以冰冷的裂解緩衝液(5〇 ^ HEpES緩衝液
(PH7.4)、1% NP40、2.5 mM EDTA、100 mM It化納、1〇 mM 鈉ΡΡι、蛋白酶抑制劑混合片劑(R〇che)、2慮原釩酸鈉)來溶 解細胞，並以12,〇〇〇g離心1〇分鐘。然後採用DC蛋白分析 ^(BioRad)定量分析溶胞產物的總蛋白水平。使用活性胱冬裂 麵 3 beadmates 套組(Upstate)和 Luminex 100™ 系統，按照製造 商推薦的規程確定活性胱冬裂酶_3水平。使用總AKT抗體 52 201237174 bead套組和磷特祕AKT S473抗體_套組(Bi〇s〇urce)以及
Lummex 100彡統，按照製造商推薦的規程確定總akt和鱗 酸化ΑΚΤ的水平。 圖15所示的實驗結果顯示，與對照樣本相比，Pim-1的 向下撕減少了 AKT的基線磷酸化，而且隨著多$紫杉醇濃 度的祜加這種影響顯著地加強。通過比較，BubR1的向下調節 牦加了 AKT的基線磷酸化而且這種影響在多西紫杉醇濃度較 低而不是較糾制加強，表明在較高劑量時也許有其他的信 號通路被激活。 申請人進行了西方印跡分析，使用抗Pimd和BubR1的 抗體於第48小時測量蛋白水平。將等量蛋白載入NupAGE Novex Bis-Tns凝膠(Invitrogen)。按照製造商的推薦，使用了 抗 Prni-1 (Santa Cruz biotechnology)、BubRl(BD bioscience)和 α- 微管蛋白(Sigma)的抗體。將第二抗體與結合並以 ECL西方印跡檢測系統(Amhersham Biosciences)檢測，然後再 與 ECL Hyperfilm(Amhersham Biosciences)接觸。圖 16 所示的 貫驗結果顯示’與對照樣本相比，Pim_l和BubRi蛋白水平降 低，顯示了降低的蛋白水平對應於某種功能的變化(圖15^這 些數據提示，Pim-1蛋白水平的向下調節能夠阻止AKT的磷 酸化和活化，以迫使細胞趨向凋亡。Pim—丨似乎能通過激活有 利於生存的通路而導致細胞的生存。 本發明的範圍不限於此處所述的特定具體實施例。確實， 除了此處所述的那些實施例，本發明之各種各樣的修改，通過 前面的說明和附圖，對於本領域的專業人士將變得顯而易見。 53 201237174 這類修改均屬於所附的專利權要求範圍。 本文引述的所有參考文獻均以其整體引用在此。
Anand S, Penrhyn-Lowe S5 Venkitaraman AR.(2003)AURORA-A amplification overrides the mitotic spindle assembly checkpoint, inducing resistance to Taxol(AURORA-A 擴增克服有絲分裂纺 鐘體集合檢查點，誘發對紫杉醇的抗藥性).Cancer Cell. 3:51-62.
Aza-Blanc P, Cooper CL, Wagner K, Batalov S, Deveraux QL, Cooke MP.(2003)Identification of modulators of TRAIL-induced apoptosis via RNAi-based phenotypic screening(經由基於 RNAi 的表型篩檢來鑑別TRAIL所誘發凋亡的調節基因).Mol Cell. • 12:627-37.
Chang JC, Wooten EC, Tsimelzon A, Hilsenbeck SG, Gutierrez MC, Elledge R, Mohsin S, Osborne CK, Chamness GC, Allred DC, O'Connell P.(2003)Gene expression profiling for the prediction of therapeutic response to docetaxel in patients with breast cancer(予員 測乳腺癌患者對多西紫杉醇治療反應的基因表達圖譜分析). Lancet. 362:362-9.
Hong, WK(2002)The current status of docetaxel in solid 54 201237174 tumors(實體腫瘤方面多西紫杉醇的現狀)· Oncology 16:9-15.
Jackson AL, Bartz SR, Schelter J, Kobayashi SV, Burchard J, Mao M, Li B, Cavet G, Linsley PS.(2003)Expression profiling reveals off-target gene regulation by RNAi(表達圖譜分析揭示 RNAi 對 偏離目標基因的調節).Nat Biotechnol. 21:635-7.
Katsumata N.(2003)Docetaxel: an alternative taxane in ovarian cancer(多西紫杉醇：卵巢癌治療中一種可供選擇的紫杉烷).Br J Cancer. 89 Suppl 3:S9-S15.
Kim R, Tanabe K, Uchida Y, Emi M, Toge T.(2003)Effect of Bcl-2 antisense oligonucleotide on drug-sensitivity in association with apoptosis in undifferentiated thyroid carcinoma(Bcl-2 反意低聚 核苷酸對未分化曱狀腺癌中與凋亡有關的藥物敏感性的影響). Int JMol Med. 11:799-804.
Kolfschoten GM, Hulscher TM, Duyndam MC, Pinedo HM, Boven E.(2002)Variation in the kinetics of caspase-3 activation, Bcl-2 phosphorylation and apoptotic morphology in unselected human ovarian cancer cell lines as a response to docetaxel(作為對 多西紫杉醇的反應的隨意選定的人的卵巢癌細胞係中胱冬裂 酶-3的活化、Bcl-2的磷酸化和凋亡形態學的動力學變化). Biochem Pharmacol. 63:733-43. 55 201237174
Kung AL, Sherwood SW, Schimke RT.(1990)Cell line-specific differences in the control of cell cycle progression in the absence of mitosis(無有絲分裂情況下細胞週期性進化控制中細胞係特 異性差異).Proc Natl Acad Sci U S A. 87:9553-7.
Lanni JS, Jacks T.(1998)Characterization of the p53-dependent postmitotic checkpoint following spindle disruption(紡鐘體破壞 後p53依賴性有絲分裂期後檢查點的特性描述)Mol cell Biol. 18:1055-64.
Lee LF, Li G, Templeton DJ, Ting JP.(1998)Paclitaxel(Taxol)-induced gene expression and cell death are both mediated by the activation of c-Jun NH2-terminal kinase(JNK7SAPK)【太平洋紫杉醇(紫杉醇)誘發的基因表達和 細胞死亡均由c-Jun NH2-封端激酶(JNK/SAPK)的活化引起】.J Biol Chem. 273:28253-60.
Li Y, Dowbenko D, Lasky LA.(2002)AKT/PICB phosphorylation of p21Cip/WAFl enhances protein stability of p21Cip/WAFl and promotes cell survival(p21Cip/WAFl 的 AKT/PKB 峨酸化提高 p21Cip/WAFl的蛋白穩定性並促進細胞生存).J Biol Chem. 277:11352-61.
Lum L, Yao S, Mozer B, Rovescalli A, Von Kessler D, Nirenberg 56 201237174 M, Beachy PA.(2003)Identification of Hedgehog pathway components by RNAi in Drosophila cultured cells(籍由果繩培養 細胞内的RNAi對Hedgehog通路組分進行鑑別）.Science. 299:2039-45.
Masuda A, Maeno K, Nakagawa T, Saito H, Takahashi T.(2003)Association between mitotic spindle checkpoint impairment and susceptibility to the induction of apoptosis by anti-microtubule agents in human lung cancers(人的肺癌中有絲 分裂紡錘體檢查點損傷和對於抗微管劑誘導的凋亡易感性之 間的聯繫).Am J Pathol. 163:1109-16.
McManus MT, Sharp PA.(2002)Gene silencing in mammals by small interfering RNAs(小型干擾RNA引起的哺乳動物基因沉 默).Nat Rev Genet. 3:737-47.
Meraldi P, Honda R, Nigg EA.(2004)Aurora kinases link chromosome segregation and cell division to cancer susceptibility(Aurora激酶將染色體分隔及細胞分裂與癌症易 感性相關聯).Curr Opin Genet Dev. 14:29-36.
Michel L, Diaz-Rodriguez E, Narayan G, Hernando E, Murty W, Benezra R.(2004)Complete loss of the tumor suppressor MAD2 causes premature cyclin B degradation and mitotic failure in 57 201237174 human somatic cells(人類體細胞内腫瘤抑制基因MAD2的完全 喪失導致細胞週期蛋白B的過早降解和有絲分裂失敗).proc Natl Acad Sci USA. 101:4459-64.
Ojima, I. and Geney, R. 109881 Aventis(2004)Curr Opin Investig Drugs 4:737-40.
Ringel I, Horwitz SB.(1991)Studies with RP 56976(taxotere): a semisynthetic analogue of taxol【關於 RP 56976(效癌易）的研 究：紫杉醇的一種半合成類似物】.JNatl Cancer Inst. 83:288-91.
Roh M, Gary B, Song C, Said-Al-Naief N, Tousson A, Kraft A, Eltoum IE, Abdulkadir SA.(2003)Overexpression of the oncogenic kinase Pim-1 leads to genomic instability(致癌激酶 Pim-1 的過度 表達導致基因組不穩定).Cancer Res. 63:8079-84.
Shin HJ, Baek ΚΉ, Jeon AH, Park MT, Lee SJ, Kang CM, Lee HS, Yoo SH, Chung DH, Sung YC, McKeon F, Lee CW.(2003)Dual roles of human BubRl, a mitotic checkpoint kinase, in the monitoring of chromosomal instability(人的 BubRl，一種有絲分 裂檢查點激酶，在染色體不穩定性監視中的雙重作用).Cancer Cell. 4:483-97.
Simmer F, Moorman C, Van Der Linden AM, Kuijk E, Van Den 58 201237174
Berghe PV, Kamath R, Fraser AG, Ahringer J, Plasterk RH.(2003)Genome-Wide RNAi of C. elegans Using the Hypersensitive rrf-3 Strain Reveals Novel Gene Functions(使用高 靈敏度rrf-3菌株的基因組範圍内C. elegans的RNAi揭示了新 的基因功能).PLoS Biol. 1:E12.
Sudo T, Nitta M, Saya H, Ueno NT.(2004)Dependence of paclitaxel sensitivity on a functional spindle assembly checkpoint(太平洋紫杉醇敏感性對功能紡錘體集合檢查點的依 賴性).Cancer Res. 64:2502-8.
Tanabe K, Kim R, Inoue H, Emi M, Uchida Y, Toge T.(2003)Antisense Bcl-2 and HER-2 oligonucleotide treatment of breast cancer cells enhances their sensitivity to anticancer dmgs(用反意Bcl-2和HER-2低聚核苷酸對乳腺癌細胞的治療 提高了它們對於抗癌藥物的敏感性).Int J Oncol. 22:875-81.
Taylor SS, McKeon F.(1997)Kinetochore localization of murine Bubl is required for normal mitotic timing and checkpoint response to spindle damage(正常的有絲分裂時機和檢查點對紡 錘體破壞的反應需要鼠科Bubl的著絲粒定位).Cell. 89:727_35.
Wang ΤΗ, Wang HS, Soong YK(2000)Paclitaxel-induced cell death’· where the cell cycle and apoptosis come together(太平洋紫 59 201237174 杉醇誘發的細胞死亡：細胞週期和凋亡的匯合點）.Cancer· 88:2619-28.
Wang Z, Bhattacharya N, Mixter PF, Wei W, Sedivy J, Magnuson NS.(2002)Phosphorylation of the cell cycle inhibitor p21Cipl/WAFl by Pim-1 kinase(Pim-l 激酶引起的細胞週期抑 制劑 p21Cipl/WAFl 的構酸化）.Biochim Biophys Acta. 1593:45-55.
Zhou J, Yao J, Joshi HC.(2002)Attachment and tension in the spindle assembly checkpoint(紡鐘體集合檢查點的連接和張力）· J Cell Sci. 115:3547-55. 【圖式簡單說明】 圖1顯示了某些基因的特性，它們的向下調節可產生對多 西紫杉醇的抗藥性。所顯示的多西紫杉醇劑量效應曲線為用 RBI、BubRl、Mad2和Mpsl siRNA(實心正方形）轉染的 HCT116細胞與對照siRNA(空心正方形)相比的情況。rjbi是 在篩檢中沒有得分的siRNA的一個實例。在加入WST-1之後 於450 nM吸收率條件下測量細胞存活率。最小比率(mr)是多 西紫杉醇劑量為40nM時基因WST-1值與對照物WST-1值 的比率。 圖2顯示了將BubRl和Mpsl shRNA(實心正方形)與對照 shRNA(空心正方形)比較的劑量效應曲線。 201237174 圖3顯示了在分別含有BubRl shRNA和Mpsl shRNA的 細胞内，對BubRl shRNA和Mpsl mRNA水平進行的TaqMan 實時PCR分析。 圖4分別顯示了在使用或不使用多西紫杉醇處理的情況 下，用Mad2、BubRl和Mpsl siRNA轉染的HCT116細胞的 細胞存活率和形態學。在轉染後24小時，對細胞不加處理 (-Docetaxel)或以200 nM多西紫杉醇處理(+Docetaxel)，並在處 理後16和72小時以鈣黃綠素染色以顯現活細胞。 圖5顯示了用Mad2、BubRl、Mpsl轉染的HCT116細 胞和對照siRNA繼多西紫杉醇處理之後的有絲分裂指數。轉 染後24小時細胞以200 nM多西紫杉醇處理16小時和72小時 並加以進一步處理。以磷酸化的組蛋白H3抗體檢出有絲分裂 細胞，此處顯示為染色細胞核的紅色斑點（有絲分裂指數套 組，Cellomics)。用Hoechst染料將細胞核染成藍色。 圖6顯示了在分別用Mpsl、BubRl和Mad2 siRNA轉染 的HCT116細胞内，對Mps卜BubRl和Mad2 mRNA水平 進行的TaqMan實時PCR分析。 圖7顯示了用三種有絲分裂檢查點基因siRNA轉染的 HCT116細胞的細胞週期分析。在用Mps卜BubRl和Mad2 siRNA轉染之後，未用多西紫杉醇(-Docetaxel)處理細胞或以 200 nM多西紫杉醇(+Docetaxel)處理24小時。在加入多西紫 杉醇後72小時’收穫細胞並分析細胞週期。峰頂的數字表示 DNA 含量，例如 2N、4N、8N、16N 或 32N。 圖8顯示了使用穩定的抑制細胞係進行的無性系細胞存 61 201237174 活分析。將含有BubR1或載體對照shRNA的HCT110細胞 接種在10 cm培養皿中並在5nM多西紫杉醇中保持1〇天。 用PBS洗滌細胞群並以結晶紫染色。 圖9顯示了幾種基因的劑量效應曲線，這些基因的向下調 節忐增加對多西紫杉醇的敏感性。所顯示的多西紫杉醇劑量效 應曲線為用 RBI、Pim_卜 p2卜 AuroraA 和 TACC3 siRNA(實 心正方形)轉染的HCT116細胞與對照siRNA(空心正方形)相 比的情況《最小比率(MR)是多西紫杉醇濃度為4〇 nM時基因 WST_1讀數與對照物WST-1讀數的比率。IC50(IR)比率是基 因的IC50與對照物IC50的比率。 圖顯示了 Aurora A shRNA(實心正方形)與載體對照物 (空心正方形)比較的劑量效應曲線。 圖11顯示了在含有Aurora A shRNA的細胞内，對Aurora AmRNA水平的TaqMan實時PCR分析。 圖12顯示了用pim_i和TACC3 siRNA轉染的HCT116細 胞(實心正方形)與對照siRNA(空心正方形)比較在增殖方面的 區別。也就是在用Pim-1、TACC3和對照siRNA轉染後的不 同時刻’在6孔培養板内剩下的細胞數量。 圖13顯示了在siRNA轉染後對Pim-1和TACC3 mRNA 水平進行的TaqMan分析。 圖14顯示了在用pim_i和BubRl siRNA轉染的HCT116 細胞内活性胱冬裂酶-3的水平。使用活性胱冬裂酶-3 beadmates套組(Upstate)，螢光強度顯示活性胱冬裂酶-3的水 平。檢驗了 3種多西紫杉醇的濃度(即0、5和40 nM)以及3個 62 201237174 時刻（即加入多西紫杉醇後24、48和72小時)的情況。 圖15顯示了用Pim-1和BubRl siRNA轉染的HCT116細 胞内AKT的磷酸化水平。磷酸化AKT和總AKT水平的比率 是用bead-based測定法(Bi〇s〇urce)確定的。轉染後24小時， 對細胞不加處理或以5 nM和40 nM多西紫杉醇處理。在多西 紫杉醇處理後48小時，分析細胞溶胞產物。計算磷酸化水平， 並以磷酸化AKT(p-AKT)與總AKT(t-AKT)的比率表示。 圖16以西方印跡法結果顯示轉染後48小時Pim-1和 BubRl的水平下降。 63 201237174 序列表 <110 > GRUENBERG, Dorre HUANG, Xi NATESAN, Sridaran AUGUST, Paul <120> 測量對多西紫杉醇的抗型或敏感性之方法 <130> USAV2004/0088 US PCT <140> 11721103 <141> 2007-06-07 <160> 116 <170> Patentln version 3.3 <210> 1 <211> 19 <212> RNA <213> 人工 <220> <223> siRNA <400> 1 gcgauggaac uucgacuuu <210> 2 <211> 19 <212> RNA <213> 人工 <220> <223> siRNA <400> 2 uggaacuucg acuuuguca <210> 3 <211> 19 <212> RNA <213> 人工 <220> <223> siRNA <400> 3 agaccaugug gaccuguca 19 19 19 201237174 <210> <211> <212> <213> 4 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 4 ccuucgaaga aauccagaa <210> <211> <212> <213> 5 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 5 uggugugugg agauauucc <210> <211> <212> <213> 6 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 6 uauuccuuuc gagcaugac
<210> <211> <212> <213> 7 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 7 cgaaaggcau guaccauaa <210> <211> <212> <213> 8 19 RNA 人工 201237174 <220>
<223> siRNA
<400> 8 gauacaggcu gaagagauu <210> 9 <211> 19 <212> RNA <213> 人工 <220> <223> siRNA <400> 9 gaacaggagc aacuacuaa <210> 10 <211> 19 <212> RNA <213> 人工 <220> <223> siRNA <400> 10 gcaaggaccu gaccuacac <210> 11 <211> 19 <212> RNA <213> 人工 <220> <223> siRNA <400> 11 gcaaggaccg gaacgagaa <210> 12 <211> 19 <212> RNA <213> 人工 <220> <223> siRNA <400> 12 201237174 gacccuguca ccaacauuu <210> <211> <212> <213> 13 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 13 caaauccgcu gacugaaau <210> <211> <212> <213> 14 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 14 gaacaagaca gaccgagau <210> <211> <212> <213> 15 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 15 gacccuaugu uuccuaaug <210> <211> <212> <213> 16 19 RNA 人工 <220> <223> SiRNA <400> 16 guguauucga caacucugu <210> 17 <211> 19 201237174
<212> <213> RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 17 gauugcaaga uuggaacaa
<210> <211> <212> <213> 18 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 18 guacucaguu gcagacauu
<210> <211> <212> <213> 19 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 19 guaucacaaa uuggcuaga
<210> <211> <212> <213> 20 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 20 gcacggagau guugcagua
<210> <211> <212> <213> 21 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA 201237174 <400> 21 gcaaagaaca ucauccaua
<210> <211> <212> <213> 22 19 RNA 人工. <220> <223> siRNA <400> 22 gacaugaaau ccaacaaua
<210> <211> <212> <213> 23 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 23 ggaaugagcu ugcaugacu
<210> <211> <212> <213> 24 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 24 gagaacugcu acuuauaua
<210> <211> <212> <213> 25 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 25 gaauaugcac cacuuggaa 201237174
<210> <211> <212> <213> 26 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 26 gaaggucgga ugcaugaug
<210> <211> <212> <213> 27 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 27 guaaaggaaa guuugguaa
<210> <211> <212> <213> 28 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 28 gcaccucgcu ucccacaag
<210> <211> <212> <213> 29 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 29 gagcggaccu guaaaacua <210> <211> <212> <213> 30 19 RNA 人工 201237174 <220> <223> siRNA <400> 30 gaacgaagag ucacugaag 19 <210> 31 <211> 19 . <212> RNA <213 > 人工 <220> <223> siRNA <400> 31 gcagaaagag gacauauca 19 <210> 32 <211> 19 <212> RNA <213> 人工 <220> <223> siRNA <400> 32 gcagcgagcc auugccuuu 19 0 12 3 1111 2 2 2 2 < < < < iah 3 9^^ 3 1 R Ay <220> <223> siRNA <400> 33 gcccgucuau gacaagaaa 19 <210> 34 <211> 19 <212> RNA <213> 人工 <220> <223> siRNA <400> 34 19 ggacguggau ugcaaacaa 8 201237174 <210> 35 <211〉 19 <212> RNA <213> 人工 <220> <223> siRNA <400> 35 gcaugaaugu gcaccauaa <210> 36 <211> 19 <212> RNA <213> 人工 <220> <223> siRNA <400> 36 gaaagaacgc uucaacauc <210> 37 <211> 19 <212> RNA <213> 人工 <220> <223> siRNA <400> 37 gggcguacca gcagucuga <210> 38 <211> 19 <212> RNA <213> 人工 <220> <223> siRNA <400> 38 gcucugggcu caugaacac <210> 39 <211> 19 <212> RNA <213> 人工 201237174 <220> <223> siRNA <400> 39 gucugaagcc uauaagaug
<210> <211> <212> <213> 40 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 40 gagaucgacu cccuguuug
<210> <211> <212> <213> 41 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 41 uggaggaguu caagagaaa
<210> <211> <212> <213> 42 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 42 gaucaacgac ggagacaag <210> <211> <212> <213> 43 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 43 201237174 gaagaaggaa auucaacua
<210> <211> <212> <213> 44 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 44 gagaagcguu ucccagugu
<210> <211> <212> <213> 45 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 45 gaaacauccu ccggcugaa
<210> <211> <212> <213> 46 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 46 gaugacuug
<210> <211> <212> <213> 47 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 47 ggagauugcu gugucuauc <210> 48 <211> 19 201237174 <212> <213> RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 48 ggagggccau gugaagaug <210> <211> <212> <213> 49 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 49 gaugugaagc ccuccaaug <210> <211> <212> <213> 50 19 RNA 人工 <220> <223> SiRNA <400> 50 gcaaugagcc uuuggauau <210> <211> <212> <213> 51 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 51 ggaacaaccu cauucuaaa
<210> <211> <212> <213> 52 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA 201237174 <400> 52 ggaagaagau cuagaugua
<210> <211> <212> <213> 53 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 53 gaaaucgugg ccgaguucu
<210> <211> <212> <213> 54 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 54 guggcauaua uccaucuga
<210> <211> <212> <213> 55 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 55 gccgaguucu ucucauucg
<210> <211> <212> <213> 56 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 56 ggaacaacug aaagauugg 201237174 <210> 57 <211> 19 <212> RNA <213> 人工 <220> <223> siRNA <400> 57 gucguuacag ucaagcaau <210> 58 <211> 19 <212> RNA <213> 人工 <220> <223> siRNA <400> 58 gcacgugacu acuuucaaa iAH 9 9^e 5 1 R Λ. Λ Λ Λ Λ 0 12 3 1111 2 2 2 2 <<<*= <220> <223> siRNA <400> 59. gaugaacuaa gcuugaaua <210> 60 <211> 19 <212> RNA <213> 人工 <220> <223> siRNA <400> 60 gagcaguacc acuagaaau <210> 61 <211> 19 <212> RNA <213> 人工 19 201237174 <220>
<223> siRNA
<400> 61 gagcaguacc acuagaaau <210> 62 <211> 19 <212> RNA <213> 人工 <220> <223> siRNA <400> 62 gcaccgagac uauuucuug <210> 63 <211> 19 <212> RNA <213> 人工 <220> <223> siRNA <400> 63 ggaugaagau gagcuguaa <210> 64 <211> 19 <212> RNA <213> 人工 <220> <223> siRNA <400> 64 gcauguggcu cagaucuug <210> 65 <211> 18 <212> RNA <213> 人工 <220> <223> siRNA 19 19 19 <400> 65 guacaacagu gaccucca 15 18 201237174
<210> <211> <212> <213> 66 19 RNA 人工 <220> <223> SlRNA <400> 66 gaugcuggau gugugaaua
<210> <211> <212> <213> 67 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 67 gcuugugaua aagagucaa
<210> <211> <212> <213> 68 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 68 gauccaccag augcuauug
<210> <211> <212> <213> 69 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 69 gcugucagau aguugauuu <210> 70 <211> 19
<212> RNA 201237174
<213> 人工 <220> <223> siRNA <400> 70 gccuacagcu ucuauaguc
<210> <211> <212> 71 19 RNA <213> 人工 <220> <223> siRNA <400> 71 guggacaguu guaaaucua
<210> <211> <212> <213> 72 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 72 gaagaucguu uccuauaca
<210> <211> <212> <213> 73 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 73 gcacgaaagc aagagauua
<210> <211> <212> <213> 74 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA 201237174 <400> 74 gaagaaacca gauggagua <210> <211> <212> <213> 5 7 9 ΙΛΧ <220> <223> siRNA <400> 75 gcuagaaucu gccgucuuu <210> 76 <211> 19 <212> RNA <213> 人工 <220> <223> siRNA <400> 76 gaucaaggcu ggagcuuau <210> 77 <211> 19 <212> RNA <213> 人工 <220> <223> siRNA <400> 77 gaacaugucg aucaagacu <210> 78 <211> 19 <212> RNA <213> 人工 <220> <223> siRNA <400> 78 guuuguaaca gauaucgau <210> 79 201237174
<211> <212> <213> 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 79 gaguagugca ucgcgaucu
<210> <211> <212> <213> 80 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 80 guaacagaua ucgaugaac
<210> <211> <212> <213> 81 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 81 gaacgaagaa ugugaucag
<210> <211> <212> <213> 82 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 82 guggauuauc acagaucua <210> <211> <212> <213> 83 19 RNA 人工 201237174 <223> siRNA <400> 83 gguacaaggc agagcuuaa 19 <210> <211> <212> <213> 84 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 84 gugccacagc agccgacau 19 <210> <211> <212> <213> 85 21 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 85 gucgaccauu auguaccgga u 21 <210> <211> <212> <213> 86 21 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 86 ggauucguaa cgugauuagc g 21 <210> <211> <212> <213> 87 19 RNA 人工 <220> <223> siRNA <400> 87 gaaacagaag aaccugauu 19 20 201237174 <210> 88 <211> 19 <212> RNA <213> 人工 <220> <223> siRNA <400> 88 . gaaaggacau gugaacuua 19 <210> 89 <211> 19 <212> RNA <213> 人工 <220> <223> siRNA <400> 89 guacaucuca gaaucuuga 19 <210> 90 <211> 2140
<212> DNA <213> 人類 <400> 90 agctgaggtg tgagcagctg ccgaagtcag ttccttgtgg agccggagct gggcgcggat 60 tcgccgaggc accgaggcac tcagaggagg cgccatgtca gaaccggctg gggatgtccg 120 tcagaaccca tgcggcagca aggcctgccg ccgcctcttc ggcccagtgg acagcgagca 180 gctgagccgc gactgtgatg cgctaatggc gggctgcatc caggaggccc gtgagcgatg 240 gaacttcgac tttgtcaccg agacaccact ggagggtgac ttcgcctggg agcgtgtgcg 300 gggccttggc ctgcccaagc tctaccttcc cacggggccc cggcgaggcc gggatgagtt 360 gggaggaggc aggcggcctg gcacctcacc tgctctgctg caggggacag cagaggaaga 420 ccatgtggac ctgtcactgt cttgtaccct tgtgcctcgc tcaggggagc aggctgaagg 480 gtccccaggt ggacctggag actctcaggg tcgaaaacgg cggcagacca gcatgacaga 540 tttctaccac tccaaacgcc ggctgatctt ctccaagagg aagccctaat ccgcccacag 600 gaagcctgca gtcctggaag cgcgagggcc tcaaaggccc gctctacatc ttctgcctta 660 gtctcagttt gtgtgtctta attattattt gtgttttaat ttaaacacct cctcatgtac 720 ataccctggc cgccccctgc cccccagcct ctggcattag aattatttaa acaaaaacta 780 21 840 201237174 ggcggttgaa tgagaggttc ctaagagtgc tgggcatttt tattttatga aatactattt aaagcctcct catcccgtgt tctccttttc ctctctcccg gaggttgggt gggccggctt catgccagct acttcctcct ccccacttgt ccgctgggtg gtaccctctg gaggggtgtg gctccttccc atcgctgtca caggcggtta tgaaattcac cccctttcct ggacactcag acctgaattc tttttcattt gagaagtaaa cagatggcac tttgaagggg cctcaccgag tgggggcatc atcaaaaact ttggagtccc ctcacctcct ctaaggttgg gcagggtgac cctgaagtga gcacagccta gggctgagct ggggacctgg taccctcctg gctcttgata cccccctctg tcttgtgaag gcagggggaa ggtggggtac tggagcagac caccccgcct gccctcatgg cccctctgac ctgcactggg gagcccgtct cagtgttgag ccttttccct ctttggctcc cctgtacctt ttgaggagcc ccagcttacc cttcttctcc agctgggctc tgcaattccc ctctgctgct gtccctcccc cttgtctttc ccttcagtac cctctcatgc tccaggtggc tctgaggtgc ctgtcccacc cccaccccca gctcaatgga ctggaagggg aagggacaca caagaagaag ggcaccctag ttctacctca ggcagctcaa gcagcgaccg ccccctcctc tagctgtggg ggtgagggtc ccatgtggtg gcacaggccc ccttgagtgg ggttatctct gtgttagggg tatatgatgg gggagtagat ctttctagga gggagacact ggcccctcaa atcgtccagc gaccttcctc atccacccca tccctcccca gttcattgca ctttgattag cagcggaaca aggagtcaga cattttaaga tggtggcagt agaggctatg gacagggcat gccacgtggg ctcatatggg gctgggagta gttgtctttc ctggcactaa cgttgagccc ctggaggcac tgaagtgctt agtgtacttg gagtattggg gtctgacccc aaacaccttc cagctcctgt aacatactgg cctggactgt tttctctcgg ctccccatgt gtcctggttc ccgtttctcc acctagactg taaacctctc gagggcaggg accacaccct gtactgttct gtgtctttca cagctcctcc cacaatgctg aatatacagc aggtgctcaa taaatgattc ttagtgactt taaaaaaaaa aaaaaaaaaa <210> 91 <211> 5449 <212> DNA <213> 人類 <400> 91 900 960 1020 1080 1140 1200 1260 1320 1380 1440 1500 1560 1620 1680 1740 1800 1860 1920 1980 2040 2100 2140 22 201237174 gcgccggggg ccgccgcgcc cgccgcccgc tgcctgcgcc gccggccggg catgagttag 60 tcgcagacat ggacaccaaa catttcctgc cgctcgattt ctccacccag gtgaactcct 120 ccctcacctc cccgacgggg cgaggctcca tggctgcccc ctcgctgcac ccgtccctgg 180 ggcctggcat cggctccccg ggacagctgc attctcccat cagcaccctg agctccccca 240 tcaacggcat gggcccgcct ttctcggtca tcagctcccc catgggcccc cactccatgt 300 cggtgcccac cacacccacc ctgggcttca gcactggcag cccccagctc agctcaccta 360 tgaaccccgt cagcagcagc gaggacatca agccccccct gggcctcaat ggcgtcctca 420 aggtccccgc ccacccctca ggaaacatgg cttccttcac caagcacatc tgcgccatct 480 gcggggaccg ctcctcaggc aagcactatg gagtgtacag ctgcgagggg tgcaagggct 540 tcttcaagcg gacggtgcgc aaggacctga cctacacctg ccgcgacaac aaggactgcc 600 tgattgacaa gcggcagcgg aaccggtgcc agtactgccg ctaccagaag tgcctggcca 660 tgggcatgaa gcgggaagcc gtgcaggagg agcggcagcg tggcaaggac cggaacgaga 720 atgaggtgga gtcgaccagc agcgccaacg aggacatgcc ggtggagagg atcctggagg 780 ctgagctggc cgtggagccc aagaccgaga cctacgtgga ggcaaacatg gggctgaacc 840 ccagctcgcc gaacgaccct gtcaccaaca tttgccaagc agccgacaaa cagcttttca 900 ccctggtgga gtgggccaag cggatcccac acttctcaga gctgcccctg gacgaccagg 960 tcatcctgct gcgggcaggc tggaatgagc tgctcatcgc ctccttctcc caccgctcca 1020 tcgccgtgaa ggacgggatc ctcctggcca ccgggctgca cgtccaccgg aacagcgccc 1080 acagcgcagg ggtgggcgcc atctttgaca gggtgctgac ggagcttgtg tccaagatgc 1140 gggacatgca gatggacaag acggagctgg gctgcctgcg cgccatcgtc ctctttaacc 1200 ctgactccaa ggggctctcg aacccggccg aggtggaggc gctgagggag aaggtctatg 1260 cgtccttgga ggcctactgc aagcacaagt acccagagca gccgggaagg ttcgctaagc 1320 tcttgctccg cctgccggct ctgcgctcca tcgggctcaa atgcctggaa catctcttct 1380 tcttcaagct catcggggac acacccattg acaccttcct tatggagatg ctggaggcgc 1440 cgcaccaaat gacttaggcc tgcgggccca tcctttgtgc ccacccgttc tggccaccct 1500 gcctggacgc cagctgttct tctcagcctg agccctgtcc ctgcccttct ctgcctggcc 1560 tgtttggact ttggggcaca gcctgtcact gctctgccta agagatgtgt tgtcaccctc 1620 23 201237174 cttatttctg ttactacttg tctgtggccc agggcagtgg ctttcctgag gcagcagcct tcgtggcaag aactagcgtg agcccagcca ggcgcctccc caccgggctc tcaggacacc ctgccacacc ccacggggct tgggcgacta cagggtcttc gggccccagc cctggagctg caggagttgg gaacggggct tttgtttccg ttgctgttta tcgatgctgg ttttcagaat tcctgtgtgg ccctcctgtc tggagtgaca tcttcatctg ctctgaatac tggtgcccag ccagcccgtg acagcttccc cctaatcagg aggggacagc tgggggcgca agctggtgtg tcatcagcaa agacctcagc cgcctcgggg atgagagggg actcgtgggg caagcaagct gccctgtgct ctgagtgagg gggaaggtag cccctttttc caaagataac tcacagtttt gccctcgagc caatgagaac atgagctgcc ctctgtgcaa ggtttcgggg ccacctccag gctgcagggg cgggtcactc acccccctgt tttctctctg ccttggtgtt ctggtttcag actcccgact ccccgttcag accagagtgc cccggcccct ccccagcctg agtcttctcc ttgctctgcg gggtgggctg aggcttgtcc ttgtttcctg cagggctggc cctggctcgg gcagggtggg gcatcaccac ctcactggcc ttgctggagg cacagggctc tgcggacctg cagccatctg tgaggcccgc ggggatggga ggggaggagg gtggcctgtt ggtttccctc agagggggca ggtggcctgg agagagaggg gctcaggaac tgggagcctc gtgggtgggg cagatgctcc gcggcctgga gtggctctgc cggggcattg gtgggacccc tgctcaggcc ttctctctgg ctgccagttg tgtctaaaag actcttggaa tctgagaacc cggagtcgca gcgccctcgg gcctgggcca cacgcaggcc ctggtgggac cacccagcct ggtattgtcc acggacagcg ttgttcaccc agagccttac ttgggagcct cactgaacgc ctgctctggt tgaaggtggg gtgggggcgg ggcttggggc ctccctggct cagcccagtg cggcctggcg ctcctcccgc aggctctgcc cccgggctcc ggtggtgcgg ggccctctca ggttgaactc gcctcttttg cactggaagg ccctcccttt ggcctgagta cttttcccgt tcacgcctca gtcccgtgga cccagccttt gtcagtggca ggtgcctgaa cagagggtgg atggggggga taccggaggg ggtcttgtct tcccagccgc agtctaggaa tgatgcgggg gggtggacgc cttctccata gtctttcccc acctggagca ggggcttcct cagtggtgag gggagctgcc tacaggttgg accgggaggc agtggcttgg agaggcagct ttccagcctt ggtggggaag aaagtgtcca ttctttgcct tcctggagct cccagccaga gctgagctta ggcacccgag 1680 1740 1800 1860 1920 1980 2040 2100 2160 2220 2280 2340 2400 2460 2520 2580 2640 2700 2760 2820 2880 2940 3000 3060 3120 3180 3240 24 201237174 tggagcctgc agctgagtct gtgcccgaga caggctgtca gagattccag aagcctctcc 3300 tccccgccgc cctccacccc tgcctttcag cgttgtggat ccctagaggt ggccccctgc 3360 ccgatccacc gtcctgaggc agagtgttga gcctcatacc tgtaccaggt ccccggccag 3420 ctgggcccct cccaggcact gccaggaagc cccagctgcc cctggcgggt gtggtggaaa 3480 tggcaggagg gtgcaggtac tcttggggcc ccagcggtgg gagtgcaaaa gacccaacgc 3540 caacacctgg tgccttttgc agccagcgcc cacccatccg tgcccggacc cttgggaatg 3600 cccgcggctc cagaggaaaa agcccaggga cggggcctcc gttgcggggg gtcggctgct 3660 tcttgggaac tttgtcgttt ccggcgctgg ctggctggct ggctgtaaag cactgaagcc 3720 ccccggccgc caacccctga aagcagaacc tggcctccct ggccacagca gccttaccca 3780 ccgctctacg tgtcccgggc acttcccgca gccttcccgt ccctttctca tcggccttgt 3840 agttgtacag tgctgttggt ttgaaaaggt gatgtgtggg gagtgcggct catcactgag 3900 tagagaggta gaatttctat ttaaccagac ctgtagtagt attaccaatc cagttcaatt 3960 aaggtgattt tttgtaatta ttattatttt ggtgggacaa tctttaattt tctaaagata 4020 gcactaacat cagctcatta gccacctgtg cctgtccccg ccttggcccg gctggatgaa 4080 gcggcttccc cgcagggccc ccacttccca gtggctgctt cctggggacc cagggcaccc 4140 cggcaccttc aggcacgctc ctcagctggt cacctcccgg ctttgccgtt cagatggggc 4200 tcctgaggct caggagtgaa gatgccacag agccgggctc ccctaggctg cgtcgggcat 4260 gcttggaagc tggcctgcca ggaccttcca ccctggggcc tgtgtcagcc gccggccctc 4320 cgcaccctgg aagcacacgg cctctgggaa ggacagccct gaccttcggt tttccgagca 4380 cggtgtttcc caagaattct gggctggcgg cctggtggca gtgctggaga tgaccccgag 4440 cccctccccg tggggcaccc aggagggccc tgccggaatg tgcagcctgt gggtagtcgg 4500 ctggtgtccc tgtcgtggag ctggggtgcg tgatctggtg ctcgtccacg caggtgtgtg 4560 gtgtaaacat gtatgtgctg tacagagaga cgcgtgtgga gagagccgca caccagcgcc 4620 acccaggaaa ggcggagcgg ttaccagtgt tttgtgttta tttttaatca agacgtttcc 4680 cctgttttcc tataaatttg cttcgtgtaa gcaagtacat aaggaccctc ctttggtgaa 4740 atccgggttc gaatgaatat ctcaaggcag gagatgcatc tattttaaga tgctttggag 4800 cagacagctt tagccgttcc caatccttag caatgcctta gctgggacgc atagctaata 4860 25 201237174 ctttagagag gatgacagat ccataaagag agtaaagata agagaaaatg tctaaagcat 4920 ctggaaaggt aaaaaaaaaa aatctatttt tgtacaaatg taattttatc cctcatgtat 4980 acttggatat ggcgggggga gggctgggac tgtttcgttt ctgcttctag agattgaggt 5040 gaaagcttcg tccgagaaac gccaggacag acgatggcag aggagagggc tcctgtgacg 5100 gcggcgaggc ttgggaggaa accgccgcaa tgggggtgtc ttccctcggg gcaggagggt 5160 gggcctgagg ctttcaaggg ttttcttccc tttcgagtaa tttttaaagc cttgctctgt 5220 tgtgtcctgt tgccggctct ggccttcctg tgactgactg tgaagtggct tctccgtacg 5280 attgtctctg aaacatcgtg gcctcaggtg ccagggtttg atggacagta gcattagaat 5340 tgtggaaaag gaacacgcaa agggagaagt gtgagaggag aaacaaaata tgagcgttta 5400 aaatacatcg ccattcagtt cgttaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaa 5449 <210> 92 <211> 2881 <212> DNA <213>人類 <400> 92 acagaagtgc tagaagccag tgctcgtgaa ctaaggagaa aaagaacaga caagggaaca 60 gcctggacat ggcatcagag atccacatga caggcccaat gtgcctcatt gagaacacta 120 atgggcgact gatggcgaat ccagaagctc tgaagatcct ttctgccatt acacagccta 180 tggtggtggt ggcaattgtg ggcctctacc gcacaggcaa atcctacctg atgaacaagc 240 tggctggaaa gaaaaagggc ttctctctgg gctccacggt gcagtctcac actaaaggaa 300 tctggatgtg gtgtgtgccc caccccaaga agccaggcca catcctagtt ctgctggaca 360 ccgagggtct gggagatgta gagaagggtg acaaccagaa tgactcctgg atcttcgccc 420 tggccgtcct cctgagcagc accttcgtgt acaatagcat aggaaccatc aaccagcagg 480 ctatggacca actgtactat gtgacagagc tgacacatag aatccgatca aaatcctcac 540 ctgatgagaa tgagaatgag gttgaggatt cagctgactt tgtgagcttc ttcccagact 600 ttgtgtggac actgagagat ttctccctgg acttggaagc agatggacaa cccctcacac 660 cagatgagta cctgacatac tccctgaagc tgaagaaagg taccagtcaa aaagatgaaa 720 cttttaacct gcccagactc tgtatccgga aattcttccc aaagaaaaaa tgctttgtct 780 ttgatcggcc cgttcaccgc aggaagcttg cccagctcga gaaactacaa gatgaagagc 840 26 201237174 tggaccccga atttgtgcaa caagtagcag acttctgttc ctacatcttt agtaattcca 900 aaactaaaac tctttcagga ggcatccagg tcaacgggcc tcgtctagag agcctggtgc 960 tgacctacgt caatgccatc agcagtgggg atctgccgtg catggagaac gcagtcctgg 1020 ccttggccca gatagagaac tcagctgcag tgcaaaaggc tattgcccac tatgaacagc 1080 agatgggcca gaaggtgcag ctgcccacag aaagcctcca ggagctgctg gacctgcaca 1140 gggacagtga gagagaggcc attgaagtct tcatcaggag ttccttcaaa gatgtggacc 1200 atctatttca aaaggagtta gcggcccagc tagaaaaaaa gcgggatgac ttttgtaaac 1260 agaatcagga agcatcatca gatcgttgct caLgqtttact tcaggtcatt ttcagtcctc 1320 tagaagaaga agtgaaggcg ggaatttatt cgaaaccagg gggctatcgt ctctttgttc 1380 agaagctaca agacctgaag aaaaagtact atgaggaacc gaggaagggg atacaggctg 1440 aagagattct gcagacatac ttgaaatcca aggagtctat gactgatgca attctccaga 1500 cagaccagac tctcacagaa aaagaaaagg agattgaagt ggaacgtgtg aaagctgagt 1560 ctgcacaggc ttcagcaaaa atgttgcagg aaatgcaaag aaagaatgag cagatgatgg 1620 aacagaagga gaggagttat caggaacact tgaaacaact gactgagaag atggagaacg 1680 acagggtcca gttgctgaaa gagcaagaga ggaccctcgc tcttaaactt caggaacagg 1740 agcaactact aaaagaggga tttcaaaaag aaagcagaat aatgaaaaat gagatacagg 1800 atctccagac gaaaatgaga cgacgaaagg catgtaccat aagctaaaga ccagagcctt 1860 cctgtcaccc ctaaccaagg cataattgaa acaattttag aatttggaac aagcgtcact 1920 acatttgata ataattagat cttgcatcat aacaccaaaa gtttataaag gcatgtggta 1980 caatgatcaa aatcatgttt tttcttaaaa aaaaaaaaaa gactgtaaat tgtgcaacaa 2040 agatgcattt acctctgtat caactcagga aatctcataa gctggtacca ctcaggagaa 2100 gtttattctt ccagatgacc agcagtagac aaatggatac tgagcagagt cttaggtaaa 2160 agtcttggga aatatttggg cattggtctg gccaagtcta caatgtccca atatcaagga 2220 caaccaccct agcttcttag tgaagacaat gtacagttat ccattagatc aagactacac 2280 ggtctatgag caataatgtg atttctggac attgcccatg tataatcctc actgatgatt 2340 tcaagctaaa gcaaaccacc ttatacagag atctagaatc tctttatgtt ctccagagga 2400 aggtggaaga aaccatgggc aggagtagga attgagtgat aaacaattgg gctaatgaag 2460 27 201237174 aaaacttctc ttattgttca gttcatccag attataactt caatgggaca ctttagacca 2520 ttagacaatt gacactggat taaacaaatt cacataatgc caaatacaca atgtatttat 2580 agcaacgtat aatttgcaaa gatggacttt aaaagatgct gtgtaactaa actgaaataa 2640 ttcaattact tattatttag aatgttaaag cttatgatag tcttttctaa ttcttaacac 2700 tcatacttga aatctttccg agtttcccca gaagagaata tgggattttt tttgacattt 2760 ttgacccatt taataatgct cttgtgttta cctagtatat gtagactttg tcttatgtgt . 2820 caaaagtcct aggaaagtgg ttgatgtttc ttatagcaat taaaaattat ttttgaactg 2880 a 2881 <210> 93 <211> 2684 <212> DNA <213> 人類 <400> 93 cccgagagga gtcggtggca gcggcggcgg cgggaccggc agcagcagca gcagcagcag 60 cagcaaccac tagcctcctg ccccgcggcg ctgccgcacg agccccacga gccgctcacc 120 ccgccgttct cagcgctgcc cgaccccgct ggcgcgccct cccgccgcca gtcccggcag 180 cgccctcagt tgtcctccga ctcgccctcg gccttccgcg ccagccgcag ccacagccgc 240 aacgccaccc gcagccacag ccacagccac agccccaggc atagccttcg gcacagcccc 300 ggctccggct cctgcggcag ctcctctggg caccgtccct gcgccgacat cctggaggtt 360 gggatgctct tgtccaaaat caactcgctt gcccacctgc gcgccgcgcc ctgcaacgac 420 ctgcacgcca ccaagctggc gcccggcaag gagaaggagc ccctggagtc gcagtaccag 480 gtgggcccgc tactgggcag cggcggcttc ggctcggtct actcaggcat ccgcgtctcc 540 gacaacttgc cggtggccat caaacacgtg gagaaggacc ggatttccga ctggggagag 600 ctgcctaatg gcactcgagt gcccatggaa gtggtcctgc tgaagaaggt gagctcgggt 660 ttctccggcg tcattaggct cctggactgg ttcgagaggc ccgacagttt cgtcctgatc 720 ctggagaggc ccgagccggt gcaagatctc ttcgacttca tcacggaaag gggagccctg 780 caagaggagc tggcccgcag cttcttctgg caggtgctgg aggccgtgcg gcactgccac 840 aactgcgggg tgctccaccg cgacatcaag gacgaaaaca tccttatcga cctcaatcgc 900 28 201237174 ggcgagctca agctcatcga cttcgggtcg ggggcgctgc tcaaggacac cgtctacacg 960 gacttcgatg ggacccgagt gtatagccct ccagagtgga tccgctacca tcgctaccat 1020 ggcaggtcgg cggcagtctg gtccctgggg atcctgctgt atgatatggt gtgtggagat 1080 attcctttcg agcatgacga agagatcatc aggggccagg ttttcttcag gcagagggtc 1140 tcttcagaat gtcagcatct cattagatgg tgcttggccc tgagaccatc agataggeca 1200 accttcgaag aaatccagaa ccatccatgg atgcaagatg ttctcctgcc ccaggaaact 1260 gctgagatcc acctccacag cctgtcgccg gggcccagca aatagcagcc tttctggcag 1320 gtcctcccct ctcttgtcag atgcccgagg gaggggaagc ttctgtctcc agcttcccga 1380 gtaccagtga cacgtctcgc caagcaggac agtgcttgat acaggaacaa catttacaac 1440 tcattccaga tcccaggccc ctggaggctg cctcccaaca gtggggaaga gtgactctcc 1500 aggggtccta ggcctcaact cctcccatag atactctctt cttctcatag gtgtccagca 1560 ttgctggact ctgaaatatc ccgggggtgg ggggtggggg tgggtcagaa ccctgccatg 1620 gaactgtttt cttcatcatg agttctgctg aatgccgcga tgggtcaggt aggggggaaa 1680 caggttggga tgggatagga ctagcaccat tttaagtccc tgtcacctct tccgactctt 1740 tctgagtgcc ttctgtgggg actccggctg tgctgggaga aatact.tgaa cttgcctctt 1800 ttacctgctg cttctccaaa aatctgcctg ggttttgttc cctatttttc tctcctgtcc 1860 tccctcaccc cctccttcat atgaaaggtg ccatggaaga ggctacaggg ccaaacgctg 1920 agccacctgc ccttttttct gcctccttta gtaaaactcc gagtgaactg gtcttccttt 1980 ttggttttta cttaactgtt tcaaagccaa gacctcacac acacaaaaaa tgcacaaaca 2040 atgcaatcaa cagaaaagct gtaaatgtgt gtacagttgg catggtagta tacaaaaaga 2100 ttgtagtgga tctaattttt aagaaatttt gcctttaagt tattttacct gtttttgttt 2160 cttgttttga aagatgcgca ttctaacctg gaggtcaatg ttatgtattt atttatttat 2220 ttatttggtt cccttcctat tccaagcttc catagctgct gccctagttt tctttcctcc 2280 tttcctcctc tgacttgggg accttttggg ggagggctgc gacgcttgct ctgtttgtgg 2340 ggtgacggga ctcaggcggg acagtgctgc agctccctgg cttctgtggg gcccctcacc 2400 tacttaccca ggtgggtccc ggctctgtgg gtgatgggga ggggcattgc tgactgtgta 2460 tataggataa ttatgaaaag cagttctgga tggtgtgcct tccagatcct ctctggggct 2520 29 201237174 gtgttttgag cagcaggtag cctgctggtt ttatctgagt gaaatactgt acaggggaat 2580 aaaagagatc ttattttttt ttttatactt ggcgtttttt gaataaaaac cttttgtctt 2640 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaa 2684 <210> 94 <211> 2709 <212> DNA <213> 人類 <400> 94 ccctgacccc gcgccgccga gcgccctgag gactcagcga agggtgggcg ccgccgaggc 60 ctcctgccgc tggcgggttt ccgcggagtg ccgcccggct ccgctctgcc gccggcgcgg 120 ctcatgggca gagtcggccg ggcgggccgg cattaaactg aagaaaagat gtccctgtac 180 gatgacctag gagtggagac cagtgactca aaaacagaag gctggtccaa aaacttcaaa 240 cttctgcagt ctcagcttca ggtgaagaag gcagctctca ctcaggcaaa gagccaaagg 300 acgaaacaaa gtacagtcct cgccccagtc attgacctga agcgaggtgg ctcctcagat 360 gaccggcaaa ttgtggacac tccaccgcat gtagcagctg ggctgaagga tcctgttccc 420 agtgggtttt ctgcagggga agttctgatt cccttagctg acgaatatga ccctatgttt 480 cctaatgatt atgagaaagt agtgaagcgc caaagagagg aacgacagag acagcgggag 540 ctggaaagac aaaaggaaat agaagaaagg gaaaaaaggc gtaaagacag acatgaagca 600 agtgggtttg caaggagacc agatccagat tctgatgaag atgaagatta tgagcgagag 660 aggaggaaaa gaagtatggg cggagctgcc attgccccac ccacttctct ggtagagaaa 720 gacaaagagt taccccgaga ttttccttat gaagaggact caagacctcg atcacagtct 780 tccaaagcag ccattcctcc cccagtgtac gaggaacaag acagaccgag atctccaacc 840 ggacctagca actccttcct cgctaacatg gggggcacgg tggcgcacaa gatcatgcag 900 aagtacggct tccgggaggg ccagggtctg gggaagcatg agcagggcct gagcactgcc 960 ttgtcagtgg agaagaccag caagcgtggc ggcaagatca tcgtgggcga cgccacagag 1020 aaagatgcat ccaagaagtc agattcaaat ccgctgactg aaatacttaa gtgtcctact 1080 aaagtggtct tactaaggaa catggttggt gcgggagagg tggatgaaga cttggaagtt 1140 gaaaccaagg aagaatgtga aaaatatggc aaagttggaa aatgtgtgat atttgaaatt 1200 cctggtgccc ctgatgatga agcagtacgg atatttttag aatttgagag agttgaatca 1260 30 1320 201237174 gcaattaaag cggttgttga cttgaatggg aggtattttg gtggacgggt ggtaaaagca tgtttctaca atttggacaa attcagggtc ttggatttgg cagaacaagt ttgattttaa gaactagagc acgagtcatc tccggtgatc cttaaatgaa ctgcaggctg agaaaagaag gaaaaaggtc acagcctcca tggctgttgc ataccaagac tcttggaagg acttctaaga tatatgttga ttgatccctt ttttattttg tggtttttta atatagtata aaaatccttt taaaaaaaca acaatctgtg tgcctctctg gttgtttctc ttttttatta ttactcctga gttgatgaca ttttttgtta gatttcatgg taattctcaa gtgcttcaat gatgcagcat ttcttgcact aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aactagaaag ttttgggaca tggggttata ttaaattatt ctttgttttt ctttttcttt taataaagcc tgcaagttac taaattgtag tttcataaat tctgtagtaa agtatcatct tggcagtgtg ccaaaggtga aaatgatgct ttctctaaca gagaaattct tagtgactcc agtcgtagaa aaacgtcttt acaacctgaa taagattgaa gaattgtgaa cataccatgg cctattggat gaatcatttg ccgtaggcta aatcagactg tagggtttgt gatggattta tggagtatgt gggtatagaa atcatgaatc tagcatttgt tttcagaga.t tcaagcatag tcttaagggt agatcagaaa tgacaaatga attcaaaacc tagcaggtgc attgtaaatg tgtgcccagt tatgttttgg aaatggcagt tccttggggt catgtttcta ctggcaaaat ttgcaatagt gttctattgt atgtaatttt aaaatttata agattatcca cgttggccaa gtaaactgta ctgccaatag aattctggaa ttgtgagaaa ttgtatcatt gaagttcagt aggatgtgtg gcttaaaaat ttatcaggac cacaaaaaag aaaacaaaaa tatttggtac tgaggttcat tgccagggca ggaggtattt ccagaaaata ctcatgcctg tgttctgttc cttgctttcc caaatactgc atgtgacttt cctaagcggc agctgaaaga ctcgagcccg tgctgtctcc tttggttatt atgacatgaa agtgtatcaa gaactcagca tttctttgca tccatggact tggtttggag acataaggaa tattctgacc ctttttaaaa aaggattttc tcatgttttt atttaacata aataaaagaa taacatttta tcttttgtgg tattatttta ttgaataaaa ttgagtttta tgataaaaaa aaaaaaaaa <210> 95 <211> 2150 1380 1440 1500 1560 1620 1680 1740 1800 1860 1920 1980 2040 2100 2160 2220 2280 2340 2400 2460 2520 2580 2640 2700 2709 31 201237174 <212> DNA <213> 人類 <400> 95 ctcgagccac gaaggccccg ctgtcctgtc tagcagatac ttgcacggtt tacagaaatt 60 cggtccctgg gtcgtgtcag gaaactggaa aaaaggtcat aagcatgaag cgcagttcag 120 tttccagcgg tggtgctggc cgcctctcca tgcaggagtt aagatcccag gatgtaaata 180 aacaaggcct ctatacccct caaaccaaag agaaaccaac ctttggaaag ttgagtataa 240 acaaaccgac atctgaaaga aaagtctcgc tatttggcaa aagaactagt ggacatggat 300 cccggaatag tcaacttggt atattttcca gttctgagaa aatcaaggac ccgagaccac 360 ttaatgacaa agcattcatt cagcagtgta ttcgacaact ctgtgagttt cttacagaaa 420 atggttatgc acataatgtg tccatgaaat ctctacaagc tccctctgtt aaagacttcc 480 tgaagatctt cacatttctt tatggcttcc tgtgcccctc atacgaactt cctgacacaa 540 agtttgaaga agaggttcca agaatcttta aagaccttgg gtatcctttt gcactatcca 600 aaagctccat gtacacagtg ggggctcctc atacatggcc tcacattgtg gcagccttag 660 tttggctaat agactgcatc aagatacata ctgccatgaa agaaagctca cctttatttg 720 atgatgggca gccttgggga gaagaaactg aagatggaat tatgcataat aagttgtttt 780 tggactacac cataaaatgc tatgagagtt ttatgagtgg tgccgacagc tttgatgaga 840 tgaatgcaga gctgcagtca aaactgaagg atttatttaa tgtggatgct tttaagctgg 900 aatcattaga agcaaaaaac agagcattga atgaacagat tgcaagattg gaacaagaaa 960 gagaaaaaga accgaatcgt ctagagtcgt tgagaaaact gaaggcttcc ttacaaggag 1020 atgttcaaaa gtatcaggca tacatgagca atttggagtc tcattcagcc attcttgacc 1080 agaaattaaa tggtctcaat gaggaaattg ctagagtaga actagaatgt gaaacaataa 1140 aacaggagaa cactcgacta cagaatatca ttgacaacca gaagtactca gttgcagaca 1200 ttgagcgaat aaatcatgaa agaaatgaat tgcagcagac tattaataaa ttaaccaagg 1260 acctggaagc tgaacaacag aagttgtgga atgaggagtt aaaatatgcc agaggcaaag 1320 aagcgattga aacacaatta gcagagtatc acaaattggc tagaaaatta aaacttattc 1380 ctaaaggtgc tgagaattcc aaaggttatg actttgaaat taagtttaat cccgaggctg 1440 gtgccaactg ccttgtcaaa tacagggctc aagtttatgt acctcttaag gaactcctga 1500 32 201237174 atgaaactga agaagaaatt aataaagccc.taaataaaaa aatgggtttg gaggatactt 1560 tagaacaatt gaatgcaatg ataacagaaa gcaagagaag tgtgagaact ctgaaagaag 1620 aagttcaaaa gctggatgat ctttaccaac aaaaaattaa ggaagcagag gaagaggatg 1680 aaaaatgtgc cagtgagctt gagtccttgg agaaacacaa gcacctgcta gaaagtactg 1740 ttaaccaggg gctcagtgaa gctatgaatg aattagatgc tgttcagcgg gaataccaac 1800 tagttgtgca aaccacgact gaagaaagac gaaaagtggg aaataacttg caacgtctgt I860 tagagatggt tgctacacat gttgggtctg tagagaaaca tcttgaggag cagattgcta 1920 aagttgatag agaatatgaa gaatgcatgt cagaagatct ctcggaaaat attaaagaga 1980 ttagagataa gtatgagaag aaagctactc taattaagtc ttctgaagaa tgaagataaa 2040 atgttgatca tgtatatata tccatagtga ataaaattgt ctcagtaaaa aaaaaaaaaa 2100 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2150 <210> 96 <211> 2977
<212> DNA <213> AM <400> 96 ccgaatgtga ccgcctcccg ctccctcacc cgccgcgggg aggaggagcg ggcgagaagc 60 tgccgccgaa cgacaggacg ttggggcggc ctggctccct caggtttaag aattgtttaa 120 gctgcatcaa tggagcacat acagggagct tggaagacga tcagcaatgg ttttggattc 180 aaagatgccg tgtttgatgg ctccagctgc atctctccta caatagttca gcagtttggc 240 tatcagcgcc gggcatcaga tgatggcaaa ctcacagatc cttctaagac aagcaacact 300 atccgtgttt tcttgccgaa caagcaaaga acagtggtca atgtgcgaaa tggaatgagc 360 ttgcatgact gccttatgaa agcactcaag gtgaggggcc tgcaaccaga gtgctgtgca 420 gtgttcagac ttctccacga acacaaaggt aaaaaagcac gcttagattg gaatactgat 480 gctgcgtctt tgattggaga agaacttcaa gtagatttcc tggatcatgt tcccctcaca 540 acacacaact ttgctcggaa gacgttcctg aagcttgcct tctgtgacat ctgtcagaaa 600 ttcctgctca atggatttcg atgtcagact tgtggctaca aatttcatga gcactgtagc 660 accaaagtac ctactatgtg tgtggactgg agtaacatca gacaactctt attgtttcca 720 aattccacta ttggtgatag tggagtccca gcactacctt ctttgactat gcgtcgtatg 780 33 840 201237174 cgagagtctg tttccaggat gcctgttagt tctcagcaca gatattctac acctcacgcc ttcaccttta acacctccag tccctcatct gaaggttccc tctcccagag gcagaggtcg acatccacac ctaatgtcca catggtcagc accacgctgc ctgtggacag caggatgatt gaggatgcaa ttcgaagtca cagcgaatca gcctcacctt cagccctgtc cagtagcccc aacaatctga gcccaacagg ctggtcacag ccgaaaaccc ccgtgccagc acaaagagag cgggcaccag tatctgggac ccaggagaaa aacaaaatta ggcctcgtgg acagagagat tcaagctatt attgggaaat agaagccagt gaagtgatgc tgtccactcg gattgggtca ggctcttttg gaactgttta taagggtaaa tggcacggag atgttgcagt aaagatccta aaggttgtcg acccaacccc agagcaattc caggccttca ggaatgaggt ggctgttc.tg cgcaaaacac ggcatgtgaa cattctgctt ttcatggggt acatgacaaa ggacaacctg gcaattgtga cccagtggtg cgagggcagc agcctctaca aacacctgca tgtccaggag accaagtttc agatgttcca gctaattgac attgcccggc agacggctca gggaatggac tatttgcatg caaagaacat catccataga gacatgaaat ccaacaatat atttctccat gaaggcttaa cagtgaaaat tggagatttt ggtttggcaa cagtaaagtc acgctggagt ggttctcagc aggttgaaca acctactggc tctgtcctct ggatggcccc agaggtgatc cgaatgcagg ataacaaccc attcagtttc cagtcggatg tctactccta tggcatcgta ttgtatgaac tgatgacggg ggagcttcct tattctcaca tcaacaaccg agatcagatc atcttcatgg tgggccgagg atatgcctcc ccagatctta gtaagctata taagaactgc cccaaagcaa tgaagaggct ggtagctgac tgtgtgaaga aagtaaagga agagaggcct ctttttcccc agatcctgtc ttccattgag ctgctccaac actctctacc gaagatcaac cggagcgctt ccgagccatc cttgcatcgg gcagcccaca ctgaggatat caatgcttgc acgctgacca cgtccccgag gctgcctgtc ttctagttga ctttgcacct gtcttcaggc tgccagggga ggaggagaag ccagcaggca ccacttttct gctccctttc tccagaggca gaacacatgt tttcagagaa gctctgctaa ggaccttcta gactgctcac agggccttaa cttcatgttg ccttcttttc tatccctttg ggccctggga gaaggaagcc atttgcagtg ctggtgtgtc ctgctccctc cccacattcc ccatgctcaa ggcccagcct tctgtagatg cgcaagtgga tgttgatggt agtacaaaaa gcaggggccc agccccagct gttggctaca 900 960 1020 1080 1140 1200 1260 1320 1380 1440 1500 1560 1620 1680 1740 1800 1860 1920 1980 2040 2100 2160 2220 2280 2340 2400 34 201237174 tgagtattta gaggaagtaa ggtagcaggc agtccagccc tgatgtggag acacatggga 2460 ttttggaaat cagcttctgg aggaatgcat gtcacaggcg ggactttctt cagagagtgg 2520 tgcagcgcca gacattttgc acataaggca ccaaacagcc caggactgcc gagactctgg 2580 ccgcccgaag gagcctgctt tggtactatg gaacttttct taggggacac gtcctccttt 2640 cacagcttct aaggtgtcca gtgcattggg atggttttcc aggcaaggca ctcggccaat 2700 ccgcatctca gccctctcag gagcagtctt ccatcatgct gaattttgtc ttccaggagc 2760 tgcccctatg gggcgggccg cagggccagc ctgtttctct aacaaacaaa caaacaaaca 2820 gccttgtttc tctagtcaca tcatgtgtat acaaggaagc caggaataca ggttttcttg 2880 atgatttggg ttttaatttt gtttttattg cacctgacaa aatacagtta tctgatggtc 2940 cctcaattat gttattttaa taaaataaat taaattt 2977 <210> 97 <211> 1212 <212> DNA <213> 人類 <400> 97 atggaccgat ctaaagaaaa ctgcatttca ggacctgtta aggctacagc tccagttgga 60 ggtccaaaac gtgttctcgt gactcagcaa tttccttgtc agaatccatt acctgtaaat 120 agtggccagg ctcagcgggt cttgtgtcct tcaaattctt cccagcgcat tcctttgcaa 180 gcacaaaagc ttgtctccag tcacaagccg gttcagaatc agaagcagaa gcaattgcag 240 gcaaccagtg tacctcatcc tgtctccagg ccactgaata acacccaaaa gagcaagcag 300 cccctgccat cggcacctga aaataatcct gaggaggaac tggcatcaaa acagaaaaat 360 gaagaatcaa aaaagaggca gtgggctttg gaagactttg aaattggtcg ccctctgggt 420 aaaggaaagt ttggtaatgt ttatttggca agagaaaagc aaagcaagtt tattctggct 480 cttaaagtgt tatttaaagc tcagctggag aaagccggag tggagcatca gctcagaaga 540 gaagtagaaa tacagtccca ccttcggcat cctaatattc ttagactgta tggttatttc 600 catgatgcta ccagagtcta cctaattctg gaatatgcac cacttggaac agtttataga 660 gaacttcaga aactttcaaa gtttgatgag cagagaactg ctacttatat aacagaattg 720 gcaaatgccc tgtcttactg ccattcgaag agagttattc atagagacat taagccagag 780 35 201237174 aacttacttc ttggatcagc tggagagctt aaaattgcag attttgggtg gtcagtacat 840 gctccatctt ccaggaggac cactctctgt ggcaccctgg actacctgcc ccctgaaatg 900 attgaaggtc ggatgcatga tgagaaggtg gatctctgga gccttggagt tctttgctat 960 gaatttttag ttgggaagcc tccttttgag gcaaacacat accaagagac ctacaaaaga 1020 atatcacggg ttgaattcac attccctgac tttgtaacag agggagccag ggacctcatt 1080 tcaagactgt tgaagcataa tcccagccag aggccaatgc tcagagaagt acttgaacac 1140 ccctggatca cagcaaattc atcaaaacca tcaaattgcc aaaacaaaga atcagctagc 1200 aaacagtctt ag 1212 <210> 98 <211> 2788 <212> DNA <213> 人類 <400> 98 ggcggcggta gcagccaggc ttggcccccg gcgtggagca gacgcggacc cctccttcct 60 ggcggcggcg gcgcgggctc agagcccggc aacgggcggg cgggcagaat gagtctgcag 120 gtcttaaacg acaaaaatgt cagcaatgaa aaaaatacag aaaattgcga cttcctgttt 180 tcgccaccag aagttaccgg aagatcgtct gttcttcgtg tgtcacagaa agaaaatgtg 240 ccacccaaga acctggccaa agctatgaag gtgacttttc agacacctct gcgggatcca 300 cagacgcaca ggattctaag tcctagcatg gccagcaaac ttgaggctcc tttcactcag 360 gatgacaccc ttggactgga aaactcacac ccggtctgga cacagaaaga gaaccaacag 420 ctcatcaagg aagtggatgc caaaactact catggaattc tacagaaacc agtggaggct 480 gacaccgacc tcctggggga tgcaagccca gcctttggga gtggcagctc cagcgagtct 540 ggcccaggtg ccctggctga cctggactgc tcaagctctt cccagagccc aggaagttct 600 gagaaccaaa tggtgtctcc aggaaaagtg tctggcagcc ctgagcaagc cgtggaggaa 660 aaccttagtt cctattcctt agacagaaga gtgacacccg cctctgagac cctagaagac 720 ccttgcagga cagagtccca gcacaaagcg gagactccgc acggagccga ggaagaatgc 780 aaagcggaga ctccgcacgg agccgaggag gaatgccggc acggtggggt ctgtgctccc 840 gcagcagtgg ccacttcgcc tcctggtgca atccctaagg aagcctgcgg aggagcaccc 900 ctgcagggtc tgcctggcga agccctgggc tgccctgcgg gtgtgggcac ccccgtgcca 960 36 201237174 gcagatggca ctcagaccct tacctgtgca cacacctctg ctcctgagag cacagcccca 1020 accaaccacc tggtggctgg cagggccatg accctgagtc ctcaggaaga agtggctgca 1080 ggccaaatgg ccagctcctc gaggagcgga cctgtaaaac tagaatttga tgtatctgat 1140 ggcgccacca gcaaaagggc acccccacca aggagactgg gagagaggtc cggcctcaag 1200 cctcccttga ggaaagcagc agtgaggcag caaaaggccc cgcaggaggt ggaggaggac 1260 gacggtagga gcggagcagg agaggacccc cccatgccag cttctcgggg ctcttaccac 1320 ctcgactggg acaaaatgga tgacccaaac ttcatcccgt tcggaggtga caccaagtct 1380 ggttgcagtg aggcccagcc cccagaaagc cctgagacca ggctgggcca gccagcggct 1440 gaacagttgc atgctgggcc tgccacggag gagccaggtc cctgtctgag ccagcagctg 1500 cattcagcct cagcggagga cacgcctgtg gtgcagttgg cagccgagac cccaacagca 1560 gagagcaagg agagagcctt gaactctgcc agcacctcgc ttcccacaag ctgtccaggc 1620 agtgagccag tgcccaccca tcagcagggg cagcctgcct tggagctgaa agaggagagc 1680 ttcagagacc ccgctgaggt tctaggcacg ggcgcggagg tggattacct ggagcagttt 1740 ggaacttcct cgtttaagga gtcggccttg aggaagcagt ccttatacct caagttcgac 1800 cccctcctga gggacagtcc tggtagacca gtgcccgtgg ccaccgagac cagcagcatg 1860 cacggtgcaa atgagactcc ctcaggacgt ccgcgggaag ccaagcttgt ggagttcgat 1920 ttcttgggag cactggacat tcctgtgcca ggcccacccc caggtgttcc cgcgcctggg 1980 ggcccacccc tgtccaccgg acctatagtg gacctgctcc agtacagcca gaaggacctg 2040 gatgcagtgg taaaggcgac acaggaggag aaccgggagc tgaggagcag gtgtgaggag 2100 ctccacggga agaacctgga actggggaag atcatggaca ggttcgaaga ggttgtgtac 2160 caggccatgg aggaagttca gaagcagaag gaactttcca aagctgaaat ccagaaagtt 2220 ctaaaagaaa aagaccaact taccacagat ctgaactcca tggagaagtc cttctccgac 2280 ctcttcaagc gttttgagaa acagaaagag gtgatcgagg gctaccgcaa gaacgaagag 2340 tcactgaaga agtgcgtgga ggattacctg gcaaggatca cccaggaggg ccagaggtac 2400 caagccctga aggcccacgc ggaggagaag ctgcagctgg caaacgagga gatcgcccag 2460 gtccggagca aggcccaggc ggaagcgttg gccctccagg ccagcctgag gaaggagcag 2520 atgcgcatcc agtcgctgga gaagacagtg gagcagaaga ctaaagagaa cgaggagctg 2580 37 201237174 accaggatct gcgacgacct catctccaag atggagaaga tctgacctcc acggagccgc 2640 tgtccccgcc cccctgctcc cgtctgtctg tcctgtctga ttctcttagg tgtcatgttc 2700 ttttttctgt cttgtcttca acttttttta aaactagatt gctttgaaaa catgactcaa 2760 taaaagtttc ctttcaattt aaaaaaaa 2788 0 12 3 1111 2 2 2 2 < < < < 99 2287
DNA 人類 <400> 99 cgcgccccgc gcagccccgg gcgccgcgcg tcctgcccgg cctgcggccc cagcccttgc 60 gccgctcgtc cgacccgcga tcgtccacca gaccgtgcct cccggccgcc cggccggccc 120 gcgtgcatgc ttcggtctgg gccagcctct gggccgtccg tccccactgg ccgggccatg 180 ccgagtcgcc gcgtcgccag accgccggct gcgccggagc tgggggcctt agggtccccc 240 gacctctcct cactctcgct cgccgtttcc aggagcacag atgaattgga gatcatcgac 300 gagtacatca aggagaacgg cttcggcctg gacgggggac agccgggccc gggcgagggg 360 ctgccacgcc tggtgtctcg cggggctgcg tccctgagca cggtcaccct gggccctgtg 420 gcgcccccag ccacgccgcc gccttggggc tgccccctgg gccgactagt gtccccagcg 480 ccgggcccgg gcccgcagcc gcacctggtc atcacggagc agcccaagca gcgcggcatg 540 cgcttccgct acgagtgcga gggccgctcg gccggcagca tccttgggga gagcagcacc 600 gaggccagca agacgctgcc cgccatcgag ctccgggatt gtggagggct gcgggaggtg 660 gaggtgactg cctgcctggt gtggaaggac tggcctcacc gagtccaccc ccacagcctc 720 gtggggaaag actgcaccga cggcatctgc agggtgcggc tccggcctca cgtcagcccc 780 cggcacagtt ttaacaacct gggcatccag tgtgtgagga agaaggagat tgaggctgcc 840 attgagcgga agattcaact gggcattgac ccctacaacg ctgggtccct gaagaaccat 900 caggaagtag acatgaatgt ggtgaggatc tgcttccagg cctcatatcg ggaccagcag 960 ggacagatgc gccggatgga tcctgtgctt tccgagcccg tctatgacaa gaaatccaca 1020 aacacatcag agctgcggat ttgccgaatt aacaaggaaa gcgggccgtg caccggtggc 1080 gaggagctct acttgctctg cgacaaggtg cagaaagagg acatatcagt ggtgttcagc 1140 38 1200 201237174 agggcctcct gggaaggtcg ggctgacttc tcccaggccg acgtgcaccg ccagattgcc attgtgttca agacgccgcc ctacgaggac ctggagattg tcgagcccgt gacagtcaac gtcttcctgc agcggctcac cgatggggtc tgcagcgagc cattgccttt cacgtacctg cctcgcgacc atgacagcta cggcgtggac aagaagcgga aacgggggat gcccgacgtc cttggggagc tgaacagctc tgacccccat ggcatcgaga gcaaacggcg gaagaaaaag ccggccatcc tggaccactt cctgcccaac cacggctcag gcccgttcct cccgccgtca gccctgctgc cagaccctga cttcttctct ggcaccgtgt ccctgcccgg cctggagccc cctggcgggc ctgacctcct ggacgatggc tttgcctacg accctacggc ccccacactc ttcaccatgc tggacctgct gcccccggca ccgccacacg ctagcgctgt tgtgtgcagc ggaggtgccg gggccgtggt tggggagacc cccggccctg aaccactgac actggactcg taccaggccc cgggccccgg ggatggaggc accgccagcc ttgtgggcag caacatgttc cccaatcatt accgcgaggc ggcctttggg ggcggcctcc tatccccggg gcctgaagcc acgtagcccc gcgatgccag aggaggggca ctgggtgggg agggaggtgg aggagccgtg caatcccaac caggatgtct agcaccccca tccccttggc ccttcctcat gcttctgaag tggacatatt cagccttggc gagaagctcc gttgcacggg tttccccttg agcccatttt acagatgagg aaactgagtc cggagaggaa aagggacatg gctcccgtgc actagcttgt tacagctgcc tctgtcccca catgtggggg caccttctcc agtaggattc ggaaaagatt gtacatatgg gaggaggggg cagattcctg gccctccctc cccagacttg aaggtggggg gtaggttggt tgttcagagt cttcccaata aagatgagtt tttgagcctc aaaaaaaaaa aaaaaaa <210> 100 <211> 2850 <212> DKA <213>人類 <400> 100 tcgcacttcc gtgtgccgcg gcgccggagc ccgaggcggc tgtagcccac atctcccgag cgacccccgg cgcccgcccg ccgcgcggag gcccgggcca cacctcactg gccgcttggc ccatcccagt cagcgccgcg ccgaaccccg tccgcgcgcg ccggggagcg gcgcccccgc cgctgccgcc gcgacccttg gcgcctgccc ctgcaacggg aggtctgcag ggaactggcc 1260 1320 1380 1440 1500 1560 1620 1680 1740 1800 I860 1920 1980 2040 2100 2160 2220 2280 2287 60 120 180 240 39 201237174 aggcaagggg gcaggcccgt ttctcctggt ggttggtgcg ttgtagcagc agcgggagcc 300 aggactaagg acaagcagga gctgggagcc ccagccccac tgcaggcccc accatggcgc 360 cgttcctgcg catcgccttc aactcctatg agctgggctc cctgcaggcc gaggacgagg 420 cgaaccagcc cttctgtgcc gtgaagatga aggaggcgct cagcacagag cgtgggaaaa 480 cactggtgca gaagaagccg accatgtatc ctgagtggaa gtcgacgttc gatgcccaca 540 tctatgaggg gcgcgtcatc cagattgtgc taatgcgggc agcagaggag ccagtgtctg 600 aggtgaccgt gggtgtgtcg gtgctggccg agcgctgcaa gaagaacaat ggcaaggctg 660 agttctggct ggacctgcag cctcaggcca aggtgttgat gtctgttcag tatttcctgg 720 aggacgtgga ttgcaaacag tctatgcgca gtgaggacga ggccaagttc ccaacgatga 780 accgccgcgg agccatcaaa caggccaaaa tccactacat caagaaccat gagtttatcg 840 ccaccttctt tgggcaaccc accttctgtt ctgtgtgcaa agactttgtc tggggcctca 900 acaagcaagg ctacaaatgc aggcaatgta acgctgccat ccacaagaaa tgcatcgaca 960 agatcatcgg cagatgcact ggcaccgcgg ccaacagccg ggacactata ttccagaaag 1020 aacgcttcaa catcgacatg ccgcaccgct tcaaggttca caactacatg agccccacct 1080 tctgtgacca ctgcggcagc ctgctctggg gactggtgaa gcagggatta aagtgtgaag 1140 actgcggcat gaatgtgcac cataaatgcc gggagaaggt ggccaacctc tgcggcatca 1200 accagaagct tttggctgag gccttgaacc aagtcaccca gagagcctcc cggagatcag 1260 actcagcctc ctcagagcct gttgggatat atcagggttt cgagaagaag accggagttg 1320 ctggggagga catgcaagac aacagtggga cctacggcaa gatctgggag ggcagcagca 1380 agtgcaacat caacaacttc atcttccaca aggtcctggg caaaggcagc ttcgggaagg 1440 tgctgcttgg agagctgaag ggcagaggag agtactttgc catcaaggcc ctcaagaagg 1500 atgtggtcct gatcgacgac gacgtggagt gcaccatggt tgagaagcgg gtgctgacac 1560 ttgccgcaga gaatcccttt ctcacccacc tcatctgcac cttccagacc aaggaccacc 1620 tgttctttgt gatggagttc ctcaacgggg gggacctgat gtaccacatc caggacaaag 1680 gccgctttga actctaccgt gccacgtttt atgccgctga gataatgtgt ggactgcagt 1740 ttctacacag caagggcatc atttacaggg acctcaaact ggacaatgtg ctgctggacc 1800 gggatggcca catcaagatt gccgactttg ggatgtgcaa agagaacata ttcggggaga 1860 40 201237174 gccgggccag caccttctgc ggcacccctg actatatcgc ccctgagatc ctacagggcc 1920 tgaagtacac attctctgtg gactggtggt ctttcggggt ccttctgtac gagatgctca 1980 ttggccagtc ccccttccat ggtgatgatg aggatgaact cttcgagtcc atccgtgtgg 2040 acacgccaca ttatccccgc tggatcacca aggagtccaa ggacatcctg gagaagctct 2100 ttgaaaggga accaaccaag aggctgggag tgaccggaaa catcaaaatc caccccttct 2160 tcaagaccat aaactggact ctgctggaaa agcggaggtt ggagccacct ttcaggccca 2220 aagtgaagtc acccagagac tacagtaact ttgaccagga gttcctgaac gagaaggcgc 2280 gcctctccta cagcgacaag aacctcatcg actccatgga ccagtctgca ttcgctggct 2340 tctcctttgt gaaccccaaa ttcgagcacc tcctggaaga ttgaggttcc tggacagatc 2400 aggctagccc tgccctccac ccacacctgc ccgctcccca cgataagcac cagtgggact 2460 gtggtgactt ctgctgctgg ccccgcccct gcccccagag cgtccttggc tgccgtctgg 2520 ccgggctctc atggtacttc ctctgtgaac tgtgtgtgaa tctgcttttc ctctgccttc 2580 ggagggaaat tgtaaatcct gtgtttcatt acttgaatgt agttatctat tgaaaatata 2640 tattatatac atagacatat atatatatat aataggctgt atatattgct cagtagagaa 2700 aaaccatggg ggactggtga tatgttgatc tttttcaaaa aaatatatat atgacaaaaa 2760 aaaaaaaaaa ggagcacaag ctgtttgaac caccaggttt atttgtgtgt ctaaataaac 2820 accaaatagt accaaaaaaa aaaaaaaaaa 2850 <210> 101 <211> 1584 <212> DNA <213> 人類 <400> 101 gttggttgga gcgtcgcgca gtcgggaggt ccgggaaagt ttctttggag gtccggcccg 60 gagcggccat gtcccacggc cccaagcagc ccggcgcggc cgccgcgccg gcgggcggca 120 aggctccggg ccagcatggg ggcttcgtgg tgactgtcaa gcaagagcgc ggcgagggtc 180 cacgcgcggg cgagaagggg tcccacgagg aggagccggt gaagaaacgc ggctggccca 240 agggcaagaa gcggaagaag attctgccga atgggcccaa ggcaccggtc acgggctacg 300 tgcgcttcct gaacgagcgg cgcgagcaga tccgcacgcg ccacccggat ctgccctttc 360 41 201237174 ccgagatcac caagatgctg ggcgccgagt ggagcaagct gcagccaacg gaaaagcagc 420 ggtacctgga tgaggccgag agagagaagc agcagtacat gaaggagctg cgggcgtacc 480 agcagtctga agcctataag atgtgcacgg agaagatcca ggagaagaag atcaagaaag 540 aagactcgag ctctgggctc atgaacactc tcctgaatgg acacaagggt ggggactgcg 600 atggcttctc caccttcgat gttcccatct tcactgaaga gttcttggac caaaacaaag 660 cgcgtgaggc ggagcttcgg cgcttgcgga agatgaatgt ggccttcgag gagcagaacg 720 cggtactgca gaggcacacg cagagcatga gcagcgcgcg cgagcgtctg gagcaggagc 780 tggcgctgga ggagcggagg acgctggcgc tgcagcagca gctccaggcc gtgcgccagg 840 cgctcaccgc cagcttcgcc tcactgccgg tgccgggcac gggcgaaacg cccacgctgg 900 gcactctgga cttctacatg gcccggcttc acggagccat cgagcgcgac cccgcccagc 960 acgagaagct catcgtccgc atcaaggaaa tcctggccca ggtcgccagc gagcacctgt 1020 gaggagtggg cgggcccacg atgcagagga gaagctgtgg gcgcggccct gccacacccc 1080 accccgtgga cgagaggctg ggggtccacc ctttggggcc tggtcccatc ctgcaccttg 1140 ggggctccag cccccctaaa attaaatttc tgcagcatcc ctttagcttt caatctcccc 1200 agccccctga acccggaaaa agcactcgct gcgcgataca cccagaagaa cctcacagcc 1260 gagggtgccc ctcctcggag gacagccacg cgctacactg gctctccggg ccacccccag 1320 gacacagggc agacgaaacc cacccccagc acacggcagg accccccaaa ttactcacta 1380 cggggggctg tgccataggc cacacaggaa gctgccttgt ggggacttac ctggggtgtc 1440 ccccgcatgc ctgtacccca gatgggtggg ggccggcttt gcccatcctg ctctcctcca 1500 gccgagggac cctggtgggg gtggctcctt ctcactgctg gatccggact ttttaaataa 1560 aaacaagtaa aatttgtgtt ttaa 1584 <210> 102 <211> 2383 <212> DNA <213>人類 <400> 102 gctgctgcga cagtccacta cctttttcga gagtgactcc cgttgtccca aggcttccca 60 gagcgaacct gtgcggctgc aggcaccggc gcgtcgagtt tccggcgtcc ggaaggaccg 120 agctcttctc gcggatccag tgttccgttt ccagccccca atctcagagc cgagccgaca 180 42 201237174 gagagcaggg aaccggcatg gccaaagccg cggcgatcgg catcgacctg ggcaccacct 240 actcctgcgt gggggtgttc caacacggca aggtggagat catcgccaac gaccagggca 300 accgcaccac ccccagctac gtggccttca cggacaccga gcggctcatc ggggatgcgg 360 ccaagaacca ggtggcgctg aacccgcaga acaccgtgtt tgacgcgaag cggctgatcg 420 gccgcaagtt cggcgacccg gtggtgcagt cggacatgaa gcactggcct ttccaggtga 480 tcaacgacgg agacaagccc aaggtgcagg tgagctacaa gggggacacc aaggcattct 540 accccgagga gatctcgtcc atggtgctga ccaagatgaa ggagatcgcc gaggcgtacc 600 tgggctaccc ggtgaccaac gcggtgatca ccgtgccggc ctacttcaac gactcgcagc 660 gccaggccac caaggatgcg ggtgtgatcg cggggctcaa cgtgctgcgg atcatcaacg 720 agcccacggc cgccgccatc gcctacggcc tggacagaac gggcaagggg gagcgcaacg 78.0 tgctcatctt tgacctgggc gggggcacct tcgacgtgtc catcctgacg atcgacgacg 840 gcatcttcga ggtgaaggcc acggccgggg acacccacct gggtggggag gactttgaca 900 acaggctggt gaaccacttc gtggaggagt tcaagagaaa acacaagaag gacatcagcc 960 agaacaagcg agccgtgagg cggctgcgca ccgcctgcga gagggccaag aggaccctgt 1020 cgtccagcac ccaggccagc ctggagatcg actccctgtt tgagggcatc gacttctaca 1080 cgtccatcac cagggcgagg ttcgaggagc tgtgctccga cctgttccga agcaccctgg 1140 agcccgtgga gaaggctctg cgcgacgcca agctggacaa ggcccagatt cacgacctgg 1200 tcctggtcgg gggctccacc cgcatcccca aggtgcagaa gctgctgcag gacttcttca 1260 acgggcgcga cctgaacaag agcatcaacc ccgacgaggc tgtggcctac ggggcggcgg 1320 tgcaggcggc catcctgatg ggggacaagt ccgagaacgt gcaggacctg ctgctgctgg 1380 acgtggctcc cctgtcgctg gggctggaga cggccggagg cgtgatgact gccctgatca 1440 agcgcaactc caccatcccc accaagcaga cgcagatctt caccacctac tccgacaacc 1500 aacccggggt gctgatccag gtgtacgagg gcgagagggc catgacgaaa gacaacaatc 1560 tgttggggcg cttcgagctg agcggcatcc ctccggcccc caggggcgtg ccccagatcg 1620 aggtgacctt cgacatcgat gccaacggca tcctgaacgt cacggccacg gacaagagca 1680 ccggcaaggc caacaagatc accatcacca acgacaaggg ccgcctgagc aaggaggaga 1740 tcgagcgcat ggtgcaggag gcggagaagt acaaagcgga ggacgaggtg cagcgcgaga 1800 s 43 201237174 gggtgtcagc caagaacgcc ctggagtcct acgccttcaa catgaagagc gccgtggagg 1860 atgaggggct caagggcaag atcagcgagg ccgacaagaa gaaggtgctg gacaagtgtc 1920 aagaggtcat ctcgtggctg gacgccaaca ccttggccga gaaggacgag tttgagcaca 1980 agaggaagga gctggagcag gtgtgtaacc ccatcatcag cggactgtac cagggtgccg 2040 gtggtcccgg gcctgggggc ttcggggctc agggtcccaa gggagggtct gggtcaggcc 2100 ccaccattga ggaggtagat taggggcctt tccaagattg ctgtttttgt tttggagctt 2160 caagactttg catttcctag tatttctgtt tgtcagttct caatttcctg tgtttgcaat 2220 gttgaaattt tttggtgaag tactgaactt gctttttttc cggtttctac atgcagagat 2280 gaatttatac tgccatctta cgactatttc ttctttttaa tacacttaac tcaggccatt 2340 ttttaagttg gttacttcaa agtaaataaa ctttaaaatt caa 2383 <210> 103 <211> 3283 <212> DNA <213> 人類 <400> 103 gcgtgtcggg cgcggaaggg ggaggcggcc cggggcgccc gcgagtgagg cgcggggcgg 60 cgaagggagc gcgggtggcg gcacttgctg ccgcggcctt ggatgggctg ggcccccctc 120 gccgctccgc ctcctccaca cgcgcggcgg ccgcggcgag ggggacgcgc cgcccggggc 180 ccggcacctt cgggaacccc ccggcccgga gcctgcggcc tgcgccgcct cggccgccgg 240 gagccccgtg gagcccccgc cgccgcgccg ccccgcggac cggacgctga gggcactcgg 300 ggcggggcgc gcgctcgggc agacgtttgc ggggaggggg gcgcctgccg ggccccggcg 360 accaccttgg gggtcgcggg ccggctcggg gggcgcccag tgcgggccct cgcgggcgcc 420 gggcagcgac cagccctgag cggagctgtt ggccgcggcg ggaggcctcc cggacgcccc 480 cagccccccg aacgctcgcc cgggccggcg ggagtcggcg ccccccggga ggtccgctcg 540 gtcgtccgcg gcggagcgtt tgctcctggg acaggcggtg ggaccggggc gtcgccggag 600 acgcccccag cgaagttggg ctctccaggt gtgggggtcc cggggggtag cgacgtcgcg 660 gacccggcct gtgggatggg cggcccggag aagactgcgc tcggccgtgt tcatacttgt 720 ccgtgggcct gaggtccccg gaggatgacc tagcactgaa aagccccggc cggcctcccc 780 44 201237174 agggtccccg aggacgaagt tgaccctgac cgggccgtct cccagttctg aggcccgggt 840 cccactggaa ctcgcgtctg agccgccgtc ccggaccccc ggtgcccgcc ggtccgcaga 900 ccctgcaccg ggcttggact cgcagccggg actgacgtgt agaacaatcg tttctgttgg 960 aagaagggtt tttcccttcc ttttggggtt tttgttgcct tttttttttc ttttttcttt 1020 gtaaaatttt ggagaaggga agtcggaaca caaggaagga ccgctcaccc gcggactcag 1080 ggctggcggc gggactccag gaccctgggt ccagcatgga ggtggtggac ccgcagcagc 1140 tgggcatgtt cacggagggc gagctgatgt cggtgggtat ggacacgttc atccaccgca 1200 tcgactccac cgaggtcatc taccagccgc gccgcaagcg ggccaagctc atcggcaagt 1260 acctgatggg ggacctgctg ggggaaggct cttacggcaa ggtgaaggag gtgctggact 1320 cggagacgct gtgcaggagg gccgtcaaga tcctcaagaa gaagaagttg cgaaggatcc 1380 ccaacgggga ggccaacgtg aagaaggaaa ttcaactact gaggaggtta cggcacaaaa 1440 atgtcatcca gctggtggat gtgttataca acgaagagaa gcagaaaatg tatatggtga 1500 tggagtactg cgtgtgtggc atgcaggaaa tgctggacag cgtgccggag aagcgtttcc 1560 cagtgtgcca ggcccacggg tacttctgtc agctgattga cggcctggag tacctgcata 1620 gccagggcat tgtgcacaag gacatcaagc cggggaacct gctgctcacc accggtggca 1680 ccctcaaaat ctccgacctg ggcgtggccg aggcactgca cccgttcgcg gcggacgaca 1740 cctgccggac cagccagggc tccccggctt tccagccgcc cgagattgcc aacggcctgg 1800 acaccttctc cggcttcaag gtggacatct ggtcggctgg ggtcaccctc tacaacatca 1860 ccacgggtct gtaccccttc gaaggggaca acatctacaa gttgtttgag aacatcggga 1920 aggggagcta cgccatcccg ggcgactgtg gccccccgct ctctgacctg ctgaaaggga 1980 tgcttgagta cgaaccggcc aagaggttct ccatccggca gatccggcag cacagctggt 2040 tccggaagaa acatcctccg gctgaagcac cagtgcccat cccaccgagc ccagacacca 2100 aggaccggtg gcgcagcatg actgtggtgc cgtacttgga ggacctgcac ggcgcggacg 2160 aggacgagga cctcttcgac atcgaggatg acatcatcta cactcaggac ttcacggtgc 2220 ccggacaggt cccagaagag gaggccagtc acaatggaca gcgccggggc ctccccaagg 2280 ccgtgtgtat gaacggcaca gaggcggcgc agctgagcac caaatccagg gcggagggcc 2340 gggcccccaa ccctgcccgc aaggcctgct ccgccagcag caagatccgc cggctgtcgg 2400 45 201237174 cctgcaagca gcagtgaggc tggccgcctg cagcccgtgt ccaggagccc cgccaggtgc 2460 ccgcgccagg ccctcagtct tcctgccggt tccgcccgcc ctcccggaga ggtggccgcc 2520 atgcttctgt gccgaccacg ccccaggacc tccggagcgc cctgcagggc cgggcagggg 2580 gacagcaggg accgggcgca gccctccccc ctcggccgcc cggcagtgca cgcggcttgt 2640 tgacttcgca gccccgggcg gagccttccc gggcgggcgt gggaggaggg aggcggcctc 2700 catgcacttt atgtggagac tactggcccc gcccgtggcc tcgtgctccg cagggcgccc 2760 agcgccgtcc ggcggccccg ccgcagacca gctggcgggt gtggagacca ggctcctgac 2820 cccgccatgc atgcagcgcc acctggaagc cgcgcggccg ctttggtttt ttgtttggtt 2880 ggttccattt tctttttttc tttttttttt taagaaaaaa taaaaggtgg atttgagctg 2940 tggctgtgag gggtgtttgg gagctgctgg gtggcagggg ggctgtgggg tcgggctcac 3000 gtcgcggccg cctttgcgct ctcgggtcac cctgctttgg cggcccggcc ggagggcagg 3060 accctcacct ctcccccaag gccactgcgc tcttgggacc ccagagaaaa cccggagcaa 3120 gcaggagtgt gcggtcaata tttatatcat ccagaaaaga aaaacacgag aaacgccatc 3180 gcgggatggt gcagacgcgg cggggactcg gagggtgccg tgcgggcgag gccgcccaaa 3240 tttggcaata aataaagctt gggaagcttg gacctgaaaa aaa 3283 <210> 104 <211> 2030 <212> DNA <213>人類 <400> 104 tggctggcaa tggccttgct gacctcgagc cgggcccacg tggggacctt tggagcacag 60 cctacgatcc tggtgcaagg ccggtggatg cagaggccag tccatatacc acccaggcct 120 gcgaggagcg tggtccccac ccatccagcc catatgtgca agtgcccttg acagagaggc 180 tggtcatatc catggtgacc atttatgggc cacaacaggt ccccatctgc gcagtgaacc 240 ctgtgctgag caccttgcag acgtgatctt gcttcgtcct gcagcactgt gcggggcagg 300 aaaatccaag aggaagaagg atctacggat atcctgcatg tccaagccac ccgcacccaa 360 ccccacaccc ccccggaacc tggactcccg gaccttcatc accattggag acagaaactt 420 tgaggtggag gctgatgact tggtgaccat ctcagaactg ggccgtggag cctatggggt 480 ggtagagaag gtgcggcacg cccagagcgg caccatcatg gccgtgaagc ggatccgggc 540 46 201237174 caccgtgaac tcacaggagc agaagcggct gctcatggac ctggacatca acatgcgcac 600 ggtcgactgt ttctacactg tcaccttcta cggggcacta ttcagagagg gagacgtgtg 660 gatctgcatg gagctcatgg acacatcctt ggacaagttc taccggaagg tgctggataa 720 aaacatgaca attccagagg acatccttgg ggagattgct gtgtctatcg tgcgggccct 780 ggagcatctg cacagcaagc tgtcggtgat ccacagagat gtgaagccct ccaatgtcct 840 tatcaacaag gagggccatg tgaagatgtg tgactttggc atcagtggct acttggtgga 900 ctctgtggcc aagacgatgg atgccggctg caagccctac atggcccctg agaggatcaa 960 cccagagctg aaccagaagg gctacaatgt caagtccgac gtctggagcc tgggcatcac 1020 catgattgag atggccatcc tgcggttccc ttacgagtcc tgggggaccc cgttccagca 1080 gctgaagcag gtggtggagg agccgtcccc ccagctccca gccgaccgtt tctcccccga 1140 gtttgtggac ttcactgctc agtgcctgag gaagaacccc gcagagcgta tgagctacct 1200 ggagctgatg gagcacccct tcttcacctt gcacaaaacc aagaagacgg acattgctgc 1260 cttcgtgaag aagatcctgg gagaagactc ataggggctg ggcctcggac cccactccgg 1320 ccctccagag ccccacagcc ccatctgcgg gggcagtgct cacccacacc ataagctact 1380 gccatcctgg cccagggcat ctgggaggaa ccgagggggc tgctcccacc tggctctgtg 1440 gcgagccatt tgtcccaagt gccaaagaag cagaccattg gggctcccag ccaggccctt 1500 gtcggcccca ccagtgcctc tccctgctgc tcctaggacc cgtctccagc tgctgagatc 1560 ctggactgag ggggcctgga tgccccctgt ggatgctgct gcccctgcac agcaggctgc 1620 cagtgcctgg gtggatgggc caccgccttg cccagcctgg atgccatcca agttgtatat 1680 ttttttaatc tctcgactga atggactttg cacactttgg cccagggtgg ccacacctct 1740 atcccggctt tggtgcgggg tacacaagag gggatgagtt gtgtgaatac cccaagactc 1800 ccatgaggga gatgccatga gccgcccaag gccttcccct ggcactggca aacagggcct 1860 ctgcggagca cactggctca cccagtcctg cccgccaccg ttatcggtgt cattcacctt 1920 tcgtgttttt tttaatttat cctctgttga ttttttcttt tgctttatgg gtttggcttg 1980 tttttcttgc atggtttgga gctgatcgct tctcccccac cccctagggg 2030 <210> 105 <211> 3583
Si 47 201237174 <212> DNA <213>人類 <400> 105 aaaggcctgc agcaggacga ggacctgagc caggaatgca ggatggcggc ggtgaagaag 60 gaagggggtg ctctgagtga agccatgtcc ctggagggag atgaatggga actgagtaaa 120 gaaaatgtac aacctttaag gcaagggcgg atcatgtcca cgcttcaggg agcactggca 180 caagaatctg cctgtaacaa tactcttcag cagcagaaac gggcatttga atatgaaatt 240 cgattttaca ctggaaatga ccctctggat gtttgggata ggtatatcag ctggacagag 300 cagaactatc ctcaaggtgg gaaagagagt aatatgtcaa cgttattaga aagagctgta 360 gaagcactac aaggagaaaa acgatattat agtgatcctc gatttctcaa tctctggctt 420 aaattagggc gtttatgcaa tgagcctttg gatatgtaca gttacttgca caaccaaggg 480 attggtgttt cacttgctca gttctatatc tcatgggcag aagaatatga agctagagaa 540 aactttagga aagcagatgc gatatttcag gaagggattc aacagaaggc tgaaccacta 600 gaaagactac agtcccagca ccgacaattc caagctcgag tgtctcggca aactctgttg 660 gcacttgaga aagaagaaga ggaggaagtt tttgagtctt ctgtaccaca acgaagcaca 720 ctagctgaac taaagagcaa agggaaaaag acagcaagag ctccaatcat ccgtgtagga 780 ggtgctctca aggctccaag ccagaacaga ggactccaaa atccatttcc tcaacagatg 840 caaaataata gtag.aattac tgtttttgat gaaaatgctg atgaggcttc tacagcagag 900 ttgtctaagc ctacagtcca gccatggata gcacccccca tgcccagggc caaagagaat 960 gagctgcaag caggcccttg gaacacaggc aggtccttgg aacacaggcc tcgtggcaat 1020 acagcttcac tgatagctgt acccgctgtg cttcccagtt tcactccata tgtggaagag 1080 actgcacaac agccagttat gacaccatgt aaaattgaac ctagtataaa ccacatccta 1140 agcaccagaa agcctggaaa ggaagaagga gatcctctac aaagggttca gagccatcag 1200 caagcgtctg aggagaagaa agagaagatg atgtattgta aggagaagat ttatgcagga 1260 gtaggggaat tctcctttga agaaattcgg gctgaagttt tccggaagaa attaaaagag 1320 caaagggaag ccgagctatt gaccagtgca gagaagagag cagaaatgca gaaacagatt 1380 gaagagatgg agaagaagct aaaagaaatc caaactactc agcaagaaag aacaggtgat 1440 cagcaagaag agacgatgcc tacaaaggag acaactaaac tgcaaattgc ttccgagtct 1500 48 201237174 cagaaaatac caggaatgac tctatccagt tctgtttgtc aagtaaactg ttgtgccaga gaaacttcac ttgcggagaa catttggcag gaacaacctc attctaaagg tcccagtgta cctttctcca tttttgatga gtttcttctt tcagaaaaga agaataaaag tcctcctgca gatcccccac gagttttagc tcaacgaaga ccccttgcag ttctcaaaac ctcagaaagc atcacctcaa atgaagatgt gtctccagat gtttgtgatg aatttacagg aattgaaccc ttgagcgagg atgccattat cacaggcttc agaaatgtaa caatttgtcc taacccagaa gacacttgtg actttgccag agcagctcgt tttgtatcca ctccttttca tgagataatg tccttgaagg atctcccttc tgatcctgag agactgttac cggaagaaga tctagatgta aagacctctg aggaccagca gacagcttgt ggcactatct acagtcagac tctcagcatc aagaagctga gcccaattat tgaagacagt cgtgaagcca cacactcctc tggcttctct ggttcttctg cctcggttgc aagcacctcc tccatcaaat gtcttcaaat tcctgagaaa ctagaactta ctaatgagac ttcagaaaac cctactcagt caccatggtg ttcacagtat cgcagacagc tactgaagtc cctaccagag ttaagtgcct ctgcagagtt gtgtatagaa gacagaccaa tgcctaagtt ggaaattgag aaggaaattg aattaggtaa tgaggattac tgcattaaac gagaatacct aatatgtgaa gattacaagt tattctgggt ggcgccaaga aactctgcag aattaacagt aataaaggta tcttctcaac ctgtcccatg ggacttttat atcaacctca agttaaagga acgtttaaat gaagattttg atcatttttg cagctgttat caatatcaag atggctgtat tgtttggcac caatatataa actgcttcac ccttcaggat cttctccaac acagtgaata tattacccat gaaataacag tgttgattat ttataacctt ttgacaatag tggagatgct acacaaagca gaaatagtcc atggtgactt gagtccaagg tgtctgattc tcagaaacag aatccacgat ccctatgatt gtaacaagaa caatcaagct ttgaagatag tggacttttc ctacagtgtt gaccttaggg tgcagctgga tgtttttacc ctcagcggct ttcggactgt acagatcctg gaaggacaaa agatcctggc taactgttct tctccctacc aggtagacct gtttggtata gcagatttag cacatttact attgttcaag gaacacctac aggtcttctg ggatgggtcc ttctggaaac ttagccaaaa tatttctgag ctaaaagatg gtgaattgtg gaataaattc tttgtgcgga ttctgaatgc caatgatgag gccacagtgt ctgttcttgg ggagcttgca gcagaaatga atggggtttt tgacactaca 1560 1620 1680 1740 1800 1860 1920 1980 2040 2100 2160 2220 2280 2340 2400 2460 2520 2580 2640 2700 2760 2820 2880 2940 3000 3060 3120 s 49 201237174 ttccaaagtc acctgaacaa agccttatgg aaggtaggga agttaactag tcctggggct 3180 ttgctctttc agtgagctag gcaatcaagt ctcacagatt gctgcctcag agcaatggtt 3240 gtattgtgga acactgaaac tgtatgtgct gtaatttaat ttaggacaca tttagatgca 3300 ctaccattgc tgttctactt tttggtacag gtatattttg acgtcactga tattttttat 3360 acagtgatat acttactcat ggccttgtct aacttttgtg aagaactatt ttattctaaa 3420 cagactcatt acaaatggtt accttgttat ttaacccatt tgtctctact tttccctgta 3480 cttttcccat ttgtaatttg taaaatgttc tcttatgatc accatgtatt ttgtaaataa 3540 taaaatagta tctgttaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaa 3583 <210> 106 <211> 1379 <212> DNA <213> 人類 <400> 106 ctgttggagc cgctgtggtt gctgtccgcg gagtggaagc gcgtgctttt gtttgtgtcc 60 ctggccatgg cgctgcagct ctcccgggag cagggaatca ccctgcgcgg gagcgccgaa 120 atcgtggccg agttcttctc attcggcatc aacagcattt tatatcagcg tggcatatat 180 ccatctgaaa cctttactcg agtgcagaaa tacggactca ccttgcttgt aactactgat 240 cttgagctca taaaatacct aaataatgtg gtggaacaac tgaaagattg gttatacaag 300 tgttcagttc agaaactggt tgtagttatc tcaaatattg aaagtggtga ggtcctggaa 360 agatggcagt ttgatattga gtgtgacaag actgcaaaag atgacagtgc acccagagaa 420 aagtctcaga aagctatcca ggatgaaatc cgttcagtga tcagacagat cacagctacg 480 gtgacatttc tgccactgtt ggaagtttct tgttcatttg atctgctgat ttatacagac 540 aaagatttgg ttgtacctga aaaatgggaa gagtcgggac cacagtttat taccaattct 600 gaggaagtcc gccttcgttc atttactact acaatccaca aagtaaatag catggtggcc 660 tacaaaattc ctgtcaatga ctgaggatga catgaggaaa ataatgtaat tgtaattttg 720 aaatgtggtt ttcctgaaat caagtcatct atagttgata tgttttattt cattggttaa 780 tttttacatg gagaaaacca aaatgatact tactgaactg tgtgtaattg ttcctttatt 840 tttttggtac ctatttgact taccatggag ttaacatcat gaatttattg cacattgttc 900 aaaaggaacc aggaggtttt tttgtcaaca ttgtgatgta tattcctttg aagatagtaa 960 50 201237174 ctgtagatgg aaaaacttgt gctataaagc tagatgcttt cctaaatcag atgttttggt 1020 caagtagttt gactcagtat aggtagggag atatttaagt ataaaataca acaaaggaag 1080 tctaaatatt cagaatcttt gttaaggtcc tgaaagtaac tcataatcta taaacaatga 1140 aatattgctg tatagctcct tttgaccttc atttcatgta tagttttccc tattgaatca 1200 gtttccaatt atttgacttt aatttatgta acttgaacct atgaagcaat ggatatttgt 1260 actgtttaat gttctgtgat acagaactct taaaaatgtt ttttcatgtg ttttataaaa 1320 tcaagtttta agtgaaagtg aggaaataaa gttaagtttg ttttaaattt gtcttaaaa 1379 <210> 107 <211> 2984 <212> DNA <213> 人類 <400> 107 ggaaattcaa acgtgtttgc ggaaaggagt ttgggttcca tcttttcatt tccccagcgc 60 agctttctgt agaaatggaa tccgaggatt taagtggcag agaattgaca attgattcca 120 taatgaacaa agtgagagac attaaaaata agtttaaaaa tgaagacctt actgatgaac 180 taagcttgaa taaaatttct gctgatacta cagataactc gggaactgtt aaccaaatta 240 tgatgatggc aaacaaccca gaggactggt tgagtttgtt gctcaaacta gagaaaaaca 300 gtgttccgct aagtgatgct cttttaaata aattgattgg tcgttacagt caagcaattg 360 aagcgcttcc cccagataaa tatggccaaa atgagagttt tgctagaatt caagtgagat 420 ttgctgaatt aaaagctatt caagagccag atgatgcacg tgactacttt caaatggcca 480 gagcaaactg caagaaattt gcttttgttc atatatcttt tgcacaattt gaactgtcac 540 aaggtaatgt caaaaaaagt aaacaacttc ttcaaaaagc tgtagaacgt ggagcagtac 600 cactagaaat gctggaaatt gccctgcgga atttaaacct ccaaaaaaag cagctgcttt 660 cagaggagga aaagaagaat ttatcagcat ctacggtatt aactgcccaa gaatcatttt 720 ccggttcact tgggcattta cagaatagga acaacagttg tgattccaga ggacagacta 780 ctaaagccag gtttttatat ggagagaaca tgccaccaca agatgcagaa ataggttacc 840 ggaattcatt gagacaaact aacaaaacta aacagtcatg cccatttgga agagtcccag 900 ttaaccttct aaatagccca gattgtgatg tgaagacaga tgattcagtt gtaccttgtt 960 51 201237174 ttatgaaaag acaaacctct agatcagaat gccgagattt ggttgtgcct ggatctaaac 1020 caagtggaaa tgattcctgt gaattaagaa atttaaagtc tgttcaaaat agtcatttca 1080 aggaacctct ggtgtcagat gaaaagagtt ctgaacttat tattactgat tcaataaccc 1140 tgaagaataa aacggaatca agtcttctag ctaaattaga agaaactaaa gagtatcaag 1200 aaccagaggt tccagagagt aaccagaaac agtggcaatc taagagaaag tcagagtgta 1260 ttaaccagaa tcctgctgca tcttcaaatc actggcagat tccggagtta gcccgaaaag 1320 ttaatacaga gcagaaacat accacttttg agcaacctgt cttttcagtt tcaaaacagt 1380 caccaccaat atcaacatct aaatggtttg acccaaaatc tatttgtaag acaccaagca 1440 gcaatacctt ggatgattac atgagctgtt ttagaactcc agttgtaaag aatgactttc 1500 cacctgcttg tcagttgtca acaccttatg gccaacctgc ctgtttccag cagcaacagc 1560 atcaaatact tgccactcca cttcaaaatt tacaggtttt agcatcttct tcagcaaatg 1620 aatgcatttc ggttaaagga agaatttatt ccattttaaa gcagatagga agtggaggtt 1680 caagcaaggt atttcaggtg ttaaatgaaa agaaacagat atatgctata aaatatgtga 1740 acttagaaga agcagataac caaactcttg atagttaccg gaacgaaata gcttatttga 1800 ataaactaca acaacacagt gataagatca tccgacttta tgattatgaa atcacggacc 1860 agtacatcta catggtaatg gagtgtggaa atattgatct taatagttgg cttaaaaaga 1920 aaaaatccat tgatccatgg gaacgcaaga gttactggaa aaatatgtta gaggcagttc 1980 acacaatcca tcaacatggc attgttcaca gtgatcttaa accagctaac tttctgatag 2040 ttgatggaat gctaaagcta attgattttg ggattgcaaa ccaaatgcaa ccagatacaa 2100 caagtgttgt taaagattct caggttggca cagttaatta tatgccacca gaagcaatca 2160 aagatatgtc ttcctccaga gagaatggga aatctaagtc aaagataagc cccaaaagtg 2220 atgtttggtc cttaggatgt attttgtact atatgactta cgggaaaaca ccatttcagc 2280 agataattaa tcagatttct aaattacatg ccataattga tcctaatcat gaaattgaat 2340 ttcccgatat tccagagaaa gatcttcaag atgtgttaaa gtgttgttta aaaagggacc 2400 caaaacagag gatatccatt cctgagctcc tggctcatcc ctatgttcaa attcaaactc 2460 atccagttaa ccaaatggcc aagggaacca ctgaagaaat gaaatatgtt ctgggccaac 2520 ttgttggtct gaattctcct aactccattt tgaaagctgc taaaacttta tatgaacact 2580 52 201237174 atagtggtgg tgaaagtcat aattcttcat cctccaagac ttttgaaaaa aaaaggggaa 2640 aaaaatgatt tgcagttatt cgtaatgtca aataccacct ataaaatata ttggactgtt 2700 atactcttga atccctgtgg aaatctacat ttgaagacaa catcactctg aagtgttatc 2760 agcaaaaaaa attcagtaga ttatctttaa aagaaaactg taaaaatagc aaccacttat 2820 ggtactgtat atattgtaga cttgttttct ctgttttatg ctcttgtgta atctacttga 2880 catcatttta ctcttggaat agtgggtgga tagcaagtat attctaaaaa actttgtaaa 2940 taaagttttg tggctaaaat gacactaaaa aaaaaaaaaa aaaa 2984 <210> 108 <211> 2166 <212> DNA <213>人類 <400> 108 gggggtcgct gtgcctgtcc ccgtgtgatc cgaaaagtgc tggcaaaatg cggctgctgc 60 ttcgcccggg ggggtaaggg ggtgccctgg tgaaattttc tatcctggcc aactcaaatg 120 aggatggcaa gagagtgagc ccttggagag agaggctgag catcatgaag agaagaccct 180 gggagttccc tggggaccct gagtctggag ctggggcaag gccccccagg gcccgtcagt 240 ggcctgagga gatggttgga tcattccaaa cattgtctca gtgtggaaac tgaggcagac 300 agtggtcagg caggaccata tgagaactgg atgttggagc cagctctagc cacaggagag 360 gagctgccgg aactgacctt gctgaccaca ctgttggagg gccctggaga taagacgcag 420 ccacctgaag aggagacttt gtcccaagcc cctgagagtg aggaggaaca gaagaagaag 480 gctctggaaa ggagtatgta tgtcctgagt gaactggtag aaacagagaa aatgtacgtg 540 gacgacttgg ggcagattgt ggagggttat atggccacca tggctgctca gggggtcccc 600 gagagtcttc gaggccgtga caggattgtg tttgggaata tccagcaaat ctatgagtgg 660 caccgagact atttcttgca agagctacaa cggtgtctga aagatcctga ttggctggct 720 cagctattca tcaaacacga gcgccggctg catatgtatg tggtgtactg tcagaataag 780 cccaagtcag agcatgtggt gtcagagttt ggggacagct actttgagga gctccggcag 840 cagctggggc accgcctgca gctgaacgac ctcctcatca aacctgtgca gcggatcatg 900 aaataccagc tgctgctcaa ggattttctc aagtattaca atagagctgg gatggatact 960 gcagacctag agcaagctgt ggaggtcatg tgctttgtgc ccaagcgctg caacgatatg 1020 53 1080 201237174 atgacgctgg ggagattgcg gggatttgag ggcaaactga ctgctcaggg gaagctcttg ggccaggaca ctttctgggt caccgagcct gaggctggag ggctgctatc ttcccgaggt cgagagaggc gcgtcttcct ctttgagcaa atcatcatct tcagtgaagc cctgggagga ggagtgagag gtggaacaca gcctggatat gtatacaaga acagcattaa ggtgagctgc ctgggactgg aggggaacct ccaaggtgac ccttgccgct ttgcactgac ctccagaggg ccagagggtg ggatccagcg ctatgtcctg caggctgcag accctgctat cagtcaggcc tggatcaagc atgtggctca gatcttggag agccaacggg acttcctcaa cgcattgcag tcacccattg agtaccagag acgggagagc cagaccaaca gcctggggcg gccaagaggg cctggagtgg ggagccctgg aagaattcgg cttggagatc aggcccaggg cagcacacac acacccatca atggctctct cccctctctg ctgctgtcac ccaaagggga ggtggccaga gccctcttgc cactggataa acaggccctt ggtgacatcc cccaggctcc ccatgactct cctccagtct ctccaactcc aaaaacccct ccctgccaag ccagacttgc caagctggat gaagatgagc tgtaactggt gaaaaccatg ggggtggtgc tgactcagcc gcctattccc caaggagctt cagggcagtc cttctggcac tgctccagaa ttcctccttc ttggtgtgtc tggagggtgg gcaaggctgg gagggatatc aacttggagg agaacaccta gacccaagga cttttttctg cccaaggaac acagtttcct tcagctccca tccctatgca tgcatcatgg tccccccaaa aggaggatat gtgggtgggt gggagggctg gggcaggggc cagatagaaa ttattggttt tgttttttaa ttttgttttt cctgttttct gagaataaag gttttgttat atcaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaa <210> 109 <211> 3486 <212> DNA <213>人類 <400> 109 gagccgactg cggctgcgcg gggtattcga atcggcggcg gcttctagtt tgcggttcag gtttggccgc tgccggccag cgtcctctgg ccatggacac cccggaaaat gtccttcaga tgcttgaagc ccacatgcag agctacaagg gcaatgaccc tcttggtgaa tgggaaagat 1140 1200 1260 1320 1380 1440 1500 1560 1620 1680 1740 1800 1860 1920 1980 2040 2100 2160 2166 60 120 54 180 201237174 acatacagtg ggtagaagag aattttcctg agaataaaga atacttgata actttactag 240 aacatttaat gaaggaattt ttagataaga agaaatacca caatgaccca agattcatca 300 gttattgttt aaaatttgct gagtacaaca gtgacctcca tcaatttttt gagtttctgt 360 acaaccatgg gattggaacc ctgtcatccc ctctgtacat tgcctgggcg gggcatctgg 420 aagcccaagg agagctgcag catgccagtg ctgtccttca gagaggaatt caaaaccagg 480 ctgaacccag agagttcctg caacaacaat acaggttatt tcagacacgc ctcactgaaa 540 cccatttgcc agctcaagct agaacctcag aacctctgca taatgttcag gttttaaatc 600 aaatgataac atcaaaatca aatccaggaa ataacatggc ctgcatttct aagaatcagg 660 gttcagagct ttctggagtg atatcttcag cttgtgataa agagtcaaat atggaacgaa 720 gagtgatcac gatttctaaa tcagaatatt ctgtgcactc atctttggca tccaaagttg 780 atgttgagca ggttgttatg tattgcaagg agaagcttat tcgtggggaa tcagaatttt 840 cctttgaaga attgagagcc cagaaataca atcaacggag aaagcatgag caatgggtaa 900 atgaagacag acattatatg aaaaggaaag aagcaaatgc ttttgaagaa cagctattaa 960 aacagaaaat ggatgaactt cataagaagt tgcatcaggt ggtggagaca tcccatgagg 1020 atctgcccgc ttcccaggaa aggtccgagg ttaatccagc acgtatgggg ccaagtgtag 1080 gctcccagca ggaactgaga gcgccatgtc ttccagtaac ctatcagcag acaccagtga 1140 acatggaaaa gaacccaaga gaggcacctc ctgttgttcc tcctttggca aatgctattt 1200 ctgcagcttt ggtgtcccca gccaccagcc agagcattgc tcctcctgtt cctttgaaag 1260 cccagacagt aacagactcc atgtttgcag tggccagcaa agatgctgga tgtgtgaata 1320 agagtactca tgaattcaag ccacagagtg gagcagagat caaagaaggg tgtgaaacac 1380 ataaggttgc caacacaagt tcttttcaca caactccaaa cacatcactg ggaatggttc 1440 aggcaacgcc atccaaagtg cagccatcac ccaccgtgca cacaaaagaa gcattaggtt 1500 tcatcatgaa tatgtttcag gctcctacac ttcctgatat ttctgatgac aaagatgaat 1560 ggcaatctct agatcaaaat gaagatgcat ttgaagccca gtttcaaaaa aatgtaaggt 1620 catctggggc ttggggagtc aataagatca tctcttcttt gtcatctgct tttcatgtgt 1680 ttgaagatgg aaacaaagaa aattatggat taccacagcc taaaaataaa cccacaggag 1740 ccaggacctt tggagaacgc tctgtcagca gacttccttc aaaaccaaag gaggaagtgc 1800 % 55 201237174 ctcatgctga agagtttttg gatgactcaa ctgtatgggg tattcgctgc aacaaaaccc 1860 tggcacccag tcctaagagc ccaggagact tcacatctgc tgcacaactt gcgtctacac 1920 cattccacaa gcttccagtg gagtcagtgc acattttaga agataaagaa aatgtggtag 1980 caaaacagtg tacccaggcg actttggatt cttgtgagga aaacatggtg gtgccttcaa 2040 gggatggaaa attcagtcca attcaagaga aaagcccaaa acaggccttg tcgtctcaca 2100 tgtattcagc atccttactt cgtctgagcc agcctgctgc aggtggggta cttacctgtg 2160 aggcagagtt gggcgttgag gcttgcagac tcacagacac tgacgctgcc attgcagaag 2220 atccaccaga tgctattgct gggctccaag cagaatggat gcagatgagt tcacttggga 2280 ctgttgatgc tccaaacttc attgttggga acccatggga tgataagctg attttcaaac 2340 ttttatctgg gctttctaaa ccagtgagtt cctatccaaa tacttttgaa tggcaatgta 2400 aacttccagc catcaagccc aagactgaat ttcaattggg ttctaagctg gtctatgtcc 2460 atcaccttct tggagaagga gcctttgccc aggtgtacga agctacccag ggagatctga 2520 atgatgctaa aaataaacag aaatttgttt taaaggtcca aaagcctgcc aacccctggg 2580 aattctacat tgggacccag ttgatggaaa gactaaagcc atctatgcag cacatgttta 2640 tgaagttcta ttctgcccac ttattccaga atggcagtgt attagtagga gagctctaca 2700 gctatggaac attattaaat gccattaacc tctataaaaa tacccctgaa aaagtgatgc 2760 ctcaaggtct tgtcatctct tttgctatga gaatgcttta catgattgag caagtgcatg 2820 actgtgaaat cattcatgga gacattaaac cagacaattt catacttgga aacggatttt 2880 tggaacagga tgatgaagat gatttatctg ctggcttggc actgattgac ctgggtcaga 2940 gtatagatat gaaacttttt ccaaaaggaa ctatattcac agcaaagtgt gaaacatctg 3000 gttttcagtg tgttgagatg ctcagcaaca aaccatggaa ctaccagatc gattactttg 3060 gggttgctgc aacagtatat tgcatgctct ttggcactta catgaaagtg aaaaatgaag 3120 gaggagagtg taagcctgaa ggtcttttta gaaggcttcc tcatttggat atgtggaatg 3180 aattttttca tgttatgttg aatattccag attgtcatca tcttccatct ttggatttgt 3240 taaggcaaaa gctgaagaaa gtatttcaac aacactatac taacaagatt agggccctac 3300 gtaataggct aattgtactg ctcttagaat gtaagcgttc acgaaaataa aatttggata 3360 tagacagtcc ttaaaaatca cactgtaaat atgaatctgc tcactttaaa cctgtttttt 3420 56 201237174 tttcatttat tgtttatgta aatgtttgtt aaaaataaat cccatggaat atttccatgt 3480 aaaaaa 3486 <210> 110 <211> 6641 <212> DNA <213 > 人類 <400> 110 ggttacattt tggatcctcg cggagtactg gtcaggcggt taagtcctgt acctaggaaa 60 gagggcgagc tctggggcgc tctccggtgt catgaggagc ttcaaaagag tcaactttgg 120 gactctgcta agcagccaga aggaggctga agagttgctg cccgccttga aggagttcct 180 gtccaaccct ccagctggtt ttcccagcag ccgatctgat gctgagagga gacaagcttg 240 tgatgccatc ctgagggctt gcaaccagca gctgactgct aagctagctt gccctaggca 300 tctggggagc ctgctggagc tggcagagct ggcctgtgat ggctacttag tgtctacccc 360 acagcgtcct cccctctacc tggaacgaat tctctttgtc ttactgcgga atgctgctgc 420 acaaggaagc ccagaggcca cactccgcct tgctcagccc ctccatgcct gcttggtgca 480 gtgctctcgc gaggctgctc cccaggacta tgaggccgtg gctcggggca gcttttctct 540 gctttggaag ggggcagaag ccctgttgga acggcgagct gcatttgcag ctcggctgaa 600 ggccttgagc ttcctagtac tcttggagga tgaaagtacc ccttgtgagg ttcctcactt 660 tgcttctcca acagcctgtc gagcggtagc tgcccatcag ctatttgatg ccagtggcca 720 tggtctaaat gaagcagatg ctgatttcct agatgacctg ctctccaggc acgtgatcag 780 agccttggtg ggtgagagag ggagctcttc tgggcttctt tctccccaga gggccctctg 840 cctcttggag ctcaccttgg aacactgccg tcgcttttgc tggagccgcc accatgacaa 900 agccatcagc gcagtggaga aggctcacag ttacctaagg aacaccaatc tagcccctag 960 ccttcagcta tgtcagctgg gggttaagct gctgcaggtt ggggaggaag gacctcaggc 1020 agtggccaag cttctgatca aggcatcagc tgtcctgagc aagagtatgg aggcaccatc 1080 acccccactt cgggcattgt atgagagctg ccagttcttc ctttcaggcc tggaacgagg 1140 caccaagagg cgctatagac ttgatgccat tctgagcctc tttgcttttc ttggagggta 1200 ctgctctctt ctgcagcagc tgcgggatga tggtgtgtat gggggctcct ccaagcaaca 1260 gcagtctttt cttcagatgt actttcaggg acttcacctc tacactgtgg tggtttatga 1320 57 201237174 ctttgcccaa ggctgtcaga tagttgattt ggctgacctg acccaactag tggacagttg 1380 taaatctacc gttgtctgga tgctggaggc cttagagggc ctgtcgggcc aagagctgac 1440 ggaccacatg gggatgaccg cttcttacac cagtaatttg .gcctacagct tctatagtca 1500 caagctctat gccgaggcct gtgccatctc tgagccgctc tgtcagcacc tgggtttggt 1560 gaagccaggc acttatcccg aggtgcctcc tgagaagttg cacaggtgct tccggctaca 1620 agtagagagt ttgaagaaac tgggtaaaca ggcccagggc tgcaagatgg tgattttgtg 1680 gctggcagcc ctgcaaccct gtagccctga acacatggct gagccagtca ctttctgggt 1740 tcgggtcaag atggatgcgg ccagggctgg agacaaggag ctacagctaa agactctgcg 1800 agacagcctc agtggctggg acccggagac cctggccctc ctgctgaggg aggagctgca 1860 ggcctacaag gcggtgcggg ccgacactgg acaggaacgc ttcaacatca tctgtgacct 1920 cctggagctg agccccgagg agacaccagc cggggcctgg gcacgagcca cccacctggt 1980 agaactggct caggtgctct gctaccacga ctttacgcag cagaccaact gctctgctct 2040 ggatgctatc cgggaagccc tgcagcttct ggactctgtg aggcctgagg cccaggccag 2100 agatcagctt ctggacgata aagcacaggc cttgctgtgg ctttacatct gtactctgga 2160 agccaaaatg caggaaggta tcgagcggga tcggagagcc caggcccctg gtaacttgga 2220 ggaatttgaa gtcaatgacc tgaactatga agataaactc caggaagatc gtttcctata 2280 cagtaacatt gccttcaacc tggctgcaga tgctgctcag tccaaatgcc tggaccaagc 2340 cctggccctg tggaaggagc tgcttacaaa ggggcaggcc ccagctgtac ggtgtctcca 2400 gcagacagca gcctcactgc agatcctagc agccctctac cagctggtgg caaagcccat 2460 gcaggctctg gaggtcctcc tgctgctacg gattgtctct gagagactga aggaccactc 2520 gaaggcagct ggctcctcct gccacatcac ccagctcctc ctgaccctcg gctgtcccag 2580 ctatgcccag ttacacctgg aagaggcagc atcgagcctg aagcatctcg atcagactac 2640 tgacacatac ctgctccttt ccctgacctg tgatctgctt cgaagtcaac tctactggac 2700 tcaccagaag gtgaccaagg gtgtctctct gctgctgtct gtgcttcggg atcctgccct 2760 ccagaagtcc tccaaggctt ggtacttgct gcgtgtccag gtcctgcagc tggtggcagc 2820 ttaccttagc ctcccgtcaa acaacctctc acactccctg tgggagcagc tctgtgccca 2880 aggctggcag acacctgaga tagctctcat agactcccat aagctcctcc gaagcatcat 2940 58 201237174 cctcctgctg atgggcagtg acattctctc aactcagaaa gcagctgtgg agacatcgtt 3000 tttggactat ggtgaaaatc tggtacaaaa atggcaggtt ctttcagagg tgctgagctg 3060 ctcagagaag ctggtctgcc acctgggccg cctgggtagt gtgagtgaag ccaaggcctt 3120 ttgcttggag gccctaaaac ttacaacaaa gctgcagata ccacgccagt gtgccctgtt 3180 cctggtgctg aagggcgagc tggagctggc ccgcaatgac attgatctct gtcagtcgga 3240 cctgcagcag gttctgttct tgcttgagtc ttgcacagag tttggtgggg tgactcagca 3300 cctggactct gtgaagaagg tccacctgca gaaggggaag cagcaggccc aggtcccctg 3360 tcctccacag ctcccagagg aggagctctt cctaagaggc cctgctctag agctggtggc 3420 cactgtggcc aaggagcctg gccccatagc accttctaca aactcctccc cagtcttgaa 3480 aaccaagccc cagcccatac ccaacttcct gtcccattca cccacctgtg actgctcgct 3540 ctgcgccagc cctgtcctca cagcagtctg tctgcgctgg gtattggtca cggcaggggt 3600 gaggctggcc atgggccacc aagcccaggg tctggatctg ctgcaggtcg tgctgaaggg 3660 ctgtcctgaa gccgctgagc gcctcaccca agctctccaa gcttccctga atcataaaac 3720 acccccctcc ttggttccaa gcctcttgga tgagatcttg gctcaagcat acacactgtt 3780 ggcactggag ggcctgaacc agccatcaaa cgagagcctg cagaaggttc tacagtcagg 3840 gctgaagttt gtagcagcac ggatacccca cctagagccc tggcgagcca gcctgctctt 3900 gatttgggcc ctcacaaaac taggtggcct cagctgctgt actacccaac tttttgcaag 3960 ctcctggggc tggcagccac cattaataaa aagtgtccct ggctcagagc cctctaagac 4020 tcagggccaa aaacgttctg gacgagggcg ccaaaagtta gcctctgctc ccctgcgcct 4080 caataatacc tctcagaaag gtctggaagg tagaggactg ccctgcacac ctaaaccccc 4140 agaccggatc aggcaagctg gccctcatgt ccccttcacg gtgtttgagg aagtctgccc 4200 tacagagagc aagcctgaag taccccaggc ccccagggta caacagagag tccagacgcg 4260 cctcaaggtg aacttcagtg atgacagtga cttggaagac cctgtctcag ctgaggcctg 4320 gctggcagag gagcctaaga gacggggcac tgcttcccgg ggccgggggc gagcaaggaa 4380 gggcctga.gc ctaaagacgg atgccgtggt tgccccaggt agtgcccctg ggaaccctgg 4440 cctgaatggc aggagccgga gggccaagaa ggtggcatca agacattgtg aggagcggcg 4500 tccccagagg gccagtgacc aggccaggcc tggccctgag atcatgagga ccatccctga 4560 59 201237174 ggaagaactg actgacaact ggagaaaaat gagctttgag atcctcaggg gctctgacgg ggaagactca gcctcaggtg ggaagactcc agctccgggc cctgaggcag cttctggaga atgggagctg ctgaggctgg attccagcaa sraagaagctg cccasrcccat gcccagacaa ggagagtgac aaggaccttg gtcctcggct ccggctcccc tcagcccccg tagccactgg tctttctacc ctggactcca tctgtgactc cctgagtgtt gctttccggg gcattagtca ctgtcctcct agtgggctct atgcccacct ctgccgcttc ctggccttgt gcctgggcca ccgggatcct tatgccactg ctttccttgt caccgagtct gtctccatca cctgtcgcca ccagctgctc acccacctcc acagacagct cagcaaggcc cagaagcacc gaggatcact tgaaatagca gaccagctgc aggggctgag ccttcaggag atgcctggag atgtccccct ggcccgcatc cagcgcctct tttccttcag ggctttggaa tctggccact tcccccagcc tgaaaaggag agtttccagg agcgcctggc tctgatcccc agtggggtga ctgtgtgtgt gttggccctg gccaccctcc agcccggaac cgtgggcaac accctcctgc tgacccggct ggaaaaggac agtcccccag tcagtgtgca gattcccact ggccagaaca agcttcatct gcgttcagtc ctgaatgagt ttgatgccat ccagaaggca cagaaagaga acagcagctg tactgacaag cgagaatggt ggacagggcg gctggcactg gaccacagga tggaggttct catcgcttcc ctagagaagt ctgtgctggg ctgctggaag gggctgctgc tgccgtccag tgaggagccc ggccctgccc aggaggcctc ccgcctacag gagctgctac aggactgtgg ctggaaatat cctgaccgca ctctgctgaa aatcatgctc agtggtgccg gtgccctcac ccctcaggac attcaggccc tggcctacgg gctgtgccca acccagccag agcgagccca ggagctcctg aatgaggcag taggacgtct acagggcctg acagtaccaa gcaatagcca ccttgtcttg gtcctagaca aggacttgca gaagctgccg tgggaaagca tgcccagcct ccaagcactg cctgtcaccc ggctgccctc cttccgcttc ctactcagct actccatcat caaagagtat ggggcctcgc cagtgctgag tcaaggggtg gatccacgaa gtaccttcta tgtcctgaac cctcacaata acctgtcaag cacagaggag caatttcgag ccaatttcag cagtgaagct ggctggagag gagtggttgg ggaggtgcca agacctgaac aggtgcagga agccctgaca aagcatgatt tgtatatcta tgcagggcat ggggctggtg cccgcttcct tgatgggcag gctgtcctgc ggctgagctg tcgggcagtg gccctgctgt ttggctgtag 4620 4680 4740 4800 4860 4920 4980 5040 5100 5160 5220 5280 5340 5400 5460 5520 5580 5640 5700 5760 5820 5ΘΘ0 5940 6000 6060 6120 6180 60 201237174 cagtgcggcc ctggctgtgc gtggaaacct ggagggggct ggcatcgtgc tcaagtacat 6240 catggctggt tgccccttgt ttctgggtaa tctctgggat gtgactgacc gcgacattga 6300 ccgctacacg gaagctctgc tgcaaggctg gcttggagca ggcccagggg ccccccttct 6360 ctactatgta aaccaggccc gccaagctcc ccgactcaag tatcttattg gggctgcacc 6420 tatagcctat ggcttgcctg tctctctgcg gtaaccccat ggagctgtct tattgatgct 6480 agaagcctca taactgttct acctccaagg ttagatttaa tccttaggat aactctttta 6540 aagtgatttt ccccagtgtt ttatatgaaa catttccttt tgatttaacc tcagtataat 6600 aaagatacat catttaaacc ctgaaaaaaa aaaaaaaaaa a 6641 <210> 111 <211> 2080 <212> DNA <213>人類 <400> 111 gcggccgctg ggctcaggct gtccgctctg ggctccgcgg cctcggcccc gctgcactcc 60 acctccgccc cctcggactc cctcccctct gcttctactc ctcctgctcc agtgcggatc 120 gtttcgcaac tgcttgccac tcgtcccgtg cctggctgtt tttccatttc ccggccccct 180 cttcttgagt actttacccc ctgcatttgg ggacagggac tggaaaaggg gcgggtggag 240 cgtccagtgg agaagaagga agcgaggccc gcaggaggag gaggatcggc ggactgtggg 300 gaggagaccc cacgccaccc tttctggtca tctcccctcc cgccccgccc ctgcgcacac 360 tccctcgcgg gcgagctact ttcggaccag gaaagtaaga gcggccctgg gtgacagcgc 420 cgcggggcca gtcccggggt tagccgcgcg tctgctcgct tctggtccgt cgcgctccca 480 gccagggcac agcccggacc gaggatggct tcgaccacaa cctgcaccag gttcacggac 540 gagtatcagc ttttcgagga gcttggaaag ggggcattct cagtggtgag aagatgtatg 600 aaaattccta ctggacaaga atatgctgcc aaaattatca acaccaaaaa gctttctgct 660 agggatcatc agaaactaga aagagaagct agaatctgcc gtcttttgaa gcaccctaat 720 attgtgcgac ttcatgatag catatcagaa gagggctttc actacttggt gtttgattta 780 gttactggag gtgaactgtt tgaagacata gtggcaagag aatactacag tgaagctgat 840 gccagtcatt gtatacagca gattctagaa agtgttaatc attgtcacct aaatggcata 900 61 201237174 gttcacaggg acctgaagcc tgagaatttg cttttagcta gcaaatccaa gggagcagct 960 gtgaaattgg cagactttgg cttagccata gaagttcaag gggaccagca ggcgtggttt 1020 ggttttgctg gcacacctgg atatctttct ccagaagttt tacgtaaaga tccttatgga 1080 aagccagtgg atatgtgggc atgtggtgtc attctctata ttctacttgt ggggtatcca 1140 cccttctggg atgaagacca acacagactc tatcagcaga tcaaggctgg agcttatgat 1200 tttccatcac cagaatggga cacggtgact cctgaagcca aagacctcat caataaaatg 1260 cttactatca accctgccaa acgcatcaca gcctcagagg cactgaagca cccatggatc 1320 tgtcaacgtt ctactgttgc ttccatgatg cacagacagg agactgtaga ctgcttgaag 1380 aaatttaatg ctagaagaaa actaaagggt gccatcttga caactatgct ggctacaagg 1440 aatttctcag cagccaagag tttgttgaag aaaccagatg gagtaaagga gtcaactgag 1500 agttcaaata caacaattga ggatgaagat gtgaaagcac gaaagcaaga gattatcaaa 1560 gtcactgaac aactgatcga agctatcaac aatggggact ttgaagccta cacaaaaatc 1620 tgtgacccag gccttactgc ttttgaacct gaagctttgg gtaatttagt ggaagggatg 1680 gattttcacc gattctactt tgaaaatgct ttgtccaaaa gcaataaacc aatccacact 1740 attattctaa accctcatgt acatctggta ggggatgatg ccgcctgcat agcatatatt 1800 aggctcacac agtacatgga tggcagtgga atgccaaaga caatgcagtc agaagagact 1860 cgtgtgtggc accgccggga tggaaagtgg cagaatgttc attttcatcg ctcggggtca 1920 ccaacagtac ccatcaagcc accctgtatt ccaaatggga aagaaaactt ctcaggaggc 1980 acctctttgt ggcaaaacat ctaaggcctg aaaaccattc acatatgggt cttctaaatt 2040 tcaacagtgc cacttctgca ttctctgttc tcaaggcacc 2080 <210> 112 <211> 11611 <212 > DNA <213> 人類 <400> 112 ggcttcagcc ctgcagggaa agaaaagtgc aatgattctg gactgagacg cgcttgggca 60 gaggctatgt aatcgtgtct gtgttgagga cttcgcttcg aggagggaag aggagggatc 120 ggctcgctcc tccggcggcg gcggcggcgg cgactctgca ggcggagttt cgcggcggcg 180 gcaccagggt tacgccagcc ccgcggggag gtctctccat ccagcttctg cagcggcgaa 240 62 201237174 agccccagcg cccgagcgcc tgagccggcg gggagcaagt aaagctagac cgatctccgg 300 ggagccccgg agtaggcgag cggcggccgc cagctagttg agcgcacccc ccgcccgccc 360 cagcggcgcc gcggcgggcg gcgtccaggc ggcatggaga aggacggcct gtgccgcgct 420 gaccagcagt acgaatgcgt ggcggagatc ggggagggcg cctatgggaa ggtgttcaag 480 gcccgcgact tgaagaacgg aggccgtttc gtggcgttga agcgcgtgcg ggtgcagacc 540 ggcgaggagg gcatgccgct ctccaccatc cgcgaggtgg cggtgctgag gcacctggag 600 accttcgagc accccaacgt ggtcaggttg tttgatgtgt gcacagtgtc acgaacagac 660 agagaaacca aactaacttt agtgtttgaa catgtcgatc aagacttgac cacttacttg 720 gataaagttc cagagcctgg agtgcccact gaaaccataa aggatatgat gtttcagctt 780 ctccgaggtc tggactttct tcattcacac cgagtagtgc atcgcgatct aaaaccacag 840 aacattctgg tgaccagcag cggacaaata aaactcgctg acttcggcct tgcccgcatc 900 tatagtttcc agatggctct aacctcagtg gtcgtcacgc tgtggtacag agcacccgaa 960 gtcttgctcc agtccagcta cgccaccccc gtggatctct ggagtgttgg ctgcatattt 1020 gcagaaatgt ttcgtagaaa gcctcttttt cgtggaagtt cagatgttga tcaactagga 1080 aaaatcttgg acgtgattgg actcccagga gaagaagact ggcctagaga tgttgccctt 1140 cccaggcagg cttttcattc aaaatctgcc caaccaattg agaagtttgt aacagatatc 1200 gatgaactag gcaaagacct acttctgaag tgtttgacat ttaacccagc caaaaigaata 1260 tctgcctaca gtgccctgtc tcacccatac ttccaggacc tggaaaggtg caaagaaaac 1320 ctggattccc acctgccgcc cagccagaac acctcggagc tgaatacagc ctgaggcctc 1380 agcagccgcc ttaagctgat cctgcggaga acacccttgg tggcttatgg gtccccctca 1440 gcaagcccta cagagctgtg gaggattgct atctggaggc cttccagctg ctgtcttctg 1500 gacaggctct gcttctccaa ggaaaccgcc tagtttactg ttttgaaatc aatgcaagag 1560 tgattgcagc tttatgttca tttgtttgtt tgtttgtctg tttgtttcaa gaacctggaa 1620 aaattccaga agaagagaag ctgctgacca attgtgctgc catttgattt ttctaacctt 1680 gaatgctgcc agtgtggagt gggtaatcca ggcacagctg agttatgatg taatctctct 1740 gcagctgccg ggcctgattt ggtacttttg agtgtgtgtg tgcatgtgtg tgtgtgtgtg 1800 tgtgtgtgtg tgtgtgtatg tgagagattc tgtgatcttt taaagtgtta ctttttgtaa 1860 63 201237174 acgacaagaa taattcaatt ttaaagactc aaggtggtca gtaaataaca ggcatttgtt cactgaaggt gattcaccaa aatagtcttc tcaaattaga aagttaaccc catgtcctca gcatttcttt tctggccaaa agcagtaaat ttgctagcag taaaagatga agttttatac acacagcaaa aaggagaaaa aattctagta tattttaaga gatgtgcatg cattctattt agtcttcaga atgctgaatt tacttgttgt aagtctattt taaccttctg tatgacatca tgctttatca tttcttttgg aaaatagcct gtaagctttt tattacttgc tataggttta gggagtgtac ctcagataga ttttaaaaaa aagaatagaa agcctttatt tcctggtttg aaattccttt cttccctttt tttgttgttg ttattgttgt ttgttgttgt tattttgttt ttgtttttag gaatttgtca gaaactcttt cctgttttgg tttggagagt agttctctct aactagagac aggagtggcc ttgaaatttt cctcatctat tacactgtac tttctgccac acactgcctt gttggcaaag tatccatctt gtctatctcc cggcacttct gaaatatatt gctaccattg tataactaat aacagattgc ttaagctgtt cccatgcacc acctgtttgc ttgctttcaa tgaacctttc ataaattcgc agtctcagct tatggtttat ggcctcgatt ctgcaaacct aacagggtca catatgttct ctaatgcagt ccttctacct ggtgtttact tttgctaccc aaataatgag taggatcttg ttttcgtata cccccaccac tcccattgct accaactgtc accttgtgca ctcctttttt atagaagata ttttcagtgt ctttacctga gggtatgtct ttagctatgt 'tttagggcca tacatttact ctatcaaatg atcttttctc catcccccag gctgtgctta tttctagtgc cttgtgctca ctcctgctct ctacagagcc agcctggcct gggcattgta aacagctttt cctttttctc ttactgtttt ctctacagtc ctttatattt cataccatct ctgccttata agtggtttag tgctcagttg gctctagtaa ccagaggaca cagaaagtat cttttggaaa gtttagccac ctgtgctttc tgactcagag tgcatgcaac agttagatca tgcaacagtt agattatgtt tagggttagg attttcaaag aatggaggtt gctgcactca gaaaataatt cagatcatgt ttatgcatta ttaagttgta ctgaattctt tgcagcttaa tgtgatatat gactatcttg aacaagagaa aaaactagga gatgtttctc ctgaagagct tttggggttg ggaactattc ttttttaatt gctgtactac ttaacattgt tctaattcag tagcttgagg aacaggaaca ttgttttcta gagcaagata ataaaggaga tgggccatac aaatgttttc tactttcgtt gtgacaacat tgattaggtg 1920 1980 2040 2100 2160 2220 2280 2340 2400 2460 2520 2580 2640 2700 2760 2820 2880 2940 3000 3060 3120 3180 3240 3300 3360 3420 3480 64 201237174 ttgtcagtac tataaatgct tgagatataa tgaatccaca gcattcaagg tcaggtctac tcaaagtctc acatggaaaa gtgagttctg cctttccttt gatcgagggt caaaatacaa agacattttt gctagggcct acaaattgaa tttaaaaact cactgcactg attcatctga gctttttggt tagtattcat ggctagagtg aacatagctt tagtttttgc tgttgtaaaa gtgttttcat aagttcactc aagaaaaatg cagctgttct gaactggaat ttttcagcat tctttagaat tttaaatgag tagagagctc aacttttatt cctagcatct gcttttgact catttctagg cagtgcttat gaagaaaaat taaagcacaa acattctggc attcaatcgt tggcagatta tcttctgatg acacagaatg aaagggcatc tcagcctctc tgaactttgt aaaaatctgt ccccagttct tccatcggtg tagttgttgc atttgagtga.atactctctt gatttatgta ttttatgtcc agattcgcca tttctgaaat ccagatccaa cacaagcagt cttgccgtta gggcattttg aagcagatag tagagtaaga acttagtgac tacagcttat tcttctgtaa catatggttt caaacatctt tgccaaaagc taagcagtgg tgaactgaaa agg5catatt gccccaaggt tacactgaag cagctcatag caagttaaaa tattgtgaca gatttgaaat catgtttgaa tttcatagta ggaccagtac aagaatgtcc ctgctagttt ctgtttgatg tttggttctg gcggctcagg cattttggga actgttgcac agggtgcagt caaaacaacc tacatataaa aattacataa aagaaccttg tccatttagc tttcataaga aatcccatgg caaagagtaa taaaaaggac ctaatcttaa aaatacaatt tctaagcact tgtaagaacc cagtgggttg gagcctccca ctttgtccct cctttgaagt ggatgggaac tcaaggtgca aagaacctgt tttggaagaa agcttggggc catttcagcc ccctgtattc tcatgatttt ctctcaggaa gcacacactg tgaatggcag acttttcatt tagccccagg tgacttacta aaaatagttg aaaattattc acctaagaat agaatctcag cattgtgtta aataaaaatg aaagctttag aaggcatgag atgttcctat cttaaataaa gcatgtttct tttctataga gaaatgtata gtttgactct ccagaatgta ctatccatct tgatgagaaa actcttaaat agtaccaaac attttgaact ttaaattatg tatttaaagt gagtgtttaa gaaactgtag ctgcttcttt tacaagtggt gcctattaaa gtcagtaatg gccattattg ttccattgtg gaaattaaat tatgtaagct tcctaatatc ataaacatat taaaattctt ctaaaatatt gcttttcttt taagtgacaa tttgactatt cttatgataa gcacatgaga 3540 3600 3660 3720 3780 3840 3900 3960 4020 4080 4140 4200 4260 4320 4380 4440 4500 4560 4620 4680 4740 4800 4860 4920 4980 5040 5100 65 201237174 gtgtcttaca ttttccaaaa gcaggcttta attgcatagt tgagtctagg aaaaaataat 5160 gttaaaagtg aatatgccac cataattact taattatgtt agtatagaaa ctacagaata 5220 tttaccctgg aaagaaaata ttggaatgtt attataaact cttagatatt tatataattc 5280 aaaagaatgc atgtttcaca ttgtgacaga taaagatgta tgatttctaa ggctttaaaa 5340 attattcata aaacagtggg caatagataa aggaaattct ggagaaaatg aaggtattta 5400 aagggtagtt tcaaagctat atatattttg aaggatatat tctttatgaa caaatatatt 5460 gtaaaaattt atactaaggt catctggtaa ctgtgggatt aatatggtcg aaaacaaatg 5520 ttatggagaa gctgtcccaa gcaaactaaa ttacctgtac ttttttccca tttcaaggga 5580 agaggcaacc acatgaagca atacttctta cacatgccta agaacgttca ttgaaaaaat 5640 aaatttttaa aaggcatgtg tttcctatgc caccaatact tttgaaaaat tgtgaacctt 5700 acccaaaacc atttatcatg tccattaagt atatttgggt atataattag gaagatattt 5760 acatgttcca tctccacagt ggaaaaactt attgaggcta ccaaagtgtg ccaagaaatg 5820 taagtcctta gagtaattag aaatgctgtt ttcctcaaaa gcatgagaaa ctagcatttt 5880 catttcttat ttactccctt tctatatcaa tgcaattcac aacccaattt taatacatcc 5940 ctatatctca agcatttcta tcttgtactt tttcagaaaa taaaccaaaa ataatccttt 6000 ggtctctcta tcttctgacc tttgtaagca acagaaatgt aaaaacagaa ggggtccaat 6060 ttttacacgt ttttttctca agtagccttt ctggggattt ttattttctt aatgaagtgc 6120 caatcagctt ttcaaaatgt tttctatttc tcagcatttc caggaagtga taacgtttag 6180 ctaaatgagt agaagtggac ttccttcaac atattgttac cttgtctagc cttaggaaga 6240 aaacaagagc cacctgaaaa taaatacagg ctcttttcga gcatctgctg aaatactgtt 6300 acagcaattt gaagttgatg tggtaggaaa ggaaggtgac ttttcttgca aaagtctttc 6360 taaacattca cactgtccta agagatgagc tttcttgttt tattccggta tattccacaa 6420 ggtggcactt ttagagaaaa acaaatctga tgaagactaa agaggtactt ctaaaagaga 6480 tttcattcta actttatttt tctgcgcata tttaactctt tcctagcact tgttttttgg 6540 gatgattaat agtctctata atgttctgta acttcaatat tttacttgtt acctaggttc 6600 tgaacaattg tctgcaaata aattgttctt aaggatggat aatacaccca ttttgatcat 6660 ttaagtaaag aaagcctagt cattcattca gtcaagaaaa aatttttgaa gtacccagtt 6720 66 201237174 accttacttt tctagattaa aacaggctta gttactaaaa aggcagtcct catctgtgaa caggatagtt tcgttagaag tataaaactc ctttagtggc cccagttaaa acacacatac cctctctgct gctttcaaat tccctagcat ggtggccttt caacattgat taaattttaa aatcctaatt taaagatcag gtgagcaaaa tgagtagcac atcagtaatt cagtagacaa aacttttgtc tgaaaaattg ctgtattgaa acagagccct aaaataccaa aagaccaggt aattttaaca tttgtggaat cacaaatgta aattcataag aagctctaat taaaaaaaaa aagtctgaag tatatgagca taacaactta ggagtgtgtc tacatactta acttttgaag ttttttggca actttatata ctttttttaa atttacaagt ctacttaaag acttcttata ccccaaatga ttaagttaat tttagaggtc acctttctca cagcagtgtc acttgaaatt tagtagggaa ggatattgca gtatttttca gtttccttag cacagcacca cagaaagcag cttattcctt ttgagtggca gacactcgac ggtgcctgcc caactttcct cctgagtggc aagcagatga gtctcagtaa ttcatactga accaaaatgc cacatacact aggggcagtc agaaactggc tgagaaatcc cccgcctcat tcgcccctct gctcccagga actagagtcc agttaaagcc cctatgcgaa aggccgaatt ccaccccagg gtttgttata acagtggcca gtctgaaccc catttgctcg tgctcaaaac ttgattccca cttgaaagcc ttccgggcgc gctgcctcgt tgccccgccc ctttggcagg agagaggcag tgggcgaggc cgggctgggg ccccgcctcc cactcacctg ccggtgcctg aaattatgtg cggccccgcg ggctgctttc cgaggtcaga gtgccctgct gctgtctcag aggcatctgt tctgcaaatc ttaggaagaa aaatgtccct agtagcaaac gggtgtcttc tgtgcataaa taagtacaac acaattctcc gaaagttcgg gtaaaaagag atgcggtagc agctgccctg tgtgaagctg tctaccccgc atctctcagg cgctaagctc agtttttgtt tttgtttttg tttttttaaa gaaaagatgt ataattgcag gaattttttt ttattttttt attttccatc attctatata tgtgatggtg aaagatatgc ctggaaaagt tttgttttga aaagtttatt ttctgcttcg tcttcagttg gcaaaagctc tcaattcttt agcttccagt ttcttttctc tctttttctt tgttaggtaa ttaaaggtat gtaaacaaat tatctcatgt agcaggggat tttcatgttg agaggaatct tccgtgtgag ttgtttggtc acacaaataa ccctttctca attttaggag tttggattgt caaatgtagg tttttctcaa agggggcata taactacata ttgactgcca agaactatga 6780 6840 6900 6960 7020 7080 7140 7200 7260 7320 7380 7440 7500 7560 7620 7680 7740 7800 7860 7920 7980 8040 8100 8160 8220 8280 8340 67 201237174 ctgtagcact aatcagcaca catagagcca cacaattatt taatttctaa ctctctgtgg tccctagaaa aattccgttg atgtgcttag gttaaagttc tgaagatacc cgttgtaccc ttacttgaaa gtttctaatc ttaagtttta tgaaatgcaa taatatgtat cagctagcaa tatttctgtg atcaccaaca actctcagtt tgatcttaaa gtctgaataa taaaacaaat cccagcagta atacatttct taaacctcac agtgcatgat atatcttttc attctgatcc tgtgtttgca aaaatataca catgtatatc atagttcctc actttttatt catttgtttt cctattacct gtagtaaata tattagttag tacatggaat ttatagcatc agctaccccc aggaacagca cctgacaggc gggggatttt ttttcaagtt gttctacatt tgcataaatt atttctatta ttattcatgt atgttattta tttctgaatc acactagtcc tgtgaaagta caactgaagg cagaaagtgt taggattttg catctaatgt tcattatcat ggtattgatg gacctaagaa aataaaaatt agactaagcc cccaaataag ctgcatgcat ttgtaacatg attagtagat ttgaatatat agatgtagta ttttgggtat ctaggtgttt tatcattatg taaaggaatt aaagtaaagg actttgtagt tgtttttatt aaatatgcat atagtagagt gcaaaaatat agcaaaaata aaaactaaag gtagaaaagc attttagata tgccttaatt tagaaactgt gccaggtggc cctcggaata gatgccaggc agagaccagt gcctgggtgg tgcctcctct tgtctgccct catgaagaag cttccctcac gtgatgtagt gccctcgtag gtgtcatgtg gagtagtggg aacaggcagt actgttgaga ggagagcagt gtgagagttt ttctgtagaa gcagaactgt cagcttgtgc cttgaggctt ccagaacgtg tcagatggag aagtccaagt ttccatgctt caggcaactt agctgtgtac agaagcaatc cagtgtggta ataaaaagca aggattgcct gtataattta ttataaaata aaagggattt taacaaccaa caattcccaa cacctcaaaa gcttgttgca ttttttggta tttgaggttt ttatctgaag gttaaagggc aagtgtttgg tatagaagag cagtatgtgt taagaaaaga aaaatattgg ttcacgtaga gtgcaaatta gaactagaaa gttttatacg attatcattt tgagatgtgt taaagtaggt tttcactgta aaatgtatta gtgtttctgc attgccatag ggcctggtta aaactttctc ttaggtttca ggaagactgt cacatacagt aagctttttt ccttctgact tataatagaa aatgttttga aagtaaaaaa aaaaaatcta atttggaaat ttgacttgtt agtttctgtg tttgaaatca tggttctaga aatgtagaaa ttgtgtatat cagatactca 8400 8460 8520 8580 8640 8700 8760 8820 8880 8940 9000 9060 9120 9180 9240 9300 9360 9420 9480 9540 9600 9660 9720 9780 9840 9900 9960 68 201237174 tctaggctgt gtgaaccagc ccaagatgac caacatcccc acacctctac atctctgtcc cctgtatctc ttcctttcta ccactaaagt gttccctgct accatcctgg cttgtccaca tggtgctctc catcttcctc cacatcatgg accacaggtg tgcctgtcta ggcctggcca ccactcccaa cttgacctag ccacattcat ctagagatgg ttcctgatgc tgggcacaga ctgtgctcat ggcacccatt agaaatgcct ctagcatctt tgtatgcatc ttgattttta aaccaagtca ttgtacagag cattcagttt tggctgtggt accaagagaa aaactaatca agaatataaa ccacattcca ggctgctgtt ttctctccat ctacaggcca cacttttact gtatttcttc atacttgaaa ttcattctgc tattttcata tcagggtaca gacttataag ggtgcatgtt ccttaaaggt gcataattat tcttattccg tttgcttata ttgctacaga atgctctgtt ttggtgcttt gagttctgca gacccaagaa gcagtgtgga aattcactgc ctgggacaca gtcttataag aatgttggca ggtgactttg tatcagatgt tgcttctctt ttctctgtac acagattgag agttaccaca gtggcctgtc gggtccaccc tgtgggtgca gcacagctct ctgaaagcaa gaaccttcct acctattcta acgtttttgc cctctaagaa aaatggcctc aggtatggta tagacatagc aagaggggaa gggctgtctc actctagcaa ccatccctcc attacacaca gaaagccctc ttgaagcaaa agaagaagaa agaaagaaag cttatctcta aggctactgt cttcagaatg ctctgagctg aatgctcttg ctcctttccc aagaggcaga tgaaaatata gccagtttat ctataccctt cctatctgag gaggagaata gaaaagtagg gtaaatatgt aacgtaaaat atgtcattca aggaccacca aaactttaag taccctatca ttaaaaatct ggttttaaaa gtagctcaag taagggatgc tttgtgaccc agggtttctg aagtcagata gccattctta cctgcccctt actctgactt attgggaaag ggagaactgc agtggtgttt ctgttgcagt ggcaaaggta acatgtcaga aaattcagag ggttgcatac caataatcct ttggaaactg gatgtcttac tgggtgctag aatgaaaatg taggtattta ttgtcagatg atgaagttca ttgttttttt caaaattggt gttgaaatat cactgtccaa tgtgttcact tatgtgaaag ctaaattgaa tgaggcaaaa agagcaaata gtttgtatat ttgtaatacc ttttgtattt cttacaataa aaatattggt agcaaataaa aataataaaa acaataactt taaactgctt tctggagatg aattactctc ctggctattt tcttttttac tttaatgtaa aatgagtata actgtagtga gtaaaattca ttaaattcca 10020 10080 10140 10200 10260 10320 10380 10440 10500 10560 10620 10680 10740 10800 10860 10920 10980 11040 11100 11160 11220 11280 11340 11400 11460 11520 11580 69 201237174 agttttagca gaaaaaaaaa aaaaaaaaaa a 11611 <210> 113 <211> 3317 <212> DNA <213> 人類 <400> 113 agttctcgcg ggacaccgac ggggagcgga agccaggagg tattgctgct tcggcgaccg 60 ggcggcggca gcggcggcgg cggctgtggc agagtctgtg cctgtggcgg tgacggcggc 120 gggagcaagc gctgccctcg cagagcagcc ttggggtcgc cggccgctcg cagcgttgtg 180 gaggggcggg ccggacgctg agcggagcag ctgcgccacg ggtggcattg tgtgtcccag 240 agtgccggag cgagtcccag aagagaggcg aggctaagcc cagagcgctg ggttgcttca 300 gcagggaaga ctcccttccc cctgcttcag gctgctgagc actgagcagc gctcagaatg 360 gaagccatcg ccaaatatga cttcaaagct actgcagacg acgagctgag cttcaaaagg 420 ggggacatcc tcaaggtttt gaacgaagaa tgtgatcaga actggtacaa ggcagagctt 480 aatggaaaag acggcttcat tcccaagaac tacatagaaa tgaaaccaca tccgtggttt 540 tttggcaaaa tccccagagc caaggcagaa gaaatgctta gcaaacagcg gcacgatggg 600 gcctttctta tccgagagag tgagagcgct cctggggact tctccctctc tgtcaagttt 660 ggaaacgatg tgcagcactt caaggtgctc cgagatggag ccgggaagta cttcctctgg 720 gtggtgaagt tcaattcttt gaatgagctg gtggattatc acagatctac atctgtctcc 780 agaaaccagc agatattcct gcgggacata gaacaggtgc cacagcagcc gacatacgtc 840 caggccctct ttgactttga tccccaggag gatggagagc tgggcttccg ccggggagat 900 tttatccatg tcatggataa ctcagacccc aactggtgga aaggagcttg ccacgggcag 960 accggcatgt ttccccgcaa ttatgtcacc cccgtgaacc ggaacgtcta agagtcaaga 1020 agcaattatt taaagaaagt gaaaaatgta aaacacatac aaaagaatta aacccacaag 1080 ctgcctctga cagcagcctg tgagggagtg cagaacacct ggccgggtca ccctgtgacc 1140 ctctcacttt ggttggaact ttagggggtg ggagggggcg ttggatttaa aaatgccaaa 1200 acttacctat aaattaagaa gagtttttat tacaaatttt cactgctgct cctctttccc 1260 ctcctttgtc ttttttttca tccttttttc tcttctgtcc atcagtgcat gacgtttaag 1320 70 1380 201237174 gccacgtata gtcctagctg acgccaataa taaaaaacaa gaaaccaagt gggctggtat tctctctatg caaaatgtct gttttagttg gaatgactga aagaagaaca gctgttcctg tgttcttcgt atatacacac aaaaaggagc gggcagggcc gctcgatgcc tttgctgttt agcttcctcc agaggagggg acttgtagga atctgccttc cagcccagac ccccagtgta ttttgtccaa gttcacagta gagtagggta gaaggaaagc atgtctctgc ttccatggct tcctgagaaa gcccacctgg gctgggcgcg gtggctcacg cctgtaatcc cagcactttg ggaggccaag gtgggcggat cacaaggtca ggagttcgag accaacctag ccaacatggt gaaaccccgt ctctactaaa aataagaaat tagccgggtg tggcacgcac ctgtagtccc agctacttgg gagcctgagg caggagaatc gcttgaacct gggaagtgga ggttgagtga gccgggaccg tgccattgta ctccagcctg ggtgacagag cgagattccg tctcaaaaaa aaaaaaaaaa agcccacctg aaagcctgtc tctttccact ttgttggccc ttccagtggg attatcgagc atgttgtttt ttcatagtgc ctttttcctt atttcaaggg ttgcttctga gtggtgtttt tttttttttt ttaatttgtt ttgttttaaa ataagttaaa ggcagtccag agcttttcag ccaatttgtc tcctactctg tgtaaatatt tttccctccg ggcaggggag ccagggtaga gcaaaggaga caaagcagga gtggaaggtg aggcgttctc ctgcttgtac taagccagga ggctttaagc tccagcttta agggttgtga gccccttggg ggttcaggga actgcttgcc cagggtgcag tgtgagtgtg atgggccacc ggggcaagag ggaaggtgac cgcccagctc tcccacatcc cactggatct ggcttacagg ggggtcggaa gcctgtcctc accgtctcgg gggttgtggc ccccgccccc tccctatatg cacccctgga accagcaagt cccagacaag gagagcggag gaggaagtca tgggaacgca gcctccagtt gtagcaggtt tcactattcc tatgctgggg tacacagtga gagtactcac ttttcacttg tcttgctctt agattgggcc atggctttca tcctgtgtcc cctgacctgt ccaggtgagt gtgagggcag cactgggaag ctggagtgct gcttgtgcct cccttcccag tgggctgtgt tgactgctgc tccccacccc taccgatggt cccaggaagc agggagagtt ggggaaggca agattggaaa gacaggaaga ccaaggcctc ggcagaactc tctgtcttct ctccacttct ggtcccctgt ggtgatgtgc ctgtaatctt tttctccacc caaacccctt cccacgacaa aaacaagact gcctccctct cttccgggag ctggtgacag ccttgggcct ttcagtccca aagcggccga 1440 1500 1560 1620 1680 1740 1800 1860 1920 1980 2040 2100 2160 2220 2280 2340 2400 2460 2520 2580 2640 2700 2760 2820 2880 2940 71 201237174 tgggagtctc cctccgactc cagatatgaa cagggcccag gcctggagcg tttgctgtgc 3000 caggaggcgg cagctcttct gggcagagcc tgtccccgcc ttccctcact cttcctcatc 3060 ctgcttctct tttcctcgca gatgataaaa ggaatctggc attctacacc tggaccattt 3120 gattgtttta ttttggaatt ggtgtatatc atgaagcctt gctgaactaa gttttgtgtg 3180 tatatattta aaaaaaaaat cagtgtttaa ataaagacct atgtacttaa tcctttaact 3240 ctgcggatag catttggtag gtagtgatta actgtgaata ataaatacac aatgaattct 3300 tcaaaaaaaa aaaaaaa 3317 <210> 114 <211> 4772 <212> DNA <213> 人類 <400> 114 gctcagttgc cgggcggggg agggcgcgtc cggtttttct caggggacgt tgaaattatt 60 tttgtaacgg gagtcgggag aggacggggc gtgccccgac gtgcgcgcgc gtcgtcctcc 120 ccggcgctcc tccacagctc gctggctccc gccgcggaaa ggcgtcatgc cgcccaaaac 180 cccccgaaaa acggccgcca ccgccgccgc tgccgccgcg gaacccccgg caccgccgcc 240 gccgccccct cctgaggagg acccagagca ggacagcggc ccggaggacc tgcctctcgt 300 caggcttgag tttgaagaaa cagaagaacc tgattttact gcattatgtc agaaattaaa 360 gataccagat catgtcagag agagagcttg gttaacttgg gagaaagttt catctgtgga 420 tggagtattg ggaggttata ttcaaaagaa aaaggaactg tggggaatct gtatctttat 480 tgcagcagtt gacctagatg agatgtcgtt cacttttact gagctacaga aaaacataga 540 aatcagtgtc cataaattct ttaacttact aaaagaaatt gataccagta ccaaagttga 600 taatgctatg tcaagactgt tgaagaagta tgatgtattg tttgcactct tcagcaaatt 660 ggaaaggaca tgtgaactta tatatttgac acaacccagc agttcgatat ctactgaaat 720 aaattctgca ttggtgctaa aagtttcttg gatcacattt ttattagcta aaggggaagt 780 attacaaatg gaagatgatc tggtgatttc atttcagtta atgctatgtg tccttgacta 840 ttttattaaa ctctcacctc ccatgttgct caaagaacca tataaaacag ctgttatacc 900 cattaatggt tcacctcgaa cacccaggcg aggtcagaac aggagtgcac ggatagcaaa 960 acaactagaa aatgatacaa gaattattga agttctctgt aaagaacatg aatgtaatat 1020 72 1080 201237174 agatgaggtg aaaaatgttt atttcaaaaa ttttatacct tttatgaatt ctcttggact tgtaacatct aatggacttc cagaggttga aaatctttct aaacgatacg aagaaattta tcttaaaaat aaagatctag atgcaagatt atttttggat catgataaaa ctcttcagac tgattctata gacagttttg aaacacagag aacaccacga aaaagtaacc ttgatgaaga ggtgaatgta attcctccac acactccagt taggactgtt atgaacacta tccaacaatt aatgatgatt ttaaattcag caagtgatca accttcagaa aatctgattt cctattttaa caactgcaca gtgaatccaa aagaaagtat actgaaaaga gtgaaggata taggatacat ctttaaagag aaatttgcta aagctgtggg acagggttgt gtcgaaattg gatcacagcg atacaaactt ggagttcgct tgtattaccg agtaatggaa tccatgctta aatcagaaga agaacgatta tccattcaaa attttagcaa acttctgaat gacaacattt ttcatatgtc tttattggcg tgcgctcttg aggttgtaat ggccacatat agcagaagta catctcagaa tcttgattct ggaacagatt tgtctttccc atggattctg aatgtgctta atttaaaagc ctttgatttt tacaaagtga tcgaaagttt tatcaaagca gaaggcaact tgacaagaga aatgataaaa catttagaac gatgtgaaca tcgaatcatg gaatcccttg catggctctc agattcacct ttatttgatc ttattaaaca atcaaaggac cgagaaggac caactgatca ccttgaatct gcttgtcctc ttaatcttcc tctccagaat aatcacactg cagcagatat gtatctttct cctgtaagat ctccaaagaa aaaaggttca actacgcgtg taaattctac tgcaaatgca gagacacaag caacctcagc cttccagacc cagaagccat tgaaatctac ctctctttca ctgttttata aaaaagtgta tcggctagcc tatctccggc taaatacact ttgtgaacgc cttctgtctg agcacccaga attagaacat atcatctgga cccttttcca gcacaccctg cagaatgagt atgaactcat gagagacagg catttggacc aaattatgat gtgttccatg tatggcatat gcaaagtgaa gaatatagac cttaaattca aaatcattgt aacagcatac aaggatcttc ctcatgctgt tcaggagaca ttcaaacgtg ttttgatcaa agaagaggag tatgattcta ttatagtatt ctataactcg gtcttcatgc agagactgaa aacaaatatt ttgcagtatg cttccaccag gccccctacc ttgtcaccaa tacctcacat tcctcgaagc ccttacaagt ttcctagttc acccttacgg attcctggag ggaacatcta tatttcaccc ctgaagagtc catataaaat ttcagaaggt ctgccaacac caacaaaaat 1140 1200 1260 1320 1380 1440 1500 1560 1620 1680 1740 1800 1860 1920 1980 2040 2100 2160 2220 2280 2340 2400 2460 2520 2580 2640 73 201237174 gactccaaga tcaagaatct tagtatcaat tggtgaatca ttcgggactt ctgagaagtt 2700 ccagaaaata aatcagatgg tatgtaacag cgaccgtgtg ctcaaaagaa gtgctgaagg 2760 aagcaaccct cctaaaccac tgaaaaaact acgctttgat attgaaggat cagatgaagc 2820 agatggaagt aaacatctcc caggagagtc caaatttcag cagaaactgg cagaaatgac 2880 ttctactcga acacgaatgc aaaagcagaa aatgaatgat agcatggata cctcaaacaa 2940 ggaagagaaa tgaggatctc aggaccttgg tggacactgt gtacacctct ggattcattg 3000 tctctcacag atgtgactgt ataactttcc caggttctgt ttatggccac atttaatatc 3060 ttcagctctt tttgtggata taaaatgtgc agatgcaatt gtttgggtga ttcctaagcc 3120 acttgaaatg ttagtcattg ttatttatac aagattgaaa atcttgtgta aatcctgcca 3180 tttaaaaagt tgtagcagat tgtttcctct tccaaagtaa aattgctgtg ctttatggat 3240 agtaagaatg gccctagagt gggagtcctg ataacccagg cctgtctgac tactttgcct 3300 tcttttgtag catataggtg atgtttgctc ttgtttttat taatttatat gtatattttt 3360 ttaatttaac atgaacaccc ttagaaaatg tgtcctatct atcttccaaa tgcaatttga 3420 ttgactgccc attcaccaaa attatcctga actcttctgc aaaaatggat attattagaa 3480 attagaaaaa aattactaat tttacacatt agattttatt ttactattgg aatctgatat 3540 actgtgtgct tgttttataa aattttgctt ttaattaaat aaaagctgga agcaaagtat 3600 aaccatatga tactatcata ctactgaaac agatttcata cctcagaatg taaaagaact 3660 tactgattat tttcttcatc caacttatgt ttttaaatga ggattattga tagtactctt 3720 ggtttttata ccattcagat cactgaattt ataaagtacc catctagtac ttgaaaaagt 3780 aaagtgttct gccagatctt aggtatagag gaccctaaca cagtatatcc caagtgcact 3840 ttctaatgtt tctgggtcct gaagaattaa gatacaaatt aattttactc cataaacaga 3900 ctgttaatta taggagcctt aatttttttt tcatagagat ttgtctaatt gcatctcaaa 3960 attattctgc cctccttaat ttgggaaggt ttgtgttttc tctggaatgg tacatgtctt 4020 ccatgtatct tttgaactgg caattgtcta tttatctttt atttttttaa gtcagtatgg 4080 tctaacactg gcatgttcaa agccacatta tttctagtcc aaaattacaa gtaatcaagg 4140 gtcattatgg gttaggcatt aatgtttcta tctgattttg tgcaaaagct tcaaattaaa 4200 acagctgcat tagaaaaaga ggcgcttctc ccctccccta cacctaaagg tgtatttaaa 4260 74 201237174 ctatcttgtg tgattaactt atttagagat gctgtaactt aaaatagggg atatttaagg 4320 tagcttcagc tagcttttag gaaaatcact ttgtctaact cagaattatt tttaaaaaga 4380 aatctggtct tgttagaaaa caaaiatttta ttttgtgctc atttaagttt caaacttact 4440 attttgacag ttattttgat aacaatgaca ctagaaaact tgactccatt tcatcattgt 4500 ttctgcatga atatcataca aatcagttag tttttaggtc aagggcttac tatttctggg 4560 tcttttgcta ctaagttcac attagaatta gtgccagaat tttaggaact tcagagatcg 4620 tgtattgaga tttcttaaat aatgcttcag atattattgc tttattgctt ttttgtattg 4680 gttaaaactg tacatttaaa attgctatgt tactattttc tacaattaat agtttgtcta 4740 ttttaaaata aattagttgt taagagtctt aa 4772 <210> 115 <211> 1260 <212> DNA <213> 人類 <400> 115 aaattgagcc cgcagcctcc cgcttcgctc tctgctcctc ctgttcgaca gtcagccgca 60 tcttcttttg cgtcgccagc cgagccacat cgctcagaca ccatggggaa ggtgaaggtc 120 ggagtcaacg gatttggtcg tattgggcgc ctggtcacca gggctgcttt taactctggt 180 aaagtggata ttgttgccat caatgacccc ttcattgacc tcaactacat ggtttacatg 240 ttccaatatg attccaccca tggcaaattc catggcaccg tcaaggctga gaacgggaag 300 cttgtcatca atggaaatcc catcaccatc ttccaggagc gagatccctc caaaatcaag 360 tggggcgatg ctggcgctga gtacgtcgtg gagtccactg gcgtcttcac caccatggag 420 aaggctgggg ctcatttgca ggggggagcc aaaagggtca tcatctctgc cccctctgct 480 gatgccccca tgttcgtcat gggtgtgaac catgagaagt atgacaacag cctcaagatc 540 atcagcaatg cctcctgcac caccaactgc ttagcacccc tggccaaggt catccatgac 600 aactttggta tcgtggaagg actcatgacc acagtccatg ccatcactgc cacccagaag 660 actgtggatg gcccctccgg gaaactgtgg cgtgatggcc gcggggctct ccagaacatc 720 atccctgcct ctactggcgc tgccaaggct gtgggcaagg tcatccctga gctgaacggg 780 aagctcactg gcatggcctt ccgtgtcccc actgccaacg tgtcagtggt ggacctgacc 840 75 201237174 tgccgtct在g aaaaacctgc caaatatgat gacatc丑这g在这ggtggtgaa gcaggcgtcg 900 gagggccccc tcaagggcat cctgggctac actgagcacc aggtggtctc ctctgacttc 960 aacagcgaca cccactcctc cacctttgac gctggggctg gcattgccct caacgaccac 1020 tttgtcaagc tcatttcctg gtatgacaac gaatttggct acagcaacag ggtggtggac 1080 ctcatggccc acatggcctc caaggagtaa gacccctgga ccaccagccc cagcaagagc 1140 acaagaggaa gagagagacc ctcactgctg gggagtccct gccacactca gtcccccacc 1200 acactgaatc tcccctcctc acagttgcca tgtagacccc ttgaagaggg gaggggccta 1260 <210> 116 <211> 974 <212> DNA <213> 人類 <400> 116 gtttgcttag gtgaggcgca gacggggaag cggagccaac atgccagtgg cccggagctg 60 ggtttgtcgc aaaacttatg tgaccccgcg gagacccttc gagaaatctc gtctcgacca 120 agagctgaag ctgatcggcg agtatgggct ccggaacaaa cgtgaggtct ggagggtcaa 180 atttaccctg gccaagatcc gcaaggccgc ccgggaactg ctgacgcttg atgagaagga 240 cccacggcgt ctgttcgaag gcaacgccct gctgcggcgg ctggtccgca ttggggtgct 300 ggatgagggc aagatgaagc tggattacat cctgggcctg aagatagagg atttcttaga 360 gagacgcctg cagacccagg tcttcaagct gggcttggcc aagtccatcc accacgctcg 420 cgtgctgatc cgccagcgcc atatcaggta ccacctcgga tgggcacctg aatcttcctc 480 cacctgcccc tctgatggtt gccctcacta agcctgctgt ccctatctcc tatgcagccc 540 tcggaggtga tgggtgtgaa ctcacccaga gggtacagat tcacccttgc acacagctca 600 ccagggagct ggggcagcct cttgccccaa tagcccagcg caagggtcac tgcggctcta 660 gccgtacacc ttgtgaaggc ctctgccagg catgtgggca gctggacagg gtccgcaagc 720 aggtggtgaa catcccgtcc ttcattgtcc gcctggattc ccagaagcac atcgacttct 780 ctctgcgctc tccctacggg ggtggccgcc cgggccgcgt gaagaggaag aatgccaaga 840 agggccaggg tggggctggg gctggagacg acgaggagga ggattaagtc cacctgtccc 900 tcctgggctg ctggattgtc tcgttttcct gccaaataaa caggatcagc gctttaaaaa 960 aaaaaaaaaa aaaa 974 76

Claims (1)

  1. 201237174 七、申請專利範圍： 1. -種綱生物樣本巾腫瘤細胞㈣杉賴化合物分子的 反應的方法，其包括以下步驟： a) 從該患者的癌症部位獲得試驗樣本； b) 獲得對照樣本； c) 測量Bubl(苯并咪w同系物解除抑制芽殖)之以 及 屮比較在試驗樣本和對照樣本中所測量# 之水平； 八中與對照樣本比較，在試驗樣本内所測的触1水平 的下降表輯紫杉_化合物分子抗性的增強。 2.=申請專利範圍第！項之方法，其中該紫杉醇類化合物 /刀子係選自由太平洋紫杉醇、多西紫杉醇XRp麵和 XRP6258組成之群組。 3·如申請專利範圍第1之方法，其中該歸i的水平是由 mRNA、DNA或蛋白測量。 4. 如申請專利範圍第3項之方法，其中該_^是採用選 自由下列組狀群_技術關量：原姆交、反轉錄酶 聚合酶鏈反應、核_交、電泳 '財墨點法和質譜。 5. 如申請專利範圍第3項之方法，其中該DNA是採用選自 由下列組成之群組的技術所測量：定量聚合酶鍵反應、基 因組DNA·晶片、原位雜交、電泳、南方墨點法和質譜。 6. 如㈣專利範圍第3項之方法，其中該蛋#採用選自 由下列組成之群組的技術所測量：免疫測定法、西方墨點 法、ELISA，以及質譜。 201237174 .種預測或監測腫瘤細胞對紫杉醇類化合物分子的反應 之套組，其中該套組包含可檢測標記抗體、可檢測標記抗 體片段或可檢測標記寡核聽，該寡核苷酸包含能在嚴格 條件下與包含SEQ ID NC) : 1()9的㈣丨核碰序列雜交 的核酸。 8·種預測或監測癌症患者對紫杉醇類化合物分子的反應 之套組’其中該套組包含： a) 從身體樣本分離總RNA之RNA回收溶液； b) 反轉錄總RNA以獲得CDNA之酵素；以及 c) 使該cDNA經由聚合酶鏈反應擴增之一組引子， 其中一個或兩個引子具有可檢測標記，且兩個引子均衍生 自包含SEQ ID NO··· 109的Bubl核苷酸序列。 9. 如申請專利範圍第7或8項之套組，其中該可檢測標記 係選自由下列組成之群組：一種酶、一種放射性同位素、 或一種發螢光的化合物、一種化學發光劑分子、不透射線 的物質、脂質體，以及半抗原分子。 10. —種預測生物樣本中腫瘤細胞對紫杉醇類化合物分子的 反應的方法，其包括以下步驟： a) 測篁來自該患者的癌症部位之試驗樣本中Bub丨(苯并 咪唑1同系物解除抑制芽殖)之水平； b) 測量該試驗樣本中一種或一種以上參照標記物的水 平’其中該參照標記物係選自由下列組成之群組：甘油 醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)及RPS9 ;及 c) 比較在|式驗樣本中所測的Bub 1和該一種或一種以上來 2 201237174 照標記物的水平； 其中’與該一種或一種以上參照標記物的水平比較，Bubl 水平的下降表示對紫杉醇類化合物分子抗性的增強。 11. 如申請專利範圍第10項之方法，其中該紫杉醇類化合物 分子係選自由太平洋紫杉醇、多西紫杉醇XRP9881和 XRP6258組成之群組。 12. 如申請專利範圍第10項之方法，其中該Bubl的水平是 由mRNA、DNA或蛋白測量。 13. 如申請專利範圍第12項之方法，其中該mRNA是採用 選自由下列組成之群組的技術所測量：原位雜交、反轉錄 酶聚合酶鏈反應、核酸雜交、電泳、北方墨點法和質譜。 14. 如申請專利範圍第12項之方法，其中該DNA是採用選 自由下列組成之群組的技術所測量：定量聚合酶鏈反應、 基因組DNA-晶片、原位雜交、電泳、南方墨點法和質譜。 15. 如申請專利範圍第12項之方法，其中該蛋白是採用選自 由下列組成之群組的技術所測量：免疫測定法、西方墨點 法、ELISA，以及質譜。 16. —種預測或監測腫瘤細胞對紫杉醇類化合物分子的反應 的套組，其中該套組包含可檢測標記抗體、可檢測標記抗 體片段或可檢測標記寡核苷酸，該寡核苷酸包含能在嚴格 條件下與包含SEQ ID NO.: 109的Bubl核苷酸序列雜交 的核酸。 201237174 17. 如申請專利範圍第16項之套組，其進一步包含可檢測標 記抗體、可檢測標記抗體片段或可檢測標記寡核苷酸，該 寡核苷酸包含能在嚴格條件下與參照標記物雜交的核酸。 18. —種預測或監測生物樣本中腫瘤細胞對紫杉醇類化合物 分子的反應的套組，其中該套組包含： a) 從身體樣本分離總RNA之RNA回收溶液； b) 反轉錄總RNA以獲得cDNA之酵素； c) 使與Bubl (SEQ ID NO·: 109)相關的cDNA經由聚合酶 鏈反應擴增之第一組引子，以及 d) 使與參照標記物相關的cDNA經由聚合酶鏈反應擴增 之第二組引子， 其中，一個或一個以上之引子具有可檢測標記。 19. 如申請專利範圍第16或18項之套組，其中該可檢測標 .....〇 * « ' 記係包含一種酶、一種放射性同位素、或一種發螢光的化 合物、一種化學發光劑分子、不透射線的物質、脂質體， 以及半抗原分子。 20. 如申請專利範圍第17或18項之套組，其中該參照標記 物係選自由 GAPDH (SEQ ID NO.: 115)及 RPS9 (SEQ ID NO·: 116)組成之群組。 4
TW101120202A 2004-12-08 2005-12-08 Method for measuring resistance or sensitivity to Docetaxel TW201237174A (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US63429804P 2004-12-08 2004-12-08

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW201237174A true TW201237174A (en) 2012-09-16

Family

ID=36512512

Family Applications (10)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW101120209A TW201237178A (en) 2004-12-08 2005-12-08 Method for measuring resistance or sensitivity to Docetaxel
TW101120204A TW201241177A (en) 2004-12-08 2005-12-08 Method for measuring resistance or sensitivity to Docetaxel
TW101120208A TW201237177A (en) 2004-12-08 2005-12-08 Method for measuring resistance or sensitivity to Docetaxel
TW101120207A TW201241178A (en) 2004-12-08 2005-12-08 Method for measuring resistance or sensitivity to Docetaxel
TW101120206A TW201237176A (en) 2004-12-08 2005-12-08 Method for measuring resistance or sensitivity to Docetaxel
TW101120202A TW201237174A (en) 2004-12-08 2005-12-08 Method for measuring resistance or sensitivity to Docetaxel
TW101120210A TW201237179A (en) 2004-12-08 2005-12-08 Method for measuring resistance or sensitivity to Docetaxel
TW094143285A TW200636076A (en) 2004-12-08 2005-12-08 Method for measuring resistance or sensitivity to docetaxel
TW101120205A TW201237175A (en) 2004-12-08 2005-12-08 Method for measuring resistance or sensitivity to Docetaxel
TW101120203A TW201241176A (en) 2004-12-08 2005-12-08 Method for measuring resistance or sensitivity to Docetaxel

Family Applications Before (5)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW101120209A TW201237178A (en) 2004-12-08 2005-12-08 Method for measuring resistance or sensitivity to Docetaxel
TW101120204A TW201241177A (en) 2004-12-08 2005-12-08 Method for measuring resistance or sensitivity to Docetaxel
TW101120208A TW201237177A (en) 2004-12-08 2005-12-08 Method for measuring resistance or sensitivity to Docetaxel
TW101120207A TW201241178A (en) 2004-12-08 2005-12-08 Method for measuring resistance or sensitivity to Docetaxel
TW101120206A TW201237176A (en) 2004-12-08 2005-12-08 Method for measuring resistance or sensitivity to Docetaxel

Family Applications After (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW101120210A TW201237179A (en) 2004-12-08 2005-12-08 Method for measuring resistance or sensitivity to Docetaxel
TW094143285A TW200636076A (en) 2004-12-08 2005-12-08 Method for measuring resistance or sensitivity to docetaxel
TW101120205A TW201237175A (en) 2004-12-08 2005-12-08 Method for measuring resistance or sensitivity to Docetaxel
TW101120203A TW201241176A (en) 2004-12-08 2005-12-08 Method for measuring resistance or sensitivity to Docetaxel

Country Status (16)

Country Link
US (2) US20090226894A1 (zh)
EP (10) EP2395102A1 (zh)
JP (5) JP5139811B2 (zh)
KR (10) KR101357032B1 (zh)
CN (10) CN102605067A (zh)
AR (1) AR051523A1 (zh)
AU (1) AU2005314335C1 (zh)
BR (1) BRPI0518884A2 (zh)
CA (1) CA2589918A1 (zh)
HK (2) HK1111441A1 (zh)
IL (9) IL183718A (zh)
MX (1) MX2007006867A (zh)
RU (2) RU2403574C2 (zh)
SG (2) SG194337A1 (zh)
TW (10) TW201237178A (zh)
WO (1) WO2006062811A2 (zh)

Families Citing this family (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB0606096D0 (en) 2006-03-27 2006-05-03 Cbmm Sa Screening method
JP2010512730A (ja) * 2006-12-13 2010-04-30 オンコセラピー・サイエンス株式会社 肺癌の腫瘍マーカーおよび治療標的としてのｔｔｋ
ES2447868T3 (es) * 2007-03-14 2014-03-13 Bionsil S.R.L. In Liquidazione Inhibidores de la BTK para uso en el tratamiento de tumores epiteliales resistentes a fármacos quimioterapéuticos
CN101932938B (zh) * 2007-11-30 2014-08-27 克雷特诊疗服务公司 作为标记物用于化学疗法的tle3
EP2177630A1 (en) 2008-10-02 2010-04-21 Institut Gustave Roussy Methods for predicting or monitoring whether a patient affected by a cancer is responsive to a treatment with a molecule of the taxoid family
TW201102081A (en) 2009-05-11 2011-01-16 Oncotherapy Science Inc TTK peptides and vaccines including the same
CA2779009A1 (en) 2009-10-29 2011-05-05 Aventis Pharma S.A. Novel antitumoral use of cabazitaxel
WO2011124669A1 (en) 2010-04-08 2011-10-13 Institut Gustave Roussy Methods for predicting or monitoring whether a patient affected by a cancer is responsive to a treatment with a molecule of the taxoid family
JP2012005479A (ja) * 2010-05-26 2012-01-12 Japanese Foundation For Cancer Research 抗癌剤のスクリーニング方法
PT2666016T (pt) * 2011-01-21 2017-04-03 Basilea Pharmaceutica Ag Utilização de bubr1 como um biomarcador da resposta farmacológica a furazanobenzimidazolos
CN104395752B (zh) * 2011-11-21 2017-09-15 泰纬生命科技股份有限公司 对hec1活性调节剂具有反应的癌症的生物标记
CA2857191A1 (en) * 2011-11-28 2013-06-06 National Research Council Of Canada Paclitaxel response markers for cancer
CN102621325B (zh) * 2012-04-06 2014-11-12 上海蓝怡科技有限公司 用于检测血液中多西他赛浓度的试剂盒
CN105803053B (zh) * 2014-12-31 2021-03-16 上海吉凯基因科技有限公司 人rbm17基因的用途及其相关药物
CN105925611A (zh) * 2016-04-23 2016-09-07 同济大学苏州研究院 靶向hsp70基因rna干扰重组慢病毒载体及其构建方法
CN107447028A (zh) * 2017-09-13 2017-12-08 赵小刚 检测rb1基因i680t位点突变的试剂盒
CN108931633B (zh) * 2018-05-22 2021-08-27 郑州大学第一附属医院 胆囊癌诊断和预后判断标志物pim1
CN111944905B (zh) * 2020-08-20 2023-06-02 武汉凯德维斯医学检验实验室有限公司 人类基因组合及其在制备评估宫颈癌新辅助化疗药物敏感性试剂盒中的应用
KR102605155B1 (ko) 2022-03-04 2023-11-23 우순 다기능 표적 이송장치
KR102596893B1 (ko) 2022-03-04 2023-11-01 우순 표적지 이송장치

Family Cites Families (36)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL7807532A (nl) 1978-07-13 1980-01-15 Akzo Nv Metaal-immunotest.
NL8000173A (nl) 1980-01-11 1981-08-03 Akzo Nv Toepassing van in water dispergeerbare, hydrofobe kleurstoffen als label in immunochemische testen.
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4703017C1 (en) 1984-02-14 2001-12-04 Becton Dickinson Co Solid phase assay with visual readout
JPS61231031A (ja) * 1985-04-08 1986-10-15 Agency Of Ind Science & Technol 二硫化炭素重合体の製造方法
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
JPH0664061B2 (ja) 1987-02-27 1994-08-22 イーストマン コダック カンパニー 免疫反応性試薬、その製造法及び免疫反応性種を測定するためのその用途
EP0280559B1 (en) 1987-02-27 1993-10-20 EASTMAN KODAK COMPANY (a New Jersey corporation) Agglutination immunoassay and kit for determination of a multivalent immune species using a buffered salt wash solution
US4857453A (en) 1987-04-07 1989-08-15 Syntex (U.S.A.) Inc. Immunoassay device
JPH0746107B2 (ja) 1987-04-27 1995-05-17 ユニリーバー・ナームローゼ・ベンノートシヤープ 検定法
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5859205A (en) * 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
WO1997005157A1 (en) * 1995-08-01 1997-02-13 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Gene encoding the human homolog of mad2
US6410312B1 (en) * 1997-12-19 2002-06-25 Chiron Corporation huBUB3 gene involved in human cancers
US6489137B2 (en) * 1997-06-11 2002-12-03 Chiron Corporation Detection of loss of the wild-type huBUB1 gene
CA2311414A1 (en) * 1997-11-27 1999-06-10 Chugai Research Institute For Molecular Medicine, Inc. Diagnostic method, diagnostic reagent and therapeutic preparation for diseases caused by variation in lkb1 gene
CA2321480A1 (en) * 1998-02-18 1999-08-26 Laurence Anthony Seabra Treating cancer
DE69937835T2 (de) * 1998-09-24 2009-01-02 Promega Corp., Madison Antikörper für apoptosemarker und anwendungsverfahren
EP1140137A2 (en) * 1998-12-18 2001-10-10 Scios Inc. Method for detection and use of differentially expressed genes in disease states
US20020120004A1 (en) * 2000-02-17 2002-08-29 Roth Frederick P. Methods and compositions for the identification, assessment, prevention and therapy of human cancers
WO2001061048A2 (en) * 2000-02-17 2001-08-23 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for the identification, assessment, prevention and therapy of human cancers
KR100876327B1 (ko) * 2001-02-21 2008-12-31 노바티스 백신즈 앤드 다이아그노스틱스 인코포레이티드 진단에서의, 그리고 암에서 치료 표적으로서의 ｔｔｋ
US6783597B2 (en) * 2001-03-13 2004-08-31 3M Innovative Properties Company Filament recoating apparatus and method
US7229774B2 (en) * 2001-08-02 2007-06-12 Regents Of The University Of Michigan Expression profile of prostate cancer
DE10139283A1 (de) * 2001-08-09 2003-03-13 Epigenomics Ag Verfahren und Nukleinsäuren zur Analyse von Colon-Krebs
US20030235581A1 (en) * 2002-06-20 2003-12-25 George Pieczenik Ligands for Reproductive Science
ES2359055T3 (es) * 2002-09-11 2011-05-18 Genentech, Inc. Composiciones y métodos para el diagnóstico y el tratamiento de tumores.
US20040214203A1 (en) * 2002-12-12 2004-10-28 Oncotech, Inc. Genes related to sensitivity and resistance to chemotherapeutic drug treatment
DE10260264A1 (de) * 2002-12-20 2004-07-01 GSF-Forschungszentrum für Umwelt und Gesundheit GmbH Verfahren und Zelllinie zur Identifizierung proliferationshemmender, anti-inflammatorischer oder proliferationsfördender Wirkstoffe
EP1661991A4 (en) * 2003-08-24 2007-10-10 Univ Nihon WITH HEPATOCELLULAR CARCINOMA ASSOCIATED GEN
US20050136177A1 (en) * 2003-08-25 2005-06-23 Anthony Hesse Method for coloring landscaping materials using foamable dry colorant
ES2550614T3 (es) * 2004-04-09 2015-11-11 Genomic Health, Inc. Marcadores de expresión génica para predecir la respuesta a la quimioterapia
JP2006014722A (ja) * 2004-06-02 2006-01-19 Keio Gijuku 遺伝子マーカー及びその利用
GB0426393D0 (en) * 2004-12-01 2005-01-05 Cancer Rec Tech Ltd Materials and methods relating to modulators of spindle checkpoint kinases
US7957910B2 (en) * 2005-01-31 2011-06-07 Sysmex Corporation Method for predicting effectiveness of chemotherapy
EP2177630A1 (en) * 2008-10-02 2010-04-21 Institut Gustave Roussy Methods for predicting or monitoring whether a patient affected by a cancer is responsive to a treatment with a molecule of the taxoid family

Also Published As

Publication number Publication date
IL210298A0 (en) 2011-03-31
AU2005314335C1 (en) 2012-08-16
EP1831398B1 (en) 2014-10-29
EP2395103A1 (en) 2011-12-14
EP2395110A1 (en) 2011-12-14
KR101357039B1 (ko) 2014-02-03
KR101323574B1 (ko) 2013-10-30
US20090226894A1 (en) 2009-09-10
KR101347106B1 (ko) 2014-01-02
KR101357032B1 (ko) 2014-02-03
IL221772A0 (en) 2012-10-31
CN102618641A (zh) 2012-08-01
SG194337A1 (en) 2013-11-29
TW201237179A (en) 2012-09-16
IL225469A0 (en) 2013-06-27
CN102605066A (zh) 2012-07-25
EP2395102A1 (en) 2011-12-14
MX2007006867A (es) 2007-08-06
HK1153786A1 (en) 2012-04-05
CA2589918A1 (en) 2006-06-15
CN102605067A (zh) 2012-07-25
IL210299A (en) 2012-12-31
KR101357037B1 (ko) 2014-02-03
IL225468A0 (en) 2013-06-27
KR20130105759A (ko) 2013-09-25
RU2403574C2 (ru) 2010-11-10
EP2395108A1 (en) 2011-12-14
RU2007125722A (ru) 2009-01-20
CN102747141A (zh) 2012-10-24
CN101072883A (zh) 2007-11-14
EP2395107A1 (en) 2011-12-14
JP2012120532A (ja) 2012-06-28
TW201237178A (en) 2012-09-16
TW201237176A (en) 2012-09-16
KR20070085986A (ko) 2007-08-27
IL183718A (en) 2013-04-30
JP2008522615A (ja) 2008-07-03
TW201237177A (en) 2012-09-16
SG156625A1 (en) 2009-11-26
CN101072883B (zh) 2012-05-23
EP2395106A1 (en) 2011-12-14
IL183718A0 (en) 2007-09-20
CN102618641B (zh) 2014-08-13
CN102634574A (zh) 2012-08-15
JP5531001B2 (ja) 2014-06-25
KR20130105758A (ko) 2013-09-25
TW201241178A (en) 2012-10-16
CN102618642B (zh) 2014-12-31
TW201237175A (en) 2012-09-16
CN102618642A (zh) 2012-08-01
EP2395104A1 (en) 2011-12-14
IL205636A (en) 2012-08-30
TW200636076A (en) 2006-10-16
KR20130113526A (ko) 2013-10-15
JP2012100666A (ja) 2012-05-31
IL210298A (en) 2012-12-31
KR101357033B1 (ko) 2014-02-03
KR20130113527A (ko) 2013-10-15
KR20130105761A (ko) 2013-09-25
KR101357040B1 (ko) 2014-02-03
WO2006062811A2 (en) 2006-06-15
RU2010122759A (ru) 2011-12-10
EP2395105A1 (en) 2011-12-14
TW201241177A (en) 2012-10-16
CN102747142A (zh) 2012-10-24
AU2005314335A1 (en) 2006-06-15
IL210299A0 (en) 2011-03-31
JP2012100665A (ja) 2012-05-31
KR101357038B1 (ko) 2014-02-03
CN101974619A (zh) 2011-02-16
CN101974619B (zh) 2012-11-21
KR20130099246A (ko) 2013-09-05
JP2012115267A (ja) 2012-06-21
IL221772A (en) 2014-06-30
EP2395109A1 (en) 2011-12-14
KR20130105760A (ko) 2013-09-25
AU2005314335B2 (en) 2012-02-02
WO2006062811A3 (en) 2006-09-14
BRPI0518884A2 (pt) 2008-12-30
IL205702A0 (en) 2011-07-31
AR051523A1 (es) 2007-01-17
CN102634574B (zh) 2014-11-12
JP5139811B2 (ja) 2013-02-06
KR101347107B1 (ko) 2014-01-02
TW201241176A (en) 2012-10-16
KR101357035B1 (ko) 2014-02-03
KR20130004381A (ko) 2013-01-09
CN102747140A (zh) 2012-10-24
US20130252837A1 (en) 2013-09-26
EP1831398A2 (en) 2007-09-12
JP5530999B2 (ja) 2014-06-25
HK1111441A1 (en) 2008-08-08
JP5531000B2 (ja) 2014-06-25
JP5531002B2 (ja) 2014-06-25
IL205635A (en) 2013-02-28
KR20130105762A (ko) 2013-09-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101323574B1 (ko) 도세탁셀에 대한 내성 또는 감수성을 측정하는 방법
RU2721130C2 (ru) Оценка активности путей клеточной сигнализации с помощью линейной комбинации(ий) экспрессий генов-мишеней
RU2719194C2 (ru) Оценка активности клеточных сигнальных путей с применением вероятностного моделирования экспрессии целевых генов
DK2681333T3 (en) EVALUATION OF RESPONSE TO GASTROENTEROPANCREATIC NEUROENDOCRINE NEOPLASIS (GEP-NENE) THERAPY
KR100964193B1 (ko) 간암 예후 마커
CA2430981A1 (en) Gene expression profiling of primary breast carcinomas using arrays of candidate genes
KR20120082906A (ko) 자가포식현상-향상 유전자 생성물의 조절을 통한 자가포식현상의 조절 방법
US20230022417A1 (en) Chemical compositions and methods of use
WO2018217627A1 (en) Methods for melanoma detection
EP1692311A2 (en) Genes associated with colorectal cancer
KR20100115283A (ko) 간암 예후 마커