CN104395752B - 对hec1活性调节剂具有反应的癌症的生物标记 - Google Patents

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Abstract

所考虑的组合物和方法涉及到用Hec1抑制剂进行肿瘤疾病治疗的相关的生物标记和方法。Hec1(HEC)、Rb(RB1)和/或p53(TP53)的基因状态和/或表达水平可用作对Hec1抑制剂治疗的敏感性的生物标记。另外，当与细胞毒性药联用时，Hec1抑制剂可显示出协同效应。

Description

对HEC1活性调节剂具有反应的癌症的生物标记
本申请要求于2011年11月21日申请的、同时待审的序列号为61/562,177的美国临时申请的优先权。
发明领域
本发明领域是鉴定和使用用于判定增殖性疾病对分子靶向治疗药的敏感性的生物标记，尤其是HEC1抑制剂与细胞毒性剂组合。
发明背景
在2012年美国预计有超过160万个新增癌症诊断病例，且有约580,000人死于癌症。癌症是目前美国第二最常见的致死病因，仅次于首位致死疾病心脏病。虽然在过去十年中，已经开发出各种新的癌症治疗方法，但在1999年和2006年之间，所有诊断出癌症的5年相对生存率为68%，估计死亡率对于肺癌的男性和女性分别为28%和26%，女性乳腺癌是15%，前列腺癌是11%。这些统计资料表明迫切需要进一步改善可用的治疗。
通过利用生物标记谱以更有效地预测患者对药物的反应并减少花费在让疾病发展的无效治疗上的时间，个性化医疗已经革新了现有医学治疗的试验及出错过程并改善了患者的反应率。至少在某些情况下，这种做法允许更有靶向从而更有效的治疗，突出在定制提高治疗成功率的患者治疗方案中使用生物标记的潜在利益。
例如，在第47届美国临床肿瘤学会年会(Annual Meeting of the AmericanSociety of Clinical Oncology，2011年6月)上，来自MD安德森癌症中心(AndersonCancer Center)的Tsimberidou等人提交了一份研究，描述了在带有一个基因畸变的175例患者中，靶向PIK3CA、mTOR、BRAF、MEK、multikinases、KIT或EGFR的成功治疗方案。这项研究说明，相匹配的靶向疗法的反应率为27%，而不相匹配疗法治疗的患者反应率为5%。Duffy和Crown (Clinical Chemistry, 2008, 54(11):1770-1779)描述了改善用于个性化医疗的治疗后果的至少某些成功的其它标记。该文以及本文讨论的所有其它外部引用材料都通过引用以其整体结合到本文中。当所结合的文献中某术语的定义或使用与本文所提供的该术语的定义不一致或有矛盾时，则该术语的定义以本文提供的为准，而不适用于文献中的定义。
错误的染色体分离以及不受控制的有丝分裂增殖是肿瘤疾病的标志。然而，尽管有越来越多的肿瘤标记可使用，但仍然缺乏指示对靶向纺锤体和着丝粒的调控或有丝分裂检查点控制的药物的敏感度的标记。例如，Hec1是纺锤体检查点信号转导中的关键组分，其在癌症中高度表达并有助于在细胞分裂期间确保染色体的正确分离。近期已经报道了若干可能有效的Hec1抑制剂(参见例如Lau和Huang的WO 2011/115998；Qiu等人，J. Med.Chem., 2009, 52(6):1757–1767；Wu等人，Cancer Res., 2008 Oct 15, 68(20):8393-9)。尽管至少某些化合物已经显示出有前景的结果，然而，对任何生物标记没有指导表明用这类化合物增加治疗成功。
因此，仍然需要对Hecl活性调节剂具有反应的癌症的生物标记。
发明概述
本发明的主题涉及治疗肿瘤疾病的相关的生物标记和方法，其中所述疾病用Hec1抑制剂治疗。更具体地讲，本发明人现在已经发现，Hec1(HEC)、Rb(RB1)和/或p53 (TP53)的状态和/或表达水平可用作治疗多种疾病状态的预测性生物标记，其中所述疾病用Hec1抑制剂治疗，其中所述状态是关于野生型与突变基因型和/或缺陷的/缺乏的基因表达。
因此，在本发明主题的一个实施方案中，对生物标记谱的鉴定用于判定增殖性疾病例如癌症对Hec1抑制剂或其它Hec1靶向化合物的敏感性。因此，考虑了在受试者中判定增殖性疾病和/或肿瘤细胞对Hec1抑制剂治疗的敏感性的方法，包括在来自受试者的样品中判定Hec1(HEC)、Rb(RB1)和p53 (TP53)中的一项或多项的状态和/或表达水平的步骤。这样的判定可以包括形成可检测复合物，其提供测试结果。在某些实施方案中，可将所述测试结果与Hec1(HEC)、Rb(RB1)和p53 (TP53)中的一项或多项的状态和/或表达水平的相关参考结果进行比较。
在本发明构思的另一实施方案中，考虑了选择受试者和/或评价增殖性或肿瘤疾病的患者对Hec1抑制剂治疗的方法，包括在来自所述受试者的样品中判定Hec1(HEC)、Rb(RB1)和p53 (TP53)中的一项或多项的状态和/或表达水平的步骤。这样的判定可以包括形成可检测的复合物并可提供测试结果。在某些实施方案中，可将所述测试结果与得自参考细胞的Hec1(HEC)、Rb(RB1)和p53 (TP53)中的一项或多项的状态和/或表达水平的相关参考结果进行比较，以确定敏感性。这样的敏感性可用于提供评价或选择结果。
在本发明构思的某些实施方案中，可以判定Hec1的表达水平；在这样的实施方案中，增加的表达水平可以指示肿瘤细胞或增殖细胞对Hec1抑制剂的敏感性。在本发明构思的其它实施方案中，可以判定Rb和p53中的至少一项的状态；在这样的实施方案中，Rb和/或p53的缺失或者突变型Rb和/或p53的存在可以指示肿瘤细胞或增殖细胞对Hec1抑制剂的敏感性。Hec1、Rb和/或p53的状态和/或表达可通过以下来表征：通过Hec1、Rb和/或p53的编码核酸的定量测定，通过Hec1、Rb和/或p53的编码核酸的测序，通过Hec1、Rb和/或p53的编码核酸的杂交，或通过这些的组合。或者，Hec1、Rb和/或p53状态和/或表达可以通过Hec1蛋白、Rb蛋白和p53蛋白的定量测定和/或序列特征来表征。在本发明构思的某些实施方案中，Hec1、Rb和/或p53相关的核酸和蛋白两者均可被表征。
在本发明主题的再一个实施方案中，考虑了肿瘤疾病患者用Hec1抑制剂治疗的方法，包括判定来自受试者样品的肿瘤疾病的分子类型并判定Hec1、Rb和p53的至少一项的表达水平的分子类型的步骤。这样的判定可以包括形成可检测的复合物，并可提供评价结果。在这样的实施方案中，相对于相应的参考值或结果而言，增加的Hec1表达水平和/或Rb和/或p53的缺失或其突变形式的存在可以指示患者的肿瘤疾病对Hec1抑制剂的适用性。这类实施方案的肿瘤疾病包括但不限于乳腺癌、肺癌、结肠癌和肝癌。
本发明主题的另一实施方案是通过使所述肿瘤细胞与Hec1抑制剂和第二化疗药/细胞毒性剂接触治疗对Hec1抑制剂敏感的肿瘤细胞的方法。这样的方法可以利用对于抑制所述肿瘤细胞生长有效实现协同作用的一个或多个剂量。合适的Hec1抑制剂包括但不限于N-(4-(4-异丙氧基-2,6-二甲基苯基)噻唑-2-基)异烟酰胺(100951)；N-(4-(4-(4-甲氧基苯氧基)-2,6-二甲基苯基)噻唑-2-基)异烟酰胺(101001)；2-氟-N-(4-(4-(4-甲氧基苯氧基)-2,6-二甲基苯基)噻唑-2-基)异烟酰胺(101015)；N-(4-(4-(5-(2-甲氧基乙氧基)吡嗪-2-基氧基)-2,6-二甲基苯基)噻唑-2-基)异烟酰胺(Hec110091)；N-(4-(4-(5-(2-甲氧基乙氧基)吡嗪-2-基硫基)-2,6-二甲基苯基)噻唑-2-基)异烟酰胺(110095)；和N-(4-(4-(5-(2-(二甲基氨基)乙氧基)吡嗪-2-基硫基)-2,6-二甲基苯基)噻唑-2-基)异烟酰胺。这样的Hec1抑制剂可以是游离碱形式或盐形式。这样的实施方案可以使用细胞毒性剂和/或化疗药例如泰素、多柔比星和托泊替康，然而也考虑使用任何合适的细胞毒性剂和/或化疗药。
本发明主题的再一实施方案是治疗多重耐药性(或对伊马替尼治疗有抵抗性)的肿瘤细胞的方法，即通过使所述肿瘤细胞与有效实现生长抑制的剂量的Hecl抑制剂接触。在本发明构思的某些实施方案中，所述Hecl抑制剂可以与第二化疗药或细胞毒性剂联合使用。合适的Hecl抑制剂包括但不限于N-(4-(4-异丙氧基-2，6-二甲基苯基)噻唑-2-基)异烟酰胺(100951)；N-(4-(4-(4-甲氧基苯氧基)-2，6-二甲基苯基)噻唑-2-基)异烟酰胺(101001)；2-氟N-(4-(4-(4-甲氧基苯氧基)-2，6-二甲基苯基)噻唑-2-基)异烟酰胺(101015)；N-(4-(4-(5-(2-甲氧基乙氧基)吡嗪-2-基氧基)-2，6-二甲基苯基)噻唑-2-基)异烟酰胺(Hecl10091)；N-(4-(4-(5-(2-甲氧基乙氧基)吡嗪-2-基硫基)-2，6-二甲基苯基)噻唑-2-基)异烟酰胺(110095)；和N-(4-(4-(5-(2-(二甲基氨基)乙氧基)吡嗪-2-基硫基)-2，6-二甲基苯基)噻唑-2-基)异烟酰胺。这样的Hecl抑制剂可以是游离碱形式或盐形式。这样的实施方案可以使用细胞毒性剂和/或化疗药例如泰素、多柔比星和托泊替康，然而也考虑使用任何合适的细胞毒性剂和/或化疗药。
本发明主题的多个目标、特征、方面和优势将透过以下优选实施例的详述及附图而更加显而易见，其中相同的数字代表类似的组件。
附图简述
图1A至图1E显示Hecl抑制化合物的GI50和Hecl表达之间的关系：图1A显示在来自异步维持的细胞系的总蛋白中Hecl蛋白表达水平。定量测定Hecl蛋白表达水平并表示为相对于HeLa表达水平的％并将其分为对Hecl抑制剂非常敏感(GI50＜50nM)、中度敏感(50nm＜GI50＜100nm)、部分敏感(100nm＜GI50＜1μM)或抵抗(GI50＞10μM)。图1B显示总RNA中的Hecl RNA表达水平。定量测定HeclRNA表达，表示为相对于HeLa表达水平的％，并针对蛋白表达以相关性作图。图1C显示在响应不同Hecl抑制剂时分类为敏感(GI50＜300gM)或抵抗(GI50＞300μM)的癌细胞系中的Hecl蛋白表达的编辑数据。图1D-1和图1D-2显示从细胞系筛选测定中收集的GI50数据的log10，使用4种Hecl化合物类似物(100951、101001、101015和110095)，针对Hecl蛋白表达水平作图。双侧T检验用于判定显着性(所有测试药物的P-值为4.3X 10-17)。图1E显示按照总RNA％的Hecl RNA表达水平和按照总蛋白％的Hecl蛋白表达水平之间的相关性。
图2A至图2C显示在不同癌细胞系和在来自人类患者样本的肺癌和乳腺癌的亚型中的Hecl表达。图2A和图2B显示分别得自GEO数据库GSE8894和GSE14814的人肺癌肿瘤的Hecl(NDC80)表达数据，表示为表达强度的对数；结果显示在鳞状细胞癌中的高Hecl表达。图2C显示得自GEO数据库GSE 20685的乳腺癌肿瘤样品的Hecl(NDC80)表达数据，表示为表达强度的对数；结果显示在I型中的高Hecl表达。
图3A至图3B显示siRNA敲除Rb对于癌细胞对Hecl抑制化合物的敏感性的影响。图3A显示用对照siRNA或靶向Rb的siRNA(siRb)转染的野生型Rb MDA-MB-231细胞的转染敲除对于对Hecl抑制化合物101001的敏感性(按照GI50)的影响。还显示了转染细胞中的Rb RNA表达。图3B显示所 选的具有野生型Rb(231、MDA-MB-231、K562、ZR-75-1、T47D、A549、HCT116)或突变型Rb(HeLa细胞)的细胞系的细胞敏感性，所述细胞系用靶向Rb的2个siRNA中的1个转染并如图3A处理，表示为相对于非药物处理的细胞的生长抑制％。来自转染细胞的裂解液的检测Rb的免疫印迹在相应的抑制图下方显示。
图4A至图4B显示siRNA敲除p53对于癌细胞对Hecl抑制化合物的敏感性的影响。图4A显示用对照siRNA或靶向p53的siRNA(sip53)转染的野生型p53细胞(A549、HCT116)的转染敲除对于对Hecl抑制化合物101001的敏感性(按照GI50)的影响。细胞敏感性表示为GI50(nM)。还显示了来自转染细胞的p53RNA表达。图4B显示所选的具有野生型p53(A549、HCT116、ZR-75-1、U2OS)或突变型p53(HeLa)的细胞系的细胞敏感性，所述细胞系用靶向p53的2个不同的siRNA中的1个转染并如图4A处理，表示为相对于非药物处理的细胞的生长抑制％。来自转染细胞的裂解液的检测p53的免疫印迹在相应的抑制图下方显示。
图5A至图5D显示在药物反应性细胞(GI50＜10uM)及非药物反应性细胞(GI50＞10uM)中，在Hecl抑制剂作用下，p73磷酸化的诱导、凋亡标记的活化和抗凋亡标记的下调的差异。还显示了肌动蛋白作为对照。图5A显示免疫印迹，证明在药物反应性HeLa细胞及非药物反应性A549细胞中，在不同时间点以200nM选择性Hecl抑制化合物处理后，Hecl抑制化合物(200nM)对磷酸化P73(P-P73)的表达的影响。图5B显示免疫印迹，证明在药物反应性HeLa细胞中，Hecl抑制化合物(1μM)对于凋亡标记胱冬蛋白酶3、PARP和抗凋亡标记Mcl-1、XIAP、Bcl-2的表达的影响。图5C显示免疫印迹，证明在非药物反应性A549细胞中，所选Hecl抑制化合物和泰素对于凋亡标记胱冬蛋白酶3、PARP和抗凋亡标记Mcl-1、XIAP、Bcl-2的表达的影响。图5D显示免疫印迹，证明在药物反应性HeLa细胞和非药物反应性A549细胞中，Hecl抑制化合物101001对于凋亡标记胱冬蛋白酶3、PARP和抗凋亡标记Mcl-1、XIAP、Bcl-2的表达的影响。
图6A至图6C显示在药物反应性细胞(GI50＜10μM)和非药物反应性细胞(GI50＞I0μM)中，在Hecl抑制剂作用下，Hecl和Nek2蛋白表达的不同细胞周期调节和Nek2蛋白的不同下调。图6A显示在不同时间点，来自同步化的药物反应性细胞(HeLa、MDA-MB-468、HCT116)和非药物反应性细胞(A549)的Hecl和Nek2的免疫印迹。包括肌动蛋白作为上样对照。图6B显示来自用DMSO对照和不同浓度Hecl抑制化合物处理的药物反应性细胞(HeLa、HCT116)和非药物反应性细胞(A549)的Nek2的免疫印迹。图6C显示在不同时间周期，用DMSO对照或Hecl抑制化合物处理的HeLa细胞的细胞周期蛋白B1和细胞周期蛋白D1的免疫印迹。包括肌动蛋白作为上样对照。
在附图中给出的实施方案在本质上是说明性的，而无意用于限制由权利要求书限定的本发明。此外，附图的个别特征和本发明将通过发明详述而更加显而易见。
发明详述
根据可选择性地和/或特异性地靶向Hecl/Nek2途径的小分子的近期发现，本发明人已开发出了靶向着丝粒组分Hecl的各种改进的Hecl抑制剂，Hecl在多种人类癌症中过量表达。这些化合物引导本发明人去研究在癌细胞中Hecl、Rb和P53对Hecl抑制剂药物敏感性的作用。
细胞依靠贯穿有丝分裂的正常调节的细胞周期控制来正常运行。癌细胞中观察到的失调的有丝分裂过程牵涉到例如异常纺锤体形成和染色体分离的过程。Hecl在快速分裂的细胞中表达水平最多，而非在最终分化的细胞中。在全基因组表达谱中已显示Hecl在脑、肝、乳腺和肺的肿瘤细胞中上调，而在子宫颈癌、结肠直肠癌、乳腺癌、肺癌细胞系以及结肠直肠癌及胃癌组织中过量表达。因此，在快速分化的细胞、转化细胞系和癌组织中Hecl差异表达，表明Hecl可能是人类癌症的靶向治疗的优秀候选物。同样，通过Hecl表达和IC50相关性的统计学分析，可支持Hecl作为用于癌症治疗靶标的可能性。
Hecl与成视网膜细胞瘤基因(Rb)有关，后者在细胞周期的G2-M期起到重要作用。更具体而言，在G2-M期Rb与蛋白磷酸酶1α相互作用，该蛋白显示对于着丝粒(kinetochore)功能是必不可少的。在细胞周期G1-S期中的Rb磷酸化与G2-M期的细胞周期蛋白的诱导和降解相协调。Rb在G2-M期还直接调节染色体分离并与Hecl相互作用。缺乏功能性Rb的细胞，不能正确完成有丝分裂，这样的细胞有丝分裂造成超倍性(hyperploidy)。这些关系表明Rb可能在涉及Hec1的有丝分裂步骤中起作用。
P53蛋白是包含不同的结构域的多功能蛋白，所述结构域涉及与DNA、RNA、蛋白质和细胞代谢物的特定而复杂的相互作用。在癌症中p53基因经常突变，主要是导致单一氨基酸置换的错义突变。这样的突变型P53蛋白被归类到不同的结构群。例如，具有在DNA结合域内发生的“热点”突变的p53蛋白可被表征为DNA的接触突变体或构象突变体。突变型p53在整个肿瘤进程(包括晚期和远程转移)中通常高度表达，意味着它可能具有功能获得性(GOF)属性。这样的GOF属性允许突变型P53与染色质上的位点(所述位点不同于与野生型P53相互作用的染色质位点)相互作用，并与分别上调或阻遏基因例如多重抗药性1基因(multi-drug resistance 1 gene)或胱冬蛋白酶-3的各种转录因子相互作用。还证明了野生型p53的失活增加了对多种化疗药物(包含顺铂、卡铂和泰素)的敏感性。
基于上述考虑和其他因素，本发明人现在已发现，可通过Hec1(HEC)、Rb(RB1)和/或p53 (TP53)的状态及/或表达水平来准确而可靠地预测细胞对Hec1抑制剂的敏感性。这有利地允许早期鉴定可受益于Hec1抑制剂治疗的癌症患者，这进而可在他们的疾病仍处于早期阶段时更有效地治疗疾病。
更具体地讲，本发明人已经发现，Hecl表达水平与肿瘤细胞对Hecl抑制剂治疗的敏感性正相关，并且Rb和/或P53的缺失、失调或功能障碍与肿瘤细胞对Hecl抑制剂治疗的敏感性也呈正相关。因此，应理解，这样的相关性可能不仅允许预测Hecl抑制剂对肿瘤细胞和组织的治疗成功性，而且某些癌症类型对Hecl抑制剂治疗天生敏感或抵抗。
例如，还如下文更详细地进一步所示，具有相对高的Hecl表达的某些肿瘤细胞系和肿瘤细胞(例如，Hep3B/肝细胞癌、HeLa/子宫颈癌、T47D/转移、胸膜癌、侵入性癌、导管癌)可能对Hecl抑制剂治疗高度敏感，而Hecl表达非常低或无表达的其它细胞系(例如，MOLT-4/急性成淋巴细胞性白血病，N87/胃癌)可能对Hecl抑制剂治疗明显地较不敏感(或抵抗)。
这样的不同敏感性还可用于单一类型或类别的癌症的分类和/或治疗。例如，乳腺癌的分子亚型分为I-VI型，但只有I和IV表现出显著的Hecl表达水平，因此对Hecl抑制剂治疗可能敏感。同样，对患者癌症的具体类型或类别的鉴定，可能指示对Hecl抑制剂的敏感性，并因此可用于优化治疗。
因此，本发明构思的一个实施方案是选择使用Hec1抑制剂(任选与细胞毒性剂联用)治疗的患有增殖性疾病的受试者的方法，其中这样的选择基于先前判定的Hecl表达和/或状态。在本发明主题的一个特别优选的方面，Hecl表达和/或状态通过野生型Hecl (HEC)基因的表达水平的定量测定、突变型Hecl (HEC)基因的存在、或通过Hecl(HEC)基因的缺乏、不足(相对于健康对照)或缺失的测定而得以判定。同样，还应该理解，这样的定量测定也可包括在得自受试者的样品中的Hec1的表达水平及/或翻译后修饰的测定。例如，可以通过测定受试者的野生型Hec1基因的表达水平并与健康对照受试者的野生型Hec1 (HEC)基因的表达水平进行比较，来进行这样的判定。另外或备选地，对照受试者也可代表对具体治疗(最典型的是用Hecl抑制剂治疗)有或无反应的肿瘤。在对照代表对治疗有反应的肿瘤的情况下，与对照相比，个体的野生型Hecl (HEC)基因的较高表达可预测对治疗的可能反应性。相反，当对照代表对治疗抵抗的肿瘤，与对照相比，个体的Hecl的较低表达水平可预测对治疗的可能抵抗。
本发明主题的另一实施方案(特别但并非必要，在相对于对照具有高Hecl (HEC)表达水平的受试者中)，考虑了这样的方法：其中选择患者用于用Hecl抑制剂治疗，其中所述患者罹患适合用Hecl抑制剂治疗的增殖性疾病，并且其中所述患者选择依赖(至少部分地)于表征或判定Rb状态的步骤。Rb状态可以通过判定在得自受试者的样品中野生型Rb(RB1)基因的存在、突变型Rb (RB1)基因的存在、Rb (RB1)基因的缺乏、不足或缺失、和/或Rb表达水平和/或翻译后修饰来表征。如前所述，应该理解，减少或缺乏Rb的表达，或具有失调和/或机能障碍的Rb (RB1)，可能指示肿瘤细胞对Hecl抑制剂治疗的反应性。因此，可以依照显示不足/突变/缺失的Rb (RB1)状态的受试者，选择用Hecl抑制剂治疗的患者群。
同样，在本发明构思的又一实施方案中，考虑了选择用Hecl抑制剂治疗(任选与细胞毒性剂联用)的患有增殖性疾病的受试者的方法，其中所述方法包括以下步骤：通过表征或判定p53状态，在所述受试者中测定增殖性疾病对Hec1抑制剂治疗的敏感性。例如，所述方法可包括下列步骤：经由在来自所述受试者的样品中鉴定和/或定量测定野生型p53(TP53)基因、突变型p53 (TP53)基因、或p53 (TP53)基因的缺乏、不足或缺失、和/或p53表达水平和/或翻译后修饰，而判定P53状态。因此，可根据显示不足/突变/缺失的P53(TP53)状态的受试者，选择用Hecl抑制剂治疗的患者群。
应当理解，Hec1、Rb和p53基因的状态和表达除了用作单独的指示物以外，还可联合用作选择用Hecl抑制剂治疗的患者群的基础。例如，Hecl基因型、Hecl表达、Rb基因型、Rb表达、P53基因型和/或P53表达可单独或以任意组合用作肿瘤疾病或细胞系对Hecl抑制剂化合物的敏感性的指示物。
应当理解，基因和基因产物(例如与Hecl、Rb和p53相关的基因和基因产物)的检测、定量测定及/或表征，可包括对基因或基因产物进行标记或标签，和/或形成可检测的复合物。这样的标记可以是直接或间接的。例如，基因或基因产物(如RNA或蛋白质)可以通过修饰其组成而直接标记，使其可例如通过将可检测部分连结到有待表征的基因和/或基因产物上以形成可检测复合物而被检测。同样，基因或基因产物也可通过与携带可检测部分的结合配体(例如，互补的核酸序列、互补的核酸类似物序列、适体或抗体)相互作用形成可检测复合物而被间接标记。或者，基因或基因产物(例如，来自患者样本)可通过其以下能力而被标记：置换携带可检测部分的基因类似物或携带来自结合配体(例如，互补的核酸序列、互补的核酸类似物序列、适体或抗体)的可检测部分的基因产物类似物，从而调节可检测复合物的形成。合适的可检测部分包括，但不限于，荧光分子、磷光发光性分子、发光分子、酶、金属、生物素和/或生物素类似物、量子点、微粒、放射性核素、核酸和/或核酸类似物、同位素质量标记、自旋标记、正电荷或负电荷或这些的组合。
在本文中，应当注意，基因型的测定和/或Hecl、Rb和/或p53核酸和蛋白质产物的定量测定的所有已知方式，皆被认为适用于本文。特别合适的方法包括(但不限于)DNA测序、拷贝数测定、单倍型测定、RNA测序、qPCR、RT-PCR、q-RT-PCR、数字PCR、DNA杂交和/或RNA杂交、FISH、微阵列分析、液相杂交/定量测定、电流分析(amperometric)和/或荧光定量测定、免疫测定和/或适于表征基因和/或基因产物的任何方法。备选地或另外，当细胞学或组织病理学分析指示Hecl、Rb和/或p53特定状态时，可以完全省略单独的定量分析。
关于用Hecl抑制剂治疗，应当理解，所有已知的Hecl抑制剂皆被视为适用于本发明，且优选的Hecl治疗剂包括描述于WO 2011/115998和同时待审的顺序号为64/564,773的美国临时申请中的那些。因此，在特别考虑的化合物中，特别优选的Hecl抑制剂包括N-(4-(4-异丙氧基-2，6-二甲基苯基)噻唑-2-基)异烟酰胺(100951)、N-(4-(4-(4-甲氧基苯氧基)-2，6-二甲基苯基)噻唑-2-基)异烟酰胺(101001)、2-氟-N-(4-(4-(4-甲氧基苯氧基)-2，6-二甲基苯基)噻唑-2-基)异烟酰胺(101015)、N-(4-(4-(5-(2-甲氧基乙氧基)吡嗪-2-基氧基)-2，6-二甲基苯基)噻唑-2-基)异烟酰胺(110091)、N-(4-(4-(5-(2-甲氧基乙氧基)吡嗪-2-基硫基)-2，6-二甲基苯基)噻唑-2-基)异烟酰胺(110095)和N-(4-(4-(5-(2-(二甲基氨基)乙氧基)吡嗪-2-基硫基)-2，6-二甲基苯基)噻唑-2-基)异烟酰胺(110096)。
还进一步考虑到Hecl抑制剂可以与例如以下一种或多种细胞毒性剂共给予：抗肿瘤代谢物、拓扑异构酶I或II抑制剂和/或微管活性剂。所有这些已知的作用剂已被认为适用于本发明。对于这类试剂的剂量，可以目前已知剂量，或稍低于所述已知剂量给予所述试剂。
令人惊讶的是，当所考虑的Hecl抑制剂与一种或多种细胞毒性剂共给予时，观察到与所选化合物的协同活性，如下文更详细地描述。最有利的是，Hecl抑制剂和泰素、多柔比星和托泊替康组合时观察到协同反应。尽管并不限制本发明的主题，考虑到在细胞和/或组织中可以观察到协同作用，其中所述细胞和/或组织对浓度等于或小于100nM的Hecl抑制剂敏感(表9至表11)。
同样要注意的是，所考虑的Hecl抑制剂化合物还对被认为具有抗药性的多种细胞系表现出显着的活性，从而提供了治疗其它难治性细胞和组织的另外的方法(表8)。此外，本发明人还观察到，本文考虑的Hecl抑制剂在反应性细胞(GI50＜1μM)中显示出活性并触发凋亡反应，但在非反应性细胞(GI50＞1μM)中不触发凋亡反应的诱导(图5A至图5D)。
实施例
材料与方法
细胞培养: A549、MDA-MB231、K562、HCT116癌细胞系是由Y.S.Lee博士(台湾，新北市，生物技术开发中心(Development Center for Biotechnology, New Taipei City,Taiwan))提供。T47D、ZR-75-1细胞系得自BCRC (台湾，生物资源收集和研究中心(Bioresource Collection and Research Center, Taiwan))。将细胞系最初维持在所建议的培养基中并适应于37°C在含5% CO2的空气中维持在含有10%胎牛血清、低葡萄糖(1g/L) Dulbecco's Modified Eagle's (DME) Medium的培养基中。
药物敏感性:将细胞系以适当接种量接种在含低葡萄糖DME和10% FBS的96孔板中之后，通过用指定药物处理24小时，进行药物敏感性筛选。将药物添加于板的3个重复孔中，再将细胞在药物处理的培养基中孵育96小时，再使用CellTiter 96®水性非放射性细胞增殖测定系统(Promega, Madison, WI 53711 USA)，通过MTS测定来检测细胞活力。MTS测定根据制造商的说明书来进行。使用Bio-Tek 340分光光度计(Bio-Tek, Winooski, VT05404)进行光密度测定，然后在Excel (Microsoft, Redmond, WA 98052-7329)和GraphPad Prism 5线性回归软件(GraphPad Software，La Jolla, CA 92037 USA)中处理光学读数，以确定浓度反应曲线，用于计算相对GI50。GI50值是指引起50%生长抑制的浓度。计算测试药物对细胞的生长抑制％为：[1 - (试验值)/(对照值)]x 100；这些值被用来绘制浓度-反应曲线，然后再用线性回归软件分析。
协同作用：对所选药物测定GI50，并用于计算用于与Hecl抑制剂的协同测定的浓度比例。将细胞以适当接种量接种在含低葡萄糖DME和10% FBS的96孔板中后，用药物处理24小时。将Hecl抑制剂及所选药物以所确定的GI50浓度比例加至板的三个重复孔中，并将细胞培养在药物处理的培养基中孵育96小时，然后测定细胞活力。按照制造商说明书使用CellTiter 96®水性非放射性细胞增殖测定系统(Promega, Madison, WI 53711 USA)，通过MTS测定来检测细胞活力。使用Bio-Tek 340 分光光度计(Bio-Tek, Winooski, VT05404)进行光密度测定，然后使用Excel (Microsoft, Redmond, WA 98052-7329)和GraphPad Prism 5线性回归软件(GraphPad Software，La Jolla, CA 92037 USA)处理以确定浓度-反应曲线，用于计算相对GI50。通过使用算式CI (组合指数)= (CA,X/ICx,A ) +(CB,X/ICx,B)计算组合指数值来确定协同作用，其中CA,X和CB,X是组合用于达到x%的药物效果的药物A和药物B的浓度。ICx,A和ICx,B为达到相同效果的单一试剂的浓度。
基因沉默：将细胞以适当细胞数量铺板于96孔板中并经siPort NeoFx转染方法(Life Technologies，Carlsbad, California 92008 USA )，根据制造商的说明书进行转染，维持24小时，然后用药物处理。将细胞在药物处理的培养基中孵育48小时，然后通过MTS测定进行分析。使用对照siRNA (Life Technologies, Carlsbad, California 92008;Cell Signaling Technology, Danvers, MA 01923 USA; 和Santa Cruz Biotechnology,Santa Cruz, CA. 95060 USA)、Rb siRNA (#1: Life Technologies, Carlsbad,California 92008 USA; #2: Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA. 95060USA)和p53 siRNA (#1: Cell Signaling Technology, Danvers, MA 01923 USA; #2:Cell Signaling Technology, Danvers, MA 01923 USA)。细胞在接种后用药物处理24小时并与药物一起孵育48小时，然后进行MTS测定。按照制造商的说明书(Promega, Madison,WI 53711 USA)进行MTS测定。
免疫印迹：通过在放射免疫沉淀测定(RIPA)缓冲液(50mM Tris-HCl, pH7.4,150mM NaCl, 1% NP40, 0.25% DOC, 0.1% SDS, 1mM NaVO4, 1mM EDTA, 1ug/ml亮抑酶肽, 1μg/ml胃酶抑素)或2.5X 样品缓冲液(50mM Tris-HCl, pH6.8, 1% SDS, 2.5% BME,7.5%甘油, 溴酚蓝)中孵育细胞获得细胞裂解物。将组织标本浸渍在RIPA缓冲液中，用均质器破碎，再离心至澄清。接着对样品进行SDS-PAGE，印迹到免疫印迹膜上，并与第一抗体在3%BSA-TBST中孵育。用辣根过氧化物酶缀合的第二抗体，通过增强型化学发光(Millipore，Billerica，MA 01821 USA)进行蛋白质检测。以下抗体用于蛋白质印迹：抗Rb单克隆抗体1F8 (Abcam, Cambridge, MA 02139-1517 USA)；抗p53单克隆抗体(Santa CruzBiotechnology, Santa Cruz, CA. 95060 USA)；抗–β-肌动蛋白单克隆抗体AC-15 (SigmaAldrich, St. Louis, MO, USA)。
实时定量 PCR: 使用Quick-RNA miniPrep试剂盒(Zymo Research, Irvine, CA92614 USA)分离总RNA。使用One Step SYBR ExTaq qRT-PCR试剂盒(Takara-Bio, Shiga,Japan)，按照制造商的说明书，在ABI Prism 7500 (Life Technologies, Carlsbad,California 92008 USA)上进行逆转录和定量实时PCR。用于GAPDH的引物序列是：5’-GGTTTACATGTTCCAATATGATTCCA-3’ (正向)、5’-ATGGGATTTCCATTGATGACAAG-3’ (反向)。用于Rb的引物序列是：5’-GCAGTATGCTTCCACCAGGC-3’ (正向)、5’-AAGGGCTTCGAGGAATGTGAG-3’ (反向)。用于p53的引物序列是：5’-GCCCCCAGGGAGCACTA-3’ (正向)、5’-GGGAGAGGAGCTGGTGTTG-3’ (反向)。
临床样品的基因表达：HEC基因表达数据得自GSE数据库，进行分析并表示为以2为底数的基因表达强度的对数。
以下讨论提供了本发明主题的多个示例性实施方案。虽然每个实施方案代表本发明要素的单一组合，但本发明的主题被认为包括所公开要素的所有可能的组合。因此，如果一个实施方案中包括要素A、B和C，而第二实施方案包括要素B和D，则本发明的主题也被认为是包括A、B、C或D的其它剩余组合，即使没有被明确公开。此外，除非另有相反规定，否则本文中所给出的所有范围应视为包括其端点，且末端开放式的范围应视为仅包括商业上实用的值。同样，除非另有相反规定，否则所有的值列表应视为包括中间值。
Hec1表达和细胞对Hec1抑制剂的敏感性之间的关联：表征各种癌症细胞系对Hec1抑制剂敏感性的结果显示于表1中。显而易见，所述细胞对Hec1抑制剂的敏感性不同。在此，所述细胞系用Hec1抑制剂(101001)处理，并分析其增殖活性和代谢活性。表1以GI50递增的顺序列举了筛选的细胞系，并依照它们对Hec1抑制剂的敏感性而将其分组。
表1
为了在Hec1抑制剂抵抗性细胞系中表征耐药性的可能机制，在Hec1抑制剂101001敏感性和抵抗性细胞系中，测定Hec1蛋白和RNA的表达水平。进行类似的研究，在经鉴定为对第二Hec1抑制剂110095具有敏感性(GI50<300nM)和抵抗性(GI50>300nM)的细胞系中表征Hec1蛋白的表达水平。裂解异步维持的细胞系，并将其总蛋白对Hec1的表达水平进行免疫印迹。定量测定Hec1蛋白的表达水平并表示为相对于HeLa表达水平的％(图1A)。同样，收集异步维持的细胞系，并通过定量实时PCR分析相对于HeLa其总RNA的Hec1表达水平(图1B)。注意到Hec1抑制剂101001抵抗性细胞系(GI50>10uM) A549和MDA-MB-361的Hec1表达水平低，同时9个非常敏感的细胞系(GI50 <50nm)中的7个的Hec1水平高于K562 (该细胞系具有最低GI50)。同样，相对于抵抗性细胞系，对Hec1抑制剂110095敏感的细胞系显示统计学上显著升高的Hec1蛋白表达(P值<0.0001)(图1C)。图1D-1和图1D-2显示了4种不同Hec1抑制剂研究的类似结果。将来自4种Hec1化合物类似物(100951、101001、101015和110095)的细胞系筛选测定中收集的GI50数据的对数，针对定量测定的Hec1蛋白表达水平作图，并用双侧t检验确定P值的显著性。发现P值为4.32914X10-17，强烈表示在临床试验设计中，Hec1表达水平可有效地作为Hec1抑制剂的生物标记。总体而言，Hec1表达显示与对Hec1抑制剂的敏感性正相关。在HeLa细胞中的另外研究显示Hec1蛋白和RNA表达(分别作为总蛋白和总RNA的函数)之间的关系(如图1E所示)为近似线性。这表明，有利的是，在临床试验的设计中，Hec1蛋白表达或Hec1 RNA表达都可以有效地作为Hec1抑制剂的生物标记。
在临床癌症样品类型和亚型中的Hec1表达：全基因组表达谱显示，在乳腺、肺、肝和脑细胞中Hec1表达被上调并且Hec1的表达与肿瘤的分级和预后有关。收集临床癌症患者组织样品并分析其Hec1表达水平。数据显示在某些癌症的类型和亚型中显著更高的Hec1表达水平。图2A和图2B显示得自GEO数据库GSE8894 (图2A)和GSE14814 (图2B)的代表腺癌和鳞状细胞癌的肺癌肿瘤样品的HEC (NDC80)表达数据，对其进行分析并表示为相对于正常组织而言的表达强度的底数为2的对数。在这两个数据集中，在鳞状细胞癌细胞中HEC(NDC80)基因的平均表达升高。在结肠癌细胞中发现相似的Hec1表达升高(未显示)。同样，对于不同分子亚型的乳腺癌肿瘤样品，HEC(NDC80)表达数据得自GEO数据库GSE 20685，对其进行分析，并表示为相对于正常组织的表达强度的底数为2的对数。HEC在乳腺癌分子亚型I中过量表达，正如其基因表达水平谱中所示(图2C)。还表征了分离自患者的乳腺癌肿瘤样品中的Hec1蛋白表达，同样是乳腺癌的该分子亚型，并总结于表2中。分子亚型I和IV显示了Hec1蛋白的表达升高。不同分类的乳腺癌分子亚型的性质还列于表1中，其显示了在筛选的细胞系中的成视网膜细胞瘤(Rb)和p53基因和蛋白状态并以GI50递增的顺序列出细胞系。这些结果强烈地说明，肿瘤或肿瘤细胞系的类型和/或分子亚型可能是在临床试验期间用于对Hec1抑制剂选择合适患者的关键指示。
表2
Rb和p53状态与细胞对Hec1抑制剂的敏感性的相关性:通过Hec1与成视网膜细胞瘤蛋白Rb的相互关系而发现Hec1。这说明在本药物筛选系统中的癌细胞系的Rb状态(表1)与对Hec1抑制剂的敏感性之间可能有关联。令人惊讶的是，在本细胞系中Rb和p53状态的模式可指示对Rb的突变形式和/或p53的突变形式存在的需要。如表3所示，将突变/异常的Rb作为单一生物标记，比突变/异常的p53更不显著，其P值分别为0.3和<0.005。
表3
类似结果见表4，其中突变型Rb作为单一生物标记，其P值>0.6，而突变型p53的P值<0.007。
表4
为了进一步阐明这些肿瘤抑制剂在细胞对Hec1抑制剂的敏感性中的作用，siRNA用于选择性敲除或减少所选细胞系中Rb和P53的表达，并表征对其对Hec1抑制剂的敏感性的影响。令人惊讶的是，Rb敲除引起在携带野生型Rb的若干癌细胞系(MDA-MB-231、K562、ZR-75-1、T47D、HCT116)中Hec1抑制剂敏感性增加，但在具有突变型Rb的细胞系(HeLa)中无影响(图3A-3B)。图3A显示用靶向Rb的siRNA (siRb)和对照siRNA转染并再用Hec1抑制剂101001处理的野生型Rb MDA-MB-231细胞的成活力研究结果；细胞敏感性表示为GI50(μM)。还显示通过实时PCR定量测定来自转染细胞的Rb RNA的结果，并且显示在siRNA处理的细胞中Rb RNA显著下降。图3B显示，具有野生型Rb的所选细胞系(MDA-MB-231、K562、ZR-75-1、T47D、A549、HCT116)或具有突变型Rb的所选细胞系(HeLa)的siRb转染并如图3A进行处理的结果；细胞敏感性表示为相对于非药物处理的细胞的%生长抑制。收集来自转染细胞的细胞裂解物并通过免疫印迹分析Rb蛋白；印迹显示在相应抑制图的下方。包括肌动蛋白作为上样对照。
p53的沉默在携带野生型p53的细胞(A549、HCT116、ZR-75-1、U2OS)中引起类似的敏化作用，但令人惊讶的是，对携带突变型p53的细胞(MDA-MB-23、HeLa)没有影响，如图4A-4B所示。图4A显示用靶向p53的siRNA (sip53)转染并再用Hec1抑制化合物101001处理的野生型p53细胞(A549、HCT116)和突变型细胞(MDA-MB-231)的结果。分析细胞成活力和以GI50(nM)表示的细胞敏感性。还通过定量实时PCR分析了转染细胞的RNA中p53 RNA水平。通过sip53处理的具有野生型p53的细胞的GI50的降低，显示了sip53处理的细胞的敏感性增加，但在具有突变型P53的细胞中并没有观察到此现象。类似地，图4B显示具有野生型p53的所选细胞系(A549、HCT116、ZR-75-1、U2OS)或具有突变型p53的所选细胞系(HeLa)用靶向p53的siRNA转染并如图4A进行处理的结果。细胞敏感性表示为相对于非药物处理的细胞的%生长抑制。对于p53的转染细胞的细胞裂解物的免疫印迹结果；相应的印迹显示在相应的抑制图下方。总结而言，这些结果表明，具有受损Rb和p53的癌细胞通过尚不知晓的途径对Hec1抑制剂更加敏感，这可以提供用于指导临床Hec1抑制剂治疗的患者选择的另外生物标记。
因此，应当理解，根据本发明主题给出了三个生物标记，其用于针对对Hec1抑制剂的敏感性来选择敏感性细胞系和临床患者。Hec1、突变型Rb和/或突变型p53的表达增加指示对Hec1抑制剂可能敏感的肿瘤和细胞系。这些因子可单独或以任何组合用于预测。令人惊讶的是，所有三个生物标记的组合P值<0.0001 (表3)。这为选择对Hec1抑制剂治疗更可能具有反应性的患者的临床研究设计提供了选择指导。
Hec1抑制剂相对于现有细胞毒性药物的功效：肿瘤衍生的细胞对Hec1抑制剂的敏感性，和目前用于癌症治疗(依据GI50)的细胞毒性药物的选择，见表5-7。表5总结了多个乳腺癌衍生细胞系对Hec1抑制剂101001和若干细胞毒性药物(紫杉醇、多柔比星、托泊替康和索拉非尼)的GI50。表6显示多个肝癌细胞衍生的细胞系的类似数据。同样，表7总结了其它癌症衍生的细胞系对Hec1抑制剂101001和紫杉醇、多柔比星和托泊替康的GI50。在大多数情况下，在所选细胞系中，Hec1抑制剂比所选细胞毒性剂更为有效(即有较低GI50)。令人惊讶的是，Hec1抑制剂对于若干耐药性细胞系也有效，所述细胞系包括泰素-抵抗性细胞系Mex-SA/Dx5和NCI/ADR-Res和格列卫(Gleevec)-抵抗性细胞系K562R，如表8所示。这些结果提供了Hec1抑制剂用作细胞毒性药物(例如，泰素、多柔比星、托泊替康和格列卫)治疗方案的替代物或与之联用的基础。
表5
表6
表7
表8
Hec1抑制剂与细胞毒性药的协同效应：联合疗法是更有效治疗癌症患者的有前景的方法。可以靶向其它现有抗癌药不能达到的途径的药物具有更加良好的将其掺入到现有治疗方案中的临床潜力。如上所述，单一药物研究结果强烈支持Hec1抑制剂在这样的联合疗法中可能有效。为研究Hec1抑制剂的可能的临床联合治疗方法，表征了Hec1抑制剂与用于癌症治疗的若干现有可用的细胞毒性剂的协同效应。用Hec1抑制剂和所选的抗癌药以适当浓度比例的混合物处理用于筛选的Hec1抑制剂-反应性癌细胞，并评价其细胞成活力。根据按上所述获得的GI50计算出组合指数(CI)，代表相加(CI=大约1)、协同(CI<1)或拮抗(CI>1)效应。表9总结了用Hec1抑制剂110001与细胞毒性药联合处理的多种癌症衍生细胞系的协同硏究结果。表10总结了用Hec1抑制剂110095进行的类似硏究的结果。同样，表11总结了Hec1抑制剂100951(0951)、101001(1001)、101015(1015)和110095(0095)和细胞毒性药对白血病、子宫颈癌、乳腺癌、肝癌细胞系获得的组合指数(CI)値。鉴定了Hec1抑制剂与泰素、多柔比星和托泊替康在许多测试的细胞系中的协同效应(即CI <1)。这说明，当添加到现有细胞毒性药方案中时，Hec1抑制剂可为治疗肿瘤疾病或抑制癌细胞系的生长提供额外的治疗形式。
Hec1抑制剂诱导细胞死亡的机制：已知P53是细胞周期的G1和G2期的重要调节因子，并控制在响应异常增殖信号和应激时的细胞凋亡。由于本发明人发现大多数Hec1抑制剂敏感性细胞系具有突变型P53，因此可以推测，P53非依赖性凋亡途径可能参与Hec1抑制剂诱导的细胞死亡。P73是P53家族成员，其介导细胞凋亡，并在P53缺陷型细胞中替代P53的功能。因此，P73是分子的潜在候选物，所述分子介导导致Hec1抑制剂诱导的细胞死亡的细胞凋亡。为了研究这个问题，携带突变型p53蛋白的药物反应性细胞(HeLa)和耐药性细胞(A549)用Hec1抑制剂110095处理不同的时间。磷酸化P73的免疫印迹结果显示，在处理过的细胞中Hec1抑制剂诱导时间依赖性的P73磷酸化，在药物治疗后48小时达到峰値(图5A)。这种磷酸化表明Hec1抑制剂可能通过调节P73活性，至少部分地起到诱导细胞死亡的作用。
同样，HeLa (图5B)细胞用1μM的所选Hec1抑制剂110091(91)、110093(93)、110095(95)处理24或48小时，然后对裂解物的凋亡标记胱冬蛋白酶3和PARP和抗凋亡标记Mcl-1、XIAP和Bcl-2进行免疫印迹。肌动蛋白作为上样对照。A549细胞同样用Hec1抑制剂100951(0951)、101001(1001)、101015(1015)、110078(0078)和110079(0079)处理，结果为
表9
总结于图5C。利用不同的Hec1抑制剂的类似研究见图5D，其说明用Hec1抑制剂101001处理HeLa和A549细胞系的结果。Hec1抑制剂处理在药物反应性细胞(HeLa)中导致凋亡胱冬蛋白酶的活化(图5B、图5D)。对抵抗性细胞系(A549)的类似处理不显示出类似反应(图5C、图5D)。这表明在突变型p53细胞(HeLa)中，Hec1抑制剂能够诱导p73活化，以触发导致药物诱导的细胞死亡的p73-依赖性细胞凋亡。
表10
对Hec1抑制剂的不同反应机制：在细胞周期中，Hec1和Nek2受到调控，并且发现它们在G2/M期达到最高表达水平。由于一些细胞系对Hec1抑制剂处理不太敏感，所以这样的Hec1/Nek2途径的不同调节可能是在对Hec1抑制剂的不同细胞反应中的因素。
表11
为了研究这种可能性，通过饥饿将药物反应性细胞(HeLa、MDA-MB-468、HCT116)和抵抗性细胞(A549)同步化，并在1 (G1)、27 (G27)、32 (G32 )和48 (G48)小时表征Hec1和Nek2的表达。Hec1和Nek2之间的不同表达模式是显而易见的，这表明Hec1/Nek2途径的调控中的差异(图6A)。将细胞用Hec1化合物110095以指定浓度处理48小时，再经过免疫印迹表征Nek2表达(图6B)。Hec1抑制剂处理导致敏感性细胞系中Nek2降解；但这种作用在抵抗性细胞系中(A549)中未观察到(图6B)。这说明了Hec1抑制剂敏感性或Hec1抑制剂抵抗性的细胞系可能差异性地调节(或利用)HeC/Nek2途径。此外，药物反应性细胞(HeLa)用Hec1抑制剂110095 (095)处理不同的时间，并通过免疫印迹法表征细胞周期蛋白B1和细胞周期蛋白D1含量(图6C)。在用Hec1抑制剂处理的药物反应性细胞中，细胞周期蛋白B1和细胞周期蛋白D1水平被下调。这说明了具有不同细胞环境的细胞系有着不同的细胞周期路径，使得所选细胞系能够逃避Hec1化合物诱导的细胞死亡。对特征性的调节或细胞周期途径(例如Hec1/Nek2途径的表征和/或细胞周期蛋白B1和细胞周期蛋白D1调节)的鉴定，可提供对Hec1抑制剂具敏感性的肿瘤疾病和/或细胞系的鉴定。
Hec1表达还被证明与肿瘤的分级和预后有关。例如，Hec1是乳腺癌不良治疗后果的预后预测物的部分，其中在单变量分析中的重要预后预测物是细胞周期蛋白B1、BUB1、HEC和11-基因签名。这强调了有效的Hec1小分子抑制剂在乳腺癌患者中的应用重要性。癌症类型和亚型可为选择对Hec1抑制剂疗法更可具有敏感性的患者的设计临床研究提供选择指导，因为具有升高的Hec1基因表达的癌症类型和亚类对Hec1抑制剂可能更加敏感(如以上乳腺癌分子亚型I和IV所示)。
在功能上，Hec1是有丝分裂中着丝粒的组分，其在许多癌症中过量表达并导致肿瘤表型。在正常细胞和转化细胞中，Hec1的表达在细胞周期中是被严格调控的，但在癌细胞系中，Hec1的着丝粒募集会增加。正如已知的那样，成视网膜细胞瘤基因(Rb)的沉默增加Hec1 mRNA和蛋白的表达。在乳腺癌细胞系MCF7、T47D和ZR-75-1中，还已知道Rb的敲除和RB/E2F靶基因的失调增加对治疗剂量的DNA损伤剂的敏感性。因此，Rb缺陷型癌细胞中由于Hec1表达增加所致非整倍体和染色体的不稳定性增加促进所观察到的在具有突变Rb基因型的癌细胞中对Hec1抑制剂的敏感性的增加。Rb和/或相关基因的基因分型可为选择对Hec1抑制剂疗法可能有反应的患者和/或细胞系的设计临床研究提供选择指导。
尽管RB和p53表达谱和药物筛选细胞系的Hec1抑制剂的GI50说明了突变型RB或突变型p53是Hec1抑制剂敏感性的增强因素，但是并不能证明p53的天然缺乏或突变型p53的功能获得性使细胞敏化。例如MDA-MB-361细胞并不表达p53蛋白，但仍然发现其对Hec1抑制剂无反应(即GI50>10uM)。野生型P53是保护细胞免于异常增殖的肿瘤抑制剂。虽然早期硏究错误地鉴定了具有突变型P53形式的细胞并误判P53为癌基因，但后来的硏究显示，突变型P53蛋白的巨量过量产生是癌症标志，并且加重了肿瘤进展。在这种情况下，突变型P53的过量表达产生了高度致瘤细胞。同样，人类热点突变型P53的小鼠等同物的表达产生具有基因组不稳定性增加的肿瘤，并伴随着非整倍性、异常中心体扩增和单向染色体易位。这表明突变型P53形式本身在Hec1抑制剂的抑制机制中可能具有活性作用。P53和/或相关基因的基因分型可为选择对Hec1抑制剂疗法可能有反应的患者和/或细胞系的设计临床研究提供选择指导。
如前所述，突变型P53的存在与肿瘤进展相关，这是一种功能获得性(GOF)效应。突变型p53的许多GOF效应与其结合和/或钝化p53家族蛋白(如p63和p73)的能力相关。P73在P53缺陷型细胞中可以取代P53基因组维持功能。如前所述，用Hec1抑制剂筛选以鉴定敏感性细胞系，显示最敏感的细胞系具有突变型P53。这表明Hec1药物诱导的细胞死亡可能通过一种或多种P53非依赖性途径而发生。已知突变型P53细胞具有受损的p73/p63介导的细胞凋亡。在突变型p53肿瘤细胞中，p73和p63不能募集其靶基因；突变型p53、P73和/或P63的蛋白复合物的存在会对癌细胞的化疗敏感性产生负面影响。本发明人推测，在Hec1抑制剂的情况下，药物诱导的细胞死亡可能通过P73依赖性细胞凋亡而发生。在这一点上，本发明人进一步推测在Hec1抑制剂诱导的细胞死亡中的一种机制可能涉及突变型P53和P73之间的一种或多种相互作用的破坏，以引发P73基因的活化，致使P73依赖性细胞凋亡。有趣的是，用Hec1抑制剂处理细胞，诱发凋亡胱冬蛋白酶标记和p73的磷酸化两者，强烈表明P73依赖性凋亡途径的活化。然而，P53的复杂功能在不同细胞环境中可能不同，并且Hec1、Hec1抑制剂和p53之间的关系仍未被完全阐明。其它化合物、组合物和实验在WO2011/115998中提供，所述文献通过引用结合到本文中。
本领域技术人员显而易见的是，除了已经描述的部分，不偏离本发明构思的许多更多修改是可能的。因此，本发明的主题除所附权利要求书的精神的限制之外不受限制。此外，在解释本说明书和权利要求书时，所有的术语应视为按照尽可能广泛且与上下文一致的方式。特别是，术语“包含”和“包括”应视为指以非独占方式的要素、成分或步骤，表明所述要素、成分或步骤可能存在或被使用，或与未明确指出的其它要素、成分或步骤组合。当本说明书的权利要求书涉及选自A、B、C...和N的至少一个时，其文字应视为要求来自群组中的仅一个要素，而不是A加N或B加N等。
序列表
<110> Taivex Therapeutics Corporation
<120> 对HEC1活性调节剂具有反应的癌症的生物标记
<130> 102099.0001PCT
<150> US 61/562,177
<151> 2011-11-21
<160> 6
<170> PatentIn version 3.4
<210> 1
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工的
<220>
<223> 合成的DNA
<220>
<221> 其它特征
<222> (1)..(26)
<223> GAPDH正向引物
<400> 1
ggtttacatg ttccaatatg attcca 26
<210> 2
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工的
<220>
<223> 合成的DNA
<220>
<221> 其它特征
<222> (1)..(23)
<223> GAPDH反向引物
<400> 2
atgggatttc cattgatgac aag 23
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工的
<220>
<223> 合成的DNA
<220>
<221> 其它特征
<222> (1)..(20)
<223> Rb正向引物
<400> 3
gcagtatgct tccaccaggc 20
<210> 4
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工的
<220>
<223> 合成的DNA
<220>
<221> 其它特征
<222> (1)..(21)
<223> RB反向引物
<400> 4
aagggcttcg aggaatgtga g 21
<210> 5
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工的
<220>
<223> 合成的DNA
<220>
<221> 其它特征
<222> (1)..(17)
<223> p53正向引物
<400> 5
gcccccaggg agcacta 17
<210> 6
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工的
<220>
<223> 合成的DNA
<220>
<221> 其它特征
<222> (1)..(19)
<223> p53反向引物
<400> 6
gggagaggag ctggtgttg 19

Claims (12)

1.Hec1抑制剂在制备用于治疗肝癌的药物中的用途，其中相对于正常细胞，所述肝癌的细胞中Rb和p53均为不足或突变并且Hec1表达水平增加；其中所述Hec1抑制剂选自N-(4-(4-异丙氧基-2,6-二甲基苯基)噻唑-2-基)异烟酰胺(Hec100951)、N-(4-(4-(4-甲氧基苯氧基)-2,6-二甲基苯基)噻唑-2-基)异烟酰胺(Hec101001)、2-氟-N-(4-(4-(4-甲氧基苯氧基)-2,6-二甲基苯基)噻唑-2-基)异烟酰胺(Hec101015)、N-(4-(4-(5-(2-甲氧基乙氧基)吡嗪-2-基氧基)-2,6-二甲基苯基)噻唑-2-基)异烟酰胺(Hec110091)、N-(4-(4-(5-(2-甲氧基乙氧基)吡嗪-2-基硫基)-2,6-二甲基苯基)噻唑-2-基)异烟酰胺(Hec110095)和N-(4-(4-(5-(2-(二甲基氨基)乙氧基)吡嗪-2-基硫基)-2,6-二甲基苯基)噻唑-2-基)异烟酰胺或其盐形式。
2.权利要求1的用途，其中所述肝癌的细胞中Hec1表达水平增加或Rb和p53的不足或突变是通过Hec1、Rb和p53的编码核酸的定量测定来判断的。
3.权利要求1或2的用途，其中所述肝癌的细胞中Hec1表达水平增加或Rb和p53的不足或突变是通过Hec1、Rb和p53的编码核酸的测序或杂交或这两者的组合来判断的。
4.权利要求1或2的用途，其中所述肝癌的细胞中Hec1表达水平增加或Rb和p53的不足或突变是通过Hec1蛋白、Rb蛋白和p53蛋白的定量测定来判断的。
5.权利要求1或2的用途，其中所述药物还包含选自泰素、多柔比星和托泊替康的第二化疗药。
6.权利要求1或2的用途，其中所述肝癌对伊马替尼治疗有抵抗性。
7.Hec1抑制剂在制备用于治疗肝癌的药物中的用途，其中相对于正常细胞，所述肝癌的细胞中Rb和p53均为缺失并且Hec1表达水平增加；其中所述Hec1抑制剂选自N-(4-(4-异丙氧基-2,6-二甲基苯基)噻唑-2-基)异烟酰胺(Hec100951)、N-(4-(4-(4-甲氧基苯氧基)-2,6-二甲基苯基)噻唑-2-基)异烟酰胺(Hec101001)、2-氟-N-(4-(4-(4-甲氧基苯氧基)-2,6-二甲基苯基)噻唑-2-基)异烟酰胺(Hec101015)、N-(4-(4-(5-(2-甲氧基乙氧基)吡嗪-2-基氧基)-2,6-二甲基苯基)噻唑-2-基)异烟酰胺(Hec110091)、N-(4-(4-(5-(2-甲氧基乙氧基)吡嗪-2-基硫基)-2,6-二甲基苯基)噻唑-2-基)异烟酰胺(Hec110095)和N-(4-(4-(5-(2-(二甲基氨基)乙氧基)吡嗪-2-基硫基)-2,6-二甲基苯基)噻唑-2-基)异烟酰胺或其盐形式。
8.权利要求7的用途，其中所述肝癌的细胞中Hec1表达水平增加或Rb和p53的缺失是通过Hec1、Rb和p53的编码核酸的定量测定来判断的。
9.权利要求7或8的用途，其中所述肝癌的细胞中Hec1表达水平增加或Rb和p53的缺失是通过Hec1、Rb和p53的编码核酸的测序或杂交或这两者的组合来判断的。
10.权利要求7或8的用途，其中所述肝癌的细胞中Hec1表达水平增加或Rb和p53的缺失是通过Hec1蛋白、Rb蛋白和p53蛋白的定量测定来判断的。
11.权利要求7或8的用途，其中所述药物还包含选自泰素、多柔比星和托泊替康的第二化疗药。
12.权利要求7或8的用途，其中所述肝癌对伊马替尼治疗有抵抗性。
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Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX346395B (es) 2010-03-17 2017-03-17 Taivex Therapeutics Corp Moduladores de actividad hec1 y sus metodos.
US11071736B2 (en) * 2011-11-21 2021-07-27 Taivex Therapeutics Corporation Modulators of HEC1 activity and methods therefor
TWI640519B (zh) * 2011-11-29 2018-11-11 泰緯生命科技股份有限公司 Ｈｅｃ１活性調控因子及其調節方法
GB201820975D0 (en) * 2018-12-21 2019-02-06 Fund Calouste Gulbenkian Methods of cancer treatment

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2003250831A1 (en) * 2002-06-12 2003-12-31 Max-Planck-Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften E.V. Use of hec1 antagonists in the treatment of proliferative disorders and cancer
WO2004033666A2 (en) 2002-10-11 2004-04-22 Board Of Regents, The University Of Texas System Method and compounds for inhibiting hec1 activity for the treatment of proliferative diseases
EP1664006A2 (en) 2003-09-06 2006-06-07 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Modulators of atp-binding cassette transporters
MX2007006867A (es) * 2004-12-08 2007-08-06 Aventis Pharma Inc Metodo para medir la reistencia o sensibilidad a docetaxel.
WO2007004038A1 (en) 2005-07-05 2007-01-11 Pfizer Products Inc. Aminothiazole derivatives as agonists of the thrombopoietin receptor
KR100861278B1 (ko) * 2008-02-19 2008-10-01 고려대학교 산학협력단 암 치료용 리보핵산 의약 조성물
EP2300004A4 (en) 2008-05-15 2012-05-30 Univ Duke COMPOSITIONS AND METHODS RELATED TO HEAT SHOCK TRANSCRIPTION FACTOR ACTIVATING CONNECTIONS AND OBJECTS THEREFOR
US8324385B2 (en) * 2008-10-30 2012-12-04 Madrigal Pharmaceuticals, Inc. Diacylglycerol acyltransferase inhibitors
EP2287197A1 (en) * 2009-08-21 2011-02-23 Pierre Fabre Medicament Anti-cMET antibody and its use for the detection and the diagnosis of cancer
EP2309273B1 (en) 2009-09-16 2016-05-18 ZEILLINGER, Robert Novel tumor marker determination
MX346395B (es) 2010-03-17 2017-03-17 Taivex Therapeutics Corp Moduladores de actividad hec1 y sus metodos.

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Publication number Publication date
US9976183B2 (en) 2018-05-22
TW201331371A (zh) 2013-08-01
SG10201506881PA (en) 2015-10-29
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TWI641386B (zh) 2018-11-21
WO2013078145A1 (en) 2013-05-30
MX2014006088A (es) 2015-04-08
US20130171634A1 (en) 2013-07-04
EP2783217B1 (en) 2019-04-24
JP6099662B2 (ja) 2017-03-22
TWI681055B (zh) 2020-01-01
HK1202922A1 (zh) 2015-10-09
JP2015500008A (ja) 2015-01-05
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