TW201012814A

TW201012814A - Cyclopropyl polymerase inhibitors

Info

Publication number: TW201012814A
Application number: TW098121932A
Authority: TW
Inventors: Tim Hugo Maria Jonckers; Koen Vandyck; Pierre Jean-Marie Raboisson
Original assignee: Centocor Ortho Biotech Products L P; Medivir Ab
Priority date: 2008-07-01
Filing date: 2009-06-30
Publication date: 2010-04-01
Also published as: UY31950A; ES2396803T3; KR20110038683A; JP5624029B2; HRP20121068T1; ZA201009294B; EA022754B1; US20110092460A1; ECSP10010725A; CO6321255A2; CN102083845B; HK1226080A1; AR072428A1; WO2010000459A1; CN102083845A; PT2141172E; MX2010014493A; SI2141172T1; AU2009266004B2; CL2010001634A1

Description

201012814 六、發明說明：【發明所屬之技術領域】本發明係關於為C型肝炎病毒(HCV)抑制劑之核苷衍生物，以及其於HCV之治療或預防的用途。【先前技術】 HCV為一種單股、正向（positive-sense) RNA病毒，屬 ❹ ❿ 於黃病毒科（Flaviviridae family )之肝炎病毒屬（hepacivirus genus)。於初期急性感染後，大多數感染個體會發展成慢性肝炎，因HCV會優先於肝臟細胞中複製，但非是直接細胞病變的。尤其，缺乏強健的T淋巴細胞反應及病毒對突變之高傾向顯示促進了高比率之慢性感染。慢性肝炎可進展成肝纖維化，導致肝硬化、末期肝臟疾病及Hcc(肝細胞癌），使其成為肝臟移植之主要原因。有六種主要HCV基因型及超過5〇種亞型，其在地理上分佈不同。於歐洲及美國，HCV基因型i為主要的基因塑。HCV之廣泛基因異質性具有重要的診斷及臨床含意，似乎說明了疫苗發展的困難及目前療法的有限功效。 HCV之傳*可透過與汙染的企液或血液製品接觸而發生’例如隨著輸A或靜脈内藥物使用。弓|進血液筛選所使用的診斷試驗已導致輸液後贿發生的τ降趨勢。然而， == 至末期肝病，現存感染將極長時間持續造成嚴重的醫療及經濟負擔。 :月〗,HCV之照護標準係基於聚乙二醇化㈣如㈣千擾素-a(IFN-a)與利巴責妯r .. 、叫巴早林（ribavmn)之組合。此組合療 201012814 法於約50%感染HCV基因型1的病患及約80%感染基因型 2及2的病患產生持續的病毒學反應。除了於HCV基因型 1的有限功效，此組合療法具有顯著的副作用且在許多病患而f受性較差。主要的副作用包括類流感症狀、血液異常、及神經精神病症狀。因此，對於更有效、方便及較佳财受性治療有所需求。以HIV藥物的經驗，尤其HIV蛋白酶抑制劑，已敎示次理想藥物動力學及複合的投劑療程會快速地造成疏忽的服從醫囑性失敗。此意味著於HIV療程中各別藥物之24小時波谷濃度（trough concentration)(最小血漿濃度）’ 一天中大部分時間經常會下降到低於IC90或ED90閾値。認為至少IC5〇之24小時波谷濃度，更實在地，IC9〇或ED9〇之24 小時波谷濃度，對於減緩藥物逃逸變異之發展是必要的。以必要的藥物動力學及藥物代謝達成允許如此之波谷濃度提供了對於藥物設計的急迫挑戰。 RNA多基因之NS5B區域編碼RNA依賴RNA聚合酶 (RdRp)，其對於病毒複製為必要的。因此，此酵素引起醫藥化學家顯著的關注。NS5B之核苷及非核苷抑制劑為已知。核皆抑制劑可作為鏈終止劑或競爭性抑制劑，其干擾核苷酸結合至聚合酶。作為鏈終止劑之功用，核苷類似物必須被細胞攝入，且於活體内轉化成三磷酸酯。此三磷酸酯之轉化通常經細胞激酶調節，其於潛在的核苷聚合酶抑制劑透露出另外的結構需求。此外，對於能夠原位磷酸化 201012814 (in situ phosphorylation)的細胞系試驗中，此限制了作為 HCV複製抑制劑之核苷的直接評估。對於發展核料為HCV RdRPq_已騎各種嘗試，但當少數化合物進入臨床發展時，皆沒有逐步進行到登記階段。至今HCV標靶核苷遭遇的問題為毒性、突變性、缺乏選擇性、不良的效力、不良的生物可利用性、次最佳化劑量療程，因而產生的高量藥丸負擔、及物品成本。 ❹ 數個專利案及專利申請案與科學刊物揭示具有HCV抑制活性之核苷似物。WO 2004/002999揭示用於治療黃病毒感染之經修飾的2,及3，-核苷前藥。W0 2008/043704揭示 4-胺基-l-((2R，3S,4S，5R)-5-疊氮基-4-羥基_5_羥基·曱基_3_ 甲基-四Jlσ夫喃-2-基)-lH-痛咬-2-_及g旨衍生物，作為HCV 聚合酶抑制劑。Murakami Eisuke 等人(Antimicrobial Agents and Chemotherapy, American Society for Microbiology, Vol. 51，n〇.2, pp. 503-509(2007))揭示 p-D-2，-去氧-2，-氟_2,0曱 φ 基胞苦及一些類似物之HCV NS5B聚合酶之磷酸化及抑制。此等化合物中並不具有2-螺環丙基取代基。

對於可克服目前HCV療法之一或多種不利益的HCV 抑制劑仍有需求，此不利益例如為副作用、有限的功效、抗藥性之出現、及服從醫囑性失敗，以及改善持續的病毒反應。【發明内容] 本發明係關於HCV抑制4-胺基-H7-羥基-6-羥基-曱基氧雜-螺[2.4]庚-4-基)-1Η-嘧啶-2-酮類，具一或多種基於 201012814

廓、有利的病毒學輪廓、有利的毒物學及基因毒物學輪廓、及有利的藥物動力學及藥效學’並易於調配及投盘。一種此類化合物，即，4_胺基_H(4R，6R，7S)_7_羥基羥基曱基 -5-氧雜-螺[2·4]庚冰基)-1H-嘧咬-2-酮，亦稱為2，-去氧_2，_ 螺環丙基胞苷已被描述於Can. j. Chem，vqL 71> pp.413-416 ’但並未作為HCV抑制劑。 ’ 本發明之化合物亦可引人注目的是由於缺乏抗其他病毒之活性的事實’尤其是抗HI V。感染HI V的病患通常罹❹ 患諸如HCV的共同感染，以抑制HIV之HCV抑制劑治療此種病患可能導致HIV抗性株之出現。【實施方式】於一態樣中’本發明提供由式I表示之化合物：

包括其任何可能的立體異構物，其中： R2為氫或crc4烷基； R3 及 R4 為獨立地選自氫、_C(=〇)R5&_C(：=〇)CHR6_NH2 所組成之群組；或 R3為氫且R4為單磷酸酯、二磷酸酯或三磷酸酯；或 R 為氫、-C(=0)CHR5 或-C(=〇)CHR6-NH2 且 R4 為下式基： 201012814 R9

各R5係獨立地選自氫、Cl_C6烷基及C3_C7環烷基所組成之群組； R為鼠或Ci-Cg烧基； R7為苯基，可經卜2或3個取代基任意取代，此取代〇基各自獨立地選自函素基、CA烧基、c3-c6烤基、c「c6 烧氧基^基及胺基，或R7為萘基；或尺7為令朵基； R為風、C!-C6烧基、爷基； R為氮、Ci_C6烧基、节基；或 '及R與其附著的碳原子一起形成C3_C7環烷基； R為q-c：6烷基、苄基或苯基，其中該苯基可經1、2 或3個取代基任意取代’此取代基各自獨立選自經基、烷氧基、胺基、單-及二CVC6烷基胺基； ©惟’ R2、R3及R4不全為氫；或其醫藥上可接受的鹽類或溶劑合物。於另一態樣，本發明係關於式I化合物之用途，如本文所具體指出’包括其中R2、R3及R4皆為氫之式合物，用以抑制及治療HCV感染。或者，提供式I化合物於製造醫藥上之用途，如本文所具體指出，包括其中R2、R3&R4 不皆為氫之式I化合物，用以抑制及治療HCV感染。 -NH-C(R8)(R8’)-C(〇)_基團形成胺基酸殘基，其包括天然及非天然胺基酸殘基。彼等中受關注的為R8為氫之胺基 201012814 酸殘基。於後例R8不為氫時，於非對稱碳原子帶有R8之構形可為L-胺基酸之構形。此構形亦可被指定為s_構形。實例為丙胺酸(Ala)’即，於R8’為氫且R8為曱基；^ (，即’於氫且以異丙基…酸二:：，於R為氫且R8為-CH2CH(CH3)2異白胺酸(Tie)，即，於R8，為8氮且R8為_CH(CH3)CH2CH3及苯基丙胺酸(Phe)，即於 R8為氫且r8為苄基；尤其為L-Ala、L-Va卜L-Ile及L_Phe。其中R及R與其附著之碳原子一起形成C3_c7環统基之胺基酸殘基的實例為1，1_環丙基胺基酸。於以及R8,兩者皆為© 氫時 ’ -nh-c(r8)(r8’)_c(=0)-基團形成甘胺酸(Gly)。 -C(=0)CHR6-NH2基團與無具侧鏈(R6為氫）或Cl_c6烷基侧鏈之胺基酸形成胺基酸酯，此種胺基酸包含甘胺酸(R6 為氫）、纈胺酸(R6為異丙基）、白胺酸(r6為_CH2CH(CH3)2、或異白胺酸(R6為-CH(CH3)CH2CH3)，尤其為L-立體異構形式 H-L-Val-、H-L-Leu-或 H-L-Ile-。式I化合物之亞群為彼等式Ϊ化合物、或如本文定義式 I化合物中R2為氫之亞群。 ❹ 式I化合物之亞群為彼等式I化合物、或如本文定義式 Ϊ化合物中R3為氳之亞群。式I化合物之亞群為彼等式I化合物、或如本文定義式 I化合物中R4為氫之亞群。式I化合物之亞群為彼等式I化合物、或如本文定義式 I化合物之亞群，其中R3及R4之一者為氫，且“及R4之另一者係選自乙醯基、三曱基乙醯基，較佳為異丁醯基； 201012814 ^及白^:者為氫心及〜-者係選自白胺酸 ^r3^r4 r具體實施例中，r3為氯且r,如上述定義=ί體 ❹ 合物、心本歧義式1化合物中R3 及R兩者自為異丁醯基《(哪CH(CH3)2)之亞群。式I化合物之亞群為彼等化合物、或如本文定義 I化合物之亞群，其中r3為氫或_c(=〇)r5，且r4為下式基：

式I化合物之亞群為彼等式丨化合物、或式〗化合物之 ❿ 亞群，如本文定義者，其中各以為Ci_C6烷基，尤其為曱基、異丙基（1-曱基乙基）、異丁基(2_甲基丙基）、第二丁基 (卜甲基丙基）。 i 式I化合物之亞群為彼等式I化合物、或如本文定義式 I化合物中R6為氫或Cl-(：4烷基之亞群，尤其為氫、甲基或異丁基。式I化合物之亞群為彼等式I化合物、或如本文定義式 I化合物之亞群，其中： 11 201012814 (a)R為苯基，可裔基各自獨立選自鹵素基氧基、羥基及胺基，或可經1或2個取代基任意取代，此取代 ^基、Ci-C6 燒基、c3_c6 烯基、Ci-C6 炫 r7為萘基；或R7為吲哚基； (b) R7為苯基，可經鹵素基、CrC6烷基、c3_C6烯基或 Ci-C6燒氧基任意取代，或R7為萘基； (c) R7為苯基，可經鹵素基或crc6烷基任意取代，或 R7為萘基； (d) R7為苯基，可經鹵素基任意取代。於一具體實施例中，於式1化合物或其任一亞群中之17弓丨哚基為5-呷哚基。式I化合物之益群為彼等式I化合物、或如本文定義式 I化合物之亞群，其中R8為氫，且R8’為甲基或CrC6烷基’ 諸如異丙基或異丁基。式I化合物之亞群為彼等式I化合物、或如本文定義式I化合物之亞群，其中

(Gly、Ala 或 vai ;尤其為 Gly、L_Ala 或 L-Val)。式I化合物之亞群為彼等式I化合物、或如本文定義式 I化合物之亞群，其中 ⑷尺9為Cl_c6烷基或苄基； (b)R9 為 CVC6 烷基； ⑷以為烷基；或 12 201012814 (d)R為曱基、乙基、或第三丁基。式I化合物具有數個對掌性中心，尤其於广、3,、及4, 碳原子。儘管於此等碳原子上的立體化學為固定的，此化合物於各對掌中心上可顯現至少75%，較佳至少9〇%，例如超過95%之對映異構物性純度。對掌性亦可存在於取代基，例如R3及/或R4為-C(=〇)CHR6-NH2時，具非氫之r6 ;

或例如於

基團時，其在帶碳原子之汉8(於R8及 R8為不同時)及在磷原子上可具有對掌性。磷中心可呈現為 RP或Sp，或此種立體異構物之混合物，包括外消旋物。由對掌磷中心及對掌碳原子所產生的非對映異構物也可存在。本發明之具體實施例係表示2，_去氧_2，_螺環 ❹ (式ί化合物，其中R2、I^R4皆為氫)之化合物土^ 抑制劑之用途；或表示雙3’,5，-異丁醯基·2、去氧基胞苷（式I化合物，其中R2為氫且R3及R4雨二 -C(0)R5，其中R5為異丙基)之化合物作為HCv 用途；兩者為游離形式或醫藥上可接受的酸加成合物之形式；作為HCV之抑制劑或Hcv感染之治療= P方。 ’、〆一具體實施例係關於如下文實施例章節所述，化合物 1、2a、2b、2C、2d、3、4、5、6 » 7 夕、缺日 5 6及7之游離形式化 13 201012814

合物。另一具體實施例係關於此等化合物以及其醫蔡土二接受的鹽類及溶劑合物。一特定具體實施例係關於化1"另雙3，，5，-異丁醯基·2，-去氧-2，-螺環丙基胞苷之游離形嫘一特定具體實施例係關於雙3，，5，_異丁醯基-2，-女氧·"〜、環丙基胞苷’其醫藥上可接受的酸加成鹽類及溶劑合° 於另一態樣，本發明提供一種式j化厶物或其醫藥上二接受的鹽、水合物或溶劑合物，用於治療θ成預防(或治療或預防用醫藥之製造)HCV感染之用途/依據/本發明，於治療或預防之場合’代表性HCV基因型包二基因蜇lb(流行於歐洲）或la(流行於北美）。本發明亦提供二種治療或預防 HCV感染之方法，尤其是基因型ia戈^ 式I化合物被描述為-種界定的立體異構物。此種化合物之絕對構形可❹技術巾已知之方㈣定諸如I射線繞射或：=已：立趙化學之起始物質推論。依據本發明之醫樂組成物’較佳地應實質物之立體異構性純的製備物。匕s所才曰立體,、構如本文所述 ” …口仍夂T间產物之被定義為實質上不含與該化合物W 基& 結構之其他對映異構或非對映異構形式的是，“立體異構性二的”一詞係關於的二有至少80%之立體異構物性過量（即.，门座哪，、/、物與最多_其他可能的異構物)，/至：:= 構物性過量（即，纖的—種異構物且無其他者更ί體而言’化合物或中間產物具有9G%多至聰之立體異構物 201012814 性過量，再更具體為具有94%多至100%之立體異構物性過量，最具體為具有97%多至100%之立體異構物性過量。“對映異構性純的”及“非對映異構性純的”一詞應以相似方式了解，但另一方面指混合物中各別具有對映異構物性過量及非對映異構物性過量。本發明化合物及中間產物之純的立體異構形式可應用技術中已知之程序獲得，例如，對映異構物可以光學活性酸類或鹼類，經其非對映異構性鹽類之選擇性結晶化而彼此分離，其實例為酒石酸、二苄醯酒石酸、二曱苯甲醯基酒石酸及樟腦磺酸。或者，對映異構物可使用對掌固定相經層析技術分離。該純的立體化學異構物形式亦可衍生自適當起始物質之對應的純的立體化學異構物形式，惟，此反應立體特異性地發生。若一特定立體異構物為所欲的，該化合物較佳地經立體特異性製備方法合成。此等方法將有利地運用對映異構物性純的起始物質。式I化合物之非對映異構物性外消旋物可經習知方法獲得。可有利地運用適當的物理分離方法，例如選擇性結晶化及層析，例如管柱層析。本發明亦意圖包括所有於本化合物上產生的原子之同位素。同位素包括彼等具有相同原子序但不同質量數之原子。作為一般實例且並非限制，氫同位素包括氚及氘。碳同位素包括C-13及C-14。醫藥上可接受的加成鹽類包含式I化合物之治療上活性之非毒性酸及鹼加成鹽形式。受關注的為式I化合物或本 15 201012814 文所指出之式i化合物之亞群之游離（即，非鹽）形式。如本文所使用者，“游離形式’’一詞係指不為鹽形式或溶劑合物之式I化合物。醫藥上可接受的酸加成鹽類可經以適當酸處理游離形式而方便地獲得。適當酸類包含，例如無機酸類諸如氫鹵酸類，例如氫氯酸或氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等酸類；或有機酸類諸如，例如乙酸、丙酸、羥基乙酸、乳酸、丙酮酸、草酸（即，乙二酸）、丙二酸、琥珀酸（即，丁二酸）、順丁烯二酸、反丁烯二酸、蘋果酸（即，羥基丁二酸）、酒石^ 酸、捧檬酸、曱烧項酸、乙烧項酸、苯續酸、對曱苯續酸、環己胺基績酸（cyclamic acid)、水揚酸、對胺基水揚酸、雙羧萘酸（pamoic acid )等酸類。相反地，經由以適當驗處理可轉化該酸加成鹽形式成為游離形式。含酸性質子之式I化合物亦可經由以適當有機及無機鹼處理而被轉化成其醫藥上可接受的金屬或胺加成鹽形式。適當驗鹽形式包含，例如，銨鹽類、驗金屬及驗土金 Λ 屬鹽類，例如，鋰、鈉、鉀、鎂、鈣鹽類等，具有機鹼之ν 鹽類，例如苄星青黴素（benzathine )、Ν-曱基-D-葡萄糖胺、海巴明鹽（hydrabamine )鹽類，及具胺基酸諸如例如，精胺酸、離胺酸等之鹽類。相反地，該金屬或胺加成鹽形式可經以適當酸處理而被轉化成游離形式。 “溶劑合物”一詞涵括式I化合物及其鹽類能夠形成之任何醫藥上可接受的溶劑合物。此種溶劑合物例如為水合物、醇合物，例如乙醇合物、丙醇合物等。 16 201012814 一些式i化合物亦可以其互變異構物形式存在。例如，醯胺基（-C(O)-NH-)之互變異構物形式為亞胺醇類 (-C(OH)=N-)，其於具芳香性質之環中可變為安定。此種形式’儘管於本文所示結構式中並未清楚指出，但意圖包含於本發明之範疇中。如本文所使用者，“Cr(：4烷基’，作為一基團或一基團之一部分者，定義為具有1至4個碳原子之飽和直鏈或枝鏈〇烴基，例如，甲基、乙基、1-丙基、2-丙基、κ丁基、2_丁基、2-曱基-1-丙基、2-甲基-2-丙基。“Cl_c6烷基，，包含Ci_Q 烷基及其具有5或6個碳原子之較高級同系物，例如，^ 戊基、2-戊基、3-戊基、1-己基、己基、2_甲基_丨·丁基、 2-甲基-1-戊基、2-乙基-1-丁基、3_甲基_2戊基等。ca烷基中受關注的為CrCt烷基。

Ci-C6烷氧基”意指_〇_CrC6烷基基基如上列定義。絲基之例為甲氧基、乙:基、= Q 氧基、及異丙氧基。 /c3-c7環絲，，包括環丙基、環丁基、環戊基、環己基及衣‘庚基。此等之亞群為C3_C6環炫基。有興趣者為環丙基。 “c3-cw基”一詞作為一基團或一基團之一部分者，定飽和碳-碳鍵及至少一個雙鍵之直鍵或枝鍵煙基，且 1、丁檢ί 6個碳原子’例如1_丙稀基、2·丙烯基（或稀丙基）、丁稀基、3_ 丁烯基、2·甲基_2_丙烯基、2-戍烯 ΐ嫌其9 土、2_己烯基、3_己烯基、4-己烯基、2_甲基_2_ 土、-甲基-2-戊烯基等。C3_Q烯基中受關注的為c3_c4 17 201012814 烯基。C3_C6烯基或C3_C4烯基中受關注的為具有一個雙鍵的基團。 ‘‘鹵素基”一詞為氟基、氯基、溴基及碘基之總稱。如本文之使用’“(=0)，’或“酮基”一詞當附著於碳原子時形成羰基基團。應注意原子於其允許的價數可僅以一酮基取代。 “單磷酸酯、二磷酸酯或三磷酸酯，，一詞係指下列基團

ΟI! 0—^—OH

-0—1—| OH

-0—〒—〇—j OH f

T—〇—tj*—丨 OH OH

OH 如本文之使用，用於定義中之於任何分子上的基團部份可位於此基團之任何位置’只要其為化學上安定的。當於所給基團中任何變數出現超過一次，此變數之各定義為獨立的。於本文中每次使用時，“式I化合物，，或‘‘本發明化合物” 或相似詞’其意指包括式I化合物’包括可能的立體化學上的異構物形式，及其醫藥上可接受的鹽類及溶劑合物。 ❹ 製備方法其R及R兩者皆為氫之式I化合物，本文以式I_a表示’可經尿嘴咬至胞喷咬轉化反應而製備，其由2，_去氧_2，_ 螺環丙基尿苷If至對應的2’-去氧-2、螺環_丙基胞苦ig，隨後移除保護基PG，獲得所欲終產物I-a。此尿嘴咬轉化至胞痛咬可經由將尿哺唆衍生物物與P〇Cl3或二氯填酸醋 (phosphorodichloridate)反應而實施’此二氯麟酸酯諸如 18 201012814 為苯基或經取代苯基二氯磷酸酯，例如’ 4-氯苯基二氣磷酸酯、及三唾或四唾。此反應可於反應惰性溶劑中於驗存在下進行’例如，齒化烴諸如二氯甲烧’於三級胺存在下，諸如三乙胺或，亦可使用鹼性溶劑諸如吡啶。如果需要，生成的下式三唑或四唑衍生物可經分離及纯化··

後者以氨或R2-NH2之處理獲得對應的胞嘧啶衍生物Ig。移除PG基最後導致所欲終產物p如本文之使用，pG代表經基保護基，尤其下文所述基團之一者。 1 上述轉化所使用之中間產物lf，係經由在中間產物 ❹ 形成反應，且隨後移除中間產“ 鍵之加成，隨後以環㈣基團之形成及氮 = 重排，較佳於光敏化劑存在下，諸如二 /、子較佳於反應惰性溶财進行，例如 ^。此專反應中進行’諸如二乙醚，且於芳香族甲=可於_ 苯或曱苯’或非質子二極性溶劑諸如乙产子卜諸如中間產物Id由中間產物lc經^、或其混合物。在此反應中’後者與曱基三笨基鱗自化物，較佳為翁 201012814 化物或溴化物，於反應惰性溶劑諸如醚（例如二乙醚或四氫呋喃）中反應。中間產物lc依次於吡啶中之乙酸酐存在下，經由中間產物lb中之2，-羥基之氧化反應而衍生，例如，以二氧化鉻。la中4’及5’_羥基之選擇性保護產生中間產物 lb。為了避免副反應，4’及5，-羥基較佳以羥基保護基PG 保護’且於尿喷啶基團之胺基(NH)官能基以胺基保護基PG1 保護。羥基保護基PG可為不同或相同，或合併形成環保護基。PG例如為三烷基矽烷基，諸如三曱基矽烷基(TMS)、© 第二丁基二甲基矽烷基（TBDMS)、或三異丙基矽烷基 (TIPS)。或兩個PG基團合併形成聚烷基化二矽氧烷—^^二基’諸如四異丙基二矽氧烷_丨，3二基(TIpDS)。此等基團可經酸或氟離子（諸如NaF或氟化四正丁基銨_TBAF)移除。另一經基保護基’其亦可為胺基保護基，為三苯曱基或經取代三苯曱基，例如4-甲氧基-三苯甲基((4-曱氧基苯基)(聯苯基）甲基）’其於酸性條件下被移除，例如經乙醇/HC1 ’或以乙酸處理。 ❹ 選擇胺基保護基PG1，如此其可選擇性裂解成PG基團。可使用之胺基保護基為苄醯基。其他此種基為二曱基胺基亞曱基，其可使用二曱基曱醯胺乙縮醛導入。於酸性條件下，二甲基胺基亞甲基被移除，例如以乙醇/HC1處理。上述反應說明於下列反應流程圖。 20 201012814

鑲謹反應後去保護 ❹

理丙烷作用丨· » Ο

去保護

t-a 流程圖1 · 2’-去乳-2’-螺ί哀丙基胞皆之一般合成〇如下列反應流程圖所描繪，式I-a化合物依序可被轉化成氨基填酸酯類（phosphoramidates)。於驗存在下將化合物I-a與氯構酸酯（phosphorochloridate) 2a反應，獲得氨基磷酸酯I-b。此反應可使用之溶劑包含醚類’例如二乙醚或THF，或吡啶，或其混合物。可添加例如N-曱基咪唑之鹼，以捕獲於反應期間所形成的酸。 21 201012814

流程圖2 :氨基磷酸酯之一般合成法 I-a之單-或二-酯之合成描述於下列流程圖3。於此流程© 圖中，尺以及R4a獨立為-C(=〇)r5 4_c(=〇)chr6_nH2，或具體而吕，R及R獨立為-C(=〇)R5。於R3a及R4a獨立為 -C(=0)CHR6-NH2時，後者基團之胺基較佳經胺基保護基保護’例如上述任何胺基保護基PGi，且此基可以 -CPCOCHR^-NH-PG1表示。使用移除此種基之適當反應條件，可移除胺基保護基’例如，PG1可為BOC基團，且可於酸性條件下移除。當游離胺基不會再干擾隨後反應步驟時’於任何階段可移除此胺基保護基，但通常於最後步驟❹ 移除。中間產物3a中之較有反應性的5’-羥基可被選擇性保護，如同在中間產物3b ’其依序被醋化成3c ’隨後尿喷咬至胞嘧啶轉化成3d。後者被去保護，產生3’-單酯i_c。工-c 中5’-羥基之酯化產生終產物I-d。較有反應性的5’-羥基亦可經選擇性酯化導入R4基’以產生3e ’且所產生的5，-醋中間產物可隨後以不同的酸酯化，因而導入R3a基’其如上 22 201012814 述定義。此等酯化反應產生二-酯中間產物3f，其被提交到尿σ密咬至胞嘴σ定轉化，產生終產物I-d。尿嘴咬至胞痛咬轉化使用上述製備中間產物lg之程序進行。

R3*' i-d 流程圖3 :單-及二-酯類之合成 23 201012814 如上列所指明，R3a為氫且R4a為酯之式I化合物，該

化合物以I-e表示，其製備可藉由以羥基保護基保護中間產物3b之游離羥基，該羥基保護基選擇性裂解成其他羥基保護基，生成中間產物4a。然後下一步驟涉及5’-羥基保護基之移除，產生中間產物4b，隨後酯化反應中間產物4c。隨後尿嘧啶至胞嘧啶轉化，產生對應的4’-羥基經保護胞苷衍生物4d，其經去保護而產生5’-經取代、4’-未經取代的衍生物I-e。此等反應呈現於流程圖4,其中PGa基具有如PG之相同意義，但被選擇因而PG可選擇性裂解至PGa基團。例如，PG可為三苯曱基或4-曱氧基三苯甲基，而PGa為三烷基矽烷基諸如三甲基矽烷基或第三丁基二甲基矽烷基。 24 201012814 ο

ο

選擇性酯化

選擇性去保護

鼷至臓陡

流程圖4 :單酯類之合成 25 201012814 R3a&尺43為相同酯基之式I化合物，下文以I-f表示，可以相同羧酸，經酯化兩羥基，而自化合物3a製備。

流程圖5 :二酯類之合成起始物質3a可經移除中間產物If中的羥基保護基PG 而製備，其可如上列流程圖1之說明製備。 “胺基保護基”或“N-保護基”一詞包括醯基，諸如曱醯基、乙醯基、丙醯基、三甲基乙醯基、第三丁基乙醯基、 2-氯乙醯基、2-溴乙醯基、三氟乙醯基、三氣乙醯基、酞醯基、鄰硝基苯氧基乙醯基、α-氣丁醯基、苄醯基、4-氣苄醯❹ 基、4-溴-苄醯基、4-硝基苄醯基等；磺醯基，諸如苯磺醯基、對曱苯磺醯基等；胺基曱酸酯形成基，諸如苄基氧基羰基、對氣-苄基氧基羰基、對甲氧基苄基氧基羰基、對硝基苄基氧基羰基、2-硝基苄基氧基羰基、對溴苄基氧基羰基、3,4-二曱氧基苄基氧基-羰基、4-甲氧基苄基氧基羰基、 2-硝基-4,5-二曱氧基苄基氧基羰基、3,4,5-三曱氧基苄基氧基羰基、1-(對聯苯基)-1-曱基乙氧基羰基、α,α-二曱基-3,5- 26 201012814 二曱氧基苄基-氧基羰基、二苯甲基氧基羰基、第三丁氧基_ 幾基、二異丙基甲氧基幾基、異丙基氧基幾基、乙氧基幾基、曱氧基羰基、烯丙基氧基羰基、2,2,2-三氯乙氧基幾基、苯氧基羰基、4-硝基苯氧基羰基、第基_9_曱氧基艘基、環戊基氧基羰基、金剛烷基氧基羰基、環己基氧基羰基、笨基硫羰基等；烷基，諸如苄基、三苯基曱基、苄基氧基甲基等，及珍烧基’諸如三曱基碎烧基等。 Ο ❹ 羥基-保護基包括醚類’諸如曱基、經取代甲基趟類，諸如曱氧基曱基、曱硫基曱基、苄基氧基曱基、第三丁氧基甲基、2-曱氧基乙氧基甲基等，梦燒基鍵類，諸如三曱基矽烷基(TMS)、第三丁基二甲基矽烷基(TBDMS)三苄基矽烷基、三苯基矽烷基、第三丁基二苯基矽烷基、三異丙基矽烷基等；經取代乙醚類，諸如丨_乙氧基甲基、曱基_丨一甲，基乙基；第三丁基、烯丙基、苄基、對曱氧基苄基、二苯基甲基、三苯甲基等4旨經基保護基包括賴，諸如甲酸酉曰、节基甲酸酉旨、氯乙酸酉旨、曱氧基乙酸醋、苯氧基乙 =醋、三曱基乙酸醋、金剛酸(adamant)、三甲基酯、苯甲酸酯等。治療本發明係關於—種醫藥組成物，其包含較荜上的式1化合物(如本文所具體指出者），及一種 w樂上可接受的載劑。在’二受感染的病患或料♦祕“ /療上料量係一種在抗、或安定化、或、“ f病患中，足以以預防方式對送、九 ^减輕病毒感染的數量，尤苴是HCV病毒感染。於另一態樣中士里兀，、疋届毋中本發明係關於一種製備醫藥組成物(如 27 201012814 本文所具體指出者）之方法，其包含完全混合醫藥上可接受的載劑與治療上有效量之式I化合物（如本文所具體指出者）。本發明之化合物或其任何亞群可依投與目的被調配成各種醫藥型式。作為適當的組成物，此等可被引用的所有組成物通常被運用於全身性投與藥物。為了製備本發明之醫藥組成物，特定化合物之有效量可任意地為加成鹽型式或金屬複合物作為活性成分，與醫藥上可接受的載劑完全混合合併，依所欲投與製劑之型式，載劑可採廣泛多樣化型式。此等所欲的醫藥組成物為適於單一劑型，尤其適用於口服投與、直腸投與、皮下投與、或腸胃外注射。例如，於製備口服劑型之組成物，可運用任一種通常的醫藥媒劑，於口服液體製劑，諸如懸浮液、糖衆劑、酿劑、乳劑及溶液之情形，可例如為水、二醇類、油類、醇類等；或於粉末劑、丸劑、膠囊及錠劑之情形為固體載劑，諸如澱粉、糖類、高嶺土、潤滑劑、結合劑、崩散劑等。因其易於投與，錠劑及膠囊代表最有力的口服單位劑型，於此情形顯然運用固體醫藥載劑。於腸胃外組成物，載劑通常包含無菌水，至少為大部分，然而可包括其他成分，例如為了幫助溶解。例如製備可注射溶液，其中載劑包含鹽水溶液、葡萄糖溶液或鹽水及葡萄糖溶液之混合物。亦可製備可注射懸浮液，其中可應用適當液體載劑、懸浮劑等之情形。亦包括者為固體型式製劑，其於欲使用前短暫時間被轉化成液體型式製劑。於適合經皮投與之組成物中，此載 28 201012814 劑可選擇包含穿透增進劑及/ 量比例之任何天然之適當添加以濕：劑’可任意與小會導入顯著的毒性效果。本發明：：丄该添加劑對皮膚不吹入投與，以溶液、懸錢或。物亦可細吸入或術中已知的遞迸系統。杨末之型式，使用任何技

調配易於投與且劑量均—β 物為特別有利的。如本文使用之^位劑型的前述醫藥組成一劑量之物理上分離的單位型仙適合作為單的活性成分以產生所欲户瘃^s 3有預定量之經計算結。此等單位劑型之例為°錠劑（包括^與戶斤需醫藥載劑連或包衣錠）、膠囊、丸劑、栓劑、錠（_edtablet) 可注射溶液或懸浮液等，及其二匕、粉片（wafers)、 r ,u 刀離的成抵品。式I化合物顯示抗HCV之活 HCV感染或與Hcv有關之疾病^^用於治療及預防化、炎症及壞死導致肝硬化 ^者包括漸進式肝纖維發明之化合物可對於HCV突變株且右丙、及HCC。此外本 ::=有示有利的藥物動力學輪:== 率項目上可具有引人注目的性質’包括可接受的半衰期、 AUC(曲線下面積)及峰值、及缺乏不利的現象，如不充分的快速起始及組織停滯。亦引人注目的是由於本發明化合物之低毒性及良好選擇性指數可被證實，例如於細胞毒性試驗。此外，本發明之化合物缺乏抗其他病毒之活性，尤其抗mv。於共同感染的病患中’使用具雙重或多重抗病毒效果之藥物；能導 29 201012814 致抗其他病毒的次最佳化投劑，結果可導致抗病毒株的出現0 式I化合物之活體外抗HCV之抗病毒活性可於細胞 HCV複製子系統（HCV replicon system)中試驗，基於

Lohmann et al.(1999) Science 285 : 110-113，以 Krieger et al.(2001) Journai 〇f Virology 75 : 4614-4624(以參考文獻併入)所述進一步修飾’其進一步示例於實施例章節。此模式，並非HCV完全感染模式，被廣泛接受作為目前可取得之自發HCV RNA複製之最健全及有效的模式。應了解於Hcv❿ 複製子模式中區分特異性干擾HCV功能之化合物與彼等發揮細胞毒性或細胞靜止效果的化合物為重要的，結果造成 HCVRNA或連結報導子酵素濃度之降低。於評估細胞毒性的領域中試驗係屬已知，例如基於粒線體酵素活性，使用諸如刃天青（resazudn)之螢光氧化還原染料。此外，細胞計數篩選用於連結的報導子基因活性之非選擇性抑制之評估，諸如螢火蟲螢光酶。以依據構成的活性基因啟動子而表現的螢光酶報導子基因穩定轉染，可準備適當的細胞型❹ 式，且此等細胞可使用作為計數篩選，以排除非選擇性抑制劑。由於其抗病毒性質，尤其是抗HCV性質，式合物，包括任何可能的立體異構物、其醫藥上可接受的加成鹽類，溶劑合物’有助於用於治療感染HCV之溫金動物，尤其疋人類’且用於溫血動物中Hcv感染之預防，尤其是人類。本發明進一步更係關於一種治療感染HCV之溫血動物之方 30 201012814 法，尤f是人類’或有成為感染HCV風險的溫血動物，該方法包含投與抗HCV有#| + + τ & Α , 负欢量之式I化合物，如本文所且體指出者。 ❹

因此’本發明之化合物可用於作為醫藥，尤其作為抗 HCV醫藥或作為HCV-抑他醫藥。本發明亦係關於化合物於製造治療或預防HCV感染之醫藥之用途。該作為醫藥之使用威治療方法包含對於HCV感染的病患’或對HCV感染有感受性的病患，全身性投與一種如本文所具體指出之式Η匕合物之量，該量有效防止與Hcv感染有關的病況。〆般而言，預期每日抗病毒有效量為約〇〇1至約7〇〇毫克/公斤，或約〇·5至約400毫克/公斤，或約！至約25〇毫克/公斤，或約2至約200毫克/公斤，或約1〇至約15〇毫克/么斤體重。應明瞭於全日適當間隔投與所需劑量，如二、多、四或多個之次劑量。該次劑量可被調配為單位劑型，例如每單位劑型中含約1至約50〇〇毫克，或約5〇至約30〇0毫克’或約100至約1000毫克，或約200至約600 毫克，或約100至約400毫克之活性成分。本發明亦係關於一種式I化合物、其醫藥上可接受的鹽或溶劍合物、及另一抗病毒藥物之組合物，尤其另—抗HCV 化合物。‘‘組合物”一詞可關於含如上列具體指明之（a)式I 化合物’及(b)任意之其他抗HCV化合物之產品，作為於同時、分開或連續使用於治療HCV感染之組合製劑。 <用於此種組合物之抗HCV化合物包括hcv聚合酶抑制劑、HCV蛋白酶抑制劑、於HCV生活史中之其他標的 31 201012814 之抑制劑、及免疫調節劑，及其組合。HCV聚合酶抑制劑包括 NM283(瓦羅他平；valopicitabine)、R803、JTK-109、 JTK-003、HCV-371、HCV-086、HCV-796 及 R-1479、 R-7128、MK-0608、VCH-759、PF-868554、GS9190、 XTL-2125、NM-107、GSK625433、R-1626、BILB-1941、 ANA-598、IDX-184、IDX-375、MK-3281、MK-1220、 ABT-333、PSI-7851、PSI-6130、VCH-916。HCV 蛋白酶之抑制劑（NS2-NS3抑制劑及NS3-NS4A抑制劑）包括 BILN-2061 、VX-950(特拉匹韋，telaprevir)、 GS-9132(ACH-806)、SCH-503034(伯希匹韋，boceprevir)、 TMC435350(亦稱為 TMC435)、TMC493706、ITMN-191、 MK-7009、BI-12202、BILN-2065、BI-201335、BMS-605339、 R-7227、VX-500、BMS650032、VBY-376、VX-813、SCH-6、 PHX-1766、ACH-1625、IDX-136、IDX-316。HCV NS5A 抑制劑之一實例為 BMS790052，A-831、A-689、NIM-811 及 DEBIO-025為NS5B親環素(cyclophilin)抑制劑之例。於HCV生命週期中之其他標的之抑制劑包括NS3螺旋® 酶；金屬蛋白酶(metalloprotease)抑制劑；反義寡核苷酸抑制劑，諸如 ISIS-14803 及 AVI-4065 ; siRNA’s，諸如 SIRPLEX-140-N;載體-編碼的短髮夾狀RNA(shRNA); DNAzymes ; HCV特異性核糖核酸酶（ribozymes )，諸如海他酶（heptazyme)、RPI.13919 ;進入抑制劑，諸如 HepeX-C、HuMax-HepC ;酷祿键（α-glucosidase)抑制劑， 32 201012814 諸如賽共西韋（celgosivir)、UT-231B 等；ΚΡΕ-02003002 ; 及 BIVN401。免疫調節劑包括天然及重組干擾素異型化合物，包括 α-干擾素、β-干擾素、γ_干擾素、及ω-干擾素，諸如Intron A®、Roferori-A®、Canferon-A300®、Advaferon®、 Infergen®、Humoferon®、Sumiferon MP®、Alfaferone®、 IFN-beta®、及Feron® ;聚乙二醇衍生的（聚乙二醇化）干擾素化合物，諸如PEG干擾素-a-2a(Pegasys®)、PEG干擾素 _a-2b(PEG-Intron®)、及聚乙二醇化 IFN-a-con 1 ;長作用調配物及干擾素化合物之衍生作用，諸如白蛋白稠合的干擾素阿普豐a(albuferon a);於細胞刺激干擾素合成之化合物，諸如雷西莫特（resiquimod);介白素（interleukins)；增進第1型輔助T細胞反應之發展之化合物，諸如 SCV-07 ;類TOLL受體激動劑諸如CpG-10101(艾丁倫， actilon)、及艾沙托立賓（isatoribine);胸腺肽 a-1 (thymosin a-1) ; ANA-245 ; ANA-246 ;組織胺二鹽酸鹽；丙帕錄 (propagermanium);十氧化四氣(tetrachlorodecaoxide);阿普林津（ampligen) ; IMP-321 ; KRN-7000 ;抗體，諸如西瓦西爾（civacir)及XTL-6865 ;及預防及治療性疫苗，諸如 InnoVac C 及 HCV E1E2/MF59。其它抗病毒劑包括利巴韋林、阿曼他丁（amantadine)、維拉米丁（viramidine)、硝唑尼特（nitazoxanide);汰比夫定 (telbivudine) ; NOV-205 ;他立韋林(taribavirin);内核糖體進入之抑制劑；廣效性病毒抑制劑，諸如IMPDH抑制劑， 33 201012814 及黴紛酸(mycophenolic acid)及其衍生物，包括但不限於 VX-497(美泊地布 ’ merimepodib)、VX-148、及/或 VX-944); 或上述任何之組合。於該組合物中使用之特殊藥劑包括干擾素-a(IFN-a)、聚乙二醇化干擾素-a或利巴韋林，以及基於抗體標靶抗 HCV抗原決定位、小干擾RNA(SiRNA)、核糖核酸酶、DNA 酶（DNAzymes)、反義RNA、小分子拮抗劑例如NS3蛋白酶、NS3螺旋酶及NS5B聚合酶之治療。於另一態樣’提供如本文所具體指出之式I化合物及抗® HIV化合物之組合。後者較佳為HIV抑制劑者，其於改進生物可利用率之藥物代謝及/或藥物動力學上具有正面效果。此種ιπν抑制劑之實例為利托那韋(ritonavir^如此，本發明進一步提供一種組合物，其包含(&)式〗化合物或其醫藥上可接受的鹽或溶劑合物；及(b)利托那韋或其醫藥上可接受之鹽。化合物利托那韋、其醫藥上可接受的鹽類、及其製備之方法述於WO 94/14436。us 6,037，157及其中引述之參考文獻：US 5,484,801、US 08/402,690、WO ❿ 95/〇7696、及WO 95/09614,揭示利牦那韋之較佳劑型。本發明亦係關於一種製備本文所述組合物之方法，包含合併如前文所指式Ϊ化合物及另一藥劑，諸如抗病毒劑，包括抗HCV或抗HIV劑，尤其是前文所述者。該組合物可發現用於製造用於在受感染之哺乳類動物中治療HCV感染之醫藥，該組合物尤其包含如前文所指式 I化合物及干擾素-α卿·α)、聚乙二醇化干擾素_α、或利巴 34 201012814 韋林。或者本發明提供一種治療感染HCV之哺乳類動物之方法，尤其是人類，包含投與該哺乳類動物有效量之如本文所具體指出之組合物。尤其，該治療包含全身性投與該組合物，且有效量為有效於治療與HCV感染有關之臨床病況的數量。於一具體實施例中，上述組合物被調配為醫藥組成物之型式，其包括上述活性成分及如上所述之載劑。每一種 Ο 活性成分可被分開調配，且調配物可共同投與，或如果需要進一步提供活性成分，一調配物含有兩者。於前者之情形，此組合物亦可被調配為合併的製劑，以同時、分開或連續使用於HCV治療，該組成物可採上述任一型式。於一具體實施例中，兩成分被調配成一劑型諸如固定劑量組合。於-特定具體實施例巾，本發明提供—種醫藥組成物，其包含⑷治療上有效量之式Ϊ化合物，包括其可能的立體異構物型式，或其醫藥上可接受的鹽、或其醫藥上可接受 ❹的》谷劑合物，及治療上有效量之利托那韋或其醫藥上可接受的鹽，及(c)載劑。本發明組合物之個別成分於治療期間可於不同時間被分開投與，或同時以分開或單一組合物型式投與。本發明意欲包含所有此種同時或間隔治療之療程，且“投與”一詞因此被理解”佳具體實施财，分開劑型被同時投與。於一具體實施财’本發明之組合物含有適量之利托那韋’或其醫藥上可接受的鹽’相對於該式Z化合物單獨被投與之生物可利用率’其足以臨床上改善式t化合物之生物 35 201012814 可利用率。或者’本發明之組合物含有適量之利托那韋，或其¾藥上可接受的鹽，相對於當式I化合物單獨被投與之該至少一種藥物動力變數’其足以增加式丨化合物之至少一種藥物動力變數，該變數選自t1/2、Cmin、Cmax、Css、12小時之AUC，或24小時之AUC。本發明組合物可以於該組合物中每一所含成分之特定劑量範圍投與至人類，例如，如上具體指明之式合物，及利托那羊或其醫藥上可接受的鹽，可具有範圍為 0.02 至 5·0克/日之劑量程度。式I化合物對利托那韋之重量比可為® 約30 : 1至約1 :丨5 ’或約15 : 1至約1 : 10，或約15 : 1 至約1 · 1 ’或約10 : 1至約1 : 1，或約8 : 1至約〗：，或約5 . 1至約1 : 1，或約3 : 1至約1 :卜或約2 : 1至1 : 1之範圍。每日可共同投與式I化合物及利托那韋一次或二 -人較佳為口服’其中每劑式I化合物之量如上所述；且每劑利托那早之量為！至約25〇〇毫克，或約 50至約1500毫克’或約100至約8〇〇毫克，或、約100至約400毫克，或 40至約100毫克之利托那韋。 ❿ 本文所引述之所有參考文獻以參考文獻倂入本文。實施例下列實施例中，化合物名稱以Chemdraw UltraTM軟體， Cambridgesoft，第 9 〇 7 版產生。實施例1.4-胺基經基·6-經基甲基-$氧雜·螺[2 4]庚基)-1Η·嘴咬 36 201012814

α-6)

了 BAF THF

步驟 1 : l-((6aR，8R，9R，9aS)-9-羥基-2,2,4,4-四異丙基 -6a,8,9,9a- 四氫 -6H- 呋喃幷 37 201012814 8_基）嘧啶-2,4(1H，3H)-二酮 [3,2-f][l,3,5,2,4]trioxadisilocin- (1-1) 將含D-尿苷(2〇克)及！，^工氯+ ^义四異丙基二矽氧院（1.018 g篁）之*1比咬(300宅升）混合物於室溫授拌64小時。於真空（30 C)中移除°比咬，將殘餘物再次溶解於丨〇〇毫升CHfl2，以水(3x75毫升）洗滌，以無水MgS〇4乾燥並過濾。將蒸發濾液至乾燥並用於下一反應。LC-MS : Rt : 3.16 分鐘，m/z : 487(M+H)+。步驟 2 : 1-((6&11，811，9&11)-2,2,4,4-四異丙基_9-酮基四氫-611-® °夫 α南幷[3,2-f][l，3,5,2,4]trioxadisilocin-8-基）嘴咬 -2,4(1H，3H)_ 二酮（1-2) 將中間產物1-1(19.93克）溶解於200毫升CH2C12，加入吼啶（1當量）及乙酸酐(2.91當量），隨後加入〇：1*03(2.75 當量）。於室溫攪拌混合物，30分鐘後觀察到溫和的回流。攪拌90分鐘後’LC-MS指出形成反應產物1-2(50%)及留下起始物質1-1(50%)。另攪拌2小時生成55%之產物1-2及殘留45%之1-1。另添加1〇毫升吡啶、5毫升乙酸酐及5克❹ Cr〇3’並於室溫攪拌此混合物隔夜。[e-MS指出少量進展。將暗棕色溶液傾注至1300毫升乙酸乙酯，並將殘餘物通過矽藻土(dicahte)墊過濾。沉澱物以另外的乙酸乙酯洗滌。蒸發合併的濾液至乾燥。使用CH2C12至1 : 1之CH2C12/乙酸乙酯，以管柱層析純化中間產物1-2。薄層層析(TLC)指出兩個點。因此使用7 : 3之庚烧/丙網，將中間產物ι_2以管柱層析再次純化。收集含產物的部分，並蒸發生成8 5克之 38 201012814 白色固體(1-2)。LC-MS : Rt : 3.31 分鐘，m/z : 485(M+H)+。備註：亦觀察到酮之水合物：LC-MS : Rt: 3.20分鐘，m/z : 503 (M+H)+。步驟3: 1-((6&尺，811，938)-2,2,4,4-四異丙基-9-亞甲基四氫 -6H-吱喃幷[3,2-f][l，3,5,2,4]trioxadisilocin-8-基）嘧咬 -2,4(1H，3H)-二酮(1-3) 將NaH(0.897克）懸浮於15毫升乾燥二曱基亞颯 q (DMSO) ’並於氬氣下加熱至65°C 1.5小時。在撥拌下加入溴化曱基三苯基鱗（12.84克）’隨後加入30毫升乾DMSO 及15毫升乾四氫呋喃（THF)。於室溫攪拌混合物1.5小時，形成黃色/橘色混合物。然後經由注射器逐滴加入溶解於2〇毫升乾THF之中間產物^2(6.97克）’全部於室溫攪拌u 小時’然後於5 0 C擾摔1小時。然後冷卻混合物至室溫，通過矽藻土（dicalite)塞濾除沉澱物，濃縮濾液（以移除 THF) ’並將殘餘物分配於CHC13及水之間（各300毫升）， ❹ 分離有機層，水層以CHCI3萃取。合併的層通過矽藻土 (dicalite)塞過濾並濃縮。使用CH2C12至7 : 3之CH2C12/ 乙酸乙醋作為洗析液，將產物經管柱層析純化。蒸發生成 2.97克呈白色固體之中間產物i_3cLC-MS : Rt: 3.56分鐘， m/z : 483(M+H)+。步驟 4 : 3-节醯基-1_((6&11，811，938)-2,2,4,4-四異丙基-9-亞甲基四氫-6Η-σ夫喃幷[3,2-;^[1，3,5,2,4]114〇乂&(11311〇(^11-8-基)濟口定 -2,4(1H，3H)·二酮(1-4) 39 201012814 以20毫升無水吡啶蒸發中間產物1-3(2.4克)2次，然後將其再次溶解於30毫升無水吡啶。添加二-異丙基乙基胺 (3當量），隨後添加氣化节醯基（1.5當量）。混合物於室溫攪拌2小時。在低於30°C真空中蒸發吡啶，並加入150毫升 CH2C12。所產生的混合物以50毫升飽和NaHC03洗滌2次，有機層於MgS04上乾燥，過遽並蒸發，殘餘物於真空中乾燥64小時。使用CH2C12至8 ·· 2之CH2C12/乙酸乙酯作為洗析液，將中間產物1-4經管柱層析純化。蒸發後，獲得 2.89克呈白色泡沫之1-4。LC-MS : Rt : 3.79分鐘，m/z : 587(M+H)+。步驟 5 : 3-苄醯基小((3’11，6&11，811，933)-2,2,4,4-四異丙基 -4’，5’，6,6a，8,9a- 六氫螺 [吱味幷 [3,2-f][l，3,5,2,4]trioxadisilocine-9,3’_ σ比唾]-8-基）。密口定 -2,4(1Η，3Η)-二_及其表異構物（epimer ) 3-苄醯基 -1-((3’8,6&11，811，938)-2,2,4,4-四異丙基-4，，5,6,63,8,93-六氫螺[σ夫0南幷[3,2-f][l,3,5,2,4]trioxadisilocine-9,3’-«nt^]-8-S) 嘧啶-2,4(1H，3H)-二酮(1-5) 自N-甲基-N-亞硝基-P-甲苯磺醯胺(DIAZALD)(4.862 克），及含KOH(2.9克）之二乙醚及2-(2_乙氧基乙氧基）乙醇產生重氮曱烷，將其溶解於含1-4(1.072克）之二乙醚(20毫升）之攪拌溶液’其於冰水浴中冷卻。當蒸餾完全時，於室溫攪拌黃色溶液直到TLC或LC-MS顯示反應完全。將混合物蒸發至乾燥’生成1.149克白色泡沫。LC-MS指出表異 201012814 構物（1-5)之3 : 1混合物，其被使用於下一反應。LC-MS : Rt : 3.67 與 3.68 分鐘，m/z : 629(M+H)+。步驟 6 : 3-苄醯基-1-((6&，尺，8，11，9&，8)-2’，2’，4’，4’-四異丙基六氫螺 [環丙烷 -1,9’- 呋喃幷 [3,2-幻[1，3,5,2,4]1；14〇乂3(^11〇(^116]-8’-基）癌唆-2,4(111，311)-二酮(1-6) 在氬氣下，於室溫攪拌中間產物1-5(250毫克）與溶解 0 於5毫升1 : 1之無水苯/CH3CN的二苯甲酮（1當量）之混合物。此混合物以150瓦鹵素燈照射直到LC-MS顯示起始物質之完全轉化。蒸發混合物至乾燥，並使用CH2C12作為洗析液’以管柱層析純化中間產物1-6。純化濾份蒸發後，獲得呈清澈油狀物之1-6(150毫克）。LC-MS : Rt : 3.91分鐘， m/z : 601(M+H)+。步驟7: 1-(^%8’尺如，8)-2，,2，，4，，4，-四異丙基六氫螺[環丙烧-1，9’-呋喃幷[3,2-f][l，3,5,2,4]tri〇xadisilocine]-8，-基）嘧啶 ❹-2,4(1H，3H)-二酮（1-7) 將中間產物1-6(150毫克）溶解於3毫升CH2C12，並加入10耄升ΝΗν曱醇。擾拌混合物1小時，蒸發至乾燥，使用CHWl2至9 : 1之CH/h/乙酸乙酯作為洗析液，經管柱層析純化。蒸發後，獲得無色油狀物，其以二乙鰱研製及蒸發後’生成87毫克呈白色泡沫之中間產物^7。LC-MS : Rt : 3.66 分鐘，m/z : 497(M+H)+。 201012814 步驟8 : 4-胺基-1-((63%8，艮9&，8)-2，，2，，4，，4，-四異丙基六氫螺[環丙烷-1，9’-呋喃幷[3,2-f][l，3,5,2,4]trioxadisilocine]-8，· 基)鳴啶-2(1H)-酮(1-8) 將1-7(1.0克）溶液溶解於2〇毫升無水吡咬，並將此溶液於冰浴中冷卻。逐滴添加4_氯苯基二氯磷酸酯（15當量）’並冷攪拌此溶液5分鐘。然後，逐滴添加四唑(3當量， 0.45 Μ溶液於CH3CN)。移除冰浴，進行反應直到LC-MS 顯示未進一步進行。另添加1當量之4-氯苯基二氣磷酸酯，並另於室溫授拌混合物3小時。LC-MS指出無起始物質留® 下。將混合物蒸發至乾燥（<40°C )，並將殘餘物置入 CH2C12(75毫升），以飽和NaHC03洗滌2次。以Na2S04乾燥有機相，過濾並蒸發。將先前反應之殘餘物溶解於二今烷(0.5M)之25毫升NH3溶液。於規律間隔添加額外含二哼烧之ΝΑ直到以LC-MS判斷為反應完全。當完成時，將混合物蒸發至乾燥。使用CH2C12至9: 1之CH2C12/曱醇作為洗析液’將中間產物1-8經管柱層析純化。蒸發後，獲得呈黃色至橘色黏稠固體之1-8(840毫克）。LC-MS : Rt : 3.42❹ 分鐘，m/z : 496(M+H)+。步驟9 : 4-胺基-1-(7-經基-6-經基甲基_5_氧雜_螺[2.4]庚-4- 基)-1Η-喷咬-2-酮（I) 將中間產物1-8(840毫克）溶解於25毫升THF，加入氟化四正丁基銨(TBAF; 2當量）。於室溫攪拌混合物i小時，然後於真空中蒸發。使用9:1之CHC13/曱醇至3: i之CHCl3/ 曱醇作為洗析液’將化合物經管柱層析純化2次。蒸發含 42 201012814 產物之各濾份後，獲得呈白色固體之化合物1(300毫克）。 LC_MS : Rt: 1.25 分鐘，m/z : 254(M+H)+。NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.31-0.59(m, 3H), 0.93-1.02(m, 1H), 3.5l_3.65(m, 1H)，3.71(d，J=4.89 Hz, 2H)，3 97(t, J=5 87 Hz, 1H), 4.98(t, J=4.99 Hz, 1H), 5.12(d, J=5.87 Hz, 1H), 5.72(d, J=7.43 Hz, 1H), 6.01(s, 1H), 7.13(br. s., 2H), 7 77(d J=7 24 Hz, 1H). ，，.

實施例2 : (2S)-节基2-((((4R，6R，7S)_4•⑷胺基_2_嗣基嘴啶丄(2H)-基)_7_經基-5-氧雜螺[2.4]庚烧-6-基）甲氧基χ苯氧基）磷醯基)胺基）丙酸酯

(2a) 胺美^ )與(2S)砰基2·(氯(苯氧基)磷醯基 =基）丙W旨(279毫克，2.〇當量）—起溶解於乾τ靜比咬。冷:混合物至-m：，添加Ν_甲基味唾(刪1)(259毫克，8 =’並於_78 C攪拌此混合物15分鐘，然後於RT攪拌隔夜。瘵發所產生之混合物至乾燥。添加1〇毫升CH2Cl2 43 201012814 並以10毫升0.5N HC1洗蘇殘餘物。分離有機層並以ι〇毫升水洗蘇’於Na2S〇4乾燥，過遽並蒸發。使用ch2c12至 CH^CL/MeOH 9-1作為洗析液，將化合物經梦凝膠層析純化(於此洗析液中Rf=0.2)。獲得黃色固體，使用EtOAc至 EtOAc/MeOH8-2作為洗析液，以管柱層析再次純化。蒸發並於真空乾燥隔夜後’獲得80毫克(33.4%)之2a(非對映異構物之混合物）。LC-MS : Rt : 3.37 分鐘，m/z : 569(M-H)-。 'H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 〇.31-0.41(m, 1H), 〇.43_0.58(m，2H), 0.95-l.〇6(m, 1H), 1.20-1.31(m, 3H)，❹ 3.82-4.01(m, 3H), 4.09-4.23(m, 1H), 4.23-4.36(m, 1H), 4.98-5.15(m, 2H), 5.29-5.39(m, 1H), 5.70(d, J=7.43 Hz, 1H), 6.07(s, 1H), 6.13(dd, J=12.81, 10.47 Hz, 1H), 7.08-7.25(m, 6H), 7.29-7.39(m, 6H), 7.54(d, 1H). 以相似方式製作下列化合物：

(2S)-苄基 2-((((4R，6R,7S)-4-(4-胺基-2-酮基嘧啶 _1(2H)_ 基)_7_羥基-5-氧雜螺[2.4]庚烷-6-基）甲氧基)(4-氣苯氧基磷醯基胺基）丙酸酯（2b) LC-MS : Rt: 3.65 分鐘，m/z : 603(M-H)·。4 NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.30-0.43(m, 1H), 0.44-0.60(m, 2H), 〇.95-l.〇6(m, 1H), 1.20-1.31(m, 3H), 3.84-4.01(m, 3H), 44 201012814 4.09-4.23(m, 1H), 5.04-5.14(m, 2H), 5.29-5.39(m, 1H), 5.71(d, J-7.63 Hz, 1H), 6.07(s, 1H), 6.12-6.27(m, 1H), 7.08-7.26(m, 5H), 7.27-7.43(m, 7H), 7.55(a, J=7.24 Hz, 1H). (2S)-乙基 2-((((4R，6R，7S)-4-(4-胺基-2_ 酮基嘧啶-1(2H)-基)-7-羥基-5-氧雜螺[2.4]庚烷-6-基）曱氧基（苯氧基)磷醯基胺基-3-苯基丙酸酯（2c)

LC-MS : Rt : 1.84 分鐘，m/z : 585(M+H)+ (2S)-甲基 2-((((4R，6R，7S)-4-(4-胺基-2-酮基嘧啶-1(2H)-Q 基)-7-羥基-5-氧雜螺[2.4]庚烷-6-基）甲氧基)(苯氧基)磷醯基胺基）丙酸酯（2d)

LC-MS : Rt : 1.25 分鐘，m/z : 495(M+H)+ 45 201012814 實施例3 : (4R6R，7S)-4_(4_胺基_2-酮基嘧咬_1(況)_基)-6-(異丁醯基-氧基曱基)-5-氧雜螺[2.4]庚烷-7-基異丁酸酯(3)

將中間產物1-7(11.00克’22.14毫莫耳）溶解於ThF(280 毫升）’並加入TBAF(59.8毫升，59.8毫莫耳）。於室溫授拌混合物1小時。加入°比π定、甲醇及水之混合物（8〇毫升，3 : 1 : 1)，隨後將強酸陽離子交換劑，Dowex 50 Wx4(128克），加至D比咬、曱醇及水之混合物（320毫升，3 : 1 : 1)。擾拌反應混合物45分鐘並過遽。Dowex殘餘物以„比唆、甲醇及水之混合物（320毫升，3 : 1 : 1)洗滌2次，並於減壓下濃 46 201012814 縮合併的濾液。以〇至10%含甲醇之乙酸乙酯之梯度洗析，將混合物以矽凝膠層析純化，生成呈白色泡沫之中間產物 1-9(5.597 克 ’ 84%)。LC-MS，Rt: 2·〇5 分鐘，m/z = 253(M-H)_。將中間產物1-9(5.16克，20.30毫莫耳）溶解於無水吡啶 (1〇〇毫升）’此溶液以冷水外部冷卻。添加異丁酸酐（16 85 毫升’ 101毫莫耳），並使反應於室溫進行隔夜。此反應再次以冷水外部冷卻，添加甲醇以驟冷過量異丁酸酐。於室 ❹ 皿授拌20分鐘並蒸發揮發物，添加乙酸乙酯並以飽和 NaHC〇3水溶液洗滌(2χ)混合物。有機相以MgS〇4乾燥並於真空中浪縮’獲得呈白色固體之1-10(7.68克，96%)。 LC-MS : Rt : 2.26 分鐘，m/z = 393(M-H)·。添加P0C13(4.72毫升，50.6毫莫耳）至經冷卻的含 1-10(7.68 克 ’ 19.47 毫莫耳）、ih-1，2,4-三唾（15.20 克，220 ，莫耳)及二乙胺(3〇.7毫升，220毫莫耳）之無水（：112(：12(5〇耄升）混合物。於室溫攪拌混合物2.5小時。添加冷水以驟 ❹冷過量P0C13,並分離有機層’於真空中濃縮。使用洗析梯度CH2Cl2/乙酸乙醋90 : 1〇至85 : 15，將混合物經石夕凝膠層析純化，生成中間產物1-11(7.5克，86%)。LC_MS : Rt : 2.38 分鐘，m/z = 446(M+H)+。將中間產物l-il(7·49克’ 16.81亳莫耳)溶解於thf(2〇〇毫升），並以濃nh4〇h水溶液(15毫升)處理。3 5小時後，於減壓下移除揮發物。以〇至5%含甲醇之CH2Ci2梯度洗析，將混合物㈣凝膠騎純化。將產物溶解於乙酸乙醋，並以水(2x)及鹽水(2χ)洗滌混合物。 47 201012814 以MgS04乾燥有機相，過濾後，於真空中濃縮，生成呈白色泡沫之化合物3(5.597克，84%)LC-MS : Rt : 1.95分鐘，m/z = 394(M+H)+。 !H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.36-0.46(m, 1H) 0.64-0.75(m, 1H) 0.77-0.92(m, 2H) 1.06-1.15(m, 12H)2.53-2.66(m, 2H) 4.18-4.36(m, 3H) 4.98-5.02 (m, 1H) 5.77(d, J7.4 Hz, 1H) 6.25(s, 1H) 7.25(br. s., 1H) 7.29(br. s., 1H) 7.55(d, J=7.4 Hz, 1H) 實施例 4 : ((4R，6R，7S)-4-(4_胺基-2-酮基嘧啶-1(2H)-基)-7-羥基-5-氧雜螺[2.4]庚烷-6-基）曱基異丙酸酯（4) 48 201012814

(1-17) ⑷ 於冰水浴中冷卻含中間產物1-9(350毫克，1.377毫莫耳）之無水吡啶（15毫升）溶液，並添加（氯(4-曱氧基苯基）亞曱基）二苯(900毫克，2.91毫莫耳）。將反應混合物置於融化 49 201012814 的冰水浴中，然後於室溫攪拌隔夜。添加過量曱醇，30分鐘後，將反應混合物濃縮，乾燥並用於下一反應。LC-MS :

Rt : 2.48 分鐘 ’ m/z = 525(M-H)-。在含上述殘餘物之無水DMF(15毫升）溶液中，添加第三丁基氯二甲基矽烷(TBDMSC1 ; 311毫克，2.065毫莫耳）及咪吐（169亳克，2.478毫莫耳）。於室溫攪拌反應混合物隔夜，於次日添加總量6當量之TBDMSC1及咪唑，並再次連續攪拌隔夜。混合物以甲醇驟冷，並部份移除揮發物，以乙酸乙酯稀釋，混合物以水(2χ)及鹽水洗滌。有機相以❹ MgS〇4乾燥，過濾後，於真空中濃縮。以ch2C12至19 : 1 之CHbCh/曱醇洗析梯度，將混合物經矽凝膠層析純化，生成中間產物1-13，其直接用於下一反應。LC-MS : Rt : 3.7〇分鐘，m/z = 639(M-H)'。將中間產物1-13溶解於80%乙酸水溶液（10毫升），並於室溫攪拌混合物。8小時後，蒸發揮發物，以CH2C12至 4 %甲醇/CHfl2之洗析梯度，將混合物經矽凝膠層析純化。蒸發溶劑生成中間產物1-14(318毫克，73%)。LC-MS : Rt .❹ 2.46 分鐘，m/z = 367(Μ·Η；Γ。將中間產物1-14(318毫克，0.863毫莫耳）溶解於乾览啶(8毫升）’此溶液以冷水外部冷卻。經由注射器加入異丁酸酐(430微升，2.59毫莫耳）。於室溫隔夜攪拌反應混合物。添加甲醇以驟冷過量的異丁酸酐，然後移除揮發物。添加乙酸乙酯’溶液以飽和NaHCCh洗滌，以MgS〇4乾燥，過 50 201012814 濾後於真空中濃縮，生成中間產物1-15(307毫克，81〇/〇)。 LC-MS ·· Rt : 3.0 分鐘，m/z = 437(M-H)·。將中間產物1-15(307毫克，0.700亳莫耳）、1H1，2，心三峻(546毫克’ 7.91毫莫耳)及三乙胺(1.1毫升，7·91毫装耳）溶解於乾毫升），並於〇它冷卻。添加 POCl^O.170亳升，i 820毫莫耳），此期間反應溫度維持低於25°c。隔夜攪拌此混合物。添加3 0當量之三 Ο 唑及三乙胺以及CH2C12(5毫升），並於室溫另攪拌混合物二3 小時。小心添加冷水以驟冷過量p〇cl3。分離下層之有機層，於真空中蒸發而濃縮。以CH2Cl2i 4%甲醇/CH2Ci2 梯度洗析，將混合物經矽凝膠層析純化，生成中間產物2 1-16(200 亳克 ’ 58%)。LC-MS : Rt : 3.09 分鐘，m/z = 490(M+H)+。將中間產物1-16(200毫克’ 0.408毫莫耳)溶解於丁抑(5 毫升）’並以濃NH4〇H水溶液(0.5毫升)處理。7小時後， ❹ 移除揮發物’並於減壓下濃縮混合物。以（：112(：12至5%甲醇CK^Cl2梯度洗析’將混合物經石夕凝膠層析純化。蒸發溶劑後’獲得中間產物1-17(179毫克，100%)。LC-MS : Rt : 2.74 分鐘，m/z = 438(M+H)+。在含中間產物1-17(179毫克’ 0.409毫莫耳)及乙酸(147 毫克，2.454毫莫耳）之THF(l〇毫升）之溶液中，添加 TBAF(1227微升，1.227毫莫耳，1M於THF)。於室溫授拌混合物，連續攪拌2小時，然後移除溶劑。以甲醇/CH2C12 4% 至8%梯度洗析’將混合物經矽凝膠層析純化。將產物（100 51 201012814 毫克)與含CaCO3(60毫克)及Dowex 50 Wx4(200毫克)之 THF(10毫升)混合’並於室溫攪拌2小時。過濾混合物，蒸發揮發物後，經矽凝膠層析再次純化(梯度洗析：〇至15% 含甲醇之氣仿），生成呈白色固體之化合物4(59毫克， 44%)。LC-MS : Rt : 1.08 分鐘，m/z = 324(M+H)+。 !H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.36-0.45(m, 1H)

〇.46-0.57(m, 2H) 0.96-1.05(m, 1H) 1.10(d(app.)), J=6.5 Hz, 6H) 2.58(h(app.)), J=6.5 Hz, 1H) 3.86-3.91(m, 1H) 3.97-4.01(m, 1H) 4.21(dd, J=12.0, 5.9 Hz, 1H) 4.33(dd, J=12.0, 2.3 Hz, 1H) 5.34(d, J=5.7 Hz, 1H) 5.74(d, J=7.4 Hz, 1H)，6.01(s，1H) 7.06-7.28(m，2H) 7.57(d，J=7.4 Hz，1H)。實施例5: (4R，6R,7S)-4-(4-胺基-2-酮基嘧啶-1 (2H)-基)-6-(羥基曱基)-5-氧雜螺[2.4]庚烷-7-基異丁酸酯（5)

52 201012814

Q 將中間產物1-12(250毫克，0.475毫莫耳）溶解於無水吡啶（10毫升），並以冷水外部冷卻此溶液。經注射器加入異丁酸酐(236微升，1.424毫莫耳）至此溶液，於室溫攪拌此反應2小時。加入更多異丁酸酐(236微升，1.424毫莫耳）。另攪拌此混合物2小時。加入更多異丁酸酐(236微升， 1.424毫莫耳），隔夜攪拌混合物。隨後，添加曱醇以驟冷過量異丁酸酐。於室溫攪拌此溶液20分鐘，然後濃縮至乾燥。殘餘物置入乙酸乙酯（30毫升）中，以飽和NaHC03水溶液 (2x20毫升）洗滌。有機相於Na2S04上乾燥，濾除固體，溶 53 201012814 劑經蒸發移除。生成呈無色油狀物之，使用此等於下一反應。LC-MS : Rt : 3.07 分鐘。、將P〇C13(1〇2微升，1.089毫莫耳)加至經冷卻的含中間產物1-18(250毫克，〇·419毫莫耳）、瓜12,4_三吐(327毫克，4.73毫莫耳）、三乙胺⑽微升，（η毫莫耳）及 CH2C12(6.0毫升）之混合物，期間溫度維持低於25。[(生成白色沉殿）。於室溫勝反應混合物4小時。#反應完成時，經由小心添加冷以驟冷過量P0C13。分離有機層，於真空中蒸發而濃縮。以90: 1〇至85: ^之阳叫乙酸乙◎ 酯梯度洗析，將混合物經矽凝膠層析純化，生成呈油狀物之中間產物1-19(200毫克’ 74 %) : Rt : 3.15分鐘。將中間產物1-19(200毫克’ 0.309毫莫耳）溶解於THF(5 毫升），並以濃NH4〇H水溶液(0.6毫升）處理。4小時後，添加更多濃NHUOH水溶液(0.3毫升），攪拌混合物隔夜。真空中移除溶劑’將油狀物收取於乙酸乙酯，以水及鹽水洗滌。以NajO4乾燥，過濾並蒸發揮發物，殘餘物(1-2〇)直接使用於下一反應。LC-MS : Rt : 2.86分鐘，m/z =❹ 594(M-H)-。將中間產物1-20(180毫克’ 0.302毫莫耳）溶解於80〇/〇乙酸水溶液(5毫升），於室溫攪拌反應混合物。9小時後，移除揮發物，以5%至15%含曱醇之CH2C12洗析梯度，將混合物經矽凝膠層析純化，獲得之殘餘物以iPr2〇研製，並於真空中乾燥。生成化合物5(60.8亳克，62%)。LC-MS :

Rt : 1.25 分鐘，m/z = 324(M+H)+。 54 201012814 !Η NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.33-0.41(m, 1H) 0.62-0.71(m， 1H) 0.74-0.82(m, 2H) 1.08-1.14(m, 6H) 2.55-2.64(lH, m) 3.62-3.68(m, 2H) 3.99-4.04(m, 1H) 4.98-5.03(m, 1H) 5.12(t, J=5.2 Hz, 1H) 5.76(d, J=7.4 Hz, 1H) 6.27(s, 1H) 7.14-7.33(m, 2H) 7.80(d, J=7.4 Hz, 1H) 實施例6:(2S)-苄基2-((((4R，6R,7S)-4-(4-胺基-2-酮基-嘧啶〇 -1(2H)-基)-7-羥基-5-氧雜螺[2.4]庚烷-6-基）甲氧基)（苯氧基) 磷醯基胺基）丙酸酯之異丁酸酯（6)

將化合物5與(2S)-苄基2-(氣-苯氧基)磷醯基胺基）丙酸酯（2.0當量）一起溶解於無水THF/吡啶中，冷卻此混合物〇至-78°C。添加N-甲基咪唑(NMI)(8當量），並於-78°C攪拌此混合物15分鐘，然後於RT攪拌隔夜。將混合物蒸發至乾燥，添加10毫升CH2C12，殘餘物以10毫升0.5N HC1 洗滌。分離有機層並以10毫升水洗滌，於Na2S04上乾燥，過濾並蒸發。使用CH2Cl2/MeOH之梯度作為洗析液，將化合物經矽凝膠層析純化。隨後以相同步驟，但由（2S)-乙基2-(氯-(苯氧基)磷醯基胺基）丙酸酯起始，亦製備（2S)-乙基2-((((4R，6R，7S)-4-(4- 55 201012814 胺基-2-_基-鳴咬_ι(2Η)_基)-7-經基-5-氧雜螺[2.4]庚炫_6 基）甲氧基)(苯氧基)鱗醢基-胺基）丙酸醋之異丁醯基輯（7):

生物學實施例複製子（replicon)試驗 ❿ 於細难試驗檢查式I化合物於HCVRNA之抑制活性，針對鑑定抑制HCV功能上細胞複製細胞株之化合物，亦已知為HCV複製子。此細胞試驗係基於雙順反子表現構築體 (bicistronic expression construct) ’ 如 Lohmann et al.(1999) Science vol. 285 pp. 110-113 所述，經 Krieger et al.(2〇〇l)

Journal of Virology 75 : 4614-4624 所述修飾，以多重目標篩選策略。 $ 此試驗利用穩定轉染的細胞株Huh-7 luc/neo(下文稱為❹ Huh-Luc)。此細胞株帶有RNA編碼雙順反子表現構築體：

糖體進入位（IRES)，來自腦心肌炎病毒 EMCV)’跟著報導子部分汗乩_ 分(neo®，新黴素磷酸轉移酶）。 [CV之5’及3, NTRs(非轉譯區 (encephalomyocarditis virus，EMCV)，跟著 G顿㈣⑧)存在下，此複製子細胞之連續培養依賴螢光酶），及可選擇的標記部分(neo®，新；|| 此構築體鄰接來自第lb型HCV之5，及3 域）。於G418(neo®)存在下，此福贺+ 4 56 201012814 於HCV RNA之複製。表現HCV職 <穩定轉染的複細胞’其自動複製’且高量、編碼尤其選抗病毒化合物。 ^ 將複製子細胞置於以各種漠度添加之試驗及對照化合物存在下之384孔平盤。隨後培育3日，經由試驗活性測量腳複製㈣財螢光_驗受體及試劑及

Perkm Elmer V而Lux ultraHTS為量盤影像器）。於缺乏任

何抑制劑下’對照培養巾㈣子細胞具有高螢光酶表現。化合物於螢光酶活性上之抑制活性於Huh_Lue細胞監測，能夠於每-試驗化合物作劑量反應曲線。然後計算ec^ 值，其值代表降低偵測的螢光酶活性5〇%所需化合物之量，或更具體而言，偵測基因上連結的HCV複製子RNA複製的能力。細胞毒性於Huh7-CMV_Luc複製子試驗中測定細胞毒性。複製子、田胞(2500個細胞/孔），於巨細胞病毒(cyt〇inegai〇virus， CMV)構成的啟動子控制下，以螢光酶報導子基因穩定轉开^，於試驗化合物各濃度存在或不存在下培育。於濕濶之 5胃/〇(：〇2裱境之37它下培育3日後，經由測量luc活性而定里、、、胞增殖並表現為CC5。值（細胞毒性，細胞生長之5〇% 抑制濃度）。試驗於384孔盤中進行。 HIV試驗以本發明之化合物試驗其抗野生型人類免疫缺陷病毒 (HIV)之效力。使用細胞試驗評估抗病毒活性，依據下列步 57 201012814 驟進行。人類T細胞株MT4以綠色螢光蛋白…代如

Fluorescent Protein，GFP)及 HIV-特異性啟動子、班v 1 長端重複區（LTR)基因工程處理。此細胞株指明為mt4 LTR-EGFP，可用於研究的化合物於活體外抗_mv活性之評估。於HIV-1感染的細胞’產生Tat蛋白質，其向上調節LTR啟動子，最後導致GFP報導子生產之刺激_ 螢光計量測量進行的HIV-感染。可測定有效濃度值諸如 50%有效濃度(ECmj) ’且通常以μΜ表示。EC%值被定義為降低50% HIV感染細胞之螢光的試驗化合物之濃度。HJV-1❹ 感染之監測使用掃描顯微鏡進行，影像分析能夠極敏感的偵測病毒感染。於細胞壞死前進行測量，其通常於感染後5 曰發生，尤其於感染後3日進行測量。表中ιπΒ攔列出抗野生型株IIIB之EC5G值。結果於下表中說明本發明之化合化顯示抗HCV活性，而缺少抗HIV活性。其於毒性項目上顯示有利的結果，且具有可接受的選擇性指數(EC5G及CC5Q之間的比）。妻：試驗結果 © 化合物編號 EC5Q(複製子） μΜ CC5〇(Huh7) μΜ EC5〇(IIIB) μΜ 1 8.4 >98 >98 2a 15.3 >98 >98 2b 26.3 >98 >98 2c " 98 >98 >98 2d 63.1 >98 >98 58 201012814 3 27.2 >98 >98 4 9.2 >98 >98 5 42.5 >98 >98 【圖式簡單說明】無【主要元件符號說明】益 M%·*

59

Claims

201012814 七、申請專利範圍： 1. 一種式I化合物，

0) 包括其任何可能的立體異構物，其中： R為氫或crc4燒基； =及R為獨立地選自氫、_c(=C))r5及哥⑺⑶尺6_卿激成之群，或 ^為風及R4為單磷酸醋、二磷酸醋或三罐酸醋；或R3肩虱、_C(=〇)CHR5 lC(=〇)CHR6_NH2 及 R4 為下式基：， =係獨立地選自氫、Ci_C6絲及C3_c7魏基之群； R7為氫或CrC6烷基；白可任意經1、2 S 3個取代基取代，此取代基各其、」選自由素基、Ci_c6烧基、CA歸基、Ci_c6烷氧基及胺基’或R7為萘基；或117為t朵基； 8，為虱、C1-C6烷基、苄基；為氫8、Cl-C6烷基、苄基；或 R及R8與其附著的碳原子一起形成（：3-〇7環烷基； 201012814 R9為基、¥基或苯基，其中該苯基可任意經卜2 =個取代基取代，此取代基各自獨立選自祕、Ci-^烧氧基、胺基、單-及二CrC6烷基胺基；惟，R2、R3及R4不皆為氫；或其醫藥上可接受的鹽類或溶劑合物。 2.如申請專利範圍第1項之化合物，其中R1為氫。申》月專利範圍第1項之化合物，其中R2 ^ R3為氫。 ❹ ^申"月專利範圍第1或2項之化合物，其令R3為氫，且 R為下式基：

OR7 I P一〇 61 1 . 如”f專利範圍第1至2或4項中任-項之化合物，其為苯基，可任意經鹵素基、或（^-匕烷基取代，或 R為萘基。 2 . 如申請專利範圍第1至2、4或5項中任一項之化合物，其中R4為氫，且R4’為氫或crc6烷基。 3 ·如申請專利範圍第1至2、4或5項中任一項之化合物，其=R3及R4之一者為_C(=0)R5，且R3及尺4之另一者為氫；或其中R3及R4兩者為_c(=〇)r5 ;且烷基。 4 j» ’ °申請專利範圍第7項之化合物，其中R5為異丙基。 201012814 物：利9範圍第1至2、或4至8項中任一項之化合 +為祕舒基。 °月專利範圍第1項之化合物’其中化合物具有下式：

型 y藥組成物’其含有抗病毒有效量之如申請專利範弟至11項中任一項所定義之式丨化合物及醫藥上可接受的載劑。 •種作為HCV抑制劑之如申請專利範圍第1至11項中任一項所定義之式1化合物以及R2、R3及R4皆為氫之式I化合物。 14·如申請專利範圍第13項之作為HCV抑制劑之式！化合❹ 物，其中式Ϊ化合物之R2、R3及R4皆為氫。 15.如申請專利範圍第14項之作為Hcv抑制劑之式j化合物，其中化合物為游離型。以一種組合物，其包含式工化合物及R2、R3及r4皆為氫之式I化合物與另一種HCV抑制劑之組合物。 7.種製備式1化合物之方法，該化合物如申請專利範圍第1至11項中任一項之定義，其中 62 201012814 (a)製備其R3及R4兩者皆為氳之式I化合物，其以式I-a表示，以自2’-去氧-2’-螺環丙基尿苷If至對應的2’-去氧-2’-螺環丙基胞苦lg之尿嘧啶至胞嘧啶的轉化反應，隨後移除保護基PG而獲得化合物I-a :

(b)製備式I化合物，其中R3為氫且R4為 r8· OR7 R9'

P一 N^il Η 〇 Ο 經由將化合物I-a與氯磷酸酯2a於鹼存在下反應獲得氨基磷酸酯I-b :

(c)製備式I化合物，其中R3為氳且R4為-C(=0)R5或 -C(=0)CHR6-NH2，其以R4a表示，且該化合物以式I-c表示；或R3及R4彼此獨立為-C(=0)R5或-C(=0)CHR6-NH2，其分別以R3a、R4a表示，且該化合物以式I-d表示；其中於 63 201012814 -c(=o)chr6-nh2之胺基可以後續可被移除之胺基保護基保護；經選擇性保護中間產物3a中之5’-羥基，獲得中間產物3b，之後被酯化成中間產物3c，隨後經尿嘧啶至胞嘧啶轉化成中間產物3d ;之後將後者去保護成3’-單酯I_c ;或經酯化 I-c中之5’-經基成化合物I-d ;或經選擇性酯化中間產物3a中之5經基，如此導入R4a基而生成中間產物3e，中間產物3e隨後以不同酸酯化，因而導_ 入R3a基，產生二-酯中間產物3f，使其尿嘧啶至胞嘧啶轉化，產生化合物I-d :

64 201012814

選擇性磨化

Μ (d)製備式I化合物，其中R3為氫且R4為如上述特定之R4a，該化合物以式I-e表示，經由以羥基保護基保護中間產物3b 中的游離羥基，該羥基保護基可選擇性裂解成另一羥基保護基，生成中間產物4a;移除5’-羥基保護基，產生中間產物4b ;酯化後者成為中間產物4c ;將後者經尿嘧啶至胞嘧 65 201012814 啶轉化，因此獲得4’-羥基經保護的胞苷衍生物4d，將其去保護，產生化合物I-e ;如下列流程圖中所表示’其中PGa 基團具有相同於PG之意義，但其被選擇因而其可選擇裂解成PG基團：

66 201012814 流程圖4 :單酯類之合成 (e)製備式I化合物，其中R3a& R4a為相同且為上述所特定者，該化合物以式I-f表示，經酯化中間產物3a中之兩羥基：

67 201012814 四、指定代表圖： (一) 本案指定代表圖為：第（無）圖。 (二) 本代表圖之元件符號簡單說明：無五、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式：

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