TW201002337A - Rice bran extracts and methods of use thereof - Google Patents

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201002337 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於增加細胞之葡萄糖攝取之米糠萃取物，該 等米糠萃取物適用於治療低血糖症、糖尿病、代謝及肥 胖。 本申味案主張2008年5月1 8曰申請之美國臨時申請案第 61/〇54，151號、2008年9月3〇日申請之美國臨時申請案第 61/101,475琥及2009年1月26號申請之美國臨時申請案第 61/147,305號之優先權的權益，該等申請案中之每一者均 以全文引用之方式併入本文中。 【先前技術】 2型糖尿病之特徵在於，碳水化合物代謝失調導致血液 中糖含量異常之高（高血糖）。嚴重程度隨該異常而增加之 特徵性症狀包括：（1)由糖導致產生過多尿（多尿症），從而 導致代償性口渴及液體攝取增加（劇渴症）；（2)由糖作用於 眼睛之光學結構而導致視力模糊；（3)不明之體重減輕；及 (4)嗜睡。1型糖尿病（其中胰臟不產生或分泌胰島素）通常 係由於胰臟β細胞自體免疫損壞且僅可藉由注射胰島素治 療（Κ· I. Rother，2007. Diabetes treatment-Bridging the divide. Ν· Eng. J. Med.，356:1499_15〇1)。2型糖尿病之特 徵在於標革巴組織中之胰島素抗性（insulin resistance)，且可 藉由膳食治療、藥物治療及/或胰島素增補之組合來應對 (K. I. Rother, 2007. Diabetes treatment-Bridging the divide. 风五叹.《/·从356:1499-1501)。隨著該疾病發展，需要 140501 .doc 201002337 日皿增冈之胰島素水準’且在某個時點，β-細胞不再能滿 : 娠期糖尿病（通常稱為子癲症（preclampsia))涉 及由这傳]·生素因之婦女體内的孕激素導致之月夷島素抗性 (類似於2型）。 糖尿病可引起許多併發症。若該疾病未得到充分控制， 貝J *T at出現急性併發症，如低血糖症、酮酸中毒或非_性 南0丨生曰迷。嚴重長期併發症包括心企管疾病、慢性腎衰 竭視網膜損傷（其可致盲）、神經損傷及微血管損傷（其可 導致癒合困難）（D. M. Nathan，1993. Long-term complications of diabetes mellitus· N. Eng. J. Med.，328:1676-1685)。傷 口（尤其腳傷）癒合困難可導致壞死，該壞死可能需要進行 切除。充分治療糖尿病以及加強血壓控制可改良前述併發 症之風險概況。 在2型糖尿病之發作中膳食已顯示出起決定性作用，且 问精製糖及高脂肪含量的西方膳食有可能要對美國糖尿病 發病率增加負責（j· S. Carter，J. A. Pugh及 A. Monterrosa, 1996. Noninsulin-dependent diabetes mellitus in minorities in the United states. Ann. Intern. Med.，125:221-232)。在 糖尿病治療中推薦使用植物追溯到大約公元前丨55〇年（A. M. Gray及 p. R. Fiatt，1997. Pancreatic and extra-pancreatic effects of the traditional anti-diabetic plant, Medicago sativa(lucerne). Brit. J· Nutr.，78:325-334)。藥物治療對於 世界人口之大多數為不可行的，因而，需要評估及開發替 代方法。 140501.doc 201002337 詳言之，已報導米糠具有許多健康益處及用途（z. Takakori，Μ· Zare，Μ· Iranparvare，等人，2005. Effect of rice bran on blood glucose and serum lipid parameters in diabetes II patients. Internet. J. Nutr. Wellness,.2:1 ； G. S. Seetharamaiah 及 N. Chandrasekhara, 1989. Studies on hypocholsterolemic acitvity of rice bran oil. Arthersclerosis, 78:219-223)。在亞洲及印度之研究亦已顯示，在將米糠油 併入膳食中一個月内，血清膽固醇及三酸甘油酯水準顯著 降低（Z. Takakori, M. Zare，M. Iranparvare 及 Y. Mehrabi 2005. Effect of rice bran on blood glucose and serum lipid parameters in diabetes II patients. Internet. J. Nutr. Wellness, 2:1)。

米糠含有參雙鍵生育酚及植物留醇。與參雙鍵生育紛相 關之生物活性包括降低血清膽固醇、降低膽固醇合成及抗 腫瘤活性（A. A. Quershi，N. Quershi，J. J. K· Wright’ 等 人，1991. Lowering of serum cholesterol in hypercholsterolemic humans by tocotrienols(palmvitee). Am. J. Clin. Nutr., 53:1021S-1026S ; Μ. N· Gould, J· D. Haag, W. S. Kennan， 等人，1991. A comparison of tocopherol and tocotrienol for the chemoprevention of chemically induced rat mammary tumors. Am. J. Clin. Nutr.，53:1068S-1070S)。米糠中之植 物甾醇（尤其米糠醇）與血漿膽固醇降低、血小板凝聚、肝 膽固醇生物合成及膽固醇吸收相關（K. B. Wheeler及K. A. Garleb, 1991. g-Oryzanol plant sterol supplementation: 140501.doc 201002337

Metabolic, endocrine, and physiologic effects. Internatl J

Sport Nutr·, 1:170-177，G. S. Seetharamaiah 及 N.

Chandrasekhara, 1990. Effect of oryzanol on cholesterol absoprtion and biliary and fecal bile acids in rats. Indian J.

Med· Res.，92:471-475)。 葡萄糖攝取為藉由極其特定且不同的轉運機制將血液中 之葡萄糖轉運至細胞中的過程。葡萄糖攝取可藉由易化擴 散及二次主動轉運進行。易化擴散為被動過程，其需要葡 萄糖攝取轉運體（GLUT)，尤其為負責維持葡萄糖基本攝 取率之 GLUT1 及 GLUT3(G. K. Brown, 2000. Glucose transporters: Structure, function, and consequences of deficiency. J. Inker. Metab. Disorders, 23:237-246)。發現 於肌肉及脂肪組織中之GLUT4轉運體對胰島素敏感，且因 此對勝食後自血流攝取過多葡萄糖至關重要。二次主動轉 運通常發生於腎中且間接需要ATP水解，因此其為能量依 賴型（L. Reuss, 2000. 〇ne-hundred years of inquiry: The mechanism of glucose absorption in the intestine. Ann. Rev. Physiol，62:939-946)。在腎内發現兩種二次主動轉運體， SGLT1及SGLT2。SGLT1具有較高親和性但葡萄糖容量較 低，而SGLT2部恰恰相反（親和性低，容量高）（T. Asan〇, M. Anai，Η· Sakoda，等人，2004. SGLT as α therapeutic target. Drugs Future, 29:461)。兩種SGLT轉運體共同工作 以保證將儘可能多的葡萄糖送回至血流中，且僅有少量葡 萄糖於尿中排出。 140501.doc 201002337

儘管關係較為複雜，但胰島素介導之葡萄糖攝取異常對 2型糖尿病之發病至關重要（r.a. DeFronzo, 1988. The triumvirate: beta-cell, muscle, liver. A collision responsible for NIDDM. Diabetes 37:667-687 ； A. Bsau, R Basu, P Shah, A Valla, C. M. Johnson, K. S. Nair, M. D. Jensen, W. F. Schwenk，及 R. A. Rizza, 2000. Effects of type 2 diabetes on the ability of insulin and glucose to regulate splanchmic and muscle glucose metabolism. Evidence for a defect in hepatic glucokinase activity. Diabetes, 49:272-283，A· R. Cherrington, 1999. Control of glucose uptake and release by liver in vivo. Diabetes, 48:1 198-1214； P. Iozzo K. Hallstein, V. Oikonen, K. A. Virtanen, J. Kemppainen, 0· Solin, E. Ferrannini，J. Knuuti及 P- Nuutila, 2003· Insulin-mediated hepatic glucose uptake is impaired in type 2 diabetes: evidence for a relationship with glycemic control. J. Clin. Endrocrin. Metab., 88:2055-2060 ； P-H, Ducluzeau, L. M. Fletcher, H. Vidal, M. Laville ’ 及 J. M. Tavare, 2002. Molecular mechanisms of insulin-stimulated glucose uptake in adipocytes. Diabetes Metab. 28:85-92)。此外，增強的葡萄糖攝取（熱量過度）與 脂質合成及儲存之增加之間的密切關係已使2型糖尿病與 肥胖相關連（D_ A. McClain, M. Hazel, G. Parker，及R. C. Cooksey, 2005. Adipocytes with increased hexoamine flux exhibit insulin resistance, increased glucose uptake, and 140501.doc 201002337 increased synthesis and storage of lipid. Am. J. Physiol.

Endrocrinol. Metab·, 288:E973-E979 ; J_ V. Nielsen及 E. A. J oensson, 2008. Low-car bo hydrate diet in type 2 diabetes: stable improvement of bodyweight and glycemic control during 44 months follow-up. Nutr. Metab., 5:1-6 ; S. Z. Yanovski 及 J. A. Yanovski, 2002. Obesity. New Eng. J.

Med·，346:591-602)。詳言之，McClain 等人（2005)展示， 胰島素刺激葡萄糖攝取伴有GLUT4 mRNA增加41 %及脂質 合成增加206%，從而佐證了增強的葡萄糖攝取與脂肪合 成之間的緊密關係。 PPAR(過氧化體增殖劑活化受體）核受體家族且尤其 PPAR-γ在控制脂肪細胞中葡萄糖攝取方面的作用已十分明 確（T. M. Wilson J. E. Cobb, D. J. Cowan，等人，1996. The structure-activity relationship between peroxisome proliferator-activated receptor-γ agonism and the antihyperglycemic activity of thiazolidinediones. J.

MedChem. 39:665-668 ； R. Mukherjee, P. A. Hoener, L.

Jow, J. Bilakovics, K. Klausing, D. E. Mais, A. Faulkner, G. E. Croston，及 J.R. Paterniti, Jr·, 2000. A selective perioxisome pro lifer at or-activated receptor-y(PPARy) modular blocks adipocytes differentiation but stimulates glucose uptake in 3T3-L1 adipocytes. Molec. Endocrin., 14:1425-1433 ； C. Nugent, J. B. Prins, J. P. Whitehead, D. Savage，J. W. Wentworth, V. K. Chatterjee及 S. O'Rahilly， 140501.doc 201002337 2001. Potentiation of glucose uptake in 3T3-L1 adipocites by PPARy agonists is maintained in cells expressing a PPARy dominant-negative mutant: Evidence for selectivity in the downstream responses to PPARy activation. Molec. . Endrocrin.，15:1729-1738)。PPARy活化對脂肪生成至關重 要且因此此受體之拮抗劑可適用於肥胖，但重要地，其可 預防胰島素抗性並增加葡萄糖攝取。 2型糖尿病中胰島素抗性的特徵為β-細胞質膜中產生 GLUT4 轉運體（D. Ε· James 及 R. C· Piper, 1994. Insulin resistance, diabetes, and the insulin regulated trafficking of GLUT4· J· Cell Biol，126:1123-1126)。其他研究已顯示， 在雜合GLUT4基因剔除小鼠中胰島素信號通道可補償 GLUT4表現水準及功能降低，但該細胞GLUT4含量在調節 脂肪細胞中最大胰島素刺激葡萄糖攝取中為限速因子（L I.

Jing，K. L. Houseknecht，A. E. Stenbit, Ε· Β· Katz，及 M. J. CJ Charron, 2000. Reduced glucose uptake precedes insulin signaling defects in adipocytes from heterozygous GLUT4 knockout mice· FASEB J·，14:1117-1125)。目前認為，胰島 素刺激葡萄糖攝取降低為控制GLUT4位移至質膜的胰島素 ' 信號通道（包括PI 3-激酶依賴型通道）中之異常性的結果（1>_ H，Ducluzeau，L. M. Fletcher, H. Vidal, M. Laville及 J. M.

Tavare, 2002. Molecular mechanisms of insulin-stimulated glucose iiptake in adipocytes. Diabetes Metab.，28:85-92)。 細胞骨架在與經由GLUT4控制葡萄糖攝取有關之囊泡運輸 14050 丨.doc 201002337 (vesicle trafficking)中起重要作用，此係由於此等結構之 破壞抑制騰島素刺激葡萄糖攝取（A. Guilherme, M. Emoto, J. M. Buxton, S. Bose, R. Sabini, W. E. Theurkauf, J.

Leszyk及 Μ· P. Czech, 2000. Perinuclear localization and insulin-responsiveness of GLUT4 requires cytoskeletal integrity in 3T3-L1 adipocyctes. J. Biol. Chem., 275:38151- 38159 ; A. L. Olsen, A. R. Trumbly及 G_ V. Gibson, 2001.

Insulin-mediated GLUT4 translocation is dependent on the microtubule network. J. Biol. Chem., 276:10706-10714 ； P-H，Ducluzeau，L. M. Fletcher, H. Vidal, M. Laville及 J. M. Tavare, 2002. Molecular mechanisms of insulin-stimulated glucose uptake in adipocytes· Diabetes Metab·, 28:85-92)。 再循環小體變成GLUT4儲存囊泡，隨後藉由用於轉運之細 胞骨架調動該等囊泡，從而進入質膜並與其融合（κ· j. Rodnick, J. W. Slot, D. R. Studelska, D. E. Hanpeter, L. J., L·· J· Robinson, H. J. Geuze &D.E.James,1992· Immunoctrochemical and biochemical studies of GLUT4 in rat skeletal muscle. J. 5ζ·〇/. 267:6278-6285)。經由 胰島素受體進入脂肪細胞之胰島素入口調節至質膜的 GLUT4囊泡運輸。 脂肪酸結合蛋白（FABP)為脂質結合蛋白（LBP)之多基因 超級家族，其涉及脂肪酸及其他脂質在身體各部位之轉運 (A. Chmurzynska, 2006. The multigene family of fatty acidbinding proteins(FABPs): function, structure and 140501.doc •10- 201002337 polymorphism. J. Appl. Genet. 47: 39-48)。藉由 FABP4調節 脂肪酸轉運在身體各處均較為重要，此係由於脂肪酸為重 要能源、其他分子之建構基塊及發信號分子（E. Z. Amri, G. Ailhaud等人，1994. Fatty acids as signal transducing molecules: involvement in the differentiation of preadipose to adipose cells. J. Lipid Res·，35: 930-937 ; D. A. Bernlohr, N. R. Coe，等人，1997. Regulation of gene 、 expression in adipose cells by polyunsaturated fatty acids. \ -

Adv. Exp. Med. Biol. 422: 145-56 ； J. A. Hamilton, 1998.

Fatty acid transport: difficult or easy? J. Lipid Res. 39:467-81)。 FABP可再分成兩個主要群組，細胞質FABP(FABPC)及質 膜 FABP(FABPpm)(J. F. Glatz&G.J.vanderVusse,1996. Cellular fatty acid-binding proteins: their function and physiological signiHcance. Prog. Lipid Res. 35:243-82)。 ◎ 目前’有9種已知FABP，其定位於身體各部分中，包括脂 肪細胞、神經系統、肌肉、肝及睾丸。此定位對於特定 FABP之功能至關重要。由於此等蛋白質在特定脂肪睃之 轉運中起重要作用’因此FABP蛋白之調節可能用於治療 ' 許多病狀。 體内最重要的FABP之一為脂肪細胞FABP(亦稱為 FABP4、aP2或A-FABP)。FABP4主要發現於脂肪細胞中， 但亦存在於睫狀神經節、附件、皮膚及胎盤中（C_ A Baxa, R. S. Sha 等人 ’ 1989. Human adipocyte lipid-binding 140501.doc 201002337 protein : purification of the protein and cloning of its complementary DNA. Biochemistry 28:8683-8690 ; A.

Chmurzynska, 2006. The multigene family of fatty acidbinding protein s(FABPs): function structure and polymorphism. J. Appl. Genet., 47:39-48) ° 若干研究已顯 示如下指示：FABP4在若干疾病中係重要的。一項研究已 顯示，FABP4為氣管炎所需，從而指示FABP4抑制用於哮 喘治療的可能作用（Shum，B· 0., C. R. Mackay等人，2006· The adipocyte fatty acid-binding protein aP2 is required in allergic airway inflammation. J. Clin. Invest. 116:2183-2 1 92)。若干研究已顯示FABP4在2型糖尿病、動脈粥樣硬 化及肥胖中起重要作用（J. B. Boord, S. Fazio，等人， 2002. Cytoplasmic fatty acid-binding proteins: emerging roles in metabolism and atherosclerosis. Curr. Opin. 13:141-147 ; Makowski，L.及 G. S. Hotamisligil， 2005. The role of fatty acid binding proteins in metabolic syndrome and atherosclerosis. Curr. Opin. Lip idol. 16:543-548 ; Erbay, E., H. Cao，等人，2007. Adipocyte/macrophage fatty acid binding proteins in metabolic syndrome. Curr. Atheroscler. Rep. 9:222-229 ； M. Furuhashi 及 G. S.

Hotamisligil, 2008. Fatty acid-binding proteins: role in metabolic diseases and potential as drug targets. Nat Rev Dbcov. 7:489-503)。詳言之，缺乏FABP4之小鼠已顯 示減少高胰島素血症及胰島素抗性（G. S. Hotamisligil, R. 140501.doc -12- 201002337 S. Johnson等人，1996. Uncoupling of obesity from insulin resistance through a targeted mutation in aP2, the adipocyte fatty acid binding protein. Science 274:1377-1379) 〇 已顯示在小鼠模型中將FABP4抑制劑用於糖尿病及動脈 粥樣硬化為有效的（Furuhashi, M，G. Tuncman等人，2007. Treatment of diabetes and atherosclerosis by inhibiting fatty-acid-binding protein aP2. Nature 447:959-965)。未來 研究可能引出藉由發現FABP4之抑制劑來治療糖尿病、動 脈粥樣硬化、哮喘、某些形式之炎症及肥胖。 已顯示，若干基於植物學之生物活性物質刺激葡萄糖攝 取。來自紅景天（Rhodiola rosea)之苦類（毛柳戒， Salidroside)刺激大鼠肌母細胞中之葡萄糖攝取以及胰島素 介導之葡萄糖攝取，且此活性係由AMP-活化蛋白激酶介 導（H-B. Li，Y. Ge，X-X. Zheng及L. Zhang, 2008. Salidroside stimulated glucose uptake in skeletal muscle cells by activating AMP-activated protein kinase. Eur. J. Pharmacol., 588:165-169)。在來源於黃連（CopiWs r/z/zomcz)及黃柏（Coriex 之某些中藥中發現的 異喹琳生物驗黃連素（Berberine)具有較強的抗高血糖作用 (J. Yin，R. Hu，M. Chen, J. Tang，F. Li，Y. Yang及 J. Chen， 2002. Effects of berberine on glucose metabolism in vitro. Me/αό. C7k. Exper.，51:1439-1443 ; X. Bian，L. He及 G. Yang, 2006. Synthesis and antihyperglycemic evaluation of various protoberberine derivatives. Bioorgan. Med. Chem. 140501.doc -13 - 201002337

Lett., 16:1380-1383 ； S. H. Kim, E-J. Shin, E-D. Kim, T. Bayarra, S. C. Frost及 C-K. Hyun，2007. Berine activates GLUTl-medeiated glucose uptake in 3T3-L1 adipocytes. 30:2120-2125)，且在 3T3-L1脂肪細胞 中特定活化GLUT1介導之葡萄糖轉運。已發現，在柑桔、 番茄及許多漿果中發現的常見類黃酮，柚配質 (Naringenin)，刺激胰島素介導之葡萄糖攝取（s. L. Lim, K. P. Soh及 U. R. Kuppusamy，2008. Effects of naringenin on lipogensis, lipolysis and glucose uptake in Rat adipocytes primary culture: A nature antidiabetic agent. Internet. J. Altern. Med·，5:2)，而中草藥紫草（紫色紫草屬植物，紫草 {Lithospermum eryi/zror/n’zon)之草乞根）之主要成分紫草寧 (Shikonin ; 5,8-二羥基-2-(1-羥基-4-甲基-戊-3-烯基）萘-1,4- 二酮）經由胰島素滅活之酪胺酸激酶通道刺激葡萄糖攝取 (R. Kamei，Y. Kitagawa, M. Kadokura, F. Hattori, 0.

Hazeki, Y. Ebina，T. Nishihara 及 S. Oikawa, 2002.

Shinkonin stimulates glucose uptake in 3T2-L1 adipocytes via and insulin-independent tyrosine kinase pathway.

Biochem. Biophys. Res. Commun·，292:642-651)。 肉桂皮（Cinnamon bark)萃取物已顯示在葡萄糖攝取刺激 方面具有活性且根據人類臨床試驗發現其缓和2型糖尿病 之特徵（A. Khan, M. Safdar，Μ· M. Khan, K_ N_ Khattak及 R. A_ Anderson, 2003. Cinnamon improves glucose and lipids of people with type 2 diabetes, Diabetes Care,

140501.doc ,A 201002337 26:3215-3218 ; Ε· J. Verspohl，K. Bauer及 E. Neddermann, 2005. Antidiabetic effect of Cinnamomum cassia and Cinnamomum zeylanicum in vivo and in vitro, Phytother. 及19:203-206 ; R· A. Anderson, J. H. Brantner&M.M· Polansky, 1978. An improved assay for biologically active chromium, J· jgrz’c.尸ooc? C/zem., 26:1219-1221)。 如鞣酸之其他常見植物化合物經由胰島素依賴型通道刺 激葡萄糖攝取（X. Liu, J-k. Kim，Y. Li, J. Li, F. Liu 及 X. Chen, 2005. Tannic acid stimulates glucose transport and inhibits adipocytes differentiation in 3T3-L1 cells. J. Nutr., 135:165-171)，而棕櫊酸經由涉及細胞内鈣介導之胰島素 依賴型通道增強葡萄糖攝取（J. Thode, H. A Pershadsingh, J. H. Ladenson, R. Hardy及 J. Μ· McDonald, 1989. Palmitic acid stimulates glucose incorporation in the adipocyte by mechanisms likely involving intracellular calcium. J. Lipid Res., 30:1299-1305) 。Perrini 等人（S. Perrini, A. Natalicchio, L. Laviola等人，2004. Dehdroepiandrosterone stimulates glucose uptake in human and murine adipocytes by inducing GLUT1 and GLUT4 translocation to the plasma membrane. Diabetes，53:41-52)已展示，DHEA(去氫表雄固 酮）顯著刺激葡萄糖攝取且經由胰島素受體受質（IRS-1及 IRS-2)之酪胺酸磷酸化作用將GLUT1及GLUT4移位蛋白位 移至質膜，且使細胞内妈增加。相反，已顯示某些類黃酮 (如槲皮酮（quercitin)、楊梅黃酮（myricetin)及異槲皮酮’ 140501.doc -15- 201002337 該等類黃酮在許多果實及植物中極為充足）為經由GLUT2 轉運體介導之葡萄糖攝取的有效抑制劑，同時亦已指示 GLUT1 及 GLUT4 之抑制（ρ· strobel，C· Allard, T_ Perez-Acle, T. Calderon, R. Adunate 及 F. Leighton, 2005.

Myricitin, quercetin, catechin-gallate inhibit glucose uptake in isolated rat adipocytes. Biochem. J., 386:471-4768 ； O. Kwon, P. Eck, S. Chen, C. P. Corpe, J-H. Lee，M. Kruhlak及 M. Levine, 2007. Inhibition of intestinal glucose transported GLUT2 by flavonoids· FASEB J·，21:366-377)。 最近，已顯示槲皮酮及葡萄糖以相同方式穿過gluti轉運 體，且根據船塢研究（docking study)，樹皮酮結合阻斷葡 萄糖轉運（R. Cunningham，I. Afazal-Ahmed及R. J. Naftalin， 2006. Docking studies show that D-glucose and quercetin slide through the transporter GLUTI. J. Bio. Chem., 281:5797-5 803)。槲皮酮看似為GLUTI之競爭性抑制劑。 經由GLUTI及GLUT2之葡萄糖轉運抑制劑使得能夠處理肥 胖及在小腸十葡萄糖轉運之特定抑制劑（D. Cermak，S. Landgraf及 S. Wolffram，2004. Quercitin glucides inhibit glucose uptake into brush-border-membrane vesicles of porcine jejunum. Brit. J. Nutr·，91:849-855)。脂肪酸（尤其 花生油酸（arachidonic acid))已顯示出藉由非環加氧酶依賴 性機理，藉由增加質膜中之GLUT1及GLUT4活性來刺激葡 萄糖攝取（J· B. P. Claire Nugent, P. Jonathan Whitehead, J_ M. Wentworth, V. Krishna K. Chatterjee 及 S. O’Rahilly， 140501.doc -16- 201002337 2001. Arachidonic acid stimulates glucose uptake in 3T3-L1 adipocytes by increasing GLUT1 and GLUT4 levels at the plasma membrane. J. Βζ·ο/· C/zem·, 278:9149-9157)。 以下揭示來自穩定之米糠的最優萃取物，其增強人類細 胞中之葡萄糖攝取。該等萃取物在微克/毫升範圍内（例 如，<1000 pg/mL·1)顯示活體外增強葡萄糖攝取之活性。 該等萃取物亦具備在糖尿病及肥胖中為關鍵的促進脂肪酸 及碳水化合物代謝平衡的FABP4抑制活性。因而，穩定之 米糠萃取物適用於治療低血糠症、糖尿病、代謝失調及肥 胖。此外’該等萃取物安全、有效，且可提供為食物增補 劑、添加至多種維生素，以及併入食物中以製造功能性食 品。 【發明内容】 本發明部分係關於一種米糠萃取物，其包含至少一種選 自由以下各物組成之群的化合物：〇 〇〇丨重量％至5重量％ 2-甲基-丁烯酸；〇.〇〇1重量％至5重量％ 8_甲基_8_氮雜雙環 [3.2_1]辛烷-3,6-二醇；〇.〇1重量％至5重量。/。4-異丙基-1,2- 苯二醇二甲喊；0.005重量％至5重量％麩醯胺酸n 5-異丙 基；0.05重量。/〇至1〇重量％ 6，1〇,14_三曱基_5913_十五碳 二烯-2-酮，〇.〇5重量％至1〇重量％ n，14_十八碳二烯醛； 0.05重量％至1〇重量％之9，11，13，15_十八碳四烯酸；〇.1重 里％至20重量％ 7_羥基-14,14-降二-8(17)-半曰花烯 (labden)-13-酮；〇·〇5重量％至2〇重量％ 9,i2-十八碳烯酸； 0.05重里。/〇至20重量。/。1〇_十八碳浠酸；〇 〇1重量％至15重 140501.doc 201002337 量％16-羥基_9,12，14-十八碳三烯酸；0.05重量％至15重量 % 13-氧-9-十八碳稀酸；o.oi重量％至5重量％ 氧十八石炭 稀酸；0.05重量％至5重量％木蠟醇（palmidr〇1) ; 〇 〇〇5重量 %至5重量°/。福提黴素（f〇rtjmicin) ; 〇.〇〇5重量％至5重量％ 洛舍瑞寧（loeserinine) ; 0·01重量％至5重量°/。1，2_二羥 基-5-二十一烯_4-酮；〇.〇〇5重量％至5重量％ 2-胺基—4-十八 石厌烯-1,3-二酵；〇·01重量％至5重量％ 2_(胺甲基）_2_丙烯酸 Ν-十六酿基甲酯；〇.〇1重量％至1〇重量％丨_烷酸甘油酯卜 十八碳二烯酸甘油酯；〇〇1重量％至5重量％環黃楊茶鹼 0(cyclobuxophylline 〇); 〇.〇1重量％至 2〇重量％ 丨烷酸甘 油酯1 -十八碳焊酸甘油酯；〇 . 〇丨重量。/。至5重量％黃揚刀寧 L(buXand〇nine L) ; 0.005 重量 ％至5重量 ％之 12_ 羥基_25_ 降-17-斯卡拉烯（scaiarene)_24^ ; 〇 〇〇5重量％至5重量％ 康尼啶A(coniodine A);及〇.〇5重量％至1〇重量％ 24-降 _4(23),9(11)-菲尼啶（fernidine)。 本發明之另一態樣係關於—種米糠萃取物，其包含至少 一種選自由以下各物組成之群的化合物：〇 〇丨重量％至1重 畺％ 2-甲基-丁稀酸；0.01重量0/〇至2重量0/〇 8_甲基_8-氮雜 雙環[3.2.1]辛烧-3,6-二醇；〇.1重量％至3重量％ 4_異丙 基-1,2-笨二醇二甲丨重量0/。至1重量％之麵醯胺酸n 5-異丙基；0.1重量％至3重量％ 6,1〇，14_三曱基_5913_十 五碳三烯-2-酮；0.1重量％至2重量％ 十八碳二烯 醛；0.2重量％至5重量％ 9，〗1，13，15_十八碳四烯酸；1重量 0/〇至10重量％ 7-羥基-M，14-降二_8(17)_半日花烯_丨3_酮； 140501 .doc •18· 201002337 0_3重嚴/〇至5重量％ 9,12-十八碳烯酸；〇 2重量％至5重量％ 10-十八碳烯酸；〇·5重量％至5重量％丨6_羥基_9，12，14_十八 碳三烯酸；〇.5重量％至5重量％ 13_氧_9_十八碳烯酸；〇.2 重里％至1重量％ 4-氧十八碳烯酸；〇1重量％至i重量％木 蠟醇，0.01重量％至0.5重量％福提黴素；〇.1重量％至1重量 /〇洛舍瑞争，〇· 1重量％至1重量。丨，2•二經基_5_二十一 烯-4-S同；0.05重量％至1重量％ 2_胺基_4_十八碳烯_丨，3_二 醇，0.1重量％至1重量％ 2_(胺甲基）_2_丙烯酸N_+六醯基 甲醋；0.2重量％至2重量％ i_烷酸甘油酯卜十八碳二烯酸 甘油酷；0.1重量％至1重量％環黃揚茶鹼〇 ; 〇丨重量％至2 重量◦/〇 1 -烧酸甘油酯1 _十八碳稀酸甘油酯；〇. 1重量。/。至1 重量％黃揚刀寧L ; 〇.〇5重量％至0.5重量％ 12-羥基-25-降-17-斯卡拉烯-24-醛；〇.〇5重量％至1重量％康尼啶A;及 〇.2重量％至2重量％ 24-降-4(23)，9(11)-菲尼啶。 本發明之又一態樣係關於一種米糠萃取物，每1 〇〇 mg該 萃取物包含至少一種選自由以下各物組成之群的化合物： 1 pg至100叫2-曱基-丁烯酸；0.1 至1000 pg 8-曱基-8-氮雜雙環[3.2.1]辛烷-3,6-二醇；10 pg至2000 pg 4-異丙基-1，2-苯二醇二曱醚；1 至500 pg麩醯胺酸N 5-異丙基； 100 pg 至 2500 pg 6,10,14-三曱基-5,9,13-十五碳三烯-2-酮；100 至 2000 pg 11,14-十八碳二烯醛；100 pg 至 2000 卜经9，11，13,15-十八碳四烯酸；500 #§至15,00〇4吕7-羥 基-14,14-降二-8(17)-半日花烯-13-酮；100 至 15,000 pg 9,12-十八碳烯酸；100 pg至15,000 pg 10-十八碳烯酸； 140501.doc -19- 201002337 100 pg 至 2500 pg 16-經基-9，12，14-十八破三稀酸；100 至5000 pg 13-氧-9-十八碳烯酸；100 pg至1500 4-氧十 八碳烯酸；100 gg至1500 pg木蠟醇；5 pg至200 pg福提黴 素；20 pg至 1〇〇〇 pg洛舍瑞寧；10 pg至 500 pg 1,2-二輕 基-5-二十一稀-4-S同；10 pg至 500 pg 2-胺基-4-十八碳 烯-1，3-二醇；10 Hg至500 pg 2-(胺曱基）-2-丙烯酸N-十六酸 基甲酯；100 pg至2500 pg 1-烷酸酯卜十八碳二烯酸甘油 酯；10 pg至1000 pg環黃揚茶鹼0; 100 pg至3000 丨_燒 酸甘油酯卜十八碳烯酸甘油酯；50 pg至1000 pg黃揚刀寧 L; 10 pg 至 500 gg 12-羥基-25-降-17-斯卡拉烯-24-醛；1〇 pg 至 5 00 pg 康尼啶 A ;及 1〇〇 至 2000 pg 24-降-4(23) 9(11)-菲尼啶。 本發明之又一悲樣係關於一種米糖萃取物’其包含至少 一種選自由以下各物組成之群的化合物：00丨重量％至i 〇 重量％ 4,5-二氫-4-羥基-5-甲基-2-十四基-2(3H)-呋喃酮； 0.01重量％至1〇重量％孕留烷_2,3,6-三醇；0.01重量％至1〇 重置％ 5-(8-十七烯基）二氫-3-羥基_2(3H)-呋喃嗣；（^(^重 量％至10重量 ％ 24-降-4(23),9(11)_ 菲那啶（fernadine) ; 〇 〇1 重量/〇至10重星/。24-降-12-烏蘇燦（ursene); 〇〇1重量％至 1〇重量。/。齊燉果二烯；〇〇1重量％至5重量％ 14_ 曱基-9,19-¾麥角-24(28)-烯-3-醇；0.01重量％至1〇重量％ 孟特克驗（montecristin) ; 0.01 重量 ％至1〇重量 ％ 3 (3 4·二 經苯基）-2-丙稀酸三十S旨；〇.〇1重量％至1〇重量％蠶砂酮 (bombiprenone);及 0.001 重量 ％至1〇 重量 ％12 二（am 140501.doc -20- 201002337 十八碳二烯酸）甘油酯。 本考:月之另n係、關於_種米糠萃取物，其包含至少 種選自由以下各物組成之群的化合物：〇· 1重量％至2重 量:4’5'H經基·5_甲基-2-十四基_2(叫。夫仙；（U 重里/〇至2重s %孕g 三醇重量％至3重量％

5 (8十七稀基）一氫_3_赵基_2(3η)“夫喃酮；重量％至2 重里/。24-降-4(23),9(11)-菲那啶；〇 5重量％至5重量％ 24· 降-12-烏蘇烯；0·05重量％至3重量％ 齊燉果二 烯，0.05重$ 〇/。至丄重量％ 14_甲基_9，19_環麥角_24(28)_ 烯-3-醇；0.05重量。/。至3重量％孟特克鹼；〇〇5重量％至5 重3-(3,4-二羥苯基）_2-丙烯酸三十酯；〇 〇1重量％至1〇 重量％蠶砂酮；及0.01重量％至2重量％ 十 八碳二烯酸）甘油酯。 本發明之另一態樣係關於一種米糠萃取物，每i 〇〇呵該 萃取物包含至少一種選自由以下各物組成之群的化合物： 50 pg 至 3000 4,5-二氫-4-羥基-5-甲基-2-十四基-2(3H)- 呋喃酮；50 pg至3000 pg孕留烷-2,3,6-三醇；50 pg至3000 pg 5-(8-十七烯基）二氫-3-羥基-2(3H)-呋喃酮；50 gg至 2000 pg 24-降-4(23),9(11)-菲那啶；1〇 至 5000 pg 24-降-12-烏蘇烯；25 gg 至 2500 pg 11,13(18)-齊燉果二烯；10 pg至 1000 pg 14-甲基-9，19-環麥角-24(28)-烯-3-醇；10 pg 至 3000 pg 孟特克鹼；5 pg 至 5000 pg 3-(3,4-二羥苯基）-2-丙烯酸三十酯；5 pg至5000 pg蠶砂酮；及5 pg至3000 pg 1，2-二-(9Z，12Z-十八碳二烯酸）甘油酯。 140501.doc -21 - 201002337 在某些實施例中，本發明係關於一種諸如前述萃取物中 任一者之米糠萃取物，其具有包含圖丨至圖14中任一者之 直接即時分析（DART)質譜層析圖的部分。 在某些實施例中，米糠萃取物之葡萄糖攝取刺激大於 200 nM胰島素之葡萄糖攝取刺激。在某些實施例中，該萃 取物之葡萄糖攝取刺激比2〇〇 nM胰島素之葡萄糖攝取刺激 大0.5倍至5倍。在某些實施例中，該萃取物之葡萄糖攝取 刺激比200 nM胰島素之葡萄糖攝取刺激大〇 5倍至3 5倍。 在某些貫施例中，該萃取物之葡萄糖攝取刺激比2〇〇 胰 島素之葡萄糖攝取刺激大〇.7倍至3·丨倍。在其他實施例 中，該卒取物之葡萄糖攝取刺激比2〇〇 島素之葡萄糖 攝取刺激大3倍以上。在其他實施例中，該萃取物之葡萄 糖攝取刺激比200 nM胰島素之葡萄糖攝取刺激大約3倍。 在另貝施例中’卒取物之葡萄糖攝取刺激大於對照物 之葡萄糖攝取刺激。在某些實施例中，該萃取物之葡萄糖 攝取刺激比對照物之葡萄糖攝取刺激大丨倍以上。在其他 實施例中，該萃取物之葡萄糖攝取刺激比對照物之葡萄糖 攝取刺激大1倍至10倍。在其他實施例中，該萃取物之葡 萄糖攝取刺激比對照物之葡萄糖攝取刺激大2倍至7倍。在 其他實施例中，該萃取物之葡萄糖攝取刺激比對照物之葡 萄糖攝取刺激大約6倍。 在某些實施例中，該萃取物具有1〇〇計數/分鐘至3〇〇〇計 數/分鐘（cpm)之葡萄糖攝取刺激。在其他實施例中，該萃 取物具有100 Cpmi 1000 cpm之葡萄糖攝取刺激。在某些 140501.doc -22- 201002337 實施例中，該萃取物之濃度為5 pg/mL至2000 pg/mL，且 葡萄糖攝取刺激為100 cpm至3000 cpm或者100 cpm至1000 cpm。在其他實施例中，該萃取物之濃度為10 pg/mL至 1000 pg/mL。在其他實施例中，該萃取物之濃度為10 pg/^mL、50 pg/mL、250 pg/mL或 1000 pg/mL。 在某些實施例中，米糠萃取物具有小於2000 pg/mL之 FABP4抑制的IC50值。在其他實施例中，該FABP4抑制的 IC5〇 值為 25 pg/mL 至 2000 pg/mL、25 pg/mL 至 1000 pg/mL，或 25 pg/mL至 500 pg/mL。 本發明之另一態樣係關於一種米糠萃取物，其係由包含 以下步驟之方法製備： a) 提供穩定之米糖原料，及 b) 萃取該原料。 在某些實施例中，萃取步驟為含水乙醇萃取；而在其他 實施例中，萃取步驟為超臨界二氧化碳萃取。 本發明之另一態樣係關於一種包含前述米糠萃取物中任 一者之醫藥組合物。在某些實施例中，該米糠萃取物係調 配成功能性食品、食物增補劑、粉末或飲料。 本發明之另一態樣係關於一種抑制葡萄糖攝取之方法， 該方法包含向有需要之個體投予有效量之任何前述米糠萃 取物或醫藥組合物。 本發明之另一態樣係關於一種抑制FABP4結合之方法， 該方法包含向有需要之個體投予有效量之任何前述米糠萃 取物或醫藥組合物。在某些實施例中，個體患有高血糖 140501 .doc -23- 201002337 症。在其他實施例中，個體患有糖尿病。在其他實 中’個體患有1型糖尿病；而在其他實施例中，個體患有2 型糖尿病。在其他實施例中，個體患有肥胖及相關 失調。 〜遗 【實施方式】 定義 術語「協同」係業内公認且係指兩個或兩個以上組分共 同作用以致總效用大於該等組分之加總。 刀八 術語「治療」為業内公認且係指治癒以及改善任何病狀 或疾病之至少一種症狀。 士本文中所使用’術語「p細胞或β'細胞」係指姨臟中 之種，，、田胞，其產生並釋放胰島素（一種控制血液中葡萄 糖含量之激素）。 如本文中所使用，術語「葡萄糖攝取」係指將葡萄糖吸 收入細胞中之過程。葡萄糖攝取之方法在所有組織中視兩 個因素而不同：組織之代謝需要’及葡萄糖之可用性。兩 種可發生葡萄糖攝取之方式為易化擴散（被動過程）及二次 主動轉運（主動過程，其間接需要Ατρ水解）。 士本文中所使用，術語r 3 T3_L丨細胞」係指來源於用於 對脂肪組織進行生物學研究的3T3細胞之細月包系。此等細 胞具有纖維母細胞狀形態，但在適#條件下，㈣細胞分 化成脂肪細胞狀表型。脂肪細胞形態之3T3-L1細胞增加三 -甘油ia之s成及累積，且獲得脂肪細胞之印環狀外觀。 此等細胞亦對成脂激素及解脂激素以及藥物（包括腎上腺 I4050J.doc -24- 201002337 素、異丙基腎上腺素及胰島素）敏感。 如本文中所使用，術言吾「GLUT」係指葡萄糖轉運體且 表示在許多哺乳動物細胞中均發現之膜蛋白家族。glut 為含有丨2個跨膜螺旋之嵌入膜蛋白，胺基與羧基末端二者 均暴露在質膜之細胞質側。GLUM白根據交互構造模型 轉運葡萄糖及相關己醣’其預示轉運體向細胞外側或細胞 内側暴露單-受質結合位點。葡萄糖結合至—個位點引起

與轉運相關之構型變化，且將葡萄糖釋放至膜的另一側。 内部及外部葡萄糖結合位點可能位於轉運體之跨膜區段 9、10、U中。此外’轉運之受質的選擇及親和性可能涉 及位於第七跨膜區段中之QLS基元。GLUn對所有細胞中 維持呼吸所需之低水準基本葡萄糖攝取負責，且細胞膜中 之GLUT1水準因葡萄糖水準降低而增加，且㈣萄糖水準 增加而降低。GLUT4發現於脂肪組織及橫紋肌（骨路肌及 心肌）中’且為負責騰島素調節之葡萄糖儲存的胰島素調 節之葡萄糖轉運體。 如本文中所使用，術語「FABP」係指脂肪酸結合蛋白 (FABP) ’其係涉及身體各部位t之脂肪酸及其他脂質之運 輸的脂質結合蛋白（LBP)的多基因超級家族。FABp可再分 成兩個主要群組：細胞質FABp(FABPc)及質膜 FABP(FABPpm)。有9種已知FABp，其位於身體各部分令， 包括脂肪細胞、m统、肌肉、肝及睾丸m立對於 特定FABP之功能至關重要。 如本文中所使用，術語rFABP4」係指特定脂肪酸結合 140501.doc •25 - 201002337 蛋白4，其係脂肪組織中脂肪酸之細胞内轉運及代謝的關 鍵介體。FABP4以高親和性結合脂肪酸且將其轉運至各個 細胞區室。當與脂肪酸複合時，FABP4與兩種重要代謝調 節因子，激素敏感型脂肪酶及過氧化體增殖劑活化受體 γ(ΡΡΑΚ-γ)相互作用並對其活性進行調整。1?八3]?4在2型糖 尿病中起重要作用。 如本文中所使用，術語「細胞遲緩素」或「細胞遲緩素 B」係指細胞可滲透性黴菌毒素。細胞遲緩素B藉由阻斷 收縮性微絲之形成而抑制細胞質分裂◦其抑制細胞運動且 誘發核穿壁（nuclear extrusion)。細胞遲緩素B藉由阻斷在 聚合物快速生長端處的單體添加而縮短肌動蛋白質細絲， 且特定抑制葡萄糖轉運及血小板凝聚。 如本文中所使用，術語「ms-丨」係指胰島素受體受 質-1，其在自胰島素及胰島素狀生長因子受體傳 輸信號至細胞内通道PI3K/AKT及Erk MAp激酶通道中起關 鍵作用。IRS-1在代謝及促細胞分裂（促生長）通道中起重要 作用。例如，缺乏IRS-1之小鼠具有糖尿病表型。 如本文所使用，術語「IR」或「胰島素受體」為藉由胰 島素活化之跨膜受體。其屬於酪胺酸激酶受體之大類。兩 個α子單元及兩個β子單元組成該胰島素受體。p子單元穿 過細胞膜且藉由雙硫鍵連結。α子單元及|3子單元係由單其 因（INSR)編碼。 & 如本文所使用，術語「AKT」係指在哺乳動物中非常重 要之蛋白激酶B。其為葡萄糖轉運體4(GLUT4)至質膜的胰 H050l.doc •26· 201002337 島素誘致位移所需。可藉由Ακτ在磷酸化時抑制肝糖合成 酶激酶3(GSK-3)，其導致促進肝糖合成。在信號傳導 中涉及GSK-3，且在控制細胞代謝方面在w价通道中可能 亦牽涉AKT。 . 如本文所使用，術語「Zucker大鼠」係指稱為Zucker大 鼠之實驗室大鼠品系褐鼠（挪威鼠）的遺傳系。此等大鼠經 繁殖以遺傳性地易患糖尿病，在人類中可發現相同之代謝 /、 失調。 (Ί. 萃取物 本發明部分係關於包含某些化合物的穩定之米（SRB)萃 取物。在某些實施例中，米糠萃取物包含至少一種選自由 以下各物組成之群的化合物：〇.〇〇丨重量％至5重量％ 2_曱 基-丁烯酸；〇.〇〇1重量％至5重量％ 8-甲基-8-氮雜雙環 [3·2·1]辛烷_3,6-二醇；〇.01重量％至5重量％ 4_異丙基4,2 — 苯二醇二曱醚；〇.005重量％至5重量。/。麩醯胺酸ν 5-異丙 Ο 基；〇.〇5重量％至1〇重量％6,10，14-三曱基-5,9,13-十五碳 三烯-2-酮；〇.〇5重量％至1〇重量％11，14_十八碳二烯醛； 0.05重量。/〇至10重量％ 9,1113,15十八碳四烯酸；〇」重量 %至20重量％ 7-羥基-14,14-降二_8(17)-半曰花烯-13-閑； 〇.05重量％至2〇重量％9,12-十八碳烯酸；0.05重量％至20 重量°/〇 10-十八碳烯酸；〇 〇丨重量〇/。至1 5重量.％ 1 6-羥 基-9,12,14-十八碳三烯酸；〇〇5重量。/。至15重量％ 13-氧-9-十八碳烯酸；〇.〇1重量％至5重量％ 4_氧十八碳烯酸；〇.〇5 重量％至5重量％木蠟醇；〇 〇〇5重量％至5重量％福提黴 140501 .doc -27- 201002337 素， 0.005重量％至5重量％洛舍瑞寧；〇〇1重量％至5重量〇/〇 !，2-二羥基-5-二十一烯-4-酮；0·005重量％至5重量％ 2胺 基-4-十八碳烯-1，3-二醇；0.01重量％至5重量％ 2_(胺甲 基）-2-丙烯酸Ν-十六醯基甲酯；〇〇1重量％至1〇重量％ 烷 酸甘油酯卜十八碳二烯酸甘油酯；〇_〇1重量％至5重量 黃揚茶鹼Ο; 〇.〇1重量％至20重量％ ；i_烷酸甘油酯丨十八= 烯酸甘油酯，· 0.01重量％至5重量％黃揚刀寧L ; 〇 〇〇5重^ %至5重量％ 經基_25务17_斯卡拉稀_24_酸；〇〇〇5重= %至5重量％康尼啶A ;及〇 〇5重量％至1〇重量％ 降_4(23)，9(11)-菲尼„定。該萃取物可包含一種、兩種或兩 種以上前述化合物，或該萃取物可含有所有前述化合物。 在某些貫施例中，該萃取物包含所有前述化合物。 在某些實施例中，米糠萃取物包含至少一種選自由以下 各物、且成之群的化合物：〇.〇 1重量％至1重量％ 2-甲基、丁 稀^ ’ 〇.〇1重量％至2重量％ 8-甲基-8-氮雜雙環[3.2.1]辛 烧_3’6_一醇；0·1重量％至3重量％ 4-異丙基-1，2-苯二醇二 甲_ ’ 〇·01重量％至1重量％麩醯胺酸N 5-異丙基；0.1重量 %至3重量％ ()，1〇，1扣三甲基-5,9，13-十五碳三烯-2-酮；〇1 重里/°至2重量％ 11,14-十八碳二烯醛；0.2重量°/〇至5重量 /〇 9’11 ’13，1 5~十八碳四烯酸；1重量％至1 0重量％ 7-輕 基-14 14 -P备- ’ 牛一-8(17)-半曰花烯-13-酮；0.3重量％至5重量0/。 9’1 2十八兔烯酸；0.2重量°/。至5重量％ 10-十八碳烯酸； 〇.5重里。/〇至5重量。/。16-羥基-9,12,14-十八碳三烯酸；0.5重 里％至5重里％ 13_氧_9_十八碳烯酸；ο』重量％至1重量％ 140501.doc • 28- 201002337 4-氧十八碳烯酸；〇」重量。/。至！重量％木蠟醇；〇〇ι重量％ 至0.5重里％福提黴素；〇· 1重量°/。至1重量％洛舍瑞寧；〇_ 1 重i/ο至1重1，2_二輕基_5_二十一烯_4_綱；重量％ 至1重里/ό 2-胺基_4-十八碳細-1,3 -二醇；〇·ι重量％至1重量 % 2_(胺甲基）-2-丙烯酸N-十六醯基曱酯；0.2重量％至2重 量0/〇 1-院酸甘油酯丨_十八碳二烯酸甘油酯；〇1重量％至1 重里A之環育揚茶驗0，· 〇·1重量％至2重量％ 1-烧酸甘油@旨 1-十八碳烯酸甘油酯；0.1重量％至1重量％黃揚刀寧L ; 〇_〇5重量％至〇.5重量％ 12-羥基-25-降-17-斯卡拉烯-24-醛；0.05重量％至1重量％康尼啶A ;及0.2重量％至2重量％ 24-降-4(23),9(11)-菲尼啶。 本發明之又另一態樣係關於一種米糠萃取物，每1 〇〇 mg 該萃取物包含至少一種選自由以下各物組成之群的化合 物：1 pg至 100 2-甲基-丁浠酸；0.1 Kg至 1〇〇〇 pg 8-甲 基-8-氮雜雙環[3.2.1]辛烷-3,6-二醇；10 pg至2000 4-異 丙基-1，2-苯二醇二甲醚；1 Pg至500 μβ麵醯胺酸Ν 5-異丙 基；100 pg 至 2500 pg 6,10,14-三甲基-5,9，13-十五碳三 烯-2-酮；100 gg 至 2000 Kg 11，14-十八碳二烯醛；1〇〇 Kg 至 2〇〇〇#§9,11,13,15-十八碳四烯酸；5〇〇4§至15,〇〇〇0§7-羥基-14,14-降二-8(17)-半曰花烯-13-酮；1〇〇 Kg 至 15,〇〇〇 阳9,12-十八碳烯酸；100叩至15,000叫10_十八碳稀酸； 100 pg至2500 pg 16-羥基-9，12，14-十八碳三稀酸；100吨 至5000 gg 13-氧-9-十八碳烯酸；1〇〇 至1500叫4_氧十 八碳烯酸；1〇〇 Pg至1500盹木蠟醇；5问至200阳福提 140501.doc -29· 201002337 黴素；20 Kg至l〇00 pg洛舍瑞寧；10 pg至500 Mg 1，2-二經 基-5-二十一烯-4-酮；10 pg至500 pg 2-胺基-4-十八碳 稀-1,3-二醇，至500 pg 2-(胺甲基）-2 -丙細酸N-十六酿 基甲酯；100 pg至2500 pg 1-烷酸酯1-十八碳二烯酸甘油 酯；10 pg至1〇〇〇 Ag環黃楊茶驗0 ; 100 pg至3000 pg 1_烧 酸甘油酯1-十八碳烯酸甘油酯；50 pg至1〇〇〇 Kg黃揚刀寧 L ; 10 pg 至 500 pg 12-羥基-25-降-17-斯卡拉烯-24-醛；10 pg 至 500 pg 康尼啶 A;及 100 pg 至 2000 pg 24-降-4(23), 9(11)-菲尼啶。 在另一實施例中’米糠萃取物每100毫克萃取物包含至 少一種選自由以下各物組成之群的化合物.25 pg至75 pg 2-曱基-丁烯酸；300 pg至500 pg 8-甲基-8-氮雜雙環[3.2.1] 辛烧-3,6-二醇；750 pg至100 pg 4-異丙基-1,2-苯二醇二曱 醚；100 pg至250 pg麩醯胺酸N 5-異丙基；500 pg至2000 pg 6,10,14-三甲基-5,9,13-十五碳三烯-2-酮；250 至750 pg 11,14-十八碳二烯醛；1〇〇〇 Kg至 1500 Kg 9,11,13,15-十 八碳四烯酸；5000 pg至10,000 pg 7-羥基-14,14-降 二_8(17)-半曰花烯-13-酮；5000 pg至 10,000 pg 9,12-十八 碳稀酸；200 pg至1〇〇〇 pg 10-十八碳稀酸；！〇〇〇 Kg至20〇〇 pg 16-羥基-9,12,14-十八碳三烯酸；500 pg 至 3000 pg B-氧-9-十八碳烯酸；200 pg至800 pg 4-氧十八碳烯酸；200 pg至800 pg木蠟醇；1〇 μβ至2〇〇 pg福提黴素；50 pg至500 pg洛舍瑞寧；50 pg至500 yg 1,2-二經基-5-二十一烯-4-酮；100 pg至500 pg 2-胺基-4-十八碳_ -1,3-二醇’ 140501.doc -30- 201002337 100 pg至500 pg 2-(胺曱基）-2-丙烯酸N-十六醯基曱酯； 200 pg至1000 pg 1-烷酸酯1-十八碳二烯酸甘油酯；100 至1000 環黃揚茶鹼Ο ; 200 至1000 1-烷酸甘油酯1- 十八碳烯酸甘油酯；200 pg至1000 pg黃楊刀寧L ; 10 pg至 . 500 gg 12-羥基-25-降-17-斯卡拉烯-24-醛；100 至 500 pg康尼啶 A ;及 500 至 1500 pg 24-降-4(23),9(11)-菲尼 咬。 ^ 在某些實施例中，米糠萃取物每100 mg萃取物包含約5

C pg、10 pg、20 pg、30 pg、40 pg、50 pg、60 pg、70 pg、80 pg、90 pg或 100 pg2 -甲基-丁 稀酸。 在某些實施例中，米糠萃取物每100 mg萃取物包含約10 pg、20 pg、30 pg、40 pg、50 pg、60 pg、70 pg、80 pg 、 90 pg 、 100 pg 、 150 pg 、 200 pg 、 250 pg 、 300 pg 、 3 50 pg、400 或 450 8-曱基-8-氮雜雙環[3.2.1]辛 烧-3,6-二醇。 Q 在某些實施例中，米糠萃取物每100 mg萃取物包含約 100 pg、200 pg、300 pg、400 pg、500 pg、600 pg、700 pg、800 pg、900 pg 或 100 pg 4 -異丙基-1,2 -苯二醇-二曱 酸。 ' 在某些實施例中，米糠萃取物每100 mg萃取物包含約10 \ig ' 20 pg、30 pg、40 pg、50 pg、60 pg、70 pg、80 pg、90 pg、100 pg、110 pg、120 pg、13 0 pg、140 pg、 150 pg、160 pg、170 pg、180 pg、190 pg或 200 pg楚臨胺 酸N 5 -異丙基。 140501.doc -31 - 201002337 在某些實施例中，米糠萃取物每1 〇〇 mg萃取物包含約 200 pg、300 pg、400 pg、500 pg、600 pg、700 pg、800 pg 、 900 pg 、 1000 pg 、 1100 gg 、 1200 pg 、 1300 pg 、 1400 pg、1500 pg、1600 pg、1700 pg、1800 pg、1900 pg或 2000 pg 6,10,14-三曱基-5,9,13-十五碳三浠-2-酮。 在某些實施例中，米糠萃取物每1 〇〇 mg萃取物包含約 200 pg、300 pg、400 pg、500 pg、600 pg、700 pg、800 pg 、 900 pg 、 1000 pg 、 1100 pg 、 1200 pg 、 1300 pg 、 1400 pg或1500 pg 11，14-十八碳二稀搭。 在某些實施例中，米糠萃取物每1 〇〇 mg萃取物包含約 200 pg 、 300 pg 、 400 pg 、 500 pg 、 600 pg 、 700 pg 、 800 pg 、 900 pg 、 1000 pg 、 1100 pg 、 1200 pg 、 1300 pg 、 1400 pg或15 00 pg 9,11,13,15-十八碳四烯酸。 在某些實施例中，米糠萃取物每1 〇〇 mg萃取物包含約 1000 pg、15 00 ' 2000 pg、2500 pg、3000 pg、3500 pg、4000 pg、4500 pg、5000 pg、5500 pg、6000 pg、 6500 pg、7000 pg、7500 pg、8000 pg、8500 pg、9000 pg、9500 pg 或 10000 pg 至 15000 pg 7-羥基-14,14-降二-8(17)-半日花烯-13-酮。 在某些實施例中，米糠萃取物每1 〇〇 mg萃取物包含約 300 pg 、 400 pg 、 500 pg 、 600 pg 、 700 pg 、 800 pg 、 900 pg、1000 pg、15 00 pg、2000 pg、2500 pg、3000 pg、 3 5 00 pg、4000 pg、4500 pg、5 000 pg、5 5 00 pg、6000 pg、6500 pg、7000 pg、7500 pg、8000 pg、8500 pg、 140501.doc -32- 201002337 9000 pg、9500 pg或 10000 pg 9,12-十八碳稀酸。 在某些實施例中，米糠萃取物每1 00 mg萃取物包含約 200 pg、300 pg、400 pg、500 pg、600 pg、700 pg、800 pg 、 900 pg 、 1000 pg 、 1500 pg 、 2000 pg 、 2500 pg 、 3000 pg、3500 \ig ' 4000 pg、4500 pg、5000 pg、5500 pg、 6000 pg ' 65 00 pg、7000 pg、7500 pg、8000 pg、8500 pg、9000 pg、95 00 pg或 10000 pg至 15 000 pg 10-十八碳稀 酸。 在某些實施例中，米糠萃取物每1 00 mg萃取物包含約 5 00 pg、600 pg、700 pg、800 pg、900 pg、1000 pg、 1100 pg、 1200 pg 、 1300 pg 、 1400 pg 、 15000 pg 、 1600 pg、1700 pg、1800 pg、1900 pg 或 2000 pg 16-經 基-9,12,14-十八碳三烯酸。 在某些實施例中，米糠萃取物每1 00 mg萃取物包含約 5 00 pg、600 pg、700 pg、800 pg、900 pg、1000 pg、 1500 pg、2000 pg、2500 pg、3000 pg、3500 pg、4000 pg、4500 pg或 5000 pg 13-氧-9-十八碳_ 稀酸。 在某些實施例中，米糠萃取物每1 00 mg萃取物包含約 100 pg、200 pg、300 pg、400 pg、500 pg、600 pg、700 pg、800 pg、900 pg或 1000 pg4-氧十八碳烯酸。 在某些實施例中，米糠萃取物每1 00 mg萃取物包含約 100 pg、200 pg、300 pg、400 pg、500 pg、600 pg、700 pg、800 pg、900 pg或 1000 pg木虫鼠醇。 在某些實施例中，米糠萃取物每100 mg萃取物包含約10 140501.doc -33 - 201002337 pg、20 \xg ' 30 pg、40 pg、50 pg、60 pg、70 pg、80 gg、90 pg或1 00 pg福提黴素。 在某些實施例中，米糠萃取物每1 〇〇 mg萃取物包含約 100 pg 、 150 pg 、 200 pg 、 250 pg 、 300 pg ' 350 pg 、 400 pg、450 pg或5 00 pg洛舍瑞寧。 在某些實施例中，米糠萃取物每1 00 mg萃取物包含約 100 pg 、 110 pg 、 120 pg 、 130 pg 、 140 pg 、 150 pg 、 160 pg、170 pg、180 (〇_g、190 pg、200 pg、210 pg、220 pg、 230 pg 、 240 pg 、 250 pg 、 260 pg 、 270 pg 、 280 pg 、 290 jag或 300 pg 1,2-二經基-5-二十一稀-4-酮。 在某些實施例中，米糠萃取物每100 mg萃取物包含約50 pg、100 pg、150 pg、200 pg、250 pg、300 pg、250 pg、 400 pg、450 pg 或 500 pg 2-胺基-4-十八碳稀-1，3-二醇。 在某些實施例中，米糠萃取物每1 00 mg萃取物包含約 1 00 pg、1 50 pg、200 pg、250 pg ' 300 pg、250 pg、400 pg、45 0 pg或5 00 pg 2-(胺曱基）-2-丙烯酸N-十六醯基甲 酉旨。 在某些實施例中，米糠萃取物每1 00 mg萃取物包含約 200 μ§ ' 3 00 pg、400 pg、500 pg、600 pg、700 pg、800 pg 、 900 pg 、 1000 pg 、 1100 pg 、 1200 pg 、 1300 μβ ' 1400 pg、15 00 pg、1600 pg、1700 pg、18 00 pg、1900 pg 或 2 0 0 0 pg 1 -烧酸醋1 -十八碳二稀酸甘油醋。 在某些實施例中，米糠萃取物每1 00 mg萃取物包含約 100 pg、15 0 pg、200 pg、250 pg、300 pg、350 pg、400 140501.doc -34- 201002337 pg、450 Kg或500 pg環黃揚茶驗Ο。 在某些實施例中，米糠萃取物每1 00 mg萃取物包含約 200 pg、300 pg、400 pg、500 pg、600 pg、700 pg、800 pg、900 pg、1000 pg、1500 pg、2000 pg或 2500 pg 1-烧 酸甘油ί旨1 -十八碳烯酸甘油s旨。 在某些實施例中，米糠萃取物每1 00 mg萃取物包含約 100 pg、150 pg、200 pg、250 pg、300 pg、350 pg、400 pg、 450 pg、 500 pg、 550 pg 、 600 pg、 650 jig、 700 |ig或 750 黃楊刀寧L。 在某些實施例中，米糠萃取物每100 mg萃取物包含約50 jag、60 pg、70 pg、80 pg、90 pg、100 pg、150 pg、200 pg、250 pg、3 00 pg、250 pg、400 pg 或 500 pg 12-經 基-25-降-17-斯卡拉烯-24-醛。 在某些實施例中，米糠萃取物每100 mg萃取物包含約50 pg 、 60 pg 、 70 pg 、 80 pg 、 90 pg 、 100 pg 、 150 pg 、 200 pg、250 pg、300 pg、250 pg、400 pg或 500 pg康尼 口定 A ° 在某些實施例中，米糠萃取物每1 00 mg萃取物包含約 200 pg、300 pg、400 pg、500 pg、600 pg、700 pg、800 \xg ' 900 μ§ ' 1000 pg、1100 pg、1200 pg、1300 pg、1400 pg或 1500 pg 24-降-4(23),9(11)-菲尼啶。 本發明之又一態樣係關於一種米糠萃取物，其包含至少 一種選自由以下各物組成之群的化合物：0.01重量％至10 重量％ 4,5-二氫-4-羥基-5-曱基-2-十四基-2(3H)-呋喃酮； 0.01重量％至10重量％孕甾烷-2,3,6-三醇；0.01重量％至10 140501.doc -35- 201002337 重量％ 5-(8-十七烯基）二氫_3_羥基_2(3印_呋喃酮；〇〇1重 量^至⑺重量^/^^仁降-以以^丨丨^菲那啶：山…重量^至㈠ 重量％ 24-降-12-烏蘇烯；〇.〇丨重量％至1〇重量％ n，13(l8)、 齊域果二烯；〇〇1重量0/〇至5重量％ 14_曱基_9，19_環麥 角-24(28)-烯-3-醇；0.01重量％至10重量％孟特克鹼；〇 〇1 重虿％至10重量。3气3,4_二羥苯基）_2_丙烯酸三十酯； 重量。/。至10重量％蠶砂酮；及〇〇〇1重量％至1〇重量％ ι，ι 二-(9Z，12Z-十八碳二烯酸）甘油酯。該萃取物可包含〜 種、兩種或兩種以上前述化合物，或該萃取物可包含所有 前述化合物。 在某些實施例中，米糠萃取物包含至少一種選自由以下 各物組成之群的化合物：〇.1重量％至2重量％ 4,5-二氫、4 羥基-5-曱基-2-十四基_2(3H)_呋喃酮；〇.1重量％至2重量0/〇 孕甾烷-2,3,6-三醇；〇·ι重量％至3重量％ 5_(8_十七烯基）二 氫-3-經基-2(3H)-呋喃酮；〇.1重量％至2重量％ 24 降-4(23),9( 11)-菲那啶；0.5重量％至5重量％ 24-降-12-烏兹 烯；0.05重量％至3重量％ U，13(18)_齊燉果二烯；〇〇5重 至1重量％ 14-甲基-9,19-環麥角-24(28)-烯-3-醇；0〇5 重量％至3重量❶/。孟特克鹼；〇.05重量％至5重量％ 3_(3,4，一 經苯基）-2-丙烯酸三十酯；〇.〇丨重量％至1〇重量％蠶砂_ . 及0.01重量％至2重量％ 1，2-二_(9Z，12Z-十八碳二烯酸）甘油 酯。 在某些實施例中，米糠萃取物每i 〇〇 mg萃取物包含至少 一種選自由以下各物組成之群的化合物：50 pg至3000 140501 .doc -36 - 201002337 4.5- 二氫-4-羥基-5-甲基-2-十四基-2(31^)-呋喃酮；50#§至 3 000 pg孕甾烷-2,3,6-三醇；50 pg至 3000 pg 5-(8-十七烯 基）二氫-3-羥基-2(3H)-呋喃酮；50 至 2000 pg 24-降-4(23),9(11)-菲那啶；10 至 5000 24-降-12-烏蘇 烯；25 pg 至 2500 11,13(18)-齊燉果二稀；10 pg 至 1〇〇〇 pg 14-甲基-9,19-環麥角-24(28)-烯-3-醇；10 pg至 3000 pg 孟特克鹼；5 至5000 pg 3-(3,4-二羥苯基）-2-丙烯酸三十 酯；5 |xg 至 5000 蠶砂酮；及5 pg至 3000 pg 1,2-二（9Z， (" 1 2 Z -十八碳二烤酸）甘油S旨。 在某些實施例中，米糠萃取物每100 mg萃取物包含至少 一種選自由以下各物組成之群的化合物：1 00 pg至1 500 pg 4.5- 二氫-4-羥基-5-甲基-2-十四基-2(3H)-呋喃酮；1〇〇 Pg 至 1500 pg孕留烷-2,3,6-三醇；100 至 2500 pg 5-(8-十七 烯基）二氫-3-羥基-2(3H)-呋喃酮；1〇〇 pg至1500 #§24-降-4(23),9( 11)-泮那0定；50 pg至 1000 pg 24-降-12-烏蘇 Q 烯；100 Kg至 2000 Kg 11，13(18)-齊燉果二烯；50 pg至 1000 pg 14-甲基-9,19-環麥角-24(28)-烯-3-醇；50 pg 至 2500 pg 孟特克鹼；10 pg至1500 pg 3-(3,4-二羥苯基）-2-丙烯酸三 十酯；10 pg至2500 蠶砂酮；及1〇畔至2000 pg 1,2-' 二-(9Z，12Z-十八破二烯酸）甘油酯。 在某些實施例中’米糠萃取物每100 mg萃取物包含約 100 pg、200 pg、300 、400 pg、500 pg、600 pg、700 gg、800 、900 pg、1000 ^、iioo 吨、1200 pg、1300

Kg、1400 pg 或 1500 gg 4,5_ 二氫 _4_ 羥基 _5_ 曱基 _2-十四 140501.doc -37- 201002337 基-2(3H)-呋喃酮。 在某些實施例中，米糠萃取物每1 〇〇 mg萃取物包含約 100 μβ ' 200 pg、300 pg、400 pg、500 pg、600 pg、700 pg、800 μ% ' 900 pg、1000 pg、1100 pg、1200 pg、13 00 pg、1400 pg或 1500 pg孕甾烧- 2,3,6-三醇。 在某些實施例中，米糠萃取物每1 00 mg萃取物包含約 100 pg、200 pg、300 pg、400 pg、500 pg、600 pg、700 pg 、 800 pg 、 900 pg 、 1000 pg 、 1100 pg 、 1200 pg 、 1300 pg、1400 pg、1500 pg、1600 μg ' 1700 pg、1800 pg、 1900 pg 、 2000 pg 、 2100 pg 、 2200 pg 、 2300 pg 、 2400 pg 或2500 pg 5-(8-十七烯基）二氫-3-羥基-2(3H)-呋喃酮。 在某些實施例中，米糠萃取物每1 00 mg萃取物包含約 100 pg、200 pg、300 pg、400 pg、500 pg、600 pg、700 pg、800 pg、900 pg、1000 pg、1100 pg、1200 pg、13 00 pg、1400 pg或 1500 pg 24-降-4(23),9(11)-菲那啶。 在某些實施例中，米糠萃取物每100 mg萃取物包含約10 pg、20 pg、30 pg、40 pg、50 pg、60 pg、70 pg、80 pg 、 90 pg 、 100 pg ' 200 pg 、 300 pg 、 400 pg 、 500 pg 、 600 pg、700 pg、800 pg、900 pg、1000 pg、1100 pg、 1200 pg、13 00 pg、1400 pg、15 00 pg、200 pg、2500 pg 或3 000 pg 24-降-12-烏蘇烯。 在某些實施例中，米糠萃取物每1 00 mg萃取物包含約 100 μ§ ' 200 pg 、 300 pg 、 400 pg 、 500 pg 、 600 pg 、 700 pg、800 pg、900 pg、1000 pg、1100 pg、1200 pg、13 00 140501.doc -38- 201002337 pg、1400 pg、1500 pg、1600 pg、1700 pg、1800 pg、 1900 pg 或 2000 pg 11,13(18)-齊燉果二烯。 在某些實施例中，米糠萃取物每1 00 mg萃取物包含約 100 pg 、 200 pg 、 300 pg 、 400 pg 、 500 pg 、 600 pg 、 700 μg、800 μg、900 μg或 1000 μgl4-曱基-9，19-環麥角-24 (28)-烯-3-醇。 在某些實施例中，米糠萃取物每1 00 mg萃取物包含約 100 pg 、 200 pg 、 300 pg 、 400 pg 、 500 pg 、 600 pg 、 700 pg、800 、900 pg、1000 、1100 pg、1200 、1300 pg、1400 pg、1500 pg、1600 pg、1700 pg、1800 pg、 1900 pg、2000 pg、2100 pg、2200 、2300 、2400 pg、25 00 pg孟特克驗。 在某些實施例中，米糠萃取物每100 mg萃取物包含約10 pg、20 pg、30 pg、40 pg、50 pg、60 pg、70 pg、80 pg、90 pg、100 pg、200 pg、300 pg、400 jig、500 pg、 600 pg、700 pg、800 pg、900 pg、1000 pg、1100 pg、 1200 pg、13 00 pg、1400 pg、15 00 pg、1600 pg、1700 pg、1800 pg、1900 pg、2000 pg、2100 pg、2200 pg、 2300 pg、2400 pg、2500 gg 3-(3,4-二羥苯基）-2-丙烯酸三 十酉旨。 在某些實施例中，米糠萃取物每100 mg萃取物包含約10 pg、20 pg、30 pg、40 pg、50 pg、60 pg、70 pg、80 pg、90 pg、100 pg、200 pg、300 pg、400 pg、500 pg、 600 pg、700 pg、800 pg、900 pg、1000 pg、1100 pg、 140501.doc -39- 201002337 1200 gg、1300 、1400 叫、15〇〇 问、16〇〇 、17〇〇 gg、1800 pg、Β00 、2〇〇〇 叩、21〇〇 叫、22〇〇 叩、 2300 gg、2400 、2500 蠢砂酮。 在某些實施例中’米糠萃取物每1〇〇 mg萃取物包含約10 gg、20 、30 pg、40 、5〇 阳、6〇 问、7〇 、8〇 μβ、90 、1〇〇 阳、2〇〇 叫、3〇〇 ㈣、4〇〇 阳、5〇〇 ㈣、 600 gg、700 、800 、900 、1〇〇〇 、11〇〇 、 1200 pg、1300 pg、1400 gg、15〇〇 叫、16〇〇 畔、17〇〇 pg、1800 μδ、1900 或 2000 ι，2-二 _(9Ζ，12Ζ-十八石炭二 烤酸）甘油酯。 在某些貫施例中’本發明係關於一種諸如前述萃取物中 任一者之米糠萃取物，其具有包含圖1至圖14中任一者之 直接即時分析（DART)質譜層析圖的部分。 在某些實施例中’米糠萃取物之葡萄糖攝取刺激大於 200 nM胰島素之葡萄糖攝取刺激。在某些實施例中，該萃 取物之葡萄糖攝取刺激比200 nM胰島素之葡萄糖攝取刺激 大0.5倍至5倍。在某些實施例中，該萃取物之葡萄糖攝取 刺激比200 nM胰島素之葡萄糖攝取刺激大〇.5倍至3 5倍。 在某些實施例中’該萃取物之葡萄糖攝取刺激比2〇〇 nM胰 島素之葡萄糖攝取刺激大〇.7倍至3 1倍。在其他實施例 中’該萃取物之葡萄糖攝取刺激比2〇〇 nM胰島素之葡萄糖 攝取刺激大3倍以上。在其他實施例中，該萃取物之葡萄 糖攝取刺激比2〇〇 nM胰島素之葡萄糖攝取刺激大約3倍。 在另一貫施例中’萃取物的葡萄糖攝取刺激大於對照物 140501.doc -40- 201002337 的葡萄糖攝取刺激。在某些實施例中，該萃取物之葡萄糖 攝取刺激比對照物之葡萄糖攝取刺激大1倍以上。在其他 貫施例中，該萃取物之葡萄糖攝取刺激比對照物之葡萄糖 攝取刺激大1倍至10倍。在其他實施例中，該萃取物之葡 萄糖攝取刺激比對照物之葡萄糖攝取刺激大2倍至7倍。在 其他實施例中’該萃取物之葡萄糖攝取刺激比對照物之葡 萄糖攝取刺激大約6倍。 在某些實施例中’該萃取物具有1 〇〇計數/分鐘至3〇〇〇計 數/分鐘（cpm)之葡萄糖攝取刺激。在其他實施例中，該萃 取物具有100 cpm至1000 cpm之葡萄糖攝取刺激。在某些 實施例中，該萃取物之濃度為5 pg/mL至2000 pg/mL，且 該葡萄糖攝取刺激為100 cpm至3000 cpm或1 00 cpm至1000 cpm。在其他實施例中’該萃取物之濃度為1〇 μ§/ηι]：至 1000 pg/mL。在其他實施例中，該萃取物之濃度為1〇 pg/mL、50 pg/mL、250 pg/mL或 1000 pg/mL。 在某些實施例中，米糠萃取物具有小於2000 pg/mL之 FABP4抑制的IC5〇值。在其他實施例中，該FABP4抑制的 IC5〇值為 25 pg/mL至 2000 pg/mL、25 pg/mL至 1000 pg/mL，或 25 gg/mL至5 00 pg/rnL。在某些實施例中，該FABP4抑制 的IC50值為100 pg/mL至1000 gg/mL。在其他實施例中，該 FABP4 抑制的 IC50 值為約 100 pg/mL、200 pg/mL、300 pg/mL、400 pg/mL、500 pg/mL、600 pg/mL、700 pg/mL、800 pg/mL、900 pg/mL或 1000 pg/mL。 140501.doc -41- 201002337 本电明之另一態樣係關於一種米糠萃取物，其係由包含 以下步驟之方法製備： a) 提供穩定之米糠原料；及 b) 萃取該原料。 在某些實施例中’萃取步驟為含水乙醇萃取，而在其他 貝轭例中，萃取步驟為超臨界二氧化碳萃取。在某些實施 例中’含水乙醇為約丨0〇/〇至99%乙醇。在其他實施例中， 含水乙酵為約20%至9〇〇/。乙醇◦在其他實施例中，含水乙 醇為約 20%、30%、40%、50〇/〇、60%、70%、80%或 90% 乙 醇。在其他實施例中，含水乙醇為約4〇%至8〇%乙醇。在 某些實施例中’含水乙醇萃取係在約2〇°c至8〇。〇之溫度下 進行。在其他實施例中，該萃取係在約3〇°c至7〇°c之溫度 下進行。在其他實施例中，該溫度為約4〇°C至601：。在其 他實施例中，該溫度為約3(TC、40。(：、50°C、60X：或 70。(：。 在某些實施例中，該超臨界二氧化碳萃取係在約20°C至 100°C之溫度下進行。在其他實施例中，該溫度為約30°C 至90°c，或40°c至80°C。在其他實施例中，該溫度為約 40°C、50°C、60°C、70°C或8(TC。在某些實施例中，超臨 界二氧化碳萃取之壓力為約200巴至800巴。在其他實施例 中，壓力為約200巴至600巴。在其他實施例中，壓力為約 3 00巴至500巴。在某些實施例中’壓力為約300巴、400巴 或500巴。 醫藥組合物 140501.doc -42 - 201002337 在本發明之某些態樣中，提供包含前述化合物中之任— 者及至少一種醫樂學上可接受之載劑的醫藥調配物。 本揭示案之組合物包含呈諸如她业 主渚如糊狀、粉末、油狀'液 體、懸浮液、溶液、軟膏形式或其他形式的穩定之米糖萃 取物，其包含將用作食物增補劑、營養藥物或可用於預防 或治療各種人類病痛之該等其他製劑的一或多種部分或子 部分。可加工萃取物以製成該等可消耗品，例如：藉由將

其混合成呈膠囊或錠劑的食品產品；或藉由提供本身件用 作食物增補劑之糊狀物，適當時添加甜味劑或調味劑。因 此，該等製劑可包括（但不限於）呈錠劑、膠囊、口含劑、液 體、乳液、可流動乾粉及速溶鍵劑形式的用於口服遞送之 米糠萃取物製劑。根據本文中所描述之抗過敏活性，可期 待患者將受益於處於約50 mg至約1〇〇〇 mg範圍内之每曰劑 量。例如，可每日一次或兩次將包含約5〇 mg、55 mg、6〇 mg、65 mg、70 mg、75 mg、8〇 mg、85 叫、9〇 叫、％ mg、10G mg、105 mg、lio mg、115 mg、12G mg、125 mg、130 mg、135 mg、14〇 mg、145 mg、15〇 叫、i6〇 mg ' 170 mg > 180 mg ^ 190 mg > 200 mg ^ 210 mg > 220 mg、230 mg、240 mg或25〇 mg萃取物的口含劑投予個體 作為預防。或者，回應於嚴重過敏性反應，可能每4小時 至6小時即需要兩個口含劑。 在一實施例中’使用高剪切混合器將乾燥之萃取米糠組 合物與諸如（但不限於）水或乙醇之適合溶劑以及適合之食 品級材料混合’且接著使用習知方法進行噴霧風乾以產生 140501.doc •43· 201002337 具有極細米糠萃取物 末。 R °。級载劑相組合之顆粒的粉 在-特定實例中，使用高剪切混 物與約其兩倍重量之食品級载Ύ切卒取物組合 至約1 50微米之間的夹穿 — 边度介於丨00微米 惰性載劑(諸如二氧化矽 ；1混&。可添加 之平均粒度）以改良彤成 ......1微米至約50微米 — 成之最終粉末的流動。較佳地，1 寺添加物至多為該混合物之2重量％。“ 較佳為形成具有適合於 乙酵的$ 於噴務風乾法之黏度的溶液所需之芒 小值。常用量係處於每公斤萃取 ④之最 卡取材科約5公升至約1〇公弁 之間的範圍内。萃取物、麥芽糖糊精及乙醇之溶 風乾以產生具有嫂美於初始载劑材料之平均粒度的粉末 在另一實施例中’將萃取物與諸如碳酸鎂、乳清蛋白或 麥芽糖糊精之食品級載劑乾混，接著在含有適合之溶劑 (諸，水或乙醇)的高剪切混合器中混合。接著，經由冷二 乾燥或折射窗乾燥將該混合物乾燥。在一特定實例中:將 卒取物材料與以該萃取物之重量計約丨·5倍的食品級材料 組合，諸如具有約20微米至2〇〇微米之平均粒度的碳酸 鎂。可較佳以至多為混合物2重量％之量添加惰性載劑（諸 如具有約1微米至約50微米之粒度的二氧化矽），從而改良 該混合物之流動。接著，在於1〇〇 rpm下操作之類似於食 品加工機型混合器的高速混合器中乾混碳酸鎂舆二氧化 石夕。接著，加熱該萃取物直至其呈重油狀流動。較佳地， 將其加熱至約5 0 °C。接著’將加熱之萃取物添加至在高剪 140501.doc -44- 201002337 :混合器中進行混合的碳酸鎂與二氧㈣粉末混合物。該 混:較佳繼續進行直至粒度處於約㈣微米至約旧米之間 、々圍内將每公斤萃取物約2公升至約⑺公升之間的冷 水（較佳處於約代）引人高剪切混合器中。將萃取物、碳酸 鎮及二之混合物緩慢或增量地引入高剪切混合器 '5 了此α。舄要時亦可將諸如羧甲基纖維素或印礙脂 之礼化為加至該混合物。需要時亦可在此階段以至多約 5重量〇/。添加諸如三氯半乳嚴糖或安賽蜜（八⑽训證以 甜未:1《者’可替代特定甜味劑或連同特定甜味劑而添 筠（tevia rebaudiana)之萃取物（極具甜味之食物增補 劑）(為簡單起見，甜菊在本文中將簡稱為甜味劑）。混合完 成之後’使用束乾或折射窗乾燥來乾燥該混合物。所得的 萃取物、碳酸鎂、二氧化石夕及可選乳化劑以及可選甜味劑 之可抓動乾粉具有料於初始載劑及預定萃取物的平均粒 度。 根據另-實施例，萃取物係與約相等重量之食品級載劑 (諸如乳清蛋白)組合’該載劑較佳具有介於約2〇〇微米至約 1000微米之間的粒度。可添加惰性載劑（諸如粒度介於約i 微米至約50微米之間的二氧化秒，或粒度介於約1〇微米至 約10 0微米之間的羧甲基纖維素)以改良該混合物之流勤。 惰性載劑添加量較佳為不超過該混合物之約2重量。A。接 著，在以超過100 rpm操作之食品加工機型混合器中乾混 乳清蛋白及情性成份。可加熱萃取物直至其呈重油狀流： (較佳加熱至約50。〇。接著，將加熱之萃取物增量添加至 14050I.doc -45- 201002337 在食品加工機型混合器中進行混合之乳清蛋白及惰性載 劑。萃取物與乳清蛋白及惰性載劑之混合繼續進行，直至 粒度處於約250微米至約i毫米之範圍内。接下來，將每公 =狀混合物2公升至10公升之冷水（較佳處於約4。〇引二 高勢切混合器中。將萃取物、乳清蛋白及惰性載劑之混合 物增量引入含有冷水之高剪切混合器中，同時混合。需要 時可在此階段添加至多約5重量％之甜味劑或其他口味添 混合完成之後，使料乾或折射窗乾燥來乾燥該混 “勿。所得的萃取物、乳清蛋白、惰性载劑及可選甜味劑 之^流動乾粉具有約⑼微米至約彻微米之粒度及獨特的 預疋之萃取物。 在如美國專利5 298,261中所;^ 速容錄句由— 中所心途的將卒取物包括於口服 物，/ 貫施例中’可「淨（咖）」使料獨特萃取 後添加之任何其他組分。=迷，在成:定過程中並無梢 用於製造^丨 /避免了將卒取物引入接著 用於k錠劑之可流動乾粉中的必要性。 -旦獲得萃取物乾粉(藉由 將其分配伊使用社 〃 h这之方法），即可 途。在—二V: 食物增補劑或用於其他用 合以形成可新賴萃取物粉末與其他成分混 醉與水之溶劑或其他適合之溶劑以 ：：包… 醇⑽/ 咖―）的量濕潤成錠粉末。^之 知包括（但不限於）乙醇、異 適口之 及含丙酮之變性乙醇。接著性乙醇、 將所传糊狀物壓入錠 140501.doc -46- 201002337 劑模中。可使用如美國專利第5,407,339號中所描述之自動 化錠劑成形系統。接著，可自該模移除錠劑及乾燥，較佳 在足夠高溫下（通常介於約7(TC至約85。(：之間），藉由風乾 法乾燥至少若干小時，以除去用以濕潤成錠粉末混合物之 溶劑。接著，可將經乾燥之錠劑包裝供分配。 組合物可呈糊狀物、樹脂、油、粉末或液體形式。供口 服投藥之液體製劑可呈（例如）溶液、糖漿或懸浮液之形 n 式，或者其可作為用於在投藥之前以水或其他適合之媒劑 復原之乾產物而存在。可藉由習知方法製備具有醫藥學上 可接受之添加劑的液體製劑，添加劑諸如：懸浮劑（例 如，山梨糖酵糖漿、子基纖維素或氫化食用脂肪）；乳化 劑（例如，卵磷脂或阿拉伯膠）；無水媒劑（例如，杏仁油、 油性酯或乙醇）；防腐劑（例如，對_羥基苯甲酸甲酯或對· 羥基苯甲酸丙酯，或者山梨酸）；及人造或天然色彩及/或 甜味劑。液體製劑之組合物可於熟習此項技術者已知之醫 〇 藥載劑中投予人類或動物。醫藥載劑包括（但不限於）膠 囊、口含劑、糖漿、噴霧、淋洗劑及嗷口液。 可根據本文中所揭示之方法及熟習此項技術者已知之其 他方法製備乾粉組合物，諸如（但不限於）喷霧風乾法、凍 乾法、真空乾燥及折射窗乾燥。組合之乾粉組合物可併入 醫藥載劑中，諸如（但不限於）錠劑或膠囊；或者在諸如茶 之飲料中復原。 所描述之萃取物可與其他植物之萃取物組合，諸如（但 不限於）各種武^葉（Gymnemia)、薑黃、乳香樹 140501.doc -47· 201002337 (Boswelha)、瓜拉那（Guarana)、櫻桃、葛莖、紫花馬蘭菊 (Echinacea)、委葉、檳榔（jreca⑺^仏“）、巴西榥榥木 (Mmra puama)、薑、柳樹、巴西人蔘（suma)、卡法樹 (kava)、角質山羊草、銀杏、瑪黛茶0价）、大蒜蒺 藜、紅斤、天（arctic root)、黃芪（Astragalus)、杜仲、 gastropoda，及鉤藤，或者醫藥藥劑或營養藥劑。 可猎由添加約1重量％至4 〇重量％粉末狀萃取物以及介於 30重里/〇至約8〇重量％之間的乾燥水分散性吸收劑（諸如但 不限於礼糖）來形成成錠粉末。亦可將其他乾燥添加劑添 加至成錠粉末，諸如但不限於一或多種甜味劑、調味劑及 /或著色剡、諸如阿拉伯膠或阿拉伯樹膠之黏合劑、潤滑 劑、崩解劑及緩衝劑。將乾燥成分過篩至粒度介於約50目 至約150目之間。較佳地，將乾燥成分過篩至粒度介於約 8 0目至約1 〇 〇目之間。 較佳地，錠劑在口腔中展現快速溶解或 為句貝、.且σ物，其在口腔中快速溶解或崩解以在約2秒 者小於6〇秒或60秒以上、較佳約3秒至約45秒且最佳介 '勺5心至、力1 5秒之間的時段内釋放出萃取物内含物。 可使用此項技*中已知之各種速溶錠劑調配物。代表 調配物揭示於（例如）美國專利第 '佩奶號、第Μ%,! \ 第，21,392 號 '第 5,298,261 號及第 6,200,604 號中 各專利之全部内容明確地以引用之方式併入本文中。 如’美國專利第5,298,261號教示—種;東乾法。此方法涉 使用冷殊及接著在真空下乾燥以藉由昇華除去水。 I40501.doc •48- 201002337 分包括以介於ο·，.5%之間的量添加的經乙基纖維素， 諸如來自HercuIes Chemical〜师卿之咖―。其他組 刀巴括"於1 /〇至5 /〇之間的麥芽糖糊精，m_5〇〇)。 將此等罝於水中溶液化且用作初始混合物，向該混合物添 . 加綠萃取組合物，以及調味劑（諸如三氯半乳蔬糖或安 . 賽雀、之甜味劑）及礼化劑（諸如綠豆萃取物BeFlora及

BeFloraPlus)。尤佳成錠組合物或粉末含有約【㈣至6〇%之 Π. 萃取物粉末及約30%至約60%之水溶性稀釋劑。 ' 纟-較佳實施中’藉由將如以上描述之各種組分(例 如，活性成分（萃取物）、稀釋劑、甜味添加劑及調味劑等） 混合成乾粉形式來製備成錠粉末。可添加在約ι〇%至約 15〇=範圍内的過量之活性萃取物以補償隨後錠劑加工朗間 的損失接著，藉由篩子以較佳處於約80目至約1 〇〇目範 圍内之目長將該混合物過_以保證大體上均勻的粒子組 成。 〇 錠劑可具有任何所要大小、形狀、重量或密實度。在單 一口服劑量中呈可流動乾粉形式之萃取物的總重量通常處 於約40 至約1000 mg範圍内。錠劑意欲在口中溶解且因 此不應具有有助於呑咽鍵劑之形狀。鍵劑越大，意外吞儀 . 之可能性越小，但其溶解或崩解所耗之時間越長。在校佳 形式中，錠劑為具有約〇_15对至約〇·5吋之直徑及約〇〇8时 至約〇·2吋之厚度，且重量介於約160 mg至約丨，500 mg之間 的圓或圓片。除圓盤、圓片或硬幣形狀以外，鍵劑可呈 圓柱、球形、立方體形式或其他形狀。 140501.doc •49· 201002337 獨特萃取物組合拍j夕人』二I 物之組合物亦可以每劑量介於約10 mg 與約2000 mg之間的量包含萃取物組合物 本么明之另-態樣係關於一種刺激葡萄糖攝取之方法， 該方法包含向有需要之個體浐 '’ 1口肢扠予有效量之任何前述米糠其 取物或醫藥組合物。 个 ;本發明之另一態樣係關於一種抑制FABP4結合之方法， 該方法包含向有需要之個體 " 仅于有效里之任何丽述米糠萃 取物或醫藥組合物。在草此麻 隹杲二Λ靶例中，個體患有高血糖 症。在其他實施例中，個體* IUI to心有糖尿病。在其他實施例 中’個體患有1型糖尿广丙；而在其他實施例中，個體电有2 型糖尿病。在其他實施例中，個體患有肥胖及相關之 失調。 在某些實施例中，個體為諸如靈長類之哺乳動物，例如 人類。 例示 方法 A.穩定之米糠原料 穩定之米糠（SRB)係由Nutracea Inc·，說供應且在室溫 下儲存。在使料料14()目_子（⑽㈣將咖過筛。 Β·製備穩定之米糠萃取物 1.溶劑萃取 在具有150 mL用於植物材料之有機溶劑的燒瓶中萃取1〇 g SRB。使用不同濃度的乙醇於水中之溶劑，如水、 140501.doc >50- 201002337 20%(v/v)乙醇、40%乙醇、60%乙醇，以及80%乙醇及 100%乙醇。在20°c至6〇。〇之溫度下以兩個2小時之階段進 行萃取。藉由微孔大小為4_8 pm之Fisher P4慮紙過濾組合 之萃取物’且在2000 rpm下離心2〇分鐘。收集上層清液且 .在50°C下於真空烘箱中蒸乾隔夜。 2 ·超臨界二氧化碳萃取 使用針對分別為至多690巴及200°C之壓力及溫度而設計 ζ\ 之 SFT 250(Supercritical Fluid Technologies, Inc” Newark, DE)進行超臨界二氧化碳（scc〇)萃取實驗。該裝置由三個 杈組組成：烘箱、泵及控制器，及收集模組。泵模組裝備 有具有300 mL min-i之恆定流量的壓縮氣動泵，而收集模 組為用於回收萃取產物的以蓋子及隔膜密封之4〇 mL玻璃 瓶。監視萃取容器壓力及溫度，且控制在土3巴及土rc内。 將目長大於105 μιη(使用14〇目篩子量測）之3〇 g SRB粉 末樣本裝入100 mL萃取容器中以進行各實驗。將玻璃絨置 〇 於官柱之兩端以避免任何可能騰帶之固體材料。將烘箱預 熱至所要溫度，接著將包裝之容器裝入。封閉該系統，且 使用氣動液體泵加壓至所要萃取壓力並平衡約3 min。將 取樣小瓶（40社)稱$且連接至取樣口。藉由使叫以㈣ • sLPM(19 g/min)之速率流動開始萃b產钱義為總萃取 物與饋入原料之重量比。產率定義為萃取的油相對於萃取 器中原料之初始裝料的重量百分數。採用完全因子萃取設 計，溫度自40t至80t變化且壓力自8〇巴至5〇〇巴變化。 C.萃取物之DARTTOF-MS表徵 14050 丨.doc -51 - 201002337 將 Jeol DART AccuTOF-MS(JMS-T100LC 型；Jeol USA, Peabody, MA)用於SRB萃取物中之化合物的化學表徵。載 入如下DART設定：DART針電壓=3000 V ;電極1電壓=150 V ;電極2電壓=250 V ;溫度=250°C ; He流動速率=2.52 LPM。載入以下AccuTOF質譜儀設定：環形鏡頭電壓=5 V ;採樣孔1電壓=1 0 V ;採樣孔2電壓=5 V ;峰電壓=1000 V(用於介於100-1000 amu之間的解析度）；關閉採樣孔1之 溫度。藉由將矽酸硼玻璃毛細管之封閉端置於SRB萃取物 中來引入樣本，且將經塗布之毛細管置於DipIT™樣本夾 中，從而提供用於在He電漿中進行離子化的均勻且恆定之 表面暴露。使SRB萃取物保持在He電漿流中直至在總離子 層析圖（TIC)中觀察到信號。移除樣本，且在引入下一樣 本之前使TIC下降至基線水準。將聚乙二醇600(Ultra Chemicals, Kingston, RI)用作内校準標準物，其具有遍布 所要範圍100-1000 amu的質量峰。對照專屬化學物質資料 庫搜尋各SRB萃取物之DART質譜並用於鑑定萃取物中存 在的許多化合物。搜尋條件始終為[M+H] +離子處於計算質 量之1 0 mmu内。以大於90%之置信度報導鑑定之化合物。 分別在圖1至圖14中展示萃取物1至萃取物14之DART質 譜，X轴顯示質量分配（1 00-1 000 m/z [M+H+])，而y軸顯示 所偵測之各化學物質的相對豐度。 D.葡萄糖攝取 1_ [[1,2-3H】2-去氧-D-葡萄糖（2-去氧葡萄糖）攝取：如以 下所描述生長及分化細胞，3T3-L脂肪細胞。在[3H]2-去氧 140501.doc -52- 201002337 葡萄糖攝取之前，將細胞轉移至具有ο · 1 %牛血清白蛋白之 DMEM，歷時6 h。如所描述檢定[3η]2-去氧葡萄糖攝取（D. R. Cooper, J. E. Watson, N. Patel, P. Illingworth, M. Cevedo-Duncan，J. Goodnight, C. E. Chalfant及 H. Mischak, 1999. Ectopic expression of protein kinase Cbetall, -delta, and -epsilon, but not -betal or -zeta, provide for insulin stimulation of glucose uptake in NIH-3T3 cells. Arch. Biochem. Biophys., 372:69-79 ； T. P Ciraldi, O. G. Kolterman 及 J. M. Olesky, 1981. Mechanism of the postreceptor defect in insulin action in human obesity: decrease in glucose transport system activity. J. Clin /ηναΛ，68:875-880)。以具有1%牛血清白蛋白（BSA)的 Dulbecco之磷酸鹽缓衝鹽水（DPBS)預培養細胞1〇 min，添 加胰島素（1-100 nM)或媒劑DPBS+BSA，且在37°C下再培 養細胞20 min。藉由添加10 nmol [3H]2-去氧葡萄糖（5〇_ 15〇 μα/μιη〇1)且接著在37°C下培養6 min來量測攝取。藉 由吸出培養基終止攝取，且以冷DPB S洗務細胞單層3次。 以1 ml l%(w/v)SDS溶解細胞，且藉由液體閃爍計數測定 放射性。2-去氧葡萄糖攝取係指將類似物轉運過質膜，同 時藉由己糖激酶將其磷酸化。 2· 3-0-[曱基-14c]葡萄糖攝取：針對3-0-曱基葡萄糖攝 取’在添加有胰島素（10 nM)的轉運緩衝液中預培養細胞 30 min ’接著添加32 μΜ 3-0-[甲基，c]葡萄糖⑼ mCi/mmol)歷時〇.5 min或1 min，且如所描述而終止（只尺 14050丨.doc -53- 201002337

Whitesell 及 j. Gliemann, 1979. Kinetic parameters of transport of 3-〇-methylglucose and glucose in adipocytes. /· 5ζ·ο/· 254:5276-5283)。對照研究指示，在此等條 件下3-0-甲基葡萄糖攝取在攝取之第一分鐘期間為線性 的。 3.細胞遲緩素b抑制檢定：使用Estenser^Plagemanri之 方法δ平估可能影響葡萄糖攝取之SRB萃取物對細胞支架活 性的可能影響（R. D. Estensen 及 P. G. W. Plagemann, 1972. Cytochalasin B: Inhibition of glucose and glucosamine transport. Proc. A^"·5W. USA 69:1430-1434)。 E.受體及轉運體表現研究 1.騰島素受體表現：使用西方墨點分析法（Western blot analysis)檢查萃取物之胰島素受體、GLUT4移位體的表現 (D. R. Cooper, J. E. Watson, N. Patel, P. Illingworth, M. Cevedo-Duncan, J. Goodnight，C. E. Chalfant及 H. Mischak, 2001. Ectopic expression of protein kinase Cbetall, -delta, and -epsilon, but not -betal or -zeta, provide for insulin stimulation of glucose uptake in NIH-3T3 cells. Arch. Biochem. Biophys., 372:69-79 ； C. E. Chalfant, S. Orrno, Y. Konno, A. A. Fisher，L. D. Bisnauth，J. E. Watson及 D. R. Cooper, 1996. A carboxy-terminal deletion mutant of protein kinase C beta II inhibits insulin-stimulated 2-deoxyglucose uptake in L6 rat skeletal muscle cells. Mol. Endocrinol, 10:1273-1281 I N. A. Patel, C. E. Chalfant, J. 140501.doc -54- 201002337 E. Watson，J. R. Wyatt，Ν· M. Dean, D. C. Eichler及 D. R_ Cooper, 2001. Insulin regulates alternative splicing of protein kinase C beta II through a phosphatidylinositol 3-kinase-dependent pathway involving the nuclear serine/arginine-rich splicing factor, SRp40, in skeletal muscle cells. J. B/o/. C/zem., 276:22648-22654)、IRS-1 活性 及PI-3激酶/AKT活性。 2. IRS-1及AKT之磷酸化狀態：如Patel等人所描述測定 f、 IRS-1 及 AKT 之磷酸化狀態（N.A.Patel,C.E.Chalfant,J· E. Watson，J. R. Wyatt, N. M. .Dean, D. C· Eichler及 D. R· Cooper, 2001. Insulin regulates alternative splicing of protein kinase C beta II through a phosphatidylinositol 3-kinase-dependent pathway involving the nuclear serine/arginine-rich splicing factor, SRp40, in skeletal muscle cells. J. 厂 C/zem.，276:22648-22654) ° Q 3. GLUT4自ER至細胞表面之位移：使用具有螢光標記 之GLUT4抗體藉由螢光顯微術評定GLUT4自ER至質膜之 位移。 F. Zucker大鼠肥胖模型 ' 設計研究以檢查SRB萃取物CR是否降低Zucker胖鼠模型 中之高血糖及2型糖尿病之其他態樣，以Zucker瘦鼠充當 對照。Zucker胖鼠為高血糖型且視為2型非胰島素依賴型 糖尿病（NIDDM)之良好齧齒類模型。Zucker胖鼠及Zueker 瘦鼠均為8週齡’葡萄糖耐受不良。Zucker痩鼠並未成為 140501.doc -55- 201002337 高血糖型，但達到32週齡時為胰島素過度分泌。所有 Zucker胖鼠在8週齡時均成為高血糖型。 使用Zucker胖鼠、Zucker痩鼠及F344大鼠。開始使10隻 Zucker胖鼠、Zucker痩鼠或F344大鼠之群組食用對照膳食 或CR膳食，且進行2個月或4個月。根據制度準則 (Institutional Guidelines)，將該等動物圈養及維持在 USFCOM(Tampa，Florida)的充分認證之AAALAC動物設施 中。動物處置經實驗動物醫學倫理學委員會（USFCOM)批 准。如LAMEC所批准及批准之IACUC中所界定以戊巴比 妥鈉進行安樂死。 動物在10週齡時進入研究，且以正常齧齒類食物餵養並 隨意飲用自來水。在投予萃取物4週之後監視大鼠的葡萄 糖及胰島素水準，且向大鼠給與葡萄糖及胰島素激發以檢 查葡萄糖而ί受性及胰島素而ί受性之變化。此外，在實驗結 束時，評定來自大鼠之分離組織中的脂肪細胞之細胞信號 轉運機制。收集各安樂死之大鼠的胰臟並進行處理以供光 學顯微鏡（LM)分析及電子顯微鏡（ΕΜ)分析。以4%聚甲醛 /PBS固定用於LM之組織，加工至石蠟中，且以Η&Ε染色 以供進行常規組織學/病理學分析。某些石蠟載片以DTZ染 色以鑑定β-細胞，且某些以ApoTag染色以測定胰島細胞之 細胞凋亡。進行β-細胞及細胞凋亡之雙標記免疫染色以偵 測β-細胞破壞。以5%(ν/ν)戊二醛固定用於ΕΜ之組織且常 規地加工至塑膠樹脂中。較厚區段以曱苯胺藍染色（光學 顯微術）且較薄區段以UA/LC染色（電子顯微術）。 140501.doc -56- 201002337 ㈣產虎·在研究開始時，將所有大鼠稱重，且記錄藉 由Freestyle血糖儀及測試片由尾部靜脈血測定之非禁食 血糖。每日，觀察所有大鼠全身狀況之任何可見變化，、^ 藉由FreeStyleTM系統㈣非禁食▲糖濃度。每週，將所有 - =鼠稱重且監視進食量。開始CR治療之後每2週在於代謝 蘢中24 h之後測定尿糖及胰島素水準。記錄全身狀況、體 重、血糖派度及尿糖濃度，以及每月尿胰島素濃度。每隔 〇 兩週進行葡糖耐量測試及胰島素耐量測試。 G. FABP4抑制研究 使用脂肪酸結合蛋白4(FABP4)抑制劑/配位體篩檢套組 (Cayman，Ann Arbor，MI)測定脂肪酸結合蛋白4(FABp㈠抑 制。該檢定使用96孔培養盤格式，其包括正性及負性對照 物、標準物（花生油酸）之系列稀釋，及接收偵測試劑（偵測 孔）或不接收偵測試劑（未偵測孔）之萃取物。在室溫下於檢 定緩衝液中培養FABP4蛋白之可能抑制劑/配位體，歷時15 ϋ 分鐘。花生油酸係用作供比較之已知抑制劑標準物。正性 對照孔不接收抑制劑/配位體（亦即，無花生油酸或萃取物） • 且負性對照孔不接收FABp4。接著，將於溶液中之萃取物 暴路至當結合至FABP4時將發出螢光的顯影劑。若FABp4 f抑制’則觀察到螢光產量減少。使用調請成分別為37〇 nm及475 nm的激發/發射波長的Synergy 4培養盤讀數器將 螢光量化。負性對照之螢光係自正性對照孔減去，且來自 「未偵測」孔之螢光係自對應「偵測」孔減去。基於經校 正之萃取物孔相對於經校正之正性對照的螢光百分比確定 140501.doc •57- 201002337 ic50 值。 結果 A.葡萄糖攝取 表1匯總了在存在不同濃度之SRB萃取物1-10的情況下， 3T3-L1細胞中[1,2-3H]2-去氧-D-葡萄糖（2-去氧葡萄糖）攝取 之劑量相依之攝取，及在存在不同濃度之萃取物11-15的 情況下3T3-L1細胞中3-0-曱基葡萄糖之劑量相依之攝取。 表1.在存在不同水準SRB萃取物1-10的情況下3T3-L1細 胞中[1,2-3H]2-去氧-D-葡萄糖（2-去氧葡萄糖）攝取之劑量相 依攝取，及在存在不同水準之萃取物11 -1 5的情況下3T3-L1細胞中3-0-甲基葡萄糖之劑量相依攝取（呈現為最大 cpm) ° 萃取物 萃取物 ㈣ mL-1) CPM 萃取物 萃取物 (μδ mL !) CPM 萃取物 萃取物 (Hg mL'1) CPM 對照物 131 萃取物5 10 139 萃取物10 10 177 騰島素 (50 nM) 149 萃取物5 50 169 萃取物10 50 208 膜島素 (100 nM) 157 萃取物5 250 202 萃取物10 250 196 騰島素 (200 nM) 266 萃取物5 1000 808 萃取物10 1000 286 萃取物1 10 158 萃取物6 10 142 萃取物11 50 252 萃取物1 50 175 萃取物6 50 295 萃取物11 250 227 萃取物1 250 156 萃取物6 250 499 萃取物11 1000 380 萃取物1 1000 157 萃取物6 1000 825 萃取物11 2000 1379 萃取物2 10 167 萃取物7 10 128 萃取物12 50 277 萃取物2 50 159 萃取物7 50 143 萃取物13 250 291 140501.doc •58· 201002337 萃取物2 250 199 萃取物7 250 136 萃取物13 1000 213 萃取物2 1000 140 萃取物7 1000 455 萃取物13 2000 502 萃取物3 10 236 萃取物8 10 203 萃取物14 50 217 萃取物3 50 220 萃取物8 50 185 萃取物14 250 270 萃取物3 250 200 萃取物8 250 165 萃取物14 1000 1263 萃取物3 1000 230 萃取物8 1000 765 萃取物14 2000 512 萃取物4 10 167 萃取物9 10 163 萃取物15 50 196 萃取物4 50 162 萃取物9 50 172 萃取物15 250 232 萃取物4 250 145 萃取物9 250 213 萃取物15 1000 274 萃取物4 1000 148 萃取物9 1000 332 萃取物15 2000 615

表2匯總在存在SRB萃取物1-10的情況下3T3-L1細胞中 [1,2-3H]2-去氧-D-葡萄糖（2-去氧葡萄糖）攝取之劑量相依攝 取，及在存在萃取物11-14的情況下3T3-L1細胞中3-0-曱 基葡萄糖之劑量相依攝取。表2顯示資料顯示為超過對照 物及200 nM胰島素之增量（刺激）。 表2.在存在SRB萃取物1-10的情況下3T3-L1細胞中[1,2-3H] 2-去氧-D-葡萄糖（2-去氧葡萄糖）攝取之劑量相依攝取，及 在存在萃取物11-14的情況下3T3-L1細胞中3-0-曱基葡萄 糖之劑量相依攝取（呈現為最大cpm)。資料顯示超過對照 物及200 nM胰島素之增量（刺激）。

樣本 最大CPM 超過對照物 之增量 超過200 nM 胰島素之增量 對照物 131 NA 0.5 50 nM胰島素 149 1.1 0.6 100 nM胰島素 157 1.2 0.6 200 nM胰島素 266 2.0 NA 140501.doc -59- 201002337 萃取物1 175 1.3 0.7 萃取物2 199 1.5 0.7 萃取物3 230 1.8 0.9 萃取物4 167 1.3 0.6 萃取物5 808 6.2 3.0 萃取物6 825 6.3 3.1 萃取物7 455 3.5 1.7 萃取物8 765 5.8 2.9 萃取物9 332 2.5 1.2 萃取物10 286 2.2 1.1 萃取物11 380 2.9 1.4 萃取物12 291 2.2 1.1 萃取物13 512 3.9 1.9 萃取物14 274 2.1 1.0 表3展 示穩定之米糠萃取物1至1 4中的 已知化合物，該等 化合物為葡萄糖攝取抑制劑 。特定言之 ，表2列出了化學 名稱、準確質量、相對豐度範圍及基於SRB萃取物中此等 化合物之相對豐度的每100 mg重量（pg)。SRB-DI中有助於 葡萄糖攝取活性之化合物包括脂質可溶性固醇及脂肪酸， 多數為脂肪酸。脂肪酸（尤其花生油酸）已顯示出藉由非環 加氧酶依賴型機理藉由增加質膜中GLUT 1及GLUT4活性而 刺激葡萄糖攝取（J· B. P_ Claire Nugent, J_ P. Whitehead，J. M. Wentworth, V. Krishna K. Chatterjee 及 S. O’Rahilly, 2001. Arachidonic acid stimulates glucose uptake in 3T3-L1 adipocytes by increasing GLUT1 and GLUT4 levels at the 140501.doc -60- 201002337 plasma membrane. «/. 5ζ·ο/· C/zem. 278:9149-9157)。 表3.在SRB萃取物1至14中鑑定為葡萄糖攝取增強之活性 貢獻成分的化合物匯總。除經鑑定MS峰值（m/z)以外，亦 提供萃取物之相對豐度及每100 mg重量。 化合物名稱 m/z (M+H+) 相對豐度 (%) 重量/100 mg (μδ) 2-曱基-2-丁烯酸醯胺 100.08 0.2-1.3 5-46 8-曱基-8-氮雜雙環[3.2.1]辛烷-3,6-二醇 158.12 0.1-19.4 8-408 4-異丙基-1,2-苯二醇二曱醚 181.12 1.9-24.6 104-904 麩醯胺酸N 5-異丙基 189.12 0.2-4.3 19-177 6,10,14-三曱基-5,9,13-十五碳三烯-2-酮 263.24 10.4-37.0 285-1903 11，14-十八碳二稀酸 265.25 8.5-26.7 260-1385 9,11,13，15-十八碳四烯酸 277.22 4.1-21.1 292-1251 7-羥基-14，15-降二-8(17)-半曰花烯-13-酮 279.23 38.5-100.0 1059-8139 9,12-十八碳二稀酸 281.25 12.8-100.0 352-7625 10-十八礙烯酸 283.26 10.0-100.0 274-7852 16-羥基-9,12,14-十八碳三烯酸 295.23 11.4-35.5 623-1611 13-乳-9-十八碳_細酸 297.25 19.8-45.1 543-3091 4-氧十八碳婦酸 299.26 7.2-17.0 211-877 木蠟醇 300.29 4.5-13.0 209-768 福提黴素 321.22 0.7-4.0 35-79 洛舍瑞寧 338.28 1.6-9.8 94-411 1，2-二經基-5-二十一稀-4-西同 341.30 2.0-7.4 108-242 2-胺基-4-十八 *^細-1，3-·一Sf- 342.30 1.2-11.8 64-368 2-(胺曱基)-2-丙烯酸N-十六醯基Me酯 354.29 1.9-10.4 105-364 1-(9Z, 12Z-十八碳二稀酸)甘油醋 355.29 6.4-29.7 228-1673 環黃揚茶鹼0 356.29 2.9-12.8 156-470 1-(9Ζ·十八碳婦酸)甘油酉旨 357.30 6.3-32.6 241-2159 黃揚刀寧L 358.31 3.0-12.5 128-583 12-羥基-25-降-17-斯卡拉烯-24-醛 359.30 1.2-8.8 63-243 康尼啶A 366.31 1.9-7.8 63-236 140501.doc -61 - 201002337 B. FABP4抑制 表4展示萃取物1至萃取物14中fabp4結合 — 〜租果。卒取 物1至萃取物8係獲自SRB原料A，而萃取物9至萃取物22係 獲自SRB原料B。表5列出穩定之米糠萃取物丨至“中經鑑 定之已知化合物，該等化合物為FABP4抑制劑。表5提供 化學名稱、準確質量、相對豐度範圍及基於SRb萃取物令 此等化合物之相對豐度的每100 mg重量，以及π〗。估 計值。 表4· SRB萃取物之FABP4抑制匯總，提供I(：5g值、生物 檢定之R2及N值。 萃取物 編號 萃取條件 ic5〇 (Hg tnL1) R2 Ν 1 在室溫下藉由80%乙醇自原料A浸洗獲得之米糠乙醇 萃取物 να ΝΑ ΝΑ 2 在40°C下藉由蒸餾水自原料入浸洗獲得之米糠乙醇萃 取物 ΝΑ ΝΑ ΝΑ 3 在40 C下藉由20%乙酵自原料A浸洗獲得之米糠乙醇 萃取物 ΝΑ ΝΑ ΝΑ 4 在40 C下藉由40%乙醇自原料A浸洗獲得之米糠乙醇 萃取物 ΝΑ ΝΑ ΝΑ 5 在40°C下藉由60%乙醇自原料A浸洗獲得之米糠乙醇 萃取物 617.3 0.988 15 6 在40°C下藉由80%乙醇自原料A浸洗獲得之米糠乙醇 萃取物 332.1 0.99 15 7 在40°C下藉由乙醇自HS01590原料A浸洗獲得之米糠 乙醇萃取物 642.4 0.975 15 8 在60°C下藉由80%乙醇自原料A浸洗獲得之米乙酵萃 取物 298.0 0.949 15 140501.doc -62- 15201002337 藉由在40°C及300巴下對HS00332進行SFT獲得之求 糠C〇2萃取物 又 ’、 藉由在40°C及500巴下對原料B進行SFT獲得之米糠 C02萃取物 436.2 517.4 0.949 0.958 11 藉由在60°C及300巴下對原料β進行SFT獲得之米糠 C02萃取物 ' 313.6 0.984 15 12 藉由在60°C及500巴下對原料β進行SFT獲得之米糠 C02萃取物 ' 558.4 0.937 15 13 藉由在80°C及300巴下對原料B進行SFT獲得之米糠 C02萃取物 176.9 0.987 15 ί Ο 藉由在80°C及500巴下對原料β進行SFT獲得之米糠 C02萃取物 、 349.2 0.965 15 15 16 在室溫下藉由80%乙醇自原料b SFT殘餘物獲得之米 糠乙醇萃取物 ~ 在4〇°C下藉由蒸餾水自原料B SFT殘餘物獲得之来糖 乙醇萃取物 w

ND 0.729 17 在4〇°C下藉由20%乙醇自原料b SFT殘餘物獲得之半 糠乙醇萃取物 叉

ND 0.493 10 18 ⑶tt4〇%乙醇自原料順殘雜

ND 0.935 19 在4〇°C下藉由60%乙醇自原料β SFT殘餘物獲得之米 糠乙醇萃取物 '

ND 0.77 20 在4〇°C下藉由80%乙醇自原料b SFT殘餘物獲得之米 糠乙醇萃取物 '

NA

NA

NA 21 在4〇°C下藉由乙醇自原料b SFT殘餘物獲得之米糠乙 醇萃取物

ND 0.947 22 在60°C下藉由80%乙醇自原料b SFT殘餘物獲得之米 糖乙醇萃取物

NA

NA

NA 140501.doc -63- 201002337 表5. SRB萃取物1至14中FABP4抑制化合物之匯總。化 合物與其相應分子質量、相對豐度、每100 mg萃取物之重 量及IC5G預測值（基於所有活性成分之貢獻）。 化合物名稱 分子 質量 相對豐度 (%) 每 100 mg 重量(pg) IC5O預測值 (μΜ) 4,5-二氣-4-經基-5-曱基-2-十四基-2(3Η)-σ夫喃麵1 312.2670 3.64-42.41 169.98- 1443.30 61.03- 85.04 孕甾烷-2,3,6-三醇 336.2709 2.33-43.18 132.59- 1469.28 44.21- 80.39 5-(8-十七烯基)二氫-3-羥基-2(3Η)-呋 σ南酮 338.2854 2.58-63.20 117.41- 2150.71 38.91- 116.97 24-降-4(23),9(11)-羊齒二烯 394.3646 2.99-42.37 105.06- 1313.12 29.87- 61.26 24-降-12-烏蘇烯 396.3766 0.49-100.0 61.53- 3449.39 17.41- 160.11 11,13(18)-齊燉果二烯 408.3772 2.93-62.74 102.92- 2004.82 28.26- 90.32 14-甲基-9,19-環麥角-24(28)-烯-3-醇 412.3733 1.05-18.05 78.20- 576.65 21.26- 25.73 孟特克驗 574.4990 2.42-63.79 88.94- 2170.87 17.36- 69.52 3-(3,4-二羥苯基)-2-丙烯酸三十酯 600.5155 1.41-97.32 42.81- 3311.85 7.99- 101.47 蠶砂酮 602.5337 1.37-78.19 37.40- 2660.64 6.96- 81.25 1,2-二烷酸甘油酯；1,2-二(9Z,12Z-十八 碳二烯酸)甘油酯 616.5157 0.77-55.17 26.87- 1877.32 4.89- 56.03 表6匯總了 SRB萃取物6中之活性化合物，提供活性終 點、分子質量、相對豐度、每1〇〇毫克萃取物之重量及IC50 預測值（基於所有活性成分之貢獻）。 140501.doc -64- 201002337

表6. SRB萃取物6中之活性化合物匯總。 化合物名稱 終點 分子 質量 相對豐度 (%) 每 100 mg 重量(pg) IC5〇 預測值 (μΜ) 2-曱基-2-丁烯酸醯胺 葡萄糖攝取 99.074 1.26 20 ΝΑ* 8-甲基-8-氮雜雙環[3.2.1] 辛烧-3,6-二醇 葡萄糖攝取 157.110 19.36 300 ΝΑ* 4-異丙基-U-苯二醇二曱 醚 葡萄糖攝取 180.104 24.63 380 ΝΑ* 麩醯胺酸N 5-異丙基 葡萄糖攝取 188.110 4.32 70 ΝΑ* 6,10,14-三甲基-5,9，13-十 五碳三烯-2-酮 葡萄糖攝取 262.230 22.85 360 ΝΑ* 11，14-十八碳二稀酸 葡萄糖攝取 264.245 13.66 210 ΝΑ* 9,11,13,15-十八碳四烯酸 葡萄糖攝取 276.210 21.11 330 ΝΑ* 7-羥基-14,15-降二-8(17)-半曰花烯-13-酮 葡萄糖攝取 278.225 100.00 1560 ΝΑ* 9,12-十八碳二稀酸 葡萄糖攝取 280.240 39.18 610 ΝΑ* 10-十八碳稀酸 葡萄糖攝取 282.255 20.43 320 •ΝΑ* 16-羥基-9,12,14-十八碳三 稀酸 葡萄糖攝取 294.222 35.53 550 ΝΑ* 13 -氧-9-十八碳烤酸 葡萄糖攝取 296.239 38.16 590 ΝΑ* 4-氧十八破稀酸 葡萄糖攝取 298.256 11.09 170 ΝΑ* 木蠟醇 葡萄糖攝取 299.274 10.98 170 ΝΑ* 4,5-二氫-4-羥基-5-甲基-2-十四基-2(3Η)-^σ南顯1 FABP4抑制 312.267 12.24 190 73.32 福提黴素 葡萄糖攝取 320.204 4.03 60 ΝΑ* 孕甾烷-2,3,6-三醇 FABP4抑制劑 336.271 12.47 190 69.39 洛舍瑞寧 葡萄糖攝取 337.272 7.61 120 ΝΑ* 5-(8-十七稀基)二氮-3-說 基-2(3H)-呋喃酮 FABP4抑制 338.285 17.51 270 96.84 U-二羥基-5-二十一烯-4- 酮 葡萄糖攝取 340.286 7.42 120 ΝΑ* 140501.doc -65- 201002337 2-胺基-4-十八碳細-1，3·二 醇 葡萄糖攝取 341.290 11.80 180 NA* 2-(胺甲基)-2-丙烯酸Ν-十 六醯基Me S旨 葡萄糖攝取 353.283 10.42 160 NA* 1-烷酸甘油酯1-(9Z,12Z-十 八碳二烯酸)甘油酯 葡萄糖攝取 354.283 11.88 190 NA* 環黃楊茶鹼〇 葡萄糖攝取 355.280 11.95 190 NA* 1 -烧酸甘油S旨1 -(9Z-十八 碳烯酸)甘油酯 葡萄糖攝取 356.295 12.64 200 NA* 黃楊刀寧L 葡萄糖攝取 357.292 12.50 190 NA* 12-羥基-25-降-17-斯卡拉 烯-24-醛 葡萄糖攝取 358.284 4.35 70 NA* 康尼 葡萄糖攝取 365.296 7.79 120 NA* 24-降-4(23),9(11)-羊齒二 烯 葡萄糖攝取 394.363 21.38 330 NA* 24-降-12-烏蘇烯 FABP4抑制 396.377 42.21 660 199.25 11,13(18)-齊燉果二烯 FABP4抑制 408.377 19.87 310 91.04 14-甲基-9,19-環麥角-24(28)-烯-3-醇 FABP4抑制 412.373 12.28 190 60.55 孟特克驗 FABP4抑制 574.499 12.84 200 40.01 3-(3,4-二羥苯基)-2-丙烯酸 三十酯 FABP4抑制 600.516 9.53 150 29.68 蠶砂明 FABP4抑制 602.534 8.53 130 26.50 1,2-二烷酸甘油酯；1,2-二 (9Z，12Z-十八碳二烯酸)甘 油酉旨 FABP4抑制 616.516 8.12 130 24.66 *NA=無法預測IC50 等效物 熟習此項技術者應瞭解或僅使用常規實驗法即能夠確定 本文中所描述之本發明特定實施例的許多等效物。以下申 請專利範圍意欲涵蓋該等等效物。 140501.doc •66- 201002337 【圖式簡單說明】 圖1描繪藉由在室溫下以80%(v/v)乙醇萃取而獲得之SRB 萃取物1的DART TOF-MS譜，其中X軸顯示質量分配（100-800 m/z [M+H+])，而y軸顯示所偵測之各化學物質的相對 豐度。 圖2描繪藉由在40°C下以蒸餾水萃取而獲得之SRB萃取 物2的DART TOF-MS譜，其中X軸顯示質量分配（100-800 m/z [M+H+])而y轴顯示所偵測之各化學物質的相對豐度。 圖3描繪藉由在40°C下以20%(v/v)乙醇萃取而獲得之SRB 萃取物3的DART TOF-MS譜，其中X軸顯示質量分配（100-800 m/z [M+H+])而y軸顯示所债測之各化學物質的相對豐 度。 圖4描繪藉由在40°C下以40%(v/v)乙醇萃取而獲得之SRB 萃取物4的DART TOF-MS譜，其中X軸顯示質量分配（100-800 m/z [M+H+])而y轴顯示所债測之各化學物質的相對豐 度。 圖5描繪藉由在40°C下以60%(v/v)乙醇萃取而獲得之SRB 萃取物5的DART TOF-MS譜，其中X軸顯示質量分配（100-800 m/z [M+H+])而y轴顯示所彳貞測之各化學物質的相對豐 度。 圖6描繪SRB萃取物6(在40°C下以80%(v/v)乙醇萃取）的 DART TOF-MS譜，其中X軸顯示質量分配（100-800 m/z [M+H+])而y軸顯示所偵測之各化學物質的相對豐度。 圖7描繪藉由在40°C下以1〇〇%(ν/ν)乙醇萃取而獲得之 140501.doc -67- 201002337 SRB萃取物7的DART TOF-MS譜，其中X軸顯示質量分配 (100-800 m/z [M+H+])而y軸顯示所偵測之各化學物質的相 對豐度。 圖8描繪藉由在60°C下以80%(v/v)乙醇萃取獲得之srb萃 取物8的DARTTOF-MS譜，其中X軸顯示質量分配（100_8()() m/z [M+H+])而y軸顯示所積測之各化學物質的相對豐度。 圖9描繪SRB萃取物9(在40°C、300巴下以SCC02萃取）的 DART TOF-MS譜，其中X軸顯示質量分配（100-800 m/z [M + H + ])而y軸顯示所偵測之各化學物質的相對豐度。 圖10描繪藉由在4〇°C、500巴下以SCC〇2萃取而獲得之 SRB萃取物1〇的DART TOF-MS譜，其中X軸顯示質量分配 (100-800 m/z [M+H+])而y軸顯示所偵測之各化學物質的相 對豐度。 圖11描繪藉由在60°C、300巴下以SCC〇2萃取而獲得之 SRB萃取物11的DART TOF-MS譜，其中X軸顯示質量分配 (100_800 m/z [M+H+])而y軸顯示所偵測之各化學物質的相 對豐度。 圖12描繪藉由在6(TC、5〇〇巴下以SCC〇2萃取而獲得之 SRB萃取物12的DART TOF-MS謹，其中X軸顯示曾旦八 兒里刀配 (100-800 m/z [M+H+])而y軸顯示所偵測之各化學物質的相 對豐度。 圖13描繪藉由在8CTC、300巴下以SCC〇2萃取獲得之Srb 萃取物13的DArtt〇F，MS譜，其中X軸顯示質量分配（1〇〇 800 m/z [M+H+])而y軸顯示所偵測之各化學物質的相對幽 140501.doc •68· 201002337 度。 圖14描繪藉由在80°C、500巴下以SCC02萃取而獲得之 SRB萃取物14的DART TOF-MS譜，其中X軸顯示質量分配 (1 00-800 m/z [M+H+])而y轴顯示所偵測之各化學物質的相 對豐度。

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Claims (1)

1. 201002337 七、申請專利範圍： 一種米糠萃取物，其包含至少一種選自由以下各物組成 之群的化合物：〇·〇〇1重量％至5重量％ 2-曱基-丁稀酸； 0.001重量％至5重量％ 8-甲基-8-氮雜雙環[3·2.1]辛 烷-3,6-二醇；〇.〇1重量％至5重量％ 4-異丙基-1，2-苯二醇 二曱醚；0.〇〇5重量％至5重量％麩醯胺酸N 5-異丙基； 0.05重量％至10重量％ 6,1〇,14-三曱基-5,9，13-十五碳三 烯-2-酮；〇.〇5重量％至10重量％ u，i4-十八碳二烯醛； 0.05重量。/。至1〇重量％ 9,11,13,15-十八碳四烯酸；〇·1重 量0/〇至20重量。/。7-羥基-14,14-降二-8(1 7)-半日花烯-13-酮；0.05重量❹/◦至2〇重量％ 9,12-十八碳烯酸；〇.〇5重量％ 至20重量％ 10_十八碳烯酸；0_01重量％至15重量％ 16-羥 基-9,12,14-十八碳三烯酸；〇〇5重量％至15重量％ ι3_ 氧-9-十八碳烯酸；〇 〇1重量％至5重量％ 4_氧十八碳稀 酸；0.05重量％至5重量％木蠟醇；〇_005重量％至5重量％ Q 褐提黴素；0.005重量％至5重量％洛舍瑞寧；〇.01重量％ 至5重ι，2-二羥基_5_二十一烯_4_酮；〇〇〇5重量％至$ 重量％ 2-胺基-4-十八碳烯_丨，3_二醇；〇〇1重量％至5重量 /〇 2-(月女曱基）_2·丙稀酸N_ +六醯基曱酯；重量％至 1〇重量。/〇 1-烷酸甘油酯丨_十八碳二烯酸甘油酯；ο·。重 里％至5重量°Λ環黃楊茶鹼〇 ; 〇.〇1重量％至2〇重量％丨_烷 酸甘油酯1-十八碳烯酸甘油酯；001重量％至5重量％普 楊刀寧L ; 0.005重量％至5重量％ 12老基_25n斯; 拉烯-24-醛；0.005重量％至5重量。/〇康尼啶a，及㈣重 140501.doc 201002337 篁％至10重量。24-降-4(23),9(11)-菲尼啶。 2·如請求項1之米糠萃取物，其包含至少一種選自由以下 各物組成之群的化合物：〇.〇1重量％至1重量％ 2-曱基-丁 烯酸；0.01重量％至2重量％ 8-曱基-8-氮雜雙環[3.2.1]辛 烧_3,6-二醇；〇.1重量％至3重量％ 4-異丙基-1，2-苯二醇二 曱謎；0.01重量。/〇至1重量％麩醯胺酸N 5-異丙基；0.1重 量％至3重量％ 6,10,14-三甲基-5,9，13-十五碳三烯-2-酮； 0_1重量°/°至2重量％11，14-十八碳二烯醛；〇.2重量％至5 重量％ 9，U，13,15_十八碳四烯酸；1重量％至1〇重量％ 7_ 經基-14,14-降二_8(17)_半日花烯-13-酮；0.3重量％至5重 量％ 9,12-十八碳烯酸；〇.2重量％至5重量％ 10-十八碳烯 酸；0.5重量％至5重量％ 16-經基-9,12,14-十八碳三稀 酸；0.5重量。/。至5重量％ 13-氧-9-十八碳烯酸；0.2重量％ 至1重1 % 4_氧十八石炭稀酸；0.1重量％至1重量％木壤 醇，0.01重量。/。至〇.5重量％福提黴素；0.1重量°/〇至1重量 0/〇洛舍瑞寧；〇. 1重量％至1重量％ 1，2 -二經基-5 -二十— 烯-4-酮；〇.〇5重量％至丨重量％ 2-胺基-4-十八碳烯_1,3_二 醇；0.1重量％至1重量。2-(胺甲基）-2-丙烯酸N-十六醯 基曱酉旨；0 · 2重量％至2重量％ 1_烧酸甘油酉旨1 -十八碳二歸 酸甘油I旨；〇·1重量％至1重量％壤黃揚茶驗Ο; 0.1重量％ 至2重量％ 1 -垸酸甘油酯1 -十八竣烯酸甘油酯；0 · 1重量％ 至1重量°/。黃揚刀寧L; 〇.〇5重ΐ%至0.5重量％ 12 -經 基-25-降-17-斯卡拉烯_24-醛；〇.05重量％至1重量％康尼 啶A ;及0.2重量％至2重量％ 24-降-4(23),9( 11)-菲尼啶。 140501.doc 201002337 3. —種米糠萃取物’每100 mg該萃取物包含至少一種選自 由以下各物組成之群的化合物：1 pg至1〇〇 2_曱基-丁 烯酸；0.1 pg至1000 Kg 8-曱基-8-氮雜雙環[3.2.1]辛 炫《-3,6-二醇；10 pg至2000 pg 4-異丙基-1,2-苯二醇一曱 醚；1 pg至500 pg麩醯胺酸N 5-異丙基；100 pg至250〇 6,10，14-三甲基-5,9,13-十五碳三烯-2-酮；1〇〇 Kg至 2000 pg 11,14-十八碳二烯醛；100 pg 至 2000 pg 9,11，13,15-十八碳四烯酸；500 pg 至 15,000 pg 7-羥 …基-14,14-降二-8(17)-半曰花烯-13-酮；100 pg 至 15,000 pg 9,12-十八碳烯酸；100 至15,000 pg 10-十八碳烯 酸；100 pg至2500 pg 16-羥基-9,12,14-十八碳三烯酸； 100 pg 至 5000 pg 13-氧-9-十八碳烯酸；1〇〇 至 1500 pg 4-氧十八碳烯酸；100 pg至1500 pg木蠟醇；5 pg至200 pg福提徽素；20 pg至1000 pg洛舍瑞寧；1〇 pg至500 yg 1,2-二羥基-5-二十一烯-4-酮；1〇 至 500 pg 2-胺基-4-◎ 十八碳烯-1,3-二醇；1〇 pg至500 2-(胺曱基）-2-丙烯酸 N-十六醯基甲酯；100 至2500 1-烷酸酯1-十八碳二 烯酸甘油酯；10 pg至1000 pg環黃揚茶鹼〇; 10〇叫至 3000 pg 1-烷酸甘油酯1-十八碳烯酸甘油酯；5〇吨至 • 1000叫黃楊刀寧L ; gg至500 pg 12-羥基-25-降-17-斯 卡拉烯-24-醛；10 gg至500 pg康尼啶a ;及1〇〇 至2000 24-降-4(23),9(11)-菲尼啶。 4. 一種米糠萃取物，其包含至少一種選自由以下各物紲成 之群的化合物：0.01重量％至1〇重量％ 4,5 -二氫-4 -經 140501.doc 201002337 基-5-曱基-2-十四基_2(3H)-呋喃酮；0.01重量％至1〇重量 /〇孕甾烷-2,3,6-三醇；0.01重量〇/0至10重量％ 5_(8_十七烯 基）二氫-3-羥基_2(3H)_呋喃酮；0.01重量％至1〇重量0/〇 2心降-4(23)，9(11)-菲那啶；0.01重量％至1〇重量％24_ 降-12-烏蘇烯；〇 〇1重量％至1〇重量％ u，13(i8)·齊燉果 二稀；0.01重量％至5重量〇/〇 14_曱基_9，19環麥角_24 (28)-烯-3-醇；0.01重量％至〗〇重量％孟特克鹼；〇〇1重 量0/。至10重量％ 3_(3,4_二羥苯基）_2_丙烯酸三十酯；〇〇1 重量％至10重量％蠶砂酮；及〇〇〇1重量％至1〇重量％之 1，2-二-(9Z，12Z-十八碳二烯酸）甘油酯。 5 ·如請求項4之米糠萃取物，其包含至少一種選自由以下 各物組成之群的化合物：〇·丨重量％至2重量％ 4,5_二 氫-4-羥基-5-曱基-2-十四基-2(3H)-呋喃酮；0.1重量。/〇至2 重量％孕甾烷-2,3,6-三醇；〇.1重量％至3重量％5-(8-十七 烯基）二氫-3-羥基-2(3H)-呋喃酮；0.1重量％至2重量％ 24-降-4(23),9(11)-菲那啶；〇.5重量％至5重量％ 24· 降~12-烏蘇烯；〇.〇5重量％至3重量％ 11,13(18)-齊燉果二 婦；0.05重量0/〇至1重量〇/0 14-曱基-9,19-環麥角-24(28)-烯-3-醇；〇.〇5重量％至3重量％孟特克鹼；〇·〇5重量％至5 重量％ 3-(3,4-二羥苯基）-2-丙烯酸三十酯；〇·〇1重量％至 10重量％蠶砂酮；及〇.〇1重量％至2重量％ ι,2- •一 - ( 9 Ζ，12 Ζ -十八碳二稀酸）甘油g旨。 6. 一種米糠萃取物，每1 〇〇 mg該萃取物包含至少一種選自 由以下各者組成之群的化合物：50 μ§至3000叩4,5-二 140501.doc 201002337 氫-4-羥基-5-甲基-2-十四基-2(3H)-呋喃酮；50 pg至3000 pg孕甾烧- 2,3，6-三醇；50 pg至3000 pg 5-(8-十七烯基）二 氫-3-經基-2(3Η)- π夫喃酮；50 pg 至 2000 pg 24-降-4(23),9(11)-菲那啶；10 pg 至 5000 24-降-12-烏蘇 烯；25 pg 至 2500 pg 11,13(18)-齊燉果二烯；1〇 至 1000 pg 14-甲基-9,19-環麥角-24(28)-烯-3-醇；10 pg至 3000 pg 孟特克鹼；5 gg 至 5000 3-(3,4-二羥苯基）-2-丙 【 烯酸三十酯；5 pg至5000 pg蠶砂酮；及5 pgi300〇 1，2-二- (9Ζ，12Ζ-十八碳二稀酸）甘油g旨。 7. 如請求項1至6中任一項之米糠萃取物’其具有包含圖1 至圖14中任一者之直接即時分析（DART)質譜層析圖的部 分。 8. 如請求項1至6中任一項之米糠萃取物，其中該萃取物之 葡萄糖攝取刺激大於200 nM胰島素之葡萄糖攝取刺激。 9. 如請求項8之米糠萃取物，其中該萃取物之葡萄糖攝取 ϋ 刺激比200 ηΜ胰島素之葡萄糖攝取刺激大0.5倍至5倍。 10. 如請求項9之米糠萃取物，其中該萃取物之葡萄糖攝取 刺激比200 ηΜ胰島素之葡萄糖攝取刺激大〇.5倍至3.5 ' 倍。 11. 如請求項10之米糠萃取物，其中該萃取物之葡萄糖攝取 刺激比200 ηΜ胰島素之葡萄糖攝取刺激大〇7倍至31 倍。 12. 如明求項8之米糠萃取物，其中該萃取物之葡萄糖攝取 刺激比200 ηΜ胰島素之葡萄糖攝取刺激大3倍以上。 140501.doc 201002337 13. 如請求項8之来糠萃取物’其中該萃取物之葡萄糠攝取 刺激比200 nv[胰島素之葡萄糖攝取刺激大約3倍。 14. ^請求項1至6中任-項之米糠萃取物，其中該萃取物之 葡萄糖攝取刺激大於對照物之葡萄糖攝取刺激。 月求員14之米糠萃取物，其中該萃取物之葡萄糠攝取 刺激比對照物之葡萄糖攝取刺激大丨倍以上。 16‘如凊求項14之米糠萃取物，其中該萃取物之葡萄糖攝取 刺激比對照物之葡萄糖攝取刺激大丨倍至丨〇倍。 17. 如請求項14之米糠萃取物，其中該萃取物之葡萄糖攝取 刺激比對照物之葡萄糖攝取刺激大2倍至7倍。 18. 士 β求項14之米糠萃取物，其中該萃取物之葡萄糖攝取 刺激比對照物之葡萄糖攝取刺激大約6倍。 19. 如π求項1至6中任—項之米糠萃取物，其中該萃取物具 有1 〇〇计數/分鐘至3〇〇〇計數/分鐘（cpm)之葡萄糖攝取刺 激。 20. 如β求項19之米糠萃取物’其中該萃取物具有1〇〇 cpni 至1000 cpm之葡萄糖攝取刺激。 21. 如請求項1至6中任—項之米糠萃取物，其中該萃取物之 濃度為 5 pg/rnL 至 2000 pg/mL。 22’如請求項21之米糠萃取物，其中該萃取物之濃度為1〇 Kg/niL至 1〇〇〇 gg/mL。 23 _如請求項22之米糠萃取物，其中該萃取物之濃度為i 〇 Pg/mL、50 pg/mL、250 pg/mL或 1000 pg/mL。 24.如請求項1至6中任—項之米糠萃取物，其中該萃取物具 140501.doc 201002337 有小於2000 pg/mL之FABP4抑制的IC5〇值。 25_如請求項24之米糠萃取物，其中該FABP4抑制的IC50值 為 25 pg/mL至 2000 pg/mL。 26. 如請求項25之米糠萃取物，其中該FABP4抑制的IC50值 為 25 pg/mL至 1〇〇〇 pg/mL。 27. 如請求項26之米糠萃取物，其中該FABP4抑制的1(：50值 為 25 pg/mL至 500 pg/mL。 2 8 . —種米糠萃取物，其係藉由包含以下步驟之方法製備： a) 提供穩定之米糠原料；及 b) 萃取該原料。 29·如請求項28之萃取物，其中該萃取步驟為含水乙醇萃 取。 30_如凊求項28之萃取物，其中該萃取步驟為超臨界二氧化 碳卒取。 31. 一種醫藥組合物，其包含如請求項！至27中任-項之米 糖卒取物。 32·如請求項31之醫藥組合物，其係調配成功能性食品、食 物增補劑、粉末或飲料。 3 3. —種如請求項1至2 7 φ彳工 ^ 任一項之萃取物用於製備抑钊葡 萄糖攝取之藥物之用途。 任—項之萃取物用於製備抑制 34. —種如請求項i至27中 FABP4結合之藥物之用途 35. 如凊求項33或34之用徐，计丄 % 其中該個體患有高血糖症 3 6 ·如凊求項3 3或3 4之用徐，甘丄 、 其中該個體患有糖尿病。 140501.doc 201002337 37.如請求項36之用途， 3 8.如請求項％之用途， 3 9 _如凊求項3 6之用途， 失調。 其令該個體患有1型糖尿病。 其中該個體患有2型糖尿病。 其中該個體罹患肥胖及相關之代謝 140501.doc