TW200927107A - ABCG2 inhibitor - Google Patents

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200927107 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於一種乳癌抗藥性蛋白（BCRp/ABCG2)抑制 劑。 【先前技術】 . 在癌症化學療法中，出現自治療開始時抗癌劑就無效之 . 自然抗藥性、或長期連續使用抗癌劑後其效果降低之獲得 抗藥性，這正成為大問題。業界期待克服這種對抗癌劑之 〇 抗藥性，以提高癌症化學療法之治療成果，至今已明確各 種抗藥性機制之存在。其中，一般認為將抗癌劑主動輸送 至細胞外而使抗癌劑之細胞内蓄積量減少的藥劑輸送蛋白 質的表現起到抗藥性機制之中心作用。 由二十世紀七十年代發現之MDR1基因所編碼的藥劑輸 送蛋白質P-糖蛋白（Permeability-glycoprotein)，會對化學 結構或作用機制不同之複數種抗癌劑產生交叉抗藥性，因 此其已被視為多重抗藥性克服劑之有力的標靶分子。但 β 是，現已逐漸明確僅憑藉p_糖蛋白無法完全說明抗癌劑抗 藥性機制，業界期待進一步開發出以新的藥劑輸送蛋白質 •作為標把分子之抗藥性克服劑。 其中，在1998年，作為與p_糖蛋白同屬於稱為Ατρ結合 盒（ATP-binding cassette，ABC)轉運體超級家族之一群的 藥劑輸送蛋白質，發現了乳癌抗藥性蛋白質（除了稱為 BCRP以外，亦稱為ABCG2、MXR或ABCP)(參照非專利文 獻1)。BCRP之結構中僅存在一個ATp結合盒，而與具有兩 136554.doc 200927107 個ATP結合盒之P-糖蛋白或其他ABC轉運體在結構上有所 不同。BCRP係與針對鹽酸伊立替康（Irin〇tecan)(Cp7M u 或拓朴替康（Topotecan)等拓樸異構酶j抑制劑、米托蒽醌 (mit〇xantrone)等拓樸異構酶„抑制劑、吉米沙星（gefhinib) 或伊馬替尼（Imatinib)等分子標靶治療藥的抗藥性機制有 關。另一方面，BCRP對於由P_糖蛋白排出之太平洋紫杉 酵或長春新鹼等不起作用，另外BCRp與幾乎不會被ρ·糖 蛋白排出至細胞外之cpt-u或7·乙基_10_羥基喜樹驗（SN_ 3 8 . CPT-11之活性體）等喜樹鹼衍生物之排出有關（參照非 專利文獻2)，由此可明確BCRP具有與p_糖蛋白不同之受質 特異性。進而表示，BCRP亦與經口投予之抗癌劑之生體 利用率的限度有關（參照非專利文獻3)。根據該等事實，而 期待抑制B C R P之藥劑針對先前之抗藥性克服劑所無法克 服的抗癌劑之抗藥性而發揮克服效果，進而亦提高抗癌劑 之生體利用率’故而業界期待其之開發。 至今為止，以克服對抗癌劑之抗藥性為目的，目前已開 發出多種P-糖蛋白抑制劑。相對於此，關於BCRp抑制劑 之報告較少，另外其抑制作用亦並不充分，因此業界為了 發現更為有效之BCRP抑制劑而不斷努力研究。再者，至 今為止所報告之具有BCRP抑制作用的化合物有FTC (Fumitremorgin c)衍生物（參照非專利文獻4)、雌激素或抗 雌激素（參照非專利文獻5)、新生黴素（參照非專利文獻6) 等。又，我等雖然發現類黃酮（參照專利文獻1}、二苯基丙 烯腈衍生物（參照專利文獻2)及具有雜環之丙烯腈衍生物 136554.doc 200927107 (參照專利文獻3)具有BCRP抑制作用，但該等均無法獲得 充分之效果，此外尚存在溶解性、毒性等用作醫藥品時必 需解決之課題。 [專利文獻1]國際公開第2004/069233號手冊 [專利文獻2]國際公開第20(M/069243號手冊 * [專利文獻3]國際公開第2006/106778號手冊 . [非專利文獻 1] Proc. Natl. Acad. Sci. USA，1998, 95:15665- 15670 〇 [非專利文獻 2] Cancer Res.，1999, 59:5938-5946 [导F 專矛1J 文獻 3] J. Clin. Oncol.，2002, 20:2943-2950 [If 專矛 ij 文獻 4] Mol. Cancer Ther.，2002, 1:417-425 [非專利文獻 5] Mol. Cancer Ther.，2003, 2:105-1 12 [非專利文獻 6] Int. J. Cancer, 2004，108:146-151 【發明内容】 [發明所欲解決之問題] 本發明之目的在於提供一種具有優異之乳癌抗藥性蛋白 V 質（BCRP)抑制作用且溶解性得到改善之新穎藥劑。 [解決問題之技術手段] 本發明者為解決上述課題，使用藉由BCRP而獲得抗藥 . 性之抗癌劑抗藥性癌細胞對各種化合物進行篩選，結果發 現：以下述式（1)所表示之新穎之丙烯腈衍生物具有強力之 BCRP抑制作用。 即，本發明提供一種以通式（1)所表示之丙烯腈衍生物 或其鹽： 136554.doc 200927107 [化1]

^或2) [式中’A表示可具有取代基之3〜8員之雜環]。 又’本發明提供一種以上述丙烯腈衍生物或其鹽作為有 效成分之醫藥。

又，本發明提供一種以上述丙烯腈衍生物或其鹽作為有 效成分之BCRP抑制劑。 又’本發明提供一種以上述丙烯腈衍生物或其鹽作為有 效成分之抗癌劑抗藥性克服劑或抗癌劑效果增強劑。 又，本發明提供一種含有上述丙烯腈衍生物或其鹽、及 藥學上所容許之載劑的醫藥組合物。 又，本發明提供一種含有上述丙烯腈衍生物或其鹽、及 可成為BCRP之受質之抗癌劑的抗癌劑組合物。 [發明之效果] 藉由本發明之丙烯腈衍生物或其鹽的優異2BCRp抑制 作用，可克服與BCRP有關之抗癌劑抗藥性。又可增強 抗癌劑對原本表現BCRP之癌症的效果。又，可期待提高 抗癌劑之生體利用率，從而期待提高癌症化學療法之治 成果。 · ^ ' 進而，本發明之丙烯腈衍生物或其鹽，其溶解性優異， 作為醫藥品原料極為有用。 136554.doc 200927107 【實施方式】 通式（1)中，作為以A所表示之雜環，可列舉3〜8員之雜 環，其中較好的是4〜8員之雜環。作為以上述A所表示之雜 環，具體可列舉：氮丙啶、吖丁啶、吡咯啶、哌啶、哌 井硫代馬嚇·、嗎琳、氮雜環庚烧（azepane)、氣雜環辛统 (azocane)等。其中，較好的是以下述式（2)〜(9)所表示之雜 環，尤其好的是以下述式（5)所表示之哌啶： [化2]

通式（1)中，以上述A所表示之雜搭π曰士 ^ ^ ^ ^ 丨取不之雜環可具有一個或者多個 取代基；作為該取代基，可列無甘

〜赛』列舉羥基、低級烷基、低級烷 氧基、低級酿氣基、硝基、脸» j. 胺基、卣素原子、低級羥基烷 基、低級烷氧基羰基等；於且古 Ψ於具有多個取代基之情形時，各 取代基可相同亦可不同。其中，士 具中，尤其好的是具有羥基之雜 環。 作為上述低級燒基’可列表城板基， 〜準碳數為1〜6之烷基，具體可 列舉甲基、乙基、正丙基、異丁基等。 作為上述低級烧氧基，可列舉碳數為Μ之烧氧基，具 體可列舉甲氧基、乙氧基等。 136554.doc 200927107 作為上述低級醯氧基，可列舉碳數為卜6之醢氧基，具 體可列舉曱醯氧基、乙醯氧基、丙酿氧基等。 作為上述低級經基烷基，可列舉碳數為丨〜6之經基炫 基，具體可列舉羥基曱基、羥基乙基等。 作為上述低級烷氧基幾基，可列舉碳數為卜6之烷氧基 . 肖基’具體可列舉甲氧絲基、乙氧基幾基等。 . 作為函素原子，可列舉氣、溴、氟、碘等。 本發明之丙烯腈衍生物可形成藥理學上所容許之鹽，該 ❹ ^"亦匕括在本發明中。作為鹽，可列舉：鹽酸幾、硫酸 鹽、蛾酸鹽、璘酸鹽等無機酸鹽；納、卸等驗金屬鹽； 約鎮等驗土金屬鹽，對曱苯續酸鹽、甲確酸鹽、反丁稀 一酸鹽、丁二酸鹽、乳酸鹽等有機酸鹽等。又，本發明之 化合物亦有以溶劑水合物之形態而存在之情況該水合物 亦包括在本發明中。進而，本發明之丙烯腈衍生物可存在 異構物該等異構物及其混合物亦包括在本發明中。 •該等之中尤其好的化合物為下述化合物或其鹽。 哌啶-1-基乙酸-ΐ-[5·[(ζ)_2•氰基_2_(3 4_二甲氧基苯基） 乙烯基]噻吩-2-基]哌啶_4-基酯； (4-羥基哌啶_丨·基）乙酸氰基_2(3,4二甲氧 基苯基）乙烯基]噻吩_2_基]哌啶_4_基酯； 吖丁啶-1-基乙酸氰基·2(34二曱氧基苯 基）乙烯基]噻吩-2·基]哌啶基酯； 吡咯啶-1-基乙酸]—[5_[(ζ) 2氰基·2 (3 4二曱氧基苯 基）乙烯基]噻吩-2-基]哌啶·4_基酯； 136554.doc 200927107 (2-甲基旅啶-1-基）乙酸氰基-2·(3,4_二甲氧 基笨基）乙烯基]噻吩-2-基]哌啶-4-基酯； 0-羥甲基哌啶基）乙酸·•氰基_2_(3,4_二甲 氧基苯基）乙烯基]噻吩-2-基]哌啶 •4-基酯； 氮雜環庚烷-1-基乙酸氰基_2_(34_二甲氧基 本基）乙稀基]嗟吩_2-基]B底咬基酯； 氮雜環辛烷-1-基乙酸— 氰基_2_(34•二甲氧基 苯基）乙烯基]噻吩-2-基]哌啶_4_基酯； Ο (4-曱基哌畊_1_基）乙酸氰基·2(34二曱氧 基苯基）乙浠基]嗟吩-2-基]π辰咬_4_基醋； 嗎啉_4_基乙酸^^[54(2)-2-氰基-2-(3,4-二甲氧基苯基） 乙婦基]嘆吩-2-基]派咬_4_基醋。 本發明之丙婦腈衍生物或其鹽例如可根據以下之反應式 (Α)來製造。 反應式（Α): [化3]

πα (X)

OCHa (Y) BrCHzCOBr (XX) -►

136554.doc •12- 200927107

0、 (ΧΖ) GX^^T^X^och, 試劑：⑻ NaOEt、EtOH、回流 （1) (E或Z) Uoch， (b) CHC13、吡啶、〇 deg->回流. (c) Et3N ' CHC13 > 0 deg^rt ❹

即，藉由使5-(4-羥基哌啶-1-基）噻吩-2-甲醛（X)與3,4-二 曱氧基苯乙腈（Y)進行縮合，可獲得（Z)-2-(3，.4-二甲氧基苯 基）-3-[5-(4-羥基哌啶-1-基）噻吩-2-基]丙烯腈（Z)。 進而，藉由使（Z)與溴乙醯溴（XX)進行反應，可獲得溴 乙酸-1-[5-[(Ζ)-2-氰基-2-(3,4-二甲氧基苯基）乙烯基]噻吩-2-基]哌啶-4-基酯（XY)。藉由使溴乙酸-1-[5-[(Ζ)-2-氰基-2-(3,4-二甲氧基苯基）乙烯基]噻吩_2_基]哌啶_4_基酯（χγ)與 所期望之二級胺類（XZ :式中，A與上述定義相同）進行反 應’可獲得本發明之以通式（1)所表示之丙烯腈衍生物（式 中’ A與上述定義相同）。 上述二級胺類（XZ :式中’ A與上述定義相同）並無特別 限定’具體可列舉哌唆、4-羥基派啶、氮丙啶_2_羧酸甲 酯、吖丁啶、吡咯啶、2-甲基哌啶、3-羥曱基哌啶、氮雜 環庚烷（六亞甲基亞胺）、氮雜環辛烷（七亞甲基亞胺）、扣 甲基哌畊、嗎啉、硫代嗎啉等；上述反應式（A)中，作為 藉由該等二級胺類而獲得之丙烯腈衍生物，可列舉： 哌啶小基乙酸小[5-[(Ζ)-2_氰基-2_(3,4_二甲氧基苯基） 乙稀基]噻吩-2-基]哌啶-4-基酯、 136554.doc -13- 200927107 (4-羥基哌啶-1-基）乙酸-l-[5-[(Z)-2-氰基-2-(3,4-二甲氧 基苯基）乙烯基]噻吩-2-基]哌啶-4-基酯、 1-(1-[5-[(Ζ)-2-氰基-2-(3,4-二甲氧基苯基）乙烯基]噻吩-2-基]哌啶-4-基氧基羰基甲基）氮丙啶-2-羧酸甲酯、 吖丁啶-1-基乙酸-1-[5-[(Ζ)-2-氰基-2-(3,4-二甲氧基苯 基）乙稀基]嗟吩-2-基]旅咬-4-基醋、 - °比咯啶-1-基乙酸-1-[5-[(Ζ)-2-氰基-2-(3,4-二曱氧基苯 基）乙稀基]嗟吩-2 -基]娘咬-4-基醋、 © (2-甲基哌啶-1-基）乙酸-1-[5-[(Ζ)-2·氰基-2-(3,4-二甲氧 基本基）乙稀基]嗟吩-2 -基]旅唆-4 -基5旨、 (3-羥曱基哌啶-1-基）乙酸小[5_[(z)_2_氰基_2_(3 4_二甲 氧基苯基）乙烯基]噻吩-2-基]哌啶-4-基酯、 氮雜環庚烷-1-基乙酸-1-[5-[(Ζ)-2-氰基-2-(3,4-二甲氧基 苯基）乙烯基]噻吩-2-基]哌啶-4-基酯、 氮雜環辛烷-1-基乙酸-1-[5-[(Ζ)-2-氡基-2-(3,4-二甲氧基 苯基）乙烯基]噻吩_2_基]哌啶-4-基酯、 (4-甲基哌畊-i_基）乙酸氰基_2(34二曱氧 基苯基）乙稀基]η塞吩_2_基]略咬_4_基酯、 嗎啉-4-基乙酸d-dOl氰基_2(34二甲氧基苯基） 乙烯基]嘆吩·2-基]略咬_4_基酯、 硫代嗎啉-4·基乙酸氰基_2(34二甲氧基苯 基）乙烯基]噻吩-2-基]哌啶-4-基酯等。 縮合反應較好的是在烷醇鈉、氫氧化鈉、氫氧化鉀等鹼 之存在下而進行。於烷醇鈉之存在下的縮合反應例如可 136554.doc 200927107 2甲醇、乙醇等醇溶劑t，在冰浴冷卻後於回流溫度下進 行又*氫氧化鈉之存在下的縮合反應可於二氣罗燒、 氣仿等惰性溶劑與水之混合溶财，添加喊錄等而進 行。 本發月之具有雜環之丙烯腈衍生物或其鹽，可直接投 予’亦可將其與其他藥學上所容許之分散助劑、賦形劑等 載劑進行混合，而以粉劑、液劑、膠囊劑、懸浮劑、乳 ❹ ❹ 劑、糖漿劑、醜劑、顆粒劑、丸劑、鍵劑、口含劑、檸檬 劑等經口劑、或注射劑等劑形使用。該等製劑可藉由取所 周知之方法製造。 冰作為載劑’可列舉··例如甘露糖醇、乳糖、葡聚糖等水 +性㈣㈣至寡_或者多糖類；例如_基纖維素、 每丙基f基纖維素、甲基纖維素等凝膠形成性或水溶性纖 =類’例如結晶性纖維素、心纖維素、交聯幾甲基纖 類、納、及該等之衍生物等吸水性且水難溶性之纖維素 / 丙基殿粉、竣甲基殿粉、交制粉、直鏈殿 粉'果滕及該等之衍生物等吸水性且水難溶性 :多=例如阿拉伯膠、西黃㈣、葡甘露聚糖及該等 =生=等吸水性且水難溶性之樹膠類；例如聚洛 =乙=聚丙稀酸及其鹽、交聯聚乙烤醇、聚甲基丙稀 質膽J醇Γ等之付生物等交聯乙婦基聚合物類：填脂 質膽固醇等形成核糖趙等分子聚集體之脂質類等。 化化合物的溶解性較低之情形時，可實施可溶 為可溶化處理’可列舉通常應用於醫藥之方 136554.doc -15- 200927107 法例如·添加聚氧乙烯醇醚類、聚氧乙烯醯酯類、山梨 糖醇酐醯自曰類或聚氧乙烯山梨糖醇酐醯酯類等界面活性劑 之方法，使用聚乙二醇等水溶性高分子之方法等。又，亦 可視需要而採用使本發明之化合物形成可溶性鹽之方法、 使用環糊精等使其形成包合物之方法等。可溶化處理之方 法可根據目標之丙稀腈衍生物或其鹽而適當變更。 . 由於本發明之化合物可強力地抑制BCRP，故而可用作 BCRP抑制劑、抗癌劑抗藥性克服劑或抗癌劑效果增強 ❹ 劑，進而可將其與可成為BCRP之受質的抗癌劑組合，製 成抗癌劑組合物而使用。本發明之化合物對於因投予抗癌 劑而獲得與BCRP有關之抗藥性的癌症，可用作抗癌劑抗 藥性克服劑，又，對於原本表現BCRP且對抗癌劑為低敏 感性之癌症’可用作抗癌劑效果增強劑。作為以本發明之 BCRP抑制劑作為有效成分的抗癌劑抗藥性克服劑及抗癌 劑效果增強劑之對象的抗癌劑，若為可成為BCRp或其類 似物之受質的抗癌劑’則無特別限制，例如可列舉：鹽酸 伊立替康/CPT-11 (活性本趙：SN-38)或拓朴替康等拓樸異 構酶I抑制劑、米托蒽醌、多柔比星、唐黴素（Daunorubicin)、 比生群（bisantrene)或依託泊苷等拓樸異構酶π抑制劑、甲 胺喋呤等葉酸代謝拮抗藥、吉米沙星或伊馬替尼等分子標 把治療藥等。再者，此處若BCRP之類似物係與BCRP同樣 地與癌症之抗藥性或抗癌劑之敏感性有關者，則並無特別 限制。 本發明之BCRP抑制劑之投予量可根據投予方法或患者 136554.doc •16- 200927107 之症狀等而適當調整，成人每日較好的是投予！ mg〜i〇 呂、更好的是〗〇〇!^〜〗〇§、尤其好的是5〇()1^〜】〇8。又， 抗癌劑與BCRP抑制劑之比例並無特別限定，其較好的範 圍根據所使用之抗癌劑、抑制劑之種類等而有所不同，例 如於使用鹽酸伊立替康作為抗癌劑之情形時，以重量換 . 算，抗癌劑：BCRP抑制劑之比例較好的是1 :卜丨：5〇〇， . 更好的是1 : 1〜1 : 100，尤其好的是i : i〜i : 1〇。 [實施例] © 其次，列舉實施例更詳細地說明本發明，但該等實施例 僅為例示，並非限定本發明者。 實施例1 .具有雜環之丙婦腈衍生物之製造 (製造步驟1) 5-(4-經基略咬-1_基）嗟吩·2_甲搭之製造 步驟（向5->臭嗟吩-2-甲搭中導入4-經基娘咬之步驟） 向反應容器中加入5-溴噻吩-2-甲醛，並添加水。添加3 當量之4-羥基哌啶，於回流下攪拌數十分鐘後進行徹夜攪 _ 样°反應結束後，立即利用濾紙進行過濾，以流水將濾液 冷卻數十分鐘’繼而以冰冷卻數小時。吸濾取得析出之結 晶’以冷水清洗’並除去水分後，溶解於氯仿中。以無水 硫酸納使氣仿溶液乾燥，利用矽膠墊進行過濾，再以氣仿 進灯清洗直至濾液顏色變淡為止。於減壓下濃縮濾液，於 結晶開始析出時停止濃縮，添加正己烷，於室溫下徹夜攪 掉。過濾取得結晶，以正己烷進行清洗，於減壓下進行乾 燦’而獲得5-(4-羥基哌啶_1_基）噻吩_2·甲醛。 (製造步驟2) (Ζ)-2-(3,4-二曱氧基苯基）-3-[5-(4-羥基哌 136554.doc 200927107 咬-1-基）嘆吩-2-基]丙烯腈之製造步驟（5_(4_M基哌咬小 基）售吩·2_甲路與3,4_:甲氧基苯乙腈之縮合步驟） 將5-(4-羥基哌啶·丨_基）噻吩_2·甲醛及34_二甲氧基苯乙 腈添加至反應容器中，並溶解於乙醇中。添加乙醇鈉於 回流下進行授拌。反應結束後，以流水將反應液冷卻數十 分鐘，添加水，再攪拌數十分鐘。吸濾取得析出之結晶， . 依序以水、乙醇、己烷進行清洗後，於減壓下進行乾燥， *獲得(Ζ)-2-(3,4-二甲氧基苯基)_3_[5·(4_羥基哌啶卜基)噻 ® 吩-2-基]丙埽腈。 (製造步驟3 : Α法）演乙酸·1-[5-[(Ζ)_2-氰基-2-(3,4-二 甲氧基苯基）乙烯基]噻吩基]哌啶_4基酯之製造步驟 於氬氣環境下，將（Z)_2_(34_二曱氧基苯基）3_[5(4_羥 基哌啶-1-基）噻吩_2-基]丙烯腈添加至反應容器中，並溶解 於氣仿中，添加吡啶，於冰浴中攪拌數十分鐘。向反應液 中添加溴乙酿溴後，於冰浴中攪拌數小時，並於室溫下徹 ◎ 夜攪拌。反應結束後，添加氣仿、水進行分液。以水清洗 有機層後，以無水硫酸鎂使其乾燥，於減壓下蒸潑除去溶 劑。藉由矽膠管柱層析法對殘留物進行精製，而獲得溴乙 酸-1-[5-[(Ζ)-2-氰基-2·(3,4-二甲氧基苯基）乙烯基]噻吩-2_ 基]哌啶-4-基酯。 (製造步驟3 : Β法）溴乙酸-1-[5-[(Ζ)-2·氰基-2-(3,4-二 甲氧基苯基）乙烯基]噻吩-2-基]哌啶-4-基酯之製造步驟 將（Ζ)-2-(3,4·二甲氧基苯基）-3·[5_(4_羥基哌啶_丨_基）噻 吩-2-基]丙烯腈添加至反應容器中，並溶解於四氫呋喃 136554.doc -18- 200927107 中，再進行冰浴冷卻。添加氫氧化納’於冰浴中挽掉數十 分鐘。向反應液添加溴乙醯氣後，於回流下授拌數小時。 放置冷卻後，向反應液中添加氣仿、水而進行分液。以水 清洗有機層後’以無水硫酸鈉使其乾燥，於減壓下蒸销除 去溶劑。藉由矽膠管柱層析法對殘留物進行精製，而獲得 溴乙酸-1-[5-[(Ζ)-2-氰基-2-(3,4-二甲氧基苯基）乙烯基]噻 吩-2-基]略咬-4-基酿。 (製造步驟4)向溴乙酸_1-[5-[(Ζ)-2·氰基-2-(3,4-二甲氧 基苯基）乙稀基]售吩-2-基]略咬-4-基醋中導入胺之步驟 於氬氣環境下’將溴乙酸-l-[5-[(Z)-2-|L基-2-(3,4-二甲 氧基本基）乙烯基]嗟吩-2-基]β辰咬-4-基S旨添加至反應容器 中’並溶解於氣仿中，再於冰浴中攪拌數十分鐘。添加所 期望之二級胺及三乙胺等三級胺，於冰浴中攪拌數小時， 並於室溫下徹夜攪拌。反應結束後，以水清洗反應液，以 無水硫酸鈉使有機層乾燥，於減壓下蒸餾除去溶劑。藉由 石夕膠管柱層析法對殘留物進行精製，而獲得所期望之丙烯 腈衍生物。 以下表示衍生物之製造及分析結果之具體例。 旅啶-1-基乙酸-1_[5-[(Ζ)-2_氰基-2-(3,4-二甲氧基苯基） 乙烯基]噻吩-2-基]哌啶_4_基酯（化合物1)之製造 使用5-溴噻吩_2_甲醛（42.30 g)及4-羥基哌啶（67.30 g)， 依據（製造步驟1)導入胺（產量33.00 g，產率71%)，依據（製 造步驟2)使所獲得之5·(4-羥基哌啶-1-基）噻吩-2-曱醛 (10.50 g)及3,4-二曱氧基苯乙腈（8.86 g)縮合，而獲得（Ζ)- 136554.doc -19· 200927107 2-(3,4-二曱氧基苯基）_3_[5-(4-羥基哌啶-1-基）噻吩-2-基]丙 烯腈（產量13.50g，產率73%)。將所獲得之（Z)-2-(3,4-二曱 氧基苯基）-3-[5-(4-羥基哌啶-1-基）噻吩-2-基]丙烯腈（20.00 g)溶解於氯仿（650 ml)中，進而依據（製造步驟3)A法使吡 啶（6.41 g)及溴乙醯溴（14.13 g)進行反應（產量23.00 g，產 ' 率87%)，將所獲得之溴乙酸_i_[5-[(Z)-2-氰基-2-(3,4-二曱 • 氧基苯基）乙蝉基]嗟吩-2-基]旅咬-4-基酯（2.30 g)溶解於氣 仿（100 ml)中，進而依據（製造步驟4)使派π定（533 mg)及三 〇 乙胺（658 mg)進行反應，而獲得目標物（產量1.40 g，產率 60%) ° (4-羥基哌啶-1-基）乙酸-1-[5-[(Ζ)-2-氰基-2-(3,4-二曱氧 基苯基）乙烯基]噻吩-2-基]哌啶-4-基酯（化合物2)之製造 將上述化合物1之製造中所獲得之溴乙酸-1-[5-[(Ζ)-2-氰 基-2-(3,4-二甲氧基苯基）乙烯基]嗟吩-2-基]派咬-4-基醋 (910 mg)溶解於氣仿（50 ml)中，進而依據（製造步驟4)使4_ 0 羥基旅啶（233 mg)及三乙胺（233 mg)進行反應，而獲得目 標物（產量622 mg，產率64%)。 'H-NMR (CDCls) δ： 7.37 (1Η, s), 7.22 (1H, d, J = 4.4)j . 7.13 (1H，dd，J = 8.5, 2.2)，7.04 (1H，d，J = 2.2)，6.87 (1H, J = 8.5), 6.05 (1H, d, J = 4.4), 5.08-5.02 (1H, m), 3.94 (3H, s), 3.90 (3H, s), 3.77-3.70 (1H, m), 3.58-3.52 (2H, m), 3.31-3.27 (2H, m), 3.25 (2H, s), 2.87-2.82 (2H, m), 2.42-2.36 (2H, m), 2.43-2.35 (2H, m), 1.95-1.82 (4H, m), 1.7〇. 1.60 (2H, m) 136554.doc -20- 200927107 派咬-1-基乙酸-1-[5-[(Ζ)_2-氰基-2-(3,4_二甲氧基苯基） 乙婦基]嗟吩-2 -基]略咬-4 -基醋鹽酸鹽（化合物3)之製造 於化合物1(950 mg)中添加6 m〇m鹽酸（352 μ丨）、2-丙醇 (25 ml)、乙醇（10 mi)，於約8(TC下進行加熱溶解。放置冷 卻後’於減壓下蒸餾除去溶劑，利用2_丙醇-甲醇系對殘留 物進行再結晶’藉此獲付目標物（產量869 mg，產率85%)。 H-NMR (DMSO-de) δ · 10.01 (1Η, br s), 7.94 (1H s) 7.42 (1H，d，J = 4.4)，7.17 (1H，d，J = 2.2)，7.09 (ih, dd，j =8.8, 2.2)，7.01 (1H，d，J = 8.8)，6.32 (1H，d’ J = 4.4)， 5.13- 5.09 (1H, m), 4.23 (2H, br s), 3.83 (3H, s), 3.78 (3H, s), 3.56-3.42(4H, m), 3.40-3.30 (4H, m), 3.05-2.95 (2H, m) 2.08-2.02 (2H, m), 1.85-1.65 (6H, m) (4-羥基哌啶-1-基）乙酸小[5_[(Z)_2_氰基_2_(3,4二甲氧 基苯基）乙烯基]噻吩-2-基]哌啶-4-基酯鹽酸鹽（化合物4) 之製造 於化合物2(956 mg)中添加6 mol/1鹽酸（342 μΐ)、2_两醇 (30 ml)、甲醇（30 ml)，於約80。〇下進行加熱溶解β放置冷 卻後，於減壓下蒸餾除去溶劑，利用2_丙醇使殘留物進行 再結晶’藉此獲得目標物（產量947 mg，產率93%)。 iH-NMR (DMSO-d6) δ: 10.14 (1H, br s)，7.94 (ιΗ 勾 7.42 (1H，d, J = 4.4)，7.17 (1H，d, J = 2.0)，7.09 (1H，dd j =8.4’ 2.0)，7.01 (1H，d，J = 8.4)，6.32 (1H，d，J = 4 4、 / 5 5.13- 5.07 (1H，m)，4.29-4.23 (2H, m)，3.83 (3H，s)，3 78 (3H，s)，3.58-3,46 (3H，m)，3.40-3.26 (6H，m)，2.07] 9〇 136554.doc •21 · 200927107 (4H, m), 1.85-1.65 (4H, m) 哌啶-1-基乙酸-1-[5-[(Ζ)_2_氰基_2_(3,4_二甲氧基苯基） 乙烯基]噻吩-2-基]哌啶-4·基酯甲磺酸鹽（化合物5)之製造 於化合物1(951 mg)中添加甲磺酸（137 μ1)、2丙醇（2〇 ml)、甲醇（5 ml)，於約80。〇下進行加熱溶解。放置冷卻 後，於減壓下蒸餾除去溶劑，利用2_丙醇_甲醇系使殘留物 進行再結晶，藉此獲得目標物（產量1078 mg，產率95%)。 'H-NMR (DMSO-d6) δ ： 9.78 (1Η, br s), 7.93 (1H, s),

7.42 (1H，d，J = 4.4)，7.17 (1H，d，J = 2.2)，7.09 (1H，dd，J 8.8, 2.2), 7.01 (1H, d, J = 8.8), 6.32 (1H, d, J = 4.4), 5.13-5.09 (1H, m), 4.24 (2H, br s), 3.83 (3H, s), 3.78 (3HS s), 3.55-3.40 (4H, m), 3.38-3.30 (4H, m), 3.06-2.94 (2H, m), 2.29 (3H, s), 2.08-2.02 (2H, m), 1.85-1.65 (6H, m) (4-羥基哌啶-1-基）乙酸氰基-2(34•二曱氧 基苯基）乙烯基]噻吩-2-基]哌啶-4-基酯甲磺酸鹽（化合物 6)之製造 於化合物2(1029 mg)中添加甲磺酸（144 w)、2丙醇（2〇 ml)、曱醇（10 ml)，於約8〇<t下進行加熱溶解。放置冷卻 後，於減壓下蒸餾除去溶劑，利用2_丙醇-甲醇系使殘留物 進行再結晶，藉此獲得目標物（產量696 mg，產率57%)。 H-NMR (CDC13) δ : 11.32 (1H，br s), 7.37 (1H s) 7 22 (1H，d, J = 4.4)，7.13 (1H, dd, J = 8.5, 2.2)，7·〇4 (1H，d，J = 2.2), 6.88 (1H, d, J - 8.5), 6.06 (1H, d, J = 4.4^ 5 18 5 12 (1H, m), 4.29 (1H, br s), 3.95 (3H, s), 3.93 (2H, br s) 3 91 136554.doc •22- 200927107 (3H, s), 3.65-3.52 (4H, m), 3.50-3.38 (2H, m), 3.33-3.25 (2H, m), 2.78 (3H, s), 2.48-2.30 (2H, m), 2.15-2.05 (2H, m), 2.00-1.87 (4H, m), 1.65-1.55 (2H, m) 吖丁啶-1-基乙酸-l-[5-[(Z)-2-氟基-2-(3,4-二甲氧基苯 基）乙烯基]噻吩-2-基]哌啶-4-基酯（化合物7)之製造 ' 以與化合物2相同之方式，依據（製造步驟4)使用π丫丁咬 及三乙胺進行反應，而獲得目標物（產率74%) 〇 ^-NMR (CDC13) δ ： 7.37 (1Η, s), 7.22 (1H, d, J = 4.1), 〇 7.13 (1H, dd, J = 8.3, 2.2), 7.04 (1H, d, J = 2.2), 6.87 (1H, d, J = 8.3), 6.05 (1H, d, J = 4.1), 5.07-4.98 (1H, m), 3.95 (3H, s), 3.91 (3H, s), 3.59-3.50 (2H, m), 3.35 (4H, t-like, J =7.1), 3.31-3.22 (2H, m), 3.26 (2H, s), 2.14 (2H, quintlike, J = 7.1), 2.08-1.97 (2H, m), 1.92-1.79 (2H, m) 吖丁咬-1-基乙酸- l-[5-[(Z)-2-氰基-2-(3,4-二曱氧基苯 基）乙烯基]噻吩-2-基]哌啶-4-基酯甲磺酸鹽（化合物8)之 製造 將化合物7(300 mg)懸浮於甲醇（2 mL)中，添加1 mo〗"甲 確酸（曱醇溶液）(630 μΐ)將其溶解。於減壓下蒸餾除去溶 劑，於殘留物中添加醚而使其形成粉末，藉此獲得目標物 • (產量 345 mg，產率 95%)。 MS (FAB)m/z ： 468 [M+H] + !H-NMR (CDCI3) δ ： 11.80 (1H, br s), 7.37 (1H, s), 7.21 (1H，d，J = 4.1)，7.13 (1H，dd，J = 8.5, 2.2)，7.03 (1H，d，j = 2.2)，6.87 (1H，d，J = 8.5)，6.06 (1H，d, J = 4,1)，5.17-5.08 136554.doc •23· 200927107 (1H，m)，4.63-4.52 (2H，m)，4.15-4.02 (4H，m)，3.94 (3H， s), 3.90 (3H, s), 3.60-3.50 (2H, m), 3.34-3.24 (2H, m), 2.87-2.75 (1H, m), 2.81 (3H, s), 2.56-2.41 (1H, m), 2.12-2.02 (2H, m), 1.97-1.85 (2H, m) 吡咯啶-1-基乙酸-1-[5-[(乙)-2-氰基-2-(3,4-二曱氧基苯 基）乙烯基]噻吩-2-基]哌啶-4·基酯（化合物9)之製造 - 以與化合物2相同之方式，依據（製造步驟4)使用吡咯啶 及三乙胺進行反應，而獲得目標物（產率74%)。 O lH-NMR (CDC13) δ ： 7.37 (1Η, s), 7.22 (1H, d, J = 4.4), 7.13 (1H, dd, J = 8.3, 2.2), 7.04 (1H, d, J = 2.2), 6.87 (1H, d, J = 8.3), 6.05 (1H, d, J = 4.4), 5.10-5.02 (1H, m), 3.95 (3H, s), 3.91 (3H, s), 3.62-3.50 (2H, m), 3.37 (2H, s), 3.32-3.22 (2H, m), 2.72-2.58 (4H, m), 2.10-1.99 (2H, m), 1.94-1.78 (6H, m) 。比咯啶-1-基乙酸-l-[5-[(Z)-2-氰基-2-(3,4-二曱氧基苯 基）乙烯基]噻吩-2·•基]哌啶-4-基酯曱磺酸鹽（化合物10)之 製造 將化合物9(300 mg)懸浮於甲醇（3 ml)中，並添加1 mol/1 * 甲磺酸（曱醇溶液）（620 μΐ)而將其溶解。將該溶解液一面於 冰浴冷卻下進行攪拌，一面添加至醚（50 ml)-2-丙醇（10 ml)之混合液中，藉此獲得目標物（產量342 mg，產率 95%) 〇 MS (FAB)m/z ： 482 [M+H] + ^-NMR (CDCI3) δ ： 11.58 (1H, br s), 7.37 (1H, s), 7.21 136554.doc •24· 200927107 (1H，d，J = 4.4)，7.12 (1H，dd，J = 8.5, 2.2)，7.04 (1H，d，J = 2.2)，6.87 (1H, d，J = 8,5)，6.06 (1H，d，J = 4.4) ’ 5.18-5.08 (1H，m)，4.11 (2H，s)，4.05-3.91 (2H，br m)，3.94 (3H，s)， 3.90(3H,s),3.61-3.49(2H，m)，3.35-3.22 (2H，m)，3.18-3.01 (2H, br), 2.77 (3H, s), 2.27-1.85 (8H, m) (2-甲基哌啶-1-基）乙酸“-[[[(Z)-2-氰基-2-(3,4-二甲氧 - 基苯基）乙烯基]噻吩-2-基]哌啶-4-基酯（化合物Η)之製造 以與化合物2相同之方式’依據（製造步驟4)使用2-甲基 〇 哌啶及三乙胺進行反應，而獲得目標物（產率73 %)。 !H-NMR (CDC13) δ ： 7.36 (1Η, s), 7.22 (1H, d, J = 4.4), 7.13 (1H, dd, J = 8.3, 2.2), 7.04 (1H, d, J — 2.2), 6.87 (1H, d，J = 8.3)，6.05 (1H，d，J = 4.4)，5.09-5.00 (1H, m), 3.94 (3H，s)，3.90 (3H，s)，3.60-3.48 (2H，m)，3.41 (2H，d，J = 4.1), 3.34-3.22 (2H, m), 2.91-2.82 (1H, m), 2.62-2.47 (2H, m), 2.09-1.98 (2H, m), 1.81-1.80 (2H, m), 1.77-1.50 (4H, ^ m), 1.38-1.21 (2H, m), 1.08 (3H, d, J = 6.3) (2-甲基略咬-1 -基）乙酸-1-[5-[(Z)-2-氣基-2-(3，4-二甲氧 基苯基）乙烯基]噻吩-2-基]哌啶-4-基酯甲磺酸鹽（化合物 * 12)之製造 • 將化合物11(312 mg)懸浮於曱醇（2 ml)中，並添加1 mol/Ι甲磺酸（曱醇溶液）(610 μΐ)而將其溶解。於減壓下蒸 餾除去溶劑，於殘留物中添加醚而使其形成粉末，藉此獲 得目標物（產量320 mg，產率86%)。 MS (FAB)m/z ： 510 [M+H] + 136554.doc -25 - 200927107 'H-NMR (CDC13) δ ： 10>84 (1Hj br s), 7.38 (1H, s), 7.22 (1H, d, J = 4.1), 7.14 (1H, dd, J = 8.3, 2.0), 7.05 (1H, d, J = 2.0)，6.88 (1H, d, J = 8.3)，6.08 (1H, d，J = 4.1)，5.15-5.06 (1H，m)，4.24 (1H，d，J = l8 3)，4 〇9 〇h, d, J = 18.3)，3.94 (3H, s), 3.90 (3H, s), 3.75-3.64 (1H, m), 3.63-3.43(4H, m), 3.35-3.24 (2H, m), 2.83 (3H, s), 2.15-2.03 (3H, m), 1.98-1·79 (6H，m)，1.62-1.48 (1H, m)，1.43 (3H, d, J = 6.3) (3-羥甲基哌啶-1-基）乙酸_1_[5-[(2：)_2_氰基_2-(3,4-二 〇 甲氧基苯基）乙稀基]嘆吩-2-基]0辰°定-4-基醋（化合物13)之 製造 以與化合物2相同之方式，依據（製造步驟4)使用3-羥曱 基哌啶及三乙胺進行反應，而獲得目標物（產率90%)。 'H-NMR (CDC13) δ ： 7.36 (1Η, d, J = 0.5), 7.22 (1H, dd, J = 4.4, 0.5), 7.13 (1H, dd, J = 8.5, 2.2), 7.04 (1H, d, J = 2.2), 6.87 (1H, d, J = 8.5), 6.05 (1H, d, J = 4.4), 5.09-5.00 (1H, m), 3.94 (3H, s), 3.90 (3H, s), 3.67-3.49 (4H, m), 3.33-3.22 (2H, m), 3.23 (2H, d, J = 5.1), 2.90-2.80 (1H, m), 2.78-2.67 (1H, m), 2.39-2.17 (2H, m), 2.10-1.97 (2H, m), 1.93-1.55 (7H, m), 1.22-1.08 (1H, m) (3-經甲基派咬-1-基）乙酸-l-[5-[(Z)-2-氰基-2-(3,4-二甲 氧基苯基）乙烯基]噻吩-2-基]哌啶-4-基酯甲磺酸鹽（化合 物14)之製造 將化合物13(330 mg)懸浮於甲醇（3 ml)中，並添加1 mol/1甲磺酸（甲醇溶液）（630 μΐ)而將其溶解。於減壓下蒸 136554.doc -26- 200927107 餾除去溶劑’於殘留物中添加醚而使其形成粉末，藉此獲 得目標物（產量349 mg，產率89%)。 MS (FAB)m/z ： 526 [M+H]+ !H-NMR (CDC13) δ ： 10.42 (1H, br s), 7.37 (1HS s), 7.21 (1H，d，J = 4.1)，7.12 (1H，dd，J = 8.5, 2.0)，7.04 (1H，d，J = 2.0)，6.87 (1H，d，J = 8.5)，6.10 (1H，d，J = 4.1)，5.19-5.10 (1H, m), 4.12 (1H, d, J = 16.8), 4.01 (1H, d, J = 16.8), 3.94 (3H, s), 3.90 (3H, s), 3.81-3.65 (2H, m), 3.61-3.50 (2H, m), 3.47-3.38 (1H, m), 3.35-3.25 (2H, m), 3.20-3.05 (4H, m), 3.02-2.89 (2H, m), 2.80 (3H, s), 2.14-1.78 (7H, m) 氮雜環庚烷-1-基乙酸-l-[5-[(Z)-2-氰基·2-(3,4-二甲氧基 苯基）乙烯基]嗟吩-2-基]旅咬_4-基醋（化合物15)之製造 以與化合物2相同之方式，依據（製造步驟4)使用六亞甲 基亞胺及三乙胺進行反應，而獲得目標物（產率75%)β !H-NMR (CDC13) δ ： 7.36 (1Η, s), 7.22 (1H, d, J = 4.4), 7.13 (1H, dd, J = 8.5, 2.2), 7.04 (1H, d, J = 2.2), 6.87 (1H, d, J = 8.5)，6.05 (1H, d，J = 4.4)，5.08-5.00 (1H, m)，3.94 (3H, s), 3.90 (3H, s), 3.60-3.50 (2H, m), 3.41 (2H, s), 3.23-3.22 (2H, m), 2.82-2.71 (4H, m), 2.09-1.98 (2H, m), 1.92-1.80 (2H, m), 1.72-1.55 (8H, m) 氮雜環庚烷-1-基乙酸-1-[5_[(2)-2-氰基-2-(3,4-二甲氧基 苯基）乙烯基]噻吩-2-基]哌啶_4_基酯甲磺酸鹽（化合物16) 之製造 將化合物15(300 mg)懸浮於甲醇（2 ml)中，並添加1 136554.doc •27· 200927107 mol/l甲績酸（甲醇溶液）（590 μΐ)而將其溶解。於減壓下蒸 餾除去溶劑，於殘留物中添加醚而使其形成粉末，藉此獲 得目標物（產量327 mg，產率92%)。 MS (FAB)m/z ： 510 [M+H] + ^-NMR (CDC13) δ ： 11.10 (1H, br s), 7.37 (1H, s), 7.22 (1H, d, J = 4.1), 7.13 (1H, dd, J = 8.5, 2.2), 7.04 (1H, d, J = 2.2), 6.88 (1H, d, J = 8.5), 6.07 (1H, d, J = 4.1), 5.17-5.09 (1H, m), 4.11 (2H, d, J = 3.2), 3.94 (3H, s), 3.90 (3H, s), ❹ 3.67-3.50 (4H，m)，3.42-3.24 (4H，m)，2.82(3H，s)，2.20- 2.03 (4H, m), 1.98-1.82 (6H, m), 1.74-1.61 (2H, m) 氣雜環辛烧-1-基乙酸- l-[5-[(Z)-2 -氰基-2-(3,4-二曱氧基 苯基）乙烯基]噻吩-2-基]哌啶-4-基酯（化合物17)之製造 以與化合物2相同之方式，依據（製造步驟4)使用七亞甲 基亞胺及三乙胺進行反應’而獲得目標物（產率71 °/〇)。 ^-NMR (CDCI3) δ ： 7.37 (1Η, s), 7.22 (1H, d, J = 4.1), 7.13 (1H, dd, J = 8.5, 2.2), 7.04 (1H, d, J = 2.2), 6.87 (1H, ^ d, J = 8.5), 6.05 (1H, d, J = 4.1), 5.08-5.00 (1H, m), 3.95 (3H, s), 3.91 (3H, s), 3.60-3.50 (2H, m), 3.39 (2H, s), 3.34-* 3.24 (2H, m), 2.77-2.65 (4H, br), 2.09-1.99 (2H, m), 1.92- 1.80 (2H, m), 1.68-1-50 (l〇H, m) 氮雜環辛烷-1-基乙酸^-[^[(Z)-2氰基-2-(3,4_二甲氧基 苯基）乙豨基]噻吩-2-基]派咬-4_基酯曱確酸鹽（化合物18) 之製造 將化合物17(300 mg)懸浮於甲醇（2 ml)中’並添加1 136554.doc -28- 200927107 mol/l甲磺酸（甲醇溶液）（570 μΐ)而將其溶解。於減壓下蒸 餾除去溶劑，於殘留物中添加醚而使其形成粉末，藉此獲 得目標物（產量327 mg，產率92%)。 MS (FAB)m/z ： 524 [M+H] + !H-NMR (CDC13) δ ： 10.60 (1H, br s), 7.37 (1H, s), 7.22 (1H, d, J = 4.1), 7.13 (1H, dd, J = 8.5, 2.2), 7.04 (1H, d, J = 2.2), 6.87 (1H, d, J = 8.5), 6.07 (1H, d, J = 4.1), 5.18-5.09 (1H, m), 4.12 (2H, d, J = 2.9), 3.94 (3H, s), 3.90 (3H, s), ❹ 3.69-3.50 (4H，m)，3.44-3.22 (4H，m)，2.80(3H，s)，2.18- 1.82 (10H, m), 1.78-1.53 (4H, m) (4-甲基哌畊-1-基）乙酸-l-[5-[(Z)-2-氰基-2-(3,4·二甲氧 基苯基）乙烯基]噻吩-2·基]哌啶·4-基酯（化合物19)之製造 以與化合物2相同之方式，依據（製造步驟4)使用4_甲基 哌畊及三乙胺進行反應’而獲得目標物（產率69%)。 'H-NMR (CDC13) δ ： 7.37 (1Η, s), 7.22 (1H, d, J = 4.1), 7.13 (1H, dd, J = 8.5, 2.2), 7.04 (1H, d, 7 = 2.2), 6.88 (1H, d, J = 8.5), 6.05 (1H, d, J = 4.1), 5.08-5.00 (1H, m), 3.95 (3H, s), 3.91 (3H, s), 3.60-3.50 (2H, m), 3.33-3.21 (2H, m), • 3.24 (2H, s), 2.75-2.36 (8H, br m), 2.30 (3H, s), 2.09-1.99 (2H, m), 1.92-1.81 (2H, m) (4-甲基哌畊-1-基）乙酸小[5-[(Z)_2_氰基_2_(3,4-二曱氧 基苯基）乙烯基]噻吩-2-基]哌啶-4·基酯甲磺酸鹽（化合物 20)之製造 將化合物19(270 mg)懸浮於曱醇（2 ml)中，並添加1 136554.doc -29- 200927107 mol/l甲磺酸（甲醇溶液）（530 μΐ)而將其溶解。於減壓下蒸 餾除去溶劑，於殘留物中添加醚而使其形成粉末，藉此獲 得目標物（產量285 mg，產率89%)。 MS (FAB)m/z : 511[M+H] + 'H-NMR (CDC13) δ ： 1 1.60-10.80 (1H, br), 7.37 (1H, s), 7.22 (1H, d, J = 4.1), 7.13 (1H, dd, J = 8.5, 2.2), 7.04 (1H, d, J = 2.2), 6.88 (1H, d, J = 8.5), 6.06 (1H, d, J = 4.1), 5.10-5.00 (1H, m), 3.94 (3H, s), 3.90 (3H, s), 3.62-3.49 (4H, m), 3.41(2H, s), 3.34-3.21 (2H, m), 3.18-3.00 (6H, m), 2.90 (3H, s), 2.82 (3H, s), 2.10-1.99 (2H, m), 1.93-1.81 (2H, m) 嗎啉-4-基乙酸-l-[5-[(Z)-2-氱基-2-(3,4-二甲氧基苯基） 乙烯基]噻吩-2-基]哌啶-4-基酯（化合物21)之製造 以與化合物2相同之方式，依據（製造步驟4)使用嗎啉及 三乙胺進行反應’而獲得目標物（產率73%)。 ^-NMR (CDC13) δ ： 7.37 (1Η, s), 7.22 (1H, d, J = 4.1), 7.13 (1H, dd, J = 8.5, 2.2), 7.04 (1H, d.J = 2.2), 6.87 (1H, d, J = 8.5), 6.05 (1H, d, J = 4.1), 5.10-5.00 (1H, m), 3.94 (3H, s), 3.90 (3H, s), 3.80-3.70 (4H, m), 3.60-3.50 (2H, m), 3.34-3.20 (2H, m), 3.24 (2H, s), 2.65-2.54 (4H, m), 2.ΙΟΙ.98 (2H, m), 1.93-1.80 (2H, m) 嗎啉-4·基乙酸·1-[5-[(Ζ)·2-氰基-2-(3,4-二曱氧基苯基）乙 烯基]噻吩-2-基]哌啶-4-基酯曱磺酸鹽（化合物22)之製造 將化合物21(300 mg)懸浮於甲醇（2 ml)中，並添加1 136554.doc •30- 200927107 mol/l甲磺酸（曱醇溶液）（600 μΐ)而將其溶解。將該溶解液 一面於冰浴冷卻下進行攪拌，一面添加至醚（5〇 mi)中，藉 此獲得目標物（產量340 mg，產率95%)。 MS (FAB)m/z ： 498[M+H]' JH-NMR (CDC13) δ ： 13.00-1 1.00 (1H, br), 7.37 (1H, s), 7.21 (1H, d, J = 4.1), 7.12 (1H, dd, J = 8.5, 2.2), 7.04 (1H, • d, J = 2.2), 6.87 (1H, d, J = 8.5), 6.06 (1H, d, J = 4.1), 5.19-5.10 (1H, m), 4.19-3.97 (4H, m), 4.04 (2H, s), 3.94 © (3H, s), 3.90 (3H, s), 3.80-3.62 (2H, br), 3.58-3.49 (2H, m), 3.38-3.17 (4H, m), 2.78 (3H, s), 2.13-2.03 (2H, m), 1.98-1.86 (2H, m) 實施例2:活體内之抗癌劑抗藥性克服效果（經口投予） 於6週齡之BALB/c系、雄裸小鼠（5隻/群）之鼠蹊部皮 下’移植導入有BCRP基因之人類大腸癌HCT11 6細胞 (HCT116/BCRP細胞）（自財圏法人癌研究會癌化學療法中 心杉本芳一處獲得）(2x 106 cells/0.1 ml/mouse)，自根據 馨 l/2ab2(a為腫瘤之長徑’ b為短徑）算出之推算腫瘤體積達 到約100〜150 mm3之時起，將表1至表4所示之本發明化合 • 物及作為陽性對照化合物之專利文獻3(國際公開第 2006/106778號公報）所揭示的化合物14(〇2-(3,4-二曱氧 基苯基）-3-{5-[4·(2-羥基-乙基）)-旅畊_1-基}噻吩_2_基）丙烯 腈鹽酸鹽：以下稱為前案化合物14)1天〗次經口投予9天 (合計9次），並分別於第1天、第5天、第9天1天1次（合計3 次）靜脈内投予CPT-11(45 mg/kg/day)。本發明化合物之投 136554.doc -31 200927107 予量係設為0.20或0.40 mmol/kg/day，陽性對照化合物之 投予量係設為0.23或0.46 mmol/kg/day。再者，本發明之 化合物3及化合物5係溶解於5%葡萄糖溶液再進行投予， 化合物4及化合物6係溶解於Britton-Robinson緩衝液再進行 投予，前案化合物14係溶解於0.1%Tween 80溶液再進行投 • 予，CPT-11係溶解於生理鹽水再進行投予。對照群僅投予 - 溶劑。自開始投予起第21天，摘取腫瘤並測定重量後，根 據下式算出腫瘤增殖抑制率IR(%): © 腫瘤增殖抑制率IR(%) = (1-投予群之平均腫瘤重量/對照群之平均腫瘤重量）xl〇〇 將其結果示於表1至表4。 如表1至表3所示，可確認：本發明之丙烯腈衍生物在活 體内亦可強力地抑制BCRP，而發揮極為優異之抗癌劑抗 藥性克服效果。 又，可確認：本發明化合物與表4所示之前案化合物 14(在活體内可見優異之抗癌劑抗藥性克服效果）之結果相 〇 比，可發揮更加顯著之抗癌劑抗藥性克服效果。 [表1] 化合物 投予量(mg/kg/day) 腫瘤重量(g) IR 化合物 CPT-11 Mean±S.D (%) 化合物3 108.1 45 0.73±0.07*** 51.9 216.3 45 0.65±0.11*** 54.7 溶劑 0 45 1.19+0.16 21.3 0 0 1.51+0.19 ***P<0.001 :相對於溶劑+CPT-11(HCT116/BCRP)之顯著差異(Duimett檢驗) 136554.doc -32- 200927107 [表2] 化合物 _^予量(mg/kg/day)i2〇r—

腫瘤重量(g) Mean+S.D IR(%)

化合物5 CPT-11 45 0.73+0.12*** 50.9 溶劑 -- 45 45 0.65+0.16*** 1.13+0.07 55.9 23.4 0 0 1.4810.19 ***Ρ<〇·〇〇1 : 相對於溶劑+CPT-11(HCT116/BCRP)之顯著差異(Dunnett檢驗） [表3] --------- 化合物 --t(mg/kg/day) 腫瘤重量(g) IR 化合物 CPT-11 Mean土S.D (%) 化合物4 111.4 45 0.89+0.09*** 31.8 222.8 45 0.70±0.11*** 46.4 化合物6 123.5 45 0.82+0.04*** 36.9 247.0 45 0.76+0.09*** 41.8 溶劑 ~0 ~~ 45 1.22±0.12 6.0 0 0 1.30+0.22 ***ρ<0.001 ： 相對於溶劑+CPT-11(HCT116/BCRP)之顯著差異(Dunnett檢驗） [表4] 化合物 投予量(mg/kg/day) 腫瘤重量(g) IR 化合物 CPT-11 MeaniS.D (%) 前案化合物14 100 45 1.04±0.17 23.9 200 45 0.88±0.14* 35.6 溶劑 0 45 1.16±0_13 15.3 0 0 1.37±0.22 ***Ρ<0·05 :相對於溶劑+CPT-11(HCT116/BCRP)乏顯著差異(Dunnett檢驗）

實施例3 :溶解性 稱量表5所示之本發明化合物或前案化合物14(10 mg)並 將其置於密封容器中，添加水或5%葡萄糖液以使最終濃 度達到100 mg/mL。於室溫下攪拌約30分鐘後，進行離心 分離，藉由高效液相層析法對所獲得之上清夜中之化合物 濃度進行定量。將其結果示於表5。又’對於本發明化合 物（化合物5、12、14、20)及前案化合物14，亦確認該等在 生理鹽水中之溶解性（除添加生理鹽水作為溶劑以外，以 136554.doc -33· 200927107 與上述相同之方式對上清夜中之化合物濃度進行定量）。 本發明化合物（化合物5、8、10、12、14、16、18、 20、22)與前案化合物14相比，於使用水或5%葡萄糖液作 為溶劑時表現出極高之溶解性。又，前案化合物14在生理 鹽水中表現出低溶解性（未滿1 mg/mL)，但另一方面，本 • 發明化合物（化合物5、12、14、20)並不依賴於溶劑成分而 . 表現出較高之溶解性（100 mg/mL以上）。 因此，表示本發明化合物具有極高之溶解性，尤其是具 0 有在投予至患者時不受輸液成分之限制的有用特性。 [表5]

溶劑 水 5%葡萄糖液 前案化合物14 6.6 mg/mL 6.6 mg/mL 化合物5 100 mg/mL 以上 100 mg/mL 以上 化合物8 100 mg/mL 以上 100 mg/mL 以上 化合物10 100 mg/mL 以上 100 mg/mL 以上 化合物12 100 mg/πφ 以上 100 mg/mL 以上 化合物14 100 mg/mL 以上 100 mg/mL 以上 化合物16 100 mg/mL 以上 100 mg/mL 以上 化合物18 100mg/mL 以上 100mg/mL 以上 化合物20 100 mg/mL 以上 100 mg/mL 以上 化合物22 100 mg/mL 以上 100 mg/mL 以上 實施例4 : 混合以下所示之成分 [表6] ，將其混合物進行壓錠。 化合物5 100 mg 乳糖 100 mg 馬鈴薯澱粉 39 mg 微結晶纖維素 30 mg 合成矽酸鋁 30 mg 硬脂酸鈣 1 mg 總量(1錠分） 300 mg 136554.doc -34-

Claims (1)

1. 200927107 十、申請專利範圍： 該丙烯腈衍生物係以通式（1) 1. 一種丙烯腈衍生物或其鹽 表示： [化1]

   2.如請求们之丙烯腈衍生物或其鹽，其中上述a係選自可 具有取代基之下述（3)至（9)中的〗種： [化2] α (4)

   〇、

   ❹ 3. —種丙稀腈衍生物或其鹽’其係選自下述化合物： 哌啶-1-基乙酸-1-[5-[(Ζ)-2·氰基-2-(3,4-二甲氧基苯基） 乙稀基]嘆吩-2-基]派咬-4-基酯； (4-羥基哌啶-1-基）乙酸小[5_[(Ζ)_2_氰基_2_(34二甲 氧基苯基）乙烯基]噻吩-2-基]哌啶-4-基酯； 吖丁啶-1-基乙酸-1-[5-[(Ζ)-2-氰基-2-(3,4-二甲氧基苯 136554.doc 200927107 基）乙歸基]喧吩-2-基]略咬-4-基醋； 0比咯啶-1-基乙酸-1-[5-[(Ζ)-2-氰基-2-(3,4-二甲氧基苯 基）乙稀基]嗟吩-2-基]0底咬-4-基g旨； (2-曱基哌啶-1-基）乙酸小[5_[(ζ)_2·氰基_2·(3,4-二曱 氧基苯基）乙烯基]噻吩-2-基]哌啶_4_基醋； ' (3-羥甲基哌啶-1-基）乙酸-1-[5-[(Ζ)-2·氰基-2-(3,4-二甲 • 氧基苯基）乙稀基]嗟吩-2-基]π辰咬_4_基酿； 氮雜環庚烷-1-基乙酸-1-[5-[(ζ)-2-氰基-2-(3,4-二曱氧 0 基苯基）乙稀基]嘆吩-2-基]派咬_4·基酯； 氮雜環辛烷-1-基乙酸_1-[5-[(2)-2-氟基-2-(3,4-二甲氧 基本基）乙稀基]嚷吩_2_基]娘咬_4·基醋； (4-曱基哌畊_1_基）乙酸4454(2) 2氰基_2_(3 4二甲 氧基本基）乙稀基]嗟吩-2-基]派σ定_4_基_ ; 嗎啉-4-基乙酸氰基_2_(3,4二甲氧基苯基） 乙烯基]噻吩-2-基]派唆·4_基酯。 珍4. 一種醫藥，其係以如請求項丨至3中任一項之丙烯腈衍生 物或其鹽作為有效成分者。 5. —種BCRP抑制劑，其係以如請求項丨至3中任一項之丙 烯腈衍生物或其鹽作為有效成分者。 6. —種抗癌劑抗藥性克服劑或抗癌劑效果增強劑，其係以 如請求項1至3中任—項之丙烯腈衫物或其鹽作為有效 成分者® 7. -種醫藥組合物’其含有如請求項⑴中任一 腈何生物或其鹽、及藥學上所容許之載劑。 . 136554.doc 200927107 8. 一種抗癌劑組合物，其含有如請求項1至3中任一項之丙 烯腈衍生物或其鹽、及可成為BCRP之受質之抗癌劑。

   136554.doc 200927107 七、指定代表圖： (一) 本案指定代表圖為：（無） (二) 本代表圖之元件符號簡單說明： 八、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式： ❹

   136554.doc