TW200916111A - Plant extract and its therapeutic use - Google Patents
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Description
200916111 九、發明說明: 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於一種植物萃取物及其治療用途,即一種治 療增生性疾病及/或炎症的包含甘菊花水性萃取物之組人 物’該組合物於製造用於治療增生性疾病及/或炎症 藥品之用途’及一種治療增生性疾病及/或炎症之方法, 該方法包括對有此需要之人類或動物患者投與有效量之上 述組合物。 本發明特定言之係關於一種治療增生性疾病及/或炎症 的包含甘菊花水性萃取物之組合物,其中該甘菊花為 Flores tubiformis。本發明進一步係關於該組合物之用途, 其特徵在於該病症為癌症,較佳為膠質母細胞瘤或肺癌或 前列腺癌。本發明亦係關於該組合物於製造用於治療炎 症’更佳為潰瘍性結腸炎(Morbus Chron),最佳為多發性 硬化症的醫藥品之用途。 【先前技術】 幾千年以來已知多種植物的治療特性。但是,即至如 今’即使已研究過的植物,對其單個或多個有效組份之屬 性及此等特性卻了解很少,因為醫藥發展通常集中於視爲 具有相當容易檢測特性且可控制其合成之小分子上。
Uteshev等人 ’ Eksp.Klin.Farmakol. (1999 11-12 月)62(6). 52-5闡述了從德國洋甘菊(Matricaria cham〇miUa)在空氣及 浸泡冷卻期間所得到的雜多醣的免疫調節性。Laskova及
Uteshev,Antibiot. Khimioter· (1992 六月)37(6):15-8 闡述 131944.doc 200916111 了從甘菊花中分離的雜多醣的免疫調節作用。水性萃取物 經口投藥或腹腔注射。作者不建議任何治療上的應用,反 而提出其刺激效應取決於劑量療程且主要取決於冷卻測試 小鼠的方式與程度。WO 2005/070440係關於一種以草藥製 劑於治療過敏性氣喘或慢性支氣管氣喘上之用《,其包含 作爲茶葉浸液投與的特定含量之經乾燥及磨碎的甘菊花、 茴香果、黑色種子等。 WO 03/1G1479M述了 -般經由肌肉注射共同投與包含多 種組份的組合物之重要的治療特性。使用的組合物包含甘 菊萃取物,雖'然此無治療活性;❻,其稱爲抗刺激劑,其 存在可減輕注射本身引起的不良影響。 WO 2007/057651揭示了一種從甘菊中移除内毒素之方 法0 【發明内容】 令人吃驚的是,今已發現較佳由水蒸汽蒸館法,從花頭 中得到的甘菊萃取物具有重要的治療特性。已知此等水性 萃取物包含甘菊花頭的揮發性組份,且在歐洲藥典 (European Pharmacopeia)(Matricariae aetheroleum PhEur 5, corrected.5.1)中閣述。 ’ 特疋s之’已發現該等萃取物可減少人類癌細胞中D财 合成且抑制白三烯與IL_6(介白素6)之製造。更令人吃驚的 為’已發現揮發油對白三烯合成之抑制作用在黑小菌香 (Nlgella sativa)種子油存在下會出現協同加強性。 J3J944.doc 200916111 尤其發現已知本身可製造作爲生長因子的介白素6之癌 、二胞與本身可製造白三稀之癌細胞具有敏感性。可推論甘 菊揮發油單獨及與黑小茵香種子油之組合可達到迄今仍音 想不到的消炎性及讓’例如治療炎症、免疫性疾病與 因此’本發明係關於 ♦⑴-種治療增生性疾病及/或炎症的組合物,其包含甘 菊花水性萃取物; ()士⑴之、’且口物’其中水性萃取物為揮發性油,其製 法為包括較佳在減壓下’水蒸汽蒸餾甘菊花的萃取法; (3)如⑴或⑺之組合物,其中甘菊花為Flores tubiformis。 、⑷如⑺印)之組合物,#中水蒸汽“㈣在氣氣下 進行且該方法進一步包含以下步驟 之交聯聚維酮接 (i)將組合物與會與香豆素形成複合物 觸; 物; (Π)移除步驟⑴中形成的交聯聚維剩與香豆素的複合 (i i i)將步驟(i i)中得到的組合物與 殘餘水;及 無水硫酸鈉接觸 移除 分離出硫酸鈉; ’其中該組合物另包含 (iv)從步驟(iii)中得到的組合物中 (5)如(1)至(4)中任一項之組合物 黑小茴香油; 131944.doc 200916111 (6) 如(5)之組合物,其中黑小茴香油為一種經由純化方 法得到的經純化的黑小茴香油,該純化方法包含以下步驟 (1)將黑小茴香油與會與酚類化合物形成複合物的交聯聚 維酮接觸; (ii) 移除步驟⑴中形成的交聯聚維酮與酚類化合物的複 合物; (iii) 將步驟(ii)中得到的黑小茴香油與無水硫酸鈉接觸, 移除殘餘水;及 (iv) 從步驟(iii)中得到的黑小茴香油中分離出硫酸鈉; (7) 如(1)至(6)中任一項之組合物,其特徵在於該病症為 炎症,較佳為選自潰瘍性結腸炎(M〇rbus Chr〇n)及多發性 硬化症組成之群; (8) 如(1)至(6)中任一項之組合物,其特徵在於該病症為 癌症,較佳選自膠質母細胞瘤、肺癌及前列腺癌組成之 群; (9) 如(1)至(7)中任一項之組合物,其特徵在於該炎症由 自體免疫性疾病引起,較佳由介白素6引起,更佳由白三 烯引起,最佳取決於介白素6及/或白三烯之存在; (10) 如(1)至(6)中任一項及之組合物,其特徵在於該 病症由增生性疾病引起,較佳由介白素6引起,更佳由白 三烯引起,最佳取決於介白素6及/或白三烯之存在; (11) 一種以如(1)至(6)中任一項定義之組合物於製造用於 治療增生性疾病及/或炎症的醫藥品之用途; 131944.doc 200916111 (12)如(11)之用途’其中該病症如(7)至(ίο)中任一項定 義; (1 3) —種治療增生性疾病及/或炎症之方法,該方法包括 對有此需要之人類或動物患者投與有效含量之如(1)至(6) 中任一項之組合物;及 (14)如(13)之方法’其中該病症如(7)至(10)中任一項所 定義。 【實施方式】 本發明基於使用較佳由水蒸汽蒸餾得到的甘菊花頭之水 性萃取物所得之數據。正確而言,水性萃取物係由洋甘菊 (Matricaria recutita L. ’習此相關技藝之人士亦稱爲 Matricariae aether〇leum)花頭的揮發性組份組成,此說明 於PhEur 5_1中。本發明進一步根據使用黑小茵香種子油與 甘菊花頭之揮發性油之組合得到的數據。 萃取物可經由任意適合方法得到,包括f此相關技藝之 人士所知的方法。萃取物可使用水性或有機媒介,經由過 渡、層析法、超臨界流體萃取法等’從其它組份中分離得 到。例如,在本發明中使用的物質來自於菊科植物洋甘菊于 (一H"ecutitaL〇的乾花頭或其令的一種或多種物 ^所包含揮發性油、母菊#(—叫、沒葯醇及其他 貝。杈佳方法為將其與交聯聚維酮及硫酸納接觸, 化初得到的揮發性油。 、’屯 ,田此相關技藝之人士已知交聯¥鲍 酮會與酚類化合物盥乐_主,上 聊秋 '准 合殘餘水。分離,…丨八 …-酸鈉會結 離 >、’屯化劑會產生無或幾乎無香豆素、齡及殘 131944.doc 200916111 餘水的萃取物。甘料取物來源很重要。應為花頭,較佳 ^ ^ (Matricaria recutita L.)(Flores tubiformis) f ^ 花。除甘狀揮發性油外,組合物可包含作爲活性成份的 黑小茵㈣子油及乙料胱⑽與抗壞血酸棕櫚酸醋。 使用的組合物應適於注射。爲此,需要移除内毒素、多 酚、香豆素及(經由相關技藝已知的任何適宜方法可移除 之)大分子量組份,例如彼等分子量大於1〇〇〇或1〇,_ 者。 適用於本發明的組合物可經由f此相關技藝之人士所知 的方法調配。應使用醫藥上可接受的組份。術語"醫藥上 可接受的"指其特性及/或物質在如:調配、穩定性、病人 接受性及生物利用率等方面,在藥理學/毒物學觀點上為 病人可接受且在物理/化學觀點上為製造醫藥化學家可接 受。
較佳係經由靜脈内注射投藥,或肌肉注射更佳,最佳經 由吸入器,呈氣霧劑或微米/奈米乳液經呼吸道投藥。 包含活性成份的醫藥組合物可以適合口服的形式,例 如,錠劑、藥片、口含旋、水性或油性懸浮液、可分散粉 末或顆粒、乳液、硬或軟㈣、或糖㈣㈣卜此等組合 物包含-種或多種選自由甜味劑、調味劑、著色劑及防: 劑組成之群的製劑,以提供醫藥上美觀且適口的製劑。錠 劑包含與醫藥上接受的無毒賦形劑混合的活性成份,該等 賦形劑如,例* :惰性稀釋劑(如:碳酸鈣、碳酸鈉:乳 糖、磷酸鈣或磷酸鈉);製粒劑及崩解劑(例如··玉米澱粉 131944.doc -10- 200916111 或藻酸);黏結劑(例如:澱粉、明膠或阿拉伯膠),·及潤取 劑(例如:硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石)。鍵劑可未經塗敷2 其經由已知技術塗敷,以延遲在胃腸道中分解與吸收且提 供長時間之持續作用。例如’可使用延長時間物質,例 如:、單硬脂酸甘油酿或二硬脂酸甘油酉旨。此等亦可經塗敷 形成控制釋放的滲透性治療錠劑。 ==配物亦可呈硬明璆囊,其中活性成份與惰性固體 如.碳_、鱗酸妈或高嶺土)混合,或呈軟明 =橄其中活性成份與水或油媒介(例如花生油、液態石 蠟或撖欖油)混合。 水性懸洋液可包含與適宜賦㈣m 賦形劑為懸浮劑,例如㈣敏…"勿質及等 躞τ基纖維素鈉、甲基纖維素、羥 阿纖維素、藻酸納、聚乙稀基対院嗣、黃箸膠及 脂,或散或潤濕劑’例如:天然鱗脂,例如:㈣ 酸酿,::環::脂肪酸的縮合產物’例如聚氧化乙烯硬脂 乙婦2 與長鍵脂肪醇的縮合產物,例如:十七 乙烯虱基鯨蠟醇,丁心 偏酯的縮合產物,’衣乙烷與衍生自脂肪酸與己糖醇的 酐的偏西匕 例如聚氧乙婦與衍生自脂肪酸與己糖醇 亦可包含一#人 烯山梨醇酐單油酸酯。水性懸浮液 正丙I旨,一 J多種防腐劑’例如:對經基苯甲酸乙醋或 或多種甜味/夕種者色劑’—種或多種調味劑,及-種 油性I 例如蔗糖或糖精。 花生:懸::調配法為取活性成份懸浮於植物油⑼如: 芝麻 '油或椰子油)中或於礦物油(例如液 131944.doc 200916111 體石螺)中。油性懸浮液可包含增稠劑,例如:蜂螺、固 =蠕物醇。可加入甜味劑(例如:上述的彼等)及調 =提供適口的口服製劑。此等組合物可加入抗氧化 劑(例如抗壞血酸)保存。 ::製備水性懸浮液的可分散粉末及顆粒經添加水,使 :乂 分散劑或潤濕劑、懸浮劑及-種或多種防腐劑 二广且的分散劑或满濕劑及懸浮劑為以上所列舉。亦 可匕S甜味劑、調味劑及著色劑。 相二::吏用的醫樂組合物亦可為水包油性乳劑形式。油 =直物油(例如撖視油或花生油)或礙 物。適宜的乳化劑可為天然膠,例如阿拉 r肪心勝’天然磷脂,例如大豆、印磷脂、及衍生自 醇酐的醋或偏',例如山梨醇酐單油《及 單曰一%乳乙烷的縮合產物,例如聚氧乙烯山梨醇酐 早油H _亦可包含甜味劑及調味劑。 糖渡與醜劑可使用甜味劑( 醇或薦糖购己。此等調配物亦包含醇、山梨糖 味劑與著色劑。醫藥組合物可為:射 ^ ^ 町用…、困水性或油性縣 :其液可使用合適分散劑或潤濕劑及嶋 益毒非已述)調配。注射用無菌製劑亦可為含在 :溶溶液或等_== 亦吊使用無菌、不揮發性油你s 不禪發1·生油作爲溶劑或懸浮媒介。於 131944.doc 200916111 的不揮發性油,包含合成的甘油 脂肪酸(例如油酸)可用在注射液 該目的,可使用任何溫和 單醋或甘油二酯。此外, 製劑中。 該組合物亦可呈栓劑形式經直腸投藥 為將藥物與一種在 卿i法 ^ ㊉咖下為固態,但在直腸溫度下為液雖 的適宜的無刺激性賦形曰 樂物。此等物質為可可月旨及聚乙二醇。 釋放 局錢用之適宜組合物為例如乳劑、軟膏、凝膠、溶 或懸浮液的形式。 夜 如上所述’本發明組合物可經由注射投與 經腸式投藥法均適合,但以肌肉注射較佳。 打非 組合物經口投藥亦較佳。在此情況下,及使用通透性逐 t增強的製劑時,胰島素不應包含在口服調配物中'經口 才又藥法特別適合用於獸醫學。 其他活性物質亦可用於個體。雖然其他物質不一定必 要^已發現某些通常經口投與的類固醇與維生素可支持 或提高醫藥品效果。適宜的類固醇激素可藉由暴露一些順 反:’藉助於必需代謝物(例如維生素及胺基酸),來提高 特定蛋白質之合成。適宜的類固醇實例為雌二醇、諾: (nandr〇】〇ne)及雌三醇。亦可投與維生素(如:A、D及/或 E) °維生素a的功能為保存上皮組織的完整,在蛋白質合 成中發揮作用,及穩定細胞 膜亦及次細胞膜。 、 旦ϋ旧-些物質的適宜劑量已給出一些指示,但精確劑 罝及技樂頻率取仍決於多種因素。如習此相關技藝之人士 131944.doc -13· 200916111 習知者,此等因素包括使用的特定組份、所處理的特定病 症、病症的嚴重性、病人的年齡、重量及全身情況,及個 體可能服用之其他藥物。 實例 以下實例進一步闡述本發明。 實例1-對THP1 (巨噬細胞)中介白素6釋放之抑制活性 樣品及對照物質 測試樣品 種類 提供者 產品號 批號 會員號 黑小茴香 (Nigella)油 Nigellae oleum Hanseler AG 26-4150-1 2006.08.0537 ViP_Nig'07_8 洋甘菊 (Matricaria) 精油 Matricariae Aetheroleum PhEur Hanseler AG 1-4925-2 2006.09.0181 ViP_Matr'〇7_78 對照物質 單號 批號 提供者 實驗 NDGA 74540 422 780/1 5400 Fluka 對分化之HL-60細胞上5-LOX之抑制作用 IL-6抑制作用分析法 分析法 細胞株 樣品 分析法中樣品含量 (以油重量為基準計) 溶劑 重覆 次數 IL-6抑制 作用* 分化的 THP 1 ViP_Nig'07_8 300 ng3 3 \ig, 30 μ§/ηι1 純a〇H 2 ViP_Matr'07_78 300 ng,3 pg, 30 μ§/ηι1 S.O, 2 *該分析法重覆兩次 對THP-1細胞中IL-6之抑制作用分析法 131944.doc -14- 200916111 ’ /、先、、’i PMA (〇. 125 χ 106細胞/孔)分化的細胞(人ΤΗΡ_ 1}在37<:下預培養30分鐘。反應由LPS (1 Ug/ml)引發且培 養在37 C進行24小時。陰性對照t(〇)使用未經Lps刺激的分 析混合物[參考1]進行。 IL 6的疋1法係使用Cayman編號:583361的酶免疫分析 (EIA)套組進行。光密度在波長 41 5 nm下測量。使用至少5 種不同濃度的標準曲線計算含量。 (χ 每個取樣點分別進行2重覆。與劑量相關的抑制值係以 相對於陽性對照組之數值的百分比表示。採用程式
GraphPad-Prism (Version 4, GraphPad Software Inc., San
Diego, CA,USA)決定IC5〇值(相當於在5〇%抑制下的樣品 含量)。 原始數據列於附錄中。 結果 實例1結果見圖1。 ί 只例2- NICHA 001於人癌細胞株中抑制白三稀釋放之活性 在不同NICHA濃度下探討兩種人類細胞株(粒細胞)之白 細胞三烯釋放反應。每次實驗使用黑小菌香(NigeU甸油、 甘菊油及兩者混合物。 131944.doc 200916111 樣品 測試 樣品 種類 提供者 產品號 批號 會員號 黑小茴香 (Nigella)油 Nigellae oleum Hanseler AG 26- 4150-1 2006.08.0 537 ViP_Nig'07_8 洋甘菊 (Matricaria) 精油 Matricari ae Aetherole um PhEur Hanseler AG 1- 4925-2 2006.09.0 181 ViP_Matr'07_78 分析法 分析法 細胞株 樣品 試驗濃度 5-LOX 抑制 粒細胞 ViP JNig,07_8 分化的HL60 ViP_MatrO7_78 0· 1 / 0.3 /1 / 3 /10 / 30 pg/ml
0,3 / 3 / 30 pg/ml 0,3 / 3 / 30 pg/ml ______混合物 WST-1 實驗 HL-60 細胞 ViP_Nig,07_8
ViP_Matr'07_78 5-LOX抑制作用分析法 人類HL-60細胞(骨髓性白血病,DSMZ編號ACC 3)在含 5% C〇2的濕潤大氣中,於37。〇下保存且在添加ι〇%胎牛血 /月及1 /〇(v/v)盤尼西林/鏈黴素溶液的完全RpMii64〇培養基 中培養。該等細胞使用DMS〇(1.2% v/v)進行分化6至8天。 LOX活)·生刀析法係按照Bennet等人[參考:2]描述的進 行。簡言之’收集分化細胞’懸浮在包含ca2+(i禮)及葡 萄糖(1 mM)的PBS中, 卫刀佈於96_孔微滴定盤(1 X 106細 胞/孔)中。 131944.doc -16- 200916111 所有數值均為最終濃度^陰性對照在無_子載體刺激下 進行。該分析混合物在3n;下培養15分鐘,加入包含hc】 Ο M,3% V/VW100 μ1甲醇,並將微滴定盤置於冰上終止 反應》在使用50 μΐ PBS中和並離心(34〇Xg)1〇分鐘後,決 定上清液中LTB4濃度。 測定在該分析條件下的白三_4產量,決定樣品與對照 化合物[參考:3]對5-LOX活性的影響q使用編號 520111 (LTB4)的酶免疫分析(EIA)套組定量白三烯I。在 波長415⑽下測量光密度。使用至少5種不同濃度的標準 曲線計算含量。每個取樣點均重覆測定。與劑量相關的抑 制作用數值係以相對於陽性對照值的百分比表示。若可行 時’使用程式 GraphPad-Prism (Versi〇n 4,Graphpad Software lnc_’ San Dieg〇, CA,USA)測定 ic5〇值(相當於 在50%抑制下的樣品含量)。 使用WST-1分析HL60的活性 細胞功能/線粒體··使用四唑鑌鹽(Tetraz〇Humsah)wsT_ 1套組(Biovision,K301_500, CA USA)測試人類肝細胞陶 G2)、人類粒細胞(分化的HL6〇)、人類單核細胞(τΗρ·ι)及 人類巨噬細胞(分化的T H p _丨)的代謝活性下降程度[參考: 4] °該等細胞與萃取物預培養24小時。 由活細胞還原四唾鑌鹽w S T_ i形成甲腊的能力測定細胞 的代謝活性。利用分析板讀數器(美國BioRad),在波長λ = 450 nm下測定光密度(〇D),直接測定甲臜含量。 131944.doc 200916111 重覆三次光測定法,並計算標準偏差。各實驗濃度下之 細胞OD測量平均值均分別減去空白(含樣品,但不含細胞 的分析混合物)OD值。相對於無樣品對照組測量之活力讀 數為100%,將OD450換算為百分比數值。 結果 實例2結果示於圖2及3。 5-LOX抑制分析法所得的IC5。值: 樣品 重覆 IC5〇 (g/ml) 95%可信區間 (g/ml) ViP_Matr'07_78 1 0,3〇 0.06 至 2.84 ViP_Nig'07_8 1 3.00 1.33 至 10.76 ViP_Matr'07_78 2 0.38 0.21 至 0.68 ViP_Nig'07_8 2 3.02 1.57 至 5.82 1 : 1混合物 1 0.53 0.23 至 1.24 對照化合物 IC5〇 (nM) 95°/。可信區間(nM) 地塞米松 0,28 0.21 至 0.39 實例3- NICHA 00 1對人類癌細胞株增生的影響 在不同NICHA濃度下探討對膠質母細胞瘤細胞及前列腺 癌細胞的增生效應。每個實驗分別使用黑小茴香(Nigella) 油、甘菊油及兩者混合物進行。 131944.doc -18- 200916111 樣品 實驗樣品 種類 提供者 產品號 批號 會員號 黑小茴香 油 Nigellae oleum Hanseler AG 26-4150-1 2006.08.0537 ViP_Nig,07一8 洋甘菊 Matricaria 精油 分析法 Matricariae Aetheroleum PhEur Hanseler AG 1-4925-2 2006.09.0181 ViP_Matr'07_78 分析法 細胞株 樣品 實驗含量 DNA合成 前列腺癌細胞 ViP_NigO7_8 0,3 / 3 / 30 pg/ml DU145 ViP_Matr'07_78 0,3 /3 /30/60 μ^πύ 膠質母細胞瘤細胞 ViP_NigO7—8 0,3 / 3 / 30 pg/ml U-87 MG ViP_Matr'07_78 混合物 DNA合成 引進3H-胸腺嘧啶核苷:以胰蛋白酶處理法收集DU145 及U-87MG細胞’並接種在96孔盤中’ 10,000個細胞/孔。 細胞與所需濃度的樣品在37°C及5。/。C〇2下培養24小時及/ 或48小時。細胞經3H-胸腺嘧啶核苷(1 KCi/ml) (Perkin Elmer)脈衝處理24小時。此後,經由PBS沖洗並以曱醇固 定兩次,每次5分鐘。蛋白質經〇·3 N TC A沉澱。經過洗滌 步驟後,加入150 μΐ 〇.3N NaOH ’ 15分鐘溶解細胞。使用 無細胞的樣品測定背景對照組。 檢測DNA合成所引進的3H-胸腺嘧啶核苷時,取樣品轉 移至含閃爍混合液的閃爍管中。在Tri_Carb 1900 TR液體 閃爍計數器(Packard,USA)中進行定量。 131944.doc -19- 200916111 在分析條件下測定放射性同位素標記量(dpm),以測定 多種濃度的樣品之影響。與劑量相關的數值係以相對於陽 性對照值的百分比表示。取樣點進行四重覆測定,誤差以 標準偏差表示。 前列腺癌細胞DU145所得結果 NICHA對前列腺癌細胞(DU145)中DNA合成的影響結果 見圖4A-4D。 對照化合物在DNA合成中的IC50值如下: 24 h培養 48 h培養 對照化合物 ic5〇 95%可信區間 IC5〇 95%可信區間 (nM) (nM) (nM) (nM) 喜樹驗 152 115.9 至 199.4 7,5 5_1 至 11,0 膠質母細胞瘤細胞U87MG所得結果 NICHA對U-87MG細胞(48小時培養)中DNA合成的影響 結果見圖5A-5C。 對照化合物對U-87MG細胞中DNA合成的IC5〇值如下: 對照化合物 48 h培養 IC5〇(nM) 95%可信區間(nM) 喜樹驗 3,32 2.5 至 4.4 實例之結果總結 研究洋甘菊(Matricaria recutita : VIP_Matr07_78)精油與 黑小茴香(Nigella sativa : VIP_Nig07_8)種子油抑制分化的 人類粒細胞細胞株HL 60(人類急性骨髓性白血病)中白三 131944.doc -20- 200916111 烯0成的月匕力。黑小菌香(Nigella sativa)種子油以IC50值 3.0=g/ml表現了抑制5_L〇x的強烈活性(實例2,圖叫。令 人吃驚^ ’吾人發現兩種化合物的混合物抑制HL 60粒 、”田胞細胞株中白三稀合成作用之效力超過其加成效力。其 ;C50並因非預期的。7“g/mi,反而為❹”叫㈤(實例2,圖 σ人之結論為這兩種化合物的組合加強了單 一組份的活性。 VIP—Matr〇7_78在抑制白三烯合成作用上表現了更高的 抑制,舌f生且ic50值為0 38 ug/ml(實例2,圖叫。因此,洋 甘菊(Matricaria)精油似乎為—種極強力的5_l〇x抑制劑。 欲評價所觀察的抑制活性是否為細胞毒作用的唯一結 果σ人取細胞依5_L〇X實驗所選用之濃度培養,並測定 線粒體活性(術)。士0圖3&及31)所示,^肩〇7—8或 P_Matr〇7_78在所選用濃度下並未出現細胞毒性(實例 2圖3a及3b)。因此’吾人之結論為抑制白三烯合成時所 觀察到的活性為與5_脂肪氧化酶之專—性交互反應的結 果0 亦由人類巨噬細胞細胞株™Plt釋放之介白素6得到進 乂、。果雖然黑*回香(Nigella 叫未表現任何活性 (實例1,圖lc及Id),伸洋廿+ .. 丨一千甘軔(Matricaria recutita)仍隨劑 量之變化抑制ΤΉΡI細廉中藉妨八&主 — 、田肥〒釋放介白素6且iC5〇為5 ug/mi (只例I’圖la及lb)。重霜營私,击帝 一 覆貫驗(重覆2)顯示重覆1之再現性 結果(實例1)。 I31944.doc -2J · 200916111 吾等之結果顯示洋甘菊(Matricaria recutita)精,、由在人; 急性骨韙性白血病細胞HL60的白三烯合成作用中表玉 強烈的抑制活性(實例2,圖2c)。其他結果顯千人 了 M ^ 禾-員不介白素6的 样放會在人巨噬細胞細胞株THP1中受到抑制 與lb)。 W例’圖la 當達到抑制效果所必要的濃度相當低時,五 a . 〇寻5心馬很容 易在人體中達到治療有效劑量,尤其當精油為高親脂性且 易於吸收。 综合精油在奈米莫耳漢度範圍内即可有效抑制人類粒细 胞細胞株HL60中形成二十碳烷酸類化合物(白三烯)之特 性’举甘菊(Matricaria recutha)精油為發展治療炎症/自身 免疫疾病及某些癌症的藥物上非常有價值的候選者。 k' 在第三組實驗中(實例4),吾人研究黑+菌香(NigeIla 灿叫種子油或洋甘菊(Matricaria recuma)揮發性油是否 可於活體外抑制前列腺癌細胞株DU145及㈣母細胞瘤么田 胞㈣中之DNA合成。其令洋甘菊(― 咖叫(VIP—Μ副7_78)在48小時後,隨劑量變化而抑制 兩種細胞系的職合成(實例4,圖叫,黑小茴香
SatiVa)(VIP-NigG7~8)對這兩種癌細胞未顯示抑制效果(實 例4,圖4d)。已知DU145合塑、生入a主,t I造介白素6作為生長因子, DNA合成作用的抑制可能(至少 刀J由洋甘菊(Matricaria recutita)揮發性油對介白去 了"白素6之釋放產生抑制活性所引起。 同樣,吾人認爲抑制勝皙# J膠貝母細胞瘤細胞株U87MG中DNA合 131944.doc •22- 200916111 成爲洋甘菊(Matricaria recutita)揮發性油強烈抑制白三烯 合成的結果。 【圖式簡單說明】 圖1A為實例1中洋甘菊(Matricaria)精油抑制il-6重覆1 之結果: VIP_Matr'07_78 IC50 = 5 pg/ml (作圖決定) PRISM IC50=7_782 pg/ml (經由 GraphPad Prism計算) 95% 區間 3.169至 19.11 圖1B為實例1中洋甘菊(Matricaria)精油抑制il-6重覆2之 結果 · VIP_Matr'07_78 IC50=8 pg/ml (作圖決定) PRISM IC50=8.78 pg/ml (經由 GraphPad Prism計算) 95%區間 6.248至12.35 4§/1111 圖1C為實例l中黑小茴香(NigeUa)精油抑制IL_6重覆1 之結果: VIP_Nig'〇7_8 IC5〇 =未採用 PRISM IC50=未涵蓋(GraphPad Prism) 95%區間 圖ID為貫例1中黑小菌香(NigeUa)精油抑制IL_6重覆1之 結果: VIP—Nig,07—8 131944.doc -23· 200916111 IC5〇 =未採用 PRISM IC5〇=未涵蓋(GraphPad Prism) 95°/。區間 圖2為測試NICHA抑制5_L0X活性的實例2中5_L〇x抑制 實驗之結果(2至4次獨立實驗之平均值(其結果來自
ViP_E_Nig'07_8之 3次獨立的5_[〇又實驗,vip_Matr,07_78 之4 -人獨立的5-LOX貫驗及1 : 1混合物之2次獨立的5_L〇x 實驗))。 圖 2A : ViP_Matr’07—78 (甘菊油),重覆 1 圖 2B . ViP_Nig'07_8 (黑小茴香(Nigella sativa)油),重覆 1 圖 2C : ViP_Matr’07_78 (甘菊油),重覆 2 圖 2D : ViP_Nig’07_8 (黑小 @ 香(Nigella sativa)油),重 覆2 圖 2E :混合物 1:1 (VIP_Matr'07_78 :ViP_E_Nig'07_8) 圖3為實例2中在NICHA影響下,WST-1對HL-60細胞之 活力分析法之結果。 圖 3A : ViP_Matr'07一78 (甘菊油) 圖 3B : ViP—Nig’〇7—8 (黑小茴香(Nigella sativa)油) 圖4為實例3中NICHA對前列腺癌細胞DU1 45中DNA合成 之影響的結果。 圖4A : 24小時培養,ViP_Matr,07—78 (甘菊油) 圖4B : 24小時培養,ViP一Nig,07—8 (黑小茴香(Nigella sativa)油) 圖4C : 48小時培養,ViP_Matr’07—78 (甘菊油) 131944.doc -24- 200916111 圖4D : 48小時培養,ViP_Nig'07_8 (黑小茵香(Nigella sativa)油) 圖5為實例3中NICHA對48小時培養的U_87MG細胞中 DNA合成的影響之結果。 圖 5A : ViP_Matr’07—78 (甘菊油) 圖 5B ·· ViP_Nig’07_8 (黑小茴香(Nigella sativa)油) 圖 5C :混合物 1:1 (VIP_Matr,07_78:ViP_E_Nig'07一8)
131944.doc •25-
Claims (1)
- 200916111 十、申請專利範圍: 1 · 一種組合物,其包令廿马— 3甘菊化水性萃取物,就 增生性疾病及/或炎症。 /、係用於治療 2·如請求項丨之組合物,其中該水性萃取物 — 取法得到之揮發性油, 種經由萃 及卒取法包括甘菊允 餾法,其較佳在減壓下進行。 〃化之水蒸汽蒸 3·如請求項2之組合物,#中該 tubiformis。 ^ 化為 Flores 4.如請求項2或3之組合物,其中該水基 下進行,且該方法進-步包含以下步驟:…氮乳 觸⑽㈣物與會與香豆素形成複合物的交聯聚維嗣接 (ii) 移除步驟⑴中开)士、^ & μ 物; ()中七成的父聯聚維鋼與香豆素的複合 (iii) 精由將步驟(ii) φ 2:* ,L· / 以移除殘餘水;及寸到的組合物與無水硫酸納接觸 ㈣從步驟㈣中得到的組合物中分離出硫酸納。 5.:二求項4之組合物’其中該組合物幾乎無水,較佳為 …於〇.1% w/w殘餘水’最佳為包含少於0.01% w/w 殘餘水。 6·如請求項5之組合物’其中該組合物幾乎不含香豆素, 、L基曰旦素计具’較佳為包含少於香豆 素’最佳為少於0.005% w/w香豆素。 7.如凊求項5或6之組合物,其中母菊莫㈣咖—叫含量 131944.doc 200916111 為 5-15% w/w,更佳為 15_25% w/w,最佳為 2〇 3〇% w/w 〇 8. 如請求項4至7中任一項之組合物,其中該組合物另包含 黑小茵香油。 9. 如請求項8之組合物,其中該黑小菌香油為可經由純化 方法得到的純化黑小茴香油,該方法包含以下步驟: ⑴將黑小茴香油與會與酚類化合物形成複合物的交聯 聚維酮接觸; (η)移除步驟⑴中形成的交聯聚維酮與酚類化合物的 複合物; (m)藉由將步驟(ii)中得到的黑小茴香油與無水硫酸鈉 接觸以移除殘餘水;及 (iv)從步驟(in)中得到的黑小茴香油中分離出硫酸納。 士明求項4至9中任一項之組合物,其中該組合物經超 濾,較佳使用孔徑在〇.〇〇1至〇.〇2 ^爪的過濾器,更佳為 〇·〇〇1 至 0·01 pm 〇 女Μ求項1至1 〇中任一項之組合物,其中該組合物不含 或基本不含内毒素,該組合物較佳包含100 EU/ml(根據 Ph· Eur.為每mi内毒素單位)或更少的内毒素,更佳為5〇 EU/ml或更少,且更佳為1〇£11/1111或更少。 12.如請求項丨至丨丨中任一項之組合物,其中該萃取物不含 刀子里大於10,000的物質’更佳為不含分子量大於丨〇〇〇 的物質。 士叫求項1至12中任一項之組合物,其中該組合物不含 131944.doc 200916111 14 15. 16. 17. 18. 19. 20. 或基本上不含選自由香豆素、類黃嗣、其他成為甘菊及/ 或黑小菌香之典型雜f的盼類化合物所組成 餘水。 π汉夕戈 :::二?1至13中任一項之組合物’其另包含抗壞血酸 才不櫚心知及/或乙醯半胱胺酸。 :::項1至丨4中任一項之組合物’其另包含至少一種 ::醫藥助劑所組成之群,較佳係選自由醫藥用劑及 w樂賦开> 劑所組成之群。 如明求項1至1 5中任一項之組合物, 特徵在於該治療 糸由注射或吸入該組合物進行。 ^求項!至16中任一項之組合物’其特徵在於該病症 .,,、人症,較佳係選自由潰瘍性結腸炎(M〇rbus c匕及 多發性硬化症所組成之群。 :6:求項1至16之組合物’其特徵在於該病症為癌症, 較‘係坻自由膠質母細胞瘤、肺癌及前列腺癌所組成之 群。 :/月求項1至17中任一項之組合物’其特徵在於該炎症 糸由自體免疫性疾病弓丨起’較佳由介白素6引起,更佳 由白三烯引起,最佳取決於介白素6及/或白三烯之存 在。 如請求们至16及18中任-項之組合物,其特徵在於該 病症係由增生性疾病引起,較佳由介白素6引起,更佳 由白三烯引起,最佳取決於介白素6及/或白三 在。 卞 131944.doc 200916111 21. —種如請求項1至15中任-項之組合物之用, 於製造治療增生性疾病及/或炎症之醫藥品。途,其係用 22. 如請求項21之用途,其中該治療係 者。 $ 1 6中所定義 23. 如請求項21或22之用途,其中 中任-項所定義者。 "-求項17至2。 24. -種治療增生性疾病及/或炎症之方法,丨包括對有此需 要之人類或動物患者投與有效量之如請求項工至b中任 一項之組合物。 25. 如請求項24之方法,其中該投與係經由注射及/或吸入該 組合物進行。 26·如請求項25之方法,其中該組合物為一種可注射的組合 物。 27.如請求項24至26中任一項之方法,其中該病症如請求項 17至20中任一項所定義者。 131944.doc
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