TW200902536A - Process for preparing porphyrin derivatives, such as protoporphyrin (IX) and synthesis intermediates - Google Patents

Description

200902536 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於製備紫質衍生物（彳 丁生物（例如原紫質（IX))之新穎 方法，且亦係關於合成該等化合物 【先前技術】 之中間體 某些紫質因其生物學或醫學性皙 酉干丨王貴而為人所知並加以使 用。舉例而言，可提及具有下式之以下紫質：

其中：

Ra--CH-CH2 ’則稱為原紫質ιχ , Ra=-CH2CH3，則稱為中紫質， Ra=-CH(OH)CH3’則稱為血紫質， Ra=H，則稱為次紫質，

Ra=-CH2CH2CO〇Rb，直中 Rh 八甲Rb為氧原子或甲基、乙基、 正丙基或異丙基，則稱為糞紫質，

Ra=-C(〇)CH3,則稱為二乙醯基次紫質。 該等紫質可以鹽形式使用， ' 、 j如’在兩個酸官能團處且 有鹼金屬之鹽，例如鈉鹽。 &八 端視應用而定’該莫势暂介1 #备'質亦可以錯合形式使用，例如， 129671.doc 200902536 紫質咖之錯合物稱為::二：°_合。原 血色素’且與⑽之錯合物稱為血晶素。之錯口物％為 動最常藉由半合成來製備1尤其造成可能存在 雜質的問題。對於某些應用而言，例如在可能用 於細胞培養基中之原紫質(ΙΧ)或其鈉鹽之情況下，期望提 供僅使用合成來源之產物的全合成製備方法。已經提出某 些藉由化學合成製備該等化合物之方法。舉例而言，JCS Perkin !，1974, mi_1781 及 li88ii94 中之公開案閣述原 紫質IX之製備。該等公開案中所提及製備原紫質之方法稱 為MacDonald方法且該方法在於在金屬陽離子m+(例如ζγ 或Fe3 + )之存在下使以下兩種吡咯曱烷（A)與（b)偶合：

㈧ (B) 以獲得卟啉二甲烷結構（C): 129671.doc 200902536 Ο

(C) 其必須隨後氣化以形成金屬化紫質（D):

此一方法特別闡述於 Science of Synthesis Houben-Weyl(第 17卷，1081-1235)及 The porphyrin Handbook(第 1 卷，synthesis and Chemistry, Academic Press, Boston, 2000)中。 若必須使用該紫質之游離形式，則隨後需要在硫酸的存 在下使該紫質脫金屬。該後一步驟尤其並非定量進行且所 獲得紫質之純度不滿意。高-C(0)CH3官能團亦必須轉化 成-CH=CH2。 【發明内容】 在此上下文中，本發明建議提供一種無任何動物來源污 染物之新合成製備方法’該方法僅使用合成來 个你之產物且 129671.doc 200902536 其尤其適用於合成視情況呈鹽形式之原紫質以、中紫質、 血紫質、次紫質、糞紫質戰二乙醯基次紫質。此方法尤 其必須允許以高產率及高純度製備該等化合物。本發明之 方法亦必須易於工業化且展示良好收益率。此外，本發明 上下文中所研發之方法還可防止形成金屬化紫質之中間 體。 在此上下文中，本發明係關於製備式⑴紫質之方法，該 紫質視情況呈鹽形式：

其中： _ R係氫原子或選自以下之基團：（：11=(^2、-(：1"12- CH3、_CH(〇H)CH3、-C(0)CH3 及-CH2CH2COOR，a，其中

Ra4氫原子或甲基、乙基、正丙基或異丙基， -化係氫原子或選自甲基、乙基、正丙基或異丙基之基 團 R，b， 該方法包含： •縮合步驟，其係於酸性介質中在以下兩種物質之間進 行：式（II)二吡咯甲烷： 129671.doc -10- (II) 200902536

其中R'b如以上針對（I)所定義， 與式（III)二吼咯曱烷：

f 其中R”係如以上針對（I)所定義之R或為R前體之基團，以 形成式（Γ)紫質：

(Γ) 其中R”與R’b皆如針對（II)及（III)所定義， 隨後· -當R”不為R時，將基團R”轉化成R， -當R’=H時，消去基團Rfb以形成-COOH官能團，該 官能團視情況呈鹽形式。 129671.doc • 11 - 200902536 【實施方式】 本心明之方法使獲得具有 皆折点发……“人，』又丨g穴刀-忍〉谷解度、尤其為水溶液 为、貝成為可能。本發明之標的物亦係式⑴之紫質：

其中： _ R係氫原子或選自以下之基團：ch=ch2、_cH2 ch3、-ch(oh)CH3、-C(0)CH3 及 _CH2CH2C〇〇R，a 其中 n為氬原子或甲基、乙基、正丙基或異丙基， R係氫原子或選自甲基、乙基、〖丙基或異丙基之基 團 R'b， 以及其根據本發明方法可獲得之鹽。 就與式（I)紫質形成之鹽而言，可提及者（例如）係與有機 或無機鹼形成之鹽。具體而t，該等鹽可與包含羧酸官能 團之式⑴紫質形成；其較佳為鹼金屬鹽（尤其鈉、鉀或鋰 孤）、或銨鹽、有機胺鹽或胺基酸（例如精胺酸或離胺酸）之 鹽。 一亦可利用無機或有機酸形成能够（例如）使式⑴化合物適 虽分離或結晶之式（I)紫質之鹽、以及醫藥上可接受之鹽。 就適且酸而言，可提及者係··苦味酸、草酸或光學活性酸 12967I.doc 200902536 (:;如::：、二苯甲醯基酒石酸、苦杏仁酸或樟腦續 破專形成生理上可接受之鹽者（例如鹽酸鹽、氫溴 :::硫酸鹽、硫酸氫帛、填酸二氫鹽、馬來酸鹽、富馬 酸鹽、2-萘磺酸鹽或對甲苯磺酸鹽）。 ，式（）化σ物之鹽係根據彼等熟悉該項技術 之技術 ::望其係在相應驗或酸之作用下較佳在最後步驊中將形 成，月望鹽之相應步驟納入本發明步驟 ― 比本發明之方法繪示於下文反應圖1中二：、"R，b 皆如針對式（„)、（III)及⑴之化合物所定義、 反應圖1

129671.doc -13- (I) (I)200902536

端視基團R之性質，可在化合物（II)與化合物（111)(其中 R" = R)之間進行偶合：此係例如當R = H、-CH2-CH3、 -CH(OH)CH3、-C(0)CH3 或-CH2CH2COOR，a(其中 R'a 為氫原 子或甲基、乙基、正丙基或異丙基）之情況。 若基團R’b=R’，則縮合步驟後直接獲得之化合物（Γ)係期 望化合物（I)，而不需任何額外步驟。若基團R’b不為R’， 此係當R'=H之情況或者其中酸官能團呈（例如）與鹼金屬（例 如Na+或K+)之鹽形式的情況，則偶合之後藉由消去基團 R'b使酸官能團去保護，以將化合物（Γ)轉化成化合物（I)。 該偶合亦可利用其中R”係作為R前體之基團的化合物 (III)進行。表述「為R前體之基團」意欲指一或多個化學 反應之後獲得期望基團R之基團。就該等前體基團、尤其 對於-CHfCH2基團之前體基團而言，可提及者係（例如） -c(o)ch3、-ch(oh)ch3、-CH2CH2OH、-ch2ch2oc(o)ch3 或-ch2ch2ci基團’尤其較佳者係-C(0)CH3與-ch(oh)ch3 基團。與化合物（III)之偶合獲得化合物（γ): 129671.doc 14· 200902536

其中R '係作為R前體之基團。然後必須在一或多個步驟 中將该為R前體之基團加以轉化以獲得期望基團R。此係 (例如）製備式（I)其中 R=_CH=CH2、-CH2-CH3、-ch(oh)ch3 或η之化合物的情況。就該等基團而言，一種方法在於與 其中R’’=-C(〇)CH3之化合物（】η)偶合，其隨後在化合物（π) 與（III)之間之縮合步驟之後進行轉化，以獲得期望基團 R。 而且’端視基團R，之性質，可在化合物（111)與化合物 (1工）（其中R’=R’b)之間進行偶合。另一方面，在其中尺,=1^之 情況下或者在其中該等酸官能團呈（例如）與鹼金屬（例如 Na+或K+)形成之鹽形式的情況，偶合之後藉由消去基團 R'b使酸官能團去保護。 在化合物（II)與（ΠΙ)之間之偶合步驟之後，當需要該兩 個步驟（即將基團R"轉化成R及消去基團R，b)時，酸官能團 之去保護可在基團R"轉化成R之前或之後進行。然而，較 佳在基團R”轉化成R之後消去基團R，b，此乃因酯官能團改 良於反應溶劑中之溶解性。 不像先前技術之MacDonald方法，化合物（η)與（ΠΙ)之間 129671.doc -15· 200902536 之縮合步驟係在不存在易於與所形成紫質（1，）錯人之金 屬、鹽或金屬衍生物的情況下進行。 在本發明之上下文中，為製備式⑴其中R係氫原子或選 自以下之基團：-ch2_ch3、-Ch(OH)Ch3、_c(〇)CH3 及-CH2CH2COOR’a(其中R’a為氫原子或甲基、乙基、正丙 基或異丙基）之化合物’該偶合可利用其中尺，，係最終基團& 之化合物⑽、或利用其中R"係作為最終基團R前體之基 團的化合物（III)來進行。 為製備式⑴其中R為-CH=CH其圍夕a人此 勺LhL LH2基團之化合物，較佳利用 以下步驟： :缩合步驟’其係於酸性介質中在以下兩種物質之間進 行：式（11)二η比B各甲燒：

Λ U LI

其中R’b如以上針對⑴所定義， 與式（III)二α比洛曱燒.

R" 體之基團 (III) 例如-CH(〇H)CH3 或-C(0)CH3 其中R"係作為r前 基團， 129671.doc 200902536 隨後將基團R”轉化成R， 且當R’=H時’消去基團R，b以形成-COOH官能團， 視情況呈鹽形式。 本發明之方法尤其適用於合成原紫質及其鹽、尤其其式 (IC.2, 2Na)之鈉鹽：

在製備式（1C)化合物：

(1C) 其中R係如針對（I)所定義，或其與例如鹼金屬形成之鹽的 情況下，有利地在以下兩種物質之間進行偶合：式（π)吼 咯甲烧： 129671.doc 17 (II) 200902536

其中R’b係如針對（I)所定義，且較佳為甲基， 與式（Ilia)二吡咯甲烷：

以形成式（la)化合物：

(la) 其中R’b係如針對（I)所定義，且較佳為曱基， 隨後 -還原-c(o)ch3官能團，以形成式（lb)紫質： 129671.doc -18- 200902536

(lb) 其中R’b係如針對（I)所定義，且較佳為甲基， -隨後進行使基團-CH(OH)CH3轉化成-CH=CH22消去反 應， -且，在其中R'為氫原子之情況下，藉由水解進行該-COOH 官能團之去保護步驟， 或者，若需要與鹼金屬形成鹽形式之化合物（1C)時，則進 行皂化步驟。 應注意到，在本發明上下文中，式（lb)化合物包含兩個 不對稱碳且可呈同分異構體混合物或純同分異構體之形 式。 此製備式（1C)化合物之方法繪示於以下反應圖2中，其 中R/b係如針對式（II)化合物所定義： 129671.doc •19- 200902536 反應圖2

在製備呈式（IC.2, 2Na)鈉鹽形式之原紫質IX的情況下：

129671.doc -20· 200902536 後步驟係由將下式化合物之兩個_c〇〇R，b官能

’、中R b係如針對⑴所定義’且較佳為甲基。此皂化步驟 可在氫氧化納之作用下在甲醇之存在下進行。舉例而言， =皂化步驟係在二氯甲烧中於回流下進行。根據一個不佳 變型方帛，亦可考慮在化合物⑴)與（Ilia)之間偶合之後、 但在獲得期望韻=阳基團之前進行此矣化步驟。 該兩種t各甲院（„)與_或（ma)之間之縮合反應較佳 在選自以下之酸的存在下進行：羧酸、三氟乙酸、氫氯 酸、三氯甲料酸、甲烧續酸、三氟甲料酸、四氣硕 酸、幻臭酸及氫埃酸。該酸較佳為强酸，較佳為三說乙酸 或三氣甲烷磺酸。該酸相對於該吡咯甲烷（π)較佳過量使 用，例如2當量酸/當量吡咯甲烷（π)。 有利地，該兩種料甲院（„)與则或（Ina)之間之縮合 反應係在乾燥劑之存在下進行，此意欲吸收水分子。就乾 燥劑而言，可提及者係酸酐、分子筛及硫酸，較佳為乙酸。 酐。在使用乙酸酐之情況下，後者相對於吡咯曱烷（ιι)較 佳以過量（例如）至少1 〇、較佳至少5〇當量之量存在。 129671.doc 21 200902536 進行該縮合法亦應有利之方式為相對於吡咯甲烷（πι)或 (Ilia)使用大體上1畲量或梢過量之吡咯甲烷（^)。該兩種吡 口各甲燒（nm (m)或（11)與（IIIa)之間之縮合反應係（例如）在 10至50 c、較佳20至251之溫度下，在質子溶劑（例如乙 酸）甲進行。 該偶合之後可能獲得期望基團尺之反應係利用習知方法 進行。 該將基團-CH(OH)CH3轉化成_CH=CH2之消去反應宜在 醢基i化物、較佳醯基氣（例如苯甲醯氯）之存在下進行。 舉例而言，該將基團·ί：Η(ΟΗ)(：Η3轉化成_ch=CH2之消去 反應係在非質子極性溶劑（例如DMSO、丙酮或較佳為 DMF)中，較佳在80至20(TC之溫度下進行30分鐘至3小 時，且較佳在50至120°C之溫度下進行大約！小時。 該-C(0)CH3官能團形成_CH(〇H)CH3之還原法宜在氫化 物、較佳為硼氫化物（例如NaBH4或BH3)之存在下進行。較 佳地’該-C(0)CH3官能團之還原係在二氯曱烷中，在甲醇 之存在下，在（例如）介於0與6(rc之間、較佳介於2〇與3〇它 之間之溫度下進行。 隨後，式⑴其中R=-CH=CH2之化合物可進行其他化學反 應以獲知其他基團R。舉例而言’式（I)其中r=_ch2-CH3 之化合物可自式⑴其中r=_ch=CH2之相應化合物藉由催化 性氮化反應獲得。舉例而言，使用Tetrahedr〇n Letters 2006, 47(29)，5119-22中闡述之技術，該技術係在約⑽它之 溫度下使用於AcNMe2中之Ruci3觸媒。 129671.doc -22- 200902536 同樣’式（I)其中r=H之化合物可自式（I)其中r=_c(〇)CH3 之相應化合物藉由中間形成式⑴其中r=_ch(oh)CH3之化 合物，隨後在BF3之作用下，在Η8-((：Η2)2-8Η之存在下進 行去乙醯化（例如使用JOC，1983，48(24)，4779-81或J,

Chem. Soc，Chemical Communications，1981，（6), 253-4 中 所闡述之方法）來獲得。 根據種隻化方案，目此可進行本發明之方法用以製備 式（IA)之化合物：

R.C 其中R’係如針對⑴所定義 §亥方法係藉由使式（⑴吼。 I，或其與例如鹼金屬形成之鹽， 咯甲烷：

COOR-b 其中R’b如以上 與式（1113)二吼 上針對（I)所定義 '比咯甲烷偶合： 且較佳為甲基， 129671.doc •23· 200902536

甲R為虱原子時 則進行水解脫除該-COOH官 隨後’若其中 能團之保護基之步驟， 及/或， 時，則、# U况右需要與鹼金屬形成鹽形式的化合物㈣ ⑴進行皂化步驟。

亦可 進行本發明之方法用以製備式（IB)化合物：

(IB) 中R係如針對⑴所定義，或其與例如鹼金屬形成之鹽， 該方法係藉由使式（II)吡咯甲烷：

其中R’b如以上針對⑴所定義，且較佳為甲基， 與式（Ilia)二吡咯甲烷偶合： 129671.doc -24- 200902536

以形成式（la)化合物：

da) 其中R，b如以上針對（I)所定義，且較佳為曱基， 隨後還原該-C(0)CH3官能團以形成_ch(〇h)Ch3官能團， 且，在其中R'為氫原子之情況下，藉由水解使_c〇〇H官能 團去保護， 及/或，若需要與驗金屬形成鹽形式的化合物（IB)時，則進 行皂化步驟。 其中Wb=Me之化合物（Π)如同其中R’b為乙基或丙基之化 合物（II)一樣係習知化合物（JCS Perkin I，1974, 1 188-1 194 及1771-1781)。對於其合成，可參考（例如）Austral. J. Chem. 1969, 22, 229 ' JCS, Chem. Comm. 1985, (8), 470- 1、Org. Bioorg. Chem· (1972-1999)，1987,（2)，265-76及 J.

Porphyrins and Phtalocyamines，2002，6 (9+10)，607-16。 另一方面，下式（in)吡咯曱烷： 129671.doc -25- 200902536

(其中R"為選自氫原子或選自以下基團之基團R: -CH=CH2 、-CH2-CH3、-CH(OH)CH3、-C(0)CH3及-CH2CH2COOR，a ，其中R'a為氫原子或甲基、乙基、正丙基或異丙基）係新 化合物且係本發明之組成部分。 在式（III)化合物中，可提及彼等其中R”為選自以下之 -ch=ch2前體的基團者：-c(o)ch3、-ch(oh)ch3、-CH2CH2OH 、-ch2ch2oc(o)ch3及-ch2ch2ci。 該-CH2CH2OH、-CH2CH20C(0)CH3 或-CH2CH2C1基團至 -CH=CH2之轉化係根據熟悉該項技術者習知的常用消去法 進行。舉例而言’該-CH2CH2C1基團可在氫氧化卸醇溶液 之作用下處理，如闡述於J.C.S. Perkin I，1974，1771-1781 中者。 就該等化合物而言，可提及式（Ilia)吡咯曱烷：

該化合物（III)可根據以下反應圖3製備： 129671.doc -26· 200902536

反應圖3

(V) (HI) (IV) 在其中R”為_C(0)CH3基團之情況下，化合物（ιχ)係藉由 (例如）三甲基曱矽烷基丙炔與乙醯氣在三氣化鋁之存在下 反應來製備。 化合物（VII)與（VI)之間之偶合較佳係在酸性介質中（例 如在TFA、Ha、MeS03H ' SnCl4或HBF4之存在下日士 且有利 地在HBF4或CFaSOsH之存在下）進行。舉例而言， °乡偶合 129671.doc -27- 200902536 係在諸如乙酸、或較佳二氯乙烧之溶劑中在（例如）介於50 與15(TC之間、尤其約9〇至1〇〇。(：之溫度下進行1至12小 時。 藉由使化合物（V)脫节基製備化合物（IV)係藉由（例如）催 化氫化來進行。出於閣述之目的，可使用金屬觸媒，例如 基於錄、基於鉑或較佳基於鈀之觸媒。 以下式（Vila)、（Va)、（IVa)之化合物（分別為化合物 vii、v及 iv ,其中 r”=_c(0)CH3): r 〇

Bn (Vila) ο

(Va) (IVa) 亦係作為本發明組成部分之新穎中間體。 為製備其中R"=-CH2CH2COOR'a(其中Ria如針對⑴所定 義）之化合物（iv)，可參考JCS，Perkin Trans丨 Bioorg Chem· 1987 (2)，299-305。用於其中 R”=_CH2CHa 化合物（iv)的部分係闡述於zhurnal 〇bshcheikhimii i96^ 36(7)，1208-10 中。 ’ 129671.doc -28- 200902536 本發明亦係關於製備式（i)紫質之方法’該紫質視情況呈 鹽形式：

⑴ 其中：

-R係氫原子或選自以下之基團：CH=CH2、-CH2-CH3、 -CH(OH)CH3、-C(0)CH3及-CH2CH2COOR'a，其中 R'a為氫 原子或甲基、乙基、正丙基或異丙基， -R’係氫原子或選自甲基、乙基、正丙基或異丙基之基團 R'b， 該紫質呈諸如鐵、鎵、鎳、鋅、鈀、鈷、鈣或鎂之金屬錯 合物形式，其中化合物（11)與（ΙΠ)或（111約之間之縮合步驟 後所形成之紫質的錯合係在所選金屬《金屬冑生物或該所 選金屬之鹽的作用下進行。 該等錯合物尤其對應於以下式（I”）：

(I.，) 129671.doc -29- 200902536 其中： -R係氫原子或選自以下之基團：CH=CH2、-CH2-CH3、 -CH(OH)CH3、_C(〇)CH3 及-CI^Ci^COOR'a，其中 R，a為氫 原子或甲基、乙基、正丙基或異丙基， -R'係氫原子或選自甲基、乙基、正丙基或異丙基之基團 R，b，及 _ Met係二價金屬M(II)或三價金屬之鹽m(III)X，其中X為 C1或OH且Μ為鐵、鎵、鎳、鋅、鈀、鈷、鈣或鎂。

本發明方法中所獲得之式⑴紫質或式（1，）紫質可尤其與 金屬或金屬鹽或氯化物、氫氧化物、乙酸鹽或硫酸鹽類型 之衍生物反應，該金屬係選自（例如）鐵、鎵、鎳、辞、 鈀、鈷、鈣或鎂，以便獲得呈金屬錯合物形式之式⑴紫 質。此金屬化需要在咕咯甲烷（„)與（111)或（ma)偶合之後 該錯合步驟較佳作為最後步驟針對該視情況呈鹽形式之 式⑴紫質進行。為形成該等錯合物，可參照以下闡述在其 中R”為·™=(：Η2基團之情況下形成金屬錯合物之公開 用於獲得血紅素、血晶素及以素之f知錯合方法1 方法可適用於如針對式！化合物所^義之各種基團从心 -Journal 〇f Photochemistry and Ph〇t〇M〇1 Che.isuy, 172(1), 55-61, ： 129671.doc •30- 200902536

其係在GaC〗3之作用下形成’其隨後利用氫氧化鉀於甲 醇中水解’此方法可適用於以類似方式在Feci3之作用下 形成血色素，

Journal of Molecular Catalysis A: Chemical, 235(1-2), 185-193, 2005，其闌述以下錯合物之形成：

其係在Ni(OAc)2之作用下在dmf中形成。

Journal of Molecular Catalysis A: Chemical, 235(1-2), 185-193，2005，其闡述錯合物c之形成· 129671.doc •31 · 200902536

其係在Zn(OAc)2之作用下在甲醇/三氣甲烷混合物中形 成。

Faming Zhuanli Shenqing Gongkai Shuomingshu, 1418885，其闡述以下錯合物之形成：

其係藉由用硫酸處理、且然後用FeS〇4處理、隨後用氫氧 化鈉處理來形成。 -Tetrahedron Letters, 27(30)，3521-4，1986，其闡述以 下錯合物之形成：

129671.doc -32- 200902536 其係在BF4_、PhsSiCHsPh)之作用下在二氣曱烷中、隨 後在其中M=Pd之情況下在PdCl2的作用下、在其中M=Ni之 情況下在NiCh的作用下、或在其中M=Co之情況下在 C0C12的作用下在曱醇中形成。 -Journal of Organic Chemistry，51(24)，4660-7, 1986及 Journal of Organic Chemistry，51(5)，666-71，1986 ,其闡述 以下錯合物之形成：

其係在FeCh之作用下在二氣甲烷/乙腈混合物中在惰性 氣氛下形成。

下文實例及製備可描述本發明。 中所製得之各種 以下反應囷4匯總了在該等製備及實例 化合物及所用方法步驟。 使用下述縮寫。

Bn—午基，Et=乙基，Ac=-C(0)Me , Me=甲式 Bn 129671.doc •33 - 200902536 反應圖4

(13,1)

(Ib.l)

129671.doc -34 200902536 製備1 式（3)吡咯之合成：

a)式（6)化合物之合成：

向4.5升配備有回流冷凝器、溫度計、滴液漏斗及氬氣 導官之Keller圓底燒瓶裝填乙醇（2升）。於周圍溫度下，將 納（2.2克）逐漸溶解以獲得清澈溶液，將此溶液冷却至 0 C。在10分鐘内逐滴添加乙醯丙酮酸鹽（5〇〇 〇克，5 〇莫 耳）’此釋放出氣體。於(TC下在1〇分鐘内將43〇克丙烯酸 甲醋逐滴添加於該淺黃色溶液中，此釋放出氣體。將反應 混合物加熱至周圍溫度且然後回流】小時。藉由狐c監視 =匕=使混合物冷却至周圍溫度。添加乙酸（3毫升）並藉 錄去W。將粗製^物蒸即W阶， .毫巴)獲得淺黃色溶液(747 8克 示’該粗產物係化合物⑹盥5 “斤展 物。 厂、氧代己酸甲酯的約1/1混合 129671.doc 35· 200902536 b)式（5)化合物之製備：

向4.5升配備有回流冷凝器、溫度計、滴液漏斗及氣氣 導管之Keller圓底燒瓶裝填乙酸（13〇升）並使其回流。於回 流下在1小時内將化合物（6)(248 71克，丨34莫耳）與胺基丙 二酸二曱酯鹽酸鹽（367.50克，丨.74莫耳）之混合物於乙酸 (0.85升）中之溶液逐滴添加於該混合物中。使該混合物再 回流2.5小時。藉由HPLC監視轉化率。使該反應混合物冷 却至周圍溫度並藉由在減壓下蒸餾除去乙酸。將黑色粗產 物用水（4.5升）研磨，水係逐份緩慢添加。將該混合物再機 械攪拌1小時且然後過濾’將濾餅用水〇升）洗滌。該深灰 色粗產物之重結晶係自乙醇/水（350/350毫升）藉由回流且 然後冷却至10°C來進行。藉由過濾分離沈澱物並用乙醇/水 (4 X 1 00/1 00毫升）洗滌。將產物在減壓下於周圍溫度下乾 燥，獲得呈淺紫色固體形式之化合物（5)(95.00克，28%)。 'H NMR (300 MHz, CDC13): 1.34 (t, CH3), 2.21 (s, CH3)» 2.27 (s, CH3), 2.43 (t, CH2), 2.70 (t, CH2), 3.66 (s, CH3)» 4.29(9，（：112)，8.60(寬單峰，；^1'12)。 c)式（4)化合物之製備： 129671.doc -36- 200902536

Bn (4)

液。將此洛液以5毫升分批添加，此使得該反應混合物劇 烈回流。藉由半連續蒸餾去除所得甲醇及乙醇。藉由 HPLC監視轉化率。使該反應混合物冷却至150°C且然後轉 移至甲醇（0· 85升）、水（〇·54升）及乙酸（1 〇毫升）之混合物 中。於30°C下迅速進行結晶。將混合物於周圍溫度下再攪 拌1小時。藉由過濾分離產物。將產物在減壓下乾燥，獲 得呈灰白色固體形式之化合物（4)(113.30克，77%)。 】H NMR (300 MHz, CDC13): 2.16 (s，CH3)，2.27 (s，CH3), 2.47 (t, CH2)，2.71 (t，CH2), 4.70 (s，CH3)，5.08 (s, CH2)， 5.28(8,(：112)，7,40(111，10印，8.60(寬單峰，：^出）。 d)式（3)化合物之製備：

Me02C 12967I.doc -37- 200902536 向2.5升配備有回流冷凝器、溫度計、滴液漏斗及氣氣 導管之Keller圓底燒瓶中裝填鈉（2.8克）於甲醇（71〇毫升）中 之溶液。於周圍溫度下，在1 〇分鐘内逐滴添加化合物 (4)(111.00克，0.28莫耳）於THF (430毫升）中之溶液。將混 合物再攪拌1小時。藉由HPLC監視轉化率。添加乙酸（7毫 升）後’在減壓下去除揮發性產物。將該粗製黏性產物溶 於乙醇（490毫升）中並添加水（280毫升）。將所得混合物於 〇 C下攪拌1小時並藉由過濾分離所沈殿產物。將產物用乙 醇/水（250/250毫升）洗蘇並在減壓下乾燥，獲得呈白色固 體形式之化合物（3)(53.31克，60%)。 !H NMR (300 MHz, CDC13): 2.25 (s, CH3), 2.31 (Sj CH3) 2.45 (t, CH2), 2.71 (t, CH2), 3.67 (s, CH3), 5.3〇 (s, CH2), 7’40〇,51'1)，8.60(寬單峰，；^1^)。 RP-HPLC ：

HP Hypersil BDS-C C18, 125x4毫米，25〇C 含有0.1% TFA之溶劑：乙腈（ACN)_水：自工至^❹％的 ACN持續10分鐘，然後1〇〇%ACN持續2分鐘 流率：1毫升/分鐘，在220奈米處檢測 樣品：1毫克/1.5毫升ACN Rt ·· 8.53 分鐘（>98%) 製備2 式（VIII.1)化合物之製備： 129671.doc •38- 200902536

向2 · 5升配備有回流冷凝器/蒸餾頭溫度計、滴液漏斗及 氬氣導管之Keller圓底燒瓶裝填4-乙醯基·3,5-二甲基。比。各_ 2-曱酸乙醋（市售品，Alpha AeSar，Karlsruhe, Germany , 產品編號A 17365)(146.00克，0.70莫耳）於苯甲醇（1〇〇升）

然後 中之溶液並加熱至120°C ’此使得共沸去除少量水 將混合物加熱至190。(：。該滴液漏斗裝填有單獨製備之納 (2克）於苯甲醇（20毫升）中之溶液。將此溶液以5毫升分批 添加’此使得該反應混合物劇烈回流。藉由蒸餾以半連續 方式去除所得甲醇及乙醇。藉由HPLC監視轉化率。使該 反應混合物冷却至150°C且然後轉移至甲醇（〇 %升） (0.66升）及乙酸（12毫升）之混合物中。使混合物冷却2 -HTC並於此溫度下再攪拌1.5小時。藉由過濾分離所沈澱 產物。將產物在減壓下乾燥，獲得呈灰白A m μ 〜、 人白色固體形式之化 合物（VIII.1)(124.40克，65%)。 4 NMR (300 MHz，CDC13): 2.34 (s，CH、9 3;，ζ·4υ (s，CH3) 2.52 (s, CH3), 5.23 (s, CH2), 7.85 (m, 5H)} 9.55(^ NH)。 ，早峰 製備3 式（VI.1)化合物之製備： 129671.doc -39- 200902536

向2.5升配備有回流冷凝器、溫度計、滴液漏斗及氬氣 導管之Keller圓底燒瓶中裝填化合物（VIII.1)(66.84克， 0.25莫耳）、乙酸（1.25升）及乙酸鈉（73.90克，1.51莫耳）。 為獲得澄清溶液，將混合物加熱至約3 5它且然後冷却至周 ( 圍溫度。在2小時内添加磺醯氣（32_4毫升，0.40莫耳），同 時在接近添加終點時仔細進行控制，以使因過反應而形成 之副產物降至最低。於周圍溫度下添加額外量的乙酸鈉 (50.0克），並將混合物於周圍溫度下再過夜攪拌。添加水 (500毫升），獲得澄清溶液。添加9_丨水-甲醇混合物（4 5 升），將反應混合物於周圍溫度下再攪拌丨小時，同時產物 沈澱。藉由過濾分離出產物並藉由回流溶於乙酸乙酯（22〇 毫升）中。自油浴中取出該兩相混合物並在攪拌的同時添 G 加甲醇（200毫升）。於周圍溫度下再攪拌1小時後，產物開 始結晶。添加額外量的曱醇（500毫升）並將混合物攪拌並冷 却至-1〇c。藉由過濾分離產物。將產物在減壓下乾燥， 獲付呈白色固體形式之化合物（VI 1 )(37丨4克，45%)。 NMR (300 MHz, CDC13)： 2.07 (s, CH3), 2.41 (s, CH3), 2.53 (s, CH3), 5.27 (s, CH2), 5.31 (s, CH2), 7.32 (m, 5H), 9.40(寬單峰，：^11)。 RP-HPLC ： 129671.doc •40· 200902536 HP Hypersil BDS-C C18, 125x4毫米，25^ 含有0.1% TFA之溶劑：乙腈（ACN)-水：自1至1〇〇%的 ACN持續10分鐘，然後i〇〇%ACN持續2分鐘 流率· 1宅升/分鐘，在2 2 〇奈米處檢測 樣品：1毫克/1.5毫升ACN Rt : 7.89分鐘（>94%) 製備4 式（7)化合物之製備： Ο

NC. A OBn (7) a)式（9)化合物之製備： H2N. 2OBn (9) 向2.5升配備有回流冷凝器、溫度計、滴液漏斗及氬氣 導管之Keller•圓底燒瓶中裝填甘胺酸（8〇 〇〇克，丨〇7莫 耳）、苯甲醇（700毫升）及對-曱苯磺酸單水合物（241克， 1 _27莫耳）。將此濃稠白色混合物加熱至1 〇〇。〇，此使得形 成澄清溶液。將混合物再於1 00它下攪拌5小時。使混合物 冷却至周圍溫度。緩慢添加乙醚（4升），此使得產物沈澱。 藉由過濾分離出產物，用乙醚（3x0.3升）洗滌並在減壓下於 6〇°C下乾燥。由於轉化不完全，故使白色固體溶於曱苯 (2.3升），並添加苯甲醇（〇·3升）及對_曱苯磺酸單水合物（2〇 129671.doc 41 200902536 克）。使混合物回流4小日夺，同日夺借助迪安-斯達克（Dean_

Stark)裝置連續去除水。使混合物冷却至周圍溫度。緩慢 添加乙醚（1升）並使混合物冷却至〇。〇，此使得產物沈澱。 藉由過渡分離出產物’用乙醚（3xQ 3升）洗蘇並在減壓下於 60°C下乾燥，獲得呈白色結晶產物形式之化合物（9)(3〇3 2〇 克，84%)。 NMR (300 MHz, DMSO-D6)： 2.28 (s, CH3), 3.90 (s5 <^2)’5,25(8，（：112)，7.15及7.39(八8，纽），7.37(111,511)。 b)式（S)化合物之製備： [| ^ OBn (8)

O 向2.5升配備有回流冷凝器、溫度計、滴液漏斗及氬氣 導管之Keller圓底燒瓶中裝填甲酸曱酯（7〇〇毫升）、化合物 (9)(303.0克，898.0毫莫耳）及三乙胺（丨37毫升，1莫耳）。 使混合物回流22小時。藉由HPLC監視轉化率。將此非均 相混合物於減壓下濃縮，獲得油狀物（429克）。將產物溶於 二氣甲烷（1.5升）中，用碳酸氫鹽（2x0.5升）及水（0.5升）洗 務。合併的水相用二氣曱烷（〇,5升）再萃取。將合併的有機 相乾燥（Na2S04)，過濾並在減壓下濃縮（40毫巴，45°C，1 小時），獲得橙黃色油狀物形式之化合物（8)(149.2克， 86%) 〇 !H NMR (300 MHz, CDC13): 4.12 (d, CH2), 5.19 (s, CH2), 129671.doc -42- 200902536 6.33(寬單峰，；^1€)，8.23(8,(：?10)。 c)式（7)化合物之製備：

NC

向2.5升配備有回流冷凝器、溫度計、滴液漏斗及氮氣 導管之Keller圓底燒瓶中裝填化合物（8)(129.7克，671 3毫 莫耳）及二氯甲烷（1升）。將混合物冷却至〇。〇。添加三乙胺 (234毫升’ 1678毫莫耳）獲得黃色溶液。在5〇分鐘内添加 卩0(：13(102.9克’671.3毫莫耳），同時將溫度維持在〇與5。(^ 之間。將混合物再搜拌2小時，同時將其加熱至周圍溫 度。在25與30°C之間緩慢並小心地以小批量小添加k2C〇3 (134克）於水（600毫升）中之溶液。添加完成後，將混合物 再授拌1小時。添加水（1升）且相分離。有機相用水（0 2升） 洗務。將合併的水相用二氣曱烧（〇. 5升）再萃取。將合併的 有機相乾燥（NazSO4) ’過濾並在減壓下濃縮，獲得褐色油 狀物（180克）。在一乳化石夕（500克）上進行層析，用二氣甲 烧進行溶析。將含產物之部分合併並在減壓下濃縮，獲得 橙黃色油狀物。於-1 〇 C下儲存使得化合物（7)結晶（丨〇 J 9 克，87%)以形成穩定產物。 Ή NMR (300 MHz, CDC13): 4, 22 (s, CH2), 5.23 (s, CH2), 7.38 (s，5H)。 製備5 式（IX.1)化合物之製備： 129671.doc -43- 200902536 .ο —=^ (IX.l) 向4.5升配備有回流冷凝器、溫度計、滴液漏斗及氬氣 導g之Keller圓底燒瓶卡裝填三氣化鋁（297,克，2 U莫 耳）及二氣甲烷（2·3升）並冷却至〇t：。在丨5小時内將三甲基 甲石夕烧基丙块（250.00克，2·23莫耳）與乙醯氯（〇16升， 2.23莫耳）於二氣甲烷（〇·4升）中之溶液添加於淺黃色懸浮液 中，將溫度維持在0與5 X：之間。將具有一定量沈澱鹽之褐 色洛液加熱至周圍溫度。將所得淡紅_褐色溶液傾倒於冰/ 水（2升）。將層分離並將水相用二氯甲烷（〇 5升）萃取。將 合併的有機相用水（0.5升）洗滌，乾燥（Na2S04)，過濾並在 減壓下濃縮，獲得淡綠-黑色液體（558克）。將產物於180毫 巴下蒸餾，獲得沸點介於64與70。(：之間之餾份（約160克）。 將此產物於210毫巴下再次蒸餾，獲得無色液體形式之化 合物（IX.1)(90.30克，49%)，其沸點介於81與85°C之間。 JH NMR (300 MHz, CDC13)： 2.02 (s, CH3), 2.31 (s, CH3) 〇 製備6 式（VII.1)化合物之製備： Ο

129671.doc -44- 200902536 向1升配備有回流冷凝器、溫度計、滴液漏斗及氬氣導 管之Keller圓底燒瓶中依次裝填化合物（7)〇 〇19〇克’ 〇 58 毫莫耳）、一氧雜環己烷（〇·5升）及化合物克， 0.64莫耳）。當添加甲基二苯基鱗（38 4克，〇 19莫耳）時， 反應開始高度放熱。 反應混合物變成深色並將其於1〇〇t下加熱丨小時。藉由 HPLC監視轉化率。在減壓下去除揮發性產物。粗製褐色 油（209克）藉由於二氧化矽（21公斤）上層析純化，用曱苯/ 乙酸乙酯（8/1)混合物進行溶析。將含純產物之部分合併並 在減壓下去除揮發性產物，獲得淺褐色糖漿狀油形式之化 合物（VII.1)(73.49 克，49%)。 ]H NMR (300 MHz, CDC13): 2.13 (s, CH3), 2.54 (s? CH3), 5.32 (8s，CH2)，6·68 (d，CH)，7·38 (m，5H)，9 2〇(寬單峰: NH)。 ， RP-HPLC ： HP Hypersil BDS_C C18, 125χ4毫米，25〇c 含有0.1% TFA之溶劑：乙腈（ACN)_水：自！至l〇〇%的 ACN持續l〇分鐘’然後1〇〇%Acn持續2分鐘 流率：1毫升/分鐘，在22〇奈米處檢測 樣品：1毫克/1.5毫升ACN Rt : 7_55分鐘（>91〇/〇) 製備7 式（2)吼咯甲烷之製備： 129671.doc -45- (2) (2)200902536

向4.5升配備有回流冷凝器、溫度計、滴液漏斗及氬氣 導管之Keller圓底燒瓶中裝填化合物（3)(52.0克，165.0毫 莫耳）及乙醚（1.5升）。在20分鐘内於周圍溫度下逐滴添加 新製備的溴（11.0毫升，214.0毫莫耳）於乙醚（0.5升）中之溶 液，以產生橙褐色溶液。藉由HPLC監視轉化率。若需 要’添加額外量的溴。將混合物於周圍溫度下再次擾拌。 在減塵下去除揮發性產物並將淺灰色-褐色殘餘物溶於甲 醇（364毫升）中。將溶液於約5(rc下加熱直至獲得完全轉化 (約1 1小時後藉由Η P L C測定）。將深色反應混合物在減壓下 浪縮直至產物開始結晶。藉由過濾分離所沈澱產物並用甲 醇（〇_2升）洗滌。藉由懸浮於乙醚（0.6升）中並回流使粗產物 重結晶，同時添加庚烷（1.8升）並繼續加熱以將混合物在回 流狀悲下再維持1 5分鐘。使混合物冷却至周圍溫度並藉由 過濾分離產物。將產物乾燥，獲得淺灰色粉末形式之化合 物（2)(31.70克，63%)。 " 'H NMR (300 MHz, CDC13)： 2.21 (s, ^ CH3), 2.43 (t, 兩個 CH2)，2.68 (t，兩個 CH2)，mo (s，兩個 CH3)，3 89 & CH2)，5·17 (s，兩個 Ch2)，7 2〇 (m, 1〇H)，9 〇〇(寬單峰，兩 個 NH)。 ’ 129671.doc -46- 200902536 製備8 式⑴吡咯甲烷之製偫：

H0T° V0H H3C^b^ ⑴

MeOOC COOMe 向低壓氫化裝置中裝填化合物（2)(3〇 7克，49 9毫莫 耳）、THF(400毫升）及1〇%的觸媒pd/c(1 5克，a〇2乃。於 周圍溫度下在氫氣壓力氣氛下進行氫化3小時。將2 ^^氨2 Ν(〇·1升）添加於反應混合物中並藉由過濾去除觸媒。藉由 添加乙酸（60毫升）將濾液調節至ρΗ為約7。在減壓下去除 溶劑。並藉由過遽去分離出沈殿產物，乾燥後獲得白色粉 末形式之化合物（1)(21.7克，定量）。 兩個 CH3)，2.20 H NMR (300 MHz, DMSO-D6): 2.18 (s (t，兩個 CH2)，2.59 (t，兩個 CH2)，3.60 (S，兩個 ch3)，3 82 (s，CH2)。 製備9 式（II.1)化合物之製備：

129671.doc •47- 200902536 向1升配備有回流冷凝器、溫度計、滴液漏斗及氬氣導 管之Keller圓底燒瓶中裝填三氟乙酸（19〇毫升）並冷却至〇 C 在10分鐘内於〇 C下以小批量添加化合物（ι)(2〇 〇克， 46.0毫莫耳p將混合物於下再攪拌！小時。藉由HpLc 監視轉化率。在30分鐘内逐滴添加原甲酸三甲酯（57毫 升），同時將溫度維持在0與5。(：之間。將反應混合物於οι 下再攪拌1小時且然後傾倒於水（丨.7升）中。將混合物劇烈 授拌10分鐘。藉由過濾分離出沈殿粗產物並用水（〇 ·3升）洗 滌所得橙色粉末。將粗產物在乙醇（〇 2升）及氨（〇 4升）中研 磨。將混合物於周圍溫度下攪拌3〇分鐘並藉由過濾分離出 產物並用水（〇 · 3升）洗條所得深黃色粉末。將產物在曱醇 (〇·4升）中回流1 〇分鐘。使混合物冷却至周圍溫度並藉由過 遽分離出產物並利用冷甲醇（〇·丨升）洗滌。將產物在減壓下 乾燥’獲得淺黃色粉末形式之化合物（π丨）（15 3〇克， 83%) 〇 】H NMR (300 MHz，CDC13): 2.30 (s，兩個 CH3)，2.53 (t, 兩個 CH2)，2.81 (t，兩個 CH2)，3.72 (s，兩個 CH3)，4.06 (s， CH2)，9.46(s，兩個 CHO)，1〇.43(寬單峰，兩個 NH)。 RP-HPLC ：

HP Hypersil BDS-C C18, 125x4毫米，25°C 含有0.1°/。TFA之溶劑：乙腈（ACN)-水：自1至100%的 ACN持續10分鐘，然後100%aCN持續2分鐘 流率：1毫升/分鐘，在220奈米處檢測

樣品：1毫克/1.5毫升ACN 129671.doc -48- 200902536 1^:6.78分鐘（>96%) 製備10 式（V.1)化合物之製備：

(V.1) 向2.5升配備有回流冷凝器、溫度計、滴液漏斗及氬氣 導管之Keller圓底燒瓶中裝填化合物（VII.1)(5〇〇克，1944 毫莫耳）、化合物（VI.1)(51.3克，155.6毫莫耳）及二氯乙烷 (1.1升）。將混合物加熱至40 t，獲得橙紅色溶液。添加 HBF4醚化物（2.35毫升（54%)，9.3毫莫耳）並將混合物迅速 加熱至90C。藉由HPLC監視轉化率。1小時後，將混合物 迅速冷却至周圍溫度並傾倒於飽和碳酸氫鹽溶液5升） 中。將層分離水相用二氯乙烷(〇.5升)萃取。將合併的有機 卒取物乾燥（NaJO4)，過濾，與？^〇1>出c(2克）一起攪拌， 過;慮並在減壓下完全濃縮，獲得朦黏褐色糖漿狀物（96.5 J)。將粗產物溶於甲醇(0.3升)中，纟減壓下濃縮並再次 冷於甲醇(150毫升)中。添加成核晶體並使混合物於周圍溫 猙止1 5小時’同時產物結晶。去除上清液並將晶體 K1，34.3克）用甲醇洗務。將合併的甲醇部分在減壓 :完全濃縮並在二氧切⑽克）上層析，用己烧/乙酸乙 S曰（2/1)進行溶析。將含產物之部分合併並在減壓下濃縮。 129671.doc -49· 200902536 將產物如上在曱醇中重結晶，獲得部分Κ2〇 6 7克）。將上 清液再次於二氧化矽（4〇〇克）上層析，用己烷/乙酸乙酯 (2/1)進行溶析。將含產物之部分合併並在減壓下濃縮。將 產物如上自曱醇重結晶，獲得部分Κ3(3.7克）。將該等產物 部分（Κ1-Κ3)合併’溶於曱苯中並在減壓下完全濃縮。在 減壓下於50°C下乾燥1小時後，回收呈灰白色晶體形式之 化合物（V.1)(54.7 克，68%)。 H NMR (300 MHz，CDC13): 2.09 (2.09，CH3)，2.49 (s， CH3)，2.50 (s，CH3)，2.58 (s，CH3)，4.04 (s，CH2)，5.27 (s, 〇12)’5.29(3，€：112)，7.35(111，1011)，10.5(寬單峰，皿）。 製備11 式（IV.1)化合物之製備：

向低壓氫化裝置中裝填化合物（V.1)(54 3克，1〇3丨毫莫 耳）、四氫呋喃（700毫升）、三乙胺（2〇 8克，2〇6 2毫莫耳） 及10%的觸媒Pd/C(2_75克）。於周圍溫度下在氫氣壓力氣 氛下進行氫化3小時。藉由過濾去除觸媒。將濾液於減壓 下濃縮。在減壓下於45°C下乾燥〇.5小時後，回收呈灰白 色發泡體形式之化合物（IV.1)(54.7克，定量），其係一種含 殘餘量曱苯及THF之單三乙胺鹽之形式。 (Η NMR (300 MHz, DMSO-D6): i 97 (s, CH3)，2 % (s， 129671.doc -50- 200902536 CH3)，2.52 (s，兩個 CH3)，4.14 (s，CH2)。 製備12 式（Ilia)化合物之製備：

向2.5升配備有回流冷凝器、溫度計、滴液漏斗及氬氣 導管之Keller圓底燒瓶中裝填固體NaHC03 (55.6克，662.0 毫莫耳）、水（900毫升）及乙醇（300毫升）。添加化合物 (IV.1)(54.3克’ 101.9毫莫耳）於乙醇（300毫升）中之溶液。 於周圍溫度下添加破（64.7克，254.9毫莫耳）於乙醇（4〇〇毫 升）中之溶液，獲得褐色非均相混合物。觀察到一定量的 泡沫及放熱減少。藉由HPLC監視轉化率。將反應混合物 於周圍溫度下再擾掉5小時。將反應混合物用水（〇. 1升）稀 釋並藉由過濾分離所沈澱產物。將沈殿物用水（3Χ〇. 1升）、 乙醇（2x0.1升）及乙謎（2x0.1升）洗務。將晶體產物在減壓下 於60 t：下乾燥後，回收淺紅色晶體形式之化合物 (III.a)(48.1 克，92%)。 NMR (300 MHz，DMSO-D6): 2.06 (s，CH3)，2.15 (s， CH3)，2.33 (s，CH3)，4.08 (s，CH2) 〇 RP-HPLC ：

HP Hypersil BDS-C C18，125x4毫米，25°C 含有0.1% TFA之溶劑：乙腈（ACN)-水：自1至l〇〇〇/o的 129671.doc -51 - 200902536 ACN持續10分鐘，然後1〇〇%ACN持續2分鐘 流率：1毫升/分鐘，在220奈米處檢測 樣品：1毫克/1.5毫升ACN Rt : 8.13 分鐘（>92%) 製備13 式（la.1)紫質之製備：

向2.5升配備有回流冷凝器、溫度計、滴液漏斗及氬氣 導管之Keller圓底燒瓶中裝填乙酸酐（29〇毫升）、乙酸〇 8 升）及三氟甲烷磺酸（4.95毫升，56.77毫莫耳）。於周圍溫度 下在5分鐘内添加化合物丨乂12 〇〇克，29 82毫莫耳）及化 合物（IIIa)(14.48克，28.40毫莫耳）於乙酸（400毫升）中之大 體均相洛液，此獲得血紅色溶液。未觀察到放熱。將混合 物於周圍溫度下再攪拌丨小時，其中形成一些沈澱物。藉 由HPLC監視轉化率。添加Na〇Ac(94克）於乙酸（1〇〇毫升） 中之溶液，獲得深褐色溶液。丨〇分鐘後，在減壓下去除揮 發性產物並在減壓下於5(rc下乾燥1 _5小時。將深色殘餘 物吸收與二氣甲烷（3〇〇毫升）、及水（5〇〇毫升）中，不進行 129671.doc •52- 200902536 劇烈搜拌。分離出有機層並用二氯甲烷（0.3升）萃取水相。 將合併的有機相乾燥（Na2S04)，過濾並濃縮，獲得黑色結 晶產物（3 1.3克）。將混合物溶於二氯甲烷中並施加於覆蓋 有二氣甲烧/丙_ (95/5)之矽膠（1公斤）管柱。產物利用95/5 至90/10之梯度溶析。將包含產物之部分合併並在減壓下 完全濃縮。回收紫黑色晶體形式之化合物（Ia.l)(9.97克， 55%)。4 NMR (3〇〇 MHz，CDC13): 3.15 (兩個 t，兩個 CH2) 3.17 (s，CH3)，3.25 (s，CH3), 3.39 (s，CH3)，3.50 (s，Ch3), 3.60 (s，CH3)，3.64 (s，CH3)，3.65 (s，CH3), 3.71 (s，CH3) 4.22 (兩個 t，兩個 ch2)，9.50 (s，CH)，9.59 (s，CH)，10.43 (s，CH), 10.46 (s，CH)。 RP-HPLC ：

HP Hypersil BDS-C C18, 125x4毫米，25°C 含有0.1°/。TFA之溶劑：乙腈（ACN)-水：自1至100%的 ACN持續10分鐘，然後i〇〇%ACN持續3分鐘 流率.1宅升/分鐘，在2 2 0奈米處檢測

樣品· 1毫克/1.5毫升ACN

Rt : 11.66分鐘（>93%) 製備14 式（Ib.l)紫質之製備： 129671.doc •53- 200902536

(Ib.l) 向1升配備有回流冷凝器、溫度計、滴液漏斗及氬氣導 管之Keller圓底燒瓶中裝填化合物（la.1)(9.86克，15·84毫 莫耳）、二氣甲烷（500毫升）及甲醇（24毫升）。向該淺紅色_ 褐色混合物中逐份添加NaBH4(3.00克，79.32毫莫耳）。觀 察到一定量泡沫。藉由HPLC密切監視該反應。80分鐘 後，將混合物傾倒於水（500毫升）與4 N HC1(80毫升）之混 合物中。看到有氣體釋放出。藉由添加固體NaHC03將混 合物中和。將層分離並用二氣甲烷（2x300毫升）萃取水相。 將合併的有機萃取物乾燥（Na2S〇4)，過滤並在減壓下濃 縮。在減壓下於50°C下乾燥0.5小時後，回收呈紫黑色晶 體形式之化合物（Ib.l)，其為兩種立體異構體之混合物形 式（9.58克，96%) ° 4 NMR (300 MHz，CDC13): 1.92 (m，6H,兩個 CH3)，3.16 (111，411，兩個（^2)，3.28，3.30，3.33及3.35(48，611,兩個 CH3), 3.43 (s，6H,兩個 CH3), 3.66 (s, 6H,兩個 CH3), 4·2〇 (m, 4H，兩個 CH2), 6.05 (m, 2H,兩個 CH)，9.73, 9.74, 9.75, 9.76，10.00，10.02，10.〇8及 lo.io (8S,總共 4H，四個 ch)。 RP-HPLC ： 129671.doc -54 - 200902536

HP Hypersii BDS-C C18, 125x4毫米，25°C

含有0.1% TFA之溶劑：乙腈（ACN)_水··自1至1〇〇%的 ACN持續1 〇分鐘’然後1 〇〇% ACN持續3分鐘 流率：1毫升/分鐘，在22〇奈米處檢測 樣品：1毫克/1.5毫升ACN

Rt : 7.90分鐘，51%，且 8.01分鐘，49% 製備15 式（Ic.l)紫質之製備：

向1升配備有回流冷凝器、溫度計、滴液漏斗及氯氣導 管之Keller圓底燒瓶中裝填化合物（11) 1)(9 48克，1512毫 莫耳）及DMF(400毫升）並利用i氣使混合物脫氣。添加苯 甲酿氣（45.0毫升，387.9毫莫耳）並將混合物迅速加熱至 HHTC。將混合物於1G(rc下再攪拌丄小時。藉由HpLc監視 轉化率。將反應混合物迅速冷却並在減壓下去除揮發性產 物。將殘餘物mu㈤升）中並與水/甲醇（〇3升） 混合物-起劇烈攪拌。將層分離並用二氯甲烷(2χ〇.2升)萃 取水相。將合併的有機萃取物用碳酸氫鹽(〇.3升)洗滌，乾 燥（Na2S〇4)並過遽。將遽液用二氧切（20克）處理並過 12967I.doc -55- 200902536 濾。添加曱醇（50毫升）且然後將混合物在減壓下濃縮，快 結束時出現結晶，獲得紫黑色產物（2〇克）。將產物用曱醇 於50 C下研磨〇.5小時。冷却至周圍溫度後，添加氣仿毫 升）並藉由過濾分離產物。在減壓下於50。(：下乾燥15小 時’回收光亮的紫黑色晶體形式之化合物（^3)(634克， 77%) ° NMR (300 MHz，CDC13): 3.23 (t，兩個 CH3)，3.52 (s， CH3)，3.54 (s，CH3), 3.58 (s，CH3), 3.64 (s，CH3), 3.64 (s， CH3), 3.65 (s, CH3), 3.66 (s, CH3), 4.32 (t,兩個 CH2)， 6.11-6.34 (m，4H，兩個 CH2=)，8.10-8.23 (m，2H，雨個 CH=), 9.85, 9.86, 9.97及 9·98 (4s，4CH)。 RP-HPLC ：

HP Hypersil BDS-C C18，125x4毫米，25°C 含有0.1% TFA之溶劑：乙腈（ACN)-水：自1至100%的 ACN持續10分鐘，然後l〇〇%ACN持續6分鐘 流率：1毫升/分鐘，在220奈米處檢測 樣品：1毫克/1.5毫升ACN Rt : 12.43 分鐘（>97〇/〇) 製備16 式（IC.2, 2Na)紫質之製備： 129671.doc -56- 200902536

向2.5升配備有回流冷凝器、溫度計、滴液漏斗及氬氣 導管之Keller圓底燒瓶中裝填化合物（Ic.1)(63〇克，ι〇67 毫莫耳）及二氯甲烧（200毫升）。藉由於40。(：下加熱將產物 溶解。於40°C下，相繼添加甲醇（400毫升）隨後4 N NaOH (200毫升）。觀察到形成沈澱。使混合物回流。藉由hplc 監視轉化率。在減壓下去除有機揮發性產物。藉助玻璃纖 維過遽器過渡懸浮液。將產物用水（3 X〇. 1升）、甲醇（3 X3〇 毫升）及乙醚（2x30毫升）洗滌。在減壓下於70°c下乾燥2小 時、然後於40°C下乾燥1 5小時後’回收紫黑色固體產物形 式之化合物（Ic.2,2Na)(6.06克，94%)。 NMR (300 MHz，TFA-D!): 3.45 (兩個 t，兩個 CH2)， 3.82 (s，CH3)，3.85 (s，CH3)，3.88 (s，CH3)，3.91 (s，CH3)， 4.73 (兩個 t，兩個 CH2)，6.43-6.70 (m，4H，兩個 CH2=)， 8.28-8.40 (m，2H，兩個 CH=)，11.08, 11.11，ll.15 及 η.27 (4s，4CH)。 RP-HPLC :

HP Hypersil BDS-C C18，125 x 4毫米，25°C 溶劑：含有0·1°/〇 TFA之乙腈（ACN)-含有0.1% TFA之水： 自1至100%的ACN持續10分鐘，然後100% CAN持續6分鐘 129671.doc •57· 200902536 流率：1毫升/分鐘，在220奈米處檢測 樣品：0.1毫克/1.5毫升AcOH/DMF 1^:9.85分鐘（>98%) 元素分析 C34.H32_N4.04.Na2的理論值(MW 606 63) 結果 C 67.32 +/- 0.3% m/m 64.91% m/m Η 5.32 +/- 0.3% m/m 5.38% m/m Ν 9.24 +/- 0.3% m/m 8.94% m/m 水 3.56% m/m Na 7.58 m/m 7.15% m/m 每莫耳產物添加1.24莫耳水（水的量藉由卡丨 爾-費希爾滴 定（Karl-Fischer titration)量測）之後校準量測值 ο C34.H32.N4.04.Na2. 1.24H20 的理論值 結果 C (MW 636.54) 64.93 +/- 0.3% m/m 64.91% m/m Η 5.28 +/- 0.3% m/m 5.38% m/m Ν 8.91 +/- 0.3% m/m 8.94% m/m 水 3.56 m/m 3.56% m/m Na 7.31 m/m 7.15% m/m 】2967 l.doc -58 -

Claims (1)

1. 200902536 十、申請專利範圍： 1. 一種製備式（I)紫質之方法，該紫質可視情況呈鹽形式：

   其中： -R係氫原子或選自以下之基團：-(：11=(：112、-(：112-CH3、-CH(OH)CH3、-C(0)CH3及-CH2CH2COOR，a，其中 R4為氫原子或曱基、乙基、正丙基或異丙基， -R’係氫原子或選自曱基、乙基、正丙基或異丙基之基 團 R’b， 該方法包含： -縮合步驟，其係於酸性介質中在以下兩種物質之間進 行：式（II)二吡咯甲烷

   其中R'b如上述（I)所定義 與式（III)二吡咯甲烷： 129671.doc (III) 200902536

   其中R"係如以上針對（I)所 團，以形成式（I')紫質： 定義之R或係作為R前體之基

   其中R”與R'b皆如針對（n)及（ΙΠ)所定義， 隨後 -當R”不為R時，將基團R”轉化成尺， -當R’=H時，消去基團R，b，以形成_c〇〇H官能團， 該官能團視情況呈鹽形式。 2.如請求項1之方法，進行該方法以製備式⑴化合物，其 中係氣原子或選自以下之基團：-CH2-CH3、 、-C(0)CH3及-CH2CH2c〇ORia，其中R，a為氫原子或甲 基'乙基、正丙基或異丙基。 月长項1之方法’進行該方法以製備其中R為-CH=CH2 基團之式(I)化合物，該方法包含： 縮〇步驟，其係於酸性介質中在以下兩種物質之間進 行·式（11)二D比洛甲烷： 129671.doc 200902536 Ο^Η Η 〇

   其中R'b如以上針對（I)所定義， 與式（III)二吡咯甲烷：

   其中R”係作為R前體之基團，隨後將基團R”轉化成R， 且當R'=H時，消去基團R’b以形成-COOH官能團，該官 能團視情況呈鹽形式。 4. 如請求項3之方法，其中R”為-CH2CH2OH、-CH2CH2C1 、-ch2ch2oc(o)ch3、-ch(oh)ch3 或-c(o)ch3基團。 5. 如請求項3或4之方法，其中R"為-CH(OH)CH3或-C(0)CH3 基團。 6. 如請求項1之方法，進行該方法以製備式（IA)化合物：

   其中R|係如針對（I)所定義，或其與例如鹼金屬形成之 129671.doc (II) 200902536 鹽，其藉由使式（II)·1比咯甲燒：

   其中R’b如以上針對⑴所定義， 與式（Ilia)二吡咯甲烷偶合：

   I I H3C (Ilia) 丨道傻，若其中R'為氫原子時 官能團之保護基之步驟， 則 進行水解脫除該-COOH 或者，視情況若f要與驗金屬形 時，則進行皂化步驟。 氣形式之化合物（IA) 月托項6之方法，其中R，b為甲基。 8.如請求項1之方 ' 進行該方法以製備式（IB)化合物： 其 中係如

   (IB) 針對（I)所 疋義，或其與例如驗金屬形成之 129671.doc 200902536 鹽，其藉由使式（II)吡咯曱烷：

   其中R’b如以上針對（I)所定義， 與式（Ilia)二吡咯曱烷偶合：

   以形成式（la)化合物：

   da) 其中R’b係如針對（I)所定義， 隨後將-c(o)ch3官能團還原成-CH(OH)CH3， 且若其中R’為氫原子時，進行水解脫除該-COOH官能團 之保護基之步驟， 或者，若需要與鹼金屬形成鹽形式之化合物（IB)時，則 進行皂化步驟。 129671.doc 200902536 9.如請求項8之方法，其中該-C(0)CH3官能團之還原係在 氮化物、較佳諸如NaBH4或BH3之硼氫化物之存在下進 行。 1〇·如請求項9之方法’其中該_C(〇)CH3官能團之還原係在 二氯甲烷中，在甲醇之存在下，較佳在介於〇與6〇t；c之 間 '較佳介於2〇與3(TC之間之溫度下進行。 進行該方法以製備 1 1.如請求項1、3及4中任一項之方法， 式（1C)化合物：

   其中R’係如針對⑴所定義’〗 鹽，其藉由使式（II)吼咯甲烷： 或其與例如驗金屬 形成之

   其中R'b如以上

   129671.doc 200902536

   以形成式（la)化合物：

   (la) 其中IVb係如針對（I)所定義， 隨後： -將-C(0)CH3官能團還原，以形成式（lb)紫質：

   其中R'b係如針對（I)所定義， -隨後進行基團-CH(OH)CH3轉化成-CH=CH2之消去反 應， -且若其中R1為氫原子時，則進行水解脫除該-COOH官 129671.doc 200902536 能團之保護基之步驟， 或者，若需要與鹼金屬形成鹽形式之化合物（IC)時，則 進行皂化步驟。 12, 如請求項！！之方法，其中該基團_ch(〇h)ch3轉化成 之消去反應係在醯基幽化物、較佳諸如苯甲醯氯之醯基 氯的存在下進行。 13. 如請求項12之方法，其中該基團_CH(〇H)cH3轉化成 之’肖去反應係在諸如DMSO、丙酮或較佳DMF之非質子 極性溶劑中，較佳在5〇至2〇〇t之溫度下進行3〇分鐘至3 小時，且較佳在80至120T：之溫度下進行大約工小時。 M.如凊求項1 1之方法，其中該—C(0)CH3官能團之還原係在 氫化物、較佳諸如NaBH4或BA之硼氫化物的存在下進 行。 15. 如凊求項14之方法，其中該-C(0)CH3官能團之還原係在 一乳甲垸中’在甲醇之存在下，較佳在介於〇與6〇〇c之 間、較佳介於20與30T：之間之溫度下進行。 16. 如請求項11之方法，其中R'b為曱基。 17. 如请求項16之方法，其用於製備呈式（1C.2, 2Na)鈉鹽形 式之原紫質（IX):

   129671.doc 200902536 其·中由式（Ic)化合物進行皂化步驟：

   18.如請求項17之方法，其中該皂化步驟係在二氯甲烷中， 於回流下進行。 1 9.如凊求項丨至4及6至8中任一項之方法其中該兩種吡咯 曱烷（II)與（ΠΙ)或（IIIa)之間之縮合反應係在選自以下之 酸的存在下進行：羧酸、三氟乙酸、氫氯酸、三氯甲烷 ㈣酸、曱烧確酸、二氟曱烧項酸、四氟爛酸、氫溴酸及 氫碘酸。 20. 士叫求項19之方法，其中該酸為强酸，較佳為三氟乙酸 或二氣甲烷磺酸，其較佳為相對於該吡咯甲烷（H)使用 過量，例如每當量吡咯甲烷（11)使用2當量酸。 21·如請求項20之方法，其中該兩種吡咯甲烷（π)與（ιπ)或 (Ilia)之間之縮合反應係在乾燥劑之存在下進行。 22. 如請求項21之方法，其中該乾燥劑係選自酸酐、分子筛 及硫酸。 23. 如請求項22之方法，其中該乾燥劑係乙酸酐。 24. 如請求項23之方法’其中該乙酸軒相對於該吼哈甲燒 129671.doc 200902536 (II)之用量為過量’較佳為至少10、較佳至少5〇當量。 25. 如請求項24之方法，其中進行該縮合法之吡略甲烧（π) 用量為相對於該。比咯甲烷（III)或（IIIa)大體上使用i當量 或賴過量。 26. 如晴求項24之方法’其中該兩種π比p各甲烧（η)與（in)戍 (Ilia)之間之縮合反應係在1〇至5〇°c、較佳2〇至25。(：之温 度下，在諸如乙酸之質子溶劑中進行。 27. —種製備式（I)紫質之方法’該紫質視情況呈鹽形式：

   其中： • R係氫原子或選自以下之基團：-(：11=(^2、-(：112- CH3、_CH(OH)CH3、-C(0)CH3及-CH2CH2COOR’a，其中 R'a為氫原子或甲基、乙基、正丙基或異丙基， -R’係氫原子或選自曱基、乙基、正丙基或異丙基之基 團 R’b， 其呈諸如鐵、鎵、鎳、鋅、鈀、鈷、鈣或鎂之金屬錯合 物形式，其中在該等化合物（H)與（m)或（ina)之該縮合 步驟後所形成紫質之錯合步驟係在所選金屬或金屬衍生 物或該所選金屬之鹽的作用下進行。 129671.doc -10- 200902536 28·如請求項27之方法，其中該錯合步驟係在最終步驟中， 由視情況呈鹽形式之式（I)紫質進行。 29. 如請求項27或28之方法，進行該方法以形成血紅素、血 晶素或血色素。 30, —種式（III)吡咯甲烷：

   其中R"為選自氫原子或選自以下基團的基團R: -CH=CH2 、-CH2-CH3、-CH(OH)CH3、-C(0)CH3及-CH2CH2COOR'a， 其中R'a為氫原子或甲基、乙基、正丙基或異丙基。 3 1.如請求項30之吡咯甲烷，其中R”係氫原子或基團-(：112-CH3、-CH(OH)CH3、-C(0)CH3 或-CH2CH2COOR，a，其中 R'a為氫原子或甲基、乙基、正丙基或異丙基。 32. 如請求項30之吡咯甲烷，其中R"係作為-CH=CH2之前體 之基團，其選自：-ch2ch2oc(o)ch3、-CH2CH2OH、-CH2CH2C1 、-ch(oh)ch3及-c(o)ch3。 33. 如請求項3 0至3 2中任一項之吡咯甲烷，其中R”為 -ch(oh)ch3 或-c(o)ch3基團。 3 4. —種化合物，其選自式（Vila)、（Va)及（IVa)之化合物： 129671.doc 200902536 »

   35. 一種式（I)紫質：

   R CH,

   其中R及R|係如請求項1中所定義，以及其與鹼金屬形成 之鹽，其可根據如請求項1至26中任一項之方法獲得。 129671.doc 12- 200902536 七、指定代表圖： (一) 本案指定代表圖為：（無） (二) 本代表圖之元件符號簡單說明： 八、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式：

   129671.doc -6-