TW200808709A - Novel compounds - Google Patents

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200808709 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明案係關於新穎之六氫U比畊衍生物、含有該化合 物之醫藥組成物’及關於其作為治療腸胃及其他疾病之用 5 途0 【先前技術】 饑餓荷爾蒙格瑞咁（Ghrelin)係28個胺基酸之胜肽， 主要為胃，少部份為腸、胰臟、腎臟、胎盤、腦下垂體及 下視丘之弧形核所製造。其僅近來已由大鼠及人類胃部純 化分離出（Kojima et al·，Nature 1999; 402: 656)，其發現自 與胃腺之酸分泌壁細胞有關之χ/Α内泌細胞。研究顯示格 瑞啉作用於生長激素促泌素受體（GHS-R)，刺激生長激素 之釋放’誘發大鼠肥胖症（Tsch0p et al·，Nature 2000, 407(6806)，908) ’ 控制胃酸分泌（Masuda et al·，Biochemical 及 Biophysical Research Communications 2000; 276: 905)， 及於舊齒類動物弧形核内釋放（Kojima et al·，Nature 1999; 402: 656; Lu et al.? Neuroscience Letters. 2002; 321(3):157) 或大腦腦室内投與時(Nakazato et al·，Nature 2001; 409: 194; Shintani et al·，Diabetes 2001 ;50·· 227)刺激食物攝取增 加。全身性投與格瑞啉可達相同效果，可能係經由改變迷 走神經輸入至腦幹迷走神經核，且由此至弧形核（Date et al·，Gastroenterology 2002; 123: 1120)。該等研究指出， 96168-發明說明書 5 200808709 =七促關具療效科_之_及飲食異常之 格瑞咁受體之促效劑業經敘述為可 5 10 15 或增加食慾。其㈣可用於患病或騎，或 :口療中，伴隨體麵輕之病患。伴隨體重減輕之疾 = 貝一aids、她病、惡病質及老弱者之消耗病。伴 減輕的治療之例包括化療、放射線治療、暫 制運動及透析。 進一步研究指出，生長激素促泌素[例如W〇 97/24369] 於下列情況扮演格瑞啉受體促效劑之角色：治療或預防因 衰老引起之虛弱、加速骨折之復原、大型手術後或慢性病 期間減緩蛋白質之分解、增進肌肉力量及鬱血性心衰竭之 運動性控制、以及其它代謝異常。該等化合物之相關研究 亦指出，其具有增進睡眠品質[WO 97/24369]，以及改善投 與格瑞σ林後鬱企性心衰竭之特性(Nagaya et al.，J. Clin. Endocrinol· Metab. 2001，86, 5854- 5859; Circulation 2001， 104, 1430-1435)。 於麻醉中及清醒之嚅齒類，以及清醒之犬，格瑞啉增 進胃螺動及排空（anaesthetised rat motility Masuda et al·， Biochemical 及 Biophysical Research Communications 2000; 276: 905; rat gastric emptying Trudel et al.? American 6 20 200808709

Journal of Physiology 2002; 282: G948; mouse gastric emptying Asakawa et al·，Gastroenterology 2001; 120: 337)。該作用亦可於試管内展現自大鼠格瑞啉促進電刺 激、嚙齒類胃底肌條之神經興奮·媒介收縮之能力，即一種 5 模擬部分5-HT4受體促效劑且表示「近似促腸胃蠕動」反 應之反應（Murray et al·，British Journal of Pharmacology 2002; 136: 1 8P)。進而，格瑞咁之大腦腦室内投藥於清醒 之大鼠可減少胃酸分泌（Sibilia et al，Neuroendocrinology 2002; 75: 92);皮下注射則無任何效用。楚鐸（Trudel)及其 ίο 同仁（American Journal of Physiology 2002; 282: G948)展 現格瑞咁可反轉由腸操作所引發麻痺性腸塞絞痛而導致 • 之胃鬱積。以上所有資料顯示，格瑞咁可以腸胃道激素作 用，以同時促進營養攝取與消化。當其對於維持適當之血 糖水準而&為重要的’此付合格瑞。林引發小幅減緩胰臟胰 15 島素分泌之能力與瑞啡於斷食期間釋放一致之提議（see

Muccioli et al·，Eur J Pharmacology 2002, 440: 235) 〇 從而，除與惡病質（如因癌症）有關之狀況、軋肉減少 症及/或因肌肉群之喪失而惡化之慢性病（如骨質疏取症、 類風濕性關節炎、骨關節炎、年齡增長）、生長激素缺乏症 20 (如因年齡之相關狀況）、其它代謝異常、睡眠或擎血性'、、 衰竭等形態之障礙以外，GHS-R促效劑均為緩和與胃: 食道逆流及/或消化不良相關症狀、無論伴隨或未伴隨食辫 ' /代謝相關之惡病質之有效治療方法。該等狀況之例^二二 • 抗癌治療及其它治療方法相關之進食減少、胃鬱積及喔土 200808709 或引發相似症狀之狀況、糖尿病性胃輕綠、胃 能性消化不良相關之症狀及胃〜食道逆流疾病。、/而力 刺激腸道橋動之能力係建議對格瑞咐受體具活丄 物為有效治療麻痺性腸塞絞痛或假性腸阻塞， 1匕口 5 關狀況如嚴重便秘敏感性腸道症候群之方法。對^山目 體具活性之化合物在減緩發炎之能力亦可用於治 胃炎及發炎性腸病等狀況。 “ 歐洲專利申請案EP1159964請求一種化合物之用 途’其以刺激病患生長激素之釋放作為方法，刺激病患腸 10 胃系統蠕動。 WO 95/06637揭示一系列之六氫π比u井衍生物，其經指 出具有5-HT1D受體拮抗劑活性。WO0236562、 W00132660、W00005225、W09942465 及 WO9827081 均 主張芳基六氫吡畊磺醯胺衍生物為5-HT6受體拮抗劑。 15 WO0274764、WO0274768 及 W00123374 均主張二甲基六 氫吡畊衍生物為選擇性5HT1B受體拮抗劑。 W006/010629揭示一系列式(A)之芳基六氳他畊衍生 物：

(A) 8 200808709 其對生長激素促泌素（GHS)受體具有促效活性。 【發明内容】 5 如今我們發現一種新穎類型之芳基六氫啦畊磺醯胺 衍生物，其表現對生長激素促泌素（GHS)受體之選擇性 促效活性。 因而本發明提供一種式⑴化合物或其藥學可接受衍 生物：

(I) 10 其中Ra為任意之經取代芳基或任意之經取代雜芳基；Rb 及Re各為氫或Cu烷基； Q為一環，其中W及X各為CH或N，且Y及Z各為CRd 或N ;且

Rd係獨立選自下組··氫、Ci_6烷基、Cw烷氧基、鹵素、 15 羥基、三氟甲基、Cu鹵烷氧基、酮基及氰基；其中0及

Re至少其中之一為C!_6烷基，且W、X、Y及Z至少其中 之一為N。 ， 無論單獨或為其它基一部分之烧基，均可為直鏈或分 200808709 鹵素」一語於此為選自氟、氯、 枝鏈。除非另有指定 溴或峨之基。 5 基。上二 =處基；基基之一部分時包括苯基及萘 基 語可代表萘-1-基及萘-2· 員 芳基」一語代表含選自氧、氮及硫之雜原子之5-6 衣方族或稠合til員雙環芳族環。 10 15 N田雜芳基一語代表5或6員基時，其含一個選自〇、 3 2之雜原子，且可任意另含丨至3個氮原子。當雜芳 土厂、6員基時含1至3個氮原子。 §雜芳基一語代表稠合之8-11員雙環之芳族環時， 3 1至3個自〇、N或s選出之雜原子。 该等單環芳族環之合適例包括噻吩基、呋喃基、吡咯 基、二唑基、咪唑基、啐唑基、噻唑基、噁二唑基、異噻 坐基異吟唾基、喧二唾基、u比嗤基、鳴咬基、建嗓基、 "比啡基及吼淀基。稠合之8-11員雙環芳族基一語包括其中 一環部分飽和之基。 該等稠合芳族環之合適例包括苯并稠合之雜環，諸如 圭琳基，異1琳基，啥唾琳基、啥嗤琳基、增琳基、萘咬 基基、’唾基、吼咯并0比咬基、嗔吩并峨。定基、苯 并呋喃基、苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并噚唑基、苯并 亏唑基、苯并噻唑基、苯并異噻唑基、笨并噁二唑基、 苯并嗟二哇基、笨并二啐烷基、吲哚咁基、異崎哚啉基、 10 20 200808709 四氫喹啉基、四氫異喹啉基、苯并氮雜箪基或吮基。 10 15 2〇 依以上疋義方基及雜方基包括之基，其可任意為一至 三個相同或不同之取代基取代，且該等取代基選自下組： 鹵素、羥基、氰基、硝基、酮基、三氟曱基、三氟甲氧基、 氟甲氧基、二氟甲氧基、Cl 6烷基、CM環烷基、全氟乙 基、C“6烷氧基、芳基Ck烷氧基、Ci 6烷基硫基、ci 6 烷氧基Cw烷基、Cp環烷基Cl_6烷氧基、Ci 6烷醯基、 烷氧基羰基、C!—6烷基磺醯基、Ci 6烷基亞磺醯基、 ，基續Si基氧基、基磧喊Ci_6^、絲瑞酿基、 2基石黃酿基氧基、芳基魏基Ci6燒基、芳基氧基、雜芳 二孔^鋒基、絲基Ci6燒基、芳基〜烧醯基、芳 :二基、雜環ΐ、或以下之基：NRlR2、C0NRlR2、 cX Γ 或 形成!'基、或雜芳基，或與氮原子共同 N之韻外環員、。彳，其可任意含-選自0、S或 已基合適之C3-6環烧基包括環丙基、環丁基、環戊基及環 ^取代，代’料取代基可任意進一步 式讀等芳基及雜芳基上之進㈣基。例如’ 烷基、Cl产气I ^取代基可選自鹵素、氰 基、及_基。22及_基。特別為氟、氰基、Ρ ，；該等芳基及雜芳基上之取代基可 200808709 選自氟基、甲氧基及曱氧基曱基。 「雜環基」一語意指4-7員單環之飽和或部分不飽和 之脂族環，其含1至3個自氧、硫或氮選出之雜原子。該 等單環之合適例包括咐略咬基、哌啶基、哌嗪基、嗎福啉 5 基、硫基嗎福啉基、二氮雜環庚烷基、氮雜環庚烷基 (azepanyl)及四氫吱喃基。 本發明之一組合適化合物為式(IA): 其中

10 Ra、Q、Rb、RC、Rd、w、X、Y 及 z 如式(I)定義。 一組合適之式(I)及(IA)化合物為： R為任意之經取代苯基；及/或 Rb及Re均為甲基；及/或 Q選自下組：2-吡啶基、3-吡啶基、4_吼啶基及4-嘧啶基； 15 及/或 所有Rd均為氫或甲氧基。 合適之Ra可為任意經取代呋喃基或任意經取代嘍吩 基所取代。 12 200808709 式(i)之特定例為： Ν-{6-[/#·3,5-二曱基小派嗪基]-2_七定基}_3遠基 基-2-吱喃基）笨石黃醯胺； 曱 Ν 一 (IP’磨_3,5_二甲基-1-哌嗪基]-4-吡啶基)-4-(5-曱基_2 5 吱喃基）苯績醯胺； Ν-[6-[/#-3,5-二甲基_；!_哌嗪基]-3_(曱基氧基)吡啶基 氟基-4-(5-曱基-2-吱喃基）苯石黃醯胺； N-(2-{廣-3,5_二曱基小哌嗪基]|嘧啶基）_3•氟基 基-2-吱喃基）苯續醯胺； ^ 10 2-氯基善[H(3及，55>3,5-二甲基小哌嗪基]-3-(甲美k 基)_2-u比咬基]-4-(5-曱基-2-吱喃基）苯石黃酿胺 2-氯基-N-[6-[(3及，55>3,5_二曱基-1-派嗪基]甲美^ 基)-2-吼咬基]-4-(4-甲基-2-嗔吩基）苯石黃酿胺 2-氯基-N-[6-[(37?，5iS)-3,5-二甲基-1· u底嗪基]_3_(甲美' 15 基)-2-11比σ定基]-4-(3-咬喃基）本績酿胺 2_氣基-N-[6-[(3兄55>3,5-二甲基小哌嗪基]_3_(甲基氧 基)-2-。比°定基]-4-(5-甲基-2-σ塞吩基）苯石黃酿胺 Ν-[6-[(3兄55>3,5-二甲基-1-哌嗪基]-3-(曱基氧基）_2_吡啶 基]-4-(5-甲基_2_呋喃基）苯磺醯胺 2〇 Ν-[6·[(3Λ，55>3,5-二曱基-1-哌嗪基]-3-(曱基氧基比咬 基]-2’-氟基-5’-(曱基氧基)-4-聯苯基磺醯胺 N-[6-[(37?，55>3,5-二甲基-1-哌嗪基]-3-(甲基氧基 基]-2-氟基-4-(5-曱基-2-呋喃基）苯磺醯胺 、 N-{4-[(3i?，5S)-3,5-二甲基小哌嗪基]-2-吡啶基卜3-氟基 13 200808709 -4-(5-甲基-2-吱淹基)苯石黃酿胺 N-[5-[賡-3,5-二甲基小旅嗪基]_2_(甲基氧基》比咬基奸 氟基-4-(5-甲基-2-呋喃基)苯磺醯胺 N- {5-[聲3,5-二甲基小旅嗪基]冬吼咬基卜3_氟基|(5_甲 5 基-2-吱喃基)苯續酸胺 N-{5-[聲3,5-二甲基小哌嗪基]_2__基]，2_二氫_3_吡啶 基卜3-氟基-4-(5-甲基-2-呋喃基）苯磺醯胺 式⑴化合物之藥學可接受衍生物包括所有藥學可接受 鹽類，酯類或式(I)化合物之該等酯類之鹽類，其投與受藥 〇 者後可（直接或間接）提供式⑴化合物或其具活性之代謝 物或殘餘物。 該等式(I)化合物可形成其酸添加鹽類。式(1)化合物之 鹽類用於醫藥應為藥學可接受者。合適之藥學可接受鹽類 應為技術純熟者所熟悉，及包括述於J. Pharm. Sei.，1977, > 66, 1-19者，諸如無機酸形成之酸添加鹽類如氩氯酸、氫 溴酸、硫酸、硝酸及有機酸如琥珀酸、順稀_ 反丁烯二酸、檸檬酸、酒石酸、苯甲酸、二—二酸乙% 磺酸、水楊酸、乳酸、苯氫乙酸或萘磺酸。 式⑴化合物及其衍生物可製為晶形或非晶形，且製為 > 晶形時可任意為水合或溶解。本發明之範圍包括化學計量 上之水合及各種水含量之化合物。 某些特定式(I)化合物可存在立體異構物形態（如eg. 非鏡像異構物及鏡像異構物）且本發明延伸至每一種該等 立體異構物形態及其混合物包括消旋物。不同之立體異構 14 200808709 物形態可以一般方法單一自其它異構物分離，或任何特定 異構物亦可以立體特異反應或不對稱合成製得。本發明亦 延伸至任何互變異構體及其混合物。 5 本發明之化合物可以相似於已知文獻之方法製備。然 而，本發明亦提供製備式(I)化合物或其藥學可接受衍生物 之方法，包括： 方法(a)將式(II)化合物

(II) 10 其中W、X、Y、Z、Rb&Re如式(I)或其受保護衍生物 之定義，與式(ΙΠ)化合物偶合，其中Ra如式(I)中所定義， 且L1為合適之脫離基，諸如合適之齒素基(如氣）或五氟基 苯基氧基。 〇 R—S—L1 !! Ο (III) 方法（a ) —般包括使用驗如吼定。方法（a )可包括使用 驗，如吼咬，於適當溫度如室溫或80°C，於適當之溶劑如 二氯甲烧。或是，方法（a )包括使用鹼諸如σ比咬溶於適當 之溶劑如二氣甲烷，形成雙-磺醯胺，其隨後可以適當之鹼 15 15 200808709 如氫氧化鈉水溶液於適當溫度如40°C裂解為單-磺醯胺。 式（III)化合物可購得或以已知方法或其相似方法製 備0 或者以方法(b):式(I)化合物與其它式⑴化合物之相互 5 10 轉變。 方法(b)可使用習用過渡金屬媒介之偶合反應實行。可 用於相互轉變方法之過渡金屬媒介偶合反應之例，包括下 列方式：鈀催化之偶合反應，例如有機親電子劑如i化芳 基與有機金屬試劑例如錫烷（史德雷（Stille)偶聯反應） 或其它適用之試劑例如硼酸（鈴木偶聯反應）間之偶合反 應;及銅媒介之酚類及硼酸類間之偶合反應。 式(II)化合物可以下列方案製備：

Rb

(V) 步驟 (ii)

Rb

(Π) 其中▽、又、丫、2、1^及1^如以上定義，1?為合適之脫 16 200808709 離基’如鹵素（如溴）。 當脫離基L2為該等鹵素原子(如溴或氯）時，典型之 步驟(1)包含於適當溫度(如回流溫度），於鹼如三級_ 丁氧化 鈉存在下，溶於適當之溶劑如二噚烷，經過渡金屬催化劑 如I巴鹽（如二（二亞节丙_)二把(〇))催化，並與合適之配位 基（如、2_二環己基膦基_2’伐I二甲基胺基）二苯基)併用 下，式（IV)化合物以式(V)之畊處理。該反應亦可於適當 溫度（如120C)，溶於適當之溶劑如二畤烷，於微波反 應器内實行。 步驟(ii)包含式(VI)化合物内之硝基還原反應，還原為 式(II)之苯胺。典型之步驟(ii)可於過渡金屬催化氫化反應 之狀況下實行，例如於一大氣壓氫氣下，於適當溫度（如 回流溫度)使用合適之催化劑如碳鈀，溶於合適之溶劑如乙 醇，或使用氯化鍚溶於適當之溶劑如乙醇。 式（IV)及（V)之化合物可購得或可以已知方法或與其 相似之方法製備。 或者以方法(c):以式(VII)化合物， R—S=0 \

(VH) 其中W、X、Y、Z及Ra如以上定義，且L2為合適之脫離 17 200808709 基如鹵素（如埃，溴或氣），鱼_^'7、 ^ u 得出式(1)化合物。 、式(V)之六心畊化合物反應 典，t巧)可於驗存在下（如三級-了氧化納溶於 適當之溶劑如4燒），於適當溫度如回流溫度， 金屬催化劑如Λ鹽(如三（二亞节丙酮）二竭)與合適之ς 位基（如2--％己基膦基_2’_(邮_二甲基胺基）二笨 併用進行。該反應亦可於適t之溶劑内諸如H於^ 波反應器内，於適當溫度如12(rc下進行。方法(c)亦可包 含於適當溫度諸如100-200°C(如於微波反應器内；)，式（VII) 化合物與式(V)之六氫吡畊於適當溶劑如卜甲基_2_吡咯啶 酮或吡啶内之反應。 式(νπ)化合物可相互轉變為其它式(VII)化合物。 式(νπ)化合物可自式(VIII)之苯胺及式(III)化合物，以 與方法（a)相似之方法製備

15 (丽） 其中W、X、Υ及ζ如以上定義，且L2為合適之脫離基 如鹵素（如硬、溴或氯）。 式（VIII)之苯胺可購得或可以已知方法或其相似方法 製備。例如式(VIII)化合物可以氨水經式(IX)之氯化合物溶 20 於適當之溶劑如乙醇之置換反應製備。 200808709

(DC) 其中W、X、Y及Z如以上定義，且L2為合適之脫離 基如鹵素（如碘、溴或氯）。 熟習此技術者將了解，保護特定之基屬必要之舉。合 適之保護基及其附著及移除方法，可習用有機化學中之已 知方法’諸如敛述於 T.W· Greene ‘Protective Groups in Organic Synthesis，（J· Wiley 及 Son，1991)者。例如，六氫 处畊基之合適保護基包括三級丁氧羰基、节基、三氟乙 酸基、苄氧幾基、2’，2’，2、三氯乙氧幾基，及之後可依標準 程序，以氯曱酸1-氯乙酯移除之甲基。 式（I)化合物業經此述之GTPyS及FLIPR (螢光成像閱 讀儀)檢測，發現為GHS-R促效劑。 因此，式(I)化合物及其藥學可接受衍生物（以下為「本 發明之化合物」）可用於治療因化合物作用於生長激素促 泌素（GHS)受體而引起之狀況或異常·本發明之化合物 特別可用於以下之治療·惡病質、肌肉減少症、骨質疏鬆 症、類風濕性關節炎、骨關節炎、與年齡相關之衰弱、生 長激素缺乏症、代謝異常、睡眠障礙、阿茲海默氏症、鬱 血性心衰竭，減緩下列相關症狀：胃一食道逆流及/或消化 不良伴隨或不伴隨食慾代謝-相關之惡病質、嘔吐、胃 炎、發炎性腸病、採用如經口银食等方法期間之胃蠕動趨 10 15 20 200808709 、緩’麻_性腸塞絞痛或 之狀況，，型腸一療’及與便秘相關 「治療」應了解為包括預防及緩解其症狀。 生物作為治供本發明之化合物或其藥學可接受衍 w起之狀貝之用途，尤其用於治療由GHS受體 4ΐ= 礙。尤其本發明提供本發明之化合物或其藥 質、肌=二、勿作為治療下列情形之物質之用途：惡病 炎、盥年妒二ί、骨質疏鬆症、類風濕性關節炎、骨關節 狀：田一入、、，、、，、 窗血性〜哀竭，減緩下列相關症 /代二、伴隨或不伴隨食慾 經口 貝月炎、發炎性腸病、採用如 性腸間之胃_趨緩、麻痒性腸塞絞痛或假 症候L ΐ 及與便秘相關之狀況’如便秘型腸易激 用。、。〜、了解本發明之化合物亦可與其它治療性物質併 t發明進-步提供一種方法可治療哺乳類動物包括人 1 ’由GHS文體媒介之狀況或障礙，其包含投與病患治 療性安全及有效量之本發明之化合物。 心 另-方面，本發明提供本發明之化合物作為藥劑製造 g途’而其_係用於治療由咖受體媒介之狀況或 為本發日狀化合物祕醫療起見，料化合物 依標準藥用實務配製為醫藥組成物。本發明亦提供醫藥組 20 200808709 成物其包3本發明之化合物及藥學可接受載劑或賦形 於更冰人^層面’本發明提供—種製備醫藥組成物之 方法’其包含混合本發明之化合物與藥學可接受載劑或賦 形劑。 10 15 -種本發明之醫藥組成物，其可以掺和製備，於適當 之周圍溫度及大氣壓力下，通常製為適於經口、非經口或 經直腸投樂丄且於該等情形下，可為以下形態：藥片、膠 囊&口液先、衣制、粉末、顆粒、菱形鍵劑、可供再配製 水溶液讀末、可和崎或何溶之隸㈣浮液，或栓 劑。其以可經口投藥組成伞7為優。 可經口投藥之筚^{ 市片及膠囊可為單位劑型，且可各依習 用，包含賦形劑諸如黏合劑（如預糊化玉米祕、聚 吼略咬巧隸丙基甲基纖維素）；填料（如乳糖，微晶纖 維素或扯朗）；壓片潤滑劑（如硬脂酸鎂，滑石或石夕）； 崩解劑（如馬铃m讀甲基驗鈉);及可接受之潤渴 劑(如十二烧基硫酸鈉）。藥片可以—般藥用實務上為人孰 知之方法包覆藥膜。 經口液態製劑可製成（如）水溶液態或油態懸浮液、 溶液、乳劑、糖漿或_卜或以可供與水或其它適當載體 再配製溶狀H態製品之等㈣。該等液態製劑可依習用 3添加物諸如懸浮劑（如山梨醇糖榘、纖維素衍生物或 氫化食用月曰），；Ub齊1 (如印鱗脂或亞拉伯樹膠)，非-水溶 液態載體（其可包括食用油如杏仁油、油性_、乙醇或 200808709 f分館植物油）、防腐劑（如甲基或丙基-P-經基笨甲酸或山 物之控制釋放^r ^之製劑可適當配製為活性化合 ^甘單位劑型於非經H係利用本發明之化合物 或其樂學可接受衍生物及無®媒難備。注射劑型可以單 瓿或多次劑型配製，利用本發明之化合物或其 物：Ί、又何生物及無菌媒劑’添加任意防腐劑。該組成 e σ日二11或水溶性媒劑中之懸浮液、溶液或乳劑形 ;埋：Γ己广諸如懸浮劑、穩定劑及/或分散劑。其它 ===成=合適之媒劑如(使用前)經滅菌 度，呈依咖及使用濃 15 20 滅菌。有利地，局部麻醉ί適;=:瓶密封之前過濾 於該媒劑巾。為增進穩定性 緩衝劑等佐劑可溶 真空移除水分後冷;東。除化^，成物可於裝人小瓶並以 菌方式不可採取過濾外，非；口 溶解’以及滅 備。該等化合物可於懸浮於無 硎/大體以相同方式製 乙烷之方式滅菌。有利地，、；面活以曝露於環氧 成物内，可促進該化合物之—致性分=戍潤濕劑包涵於組 洗劑可以水溶液態或油性驗^: 種乳化劑、穩定劑、分散劑、懸浮 般亦含-或多 滴劑可與水溶液態或‘水溶败驗 22 200808709 分散劑、穩定劑、助溶劑或懸浮劑。其亦可含—種防腐劑。 甘油脂。 本發明之化合物亦可以經直腸組成物配製，其例^栓 劑或保留灌腸，例如含習用之栓劑基體，如可可、、由戋其^ 5 10 15 本發明之化合物亦可配製為儲存劑型。該等長效作用 配方可以植入（例如皮下或肌肉内）或以軋肉注身式投 藥二從而’例如本發明之化合物可與合適之聚合或親^ 材質（例如可用油之乳劑）或離子交換樹脂，或 物如微溶鹽搭配。 /谷订 本發明之化合物用於鼻内投藥時可配製為合適之叶量 化或單-㈣投置之溶液，或與其它可選^之合適^ 帶劑製成粉末混合物裴填於合適之投藥裝置使用。因S 本發明之化合物可配製為經口、頰内、非經口、局部（包 括眼及鼻内）、儲存劑型或經直腸投藥或以合溢 為吸入或吹入散（無論經口或鼻）。 又求人 本發明之化合物可以軟膏、乳霜、凝膠、洗劑、陰道 栓劑、喷霧劑或滴劑(如眼、耳或鼻滴劑） 部投藥劑型。好及乳霜可《水溶液態或油性:驗 適之增稠及/或膠凝劑配製。用於眼投藥之軟膏可以使用滅 菌部件以無菌方式製造。 依投藥方法，組成物可含以重量計0.1%至99%，較佳 為以重量計10至60%之有效物質。通常用於治療前述^ 常之化合物劑量依病況嚴重程度、病患之體重及其它相似 因素而有差異。然而，一般準則之合適單位劑量可為005 23 20 200808709 至1000毫克，更合適為1.0至200毫克，且該等單位劑 量可一日多次投藥，如一日二或三次。該等醫療可持續數 週或數月。 (本發明之)化合物以上述劑量範圍投藥時，未發現/預 5 計有毒性。 本說明書所引用之所有出版品，包括（惟非限於）專 利及專利申請案，係併於本文中以供參考，如同已完整闡 明之各別出版品於此已具體且各別指出併入本文以供參 考。 10 【實施方式】 以下敘述及實施例，係示範本發明化合物之製備。每 個實施例均定特徵且以游離鹼、或氫氯酸鹽、或偶為直接 來自質量導向自動製備HPLC之曱酸鹽分析。氫氣酸鹽之 15 製備，係將純物質溶於二氣曱烷或曱醇及以酸式氫氣酸酯 酸化。 其中於實驗章節指為需微波加熱者，係以Biotage Initiator 60 或 Personal Chemistry Optimiser 之設備為之。 該等儀器容許溫度控制高達250°C，且容許壓力高達20 20 巴，及微波幅射於2.45GHz時可高達300W。 質量導向自動純化系統使用之條件、硬體及軟體 硬體

Waters 2525二員梯度模組 24 200808709

Waters 515補充泵 Waters泵控制模組 Waters 2767樣品管理器 Waters管柱流路管理器 5 Waters 2996發光二極體陣列檢測器

Waters ZQ質譜儀 Gilson 202 分液收集器 Gilson Aspec廢液收集器 軟體 ίο Waters Masslynx version 4 SP2 管柱 所使用之管柱為Waters Atlantis，尺寸為19mm x 100mm (小規模）及30mm x 100mm (大規模）。靜止相粒子大小為 5μηι 〇 15 溶劑 Α:水性溶劑=水+ 0.1%曱酸 Β:有機溶劑=乙腈+0.1%甲酸 補充溶劑二甲醇：水80:20 針頭清洗溶劑=甲醇 20 方法 依分析待測化合物之持續時間長短，可使用四種不同 方法。該等方法均包含13.5分鐘之運轉時間，其包含10 分鐘之梯度及隨後Π·5分鐘之管柱沖洗，以及再平衡步 ' 驟0 25 200808709 l5^55% B ^0-85% B 5〇-99% B (6分鐘内） 大/小規模1.5-2.2 大/小規模2.2-2.9 大/小規模2.9_3.6 大/小規模3.6_5.〇 流速

以上所有方法之流迷A (大規模） 今2〇mls/分鐘（小規模）或40mls/分鐘

ίο 用於分析LCMS 硬體

Agilent 1100 梯度1 Agilent 1100自動採樣機 Agilent 1100 DAD 檢測儀 15 Agilent 1100 除氣機

Agilent 1100 烘箱 Agilent 1100 控制器 Waters ZQ質譜儀

Sedere Sedex 55, Sedere Sedex 85 或 p〇lymer Labs PL-ELS-2 2〇 100 軟體

Waters MassLynx version 4.0 SP2 管柱 所使用之管柱為Waters Atlantis，尺寸為4.6mm x 5〇mm 〇 26 200808709 靜止相粒子大小為3μηι。 溶劑 Α:水性溶劑=水+ 0.05%甲酸 Β:有機溶劑乙腈+0.05%曱酸 5 方法 通用之方法需要5分鐘之運轉時間。 時間/分鐘 0 3 0.1 3 ίο 4 97 4.8 97 4.9 3 5.0 3 流速 15 以上方法之流速為3ml/分鐘 NMR之徒用條件 硬體

Bruker 400MHz核磁共振儀 BrukerB-ACS60自動採樣機 2〇 Bruker Advance 400 控制台

Bruker DPX250 Bruker AVANCE 500 Bruker DRX600 軟體 27 200808709 使用者介面一NMR Kiosk 控制軟體一 XWin NMR version 3·0 實施例 敘述1 : 4-溴-N-(6-溴-2-吡啶基)-3-

氟基笨續酿胺（D1) 室溫下’將4-溴-3-氟基苯石黃酸氯丄* 几W84耄克、37〇μ卜 2.5mmol)之二氯甲烧(2ml)溶液緩慢加入 v A胺基-6-溴吡啶 (346毫克，2.0mm〇l)之。比咬(2ml)溶液中。於室溫下授拌續 反應混合物！小時。I容誠發’且，餘物分析為乙酸 10 , 乙酯（50 ml)及水(5〇 ml)二層。有機部分以水沖、先(χ2)，八 離’乾燥及蒸發。管柱色層分析法之純化係以2〇_6〇% ^ 酸乙酯之己烧溶液洗提得出標題化合物丨MS + ) m/e 409, 411，413 [M+H]+。 15 敘述2: 4-溴_N-(6-[廣-3,5-二曱基-l _旅σ秦基]比σ定 基)-3-氟基苯磺醯胺（D2)

4_溴-Ν-(6-溴-2-吡啶基)-3-氟基苯磺醯胺(D1) (300毫 克、0.73mmol)及貭-2,6-二曱基六氫口比口井(600毫克，5.4mmol) 28 200808709 之卜甲基-2·σ比略咬酉同（5ml)及水(〇.5ml)之溶液，以2〇〇°c微 波2000秒。反應混合物以乙酸乙酯（2〇 mi)稀釋及以水 沖洗（3xl〇ml)。將有機部分乾燥並蒸發。管柱色層分析 法之純化以5%甲醇之二氯甲烷溶液洗提，得出標題化合 5 物(D2)、MS(ES + ) m/e443,445[M+H]+。 敘述3 : 4-溴-N-(2-氯基-4-吡啶基）苯磺醯胺(D3)

Cl Βγ 10 15 將4-漠苯磺隨氯(3.19g，12.5mmol)添加入4-胺基-2-氯 基°比啶(642毫克，5 mmol)之吡啶(5 ml)及二氯甲烷(5 ml) 溶液。將該反應混合物於室溫下攪拌2小時。將溶劑蒸發 並將殘餘物懸浮於2M NaOH(25 ml)及加熱至60°C1小 時。該反應混合物以乙酸乙酯（2x25 ml)萃取。將萃取物沖 洗，乾燥並蒸發。將殘餘物懸浮於甲醇並過濾。將過濾物 蒸發並以二乙基醚研磨得出標題化合物（D3)，1!! NMR(DMSO)3: 6.54(lH，d)，6·62(1Η，s)，7·60-7·63(4Η，m)， 7·66(1Η，d) 〇 欽述4: Ν·(2-氣基-4-11比咬基)-4-(5-曱基夫喃基)苯續酸胺(D4) 29 200808709

氯基县(2-氣基-4-吡啶基）苯磺醯胺(D3)(350毫克， 1 mmol)、5_甲基呋喃·2硼酸（15〇毫克、1 2nmiol)、碳酸 鈉(230毫克、22mm〇1)及二氯基二(三苯基膦)鈀(〇)(2〇毫 克、15咖1〇/0)與12_二甲氧基乙烷(3ml)及水（lml)之混合 物以120 C微波20分鐘。將該反應混合物分析為乙酸乙酯 (5M)及水(5 ml):部分，將其有機部分乾燥並蒸發。管柱 色層分析法之純化係以5_5〇%乙酸乙酯之己烷溶液洗提 得出標題化合物(D4)，MS(ES+)m/e 349, hi [M+Hf。 欽述5:6_溴-3-(甲基氧基肖基η比咬(D5)

Br ¥ 、0

方法A 6-溴！羥基-2-硝基吡啶(9.4g、42.8mmol)及碳酸鉀(6.9 g，50 mmol)與丙酮（1〇〇 mi)之混合物以峨曱烧（7」 3.11m卜50mm〇i；)處理並於4〇°C下攪拌。於2、4、6及8 小時後進一步批式添加碘甲烷(7jg、3.llml、5〇mm〇1)。 於36小時後將溶劑蒸發，殘餘物將分析為乙酸乙酯及水 二部分。有機部分以水沖洗、乾燥並蒸發。管柱色層分析 法之純化係以5-50%乙酸乙酯之己烧溶液洗提得出標題 30 20 200808709 化合物(D5)、MS(ES+)m/e233、235 [M+H]+。

方法B 於氬氣下、周圍溫度下將N，N-二甲基甲醯胺 (DMF)(700mL)添加入經攪拌之6-溴-3-羥基-2-硝基吡啶 (70.9g、324mmol)及石炭酸铯(211g，648mmol)之混合物，造 成溫度上升至30°C。將該經攪拌混合物冷卻至10°C，並 一次添加碘甲烷(41ml，659mmol)。移除冷卻浴並於室溫 下、於氬氣下攪拌混合物隔夜。於真空内蒸發DMF並添 加水（1L)。該混合物以乙酸乙酯（3 X 500ml)萃取，且該混 合之萃取物以2M氫氧化鈉(400mL)，水(400mL)，含飽和 鹽水(25mL)之水(800mL)及飽和鹽水(800mL)充份沖洗。將 有機溶液乾燥(Mg S04)並蒸發得出黃褐色之固體。（52.8g)。 兩種額外批次之D5(產生54.2g及52.1g)，係自6-溴 包基-2-硝基η比咬，以相似於上述之方式製備。 自混合之批中取得之129g物質之純化，係溶解於二 氯甲烷及過濾出某些不可溶物。濾液使用Flash 150 Biotage 之管柱，以矽膠色層分析及以30%-60%梯度漸增之二氯曱 燒/己烷洗提。匯集並蒸發產物成分，得出標題化合物 (D5)，係淡黃色之固體（98.1g)。3H(CDC13、400MHz) 3·99(3Η，s)、7·43(1Η，d，J二8·4Ηζ)、7·69(1Η，d，J二8·4Ηζ)。

方法C 使6-溴-2_硝基-3-羥基吡啶醇(23.11g、106mmol)及碳酸 31 200808709 鉀（43.95g、318mmol)懸浮於丙_(5〇〇mL)。添加甲基碘 (7.92ml、i27mmol)，並將混合物加熱至5(rc4小時。再添 加甲基碘(2 ml, 31·8 mmol)並加熱2小時。再添加曱基碘 (3.3 ml，53 mmol)並將混合物加熱至5〇〇c隔夜。將該反應 5 ’心合物冷卻、過濾，且固體以丙酮沖洗。濾液於真空内濃 縮。殘餘物以氯仿研磨，過濾固體並於真空内濃縮濾液。 殘餘物以快速色層分析法(Biotage Horizon、65、0-100%乙 酸乙醋/己烷)純化，得出標題產物(D5): 233/235 [M+H]+。 ίο

方法D 6-溴各羥基-2-硝基吡啶(44.81 g、0.214 mol)及碳酸鉀 (74.17 g、〇.537 mol)與丙酮（750 mL)之混合物以碘甲烷 (15.99 m卜0.256 mmol)處理，並於5〇°C下攪拌。於約四小 15 時之期間，再添加二次1·2當量之碘甲烷。將溶劑過濾、 蒸發，並將殘餘物溶於乙酸乙酯（5〇〇 mL)，並以水 (300mL)、飽和碳酸氫鈉溶液(3〇〇mL)、水(300mL)及鹽水 (300mL)沖洗。將有機層乾燥(MgS〇4)並蒸發。管柱色層分 析法之純化係以0-100%乙酸乙酯之己烷溶液洗提，得出 2〇 呈奶油色固狀之標題化合物（D5)(10.47g)MS(ES+)m/e 233,235[Μ+Η]+。 敘述6:翁-3,5-二甲基-1-[5_(甲基氧基)-6_硝基-2-吡啶基] • 六氫吼11井（D6) 32 200808709

方法A1 6-溴-3-(甲基氧基）-2-硝基啦啶(D5、方法A)(1.5g、 6·4ππηο1)、二曱基六氫吡畊（880 毫克，7.7mmol)、 5 三級-丁氧化鈉（1·24 g、12.9 mmol)、三（二亞苄丙酮）二鈀 .(0)(294 毫克、5mol%)，及 2-二環己基膦基-2’-(N，N-二甲 基胺基)聯苯基(300毫克、lOmol%)與二呤烷(20 ml)之混合 物加熱至110°C隔夜。該反應混合物以乙酸乙酯稀釋並以 石夕i弓石過濾、。將濾液蒸發並將殘餘物以管柱色層分析法純 1〇 化，以5%甲醇之二氯甲烷溶液洗提，隨後以逆相矽膠色 層分析法以5-100%乙腈水溶液洗提，得出標題化合物 (D6)、MS(ES+)m/e 267[M+H]+。 方法A2

6-溴3-(甲基氧基）-2-硝基吼啶(D5，方法A)(1.0g、 4.3mmol)、二甲基六氫°比口井（980 毫克、8.6mmol)、 三級-丁氧化鈉（825毫克、8.6mmol)、三（二亞苄丙酮）二I巴 (0)(196毫克，5mol%)及20二環己基膦基-2’-(N，N-二甲基 33 200808709 胺基)二苯基（168毫克、lOmol%)與二噚烷(2〇ml)之混合 物加熱至110°c隔夜。冷卻之反應混合物以乙酸乙酷（20ml) 稀釋，並以1 Μ氫氯酸萃取。萃取物以50%氫氧化鈉水 溶液驗化’隨後以乙酸乙S旨卒取。將有機萃取物乾燥並蒸 5 發。管柱色層分析法之純化係以5%甲醇之二氯甲烧溶液 洗提得出標題化合物(D6)。MS(ES+)m/e 267 [Μ+Η]4*。

方法B 將6-漠-3-(甲基氧基)-2-石肖基口比唆(D5、方法B)(45.0 ίο g、193 mmol)溶解於二噚烷（1.5L)且於氬氣下冷卻至 14°C。一次添加廣-2,6-二曱基六氳吡畊(44.1g、386mmol)， 且於15分鐘後所有物質均溶解後，添加2-二環己基膦基 -2’-(N，N-二曱基胺基)二苯基(n.3g，15 mol%)，2 分鐘後， 添加三（二亞苄丙酮）二鈀(〇)(17.6g、10 mol%)。於10分鐘 15 後，於氬氣下、14°C下攪拌，隨後於氬氣下，維持反應溫 度約14°C，於35分鐘内添加三級-丁氧化鈉（22.3g。 231mmol)。於14。(：攪拌該反應物3.5小時（以LCMS監 控），且隨後於攪拌中添加水（11^)及冰醋酸（l6.5mL)。隨後 添加碳酸氫鈉之飽和溶液（500ml)及乙酸乙酯（1.1L)於該 20 混合物中，並於分離漏斗内劇烈搖晃混合物。將液層分 離，並以5%鹽水(2 x 1L)沖洗有機部分。以乙酸乙酯（2 X 500mL)再萃取混合之水溶液態萃取物。將混合之有機萃取 物乾燥（Mg S〇4)並以矽藻土過濾。濾液於真空内濃縮得出 紅色油狀之粗製標題化合物。 34 200808709 另一批該等粗產物可自6-溴各（曱基氧基)_2_確基〇比 啶(D5)(49.0 g，210 mmol)以相似於上述之方式製備。 自該二批而來之混合粗產物隨後以色層分析法純化 [矽膠，先以50%-100%漸增之乙酸乙酯/己烷濃度梯度洗 5 提，隨後並以3%-15%濃度梯度漸增2M氨之甲醇/乙^乙 酯溶液洗提]。將產物成分匯集並蒸發得出呈紅色油狀固體 之標題化合物（D6)(62.2g、234mmol、5 8%)、 267 [M+H]+ 〇 一種更加純化之標題化合物（3.2g)係以與上述相似之 1〇 方法製備。

方法C 將6H(甲基氧基)_2_确基ϋ比唆(D5、方法c)(6.99g、 30 mmol)溶解於二喝烷（15〇 mL)。添加三（二亞苄丙酮）二 鈀(0)(1.38 g5 1·5 mm〇1)及 2二環己基膦基-2，_(n，n_二甲基 胺基）二苯基（U 8g，3 mmol)。三級-丁氧化鈉（577g 6〇 添加廣_2,6_二甲基六氫吡畊（5 14g，45 ， 並於至/孤下攪拌混合物5小時。混合物以矽約石過濾，以 乙^乙酯沖洗且濾液於真空内濃縮。殘餘物將分析為乙酸 乙酯及水二部分。有機部分以50%鹽水(χ3)、鹽水沖洗，以 無水硫酸鈉乾燥並於真空内濃縮。殘餘物以快速色層分析 法(Biotage SP4、4〇+M、0_20〇/o 2Μ 氨/甲醇之二氣甲烷溶 液）純化，得出標題產物（D6): 3.13g、MS(ES+)m/e 267 [M+H]+ 〇 35 200808709

方法D 將6-溴_3-(甲基氧基)-2-琐基吼啶(D5、方法D)(8.0g、 34.1mmol)溶解於二哼烷(3〇〇mL)並冷卻至13。(：。添加/# -2,6_一曱基六氫0比口井(7.798,68.3111111〇1)、2-二環己基膦基 _2’-(N，N_二甲基胺基）二苯基(2.013g，15mol%)及三（二亞节 丙酮）二鈀（0)(3.121§，1〇111〇1%)。隨後於溫度維持在15。(：： 下’於一分鐘時間添加三級-丁氧化鈉（6.55 g、68·3 mmol)。 於<18°C下攪拌該反應物5.5小時（以LCMS監控）並添加 水(25 mL)，且該反應物以矽藻土過濾並蒸發濾液，將所得 暗紅色半固體溶解於乙酸乙酯（6〇〇 mL)，並以飽和碳酸氫 鈉（3 X 300 mL)及鹽水(30mL)沖洗。將有機層乾燥(Mg S〇4) 並蒸發，所得紅色固體以色層分析法純化[矽膠，以〇至 20%(2M氨1甲醇)/乙酸乙酯洗提]。將產物成分蒸發所得 標題化合物呈紅色固體(D6)、MS(ES+)m/e 267 [M+H]+。 敘述7知[脣3,5_二甲基小哌嗪基]各(甲基氧基)冬吡啶胺（D7)

H.N 、a Ο

方法A 二水合氯化錫（550毫克、2.4 mmol)添加入廣-3,5-二 曱基-l-[5-(甲基氧基)-6-麟基-2-吡啶基]六氫吼畊(D6、方 36 200808709 法A2)(32〇毫克、1·2 mmol)之乙醇(20 ml)溶液，並加熱至 80 C 2小時。將該反應混合物冷卻至室溫，並將溶劑蒸發， 且殘餘物以水(20ml)稀釋。混合物以批式添加固體碳酸鉀 驗化。混合物以乙酸乙酯萃取(x2)。將混合之有機部分乾 5 燥並蒸發得出標題化合物、（D7)MS(ES+)m/e 237 [Μ+Η；Γ。 方法Β 將（3R，5S)-3,5-二甲基小[5-(曱基氧基)-6-硝基-2-吡啶 基]六氫吡畊(D6,方法B)(62.3g、234mmol)之甲醇（1.8L) 10 溶液傾倒於10%碳鈀(9.3g)與水(30mL)之漿狀物上。使用 更多甲醇（100mL)使之完全轉化為化合物D6。於周圍溫度 及30°C之間，一大氣壓氬氣下（15-18psi)將懸浮液攪拌6 小時。該反應混合物隨後以矽藻土過濾，以曱醇(2 X 200mL) 沖洗矽藻土，並蒸發濾液與沖洗液得出暗棕色油 15 (55.7g)。該物以色層分析法純化[石夕膠，以〇%_25%梯度 漸增之甲醇/二氣曱烷洗提]。將產物成分匯集並蒸發，所 得標題化合物呈暗標色油狀（D7)(40g、169mmol、72%)， MS(ES+)m/e 237 [M+H]+。

20 方法C 膺-3,5-二曱基-1-[5-(曱基氧基)_6-硝基-2-口比咬基]六 氫吼畊(D6,方法C)(3.13g、12mmol)於室溫下、1大氣壓 之氫下，於10%鈀/碳膏（3〇〇毫克）之甲醇（1〇〇 mL)液内5 小時以氫化。將催化劑過濾，並於真空内濃縮濾液得出標 37 200808709 題產物(D7)、3.40g。MS(ES+)m/e 237 [M+H]+，其可用於 後續步驟，不需進一步純化。

方法D 將（3R，5S)-3,5-二曱基小[5-(曱基氧基)-6-硝基-2-吡啶 基]六氫吡畊(D6、方法B)(〇.5g、2.25mmol)溶解於曱醇(50 mL)，並於大氣壓力下以1〇%碳鈀(0.25g、膏狀）氫化。於 2小時後將該反應混合物過濾並蒸發，所得標題化合物呈 淡黃色油狀(D7)(假設產物定量）、MS(ES+)m/e 237 [M+Hf。

方法E 將（3R，5S)-3,5-二曱基甲基氧基)硝基-2-吡啶 (150mL)並於大氣壓力下以1〇%碳鈀（lg，膏狀）氫化。於3 小時後，將該反應混合物過濾並蒸發，所得標題化合物呈 極暗棕色油狀（D7)(4.31 g)、MS(ES+)m/e 237 [m+h]+。 敖述8·· 4-溴-N-[6_[廣久5·二曱基小哌嗪基]_3_(甲基氧 基)-2-吡啶基>3-氟基苯磺醯胺(D8)

38 20 200808709

方法A ‘，化合物係以相似於⑽以(D?，方法替代 [m+h]+、。 〈方式製備。（D8)MS(ES+)m/e 473, 475 5

方法B =氬氣下、周圍溫度，於4〇分鐘期間，將4_溴_3_氟 土苯尹、1氯（54.9g、201mmol)之二氯甲烷溶液（l5〇mL) ^加於祕中之H(3R，5S)_3,5_二甲基·14嗪基]甲基 1〇 氧基定胺(D7、方法B)(39.5g、167 mmol)之嘧啶 (3(^mL)與二氣甲烷(15〇mL)溶液。於18〇c攪拌混合物3 小時後，於真空内將之濃縮為暗色殘餘物。將該殘餘物溶 解於二氯甲烷(700ml)，且該溶液以〇.3M氫氧化鈉（1.6L) 沖洗。水性部分進一步以二氣甲烷(2 x5〇〇mL)萃取。混合 15 之有機萃取物隨後以〇·2Μ氳氧化納（5〇〇mL)沖洗，並以 二氯甲烷(200mL)反萃取。pH14之混合水性沖洗物（含該產 物）以5M氫氯酸(接近70ml)調整至PH6,得出灰色沉澱 物。將固體過濾並以水沖洗(3 X 150mL)並於30°C真空下乾 燥經週末(54.4g)。將該物與沸騰甲醇(6L) —起攪拌，濾出 20 少量未溶解固體，並於真空内將濾液體積濃縮為1.5L。於 冰内冷卻後，該溶液得出結晶固體，將其濾出，並以甲醇 /二乙基醚（1:1)沖洗，隨後以二乙基醚沖洗，最終於4CTC 真空下乾燥 1 小時（3〇.7g、64.9mmo卜 39%)、MS(ES+)m/e 474/476 [M+H]+ 〇 39 200808709 敘述9: 4-氯基-2-嘧啶胺

H2NTNyCI

VN 緩緩添加0.880氨（50ml)於2,4-二氣嘧啶（5.0 g， 33·6 mmol)之乙醇(50 ml)懸浮液，並於室溫下將所得 混合物攪拌5小時。將之減壓濃縮為25 ml，並過濾 所得固體，以水沖洗並於真空鍋内乾燥4小時。所得 標題化合物之混合物(D9)、MS(ES+)m/e 130、132及 2-氟基-4-,唆胺MS(ES+)m/e 130、132使用於下一反 應不需進一步純化。 敘述10 : 4-溴-N-(2-[廣-3,5-二甲基-1-哌嗪基]-4·嘧啶基)-3- 氟基苯續醯胺

is 混合敘述9(500毫克，3.9 mmol)之粗產物及廢-2,6-二 甲基六氫吼口井(885毫克，7·8 mmol)之口密π定(2 ml)溶液，將 =於100°C下微波1〇分鐘。所得混合物與曱苯共沸並乾燥 许出4-[膺_3,5·二甲基小哌嗪基]_2_嘧啶胺及2-[膺-3,5-二 、 甲基哌嗪基]-4-嘧啶胺之混合物。 將殘餘物(250毫克，1.2 mmol)再溶解於吡啶(3 ml)， 200808709

並添加4-漠-3-氟基苯續酿氯（160 μΐ、295毫克、i 44 mmol)。將所得混合物於室溫下攪拌隔夜。隨後再添加氯 化4-溴-3-氟基苯磺醯（100 μΐ、〇·75 mm〇1或eq?)並將混合 物加熱至80C3小時。將該反應混合物減壓濃縮，放置於 SCX匣上，並以甲醇及2NNH3之甲醇溶液洗提。將基 底部分混合、蒸發並以管柱色層分析法，以〇_2〇% 2N 之甲醇與二氯甲烷溶液洗提純化，得出標題化合物(D1〇)、 MS(ES+)m/e 444、446[M+H]+。 敘述 11: 4_溴-2-氯基-]>^[6_丨(37?，55>3,5-二甲基-1-派嗓 基]-3-(甲基氧基)-2-吼唆基】苯續醯胺(dii)

將6-[賡-3,5-二甲基小哌嗪基]冬（甲基氧基)-2-喷啶胺 (D7、方法C)(473毫克、2 mmol)溶解於吡啶(5ml)及二氣 15 甲烷（Sm!)。添加氯化4-溴-2-氯基苯磺醯（870毫克，3 mmol)，並於室溫下攪拌溶液5小時。混合物於真空内濃 縮，並與曱醇共沸。將殘餘物置於甲醇中之SCX匣上 (Varian、10g)以甲醇沖洗，且基底產物以2M氨/曱醇洗提。 將產物成分於真空内濃縮，並以快速色層分析法(Biotage 2〇 SP4、40+S、0-20%2M氨/甲醇之二氯甲烷溶液）純化，得 • 出標題產物（D11)、478 毫克、MS(ES+)m/e 489/491/493 41 200808709 [M+H]+。 敘述12:羧酸1，1-二甲基乙基(2R，6S)冬【6-胺基冬（甲基 氧基)-2-吡啶基卜2,6_二甲基_1_六氫吡畊（m2)

將6-[(3及，55>3,5-二甲基小派嗪基]各（曱基氧基)_2』比 啶胺（D7、方法 C)(1.37g、5.8mmol#U^KDCM(60mL) 並冷卻至0°C。添加三乙胺(0.892 mL，6.41 mmol)，隨後添 加二碳酸二-三級-丁烷（1.39g、6.41 mmol)，並於0°C攪拌 10 該反應物2小時，隨後可升溫至室溫並攪拌72小時。該 反應混合物以DCM稀釋至150 mL，並以飽和碳酸氫鈉（2 X 100 mL)及鹽水(1 〇〇 mL)沖洗。將有機層乾燥(Mg S04)並蒸 發，將所得暗棕色油色層分析[矽膠、以0至60%乙酸乙酯 /戊烷洗提]。將產物成分蒸發，所得標題化合物呈黃色油 15 狀(D12)(1.0g)、MS(ES+)m/e 337 [M+H]+。 敘述11羧酸1，1-二甲基乙基(211，68)-4-[6-{((4_溴-2-氣 基苯基）磺醯基】胺基卜5-(甲基氧基）-2-吡啶 基]_2,6-二甲基-1-六氫11比畊（D13) 42 200808709

將羧酸1，1-二甲基乙基(2R，65)+[6-胺基_5-(甲基氧 基）-2-吡咬基]-2,6-二甲基-1-六氫吼口井（D12)(i.〇 g、2,97 mmol)溶解於DCM(10 mL)及吡啶(1〇 mL)，隨後並冷卻 5 至〇°c。隨後逐滴添加4-溴-2-氣基苯磺醯氯(0 946 g，3 27 mmol)之DCM(5 mL)溶液，且該反應隨後容許溫暖至室溫 隔夜。隨後蒸發該反應物至最少，並再溶解於DCM(1〇〇 mL)且以水沖洗(5〇mL)。水相層以DCM(2x50mL)萃取， 且混合之有機萃取物以鹽水（1〇〇 mL)沖洗。將有機層乾燥 ίο (Mg S〇4)並蒸發，所得暗棕色油以色層分析法純化[矽膠、 以0至50%乙酸乙酯/戊烷洗提]。將產物成分蒸發至得出 黃色易碎之泡沫狀物（D13)(1.29 g)，MS(ES+)m/e 589/591 [M+H]、 敘述14·•羧酸l，l-二甲基乙基(2R，6S)-4-[6-({【2_氯基-4-(4-甲基 15 -2-噻吩基)苯基]磺醯基}胺基)-5-(甲基氧基)-2-吡啶

基卜2,6-二甲基_1_六氫吼畊(D14) 43 200808709 羧酸1，1-二曱基乙基(2R，63)-4-[6-{[(4-溴-2-氣基苯基) 磺醯基]胺基}-5-(甲基氧基)-2-吡啶基]-2,6·二甲基-1-六氫 σ比口井(D13)(0.15g、0.254 mmol)、4-甲基-口塞吩-2-硼酸(〇·〇54 g，0·3 82 mmol)、氯化(1，Γ-二(二苯基膦基)二茂)鈀(η)、 5 DCM 錯合物（9.2 毫克，0.0127mmol)、峻酸鈉（0.053 g， 0.508mmol)於 DME(2 mL)及水（1 mL)中於微波 120°C 加熱 20分鐘。該反應隨後以乙酸乙酯（50 mL)稀釋及以飽和碳 酸氫納(2 X 30 mL)及鹽水(30 mL)沖洗。將有機層乾燥(Mg S04)並蒸發，所得暗掠色油以色層分析法純化[石夕膠，以〇 ίο 至50%乙酸乙酯/戊烷洗提]。將產物成分蒸發得出淡黃色 泡沫（D14)(0.127 g)MS(ES+)m/e 607/609 [M+H]+。 敘述15:羧酸1,1-二甲基乙基（2Ι?，65>4-[6-({ [2-氯基 -4-(3_呋喃基）苯基】磺醯基}胺基)-5-(甲基氧 15 基)-2-口比咬基】-2,6-二甲基-1-六氮σ比口井（D15)

羧酸1，1-二甲基乙基(2足65>4-[6-{[(4-溴-2-氯基苯基) 磺醯基]胺基}-5-(甲基氧基)-2-吡啶基]-2,6-二甲基-1-六氩 σ比口井（D1 3)(0.15 g、0.254 mmol)、2_(3_吱口南基)，4,4,5,5_四 20 甲基_1，3,2·二雜氧戊石朋烧(0.0739 g，0·381 mmol)、二氣化I巴 44 200808709 二-三苯基膦（9·0毫克、0.0127mmol)、碳酸鈉（0.053g、 0.508mmol)於 DME(2 mL)及水（1 mL)中以微波 120°C加熱 20分鐘。該反應was隨後以乙酸乙酯（50 mL)稀釋及以飽 和碳酸氫鈉(2x30 mL)及鹽水(30 mL)沖洗。將有機層乾燥 (Mg S04)並蒸發，所得黃色油以色層分析法純化[矽膠、 以0至60%乙酸乙S旨/戊烧洗提]。將產物成分蒸發，得出 淡黃色泡沫(D15)(0.170 g)MS(ES+)m/e 577/579 {M+H}+。 ίο 欽述16:叛酸1，1-二甲基乙基(21^，68)-4-[6-({【2-乳基-4-(5-甲基-2-噻吩基）苯基]磺醯基}胺基)_5_(甲基氧 基)-2-吡啶基]-2,6_二甲基-1-六氳ΰ比口井(D16)

15 羧酸1，1-二甲基乙基(2R，65)-4-[6-{[(4-溴-2—氯基苯基) 石黃臨基]胺基} - 5-(曱基氧基定基]-2,6--—甲基-1 -六鼠 吡畊(D13)(0.10 g、0.169 mmol)、5-甲基-噻吩-2_硼酸(0.0739 g，0.254 mmol)、二氯化把二-三苯基膦（5·9毫克， 0.0127mmol)、碳酸鈉(〇·〇359 g、0·339 mmol)於 DME(1 mL) 及水(0·5 mL)中以微波120°C加熱20分鐘。該反應隨後以 乙酸乙酯（50 mL)稀釋及以飽和碳酸氫鈉(2 X 30 mL)及鹽 水(30 mL)沖洗。將有機層乾燥(Mg S04)並蒸發，所得黃色 45 20 200808709 泡沫以色層分析法純化[矽膠、以0至70〇/。乙酸乙酯/戊 烧洗提]。將產物成分蒸發得出淡黃色油φ16)(〇.〇88 g)MS(ES+)m/e 607/609 [Μ+Η]+。 敘述17:4_溴々-[6-[(3兄55>3,5_二甲基小派嗪基ι_3·(甲基 氧基)-2_吡啶基]苯磺醯胺(D17)

將6-[(3足55>3,5-二甲基-1-哌嗪基]-3-(甲基氧基)-2』比 啶胺（D7、方法 Ε)(1·5 g、6·35 mmol)溶解於 DCM(15 mL) ίο 及嘧啶mL)，隨後冷卻至0°c。隨後逐滴添加氯化4一 溴苯續醯（3·04 g、11.9 mmol)之DCM(8 mL)溶液，且該反 應隨後允許溫暖至室溫隔夜。隨後將該反應蒸發至最小 量，並再溶解於DCM(100 mL)及以水沖洗(5〇 mL)。水相 層以DCM(100 mL)萃取，且混合之有機萃取物以飽和石炭 15 酸氫鈉(2 X 100 mL)及鹽水（100 mL)沖洗。將有機層乾燥 (Mg S〇4)並蒸發’所得掠色固體以乙酸乙醋（3 X 1〇 mL)研 磨，所得標題化合物呈淡黃色粉末（D17)(1.382 g)。 MS(ES+)m/e 455/457 [M+Hf。 2〇 敘述18:(37?，55>l-【6-【(4-溴-2-氟基苯基)磺醯基】-5-(甲基 氧基)-2•吡啶基】·3,5-二甲基六氫咐^φ18) 46 200808709

將6_[(3i?，5S)-3,5-二甲基-I-11辰嗪基]_3_(曱基氧基)-2-吼 啶胺（D7、方法D)(2.25 mmol)溶解於DCM(5 mL)及嘧啶 (5 mL)，隨後冷卻至〇°c。隨後逐滴添加氯化4-溴-2-氟基 5 苯磺醯(0.738 g、2.706 mmol)之 DCM(5 mL)溶液，隨後該 反應允許溫暖至室溫隔夜。將該反應隨後蒸發至最小量， 再溶解於DCM(lOOmL)，並以水(2x75mL)、飽和碳酸氫 鈉(3 X 75mL)及鹽水(75 mL)沖洗。將有機層乾燥(Mg S04) 並蒸發，所得棕色油以曱醇研磨，並於50°C高度真空下乾 1〇 燥，所得標題化合物呈棕色粉末狀（D18)(0.400 g)。 MS(ES+)m/e 473/475 [M+H]+。 敘述19: 氯基-4-吡啶基)-3,5-二甲基六氫吡畊

V 15 將 4-溴-2-氯基4b^(2.0g、l〇.4mmol)、膺-2,6-二甲基 口井（1.3g、11.4mmol)、三級丁氧納(2.0g、20.8mmol)、三（二 • 亞苄丙酮）二鈀(0)(230毫克、2.55mol%)及2-二環己基膦基 -2’-(N，N-二曱基胺基)二苯基(230毫克、5mol%)之二口夸烷 47 200808709 (20 ml)混合物於100°C下攪拌1小時。將混合物冷卻至室 溫，以ς矽鈣石，過濾，並將溶劑蒸發。以0-5%甲醇之二 氯曱烷溶液洗提之快速色層分析法純化得出標題化合物 (D19)。4 NMR CDC13 ppm δ 1·15(6Η，d)、2·42-2·45(2Η， m)、2·90-2·97(2Η，d)、3·61-3·67(2Η，m)、6·56(1Η，d)、 6·64(1Η，s)、8·00(1Η，s)。 敘述20:4-[廣-3,5-二甲基-1-哌嗪基】-N-(二苯基亞曱基)-2- σ比唆胺

標題化合物係使用廣-1-(2-氯基-4-吡啶基)-3,5-二曱基 六氫吡畊(D19)及苯曱苯酮亞胺為起始物，以相似於廢 -1-(2-氣基-4-。比啶基）-3,5-二曱基六氫吼畊(D19)之方式製 備。MS (ES+)m/e 371 [M+H]+。 欽述21:4-【>^_3,5-二甲基-1-旅17秦基】-2_π比咬胺

48 200808709 4-[廣-3,5-二曱基-1-派嗓基]#_(二笨基亞曱基)-2-σ比 咬胺（D2〇)(65〇毫克，1.76mmol)之四氫呋喃（如）溶液以 1.0M氫氣酸(5ml)處理’並於室溫下攪拌混合物1小時。 混合物以水稀釋及以二乙基沖洗。水性部分以氣氧 化納溶液驗化，隨後添加氯化鈉至飽和濃度。混人物以乙 酸乙酯（x2)萃取。將混合之萃取物乾燥並蒸發，得出伊B 化合物（D21)。NMR CDC13 ppm δ 1·13(6Η ^、 2.33'238(2Η，m)、2·91-2·96(2Η，m)、3·58-3·62(2Η m)、 5·85(1Η，s)、6·18-6·20(1Η，m)、7·78-8·00(1Η，d) 〇 10 欽述22:4-漠_]\-{4-【廣-3,5-二甲基-1·派唤基】比咬其^ $ 氟基苯磺醯胺

標題化合物係使用、5-二曱基小旅嗅基]_2 ^ 咬胺（D21)及4-漠-3-氟基苯績酸氯為起始物，以相似於 4-溴-N-(2-氯基-4-σ比咬基）苯續酿胺（D3)之方式黎』備 MS(ES+)m/e 443,445 [M+Hf。 敘述23:叛酸1，1-二甲基乙基5-溴-2-(甲基氧基)_3_吨 49 200808709

羧酸5-溴-2-曱氧基-3-吡啶（9.3g、40mmol)之甲苯 (100ml)懸浮液以二-三級丁基縮醛N，N-二甲基甲醯胺 (16.3g、80mmol)處理，並將混合物加熱至80°C2小時。將 5 混合物冷卻，將溶劑蒸發。將殘餘物溶解於乙酸乙酯及以 水沖洗（x2)。將有機部分乾燥並蒸發得出標轉化合物 (D23)。咕 NMR CDC13 ppm δ 1.58(9h，s)、4·01(3Η，s)、 8·14(1Η，s)、8·3(1Η，s)。 ίο 敘述24:1,1-二曱基乙基5-[廣-3,5-二甲基-1-哌嗪基】-2-(甲 基氧基)-3-吡啶羧酸酯

標題化合物係使用羧酸1，1-二甲基乙基5-溴-2-(甲基 氧基)_3_吡啶（D23)及廣-2,2-二甲基六氫吡畊為起始物，以 15 相似於/像-1 -(2 -氣基-4-比唆基）-3，5 -二曱基六鼠^比奸(D19) 之方式製備。 敘述25:羧酸1，1-二甲基乙基5-【廣_3,5_二甲基·4_(苯基甲 基)-1·娘唤基】-2-(甲基氧基)-3-咐*唆 50 200808709

羧酸1，1-二甲基乙基5-[看-3,5-二甲基·ι·哌嗪 基]-2-(甲基氧基)-3-口比啶(D24)(500毫克、1.56mmol)、碳酸 鉀(430 毫克、3.12mmol)及苄基 bromide(266 毫克、1.56mmol) 5 之N，N-二甲基甲醯胺(10ml)混合物於8〇t：攪拌4小時。將 該反應混合物分析為乙酸乙醋及水二部分。有機部分以水 沖洗、乾概並蒸發。以5·20ο/〇乙酸乙酯之己烧溶液洗提之 快速色層分析法純化，得出標題化合物 412 [M+H]+ ° 10 敘述26:羧酸5-丨廣_3,5-二甲基_4_(苯基曱基)4-哌嗪 基]-2-(甲基氧基比咬

Ο 羧酸U--甲基乙基5切_3、5_二甲基叫苯基甲 基)-1 -㈣基]:2·(曱基氧基)_3“㈣（D25)之二氯甲炫 (5ml)溶液以二鼠乙酸(5ml)處理，且於室溫下授拌混合物 15 200808709 2小時。將溶劑蒸發，並將殘餘物於sex上以氨之曱 醇溶液洗提純化，得出標題化合物(D26)。MS(ES+)m/e 356 [M+H]、 敘述27:胺甲酸1，1_二甲基乙基【5七3-聲3,5-二甲基七苯 基甲基H·派嗪基)_2-(甲基氧基)_3_吡啶基】

將羧酸5-[看-3,5-二甲基-4-(苯基甲基）-1·哌嗪 基]-2-(甲基氧基)-3-口比啶(D26)(100毫克、0.28mmol)、疊氮 10 化二苯基填S篮（115毫克、0.42mmol)及三乙胺（85毫克、 0.84mmol)之三級丁醇（3ml)及曱苯（3ml)混合物力口熱至 65°C1小時，隨後至ll〇°C24小時。將該反應混合物冷卻 至室溫並將溶劑蒸發。以5-25%乙酸乙酯之己烷溶液洗提 之快速色層分析法純化得出標題化合物（D27)。 15 MS(ES+)m/e 427 [M+H]+ 〇 敘述28:N-[5-【膺-3,5-二甲基-4-(苯基甲基)-1-哌嗪基卜2-(甲 基氧基)-3-吡啶基】_2,2,2·三氟基乙醯胺 52 200808709

胺曱酸1，1-二甲基乙基[5-[/#-3,5-二甲基-4-(苯基曱 基M-哌嗪基]-2-(甲基氧基)-3-咐啶基](D27)(119毫克、 0.28mmol)之二氯甲烧(2ml)溶液以三氟乙酸(2ml)處理，並 5 於室溫下攪拌2小時。將溶劑蒸發，且殘餘物與甲苯共 沸（x2)得出標題化合物(D28)。MS(ES+)m/e 423 [M+H]+。 敘述29:5-[膺-3,5-二甲基-4-(苯基甲基)-1-哌嗪基】-2-(甲基 氧基)-3-吡啶胺

10 1 N-[5-[/像_3,5_二甲基-4-(苯基甲基秦基]-2-(甲基 氧基）-3-吡啶基]-2,2,2-三氟基乙醯胺屮28)(97毫克、 0.28mmol)之曱醇(5ml)溶液以碳酸鉀(500毫克、充足大量) 處理。將混合物於室溫下攪拌24小時。混合物以乙酸乙 15 酯稀釋並以水及鹽水沖洗。將有機部分乾燥並蒸發得出可 用之標題化合物(D29)，毋需進一步純化。 53 200808709 敘述30:4-溴-Ν_[(4·溴-3-氟基苯基)磺醯基】-N-丨5-[廣-3,5-二甲基-4-(苯基甲基）-1-哌嗪基】-2·-(甲基氧 基)-3-吡啶基】-3-氟基苯磺醯胺

Br

5 標題化合物係以相似於4-溴-N-(2-氯基-4-吡啶基）苯 磺醯胺(D3)之方式，使用5-[/#-3,5-二曱基-4-(苯基甲基)-1-哌嗪基]-2-(曱基氧基)-3-吼啶胺(D29)及4-溴-3-氟基苯磺 醯氯為起始物製備。MS(ES+)m/e 799、801,803 [M+Hf。 ίο 敘述31:N_[5-丨廣_3,5_二曱基-4-(苯基甲基）_1_哌嗪 基]-2_(曱基氧基)-3-σ比咬基]-3-氣基-4-(5-甲基 -2-呋喃基）苯磺醯胺

標題化合物係以相似於實施例1(E1)之方式，使用4- 54 200808709 溴-Ν·[(4-溴-3-氟基笨基）磺醯基]-N-[5-[ |-3,5-二曱基 -4-(苯基曱基)小哌嗪基』_2-(甲基氧基比啶基]-3-氟基 苯磺醯胺(D30)為起始物製備。]yiS(ES+) m/e 565 [M+H]+。 敘述32:羧酸乙基5-丨廣_3,5-二甲基小娘11 秦基卜比咬

標題化合物係以相似於發1-(2-氯基_4_吼咬基)_3、5-二曱基六氳吡畊之方式，使用羧酸乙基孓溴吡啶及廢 -2,2-二曱基六氫吡畊(D19)為起始物製備。MS(ES+)m/e 264 [M+H] 敘述33:羧酸5-丨廣-3,5-二甲基小哌嗪基卜3』比啶

乙基5-[(3R，53)-3,5-二甲基-1-哌嗪基]-3-吡啶羧酸 (D32)(800毫克、3mmol)之四氫呋喃（5ml)溶液以0.5M氫 氧化鋰（12ml、6mmol)處理。將混合物於室溫下攪拌2小 時。該反應以乙酸(lml)驟冷。將溶劑蒸發，並將殘餘物以 2M氨之甲醇溶液洗提於SCX上純化得出標題化合物 55 200808709 (D33)。MS(ES+)m/e 236 {M+H}+。 欽述34:胺甲酸1，1-二曱基乙基{5-[廣"3,5_二甲基-1-派唤 基]-3-17比淀基}

標題化合物係以相似於胺甲酸1，1-二甲基乙基 [5-[(3-/齊-3、5-二甲基-4-(苯基曱基)-1-派嗪基)-2-(曱基氧 基)-3·吡啶基](D26)之方式，使用5-[廣-3,5-二甲基-1-哌嗪 基]-3-吡啶羧酸（D33)為起始物製備。MS(ES+)m/e 307 ίο [M+H]、 敘述35:N-{5_[廣-3,5-二甲基-1-哌嗪基]-3-吡啶基卜2,2,2-三 氟基乙醯胺(RB106565-124A1)

標題化合物係以相似於N-[5-[膺-3,5-二甲基-4-(苯基 甲基)-1-哌嗪基]-2·(甲基氧基)-3-吡啶基]-2,2,2-三氟基乙 醯胺(D28)之方式，使用胺甲酸1，1_二曱基乙基{ 5-[廣 -3,5-二甲基-1-哌嗪基]-3-吡啶基}(D34)為起始物製備。 MS(ES+)m/e 303 [M+H]+。 56 15 200808709 敘述36:5-[(3i?，55>3,5-二甲基-1-哌嗪基】-3-吡啶胺

標題化合物係以相似於5-[廣-3,5-二曱基-4-(苯基曱 基)-1-哌嗪基]·2-(曱基氧基)-3-吼啶胺（D29)之方式，使用 N-{5-[cis3,5-二曱基-1·派σ秦基]-3-。比咬基}-2,2,2-二氣基乙 醯胺(D35)為起始物製備。 敘述37:4-溴-Ν-{5·【膺·3,5_二曱基-1-哌嗪基}-3-吡啶基1_3_ 氟苯基磺醯胺

標題化合物係以相似於4-溴-Ν-(2-氣基-4-吡啶基）苯 石頁酿胺之方式，使用5-[/翁-3、5-二曱基-1 -°辰ϋ秦基]-3-0比α定 胺(D36)及氣化4-溴-3-氟基苯磺醯(D3)為起始物製備。 敘述38··羧酸乙基5-[(3R，5)-3,5_二甲基-4-(苯甲基)-1-哌嗪 基】-2-(甲基氧基 57 200808709

3化：物係以相似於卿'氣基 l)3：r^ 刹備二FS+、卞基傅a—甲基〉六氫㈣為起始物 衣備。MS(ES )m/e 384 [M+H]+ 〇 敘速39:羧酸5-【(3/?，55>3,5-二甲美4 ^ (苯基甲基)哌嗪 基]_2_(甲基氧基)-3-吼啶

Ο ίο 夫二=* 5卿)_3,5·二甲基_4_(苯基甲基H-旅 (l〇m〇及2M 1氧化納（10ml)溶液加熱至㈣2小時。將 乙醇蒸电，殘餘物以水稀釋，混合物以冰醋酸酸化，並以 乙酸乙酯萃取（x2)。將混合之萃取物乾燥並蒸發。純化於 SCX上以2Μ氨之曱醇溶液洗提得出標題化合物(D39)。 MS(ES+)m/e 356 [Μ+Η]+。 58 15 200808709 實施例1:鹽酸N-(6-[翁-3,5-二甲基小哌嗪基]-2_吡咬 基)-3-氟基-4-(5-曱基-2-呋喃基)苯磺醯胺（E1)

5 10 4->臭-N-(6-{/#-3,5-二曱基底嗓基}-2-口比0定基)-3-敗 基苯磺醯胺(D2)(40毫克、〇·〇9 mmol)、5-甲基呋喃-2-硼 酸（15 毫克、〇·ΐ2 mmol)、碳酸鈉（35 毫克、〇·33 mmol) 及一氣基二（三苯基膦）|巴(0)(5毫克、5 mol%)之1，2-二甲 氧基乙烧(3 ml)及水（1 ml)混合物以i20°C微波20分鐘。該 反應混合物將分析為二乙基醚(5 ml)及水(2 ml)。將有機部 分乾燥並蒸發。殘餘物以二乙基醚及乙酸乙酯研磨，隨後 溶解於甲醇，並經氣化氳之二乙基醚溶液處理轉化為鹽酸 泛瑪 〇 以二乙基醚研製得出標題化合物（El)、MS(ES+)m/e 445 [M+H]+。 15 實施例2:鹽酸N_(2_[看_3,5_二甲基_丨_哌嗪基]_4_吡啶 基)-4-(5-甲基-2-呋喃基)笨磺醢胺（E2) 59 200808709

5 10 N，(2-氯基_4·•吡啶基)-4-(5-甲基-2-呋喃基）苯磺醯胺 (D4)(250 毫克、0.74 mmol)、膺-2,6-二甲基六氫口比畊（170 毫克、1.48 mmol)、三級-丁 氧化納（140 毫克、1.48 mmol)、 三（二亞苄丙酮）二鈀(0)(15毫克、5 mol%)，及2-二環己基 膦基-2’-(N，N-二甲基胺基)二苯基(30毫克、10 mol%)之二 呤烷(4 ml)混合物以120°C微波1小時。該反應混合物將 分析為乙酸乙酯及水二部分。將水性部分蒸發，殘餘物以 5-10%曱醇之二氯曱烷溶液洗提之管柱色層分析法純 化。將產物溶解於曱醇及經氣化氫之二乙基醚溶液處理轉 化為鹽酸鹽，得出標題化合物（E2)、MS(ES+)m/e 427 [M+H]+ 〇 15 實施例3:鹽酸N-[6-[/#-3,5-二曱基-1-哌嗪基]-3-(曱基氧 基)-2-41:σ定基]-3 -氣基-4-(5 -曱基-2-咬。南基）笨石黃 醯胺（Ε3)

60 200808709

方法A 标題化合物係以相似於氏D之方式，以（D8、方法A) 替代(D2)製備。（E3)MS(Es+) * 仍{M+H}+。 5 方法Β :氯氣周圍/jnL度下添加碳酸納（34.3g。324mmol)之 水（145ml)溶液於經攪拌之4-溴-N-[6-[(3R，5S)-3,5-二甲基 1-哌秦基]-3-(甲基氧基)_2_吡啶基]·3_氟基苯磺醯胺(D8、 〇 方法 ^)(29.1g、61.5mm〇1)之 12 二甲氧基乙烧(29〇mi)溶 ，。p現後添加二氣化鈀二_三苯基膦⑴·844g、於該 此合物中。將該混合物激烈攪拌及加熱至35它，於該溫 度’ 30秒期間添加4,4,5,5_四甲基_2_(5_甲基_2_呋喃 基卜1，3,2-:雜氧戊硼烧（12。8g、61.4mmol)之1，2-二甲氧 ^ 基乙烷(25ml)溶液。持續加熱，使達回流溫度約i小時。 > 隨後進一步維持回流溫度1小時。此後進一步添加4,4,5,5- 四甲基-2-(5-甲基-2-呋喃基)-1，3,2-二雜氧戊硼烷（12。8g、 1.4mmol)之ι，2-二甲氧基乙烧(25mi)溶液，並維持回流溫 度〇·75小時。隨後將該反應混合物冷卻至周圍溫度及濃 ) 縮至玟餘物。添加水（1L)於該殘餘物，並添加5Μ氮氯酸 (、、、勺55mL)於其攪拌混合物，直至上清液pH值達7。所形 成之固體沉澱物，以大口徑之玻璃燒結漏斗吸引過濾，並 乂水沖洗(3 X 1〇〇 mL)。隨後將固體於40°C真空下乾燥24 小時得出淡棕色粉末(29g)。第二種固體(2·〇 g)產物，則自 母液中集得。 61 200808709 另一批固體（0.5g)係以與上述相似之方式，自‘溴 -N-[6-[(3足56>3,5-二甲基_1_哌嗪基]-3-(甲基氧基比咬 基>3-氟基苯磺醯胺(D8、方法Β)(1·0 g、2.1mmol)製備。 將所有固體集於一處（31.5g)，與沸騰之甲醇(3.2L)擾拌， 5 並以石夕藻土過濾，此時熱將移去少量之紫黑色固體。將濾 液於真空内濃縮至約1·5£之體積，並置於室溫下〇·5小 時’隨後進一步於真空内蒸發至250ml之最後體積。將混 合物以冰浴冷卻1小時，並將結晶固體過濾，以甲醇/二乙 基醚（1:1)(2 X 75mL)，隨後以二乙基醚(2 X 75mL)沖洗，並 1〇 於4〇t：真空下乾18小時（17.4g)。 於周圍溫度，添加濃縮氫氯酸(3.7ml)於該物質(I7g) 之曱醇(400mL)懸浮液。所形成之溶液以更多曱醇(i00mL) 稀釋並加熱至55°C，其於該溫度以Isolute矽-硫醇粉末 (供應商：Biotage)(2〇g，lJmmol/g等級)處理，以求萃得 15 把殘餘物。於該溫度1.5小時後，將該混合物於碎藻土、 吸引下過濾。將濾液濃縮至約200ml之體積並拌以二乙基 醚(200mL)稀釋之。於0·5小時後將所形成之沉澱固體濾 出，並以曱醇/二乙基醚（1:1)(80 mL)隨後二乙基醚（2 X lOOmL)沖洗並於40°C真空下乾燥1小時（17.3g)。將該物質 20 與沸騰之曱醇（350mL)攪拌並將溶液濃縮至100ml之體 積，隨後於冰浴冷卻0.5小時。將淡黃色結晶固體濾出， 並以甲醇/二乙基醚（1: 1)(2 X 30 mL)隨後二乙基醚(2 X 50 mL)沖洗，並於40°C真空下乾燥18小時。 該物質隨後於真空下加熱至60°C21小時以除去所有 62 200808709 甲醇溶劑（12.01 g) : (E3)。 5H(d6-DMSO、400ΜΗζ)1·20(6Η，d，J=6.4Hz)、2·39(3Η，s)、 2·40-2·45(2Η，m)、3·12-3·15(2Η，br，m)、3·76(3Η，s)、 3·82-3·86(2Η，m)、6·35-6·36(1Η，m)、6·55(1Η，d，J二9·2Ηζ)、 5 6·92-6·93(1Η，m)、7·35(1Η，d，J=8.8Hz)、7·78-7·80(2Η，m)、 7·94(1Η，t，J=8Hz)、8·8(1Η，br.s)、9·4(1Η，br.s)、10·5(1Η， br.s) 〇 實施例4:N-(2_[y#-3,5c甲基-1-u底嗅基]_4_π比咬基)_3-氟基 -4-(5-曱基-2-吱鳴基）苯石黃酸胺(Ε4)

4-溴具{2-[廣-3,5-二甲基小旅嗪基卜吼啶基卜3-氟 基苯確St胺(D10)(90毫克、0.2 mmol)、5-甲基吱喃-2-硼酸 酯（85毫克、0.4 mmol)、碳酸鈉（86毫克、〇.8 mmol)及二 氯基二(三苯基膦)鈀(0)(7毫克、5 m〇i〇/〇)之ι，2-二甲氧基 乙烧(3 ml)及水（1 ml)混合物以11〇。〇微波2〇分鐘。將該反 應混合物放置於水基質匣中並以甲醇洗提。將曱醇減壓 移除並將殘餘物放置於SCX匣中，並以曱醇及2n NH3之 曱酵溶液洗提。將基底部分混合、蒸發、斑甲苯共沸，並 將殘餘物以DMAW60(二氣甲烷··甲醇：乙酸：水之比 63 *20 200808709 60:18:2:3)洗提之管柱色層分析法純化。將產物溶解於甲 醇，並經氣化氫之二乙基醚溶液處理轉化為鹽酸鹽，得出 標題化合物(E4)、MS(ES+)m/e 446 [M+H]+。 5 實施例5:鹽酸2-氣基增_丨6-[(3及，55>3,5-二甲基小哌嗪 基】_3_(甲基氧基比咬基】·4_(5_甲基_2-吹喊基) 苯磺醯胺(Ε5)

將4-溴-2-氯基-N-[6-[(3R，5S)-3,5-二甲基小哌嗪 基曱基氧基)_2_吼啶基]苯磺醯胺(Dll)(245毫克、0.5 mmol)、4,4,5,5-四甲基-2·(5-甲基呋喃_2•基)_[1，3,2]-四氧嘧 啶硼鋁烷（alloxaboralane) (113 毫克、〇.55mmol)及碳酸 鈉(212毫克、2 mmol)於1，2-二甲氧基乙烷(4 mi)及水(2 mi) 中，微波反應器内加熱至丨30艺20分鐘。該反應混合物將 分析為乙酸乙酯及水二部分。有機部分以水以3)、鹽水沖 洗、以無水硫酸鈉乾燥，並於真空内濃縮。殘餘物以二次 之快速色層分析法(Bi〇tage SP4、25+S、0_20〇/〇 2M氨/曱 醇之二氣甲烷溶液)純化，得出標題產物。其轉化為鹽酸鹽 (1M氣化氫之二乙基醚及Me〇H溶液)得出標題產物之鹽 64 200808709 酸鹽(E5): 90 毫克、MS(ES+)m/e 49 1/493 [M+H]+。 實施例6:鹽酸2·氣基-Ν-[6·[(3Λ，55>3,5-二曱基小哌嗪 基】-3-(曱基氧基)-2-吡啶基1-4-(4-曱基-2-噻吩 基)苯磺醯胺（E6)

將羧酸U-二曱基乙基(2尺65>4-[6-({[2-氣基-4-(4-曱 基塞吩基）苯基]績酿基}胺基）-5-(甲基氧基）-2-吼ϋ定 基]-2,6-二甲基-1-六氫吼畊（D14)(0.128g)溶解於二口等烷(5 10 mL)，並添加4N HCI/二噚烧(5mL)，該反應並於室溫下攪 拌24小時。將該反應混合物蒸發，所得標題化合物呈淡 黃色固體(Ε6)(0·111 g)。MS(ES+)m/e 507/509 [M+H]+。 實施例7:鹽酸2_氣基-]\-[6-【(：3/?，55>3,5_二甲基-1-哌嗪 15 基】-3-(甲基氧基)-2-。比咬基】-4-(3-咬味基）苯績 醯胺（E7)

65 200808709 將羧酸1，1-二曱基乙基(2足65>4_[6-({[2-氯基_4-(3-吱 喃基)苯基]磺酸基}胺基)-5-(甲基氧基比咬基]-2,6-二甲 基-1·六氫0比。井（D15)(0.170g)溶解於4N HC1/二噚烧（6 mL)，並將該反應於35°C攪拌2小時。將該反應混合物蒸 5 發’並以乙酸乙醋/醚(x3)研磨，所得白色固體於5〇°c高度 真空下乾燥，所得化合物為白色固體1 19 g)。 MS(ES+)m/e 477/479 [M+H]+。 實施例8:2-氯基-N-[6-丨(3R，58)-3,5-二曱基+哌嗓基】各（甲 10 基氧基比咬基甲基·2-嗜吩基)苯橫醯胺 鹽酸(Ε8)

將羧酸1，1-二曱基乙基(2R，6S)-4-[6-({[2_氯基-4_(5一甲 基-2-嗔吩基）苯基]石黃醯基}胺基）-5-(甲基氧基）^^比。定 15 基]-2,6-^一 曱基-l-六鼠17比11井(〇16)(0.17〇8)溶解於 4N HC1/ 二畤烷(5 mL)添加，且該反應於室溫下攪拌24小時。將該 反應混合物蒸發’並以乙酸乙酯/鍵研磨x3，所得白色固 體於50°C高度真空下乾燥，所得化合物為白色固體 (Ε8)(0·066 g)。MS(ES+)m/e 507/509 [M+H]+。 66 20 200808709 實施例9:鹽酸ν_[6-[(37?，55>3,5-二曱基小哌嗪基1-3-(甲 基氧基)-2-11比淀基】-4·(5·甲基-2-咬喃基）苯績酿 胺（Ε9)

10 15 將 4-溴-N-[6-[(3R，53)-3,5_二曱基-1-哌嗪基]_3-(甲基 氧基)-2-吡啶基]笨磺醯胺(D17)(0·10g、0·219mmol)、4,4,5,5-四 甲基-2-(5-曱基 1 呋喃基 )-1，3,2-二雜氧戊硼烷 (0.068g 、 0.329mmol)、二氯化把二-三苯基膦（7·7毫克、 0.0109mmol)、碳酸鈉(〇·〇84 g、0.878 mmol)於 DME(2 mL) 及水（1.0 mL)中以微波加熱至12〇。〇20分鐘。該反應隨後 以乙酸乙酯（20 mL)稀釋，並以飽和碳酸氫鈉（2 x 15 mL) 及鹽水(15 mL)沖洗。將有機層乾燥(Mg s〇4)、蒸發，並以 色層分析法純化[矽膠、以〇 t0 15%曱醇/DCM洗提]逾 45分鐘。將產物成分蒸發，再溶解於DCM並加熱精煉轉 為HC1與1MHC1/醚。將產物蒸發，以醚/丙酮研磨，及於 50C咼度真空下隔夜乾燥（Ε9)(〇·012幻MS(ES+)m/e457 [M+H]+ 〇 實施例10:鹽酸N-【6_[(3R，58)_3,5e甲基扣辰嗪基】士（甲 基氧基比啶基】·2，_氟基-5，·(甲基氧基)-4·聯 67 200808709 苯基磺醯胺（E10)

將4-溴-N-[6-[(3R、53)-3,5-二甲基小哌嗪基]各（甲基 氧基比咬基]苯續醯胺φ17)(0·10 g、0·219 mmol)、爛酸 2-氟基-5-曱氧基苯（〇·〇56 g、0.329 mmol)、二氯化纪二三 苯基膦（7·7 毫克、（X〇i〇9mmol)、碳酸鈉（0.084 g、0.878 mmol)於DME(2 mL)及水（1·0 mE)中以微波120°C加熱20 分鐘。該反應隨後以乙酸乙酯（20 mL)稀釋，並以飽和碳酸 氫鈉(2 X 15 mL)及鹽水（15 mL)沖洗。將有機層乾燥 10 SO4)，蒸發及以色層分析法純化[矽膠、以〇 to 15%甲醇 /DCM洗提]。將產物成分蒸發，再溶解於DCM及加熱精 煉轉為HC1與充分之1M HCI/醚。蒸發，以_/丙酮研磨 並於50°C高度真空下隔夜乾燥（El 0)(0.004 g)MS(ES+)m/e 501 [M+H]+ 〇 15 實施例11:鹽酸N_[6-[(3R，5)-3,5_二甲基小哌嗪基卜3-(甲基 氧基)-2-吼咬基】-2-氟基-4-(5·甲基-2-吱喃基）苯 磺醯胺(Ε11) 68 200808709

5 10 (3足55>Η6-[(4-溴-2-氟基苯基）磺酿基]-5-(曱基氧 基）-2-吡啶基]-3,5-二甲基六氫吡畊(D18)(0.15 g、0.317 mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(5-甲基-2-呋喃基)-l，3,2-二雜氧戊 硼烷(0.098 g、〇·475 mmol)、二氯化鈀二三笨基膦（11·1毫 克、0.01 58mmol)、碳酸鈉（0.121 g、1.268 mmol)於 DME(2 mL)及水（1·〇 mL)中以微波加熱12(TC10分鐘。隨後將該 反應混合物傾倒於SCX-矽上，以甲醇(80mL)沖洗及以2M 氨1甲醇溶液(80 mL)洗提。將洗滌液蒸發，並以色層分 析法純化[矽膠、以〇至1〇%曱醇/DCM洗提]。管柱之 少量之不可溶物與經蒸發之純產物部分混合。產物再溶解 於DCM及以略超量之1MHC1/二乙基醚處理，揮發，並 以丙_/二乙基醚研磨，所得固體標題化合物，乾燥後於高 度真空下隔夜。（Ell)(0.129g)MS(ES+)m/e 475 [M+H]+。 15 實施例12:鹽酸Ν-{4·[(3π，55)-3,5·二甲基-1-哌嗪基】-2_批 咬基}-3·氣基-4·(5-甲基-2-咬喃基)苯增酿胺 69 200808709

標題化合物係以相似於實施例1(E1)之方式，使用 4-溴-N_{4_[脣·3,5-二甲基-1-哌嗪基]-2-吡啶基}-3-氟基苯 磺醯胺(D22)為起始物製備。MS(ES+)m/e445 [M+H]+。 5 實施例13:鹽酸N-[5_【膺-3,5-二甲基-1-哌嗪基】-2_(甲基 氧基)-3-吡啶基]·3_氟基-4-(5-甲基-2-呋喃基) 苯磺醯胺

10 將N_[5-[y#-3,5-二曱基-4-(笨基曱基)小旅嗪基]-2-(甲 基氧基)-3-吡啶基]-3-氟基-4-(5-甲基-2-呋喃基）苯磺醯胺 (D3 1)(60 毫克、O.lmmol)之乙醇(5ml)及 2M 氫氯酸(0.5ml) 含10%碳鈀（10毫克)溶液於氫氣一大氣壓下攪拌2小 時。混合物以π矽鈣石”過濾並將溶劑蒸發。以5%曱醇之 二氯曱烷溶液洗提之快速色層分析法，隨後以1·〇Μ氯化 氫之一乙基醚溶液處理純化殘餘物，得出標題化合物 (Ε13)。MS(ES+)m/e 475 [Μ+Η]+。 15 200808709 實施例14:鹽酸N-{5切妙二甲基小派嗓基】·3-吼咬 基} 3-既基_4_(5_甲基-2·吱喊基)笨續酿胺

、不題化合物係以相似於實施例1(Ει)之方式，使用4- /臭_叫5_[界ϋ二甲基辰嗪基比啶基卜3_氟基苯磺 &&胺(D37)為起始物製備。Ms(ES+)m/e445 [M+H]+ 〇 實施例15:N-{S_[|3,5-二甲基小派嗪基卜2__基·^工氫 心吼啶基]-3-氟基冬(5-甲基_2_呋喃基)苯磺醯胺

10 N-[5-[聲3,5-二甲基-4-(苯基曱基)小u辰嗪基；|_2_(甲基 氧基）-3-吡啶基]-3-氟基-4-(5-甲基-2-呋喃基）苯磺醯胺 (D31)(60毫克、O.lmmol)之二口等烷(2ml)溶液以4.0M氯化 氫之二啐烧溶液（lml)及水(0.5ml)處理。將混合物加熱至 70°C4小時。將溶劑蒸發，並將殘餘物溶解於乙醇(5ml) 及2M氫氯酸(2ιη1>10%碳鈀（10毫克)was添加及the混 71 15 200808709 合物於氫氣-大氣壓下授# 4小時。混合物以，賴石，過 濾，並將溶劑蒸發。以MDAP純化得出標題化合物(e15)。 MS(ES+)m/e461 [M+Hf。 分析方法 格瑞咁受體GHS-R之選殖 人類GHS-R係自人體下視丘cDna及選殖至pCR21 之TOPO中選殖出。確認該序列並轉移ApCDN“供表現 分析。再度確認該序列，且以電穿孔方式將該質體注入 CHO細胞。該選殖體以FLIPR(螢光成像閱讀儀）篩選。 GHS-R貝可曼（bacman)病毒之生成及病毒力價測定 病毒生成 GHS-R之開放讀架，係自pcdn轉移入p快速貝可曼 (pFastBacman)載體。該載體用於生成重組桿狀病毒，其中 此蟲細胞專一多角體蛋白啟動子業已為哺乳類細胞活性 啟動子取代，於此為CMV。其隨後可搭配細菌對細菌表現 系統(Invitrogen)使用。簡而言之，載體係轉形至DHi〇bac 大腸桿菌’且穿梭載體(Bacmid)自轉形細胞中分離出。穿 梭載體隨後轉染入於六孔盤之ExCell 420(JRH)培養基培 養之Sf9昆蟲細胞，以為生產重組桿狀病毒顆粒。 採集該等細胞之上清液含重組GHS-R貝可曼病 毒。隨後使用P0病毒母液感染培養於ExCell 420培養基 之200ml、1 X 106細胞/mi之sf9細胞，以進一步擴增病毒， 72 200808709 並提供P1母液。 該P1病毒母液隨後再度用於擴增10 χ 1升艾倫邁爾 (erlemeyer)搖晃培養瓶之p2病毒株以採集該等細胞之 上清液。其隨後用於將哺乳類細胞轉導，以供分析。 5 以PCR將大鼠之〇α〇 G-蛋白開放讀架自大鼠月® cDNA選殖至pCDNA3載體。其隨後轉移入p快速貝可曼 載體並以如上方式生成重組桿狀病毒顆粒。 病毒力價測定

10 在病毒之所有階段測定病毒力價，其以斑點ELISA 方法擴增，使用gp64封套蛋白單株抗體。 SF9細胞置入96孔微量滴定盤，並將一稀釋範圍之 病毒加入細胞1小時。移除病毒並將1%甲基纖維素及混 合培養基添加入細胞並培養48小時。細胞隨後固定於甲 15 醛及丙酮混合物8分鐘。細胞隨後以鱗酸緩衝生理溶液 (PBS)沖洗，並添加普通山羊血清25分鐘。血清隨後移除 並添加gp64單株抗體25分鐘。滴定孔隨後以PBS沖洗， 並添加山羊抗_鼠甩1^>共軛結合抗體25分鐘。滴定孔再 度以PBS沖洗，並添加「真藍」過氧化酶基質溶液 20 (Kirkegaard & Perry Laboratories) ’ 且培養 6〇 分鐘。 滴定孔各別計其藍點數並一併考量稀釋因子， 毒之斑點形成單位/ml。 <病 l.GHS-RGTPYS功能性促效劑分析 73 200808709 過渡性表現格瑞啉受體GHS-R的細胞之產生 HEK293T細胞(穩定表現8¥4〇大丁抗原HEK293細 胞)保存於含1〇%(ν/ν)新生犢牛血清及2mM麩醯胺酸之 DMEM。細胞種於60mm培養皿，並使生長至60-80 %滿 盤（18-24hrs)，之後使用脂染胺酸試劑轉染含相關DNA種 別之pCDNA3。為供轉染之用，3μδ之DNA與ΙΟμΙ脂染 胺酸之 0.2mL 最佳-MEM ( Opti-MEM) (Life Technologies Inc·)溶液混合，並於室溫下培養3〇分鐘，之後添加16mL 之最佳-MEM。為共轉染實驗之用，需使用upg之各 cDNA種別。將細胞曝露於脂染胺酸/DNA混合物5小時， 隨後並添加10 %(v/v)新生犢牛血清之DMEM液2 mL。於 轉染48小時後採集細胞。 過渡性表現格瑞唯受體GHS-R及大鼠Goto G-蛋白的細胞 is 之產生 保存於自由形式培養基（Invitrogen)之HEK293F細 胞，係以GHS-R及大鼠GxoG-蛋白二者共-轉導，其方式 係加入 300mls 之 GHS-R 病毒（lxl〇8 Pfu/ml)及 30mls 之 Gao G_蛋白（4xl08 pfu/ml)於1公升自由形式培養基内所培 20 養之3xl08HEKF細胞。轉導後24小時添加2mM 丁酸鈉 以增進其表現。丁酸鈉添加後24小時’以膜製備採集細 胞0 74 200808709 培養細胞之膜製備 該程序之所有步驟於4°C以預冷試劑實行。將細胞顆 粒再度懸浮於10倍體積之緩衝液A2，其含50mM磺酸 N-2-羥基乙基六氫吡畊-N-2-乙烷（HEPES)(pH 7.40)添加 5 l〇e-4M驢肽（leupeptin)(乙驢基-白胺酿基-白胺酿基-精 胺酸基；Sigma L2884)、25 pg/mL 桿菌肽(Sigma B0125)、 ImM四-乙酸乙烯二胺（EDTA)、lmM氟化苯基曱基磺醯 (PMSF)及 2 X 10 e-6M 佩普史坦 A ( pepstain A ) (Sigma)。 隨後以2 x 15秒攪拌之1升玻璃瓦林（Waring)攪拌器 10 將細胞均質化，隨後於500g離心20分鐘。上清液隨後以 48,000g離心30分鐘。將顆粒以旋渦攪拌5秒鐘再度懸浮 於4倍體積之緩衝液，隨後以唐斯（Dounce)均質器（10-15 衝程)均質化。此處將所製得物等分於聚丙烯管内並儲存於 -70〇C。 15 依以下GTPyS分析法於試管内檢測本發明之化合物 之生物活性： GHS-RGTPYS功能性促效劑分析程序 於最佳（Opti)清晰底96孔微量滴定盤内之每一待分 2〇 析化合物添加： (a) 5μ1之待測化合物以1〇〇%DMSO稀釋為所需濃度，並 添加於15μ1分析緩衝液(20mM N-2-羥基乙基六氮 口比口井-N’-2-乙烧石黃酸(HEPES)+ l〇〇mM NaCl + l〇mM 毫克Cl2、pH值以NaOH調整為7.4); 75 200808709 (b) 20μ1鳥核苷5’1^35-S]硫基三磷酸、三乙胺鹽 (Amersham;幅射活性濃度=37kBq/pl 或 imci/ml;專 一活性1160 Ci/mmol)以分析緩衝液稀釋至ι·9ηΜ得出 〇·38ηΜ最終物。 5 (c)將膜（以上述方法製備）以分析緩衝液稀釋得出最終 濃度，其每孔60μ1，含5pg蛋白。添加40μΜ最終濃 度之鳥核苷5’二鱗酸(GDP)(Sigma;以分析緩衝液 稀釋），並靜置培養10分鐘，隨後添加入分析液。 分析液起始時混合a、b及c各部分，並於室溫下培養 ίο 30分鐘。 (d)將麥芽凝集素-聚乙稀基曱苯(WGA-PVT)閃爍近接分 * 析（SPA)滴以分析缓衝液稀釋至20毫克s/ml之濃度。 • 隨後滴入25μ1於反應混合物，並再於室溫下搖晃培養 分析液30分鐘。其隨後以1500 rpm離心5分鐘。以 15 華萊士微貝他計數器之1mm標準化滴定記數程序，於 離心完成後3至6小時之間閱讀滴定盤。數據使用4-餐數對數方程式分析。基礎活性以最小值使用。 實施例之化合物分析時，<1μΜ具GHS-RGTPyS功能 性促效劑活性。 2.GHSR促效劑貝可曼FLIPR分析 過渡性表現格瑞啉受體GHS-R之U20S細胞之產生 於分析24小時前採集滿盤度100%之U20S細胞並離 心沉澱。 76 20 200808709 將上清液移除，並將細胞再度懸浮於培養基（dmem + 10%FBS + 1%L-麩醯胺酸）。使用西迪士（Cedex)測試 設備進行細胞計數，且細胞之濃度使用培養基調整至每 ml20K 細胞（10K 細胞/50μ1)。 5 將人類GHSR貝可曼病毒添加至細胞懸浮液至適當 之體積百分比（單批貝可曼病毒各別計算因病毒力價各 異）。將轉導之細胞懸浮液分配至FLIPR 384-孔清晰底滴定 盤，每孔50μ1。細胞盤培養於37它隔夜。 1〇 化合物製備 主要化合物滴定盤係備於100% DMSO内。3mlv[為最 •高濃度（giving ΙΟμΜ最終濃度），且其系列性稀釋為4倍。 ，將自主要滴定盤而來之lul移至一子滴定盤，其添加5〇μ1 之化合物稀釋緩衝液（泰洛式液（Tyrodes) + 1毫克/mi 15 BSA+ 1.5mM CaC12)。該滴定盤即係用於分析。 依以下FLIPR分析法’檢測本發明之化合物之試管内 生物活性： GHSR促效劑貝可曼FLIPR分析程序 20 培養基使用細胞沖洗器（留下10 ul之培養基）自細胞滴 定盤中吸出。細胞立即以裝載液(泰洛式液（艾爾嘉水（Elga water) + 145mM NaCl + 5mM KC1 + 20 mM HEPES + lOmM 葡萄糖 +lmM 毫克 Cl2)+1.5mMCaCl2 + 0.714 毫 克/ml羧苯磺醯胺（預溶於lMNaOH)+0.5mM亮黑食用 77 200808709 色素+ 2.5uM螢光4號染料裝載，並培養於37.5t：l小 時。隨後立即使用FLIPR 3鉀成像設備自化合物滴定盤添 加Ι.ΟμΙ至細胞滴定盤。進行螢光測定。 於GHSR促效劑貝可曼FLIPR分析中，實施例之化 5 合物之EC5G值<1 μΜ。 【圖式簡單說明】 無 10 【主要員件符號說明】 無 78

Claims (1)

1. 200808709 十、申請專利範圍： 1. 一種式(I)化合物或其藥學可接受衍生物， Rb

   (I) 5 10 其中Ra為任意之經取代芳基或任意之經取代雜芳 基；Rb及Re各為氫或C 1-6 烧基； Q為一環，其中W及X各為CH或N，且Y及Z 各為CRd或N ;且 Rd係獨立選自下組：氫、Cm烷基、Ci_6烷氧基、鹵 素、每基、二敗曱基、Ci _6鹵烧氧基、嗣基及鼠基； 其中Rb&Re至少其中之一為Cm烷基，且W、X、 Y及Z至少其中之一為N;或其藥學可接受衍生物。 2. —種式(IA)化合物，

   Rb

   Η (ΙΑ) 79 其中 Ra、Q、Rb e 專利範圍第dw、x、Y_“” =請專利範圍第丨或2項之化合物，其中：物 為任意經取代之苯基；及/或 Rb&Rc均為甲基；及/或 Q廷自下組：2-吼咬基、4_0比唆基及4_哺啶基；及/ 或 所有Rd均為氫或甲氧基。 如申請專利範圍第3項之化合物，其中R、經吱喃 基取代之苯基，二者均可進一步為取代。 如申請專利範圍第1項之化合物，其係選自下列： N {6-[廣-3,5-—甲基-1_旅σ秦基]·2-口比咬基卜3-氟基 -4-(5-甲基-2-呋喃基)苯磺醯胺； N-(2-[界3,5_二甲基-I』辰嗪基]_4_吼口定基)冰(5_甲基 -2-吱喃基)苯續酿胺； Ν-[6-|>#·3,5-二甲基-1-哌嗪基]_3_(甲基氧基)_2-咐啶 基]-3_氟基-4-(5-甲基-2-呋喃基)苯磺醯胺;. N-(2-{^-3,5-二甲基-1-哌嗪基]-4_嘧啶基）_3_氟基 -4(5-甲基-2-呋喃基)苯磺醯胺； 2-氯基_N-[6-[(3足55>3,5-二甲基小哌嗪基]_3_(甲基 氧基)-2-吼唆基]-4-(5-甲基-2-吱0南基）苯續驢胺 2-氯基-N-[6-[(3足55>3,5-二 T 基-1-哌嗪基](甲基 氧基)-2-吼。定基]-4-(4-甲基-2-嗔吩基）苯磺醯胺 2-氯基 _Ν-[6-[(37?，55>3,5-二甲基-1-哌嗪基]_3_(甲基 80 200808709 氧基)-2-吨啶基]-4-(3-呋喃基)苯磺醯胺 2-氯基-N-[6-[(3R，5S)-3,5_二曱基小哌嗪基]冬（甲基 氧基)-2-吡啶基]-4-(5-甲基-2-噻吩基)苯磺醯胺 N-[6-[(37?，55>3,5-二曱基-1-哌嗪基]各（甲基氧 基)_2_1:7比唆基]-4-(5-甲基-2-吱喃基）苯石黃酿胺 Ν-[6-[(37?，55>3,5-二甲基-1_哌嗪基]冬（甲基氧 基)-2-批啶基]-2’-氟基-5’-(甲基氧基)4-聯苯基磺醯 胺 N-[6-[(37?，55>3,5-二甲基小娘嗪基]_3_(甲基氧 基)-2-吡啶基]-2-氟基-4-(5-甲基-2-呋喃基）苯磺醯胺 N-{4_[(37?，5aS)-3,5-一 甲基-1_旅嘻基]-2-σ比咬基}-3-氟 基-4-(5-甲基-2-呋喃基）苯石黃酿胺 队[5-[脣·3,5-二甲基-1-哌嗪基]冬（甲基氧基)冬吡啶 基]-3-氟基-4-(5-甲基-2-吱喃基）苯石黃酸胺 队{5-[廣_3,5-二甲基哌嗪基]_3_吡啶基卜3_氟基 4-(5-甲基-2-呋喃基)苯磺醯胺 N_{5-[膺-3,5-二甲基_ι_哌嗪基]_2_酮基二氫 3 口比。疋基}冬敦基_4_(5_甲基_2•吱喃基）苯磺醯胺 以及其藥學可接受衍生物。 種如申明專利範圍第！ i 5項中任—項之化合物 之用途，用於治療生長激素促泌素（ghs)受體所媒 介之狀況或障礙。 種如中晴專利範圍第6項之用途，其中該狀況或 讀為惡病質、肌肉減少症、骨質疏鬆症、類風濕 81 200808709 15 20 8· 9· 性關節炎、骨關節炎、與年齡相關之衰弱、生長激 症、代謝異常、睡眠障礙、阿茲海默氏症、 繁血性心衰竭，減緩下列相關症狀：胃—食 =/或，，伴隨或不伴隨食慾_/代謝·相關之‘ 貝、ϋ、胃炎、發炎性腸病、採用如經口饒食等 方^期間之胃邮舰，料性腸塞絞痛或假性腸 阻基之治療，及與便秘相關之狀況，如便秘型腸易 激症候群。 一種如申請專利範圍第1至5項中任-項之化合物 之用途，驗製料财餘素促泌素（GHS)受體 所媒介之狀況或障礙之藥劑。 一 利範圍第8項之用途，其中該狀況或障礙 病：、肌肉減少症、骨質疏鬆症、類風濕性關 m關節炎、與年齡相關之衰弱、生長激 =症、代謝異常、睡眠障礙、阿茲海默氏症、鬱血 =竭’減緩下列相關症狀：胃—食道逆流及/或 -二不t:伴隨或不伴隨食慾/代謝-相關之惡病 、、區土月义、發炎性腸病、採用如經口傲食等 =期間之胃_趨緩、麻痺性腸塞絞痛或假性腸 基之治療’及與便秘相關之狀況，如便秘 激症候群。 J 20 :種如製備申請專利範圍第1至5項中任一項之化 合物之方法，其包含將式（II)化合物 82 10. 200808709

   Η Rc (II) 其中W、X、Y、Z、Rb&Re如式⑴中定義或其受 保護衍生物，與式(III)化合物偶合，其中Ra却式(I) 中所定義，且L1為合適之脫離基 〇 ,Η t R—S—L1 fi O ’ 5 (III) f 且/或轉化某種式（I)化合物為不同之式(I)化合物，且/ 或轉化式(I)化合物為其藥學可接受衍生物。 11. 一種醫藥組成物，其包含如申請專利範圍第1至5 項中任一項之化合物。 10 12. —種製備如申請專利範圍第11項之醫藥組成物之方 法。 13. 一種式（I)化合物或其藥學可接受衍生物之用途，用 於製造治療哺乳類包括人類之可由生長激素促泌素 (GHS)受體媒介之狀況或障礙之藥劑。 83 200808709 七、指定代表圖·· (一） 本案指定代表圖為：第（無）圖。 (二) 本代表圖之員件符號簡單說明·· 無 八、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式 Rd

   N Η a β Γ\ 〇— II Q N. JN 15 4