TW200803919A - Treatment of inflammation and vascular abnormalities of the eye - Google Patents

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200803919 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於哺乳動物患者之眼睛發炎及金管異常，其 包含彼等與局部缺血相關之眼睛發炎及血管異常、其預防 及其減輕。 眼球有三層：内視網膜，其含有感光器；中葡萄膜（脈 絡膜、睫狀體及虹膜）,·及外鞏膜，其包含透明角膜。眼 球亦含有兩個腔，即一在晶狀體前方之較小的前腔，其藉 由虹膜分成皆由似水的水性液填充之前房及後房；及一在 晶狀體後方之較大的後腔，其含有凝膠狀玻璃體（體液）。 晶狀體在虹膜後方，其藉由睫狀體及懸韌帶保持在原位。 鞏膜之可見部分藉由結膜覆蓋，該結膜為連續作為眼瞼之 裏襯之膜。外部肌肉移動眼球。 通常認為眼睛為免疫特權部位。雖然眾多其組成部分含 有血管且由血流連續地自人體循環系統來供應，但是人體 免疫糸統之活性組伤不進入眼睛以達到足以使眼睛結合至 人體正常操作免疫糸統中之程度。為在治療包含發炎及血 管異常之眼睛病症中獲得獨立於投予路線之令人滿意的功 效，藥物或活性醫藥試劑或至少藥物或活性醫藥試劑之作 用必須能穿過/滲透包含血液-視網膜障壁之不同血液_組織 障壁。 眾多眼睛生理組份經受包含發炎及/或局部缺血或血管 異常之病症。該等以標題"眼睛發炎及/或血管病症"分組之 病症包含（但不限於）下列病症： H49U.doc 200803919 代4射失^病.④視網膜病變·具有藉由高血糖症標識之慢性 型。=之糖尿病的患者中之視_損害。糖尿病可為】 盆/中人體騰臟未能生錢島素；或糖尿病可為2型， =人體顯示出對持續正常新陳代謝之騰島素抗性連同不 地胰島素分泌。兩種類型皆導致視網膜損害，稱為糖尿 t視_病變。"視網膜病變"為應用於視網膜病症之通 用術語。 籲糖尿病性視網膜病變為影響視網膜脈管系統之糖尿病的 併I症。存在漸增之跡象表明發炎有助於正在進行的視網 膜病理學，且經由活化視網膜中之内生微神經膝質細胞且 募集巨嗟細胞，順向產生發炎介體，糖尿病引起視網膜内 之局部自保持發炎反應。舉例而言，增加含量之發炎細胞 激素IL-1及IL-6發現於具有冑尿病性視網膜病變之動物模 型之視網膜組織中。 、 發炎細胞激素TNF-α暗含在糖尿t病性視網膜病變之發病 馨 機制中。因而，若干基於阻斷其活性之實驗性治療得以進 打。由於抗-TNF-a療法，病理學之逆轉發生在糖尿病性黃 斑水腫之4種狀況中（Sfikakis等人，仏2〇〇5; 28(2): 445-447)。另外，展示TNF_a在具有視網膜病變之 糖尿病兒童之血清中升高，而血清江“％抗炎細胞激素）降 低（Mysliwiec等人，d 价ochm· 2006 Aug·; 39(8): 851- 856) 〇 引起血管損失及漏出至視網膜中之視網膜血管惡化稱為 血管病變’且其導致視覺障礙且可進展至失明。在勞動年 H49I4.doc 200803919 齡個體中，糖尿病為失明之最普通病因。視網膜血流調整 在糖尿病中極早地受到破壞。已提議所得的血管損傷與其 對供應至視網膜之主要氧消耗部分之血液及氧氣的順向破 壞一起為糖尿病性視網膜病變進程之顯著的起作用因素 (Dao-Yi Yu等人，"Clinical and Experimental Ophthalmology”， (2001) 29, 164-166)。 另外，黃斑水腫（亦稱為糖尿病性黃斑水腫）為糖尿病性 視網膜病變之顯著臨床症狀，其中發炎亦包含於該病理學 中。皮質類固醇抗炎劑曲安奈德（triamcinolone acetonide) 用於藉由眼内注射來治療糖尿病性黃斑水腫。由於擴張型 高可滲透毛細管及微觀動脈瘤之漏出，糖尿病性黃斑水腫 (DME)在血液-視網膜障壁崩潰後發生（Ciulla等人，Diabetic Retinopathy and Diabetic Macular Edema: Parthophysiology， Screening，及 Novel Therapies, Diabetes Care, (September 2003)第26卷，第9期，2653-2664)。遭受糖尿病性視網膜 病變之糖尿病患者亦可發展DME。晚期糖基化終點產物可 包含於保持前發炎性信號過程中，且晚期糖基化終點產物 與該等產物之特異性受體之間的相互作用可造成視網膜血 液動力學破壞及/或對血管内皮細胞之損害（Ciulla，前 述）。 (b)-葡萄膜炎-一種眼内發炎病症之非特定術語。注意， 葡萄膜為眼球之高度帶血管的中間層，直接位於鞏膜下 方。其由虹膜、睫狀體及脈絡膜組成，且形成色素層。葡 萄膜炎通常包含一些或所有該等部分之發炎，但另外可包 I14914.doc 200803919 含眼睛之諸如視網膜及角膜之其他非葡萄膜部分之發炎。 葡萄膜炎可與已知病因之感染或疾病或未知病因之^染或 疾病相關聯，在後者狀況中，其稱為"内生葡萄膜炎"，認 為其具有自體免疫源。”交感神經性葡萄膜炎”為以一隻眼 睛由穿刺創口產生之葡萄膜發炎開始的嚴重雙向葡=膜 炎。有跡象表明葡萄膜炎可藉由諸如ΙΙΜ之細胞激素誘發 (Chiou，J. 〇⑶/.户/^所卿/ 以以，17:189198,之⑼”。一 φ 些研究者已證明誘發葡萄膜炎之1L-1藉由IL-1阻斷劑抑制 (Chicm，〇以/·，16:4〇7 418, 2⑽〇)。 (c)-黃斑退化，一種產生中央視場損失之在視網膜之黃 斑區域中的色素沉著損失。黃孩王退化具有顯著發炎組份且 些研九者已注意到經5年時期自早期階段及中間階段進 展至晚期階段之黃斑退化的進程風險中，高血含量之il_6 及C-反應蛋白（CRP)與兩倍增加相關聯。 在老齡患者中，年齡相關之黃斑退化（AMD)為失明之最 • 普通類型。黃斑退化特徵為視網膜色素上皮細胞損失及在 脈絡膜與視網膜之間的介面處出現脈絡膜疣。對組成疾病 狀況之85%之乾燥形態的AMD沒有有效的治療。尤其在脈 絡膜疣區域中存在AMD之顯著發炎組份。已經鑑別出諸如 C-反應蛋白、活化微神經膠質細胞及活化互補組份之發炎 標識與病灶相關聯。近期，已報導類風濕性關節炎具有十 倍保守之AMD，此歸因於其長期使用抗炎劑（pL McGeer及 J Sibley, Neurobiology 〇f Aging 26 (2005) 1199-1203)。該 發現與其他4項報導一致，該等報導中，發現因素H(一種 114914.doc 200803919

抵抗藉由互補之自身攻擊之保護性因素）之多態性已對 AMD之風險具有若干倍作用（GS Hageman等人PNAS 102 (2005) 7227-7232; RJ Klein 等人 Science 308 (2005) 385-389; JL Haines 等人 Science 308 (2005) 419-421; AO

Edwards 等人 Science 308 (2005) 421-424)。 發炎細胞激素IL-6及TNF-α暗含在AMD之發病機制中。 發現IL-6在AMD狀況之血清中顯著升高而TNF-α適度增加 (Seddon等人，drc/2. 2005; 123: 774-782)。 該等發現指示AMD之有效抗炎治療應具有極有益之作 用。有一些跡象表明年齡相關之黃斑退化藉由在脈絡膜血 管層area)中誘發氧化氮合成酶且過剩生 產氧化氮（一種可作為介體包含於發炎過程中之高反應性 化合物）而引起（Chiou，2001)。 【先前技術】 眼睛發炎之各不同表現形式具有其當前所推薦之治療。 糖尿病性視網膜病變之發展及進程可藉由緊密（狹窄）血 糖控制及緊密血壓控制來降低。然而，迄今為止，糖尿病 性視網膜病變之治療涉及直接治療受影響之眼睛。雷射治 療用於治療糖尿病性視網膜病變。用於黃斑水腫之雷射治 療使在受影響眼睛中之視覺角度加倍（引起部份視覺障礙） 之發生率在兩年時降低50%以上。作為在糖尿病性視網膜 病變之最早階段所經歷之發炎的治療，眼内皮質類固醇已 在經選擇之患者中得到一些成功使用。此包含使用諸如曲 安奈德之長效皮質類固醇，藉由極微小的針注射至玻璃體 114914.doc -10- 200803919 腔中且=部麻醉。曲安奈德亦用於藉由眼内注射來治療糖 尿病，黃斑水腫。亦有使用皮質類固醇外科植入眼睛内部 以使藥物在持續釋放藥物傳送裝置中恆定釋放的報導。 *動物板型可用於研究糖尿病性視網膜病變。此為鏈服佐 菌素（伽ptozotocin)誘發之糖尿病A鼠模型。糖尿病藉由 在成年實驗室大鼠中腹膜内或血管内注射鏈脲佐菌素 (STZ)而誘發。注射之3_5天内，纟鼠展示血漿血糖含量升 • 冑至糖尿病特徵之範圍。其展示與人類糖尿病性視網膜病 變相關聯之視網膜結構及功能中之眾多早期改變。 葡萄膜炎通常藉由投予皮質類固醇及其他免疫抑制劑來 治療’但該等治療並非普遍有效。作為用於交感神經性葡 萄膜炎之治療，高劑量皮質類固醇經常為有效的且該等化 合物係經眼内投予。眼内注射曲安奈德亦用於治療葡萄膜 炎。 、 在防止進展至黃斑之損害中，雷射光凝固係有效的，但 • 其引起經處理區域不可逆地形成瘢疤。藉由眼内注射投予 哌加他尼（PegaPtanib)(”MaCugen，，）為用於黃斑退化之實驗 性治療。 直接注射至眼睛中明顯為眾多患者不願經歷之不希望的 私序远今為止，幾乎沒有不涉及直接注射至眼睛中之成 功治療糖尿病性視網膜病變之報導。 國際專利申請公開案第W0/03/06! 667號Vas〇gen Ireiand Limited揭示暴露磷脂醯甘油（pG)於其表面上之脂質體及粒 子，且建議其大體藉由全身性投予及經人體免疫系統之改 114914.doc 200803919 貝而在/D療發炎及自體免疫疾病中之用途。 鑒於上文’存在對用於眼睛發炎及/或血管病症之改良 治療的長期需要。 亦需要提供適用於治療人類患者之眼睛發炎及/或血管 病症之物質的組合物。 【發明内容】 已發現眼睛發炎可在哺乳動物受檢者中藉由料投予適 當劑量之麟酸酉旨-甘油基呈遞體而得以減輕，其中該等呈 遞體八有與/周亡喷礼動物細胞或細胞〉周亡體之尺寸類似的 尺寸。投藥可為全身性的，不必直接投予至眼睛，例如肌 肉内或靜脈内投藥。今人瞥 — 7人I；冴地，樂劑之投予在通常認為 免疫特權部位且通常受伴罐 、币又保濩以避免人體之全身性作用的眼 目月中產生抗炎或血管病症減輕之作用。 因此，根據本發明之一態樣，提供一種延遲咕乳動物患 或血管病症的發展及/或進程之方法，其 σ向心者扠予有效$之醫藥上可接受之磷酸酯·甘油基 遞體#中5亥等呈遞體具有與调亡細胞或細胞调亡體之 尺寸類似的尺寸。 在貝％例中，血官病症為局部缺血病症。 根據本發明之另—能捲 、 心樣’美供醫藥上可接受之磷酸酯_ 甘油基呈遞體在製備或赞也 w a表乂供治療或預防哺乳動物患者之 眼睛發炎及/或血管病、斥 — 、 届症用之樂劑中之用途，其中該等呈 遞體具有與凋亡細胞戋 a、、、田胞凋亡體之尺寸類似的尺寸。 較佳實施例 U4914.doc •12- 200803919 適用於本發明之磷酸酯-甘油基呈遞體及其製備之詳述 可見於前述之國際專利申請公開案第W〇/〇3/〇61667號 Vasogen Ireland Limited及其於⑼们年以21日申請之美國 田,J 本 U.S.S.N· 1 0/348,601 Bolton及 Mandel，其以引用之方 式全部併入本文中。適合地，該等體具有與凋亡細胞或細 胞/周亡體之尺寸類似的尺寸。該等醫藥上可接受之體包含 合成及半合成體，其具有通常（但不排他地）為球狀、圓柱 狀、包含扁圓及長圓球形之橢球狀、蛇形、腎形等之形 狀’且具有較佳沿其最長軸量測之直徑為約2〇 nm至約5〇〇 μηι之尺寸，且包括在其表面上之磷酸酯-甘油基。 醫藥上可接受之體具有磷酸酯-甘油基或能夠在活體内 轉化之在外表面上具有預定特徵之基團。該等基團之結構 可為經合成改變的且包含原始磷脂醯甘油基之所有、部分 或修飾變型。舉例而言，帶負電荷氧之磷酸基可轉化為碟 酸醋基（例如，L-OP^XORYOR’，），其中L為磷脂醯甘油 基之剩餘物，R，為-CH2CH(OH)CH2OH且R，，為具有個 碳原子之烷基或具有2至4個碳原子及1至3個羥基之經經基 取代之烷基，其限制條件為R’’比R，基團更易在活體内水 解）’轉化為包含二鱗酸醋之二填酸g旨基（例如， L-0P(0)(0R’）0P(0)(0R’，）2，其中L及R*如上文定義且各汉" 獨立地為氫、具有1至4個碳原子之烷基或具有2至4個碳原 子及1至3個羥基之經羥基取代之烷基，其限制條件為第一 鱗酸醋基[4(0)(0^)2]比R，基團更易在活體内水解；或轉 化為包含三磷酸酯酯之三磷酸酯基（例如， H4914.doc -13- 200803919 Ι^ΟΡ(〇)(〇ιτ)〇ρ(〇)(〇κ")〇ρ(〇)(〇Ιι")2，其中 L及 Ri如上文 定義且各R"獨立地為氫、具有1至4個碳原子之烷基或具有 2至4個碳原子及1至3個羥基之經羥基取代之烷基，其限制 條件為第二及第三磷酸酯基比化，基團更易在活體内水解）； 及其類似物。該等經合成改變的磷酸酯-甘油基能在活體 内表現磷酸酯-甘油，因此，該等經改變之基團為磷酸酯_ 甘油可轉化基團。 磷脂醯甘油為已知化合物。其可藉由（例如）用磷脂酶D 處理天然產生之二聚形態之磷脂醯甘油·心磷脂來生產。 磷脂醯甘油亦可使用磷脂酶D藉由自磷脂醯膽鹼之酶促合 成來製備-見（例如）Tremblay等人之美國專利5，188,95 1。化 學上’碗脂醯甘油具有磷酸酯-甘油基及一對相似但不同 之Ci8-C2〇脂肪酸鍵。 如本文所使用，術語’’PG”欲涵蓋載有鱗酸酯-甘油基與 寬廣範圍之至少一種脂肪酸鏈的磷脂，其限制條件為所得 pG實體可作為脂質體之結構組份參與。較佳地，該等pG 化合物可藉由式I表示·· :―一〇 R 00 Ο CH 〇

I II

CH2—O--P-〇-CH2CH(OH)CH2OH 0· 其中，R及R1獨立地選自飽和或不飽和直鏈或含有有限量 之支鏈的匕^24煙鏈，其中至少一個鏈具有10至24個碳原 子。大體上，脂質鏈R及Rl形成脂質體之結構組份而非活 114914.doc • 14· 200803919 性組份。因此，只要可符合結構功能之要求，則該化合 物可變化以包含兩個或一個相同或不同的該等脂質鏈。較 佳地，脂質鏈為約10至約24個碳原子長、飽和、單不飽和 或多元不飽和直鏈或具有有少數分枝的脂質鏈。例如，月 桂酸酯（C12)、肉且蔻酸酯（C14)、棕櫚酸酯（C16)、硬脂酸 酯（C18)、花生油酸酯（C2〇)、山嶮酸酯（C22)及二十四酸酯 (C24)為適用於本發明之PG之飽和脂質鍵。標搁油酸醋 _ (C16)及油酸酯（C18)為適合之單不飽和脂質鏈的實例。亞 麻油酸酯（C18)、次亞麻油酸酯（C18)及二十酸酯 (ariChid〇nate)(C20)為適用於本發明之脂質體中之PG的適 合多元不飽和脂質鏈的實例。具有單個該脂質鍵之填脂亦 L用於本餐月其亦被稱為溶血填脂。本發明亦涵蓋脂質 體之用迷，其中活性組份為二聚形式之叫，即心鱗脂，但 其他式I之二聚物亦為適合的。較佳地，該等二聚物不為 以合成交聯劑（諸如順丁烯二醯亞胺）合成交聯者，而為如 _ Lehmger，細*所切9，第525頁（1970)所敍述並圖示於下 列反應之藉由移除甘油單元來交聯者： co—〇—ρι, 2 r2 R co~~~〇———qi«j

u p-〇——CH2CH(0H)CH20H 114914.doc -15- 200803919 R-CO-0-CH? CHj~

-CO—-CH -CO-R -CO-R1 3-—0—〇h2 -0.CH2CH(0H)CH20— 心磷脂

HOCH2CH(OH)CH2OH 其中R及R各獨立地如上文所定義。 • 術語"磷酸_ -膽鹼"係指基團-O-PPOKOHhO-CHrCH2· N+(CH3)3及其鹽，其係如以下結構所連接至脂質之剩餘 物： R2-CO--O-CHo 3 |

R -CO-O-CH

I

•P-0-CH2—CH2—N(CH3)3 OH CH2—_ __〇 其中R2及R3獨立地選自飽和或不飽和直職含有少數支鍵 的（^-(：24烴鏈，其中至少一個鏈具有1〇_24個碳原子。 本文中所使用之術語，，構酸酯-甘油基呈遞體"係指生物相 谷性的、醫藥上可接受的、在其表面上具有磷酸酯-甘油 基或可轉化為磷酸酯-甘油基之基團的三維體。以實例說 明，PG可與其他磷脂及/或膜形成材料來形成脂質體之 膜，其作為膜之唯一成份或作為其主要或微量組份。 "三維體部分"、"三維體"或"醫藥上可接受之體"之實例 包含生物相容性合成的或半合成的實體，諸如通常適用於 醫藥工t或在本技術中已知之天然或合成的生物相容性材 114914.doc -16 - 200803919 填充珠粒、粒子、顆 、或用生物相容性材 料之脂質體、實體珠粒、空心珠粒、 粒及微球體。珠粒可為實體或空心的 料填充的。術語，，生物相容性的，，係指在所使用之量下為非 毒性的或具有可接φ夕矣M 4ffiI、、口丨、,、士 #丄、^ _

由其中之一者為PG之脂質形成的脂質體。或者，醫藥上可

粒及生物相容性材料之微球體，其包括諸如聚乙二醇、聚 (甲基丙烯酸甲_)、聚乙烯㈣咬酮、聚苯乙稀之一種或 一或多種生物相容性材料及寬廣範圍之具有連接至其之磷 酸酯-甘油基的其他天然、半合成材料及合成材料。 牛 適用於本發明之組合物之體的適合形態包含（不限於）天 然或合成的生物相容性材料之粒子、顆粒、微球體或珠 φ 粒，其中生物相容性材料為諸如通常適用於醫藥工業之聚 乙二醇、聚乙稀吼略咬酮、聚苯乙稀及其類似物；諸如經 乙基澱粉、羥乙基纖維素、瓊脂糖及其類似物之多醣。較 佳地，該等材料應具有適用於衍生之側鏈或部分，以使諸 如PG之磷酸酯-甘油基可較佳地藉由共價鍵連接至該等材 料。本發明之體可為實體或空心的’或用生物相容性材料 填充的。本發明之體視需要進行修飾以使其在其表面上運 載諸如PG之磷酸酯-甘油分子^ —般而言，將磷酸酯·甘油 且尤其PG連接至各種受質之方法在本技術中為已知的。/ 114914.doc -17- 200803919 物質之較佳組合物 較佳地1旨質中無_2包括各種脂質之脂質體。然而， .“、、 帶正電。在脂質體狀況下，磷脂醯 甘油PG可構成脂質體 1或壁之主要部分或全體部分，該或 该專脂質體層或壁細

^疋向以使其磷酸酯-甘油基部分在表 面上呈現以擔當紝人I 仙、，、。、、口 口基團，且脂質鏈形成結構壁。

在：米或亞微米範圍，脂質體或脂質微脂粒為密封囊， 〃（單曰或夕層）包括形成環繞中央腔室之單層或雙層之 適口的兩親分子’肖中央腔室可經流體填充。儘管對於本 發明而言内部所含物並不重要且通常為惰性的，但是脂質 體或脂質通常含有水性介質。磷脂為兩親媒性分子(亦 即兩親刀子）’含義為該化合物包括具有連接至不溶於 水之煙鍵之極性水溶性基團的分子。充當基質之層的兩親 刀子具有經疋義之極性及非極性區域。除本發明之外， 兩親分子可包含其他的單獨與載有活性基團之磷脂一起使 用的或呈與另一脂質之混合物形式使用之天然產生的脂 貝。充¥月曰負體之層的兩親分子可為諸如聚氧化乙稀烧基 醚、聚氧化乙浠烧基酯及蔗糖二酯之惰性結構對照合成之 化合物。 較佳地’為用於形成脂質體’兩親媒性分子應包含具有 不同首基（例如磷脂醯甘油、填脂醯絲胺酸、碟脂醯膽驗） 且具有如上文所述之各種脂肪酸側鏈之磷脂的一或多種形 態，以及諸如膽固醇、鞘脂及固醇之其他親脂性分子。 本發明之脂質體通常自密封水相之磷脂雙層或複數個同 心磷脂雙層來形成。在一些狀況下，脂質體之壁可經單層 114914.doc -18- 200803919

化；然而，該等脂質體（稱為 I 所述之由雙層形成 ：層⑽)通常比如下文 nm)。依昭太恭日日，、4月3貝體更小（直徑小於約70 的、生物wL，成之脂f體得以設計成為生物相容性 物可降解的及非毒性的。該類 市场上通常在其水性内核 醫藥製劑中。缺而…有性樂物分子之若干 填充，亦即，盆大體上發明中’脂質體不用醫藥製劑來 ^ 體上不含非脂質的醫藥學活性組份。因 此 在車父佳實施例中，匕暂触 曰^體以及其他醫藥上可接受之體 篮上不含非脂質醫藥學活垂 合韭_所鼢 生貝體（例如<1%)且更佳地不 當藥物載劑。灵體，體其自身為活性的，不擔 二脂質體經製備及處理以使活性基團在表面呈現在脂 a" □此纟本發明之較佳實施例之脂f體中的⑼充 田月曰貝體自身之配位基與結構組份。 因此，本發明之較佳實施例提供脂質體在製備供治療或 預防：乳動物患者之眼睛發炎及/或血管病症用之藥劑中 之用迷，其中該等脂質體暴露或可經處理或誘發以暴露一 或多個磷酸醋-甘油基於其表面上以擔當結合基團。該等 脂質應包括10%_100%之脂質體’其餘為例如磷脂醯膽驗 pc之惰性成份、或例如磷脂醯絲胺酸以之經不同機制起 作用之惰性成份、或該等情性成份之混合物。諸如pc之惰 性共成份為較佳的。 本發明之較佳磷酸酯-甘油基呈現脂質體得以構成以達 以下程度：包括至少10重量”PG，其餘為磷脂醯膽鹼 114914.doc -19- 200803919 (pc)或其他該或該等生物學上可接受之磷脂，較佳至少 50%的PG ’更佳6(M〇〇〇/c^PG且最佳7〇-9〇%的pG，其中單 個最佳實施例為約75重量❶/。之pG。 亦可使用PG脂質體與惰性脂質體及/或與具有經不同機 制起作用之％ &之脂質體的混合物，#限制條件為在總混 合物中，PG之總量保持在約1〇%之最小值以上且較佳_ 以上。根據本發明之較佳特徵，磷酸廟-甘油基呈遞體包

括小於5〇%、較佳小於鄉、更佳小於25%且甚至更佳小 於10 %之碟脂酿膽驗。 、本lx明不僅涵蓋具有作為膜成份之pG之彼等脂質體作 為磷酸酯-甘油基呈遞體的用途，而且涵蓋具有在其外表 面上運載磷酸酯-甘油基之分子之非pG膜取代基的脂質體 作為單體或寡聚物（如區別於磷脂醯甘油）的用途，例如， 藉由化學修飾諸如月旨質體表面《呈遞體的月旨質體表面來化 學地連接，使磷酸酯_甘油基可用於後續相互作用。由於 在”亥等为子之表面上包含磷酸酯-甘油基，因此該等分子 包含於磷酸酯-甘油基呈遞體之定義中。 關於週用於本發明之非脂質體，如所注意到的，該等非 脂質體包含具有適當尺寸之生物相容性實體或空心珠粒。 生物相容性非脂質合成體或半合成體可選自聚乙二醇、聚 (甲基丙烯酸甲酯)、聚乙烯吡咯啶_、聚苯乙烯及寬廣範 圍之具有連接至其表面之磷酸，_甘油基的其它天然的： 半合成及合成材料 且包含（例如）直鏈 生物可降解聚合物揭示於此項技術中 114914.doc •20· 200803919 聚合物，諸如聚乳酸交酯、聚乙交酯、聚己酸内酯、聚酸 酐、錦綸、聚胺基甲酸酯、聚酯醯胺、聚原酸酯、聚對二 氧六環酮、聚縮醛、聚縮酮、聚碳酸酯、聚原碳酸酯、聚 磷氮烯、聚羥基丁酸酯、聚羥基戊酸酯、聚伸烷基草酸 酯、聚伸烷基琥珀酸酯、聚（蘋果酸）、聚（胺基酸）、聚乙 烯吡咯啶酮、聚乙二醇、聚羥基纖維素、殼糖、聚葡萄胺 糖及共聚物、三聚物及其組合。其他生物可降解聚合物包 含（例如）明膠、膠原蛋白等。 用於衍生以將具有基團或結合基團之磷脂或其部分連接 至三維體的適合物質可（例如）自p〇lySCiences Ine·，400

Valley Road，Warrington，PA 18976購得或自 Sigma Aldrich

Fine Chemicals購得。用於其衍生之方法在本技術中已 知。該等方法之特定較佳實例揭示於國際專利申請案 PCT/CA02/01398 Vasogen Ireland Limited中，其以引甩的 方式併入本文中。 脂質體可藉由各種在此項技術中已知之技術來製備，諸 如 Szoka等人Bbag· 9:467 (1980))詳述 之彼等技術。視用於形成脂質體之方法以及任何成形後處 理而定，脂質體可形成為各種尺寸及組態。製備適當尺寸 之脂質體之方法在此項技術中已知且並不形成本發明之部 分。可參考關於該主題之各種教科書及文獻論文，例如， 藉由 Yechezkel Barenholz及 Daan J· Α· Chromeline之評論論 文及其中所引用之文獻，例如New，R. c. (199〇)及 Nassander，U· K·等人（1990)及 Barenh〇lz，γ及 Lichtenberg， 114914.doc -21 - 200803919 D.， Liposomes: preparation, characterization， and preservation，Mw/zo心 」似/· 1988, 33:337-462 〇

多層微脂粒（MLV)可根據在此項技術中已知之方法藉由 簡單脂質-薄膜水合作用技術來形成。在該程序中，形成 脂質體之脂質之混合物溶解於適合之有機溶劑中。在容哭 中將混合物蒸發以在容器之内表面上形成薄膜，隨後向其 中添加水性介質。脂質薄膜水合以形成MLV，其通常具有 直徑在約100-1000 nm(〇」S 1〇微米）之間的尺寸。 相關的逆蒸發相（REV)技術亦可用於形成在微米直徑尺 寸範圍中之單層脂質體。REV技術包含在玻璃沸騰管中溶 解經選擇之脂質組份於諸如二乙醚之有機溶劑中，及經由 諸如23-量規皮下注射針之小量規通道快速注射視需要含 有於脂質體内部待運載之藥物溶液之水溶液至該管中。隨 後密封該管且在水浴超音波器中超音波降解處理。管之内 含物在真空下交替地蒸發且用力地混合以形成最終脂質體 懸浮液。 本發明之較佳實施例之磷酸酯-甘油基呈現脂質體以及 其他醫藥上可接受之體的直徑變化範圍為約2〇^瓜至5〇〇 μη，更佳為20 nm至約1〇〇〇 nm，更佳為約2〇 nm至約5〇〇 nm ’且最佳為約20 nm至約2〇〇 。諸如可自此項技術所 瞭解，該等較佳直徑應相應於哺乳動物細胞凋亡體之 徑。 一種REV及MLV之有效定尺寸方法包含經由_系列具有 在〇·〇3至0.2微米、通常〇.05、〇〇8、〇1或〇2微米之範圍 114914.doc -22- 200803919 中之經選擇的均勻微孔尺寸之聚碳酸酯膜擠壓脂質體之水 性懸浮液。膜之微孔尺寸粗略地相應於經由該膜藉由擠壓 生產之脂質體的中值尺寸，尤其在製劑經由相同膜擠壓兩 次或兩次以上之處為此情況。脂質體定尺寸之該方法適用 於製備均質-尺寸REV及MLV組合物。以引用的方式併入 本文中之美國專利4,737,323及4,927,637描述，使用直徑在 1 μηι範圍中之起始物質來生產具有在〇1-〇 4 ^^(100-400 nm)範圍中之均勻尺寸之脂質體的懸浮液的方法。均質化 方法亦適用於降低脂質體尺寸至100 nm或更小之尺寸 (Martin, F. J. (1990) InrSpecialized Drug Delivery Systems- -Mamifactiiring and Production Technology，ρ· Tyle (編） Marcel Dekker，New York，第 267_316頁）。*French press 中，降低脂質尺寸之另一方式係藉由施加高壓至脂質製 劑0

根據在此㈣術中已知之方&，脂質體可經製傷以具有 大體上均貝尺寸之單、雙層微脂粒，其直徑在約G 微米 與0.2微米（70-200 nm)之間的經選擇之尺寸範圍中。詳言 之’該尺寸範圍中之脂質體能夠容易地經由血管上皮^ 外滲至周圍組織中。另一優點為其可藉由在此項技術中已 知之簡單過濾方法來滅菌。雖铁裔 躍然適用於本發明之磷酸酯- 甘油基呈遞體之較佳實施例為呈有

/、有呈現在其外表面上之PG 之脂負體，但是應瞭解磷酸酯· |I呈遞體並不限於如 上文所述之脂質結構。 醫藥上可接受之體可懸浮於罄 樂上可接受之載劑（諸如 114914.doc -23- 200803919 :’、>u無菌水、無熱原質水、等張無菌鹽水及磷 ㈣緩衝無菌溶液(例如包括璘酸鹽緩衝液之無菌水溶液)) 以及其他適用於醫藥調配物 / 足非骨性相容性物質（諸如佐 劑、緩衝劑、防腐劑及其類 一 八頰似物）中。較佳地，醫藥上可 接受之體付以構成於諸如緩衝 十_ 衝無鹵鹽水之無菌生物相容性 之液體懸浮液中，且藉由任何將其暴露至免疫系統 ::或多個組份中之適當路線投予至患者，諸如經口、經 ττ經直腸、局部、動脈内、靜脐向+ 士 内投予。 靜脈内或皮下或最佳經肌肉 期望醫藥上可接受之體、^ 、、二令凍-乾紐或凍乾以便其可

Ik後再次懸浮用於投華。 ^ ^ #目此’本發明亦包含包括經康乾 或冷康-乾燥之磷酸酯-甘油 由基呈遞體及諸如生理無菌鹽 水、無鹵水、盔妖局暂士 ^ …… 等張鹽水及磷酸鹽緩衝液以及 八他適用於醫藥調配物主 ^ 之非母性相容性物質之醫藥上可接 文之載劑的部分之套組。該 . x奮、、且了視茜要提供用於將組合 物杈予至受檢者之注射方式或投予方式。 向患者投予醫藥上可接t ，一 安又之體之較佳方式為注射時程， 經一星期至數月或更長的 一 士 0時間母天、母星期數次、每星期 夂或母月一次向击泰机— 可 °投藥時程之頻率及持續時間 了此因患者不同而變化， 且根據待>口療之病狀之嚴重性及 /口燎疋否欲作為預P大、 為夂盘癒而變化。其設計及優化 马茶與醫師所熟知之枯 义^A 之技術。肌肉内注射為最佳的。一種當 刖較佳的給藥時程A夂工、 裡田 月-射歷時連續6天，接著藉由每 乃 夂激發〉主射。舍J：目、at上、 吊規測忒為將該等給藥方案外推至其他 114914.doc *24- 200803919 哺乳動物種類中。—錄 &、 射適举、、疋庄射時程為在第1天經臀肌注 射適之呈遞體，在第2天 攻 乃认主射，在第14天另一 / 、，且隨後（若適當）以每 _ ^ 母乃之時間間隔激發"注射。 二：時程為每6天注射一次且每2,固星期"激發"注 待投予之鱗酸1旨·甘油基呈遞體之量應視患者之一致 性及特徵而變化。重要的盔 要的為有效Ϊ之磷酸酯-甘油基呈遞 體對患者為非毒性的。 最有效Ϊ出乎意料地小。當使用動脈内、靜脈内、皮下 或肌肉㈣^磷㈣_甘油基呈遞體之液體懸浮液時，較 佳為對各劑量而言’投予約G1_5G ml之含有—定量之填酸 醋-甘油基呈遞體之液體，該量通常相當於通常發現於等 效體積之全血中之白血球的數的1〇%_1〇〇〇%或可自其產生 之細胞凋亡體之數的1〇%-1000%。通常，每次傳遞至人類 患者之經投予之磷酸酯-甘油基呈遞體數的範圍為約5⑼至 約3x10“個（在範圍之最高端點處，以重量計約3〇⑺幻，較 佳為約5,000個至約50〇,0〇〇,〇〇〇個，更佳為約1〇,〇〇〇個至約 10,000,000個且最佳為約2〇〇,〇〇〇個至約2,〇〇〇,〇00個。 脂質體重量與脂質體數之間的相互關係可自藉由熟習脂 質體調配物技術者所接受之知識導出，即直徑為！ 〇〇 nm2 雙層微脂粒之每個微脂粒具有約8 1，230個脂質分子，大致 50:50 分佈於該等層之間（見 Harrigan-1992 University of British Columbia PhD Thesis 丨’Transmembrane pH gradients in liposomes (microform) : drug-vesicle interactions and proton flux”，由 National Library of Canada出版，Ottawa， 114914.doc -25- 200803919

Canada (1993)，University Microfilms order第 UMI00406756 號；Canada 第 942042220 號，ISBN 03 15796936)。自此，熟 習此項技術者可進行計算，例如適用於下文之特定活體内 貝例之劑里級別的5 X 1 〇個微脂粒劑量相當於u 6 χ 1 〇 13個 脂質分子。使用對於1克分子（莫耳）中之脂質分子數之亞佛 加厥數（Avogadro’s number)，6.023xlO23，吾人確定此表示 6.74x10 11莫耳，在PG之分子量為747的條件下，對於該劑 ϊ 其為約 5.04χΐ(Γ8 gm 或 50.4 ng 之 PG。 根據本發明之一特徵，對各次投藥而言，咸信投予至注 射位點之該等體數為比每單位患者體重之磷酸酯_甘油基 呈遞體之數量或重量更有意義的定量。因此，期望對於小 動物用途而言有效量或有效數之磷酸酯-甘油基呈遞體不 可基於重量比直接轉換成用於較大哺乳動物之有效量。熟 白此項技術者可容易地自包含於本文中之資料及其他資訊 外推以得到用於其他哺乳動物之適當劑量。 本發明之一較佳實用性在於治療糖尿病性視網膜病變。 本务明之方法及組合物之臨床前工作中的實驗證據 曰丁在患有發炎細胞激素化“及IL_6及發炎向化性激動素 (已知為哺乳動物之糖尿病性視網膜病變發展及進程 /、的^w體）之糖尿病性視網膜病變之動物的視 網膜中之顯著降低。 術語糖尿病性視網膜病變包含所有與其相關聯或自其引 起之病a i主 包含但不限於糖尿病性黃斑水腫。認為糖尿病 火腫為糖尿病性視網膜病變之組份。糖尿病性視網 114914.doc •26- 200803919 膜病變之治錢是影響糖尿病性黃斑水腫且反之亦缺。 ☆本發^另-較佳實用性為治療人類患者之糖尿病性視 網膜病k之糖尿病性黃斑水腫組份的方法。 本發明之另-較佳實用性為在製備供治療人類患者之糖 尿病性視網膜病變之糖尿病性黃斑水腫組份用之藥劑中之 用途。 本發明之另-較佳實用性在於治療葡萄膜炎。 本發明之另-較佳實用性在於治療黃斑退化。本發明之 又一較佳實用性在於治療年齡相關之黃斑退化。 出於說明之目的，本發明及其實踐進一步描 定實例中。 卜符 【實施方式】 實例 在第1天，用szT(65 mg/kg)腹膜内注射15隻成年實驗室 大鼠（Sprague-Dawley)以給予其高血糖且誘發糖尿病。用 相似體積之鹽水處理另外5隻大鼠以產生非糖尿病對昭 群。在STZ注射前3小時及在其後每天歷時總共6天，8隻糖 尿病大鼠接受單層脂質體於鹽水中之懸浮液之肌肉内：射 於大腿肌肉中，該懸浮液包括75重量％卜軟月曰匕酸基_2_二、由 醯替甘油-3-構甘油（P0PG)A 25重量％ 1 _軟月旨醯基^•二油 醯-sn-甘油-3-磷膽鹼（P0PC)，其藉由已知擠壓方法製得’， ，各次注射由體積為0.1! ml之來自每如含有12χΐ〇7脂質體 之懸浮液組成。從第!天直到第6天’每天向患有糖尿病+ /〇療群之動物注射脂質體。根據相同給藥進产，* ’、 又 /又糖尿 114914.doc -27- 200803919 病動物接文相同體積鹽水之相似注射。非糖尿病對昭群之 動物不接受注射且保持正常血糖。 “、、 在第14天’犧牲三個組之所有動物且外科移除其眼睛且 自/、眼目肖刀離視網膜組織。為分離RNA處理來自各動物之 一隻眼睛之組織且藉由qRT-pCR分析細胞激素比_1、 6、™F-a(皆為發炎細胞激素）及MCP-1(發炎向化性激動 素）。經分離之RNA亦藉由qRT-PCR對於抗炎細胞激素 φ TGF42及IL-10來分析。 在重複實驗中，除了用〇·15 ml之每毫升含有l 2xl〇7個 脂質體之懸浮液來注射大鼠外，使用相同條件。 返附囷示之圖1圖解地展示1 p 量測之經各別群 斤有樣本平均化的結果。垂直標度為在組織中之細胞激 素mRNA中增加之相對倍數，來自未治療對照群之結果指 疋為1之值。應注意在來自糖尿病群之IL-Ιβ mRNA含量中 增加之倍數為非糖尿病對照動物之約18倍（p<〇〇i45)，而 參 來自糖尿病+治療群之動物之值與來自非糖尿病對照動物 之值相同且比來自糖尿病動物之值更小（ρ<0·0285)。在重 複貫驗中，在糖尿病+治療群中發現之mRNA含量顯著小 於（ρ=0·042)糖尿病群之mRNA含量。 " 隨附圖不之圖2類似地呈現發炎細胞激素IL-6之mRNA量 測的結果。在該狀況下，與非糖尿病對照群相比，在糖尿 病群中之該細胞激素之mRNA含量增加2_5倍（1><〇 〇1)，而 在糖尿病+治療群中發現之mRNA含量降低至非糖尿病對 照群之mRNA含量的約ι·2倍且顯著小於（p<〇〇17)糖尿病群 114914.doc -28- 200803919 之mRNA含量。在重複實驗中，雖然mRNA含量之降低未 達到統計顯著性，但是與糖尿病群之mRNA含量相比，在 糖尿病+治療群中發現之mRNA含量展示mRNA含量降低之 趨勢。 隨附圖示之圖3類似地呈現發炎細胞激素TNF-α之mRNA 量測的結果。在該狀況下，與非糖尿病對照群相比，在糖 尿病群中之該細胞激素之mRNA含量增加2.3倍（p<0.017)， 而在糖尿病+治療群中發現之mRNA含量降低至非糖尿病 對照群之mRNA含量的約1 ·7倍且存在朝向比糖尿病群之 mRNA含量更低（ρ = 0·063)之趨勢。在重複實·驗中，在糖尿 病+治療群中發現之mRNA含量展示朝向比糖尿病群之 mRNA含量更低（p = 0.054)之趨勢。 隨附圖示之圖4類似地呈現發炎向化性激動素MCP-1之 mRNA量測的結果。在該狀況下，與非糖尿病對照群相 比，在糖尿病群中之該向化性激動素之mRNA含量增加 2.2 5倍（ρ = 0·059)，而在糖尿病+治療群中發現之mRNA含量 降低至非糖尿病對照群之mRNA含量之約0.2倍且顯著地小 於（ρ<0·001)糖尿病群之mRNA含量。在重複實驗中，在糖 尿病+治療群中發現之mRNA含量顯著地小於（p=0.0445)糖 尿病群之mRNA含量。 隨附圖示之圖5類似地呈現抗炎細胞激素TGF-P2之 mRNA量測的結果。在該狀況下，與非糖尿病對照群相 比，糖尿病群展示在TGF-p2 mRNA含量中之顯著降低 (ρ<0·001)〇與非糖尿病對照群相比，在糖尿病+治療群中 114914.doc -29- 200803919 之Τ·β2抓财含量亦顯著降低（p<〇〇4i)，但當與糖尿 病群相比時’在糖尿病+治療群中之TGF_p2爪舰含量顯 著增加（P’U)。在重複實驗中，與糖尿病群之含 量相比’在糖尿病+治療群中發現之抓财含量展示朝向 • mRNA含量增加之趨勢’但增加未達到統計顯著性。 . 胃隨附圖示之圖6類似地呈現抗炎細胞激素几^之^皿 量測之結果。在該狀況下，與非糖尿病對照群相比，在糖 • 尿病群中之1L_1〇 mRNA含量大約顯著地降低（P<〇.0215)。 然而，與糖尿病群相比，在糖尿病+治療群中之几_1〇 mRNA含量顯著增加（ρ<〇·〇195)，而在非糖尿病對照群與 糖尿病+治療群之間的几_1〇之相對表現無顯著不同。在重 複實驗中，與糖尿病群之瓜尺^^八含量相比，在糖尿病+治 療群中發現之mRNA含量顯著地增加（ρ=〇 〇3 ! 5)。 展不於該等在糖尿病性視網膜病變之標準所接受之模型 上進灯之貫驗中的結果，明顯地指示在糖尿病哺乳動物之 _ 視網膜組織中之有害發炎細胞激素及向化性激動素的 mRNA之表現的降低調整，以及抗炎細胞激素imRNA2 表現的增加，指示根據本發明在治療人類患者之眼睛之糖 尿病性視網膜病變 '葡萄膜炎、黃斑退化及其他發炎及/ 或血管病症中之實用性。 【圖式簡單說明】 圖1為來自動物之視網膜之細胞激素比-i的信息 RNA( mRNA")含量之量測的圖解，其中如在下文之特定 貫例中所描述來治療及量測該等動物； I14914.doc -30 - 200803919 圖2為來自相同實驗之細胞激素IL-6之mRNA含量之量測 的相似圖解； 圖3為來自相同實驗之細胞激素TNF-α之mRNA含量之量 測的相似圖解；且 圖4為來自自相同實驗之細胞激素MCP-1之mRNA含量之 量測的相似圖解。 圖5為來自相同實驗之細胞激素TGF-p2之mRNA含量之

量測的相似圖解。 圖6為來自自相同實驗之細胞激素IL-10之mRNA含量之 量測的相似圖解。

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Claims (1)

1. 200803919 十、申請專利範圍： 1 · 一種延遲哺乳動物患者之眼睛發炎及/或血管病症的發展 及/或進私之方法，其包括投予該患者有效量之醫藥上可 接受之磷酸酯-甘油基呈遞體，其具有與〉周亡細胞或細胞 祠亡體類似的尺寸。 2·如請求項1之方法，其中該等呈遞體為脂質體。 3·如=求項2之方法，其中該等脂質體包括60重量％至100

   重里％之磷脂酿甘油〇 4·如請求項1至3中任一 2〇 ^ 、方法，其中該等呈遞體具有約 nm至約5 00 μιη之直徑。 ’其中該等呈遞體係以約 劑量投予。 ’其中該等醫藥上可接受 5·如請求項1至4中任一項之方法 5〇〇至約3χ10ΐ4個呈遞體之單位 6·如請求項】至6中任一項之方法 之呈遞體係經全身性投予。 如請求項1至6中任一項之 之呈遞體係經肌肉投予。’’其中該等醫藥上可接受 8. 如請求項1至6中任—項之 之呈遞體係經局部投予。…其中該等醫藥上可接受 9. 如前述請求項中任—項之方法， 視網膜病變。 /、T该病症為糖尿病性 10. 如請求項1至8中任一 炎。 項之方法 11. 如請求項1至8中 化0 任 項之方法 其中該病症為葡萄膜 其中該病症為黃斑退 114914.doc 200803919 12.如凊求項丨】之方法，其中該黃斑退化為年齡相關之黃斑 退化。 13·種百藥上可接受構酸酯-甘油基呈遞體之用途，其係用 於製備或製造治療或預防哺乳動物患者之眼睛發炎及/或 血管病症用之藥劑，其中該等呈遞體具有與凋亡細胞或 細胞凋亡體類似的尺寸。 14·如請求項13之用途，其中該等呈遞體為脂質體。 15·如請求項14之用途，其中該等脂質體包括6〇重量％至^⑽ 重量％之磷脂醯甘油。 16.如請求項13至15中任一項之用途，其中該等呈遞體具有 約20 nm至約5〇〇 μιη之直徑。 17·如請求項13至16中任一項之用途，其中該等呈遞體為約 500至約3xl〇14個呈遞體之單位劑量。 18·如请求項13至17中任一項之用途，其中該等醫藥上可接 受之呈遞體係經全身性投予。 19·如请求項13至1 7中任一項之用途，其中該等醫藥上可接 受之呈遞體係經肌肉投予。 20. 如請求項13至17中任一項之用途，其中該等醫藥上可接 受之呈遞體係經局部投予。 21. 如請求項13至20中任一項之用途，其中該病症為糖尿病 性視網膜病變。 22. 如請求項14至21中任一項之用途，其中該病症為葡萄膜 炎。 23. 如請求項14至21中任一項之用途，其中該病症為黃斑退 114914.doc Ί 200803919 化。 24·如請求項25之用途 退化。 其中該黃斑退化為年齡相關之黃斑 種治療人類患者之糖尿病性視網膜病變之糖尿病性黃 斑水腫部分的方法，該方法包括❹）具有糖尿病性黃： 水腫作為糖尿病性視網膜病變之—部分的人類患者，、且 投予該患者有效量之醫藥上可接受之磷酸醋-甘油基呈遞 Φ '、中〆等呈遞體具有與调亡細胞或細胞〉周亡體類似 的尺寸。 26·如叫求項25之方法，其中該等呈遞體為脂質體。 27·如請求項26之方法，其中該等脂質體包括⑽重量％至1〇〇 重量％之磷脂醯甘油。 28·如請求項25至27中任一項之方法，其中該等呈遞體具有 約20 nm至約5 00 μπι之直徑。 29.如請求項25至28中任一項之方法，其中該等呈遞體為約 500至約3xl014個呈遞體之單位劑量。 3 0·如請求項25至29中任一項之方法，其中該等醫藥上可接 受之呈遞體係經全身性投予。 31·如請求項25至29中任一項之方法，其中該等醫藥上可接 受之呈遞體係經肌肉投予。 32·如請求項25至29中任一項之方法，其中該等醫藥上可接 受之呈遞體係經局部投予。 114914.doc