TW200800284A - Make-up for beautification and whitening - Google Patents

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200800284 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於美白用化妝料。又，本發明之化粧料，亦包 含於日本被分類爲相當於醫藥部外用品之製品。 【先前技術】 於皮膚之老人斑·雀斑或日曬後之色素沈澱係因皮膚內存 在的色素細胞（黑色素細胞）之活性化而黑色素生成爲顯著 亢進的狀態。作爲防止或改善此等皮膚色素問題之目的之皮 膚外用劑已知有配合抗壞血酸類、過氧化氫、膠體硫黄、麩 胱甘肽（glutathione)、氫醌（hydroquinone)、或兒茶酌 (catechol)等之皮膚外用劑（特別是美白劑）（例如參照非 專利文獻1 )。然而’已知此等美白劑任一者雖大多有效作 用，但亦有無作用的場合，其詳細原因並未了解。 又，前述美白劑亦有安定性或安全性等方面的問題。即， 關於色素沈澱症之預防或改善，抗壞血酸，於含水化粧料類 之含許多水分的系統中容易被氧化而不安定，可能爲皮膚外 用劑（美白劑）變色的原因。又，過氧化氫水有保存上之安 定性及安全性上的問題。麩胱甘肽或膠體硫黄因爲會發出顯 著異臭而作爲美白劑之成分的使用上受限制。再者，氫醌、 兒茶酚等有皮膚刺激性、過敏性等之安全性問題。如此技術 背景中，冀望有效作用且滿足安定性、安全性之新美白材料 之開發。 另一方面，後述一般式（I )所示噻吩衍生物已知具有抗 氧化作用、前列腺素之抑制機序的抗炎症作用、抗過敏作用 200800284 或抗類風濕作用（例如，參照專利文獻1、專利文獻2、專利 文獻3、專利文獻4、非專利文獻2、非專利文獻3 )。 然而，如此的化合物並未知悉具有皮膚黑色素生成抑制作 用，再者，含有此等作爲有效成分之美白用化妝料亦完全未 被知悉。 專利文獻1 :特開昭5 3 - 1 4 1 265號公報 專利文獻2 :特開昭63 -0083 80號公報 專利文獻3 :特開昭63 -5 0228 1號公報 專利文獻4 :特表平〇 6 - 5 0 1 9 1 9號公報 非專利文獻1:武田克之等監修，「化粧品之有用性評價技 術與將來展望」，藥事日報社刊（200 1年） 非專利文獻 2 : Agents and Action，Vol. 12，No. 5， p 6 7 4·6 8 3， ( 1 9 8 2 ) 非專利文獻 3 : Bioorganic & Medicinal Chemistry, Vol. 11， p4207-4216， ( 2003) 【發明內容】 本發明之課題係鑒於上述狀況，提供對於老人斑·雀斑等 皮膚色素沈澱症之預防·改善上發揮優異效果之化粧料等。 本發明者們爲解決上述課題而不斷專心硏究的結果，發現 特定噻吩衍生物（具體而言，爲一般式（I )所示化合物及 /或其鹽）對於色素細胞之黑色素生成具有強力的抑制效 果。又，發現上述噻吩衍生物配合化粧料等基材時，對於皮 膚會表現優異的色素沈澱症之預防及改善效果，因而完成本 發明。 200800284 即，本發明如下所示。 (1 )——種美白用化妝料，其含有下列一般式（I )所示 化合物或其鹽， 〔化1〕 〇

R1 OH 一般式（I ) (―般式（I )中，R1及R2各自獨立爲碳數3〜7之第2級 或第3級烷基，R3爲氫原子、碳數1〜4之烷基或碳數1〜4之 烷氧基）。 (2 )如（1 )記載之美白用化妝料，其中前述一般式（I ) 所示化合物爲下列一般式（II )所示化合物。 〔化2〕

(一般式（II )中，R1及R2各自獨立爲碳數3〜7之第2級或 第3級烷基）。 (3 )如（2 )記載之美白用化粧料，其中前述一般式（II ) 所示化合物爲2,6-二-第三丁基- 4·( 2，-噻吩甲醯基）苯酚（化 合物（1 ))。 200800284 〔化3〕

(4 )如（1 )〜（3 )中任一項記載之美白用化妝料，其 用於色素沈澱症之預防及改善。 (5 )如（1 )〜（4 )中任一項記載之美白用化妝料，其 中前述一般式（I )所示化合物之含有率爲0.0001〜3質量 (6 )如（1 )〜（5 )中任一項記載之美白用化妝料，其 進一步含有至少一種選自1，3-丁二醇、二丙二醇、異戊二醇、 1，2-戊二醇、2,4-己二醇、1,2-己二醇、1,2-辛二醇之一種多 價醇。 又’本發明爲一種方法，係爲製造美白用化妝料用之前述 一般式（I )所示化合物及/或其鹽之用途，其特徵爲將前 述一般式（I )所示化合物及/或其鹽，塗布於皮膚使其美 白。 本發明之上述用途及方法中一般式（I)所示化合物之較 佳態樣、較佳用途、更佳之配合成分與前述（2 )〜（6 )相 同。 【實施方式】 (1 )爲本發明化粧料必須構成成分之一般式（I )所示 200800284 化合物 本發明化粧料必須構成成分的化合物以一般式（I )表 示。一般式（I )中，R1及R2各自獨立爲碳數3〜7之第2級 或第3級烷基，即表示佔空間的取代基。具體而言，Ri及R2 各自獨立可舉例爲異丙基、異丁基、第二-丁基、第三-丁基、 異戊基、第二-戊基、第三v戊基等。此等中，以第三-丁基爲 較佳，R1、R2同時爲第三-丁基之二·第三丁基體爲更佳。 一般式（I )中，R3爲氫原子，亦可爲選自碳數1〜4之烷 基或碳數1〜4之烷氧基之任意取代基。R3爲取代基時，其取 代位置爲任意，但較佳爲碳數1〜4之烷基、或碳數1〜4之烷 氧基。其中，特別以R3爲氫原子爲較佳。即，本發明中，一 般式（I )所示化合物以一般式（11 )所示化合物爲較佳。 本發明化粧料必須構成成分之化合物，更較佳爲2,6-二-第三丁基-4- ( 2’-噻吩甲醯基）苯酚，即化合物（1)所示化 合物。 I 一般式（I)所示化合物爲自由體者可使用於本發明之化 粧料中，使用驗等之鹽，亦可能使用。例如可列舉鈉鹽、紳 鹽等之鹼金屬鹽，鈣鹽、鎂鹽等之鹼土金屬鹽，銨鹽、三乙 醇胺鹽、三乙基胺鹽等之有機胺鹽，離胺酸鹽、精胺酸鹽等 之鹼基性胺基酸鹽等爲較佳。 < 又，此等化合物可以任何方法製造，例如，可以下述槪略 圖解1或2的方法製造，但未限於此等方法。又應理解此項技 藝之業者可適宜變更以下方法製造目的化合物。 〔化4〕 -10- 200800284 ο

圖解i 簡單説明圖解1的反應。 使用氯化亞硫醯依常法處理3，5 ·二-院基· 4 ·經基安息香 酸，得到3,5-二-烷基-4-羥基安息香酸之醯基氯體（Α)。將 此醯基氯體（A )於二硫化碳等適當溶劑中，以氯化銨、四 氯化鈦等路易士酸處理。接著，添加噻吩（B )，使其進行弗 里德爾-克拉夫滋反應（Friedel-Crafts reaction)可得到一般 式（I )化合物。

3，5-二-烷基-4-羥基安息香酸，例如，可使用Sigma-Aldrich 公司販售之3,5-二-第三丁基-4-羥基安息香酸。作爲化合物 (B)者可使用R3爲氫原子之無取代體，或甲基噻吩、甲氧 基噻吩等取代體。其中，使用之化合物（B )爲噻吩時，得 到一般式（Π )所示化合物’再者’使用之化合物（A )爲 3,5·二-第三丁基-4-羥基安息香酸之醯基氯體的場合，可得 到2,6-二-第三丁基-4-( 2’-噻吩甲醯基）苯酚（化合物（1 ))。 〔化5〕 〇

-11 200800284 圖解2 簡單説明圖解2之反應。 經由將噻吩羧酸使用氯化亞硫醯依常法處理，得到噻吩羧 酸之醯基氯體（C)。此醯基氯體（C)於二硫化碳等之適當 溶劑中，以氯化銨、四氯化鈦等路易士酸處理，其次，添加 2，6-二烷基苯酚（D)，進行弗里德爾-克拉夫滋反應可得到一 般式（I )化合物。 爲了得到化合物（C )，可使用Sigma-Aldrich公司販售之 R3爲氫原子的2-噻吩羧酸或3-甲基-2-噻吩羧酸、5-甲基-2-噻吩羧酸等。其中，化合物（C)爲使用2-噻吩羧酸之醯基 氯的場合，可得到一般式（II)所示化合物。作爲2，6-二烷 基苯酚（D)，可使用Sigma-Aldrich公司販售之2,6·二-第三 丁基•苯酚、2,6-二·異丙基苯酚等◊使用作爲化合物（C)之 2-噻吩羧酸之醯基氯、作爲化合物（D)之2,6-二第三-丁基-苯酚的場合中，可得到2,6-二-第三丁基-4- ( 2’·噻吩甲醯基） 苯酚（化合物（1 ))。 一般式（I )所示化合物對黑色素生成抑制作用爲優異。 通常，具有黑色素生成抑制作用的化合物，以酪胺酸酶之直 接抑制作用或酪胺酸酶之分解機序爲多。然而，一般式（I ) 所示化合物，被認爲是由不同於酪胺酸酶之分解作用或酪胺 酸酶之直接抑制作用的機序而抑制黑色素生成。 (2 )本發明之化粧料 本發明之化粧料含有上述一般式（I )所示化合物及/或 其鹽爲必須成分。本發明化粧料中，可僅含一般式（I )所 -12- 200800284 示化合物或其鹽之一種，亦可含有複數種之組合。 本發明化粧料之一般式（I )所示化合物中較佳含有率依 化粧料之使用目的、皮膚狀態、劑形、塗布部位而異，爲 0.0001質量％以上，較佳爲〇·〇〇〗質量％以上，更佳爲001質 量％以上。另一方面’上限爲3質量％以下，較佳爲1質量％ 以下’再更佳爲0.8質量％以下。 本發明之一般式（I )所示化合物，因其具有強力的黑色 素生成抑制作用，可於日本之醫藥部外用品或其他國類似商 品中使用。 本發明之化粧料，特佳使用於未產生炎症的肌膚狀態部 位。即，本發明之化粧料較佳爲非以抗炎症爲目的者。本發 明之化粧料，例如，適用於爲了預防一般性黑色素生成亢 進，但未產生炎症反應等之皮膚上老人斑或雀斑等色素沈澱 症，可適用於具有色素沈澱症部分者。 因本發明化粧料具有黑色素生成抑制作用，而具有老人 斑·雀斑等色素沈澱症之預防·改善作用，於各國法令範圍 內，作爲「抑制黑色素生成、預防老人斑·雀斑」等作用· 效果之表示，消費者已知此效果使用之形態者，爲本發明之 較佳形態。 本發明之化粧料，含有一般式（I )所示化合物外另含有 選自1，3-丁二醇、二丙二醇、異戊二醇、1，2-戊二醇、2,4-己二醇、1,2-己二醇、1，2·辛二醇至少一種之多價醇者爲較 佳。此等多價醇具有增進本發明化粧料之美白效果的作用。 此等多價醇之含有率並未特別限制，較佳爲〇·1〜30質量 -13· 200800284 %，更佳爲1〜20質量％，再更佳爲5〜10質量％。又，相對 於一般式（I )所示化合物，其較佳爲5〜5 0質量倍，再更 佳爲5〜2 0質量倍之含有量爲宜。 又，本發明之化粧料中，除一般式（I )所示化合物外另 使用界面活性劑爲較佳。 作爲界面活性劑，可列舉出脂肪酸石鹼（月桂酸鈉、棕櫚 酸鈉等）、月桂基硫酸鉀、烷基硫酸三乙醇胺醚等之陰離子 界面活性劑類；氯化硬脂醯三甲基銨、氯化苄烷銨、月桂基 胺氧化物等陽離子界面活性劑類；咪唑啉系兩性界面活性劑 (2·椰油醯基-2-咪唑鑰氫氧化物-1-羧基乙氧基2鈉鹽等）、 甜菜鹼系界面活性劑（烷基甜菜鹼、醯胺基甜菜鹼、磺基甜 菜鹼等）、醯基甲基牛磺酸等兩性界面活性劑類、山梨糖醇 酐脂肪酸酯類（山梨糖醇酐單硬脂酸酯、倍半油酸山梨糖醇 酐等）、甘油脂肪酸類（甘油基單硬脂酸酯等）、丙二醇脂肪 酸酯類（單硬脂酸丙二醇等）、硬化篦麻油衍生物、甘油烷 基醚、POE山梨糖醇酐脂肪酸酯類（POE山梨糖醇酐單月桂 酸酯、POE山梨糖醇酐單油酸酯、單硬脂酸聚氧乙烯山梨糖 醇酐等）、POE山梨糖醇脂肪酸酯類（POE—山梨糖醇單月桂 酸酯等）、POE甘油脂肪酸酯類（POE-甘油單異硬脂酸酯 等）、POE脂肪酸酯類（POE單月桂酸酯、POE單油酸酯、POE 二硬脂酸酯等）、POE烷基醚類（POE十六烷基醚、POE2 -辛基十二烷基醚等）、POE烷基苯基醚類（POE壬基苯基醚 等）、PLURONIC (登錄商標）類、POE · POP烷基醚類（POE • POP2—癸基十四烷基醚等）、TETR0NIC (登錄商標）類、 -14- 200800284 POE篦麻油·硬化篦麻油衍生物（POE篦麻油、POE硬化篦 麻油等）、蔗糖脂肪酸酯、烷基葡糖苷等非離子界面活性劑 類。 本發明化粧料以含有非離子性界面活性劑者爲較佳。其爲 經由共同使用一般式（I )所示化合物與非離子性界面活性 劑可更提升化粧料之美白效果。 此等界面活性劑之含有量並未特別限制，但較佳爲0.1〜 1〇質量％，更佳爲0.2〜5質量％。又，相對於一般式（！） ^ 所示化合物，較佳爲〇·1〜20質量倍，更佳可爲0·2〜20質量 倍之含有量。 又，本發明化粧料亦可含有抗紫外線劑。本案發明化粧料 或醫藥部外用品中所含抗紫外線劑，可非常大地減少老人斑 等惡化因子之紫外線對皮膚之暴露。如此，作爲抗紫外線 劑，可使用具有紫外線散亂效果之各種粉體類、具有紫外線 吸收效果的化合物。 如此的粉體類，亦可表面經處理，可列舉爲雲母、滑石、 I 高嶺土、合成雲母、碳酸鈣、碳酸鎂、無水矽酸（矽石）、 氧化鋁、硫酸鋇等，有機粉體類者可列舉爲聚乙烯粉末、聚 甲基丙嫌酸甲酯、尼龍粉末、有機聚ϊ夕氧垸彈性體等爲較佳。 具有如此紫外線吸收效果的化合物，一般以具芳香環之化 合物爲足夠。例如，可列舉維生素Β】、維生素Β2、維生素β3、 維生素Βό、維生素B1S等維生素Β群類、維生素Ε類、泛醌 (u b i q u i n ο n e )類、葉酸類等芳香環·雜環系維生素類等。 再者，使用之紫外線吸收劑爲對胺基安息香酸系紫外線吸收 -15- 200800284 劑、氨茴酸（anthranilic acid)系紫外線吸收劑、水楊酸系 紫外線吸收劑、桂皮酸系紫外線吸收劑、二苯甲酮系紫外線 吸收劑、糖系紫外線吸收劑、2· ( 2，-羥基-5, _t-辛基苯基） 苯并三唑、4-甲氧基-4,-t-丁基二苯甲醯基甲烷等。 本發明化粧料除前述成分以外，含有醫藥品、化粧品等一 般上使用的各種成分，即，油脂、鱲類、烴類、脂肪酸、高 級醇、酯類、油劑、水性成分、粉末成分、保濕劑、增黏劑、 色劑、香料、抗氧化劑、pH調整劑、螯合劑、防腐劑、抗紫 外線劑、維生素類、其他美白劑、抗炎症劑等^ 作爲油脂或蠟類，具體而言，例如，可列舉夏威夷核油、 鱷梨油、玉米油、橄欖油、菜仔油、胡麻油、篦麻油、紅花 油、綿實油、荷荷芭油、椰子油、棕櫚油、液狀羊毛脂、硬 化椰子油、硬化油、木蠟、硬化篦麻油、蜜蠟、小燭樹蠟、 巴西棕櫚蠟、蟲蠟、羊毛脂、還原羊毛脂、硬質羊毛脂、荷 何巴鱲等油、蠟類、流動石鱲、三十碳院、十八碳院、地鱲、 石蠟、精製地蠟、凡士林、微結晶鱲等烴類，作爲脂肪酸， 可列舉油酸、異硬脂酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂 酸、山茶酸 '十一碳烯酸等高級脂肪酸額；作爲高級醇，可 列舉十六烷基醇、硬脂醇、異硬脂醇、山嵛醇、辛基十二烷 醇、肉豆蔻醇、十六基硬脂醯醇等；作爲酯類。可列舉異辛 酸十六烷基酯、肉豆蔻酸異丙基酯、異硬脂酸十六基酯、己 二酸二異丙基酯、癸二酸二-2-乙基己基、乳酸十六烷基酯、 矽酸二異硬脂酸酯、二-2-乙基己酸乙二醇、二癸酸新戊二 醇、二-2·庚基十一酸甘油、三-2-乙基己酸甘油、三-2-乙基 -16- 200800284 己酸二羥甲基丙烷、三異硬脂酸三羥甲基丙烷、四乙基 己酸戊烷赤蘚醇、二聚物亞油酸二聚物二亞油基、二聚物二 亞油酸（植物醇/異硬脂醯基/十六烷基/硬脂醯基/山药 基）、N-月桂基麩胺酸（植物醇/ 2_辛基十二烷基）等合成 酯油類；作爲油劑，可列舉二甲基聚矽氧烷、甲基苯基聚矽 氧烷、二苯基聚矽氧烷等鏈狀聚矽氧烷、八甲基環四矽氧 院、十甲基環五矽氧烷、十二甲基環六矽氧烷等環狀聚矽氧 垸、胺基變性聚较氧院、聚醚變性聚政氧院、烷基變性聚矽 氧烷、氟變性聚矽氧烷等變性聚矽氧烷等矽酮油等。 作爲保濕劑，可列舉聚乙二醇、甘油、二甘油、赤蘚醇、 山梨糖醇、木糖醇、麥芽糖醇、丙二醇等多價醇類、吡咯啶 酮羧酸鈉、乳酸、乳酸鈉等；作爲增黏劑可列舉瓜耳豆膠 (guar gum)、溫梓種子（quince seed)、角叉菜膠、半乳聚 糖、阿拉伯膠、果膠、甘露聚糖、澱粉、黃原膠、可德蘭多 醣（curdlan )、甲基纖維素、經基乙基纖維素、殘基甲基纖 維素、甲基經基丙基纖維素、‘軟骨素硫酸、硫酸皮膚素 (dermatan sulfate )、肝醣、硫酸乙醯肝素（heparan sulfate)、透明質酸、透明質酸鈉、西黃耆膠、硫酸角質素 (keratan sulfate )、軟骨素、黏液素硫酸、羥基乙基瓜耳豆 膠、羧基甲基瓜耳豆膠、葡聚糖、角質硫酸、長角豆膠、琥 珀酸多醣體、卡洛寧酸（ch ar o n in ) '角殼素、殼聚糖、羧基 甲基角殼素 '洋菜、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯啶酮、羧基乙烯 聚合物、聚丙烯酸鈉、聚乙二醇、澎潤土等。 作爲無機顔料，爲表面可經處理者，可列舉紅氧化鐵、黄 -17- 200800284 氧化鉄、黑氧化鉄、氧化鈷、群青（ultramarine )、紺青、 氧化鈦、氧化鋅等；作爲珠光劑類，爲表面可經處理者，可 列舉雲母鈦、魚燐箔、氯氧化鉍等；作爲有機色素類，可爲 經色澱化之紅色2 0 2號、紅色2 2 8號、紅色2 2 6號、黃色4號、 藍色404號、黃色5號、紅色505號、紅色23 0號、紅色22 3號、 橙色201號、紅色21 3號、黃色204號、黃色203號、藍色1號、 綠色201號、紫色201號、紅色204號等。 一般式（I )所示化合物以外之美白成分或美白劑，例如， 可列舉泛醯硫氫乙胺（pantetheine ) -S-磺酸、異阿魏酸 (isoferulic acid)、抗壞血酸-葡糖苷、抗壞血酸磷酸酯鹽、 4-n-丁基間苯二酚等之4 -(碳數4〜10 )烷基間苯二酚類、熊 果苷、麴酸、亞油酸、亞油酸甲基、傳明酸（tranexamic acid)、 傳明酸甲基醯胺等。 又，本發明之化粧料，除低級醇類（乙醇、異丙醇等）、 或前記維生素類以外，亦含有維生素A或其衍生物、維生素 D類、泛酸、酸泛酿硫乙胺（pantethine )、輔酶Q10等。 本發明化粧料之劑型爲任意，通常此種化粧料或醫藥部外 用品所使用之劑型可未限制使用，但本發明案之美白用化妝 料或美白用醫藥部外用品中，一般式（I )所示化合物，由 於浸透於皮膚內，顯示美白作用、黑色素生成抑制作用，故 適合於皮膚中長時間滞留的形態，例如，化粧水、乳液、軟 膏、霜劑、洗劑爲所冀望者。又，塗敷劑（pack)亦因閉塞的 效果爲被期待之較佳形態。 本發明之化粧料除含一般式（I )所示化合物以外，可以 -18- 200800284 通常化粧料之同樣方式製造。 以下參照實施例及試驗例，進一步更詳細說明本發明，但 無庸多言本發明並未受此等實施例及試驗例的限定。 實施例 <製造例> 2，6-二-第三丁基-4-(2噻吩甲醯基）苯酚（化合物（1)) 之合成 於23,2 g之3，5 -二-第三丁基-4-羥基安息香酸中加入60g氯 & ®硫醯，室溫下攪拌1小時後，於減售下餾除過剩氯化亞 硫醯。將二硫化碳3 00ml加入其中溶解，進一步添加氯化鋁 13*5g。於40°C下，攪拌30分鐘後，添加88.2g噻吩。其次， 將反應液注入1 0 %鹽酸中，以二氯甲烷抽出，以無水硫酸鈉 乾燥後，濃縮，於矽膠管柱中分劃純化得到化合物（1 )。 <實施例1 > 依下列所示處方製作水中油霜劑。即，混合（A )之各成 φ 分’於8 0 °C中加熱。一方面，混合（B )之各成分於8 0 °C中 加熟’（A)混合物中加入（B )混合物攪拌使其乳化，之後 冷卻至3 5 °C，得到霜劑1。 -19- 200800284 (A) POE ( 30)十六烷基醚 2.0質量％

甘油單硬脂酸酯 流動石蠟 凡士林 十六烷醇 γ-生育酚 二丁基羥基甲苯 對羥基苯甲酸丁 化合物（1 ) Β) 1，3-丁二醇 精製水 1 〇 . 0質量％ 10.0質量％ 4.0質量％ 5.0質量％ 0.05質量％ (ΒΗΤ) 〇.〇1質量 ％ i旨 〇.1質量％ 〇 . 7質量％ 10.0質量％ 58.14質量％ <實施例2 >

依下列所示處方製作水中油霜劑。即，混合（A )之各成 分，於8 0 °C中加熱。一方面，混合（B )之各成分於8 0 °C中 加熱，（A)混合物中加入（B )混合物攪拌使其乳化，之後 冷卻至3 5 t：，得到霜劑2。 -20- 200800284 2.0質量％ 1〇.〇質量％ 10.0質量％ 4.0質量％ 5.0質量％ 〇.〇5質量％ 0.01質量％ 0.1質量％ 0.05質量％ 10.0質量％ 5 8.79質量％ (A) POE (30)十六烷基醚 甘油單硬脂酸酯 流動石蠟 凡士林 十六烷醇 γ-生育酚 ΒΗΤ 對羥基苯甲酸丁酯 化合物（1 ) Β) 1，3-丁二醇 精製水 <實施例3 > 依下列所示處方製作乳液。即，混合（A )之各成分，於 70°C中加熱。一方面，混合（B)之各成分於70°C中加熱，（B) 混合物中加入（A )混合物進行預備乳化，進一步於均質器 中均一乳化，乳化後一邊混合一邊冷卻至3 0 °C，得到乳液。 -21- 200800284

(A )合成鯨蠟 2.5質量％ 十六烷醇 1.0質量％ 三十碳烷 4.0質量％ 硬脂酸 1.0質量％ POE ( 25)單硬脂酸酯 2.2質量％ 甘油單硬脂酸酯 0.5質量％ γ -生育酚 〇. 〇 5質量％ ΒΗΤ 〇.〇1質量％ 對羥基苯甲酸丁酯 0.1質量％ 化合物（1 ) 1 .〇質量％ (Β ) 1，3-丁二醇 3.0質量％ 丙二醇 7.0質量％ 黃原膠 0.1質量％ 羧基乙烯基聚合物 〇 . 2質量％ 氫氧化鉀 0.2質量％ 精製水 77.14質量％ <實施例4 > 依下列所示處方製作化粧水。即，混合（A)之各成分， 於室溫下溶解，一方面，於室溫下混合（B )之各成分使其 溶解，（B)混合物中加入（A )混合物使可溶化而得到化妝 水0 -22· 200800284 (A) POE ( 20)山梨糖醇酐單月桂酸酯 1.5質量％ 〇 . 5質量％ 10.0質量％ 0.02質量％ 〇 . 〇 1質量％ 5.0質量％ 4.0質量％ 0.0 5質量％ 〇. 1 5質量％ 〇 . 1質量％ 78.67質量％ POE ( 20 )單月桂酸酯 乙醇 γ-生育酚 化合物（1 ) (Β )甘油

丙二醇 異阿魏酸鈉 檸檬酸 檸檬酸鈉 精製水 <實施例5 > 依下列所示處方製作塗敷劑（pack)。將（A )各成分於室 溫中分散溶解，於此中加入（B )混合物使其均一地溶解， 得到塗敷劑。 15.0質量％ 40.0質量％ 0.5質量％ 〇 . 0 2質量％ 4.0質量％ 2.0質量％ 3.0質量％ 3 5.4 8質量％ (A )聚乙烯醇 精製水 (B )甜沒藥萜醇（bisabolol ) γ-生育酚 乙醇 化合物（1 ) Ρ0Ε ( 8 ) · POP ( 55)共重合物 精製水 <試驗例1 >化合物1之黑色素生成抑制試驗 -23- 200800284 黑色素合成過程中使用特異性細胞中放入的硫尿嘧啶（試 驗中使用14C標籤的硫尿嘧啶），評價化合物（1 )之黑色素 生成抑制作用。使用24孔盤，其中之15孔每次放入2ml黑色 素細胞培養用完全培養基（倉敷紡績株式會社製），各孔中 各自接種1.5 XI 04個/ cm2濃度的人類正常黑色素細胞（倉敷 紡績株式會社製）。於5 %二氧化碳氛圍3 7 °C下進行24小時培 養。之後，全部孔中，以下列條件替換培養基。即，3孔以 新的黑色素細胞培養用完全培養基（對照組），每次3孔合計 9孔中含有 l.〇xl(T3mM、2.〇xl(T3mM、4·〇χ10·3πιΜ濃度的化 合物（1 )之黑色素細胞培養用完全培養基，另外3孔含有作 爲酪胺酸酶抑制劑之已知苯基硫脲0.1 mM濃度之黑色素細 胞培養用完全培養基。又，此等15孔中添加0.25 xl (T6Ci (居 禮（curie))之14C-硫尿嘧啶（14C標籤的硫尿嘧啶）。之後更 以與上述培養條件相同之條件培養3日。培養終了後，除去 各孔之培養液，以PB S (磷酸緩衝生理食鹽水）洗淨後，使 | 用含有胰蛋白及EDTA的培養基，由孔底面剝離細胞，成爲 細胞懸浮液，經遠心分離回收細胞。使用血球計算板計算細 胞數。之後，由各孔回收的細胞中14C-硫尿嘧啶量以液體閃 爍計數器測定。相對於對照組孔回收的細胞之放射線量，各 自算出含被檢測物質之培養基中培養的細胞放射線量百分 率，得到黑色素量（％ )。即，各細胞內收入的放射線量性 爲小的程度，則黑色素量小，黑色素抑制力價可爲高値。結 果示於表1。 -24- 200800284 〔表1〕 培養基添加成分 添加量（mM ) 黑色素量（％ ) -(對照組） 一 100土0.6 化合物（1 ) 1 · 0 X 1 〇 ·3 48.5土2.3 2.Οχ 1〇*3 27.9土0.8 4.0 X 1 〇 -3 1 7.0土 0.8 苯基硫服 0.1 20.3土3.8 由表1之結果，本發明化粧料中含有的化合物（1 )顯示出 濃度依存性黑色素生成抑制作用。又，苯基硫脲〇. 1 mM與化 合物（1) 4.〇xl03mM’顯不相同黑色素生成抑制力價。據 此，得知化合物（1 )與陽性對照組之苯基硫脲相比，具有 20倍以上強的黑色素生成抑制力價。又，苯基硫脲因毒性面 上而未趨向實用性，較現在實際上使用的黑色素生成抑制劑 爲黑色素生成抑制作用更非常強的物質，於通常方式的實驗 中，作爲陽性對照組使用。其中，組成物中化合物（1 )之 濃度4xl(T3mM相當於約0.000 1質量％。 <試驗例2 >本發明化粧料之使用試驗1 其次，根據上述結果，調查本發明化粧料對皮膚色素沈澱 症之預防•改善效果。於實施例1及實施例2製造的霜劑1及2 進行使用試驗，調查對紫外線照射之黑色素生成抑制作用。 又，作爲比較例，使用將實施例1中化合物（1)以精製水置 換而調整的霜劑（對照品）。 1 〇名被驗者之前腕內側部上設定3個1 .5cm Xl .5cm的部 位，3個部位內之1部位上，於1週間、1日3回塗布實施例1製 -25- 200800284 造的霜劑1 (含有〇 · 7 %化合物（1 ))，於1部位上塗布實施例 2製造的霜劑2 (含有〇 · 〇 5 %化合物（1 ))，於剩餘1部位塗布 比較例之對照組霜劑。i週間後，將3個處所之設定部位以外 遮光’設定部位上連續照射紫外線3日。照射紫外線之能量 之量，預先測定，被驗者之1 · 〇 MED (最小紅斑劑量：造成 最小紅斑之能量之量）相當量（合計3 .OMED相當量）。霜劑 之塗布’亦含紫外線之照射3日，進一步1日3回連續進行2 1 日。初次紫外線照射之7日後及2 1日後，於照射紫外線之部 位中，經3名専門評價者，以下列所示基準，評價色素沈激 之狀態。關於評價結果，每一設定部位，由専門評價者算出 評價點之平均。結果示於表2。 色素沈澱狀態之評價點 評價點：標語 0 :無變化 〇·5 :境界不明瞭的弱度黑化 0 1·0 :境界明瞭的黑化 1.5 :境界明瞭的中等度黑化 2.0 :境界明瞭的強度黑化 *亦採用各評價點之中間點。 〔表2〕 霜劑2 霜劑1 對照品 化合物（1 ) 化合物（1 ) 0.0 5 % 0.7% 7曰後 1·18士0.45 1.07士0.42 1.10士0.45 21日後 0.92土0.34 0.78士0.29 0.75土0.32 -26- 200800284 如表2所示，紫外線照射7日後，對照品與霜劑2 (含有0.05 %化合物（1 ))、霜劑1 (含有0.7%化合物（1 ))之間，不 認爲評價點有明顯差異，亦未認爲是有意義的差異（Paired 一 T 一 test )。即’紫外線照射部位同樣產生色素沈澱。然而， 2 1日後，對照品與霜劑2、霜劑1之間，認爲係有意義的差異 (各爲P < 0·05 )。霜劑2與霜劑1之間，不認爲係有意義的差 異’但由於較霜劑1有較小評價點，認爲抑制色素沈澱作用 優異。 又’初次紫外線照射之7日後及21日後，3個處所之設定部 位及其隣接部位（經遮光部位）之皮膚之明度·（ L値）以色 彩色差計（Konica Minolta色彩色差計CR300 )測定。測定結 果中，10名被驗者之設定部位上，算出L値之平均値。又， 算出2 1日後設定部位（紫外線照射部位）與紫外線非照射隣 接部位之L値之差（△ L値：隣接部位L値-紫外線照射部位 L値）。結果示於表3。 〔表3〕 對照品 霜劑2 化合物（1 ) 0.05% 霜劑1 化合物（1 ) 0.7% 非照射 7曰後之 L値 61.03 土4.49 60.85土3.87 60.67土4.00 66.42 士 1·90 2 1日後之 L値 62.94土3.25 63.60士3.25 63.66±3.23 66.67 土 3.21 21日後之 △ L値 3.73±1.43 3·07±1.42 3.01 ±1.49 — 如表3所示，紫外線照射7日後，霜劑1 (含有〇 . 7 %化合物 (1 ))塗布部位、霜劑2 (含有〇 · 〇 5 %化合物（1 ))塗布部 位、對照品塗布部位同時，較紫外線非照射部位L値（明度） -27- 200800284 下降。即，紫外線照射之色素沈澱，判定爲皮膚明度降低。 再者，各塗布部位中，比較2 1日後非照射部位之L値（明度） 算出之差的△ L値，霜劑1、霜劑2塗布部位中，與對照品塗 布部位相比，顯示與非照射部位之差的△ L値爲小，更回復 明度。即，霜劑1、霜劑2具有改善色素沈澱的作用。霜劑1、 霜劑2塗布部位同時，相對於對照品塗布部位，Paired - T 一 test之結果，P< 0.05，認爲係有意義的差異。 <試驗例3 >本發明之化粧料之使用試驗2 零 實施例1之處方中，製作將1，3·丁二醇置換爲1，2-戊二醇之 霜劑3，置換爲甘油之霜劑4、置換爲水之霜劑5。 實施例1製造的霜劑1與霜劑3、霜劑4、霜劑5中，被驗者 之上腕內側部上設定1.5x1.5cm之4個部位，以與試驗例2大 略相同之方法實施紫外線照射及試料之塗布，實施7日後與 2 1日後以色彩色差計之明度（L値）測定，進一步算出與非 照射部位之差，結果示於表4。 〔表4〕 霜劑1 霜劑3 霜劑4 霜劑5 非照射 7曰後之L値 60.67±4.00 60.85土 3.87 60.76±3.90 60.72土 4.02 66.42±1.90 21日後之L値 63,66士 3.23 63.65 土 3.21 63·28±3·31 63.26士 3.28 66.71 土 3·24 21曰後之 △ L値 3.05 士1.49 3.06 士 1.42 3.43 土 1.51 3.45 士 1.61 如表4所示，由色彩色差計之評價，紫外線照射7日後，霜 劑1、霜劑3、霜劑4、霜劑5塗布部位同時，較紫外線非照射 部位之L値（明度）下降。即’因紫外線照射之色素沈澱， 皮膚之明度會降低。再者，各塗布部位中，比較算出與2 1日 -28- 200800284 後非照射部位之L値（明度）差之△ l値，含有1，3 - 丁二醇之 霜劑1與含有1，2-戊二醇之霜劑3塗布部位中，此等以水置換 的霜劑5塗布部位相比下△ L値爲小，促進明度之回復。又， 1，3-丁二醇置換爲甘油之霜劑4中，與霜劑1或霜劑2相比，明 度之回復促進效果多少會降低。即，含有1，3 -丁二醇或1，2-戊二醇樣的2價多價醇之霜劑〗、霜劑3被認爲具有優異色素 沈澱之預防·改善作用。 又，本發明之霜劑1〜5任一者，於塗布部位未觀察到不佳 的反應，亦同時確認本發明品之化粧料或醫藥部外用品爲安 全性高者/ <試驗例4 >正常人類黑色素細胞酪胺酸酶活性之抑制試 驗 黑色素細胞培養用培養基（Medium 254，倉敷紡績株式會 社）培養的人類正常黑色素細胞（倉敷紡績株式會社）以細 胞刮刀回收，使用 PreteoExtractTM Subcellular Proteome Extraction Kit ( Cambrex股份有限公司）抽出之蛋白質溶液 作成粗酪胺酸酶蛋白質溶液。由測定此酪胺酸酶蛋白質溶液 之dopa氧化活性，評價化合物（1 )之酪胺酸酶活性之抑制 作用。 成爲基質之0.1 % dopa溶液係由將L-β- ( 3,4-二羥基苯基） 丙胺酸（L-DOPA)溶解於lOmM磷酸鈉緩衝液（ ρΗ6·8)作 成如0.1 ( w/ ν) %的方式而調製。96孔平盤中添加調製爲1 〜Spg/SOpL的粗酪胺酸酶蛋白質溶液平均80μί，於此添加 10μΜ、100μΜ、100 0μΜ的化合物（1 )之DMSO溶液各3孔， -29- 200800284 每次20 μί。又，陽性對照組之酪胺酸酶活性抑制劑以已知的 苯基硫脲同樣地於DMSO中爲ΙΟμΜ、ΙΟΟμΜ、ΙΟΟΟμΜ溶液， 各添加3孔每次20 pL。又，對照組以DM SO各3孔每次添加 2 0 pL。放入各被驗溶液之孔中每次添加％ do pa溶液 ΙΟΟμί，直接於平盤讀數機中測定450nm之吸光度，將其作 成0分値。96孔平盤，原樣於平盤讀數機中37°C下10分鐘培 育後，再度測定45 Onm吸光度，將其作爲10分値。由各孔之 10分値與〇分値之差値作爲0—10分吸光度變化値，對照組之 ® 0—10分吸光度變化値平均爲100%，測定各濃度之被驗物質 處理時之d 0 p a氧化活性，結果示於表5。 〔表5〕 添加濃度 d ο ρ a氧化活性 對照組 0 100.00士4.59 化合物（1 ) 1 μΜ 1 03.5 5 土 1.34 10μΜ 102」2士 3.68 100μΜ 1 02.52 士 2.19 苯基硫脈 (陽性對照組） ΙμΜ 64.07土1」3 1 ΟμΜ 22.52 土 1.09 1 ΟΟμΜ 4.73土2.07 添加化合物（1 )的場合，與添加濃度之高低無關，顯示 與對照組同等之dopa氧化活性。即，了解化合物（1 )未抑 制由正常人類黑色素細胞抽出的酪胺酸酶活性。又，1 〇〇μΜ 添加濃度，於試驗例1所示培養細胞系中黑色素生成爲80% 以上抑制的濃度之25倍。另一方面，苯基硫脲，由於添加濃 性成抑 活生下 酶素制 酸色機 胺黑之 酪之同 制常不 抑通全 爲與完 斷爲爲 判定制 ， 判抑 低被接 降，直 會1)之 性 {酶 活物酸 化合胺 氧化酪 pa，對 ο 1 J d 达 ， ’ 據里( 時。相 高用劑 提作制 度的抑 -30- 200800284 制黑色素生成。如此之機制，被認爲是酪胺酸酶及TrP·1、 Trp-2等酪胺酸酶關連蛋白質表現之抑制，由細胞內代謝生 成物等之間接性酪胺酸酶活性之抑制、生成的黑色素之輸送 抑制等。 〈試驗例5>酪胺酸酶及酪胺酸酶關連蛋白（Trp-l、Trp-2) 之表現 測定 人類正常黑色素細胞（倉敷紡績株式會社）之細胞懸濁液 ^ 調製成7χ104個/mL之黑色素細胞培養用培養基（Medium 254、倉敷紡績株式會社），將其以10mL播種於φ l〇cm培養 盤中，於<：02培養箱中（37°C，5% C02 )培養。翌曰，除去 培養基，添加含有2μΜ或5 μΜ化合物（1 )之黑色素細胞培養 用培養基，或各添加黑色素細胞培養用培養基（對照組）1 OrnL 後，於C02培養箱中72小時培養。72小時培養後，除去培養 基，以磷酸緩衝生理食鹽水（PBS)洗淨後，以細胞刮刀回 收細胞。於此細胞團塊加入蛋白質抽出液（0.1 %NP-40、0.01 % SDS、10mM磷酸鈉緩衝液（ΡΗ6·8 )、蛋白酶抑制劑），懸 濁細胞後，於4°C中震盪1小時。於4°C中以1 5,000rpm遠心分 離1 0分鐘，回收上清液成爲粗蛋白質抽出液。 以常法將粗蛋白質抽出液5pg經SDS-聚丙烯醯胺電泳，將 電泳蛋白質轉印至PVDF薄膜後，將此薄膜浸漬於含有3%脫 脂牛奶TPBS (含有0.1 % ( w/v ) tween-20之PBS )中1小時 (室溫）浸漬。此膜以TPBS洗淨後，於含有辨識酪胺酸酶或 酪胺酸酶關連蛋白質之1次抗體之TPBS中1小時（室溫）反 -31- 200800284 應。使用之抗體及稀釋率如下。 酪胺酸酶；抗酪胺酸酶（H-109)多株抗體（兔）、（Santa Cruz社製、SC-15 3 4 1 )、1/400稀釋

Trp-1 ;抗 Trp-1 ( H-90)多株抗體（兔）、（Santa Cruz社 製、SC-2 5 543 )、1/400 稀釋

Trp-2 ;抗 Trp-2 ( D-18)多株抗體（山羊）、（Santa Cruz 社製、SC- 1 045 1 )、1/250 薄膜以TPBS洗淨後，於含有2次抗體之TPBS中1小時（室 I 溫）反應。使用之抗體及稀釋率如下。 酪胺酸酶及Trp-1 ; ECL抗兔IgG，連結辣根過氧化酶種專 一性全抗體（Horseradish peroxidase-linked species-specific whole antibody)(驢）、Phamarical bioscience公司製， N A 9 3 4 )，1 /1 5，0 0 0 稀釋

Trp-2 ;抗山羊IgG，軛合辣根過氧化酶種專一性全抗體 (Santa Cruz社製、SC-2033)，1/7，500稀釋 $ 此膜以TPBS洗淨後，使用ECL Plus西方氏墨漬偵測系統測 出各蛋白質。檢測時使用冷却CCD相機搭載化學發行檢出裝 置（ATTO社製），結果示於第1圖。 化合物（1 )，於 < 試驗例1 >中黑色素生成抑制效果被確 認的濃度以上的5μΜ中亦無與酪胺酸酶及酩胺酸酶關連蛋 白質（Trp-1、Trp-2)表現量有關之影響。據此，進一步證 實此黑色素生成抑制作用爲新的機制。 産業上之可利用性 依本發明，提供發揮老人斑·雀斑等皮膚色素沈澱症之預 -32- 200800284 防、改善的優異效果之美白用化妝料。又，可安全地使用本 發明之化粧料。 本發明爲可應用予美白用化妝料或美白用之醫藥部外用 品。 【圖式簡單説明】 〔第1圖〕爲顯示酪胺酸酶、Trp-l、Trp-2蛋白質之表現 狀況的西方氏墨漬法之圖（圖面代替照片）°

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Claims (1)

1. 200800284 十、申請專利範圍： 1 · 一種美白用化妝料，其含有下列一般式（I )所示化合物 及/或其鹽， 〇

   (一般式（I )中，R1及R2各自獨立爲碳數3〜7之第2級或 第3級烷基，R3爲氫原子、碳數4之烷基或碳數1〜4之 烷氧基）。 4 2·如申請專利範圍第1項之美白用化妝料，其中該一般式 (I )所示化合物爲下列一般式（I I )所示化合物 0

   一般式（I I ) (一般式（II)中，R1及R2各自獨立爲碳數3〜7之第2級 或第3級垸基）。 3 ·如申請專利範圍第2項之美白用化粧料，其中該一般式 (I I )所示化合物爲2,6-二-第三丁基-4- ( 2，-噻吩甲醯基） 苯酚（化合物（1 )) -34- 200800284 r\

   如申邮#利範圍第1至3項中任一項之美白用化妝料，其用 於色素沈澱症之預防及改善。

   5·如申請專利範圍第1至4項中任一項之美白用化妝料，其中 該一般式（I )所示化合物之含有率爲0.0001〜3質量％。 6 ·如申請專利fe圍弟1至5項中任一項之美白用化妝料，甘、 具進 一步含有至少一種選自丨，3· 丁二醇、二丙二醇、異戍〜加 、’A、《醇、

   1，2-戊二醇、2,4-己二醇、1，2-己二醇 多價醇。

   種 -35-