CN101378724A - 皮肤增白化妆品 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种新颖的皮肤增白剂；和一种皮肤增白化妆品或者准药品，其对于黑变病的预防/改善是高度有效的，并且使用所述的皮肤增白剂来制备。所述的化妆品包含一种通式(I)表示的化合物和/或其盐作为活性成分。在通式(I)中，R¹和R²独立的表示具有3－7个碳原子的仲或者叔烷基基团；R³表示氢原子、具有1－4个碳原子的烷基基团或者具有1－4个碳原子的烷氧基基团。

Description

皮肤增白化妆品

[技术领域]

[0001]本发明涉及一种皮肤增白化妆品。本发明所用的术语“化妆品”还包括在日本分类为准药品(quasi-drug)的产品的等价物。

[背景技术]

[0002]在皮肤曝露于日光之后的斑点、雀斑和色素沉着指的是这样一种情形，在其中黑素生成由于存在于皮肤中的色素细胞(黑素细胞)的活化而被急剧加速。已知的是使用含有抗坏血酸、过氧化氢、胶质硫磺、谷胱甘肽、对苯二酚或者儿茶酚的皮肤外用制剂(特别是皮肤增白剂)来预防或者改善这样的皮肤色素问题(参见例如非专利文献1)。但是，同样已知的是这样的增白剂有时候有效的发挥它们的作用，但有时并不起作用。在目前的情况下，其原因不是非常清楚。

[0003]此外，上述皮肤增白剂有时候引起稳定性和安全性问题。即，抗坏血酸(其用于预防或改善色素沉着)易于氧化并且在含高浓度水的体系例如高水含量化妆品中是不稳定的，并且它可能改变外用的皮肤制剂(皮肤增白剂)的颜色。同时，过氧化氢溶液具有其保存稳定性和安全性的问题，而谷胱甘肽和胶质硫黄具有非常与众不同的气味并且难以作为皮肤增白剂的成分而使用。此外，对苯二酚、儿茶酚等可能具有安全问题例如皮肤刺激和过敏性。由于这样的技术背景，因此一种新颖的可以有效的起作用并具有令人满意的稳定性和安全性的皮肤增白材料是令人期望的。

[0004]另一方面，已知的是一种下面的通式(I)表示的噻吩衍生物，其具有抗氧化效果、通过前列腺素抑制机理而具有的消炎效果、抗变应性效果和治风湿病效果(参见例如专利文献1、2、3和4以及非专利文献2和3)。

[0005]但是，这样的化合物具有抑制皮肤中的黑色素形成作用不是已知的，并且含有该化合物作为活性成分的皮肤增白化妆品也是完全未知的。

[0006][专利文献1]JP53-141265A

[专利文献2]JP63-008380A

[专利文献3]JP63-502281A

[专利文献4]JP06-501919A

[非专利文献1]“Usability of cosmetics，Evaluation Techniques andfuture perspectives”，Katsuyuki TAKEDA等人的版本，YAKUJINIPPOLIMITED.(2001)编辑

[非专利文献2]Agents and Action，第12卷，第5期，第674-683页，(1982)

[非专利文献3]Bioorganic & Medicinal Chemistry，第11卷，第4207-4216页，(2003)

[发明内容]

[0007]已经考虑到上述的情况而进行了本发明，并且本发明的一个目标是提供一种化妆品，其对于预防/改善黑变病例如斑点和雀斑是非常有效的。

[0008]本发明的发明人已经进行了广泛的研究来实现上述的目标，并且作为结果，本发明人已经发现一种特定的噻吩衍生物(明确的，用通式(I)表示的化合物和/或其盐)具有强的抑制黑素细胞中的黑色素形成的作用。本发明人另外发现一种原料例如含有所述的噻吩衍生物的化妆品具有优异的预防或改善皮肤黑变病的效果，由此而完成了本发明。即，本发明如下。

[0009](1)一种皮肤增白化妆品，其含有下面的通式(I)表示的化合物和/或其盐。

       通式(I)

[0010](在通式(I)中，R¹和R²独立的表示具有3-7个碳原子的仲或者叔烷基基团，R³表示氢原子、具有1-4个碳原子的烷基基团或者具有1-4个碳原子的烷氧基基团。)

(2)根据第(1)条的皮肤增白化妆品，其中所述的用通式(I)表示的化合物是下面的通式(II)表示的化合物。

[0011]

      通式(II)

[0012](在通式(II)，R¹和R²独立的表示具有3-7个碳原子的仲或者叔烷基基团。)

(3)根据第(2)条的皮肤增白化妆品，其中用通式(II)表示的化合物是2，6-二叔丁基-4-(2’-噻吩甲酰)苯酚(化合物(1))。

[0013]

       化合物(1)

[0014](4)根据第(1)-(3)条的任何一种的皮肤增白化妆品，其用于预防/改善黑变病。

(5)根据第(1)-(4)条的任何一种的皮肤增白化妆品，其中用通式(I)表示的化合物的含量是0.0001-3质量％。

(6)根据第(1)-(5)条的任何一种的皮肤增白化妆品，其进一步包含至少一种多元醇，其选自1，3-丁二醇、二丙二醇、异戊二醇、1，2-戊二醇、2，4-己二醇、1，2-己二醇和1，2-辛二醇。

[0015]本发明还包括通式(I)表示的化合物和/或其盐用于制造皮肤增白化妆品的用途和一种包括将通式(I)表示的化合物和/或其盐施用到皮肤上来增白的方法。

优选的通式(I)表示的化合物的方面、优选的化妆品的使用和优选的用来另外混入到本发明上述用途和方法中的成分与上述的第(2)-(6)条相同。

[附图简述]

[0016][图1]一种表示免疫蛋白印迹(Western blotting)结果的图(用照片代替图)，其表示酪氨酸酶、Trp-1和Trp-2蛋白质的表达。

[最佳实施方式]

[0017](1)通式(I)表示的化合物:本发明化妆品的基本成分

为本发明化妆品的基本成分的化合物由通式(I)表示。在通式(I)中，R¹和R²独立的表示具有3-7个碳原子的仲或者叔烷基基团，即大体积取代基。R¹和R²每一个具体的实例分别包括异丙基，异丁基，仲丁基，叔丁基，异戊基，仲戊基和叔戊基基团。其中叔丁基基团是优选的，并且二叔丁基化合物(这里R¹和R²都是叔丁基基团)是更优选的。

[0018]在通式(I)中，R³可以是氢原子或者任何的选自具有1-4个碳原子的烷基基团或者具有1-4个碳原子的烷氧基基团的取代基。在R³是取代基的情况中，对于取代基的取代位置没有特别的限定。R³优选是具有1-4个碳原子的烷基基团或者具有1-4个碳原子的烷氧基基团。其中特别优选的R³是氢原子。即，在本发明中，通式(I)表示的化合物优选是通式(II)表示的化合物。

作为本发明的化妆品基本成分的化合物进一步优选是2，6-二叔丁基-4-(2’-噻吩甲酰)苯酚，即，用上述的化合物(1)的化学式表示的化合物。

[0019]通式(I)表示的化合物可以以自由形式或者作为通过使用碱等获得的盐的形式来用于本发明的化妆品。其实例优选包括:碱金属盐例如钠和钾盐；碱土金属盐例如钙和镁盐；有机胺盐例如铵、三乙醇胺和三乙基胺盐；和碱性氨基酸盐例如赖氨酸和精氨酸盐。

[0020]这些化合物可以通过任何方法来制造，并且所述的方法的实例包括，但不限于，如下面的方案1或者2总结的方法。本领域技术人员将理解，下面的方法可以适当的改变来制造目标化合物。

[0021]

                 方案1

[0022]下面简要描述方案1的反应。

根据常规的方法将3，5-二烷基-4-羟基安息香酸用亚硫酰氯处理，由此产生3，5-二烷基-4-羟基安息香酸的氯化物:化合物(A)。将该酰基氯化合物(A)用路易斯酸例如氯化铝或者四氯化钛在合适的溶剂例如二硫化碳中进行处理。随后，加入噻吩，化合物(B)来进行弗瑞德-克来福特(Friedel-Crafts)反应，由此产生通式(I)表示的化合物。

[0023]可以使用3，5-二烷基-4-羟基安息香酸例如由Sigma-AldrichCorporation市售的3，5-二叔丁基-4-羟基安息香酸。化合物(B)可以是未被取代的化合物，这里R³是氢原子或者可以是取代的化合物例如甲基噻吩或者甲氧基噻吩。在噻吩用作化合物(B)的情况中，可以制备通式(II)表示的化合物，而在3，5-二叔丁基-4-羟基安息香酸的酰基氯化合物用作化合物(A)的情况中，可以制备2，6-二叔丁基-4-(2’-噻吩甲酰)苯酚(化合物(1))。

[0024]

                      方案2

[0025]下面简要描述方案2的反应。

根据常规的方法将噻吩羧酸用亚硫酰氯处理，由此产生噻吩羧酸的酰基氯:化合物(C)。将该酰基氯化合物(C)用路易斯酸例如氯化铝或者四氯化钛在合适的溶剂例如二硫化碳中进行处理。随后，加入2，6-二烷基苯酚(D)来进行弗瑞德-克来福特(Friedel-Crafts)反应，由此产生通式(I)表示的化合物。

为了产生化合物(C)，可以使用2-噻吩羧酸，3-甲基-2-噻吩羧酸，5-甲基-2-噻吩羧酸，等等，这里R³是氢原子，并且其是由Sigma-AldrichCorporation市售获得的。在2-噻吩羧酸的酰基氯用作化合物(C)的情况中，可以产生通式(II)表示的化合物。2，6-二烷基苯酚(D)可以是2，6-二叔丁基-苯酚、2，6-二-异丙基苯酚等等，从Sigma-Aldrjch Corporation市售获得。在2-噻吩羧酸和2，6-二叔丁基-苯酚的酰基氯分别用作化合物(C)和(D)的情况中，可以产生2-6-二叔丁基-4-(2’-噻吩甲酰)苯酚(化合物(1))。

[0026]通式(I)表示的化合物具有优异的黑色素形成抑制作用。通常，许多具有黑色素形成抑制作用的化合物是通过酪氨酸酶的直接抑制作用和酪氨酸酶分解的机理来抑制黑色素的形成。但是，通式(I)表示的化合物被认为是通过与酪氨酸酶的直接抑制作用和酪氨酸酶分解不同的机理来抑制黑色素的形成。

[0027](2)本发明的化妆品

本发明的化妆品包含通式(I)表示的化合物和/或其盐作为基本成分。本发明的化妆品可以包含通式(I)或者其单种盐或两种或多种盐的组合所表示的化合物。

[0028]虽然通式(I)表示的化合物在本发明的化妆品中的含量将根据化妆品目的、皮肤条件、剂型和使用部位而变化，但是其含量是0.0001质量％或者更高，优选0.001质量％或者更高，并进一步优选0.01质量％或者更高。同时，上限是3质量％或者更低，优选1质量％或者更低，并进一步优选0.8质量％或者更低。

本发明的通式(I)表示的化合物可以在日本以准药品使用或者在其它国家中以其类似的产品使用，这是因为该化合物具有强的黑色素形成抑制作用。

[0029]本发明的化妆品特别优选用于没有发炎的皮肤部位。即，本发明的化妆品优选不用于消炎。通常，本发明的化妆品优选用来预防皮肤上的黑变病例如斑点和雀斑，这里黑色素形成被增强，但是不引起发炎反应等，或者优选用到黑变病的部位。

[0030]本发明的化妆品具有黑色素形成抑制作用和预防/改善黑变病例如斑点和雀斑的效果。因此，在本发明一种优选的实施方案中，在每个国家的法律范围内进行所述的化妆品的效果/效力的说明例如“这种化妆品可以抑制黑色素形成和预防斑点和雀斑”来将该化妆品的有效作用告知用户。

[0031]除了通式(I)表示的化合物之外，本发明的化妆品优选包含至少一种多元醇，其选自1，3-丁二醇、二丙二醇、异戊二醇、1，2-戊二醇、2，4-己二醇、1，2-己二醇和1，2-辛二醇。该多元醇具有增强本发明的化妆品皮肤增白效果的作用。

虽然对于每种多元醇的含量没有特别限制，但是其含量优选是0.1-30质量％，更优选1-20质量％，和进一步优选5-10质量％。同样，其含量还可以优选5-50质量倍数，并进一步优选5-20质量倍数，基于通式(I)表示的化合物。

[0032]此外，除了通式(I)表示的化合物之外，本发明的化妆品优选进一步包含表面活性剂。

[0033]表面活性剂的实例包括，阴离子表面活性剂例如脂肪酸皂(例如月桂酸钠和棕榈酸钠)，月桂基硫酸钾和三乙醇胺硫酸烷酯醚；阳离子表面活性剂例如三甲基十八烷基氯化铵，杀藻胺和氧化月桂胺；两性表面活性剂例如咪唑啉基两性表面活性剂(例如二钠2-椰油基-2-氢氧化咪唑啉鎓-1-羧乙基氧化物)，甜菜碱基表面活性剂(例如烷基甜菜碱，酰胺甜菜碱和磺基甜菜碱)，和酰基甲基牛磺酸；非离子表面活性剂例如失水山梨糖醇脂肪酸酯(例如失水山梨糖醇单硬脂酸酯和失水山梨糖醇倍半油酸酯)，脂肪酸甘油酯(例如单硬脂酸甘油酯)，脂肪酸丙二醇酯(例如单硬脂酸丙二醇酯)，固化的蓖麻油衍生物，甘油烷基醚，POE失水山梨糖醇脂肪酸酯(例如POE失水山梨糖醇单月桂酸酯，POE失水山梨糖醇单油酸酯，和聚氧乙烯失水山梨糖醇单硬脂酸酯)，POE山梨醇脂肪酸酯(例如POE-山梨醇单月桂酸酯)，POE脂肪酸甘油酯(例如POE-单异硬脂酸甘油酯)，POE脂肪酸酯(例如POE单月桂酸酯，POE单油酸酯，和POE二硬脂酸酯)，POE烷基醚(例如POE-十六烷基醚和POE2-辛基十二烷基醚)，POE烷基苯基醚(例如POE壬基苯基醚)，普卢兰尼克(pluronic)(注册商标)，POE/POP烷基醚(例如POE/POP2-癸基十四烷基醚)，tetronic(注册商标)，POE蓖麻油/固化蓖麻油衍生物(例如POE蓖麻油和POE固化蓖麻油)，蔗糖脂肪酸酯，和烷基配糖物。

本发明的化妆品优选包含非离子表面活性剂。这是因为该化妆品的皮肤增白效果可以进一步通过使用通式(I)表示的化合物和非离子表面活性剂的组合来提高。

虽然对表面活性剂的含量没有特别的限制，但是该含量优选是0.1-10质量％和进一步优选的0.2-5质量％。同样，该含量优选是0.1-20质量倍数和进一步优选的0.2-20质量倍数，基于通式(I)表示的化合物。

[0034]本发明的化妆品还优选另外包含UV保护剂。对该包含于本发明化妆品或者准药品中的UV保护剂没有特别的限制，只要该UV保护剂能够降低紫外光的曝露就行，紫外光是使皮肤产生斑点等的复杂的因素。UV保护剂的实例包括不同的具有紫外线散射效应的微粒和具有紫外线吸收效应的化合物。

[0035]作为微粒，可以给出的是云母，滑石，高岭土，合成云母，碳酸钙，碳酸镁，硅酸酐(二氧化硅)，氧化铝和硫酸钡，作为有机微粒，优选给出的是聚乙烯粉末，聚甲基丙烯酸甲酯，尼龙粉末和有机聚硅氧烷弹性体。

[0036]通常，对于这样的具有紫外光吸收效果的化合物没有特别的限制，只要该化合物具有芳环。所述的化合物的实例包括:维生素B例如维生素B₁、维生素B₂、维生素B₃、维生素B₆和维生素B₁₂；和芳环/杂环维生素例如维生素E、泛醌和叶酸。其实例进一步包括对氨基安息香酸基紫外光吸收剂，邻氨基苯甲酸基紫外光吸收剂，水杨酸基紫外光吸收剂，肉桂酸基紫外光吸收剂，苯甲酮基紫外光吸收剂，糖类紫外光吸收剂，2-(2’-羟基-5’-叔辛基苯基)苯并三唑，和4-甲氧基-4’-叔丁基二苯甲酰甲烷，其用作紫外光吸收剂。

[0037]本发明的化妆品可以包含不同的通常用于药物、化妆品等中的组分，其是脂肪和油、蜡、烃类、脂肪酸、高级醇、酯类、油性溶液、水性组分、粉末组分、湿润剂、增稠剂、着色剂、香料、抗氧化剂、pH调节剂、螯合剂、防腐剂、UV保护剂、维生素、其它皮肤增白剂和消炎剂以及上述组分。

[0038]脂肪和油以及蜡的具体的实例包括:昆士兰果油、鳄梨油、玉米油、橄榄油、油菜籽油、芝麻油、蓖麻油、红花油、棉花籽油、霍霍巴油、椰子油、棕榈油、液体羊毛脂、固化椰子油、固化油、漆脂、固化蓖麻油、蜂蜡、小烛树蜡、巴西棕榈蜡、水蜡树蜡(ibota wax)、羊毛脂、减重羊毛脂、硬羊毛脂，和霍霍巴蜡；烃类例如液体石蜡、角鲨烷，姥鲛烷、地蜡、石蜡、纯地蜡、凡士林，和微晶蜡；高级脂肪酸如脂肪酸例如油酸、异硬脂酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、山嵛酸，和十一碳烯酸；高级醇例如十六烷醇，十八烷醇，异十八烷醇，山嵛醇，辛基十二烷醇，肉豆蔻醇，和十六十八烷醇；合成的酯油例如酯类例如异辛酸十六烷酯，肉豆蔻酸异丙酯，异硬脂酸己基癸酯，乙二酸二异丙基酯，癸二酸二-2-乙基己基酯，乳酸十六烷基酯，二异十八烷苹果酸酯，乙二醇二-2-乙基己酸酯，二癸酸新戊二醇酯，十一酸甘油二-2-庚基酯，甘油三-2-乙基己酸酯，三羟甲基丙烷三-2-乙基己酸酯，三异硬脂酸三羟甲基丙酯，季戊四醇四-2-乙基己酸酯，二聚dilinoil亚油酸二聚酸，二亚油酸二聚酸(例如植物甾醇基/异十八烷/十六烷基/十八烷/山嵛基)，和N-十二酰谷氨酸(植物甾醇基/2-辛基十二烷基)；作为润滑剂的硅油，例如链聚硅氧烷例如二甲基聚硅氧烷，甲基苯基聚硅氧烷，和二苯基聚硅氧烷，环聚硅氧烷例如八甲基环状四硅氧烷，十甲基环五硅氧烷，和十二甲基环己烷硅氧烷，和改性的聚硅氧烷例如氨基改性的聚硅氧烷，聚醚改性的聚硅氧烷，烷基改性的聚硅氧烷，和氟改性的聚硅氧烷。

[0039]湿润剂的实例包括多元醇例如聚乙二醇，甘油，双甘油，赤藻糖醇，山梨糖醇，木糖醇，麦芽糖醇，和丙二醇，吡咯烷酮羧酸钠，乳酸，和乳酸钠。增稠剂的实例包括瓜耳树胶，温柏籽，角叉菜聚糖，半乳糖体，阿拉伯胶，果胶，甘露聚糖，淀粉，黄原胶，凝胶多糖(curdlan)，甲基纤维素，羟乙基纤维素，羧甲基纤维素，甲基羟丙基纤维素，硫酸软骨素，硫酸皮肤素，肝糖，硫酸乙酰肝素，透明质酸，透明质酸钠，黄蓍胶，硫酸角质素，软骨素，硫酸粘多糖，羟乙基瓜耳树胶，羧甲基瓜耳树胶，右旋糖苷，硫酸角质，刺槐豆胶，琥珀酰葡聚糖(succinoglucan)，蒈醛酸(caronic acid)，壳质，壳聚糖，羧甲基壳质，琼脂，聚乙烯醇，聚乙烯吡咯烷酮，羧乙烯基聚合物，聚丙烯酸钠，聚乙二醇，和斑脱土。

[0040]所述的无机颜料包括氧化铁红，氧化铁黄，氧化铁黑，氧化钴，群青色，铁蓝，氧化钛，和氧化锌，其表面可以被处理。珠光剂包括钛云母，鱼鳞箔，和氯氧化铋，其表面可以被处理。有机染料包括RedNo.202，Red No.228，Red No.226，Yellow No.4，Blue No.404，YellowNo.5，Red No.505，Red No.230，Red No.223，Orange No.201，Red No.213，Yellow No.204，Yellow No.203，Blue No.1，Green No.201，Purple No.201，和Red No.204，其可以制成色淀。

[0041]除了通式(I)表示的化合物之外，作为皮肤增白组分或者皮肤增白剂，这里给出的是例如泛酰巯基乙胺-S-磺酸，异阿魏酸(isoferulicacid)，抗坏血酸-配糖物，磷酸抗坏血酸酯，4-(C_4-10)烷基间苯二酚例如4-正丁基间苯二酚，熊果苷(arbutin)，曲酸，亚油酸，亚油酸甲酯，氨甲环酸，和甲酰胺氨甲环酸酯。

[0042]本发明的化妆品可以含有低级醇(例如乙醇和异丙醇)，或者除了上述的维生素之外的化合物，即，维生素A或者其衍生物，维生素D，泛酸，潘特生(pantethine)，辅酶Q10，等等。

[0043]虽然本发明的化妆品的剂型可以是任意的一种并且没有限制，只要该剂型可以用在这样的化妆品或者准药品中，本发明皮肤增白化妆品或者皮肤增白准药品令人期望的处于适于将化合物长期保持在皮肤中的形式，例如洗液，乳液，药膏，乳霜，或者洗液，因为通式(I)表示的化合物渗透到皮肤中和表现出它的皮肤增白效果和黑色素形成抑制作用。同样的，膏贴(pack)是优选的，因为可以提供由于封闭产生的效果。

[0044]本发明的化妆品可以以与常规的化妆品生产方法相同的方式来生产，除了该化妆品包含通式(I)表示的化合物。

[0045]下文中，本发明将参考实施例和测试实施例进行更详细的说明，但是很显然本发明并不限于这些实施例和测试实施例。

[实施例]

[0046]<制造实施例>2，6-二叔丁基-4-(2’-噻吩甲酰)苯酚(化合物(1))的合成

将60g亚硫酰氯加入到23.2g的3，5-二叔丁基-4-羟基安息香酸中，并将该混合物在室温搅拌1小时，随后在减压下蒸馏掉多余的亚硫酰氯。将残留物用300ml的二硫化碳溶解，并向其中加入13.5g的氯化铝。将该混合物在40℃搅拌30分钟，并向其中加入88.2g噻吩。随后，将该反应溶液倾倒入10％的盐酸中，并用二氯甲烷萃取。将萃取液用无水硫酸钠干燥并浓缩，并使用硅胶柱将浓缩物分馏净化，由此制造化合物(1)。

[0047]<实施例1>

根据下面的药方来制备水包油乳霜。即，将(A)中所述的组分进行混合并加热到80℃。另一方面，将(B)中所述的组分进行混合并加热到80℃。将混合物(B)加入到混合物(A)中，并将其整个通过搅拌进行乳化并冷却到35℃，由此制造乳霜1。

(A)POE(30)十六烷基醚            2.0质量％

   单硬脂酸甘油酯               10.0质量％

   液体石蜡                     10.0质量％

   凡士林                       4.0质量％

   十六烷醇                     5.0质量％

   γ-生育酚                     0.05质量％

   二丁基羟基甲苯(BHT)          0.01质量％

   对羟基苯甲酸丁酯             0.1质量％

   化合物(1)                    0.7质量％

(B)1，3-丁二醇                  10.0质量％

   净化水                       58.14质量％

   [0048]<实施例2>

根据下面的药方来制备水包油乳霜。即，将(A)中所述的组分进行混合并加热到80℃。另一方面，将(B)中所述的组分进行混合并加热到80℃。将混合物(B)加入到混合物(A)中，并将其整个通过搅拌进行乳化并冷却到35℃，由此制造乳霜2。

(A)POE(30)十六烷基醚          2.0质量％

   单硬脂酸甘油酯             10.0质量％

   液体石蜡                   10.0质量％

   凡士林                     4.0质量％

   十六烷醇                   5.0质量％

   γ-生育酚                   0.05质量％

   BHT                        0.01质量％

   对羟基苯甲酸丁酯           0.1质量％

   化合物(1)                  0.05质量％

(B)1，3-丁二醇                10.0质量％

   净化水                     58.79质量％

   [0049]<实施例3>

根据下面的药方来制备乳液。即，将(A)中所述的组分进行混合并加热到70℃。另一方面，将(B)中所述的组分进行混合并加热到70℃。将混合物(A)加入到混合物(B)中来达到初步乳化，并将其整个通过使用均相混合机进一步乳化。乳化完成后，将其全部在搅拌的同时冷却到30℃，由此来制造乳液。

(A)合成鲸蜡                      2.5质量％

   十六烷醇                      1.0质量％

   角鲨烷                        4.0质量％

   硬脂酸                        1.0质量％

   POE(25)单硬脂酸酯             2.2质量％

   甘油单硬脂酸酯                0.5质量％

   γ-生育酚                      0.05质量％

   BHT                           0.01质量％

   对羟基苯甲酸丁酯              0.1质量％

   化合物(1)                     1.0质量％

(B)1，3-丁二醇                   3.0质量％

   丙二醇                        7.0质量％

   黄原胶                        0.1质量％

   羧乙烯基聚合物                0.2质量％

   氢氧化钾                      0.2质量％

   净化水                        77.14质量％

   [0050]<实施例4>

根据下面的药方来制备洗液。将(A)中所述的组分进行混合并在室温溶解。另一方面，将(B)中所述的组分进行混合并在室温溶解。将混合物(A)加入到混合物(B)中来达到溶解，由此来制造洗液。

(A)POE(20)失水山梨糖醇单月桂酸酯  1.5质量％

   POE(20)单月桂酸酯              0.5质量％

   乙醇                           10.0质量％

   γ-生育酚                       0.02质量％

   化合物(1)                      0.01质量％

(B)甘油                           5.0质量％

   丙二醇                         4.0质量％

   异阿魏酸钠                     0.05质量％

   柠檬酸                         0.15质量％

   柠檬酸钠                       0.1质量％

   净化水                         78.67质量％

[0051]<实施例5>

根据下面的药方来制备膏贴。将(A)中所述的组分在室温进行分散和溶解，并将混合物(B)加入和均匀溶解到混合物(A)中，由此来制造膏贴。

(A)聚乙烯醇                            15.0质量％

   净化水                              40.0质量％

   (B)红没药醇                         0.5质量％

   γ-生育酚                            0.02质量％

   乙醇                                4.0质量％

   化合物(1)                           2.0质量％

   POE(8)·POP(55)共聚物               3.0质量％

   净化水                              35.48质量％

[0052]<测试实施例1>化合物(1)的黑色素形成抑制测试

使用硫脲嘧啶来评价化合物(1)的黑色素形成抑制作用(在这个测试中，使用用¹⁴C标记的硫脲嘧啶)，其特别被用到处于黑色素合成过程中的细胞中。将一种用于培养黑素细胞的完全培养基(来自KuraboIndustries Ltd.)以2ml/孔的量加入到24孔板的15个孔中，并将人类正常的黑素细胞(来自Kurabo Industries Ltd.)以1.5×10⁴细胞/cm²的浓度接种到每个孔中。将所述的细胞在37℃和5％的二氧化碳气氛下培养24小时。其后，在全部的孔中，将培养基在下面的条件下交换。即，将新的用于培养黑素细胞的完全培养基加入到三个孔中(对照)，将用于培养含有1.0×10^-3mM，2.0×10^-3mM和4.0×10^-3mM浓度的化合物(1)的黑素细胞的完全培养基每种加入到三个孔中(总共:9个孔)，并将用于培养含有0.1mM苯基硫脲(其被称为酪氨酸酶抑制剂)的黑素细胞的完全培养基加入到另外的三个孔中。此外，向着15个孔中以0.25×10^-6Ci(居里)加入¹⁴C-硫脲嘧啶(用¹⁴C标示的硫脲嘧啶)。将所述的细胞在与上面相同的条件下培养另外的3天。培养完成后，将培养液从所述的孔中移出，并将细胞用PBS(磷酸盐缓冲盐水)清洗并用含有胰岛素和EDTA的培养基从每个孔底部分离来产生细胞悬浮液，随后通过离心来收集细胞。使用血球计数器来计算细胞的数目。其后，使用液体闪烁计数器来测量从每个孔中收集的细胞中的¹⁴C-硫脲嘧啶含量。基于从对照孔中收集的细胞的辐射剂量计算在每个含有测试物质的培养基中培养的细胞的辐射剂量百分比来确定黑色素含量(％)。即，认为细胞中的辐射剂量越小，黑色素含量越小，产生大的黑色素抑制滴度(inhibition titer)。结果表示在表1中。

[0053]

表1

 

加入到培养基中的组分	浓度(mM)	黑色素含量(％)
			-(对照)	-	100±0.6
化合物(1)	1.0×10-32.0×10-34.0×10-3	48.5±2.327.9±0.817.0±0.8
			苯基硫脲	0.1	20.3±3.8

[0054]表1的结果揭示了包含于本发明的化妆品中的化合物(1)具有取决于浓度的黑色素形成抑制作用。已经发现苯基硫脲(0.1mM)和化合物(1)(4.0×10^-3mM具有几乎相同的黑色素形成抑制滴度。该结果揭示了化合物(1)具有比苯基硫脲(正对照)高20倍或以上的黑色素形成抑制滴度。虽然苯基硫脲由于它的毒性而没有实际应用，但是苯基硫脲通常在这样的试验中用作正对照，这是因为与现在实际使用的黑色素形成抑制剂相比，苯基硫脲是一种具有非常强的黑色素形成抑制作用的物质。在所述组合物中的化合物(1)的浓度4×10^-3mM对应于大约0.0001质量％。

[0055]<测试实施例2>本发明的化妆品的使用测试1

随后，基于上述结果，检查本发明化妆品对于黑变病的预防/改善的影响。进行实施例1和2所制造的乳霜1和2的使用测试来检查对于紫外线辐射的黑色素形成抑制作用。另一方面，将一种与实施例1相同的方式制备的乳霜(除了用净化水代替化合物(1)(对照))用作对比例。

[0056]在十个受治疗者的前臂的内侧标定出三个具有1.5cm×1.5cm尺寸的部位，并将实施例1制造的乳霜1(含有0.7％化合物(1))、实施例2制造的乳霜2(含有0.05％化合物(1))和作为对比例的对照乳霜分别的单独施用到所述的三个部位的一个、另外一个和剩余的一个上，每日三次，持续一周。一周后，将标定部位用紫外光连续照射三天，同时保护除了三个标定部位之外的其它区域免受紫外照射。该紫外线照射能量的量对于每个受治疗者为1.0MED(最小红斑量)(总和为3.0MED)，其是预定的。将乳霜每日三次连续使用另外的21天，包括初始的紫外线照射的三天。在初始紫外线照射之后的第7和21天，由三个专业评价员根据下面的标准评价在紫外光照射部位的色素沉着程度。基于评价结果，计算各自的标定部位的评价员给出的平均分。结果表示于表2中。

[0057]色素沉着度分数

分数:备注

0:所述的部位没有变化

0.5:所述的部位轻微变黑，具有不清楚的边缘

1.0:所述部位变黑，具有清楚的边缘

1.5:所述的部位适度的变黑，具有清楚的边缘

2.0:所述部位严重变黑，具有清楚的边缘

*还使用在所述分数之间的中间分数。

[0058]表2

 

	对照	乳霜2，含有0.05％化合物(1)	乳霜1，含有0.7％化合物(1)
				7天后	1.18±0.45	1.07±0.42	1.10±0.45
21天后	0.92±0.34	0.78±0.29	0.75±0.32

[0059]如表2所示，在紫外线照射后7天，在对照、乳霜2(含有0.05％化合物(1))和乳霜1(含有0.7％化合物(1))的分数之间没有明显的差异和显著差异(成对的-T-测试)。即，认为在紫外光照射部位上产生了相似程度的色素沉着。但是，在紫外线照射后21天，在对照和乳霜2的分数之间以及对照和乳霜1的分数之间存在着显著的不同(P<0.05，每个相比较)，虽然在乳霜2和乳霜1的分数之间没有显著的差异，但是乳霜1被认为具有优异的抑制色素沉着的作用，因为乳霜1的分数小于乳霜2的分数。

[0060]同时，在初始的紫外线照射后第7和21天，使用比色计(Konica Minolta Colorimeter CR300)来测量三个标定部位和其相邻部位(保护部位)的光亮度(L值)。基于该测量结果，计算十个受治疗者的各自标定部位的平均L值。此外，计算在初始的紫外线照射后21天的标定部位(紫外线照射部位)的L值和邻近部位(紫外线没有照射的部位)的L值之间的差值(ΔL值:邻近部位的L值紫外线照射部位的L值)。结果表示在表3中。

[0061]

表3

 

	对照	乳霜2，含有0.05％化合物(1)	乳霜1，含有0.7％化合物(1)	未照射的
					紫外线照射后7天的L值	61.03±4.49	60.85±3.87	60.67±4.00	66.42±1.90
紫外线照射后21天的L值	62.94±3.25	63.60±3.25	63.66±3.23	66.67±3.21
					紫外线照射后21天的ΔL值	3.73±1.43	3.07±1.42	3.01±1.49	------

[0062]如表3所示，在紫外线照射后第7天，可以发现乳霜1(含有0.7％化合物(1))使用部位、乳霜2(含有0.05％化合物(1))使用部位和对照使用部位的L值(光亮度)低于未照射紫外线的部位的L值。即，可以发现由于紫外线照射所引起的色素沉着降低了皮肤的光亮度。此外，ΔL值(表示在初始紫外线照射后21天各自使用的部位的L值(光亮度)和未照射部位的L值之间的差值)的对比揭示了乳霜1和乳霜2使用部位的ΔL值(表示与未照射部位的L值的差值)小于用对照使用的部位的ΔL值，并且乳霜1和乳霜2使用部位的光亮度恢复得多。即，可以发现乳霜1和乳霜2具有改善色素沉着的作用。对乳霜1和乳霜2使用部位基于对照使用部位进行成对-T-测试，该结果揭示了这里存在着显著的差异(P<0.05)。

[0063]<测试实施例3>本发明的化妆品使用测试2

执行实施例1的药方，除了用1，2-戊二醇，甘油和水代替1，3-丁二醇，由此分别制造乳霜3，乳霜4和乳霜5。使用实施例1制造的乳霜1，乳霜3，乳霜4和乳霜5来进行紫外线照射，并通过几乎与测试实施例2所述的完全相同的方法将样品应用于尺寸为1.5cm×1.5cm的四个部位，在每个受治疗者的前臂内侧进行标定，并在紫外线照射后第7和21天，使用比色计测量光亮度(L值)，随后计算所产生的L值和未照射部位的L值的差值。结果表示在表4中。

[0064]

表4

 

	乳霜1	乳霜3	乳霜4	乳霜5	未照射的
						紫外线照射后7天的L值	60.67±4.00	60.85±3.87	60.76±3.90	60.72±4.02	66.42±1.90
紫外线照射后21天的L值	63.66±3.23	63.65±3.21	63.28±3.31	63.26±3.28	66.71±3.24
						紫外线照射后21天的ΔL值	3.05±1.49	3.06±1.42	3.43±1.51	3.45±1.61	------

[0065]如表4所示，使用比色计的评价揭示了，紫外线照射后7天，施用乳霜1，乳霜3，乳霜4，和乳霜5部位的L值(光亮度)小于紫外线未照射部位的L值。即，可以发现由于紫外线照射引起的色素沉着降低了皮肤的光亮度。此外，ΔL值(表示在紫外线照射后21天各自使用的部位的L值(光亮度)和未照射部位的L值之间的差值)的对比揭示了含有1，3-丁二醇的乳霜1和含有1，2-戊二醇的乳霜3施用的部位的ΔL值小于含有代替这些化合物的水的乳霜5施用的部位的ΔL值，并且乳霜1和3促进了光亮度的恢复。同时，含有代替1，3-丁二醇的甘油的乳霜4被发现与乳霜1和乳霜2相比，具有稍低的促进光亮度恢复的效果。即，乳霜1和乳霜3(它们含有二价多元醇例如1，3-丁二醇和1，2-戊二醇)被认为具有优异的预防/改善色素沉着的作用。

[0066]本发明的化妆品或者准药品还被证实是非常安全的，因为本发明全部的乳霜1-5对于所施用的部位没有产生不利的反应。

[0067]<测试实施例4>正常人类黑素细胞酪氨酸酶活性抑制测试

使用细胞刮刀来收集培养在用于培养黑素细胞的培养基(培养基254，来自Kurabo Industries Ltd.)中的人类正常黑素细胞(来自KuraboIndustries Ltd.)，并使用PreteoExtract^TM亚细胞蛋白抽提试剂盒(Calbiochem)从该细胞中萃取，由此产生一种蛋白质溶液，其用作粗的酪氨酸酶蛋白质溶液。测量该酪氨酸酶蛋白质溶液的多巴-氧化活性来评价化合物(1)的酪氨酸酶活性抑制作用。

用作培养基的0.1％多巴溶液是通过将L-β-(3，4-二羟基苯基)丙氨酸(L-DOPA)以0.1(w/v)％的浓度溶解在10mM磷酸钠缓冲液(pH6.8)中来制备的。将粗酪氨酸酶蛋白质溶液(制备成1-5μg/80μL)以80μL/孔的量供给到96-孔板中，并将化合物(1)在DMSO中的10μM、100μM和1000μM的溶液以20μL/孔的量分别加入到三个孔的每个中。同时，作为正对照，将苯基硫脲(也称为酪氨酸酶活性抑制剂)在DMSO中的10μM，100μM和1000μM的溶液以20μL/孔的量以上述相同的方式分别加入到不同的三个孔的每个中。此外，作为对照，将DMSO以20μL/孔的量加入到另外三个不同的孔的每个中。在100μL的每个0.1％多巴溶液加入到每个含有上述的测试溶液的孔之后，立即使用板检测仪(plate reader)测量450nm的吸光率并定义为0分钟值。将该96-孔板在板检测仪中37℃培养10分钟，并再次测量450nm的吸光率并定义为10分钟值。将通过每个孔的0分钟值减去10分钟值计算出来的值定义为0→10分钟吸光率变化值，并将对照的0→10分钟吸光率变化值的平均值定义为100％，随后，在用不同浓度的测试物质处理的情况中测量多巴-氧化活性。结果表示在表5中。

[0068]

表5

[0069]在加入化合物(1)的情况中，不管所加入的化合物(1)的浓度如何，多巴-氧化活性与对照的活性几乎相同。即，发现化合物(1)不抑制从正常人类黑素细胞中萃取的酪氨酸酶的活性。所添加的化合物(1)的浓度100μM高于在测试实施例1中所示的占80％或者更多的培养细胞系统的抑制黑色素形成的化合物(1)的浓度25倍。另一方面，所加入的苯基硫脲的浓度越高，多巴-氧化活性越低，其揭示了苯基硫脲具有抑制酪氨酸酶活性的作用。这暗示了化合物(1)通过完全不同于直接抑制酪氨酸酶的机理来抑制黑色素形成，其不同于普通的黑色素形成抑制剂。这样的机理被认为包括酪氨酸酶和酪氨酸酶相关的蛋白质例如Trp-1和Trp-2的表达的抑制，通过细胞中的新陈代谢产物对酪氨酸酶活性的间接抑制，和已产生的黑色素转移的抑制。

[0070]<测试实施例5>酪氨酸酶和酪氨酸酶相关的蛋白质(Trp-1，Trp-2)表达的测定

制备7×10⁴细胞/mL的人类正常黑素细胞(来自Kurabo IndustriesLtd.)在用来培养黑素细胞的培养基(培养基254，来自Kurabo IndustriesLtd.)中的细胞悬浮液，并以10mL/皿的量接种到φ10-cm细菌培养皿中，将该细胞在CO₂培养器(37℃，5％ CO₂)中进行培养。第二天，除去所述的培养基，并以10mL/皿的量加入用于培养含有2μM或者5μM化合物(1)的黑素细胞的培养基或者用于培养黑素细胞(对照)的培养基，随后在CO₂培养器中培养72小时。在72小时的培养后，除去所述的培养基，并将该细胞用磷酸盐缓冲盐水(PBS)清洗，使用细胞刮刀收集细胞。将一种蛋白质萃取溶液(0.1％ NP-40，0.01％ SDS，10mM磷酸钠缓冲液(pH6.8)，蛋白酶抑制剂)加入到所述的细胞球中来悬浮该细胞，并将悬浮液在4℃摇动1小时。将所得物在4℃和15000rpm离心分离10分钟，并收集表面浮物并用作粗蛋白质萃取液。

根据常规方法对该粗蛋白质萃取液(5μg)进行SDS-聚丙烯酰胺电泳，并将电泳后的蛋白质转移到PVDF隔膜，其被浸入到含3％脱脂乳的TPBS(含有0.1-20％(w/v)的PBS)中1小时(室温)。用TPBS清洗所述隔膜并使其和TPBS反应1小时(室温)，该TPBS含有能够识别酪氨酸酶或者酪氨酸酶相关的蛋白质的初次抗体。所用的抗体和稀释比例如下。

酪氨酸酶；抗酪氨酸酶(H-109)多细胞系抗体(兔子)，(来自Santa CruzBiotechnology，Inc.，SC-15341)，稀释到1/400

Trp-1；抗Trp-1(H-90)多细胞系抗体(兔子)，(来自Santa CruzBiotechnology，Inc.，SC-25543)，稀释到1/400

Trp-2；抗Trp-2(D-18)多细胞系抗体(山羊)，(来自Santa CruzBiotechnology，Inc.，SC-10451)，稀释到1/250

[0071]用TPBS清洗所述隔膜并使其和含有二次抗体的TPBS反应1小时(室温)。所用的抗体和稀释比例如下。

酪氨酸酶和Trp-1；ECL抗兔子IgG，山葵过氧化物酶-连接的特定种类的整个抗体(驴子)，来自Amersham Biosciences，NA934)，稀释到1/15000

Trp-2；抗山羊IgG，山葵过氧化物酶-成对的抗体(驴子)，(来自SantaCruz Biotechnology，Inc.，SC-2033)，稀释到1/7500

用TPBS清洗所述隔膜，并使用ECL Plus免疫蛋白印迹测试系统测定蛋白质。使用装备有化学发光探测系统的冷却的CCD照相机(来自ATTO Corporation)进行探测。结果表示在图1中。

[0072]化合物(1)不影响酪氨酸酶和酪氨酸酶相关的蛋白质(Trp-1，Trp-2)的表达量，甚至当化合物(1)的浓度是5μM时(其是一种高于在<测试实施例1>中所证实的具有黑色素形成抑制作用浓度的浓度)也不产生影响。该结果进一步证实了所述的黑色素形成抑制作用是通过一种新颖的机理来提供的。

[工业适用性]

[0073]本发明提供了一种皮肤增白化妆品，其对于预防/改善黑变病例如皱纹/雀斑非常有效。此外，本发明的化妆品可以安全的使用。

本发明可以应用于皮肤增白化妆品或者皮肤增白准药品。

Claims (6)

1.一种皮肤增白化妆品，其包含下面的通式(I)表示的化合物和/或其盐:

     通式(I)

其中，R¹和R²独立的表示具有3-7个碳原子的仲或者叔烷基基团；R³表示氢原子、具有1-4个碳原子的烷基基团或者具有1-4个碳原子的烷氧基基团。

2.根据权利要求1的皮肤增白化妆品，其中所述的用通式(I)表示的化合物是下面的通式(II)表示的化合物:

      通式(II)

其中，R¹和R²独立的表示具有3-7个碳原子的仲或者叔烷基基团。

3.根据权利要求2的皮肤增白化妆品，其中用通式(II)表示的化合物是2，6-二叔丁基-4-(2′-噻吩甲酰)苯酚(化合物(1))。

    化合物(1)

4.根据权利要求1-3任何一项的皮肤增白化妆品，其中该皮肤增白化妆品用于黑变病的预防/改善。

5.根据权利要求1-4任何一项的皮肤增白化妆品，其中通式(I)所示的化合物的含量是0.0001-3质量％。

6.根据权利要求1-5任何一项的皮肤增白化妆品，其进一步包含至少一种多元醇，其选自1，3-丁二醇、二丙二醇、异戊二醇、1，2-戊二醇、2，4-己二醇、1，2-己二醇和1，2-辛二醇。