TW200491B - - Google Patents

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經滴部中央標準局員工消f合作社印繁 200491 ΑΓ, _Η(；_ 五、發明説明（'） 發明背軎 發明範_.圍·· 本發明相關於一種新的凝血酶結合物質、一编碼此凝 血酶結合物質之胺基酸序列之DNAH段，一包括該DNAH 段之重組載體，一載有該重組載體之轉型細胞，一包括 該具有血小板凝聚抑制活性之凝血酶結合物質之抗凝劑 组成物，及該凝血酶結合物質之製法。 發明背暑描沭： 我們做了許多的試驗以閫明凝血酶在血液凝固控制機 轉中作為蛋白分解酶的角色以及闌明血液凝固機轉中的 大部份。 在[N. L. Esion et al, J. Biological Chemistry, 2 5 7 , ( 2 ) , 8 5 9 - 8 6 4 ( 1 9 8 2 )]中有一則報告提到凝血酶 活化C蛋白的過程即作用在纖雒蛋白溶解及抗凝条统中 同時還有一種待定的物質存在兔肺組織萃取液中，其可 作為一種具有活化機能的輔酶。此種物質稱為血栓調節 素。 N. Aoki,等人報導到一種人類血栓調節素，可從人 類胎盤分離出來，Esmon等人丨Thromb. Res., U,353-364 (1985)]報導到，在未還原的狀況下其分子量約為 71,㈣0，其待性與血栓調節素類似。 在[J . C 1 i η · I n v e s t ·， , 9 8 7 - 9 9 1 ( 1 9 8 5 )]中報導 到I.Mar uyama等人把從人類胎盤分離出來分子量約為 ----------------f-------裝 ------.玎-----{ %»| *.·Λ i^l·^1''-"面之：;,&'(ί項冉塡寫本W) 本紙張尺Λ適用中阀國家標準（CNS)甲4规格（21ϋ X 297么、釐） •S] .9.20,000 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 〇〇49i = 五、發明説明（>) 75, 000的人類血栓諏節素之活性與上述兔子血清諏節素 之活性相比較。結果為二種血栓調節素之活性均相等。 δ [ J . Clin. Invest. , 7_6 , 2 1 7 8 - 2 1 8 1 ( 1 9 8 5 )]中 H. Ishii等人的報告說人血漿及人尿中均含有一些具有與 血栓調節素相同活性的物質，此血漿中物質之分子量為 63,000及54,000〇 本發明者先前亦發現了二種凝血酶結合物質於人尿中 ,其不同於前逑之物質；為在未還原狀況下具有較小之 分子量，即約39,000及31,000。本發明者對這些物質提 出專利申諳（日本專利特開（公開）No. 146898/1988) 〇 而且，本發明者將從人尿及衍生自人體組織'之細胞培 養液中分離出兩型凝血酶結合物質（A)及（B),並建立了 一套在穩定狀況下可大置生産此凝血酶結合物質之步驟 〇 本發明者先前對此凝血酶結合物質及其製法提出專利 申諳（歐洲專利公報No.455, 681)。 本發明者以重組DNA技術（r-ϋΤΜ)得到由人尿衍生之凝 血酶結合物質且對此製法提出專利申請（日本專利申請 No. 54446/1991 ) 〇 在[Κ· T. Preissner et al, J. Biological Chemistry, 2_6_5 , 4 9 1 5 - 4 9 2 2 ( 1 9 9 0 )]中報導到從兔肺 中所得之血拴調節素已知有增加抗凝血酶m之活性。在 -4 - (冰tsr···!背.§ 之;i*-'FJf!再填寫本頁) .丨裝. 訂. 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4蜆格（210 X 297 乂、货） 81.9.20,000 200491 ΑΓι ΗΓ» 明 説 明 發 五 節 3¾ 栓 血 到 得 法 無 牛 從 說 導 報 則 中 在 外 另 ο 素 aa- ， 栓 S to e 血 R 之 . 得ys 所ph 盤10 丨 B 胎 類 〇 B β 人性 h 從活OC 説之 B 導ΠΙ， 報酶al 則血 t 中凝e 1 抗wa 0)制Na 99抑. 1 ϊ K /-V 由曰 6 而在 12反且 7-素而 11節 産 m 生酶 術血 作凝 操抗 因加 基增 以司 J—jl 人種 吾 一 説 ， 導素 報節 中調 )]栓 90血 19性 < 溶 37可 -7知 9 J 2 已 7 I 種ι’ι 一 一 171 之 在 中液 1_ -1 )血’ 3 J 8 的 9 i 1 色 /V 角 2 4 要 2 E 2 望 -1為 38板 2 、 2 WJ * 二 〇 血 能 81、在 功251知 此，已 具ry素 不 S 節 則 e 調 I e 種 h 桂 一 C血 另al種 πglc一一 性og這 活 〇 到 之 B 説 腺 血被 有 制物 具 抑合 是 及結 不 性酶 而 活血 , 之凝 能ΠΙ他 功 酶其 的 血及 固 凝素 凝 抗節 酶 進調 血 β 促栓 凝應能血 制效有類 抑的要人 有固需的 具凝們性 中酸我活 。 統磷，聚來要 糸二此凝出摘 固甘因板明明 凝核 小發發 到 D 找定 ，待 究合 研結 的藉£3 泛入段 廣併一 極，之 手體物 著載合 即組結 者重酶 明種血 發一凝 本以中 ， 是床 下其人 況 ，出 情株碼 此形編 在轉可 種於 之 段 片 端 ("""'""面之汴&氺項再填寫本頁) 九 .裝. -IT. 經濟部中央標準局R工消費合作杜印纪 之板 DN生小 段衍血 一 尿制 之人抑 得生及 所産性 段 片 形 轉 胞 細 主 宿 酶 血 凝 抗 加 曾 IX 和 物 〇 合能 結功 酶之 血聚 凝凝 能活 株之 形 m 轉-此 本紙張义度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297 乂缝） 81.9.20,000 200491 五、發明説明（4 ) 本發明之目的即為提供一種新的凝血酶結合物質其具 有以下之胺基酸序列（以下稱為序列A者），並提供一 段DNAM段具有编碼序列A之核甘酸序列，和一種包括 該DNA片段及一可複製之載鼸之重組載醱，和一種載有 此重組載體之轉形細胞。 <序列A > 裝. *1T_

AlaProAlaGluProGlnProGlyGlySorGlnCysVa 1G hill isAspCystMu^A ini ou TyrProGlyProAlaThrPheLeuAsnAlaSerGInlIcCysAspGlyl.euAryGl yH is LeuMetThrValArgSerSerValAlaAlaAspVa11leSerLeuLcuLeuAsnGlyAsp GlyGlyValGlyArgArgArgLeuTrpIleGlyLeuGInLeuProProGlyCysGlyAsp ProLysArgLeuGlyProLeuArgGlyPheGInTrpValThrGlyAspAsnAsnThrSer TyrSerArgTrpAlaArgLeuAspLeuAsnGlyAlaProLeuCysGlyProLeuCysVa1 AlaValSerAlaAlaGluAlaThrValProSerGluProI1eTrpGluGluGlnGlnCys GluValLysAlaAspGIyPheLeuCysGluPheHisPheProAlaThrCysArgProLeu AlaValGluProGlyAlaAlaAlaAlaAlaValSerlleThrTyrGlyThrProPheAla AlaArgGlyAlaAspPheGlnAlaLeuProValGlySerSerAlaAlaValAlaProLeu GlyLeuGInLeuMetCysThrAlaProProGlyAlaValGlnGlyHisTrpAlaArgGlu AlaProGlyAlaTrpAspCysSerValGluAsnGlyGlyCysGluHisAlaCysAsnAla IleProGlyAlaProArgCysGlnCysProAlaGlyAlaAlaleuGlnAldAspGIyArg SerCysThrAlaSerAlaThrGlnSerCysAsnAspLeuCysGlutlisPheCysVaiPro 經濟部中央標準局員工消費合作社印" -6 - 本紙張尺度適用中家標準（CNS)甲4規格（以(丨X 297公楚） 81.9.20,000 200491 A(； 經濟部中央標準局w工消费合作社印製 五、發明説明（r ) AsnProAspGInProGlySerTyrScrCysHetCysGlulhrGlyT yrArgleuAlaAIn AspGlnHisArgCysGluAspVn lAspAspCysI leLeuGluProSorl^r'oCystVoi'] In ArgCysValAsnThrGlnGlyGlyPheGluCysHisCysTyrProAsnTyrAspI euVa1 AspGIyGluCysValGluProValAspProCysPheArgAlaAsnCysGluTyrGInCys GlnProLeuAsnGlnThrSerTyrLeuCysVaICysAlaGluGlyPhoAlaProIlePro HisGluProHisArgCysGInMetPheCysAsnGInThrAlaCysProAlaAspCysAsp ProAsnThrGInAlaSerCysGluCysProGluGlyTyrIleLeuAspAspGlyPhe)le CysThrAspI leAspGluCysGluAsnGlyGlyPheCysSerG lyVa ICysll i sAsnl.ntj ProGlyThrPheGluCysIleCysGlyProAspSerAlaLeuVelArgHisIleGlyThr AspCysAspSerGlyLysValAspXl X2 Y1 SerGlySerGlyY2f 其中XI及X2代表酸性胺基酸，而Y1及Y2則代表任一胺基 酸。 本發明之另一目的是提供一種抗凝劑組成物，包括上 述凝血酶結合物質，同時也具有抑制血小板凝聚之活性 0 而且本發明還有另一目的，就是提供一種製備上逑凝 血酶結合物質的方法。 至於本發明之其他目的，特性及優點即將顯明於以下 說明中： 圖案簡沭 圖1為一說明本發明之表現載醭，pCDM-GAG-UTMl及 PCMM-GAG-UTM2 的結構圖。 發明詳沭及參者音俐 本發明凝血酶結合物質之製備，可依以下過程來進行 -7 - (靖1閲‘垣(|而之：-^*事^再場.^本頁} .裝. 訂. 本紙張又度適用中园國家標準（CNS〉甲4規格（21(! X 297公绝） 81.9.20,000 2〇〇49i Λ(； ΙίΓ. 五、發明説明（) 。首先楔板DNA為由以滴當限制内切核酸酶切斷人類胎 盤基因組DN A而製得。模板DN A為使用以已知人類血栓調 節素基因之核甘酸序列所合成之DNA引子為探針所筛選 〔Shirai, T 等人，J . Biochem，1_0J，2 8 1 - 2 8 5 ( 1 9 8 8 ) 〕。由此産生之DHA以適當的限制内切核酸酶弄斷，且 將所得之DNA Η段與一選殖載體連接以轉形徹生物。由 轉形株萃取質體DNA並以限制内核酸酶處理以産生含有 1404個编碼衍生自人尿之凝血酶結合物質鹸基之DNA片 段。將一寡核甘酸具有编碼胺基酸序列， Xi X2 Y! SerGlySerGlyY2，之核甘酸序列，嵌人此 DNA片段，以取得含有本發明DNA片段之DNAMg。本發 明之DNA片段典型例證是具有如序列编號3及4號之核 甘酸序列。但本發明之DNA片段不受此限。任何一段可 编碼出本發明之標的物凝血酶結合物之胺基酸序列之 DNA片段，譬如，序列A,較佳為序列编號1及2,均包 括於本發明中。 欲構成一種重組載體，其中含有本發明之DMA片段者 ，可以將本發明之DNA片段與一可複製之表現型載體連 接而得。 (;!ν;κΓ.'ι-ϋΙ:1ί1;之..，"念卞項冉墙寫本TJ) 經濟部中央標準局®;工消费合作社印纪 是 以 菌們 體 桿它 載 腸要 型 大只 現 為， 表 型等 組 典等 重 <毒 則 胞病 ， 細物 質 咳钫 勿 原脊 合 •.椎 結 有， 酶 源毒 血 來病 凝 之蟲 産 體昆 生 載 ，0 效 型菌的有 現母製欲 表酵複若 >可 本紙張尺度適用中國國家標準（CN’S)甲4规格（210 X 297公釐） 81.9.20,000 200491 Λί； ________ 五、發明説明（7 ) 下⑴至⑺核甘酸序列所構成；由上至下為轉錄之順序β ⑴一段當作啓動子之核甘酸序列。 ⑵一段當作核糖體結合位置之核甘酸序列。 ⑶一段當作起始密碼的核甘酸序列。 ⑷一段可對訊號胜呔编碼的核苜酸序列》 ⑸一段可编碼出序列Α之胺基酸序列之核甘酸序列。 ⑹一段作為終止密碼之核甘酸序列。 ⑺一段作為添加聚A訊號之核甘酸序列。 質體DNA較好作為一載體，譬如一質體可自我增殖， 如：以大腸桿菌當作宿主微生物時，其可以轉形之哺乳 動物細胞表現所嵌人之基因。這種質體DNA包括質體於 大腸桿_中自我增生所需之核甘酸序列，如一做為ColEI 質體糸列複製子之核甘酸序列，一於哺乳動物細胞中做 為啓動子之核苜酸序列，一做為被轉形大腸桿菌選擇檫 記之基團，和一做為被轉形哺乳動物選擇標記之基因。 於一較佳具體例中，其再包括一種複製子核t酸序列， 如於哺乳動物細胞中作用之SV40 ori,多瘤病毒ori, 或HSV ori。可作為較佳之啓動區子包括：巨細胞病毒 ,SV4Q,多瘤病毒，牛乳頭狀瘤病毒，腺病毒，等等； 反錄病毒LTR ,如，MMTV; —金颶硫新質基因的啓動子 -----------------------裝-------訂-----ί^Γ « W 0- ('.J.«llt!«']4背面之注*事項再塡寫本頁) 經濟部中央標準局ΚΪ工消费合作社印¾ 徽類濕 康及 ， , , 因 因因基 基基抗 抗抗抵 抵抵素 素素徽 徽撇新 青氣有 苄，記 氨基標 有抗擇 記抵選 標素胞 擇徽細 選環物 的四動 ii-乳 桿因哺 腸基 。 大抗等 ，抵物 等素似 8K9.20.000 本紙張又度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（21ϋ X 297公釐） 200491 A(\ H(i 經濟部中央標準局資工消費合作社印κ 五、發明説明（3 ) 徽素B抵抗基因，胸腺嘧啶檄酶基因，二氫葉酸還原酶 基因，黃嘌昤-鳥棄嗦昤磷酸核糖轉移酶基因，及類似 物等。這些基因能單獼或合併二種以上來使用。 本發明之DNAH段藉由以適當的限制内切核酸酶切斷 含有此DNA片段之DNA,任意地，加入一適當連接子，並 將其與一已以適當限制内切核酸酶切斷之載體結合而可 偶合至上述之載體中。在此可用之限制内切核酸酶有 Eco RI, Sph I, P st I , Hind III, Bam HI, Xho I, Xba I，Ban III, Sma I, Nco I等。核甘酸之修飾型酶 有外核酸酶ID, Bal31, SI核酸酶，外核酸酶VK,緣豆 核酸酶，DN A聚合酶等均可使用之。而接合段如Eco RI 接合段，Sma I接合段，Nco I接合段，Bam HI接合段 ,Xho I接合段，Hind ΠΙ接合段，Pst I接合段，Sph I 接合段，Xbal I接合段等均可用之。 能大量産生重組載體及/或本發明之凝血酶結合物質 之轉形細胞可由將上逑方法所得之表現重組載體，以受 容細胞法，原生質體法，磷酸鈣共沉澱法，電穿孔法， DEAE葡聚糖法，lipofectin法等導人宿主細胞中而取得 β單細胞生物中如細菌和酵母培養之昆蟲細胞，培 養之脊椎動物細胞，及類似細胞均可作為生産轉形株之 宿主細胞。多種大腸桿菌Κ12之突變種，如：ΗΒ101, C 6 0 0 K, J Μ 1 0 1 , J Μ 1 0 3 , J Η 1 0 5 , J Μ 1 0 9 , Μ V 1 0 3 4 , Μ V1 18 4 ,MC1061/P3,及類似物等均可作為極佳的大腸捍®宿主 -1 0 - ----------------{-------裝 II----•玎-----^ • « «· -•''"閲'-1:而之;1*"^!冉塥寫本頁) 本紙張义度適用中阀國家標毕（CNS)甲4规格（2丨G X 297公梦） 81.9.20,000 200491

Afi H(； 經漓部中央標準局爲工消费合作社印製 五、發明説明（9 ) 細胞。可作為哺乳動物細胞極佳之宿主細胞有：cos細 胞，CH0細胞，L細胞，C127細胞，NIH3T3細胞，HeLa 細胞等細胞。 凝血酶結合物質可由培養轉形株而得，亦即從培養細 胞.或培養湯中萃取而得。許多天然或人造的培養基均能 用來培養變性細胞。培養基中最好是含有碩源的成份像 糖，酒精及有機酸之鹽類，及含有氮源成份像蛋白質混 合物，胺基酸，和銨鹽等；及含有無機鹽類等。另外， 雒生素與抗生素應和選擇性標記基因一樣最好均包括在 内。如果載體的表現型能控制的話，在細胞培養的過程 中則需增加一誘導表現的步驟。細胞培養好後，將培養 湯離心以分離培養液和細胞。而凝血酶结合物則積聚於 培養細胞中，再將培養細胞以冰凍一解凍方式破壞之， 再以超音波振盪，法式擠壓，酵素處理均一化等步驟處 理，而後凝血酶結合物再用EDTA，介面活性劑，尿素， 亞氨基甲二胺氯化氫等溶解之。 將含有凝血酶結合物的培養液或細胞萃取液放入管柱 色層分析則得純化的凝血酶結合物。層析法中像離子交 換層析法，親和層析法，或是像日本專利恃開（公開） No. 45398/1989中所述使用之單株抗體法，還有凝膠層 析法，等類似方法均可單獨或合併使用之。在我們所製 得的這些具有胺基酸序列為⑴及⑵的凝血酶結合物中均 具有下列特性： -1 1 - ----------------ί-------裝——----.玎-----^·νΗ • « (绮屯間''介面之事項冉塡寫本頁) 本紙張义度適用中围國家標苹（CNS〉甲4规格（2UJ X 297公贷） 81.9.20,000 2〇〇401 Λί； ΗΓ» 五、發明説明（ 為 列 序 之 酸 基 胺 得 可 列 序 之 酸 甘 核 中 •. 段 列 Η 序 A 酸DN 基於 肢基 者 以 下 況 2 : 狀 及量原 1 子還 號分在 编⑵ 為 得 測 法 泳 電 膠 凝 胺 醯 烯 丙 聚 為 Η Ρ 得 測' 法 泳 Ε 貝 Β 等 以 質 解 : 電 ： 黏性析 電雙分分按 r 等用糖依 cse ⑶ ⑷ 連與 相會 質糖 物多 合 性 結酸 酶種 血一 凝有 與中 可其 糖， 的看 上來 以序 個順 2 列 有排 看的 來酸 量基 子胺 連 目 丰 f^t!VJ,w;r]'曲之：i:?^Jfi冉塡寫本頁) 經濟部中央標準局tIH工消费合作社印妃 。處方 然劑安 劑次配 ，此極 凝每種 定在一 抗在這 而。為 之，。 況斤物 用末用 狀公合 射粉使 等 \ 結 注燥可 重克酶 為乾即 體毫血 作凍解 狀10凝 。。 常冷溶 症到明 性性較為水 之斤發 活活質態鹽 人公本 之之物型食 病 \ , 性III聚合佳理 按克狀 活酶凝結最生。應微症 之血板酶之或用均10何 酶凝小血用水射量為任 血抗血凝射餾注劑量發 凝加制之注蒸脈一劑引 ..抗增抑明為以靜每適會 用有有有發備，於然較不 作具具具本製時適雖，内 ⑸ 而方較而量 本紙張义度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（2U) X 297公分） 81.9.20,000 200491 ΑΓ. Η(； 五、發明説明（U ) 全之物質。 本發明之其他特性將於以下諸實例中詳述之，此寅例 雖僅供説明之用，但實際上本發明並不受限於此。 奮例 例1<選殖凝血酶結合物基因> 引子# 1具有序列编號5之序列，而引子# 2具有序列编 號6之序列可由使用一 DNA合成儀（ABI Model 381Α)參照 人類血栓調節素之核甘酸序列來合成[Shirai, T et al， J . Biochei, 1 0 3, 2 8 卜 2 8 5 ( 1 9 8 8 ) ]e DNA模板可由以 Bam DNA Η I切割人類胎盤基因組Λ( Clonefech公司之産品）而製 得。則基因放大可以在下述配方之反應液中進行，即用 速熱条统（Model QTS-10M: trademark,日本遣傳公司 製造）重復培養30回；每回包括培養於94 °C 2分鐘，50 °C 3分鐘，及72 °C 4分鐘，在此反應後，取一小部分反 應産物用洋菜凝膠電泳法來測定標的DNA帶狀的放大情 形。 經濟部中央標準局g工消t合作社印- <反應液> 蒸餾水 7 1撤升 緩衝液 10微升 dNTP 混合液（2·5πιΜ) 8徹升 引子 # 1 (20// Μ ) 5微升 引子 #2 (20 A Μ) 5撤升 DNA模板（1微克/徹升） 1微升 -13- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（21U X 297父楚） 81.9.20,000 ------^--------·--f-------裝-------訂-----ί'%「 {^"間-.背曲之d-事項再塡寫本頁) £00491 ΛΓ丨 ΗΓι 經滴部中央標準局賣工消费合作社卬" 五、發明説明（〇 ) Ampl iTag (5單位/撤升） 0 5徹升 *缓衝液.：0 . 1M氛化鉀 0 . 1 M Tris-HCl緩衝液（pH 8. 3) 0 . 1¾動物膠 1 5 π Μ氣化錢 以乙醇沉澱法收集反應液中之DNA,並以Xho I和Κρη I切割且施以洋菜凝膠電泳法得1 . 5 7 k b的X h ο I - Κ ρ η I 片段。Β外，用以選殖PUC 118之載體：[Vieira, J.和 Messing, J . , Methods E n z y m ο 1 . , 1 5 3, 3 - 1 1 (1987)] 以Hind II切開，與Xhol連接子連接，並再以Xho I及 Κρη I切開後以洋菜凝膠電泳法得載體片段。而後載體 片段與1.57 kb Xho, Ι-Κρη I片段接合且大腸桿菌MV 1 0 3 4 [Vieira, J.和 Messing, J . , Methods E n z y m ο 1 ., 1 5 3 , 3 - 1 1 ( 1 9 8 7 )]以此連接 DNA轉形。 從轉形株中举取出質體DNA ，並以 限制内切核酸酶 切開之。以此方式，選出6値具有嵌有衍生自人類血栓 諝節素基因之1.57 kb Xho Ι-Κρη I片段質體之選殖株。 於由此所得選殖株中嵌入片段之核甘酸序列測定中掲 露，各Μ段中有1到3値突變位置。其後，將來自選殖 株2之0.31 kb Xho I-Sma I片段，來自選殖株1之 0.65 kb Sma I-Mlu I片段，和來自選殖株4之0.62 kb Mlu I-kpn I片段（均無突變位置）與上述之載體片段 再結合，可得含有人類血栓調節素基因嵌入片段之質體 -1 4 - ^-------裝-------訂-----{^ W*_- (^t!y,''-'!背面之注*米項冉填·"本頁) 本紙張义度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（2U1 X 297公梦） 81.9.20,000 ΛΓ) 2〇〇4δί 五、發明説明（》$ ) pUCTM/XHO-KPN,以正確順序。 例2 <構築能表現凝血酶結合物質的載體> 為合併一段蒱糖胺聚糖附加位置至衍生自人尿凝血酶 結合物質胺基酸序列之羧基端的Asp上，乃分別合成以 SEQ ID Nos.7至12核甘酸序列之連接子$1至$6並磷酸化 各5 '-端。 pUCTM/Xho-Kpn以 Xho Ι-Κρη I切開以製得一 1.57 kb 衍生自人類血栓諝節素基因之Xho-Kpn I片段。此1.57 kb片段與·一已以Xho I切開並與連接子$1, $2, $3及$4 脱磷酸化之哺乳動物細胞表現載體CDM 8 (Invitrogen 公司産品）連接》此1.57 kbH段亦以Xho I切開並以連 接子$1, $2, $5，和$6脱磷酸化之CDM 8連接。大腸桿 菌 MC1061/P3 [Seed, B. and Aruffo， A., Proc. Natl A c a d . S c i .，U S A , 3 3 6 5 - 3 3 6 9 ( 1 9 8 7 ) j 以已連接 DNA轉形e從轉形株中萃取出質體DMAs並以限制内切核酸 酶切開以確定其嵌入之方向和位置。由8個顯示出正確 的嵌入方向和正確限制内切核酸酶輿圖之選殖株，以 Xho I切出含有本發明DNA片段之1.68 kb片段。發現所 有選殖株之核甘酸序列均具有SEQ ID No. 13或14之序列 ,故此確認表現載體均己正確構築。 由此取得本發明之表現載體命名為PCDM-GAG-UTM1及 pCDM-GAG-DTM2(围1),另外懷有載體之轉形株則命 名為大腸桿菌MC1061/P3 (PCDM-GAG-UTM1)和大賜桿菌 -1 5 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS>甲4规格（210 X 297公釐） -丨裝_ 訂· 上". 經濟部中央標準局B工消費合作社印製 81.9.20,000 2〇〇4δ1 ΒΓ. 經濟部中央標準局S工消费合作社印" 五、發明說明（》各） MC1061/P3 (PCDM-GAG-UTM2)〇 例3 <以培餐之晡乳動物細胞表現凝血酶結合物質> 以DEAE-涵聚糖法，使C0S7細胞被PCDM-GA6-UTM1或 PCDM-GAG-UTM2轉 ® 染[Seed, B. and Aruffo, Α.， Proc . Natl. Acad . S c i . , US A , 8 4., 33 65 -3369 (1987)]» 5X 10s的細胞接種到一掴60毫米的培養盤中 ，翌日，吸出培養液並加入2毫升含有10% Nu -血淸的 Dulbecco氏修飾最低必需培養基（DMEH)。將10撤克（1 微克 / 1 撖升）的 pCDM-GAG-ϋΤΜΙ 或 PCDM-GAG-UTM2 加入 1〇〇微升的10毫克/毫升DEAE-葡聚糖液（平均分子量： 5x l〇s Pharmacia的産品）於鹼性緩衝食鹽水的溶液中 ,再將此溶液與細胞培養液和撤升的2QnM氣I®混合在 一起。在37 Ό下培養4小時後，趿出培養基並加入2毫 升的10%DMS0 (溶於PBS中）。靜置此混合液於室溫2 分鐘後，吸出DMS0溶液，再加入3毫升含10% FCS的 DMEM,混合液培養於37°C24小時。以不含FCS的DMEM換 掉培養基後繼缠培養48小時。培養結束後收集所有之上 清液。 . 經上述步驟所得之培養基通過一傾含有單株抗體A-73 (日本專利特開（公開）No. 45398/1989, 2毫克IgG/ 毫升樹脂）的1毫升Sepharose4B(2毫克/ IgG /毫升樹 脂）管柱。沖洗管柱以⑴2毫升含0 . 1 Μ N a C 1的0 . 〇 2 Μ Tris-HCI 緩衝液（pH 7.4)。⑵ 20 毫升含 1Μ NaCl 及 0.05 -1 6 - ------— — — — — —----^-------1--- I I I ,?τ . > *· (¾;L·!V,·'V^^^,U之；i'-'#Jn"塡寫本I) 本紙張尺度適用中國园家標準（CNS)甲4規格（2】0 X 2耵釐） 81.9.20,000 200491* 經濟部中央標準局R工消费合作社印f 五、發明説明（，（） % T w e e η 2 0 的 〇 · 〇 2 Μ T r i s - H C ]緩衡液（P Η 7 Ο。⑶ 5 毫 升含lM NaCl的0.02Μ Tris-HCl缓衝液（pH 7.4)，接荖再 以5毫升含2M氣硫化納，5mM EDTA及1M NaCl的0.02M Tris-HCl緩衝液（ΡΗ 7·4)沖洗。洗出液再以含再以含 0.1Μ NaCl (pH 4.5)的50mM醋酸缓衝液透析並置入Mono -d Sepharose管柱以相同缓衝液冲洗及線型梯度0.1-2M NaCl於50nM醋酸緩衝液（PH 4.5)冲洗，即得純化的凝血 酶結合物質（r-GAG-UTMl 及 R-GAG-UTK2)。 例4 <以培養的哺乳動物細胞表現凝血酶結合物質> 以磷酸鈣法使CHO· K1細胞被PCDM-GAG-UTM1轉移感染 [Gorman, C. , "DNA Cloning" IRL Press, England, vol.立，143-190 (1985)]取 5X 10s CHO· K1細胞接種 在10釐米的培養盤内，翌日，更換培養基（即含10% FCS的Ham F12培養基，以下均稱培養基）。4値小時後 ，加人DNA與磷酸鈣之共沉澱物。此處使用之其沉澱物 為下述步驟所製備者：20徹克的PCDM-GAG-UTM1及1Q0毫 微克的抗新級素基因溶於450微升的1 mM Tris-HCl緩衝 液（pH 8.0)-0.1mM EDTA中，並與50撤升的2.5M氦化鈣 混合。再逐滴加入500撤升的液體：50mM HEPES (Pn 7 · 1 2 ) - 2 8 0 in Μ N a C 1-1 . 5 m Μ磷酸氫鈉β靜置一會後，此溶 液再加入細胞培養液培養2 4小時。更換新鮮的培養基後 再培養24小時；捺下來換以含400微克/毫升G418的選 擇培養基，二週後，所産生之選殖株轉移至24孔平板上 -17- ----------------^-------裝-------訂-----{% * > W * (请"阳--"而之;1-事項再塡寫本頁) 本紙張又度適用中HB1家標準（CN'S)甲4悅格（210 X 2‘J7公货） .9.20,000 /V;200431 ΗΓ» 經濟部中央標準局員工消費合作社卬繁 五、發明説明（4 ) 繼鑛培養到融合為止。從培養湯中收集上清液。定置分 析所分泌的凝血酶結合物質（r - G A G - ϋ Τ Μ 1 )以選擇能大量 生産的選殖株。對選取的選殖株以限制稀釋法再進行選 殖。即取得名為CH0-GUTM 1-8的轉形細胞，其存於發酵 研究中心，工業科技公司（FERM Ρ-3260)中。 取轉形細胞CH0-GUTM 1-8在培養基UC2G2 (Nissui藥 物公司的産品）含1¾ FCS的225平方釐米三角椎瓶中培 養使之融合，再換以50毫升不含FCS的UC202培養基。一 週後，收集培養上清液並加入等量不含FCS的新鮮培養 基，繼缠培養一週後，收集培養上清液並確定其中分泌 3-4微克/毫升的凝血酶結合物質。 與例3後面部份相同之步驟可得純化之凝血酶結合物質。 例5 <凝血酶結合物質之特性> 以 Laemmli氏法（Nature，227, 680-685)對純化之凝 血酶結合物質進行SDS-PAGE。按Matsudaira氏法[J. Biol . Che® . , 2_62_ (21), 10035-10038]蛋白質會轉到 PVDF膜上。讓PVDF膜在含0.1%牛血清蛋白及0.1M NaCl 的0 . 0 5 Μ T r i s - H C 1缓衝液（T B S )中於室溫反應2小時。使 液體流光後殘留物以T B S - 0 . 0 5 % T w e e η 2 0清洗之。再與 洋芥過氧化酶和單株抗體A - 6 0結合於Τ β S - 0 . 0 5 S； T w e e η 2 0的溶液在室溫中反應1小時。流放掉液體後殘留物以 0 · 0 5 % T w e η 2 0 - T B S清洗之，再加入5 0毫升含5毫克的 -1 8 - -'''""''•'ν^^^α^事屮再墒寫本1() 本紙張疋度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） 81.9.20,000 200491 ΗΓ» 五、發明説明（、7) 胺-9-乙基忭唑及25微克的30 %過氧化氫之醋酸緩衝液 (PH 5 . D )使其發色以確認其為荊糖胺聚糖附加物之廣帶 特性。 例6 r-UTM及r-GAG-UTMl與2(為本發明之凝血酶結合物質 ),每種取0.1微克/毫升加入5微升的軟骨酶（IOibU, Seikagaku Kogyo k.k.之産品）置於37°C下40分鐘，施 以與例5相同之免疫墨點法以確認有硫酸化軟骨膠型之 葡糖胺聚糖共價鍵存在於本發明之凝血酶結合物質中。 例7 <抗凝劑之活性> 本發明凝血酶結合物質中之r-UTM及r-GAG-UTMl與2各 取2.5撤克/毫升，與人類纖維蛋白原（2.5毫克/毫升 )和人類抗凝血酶ΠΙ (0或250徹克/毫升）混合在一起 ，並溶於5inM的CaCl 2溶液中。加入牛凝血酶（0 . 5 U/ 毫升）以測定凝血時間，結果列於表1。 經滴部中央標準局S工消费合作社印'- 表'1 對照組 r- UTM r-GAG-UTMl r- GAG-UTM2 (秒） (秒） (秒） (秒） AT I I I (-) 4 3.3 6 1.8 7 7.2 80.1 A T I I I (+ ) 4 9.5 8 0.8 >400 >400 -19- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 2ί)7公釐） 81.9.20,000 ΛΓ, Η(; 200491 五、發明説明〇?) (^4κ,-·!ϊ背而之-&'ρβ再塡寫本页) 表1證明本發明之凝血酶結合物質能與凝血酶結合而 延長血液凝固時間。其中亦顯示抗凝血酶ΠΙ具有特別顯 著的促進凝血酶結合物質之抗凝活性。 例8 <抗凝劑之活性> 取本發明凝血酶結合物質（9-90ηΜ)之r-ϋΤΜ (9-90ηΜ) ,r-GAG-UTMl，或 r-GAG-UTM2溶於含 Q.15M NaCl及牛繼 維蛋白原（1毫克/1毫升）的20mM Tris-HCl緩衝液（pH 7.4)中，再與牛凝血酶（18nM)混合以測定凝血時間。用 多種不同濃度的牛凝血酶做出校正曲線後以得知50 %的 抑制濃度（I C 5〇)。結果列於表2。 表 2 I C 5〇 ( π Μ ) r- UTH 80 r-GAG-UTMl 16 r-GAG-UTM2 15 例9 <抗凝劑之活性> 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本發明之物質（17ιιΜ)或r-DTM (17nM)溶於含牛纖維蛋 白原（1 毫克 / 毫升）及 0.15M NaCl 的 20mM Tris-HCl 之缓衝液（Ρ Η 7 . 4 )中。再與牛凝血酶（1 8 in Μ )混合以測定 凝血時間，結果列於表3。 -2 0 - 本紙張又度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（21(1 X L)97公釐） 81.9.20 000 200491 ΛΓ) ΗΓ, 五、發明説明Ο 9 ) 表 3 凝血時間（秒） 對照組 2 8.1 r-UTM 2 9.6 r-GAG-UTMl 3 0 0 .0 r-GA6-UTM2 2 9 5 .3 經濟部中央標準局R工消費合作社印5农 例1 0 <抑制血小板凝聚之活性> 本發明物（1 〇 — 6 - 1 0 — 8 Μ )之溶液8徹升及血小板豐 富血清（卩1^)2()0微升（製自兔耳靜脈），加入2#^(的腺 核甘二磷酸（A D Ρ〉測定血小板之凝聚。5 0 %的抑制濃度 ，即：本發明化合物能抑制A D P凝聚之濃度，以多種不 同濃度所做出之校正曲線得知，其中r-GAG-UTMl為2X 10- 7 Μ及 r-GAG-UTM2為 2.1X 10- 7 M。而 r-UTM顯示在 測試濃度（1 〇 — 6 - 1 〇 — 8 Μ )中，不具抑制凝聚活性。 例11〈血中濃度之改變〉 將一導管插入麻醉的Wistar母鼠之股大靜脈中，透過 導管迅速地輸入1毫克/毫升，公斤之測試化合物，r-GAG-UTM1及r-UTM^同時在用藥前及用藥後各1， 3, 6, 10 ,20, 30，60及12G分鐘時抽取0.1毫升混以肝素的血 液檢體，再取其血漿測定血中含藥濃度，血中濃度之測 -2 1 - 本紙張尺度適用中B國家標準（CNS)甲4规格（21U X 297么、釐） 81.9.20,000 200491 Λ(; ΗΓ. 五、發明説明（>。） 定是以一抗人類凝血酶結合單株抗體即三明治之酵素連 免疫吸附分析法進行β二種測試化合物均以單隔間的模 式來分析測得，其結果例於下表。 表 4 r-GAG-UTMl (n=3) r-UTM (n=5) T1 2 (min) 75.2±10·8 45·4±2.6 AUC (rain· μ g/nl) 1380±61 872±64 正如上表所說者本發明之凝血酶結合物可促進抗凝血 酶-111之活性亦可抑制血小板凝聚，而且其本身卽具有 抗凝血酶活性。故此，其可當作一有效之抗凝劑來使用 。而且，本發明之凝血酶結合物能廉價大量生産。 企企企企★★令★ ★ 士企令少企必+小必必必必小士必 个个个个个个个个个个个个♦个+令个♦♦个予个♦个个个个个 顯然地，本發明並不局限於上述教導而可有許多的修 飾及改變。因此，本發明之使用並不受限於申請專利範 圍中所陳述者。 ----------------1 -------裝------.玎 -· · ί^1:ν1Λ-"如之注-"項再埙.巧本页) 經漓部中央標準局員工消費合作社印52 -22- 本紙張疋度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（2〗0 X 297公梦） 81.9.20,000 2〇049i ΑΓ) I-------\U\_ 五、發明説明（) 1 ·序列逋號：1 2 ·序列長度：4 7 6 3 .序列類型：胺基酸 4 .序列位相：直線型 5 ·種類：蛋白質 . 6 ·序列

Ala Pro Ala Glu Pro Gin Pro Gly Gly Ser Gin Cys Val Glti llis /Vsp 5 10 15

Cys Phe Ala Leu Tyr Pro Gly Pro Ala Thr Phe Leu Asn Ala Ser Gin 2〇 25 30 -請^間·'·'''·"'背而之：;x&事項再填寫本頁) P5 s 3 A s cy

Ar u Le s o ♦Ί 4 Θ s Γ e s 95 r .4

Aia Ala Asp Val lie Ser Leu Leu Leu Asn Gly Asp Gly Gly Val Gly 5〇 55 60

Arg Arg Arg Leu Tr,p lie Gly Leu Gin Leu Pro Pro Gly Cys Gly Asp 65 70 75 80

Pro Lys Arg Leu Gly Pro Leu Arg Gly Phe Gin Trp Val Thr Glv Asp 85 90 g5

Asn Asn Thr Ser Tyr Ser Arg Trp Ala Arg Leu Asp Leu Asn Gly Ala 100 105 110

Pro Leu Cys Gly Pro Leu Cys Val Ala Val Ser Ala Ala Glu Ala Thr 115 120 125

Val Pro Ser Glu Pro lie Trp Glu Glu Gin Gin Cys Glu Val [ ys Ala 130 135 140 經濟部中央標準局員工消f合作社印來

Asp Gly Phe Leu Cys Glu Phe His Phe Pro Λ1(ί Thr Cys Arq Pro Leu 1^5 150 155 160

Ala Val Glu Pro Gly Ain Ala Ala Λ1λ ΛΙλ V.tI Sor ll〇 Thr lyv Glv 165 170 175

Thr f)ro Phe /Ua Ala Arg Gly Ala Λ邛 Phc Gin Mn l.cu Pro Vol Gly 180 185 ]g〇 81.9.20,000 本紙張又度適用中®國家標準（CNS)甲4規格（2】0 X 297公梦） Λ ί) Π (ί 經濟部屮央標準而只工消赀合作社印製 五、發明説明（Ρ) Ser Ser Ala Ala Val Ala 195 Pro Pro Gly Ala Val Gin 210 Trp Asp Cys Ser Val Glu 225 230 lie Pro Gly Ala Pro Arg 245 Ala Asp Gly Arg Ser Cys 260 Leu Cys Glu His Phe Cys 275 Ser Cys Met Cys Glu Thr 290 Cys Glu Asp Val Asp Asp 305 310 Arg Cys Val Asn Thr Gin 325 Tyr Asp Leu Val Asp Gly 340 - Arg Ala Asn Cys Glu Tyr 355 Leu Cys Val Cys Ala Glu 370 Arg Cys Gin Met Phe Cys 385 390 Pro Asn Thr Gin Ala Ser 405 Asp Gly Phe lie Cys Thr 420 Cys Ser Gly Val Cys His 435 Gly Pro Asp Ser Ala Leu 450 Gly Lys Val Asp Glu Asp 465 470

Pro Leu 200 Gly His 215 Asn Gly Cys Gin Thr Ala Val Pro 280 Gly Tyr 295 Cys lie Gly Gly Glu Cys Gin Cys 360 Gly Phe 375 Asn Gin Cys Glu Asp lie

Asn Leu 440

Gly Leu Gin Leu Trp Ala Gly Cys

Arg Glu 220

Met Cys Thr Ala 205 Ala Pro Gly Ala

Cys Pro 250 Ser Ala 265 Asn Pro Arg Leu Leu Glu Phe Glu 330 Val Glu 345 Gin Pro Ala Pro Thr Ala

Cys Pro 410 Asp Glu 425

Pro Gly His He Tyr Ser Gly Ser 忠Arg -24 h紙5艮尺度边用中國困家楳毕（CHS) TM規格（210X297公放）

Glu His 235 Ala Gly Thr Gin Asp Gin Ala Ala 300 Pro Ser 315 Cys His Pro Val Leu Asn lie Pro 380 Cys Pro 395 Glu Gly Cys Glu Thr Phe

Ala Cys Asn Ala 240 Ala Ala Leu Gin 255 Ser Cys Asn Asp 270 Pro Gly Ser Tyr 285 Asp Gin His Arg

Pro Cys Pro Gin 320 Cys Tyr Pro Asn 335 Asp Pro Cys Phe 350 Gin Thr Ser Tyr 365 His Glu Pro His

Gly Thr 糊 Gly Glu 475

Ala Asp Cys Asp 400 Tyr lie Leu Asp 415 Asn Gly Gly Phe 430 Glu Cys lie Cys 445 Asp Cys Asp Ser Λ (i ，S〇〇49i----— 五、發明説明（乃 經濟部屮央榣準局β工消费合作社印5i 1 .序列编號：2 2 .序列長度：4 7 6 3 .序列類型：胺基酸 4 .序列位相：直線型 5 .種類：蛋白質 6 .序列 Ala Pro Ala Glu Pro Gin Pro Gly Gly Ser Gin Cys Val Glu His Asp 5 10 15 Cys Phe Ala Leu Tyr Pro Gly Pro Ala Thr Phe Leu Asn Ala Ser Gin 20 25 30 lie Cys Asp Gly Leu Arg Gly His Leu Met Thr Val Arg Ser Ser Val 35 40 45 Ala Ala Asp Val lie Ser Leu Leu Leu Asn Gly Asp Gly Gly Val Glv 50 55 60 Arg Arg Arg Leu Trp He Gly Leu Gin Leu Pro Pro Gly Cys Gly Asp 65 70 75 80 Pro Lys Arg Leu Gly Pro Leu Arg Gly Phe Gin Trp Val Thr Gly Asp 85 90 95 Asn Asn Thr Ser Tyr Ser Arg Trp Ala Arg Leu Asp Leu Asn Gly Ala 100 105 110 Pro Leu Cys Gly Pro Leu Cys Val Ala Val Ser Ala Ala Glu Ala Thr 115 120 125 Val Pro Ser Glu Pro lie Trp Glu Glu Gin Gin Cys Glu Val Lvs Ala 13〇 · 135 140 Asp Gly Phe Leu Cys Glu Phe His Phe Pro Ala Thr Cvs Arq Pro Leu 145 150 155 160 Ala Val Glu Pro Gly Ala Ala Ala Ala Ala Val Ser lie Thr Tyr Glv 165 170 175 Thr Pro Phe Ala Ala Arg Gly Ala Asp Phe Gin Ala Leu Pro Val Gly !8〇 185 190 Ser Ser Ala Ala Val Ala Pro Leu Gly Leu Gin Leu Met Cys Thr Ala 195 200 205 -2 6 - 25 (請先閲請背而之注意事項孙碭寫本页) 裝< 訂- 本紙张尺度边用t國《家》準（CNS) T 4規怙（210 X 297公；Jt) 〇0049i A (i Π (; 經濟部屮央#準^员工消讣合作社印^ 五、發明説明（外） Pro Pro Gly Ala Val Gin Gly His Trp Ala Arg Glu Ala Pro Gly Ala 210 215 220 Trp Asp Cys Ser Val Glu Asn Gly Gly Cys Glu His Ala Cys Asn Ala 225 230 235 240 He Pro Gly Ala Pro Arg Cys Gin Cys Pro Ala Gly Ala Ala Leu Gin 245 250 255 Ala Asp Gly Arg Ser Cys Thr Ala Ser Ala Thr Gin Ser Cys Asn Asp 260 265 270 Leu Cys Glu His Phe Cys Val Pro Asn Pro Asp Gin Pro Gly Ser Tyr 275 280 285 Ser Cys Met Cys Glu Thr Gly Tyr Arg Leu Ala Ala Asp Gin His Arg 290 295 300 Cys Glu Asp Val Asp Asp Cys lie Leu Glu Pro Ser Pro Cys Pro Gin 305 310 315 320 Arg Cys Val Asn Thr Gin Gly Gly Phe Glu Cys His Cys Tyr Pro Asn 325 330 335 Tyr Asp Leu Val Asp Gly Glu Cys Val Glu Pro Val Asp Pro Cys Phe 340 345 350 Arg Ala Asn Cys Glu Tyr Gin Cys Gin Pro Leu Asn Gin Thr Ser Tyr 355 360 365 Leu Cys Val Cys Ala Glu Gly Phe Ala Pro lie Pro His Glu Pro His 370 375 380 Arg Cys Gin Met Phe Cys Asn Gin Thr Ala Cys Pro Ala Asp Cys Asp 385 390 395 400 Pro Asn Thr Gin Ala Ser Cys Glu Cys Pro Glu Gly Tyr lie Leu Asp 405 410 415 Asp Gly Phe He Cys Thr Asp He Asp Glu Cys Glu Asn Gly Gly Phe 420 425 430 Cys Ser Gly Val Cys His Asn Leu Pro Gly Thr Phe Glu Cys lie Cys 435 440 445 Gly Pro Asp Ser Ala Leu Val Arg His lie Gly Thr Asp Cys Asp Ser 450 455 460 Gly Lys Val Asp Asp Glu Ala Ser Gly Ser Gly Asp 465 470 475 26 本紙Λ尺度边用中明明家楳準（CNS) 1M規怙（210X297公Λ) ρ.α〇49ΐ_ ^ 五、發叫説叫 ].序列编號：3 2 .序列長度：14 2 8 3 .序列類型：核酸 4 .股型：雙股型 5 .序列位 相：直線 型 6 .種類： 互補型去 氣核糖核 酸到傳訊 ,核糖核酸 7 ·序列 GCACCCGCAG AGCCGCAGCC GGGT6GCAGC CAGTGCGTCG AGCACGACTG CTTCGCGCTC 60 TACCCGGGCC CCGCGACCTT CCT.CAATGCC AGTCAGATCT GCGACGGACT GCGGGGCCAC 120 CTAATGACAG T6C6CTCCTC GGTGGCT6CC GATGTCATTT CCTTGCTACT GAACGGCGAC 180 GGCGGCGTTG GCCGCCGGCG CCTCTGGATC GGCCTGCAGC TGCCACCC66 CTGC6GCGAC 240 CCCAAGC6CC TC666CCCCT 6CGCGGCTTC CAGTGGGTTA CGGGAGACAA CAACACCAGC 300 TATAGCAGGT GGGCACGGCT CGACCTCAAT GGGGCTCCCC TCTGCGGCCC GTTGTGCGTC 360 GCTGTCTCCG CTGCTGAGGC CACTGTGCCC AGCGAGCCGA TCTGGGAGGA GCAGCAGTGC 420 GAAGTGAAGG CCGATGGCTT CCTCTGCGAG TTCCACTTCC CAGCCACCTG CAGGCCACTG 480 GCTGTGGAGC CCGGCGCCGC GGCTGCCGCC GTCTCGATCA CCTACGGCAC CCCGTTCGCG 540 GCCCGCGGAG CGGACTTCCA GGCGCTGCCG GT6GGCAGCT CCGCC6CG6T 6GCTCCCCTC 600 GGCTTACAGC TAATGTGCAC CGCGCCGCCC GGAGCGGTCC AGGGGCACTG GGCCAGGGAG 660 GCGCCGGGCG CTTGGGACTG CAGCGTGGAG AACGGCGGCT GCGAGCACGC GTGCAATGCG 720 ATCCCTGGGG CTCCCCGCTG CCAGTGCCCA GCCGGCGCCG CCCTGCAGGC AGACGGGCGC 780 TCCTGCACCG CATCCGCGAC GCAGTCCTGC AACGACCTCT GCGAGCACTT CTGCGTTCCC 840 AACCCCGACC AGCCGGGCTC CTACTCGTGC ATGTGCGAGA CCGGCTACCG 6CTGGCGGCC 900 GACCAACACC GGTGCGAGGA CGTGGATGAC TGCATACTGG AGCCCAGTCC GTGTCCGCAG 960 CGCTGTGTCA ACACACAGGG TGGCTTCGAG TGCCACTGCT ACCCTAACTA CGACCTGGTG 1020 GACGGCGAGT GTGTGGAGCC CGTGGACCCG TGCTTCAGAG CCAACTGCGA GTACCAGTGC 1080 CAGCCCCTGA ACCAAACTAG CTACCTCTGC GTCTGCGCCG AGGGCTTCGC GCCCATTCCC 1140 經濟部中央標準局Α工消赀合作社印製 -27 - (請先閲-背而之注念事項再蜞窍本页) 本紙張尺度逍用中 aBTiMS^(CNS)«r4«m(210x2974；ab) P, Λ C Λ Λ (ί η « 五、發叫説明Pi) CACGAGCCGC ACAGGTGCCA GATGTTTTGC AACCAGACTG CCTGTCCAGC CGACTGCGAC 1200 CCCAACACCC AGGCTAGCT6 T6A6T6CCCT GAAGGCTACA TCCTGGACGA CGGTTTCATC 1260 TGCAC6GACA TCGACGAGTG CGAAAACGGC GGCTTCTGCT CCGGGGTGTG CCACAACCTC 1320 CCCGGTACCT TCGAGTGCAT CTGCGGGCCC GACTCGGCCC TTGTCCGCCA CATT6GCACC 1380 GACTGTGACT CCGGCAAGGT GGACGAGGAC TATAGCGGCT CTGGCGAG 1428 1 .序列编號：4 2 .序列長度：1 4 2 8 3 .序列類型：核酸 4 .股型：雙股型 5 .序列位相：直線型 6_種類：互補型去氣核糖核酸到傳訊核糖核酸 7 .序列 (請先閲讀背而之注意事項朴堝筠本页) 裝- 訂- 經濟部中央楛準，局员工消t合作社印Μ

GCACCCGCAG TACCCGGGCC CTAATGACAG GGCGGCGTTG CCCAAGCGCC TATAGCAGGT 6CTGTCTCCG GAAGTGAAGG GCTGTGGAGC GCCCGCGGAG GGCTTACAGC GCGCCGGGCG ATCCCT6GGG AGCCGCAGCC CCGCGACCTT TGCGCTCCTC GCCGCCGGCG TCGGGCCCCT GGGCACGGCT CTGCTGAGGC CCGATGGCTT CCGGCGCCGC CGGACTTCCA TAATGTGCAC CTTGGGACTG CTCCCC6CT6

GGGTGGCAGC CCTCAATGCC GGTGGCTGCC CCTCTGGATC GCGCGGCTTC C6ACCTCAAT CACTGTGCCC CCTCTGCGAG GGCTGCCGCC GGCGCTGCCG CGCGCCGCCC CAGCGTGGAG CCAGTGCCCA CAGTGCGTCG A6TCAGATCT GATGTCATTT GGCCTGCAGC CAGTGGGTTA GGGGCTCCCC AGCGAGCCGA TTCCACTTCC GTCTCGATCA GTGGGCAGCT GGAGCGGTCC AACGGCGGCT GCCGGCGCCG -28 -

AGCACGACTG GCGACGGACT CCTTGCTACT TGCCACCCG6 CGGGAGACAA TCTGCGGCCC TCTGGGAGGA CAGCCACCTG CCTACGGCAC CCGCCGCGGT AGGGGCACTG GCGAGCACGC CCCTGCAGGC

CTTCGCGCTC GCGGGGCCAC GAACGGCGAC CTGC66C6AC CAACACCA6C GTT6T6CGTC GCAGCAGTGC CAGGCCACTG CCCGTTCGCG GGCTCCCCTC GGCCAGGGAG GTGCAATGCG AGACGGGCGC 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 780 本紙張尺度边用中B B家榫毕(CNS>lM規怙（210x297公；《：) % Λ () Π Ο 經濟部屮央標準而员工消货合作杜印製 五、發明説明) TCCTGCACCG CATCCGCGAC GCAGTCCTGC AACGACCTCT GCGAGCACTT AACCCCGACC AGCCGGGCTC CTACTCGTGC ATGTGCGAGA CCG6CTACCG GACCAACACC GGTGCGAGGA CGT6GATGAC TGCATACTGG AGCCCAGTCC CGCTGTGTCA ACACACAGGG TGGCTTCGAG T6CCACTGCT ACCCTAACTA GACGGCGAGT GTGTG6AGCC CGTGGACCCG TGCTTCAGAG CCAACTGC6A CAGCCCCTGA ACCAAACTAG CTACCTCTGC 6TCTGCGCC6 A666CTTC6C CACGAGCCGC ACAGGTGCCA GATGTTTTGC AACCA6ACTG CCTGTCCAGC CCCAACACCC AGGCTAGCTG TGAGT6CCCT GAAGGCTACA TCCTGGACGA TGCACGGACA TCGACGAGTG CGAAAACGGC GGCTTCTGCT CCGG6GTGTG CCCGGTACCT TCGAGTGCAT CTGCG6GCCC GACTCGGCCC TTGTCCGCCA GACTGTGACT CCGGCAAGGT CGACGACGAG GCCAGCGGCT CTGGCGAC 1 .序列编號：5 2 .序列長度：2 1 3 ·序列類型：核酸 '4 .股型：單股 5 ·序列位相··直線型 6_種類：其他核酸，合成之去氣核糖核酸 7 ·序列 AGGGCCGGGC ACTTATAAAC T 1 .序列编號：6 2 .序列長度：2 1 3 ·序列類型··核酸 4 .股型：單股 5 .序列位相：直線型

CTGCGTTCCC GCTGGCGGCC GTGTCCGCAG CGACCT6GTG GTACCAGTGC 6CCCATTCCC CGACTGCGAC CGGTTTCATC CCACAACCTC CATTGGCACC 840 900 960 1020 1080 1140 1200 1260 1320 1380 1428 (請先閱讀背而之注意事項#堝寫本π) -29 - t紙張尺度边用中國Η家楳準（CNS) T4規格（210x297公址） 9 4 % Λπ 經濟部中央標準局βχ消費合作杜印¾ 五、發明説叫ue) 6 ·種類：其他核酸，合成之去氣核糖核酸 7 .序列

CCCAGTGGTC CAGTGACGTC A 1 .序列编號：7 2 .序列長度：3 9 3 .序列類型：核酸 4 .股型：單股 5 .序列位相：直線型 6.種類：其他核酸，合成之去氣核糖核酸 7 ·序列

CTTCGAGTGC ATCTGCGGGC CCGACTCGGC CCTTGTCCG 1 .序列编號：8 2 .序列長度：4 9 3 .序列類型：核酸 4 .股型：單股 5 .序列位相：直線型 6.種類：其他核酸，合成之去氣核糖核酸 7 .序列

ATGTGGCGGA CAAGGGCCGA GTCGGGCCCG CAGATGCACT CGAAGGTAC 1 .序列编號：9 2 .序列長度：6 5 3 .序列類型：核酸 -30 - 本紙Λ尺度边用中a Η家樣準（CNS) T4規格（210x297公址） (請先間讀背而之注*亊項孙碼寫木页) 裝· 訂' 200491

Λ G Π G 經濟部中央榀準局β工消评合作社印5i 五、發明説明) 4 .股型：單股 5 .序列位相：直線型 6 .種類：其他核酸，合成之去氣核糖核酸 7 .序列 CCACATTGGC ACCGACTGTG ACTCCGGCAA GGTGGACGAG GACTATAGCG GCTCTGGCGA 60 GTGAC 65 1 .序列编號：1 〇 2 .序列長度：6 3 3 .序列類型：核酸 4 .股型：單股 5 .序列位相：直線型 6.種類：其他核酸，合成之去氣核糖核酸 7 ·序列 TC6AGTCACT CGCCA6AGCC GCTATAGTCC TCGTCCACCT TGCCGGAGTC ACAGTCGGT6 60 CCA 63 1 .序列编號：11 2 .序列長度：6 5 3 .序列類型：核酸 4 .股型：單股 5 .序列位相：直線型 6.種類：其他核酸，合成之去氣核糖核酸 7 .序列 CCACATTGGC ACCGACTGTG ACTCCGGCAA GGTGGACGAC GAGGCCAGCG GCTCTGGCGA 60 CTGAC 65 (請先間讀背而之注*事項孙蜞寫本頁) 本紙張尺度边用中a ffl家《毕(CNS)T4規格（210x297公龙） Λ (i Π fi _ 五、發明説叫Ο) 1 .序列编號：]2 (請先間-背而之注意事項孙填寫本頁) 2 .序列畏度：6 3 ' 3 .序列類型：核酸 4 .股型：單股 5 .序列位相：直線型 6.種類：其他核酸，合成之去氣核糖核酸 7 .序列 ί TCGAGTCAGT CGCCAGAGCC GCTG6CCTCG TCGTCGACCT TGCCGGAGTC ACAGTCGGTG 60 CCA 63 1 .序列编號：1 3 2 .序列長度：1 680 3 .序列類型：核酸 4 .股型：雙股 5 .序列位相：直線型 6 ·種類：互補型去氣核糖核酸到傳訊核糖核酸 7 .序列之待性：， 特性之像徴性名稱：Si g胜 位置：1 9 0 , 2 4 3

測定特性之方法：S 經濟部屮央橾準而A工消扑合作杜印5i 持性之像擞性名稱：mat胜 * 位置：2 4 4 , 1 6 7 1

測定特性之方法：S 8 .序列 本紙張尺度遑用中a Η家榣毕（CNS)T4規格（210x297公;!t) 經濟部屮央標準局只工消货合作社印Μ 五、發明説明（i/) CTCGAGCCCT G6CCGATCCG CATGTCAGAG GCTGCCTCGC AGGGGCTGCG C6CA6CGGCA 60 AGAAGTGTCT GGGCTGGGAC GGACAGGAGA GGCTGTCGCC ATCGGCGTCC TGTGCCCCTC 120 TGCTCCGGCA CGGCCCTGTC GCAGTGCCCG CGCTTTCCCC GGCGCCTGCA CGCGGCGCGC 180 CTGGGTAAC ATG CTT GGG GTC CTG GTC CTT GGC GCG CTG GCC CTG GCC GGC 231 Met Leu Gly Val Leu Val Leu Gly Ala Leu Ala Leu Ala Gly -18 -15 -10 -5 CTG GGG TTC CCC GCA CCC GCA GAG CCG CAG CCG GGT GGC AGC CAG TGC 279

Leu Gly Phe Pro Ala Pro Ala Glu Pro Gin Pro Gly Gly Ser Gin Cys 1 5 10 GTC GAG CAC GAC TGC TTC GCG CTC TAC CCG GGC CCC GCG ACC TTC CTC 327

Val Glu His Asp Cys Phe Ala Leu Tyr Pro Gly Pro Ala Thr Phe Leu 15 20 25 AAT GCC AGT CAG ATC TGC GAC GGA CTG CGG GGC CAC CTA ATG ACA GTG 375

Asn Ala Ser Gin lie Cys Asp Gly Leu Arg Gly His Leu Met Thr Val 30 35 40 CGC TCC TCG GTG GCT GCC GAT GTC ATT TCC TTG CTA CTG AAC GGC GAC 423

Arg Ser Ser Val Ala Ala Asp Val lie Ser Leu Leu Leu Asn Gly Asp 45 50 55 60 GGC GGC GTT GGC CGC CGG CGC CTC TGG ATC GGC CTG CAG CTG CCA CCC 471

Gly Gly Val Gly Arg Arg Arg Leu Trp lie Gly Leu Gin Leu Pro Pro / 65 70 75 GGC TGC GGC GAC CCC AAG CGC CTC GGG CCC CTG CGC GGC TTC CAG TGG 519

Gly Cys Gly Asp Pro Lys Arg Leu Gly Pro Leu Arg Gly Phe Gin Trp 80 85 90 GTT ACG GGA GAC AAC AAC ACC AGC TAT AGC AGG TGG GCA CGG CTC GAC 567

Val Thr Gly Asp Asn Asn Thr Ser Tyr Ser Arg Trp Ala Arg Leu Asp 95 100 105 CTC AAT GGG GCT CCC CTC TGC GGC CCG TTG TGC GTC GCT GTC TCC GCT 615

Leu Asn Gly Ala Pro Leu Cys Gly Pro Leu Cys Val Ala Val Ser Ala 110 115 120 GCT GAG GCC ACT GTG CCC AGC GAG CCG ATC TGG GAG GAG CAG CAG TGC 663

Ala Glu Ala Thr Val Pro Ser Glu Pro lie Trp Glu Glu Gin Gin Cys 125 130 135 140 雜 33 — 本紙»尺度遑扣中国國家«準（CNS) Τ4規怙（210x297公;«：) (請先間筇背而之注意事項Λ-填筠木頁) 裝- 線· 公〇〇4沾 Λ ί) IK； 五、發丨説明O ) GAA GTG AAG GCC GAT GGC TTC CTC TGC GAG TTC CAC TTC CCA GCC ACC Glu Val Lys Ala Asp Gly Phe Leu Cys Glu Phe His Phe Pro Ala Thr 145 150 155 TGC A66 CCA CTG 6CT GTG GAG CCC GGC GCC GCG GCT GCC GCC GTC TCG Cys Arg Pro Leu Ala Val Glu Pro Gly Ala Ala Ala Ala Ala Val Ser 160 165 170 ATC ACC TAC GGC ACC CCG TTC GCG GCC CGC GGA GCG GAC TTC CAG GCG He Thr Tyr Gly Thr Pro Phe Ala Ala Arg Gly Ala Asp Phe Gin Ala 175 180 185 CTG CCG GTG GGC AGC TCC GCC GCG GTG GCT CCC CTC GGC TTA CAG CTA Leu Pro Val Gly Ser Ser Ala Ala Val Ala Pro Leu Gly Leu Gin Leu 190 195 200 ATG TGC ACC GCG CCG CCC GGA GCG GTC CAG GGG CAC TGG GCC AGG GAG Met Cys Thr Ala Pro Pro Gly Ala Val Gin Gly His Trp Ala Arg Glu 205 210 215 220 GCG CCG GGC GCT TGG GAC TGC AGC GTG GAG AAC GGC GGC TGC GAG CAC Ala Pro Gly Ala Trp Asp Cys Ser Val Glu Asn Gly Gly Cys Glu His 225 230 235 GCG TGC AAT GCG ATC CCT GGG GCT CCC CGC TGC CAG TGC CCA GCC GGC Ala Cys Asn Ala He Pro Gly Ala Pro Arg Cys Gin Cys Pro Ala Gly 240 245 250 c β 6 τ s 2 A 3 c 1 G A c Γ c h A T c s G y T c c Γ c Θ T s c 90 G Γ 6 c A 2 Gy G 1 G G CP As G A A a c 1 G A G n A * c G G u 5 τ β 5 c L 2 c d c 1 G A c d c 1 G η Α Ί c G G Γ c h A τ G 3 cl TCC T6C AAC GAC CTC TGC GAG CAC TTC TGC GTT CCC AAC CCC GAC CAG Ser Cys Asn Asp Leu Cys Glu His Phe Cys Val Pro Asn Pro Asp Gin 270 275 280 CCG GGC TCC TAC TCG TGC ATG TGC GAG ACC GGC TAC C6G CTG GCG GCC Pro Gly Ser Tyr Ser Cys Met Cys Glu Thr Gly Tyr Arg Leu Ala Ala 285 290 295 300 經濟部屮央榣準而员工消听合作社印製 GAC CAA CAC CGG TGC GAG GAC GTG GAT GAC TGC ATA CTG GAG CCC AGT Asp Gin His Arg Cys Glu Asp Val Asp Asp Cys He Leu Glu Pro Ser 305 310 315 CCG TGT CCG CAG CGC TGT GTC AAC ACA CAG GGT GGC TTC GAG TGC CAC Pro Cys Pro Gin Arg Cys Val Asn Thr Gin Gly Gly Phe Glu Cys His 320 325 330 TGC TAC CCT AAC TAC GAC CTG GTG GAC GGC GAG TGT GTG GAG CCC GTG Cys Tyr Pro Asn Tyr Asp Leu Val Asp Gly Glu Cys Val Glu Pro Val 335 340 345 —34 - 711 759 807 855 903 951 999 1047 1095 1143 1191 1239 1287 (請先閲-背而之注意事項孙填寫本頁) 裝* 訂_ 線- 本紙AL尺度边用中a«家榀準（CNS)T4規怙（210X25)7公Λ) 五、發明説明（3^) Λ ί) Η (ί 經濟部屮央標準局β工消奸合作杜印製 GAC CCG TGC TTC AGA GCC AAC TGC GAG TAC CAG TGC CAG CCC CTG AAC 1335 Asp Pro Cys Phe Arg Ala Asn Cys Glu Tyr Gin Cys Gin Pro Leu Asn 350 355 360 CAA ACT AGC TAC CTC TGC GTC TGC GCC GAG GGC TTC GCG CCC ATT CCC 1383 Gin Thr Ser Tyr Leu Cys Val Cys Ala Glu Gly Phe Ala Pro lie Pro 365 370 375 380 CAC GAG CCG CAC AGG TGC CAG ATG TTT TGC AAC CAG ACT GCC TGT CCA 1431 His Glu Pro His Arg Cys Gin Met Phe Cys Asn Gin Thr Ala Cys Pro 385 390 395 GCC GAC TGC GAC CCC AAC ACC CAG GCT AGC TGT GAG TGC CCT GAA GGC 1479 Ala Asp Cys Asp Pro Asn Thr Gin Ala Ser Cys Glu Cys Pro Glu Gly 400 405 410 TAC ATC CTG GAC GAC GGT TTC ATC TGC ACG GAC ATC GAC GAG TGC GAA 1527 Tyr lie Leu Asp Asp Gly Phe He Cys Thr Asp lie Asp Glu Cys Glu 415 420 425 AAC GGC GGC TTC TGC TCC GGG GTG TGC CAC AAC CTC CCC GGT ACC TTC 1575 Asn Gly Gly Phe Cys Ser Gly Val Cys His Asn Leu Pro Gly Thr Phe 430 435 440 GAG TGC ATC TGC GGG CCC GAC TCG GCC CTT GTC CGC CAC ATT GGC ACC 1623 Glu Cys lie Cys Gly Pro Asp Ser Ala Leu Val Arg His lie Gly Thr 445 450 455 460 GAC TGT GAC TCC GGC AAG GTG GAC GAG GAC TAT AGC GGC TCT GGC GAG 1671 Asp Cys Asp Ser Gly Lys Val Asp Glu Asp Tyr Ser Gly Ser Gly Glu 465 470 475 TGACTCGAG 1680 1 .序列编號：'1 4 2 .序列長度：1 6 8 0 3 .序列類型：核酸 4 .股型·.雙股 5 .序列位相：直線型 6.種類：cDNA to πιΟΑ 7 .序列之待色： (請先閲讀背而之注意事項孙填寫木頁) 裝- 線· 本紙張又度边用中國《家楳半（CNS) Τ4規格（210x297公放） 五、發明説明（多沟 待色之象擻性名稱：s i g胜 位置：]9【），2 4 3 測定特性之方法：S 特性之象擻性名稱：mat胜 位置：2 4 4 , 1 6 7 1 測定特性之方法：S 8 .序列

CTCGAGCCCT GGCCGATCCG CATGTCAGAG GCTGCCTCGC AGGGGCTGCG CGCAGCGGCA

AGAAGTGTCT GGGCTGGGAC GGACAGGAGA GGCTGTCGCC ATCGGCGTCC TGTGCCCCTC

TGCTCCGGCA CG6CCCTGTC GCAGTGCCCG CGCTTTCCCC GGCGCCTGCA CGCGGCGCGC CTGGGTAAC ATG CTT GGG GTC CTG GTC CTT GGC GCG CTG GCC CTG GCC GGC Met Leu Gly Val Leu Val Leu Gly Ala Leu Ala Leu Ala Gly -18 -15 -10 -5

CTG GGG TTC CCC GCA CCC GCA GAG CCG CAG CCG GGT GGC AGC CAG TGC

Leu Gly Phe Pro Ala Pro Ala Glu Pro Gin Pro Gly Gly Ser Gin Cys 1 5 10

GTC GAG CAC GAC TGC TTC GCG CTC TAC CCG GGC CCC GCG ACC TTC CTC

Val Glu His Asp Cys Phe Ala Leu Tyr Pro Gly Pro Ala Thr Phe Leu 15 20 25

AAT GCC AGT CAG ATC TGC GAC GGA CTG CGG GGC CAC CTA ATG ACA GTG

Asn Ala Ser Gin lie Cys Asp Gly Leu Arg Gly His Leu Met Thr Val 30 35 40

C6C TCC TCG GTG GCT GCC GAT GTC ATT TCC TTG CTA CTG AAC GGC GAC

Arg Ser Ser Val Ala Ala Asp Val lie Ser Leu Leu Leu Asn Gly Asp 45 50 55 60

GGC GGC GTT GGC CGC CGG CGC CTC TGG ATC GGC CTG CAG CTG CCA CCC

Gly Gly Val Gly Arg Arg Arg Leu Trp lie Gly Leu Gin Leu Pro Pro 65 70 75

GGC TGC GGC GAC CCC AAG CGC CTC GGG CCC CTG CGC GGC TTC CAG TGG

Gly Cys Gly Asp Pro Lys Arg Leu Gly Pro Leu Arg Gly Phe Gin Trp 80 85 90 GTT ACG GGA GAC AAC AAC ACC AGC TAT AGC AGG TGG GCA CGG CTC GAC Val Thr Gly Asp Asn Asn Thr Ser Tyr Ser Arg Trp Ala Arg Leu Asp 95 100 105

CTC AAT GGG GCT CCC CTC TGC GGC CC6 TTG TGC GTC GCT GTC TCC GCT

Leu Asn Gly Ala Pro Leu Cys Gly Pro Leu Cys Val Ala Val Ser Ala 110 115 120 ο ο ο 6 2 8 32 (請先閲讀背而之注意事項洱堪寫本頁) 裝- 訂* 線_ 經濟部屮央棵準^β工消1ν·合作杜印製 6 5 36 五 發IV】説1⑴（3ϋ)

Λ (i U G GCT GAG GCC ACT GTG CCC AGC GAG CCG ATC TGG GAG GAG CAG CAG TGC Ala Glu Ala Thr Val Pro Ser Glu Pro lie Trp Glu Glu Gin Gin Cys 125 130 135 140 GAA GTG AAG GCC GAT 6GC TTC CTC TGC GAG TTC CAC TTC CCA GCC ACC Glu Val Lys Ala Asp 61y Phe Leu Cys Glu Phe His Phe Pro Ala Thr 145 150 155 TGC AGG CCA CTG GCT GTG GAG CCC GGC GCC GCG GCT GCC GCC GTC TCG Cys Arg Pro Leu Ala Val Glu Pro Gly Ala Ala Ala Ala Ala Val Ser 160 165 170 ATC ACC TAC GGC ACC CCG TTC GCG GCC CGC GGA GCG GAC TTC CAG GCG lie Thr Tyr 61y Thr Pro Phe Ala Ala Arg Gly Ala Asp Phe Gin Ala 175 180 185 CTG CCG GTG GGC AGC TCC GCC GCG GTG GCT CCC CTC GGC TTA CAG CTA Leu Pro Val Gly Ser Ser Ala Ala Val Ala Pro Leu Gly Leu Gin Leu 190 195 200 ATG TGC ACC GCG CCG CCC GGA GCG GTC CAG GGG CAC TGG GCC AGG GAG Met Cys Thr Ala Pro Pro Gly Ala Val Gin Gly His Trp Ala Arg Glu 205 210 215 220 GCG CCG GGC GCT TGG GAC TGC AGC GTG GAG AAC GGC GGC TGC GAG CAC Ala Pro Gly Ala Trp Asp Cys Ser Val Glu Asn Gly Gly Cys Glu His 225 230 235 GCG TGC AAT GCG ATC CCT GGG GCT CCC CGC TGC CAG TGC CCA GCC GGC Ala Cys Asn Ala lie Pro Gly Ala Pro Arg Cys Gin Cys Pro Ala Gly 240 245 250 GCC GCC CTG CAG GCA GAC GGG CGC TCC TGC ACC GCA TCC GCG ACG CAG Ala Ala Leu Gin Ala Asp Gly Arg Ser Cys Thr Ala Ser Ala Thr Gin 255 260 265 TCC TGC AAC GAC CTC TGC GAG CAC TTC TGC GTT CCC AAC CCC GAC .CAG Ser Cys Asn Asp Leu Cys Glu His Phe Cys Val Pro Asn Pro Asp Gin 270 275 280 經濟部屮央標準Λβ工消#合作杜印製 CCG GGC TCC TAC TCG TGC ATG TGC GAG ACC GGC TAC CGG CTG GCG GCC Pro Gly Ser Tyr Ser Cys Met Cys Glu Thr Gly Tyr Arg Leu Ala Ala 285 290 295 300 GAC CAA CAC CGG TGC GAG GAC GTG GAT GAC TGC ATA CTG GAG CCC AGT Asp Gin His Arg Cys Glu Asp Val Asp Asp Cys lie Leu Glu Pro Ser 305 310 315 CCG TGT CCG CAG CGC TGT GTC AAC ACA CAG GGT GGC TTC GAG TGC CAC Pro Cys Pro Gin Arg Cys Val Asn Thr Gin Gly Gly Ptie Glu Cys His 320 325 330 663 711 759 807 855 903 951 999 1047 1095 1143 1191 1239 (請先閲讀背而之注意事項洱填寫本頁) 裝. 訂_ 線. 本紙》尺度边用中Η國家«準(CNS) Λ (ί η β - 五、發明説明 TGC TAC CCT AAC TAC GAC CTG GTG 6AC GGC GAG TGT GTG GAG CCC GTG 1287

Cys Tyr Pro Asn Tyr Asp Leu Val Asp Gly Glu Cys Val Glu Pro Val 335 340 345 GAC CCG TGC TTC AGA GCC AAC TGC GAG TAC CAG TGC CAG CCC CTG AAC 1335

Asp Pro Cys Phe Arg Ala Asn Cys Glu Tyr Gin Cys Gin Pro Leu Asn 350 355 360 CAA ACT AGC TAC CTC TGC GTC TGC GCC GAG GGC TTC GCG CCC ATT CCC 1383

Gin Thr Ser Tyr Leu Cys Val Cys Ala Glu Gly Phe Ala Pro lie Pro 365 370 375 380 CAC GAG CCG CAC AGG TGC CAG ATG TTT TGC AAC CAG ACT GCC TGT CCA 1431

His Glu Pro His Arg Cys Gin Met Phe Cys Asn Gin Thr Ala Cys Pro 385 390 395 GCC GAC TGC GAC CCC AAC ACC CAG GCT AGC TGT GAG TGC CCT GAA GGC 1479

Ala Asp Cys Asp Pro Asn Thr Gin Ala Ser Cys Glu Cys Pro Glu Gly 400 405 410 TAC ATC CTG GAC GAC GGT TTC ATC TGC ACG GAC ATC GAC GAG TGC GAA 1527

Tyr lie Leu Asp Asp Gly Phe lie Cys'Thr Asp lie Asp Glu Cys Glu 415 420 425 AAC GGC GGC TTC TGC TCC GGG GTG TGC CAC AAC CTC CCC GGT ACC TTC 1575

Asn Gly Gly Phe Cys Ser Gly Val Cys His Asn Leu Pro Gly Thr Phe 430 435 440 GAG TGC ATC TGC GGG CCC GAC TCG GCC CTT GTC CGC CAC ATT GGC ACC 1623

Glu Cys lie Cys Gly Pro Asp Ser Ala Leu Val Arg His He Gly Thr 445 450 455 460 GAC TGT GAC TCC GGC AAG GTC GAC GAC GAG GCC AGC GGC TCT GGC GAC 1671

Asp Cys Asp Ser Gly Lys Val Asp Asp Glu Ala Ser Gly Ser Gly Asp 465 470 475 TGACTCGAG 1680 (請先閲讀背而之注意亊項孙塥寫本JT) 經濟部屮央#準局κχ工消ίϊ·合作社印製 边 s 張 紙 本 VIZ A -公 I97 12 -X-s 2-w規 4 Ψ lNS)i(c 一脊

Claims (1)

1. 修補充本外年，丨叫 Λ 7 Β7 C7 D7 六、中沭專刊範IB 第80 109350號「凝血SS结合物S及其製法」專利案 (3 1年1 1月修正） 1. 一種具有下列胺基酸序列之凝血酶結合物質 AlaProAlaGluProGInProGlyGlySerGInCysValGluHi sAspCysPheAlaLeu TyrProGlyProAlaThrPheLeuAsnAlaSerGInlleCysAspGlyLeuArgGlyHis LeuMetThrValArgSerSerValAlaAlaAspValIleSerLeuLeuLeuAsnGlyAsp GlyGlyValGlyArgArgArgLeuTrpITeGlyLeuGlnLeuProProGlyCysGlyAsp ProLysArgLeuGlyProLeuArgGlyPheGlnTrpValThrGlyAspAsnAsnThrSer TyrSerArgTrpAlaArgLeuAspLeuAsnGlyAlaProLeuCysGlyProLeuCysVal AlaValSerAlaAlaGluAlaThrValProSerGluProITeTrpGIuGluGlnGlnCys GluValLysAlaAspGIyPheLeuCysGluPheHisPheProAlaThrCysArgProLeu AlaValGluProGlyAlaAlaAlaAlaAlaValSerlleThrTyrGlyThrProPheAla AlaArgGlyAlaAspPheGlnAlaLeuProValGlySerSerAlaAlaValAlaProLeu GlyLeuGInLeuMetCysThrAlaProProGlyAlaValGInGlyHisTrpAlaArgGlu AlaProGlyAlaTrpAspCysSerValGluAsnGlyGlyCysGluHisAlaCysAsnAla IleProGlyAlaProArgCysGlnCysProAlaGlyAlaAlaLeuGlnAlaAspGIyArg SerCysThrAlaSerAlaThrGInSerCysAsnAspLeuCysGluHisPheCysValPro AsnProAspGInProGlySerTyrSerCysMetCysGluThrGlyTyrArgLeuAlaAla AspGInHisArgCysGluAspValAspAspCysIleLeuGluProSerProCysProGIn ArgCysValAsnThrGlnGlyGlyPheGluCysHisCysTyrProAsnTyrAspLeuVal 經漪部屮央標準届员工消费合作社印^ (靖先聞請背面之注意事項再填寫本頁) AspGlyGluCysValGluProValAspProCysPheArgAlaAsnCysGluTyrGlnCys GlnProLeuAsnGlnThrSerTyrLeuCysValCysAlaGluGlyPheAlaProIlePro HisGluProHisArgCysGlnMetPheCysAsnGlnThrAlaCysProAlaAspCysAsp ProAsnThrGlnAlaSerCysGluCysProGluGlyTyrlleleuAspAspGIyPhelle CysThrAspneAspGluCysGluAsnGlyGlyPheCysSerGlyValCysHisAsnLeu ProGlyThrPheGluCysIleCysGlyProAspSerAlaLeuValArgHisIleGlyThr AspCysAspSerGlyLysValAspXl X2 Y1 SerGlySerGlyY2, -1 - 夂紙張尺度適用中國國家櫺準（CNS)甲4規格(210x297公釐) AT B7 C7 D7 六 '申諸4.H苑ffl 其中XI及X2代表酸性胺基酸，而Y1及Y2代表任一胺基 酸。 2. 如申諳專利範圍第1項之凝血酶結合物質，其中之XI 為 G 1 u , X 2 為 A s ρ , Υ 1 為 T y r* , Υ 2 為 G 1 u。 3. 如申謫專利範園第1項之凝血酶結合物質，其中之XI 為 Asp, X2為 Glu, Y1為 Ala, Y2為 Asp。 4·如申諳專利範園第1項辞=被之凝血《j結合物霣，其為 一種耱化多胜肚。 5.—種具有可编碼下列胺基酸序列之核苷酸序列的DHA 片段， 經濟部十央櫺準局貝工消费合作社印製 先聞請背面之注意事項再填葙本頁) AlaProAlaGluProGlnProGlyGlySerGlnCysValGluHisAspCysPheAlaLeu TyrProGlyProAlaThrPheLeuAsnAlaSerGInlleCysAspGIyLeuArgGlyHis LeuMetThrValArgSerSerValAlaAlaAspValIleSerLeuLeuLeuAsnGlyAsp GlyGlyValGlyArgArgArgLeuIrpIleGlyLeuGlnLeuProProGlyCysGlyAsp ProLysArgLeuGlyProLeuArgGlyPheGInTrpValThrGlyAspAsnAsnThrSer TyrSerArgTrpAlaArgLeuAspLeuAsnGlyAlaProLeuCysGlyProLeuCysVal AlaValSerAlaAlaGluAlaThrValProSerGluProIleTrpGluGluGInGlnCys GluValLysAlaAspGlyPheLeuCysGluPheHisPheProAlaThrCysArgProLeu AlaValGluProGlyAlaAlaAlaAlaAlaValSerlleThrTyrGlyThrProPheAla AlaArgGlyAlaAspPheGInAlaLeuProValGlySerSerAlaAlaValAlaProLeu GlyLeuGlnLeuMetCysThrAlaProProGlyAlaValGlnGlyHisTrpAlaArgGlu AlaProGlyAlaTrpAspCysSerValGluAsnGlyGlyCysGluHisAlaCysAsnAla 2- 本紙張尺度遴用中國Η家梂準（CNS) Ή規格(210x297公釐) B7 w C7 ___ D7 六、申請專利犯園 (-先閔讀背面之注意本項再瑱寫本頁) IleProGlyAlaProArgCysGlnCysProAlaGlyAlaAlaLeuGlnAlaAspGlyArg SerCysThrAlaSerAlaThrClnSerCysAsnAspLeuCysGluHisPheCysValPro AsnProAspGInProGlySerTyrSerCysMetCysGluThrGlyTyrArgLeuAlaAla AspGlnHisArgCysGluAspVa1AspAspCysIleLeuG1uProSerProCysProGlη ArgCysValAsnThrGInGlyGlyPheGluCysHisCysTyrProAsnTyrAspLeuVal AspG1yG1uCysVa1G1uProVa1AspProCysPheArgA1aAsnCysG1uTyrG1nCys GlnProLeuAsnGInThrSerTyrLeuCysValCysAlaGluGlyPheAlaProIlePro HisGluProHisArgCysGlnMetPheCysAsnGlnThrAlaCysProAlaAspCysAsp ProAsnThrGlnAlaSerCysGluCysProGluGlyTyrlleLeuAspAspGlyPhelle CysThrAspIleAspGluCysGluAsnGlyGlyPheCysSerGlyValCysHisAsnLeu ProGlyThrPheGluCysIleCysGlyProAspSerAlaLeuValArgHisIleGlyThr AspCysAspSerGlyLysValAspXl X2 Y1 SerGlySerGlyY2f 經濟部屮央櫺準局貝工消费合作社印製 其中XI及X2代表酸性胺基酸•而及Y2則代表任一胺 基酸。 6. 如申誚專利範麵中第5項之DNA Η段，其中XI是GU, X2是 Asρ，Υ1 是 Tyr，Υ2是 G 1 u。 7. 如申縝專利範園中第5項之DNA K段，其中XI是Asp, X2是 Glu. Y1 是 Ala, Y2是 Asp。 8. 一種具有下列核苷酸序列之DNA K段. 本紙張尺度適用中國S家楳爭（CNS)甲丨規格(2丨0x297公釐） 經清部屮央標準Λ员工消費合作社印扯 __D7_ 六、中汸專利览圊 GCACCCGCAG AGCCGCA6CC GGGTGGCAGC CAGT6CGTCG AGCACGACTG CTTCGCGCTC 60 TACCCGGGCC CC6CGACCTT CCTCAATGCC AGTCAGATCT GCGACGGACT GCGGGGCCAC 120 CTAATGACAG TGCGCTCCTC GGTGGCTGCC GATGTCATTT CCTTGCTACT GAACGGCGAC 180 GGCGGCGTTG GCCGCCGGCG CCTCTGGATC GGCCTGCAGC TGCCACCCGG CTGCGGCGAC 2Ί0 CCCAAGCGCC TCGGGCCCCT 6CGC6GCTTC CAGTGGGTTA CGGGAGACAA CAACACCAGC 300 TATAGCAGGT GGGCACGGCT CGACCTCAAT G6GGCTCCCC TCTGCGGCCC GTTGTGCGTC 360 GCTGTCTCCG CTGCTGAGGC CACTGT6CCC AGCGAGCCGA TCTGGGAGGA GCAGCAGTGC Ί20 GAAGTGAAGG CCGATGGCTT CCTCTGCGAG TTCCACTTCC CAGCCACCTG CAGGCCACTG 480 GCTGTGGAGC CCGGCGCCGC GGCTGCCGCC GTCTCGATCA CCTAC6GCAC CCCGTTCGCG 540 GCCCGCGGAG CGGACTTCCA GGCGCTGCCG GTGGGCAGCT CCGCCGCGGT GGCTCCCCTC 600 GGCTTACAGC TAAT6TGCAC CGCGCCGCCC GGAGCGGTCC AGGGGCACTG GGCCAGGGAG 660 6CGCCG66CG CTT6GGACTG CAGCGT6GA6 AAC66CGGCT 6C6A6CACGC GTGCAATGCG 720 ATCCCTGGGG CTCCCCGCTG CCAGTGCCCA GCCGGCGCC6 CCCT6CAGGC A6ACGGGCGC 780 t TCCTGCACCG CATCCGCGAC GCAGTCCTGC AACGACCTCT GCGAGCACTT CTGCGTTCCC 840 AACCCCGACC AGCCGGGCTC CTACTCGTGC ATGTGCGAGA CCGGCTACCG GCTGGCG6CC 900 GACCAACACC GGTGCGAGGA.CGTGGATGAC TGCATACT6G AGCCCAGTCC GTGTCCGCAG 960 CGCTGTGTCA ACACACAGGG TGGCTTCGAG TGCCACTGCT ACCCTAACTA CGACCTG6TG 1020 GACGGCGAGT GTGTGGAGCC CGTGGACCCG TGCTTCAGAG CCAACTGC6A GTACCAGTGC 1080 CAGCCCCTGA ACCAAACTAG CTACCTCTGC GTCTGCGCCG AGGGCTTCGC GCCCATTCCC 1140 CACGA6CCGC ACAGGTGCCA GATGTTTTGC AACCAGACTG CCTGTCCAGC C6ACTGC6AC 1200 CGCAACACCC AGGCTAGCTG TGAGTGCCCT GAAGGCTACA TCCTGGAC6A C6GTTTCATC 1260 TGCACGGACA TCGACGAGTG CGAAAACGGC GGCTTCTGCT CCGGGGTGTG CCACAACCTC 1320 CCCGGTACCT TCGAGTGCAT CT6CGGGCCC GACTCGGCCC TTGTCCGCCA CATTGGCACC 1380 GACTGTGACT CCGGCAAGGT GGACGAGGAC TATAGCGGCT CTGGCGAG 1428 (請先閉請背面之注意事項再填"本頁 .¾. •線. 本紙诔尺度適用中國國家櫺毕（CNS)*F4規格（210X297公釐） A? B7 C7 D7 經濟部屮央楳準局貝工消費合作社印$l 六、中沭專·Η範圓 9. 一種具有下列核苷酸序列之DNA Κ段. GCACCCGCAG AGCCGCAGCC GGGTGGCAGC CAGTGCGTCG AGCACGACTG CTTCGCGCTC 60 TACCCGGGCC CCGCGACCTT CCTCAATGCC AGTCAGATCT GCGACGGACT GCGGGGCCAC 120 CTAATGACAG TGCGCTCCTC GGTGGCTGCC GATGTCATTT CCTTGCTACT GAACGGCGAC 180 GGCGGCGTTG GCCGCCGGCG CCTCTGGATC GGCCTGCAGC TGCCACCCGG CTGCGGCGAC 240 CCCAAGCGCC TCGGGCCCCT GCGCGGCTTC CAGTGGGTTA CGGGAGACAA CAACACCAGC 300 TATAGCAGGT GGGCACGGCT CGACCTCAAT GGGGCTCCCC TCTGCGGCCC GTTGTGCGTC 360 GCTGTCTCCG CTGCTGAGGC CACTGTGCCC AGCGAGCCGA TCTGGGAGGA GCAGCAGTGC 420 GAAGTGAAGG CCGATGGCTT CCTCTGCGAG TTCCACTTCC CAGCCACCTG CAGGCCACTG 480 GCTGTGGA6C CCGGCGCCGC GGCTGCCGCC GTCTCGATCA CCTACGGCAC CCCGTTCGCG 540 GCCCGCGGAG CGGACTTCCA GGCGCTGCCG GTGGGCAGCT CCGCCGCGGT GGCTCCCCTC 600 GGCTTACAGC TAAT6TGCAC C6CGCCGCCC G6AGCGGTCC AG6GGCACTG GGCCAGGGAG 660 GCGCCGGGCG CTTGGGACTG CAGCGTGGAG AACGGCGGCT GCGAGCACGC GTGCAATGCG 720 ATCCCTGGGG CTCCCCGCTG CCAGTGCCCA GCCGGCGCCG CCCTGCAGGC AGAC6GGCGC 780 TCCTGCACCG CATCCGCGAC GCAGTCCTGC AACGACCTCT GCGAGCACTT CTGCGTTCCC 840 AACCCCGACC AGCC66GCTC CTACTCGTGC ATGT6C6AGA CCGGCTACCG 6CTGGCGGCC 900 GACCAACACC GGTGCGAGGA CGTGGATGAC TGCATACTGG AGCCCAGTCC GTGTCCGCAG 960 C6CTGTGTCA ACACACAGGG TGGCTTCGAG TGCCACTGCT ACCCTAACTA CGACCTGGTG 1020 GACGGCGAGT GT6TG6AGCC CGTG6ACCCG TGCTTCAGAG CCAACTGCGA GTACCAGTGC 1080 CAGCCCCTGA ACCAAACTAG CTACCTCTGC GTCTGCGCCG AGGGCTTCGC GCCCATTCCC 1140 CACGAGCCGC ACAGGTGCCA GATGTTTTGC AACCAGACTG CCTGTCCAGC CGACTGCGAC 1200 CCCAACACCC A6GCTA6CTG TGAGTGCCCT GAAGGCTACA TCCTGGACGA CGGTTTCATC 1260 TGCACGGACA TCGACGAGTG CGAAAACGGC GGCTTCTGCT CCGGGGTGTG CCACAACCTC 1320 CCCGGTACCT TCGAGTGCAT CTGC6GGCCC GACTCGGCCC TTGTCCGCCA CATTGGCACC 1380 GACTGTGACT CCGGCAAGGT CGACGACGAG GCCAGCGGCT CTGGCGAC H28 -5 - (靖先閱請背面之注竟事項再填驾本百 _装· •訂， .線. 本纸張尺度適用中SH家標毕（CNS)甲4規格（210x297公釐） < 〇〇4θ^ at ρ Β7 C7 ___ D7 _ 六、申請專利範圍 (-先閱讀背面之注意事項再瑱寫本頁 10 —種做為抗凝劑之組成物，其包括一種凝血酶結 合物質具有下列胺基酸序列， •iT. AlaProAlaGluProGlnProGlyGlySerGlnCysValGluHisAspCysPheAlaLeu TyrProGlyProAlaThrPheLeuAsnAlaSerGInlleCysAspGlyLeuArgGlyHi s LeuMetThrValArgSerSerValAlaAlaAspValIleSerLeuleuLeuAsnGlyAsp GlyGlyValGlyArgArgArgLeuTrpIleGlyLeuGlnLeuProProGlyCysGlyAsp ProLysArgLeuGlyProLeuArgGlyPheGInTrpValThrGlyAspAsnAsnThrSer TyrSerArgTrpAlaArgLeuAspLeuAsnGlyAlaProLeuCysGlyProLeuCysVal AlaValSerAlaAlaGluAlaThrValProSerGluProIleTrpGluGluGInGlnGys GluValLysAlaAspGlyPheLeuCysGluPheHisPheProAlaThrCysArgProLeu AlaValGluProGlyAlaAlaAlaAlaAlaValSerlleThrTyrGlyThrProPheAla AlaArgGlyAlaAspPheGlnAlaLeuProValGlySerSerAlaAlaValAlaProLeu GlyLeuGInLeuMetCysThrAlaProProGlyAlaValGInGlyHisTrpAlaArgGlu AlaProGlyAlaTrpAspCysSerValGluAsnGlyGlyCysGluHisAlaCysAsnAla IleProGlyAlaProArgCysGlnCysProAlaGlyAlaAlaLeuGlnAlaAspGlyArg SerCysThrAlaSerAlaThrGInSerCysAsnAspLeuCysGluHisPheCysValPro AsnProAspGInProGlySerTyrSerCysMetCysGluThrGlyTyrArgLeuAlaAla 經濟部屮央櫺準局貝工消贽合作社印^ AspGInHisArgCysGluAspValAspAspCysneLeuGluProSerProCysProGIn ArgCysValAsnThrGInGlyGlyPheGluCysHisCysTyrProAsnTyrAspLeuVal AspGIyGluCysValGluProValAspProCysPheArgAlaAsnCysGluTyrGlnCys GInProLeuAsnGInThrSerTyrLeuCysValCysAlaGluGlyPheAlaProIlePro 本紙張尺度適用中國國家桴孕（CNS)甲4規格（210x297公嫠） 經漪部中央樣準扃员工消费合作社卬91 Β7 C7 ___D7_ 六、中請專利簌圓 HisGluProHisArgCysGlnMetPheCysAsnGlnThrAlaCysProAlaAspCysAsp ProAsnThrGInAlaSerCysGluCysProGluGlyTyrITeLeuAspAspGIyPhelle CysThrAspIleAspGIuCysGluAsnGlyGlyPheCysSerGlyValCysHi sAsnLeu ProGlyThrPheGluCysIleCysGlyProAspSerAlaleuValArgHisITeGlyThr AspCysAspSerGlyLysValAspXl X2 Y1 SerGlySer61yY2,其中XI及X2代表酸性胺基酸，而Y1及Y2代表任一胺基 酸，和製蕖學上可接受之載體。 11 一種抑制血小板凝集之翳_組成物，其包括一種凝血 酶结合物質具有下列胺基酸序列， AlaProAlaGluProGlnProGlyGlySerGlnCysValGluHisAspCysPheAlaLeu TyrProGlyProAlaThrPheLeuAsnAlaSerGInneCysAspGIyLeuArgGlyHis LeuMetThrValArgSerSerValAlaAlaAspValneSerLeuLeuLeuAsnGlyAsp * GlyGlyValGlyArgArgArgLeuTrpneGlyLeuGInLeuProProGlyCysGlyAsp ProLysArgLeuGlyProLeuArgGlyPheGInTrpValThrGlyAspAsnAsnThrSer TyrSerArgTrpAlaArgLeuAspLeuAsnGlyAlaProLeuCysGlyProLeuCysVal AlaValSerAlaAlaGluAlaThrValProSerGluProITeTrpGluGluGlnGInCys GluValLysAlaAspGIyPheLeuCysGluPheHisPheProAlaThrCysArgProLeu AlaValGluProGlyAlaAlaAlaAlaAlaValSerlleThrTyrGlyThrProPheAla AlaArgGlyAlaAspPheGlnAlaLeuProVdlGlySerSerAlaAlaValAlaProLeu GlyLeuGlnLeuMetCysThrAlaProProGlyAlaValGlnGlyHisTrpAlaArgGlu (諸先閱讀背面之注意事硕再填寫本頁) 本纸張尺度適用中國國家櫺準（CNS)甲<1規格（210x297公釐） 六、申锖專利範IB 經漪部屮央標準局B工消费合作社印製 AlaProGlyAlaTrpAspCysSerValGluAsnGlyGlyCysGluHisAlaCysAsnAla IleProGlyAlaProArgCysGlnCysProAldGlyAlaAlaLeuGlnAldAspGlyArg SerCysThrAlaSerAlaThrGlnSerCysAsnAspLeuCysGluHisPheCysValPro AsnProAspGInProGlySerTyrSerCysMetCysGluThrGlyTyrArgLeuAlaAla AspGlnHisArgCysGluAspValAspAspCysIleLeuGluProSerProCysProGln ArgCysValAsnThrGInGlyGlyPheGluCysHisCysTyrProAsnTyrAspLeuVal AspGIyGluCysValGluProValAspProCysPheArgAlaAsnCysGluTyrGInCys GlnProLeuAsnGlnThrSerTyrLeuCysValCysAlciGluGlyPheAldProI lePro HisGluProHisArgCysGlnMetPheCysAsnGlnThrAlaCysProAlaAspCysAsp ProAsnThrGlnAlaSerCysGluCysProGluGlyTyrneLeuAspAspGlyPhelle CysThrAspIleAspGluCysGluAsnGlyGlyPheCysSerGlyValCysHisAsnLeu ProGlyThrPheGluCysIleCysGlyProAspSerAlaLeuValArgHisIleGlyThr AspCysAspSerGlyLysVatAspXl X2 Y1 SerGlySer61yY2# 其中XI及X2代表胺基酸，而Y1及Y 2代表任一種胺基酸 和藥學學上可接受之載_。 12 —種製備具有下列胺基酸序列之凝血酶結合物質之方 法， AlaProAlaGluProGlnProGlyGlySerGlnCysValGluHisAspCysPheAlaLeu TyrProGlyProAlaThrPheLeuAsnAlaSerGInlleCysAspGlyLeuArgGlyHis LeuMetThrVa1ArgSerSerVa 1A1 aA 1 aAspVa111eSerLeuLeuLeuAsnG1yAsp GlyGlyValGlyArgArgArgLeuTrpIleGlyLeuGlnleuProProGlyCysGlyAsp ProLysArgLeuGlyProLeuArgGlyPheGInTrpValTlirGlyAspAsnAsnThrSer TyrSerArgTrpAlaArgLeuAspLeuAsnGlyAlaProLeuCysGlyProLeuCysVal AlaValSerAlaAlaGluAlaThrValProSerGluRroIleTrpGluGluGlnGlnCys GluValLysAlaAspGIyPheLeuCysGluPheHisPheProAlaThrCysArgProLeu -8 - (-先閲請背面之注意事項再填窵本頁) 本紙》尺度適用中國國家標毕（CNS)甲‘丨規格（210x297公釐） c〇〇^9i 六、申請專H範® 經濟部屮央標準局员工消费合作社印t AlaValGluProGlyAlaAlaAlaAlaAlaValSerlleThrTyrGlyThrProPheAla AlaArgGlyAlaAspPheGlnAlaLeuProValGlySerSerAlaAlaValAlaProLeu GlyLeuGlnLeuMetCysThrAlaProProGlyAlaValGlnGlyHisTrpAlaArgGlu AlaProGlyAlaTrpAspCysSerValGluAsnGlyGlyCysGluHisAlaCysAsnAla IleProGlyAlaProArgCysGInCysProAlaGlyAlaAlaLeuGlnAlaAspGlyArg SerCysThrAlaSerAlaThrGlnSerCysAsnAspLeuCysGluHisPheCysValPro AsnProAspGlnProGlySerTyrSerCysMetCysGluThrGlyTyrArgLeuAlaAla AspGlnHisArgCysGluAspValAspAspCysIleLeuGluProSerProCysProGIn ArgCysValAsnThrGlnGlyGlyPheGluCysHisCysTyrProAsnTyrAspLeuVal AspGlyGluCysValGluProValAspProCysPheArgAlaAsnCysGluTyrGlnCys GlnProLeuAsnGlnThrSerTyrLeuCysValCysAlaGluGlyPheAlaProI.lePro HisGluProHisArgCysGlnMetPheCysAsnGlnThrAlaCysProAlaAspCysAsp ProAsnThrGlnAlaSerCysGluCysProGluGlyTyrlleLeuAspAspGlyPhelle CysThrAspI1eAspGluCysGluAsnGlyGlyPhetysSerGlyVa1CysHisAsnLeu ProGlyThrPheGluCysneCysGlyProAspSerAlaLeuValArgHisIleGlyThr AspCysAspSerGlyLysValAspXl X2 Y1 SerGlySerGlyY2, 其中XI及K2代表酸性胺基酸，而Y1及Y2代表任一胺基 0 0 有載 具組 一 重 及之 體段 載 K 製 A 0 複DNlit 可的胜 一 列多 含序之 包酸生 有砮産 載核所 胞之胞 細列細 形序餐 :轉酸培 括種基集 包一胺收 , 笔該並 酸培碼 ， 本紙張尺度適用中國國家律準(CNS)肀4規格（210x297公釐) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)