TW200418880A - Compound binding to leukocytes and medicinal composition containing the compound in labeled state as the active ingredient - Google Patents

Description

200418880 ⑴ 玖、發明說明 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於診斷或治療個體的免疫應答反應所引起 的疾病時，標識化異常部位的同時，可正確把握該活動性 狀態之對白血球具結合性之化合物、與其標識化合物作爲 有效成分之醫藥品組成物。更詳細而言，本發明爲於活體 內及活體外顯示對白血球之特異性結合性之化合物，可藉 由放射性金屬及常磁性金屬標識者，含有哺乳動物體內的 感染症、發炎、癌症及動脈硬化症之病巢部位，有用地使 用於對於病理學上的病巢部位破壞之新穎性對白血球具結 合性之化合物，及其標識化合物作爲有效成分之對放射性 診斷、SPECT畫面診斷、PET畫面診斷、MRI畫面診斷或 放射性治療等有用之醫藥組成物。 【先前技術】 含人類的動物之個體不斷地由環境中受到影響維持生 命活動之因子作用。影響到的因子爲大氣或陽光、食物等 正作用以外，亦有微生物的侵襲、有害化學物質、熱、放 射線等負作用之因子。對於引起該負作用的因子之影響， 個體爲維持生命活動必須進行種種防禦機制之作用來對 付。 該防禦機構於生物學上定義爲免疫，有關免疫的活體 內反應登爲免疫應答反應。作爲引起該反應者已知有細菌 或黴發菌等微生物、病毒、活體組織或器官的異種移植 -5- (2) (2)200418880 片、有害化學物質、高溫等熱、過度冷卻、具有高能量的 放射線、電或物理性組織障礙等◦免疫應答反應含有發炎 反應的個體之「自己」與「非自己」的辨識結果所引起的 活體反應，發燒、白血球活化與移動、除去「自己」以外 之所有的反應等廣義防禦機制作用，發炎反應爲侵入個體 的異物之除去、被侵害之組織的破壞、被破壞之組織的修 復等免疫應答反應之一部份結果所引起的現象。 作爲免疫應答反應的重要因子之一可舉出白血球。組 織會特定浸潤的白血球種類、或產生調節該程度或期間之 種種介體，又這些細胞膜表面上具有含血液的體液中所存 在的介體或與其他分子結合而應答之種種受體。受體藉由 與對應的介體之結合而活化白血球，藉由白血球的種類可 表現種種相異的受體，其結果浸潤於組織的白血球之種類 會依據存在的介體而決定。 一般發炎等局部性免疫應答，受到破壞組織等某種刺 激後，數小時內補體等免疫相關蛋白質會除去該刺激。其 後補體的分解物或受到破壞的組織所釋出的細胞分裂素等 介體釋出於血液等體液中，嗜中性白血球爲主的顆粒白血 球介著受體而被活化，對組織的浸潤由介體之密度梯度爲 準而開始。此時的介體一般稱爲趨化性因子。顆粒白血球 的浸潤由受到最初的刺激後一般於數十小時內到達高峰。 繼續以來自單核白血球爲中心的巨噬細胞之浸潤徐徐地增 加，與顆粒白血球同時去除引起刺激的來源。除受到傷害 的組織以外，由經活化的顆粒白血球或巨噬細胞等亦釋出 -6 - (3) (3)200418880 胞質分裂素等，而可有效率地進行產生抗體等免疫應答反 應，或修復被破壞的組織，或可抑制免疫應答反應的T細 胞或B細胞等所成的淋巴球之浸潤，其後會增加，一般於 受到最初刺激後數十小時後到達高峰。 如此免疫應答反應因較難維持生命活動，故雖爲極重 要的作用，但以維持生命活動爲目的時，對於個體而言， 該反應的控制爲不完全下，有時會產生致命的負作用。其 代表性現象爲稱做自身免疫疾病之疾病群的發病。該疾病 群已知有異位性皮膚炎、慢性關節風濕、behcet’s病、 全身性紅斑性狼瘡、潰瘍性大腸炎、克隆氏病、橋本病其 他如膠原病等疾病。如感染症等異物的侵襲或燒傷等組織 破壞之發炎中，雖原因已各被定義，但這些自身免疫疾病 的原因因子並未被定義或發現，係爲原因不明的疑難雜 症。然而這些疾病群的共通現象爲對各疾病固有組織的白 血球的浸潤、特別爲淋巴球或單核白血球或巨噬細胞爲熟 知的事實。 如此自身免疫疾病或慢性發炎及感染症中淋巴球或單 核白血球一般爲免疫應答反應的白血球浸潤的中心。因 此，可正確地把握住檢索或檢測出淋巴球或單核白血球及 嗜中性白血球之浸潤有無程度而有效地進行治療，其於可 避免藥物的浪費及減少患者的精神痛苦與費用負擔，及醫 療保險上的費用減輕上極爲重要。 因此，檢索或剪測白血球之浸潤有無而正確地把握其 程度下對於畫面診斷而言極爲有用，故於核醫學上種種放 (4) (4)200418880 射線藥劑及其使用正被硏究。 鎵-67 ( 67Ga)檸檬酸鹽作爲發炎閃燦藥劑而自古被 使用（例如，參照 Ebright, JR. et al.，Arch. Int. Med … 142· 246-2 54(i 9 82 ))。然而，該化合物對於感染症或發 炎部位並無特異性。又，67 Ga的r線之放射能量一般於 7相機中會得到良好的影像，故並不適用。且自放射性藥 劑的注射至顯像必須要7 2小時的待機時間。 作爲顯像感染部位之核醫學方法，有使用I η - 1 1 1標 識白血球（以下稱爲1 1 Μη-白血球）（例如，參照Peters, AM. e t al·，J. N u c 1. Med” 33，65 - 67( 1 9 92 )) 。Thakur 氏 們討論到活體外的嗜中性白血球之放射性核素標識與該利 用於廣範圍而進行分析（Sem. Nucl. Med.， 14， ΙΟ- ΐ 7(1 984) ) 。 該 方法中 ，個體 的嗜中 性白血 球於活 體外進 行銦-1 1 1 (以下稱爲In- 1 1 1 )的標識，該經標識的嗜中性 白血球可使用於活體外的動力學硏究，及使用於個體的急 性期之發炎性病巢的影像化上。 然而，使用11 Μη-白血球時，放射線標識化合物的調 製，必須進行自身血液的滅菌取出，由白血球的血液之滅 菌分離，白血球的滅菌標識及放射性核素標識白血球再注 射於患者之各階段，該調製必須花2小時以上。又，欲取 得最適的影像，自該標識白血球的再注射至攝影必須要待 機1 2至4 8小時。且一般顯影檢討所實施的白血球數每1 X 1 〇 7個爲2 0 0 // C i之放射能量中，因I η -1 1 1的放出放射 能量較強，故白血球中嗜中性白血球爲主的顆粒白血球較 (5) (5)200418880 能耐標識，淋巴球等則標識後即死亡（Chianelli. Μ· et al., Nucl. Med. Comm·，18，437-455(1997))，故使淋巴 球及單核白血球的動態成影像化較爲困難。且由暴露的現 場可投予的放射能量受到限制，故多數影像的品質較差。 其次，開發出的 Tc-99m標識白血球可縮短上述 1 1 1 In-白血球至攝影之待機時間，且淋巴球與單核白血球 的動態可由影像化，且可投予比1 1 1更高的放射能量 (例如參照 Vorne，M.etal.，J.Nucl.Med.，30，1332-1 3 3 6 ( 1 9 8 9 ))。然而，因標識安定性較爲差，故對非標的 的代謝臟器之蓄積成爲問題。又，較長調製時間及血液處 理之問題與]11Ιη·白血球相同（Chianelli，M. et al.5 Nucl. Med. Comm., 1 8, 4 3 7-4 5 5 ( 1 997) ) 〇 正嘗試對於包含單核白血球、嗜中性白血球、顆粒白 血球及其他之人類白血球顯示結合性之放射性核種所標識 的單株抗體及多株抗體之開發。例如，對於99mTc標識抗 顆粒白血球單株抗體（例如，參照Lind，P. et al., J. Nucl. Med·，31, 417〜4 73 ( 1 9 90))及1 1 1 In標識非特異性人類免 疫球蛋白（niIn-HIG ’ 例如 LaMuraglia，GM. Et al.，1989, J· Vase· Surg.; 10，20〜2 8 ( 1 9 8 9))經由感染所引起的發 炎之檢測進行檢討。1 1 11 η - ΗI G中投予與最適影像攝影之 間需要2 4〜4 8小時，故具有與1 1 11 η -白血球相同之短 處。 又，^Mn-HIG可聚集於發炎部位而描繪出來（例如 參考 Rubin, R. et al·， J. Nucl. Med., 29， 651- -9- (6) (6)200418880 6 5 6 ( 1 9 8 8 ))，該聚集機制爲藉由與存在於對發炎部位浸 潤之白血球細胞表面上之Fc受體進行結合，進而聚集於 發炎部位之想法（Fischman, A. et al·, J. Nucl. Med. 31· 1 1 9 9 - 1 2 0 5 ( 1 9 9 0 ))、以及與白血球的浸潤無關，與白蛋 白等蛋白質西同藉由血管透過性亢進而由血管外漏之想法 (Morrel， E. e t a 1 . . J. N u c 1 . Med.. 30， 1 5 3 8 - 1 5 4 5 ( 1 9 8 9))。 至今的檢討報告僅限於使用其他蛋白質及使用對白血 球顯示結合作用的活體分子。 van der Laken，CL氏們報告放射性碘元素做標識的發 炎性胞質分裂素之間白素1 (van der Laken, CJ. et al.， European J. Nuc 1. Med·，22，1 2 4 9- 1 2 5 5 ( 1 995 ))。

Signore氏們報告有關使用放射性碘元素做標識的發 炎性胞質分裂素之間白素 2對於慢性發炎病的討論 (Signore, A. et a 1. ? N u c 1. Med. Comm.. 13, 713- 722(1992))。

Hay RV.氏們報告有關使用放射性碘元素做標識的發 炎性胞質分裂素之間白素8對於化學性發炎的討論（Hay RV. et al.? Nucl. Med. Comm.5 1 8, 3 6 7-3 7 8 ( 1 99 7 ))。 這些放射性標識化合物可成功地描繪出感染症等之急 性發炎、或自身免疫疾病等之慢性發炎。 然而，如此蛋白質或抗體因分子量較爲大，故會產生 急性發炎所引起的血管透過性亢進而使血液成分由血管外 漏之問題（Roitt. I. et al·, Essential Immunology，8th edn. -10- (7) (7)200418880

Oxford· Blackwell Scientific (1994))。分子量 2000 程度 的分子既使漏出於血管外但不會於該處長期停留，然而白 蛋白（分子量約64000 )等的蛋白質因分子較爲大，故比 低分子較容易停留，難以判斷發炎特異性之聚集（Morr el. E. et al·，J. Nucl. Med·，30，1 5 3 8 - 1 5 4 5 ( 1 9 8 9 ))。 較小且容易合成的分子適用於日常的放射性藥劑，可 對於全血中的白血球進行選擇性標識，故可直接注射於患 者，且藉由決定白血球的聚集部位之位置將感染症及發炎 的病巢部位畫面化，作爲如此低分子量的合成化合物可使 用放射性核種標識肽。 例如Moyer氏們報告有關將利用與肝素等多硫酸化葡 聚糖結合的血小板第4因子（PF-4 )羧基末端之肽的化合 物進行Tc-99m標識，對於發炎的聚集性做討論（Moyer， BR. et al·，J. Nucl. Med.，37，673-679(1996))。該化合物 (PF-4肽肝素）爲含有Tc-99m螯合胺基酸序列且於第23 殘基的肽（分子量約 2600)上與肝素（分子量約 7000〜 25000)結合的形式，作爲一分子其分子量約爲1萬至3 萬程度。 因PF-4肽肝素亦具有與蛋白質相同的較大分子量， 故不能作爲僅表示聚集於白血球浸潤部位之製劑、必須爲 使用藉由血管透過性亢進之非特異性聚集較少低分子量化 合物，且僅顯示白血球浸潤之製劑。又’肝素的使用時因 肝素所具有的生理作用其使用有時受到限制。

Dahlman, T.氏們或Ringe，]D·氏們報告有關作爲肝 -11 - 200418880

素的副作用，藉由投予肝素引起骨密度降低及長期投予後 引起骨疏鬆症之發病的危險性。（Br. J. Obstet Gynaecol 1 99 0 Mar, 97; 3，2 2 1 -2 2 8 及 Ring et al.· Geburtshilfe

Frauenheilked·· 52，7· 426-429(1992))。其他亦有藉由抗 凝血酶作用、凝血激酶的生成抑制、血小板的凝集抑制等 肝素所具有的生理作用而恐怕會有副作用產生，或有出血 時或可能出血的疾病，重度肝臟疾病、腎臟障礙時必須慎 重處理等較多使用上的注意事項。 對於其他放射性核種標識肽進行討論中，已有報告出 有關含有甲釀基-甲一· δ頁醜基-白胺釀基-苯基丙氮釀基 (fMLF )-之肽之過去技術。

Day氏們報告有關以1251進行放射核種標識之趨化性 甲醯化肽（fMLF) ( Day，AR. et al·，FEBS Lett. 77，291-294(1977))。

Jian氏們報告有關以125I進行放射核種標識之趨化性 甲醯化肽（fMLF )於活體內聚集發炎（例如，Jiang, MS. e t al. ,Nuklearmedizin, 2 1, 110-113(1982))。 F i s h m a n氏們揭示介著D T P A之1 1 11 n標識趨化性甲 醯化肽（fMLF)(參照專利第293 1 09 7號說明書）。

Verbede氏們報告有關介由氫硫基乙醯基甘胺醯替甘 胺酸之Tc-99m標識趨化性甲醯基化肽（fMLF )(例如參 照 Verbeke，K. et al·，Nuclear Medicine & Biology, 27, 769-779(2000))。

Baidoo氏們報告有關介由二胺基二硫醇化合物之Tc- -12- (9) (9)200418880 99m標識趨化性甲醯基化肽（fMLF )(參照B a i d ο o . K . E . et al·，Bioconjugate Chemistry, 9· 208-217(1998)) c 又’亦有報告有關使用介由放射性核種標識趨化性甲 醯化肽（f M L F )之光親合性對身體外進行白血球的放射 性核種標識（例如參照美國專利第49 8 6 9 7 9號說明書）。 且’亦有報告有關可放射性核種標識之趨化性甲醯化 肽（fMLF )(例如參照美國專利第 5 792444號說明 書）。 趨化性甲醯化肽（fMLF )爲介由甲醯化肽受體（以 下稱爲受體FPR)與白血球結合（Niedel, J. E. et al·, Science, 205，4413，1412-1414(1979))，表現受體 FPR 之 白血球爲嗜中性白血球及單核白血球（Lewis, SL. et al.5 Inflammation, 4，363-375(1983)) ° 存在於人類血液中的白血球之正常組成爲約 5 0 %的 嗜中性白血球、1 0 %的單核白血球。因單核白血球只有嗜 中性白血球的5分之1以下，故至今所知的趨化性甲醯基 化肽之類似物種類所結合的白血球幾乎爲顆粒白血球，對 於淋巴球及單核白血球僅做微弱結合之事項（Verbeke, K. et al.; Nucl. Med. Biol., 2 7, 7 6 9- 7 79(2 000)) 0 又，嗜中性白血球的浸潤多之菌的感染症等之急性發 炎中，放射性核種標識趨化性甲醯基化肽顯示聚集（參照 Babich, J W. et al·， J. Nucl. Med., 34， 2176· 2 1 8 1 ( 1 993 ))，明確出慢性發炎病變之聚集的報告僅到 此。 -13- (10) 200418880 又，對於臨床上的診斷，含核醫學檢查或M RI檢查 之影像診斷成爲必要的原因爲，多使用於活體內檢查等初 期診斷較難判斷之病例或慢性化病變所引起的病例上。 又，治療如此病例的方法中多多少少進行類固醇藥劑的投 予及白血球除去治療法等免疫反應及白血球浸潤之抑制， 故可望得到可進行含慢性發炎的免疫反應之發炎病變所引 起的疾病影像診斷，及不會受到血管透過性亢進之影響的 低分子，且可 影像化免疫反應及白血球浸潤之製劑。 肽及聚肽以Tc-99m標識的方法爲已知（例如參照特 開平8 -23 1 5 8 7號公報）。 【發明內容】

本發明有鑑於過去技術的狀況’以提供一種對於活體 內外中白血球，即嗜中性白血球、單核白血球、淋巴球等 顯示特異性結合性，且可以放射性金屬或常磁性金屬標識 的化合物、該標識物作爲有效成分之伴隨個體的免疫反應 之白血球浸潤較盛的部位進行影像化之SPECT畫像診 斷、PET畫面診斷、MRI畫面診斷或放射性治療等有用之 醫藥組成物爲目的。 即，本發明係關於一·種d白血球具結合性之化合物， 其特徵爲下述式（1 ) Z-Y-Leu-Phe-(X)n-Lys(NH2)m- ε (-R-(T)l-U) (1) -14- (11) (11)200418880 (式（1 )中，Z表示胺基的保護基； Y表示Met或Nle; (X) η中，X表示可由1個或其以上的胺基酸及/或 可有機合成之化合物所成之介質（apacer) ’ η表示1或 0 ； (Ν Η 2 ) m中，ΝΗ2表不作爲Lys的（^位翔基之保5蒦 基的醯胺基，Π1表示1或0; e(-R-(T)l-U)中，R表示與Lys的ε-胺基上以醯胺 籲 鍵結之Ser或T hr，Τ表示可由1個或其以上的胺基酸及/ 或可有機合成之化合物所成之介質，1表示1或〇’1；表 示可金屬標識的基； 但，該X與T可相同或相異）所表示者。 且本發明係關於上述式（1 )所表示的白血球結合性 化合物以放射性金屬或常磁性金屬進行標識的標識化合物 作爲有效成分之醫藥組成物。 【實施方式】 實施發明的最佳型態 以下對本發明的實施型態進行說明。且，本發明所使 用的所有胺基酸以1字元或三字元表示，或三字元表示’ 於無特別說明時左邊表示N末端、右邊表示c末端。且 本說明書中D異構物之胺基酸以〇 ·胺基酸表示。 本發明的白血球結合性化合物係如下述式（〗）所表 -15- 7]\ ° (12) (12)200418880 Z-Y-Leu-Phe-(X)n-Lys(NH2)m-e (-R-(T)l-U) (1) 即，形成與白血球的受體FPR之結合部位Z-Y-LeU-Phe-、全白血球之單核白血球、提高對淋巴球的結合率之 Ser或Thi*所成之結合部位-R-、放射線金屬、可以常磁性 金屬標識的結構-U-、及結合這些的介質（§1^〇£1·)-(X) n-、-Lys(NH2)m-及-(T)l-所成。 具體而言，可舉例出如下述的較佳白血球結合性化合 物之型態。 甲醯基-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys ( ΝΗ2) - ε ( -Ser-Cys-Gly-Asn); 甲醯基-Nle-Leu-Phe，Nle-Tyr，Lys ( NH2) - ε ( -Ser-Cys-Asp-Asp); 甲醯基-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys ( NH2) - ε ( -Ser-Cys-Gly-Asp); 甲醯基-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys ( NH2) - ε ( -Ser-D-Arg-Asp_Cys_.Asp-Asp); 甲醯基-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys ( NH2) - ε ( -Ser-1,4,8,11-四氮雜環十四烷-1,4,8, 1卜四乙酸）； 甲醯基-Nle·Leιl-Phe-Lys(NH2)-ε(-SeΓ-D-SeΓ-Asn-D-Arg-Cys.Asp-Asp); 甲醯基-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys ( NH2) - ε ( -Ser-D-Arg-二伸乙基三胺五乙酸）； •16- (13) 200418880 甲釀基-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys (NH:)- 1·4·8，11-四氮雜環十四烷-丁酸）； 甲釀基-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys ( NH2 )-D-Arg-Asp-1.4.8，ll -四氮雜環十四烷-丁酸）； 甲釀基-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys ( NH2 )-0-86卜八511-1，4,8，11-四氮雜環十四院-丁酸）； 乙醯基-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys ( NH2 )-D-Arg-Asp-Cys-Asp-Asp ); 胺基甲酿基-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys ( NH2 Ser-D-Arg-Asp-Cys-Asp-Asp )及 甲基-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys ( NH2 ) - £ Arg-Asp-Cys-Asp-Asp ) 上述式（1 )所表示的白血球結合性化合物 FPR的結合部位之Z-Y-Leu-Phe-中，Z表示胺 基，例如使用甲醯基、乙醯基等碳數1至9之醯 Boc基等碳數2至9的醯氧基、甲基、乙基、丙 1至6的低級烷基、胺基甲醯基等。Y的M e t或 末端爲甲醯基時，對於可辨識甲醯基化肽之白血 FPR顯示結合性，具有比甲醯基大的分子結構之 第三Boc基亦顯示對受體的結合性。 上述式（1)的 Z-Y-Leu-Phe-中，Y表示 Met或Nle。白血球中，與嗜中性白血球同時存 白血球之細胞膜上恆定地表現的受體之一，且與 肽顯示強結合性之受體FPR，其對於Met顯示結 ε ( -S er-已(-Ser- ε ( -S er- £ ( -Ser- )-t (- (-Ser-D- 中與受體 基的保護 基、第三 基等碳數 Nle 的 N 球的受體 乙醯基或 胺基酸的 在著單核 甲醯基化 合性。與 -17- (14) (14)200418880

Met的空間結構極相似之Nie亦與Met顯示相同的結合 性。 L e 11及p h e爲對嗜中性白血球及單核白血球顯示高結 合性。與甲醯基化肽顯示強結合性之受體F P R，其對於甲 醯基-Met、甲醯基- Met-Met、甲醯基- Met-Met-Leu、甲醯 基-M e t - L e u - L e 11等的肽亦表示結合性，其中以甲醯基-Met-Leu-Phe顯示最強結合性。 本發明的最大特徵爲，上述式（1 )的 Z-Y-Leu-Phe-上介由介質（spacer)的 X及-Lys(NH2)m-的ε胺基酸進 行結合之R，R爲選自Ser或Thr之具有羥基的側鏈之胺 基酸。藉由利用附加於該Ser或Thr之可金屬標識的結 構，可初次達到於過去低分子白血球結合性化合物所無法 達成之對淋巴球及單核白血球之顯著結合。對於與過去受 體FPR所結合部位Z-Y-Len-Phe-單獨所成肽之白血球的 結合，可爲對嗜中性白血球、單核白血球的結合，對於淋 巴球的結合幾乎沒有。與該受體FPR之結合部位2-1 L e u - P h e -與可金屬標識之結構，介由結合於L y s的ε胺基 酸的Ser或Thr而進行結合時，對單核白血球及淋巴球的 結合率有顯著提高。此結果表示本發明的上述式（1 )所 示白血球結合性化合物可與所有白血球，即嗜中性白血 球、早核白血球之結合成爲可目ξ。例如’過去血球結合性 化合物對全白血球之淋巴球及單核白血球之結合比率約爲· 1 2 %至3 5 %範圍，相對於此本發明的血球結合性化合物 對全白血球之淋巴球及單核白血球之結合比率可提升至 -18- (15) (15)200418880 1 8 %至 6 5 %。此表示可標的化白血球浸潤較爲盛的部 位，顯示本發明的化合物可使用於診斷白血球浸潤所引起 的疾病。 對於本發明的白血球結合性化合物’與受體F p R的 結合部位Z - Y - L e u - P h e -，特別爲與淋巴球及單核白血球的 受體之結合部位R之S er或Thr及放射性金屬或常磁性金 屬的標識部位U之各間距，可由介質（spacer )的\、-Lys(NH2)m-的ε胺基酸及介質的T進行各結合時做適當取 得。藉由此可保持與受到空間性結構影響較大之受體的結 合性，而各自結合。即，欲使Ζ - Υ - L e u - P h e -的C末端上 與R的Ser或Thr的C末端結合，Z-Y-Len-Phe-的C末端 部分結構上，附加上側鏈有碳數4所成烷基上與胺基結合 的L y s，該e胺基與S e r或T h r爲佳。且必須要較大空間 性距離時，可附加介質。 X及T分別爲1或其以上的胺基酸及/或可有機合成 之化合物所成之介質，因應必要可成爲本發明的白血球糸吉 合性化合物的分子構成成分，X與Y可相同或相異者。$ 而，Cys殘基爲磺胺基於分子內或分子間因形成二硫化物 鍵結，故較易形成二量體等多量體，因該結構變化對於受 體之結合性有著較大影響，故作爲構成X或T的胺g @变 爲不佳。且，X或T含有Pro時，立體結構受到限定，故 空間自由度較少對於對受體的結合性較不佳。因此，自f 於構成X或T的序列結構之胺基酸，除去Cys及Pr〇爲 佳。 -19- (16) (16)200418880 具體而言，作爲χ所使用的胺基酸，可舉出對受體 的結合性影響較小之G 1 y、A 1 a、V a 1、L e u、11 e等非帶電 性肢基酸或N 1 e、T y r、N 1 e - T y r等。作爲T，於欲取得由 與受體的結合部位至以放射性金屬或常磁性金屬標識的結 構之距離時，或抑制活體內的體內動態時、或具有活體內 對代謝的抵抗性等之目的下，可使用與上述相同的胺基 酸、或非胺基酸化合物、或其組合。又，亦可使用上述以 外的任意L異構物及D異構物胺基酸、G 1 y等的疏水性胺 基酸、A r g、a s p、G 1 u、L y s等極性胺基酸及帶電性胺基 酸（酸性、鹼性）。 作爲構成介質（spacer)的可有機合成的化合物，可 舉出含有甲基、乙基、苯基等疏水性官能基，1,5-己二 烯、反-2 -甲基-1,3 -戊二烯、4 -甲基-3-硝基乙醯苯等化合 物；含有羥基、醯胺等極性官能基，（± ) -2-甲基-2,4-戊二醇（己二醇）、3 -甲基-1 , 3 , 5 -戊三醇等化合物；羧 基、胺基、亞胺基等帶電官能基，伸甲基琥珀酸、4-馬來 酸酐縮亞胺丁酸、6-馬來酸酐縮亞胺己酸等化合物。 作爲可金屬標識的基之U，可使用1個或其以上的胺 基酸所成基或非胺基酸所成之可金屬標識的基。作爲1個 或其以上的胺基酸所成之基，可使用-Cys-Al-A2所表示 的肽（但，A1及A2爲除Cys及Pro的胺基酸）。例如可 舉出-C y s - G 1 y - A s p、-Cys-Asp-Asp、-Cys-Asp-Gly、-Cys-G 1 y - G 1 u、- C y s · G1 u - G 1 u、- C y s - G1 u · G1 y、- C y s - G 1 y - A s n、-Cys-Asn-Asn 、-C y s - A s n - G1 y 、 - C y s - G1 y - G1 n 、 - C y s - G 1 n- -20- (17)200418880

Gin、-Cys-Gln-Gly、-Lvs-Gly , -Cys-Gly-Ar 例子。 C y s - G 1 y - L y s ' - C y s - L y s - L y s ' - C > s -g、 -Cys-Arg-Arg、 -Cys-Arg-Gly 等 f乍爲非胺基酸所成的可金屬標識的基，可舉出 1，4·7.10-四氮雜環十二烷（CyClen)、；l·4,8·11-四氮雜環 |. p~g 吹士 兀（Cyclam) 、八四氮雜環十五烷、Κ4·8·η_ 四鼠雑十四烷_5,7 -二酮（Dioxocycam)等碳數8至20的 曰氮環狀化合物；118,11-四氮雜十四烷-1,4,8，11·四乙 酤（TETA) 、1，4,7，1(Κ四氮雜環十二烷 _N，N，，N，，，N，··-四 乙酸（DOTA ) 、：I N，N ’，N ’’，N -四乙酸、} 1，4,8, 10 -四氮雜環十四烷 11-四氮雜環十四院-5,7-二酮-，4,7，10·四氮雜環十四烷·丁酸、 -丁酸等碳數8至20的含氮環狀 竣酸化合物；丨，4,7，10-四氮雜環十四烷-1-胺基乙基胺基 甲驢基甲基_4,7，1〇-三〔r，s〕·甲基乙酸（D〇3ma)、 mio-四氮雜環十四烷-α ? α α ”， α，，，. 四甲基乙酸（DOTMA)等碳數8至20的含氮環狀羧酸化 合物之衍生物；伸乙基二胺四乙酸（EDTA )、二伸乙基 二胺戊乙酸（DTPA )、三伸乙基四胺六乙酸、乙二醇-(2-胺基乙基）_1^，]^，，1^”，]^，，，-四乙酸（£0丁八）等碳數4 至1 〇的伸烷基胺羧酸等之化合物所構成之基等 本發明的白血球結合性化合物作爲影像診斷用之醫藥 組成物使用時，配合診斷的目的或治療部位，控制體內的 動態將不要的代謝物迅速地排泄，減輕對活體的無用暴 露，減少進行影像診斷時的背景影響，使診斷部位的影像 -21 - (18) (18)200418880 化可快速進行。例如’對於使用於介質χ、T的構成胺基 酸等，欲使代謝移至消化管時可利用Gly、Ala、lie、 Leu、Val等脂肪族胺基酸、phe、Trp、丁》，r等芳香族胺基 酸、M e t等含硫胺基酸、或含有甲基、乙基、苯基等之疏 水性官能基之化合物。欲使代謝移至尿及腎臟時，可藉由 選自S e r、T h r等羥基胺基酸、a s η、G 1 η等酸性胺基酸醯 胺、Arg、Asp、Gin、Lys等帶電性胺基酸（酸性、鹼 性）、作爲可合成的化合物可選自含羥基、醯胺基等極性 官能基的化合物、含羧基、胺基、亞胺基等帶電性官能基 之化合物，而利用帶電性胺基酸或帶電性官能基之化合 物。其他若需要決定與受體間的結合部分與經金屬標識的 結構之距離時，可利用1個以上的胺基酸、或院基等直鏈 可有機合成之化合物。 對於含於可金屬標識的基u之胺基酸，與上述相 同。例如選擇Asp或Lys時，或選擇含羧基或胺基之化合 物時，投予最終所得之放射性金屬標識物後之代謝物的主 要排泄途徑可控制於腎臟內。又，作爲胺基酸選擇G 1 y等 疏水性胺基酸時’可將代謝物的主要排泄途徑控制於消化 管內。 且，對於介質X、T的構成所使用的胺基酸等，活體 內欲具有對代謝的抵抗性，可考慮到D異構物胺基酸及 人工胺基酸及非胺基酸的利用。作爲由D異構物胺基酸 所構成之介質，可具體舉出D-Arg-Asp、Arg-D-Asp、D-AΓg-D，Asp 、 D-Asp-Arg 、 Asp-D-Arg 、 D-Asp-D-Arg 、 Ser- -22- (19) 200418880 D-Arg、D-Ser-Arg、D - S e r - D - A r g、D - A r g - S Ser、D-Arg-D-Ser、Ser-D-Asp、D-Ser-Asp-A s p、D - A s p - S e r、A s p · D - S e r、D _ A s p - D - S e r = 列c 本發明個白血球結合性化合物可由下述說 成。 (1 )由所有胺基酸構成時，可使用廣泛 普來多生物系統公司製作的肽自動合成機等肽 置，以Boc法或Fmoc法等進行合成。經合成 由結合於固相用樹脂載體之狀態下同時進行脫 脂載體切放後，使用逆相系管柱之高速液體層 稱爲Η P L C法）進行純化。其他亦可藉由肽液 調製、或由動物等採取。 (2 )含有非胺基酸化合物時，該多數情 相同方法合成。例如，固相用樹脂載體上結合 其保護衍生物，其Ν末端上與X的胺基酸殘 衍生物、或作爲介質的具功能化合物或其保 Ρ h e或其保護衍生物、L e u或其保護衍生物、 或其保護衍生物之順序結合、繼續活性化結合 月曰載體的L y s之側鏈的ε胺基，結合R的S e r 保5隻衍生物，將此與介質T之胺基酸或其保護 作爲介質具有功能之化合物或其保護衍生物， 可金屬標識的基所成之化合物或其保護衍生物 其後由樹脂載體切出經合成之上述式（1 )的 e r 、 A r g _ D -、D-Ser-D- f胺基酸序 明之方法合 被使用的阿 自動合成裝 的複合物可 保護基與樹 析法（以下 相合成法而 況可由上述 L y s殘基或 基或其保護 護衍生物、 Y的胺基酸 於固相用樹 或Thr或其 衍生物、或 其次U的 進行結合， 合成物之合 -23- (20) (20)200418880 成c 本發明的白血球結合性化合物上標識放射性金屬或常 磁性金屬所得之標識化合物作爲有效成分之醫藥組成物， 其使用於放射性診斷劑或放射線治療劑等，特別適用於固 體的免疫反應所引起的白血球浸潤較盛部位之影像診斷、 治療上。即，對於具有嗜中性白血球或單核白血球或淋巴 球或2種類以上的白血球系細胞之浸潤較盛的活動性部位 之疾病而言，其白血球聚集部位的檢測及聚集程度可使用 所定的檢測器而檢測出。 作爲個體的免疫反應所引起的疾病，可舉出哺乳動物 體內的感染症、發炎、及動脈性動脈硬化症所成之疾病 群。即，疾病群中含有病毒感染症、細菌感染症、真菌感 染症、原蟲感染症、蠕蟲感染症、膠原病、膠原病以外的 自身免疫疾病。又，日本人的肝炎的8成爲藉由病毒感染 的病毒性肝炎，因其他多數爲自身免疫性肝炎，故多數肝 臟的發炎性疾病患者對於嗜中性白血球的浸潤量而言爲淋 巴球·單核白血球的浸潤較多之疾病。對於如此嗜中性白 血球的浸潤爲相對性較少之疾病等時，過去的fMLF的類 似物因對淋巴球•單核白血球的結合性比對嗜中性白血球 的結合性較爲弱，故被指出病變的白血球浸潤可能評估過 小，但藉由本發明的對白血球具結合性之化合物，不僅對 於嗜中性白血球具有結合性，對於淋巴球或單核白血球的 結合性亦高，可正確地把握住多數自身免疫疾病或利什曼 原蟲症等嗜中性白血球的浸潤幾乎無法觀察到之疾病的白 -24- (21) (21)200418880 血球浸潤。 對於如此嗜中性白血球的浸潤量之淋巴球•單核白血 球浸潤較多之疾病群、或淋巴球·單核白血球佔白血球浸 潤的多數之疾病群’含有病毒感染症、原蟲感染症、蠕蟲 感染症、膠原病、膠原病以外的自身免疫疾病。本發明爲 對於白血球浸潤等免疫反應所引起的疾病群而言有效’但 對於嗜中性白血球的浸潤量而言淋巴球·單核白血球浸潤 較多的疾病群、或淋巴球•單核白血球佔白血球浸潤的多 數之疾病群特別有效。 且本發明爲，由過去技術所示且具有對嗜中性白血球 之結合性，對於淋巴球•單核白血球之浸潤量而言嗜中性 白血球的浸潤較多的疾病群、或對嗜中性白血球浸潤佔白 血球浸潤的多數之疾病群而言有效。作爲如此疾病群可舉 出細菌性心內膜炎、心肌梗塞、支氣管肺炎、大葉性肺 炎、浸出性結核、急性胃炎' 假膜性大腸炎、鼠疫感染 症、潰瘍性大腸炎、急性闌尾炎、急性膽管炎、膽囊炎、 管內增殖性絲球體腎炎、浸出性絲球體腎炎、急性腎盂腎 炎、急性卵巢炎、急性子宮頸炎、急性乳腺炎、急性睾九 炎、急性前列腺炎、過敏性血管炎、急性化膿性炎、結核 性髓膜炎、化膿性髓膜炎、急性化膿性骨髓炎、急性淋巴 節炎、結節性動脈周圍炎等。 作爲放射性診斷劑使用時，本發明的對白血球具結合 I生之化合物以 Tc-99m、In-111、Ga-67、Sn-117m、Sm-、Re-i86等SPECT用放射性金屬、或Cu-64或Ga-68 -25- (22) (22)200418880 等 P E T用放射線金屬做標識的放射性金屬標識化合物爲 較佳型態。作爲放射性治療劑使用時，該白血球結合性以 Υ-9 0、Re-1 86或Re-1 88等之放射性金屬做標識之放射性 金屬標識化合物爲較佳型態。作爲M R1造影劑使用時， 該對白血球具結合性之化合物以Cu、Fe或Gd等之常磁 性金屬進行配位之常磁性金屬標識化合物爲較佳型態。 以Tc-99m、Re-186及Re-188標識時，本發明的白血 球結合性化合物溶解於生理食鹽水及水性緩衝液等，加入 氯化錫等還原劑、與過鍀酸鈉溶液、或過鍊酸鈉溶液混合 依據一般方法調製出標識化合物。以 Cu、Cu-64、Fe、 Μη、Gd、In-111標識的標識化合物時，本發明的白血球 結合性化合物與含 C u、C u - 6 4、F e、Μ η、G d、I η · 1 1 1離 子的弱酸性水溶性溶液混合而調製成。以Ga-67、Ga-68 或 Y - 9 0標識的標識化合物，可由混合該白血球結合性化 合物與含Ga-67、Ga-68或Y-90離子之弱酸性至弱鹼性之 水溶性溶液而調製出。 提供放射性金屬標識化合物作爲放射性診斷劑或放射 性治療劑時，及提供常磁性金屬標識化合物作爲MR I造 影劑時，藉由上述方法調製出的標識化合物再經Η P L C法 進行純化除去雜質及未反應的過鍀酸離子、過鍊酸離子、 Ιη·111 離子、Cu 離子、Cu-64 離子、Ga-67 離子、Ga-68 離子、Fe離子、Μη離子、Gd離子及Y-90離子後使用亦 可 〇 放射性金屬或常磁性金屬所標識的標識化合物，藉由 -26- (23) (23)200418880 與藥學上許可之添加物混合可調製出放射性診斷劑、放射 性治療劑或MR1造影劑。作爲相關添加物可舉出藥學上 許可的抗壞血酸、P -胺安息香酸等安定化劑、水性緩衝液 等ρ Η調整劑、D -甘露糖醇等賦形劑、及改良放射化學性 純度之檸檬酸、酒石酸、丙二酸、葡糖酸鈉、葡糖庚糖酸 鈉等。又，亦提供添加這些添加物的冷凍乾燥品之即時調 製用組套之型態’本發明的放射性診斷劑特別有用。 未含本發明的對白血球具結合性之化合物以放射性金 屬標識之標識化合物之放射性診斷劑、放射性治療劑或 M RI造影劑，可藉由如靜脈內投予等一般使用的非經口手 段之投予，該投予量可依據患者的體重、年齡、適當的放 射線影像化裝置、MRI測定裝置及對象疾病狀態等各條 件，決定可影像化及治療之放射性及投予量。 以人類爲對象時，使用Tc-99m標識化合物的診斷劑 投予量，作爲Tc-99m的放射能量爲37MBq〜lllOMBq之 範圍，較佳爲 185MBq〜lllOMBq。使用 Re-186或 Re-18 8 標識 化合物 作爲治 療劑時 ，作爲 放射能 量時爲 3 7 Μ B q 〜18500MBq之範圍，較佳爲 370MBq〜7400MBq。使用 Y-90標識化合物作爲治療劑時，作爲放射能量時爲 37MBq〜3700MBq之範圍，較佳爲 37MBq〜lllOMBq之 範圍。以其他放射性金屬標識的標識化合物之投予量幾乎 相同。又，使用以G d、F e、Μ η、C υ等常磁性金屬做標識 的標識化合物之診斷劑投予量，可配合被處理的宿主、 M R影像化裝置的感度、影像實驗的標的組織、投予的特 -27- (24) (24)200418880 定樣式及使用的意圖效果而改變。然而，對於特定的患者 之特定投藥處方，取決於所使用的特定試藥活性（被衍生 的緩和性）、年齡、體重、一般健康、性別、飮食、投予 時間、排泄速度、藥劑的組合、及主治醫師的判斷等種種 因素。 標識化合物一天的約〇.l/imol/kg體重與1〇〇〇 //mol/kg體重之間，較佳一天約 0.5/imol/kg體重與約 3 00 mol/kg體重之間的投藥水準時有效。代表性調製物 含約ImM〜1 000mM之間的標識化合物。較佳爲如此調製 物含約10mM〜5 00mM之間的標識化合物。 以下本發明以實施例做更詳細的說明，但本發明未受 到這些實施例的限定。以下的實施例中，所得之物質的測 定方法、使用的試藥等如下所示。 (1 ) 7線計量機：血液內分佈的測定使用自動孔穴 r線計量機（阿羅卡公司製作）進行測定。體內分佈檢討 之測定使用Nal單頻道分析機（應用光硏公司製作）。 (2 ) τ線照相機：使用 GMS- 5 5 0U (東芝公司製 作）進行測定。 (3)逆相 HPLC:使用管柱 Millipore puresil 5//m C 1 8 ( 4.6xl50nm)。 (4 )所有呋化合物藉由固相合成法製作所得。 (5 ) 99mTc04· : 99Mo/99mTc發電機（馬濟迪各；日 本馬濟芬及克斯公司製作），使用理食鹽水所溶離出者。 (6 )所有試藥使用特級試藥以上之製品。 -28· (25) (25)200418880 (7 )所有實驗動物於實驗開始前1星期其間每1 2小 時的明暗循環條件下飼養。此期間，飼料及水爲自由攝 取。 實施例1 肽的合成 由固相合成法製造出下述的肽，使用於以下的實施 例。 本發明的對白血球具結合性之化合物 肽 3 :甲醯基-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys ( ΝΗ2 ) - ε (-Ser-Cys-Gly-Asn) 肽 4 :甲醯基-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys ( NH2 ) - ε (-Ser-Cys-Asp-Asp) (-Ser-Cys-Gly-Asp) 肽6:甲酿基-1<116-1^11-?116->116-丁>^-1^5(>^112)-£ (-Ser-D-Arg-Asp-Cys-Asp-Asp ) 肽 7 ··甲醯基-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys ( NH2 ) - ε (-Ser-siculum 四羧酸體） 肽8:甲醯基-Nle·Leu-Phe-Lys(NH2)-ε(-Ser-D-Ser-Asn-D-Arg-Cys-Asp-Asp ) 肽 9 :甲醯基-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys ( NH2 ) - ε (-Scr-D-Arg-DTPA) 肽13:甲醯基-]^16-1^11-?}^-川6-丁)，1*-1〇1(1^92)-(£ -29- (26) (26)200418880 (-Ser-siculum 丁酸） 肽 Μ :甲醯基-N 1 e - L e u - P h e - N 1 e - T y r - L y s ( N Η 2 ) - 6 (-Ser — D - A r g - A s p - s i c u 1 u m 丁酸） 肽 15:甲醯基-]\[1£-1^11-？11£-1\116-丁>，1'-1^5〔>>1142)-£ (-Ser-D-Ser，Asn-siculum 丁酸） 肽 16:乙醯基-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys(NH2)-6 (-Ser-D-Arg-Asp-Cys-Asp-Asp ) 肽 17:胺基甲醯基-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys (N Η 2 ) - ε (-Ser-D-Arg-Asp-Cys-Asp-Asp) 肽 18:甲基- Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys(NH2) - ε (-Ser-D-Arg-Asp-Cys-Asp-Asp ) 對於上述的肽，siculum四殘酸體表示1，4,8,11-四氮 雜環十四烷-1,4,8;1 1-四乙酸、DTPA表示二伸乙基三胺五 乙酸、si ciiliim 丁酸表示1,4,8,1 1-四氮雜環十四烷-丁酸。 對照肽 肽 1 :甲醯基-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys-Glu-Cys 肽 2 :甲醯基-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys ( ΝΗ2 ) - ε (-Cys-Asn-Asp) 肽 ll:甲醯基-Met·Leu，Phe-Lys-ε(-Gly-Gly-Ac-S-

Bzl ) 肽 12:甲醯基- Met-Leu-Phe-Lys-e(-Gly-Asp-Ac-S- -30- (27) (27)200418880

Bzl ) 使用阿普來多生物系統公司製作的肽合成機（模型 430A)，以 Boc 法使用 〇.5mM 的 MBHA 樹月旨（卜 M ethoxy- Benz hy dr ylamine Resin hydrochloride. 1 %

Divinybenzene-polystyrene copolymer )之條件下進行合 成。此時C端、Lys殘基的側鏈以Fmoc基保護。延長肽 鏈’ N末端胺基經甲醯基化後，LyS殘基的側鏈Fmoc基 以20%哌啶/DMF切斷，延長側鏈邊的肽鏈。肽的切出於 無水氟化氫：對甲酚（8 0 : 2 0 )中，-2 °C〜-5。(：下進行 1 . 〇小時反應。 純化爲，於管柱：YMC-Pack ODS-A SH-365-5 ( 30x 2 5 0nm)、溶離速度：2 0 m 1 /分鐘，溶離液A : 0.1 % T F A / 純水，溶離液B : 0· 1 % TFA/乙腈，由A至B的濃度梯度 條件下’使用液體層析法（HP LC法）進行。收集主吸收 峰部分進行冷凍乾燥得到目的之肽。所得之肽的純度以逆 相HPLC檢定。 且’取代MBHA樹脂使用preroadresin亦可同樣地合 成。 且，於6 Μ的鹽酸內於1 1 01，進行2 2小時的水解 後’求得對所得的主要吸收峰之胺基酸組成，確認出目的 的肽3後’冷凍乾燥胺基酸組成一致的吸收峰，得到目的 的肽3。又，於求得分子量的質譜質量分析（以下稱爲 ESI-MS )中，確認與理論値一致。以下表示肽3的胺基 酸組成之分析値（每個分子的個數）。括弧內爲表示目的 -31 - (28) (28)200418880 肽之胺基酸組成的理論値（每個分子的個數）。 肽 3 = A s p : ( 1 ) 1 . 〇 2、S e r : ( 1 ) 0 · 9 3、G1 y ·· ( 1 ) 1.03、 Tyr: ( 1) 1.〇〇、 Phe ： ( 1) 1.01 、 Lys: ( 1 ) 1.00、 NH3(2)2.1〇、Cys: (l)0.86、Leu(l)+Nle (2 ) 2.88 又’表示所得之肽3的ESI-MS分析値。括弧內表示 目的肽分子量的理論値。 ESI-MS:MW= 1 1 8 3.9 ( 1 1 8 4.4 ) 其他肽之合成 其他肽亦以相同方法合成相同方法定性。肽1、肽 1 〇、肽1 1及肽12的末端爲未經醯胺化之肽，故取代 MBHA 樹脂使用 HMP ( 4-Hydroxy-Methyl-Phenoxy Methyl-Copolystyren-1 % Divinyl-Benzene Resin)樹脂以 合成肽3所示方法進行合成。進行各定性時胺基酸組成分 析及ESI-MS分析値如下所示。肽1及肽1〇僅記載胺基 酸組成。 肽 1-Glu. ( 1) 1.04、Leu ( 1) 0.99、Tyr: ( ι) 0.98 ' Phe . ( 1 ) 0.99、Lys : ( 1 ) 1.00、Cys : ( 1 ) 0·97、Nle ( 2 ) 2.03 肽 2 = Asp. (2)2.00、Leu(l)0.86、Tyr: (1) 1.00、 Phe: (l)1.01、Lys: (1)1.00、NH3(2) 1.94 + Nle ( 2 ) 2.84 > Cys ： (1) 0.88、Nle(2) 2.10、 ESI-MS ： MW=1155.0 ( 1155.4) -32- (29)200418880 肽 4 = A s p : ( 2) 2.00 、S e r ：(1 ) 0.90、Tyr : ( 1 ) 0.99 、 Phe : (1 ) 1.01 ' L y s : :(1) 1 ·00、NH3 ( 1 ) 1.10 Leu ( 1 ) +Nle ( 2 ) 2.84 、C y s : (1 ) 0.92 > ESI MS : MW =1243.0 ( 1 24 3.4 ) 肽 5 = A s p : (2)1.00 、S e r :(1) 0.90、Gly : ( 1 ) 1.01 > Tyr ： (1 ) 0.97、Phe ： (1)1 .00 、 Lys : ( 1 ) 1.03 > nh3 ( 1 ) 1 .18、Le u ( 1 )+Nle (2) 2.86 ' Cys ： (1 ) 0 .91、ESI-MS : MW = 1185. 1(1185 .4 ) 肽 6 = A s p : ( 3 ) 3.19 、S e r 二(1 ) 0.97、Tyr ： ( 1 ) 0.97 - Phe ： (1 ) 0.98 、 L y s : :(" 1 .00、NH3 ( 1 ) 1.20 > Leu ( 1 ) +Nle ( 2 ) 2.80 、Arg : (1 ) 1 .06、Cys : (1 ) 0 .92、ESI-MS : MW = 15 14. 4 ( 1 514.7 ) 肽 7 = S e r ： ( 1 ) 0.92 、Tyr ：(1) 1 .00、Phe : ( 1 ) 1.02 L y s : (1 ) 1.00、： nh3 ( 1 ) 1.1 5 、 Leu ( 1) +N1 (2 ) 2.89、ESI-MS : MW = 1 3 24. 3(1324 • 6 ) 肽 8 = As p : ( 3 ) 2.94 ^ S e r :(2 ) 1 · 8 0、L e u : ( 1 ) 1.01 Λ Phe ： (1 ) K00、 L y s : :(1) 1 ·0 1、NH3 ( 2 ) 2.10 、 Nle ( 1 ) 0.95 、( C y s * (1 ) 1.01 、ESI-MS : MW: :1 3 24.1 ( 1 3 2 4.5 ) 肽 9 = Se r ： ( 1 ) 0.91 、Tyr • ( 1 ) 1.00、Phe : ( 1 ) 0.99 L y s : (1 ) 1.00、 nh3 ( 1 ) 1 .23、Leu ( 1 ) +N1 (2 ) 2.8 7 、Arg ( 1 ) 1 .00 、ESI- MS ： MW = 1441. (1441.6) 肽 10 = Gly: ( 2 ) 1.88' Met ： (l)0.98、Phe: -33- (30) (30)200418880 (1 ) 1.0 0 > L y s ： ( 1 ) 1.02' Leu ( 1 ) 1.04 月太 ll=Gly: ( 2 ) 1.94、 Met: (1) 0.91 、P he: (1) 1.00、Lys ： ( 1) 1.02、Leu ( 1) 1.01、ESI-MS ： MW = 842.5 ( 842.4) 月太 12 = Asp: (l)0.94、Gly: (1)0.92、 Met: (1) 0.96、 Phe: (1) 1.00、 Lys: (1) 1.01、Leu(l) 1.00、 ESI-MS : MW = 90 1 .5 ( 902.1 ) 肽 13 = Ser: (l)0.92、Tyr: (l)1.00、Phe: ( 1 ) 1.01、 Lys ： ( 1 ) 1.01、NH3 ( 1 ) 1.11、Leu ( 1 ) +Nle (2) 2.88 > ESI-MS ： MW= 1 178.3 ( 1178.5) 肽 14 = Asp ( 1) 1.01、Ser: ( 1) 0.91、Tyr: ( 1) 1 .00、Phe ： ( 1 ) 1.00、Lys : ( 1 ) 1.0 1、NH3 ( 1 ) 1.06> Leu ( 1 ) +Nle ( 2 ) 2.89、Arg(l) 1.00^ ESI-MS ： MW= 1 449.6 ( 1 449.8 ) 月太 1 5 = A s p ( 1 ) 1.01、Ser: (2) 1.77、Tyr: (1) 0.98、Phe ： ( 1 ) 1.00、Lys ： ( 1 ) 1.01、NH3 ( 2 ) 2.09、 Leu ( 1 ) +Nle ( 2) 2.87、ESI-MS : MW= 1 3 7 9.5 (1 3 7 9.7 ) 月太 16 = Asp(3)3.02、Ser: ( 1 ) 0.93 > Tyr ： (1) 1.00、 Phe ： ( 1 ) 1.00、Lys ： ( 1 ) 1.00、NH3 ( 1 ) 1.10、 Leu ( 1) +Nle (2) 2.86、Arg: ( 1) 1.01，Cys: (1) 1.07、ESI-MS : MW=1528.3 ( 1528.7) 肽 17 = Asp ( 3 ) 2.95、Ser : ( 1 ) 0.9 1、Tyr : ( 1 ) 1.00、 Phe ： ( 1 ) 1.00' Lys :(1) 1.00、NH3 ( 1 ) -34- (31) (31)200418880 1.79、Leu ( 1) +Nle (2) 2.58、Arg: ( 1) 1.00，Cys: (1) 1.00、ESI-MS : MW=1529.4 ( 1529.7) 肽 18 = Asp ( 3 ) 2.99、Ser : ( 1 ) 0.92 ' Tyr : ( 1 ) 0.88、Phe: ( 1) 0.97、Lys: ( 1) 0.97、NH3〔 1) 1.12、Leu ( 1) +Nle ( 1) 1.85、Arg: ( 1) 1.00，Cys: (1 ) 1.03、MeNle ( 1 ) 0.95 ， ESI-MS : MW= 1 5 00.5 (1500.7) 實施例2 肽1、肽2、肽3、肽4、肽5、肽6、肽7、肽8、肽9、 肽1 〇、肽1 3、肽14、肽1 5、肽16、肽1 7、肽1 8之Tc- 99m標識 (1 )方法 含有 40.3//mol/300"L 之庚糖酸與 130nmol/50//L 二氯化錫溶液之混合液之 vial管中加入1.1〜3.0GBq的 Tc-9 9m -過鍀酸鈉（以下稱99mTC04 —)溶液，全量成 1.35mL。偶爾翻轉的方式邊攪拌邊於室溫下反應30分 鐘，取出一部份以纖維素乙酸酯膜電泳法確認Tc-99m-庚 糖酸之Tc-9 9m標識率爲95%以上。 其次，將實施例1所得之1 6種肽分別溶解於二甲基 磺醯胺（DMF)中，再使用純水或含〇.9%NaCl的ρΗ7·4 之10mM磷酸緩衝液（以下爲PBS)、或ρΗΙΟ.Ο之10mM 碳酸緩衝液調製0 · 2 5〜1 2.5 n m ο 1 / 2 0 0 // L之濃度。該溶液 中各加入200以L之Tc-99m庚糖酸溶液，混合攪拌，由 -35- (32) (32)200418880

loot加熱至120t進行10分鐘反應。標識後取出其中一 部份，以Η P L C求得各τ c - 9 9 m標識率。Η P L C條件如以下 所不。管柱：Millipore poresil 5 " m C18 ( 4.6 X 15 0mm)、溶離速度：1 m L / m i η，檢測波長：2 2 0 n m，放 射能檢測器：N al單頻道分析機，溶離液A : 〇 . 1 %三氟乙 酸（以下稱爲TFA ) /純水，溶離液B : 0.1 % TFA/乙腈， 濃度梯度：0分鐘（20%B)— 20分鐘（50%B)。 (2 )結果 表1表示16種Tc-9 9m標識肽之標識率。所得之標識 化合物的Η P L C分析代表性光譜以圖〗表示肽4、圖2表 示肽6之結果。任意肽皆爲單一的標識生成物。確定任意 肽皆爲單一的標識生成物。由表I所示的標識率之結果得 知，於上述標識條件下可高達80%以上的Tc-9 9m標識。

-36- (33) (33)200418880 表1 . Tc-99m標識肽的標識率 標識化合物 放射化學性純度（％ ) T c - 9 9 m -肽 1 9 4.4% Tc-99m -月太 2 9 2.3% Tc-99m-肽 3 9 7.6% Tc-99m -肽 4 9 9.6% Tc-9 9m-肽 5 1 0 0 % Tc-99m -肽 6 1 0 0 % Tc-9 9m-肽 7 1 0 0 % Tc-99m -肽 8 9 8.5% T c - 9 9 m -肽 9 9 7.7% Tc-99m -肽 10 9 1.7% Tc-99m -肽 13 8 2.0% Tc-99m -肽 14 8 1.0% Tc-99m -肽 15 9 6.0% Tc-99m -肽 16 9 4.5% T c·9 9 m-肽 17 9 7.2% Tc-99m -肽 18 9 8.9% 實施例3 兔子血液內分佈

(1 )於實施例2中經Tc-99m標識的肽3、肽4、肽 6、肽8、肽9、肽1 2、肽1 3、肽14、肽1 5、肽1 6、肽 17及肽18，以與實施例2相同的HP LC條件之逆相HP LC -37- (34) (34)200418880 進行未標識的肽與標識肽之分離純化。梯度設定爲2 0 % — 50% (0.1%TFA 乙腈 / 〇.l%TFA 水）：〇— 20 分鐘。繼 續製作P e r c 〇 11比重梯度液。9 0 m L的P e r c ο 11 (法爾馬西 阿生技公司製）原液（比重爲1 . 1 30g/mL )中添加1 OmL 的1 . 5 Μ N a C 1，與生理食鹽水爲等滲透壓。該溶液以生理 食鹽水進行稀釋成 1.096、1.07 7、1.063 g/mL 之 Percoll 溶液。所調製出 1.096、1.077、1.063 g/mL 之 Percoll 溶 液各 1 m L重疊於1 5 m L管中。以比重標識玻璃珠（紅： 1.062、藍：1.075、橘：1.087、綠：1.098)確認出目的 密度。使用於試驗的血液爲，由無病原菌接觸之 SPF (Specific Pathogen Free)且爲健康的新紐西蘭白種系 (NZW ) 2kg左右之雄兔子耳靜脈的採血提供於試驗中。 又，欲確認急性發炎的感染症所引起的兔子血液之血 液內分佈，取代健康兔子的血液使用因金黃色葡萄球菌所 引起發炎之兔子血液而進行。將約1〇8個活菌之金黃色葡 萄球菌（Staphylococcus aureus)懸浮於lmL的生理食鹽 水，將其100 # 1投予於新紐西蘭白種系（NZW ) 2kg左 右的雄兔子之右小腿肌肉內。經2 4小時後進行兔子耳靜 脈的採血，而提供於試驗上。 且欲確認慢性發炎之潰瘍性大腸炎模型兔子之血液的 血液內分佈，取代健康的兔子血液，使用以2,4,6-三硝基 苯磺酸（TNBS )所引起的發炎之兔子血液進行。安東尼 氏們的方法(Anthony e t a 1., I n t. J. Exp. Path., 76，215-224 ( 1 995 ))爲準，製作出兔子潰瘍性大腸炎模型。即， -38- (35) (35)200418880 將36〇mg的TNBS溶解於々社的純水中，其後加入 3.2mL的乙醇，作成50.0mg/mL 46%乙醇/生理食鹽水。 由進行1天則；1¾食的7週大N e m b in a 1 a麻醉下的新紐西蘭 白種系（NZW)雄兔子M.3kg〜i.4kg) 5之肛門部位插 入管子約1 5 c m，注入3 m L的空氣。其次注入〇 · 8 m L的 TNBSM6%乙醇/生理食鹽水液體，經2分鐘的按摩及體位 改變。經4〜5天後由兔子的耳靜脈進行採血，提供於試 驗中。 將2 m L的兔子血液於3 7 °C水浴中加溫5分鐘。繼續 加入進行HPLC純化的4種TC-99m·肽的試料液3 μ L (1 1 IMBq/mL，作爲 Tc-99m·肽爲 1 · 8 x 1 0·】1 m 〇 1 / m L ) 後’進行30分鐘的恆溫培養。調製該血液試料的perc〇11 比重梯度液體安定地重疊於上面。進行2000rpm ( 800χ g ) ，1 5分鐘的離心分離。分離後冷凍試管後，各部分以 刀器切斷，分別以自動孔穴r線計量機進行測定，求得4 種T c - 9 9 m -肽各成份於血液中的放射能量分佈。 (2 )結果 由兔子的血液學參數得到白血球數1000〜8000cell/ //[，文獻所述的受體？？11數100,000〜120,000/(^11的數 値爲準，計算出兔子血液的受體FPR之推定量爲0.17〜 1.6xl〇_12m〇l/mL，兔子的肽/受體比爲0.01〜0.11。對於 全血液中的放射能之各血液成分的放射量百分率表示結果 如圖3所示。又，對全白血球的放射能量之顆粒白血球部 -39- (36) (36)200418880 分的放射能量與淋巴球及單核白血球部分的放射能量百分 率表示結果如表2及表3所示。 對於健康的SPF兔子血液，Tc-99m-肽3及Tc-99m- 肽1 2爲，顆粒白血球部分及對淋巴球與單核白血球部分 之分佈爲全血液中放射能之 5 %以下，並未見到強結合 性。 由金黃色葡萄球菌所引起的感染症之兔子血液中， Tc-9 9m-肽4爲30分鐘的恆溫培養後，顆粒白血球部分中 分佈全血液的放射能之1 〇 · 7 8 %，淋巴球及單核白血球部 分則分佈10.22%。又，對於全白血球之放射能量顆粒白 血球部分之放射能量爲5 0.22 %，淋巴球及單核白血球部 分的放射能量爲49.7 8 %。Tc-99m-肽6爲30分鐘的恆溫 培養後，顆粒白血球部分中分佈全血液的放射能之18.27 %，淋巴球及單核白血球部分則分佈2 0.2 1 %。又，對於 全白血球之放射能量顆粒白血球部分之放射能量爲4 7.6 5 %，淋巴球及單核白血球部分的放射能量爲5 2.3 5 % °肽 8、肽9、肽1 2、肽1 3、肽14、肽1 5、肽1 6、肽1 7及肽 18的各Tc-9 9m標識化合物係以全血液中的放射能量之10 %以上分佈於白血球，又淋巴球及單核白血球部分中對全 白血球之放射能量而言約2 7 %至約7 7 %範圍之分佈。 比較對照的T c - 9 9 m -肽1 2爲3 0分鐘的恆溫培養後’ 顆粒白血球部分中分佈全血液的放射能之3 9 · 7 3 %，淋巴 球及單核白血球部分則分佈8 · 8 9 %。又，對於全白血球之 放射能量顆粒白血球部分之放射能量爲8〗· 5 8 % ’淋巴球 -40- (37) (37)200418880 及單核白血球部分的放射能量爲1 8.4 2 %。由這些結果得 知，本發明的一部份之肽4、肽6、肽8、肽9、肽1 2、 肽1 3、肽1 4、肽1 5、肽1 6、肽1 7及肽1 8之各T c - 9 9 m 標識化合物爲，金黃色葡萄球菌所引起的感染症之兔子血 液中淋巴球及單核白血球部分的部分，比過去技術的肽 Tc-99m-肽12較爲多。 另一方面，由TNBS之潰瘍性大腸炎模型之兔子血液 中，如圖3所示，Tc-9 9m-肽3爲30分鐘的恆溫培養後， 顆粒白血球部分中分佈全血液的放射能之1 8 · 4 4 %，淋巴 球及單核白血球部分則分佈15.94%。又，對於全白血球 之放射能量顆粒白血球部分之放射能量如表 3所示爲 5 3.72 %，淋巴球及單核白血球部分的放射能量爲46.28 %。Tc-9 9m-肽6爲30分鐘的恆溫培養後，顆粒白血球部 分中分佈全血液的放射能之45.44%，淋巴球及單核白血 球部分則分佈12.60%。又，對於全白血球之放射能量顆 粒白血球部分之放射能量爲7 8.2 7 %，淋巴球及單核白血 球部分的放射能量爲21.73%。比較對照的Tc-99m標識 肽1 2爲3 0分鐘的恆溫培養後，顆粒白血球部分中分佈全 血液的放射能之1 5 . 1 0 %，淋巴球及單核白血球部分則分 佈8.3 4 %。又，對於全白血球之放射能量顆粒白血球部分 之放射能量爲 64.66 %，淋巴球及單核白血球部分的放射 能量爲3 5 . 3 4 %。 由這些結果得知，本發明的一部份之Tc_ 9 9m-肽3及 Tc-99m-肽6爲，因TNBS引起的潰瘍性大腸炎模型之兔 -41 - (38) 200418880 拢及單核白血球部分的部分’比過去技術的 子血液中淋巴坏 日f 1 ?較爲多c 肽TC-99H1，肽〗-料 /一 由上得知，本發明的肽與過去技術的Tc-9 9心肽1 2 顔示對淋巴球及單核白血球之結合比對顆粒白血 相比較，瘸小 球部分的結合爲強，確認出本發明的肽對多數淋巴球及單 核白血球浸潤之慢性發炎而言爲有效的。 標識化合物 感染症模型 顆粒白血球 淋巴球及單核白血球 T c - 9 9 m -肽 3 未實施 未實施 Tc-99m-肽 4 5 0.22±10.31 49.7 8土10.31 T c - 9 9 m -肽 6 47·65±2.47 52·35±2·47 Tc-99m-肽 8 51.41±6.39 4 8.5 9±6.39 Tc，9 9m-肽 9 58.5 1±2·90 4 1.49±2.90 T c - 9 9 m -肽 1 2 8 1 ·58±3.58 1 8.42±3.58 T c - 9 9 m -肽 1 3 33·45±3.69 66.5 5 ±3.69 T c - 9 9 m -肽 1 4 5 8.7 7±5·64 41 .23±5.64 T c · 9 9 m ·肽 1 5 5 8.94±6·47 41 .06±6.47 T c _ 9 9 m _ 肽 1 6 2 3.2 8±0·73 76.72±0.73 Tc-99m-肽 17 50·98±0·44 49.02±0.44 丁 c-99m-肽 18 7 2.3 5 土 4.24 2 7.65±4.24 表2 .對於兔子白血球的Tc - 9 9 m標識肽之結合率 (對全白血球的結合率（％ ) η = 3，平均値±標準偏差値） -42- (39) 200418880 表3 ·對於兔子白血球的Tc_99m標識肽之結合率 (對_舍一白血球gig合率（％)n = 3，平均値土標準偏差値） 標識化合物 大腸炎模型 顆粒白血球 淋巴球及單核白血球 T c，9 9 m ·肽 3 5 3 .7 2±10.74 46·28±10·74 T c - 9 9 m -肽 4 未實施 未實施 Tc-99m -肽 6 78.2 713.16 21 .73±3.16 Tc-99m-肽 12 64.66±4.05 3 5.3 4±4.05 實施例4 肽3、肽4、肽6、肽12的Tc· 9 9m標識化合物之兔子感 染症模型的影像化，對於急性期及亞急性期發炎之有用性 (1 )方法 金頁色葡甸球菌（Staphylococcus aureus)的約 1〇8 個活囷懸浮於1 m L的生理食鹽水，將此1 〇 〇 v L投予於約 2 k g的新紐西蘭白種（N Z W )系兔子之右小腿肌肉，經2 4 小時後，明顯有發炎的模型兔子上施予戊巴比妥麻醉，以 實施例2所得之Tc-99m所標識的肽3、肽4、肽5、肽 6、肽7、肽8、肽9、肽1 2、肽1 3、肽1 4、肽1 5、肽 1 6、肽1 7、及肽1 8之3 7〜7 4 Μ B q投予於耳靜脈內投 予，投予後5分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5 小時及2 2小時以7照相進行影像的攝影。投予5分鐘至 5小時的期間爲發炎開始後約24小時至29小時，相當於 急性期發炎。又，投予後22小時爲發炎開始後約46小 -43- (40) (40)200418880 時，相當於亞急性期發炎。 (2 )結果 所得之結果代表圖如圖4、圖5、圖6、圖7、圖8、 圖9、圖10、圖11、圖12、圖13、圖14、圖15所示c 於影像上設定注意區域，求得對於全身計數之各注意區域 與1 0 00晝素之計數比率（％投予量/ Kpix el )之結果如表 4所示。又，由該比率〔發炎〕/〔正常肌肉〕比（〔A〕/ 〔Μ〕比）求得之結果如表5所示。 其結果，過去技術的T c - 9 9 m -肽1 2爲投予後2小曰寸 (發炎後26小時，急性期發炎）的〔A〕/〔 Μ〕比爲 10.34 ±3.34 (以下爲表示平均値士標準誤差）（η==3 ) ’ 投予後22小時（發炎後46小時，亞急性期發炎）的 〔A〕/〔 Μ〕比爲33·94 土 20·76 ( η = 3 )，但對於發炎部位 的聚集爲投予後2小時（發炎後26小時）之UU0·63 %投予量/K pixel，至投予後22小時（發炎後46小時） 時減少爲〇.90±〇·29%投予量/Kpixel。 相對於此’本發明的T c - 9 9 m -狀3爲投予後2小時 (發炎後26小時）的〔A〕/〔M〕比爲ό·55±2·06 (η = 5 )，投予後2 2小時（發炎後4 6小時）的〔Α〕/ 〔Μ〕比爲54·16 ±32·86 ( η = 5 ) ’且對於發炎部位的聚集 爲投予後2小時（發炎後26小時）之0·93± 0 .3 1 %投予 量/K pixel，至投予後22小時（發炎後46小時）時增加 爲3.70 土 2.67%投予量/KPixel。又’ Tc-99m-肽4爲投予 • 44- (41) (41)200418880 後2小時（發炎後2 6小時）的〔A〕/〔 Μ〕比爲6 · 7 5 土 2.71 (η = 3)，投予後22小時（發炎後46小時）的〔A〕 /〔 Μ〕比爲2 9.0 7 土 1 9 · 9 7 ( η = 3 )，顯示比過去技術的T c -9 9 m -肽1 2低的値，但對於發炎部位的聚集爲投予後2小 時（發炎後26小時）之1.〇9±0.22%投予量/K pixel，至 投予後2 2小時（發炎後4 6小時）時增加爲1 . 8 5 土 0 . 3 4 % 投予量/ Kpix el。又，Tc-99m-肽6爲投予後2小時（發炎 後 2 6 小時）的〔A〕/〔 Μ〕比爲 1 4 · 2 5 ± 0 . 3 1 ( n = 3 )，投 予後 22小時（發炎後46小時）的〔A〕/〔 Μ〕比爲 43.84 ± 1 2.5 8 ( η = 3 )，對於發炎部位的聚集爲投予後2小 時（發炎後26小時）之1·22±0·05%投予量/ K pixel，至 投予後22小時（發炎後46小時）時增加爲1.77 ±〇.〇7% 投予量/Kpixel。 一般而言，感染後約2 4小時後對發炎巢浸潤之白血 球的大多數係由嗜中性白血球（佔顆粒白血球的大部分） 與構成，但之後會徐徐減少，浸潤白血球的主體爲巨嗜細 胞爲主的單核白血球及淋巴球。臨床上，必須要核醫學檢 查之大部分發炎病症係以單核白血球及淋巴球之浸潤爲通 著之亞急性期以後的發炎。由該檢討之結果得知，本發明 的肽不僅對於發炎後26小時（投予後2小時）之急性 期，對於亞急性期的發炎後46小時（投予後22小時）亦 極爲有用。 (42) (42)200418880 表4·對兔子感染症模型之Tc-99m 標識肽的發炎聚集（％ID/K pixel) (n=3,僅Tc-99m-肽3爲n=5，平均値土標準偏差値） 標識化合物 投與後經過時間 5分鐘 1小時 2小時 3小時 4小時 5小時 22小時 Tc-99m 肽 3 0.39±0.14 0.66士 0·93土 1.08士 1.39土 1.63土 3.70士 0.18 0.31 0.31 0.55 0.72 2.67 Tc-99m 肽 4 0.95±0.24 0.91土 1.09土 1.52土 1.76土 1.84 土 1.85士 0.14 0.22 0.27 0.39 0.27 0.34 To99m 肽 6 0.9310.10 0.94土 1.22 土 1.49土 1.59土 1.64土 1.77土 0.10 0.05 0.14 0.09 0.08 0.07 Tc-99m 肽 8 1.59±0.38 0.97土 0.73土 0.60土 0.60土 0.62土 未實施 0.34 0.16 0.10 0.14 0.11 Tc-99m 肽 9 1.39±0.22 0.65土 0.47土 0.41土 0.42土 0.43土 未實施 0.11 0.10 0.10 0.06 0.03 Tc-99m 肽 12 0·86 土 0.14 1.31土 1.66土 1.62土 1.64土 1.59土 0.90土 0.38 0.63 0.63 0.66 0.74 0.29 Tc-99m 肽 13 1.40±0.37 1.09土 0.68土 0.52土 0.54土 0.54土 未實施 0.23 0.12 0.10 0.07 0.08 Tc-99m 肽 14 1.30±0.20 0.82土 0.58土 0.44土 0.49土 0.51土 未實施 0.18 0.04 0.03 0.00 0.02 Tc-99m 肽 15 1.36±0.30 0.83土 0.76土 0.81土 0.90土 1.04土 未實施 0.02 0.07 0.32 0.33 0.28 Tc-99m 肽 16 2.93±0.21 0·85土 0.38土 0.23土 0.16土 0.13土 未實施 0.21 0.05 0.05 0.06 0.03 Tc-99m 肽 17 2.59±0.70 1.13土 0.62土 0.47土 0.38土 0.36土 未實施 0.07 0.03 0.04 0.07 0.12 Tc-99m 肽 18 2.14±0.16 0.75土 0.34土 0.19土 0.14土 0.13土 未實施 0.26 0.09 0.11 0.06 0.04 -46 - (43) (43)200418880 表5·對兔子感染症模型之Tc-99m標識肽的發炎/肌肉比 (n=3,僅Tc-99m-肽3爲n=5，平均値±標準偏差値） 標識化合物 投與後經過時間 5分鐘 1小時 2小時 3小時 4小時 5小時 22小時 Tc-99m 肽 3 1.64±0.57 3.56土 6.55土 8.68土 11.48土 13.11土 54.16土 1.03 2.06 2.89 2.88 JO / 32.86 Tc-99m 肽 4 1.94±0.49 4.08土 6.75土 10.65士 13.02土 14.81土 29.07土 1.34 2.71 5.53 5.76 6.77 19.97 Tc-99m 肽 6 2.08±0.46 6.16土 14.25土 24.31土 30.20土 29.67土 43.84土 0.59 0.31 4.55 7.49 7.66 12.58 Tc-99m 肽 8 1.31±0.56 4.27土 9.22土 13.33 土 18.51土 19.30士 未實施 2.15 3.81 5.30 1.88 2.18 Tc-99m 肽 9 1.83±0.38 3.91土 5.30土 5.79土 8.87土 8.84土 未實施 0.52 2.08 1.48 3.02 3.03 Tc-99m 肽 12 2.96±0.63 7.06土 10.34土 13.81土 16.88土 19.64 土 33.94土 1.43 3.34 2.94 2.80 1.24 20.76 Tc-99m 肽 13 1.60±0.22 2.84土 6.21土 5.60土 9.25土 11.26土 未實施 0.46 1.25 2.00 1.63 2.77 Tc-99m 肽 14 1.63±0.21 3.88土 12.23土 11.20土 18.93土 27.79土 未實施 0.88 3.30 3.73 3.08 9.32 Tc-99ni 肽 15 2.41±0.09 5.94土 8.84土 11.86土 12.88土 13.32土 未實施 1.82 4.41 6.02 9.40 8.76 Tc-99m 肽 16 2.1010.31 2.67土 4.02土 5.52土 4.14土 4.56土 未實施 0.49 1.27 0.13 0.83 0.53 Tc-99m 肽 17 2.02±0.36 3.16土 4.63土 7.29土 7.80土 10.71土 未實施 0.97 1.90 4.74 6.33 10.32 Tc-99m 肽 18 1.58±0.01 2.21士 3.76土 3.60土 4.18土 4.20土 未實施 0.98 0.11 2.71 3.09 2.67 -47- (44) (44)200418880 實施例5 肽3、肽4、肽6、肽1 2的T c · 9 9 m標識化合物的體 內動態 (1 )方法 使用實施例2所得之Tc-99m-肽3、 Tc-99m-肽4、 丁 c - 9 9 m -肽6及T c - 9 9 m -肽1 2的4種T c - 9 9 m標識化合物 進行老鼠體內分佈實驗。體內分佈實驗係以一般斯業者的 方法進丫了。即’試料的 3.0〜3 · 7 m B q對非絕食下的 s D (Sprague-Dawley )老鼠（體重 140 〜2 00g )於 RAVONAL麻醉下尾靜脈進行投予，投予後5分鐘、30分 鐘、6 0分鐘及1 8 0分鐘後，對腹部大動脈進行放血屠 设’摘取出各臟益對各臟器的放射能計量以N a I單頻道分 析機進行測定。又，測定其重量，再算出該體內分佈。將 各臟器的放射能之比率以每臟器的値（％ ID/臟器）、或 每克的値（％ ID/g臟器）表示。 (2 )結果 表6、表7、表8及表9中表示其結果。又，由表 6、表7、表8及表9的結果之尿及小腸的經時性變化分 別表示於圖1 6及圖1 7。 由表6、表7、表8、表9、圖ι6及圖17確認出TC- 9 9 m ^識肽的正常老鼠體內分佈，因Z及w的胺基酸殘 基之相異而有著相當不同的體內動態。即，由過去技術的 Tc-99n^^ ]2的代謝路徑爲，投予5分鐘後對肝臟的高聚 -48- (45) (45)200418880 集，各時間點上對胃的其他肽之高聚集、對小腸的各時間 點之高聚集、由小腸持續至盲腸的180分鐘點之高聚集得 知，肝膽管系排泄路徑爲主流（圖17)。又，因對小腸 的聚集高，故難以描繪出發炎性腸疾病等腹部發炎。 對於此，本發明的肽中，如申請專利範圍第1項所記 載的式之T及U，變更爲帶電性胺基酸及酸性灣機酸醯胺 等之親水性胺基酸，或附加之肽3、肽4及肽6的T c - 9 9 m 標識化合物係與T c - 9 9 m -肽1 2所得之動態相異，而促進 於尿的排泄（圖I6 )。特別爲Tc-99-肽6中該傾向顯 著。該特徵對於描繪發炎性腸疾病等腹部發炎病症而言極 爲重要，本發明的肽與過去技術的肽丨2相比，對於腹 部、特別對於小腸的分佈爲低，而由觀察到引起腹部的白 血球浸潤之部位等而表希本發明有效。 -49- (46) (46)200418880 表6 . T c - 9 9 m -肽3的正常老鼠之體內動態 上段：％投與量/臟器·下段：％投與量/g. (η = 3 ,平均値土標準偏差） 臃器 5分鐘 30分鐘 60分鐘 180分鐘 血液 5.345±0. 824 (0. 719±0.067) 1.759±0. 769 (0. 212 土0.073) 0.657±0. 150 (0.082 土0. 008) 0.318土0.225 (0.038土0.025) 心臟 0·182±0. 014 (0. 315±0.014〉 0.054±0. 012 (0. 094±0·024) 0.020±0. 003 (0.034 ±0.002) 0.004 ±0.000 (0. 007±0.000) 肺 0. 805土0, 150 (0. 868±0. 116) 0.395±0. 186 (0. 383±0. 155) 0· 117±0,011 (0. ]28±0. 010) 0.040土0.005 (0. 045±0·007) 肝臃 21.912±0. 529 (3. 287 士0.215) 16. 435±3. 821 (2, 475 ±0.543) 7. 339±0. 595 (1· 105 士 0·089) L 239±0. 132 (0· 206±0·026) 胰臃 0. 169±0.012 (0· 471 ±0.022) 0.102±0. 003 (0. 239±0. 020) 0. 065±0. 013 (0. 155±0·026) 0.042 ±0.004 (0. 102±0·014) 腎臟 15.350±1.803 (11.297±1.970) 19. 142±1.543 (13.953±2. 124) 14. 223 ±1.091 (10.679±0·785) 6.016±1.089 (4. 508±1.013) 胷 0, 500±0.060 (0. 131±0.031) 0.354±0. 196 (0. 090±0. 037) 0· 160±0· 177 (0.044 土 0.043) 0.058 土 0.049 (0,018±0·012) 小賜 21.307±1.479 (2. 691 ±0.329) 33. 762土5. 276 (4. 504 ±0.939) 37. 742 ±2. 889 (5. 165±0. 506) 40·273±1.263 (5. 787 土0.208) 盲腸 0.43_1± 0.048 (0. 086土0.010) 0. 125±0·035 (0. 024±0. 008) 0,057±0. 013 (0.013±0. 004) 1.636±0.993 (0. 308±0. 171) 結腸 0. 131 ±0.052 (0·335±0·_ 0.050 士 0.024 (0· 117±0.016) 0·017±0. 006 (0.040±0. 001) 0.022±0.026 (0.049 士 0.060) 直腿 0. 486±0. 059 (0. 465±0.042) 0. 164±0. 010 (0. 176±0.053) 0·063±0. 005 (0.062 ±0.004) 0.050土0.020 (0.05〗 ±0.018) 副W 0.024±0. 005 (0. 605±0. 131) 0.008 ±0.001 (0. 194±0. 024) 0.004 ±0.002 (0.095 ±0.043) 0. 001 土0.000 (0. 001 ±0. 000) 卵巣 0.059 土 0.003 (0. 735±0.034) 0.020±0. 003 (0·255±0·034) 0. 008±0. 002 (0. 106 ±0.019) 0.001土0.002 (0·013±0. 022) 下肢骨 0·408 土 0.042 (0. 332 ±0.035) 0.165±0. 035 (0. 139±0. 030) 0.073±0.008 (0.060 ±0.009) 0. 035±0.006 (0· 029±0. 006) 皮虜 1.033±0. 405 (0. 371 ±0.019) 0.362 土 0.067 (0. 154±0. 046) 0· 114±0. 037 (0.052 ±0.004) 0. 026±0.010 (0. 011±0. 001) 筋肉 1. 115±0·236 (0. 146±0·018) 0.366±0. 115 (0. 047±0. 013) 0. 110±0. 021 (0.016 ±0.002) 0. 026 ±0. 006 (0. 004±0. 001) 尿 0·230±0· 126 15. 575±3.638 34. 936 土2. 443 48.414 土 2.048 糞 0. 025±0. 013 0.014±0. 009 0. 012±0·013 0.618±1·032 全身剩 餘部份 30.489±1.877 (0·265±0·011) 11. 147 土 2·812 (0. 099±0·027) 4.283±0. 300 (0.037 ±0.002) 】.183±0. 362 (0·010±0. 003) -50- (47)200418880 表7. Tc-9 9m-肽4的正常老鼠之體內動態 上段：％投與量/臟器·下段：％投與量/g. (n = 3,平均値±標準偏差） 臟器 5分鐘 30分鐘 60分鐘 180分鐘 血液 6. 189土1· 270 (0.846±0, 167) 1.922±0. 560 (0,252 ±0.022) 0. 823±0·350 〈0. 109±0. 031) 0. 126±0.021 (0. 017±0·003) 心臟 0. 163土0.036 (0·306±0·077) 0. 043±0‘006 (0. 086±0. 010) 0. 026±0. 0】3 (0. 039±0· 0】0) 0.004±0. 001 (0. 007±0. 001) 肺 0. 652±0. 096 (0. 726±0. 107) 0. 243±0. 027 (0.279±0. 057) 0.】47±0·016 (0. 160±0·021) 0. 068±0. 017 (0.075 土 0,023) 肝臟 】8. 159±2. 621 (2. 810±0. 295) 11.820±J.257 (1.889±0· 186) 6. 583±0. 266 (1·032±0·061) 1.358±0. 284 (0. 232±0. 065) 胰臃 0. 144 土 0.010 (0. 367±0·064) 0. 1】0±0. 0]4 (0·275±0·032) 0. 076±0. 015 (0. 192±0. 031) 0. 059±0、009 (0. 160±0. 027) 臀臟 5·643±2. 131 (4· 354±1·312) 4, 671 ±0.594 (3,806±0,604〉 3.938 士 0.323 (3. 365±0. 433) 3. 433±1.054 (2· 8】4±0. 926> 胃 4·484±4. 613 (0·905±0. 747) 0· 340±0. 145 (0，115±0·042) 0.39] ±0.293 (0·1]8±0. 085) 0. 178±0. 092 (0·050±0. 025) 小腸 28. 887 ±3. 569 (3, 862±0.976) 41. 173±0. 337 (5. 648±0,657) 44. 035±4.359 (5. 876±0. 659) 13. 553±1. 591 (1. 997±0· 239) 盲腸 0.358 土 0.029 (0·089±0.019) 0· 1]6±0· 011 (0·029±0.003) 0. 077±0. 032 (0.018±0.004) 36. 011 ±2. 29] (6. 306±0. 610) 結腸 0. 244±0. 120 (0· 395±0·046) 0·072±0.024 (0. ]72±0. 089) 0·032±0. 016 (0·071±0. 031) 0. 115±0· 014 (0. 289±0. Π5) 直膜 0·476±0·241 (0. 565±0· 124) 0.125 ±0.004 (0· 166±0,0]9) 0.083 ±0.037 (0. 100±0. 057) 0. 060±0·022 (0·06]±0. 0]3) 副腎 0·024±0·003 (0· 604 ± 0.253) 0.010±0. 001 (0.242±0. 067) 0.004±0· 00] (0. 092±0·009) 0.001 ±0.001 (0,037±0. 014) 卵巣 0.069 ±0.026 (0· 861 ±0.327) 0·0]6±0·005 (0·204±0·062) 0. 008±0. 001 (0, 101±0·011) 0· 003 ±0.00] (0.035±0. 017) 下肢骨 0. 342±0. 017 (0· 304±0.019) 0.167 ±0.020 (0· 150±0.022) 0· ]06±0. 026 (0.095 ±0.022) 0. 044±0. 015 (0. 039±0, 012) 皮虜 0·506±0. 217 (0· 321 ±0.039) 0.414±0· 189 (0· 168±0.016) 0. 099±0. 0]7 (0.062±0·018) 0. 022 ±0. 006 (0.015±0. 001) 筋肉 0. 850±0· 112 (0. 132±0·014) 0.296±0.060 (0. 054±0. 0]6) 0· 115 土 0·037 (0.019 ±0.006) 0. 023 ±0. 003 (0. 004±0. 000) 尿 5. 258±2. 993 26. 706 ±0.900 37. 798土2· 759 42·009±0. 925 糞 0.027 ±0.002 0.095±0. 101 0. 097±0. 079 ].485±2. 3§谷·—一 全身剩 餘部份 27. 525±2· 159 (0. 260±0·042) Π·661±·0. 196 — (0· Π1±0·008) 5' 563 ±1. 766 (0. 052±0. 017) ]·448 土 0. 25'6_ __ (0·0 丨 4±0·002)

-51 - (48) (48)200418880 表8. Tc-99m-肽6的正常老鼠之體內動態 上段：％投與量/臟器，下段：％投與量/g， (n = 3,平均値±標準偏差） 臓器 5分鐘 30分鐘 60分鐘 ]80分鐘 血液 11. 205土0, 809 (1，414±0· ]76) 3. 657±1. 074 <0*451 土 0,052) 0. 936土0. 364 (0_ 123土0.020) 0. 532±0. 421 (0. 062±0. 044) 心臓 0·275±0. 050 (0. 494±0. 083) 0· 097±0.026 (0· 161 ±0.029) 0.029 ±0.008 (0. 056±0·017) 0. 014±0, 006 (0.024±0·009) 肺 1·770±0·274 (]· 770±0. 263) 0. 735±0·037 (0·752±0. 062) 0. 369±0. 029 (0. 390±0. 054) 0. 159±0. 023 (0·】67±0. 0]7) 肝臓 6. 374 土 0.900 (1.003±0. 162) ( 097 ±0.758 (0. 607 ±0. 113) 2· 713±0, 379 (0,465±0、072) 2· Ι67±0, 369 (0· 353±0. 042) 胰臟 0.229 ±0.050 (0.548 ±0.092) 0. 140 ±0,040 <0· 298±0· 083) 0. 105±0. 028 (0. 284±0· 054) 0. 090±0. 0]4 (0.2]0±0·011) 腎臃 10. 176±2. 359 (7. 546土 1. 996) 5·916±2.411 (3. 97】±1·559) 3. 867 ±1. 501 (2. 975±1.020) 2.634±1. 172 0.838 土 0.732〉 胃 0.658±0·】96 (0.297 ±0.022) 0.443 ±0.204 (0. 166±0. 090) 0. Ι66±0. 037 (0. 049±0. 003) 0. 104 土0· 067 (0. 028±0. 01】） 小腸 3. 680±0. 549 (0. 592±0.073) 3. 385±0. 898 (0. 472±0. 117) 3. 858±0. 753 (0. 596±0. 120) 0. 996土0.574 (0. 163±0. 099) 盲腸 0,662 土 0.009 (0. 165 ±0.020) 0.237 ±0.039 (0.049 ±0.007) 0.097 ±0.009 (0. 022±0. 008) 2·202±0.468 (0, 396±0. ]]5) 結滕 0·311±0·110 (0. 625±0·094) 0· 140±0·087 (0·223±0.057) 0.047 ±0.009 (0.094±0. 010) 0.03] ±0.021 (0. 069±0. 037) 直腸 0·895±0·245 (0.913±0. 169) 0·424±0· ]51 (0· 503±0. 372) 0. 260±0. 130 _(0·329±0. 245) 0Γ605±〇Γ〇'〇Ί— _ (0· 117±0· 029) 0·051±0·010 (0. 052±0. 009) 0. 001 (0. 061 ±0. 035) 副腎 0.027±0. 003 (0·668±0·077) 0.01】 ±0.001 (0·276±0·033) 卵巣 0.096±0. 004 (1· 195±0·048) 0. 044±0. 003 (0. 546±0. 040) 0. 020±0. 003 (0· 251 ±0.044) 0. 0·13±0· 009 (0· 160±0· 117) 下肢骨 0· 578±0·044 (0.489 ±0.065) 0·264±0. 014 (0· 221±0. 014) 0· 122±0. 030 (0. 101 ±0.023) 0.067 ±0.008 (0. 053±0. 005) 皮膚 1.756±0.16] (0·652±0. 069> 0.640±(Κ214 (0·273±0. 008) 0.238±0. 051 (0. 088±0. 011) 0.044 ±0.014 (0.024 ±0.006) 筋肉 1.632±0.201 (0. 236±0.021) 0·688±0·279 (0.094 ±0.026) 0. 180±0,036 (0· 027±0· 004) 0.066±0·009 (0.009 ±0.000) 尿 7.770±2·348 56. 342 ±5. 430 78. 567±2. 774 87. 408 ±1.020 糞 0. 048±0. 016 0.056 ±0.033 0.025±0··〇Ίΐ — 8. 397 ± Γ. 185 ' (0. 079±0. 014) 0.646 ±0.636 全身剩 餘部份 51. 858±1·75] (0.465 ±0.026) 22. 704 ±3. 734 (0, 199±0. 024) 2·巧2±0. 661 (0. 025±0. 007) -52- (49)200418880 表9. Tc-99m-肽12的正常老鼠之體內動態 上段：％投與量/臟器，下段：％投與量/g. (n = 3,平均値±標準偏差） 臟器 5分鐘 30分鐘 60分鐘 180分鐘 1 血液 4. 651±0.611 (0.683 ±0.074) 0. 880土0. 059 (0.146 士 0.019) 0.613±0. 185 (0· 1】2±0. 038) 0. 332±0. 205 (0.054 ±0.035) 心濂 0. 110±0. 016 <0. 205±0· 030) 0. 021 ±0. 004 (0. 040±0. 008) 0, 0】6土0. 006 (0.031 ±0.009) 0. 009±0. 007 (0. 0：18±0. 014) 肺 0.221 ±0.021 (0. 259±0. 013) 0.065 ±0.008 (0. 073±0. 005) 0. 052±0. 011 (0· 06] ±0. 0】2) 0. 030±0. 019 (0. 036±0. 025) 肝» 32. 141±1· 082 (4. 547 ±0.226) 1.527±0,301 {0. 235±0. 028) 0. 696±0. 083 (0· 107±0. 019) 0. 320±0. 22】 (0.054 ±0.036) 胰臟 0.055 ±0.005 (0. 135±0. 013) 0·0】9±0·003 (0.046 ±0.008) 0. 0i4±0. 00一2_ (0. 039±0. 003) 0. 0】3 土0. 010 (0. 035±0·023) 腎臓 1. 380±0. 161 (1·055±0· 152) 1.080土0. 125 (0.876±〇. 145) 1.043±0. 167 (0. 830±0. 123) 1.017±0, 639 (0. 822±0. 525) 宵 0. 802±0. 643 <0, 219±0. 167) 1.884±1.594 (0.516土0. 446) 1.748±0. 191 (0. 586±0.076) 1·953±1. 069 (0.596 士 0.178) 小通 44. 145±2.931 <5_915土0.448) 86. 860±2. 200 (12.285±0. 316) 86. 308±1. 540 02. 392±0. 927) 11. 574±15· 140 (L888±2.411) 盲餳 0, 16] ±0,022 (0. 043±0.004) 0.076 士 0.003 (0.020 ±0.002) 0. 169±0. 047 (0·043±0. 007) 73.702±24. 073 (15. 226±6· 088〉 結腸 0.080 ±0.006 (0· 167±0肩7) 0.023 ±0.005 (0. 048±0.006) 0. 026±0. 009 (0. 046 土0. 011) 0.048±0. 016 (0. 1]2±0. 052) 直腊 0. 162土0. 038 (0. 175 士 0.003) 0.041 ±0.011 (0.053 ±0.005) 0,037±0. 010 (0. 045±0·011) 0.019±0.011 (0. 022±0. 016) 副腎 0.009 ±0.001 (0. 223土0. 031) 0.002 ±0.000 (0. 057 土 0.009) 0.002 ±0.000 (0. 054±0.011) 0.00] ±0.001 (0.235 ±0.032) 卵巣 0. 029 ±0. 008 (0·368±0. 100) 0.008±0.001 (0.098±0,015) 0.007 ±0.001 <0·088±0. 014) 0.008 ±0.001 (0. 038±0. 016) 下肢骨 0. 165±0· 026 (0· 140土0.016) 0.057 土 0,005 (0· 050 土0.005) 0.049 ±0.006 (0. 043±0. 008) 0.029 ±0.021 (0. 025±0· 017) 皮膚 0. 374 ±0· 040 (0. 165土0. 027) 0.091 ±0.016 (0.073 ±0.008) 0. 104 ±0. 025 (0. 046 ±0.002) 0·042±0. 047 (0·0018±0· 019) 筋肉 0. 374 ±0. 040 (0. 165土0. 027) 0. 137 ±0.031 {D.021 土 0·004) 0.】05±0. 027 (0. 016±0. 0(Μ) 0. (Μ7±0. 023 (0. 007±0·004) 尿 0.400±0. 154 2. 687 ±0.285 5.493±0. 833 8· 767±5. 519 糞 0. 025±0.002 0.049 ±0.005 0. 105 土0. 019 0· 373±0· 122 全身剩 餘部份 14. 537 土 1.466 (0. 134±0. 015) 4: 493 土 0.616 (0,041 ±0.006) 3.4Π±0.465 (0.031 ±0.004) 1.720±1,276 (0. 0·16±0. 012)

實施例6 對老鼠潰瘍性大腸炎模型之體內動態、慢性發炎之有 用性 •53- (50) (50)200418880 (1 )方法 發乂模型的製作：依據安東尼方法（A n t h ο n y e t a 1 ·.

Int· J· Exp· path”76· 2 1 5 -2 2 4 ( 1 9 9 5 ))製作出老鼠潰瘍性 大腸炎模型。將 3 6 0 m g的 2，4 · 6 -三硝苯磺醯酸（T N B S ) 溶解於4mL的純水中，其後加入3.2mL的乙醇，作成 50.0mg/mL 46% 乙醇/生理食鹽液體。對於約2 4小時絕 食且經乙醇麻醉的7週大雌性SD系老鼠（Splague Dawley，Specific Pathogen Free)之肛門部位，以管子插 入7〜8公分，注入〇.lmL的空氣。其次，注入〇.2mL的 TNBS/46%乙醇/生理食鹽水液體，經2分鐘按摩及進行體 位改變。5天後提供於實驗中。 實施例 2所得之 Tc-99m-肽 3、 丁 c - 9 9 m -肽 4、T c-99m-肽6及作爲對照組的過去技術之Tc-99m-肽12分別 以約7.4MBq投予於1匹老鼠的尾靜脈投予，經5分鐘 後、30分鐘後、60分鐘後、180分鐘後殺死將各臟器的 放射能分佈以Nal單頻道分析機進行測定，求得各臟器的 %投予量、每lg臟器的％投予量。具有發炎位置的直腸 作爲發炎部位，以每1 g臟器的％投予量爲準求得〔直腸 (發炎）〕/〔肌肉〕比（〔A〕/〔 Μ〕比）及〔直腸（發 炎）〕/〔血液〕比（〔A〕/〔 Β〕比）。 (2 )結果 結果如表1 0、表1 1、表1 2及表1 3所示。 丁^99爪-肽3經投予後5分鐘時〔八〕/〔河〕比爲 -54- (51) (51)200418880 u6±〇.58’f又予後180分鐘時爲7·91±ι.ΐ6，對非發炎 部位的肌肉發炎部位顯示較高放射能的同時〔A〕/〔 μ〕 比顯示經時性的增加傾向。又，投予後60分鐘以後， 〔A〕/〔Β〕比超過1，投予後180分鐘時爲2〇〇 土 1.5〇, 顯示增加傾向。此並非反映血流增加之非特異性聚集，係 被考慮爲對發炎之特異性聚集。

Tc-99m-狀4經投予後5分鐘時〔a〕/〔 M〕比爲 4.j7 土 〇·68’ί又予後180分鐘時爲9·29±2·82，對非發炎 部位的肌肉發炎部位顯示較高放射能的同時〔A〕/〔 Μ〕 比顯示經時性的增加傾向。又，投予後6〇分鐘以後， 〔A〕/〔Β〕比超過丨，投予後18〇分鐘時爲1.51±〇.^， 顯不增加傾向。此並非反映血流增加之非特異性聚集，係 被考慮爲ί彳發炎之特異性聚集。

Tc-99m-肽6經投予後5分鐘時〔A〕/〔 Μ〕⑷^ 」tt爲 4.41土0.97’投予後18〇分鐘時爲ι6·5〇±11〇8，室 并發 炎部位的肌肉發炎部位顯示較高放射能的同時 < A〕/ 〔Μ〕比顯示經時性的增加傾向。又，投予後3 0兑μ >鐘以 後，〔A〕/〔 B〕比超過1，投予後1 8 0分鐘時爲〇 ^ 2·74 土 1 · 7 2 ’顯不增加傾向。此並非反映血流增加之非特 異性聚 集，係被考慮爲對發炎之特異性聚集。 丁(：-99111-肽12經投予後5分鐘時〔八〕/〔1^)1 」比爲 4.66 ±3.13，投予後180分鐘時爲6.22±4.61，龃> 一、本發明 的肽比較爲較低〔A〕/〔 Μ〕比。 又’ 〔A〕/〔 Μ〕比於投予後60分鐘時顯示叙 螓大値 -55- (52) (52)200418880 1 1 . 1 0 ± 1 2.3 3，其後減少。〔A〕/〔 B〕比爲投予後6 0分 鐘顯示1 . 8 9 ± 2 . 3 9，其後減少，投予後1 8 0分鐘時爲1 . 0 0 ±0.89 ° 由上得知，本發明的肽於淋巴球及單核白血球之浸潤 較多的慢性發炎部位聚集性及滯留性等比過去技術的肽 1 2優良，對於潰瘍性大腸炎等慢性發炎亦顯示有用。

-56- (53)200418880 表1 0 · 上段： T c - 9 9 m -肽3的模型 %投與量/臟器，下段 (n = 3,平均値±標準 動物體類動態 :%投與量/ g . 偏差） 臃器 5分 30分 60分 ]80分 血液 6. )45±1. 475 2· 39?土 1. 066 0. 763±0. 238 0. 164土0. ]20 (0. 912±0.084) (0· 341±0. 097) (0. 108±0. 025) (0. 023±0. 013) 心臃 0.0167土0.004 0.045±0, 006 0. 020±0. 001 0. 004±0,000 (0. 345±0. 006) (0. 101±0. 009) (0. 042±0. 004) (0. 008±0. 0〇]) 肺 0.840±0. 027 0. 248±0. 004 0.：15Ι±0.020 0, 053±0. 016 (1. 031±0. 058) (0. 308±0. 016) <0. 177±0· 029) (0. 068±0. 025) 肝» 24. 382±2. 015 16. 240±2.633 7.993±1.993 1.249±0,250 (4. Η6±0. 528) (2. 872±0, 793) (1.310±0. 313) (0. 234±0. 053) 胰臟 0. 211±0. 008 0· 075±0· 023 0·074±0. 0]8 0. 053±0. 016 (0. 597±0. 046) (0. 2]2土0. 070) (0. 207±0. 037) (0. 136±0. 043) 腎臃 13. 030±}.588 18. 869 士 6. 719 16. 068± 1.238 6. 248±0.746 (11.263±】·648) (15.816±5. 386) (】3·353± 1.426) (5. 333±0. 482) η 1. 428±0.982 0. 181±0. 072 0.082±0. 0】3 0. 035±0. 016 (0. 402±0. 242) (0. 058±0·034) (0. 025±0. 005) (0· 013±0· 006) 小® 20. 876±4. 511 34. 286 士 8. 6(Π 37. 506±2. 672 25. 53δ±19.634 (3. 056±0. 970) (5. 520±2. 262) (5. 249±0. 446) (4· 165±3. 176) 盲腓 0.405±0. 085 0. 192±0.134 0. 080±0. 024 14. 113±33.789 (0· 110±0· 031) <0. 030±0.003) (0· 0】5±0· 004) (3. 030±2· 871) 結肠 0. 228±0.044 0. 052±0. 033 0. 04€±0. 026 0. 087±0. 110 (0. 484±0. 028) (0. ] 40 ±0. 012) (0. 083±0. 044) (0. 229±0. 315) 直战(發炎） 0. 590±0. 118 0.286土 Q. 210 0. 110±0. 062 0. 089 ±0.024 (0. 573±0. 047) (0. 203±0· 036) (0. 097±0』35) (0. 041±0. 021) 副脊 0. 026±0. 003 0.008 ±0.001 0. 003±0. 001 0·001±0.00】 (0. 294±0. 360) <0· 097 ±0.065) <0, 067±0, 019) (0. 082±0. 084) 卵巣 0. 062±0. 046 化 01] 土 0.000 0. 005 ±0. 002 0. 005 ±0. 005 (0. 779±0. 572) (0.】35 土 0.003) (0. 069±0. 020) (0. 069±0. 057) 下肢骨 0. 225±0.047 0. 087 土0.019 0.049±ί). 0】8 0. 036±0. 022 (0. 211±0. 047) (0.086 土 0.032) (0. 050±0. 023) (0·036±0. 023) 皮虜 0. 378±0. 114 0. 191±0.211 0. )03±0. 018 0. 069±0. 047 (0. 220土0. (Π7) (0. 102±0. 049) (0. 062±ϋ. 041) (0. 040±0. 034) 肌肉 0. 537±0. 180 0. 181±0. 301 0. 094±0. 014 0.068土 ϋ. 049 (0. 104 ±0. 008) (0. 032±0· 015) (0. 018±0· 009) (0. 014±0. 012) 尿 0.681 ±0.234 4.094±0. 769 6.071±0. 796 8.305±2. 667 * 0, 656±1·023 0. 073±0.031 0. 073±0. 002 0.430±0.391 全身剩 16. 159±2. 511 5.820±1.595 3. 392± 1.387 2. 661 ±2. 059 餘部份 (0. 197±0. 056) (0· 065 ±0.027) (0· 040±0. 024) (0. 036±0. 035) 直胧(發炎 )/血掖 0.64 土 0.04 0. 63±0.10 】.09±ϋ. 70 2.00±1. 50 直賜（發炎 )/肌肉 3. 36±0. 58 4. 00±0. 95 4.78±1.S7 7·91±1· 16

•57- (54)200418880 表11. 上段：

Tc-99m-肽4的模型動 %投與量/臟器.下段： (η = 3，平均値士標準偏 物體類動態 %投與量/ g. 差） 臃器 5分 30分 60分 180分 血掖 5. 232±1. 667 (0. 625土0. 114) 1. 764±0. 087 (0. 213±0. 055) 0. 821 ±0. 308 (G· 092±0· 016) 0. 146±0. 029 (0. 019±0. 002) 心臃 0, 132±0.032 (0. 229±0. 058) G. 041 ±0.006 (0. 080±0. 019) 0. 0]7±0. 004 (0. 031±0. 008) 0.004±0. 002 (0. 007±0, 002) 肺 0. 571±0. 230 (0· 640±0. 236) 0. 373±0·074 «). 390土0. 086) 0· 171±0. 040 (0. ]82±0, 035) 0.069±0.025 (0. 075±0. 023) 肝臃 18. 757±3. 225 (2. 6]7±0. 132) ]3. 932±3. 695 (1.922±0. 413) 7. 344±ϋ. 694 (]·072±0·23】） ].219±0. 163 (0. 200±0. 024) 胰臟 0. 175土0. 088 (0.362 士 0.051) 0. 170±0, 055 <0.416 土 0. 168) 0. 081 ±0. 008 (0· ]76±0. 046) ϋ·069±0. 03】 (0. ]7]±0. 053) 腎臟 4. 564土0.850 <3. 131土0. 507) 5. 646±0. 9J9 <4·276±0. 533) 5. 439±1.647 (4. 262土 1.522) 6. 237±1. 026 (4. 490±0. 638) 1.304±1.206 (0. 323土0. 206) 0.209±0. 097 <0.057 ±0.032) 0. 149±0. 024 (0. 039±0. 011) 0.090±0. 062 (0. 035±0. 029) 小肠 33. 890土4. 651 (4. 09δ±0. 762) 41.709土7,462 <5. 413土i. ]68) 45. 378±2. 739 (6. 383±0. 486) 30. 633±}9.329 (4. 459土2. 611) 盲腿 0. 294±0.074 (0· 060±0. 0】2) 0.094土0. 023 (0. 022 ±0. 002) 0. 078±0.061 (0. 016±0. 0】0) 18. 242±20. 821 U. 248土4. 880) 結胧 0. 18}±0. 171 (0· 289 土 0. 072) C.048±0. 015 <0. 114土0, 047) 0.0]9±0.014 (0. 046±0. 010) 0. 053±0. 066 (0. J12±0. 】35) 直鵃 (發炎） 0.410±0. 157 (0. 468士 0.127) 0.4]0±0.398 (0.2)6±0.150) 0. 133±0.092 (0. ]〕5±0·076) 0. 032±0. 011 (0· 028土D, 008) 副腎 0.015±0.005 (0. 376±0.]】9) 0. 005±0. 002 <0. 129±0. 061) 0.0(Η±0. 000 (0. 095 ±0. 008) 0.00】 ±0.000 (0. 023 ±0. 008) 卵巣 0.042±0.012 (0. 529 土 0. 150> 0. 025±0. 011 (0. 309±0. 133) 0. 006±0. 002 (0. 080 ±0. 020) 0. 002±0. 000 (0. 022±0. 003) 下肢脅 0. 377 ±0.054 (0.289 土 0.033) 0. 218±0. 052 (0. 174±0. 053) 0.】21±0.008 (0. 097±0·009) 0.07δ±0. 023 (0. 061±0. 017) 皮膚 0. 773±0. 276 <0. 268±0. 050) 0.327 ±0.233 <0. ]31±ϋ· 047) 0. 112±0.048 (0. 044 ±0. 007) 0.025±0.011 (0. 009±0. 002) 肌肉 0. 757土0· 118 (0· 106±0. ΟΜ) 0. 310±0. 157 <0.047 ±0.026) ¢. 301±0.012 (0. 033±0. 001) 0.022 士 0.008 (0. 03 ±0. 003) 尿 9. 976±3.195 23. 885±2. 560 35. 648± 1.482 41. 509±2. 049 * 0· ]04±0.139 0. 032±0,034 0. 024±0.023 0. 2】5±0. 305 全身剩 餘部份 22. 375土2. J65 (0. 192±0.029) 10, 901 ±4. 459 (0.】0Ι±0. 058) 4· 354±0.670 (0. 037 ±0.005) 1.353±0. 323 (0. 011±ϋ. 002) 直® (發 炎)/血掖 0. 74±0. 10 0. 95±0. 42 1. 26±0. 82 1.5i±0.41 直腸(發 炎）/肌肉 4. 37 ±0.68 4. 46±1.00 8. 81 ±6. 35 9. 29±2. 82

-58- (55)200418880 表 12. 上段：

Tc-99m-肽6的模型動 %投與量/臟器，下段： (n = 3,平均値it標準偏 物體類動態 %投與量/ g. 差） 臟器 5分 30分 60分 180分 血液 5. 232±1. 667 (0. 625±0. 1Η) 1.770±0.092 (G. 214±ϋ. 057) 0, 818±0. 304 (0. 092 ±0. 016) 0, 146±0 ϋ29 (0. 019±0. 002) 心臓 0. 132±0.032 (0. 229 士 0. 058) 0.042 ±0.006 (0. 080±0. 020) 0. 017±0. 004 (0. 031±0. 008) 0. 004±0. 002 (0, 007±0. 002) 肺 0.571±0. 230 (0. 640±0. 236) 0. 374±0.076 (0. 39] ±0.088) 0. ]70土0. 040 (0. 181±0. 035) 0.069±0. 025 (0. 075±0. 023) 肝臃 18. 757±3. 225 (2. 617±0·】32) 13. 991±3. 796 (1. 930±0. 126) 7. 322±0. 720 (1. 069±0. 235) 1. 219±0. 163 (0. 200±0· 024) 胰臟 0. 175±0. 088 (0. 362±0. 051) 0. 171±0· 055 (0.4】8土0.170) 0. 08]±0. 008 (0. 176±0. 046) 0. 069±0,03] (0. 17] ±0. 053) 腎臃 4.564±0. 850 (3· 131 土ϋ· 507) 5.664土0.917 <4.291 ±0.548) 5.427±1.667 (4. 254±1.536) 6. 237±1.026 (4. 490土0. 638) 1·304±1.206 (0. 323±0. 206) 0.210±0. 098 (0. 057±0. 033) 0. 519±0. 649 (0. 107±0. 109) 0. 090 ±0.062 (0. 035±0· 019) 小觴 33. 890±4. 651 (4·095±0·762) 41.389±7, 985 (5. 371±1·225) 45. 175土2. 447 (6. 357 ±0.498) 30·633±19· 329 (4. 459±2. 611) 盲腿 0.294±0. 074 (0. 060±0.0]2) 0.198±0. 166 (0. 049±0. 044) 0. 078土0.061 (0. 0Ι6±0· 0】0) 18. 242±20. 821 (4. 248±4. 880) 結脉 0. 181±0. 171 (0. 289±0. 072) 0. 048±0.014 (0. 115±0· 048) 0.019±0. 014 <0. 046±0. 010) 0·053±0·066 (0. Π2±0. 135) 直Μ (發炎） 0. 410±0. 157 <0. 468±0. 127) 0. 413±0. 402 {〇. 217±0. 152) 0· 132±0·09】 (0. 114±0. 075) 0.032±0.011 (0. 028±0. 008) 副胥 0.015 土 0.005 (0. 376土 (Κ 1]9) 0·005± 0.002 (0. 130±0. 062) 0.004±0.000 (0. 094 ±0. 008) 0. 001 ±0.000 (0、023 土 0. 008) 卵巣 0·042±0. 012 (0. 529±0. 150) 0.025±0.011 (0. 311±0. 136) 0.006± 0.002 (0. 080±0. 021) 0.002 土 0· 000 (0. 022±0. 003) 下肢骨 0. 377±0. 054 (0♦ 289±0·033) 0,219±0. 054 (0.174±0. 054) 0. 120±0. 008 (0. 097±0.010) 0. 078±0·023 <0. ϋ61±0· 017) 皮膺 0·773±0·276 (0. 268±0. 050) 0.328±0. 237 (0· ：131±0. 048) 0.112±0. 048 (0. 044土0. 007) 0. 025±0.011 (0.009±0·002) 肌肉 0. 757±0. 118 (0· 106±0·0Η) 0.311±0· 160 (0. 047±0. 026) 0· 101±0·012 (0. 013±0. 001) 0. 02^±(Κ008 (0. 03±0‘001) 尿 9. 976±3· 195 23. 955±2. 467 35. 537±1. 650 41. 509±2. 049 % 0. 104±0. 139 0、032±0·034 0.024±0· 023 0. 215±0.30S 全身剩 餘部份 22. 375±2· 165 (0. 192±0. 029) 1<L953±4. 550 (0· 101±0. 058) 4. 338±0. 643 (0. 037±0. 005) 1. 353±0.323 (0♦ 011±0· 002) 直肠（發 炎）/血液 0·75±0. 13 1.27±1.04 1.88±1.44 2. 74±1. 72 直腸（發 炎）/肌肉 4.41±0.97 5.54±2. 99 ]3. 16±11.07 16. 50±11.08

-59- (56) (56)200418880 表13. Tc-9 9m-肽12的模型動物體類動態 上段：％投與量/臟器.下段：％投與量/g. (ri = 3.平均値±標準偏差） 臟器 5分 30分 60分 WO分 血液 】0. ]40±9. 197 (2, 016±0. 074) h 122±0. 291 (0. 179 ±0. 036) 0. 954±0. 447 (ϋ.】70±ϋ. 068) 0. 3ϋ8±0· 193 (0. 069±0. 055) 心臃 0. 111±0.045 (0. 269 土 0. 082) 0. 027 士0. 001 (0· 061±0. 014) ϋ. 020 土 0. 011 (0.049±0. 026) 0. 007±0. 002 (0· 018±0. 009) 肺 0. 280土0. 049 <0· 382±0. 067) 0. 086±0. 017 (0. 107 ±0, 032) 0, 07]土0.032 (0. 096±0. 049) 0. 038±0. 029 (0. 054±0. 050) 肝臟 21. 311±7. 503 (3. 326土0. 36】） 2. 012±0. 397 (0. 322±0. 075) 0.972±0.399 (0. 162±0· 074) 0. 345±0. 235 (0. 059±0. 042) 胰臟 0, 072±0. 020 (0· 189±0. 029) 0. 024 ±0.006 (0. 064±0. 019) 0. 018±0. 006 (0. 053±ϋ. 0】8) 0. 009±0. 004 (0. 031±0. 024) 腎臃 1.440 士 0.326 (1.369±0.302) 1. 077±0. 192 <0· 977±0. 383) 1.486±1.002 <1·377±0. 996) 0. 598 ±0.056 (0.506±0.065) 2. 461土2. 801 (0. 631±0. 414) 3. 446±4. S40 (1. 050±1. 309) 1.990±0. 778 (0.659±0. 263) 3. 500±4.830 (1. 245±1. 129) 小賜 43, 689±4. 685 (6. 289±0. 568) 82. 028士4. 176 (12. 654土 1.252) 80. 691 ±9. 250 (13. 503±2. 964) 82. 578±1. 469 (13· 】21±2. 433) 盲肠 0,447±0. 366 <0. 061 ±0. 008) 0.】16±0,019 <0· 030土0. 008) ί). 2ΐ)·3±0. 070 ω·061 土0. 025) 2. 703 ±3. 959 (0. 783±]· 253) 結胧 0· 194 士 0. 152 (0. 423±0· 333) 0.021 ±0.001 (0.061 士 0.009) 0,046±0. 032 (0. 103±0. 077) 0.026 ±0.024 (0. 057±0. 054) 直賜 (發炎） 1. 149土1,318 (0. 486 土 0. 319) 0. 117±0. 060 <0· 124 士 0. 044) 0. 637±0. 947 (ϋ. 398±0. 557) 0.203±0.328 (0· 098±0. 142) 副腎 0. 018±0. 002 (0. 441±0,044) 0. 004±0. 002 (0. 091±0. 047) 0· 017 土 0.024 (0.420±0. 610) 0. 002±0.003 (0. 059土0. 072) 卵巣 0.052 士 0.027 (0, 64(5土0. 334) 0. 01】±0. 000 (0· 137±0· 004) 0.015±0.016 (0· 182±0. 197) 0. 004±0.004 (0. 052±0. 050) 下肢骨 0. 225±0.047 (0. 211±0. 047) 0. 066±0. 032 (0, 078土0· 026) 0.066土 0.032 (0. 062±0. 027) 0. 028±0.020 (0. 028±0. 021〉 皮虜 0. 378±0. 114 <0. 220±0. 017) 0. 191±0. 149 (0. 096±0. 037) ϋ.130±0·048 (0· 103±0. 076) 0. 052 ±0.044 <0. 030±0. 029) 肌肉 0. 537±0. 180 (0.】04±0· 008) 0.174 土 0.073 (0, 030±0. 011) 0· 120±0. 045 (0. 026±0. 015) 0. 052±0.044 (ο.οη±ο.οιο) 尿 0.681 土 0.234 3.690±0. 886 6· 171±ϋ. 589 7. 135±2·769 粪 0, 656±1. 023 0.070±0. 023 0. 356±0. 490 0, 331 ±0.325 全身剩 餘部份 16. 159±2. 511 (0. 197±0. 056) 5.702土1. 146 (0. 062±0. 020) 6. 036土 4. 684 (0. 070±0. 056) 2.081±1.769 (0. 027±0. 029) 直腿（發 炎）/血液 0. 43土0. 16 0.72±0. 33 1.89±2. 39 1.00±0. 89 直肠(發 炎）/肌肉 4. 66土3. 13 4.21±1. 15 11· 10土 12, 33 6.22土4. 61 實施例7 經Tc-9 9m標識的肽3、肽6之人類血液內分佈 (1 )方法 -60- (57) (57)200418880 欲確認本發明以人類爲對象時的臨床上是否亦有效’ 使用人類血液進行討論，確認出本發明的2種肽對於白血 球具有結合性。將實施例2中經T c - 9 9 m標識的肽3、肽6 與實施例2相同的η p L c條件之逆相Η P L C進行爲標識肽 與標識肽之分離純化。濃度梯度設定爲2 0 % — 8 0 % ( 〇 . 1 % T F Α乙腈/ 0 . 1 % T F Α水）：0 — 2 0分鐘進行。（肽6的 純化後之放射能量爲UlMBq/mL)。 又，作爲過去技術的肽，調製出 Tc-99m-肽 1]、Tc-99m-肽 12。肽 11 與肽 12 溶解於二甲基磺醯胺 (DMF )，調製成濃度 0.1mg/5 00 v L。酒石酸/PBS液 (5mg/200mL )中添力口 50mL 的 SnCl2/l〇mM 鹽酸溶液 (5mg/10mL)，加入肽溶液馬上注入0 · 2 5 m L的9 9 m T c 0， 溶液（2 73 8MBq/mL )。經數秒振盪後進行1 2 0 °C 1 〇分鐘 的標識反應。最終濃度爲 8 5 5.6 MBq/125mg/mL。使用 Η P L C進行分液純化及放射化學性純度之測定。分析條件 與實施例2相同條件下’濃度梯度設定爲2 0 % — 5 0 % (0 · 1 % T F Α乙腈/ 〇 . 1 % T F Α水）：〇 — 2 0分鐘進行。純化 後的放射能濃度爲2 8 7〜311MBcl/mL。 繼續以實施例3所記載的方法爲準製作出P e r c 0 11比 重梯度液體。 由4〇歲以下的自願者中取出20〜30mL的血液。繼 續分別加入30/i L的Tc-99m標識肽（mMBq/mL ’作爲 丁(：-99111-肽爲1.8><1〇_11111〇1/111]1)後’進行30分鐘的恆溫 培養，取出2〜3mL的血液試料’將經調製的Percoll比 -61 - (58) (58)200418880 重梯度液體安定地重疊於上面。進行 2 000rpm ( 8 0 0 x g ) ，1 5分鐘的離心分離。分離後冷凍試管後，各部分以 刀器切斷，分別以自動孔穴7'線計量機進行測定，求得 T c - 9 9 m -肽於各血液成份中的放射能量分佈： (2 )結果 由人類的血液學參數得到白血球數 4 1 0 0〜6 1 0 0 c e 11 / //L，文獻所述的受體FPR數 100,000〜 120,000/cell的數 値爲準，計算出人類血液的受體FPR之推定量爲 0.68〜 1 ·2 X 1 (T12mol/mL，人類的肽/受體比爲0.03〜0.01。對於 4種Tc-99m-肽及陰性對照組（Tc-99m-庚糖酸）的人類血 液內分不支結果如圖1 8所示。又，對於4種Tc-99m-肽 之全白血球之放射能量顆粒白血球部分之放射能量與淋巴 球及單核白血球部分之放射能量百分比的結果如表1 4所 不。丁c-99m-肽 3、Tc-99m -肽 11、Tc-99m-肽 12 的 η 數爲 1，Tc-99m-肽 6 的 η 數爲 3。

Tc-99m-肽3爲30分鐘的恆溫培養後，顆粒白血球部 分中分佈全血液的放射能之2 1 .9 1 %，淋巴球及單核白血 球部分則分佈3 9.9 %。又，對於全白血球之放射能量顆粒 白血球部分之放射能量爲3 5.4 1 %，淋巴球及單核白血球 部分的放射能量爲64.5 9 %。由該結果得知，本發明的一 部份之Tc-99m-肽3對健康人類血液而言，其對淋巴球及 單核白血球部分之分佈比過去技術的肽T c - 9 9 m ·肽1 1及 肽 Tc-9 9m-肽 12 多。 -62- (59) (59)200418880 T c - 9 9 m -肽6爲3 0分鐘的恆溫培養後，顆粒白血球部 分中分佈全血液的放射能之29.4 5 %，淋巴球及單核白血 球部分則分佈6.5 9 %。又，對於全白血球之放射能量顆粒 白血球部分之放射能量爲 8 1 . 9 4 土 8 . 6 7 %，淋巴球及單核 白血球部分的放射能量爲1 8.0 7 ± 8 . 6 7 %。由該結果得 知，本發明的一部份之T c - 9 9 m -肽6對健康人類血液而 言，其對淋巴球及單核白血球部分之分佈比過去技術的肽 Tc-99m·肽 11 多。 另一方面，陰性對照的Tc-99m-庚糖酸爲30分鐘的 恆溫培養後，顆粒白血球部分中分佈全血液的放射能之 1 . 1 1 %，淋巴球及單核白血球部分則分佈2 · 5 2 %。血漿部 分爲分佈9 5 . 3 9 %。因對照組不會引起白血球的結合之陰 性對照，故無法算出對於全白血球之放射能量的顆粒白血 球部分與淋巴球及單核白血球部分的放射能量之比率。 對Tc-99m-肽11爲人類血液而言，30分鐘的恆溫培 養後，顆粒白血球部分中分佈全血液之2 9.4 5 %，淋巴球 及單核白血球部分則分佈5 8 . 7 0 %，淋巴球及單核白血球 部分爲分佈8 · 0 2 %。又，對於全白血球之放射能量之顆粒 白血球部分之放射能量爲8 7 · 9 8 %，淋巴球及單核白血球 部分之放射能量爲1 2.0 3 %。 對T c · 9 9 m -肽1 2爲人類血液而言，3 0分鐘的恆溫培 養後’顆粒白血球部分中分佈全血液之2 5 · 0 9 %，淋巴球 及單核白血球部分則分佈1 3 · 7 7 %。又，對於全白血球之 放射能量之顆粒白血球部分之放射能量爲64.5 7 % ,淋巴 -63- (60) 200418880 球及單核白血球部分之放射能量爲3 5.4 3 % ° 由上述結果得知，本發明的肽，與陰性對照的TC -9 9 m -庚糖酸及過去技術之T c - 9 9 m -肽1 1或丁 c - 9 9 m -肚1 2 比較，比對顆粒白血球的結合，對淋巴球及單核白血球的 結合較爲強。又，如實施例4及實施例6的結果^知’確 認本發明的肽對於多數淋巴球及單核白血球浸潤之慢性發 炎有效。 表1 4 .對於人類白血球的T c - 9 9 m標識肽之結合率 (n = 3，平均値±標準偏差値）__ 標識化合物名 對全白血球之結合率（％ )__ 顆粒白血球 淋巴球及單核白血球 Tc-99m-肽 3 35.4 1 ( n=l ) 64.5 9 ( n= 1 ) Tc-9 9m-肽 6 8 1 .94±8·67 18.07 ±8.67 T c - 9 9 m -肽 1 1 8 7.98 ( n=l ) 12.03 ( n=l) Tc-99m-肽 12 64.57 ( n^l ) 3 5.4 3 ( n= 1 ) 實施例8 經T c - 9 9 m標識之肽3、肽6之老鼠血液內分佈 (1 )方法 發炎模型的製作：依據安東尼方法（Anthony et al·， Int. J· Exp. Path·，76，2 1 5 -224( 1 995 ))製作出老鼠潰瘍性 大腸炎模型。將3 60mg的2,4;6-三硝苯磺醯酸（TNBS ) 溶解於4 m L的純水中，其後加入3.2 m L的乙醇，作成 -64- (61) (61)200418880 50.0mg/mL 46% 乙醇/生理食鹽液體。對於約2 4小時絕 食且經乙醇麻醉的7週大（1 64〜1 8 4 g )雌性S D系老鼠 (Splague Dawley, Specific Pathogen Free)之肛門部 位，以管子插入7〜8公分，注入〇 . 1 m L的空氣。其次， 注入0.2mL的TNBS/46%乙醇/生理食鹽水液體，經2分 鐘按摩及進行體位改變。連續進行3天後，最後投予曰的 4天後提供於實驗中，取出其血液。將2mL的兔子血液於 3 7 t：水浴中加溫5分鐘。繼續加入進行Η P L C純化的T c -99m-肽 3、Tc_99m-肽 6 的試料液 3/iL( lllMBq/mL，作 爲T c · 9 9 m -肽爲1 . 8 X 1 0 ·1 1 m ο 1 /m L )後，進行3 0分鐘的恆 溫培養。調製該血液試料的Percoll比重梯度液體安定地 重疊於上面。進行2000rpm(800xg) ，15分鐘的離心分 離。分離後冷凍試管後，各部分以刀器切斷，分別以自動 孔穴r線計量機進行測定，求得Tc-9 9m-肽3、Tc-99m-肽 6各成份於血液中的放射能量分佈。 (2 )結果 由雄老鼠的血液學參數得到白血球數 6600〜 1 2600cell/ // L，文獻所述的受體 FPR數 1 00,000〜 1 20,000/cell的數値爲準，計算出老鼠血液的受體FPR之 推定量爲1.1〜2.5xlO'12niol/mL，老鼠的肽/受體比爲 0.0 2〜0.0 5。對於全血液中的放射能之各血液成分的放射 量百分率表示結果如圖1 9所示。又，對全白血球的放射 能量之顆粒白血球部分的放射能量與淋巴球及單核白血球 •65- (62) (62)200418880 部分的放射能量百分率表示結果如表1 5所示。對於因 TNBS潰瘍性大腸發炎模型之老鼠血液而言，Tc-99m-肽3 爲3 0分鐘的恆溫培養後，顆粒白血球部分中分佈全血液 的放射能之 7.8 2 % ，淋巴球及單核白血球部分則分佈 1 0.0 0 %。又，對於全白血球之放射能量顆粒白血球部分 之放射能量爲4 3 . 6 9 %，淋巴球及單核白血球部分的放射 能量爲5 6 · 3 1 %。T c - 9 9 m -肽6爲3 0分鐘的恆溫培養後， 顆粒白血球部分中分佈全血液的放射能之1 8.3 4 %，淋巴 球及單核白血球部分則分佈6 · 5 7%。又，對於全白血球之 放射能量顆粒白血球部分之放射能量爲74.0 8 %，淋巴球 及單核白血球部分的放射能量爲25.92 %。 由上述結果得知，本發明的一部份之Tc-99m-肽3及 Tc-9 9m-肽6，於因TNBS潰瘍性大腸發炎模型之老鼠血 液中，於淋巴球及單核白血球中亦有多數分佈。 由上得知，確認本發明的肽對於多數淋巴球及單核白 血球浸潤之慢性發炎有效。 (63)200418880 表I 5 .對於老鼠白血球的T c - 9 9 m標識肽之結合率 (對全白血球之結合率（％ ) n = 2，平均値±標準偏差値） 標識化合物名 對全白血球之結合率（％ ) 有顆粒白血球 淋巴球及單核白血球 T c - 9 9 m -肽 3 43.69+2.74 56.3 1 ±2.74 Tc-99m -肽 6 74.08±8.37 2 5.92±8.37 實施例9 肽3、肽6的Tc-99m標識化合物之老鼠大腸炎模型的影 像化、對慢性發炎之有用性 (1 )方法 發炎模型的製作：依據安東尼方法（Anthony et al., Int· Exp· Path·, 76，2 1 5 -224 ( 1 995 ))製作出老鼠潰瘍性 大腸炎模型。將360mg的2,4,6-三硝苯磺醯酸（TNBS ) 溶解於4 m L的純水中，其後加入3 · 2 m L的乙醇，作成 50.0mg/mL 46% 乙醇/生理食鹽液體。對於約2 4小時絕 食且經乙醇麻醉的7週大（164〜184g)雌性SD系老鼠 (Splague Dawley，Specific Pathogen Free )之肛門咅 位，以管子插入7〜8公分，注入O.lmL的空氣。其次， 注入〇.2mL的TNBS/46%乙醇/生理食鹽水液體，經2分 鐘按摩及進行體位改變。連續進行3天後，最後投予日的 4天後提供於實驗中。將實施例2所得之各約3 7 Μ B q放 射能量之Tc-99m-肽3、Tc-99m·肽6分別由尾靜脈投予於 每隻老鼠上，經5分鐘後、3 0分鐘後、6 0分鐘後、1 2 0 -67- (64) (64)200418880 分鐘後以r線照相進行影像攝影。作爲比較對照，將利用 於診斷人類的潰瘍性大腸炎之Tc-99m標識白血球依據羅 卡氏等人的方法（M· Roca et al.. Eur J NucI Med 1998 25 7 9 7 - 7 9 9 )調製出，將此對每隻老鼠作約37MBq放射能量 之尾靜脈內投予，經5分鐘後、3 0分鐘後、6 〇分鐘後、 〗20分鐘後以r線照相進行影像攝影。Tc· 9 9m標識白血球 調製成包含有粒白血球、淋巴球及單核白血球等所有之白 血球者。又，經攝影結束後，即投予1 3 0分鐘由腹部大動 脈進行脫血後，取出各臟器後測定出各重量及放射能量， 算出lg的組織之放射能量（％ ID/g )。且使用算出的數 値〔發炎〕/〔肌肉〕比（〔A〕/〔 Μ〕比），〔發炎〕/ 〔血液〕比（〔A〕/〔 B L〕比），〔發炎〕/〔骨〕比 (〔A〕/〔 Β Ο〕比），〔發炎〕/〔盲腸〕比（〔A〕/ 〔AP〕比），〔發炎〕/〔結腸〕比（〔A〕 /〔 C〕 比），〔發炎〕/〔直腸〕比（〔A〕/〔 R〕比）。 (2 )結果 將所得結果的代表圖如圖2 0、圖2 1及圖2 2所示。 影像上設定注意區域，對於全身計數之每各注意區域1畫 素之計數比率（％投予量/pixel )之求得結果如表16所 示。又，由該比率〔發炎〕/〔腹部背景〕比（〔A〕/ 〔B G〕比）求得之結果如表1 7所示。且解剖結果所得之 發炎之 ％ID/g， 〔A〕/〔M〕比，〔A〕/〔BL〕比， 〔A 〕 / 〔 BO 〕比，〔A 〕 / 〔 AP 〕比，〔A 〕 / 〔 C 〕比， -68- (65) 200418880 〔A〕/〔 R〕比表不於表1 8及圖2 3。宜結穿_，t匕 的Tc-9 9m標識白血球爲投予後30分鐘之％投予^ 爲〇.11±0.025(以下爲表示平均値±標準誤差）（n_ 〔A〕 /〔 BG〕比爲 3.21 ± 1.96 ( n = 5 )。又， 1 3 〇分鐘進行脫血解剖結果所得之1 g的發炎部分 能量（％ID/g)爲 0.71±0.33， 〔A〕/〔BO〕比爲 1.37，又，〔A〕/〔 BL〕比爲 0·25 土 〇·17，於血液 佈比發炎部位多。 相對於此，本發明的Tc-99m-肽3爲投予後： 之％ 投予量 /pixel 爲 0·043±0·0ΐ5(η = 5)， 〔BG〕比爲 2·23±0·77(η = 5)。又，投予後 13〇 行脫血解剖結果所得之1 g的發炎部分的放射能 ID/g)爲 0.13±0.12， 〔A〕/〔BO〕比爲 3.4〇 土 又’ 〔A〕/〔BL〕比爲2·33±2·22，此表示發炎部 射能分佈比血液中多。又，Tc-99m-肽6爲，投予毛 鐘之 ％ 投予量 /pixel 爲 〇·〇93±0·〇48(η = 5)， 〔BG〕比爲 2.15 土 0.53 ( η = 5)。又，投予後 1 3 〇 行脫血解剖結果所得之1 g的發炎部分的放射能 ID/g)爲 0.55±0.51， 〔A〕/〔BO〕比爲 4.44:t 又’ 〔A〕/〔BL〕比爲2.88土1.61，此表示與肽6 發炎部位的放射能分佈比血液中多。藉由此可判斷 對照的Tc-99m標識白血球比較，較易受到血液的 對於肝臟、胰臟、心臟、腎臟、腦、骨等血液較 器，特別以發炎部位的描繪爲優。特別爲肽6的 較對照 i /pixel :5) 投予後 的放射 2.08 土 中的分 > 0分鐘 〔A〕/ 分鐘進 量（％ 2.78， 位的放 ! 30分 〔A〕/ 分鐘進 量（％ 2.74， 相同於 與比較 影響， 多的臟 〔A〕/ -69· (66) (66)200418880 〔Μ 〕比，[A 〕 / 〔 BL〕比，〔A 〕 / 〔 BO 〕比，〔A 、 / 〔AP〕比，〔A〕 /〔 C〕比，〔A〕/〔 R〕比，表示比比 較對照的T c - 9 9 m標識白血球更優良的數値，確認出本發 明的肽對於慢性發炎之潰瘍性大腸炎亦極有用。 表16.藉由FMLP阻礙有無之老鼠大腸炎模型的 Tc-99m標識肽之發炎聚集（％ID/pixel) (η = 5，平均値±標準偏差値） 投與後經過時間 5分鐘 30分鐘 1小時 2小時 0.057土 0.043土 0.035土 0.03 1土 Tc-99m -肽 3 0.011 0.015 0.014 0.016 0.165土 0.093土 0.071土 0.069士 Tc-99m -肽 6 0.066 0.048 0.050 0.055 0.120土 0.11 1土 0.1 02土 0.11 1土 Tc-99m-白血球 0.032 0.025 0.03 1 0.043 (67)200418880 表17.藉由FMLP阻礙有無之老鼠大腸炎模型的 T c - 9 9 m標識肽與T c - 9 9 m -白血球之發炎/腹部背景比 (11 = 5 ,平均値土標準偏差値）_ 投與後經過時間 5分鐘 30分鐘 1小時 2小時 T c - 9 9 m -肽 3 1 · 84±(M1 2.23±0.77 3·67±1.68 5.87±3·20 Tc-9 9m-肽 6 2.64±0.42 2.15 + 0.53 1·90±0.33 2·73±〇·52 T c - 9 9 m -白血球 3.23±1.50 3.21 土 1.96 3·23±1·73 3.71±2.17 表18.老鼠大腸炎模型的Tc-9 9m標識肽與 T c - 9 9 m -白血球之解剖解析結果 (n = 5，平均値±標準偏差値）_ 發炎/臟器比 Tc99m-肽 3 Tc9 9ni-肽 6 Tc99m-白血球 發炎/肌肉比 10·37±9·54 15·66土 11.17 12·12±5·97 __發炎/血液比 2.33土2.22 2.88+1.61 0.25+0.17 發炎/骨比 3 ·40土2.78 4·44±2.74 2·08土 1 .37 發炎/盲腸比 8·75±8·09 13.49土7.75 1 1 ·99±4·18 發名/結腸比 2· 1 0土〇·83 3.53土2.06 3.03±2.03 /直腸比 1·68±〇·87 2.79±1 .99 2.73+1.50 發$ (%ID/g) 0.13±〇·12 0.55 土 0.5 1 0.71+0.33

實施例1 0 肽6、藉由肽14的Tc-9 9m標識化合物之老鼠大腸炎模型 -71 - (68) (68)200418880 的自動射線照相、對慢性期發炎的有用性 (1 )方法 依據安東尼方法（Anthony et al·，Int. J· Exp· Path.， 7 6 . 2 1 5 - 2 2 4 ( 1 9 9 5 ))製作出老鼠潰瘍性大腸炎模型。將 3 6 0 m g的2，4,6 -三硝苯磺醯酸（T N B S )溶解於4 ni L的純 水中，其後加入3.2mL的乙醇，作成50.0mg/mL 46% 乙 醇/生理食鹽液體。對於約2 4小時絕食且經乙醇麻醉的7 週大（164 〜184g)雌性 SD 系老鼠（Splague Daw ley, Specific Pathogen Free)之肛門部位，以管子插入7〜8 公分，注入 O.lmL 的空氣。其次’注入 〇.2mL 的 TN B S /4 6 %乙醇/生理食鹽水液體，經2分鐘按摩及進行體 位改變。連續進行3天後，最後投予日的4天後提供於實 驗中。實施例2所得T c - 9 9 m -肽 6、T c - 9 9 m -肽1 4以約 7 4 Μ B q的放射能量對每隻進行尾靜脈內投予’經1 2 0分 鐘後進行脫血及屠殺。直接摘出大腸，除去內容物後’以 肉眼判斷爲發炎部位處以冷凍切片製作用的媒介物進行包 埋。其後馬上於液態氮內與容器一起浸數十秒間’冷凍含 大腸發炎切除部位之媒介物。靜置於-20 °C的冷凍庫數十 分鐘後，以Cryostat進行冷凍切片。切片製作後使用自動 射線照相之影像板（富士底片公司製作）密著1 2至1 9小 時。繼續影像分析機BAS 2 5 00 (富士底片公司製作）將放 射能分佈影像化。又，同樣製作出的冷凍切片進行顆粒白 血球抗體及單核白血球抗體的免疫組織化學染色’確認出 顆粒白血球及單核白血球對組織的浸潤。 -72- (69) (69)200418880 (2 )結果 所得結果的代表圖如圖24、圖25、圖26。又，由自 動射線照相的結果所得影像上設定注意區域，求得各注意 區域每]畫素之計數，基於此求得〔發炎〕/〔正常組 織〕比（〔A〕/〔 N〕比），結果如圖2 7所示。 施予引起發炎的老鼠，於直腸部位形成2 c m至 4 c m 寬的發炎於腸管全周圍，確認出所有老鼠皆有發炎部位。 免疫組織化學染色的結果，觀察到發炎部位上有顯著的顆 粒白血球及單核白血球之浸潤，顯示顆粒白血球及單核白 血球於發炎部位的分佈爲一致。得到比較對照的 Tc_ 9 9m 標識白血球爲免疫染色像的顆粒白血球與單核白血球之分 佈一致的放射能分佈。 另一方面，經Tc-9 9m標識的肽6與肽14皆與比較對 照之Tc-9 9m標識白血球相同，於免疫染色像中得到顆粒 白血球與單核白血球之分佈一致的放射能分佈。同一切片 內所得之〔A〕/〔 N〕比與比較對照的Tc-99m標識白血 球、Tc-9 9m標識的肽6及Tc· 9 9m標識的肽14比較時， Tc-99m標識的肽6及Tc-99ni標識的肽14的〔A〕/ 〔N〕比顯示比比較對照的Tc-99m標識白血球高，確認 本發明的肽對於慢性發炎的潰瘍性大腸炎亦極有用。 實施例Π 肽3、肽4、肽6、肽8、肽9、肽1 6、肽1 7、肽1 8的重 -73- (70) (70)200418880 組人類受體結合阻礙測定 (1 )方法 使用來自 CHO細胞的重組受體 FPR ( 6.24pmol/mL· 50mM Tris-HCl ρΗ7·4, 10% glycerol. 1%BSA. BioSignal

Packard Inc. Amersham 生技）及〔3H〕-FMLP ( fMLF. 9.25MBq/2.88〜6.25nmol， 第一化學藥品（股））而實 施。一定量的受體 FPR(0_05nM，200 u L/well )中力口入 1(Γ4〜1(Γ14Μ濃度範圍的各肽後，加入一定量的〔3H〕 FMLP ( 0.3nM，25# L/well)。反應後以GF/C過濾器分離 受體 FPR未結合的〔3H〕-FMLP與受體 FPR結合的 〔3H〕-FMLP，經由測定受體FPR結合的〔3H〕-FMLP之 放射能量，求得〔3H〕FMLP對受體FPR之結合量。阻礙 50%的〔3H〕FMLP的結合之各肽濃度（IC5〇)由解析軟 體「Xlfit ver 3.0.3 ( CTC拉波拉多力系統（股））」求 得，且由〔3H〕FMLP的Kd値求得阻礙定數（Ki )。試 驗進行3次，各試驗的測定進行3次，求得平均値。 (2 ) 結果 所得之結果如圖2 8所示。又，所算出的1 c 5 0値及K i 値如表19所示。比較對照的FMLP的Ki値算出爲（2.33 ± 0 .45 ) X 1 Oe-ΙΟΜ。相對於此，肽3的 Ki値算出爲 (6·50±1·84) xl〇e-9M、月太 4 3 的 Ki 値算出爲（8.36 土 3.74 ) X 1 0e-10M、肽 6 的 Ki 値算出爲（2·83 ± 1 ·0.7 ) X 10e-10M、肽 8 的 Ki 値算出爲（2.33±0.91) xl0e-9M、 •74- (71) 200418880 肽 9 的 Ki 値算出爲（1 .28 土 0.69 ) X 1 〇e-10M。又，N 末 端的甲廳基改爲乙醯基之肽1 6、改爲胺基甲醯基的肽 17、改爲甲基的肽18之各Ki値爲（3.74± 3 ·53 ) χ】〇e· 6M 、 （ 4.24 ± 3.60 ) x 10e.7M 、 （ 3 8 3 ± 工 ι2 ) χ 1〇卜 5Μ ’本發明的肽爲對於受體FPR具有親合性，介由表現 支體F P R之白血球確g忍出封於發炎診斷有用。 表19·各肽2的50%阻礙濃度（ic5())與阻礙定數（Ki) _ ( n = 9，平均値土標値） IC5〇 ( Μ ) 」 Ki ( Μ ) FMLP (5.6711.10) xl0e-10 (2.3310.45) xl〇e-l〇 肽3 (1·58±0.45) xl0e-8 (6.5 0 + 1.84 ) xlOe-9 肽4 (2.03±0.91) xlOe-9 (8.36±3.74) xl0e-10 肽6 (6.87±2.59) xl0e-10 (2.83±1.07) xl〇e-10 肽8 (5.65±2.21) xlOe-9 (2.33±〇.91) xl〇e-9 肽9 (3.10±1.69) xl0e-10 (1 ·28±〇·69) xl〇e-10 肽12 (7·40±5·03) xlOe-11 (3.05±2.07) xlOe-11 肽1 6 (9·08±8.58 ) xlOe-6 (3.74±3.53) xlOe-6 肽17 (1·03±0·88) xlOe-6 (4.24±3.60) xlOe-7 肽1 8 (9.29±2.71) xl0e-5 (3.83±1.12) xl0e-5 實施例1 2 肽6的Tc-99m標識化合物的兔子感染症模型之阻礙影像 化，活體內的白血球結合之確認 -75- (72) (72)200418880 (1 )方法 金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)的約108 個之活菌懸浮於1 mL的生理食鹽水中，其中1 00 "]以肌 肉內投予於約2 k g的新紐西蘭白種（N Z W )系兔子右小腿 中，經2 4小時後，對於明顯有發炎現象的模型兔子施予 戊巴比妥麻醉。實施例2所得的經* - 9 9 m標識的肽6以 約 7 4 Μ B q的投予放射能量進行耳靜脈內投予，投予後5 分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時後以7'線 照相機攝影其影像。欲確認肽6的發炎聚集是否受到 FMLP阻礙而設定的FMLP預先投予群，將相當於推定受 體最大量〇.lnmol/kg的約1萬倍之lmg FMLP溶解於5% D M S Ο /生理食鹽水，將此作爲F M L Ρ溶液，於投予經* -99m標識的肽6之5分鐘前進行耳靜脈投予。與未投予 FMLP的群相同於投予後5分鐘、1小時、2小時、3小 時' 4小時、5 /J、時後以r線照相機攝影其影像。 (2 )結果 所得之結果代表圖如圖2 9及圖3 0所示。於影像上設 定注意區域，求得對於全身計數之各注意區域每1 000畫 素之計數比率（％投予量/Kpixel )之結果如表20所示。 又’由該比率〔發炎〕/〔正常肌肉〕比（〔a〕/〔m〕 比）求得之結果如表2 1所示。 其結果，無FMLP阻礙的Tc-99m-肽6爲投予後2小 時的對發炎部位的聚集爲1 .77 ±0.25%投予量/Kpixel (以 -76- (73) 200418880 下爲表示平均値±標準誤差）（n = 3 )，投予後5小時後 增加爲 2·62±0·25%投予量/ Kpixel ’ 〔 A〕/〔 M〕比亦於 投予後2小時的1 2 · 7 8 ± 6 . 1 4增加至投予後5小時的2 1 · 3 9 ± 5 . 3 9。另一方面，具有 F M L P阻礙的 T c - 9 9 m -肽 6的 〔A〕/〔 Μ〕比於投予後2小時爲3.9 3 土 0.6 0，此比「無 F M L Ρ阻礙」爲低，投予後5小時增加爲9.0 5 ± 3 · 1 0，由 對發炎部位之聚集爲投予後2小時之0.4 1 ± 0 . 1 0 %投予量 /Kpixel，減少至投予後 5小時的 0.30 ± 0.04 %投予量 /Kpixel。 此可確認出本發明的一部份之肽6因與存在於白血球 的受體FPR結合’而可描繪出發炎部位，本發明的狀聚 集表示白血球浸潤引起的發炎。 表20· FMLP阻礙的有無下兔子感染症模型的 Tc-99m標識肽6的發炎聚集（％iD/Kpixel) (n = 3，平均値上標準偏差値） 投與後經渦時間 5分鐘 1小時 2小時 3小時 4小時 5小時 無 FMLP 1 .74士 1 .59土 1 .77土 2.01土 2.32土 2.62土 阻礙 0.22 0.32 0.25 0.29 0.56 0.55 無 FMLP 2·01土 0.75土 〇·41 土 0.3 1 土 0.30土 0.30土 阻礙 0.43 0.18 0.10 0.06 0.03 0.04 -77- (74)200418880 表21. FMLP阻礙的有無下兔子感染症模型的 Tc-9 9m標識肽6的發炎/肌肉比） (n = 3，平均値±標準偏_ 投與後經渦時間 5分鐘 1小時 2小時 3小時 4小時 5小時 te FMLP 2.25土 6. 1 8土 1 2.78土 1 4.53土 1 7.87土 2 1 .39 土 阻礙 0.46 2.99 6.14 5.07 5.46 5.39 無 FMLP 1 .81土 2.62土 3.93土 6.42 士 8.58土 9.05土 阻礙 0.19 0.43 0.60 1.03 2.60 3.10 產業上可利用性 本發明爲提供關於對於活體內外的白血球、即嗜中性 白血球、單核白血球、淋巴球具有特異性結合性，且可由 放射性金屬或常磁性金屬標識的化合物，以該標識化合物 爲有效成份的SPECT畫面診斷、PET畫面診斷、MRI畫 面診斷上等有用之醫藥組成物，對於個體免疫反應所引起 的白血球浸潤較盛的部位可進行影像化之畫面診斷。 【圖式簡單說明】 圖1表示Tc-99m·肽4的HPLC光譜圖。 圖2表不Tc-99m-狀6的HPLC光|普圖。 圖3表示Tc-99 m -肽的兔子血液內分佈圖。 圖4表示Tc-99 m -肽3的兔子感染症模型之影像。 左邊爲投予後2小時，右邊爲投予後2 2小時之影像。 -78- (75) (75)200418880 圖5表示Tc-99 m -肽4的兔子感染症模型之影像。 左邊爲投予後2小時，右邊爲投予後2 2小時之影像。 圖6表示Tc-99 m -肽6的兔子感染症模型之影像。 左邊爲投予後2小時，右邊爲投予後2 2小時之影像。 圖7表示T c - 9 9 m -肽8的兔子感染症模型之影像。 左邊爲投予後2小時，右邊爲投予後5小時之影像。 圖8表示T c _ 9 9 m -肽9的兔子感染症模型之影像。 左邊爲投予後2小時，右邊爲投予後5小時之影像。 圖9表示Tc-99 m -肽12的兔子感染症模型之影像。 左邊爲投予後2小時，右邊爲投予後2 2小時之影像。 圖 10表示 Tc-99 m -肽13的兔子感染症模型之影 像。左邊爲投予後2小時，右邊爲投予後5小時之影像。 圖11表示 Tc-99 m -肽14的兔子感染症模型之影 像。左邊爲投予後2小時，右邊爲投予後5小時之影像。 圖12表示 Tc-99 m -肽15的兔子感染症模型之影 像。左邊爲投予後2小時’右邊爲投予後5小時之影像。 圖13表示Tc-99 m -肽16的兔子感染症模型之影 像。左邊爲投予後2小時，右邊爲投予後5小時之影像。 圖14表示Tc-99 m -肽17的兔子感染症模型之影 像。左邊爲投予後2小時’右邊爲投予後5小時之影像。 圖15表示Tc-99 m -肽18的兔子感染症模型之影 像。左邊爲投予後2小時，右邊爲投予後5小時之影像。 圖16表示各Tc-99 m -肽的正常老鼠的尿排泄率之經 時性變化。 -79- (76) (76)200418880 圖1 7表示各T c - 9 9 m -肽的正常老鼠的對小腸的聚集 之經時性變化。 圖1 8表示各T c - 9 9 m -肽的人類血液分佈圖。 圖1 9表示各Tc-9 9m肽的正常老鼠的尿排泄率之經時 性變化。 圖2 0表示T c - 9 9 m -肽3的老鼠大腸炎模型之影像。 左邊爲投予後3 0分鐘’右邊爲投卞後1 2 0分鐘之影像。 圖21表示Tc-99 m ·肽6的老鼠大腸炎模型之影像。 左邊爲投予後3 0分鐘’右邊爲投予後1 2 0分鐘之影像。 圖22表示Tc-99標識白血球之老鼠大腸炎模型之影 像。左邊爲投予後3 0分鐘，右邊爲投予後1 2 0分鐘之影 像。 圖23表示Tc-99 m標識肽的老鼠大腸炎模型之發炎/ 臟器比。 圖24表示老鼠大腸炎的肽6之自動射線照相與免疫 染色的影像。左邊爲自動射線照相、中央爲顆粒白血球抗 體免疫染色、左邊爲單核白血球免疫染色。 圖2 5表示老鼠大腸炎的肽1 4之自動射線照相與免疫 染色的影像。左邊爲自動射線照相、中央爲顆粒白血球抗 體免疫染色、左邊爲單核白血球免疫染色。 圖26表示老鼠大腸炎的Tc-99m標識白血球之自動射 線照相與免疫染色的影像。左邊爲自動射線照相、中央爲 顆粒白血球抗體免疫染色、左邊爲單核白血球免疫染色。 圖27表示老鼠大腸炎的Tc9 9 m標識肽與Tc 9 9m標識 -80- (77) 200418880 白血球之自動射線照相的發炎/正常組織比。 圖28表示對於重組人類受體與〔3H〕-FMLP結合之 肽阻礙率。 圖29表示無FMLP阻礙的兔子感染症模型的Tc-99m 標識肽6的影像。左邊爲投予後2小時，右邊爲投予後5 小時的影像。 圖30表示具有FMLP阻礙之老鼠感染症模型的Tc-99m標識肽6的影像。 •81 - 200418880 序列表 <110> Nihon Medi-Physics Corporation Limited < 120>對白血球具結合性之化合物及以其標識化合物作爲有效成分之醫藥 組成物 <130〉 W1229-00 <160> 13 <210> 1 <211> 10 <212> PRT 〈213〉人工序列 〈220〉 <221> F0RMYLATI0N <222> 1 <200〉 <221> AMIDATI0N <222〉 6 <223〉白血球結合肽 <400〉 1

Nle Leu Phe Nle Tyr Lys Ser Cys Gly Asn 1 5 10 200418880 <210> 2 <211> 10 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220> 〈221〉 FORMYLATION <222〉 1 〈200〉 <221> AMIDATION 〈222〉 6 〈223>白血球結合肽 <400〉 2

Nle Leu Phe Nle Tyr Lys Ser Cys Asp Asp 1 5 10 <210〉 3 〈211〉 10 <212> PRT <213〉人工序列 <220〉 <221> FORMYLATION <222> 1 -2 <200〉 200418880 <221> AMIDATION <222〉 6 <223〉白血球結合肽 <400〉 3

Nle Leu Phe Nle Tyr Lys Ser Cys Gly Asp 1 5 10 <210〉 4 〈211〉 12 <212〉 PRT 〈213>人工序列 <220〉 <221> FORMYLATION <222> 1 〈200〉 <221〉 AMIDATION <222〉 6 〈223>白血球結合肽 <400〉 4

Nle Leu Phe Nle Tyr Lys Ser Arg Asp Cys Asp Asp 1 5 10

〈210〉 5 <211〉 7 <212〉 PRT -3- 200418880 <213〉人工序列 <220> <221> F0RMYLATI0N <222> 1 <200〉 <221> AMIDATI0N <222〉 6 <200> <221> BLOCKED <222> 7 <223〉白血球結合肽 <400> 5

Nle Leu Phe Nle Tyr Lys Ser 1 5 <210> 6 〈211〉 11 〈212〉 PRT 〈213>人工序列 <220> <221> F0RMYLATI0N 〈222〉 1 -4 <200〉 200418880 <221> AMIDATION <222〉 6 <220〉 <221〉 BLOCKED 〈222〉 11 <223〉白血球結合肽 <400〉 6

Nle Leu Phe Lys Ser Ser Asn Arg Cys Asp Asp 1 5 10 <210〉 7 <211〉 8 <212> PRT <213〉人工序列 <220> <221> FORMYLATION <222〉 1 <200〉 <221〉 AMIDATION 〈222〉 6 <220〉 <221〉 BLOCKED <222〉 8 <223〉白血球結合肽 200418880 <400> 7

Nle Leu Phe Nle Tyr Lys Ser 1 5 <210> 8 <211〉 7 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220> <221> FORMYLATION <222〉 1 〈200〉 <221> AMIDATION 〈222〉 6 〈220〉 <221〉 BLOCKED 〈222〉 7 <223〉白血球結合肽 <400> 8

Nle Leu Phe Nle Tyr Lys Ser 1 5 <210〉 9 <211> 9 200418880 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <221> F0RMYLATI0N <222〉 1 <200〉 <221> AMIDATI0N <222> 6 <200> <221> BLOCKED <222〉 9 <223>白血球結合肽 <400> 9

Nle Leu Phe Nle Tyr Lys Ser Arg Asp 1 5 <210> 10 〈211〉 9 〈212〉 PRT <213〉人工序列 <220>

<221> FORMYLATION <222> <200〉 <200〉200418880 <221> AMIDATION <222〉 6 <200〉 <221〉 BLOCKED <222> 9 〈223>白血球結合肽 <400> 10

Nle Leu Phe Nle Tyr Lys Ser Ser Asn 1 5 〈210〉 11 〈211〉 12 <212> PRT <213〉人工序列 <220> <221〉 ACETYLATION 〈222〉 1 <200> <221〉 AMIDATION <222〉 6 <223〉白血球結合肽 <400〉 11

Nle Leu Phe Nle Tyr Lys Ser Arg Asp Cys Asp Asp -8- 200418880 <210〉 12 <211〉 12 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220>

<221> BLOCKED <222〉 1 <200〉 <221> AMIDATI0N <222〉 6 <223〉白血球結合肽 <400〉 12

Nle Leu Phe Nle Tyr Lys Ser Arg Asp Cys Asp Asp 1 5 10 <210> 13 〈211〉 12 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220> <221> METHYLATION <222〉 1 -9- <200〉 <200〉200418880 <221> AMIDATION <222> 6 <223〉白血球結合肽 <400〉 13

Nle Leu Phe Nle Tyr Lys Ser Arg Asp Cys Asp Asp 1 5 10 -10-

Claims (1)

1. (1) (1)200418880 拾、申請專利範圍 1. 一種對白血球具結合性之化合物，其特徵爲下述式 Z-Y-Leu-Phe-(X)n-Lys(NH2)m-.£ (-R-(T)l-U) (1) (式（1 )中，Z表示胺基的保護基； Y表示Met或Nle; (X) η中，X表示可由1個或其以上的胺基酸及/或 可有機合成之化合物所成之介質（spacer )，η表示1或 0 ； (NH2 ) m中，ΝΗ2表示作爲Lys的α位羧基之保護 基的醯胺基，πι表示1或〇 ; ε (-R-(T)l-U)中’ R表不與Lys的s -胺基上以醯胺 鍵結之Ser或Thr，T表示可由1個或其以上的胺基酸及/ 或有機合成之化合物所成之介質，1表示1或〇，U表示 可金屬標識的基； 但，該X與T可相同或相異）所表示者。 2 ·如申請專利範@第〗項之對白血球具結合性之化合 物’其中式（1)的U表示_Cys-A1-A2(A1及A2爲除 C y s及P ro的胺基酸）所表示的肽所成之可金屬標識的 基。 3 ·如申請專利範圍第丨項之對白血球具結合性之化合 物，其中式（1)的U表示碳數8至2〇的含氮環狀化合 -82- (2) (2)200418880 物、碳數8至20的含氮環狀羧酸化合物、碳數8至20的 含氮環狀殘酸化合物之衍生物或碳數4至1 〇的伸院基胺 基羧酸所構成之可金屬標識的基。 4 .如申請專利範圍第1項或第2項之對白血球具結合 性之化合物，其中式（1 )所表示的對白血球具結合性之 化合物爲1種選自 甲醯基-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys ( ΝΗ2 ) · ε ( -Ser-Cys-Gly-Asn); 甲醯基-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys ( NH2) - ε ( -Ser-Cys-Asp-Asp ); 甲酿基-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys ( NH2) - ε ( - S e r -Cys-Gly-Asp); 甲醯基-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys ( NH2) - ε ( -Ser， D-Arg-Asp_Cys__Asp-Asp); 甲醯基-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys ( NH2) - ε ( -Ser-1,4,8,11-四氮雜環十四烷-1,4,8, 1卜四乙酸）； 甲醯基-Nle-Leu-Phe-Lys ( NH2 ) - ε ( -Ser-D-Ser-Asn-D-Arg-Cys-Asp-Asp); 甲醯基-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys ( NH2) - £ ( -Ser， D-Arg-二伸乙基三胺五乙酸）； 甲醯基-Nle-Leu-Phe-Nle-丁yr-Lys(NH2)-ε(-Ser- 1，4;8，11-四氮雜環十四烷-丁酸）； 甲醯基-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys ( NH2) · ε ( - S e r -D-Arg-Asp-1,4,8,11-四氮雜環十四烷-丁酸）； -83- (3) 200418880 甲驢基-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys ( NH2 〇-5€卜八511-1.4,8.11-四氮雜環十四烷-丁酸）： 乙醯基-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys ( NH: D_Arg-Asp-Cys_Asp_Asp); 胺基甲醯基-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys ( Ser-D-Arg-Asp-Cys-Asp-Asp )及 甲基-Nle-Leu-Phe-Nle-Tyr-Lys ( N Η 2 ) Arg-Asp-Cys-Asp-Asp ) 所成群者。 5 · 一種醫藥組成物，其特徵爲將申請專牙 至第4項中任一項之對白血球具結合性之化 金屬或常磁性金屬進行標識所成之標識化合: 分者。 6 .如申請專利範圍第5項之醫藥組成物 金屬爲 Tc-99m、In-111、Ca-67。 7 .如申請專利範圍第6項之醫藥組成物 行個體的免疫應答反應所引起的白血球浸潤 像化的SPECG畫面診斷。 8. 如申請專利範圍第5項之醫藥組成 性金屬爲Cu-64或Ga-68。 9. 如申請專利範圍第8項之醫藥組成 進行個體的免疫應答反應所引起的白血球浸 顯像化的PET畫面診斷。 1 0 .如申請專利範圍第5項之醫藥組成 )-ε (-Ser-)* ε ( -Ser- NH2 ) _ ε (- £ ( _Ser_D_ J範圍第1項 合物以放射性 勿作爲有效成 ，其中放射性 ，其使用於進 較盛部位之顯 物，其中放射 物，其使用於 潤較盛部位之 物，其中常磁 -84- (4) 200418880 性金屬爲Cd、Fe、Μη或Cu。 1 1 .如申請專利範圍第1 〇項之醫藥組成物，其使用 於進行個體的免疫應答反應所引起的白血球浸潤較盛部位 之顯像化的MRI畫面診斷。 12. 如申請專利範圍第5項之醫藥組成物，其中放射 性金屬爲 Y-90、Sn-117m、Sm-153、Re-186 或 Re-188。 13. 如申請專利範圍第1 2項之醫藥組成物，其使用 於放射性治療上。 -85-