TR201819859T4 - Akciğer kanseri metastazının tanısı ve prognozu için yöntem. - Google Patents

Akciğer kanseri metastazının tanısı ve prognozu için yöntem. Download PDF

Info

Publication number
TR201819859T4
TR201819859T4 TR2018/19859T TR201819859T TR201819859T4 TR 201819859 T4 TR201819859 T4 TR 201819859T4 TR 2018/19859 T TR2018/19859 T TR 2018/19859T TR 201819859 T TR201819859 T TR 201819859T TR 201819859 T4 TR201819859 T4 TR 201819859T4
Authority
TR
Turkey
Prior art keywords
maf
metastasis
gene
subject
sample
Prior art date
Application number
TR2018/19859T
Other languages
English (en)
Inventor
Gomis Roger
Planet Evarist
Original Assignee
Fundacio Inst De Recerca Biomedica Irb Barcelona
Inst Catalana Recerca Estudis Avancats
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Fundacio Inst De Recerca Biomedica Irb Barcelona, Inst Catalana Recerca Estudis Avancats filed Critical Fundacio Inst De Recerca Biomedica Irb Barcelona
Publication of TR201819859T4 publication Critical patent/TR201819859T4/tr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/6851—Quantitative amplification
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/548—Phosphates or phosphonates, e.g. bone-seeking
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2875—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF/TNF superfamily, e.g. CD70, CD95L, CD153, CD154
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6813—Hybridisation assays
    • C12Q1/6834—Enzymatic or biochemical coupling of nucleic acids to a solid phase
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57423—Specifically defined cancers of lung
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/106—Pharmacogenomics, i.e. genetic variability in individual responses to drugs and drug metabolism
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/112—Disease subtyping, staging or classification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/118—Prognosis of disease development
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/82—Translation products from oncogenes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/50—Determining the risk of developing a disease
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis

Abstract

Mevcut buluş, bir primer tümör numunesinde c-MAF geninin amplifiye olup olmadığının belirlenmesini içeren, akciğer kanserinde metastazın tanısı veya prognozu için bir yöntem ile ilgilidir. Benzer şekilde, buluş ayrıca akciğer kanserinde metastazın tanısı veya prognozu için bir yöntemin yanı sıra, c-MAF geni ekspresyon seviyesinin belirlenmesini içeren, diğer organlarda metastaza göre kemik metastazı görülme eğiliminin belirlenmesine yönelik bir yöntemle ilgilidir. Son olarak buluş, akciğer kanserinin tedavisi için terapötik hedef olarak bir c-MAF inhibitörünün kullanımı ile ilgilidir.

Description

TARIFNAME AKCIGER KANSERI METASTAZININ TANISI VE PROGNOZU IÇIN YÖNTEM BULUSUN ARKA PLANI Bulusun Alani Mevcut bulus, bir primer tümör numunesinde c-MAF geninin amplifiye olup olmadiginin belirlenmesine dayali olarak akciger kanserinde metastazin, özellikle kemik metastazinin tanisi veya prognozu ile ilgilidir. Benzer sekilde, bulus ayrica akciger kanserinde metastazin, özellikle kemik metastazinin tanisi veya prognozu için bir yöntemle ve c-MAF geni ekspresyon seviyesinin belirlenmesini içeren, akciger kanserli bir denekte özellestirilmis bir tedavi tasarlanmasina yönelik bir yöntemle ilgilidir.
Arka Plan Farkli hayati organlardaki tümör hücreleri ve çevredeki normal dokular arasindaki karmasik etkilesimlerin neden oldugu karmasik bir süreç olan metastaz, kati tümör bulunan hastalarda kansere bagli ölümlerin %90'ini olusturmaktadir. Hayati tehdit eden bu önemli problemi daha iyi ele alabilmek için primer tümörlerin metastaz olusturmasina neden olan moleküler ve hücresel mekanizmalarin anlasilmasi gerekmektedir. Bu ölümcül durumun temel biyolojisinin ve klinik uygulama için sonuçlarinin anlasilmasi için metastaz genlerinin ve mekanizmalarinin tanimlanmasi esastir. Önceki çalismalar metastaz sürecinin karmasikliginin anlasilmasini saglamistir, ancak metastazin nasil ve neden olustugunu, hangi mekanizmalarin metastazi dokuya özgü bir süreç haline getirdigini, bir primer tümörün alinmasindan yillar sonra hangi olaylarin pasif metastazi aktif ve ölümcül hale getirdigini ve metastaza aracilik eden hangi genlerin nihayetinde önemli tani markerlerini ve terapötik hedefleri olusturdugunu açiklamamistir.
Akciger kemige özgü Metastaz Akciger kanseri, akciger dokularinda kontrolsüz hücre büyümesi ile karakterize edilen bir hastaliktir. Tedavi edilmemesi halinde bu büyüme, metastaz adi verilen süreçte akcigerin disina çikarak komsu dokulara ve nihayetinde vücudun diger kisimlarina yayilabilmektedir. Primer akciger kanserleri olarak bilinen, akcigerde baslayan çogu kanser epitel hücrelerinden köken alan karsinomlardir. Dünya genelinde akciger kanserli erkek ve kadinlarda kansere bagli ölümlerin en yaygin nedeni olup, 2004 yilindan itibaren yilda 1.3 milyon ölümden sorumludur. En yaygin semptomlar nefes darligi, öksürük (öksürükle kan gelmesi dahil) ve kilo kaybidir.
Akciger kanserleri, baslica dört akciger kanseri tipinden ve çok sayida ikincil veya nadir formdan olusmaktadir. Klinik-patolojik nedenlerle bunlar genellikle yulaf hücreli kanser olarak da anilan küçük hücreli akciger kanseri (SCLC) ve küçük hücreli disi akciger kanseri (NSCLC) seklindeki genel kategorilere ayrilmaktadirlar. NSCLC de, skuamöz hücreli karsinom (SCC), adenokarsinom ve büyük hücreli karsinom seklinde üç ana tipe ayrilmaktadir. Büyük hücreli karsinomlar diger kanser tiplerinin kötü veya indiferansiye formlarini temsil edebildiginden ötürü, belirsiz bir sekilde tanimlanmis bir olusumdur ve bunun tanisina yönelik kriterler genis ölçüde degisiklik göstermektedir. Akciger kanserinin en yaygin nedeni uzun süreli sigara dumanina maruz kalmaktir. Akciger kanseri vakalarinin %15'Ini sigara içmeyen kisiler olusturmaktadir ve bu vakalar genellikle genetik faktörler, radon gazi, asbest ve pasif içicilerin maruz kaldigi çevresel sigara dumani dahil hava kirliliginin bir kombinasyonuna baglanmaktadir.
Birçok diger kansere benzer sekilde akciger kanserini, onkogenlerin aktivasyonu veya tümör baskilayici genlerin inaktivasyonu tetiklemektedir. Onkogenler, insanlari kansere daha yatkin hale getirdigine inanilan genlerdir. Proto-onkogenlerin belirli karsinojenlere maruz kaldiklarinda onkogenlere dönüstügüne inanilmaktadir. K-ras proto-onkogendeki mutasyonlar akciger adenokarsinomlarinin %10-30'undan sorumludur. Epidermal büyüme faktörü reseptörü (EGFR), hücre proliferasyonunu, apoptozu, anjiyojenezi ve tümör isgalini düzenlemektedir. EGFR'deki mutasyonlar ve amplifikasyon küçük hücreli disi akciger kanserinde yaygindir ve EGFR inhibitörleri ile tedavinin temelini saglamaktadir. Her2/neu daha az siklikla etkilenmektedir. Kromozomal hasar heterozigosite kaybina yol açabilmektedir. Bu durum tümör baskilayici genlerin inaktivasyonuna neden olabilmektedir. 3p, 5q, 13q ve 17p kromozomlarinin hasar görmesi küçük hücreli akciger karsinomunda özellikle yaygindir. Vakalarin %60-75'inde kromozom 17p'de bulunan p53 tümör baskilayici gen etkilenmektedir. Siklikla mutasyona ugrayan veya amplifiye olan diger genler ise c-MET, NKX2-1, LKBl, PIK3CA ve BRAF seklindedir.
Birkaç genetik polimorfizm akciger kanseri ile Iliskilendirilmistir. Bunlar arasinda interlökin-l, sitokrom P450, kaspaz-8 gibi apoptoz promotörleri ve XRCCl gibi DNA onarim molekülleri için kodlama yapan genlerdeki polimorfizmler yer almaktadir. Bu polimorfizmlerin bulundugu insanlarda karsinojenlere maruz kalmalari sonrasinda akciger kanseri görülmesi ihtimali daha yüksektir.
Siniflandirma Akciger kanserleri histolojik tipe göre siniflandirilmaktadir. Bu siniflandirmanin hastaligin klinik yönetimi ve prognozu için önemli sonuçlari vardir. Akciger kanserlerinin büyük bir çogunlugu epitel hücrelerinden kaynaklanan karsinomlar-malignitelerdir. Bir histopatalog tarafindan mikroskop altinda görülen malign hücrelerin büyüklügü ve görünüsüne göre kategorize edilen en yaygin iki histolojik akciger karsinomu tipi küçük hücreli disi ve küçük hücreli akciger karsinomudur. Küçük hücreli disi tip ise açik farkla en yaygin olanidir.
Akcigerin disinda görülen kanserin akciger içerisinde ortaya çikmis oldugu belirlenebilmektedir, çünkü metastaz yapan, yani yayilan akciger kanserleri genellikle, bir patologun önemli bir kesinlikle tümörün akcigerden kaynaklandigini, yani bir primer akciger kanseri oldugunu söylemesine olanak veren bir hücre markeri profilini korumaktadir. Adenokarsinom histolojisine sahip primer akciger kanserlerinde tipik olarak lTF-l ile nükleer immünohistokimyasal boyama vardir.
Küçük hücreli disi akciger karsinomu Küçük hücreli disi akciger karsinomlari (NSCLC) birlikte gruplandirilmaktadir çünkü bunlarin prognozu ve yönetimi benzerdir. Üç ana alt tip vardir: skuamöz hücreli akciger karsinomu, adenokarsinom ve büyük hücreli akciger karsinomu.
Akciger kanserlerinin %25'ini olusturan skuamöz hücreli akciger karsinomu genellikle merkezi brons civarinda baslamaktadir. Tümörün merkezinde genellikle içi bos bir kavite ve iliskili nekroz görülmektedir. Iyi diferasiye skuamöz hücreli akciger kanserleri çogunlukla diger kanser tiplerinden daha yavas büyümektedir.
Adenokarsinom küçük hücreli disi akciger kanserlerinin %40'ini olusturmaktadir.
Genellikle periferal akciger dokusunda ortaya çikmaktadir. Çogu adenokarsinom vakasi sigara içilmesi ile iliskilendirilmektedir; ancak hiç sigara içmemis kisiler (“hiç içmemisler”) arasinda adenokarsinom en yaygin akciger kanseri formudur.
Adenokarsinomun bir alt tipi olan bronsiyoloalveolar karsinom, hiç içmemis kadinlarda daha yaygindir ve tedaviye farkli yanitlari olabilmektedir.
Küçük hücreli akciger karsinomu Küçük hücreli akciger karsinomu (SCLC) daha az yaygindir. Daha önceden “yulaf hücreli” karsinom olarak anilmistir. Çogu vaka büyük solunum yollarinda (primer ve sekonder bronslar) ortaya çikip, hizla büyüyerek oldukça büyük hal almaktadir. Küçük hücreler yogun nörosekretuar granüller (nöroendokrinhormonlari içeren veziküller) içermekte olup, bunlar bu tümöre bir endokrin/paraneoplastik sendrom iliskisi vermektedir. Baslangiçta kemoterapi ve radyasyona daha hassas olmakla birlikte prezentasyon aninda genellikle metastatiktir ve niyahetinde kötü bir prognozu tasimaktadir. Küçük hücreli akciger kanserleri, uzun süredir dikotom olarak sinirli ve Ileri evrede hastalik asamasinda degerlendirilmektedir. Bu akciger kanseri tipi sigara içilmesi ile güçlü sekilde iliskilidir.
Prognoz Küçük hücreli disi akciger kanserindeki prognostik faktörler arasinda pulmoner semptomlarin olmasi ve olmamasi, tümör büyüklügü, hücre tipi (histoloji), yayilma derecesi (evre) ve çok sayida lenf dügümüne metastazlar ve vasküler invazyon yer almaktadir. Ameliyat edilemeyen hastalik bulunan hastalar için, prognoz kötü performans durumu ve %10'dan daha fazla olan kilo kaybindan olumsuz olarak etkilenmektedir. Küçük hücreli akciger kanserindeki prognostik faktörler arasinda performans durumu, cinsiyet, hastaligin evresi ve tani aninda merkezi sinir sisteminin veya karacigerin tutulumu yer almaktadir.
Küçük hücreli disi akciger karsinomu (NSCLC) için prognoz genellikle kötüdür. IA evresindeki hastaligin cerrahi rezeksiyonla tam olarak çikarilmasinin ardindan bes yillik sagkalim orani %67'dir. IB evresindeki hastalik durumunda bes yillik sagkalim orani Küçük hücreli akciger karsinomu için de prognoz genellikle kötüdür. SCLC bulunan hastalarin genel bes yillik sagkalim orani yaklasik %5'tir. Ileri evrede SCLC bulunan hastalarin %l'den az olan ortalama bes yillik sagkalim orani vardir. Sinirli evrede hastalik için ortalama sagkalim süresi 20 ay olup, bes yillik sagkalim orani %20 seklindedir.
Ulusal Kanser Enstitüsü tarafindan saglanan verilere göre, Birlesik Devletler'de ortalama akciger kanseri tanisi yasi 70'tir ve ortalama ölüm yasi ise 72'dir. ABD'de saglik sigortasi olan insanlarin daha iyi sonuç alma ihtimali daha yüksektir.
Metastaz Primer akciger kanserleri ekseriyetle böbrek üstü bezine, karacigere, beyne ve kemige metastaz yapmaktadir.
Ileri evreli akciger kanserinde iskelet metastazi meydana gelmektedir ve bunlar yüksek bir morbidite seviyesi getirmektedir. Kemik metastazi hastaliginin ilk tanisinda terapötik müdahale genellikle sistemik kemoterapi, radyoterapi ve bisfofonatlari kapsayacak olup, bunlar çogunlukla agriyi azalma amaci tasiyan geçici seçeneklerdir.
Saglikli iskelet kemiginde kemigi yikan osteoklastlar ve kemik olusturan osteoblastlarin koordineli aktivitesi vasitasiyla yeni kemik matris olusumu ve eski kemik matris resorpsiyonu arasinda esit bir denge elde edilmektedir. Metastaz kemik hastaliginda kemik resorpsiyonu ve olusumunun normal dengesi isgalci tümör hücreleri, osteoblastlar ve osteoklastlar arasinda meydana gelen homotipik ve heterotipik hücre- hücre etkilesimleri nedeniyle bozulmaktadir. Akciger kanseri ile iliskili olanlar dahil olmak üzere sekonder kemik tümörü olan çogu hasta osteolitik lezyon sergilemektedir.
Bu nedenle, metastaz kemik hastaliginda su anda kullanimda olan veya degerlendirme altinda olan çogu tedavi stratejisi, kemik matrisini osteoklastlarin yüksek kemik yikim aktivitesinden korumak için tasarlanmistir. Akcigerdeki osteolitik kemik metastaz lezyonlari, prostat kanserinin aksine memedekilerle ortak bir özelliktir. Prostat kanserinde, kastrasyona dirençli prostat kanserinde ek bir komplikasyon mevcuttur ve metastaz kemik hastaligi, kemik olusturucu veya osteoblastik lezyonlar olarak da bilinen osteosklerotik lezyonlardir veya karma lezyonlar olarak da anilan osteolitik ve osteosklerotik Iezyonlarin her ikisinin bir kombinasyonudur. Osteosklerotik Iezyonlarin tipik özelligi, dokuma görünümüne ve azaltilmis mekanik mukavemete sahip olan kötü sekilde organize olmus tip-I kollajen fibrillerin çoklu katmanini içeren kemik tabakalaridir. Akciger ve meme kanserinin ortak fenotipik özellikleri göre, kemik metastazinin sürecin benzer moleküler mekanizmalari vurguladigi sekilde olmasi muhtemeldir.
Akciger kanseri hücreleri, her ait tip arasinda, genom sapmasinin indükledigi transkripsiyonel degisikleri yüksek sadakatle sürdürmektedir. Ortaya çikan baskin genler, genel sistemde önemli genomik, transkripsiyonel, translasyonel ve biyolojik heterojenlik olmasina ragmen metastatik sonucun tahmin edilmesini saglayan moleküler olaylari açiga çikaracaktir. Ancak kanserin gelisim geçmisinin, bölgeye özgü metastazin farkli veya ortak aracilari ile sonuçlanip sonuçlanmayacagi bilinmemektedir.
Baslangiç hücresi ile baglantili yatkinlik faktörleri, metastazik ilerleme sirasinda farkli hiz sinirlama bariyerlerine sebebiyet verebilmektedir. Mevcut patent, kemige metastazi tahmin etmek için detayli ve yeni bir prognostik faktör ve bunun bir terapötik hedef olarak olasi degerine zemin hazirlamayi amaçlamaktadir.
Kati tümör kanseri olan hastalarin çogunun metastaz sonrasinda ölmesi, bir tümörün metastaz yapmasina olanak veren moleküler ve hücresel mekanizmalarin anlasilmasinin çok önemli oldugu anlamina gelmektedir. Son yayinlar metastazin karmasik ancak az bilinen mekanizmalar nedeniyle nasil olustugunu ve ayrica farkli metastatik hücre tiplerinin nasil spesifik organlara dogru yönelime sahip oldugunu ortaya koymustur. Bu dokuya özgü metastatik hücreler, bunlarin spesifik organlara kolonilesmesine olanak veren bir dizi edinilmis fonksiyona sahiptir.
ZNRF1 ve UBE2L3 genlerinin ekspresyon seviyesine göre bir NSCLC hastasinin klinik sonucunun tahmin edilmesine yönelik bir yöntemi açiklamaktadir. Bu doküman ayrica, 16q22-24 bölgesinin delesyonu ile iliskili olarak relaps riskinde önemli bir azalma oldugunu açiklayarak, bunun MAF onkogeninin delesyonundan kaynaklandigini ileri sürmektedir.
Bununla birlikte, teknigin bilinen durumunda NSCLC akciger kanseri gibi spesifik bir akciger kanserinden muzdarip olan bir hastanin metastazdan muzdarip olup olmayacaginin tanisina ve/veya prognozuna olanak veren, böylece söz konusu kanserden muzdarip olan denege uygun bir tedavi uygulanabilmesini saglayan genetik markerler bulunmamaktadir. Bu nedenle, akciger kanserinden muzdarip olan deneklerde metastaz varliginin tanisina ve/veya akciger kanserinden muzdarip olan bir denegin metastaz, özellikle kemik metastazi gelistirme olasiliginin tahmin edilmesine olanak veren yeni markerlerin tanimlanmasina Ihtiyaç duyulmaktadir. Yeni prognoz faktörlerinin tanimlanmasi en uygun tedavilerin seçilmesinde bir kilavuz görevi görecektir.
Kemik metastazinin tahmin edilmesini saglayan markerlerin tanimlanmasi, akciger hücreleri ile kemik metastatik dokusunun yayilmasina ve kolonilesmesine kisitlamalar getirerek ve ölümcül bir durumu geciktirerek veya ölümcül duruma dönüsmesini önleyerek önleyici terapötik firsat saglayacaktir. Bulus sahipleri, c-MAF ve 16q22-24 genomik kazanimini, hakiki olarak iliskili akciger kanseri kemik metastaz geni ve genomik alterasyonu olarak, tercih edilen bir uygulamada osteolitik prostat kemik metastazi olarak tanimlamistir.
BULUSUN KISA AÇIKLAMASI Mevcut bulus sahipleri, yayilmis akciger kanseri hücre metastazini, özellikle kemik metastazini etkileyen sinyallerin dengesinin tanimlanmasinin, hastaligin prognozunun ve buna karsi önleyici terapötik müdahalenin tesis edilmesi için degerli bilgiler saglayacagini belirlemistir. Bulus sahipleri, MAF ve 16q22-24 genomik kazaniminin, akciger-kemik metastaz Iezyonlarini, özellikle osteolitik kemik metastazini baslatmada rol oynadigini tanimlamistir.
Mevcut bulus sahipleri, c-MAF'i akciger kanserinin metastaza ve özellikle kemik metastazina neden olma egiliminin artmasi ile iliskili bir marker olarak tanimlamistir.
MAF asiri ekspresyonunun, c-MAF geninin bulundugu 16q22-q24 lokusunun amplifikasyonundan kaynaklandigi görülmektedir. c-MAF ekspresyon seviyeleri iki hasta kohortunda incelenmistir. Ilk kohort, akciger kanseri olan hastalardan alinan primer tümörlere iliskin klinik notlari ve ekspresyon profillerini içermistir. Ikinci hasta kohortu, kemige metastaz gelistiren 9 tümör, kemik disinda diger bölgelere metastaz gelistiren ve 5 yillik minimum klinik takip süresine sahip olan 16 tümör ve 5 yillik minimum klinik takip süresi ile birlikte hiç metastaz gelistirmemis olan 49 akciger primer tümörü dahil olmak üzere akciger primer tümör biyopsilerinden olusan bir doku mikrodizisi biçiminde olup, c-MAF geni (mRNA) ve tümör hücreleri ve biyopside protein ekspresyonu rekürrens, metastaz, kemik metastazi ve gözlemlenen genel sagkalim dahil olmak üzere farkli klinik parametrelerle pozitif olarak iliskilidir. Ayrica, bu çalismalar prognoz markeri olarak ve akciger kanseri metastazinda, özellikle kemik metastazinda bir hedef gen olarak c-MAF'in rolünü göstermistir. Benzer sekilde, bulus sahipleri akciger kanseri olan deneklerde c-MAF geni dahil olmak üzere 16q22-q24 lokusunun amplifikasyonunu, metastaz varligi, özellikle kemik metastazi varligi ile iliskilendirmistir.
Dolayisiyla bir yönünde bulus, akciger kanserli bir denekte metastaz tanisi ve/veya akciger kanserli bir denekte metastaz görülme egiliminin prognozu için bir in vitro yöntem ile ilgili olup, söz konusu yöntem asagidakileri içermektedir: (i) söz konusu denege ait bir tümör numunesinde c-MAF kopya sayisinin ölçülmesi ve (il) önceden elde edilmis kopya sayisinin, söz konusu genin bir kontrol numunesindeki kopya sayisiyla karsilastirilmasi, burada eger söz konusu genin kopya sayisi, söz konusu genin kontrol numunesindeki kopya sayisina göre artmissa, söz konusu denegin pozitif bir metastaz tanisi veya daha büyük bir metastaz görülme egilimi vardir.
Bir baska yönde bulus, akciger kanserli bir denek için özellestirilmis bir tedavi tasarlanmasina yönelik bir il; i/I'troyöntem ile ilgili olup, söz konusu yöntem asagidakileri içermektedir: (i) söz konusu denege ait bir tümör numunesinde 16q22-24 kopya sayisinin ölçülmesi ve (ii) önceden elde edilmis kopya sayisinin, söz konusu bölgenin bir kontrol numunesindeki kopya sayisiyla karsilastirilmasi, burada eger 16q22-24 kopya sayisi kontrol numunesine göre kazanilmissa, söz konusu denek metastazi önlemeyi ve/veya tedavi etmeyi amaçlayan bir tedavi almaya yatkindir.
Bir baska yönde bulus, akciger kanserli bir denekte metastazin tanisi ve/veya akciger kanserli bir denekte metastaz görülme egiliminin prognozu Için bir in vitro yöntem ile ilgili olup, söz konusu yöntem söz konusu denege ait bir tümör numunesinde c-MAF geninin amplifiye olup olmadiginin belirlenmesini içermektedir, burada eger söz konusu gen amplifiye olmussa, söz konusu denegi pozitif bir metastaz tanisi veya daha büyük bir metastaz görülme egilimi vardir, burada c-MAF geninin amplifikasyonu 16q22-q24 Bir baska yönde bulus, akciger kanserinden muzdarip olan bir denege ait bir numunenin tiplendirilmesine yönelik bir 177 vitroyöntem ile ilgili olup, söz konusu yöntem asagidakileri içermektedir: a) söz konusu denekten bir tümör numunesi saglanmasi; b) söz konusu numunede c-MAF'in ekspresyon seviyesinin ölçülmesi; c) c-MAF'in ölçülmüs ekspresyon seviyesinin c-MAF ekspresyonunun önceden belirlenmis referans seviyesiyle karsilastirilmasi ile söz konusu numunenin tiplendirilmesi; burada söz konusu tiplendirme, söz konusu denekte kemik metastazi riskiyle ilgili prognostik bilgileri saglamaktadir, burada eger söz konusu genin ekspresyon seviyesi söz konusu genin kontrol numunesindeki ekspresyon seviyesine göre artmissa, söz konusu denegin pozitif bir metastaz tanisi veya daha büyük bir metastaz görülme egilimi vardir. ÇIZIMLERIN/SEKILLERIN KISA AÇIKLAMASI SEKIL 1: Akciger primer tümörlerinde c-MAF'in gen ekspresyonu, Kaplan Meier grafiginde gözlemlendigi ve HR ve elde edilen p-degeri ile vurgulandigi gibi metastaz ile büyük ölçüde iliskilidir.
SEKIL 2: a) Primer tümör rezeksiyonundan sonra akciger kanserli hastalarin genel popülasyonunda herhangi bir zamanda kemik metastazi serbest sagkalim olasiligini gösteren Kaplan-Meier grafigi. b) Immünohistokimya (IHC) ile ölçülen c-MAF yüksek veya düsük protein ekspresyon kategorilerine göre akciger kanseri primer tümör biyopsilerinde herhangi bir zamanda kemik metastazi serbest sagkalim olasiligini gösteren Kaplan-Meier grafigi. c-MAF ekspresyon kesim degeri (20,000 Optik Yogunluk (O.D.) Birimine sahiptir), standart yöntemler uyarinca (Egri altinda kalan alan (AUC) 0.80'dir) bir alici çalisma karakteristigi egrisine (ROC egrisi) göre seçilmistir.
SEKIL 3: a) Primer tümör rezeksiyonu anindan itibaren akciger kanserli hastalarin genel popülasyonunda sagkalim olasiligini gösteren Kaplan-Meier grafigi. b) c-MAF yüksek veya düsük protein ekspresyon kategorilerine göre primer akciger kanserinde sagkalim olasiligini gösteren Kaplan-Meier grafigi. c- MAF ekspresyon kesim degeri (20,000 Optik Yogunluk (O.D.) Birimine sahiptir), standart yöntemler uyarinca herhangi bir zamanda kemik metastazina göre bir alici çalisma karakteristigi egrisine (ROC egrisi) göre seçilmistir.
AYRINTILI AÇIKLAMA c-MAF ekspresyon sevivelerine göre akciger kanseri metastazinin tanisi ve prognozu için yöntemler Bulus sahipleri, c-MAF geni ve proteinin akciger kanseri metastazinda asiri eksprese edildigini ve primer akciger tümörlerinde c-MAF ekspresyon seviyelerinin akciger kanserinin farkli klinik parametreleri, özellikle de rekürrens ve metastaz olasiligi ile iliskili oldugunu tanimlamistir. Dolayisiyla c-MAF asiri ekspresyonu, kemikte akciger tümör metastazi baslangici ile iliskilidir. Bu nedenle, c-MAF, akciger kanserli bir denekte metastazin, özellikle kemik metastazinin tanisi ve/veya prognozu için bir marker olarak kullanilabilmektedir.
Dolayisiyla bir yönde, akciger kanserli bir denekte metastaz tanisi ve/veya akciger kanserli bir denekte metastaz görülme egiliminin prognozu için bir in v/troyöntem (asagida açiklanan birinci yöntem olarak anilacaktir) açiklanmakta olup, söz konusu yöntem asagidakileri içermektedir: (i) söz konusu denekten alinan bir tümör numunesinde (örn. akciger tümör dokusu, dolasim halindeki akciger tümör hücresi, dolasim halindeki akciger tümör DNA'si) c-MAF geni ekspresyon seviyesinin ölçülmesi ve (ii) önceden elde edilmis ekspresyon seviyesinin, söz konusu genin bir kontrol numunesindeki ekspresyon seviyesi ile karsilastirilmasi, burada eger söz konusu genin ekspresyon seviyesi söz konusu genin kontrol numunesindeki ekspresyon seviyesine göre artmissa, söz konusu denegin pozitif bir metastaz tanisi veya daha büyük bir metastaz, tercih edilen bir bölgede kemik metastazi görülme egilimi vardir. c-MAF geni (MAF veya MGC71685 geni olarak da bilinen v-maf müsküloaponörotik fibrosarkom onkogen homolog (avian)), homodimer veya heterodimer gibi hareket eden bir Iösin fermuari içeren bir transkripsiyon faktörüdür. DNA baglama bölgesine bagli olarak, kodlanmis protein transkripsiyonel aktivatör veya represör olabilmektedir. c-MAF'i kodlayan DNA sekansi, NCBI veritabaninda NG_016440 erisim numarasi (SEKANS TANIM NO: 1) altinda açiklanmistir. c-MAF'nin kodlama sekansi SEKANS TANIM NO:13'te verilmistir. Iki haberci RNA, söz konusu DNA sekansindan transkribe edilmekte olup, bunlarin her biri 0 izoformu ve [3 izoformu olmak Üzere iki c-MAF protein izoformundan birine mahal verecektir. Söz konusu izoformlarin her biri için komplementer DNA sekanslari NCBI veritabaninda sirasiyla NM_005360.4 (SEKANS TANIM NO: 2) ve NM_ erisim numaralari altinda açiklanmistir.
Mevcut bulus baglaminda “metastaz", bir kanserin basladigi organdan farkli bir organa yayilmasi olarak anlasilmaktadir. Genellikle kan veya lenf sistemiyle meydana gelmektedir. Kanser hücreleri yayilarak yeni bir tümör olusturdugunda, yeni tümör sekonder veya metastatik tümör olarak adlandirilmaktadir. Sekonder tümörü olusturan kanser hücreleri, orijinal tümörünkine benzerdir. Eger akciger kanseri örnegin kemige yayilirsa (metastaz yaparsa), sekonder tümör malign akciger kanser hücrelerinden olusmaktadir. Kemikteki hastalik, metastatik akciger kanseridir; kemik kanseri degildir.
Açiklanan yöntemin özel bir uygulamasinda, metastaz kemige yayilmis (metastaz yapmis) olan akciger kanseridir.
Mevcut bulusta “akciger kanserli bir denekte metastaz tanisi”, bir hastaligin (metastaz) belirtilerinin incelenmesiyle, yani mevcut bulus baglaminda bir kontrol numunesine göre akciger kanseri tümör dokusunda artan c-MAF geni ekspresyon seviyeleri (yani asiri ekspresyon) araciligiyla belirlenmesi olarak anlasilmaktadir.
Mevcut bulus kapsaminda “akciger kanserli bir denekte metastaz görülme egiliminin prognozu”, söz konusu denegin akciger kanserinin ileride metastaz yapip yapmayacagini belirtiler temelinde bilme seklinde anlasilmaktadir. Mevcut açiklama baglaminda belirti, tümör dokusunda c-MAF geni asiri ekspresyonudur.
Açiklanan yöntem, bir birinci adimda bir denekten alinan bir tümör dokusu numunesinde c-MAF geni ekspresyon seviyesinin ölçülmesini içermektedir.
Tercih edilen bir uygulamada açiklanan birinci yöntem, tek marker olarak yalnizca c- MAF geni ekspresyon seviyesinin ölçülmesini içermektedir, yani yöntem herhangi bir ek markerin ekspresyon seviyesinin belirlenmesini içermemektedir.
Burada kullanilan sekliyle "denek" veya "hasta” terimi, memeli olarak siniflandirilan tüm hayvanlara atifta bulunmaktadir ve evcil hayvanlari ve çiftlik hayvanlarini, primatlar ve insanlar, örnegin insanoglu, insan olmayan primatlar, inekler, atlar, domuzlar, koyunlar, keçiler, köpekler, kediler ve kemirgenleri içermekle birlikte bunlarla sinirli degildir.
Denek tercihen herhangi bir yasta veya irkta bir erkek veya kadindir.
Burada kullanilan sekliyle “kötü" veya “iyi” terimleri, klinik bir sonuca atifta bulunmakta olup, denegin olumlu veya olumsuz bir sonuç gösterebilecegi anlamina gelmektedir.
Teknikte uzman olanlar tarafindan anlasilacagi gibi, böyle bir olasilik degerlendirmesi, tercih edilmesine ragmen, tani koyulacak deneklerin %100'ü için dogru olmayabilmektedir. Ancak bu terim, deneklerin istatistiki olarak anlamli bir kisminin belirli bir sonuca yatkiliga sahip seklinde tanimlanabilmesini gerektirmektedir. Bir kismin istatistiki olarak anlamli olup olmadigi, teknikte uzman kisi tarafindan, örnegin güven araliklarinin belirlenmesi, p-degerinin belirlenmesi, Student t-testi, Mann-Whitney testi vb. gibi iyi bilinen muhtelif istatistik degerlendirme araçlari kullanilarak kolaylikla belirlenebilmektedir. Ayrintilari Dowdy and Wearden, Statistics for Research, John Wiley & Sons, New York 1983 kaynaginda bulunmaktadir. Tercih edilen güven araliklari, en az yaklasik %50, en az yaklasik %60, en az yaklasik %70, en az yaklasik veya 0.0001 veya daha azdir. Daha tercihen, bir popülasyondaki deneklerin en az yaklasik %60'i, en az yaklasik %70'i, en az yaklasik %80'i veya en az yaklasik %90'i mevcut açiklamanin yöntemiyle uygun bir sekilde tanimlanabilmektedir.
Mevcut bulus kapsaminda “tümör numunesi”, primer akciger kanser tümöründen gelen numune (örn. tümör dokusu, dolasim halindeki tümör hücresi, dolasim halindeki tümör DNA'si) olarak anlasilmaktadir. Söz konusu numune geleneksel yöntemlerle, örnegin biyopsiyle, ilgili tibbi tekniklerde uzman kisiler tarafindan iyi bilinen yöntemlerle elde edilebilmektedir. Bir biyopsi numunesinin elde edilmesine yönelik yöntemler, bir tümörün büyük parçalara ayrilmasini veya mikrodiseksiyonu veya teknikte bilinen diger hücre ayirma yöntemlerini içermektedir. Tümör hücreleri ayrica, küçük bir ölçme ignesi ile aspirasyonla Sitoloji araciligiyla elde edilebilmektedir. Numune koruma ve kullanma islemini basitlestirmek için, numuneler formalin içinde fikse edilebilmekte ve parafin içerisine sokulabilmektedir veya önce dondurulup, ardindan hizli dondurma islemine olanak veren oldukça kriyojenik bir ortam içerisine daldirma yoluyla OCT bilesigi gibi bir doku dondurma ortamina sokulabilmektedir.
Teknikte uzman kisi tarafindan anlasildigi gibi, gen ekspresyon seviyeleri söz konusu genin veya söz konusu gen tarafindan kodlanan proteinin haberci RNA seviyeleri ölçülerek belirlenebilmektedir.
Bu amaçla, biyolojik numune dokuyu veya hücre yapisini fiziksel veya mekanik olarak parçalayarak intraselüler bilesenleri nükleik asitleri hazirlamaya yönelik bir sulu veya organik çözelti içine salmak için islemden geçirilebilmektedir. Nükleik asitler teknikte uzman kisi tarafindan bilinen ticari olarak temin edilebilen yöntemlerle ekstrakte edilmektedir (Sambroock, J., ve ark., "Molecular cloning: a Laboratory Manual", 3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, N.Y., Vol. 1-3).
Dolayisiyla, c-MAF geni ekspresyon seviyesi, söz konusu genin (haberci RNA veya mRNA) transkripsiyonundan veya alternatif olarak söz konusu genin komplementer DNA'sindan (cDNA) elde edilen RNA'dan ölçülebilmektedir. Bu nedenle, açiklamanin özel bir uygulamasinda c-MAF geni ekspresyon seviyelerinin ölçülmesi, c-MAF geninin haberci RNA'sinin veya söz konusu mRNA'nin bir fragmaninin, c-MAF geninin komplementer DNA'sinin veya söz konusu cDNA'nin bir fragmaninin veya bunlarin karisimlarinin ölçülmesini içermektedir.
Hemen hemen her geleneksel yöntem, c-MAF geni tarafindan kodlanan mRNA seviyelerinin veya bunun karsilik gelen cDNA'sinin saptanmasi ve ölçülmesi için açiklama kapsaminda kullanilabilmektedir. Sinirlayici olmayan örnek olarak, söz konusu gen tarafindan kodlanan mRNA seviyeleri, geleneksel yöntemler, örnegin mRNA amplifikasyonunu ve elektroforez ve boyama gibi söz konusu mRNA amplifikasyon ürününün ölçülmesini içeren yöntemler kullanilarak veya alternatif olarak Southern blot ve uygun problari kullanilarak, Northern blot ve ilgili genin (c-MAF) mRNA'sinin veya karsilik gelen cDNA'sinin spesifik problari, Sl nükleazla haritalama, RT-PCR, hibridizasyon, mikrodiziler vb. kullanilarak, tercihen uygun bir markeri kullanarak gerçek zamanli kantitatif PCR araciligiyla ölçülebilmektedir. Benzer sekilde, c-MAF geni tarafindan kodlanan söz konusu mRNA'ya karsilik gelen cDNA seviyeleri de geleneksel teknikleri kullanarak ölçülebilmektedir; bu durumda açiklanan yöntem, karsilik gelen mRNA'nin ters transkripsiyonu (RT) araciligiyla karsilik gelen cDNA'nin sentezlenmesi, ardindan söz konusu cDNA amplifikasyon ürününün amplifikasyonu ve ölçülmesi adimini içermektedir. Ekspresyon seviyelerinin ölçülmesine yönelik geleneksel yöntemler örnegin Sambrook ve ark., 2001 (yukarida alinti yapi/mistii) kaynaginda bulunabilir. Özel bir yönde c-MAF geni ekspresyon seviyeleri, kantitatif polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) veya bir DNA veya RNA dizisi araciligiyla ölçülmektedir.
Ilaveten, c-MAF geni ekspresyon seviyesi ayrica söz konusu gen tarafindan kodlanan proteinin, örnegin c-MAF proteininin (c-MAF) [NCBI, erisim numarasi 075444] veya c- MAF proteininin herhangi bir fonksiyonel olarak esdeger varyantinin ekspresyon seviyelerin ölçülmesi araciligiyla da ölçülebilmektedir. 403 amino asitten (SEKANS izoformu vardir. c-MAF geni ekspresyon seviyesi, c-MAF protein izoformlarinin herhangi birinin ekspresyon seviyelerin ölçülmesi araciligiyla ölçülebilmektedir. Dolayisiyla, özel bir yönde, c-MAF geni tarafindan kodlanan proteinin seviyelerinin ölçülmesi c-MAF proteininin ölçülmesini içermektedir.
Mevcut açiklama baglaminda "c-MAP proteininin fonksiyonel olarak esdeger varyanti”, (i) amino asit kalintilarindan birinin veya daha fazlasinin korunmus veya korunmamis bir amino asit kalintisi (tercihen korunmus bir amino asit kalintisi) ile sübstitüe edildigi c-MAF proteini varyantlari (SEKANS TANIM NO: 4 veya SEKANS TANIM NO: 5), burada bu sübstitüe edilmis amino asit kalintisi genetik kodla kodlanan bir amino asit kalintisi olabilmekte veya olmayabilmektedir, veya (ii) bir veya daha fazla amino asit insersiyonunu veya delesyonunu içeren ve örnegin bir DNA baglayici transkripsiyon faktörü olarak hareket etmek üzere c-MAF proteini ile ayni fonksiyona sahip olan sayili uluslararasi patent basvurusunda gösterildigi gibi c-MAF'in in vitro hücre gibi c-MAF'i eksprese eden hücrelerde inhibitörün, siklin D2 promotörünün veya c-MAF yanit bölgesini (MARE veya c-MAF yanit elemanini) içeren bir promotörün kontrolü altinda bir haberci genin transkripsiyon kapasitesini bloke etme kapasitesini temel alan inhibitörün, PMA/iyonomisin ile stimülasyona yanit olarak IL-4 promotörünün kontrolü altinda haberci gen ekspresyonunu bloke etme kapasitesini temel alan yöntemleri kullanarak tanimlanabilmektedir.
Bu açiklamaya göre varyantlar tercihen, c-MAF protein izoformlarinin (SEKANS TANIM NO: 4 veya SEKANS TANIM NO: 5) herhangi birinin amino asit sekansina en az %50, benzerligine sahiptir. Varyantlar ve daha önceden tanimlanan spesifik c-MAF protein sekanslari arasindaki benzerlik derecesi, alanda uzman kisiler tarafindan yaygin olarak bilinen algoritmalar ve bilgisayar islemleri kullanilarak belirlenmektedir. Iki amino asit sekansi arasindaki benzerlik tercihen BLASTP algoritmasi [BLAST Manual, Altschul, S., ve ark., NCBI NLM NIH Bethesda, Md. 20894, Altschul, S., ve ark., J. Mol. Biol. 215: c-MAF protein ekspresyon seviyesi, bir denekten alinan bir numunede söz konusu proteinin saptanmasina ve ölçülmesine olanak veren herhangi bir geleneksel yöntemle ölçülebilmektedir. Sinirlayici olmayan örnek olarak, söz konusu protein seviyeleri örnegin c-MAF baglama kapasitesine sahip antikorlar (veya bunlarin bir antijenik belirleyici içeren bir fragmani) ve olusan komplekslerin müteakip ölçümü kullanilarak ölçülebilmektedir. Bu testlerde kullanilan antikorlar etiketli olabilmekte veya olmayabilmektedir. Kullanilabilecek markerlerin açiklayici örnekleri arasinda radyoaktif izotoplar, enzimler, floroforlar, kemilüminesans reaktifler, enzim substratlari veya kofaktörler, enzim inhibitörleri, partiküller, boyalar vb. yer almaktadir. Etiketlenmemis antikorlarin (primer antikorlar) ve etiketli antikorlar (sekonder antikor) kullanildigi, mevcut açiklamada kullanilabilecek bilinen testlerin genis bir yelpazesi vardir; bu teknikler arasinda Western-blot veya Western transferi, ELISA (enzime bagli bagisiklik testi), RIA (radyoimmünoessey), kompetitif EIA (kompetitif enzim immünoessey), DAS- ELISA (çift antikor sandwich ELISA), immünositokimyasal ve immünohistokimyasal teknikler, protein mikrodizilerinin veya spesifik antikorlar içeren biyoçiplerin kullanimina dayali teknikler veya ölçme çubugu gibi formatlarda kolloidal presipitasyona dayali testler yer almaktadir. Söz konusu c-MAF proteininin saptanmasi ve ölçülmesinin diger yollari, afinite kromatografi tekniklerini, Iigand baglama testlerini vb. içermektedir.
Immünolojik yöntem kullanildiginda, c-MAF proteinine yüksek afinite ile baglandigi bilinen herhangi bir antikor veya reaktif bunun miktarini saptamak için kullanilabilmektedir. Bununla birlikte, bir antikorun, örnegin poliklonal serumlar, hibridomalarin veya monoklonal antikorlarin süpernatantlari, antikor fragmanlari, Fv, Fab, Fab' ve F(ab')2, scFv, insanlastirilmis diabody'ler, triabody'ler, tetrabody'ler, nanobody'ler, alfabody'ler, zimbalanmis peptitler, siklopeptitler ve antikorlarin kullanimi da düsünülebilir. Mevcut açiklama baglaminda kullanilabilecek, örnegin ab427, Cambridge CB4 OFL, Birlesik Krallik), AbD Serotec'e ait 075444 monoklonal antikor (Fare Anti-Insan MAF Azit içermeyen Monoklonal antikor, Konjuge olmamis, Klon 6b8) vb. gibi ticari anti-c-MAF protein antikorlari piyasada mevcuttur. Abnova Corporation, Bethyl Laboratories, Santa Cruz Biotechnology, Bioworld Technology, GeneTex vb. gibi anti-c-MAF antikorlari sunan birçok ticari sirket vardir. Özel bir yönde c-MAF protein seviyeleri, western blot, immünohistokimya, ELISA veya protein dizisi araciligiyla ölçülmektedir.
Baska bir özel yönde c-MAF protein seviyeleri, ekzozomlardan veya dolasim halindeki DNA'dan ölçülmektedir. Ekzozomlar, in i/I'i/0 ve in vitro olarak çogu hücre tipi tarafindan salgilanan 40 - 100 nm membran vezikülleridir. Ekzozomlar, kompartmanin Iümenine içe ilerleme ile multiveziküler cisimler (MVB'Ier) olarak adlandirilan endozomlarin özel bir popülasyonunda olusmaktadir. MVB'Ierin plazma membranina füzyonu sonrasinda bu iç veziküller salgilanmaktadir. Ekzozomlar alanda bilinen birkaç yöntemle farkli hücre hatlari veya vücut sivilarindan izole edilebilmektedir (Théry C. ve ark., Curr Protoc Cell Biol. 2006 Apr;Chapter 3:Unit 3.22). Ekzozomlarin izolasyonu için ExoQuickTM veya ExoTes T” gibi birkaç ticari kit mevcuttur.
Açiklanan birinci yöntem, ikinci adimda denekten alinan tümör numunesinde (primer tümör biyopsisi, dolasim halindeki tümör hücreleri ve dolasim halindeki tümör DNA'si dahil ancak bunlarla sinirli olmamak üzere) elde edilen c-MAF geni ekspresyon seviyesinin, söz konusu genin bir kontrol numunesindeki ekspresyon seviyesi ile karsilastirilmasini içermektedir.
Akciger kanserli bir denekten alinan bir tümör dokusu numunesinde, dolasim halindeki bir tümör hücresinde veya dolasim halindeki bir tümör DNA'sinda c-MAF geni ekspresyon seviyesi ölçülüp kontrol numunesi ile karsilastirildiktan sonra, eger söz konusu genin ekspresyon seviyesi kontrol numunesindeki ekspresyon seviyesine göre artmissa, söz konusu denegin pozitif bir metastaz tanisi veya daha büyük bir metastaz görülme egilimi oldugu sonucuna varilabilmektedir. c-MAF geni ekspresyon seviyesinin belirlenmesi, kontrol numunesinin veya referans numunesinin degerleri ile iliskili olmak zorundadir. Analiz edilecek tümör türüne bagli olarak kontrol numunesinin tam yapisi farklilik gösterebilmektedir. Bu nedenle bir taninin degerlendirilecek olmasi durumunda, referans numune metastaz yapmamis akciger kanserli bir denekten alinan bir tümör dokusu numunesi ya da metastaz yapmamis akciger kanserli deneklerden alinan biyopsi numunelerinde tümör dokusu koleksiyonunda ölçülen c-MAF geni ekspresyon seviyelerinin medyan degerine karsilik gelen bir tümör dokusu numunesidir.
Söz konusu referans numune tipik olarak, bir denek popülasyonundan alinan esit miktarda numune kombine edilerek elde edilmektedir. Genel olarak, tipik referans numuneleri klinik olarak iyi belgelendirilmis ve metastaz olmadigi iyi karakterize edilmis deneklerden elde edilecektir. Bu tür numunelerde biyomarkerin (c-MAF geni) normal konsantrasyonlari (referans konsantrasyon), örnegin referans popülasyonda ortalama konsantrasyon saglanarak belirlenebilmektedir. Markerin referans konsantrasyonu belirlenirken çesitli hususlar dikkate alinmaktadir. Bu hususlar arasinda yas, kilo, cinsiyet, hastanin genel fiziksel durumu ve benzeri yer almaktadir. Örnegin, tercihen yukaridaki hususlara göre, örnegin çesitli yas kategorilerine göre siniflandirilmis olan en miktarlar referans grubu olarak alinmaktadir. Referans seviyesinin elde edildigi numune koleksiyonu tercihen, çalisma konusu hasta ile ayni kanser türünden (örn. akciger kanseri) muzdarip olan deneklerden olusacaktir. Benzer sekilde, bir hasta kohortundaki referans degeri bir alici çalisma karakteristigi egrisi (ROC) kullanilarak ve hangi çiftin en iyi sonuçlari sagladigini ve hangi referans degerine karsilik geldigini belirlemek üzere tüm sensitivite ve spesifite çiftlerine yönelik egri altinda kalan alan ölçülerek olusturulabilmektedir.
Bu medyan veya referans deger olusturulduktan sonra, bu medyan degere sahip hastalardan alinan tümör dokularinda eksprese edilen bu markerin seviyesi karsilastirilabilmekte ve böylece “artan” ekspresyon seviyesine atanabilmektedir.
Denekler arasindaki degiskenlikler (örnegin yas, irk ve benzerine iliskin yönler) yüzünden c-MAF ekspresyonunun mutlak referans degerlerinin olusturulmasi (eger hemen hemen Imkansiz degilse) çok zordur. Dolayisiyla, özel yönlerde c-MAF ekspresyonunun “artan” veya “azalan" ekspresyonuna yönelik referans degerleri, hastaligi yukarida c-MAF ekspresyon seviyelerinde bahsedilen yöntemlerin herhangi biri ile iyi belgelenmis olan deneklerden izole edilen bir veya birkaç numunede testler yapilmasini içeren geleneksel yollarla yüzdelik dilimleri hesaplanarak belirlenmektedir.
Ardindan c-MAF'in “azalan” seviyeleri tercihen numunelere atanabilmektedir, burada c- MAF ekspresyon seviyeleri, örnegin normal popülasyonda 60. yüzdelik dilime esit veya bundan daha düsük ekspresyon seviyeleri, normal popülasyonda 70. yüzdelik dilime esit veya bundan daha düsük ekspresyon seviyeleri, normal popülasyonda 80. yüzdelik dilime esit veya bundan daha düsük ekspresyon seviyeleri, normal popülasyonda 90. yüzdelik dilime esit veya bundan daha düsük ekspresyon seviyeleri ve normal popülasyonda 95. yüzdelik dilime esit veya bundan daha düsük ekspresyon seviyeleri dahil olmak üzere normal popülasyonda 50. yüzdelik dilime esit veya bundan daha düsüktür. Ardindan "artan” c-MAF geni ekspresyon seviyeleri tercihen numunelere atanabilmektedir, burada c-MAF geni ekspresyon seviyeleri, örnegin normal popülasyonda 60. yüzdelik dilime esit veya bundan daha yüksek ekspresyon seviyeleri, normal popülasyonda 70. yüzdelik dilime esit veya bundan daha yüksek ekspresyon seviyeleri, normal popülasyonda 80. yüzdelik dilime esit veya bundan daha yüksek ekspresyon seviyeleri, normal popülasyonda 90. yüzdelik dilime esit veya bundan daha yüksek ekspresyon seviyeleri ve normal popülasyonda 95. yüzdelik dilime esit veya bundan daha yüksek ekspresyon seviyeleri dahil olmak üzere normal popülasyonda 50. yüzdelik dilime esit veya bundan daha yüksektir.
Mevcut açiklamada "artan ekspresyon seviyeleri", bir referans numunesindekilerden veya kontrol numunesindekilerden daha büyük c-MAF geni seviyelerine atifta bulundugundaki ekspresyon seviyesi olarak anlasilmaktadir. Özellikle referans numunedeki ekspresyon seviyeleri, hastadan izole edilen numuneye göre en az 1.1 kat, kat veya daha fazla oldugunda, bir numunenin yüksek c-MAF ekspresyon seviyeleri oldugu düsünülebilmektedir.
Mevcut bulus baglaminda, söz konusu denegin muzdarip oldugu akciger kanseri vücudun diger organlarina, özel bir uygulamada kemige metastaz yapmis oldugunda Yine daha çok tercih edilen bir yönde, kemige metastaz, osteolitik kemik metastazidir.
Burada kullanilan sekliyle “osteolitik kemik metastazi” kemik resorpsiyonunun (kemik yogunlugunun progresif kaybi) tümör hücrelerinin osteoklast aktivitesinin simülasyonundan kaynaklanan metastazin proksimitesinde olustugu ve siddetli agri, patolojik fraktürler, hiperkalsemi, omurilik sikismasi ve sinir sikismasi kaynakli diger sendromlar ile karakterize edilen bir metastaz türüdür.
Diger yandan mevcut bulusta denegin muzdarip oldugu akciger kanserinin ileride metastaz yapma olasiligi yüksek oldugunda "bir denegin daha büyük bir metastaz görülme egilimi oldugu” anlasilmaktadir.
Alanda uzman kisi, primer akciger tümörünün metastaz yapma egilimi tahmininin, belirlenecek tüm denekler (yani deneklerin %100'ü) için dogru olmasinin amaçlanmadigini anlayacaktir. Yine de bu terim, deneklerin istatistiksel olarak anlamli bir kisminin (örnegin, bir kohort çalismasinda bir kohortun) belirlenmesini saglamayi gerektirmektedir. Bir kismin istatistiksel olarak anlamli olup olmadigi, alanda uzman kisi tarafindan, örnegin güven araliklarinin belirlenmesi, p degerlerinin belirlenmesi, Student T testi, Mann-Whitney testi vb. gibi muhtelif iyi bilinen istatistiksel degerlendirme araçlari kullanilarak kolay bir sekilde belirlenebilmektedir. Ayrintilari Dowdy and Wearden, Statistics for Research, John Wiley and Sons, New York 1983 kaynaginda verilmistir. Tercih edilen güven araliklari, en az %90, en az %95, en az %97, en az Daha çok tercihen bir popülasyonun deneklerinin en az %60'i, en az %70'i, en az %80'i veya en az %90'i mevcut açiklamanin yöntemiyle uygun sekilde belirlenebilmektedir.
Burada kullanilan sekliyle “kemik yikiminin önüne geçmeye veya yikimi önlemeye yönelik madde” ya osteoblast proliferasyonunu stimüle ederek ya da osteoklast proliferasyonunu inhibe ederek ya da kemik yapisini fikse ederek kemik yikimini önleyebilen, inhibe edebilen, tedavi edebilen, azaltabilen veya durdurabilen herhangi bir moleküle atifta bulunmaktadir.
Burada kullanilan sekliyle bir “c-MAF inhibitör maddesi" hem söz konusu genin ekspresyon ürününün üretilmesini önleyerek (c-MAF geni transkripsiyonunu keserek ve/veya c-MAF geni ekspresyonundan gelen mRNA'nin translokasyonunu keserek) hem de c-MAF protein aktivitesini dogrudan inhibe ederek c-MAF geni ekspresyonunu tamamen veya kismen inhibe edebilen bir moleküle atifta bulunmaktadir. C-MAF geni ekspresyon inhibitörleri, in vitro hücre proliferasyonunu desteklemek için basvuruda açiklandigi gibi inhibitörün, siklin DZ promotörünün veya c-MAF'i eksprese eden hücrelerde c-MAF yanit bölgesini (MARE veya c-MAF yanit elemanini) içeren bir promotörün kontrolü altinda bir haberci genin transkripsiyon kapasitesini bloke etme ve c-MAF'i eksprese eden hücrelerde PMA/iyonomisinle stimülasyona yanit olarak inhibitörün, IL-4 promotörünün kontrolü altinda bir haberci genin ekspresyonunu bloke etme kapasitesini temel alan yöntemler kullanilarak belirlenebilmektedir.
Burada kullanilan sekliyle rapamisin memeli hedefi (mTOR) veya “mTOR” serin/treonin protein kinaz gibi EC 2.7.11.1. mTor enzimlerine karsilik gelen ve hücre proliferasyonu, hücre motilitesini, hücre büyümesini, hücre sagkalimini ve transkripsiyonu regüle eden proteinlere atifta bulunmaktadir.
Burada kullanilan sekliyle bir “mTOR inhibitörü” hem söz konusu genin ekspresyon ürününün üretilmesini önleyerek (mTOR geni transkripsiyonunu keserek ve/veya mTOR geni ekspresyonundan gelen mRNA'nin translokasyonunu keserek) hem de mTOR protein aktivitesini dogrudan inhibe ederek mTOR geni ekspresyonunu tamamen veya kismen inhibe edebilen bir moleküle atifta bulunmaktadir. mTOR inhibitörleri, mTOR aktivitesinin inhibisyonuna ilaveten bir veya daha fazla hedefi olan inhibitörleri içermektedir.
Burada kullanilan sekliyle “Src” EC 2.7.10.2'ye karsilik gelen proteinlere atifta bulunmaktadir. Src, bir reseptör olmayan tirozin kinazdir ve bir proto-onkogendir. Src, hücre büyümesinde ve embriyonik gelisimde rol oynayabilmektedir.
Burada kullanilan sekliyle bir “Src inhibitörü” hem söz konusu genin ekspresyon ürününün üretilmesini önleyerek (Src geni transkripsiyonunu keserek ve/veya Src geni ekspresyonundan gelen mRNA'nin translokasyonunu keserek) hem de Src protein aktivitesini dogrudan inhibe ederek Src geni ekspresyonunu tamamen veya kismen inhibe edebilen bir moleküle atifta bulunmaktadir.
Burada kullanilan sekliyle “ProstaglandIn-endoperoksidaz sintaz 2”, “siklooksijenaz-Z" veya “COX-Z” EC 1.14.99.1'e karsilik gelen proteinlere atifta bulunmaktadir. COX-2, arasidonik asiti, prostaglandin endoperoksidaz H2'ye dönüstürmekten sorumludur.
Burada kullanilan sekliyle bir "COX-2 inhibitörü” hem söz konusu genin ekspresyon ürününün üretilmesini önleyerek (COX-Z geni transkripsiyonunu keserek ve/veya COX-2 geni ekspresyonundan gelen mRNA'nin translokasyonunu keserek) hem de COX-2 protein aktivitesini dogrudan inhibe ederek COX-2 geni ekspresyonunu tamamen veya kismen inhibe edebilen bir moleküle atifta bulunmaktadir.
Burada kullanilan sekliyle “sonuç” veya "klinik sonuç" hastaligin ortaya çikan seyrine ve/veya hastaligin ilerlemesine atifta bulunmaktadir ve örnegin rekürrens, rekürrensa kadar geçen süre, metastaz, metastaza kadar geçen süre, metastaz sayisi, metastaz bölgesi sayisi ve/veya hastaliga bagli ölüm ile karakterize edilebilmektedir. Örnegin iyi klinik sonuç, tedaviyi, rekürrensi Önlemeyi, metastazi önlemeyi ve/veya belirli bir süre sagkalimi (rekürrens olmadan) kapsamaktadir ve kötü klinik sonuç, hastaligin ilerlemesini, metastazi ve/veya belirli bir süre içinde ölümü kapsamaktadir.
Burada kullanilan sekliyle “tahmin etme" akciger kanserinden muzdarip denegin uzak bir organa metastaz gelistirme olasiliginin belirlenmesine atifta bulunmaktadir. Burada kullanilan sekliyle “iyi prognoz” denegin sag kalmasinin ve/veya belirli bir sürede rekürrens veya uzak metastaz riski olmamasinin veya düsük bir riski olmasinin beklendigini (örn. tahmin edildigini) göstermektedir. “Düsük” terimi, göreceli bir terimdir ve bu uygulama baglaminda bir klinik sonuca göre (rekürrens, uzak metastaz vb.) “düsük" ekspresyon grubu riskine atifta bulunmaktadir. Bir “düsük” risk, bir heterojen kanser hastasi popülasyonuna yönelik ortalama riskten daha düsük bir risk olarak görülebilmektedir. Paik ve arkadaslari (2004) çalismasinda, genel “düsük" rekürrens riski, yüzden 15'ten az olarak kabul edilmistir. Bu risk ayrica zaman periyodu fonksiyonuna göre de farklilik gösterecektir. Zaman periyodu örnegin ilk kanser tanisindan veya prognoz yapildiktan sonra bes yil, on yil, on bes yil, hatta yirmi yil olabilmektedir.
Burada kullanilan sekliyle “kötü prognoz" denegin sag kalmamasinin ve/veya belirli bir sürede rekürrens veya uzak metastazlar riski olmasinin veya yüksek bir riski olmasinin beklendigini (örn. tahmin edildigini) göstermektedir. “Yüksek” terimi, göreceli bir terimdir ve bu uygulama baglaminda bir klinik sonuca göre (rekürrens, uzak metastaz vb.) “yüksek” ekspresyon grubu riskine atifta bulunmaktadir. Bir “yüksek” risk, bir heterojen kanser hastasi popülasyonuna yönelik ortalama riskten daha yüksek bir risk olarak görülebilmektedir. Paik ve arkadaslari (2004) çalismasinda, genel “yüksek” rekürrens riski, yüzden 15'ten daha yüksek olarak kabul edilmistir. Bu risk ayrica zaman periyodu fonksiyonuna göre de farklilik gösterecektir. Zaman periyodu örnegin ilk kanser tanisindan veya prognoz yapildiktan sonra bes yil, on yil, on bes yil, hatta yirmi yil olabilmektedir.
Burada kullanilan sekliyle “referans degeri” hastalarin laboratuvar incelemeleriyle veya hastalardan alinan numunelerden elde edilen degerler/veriler için bir referans olarak kullanilan bir laboratuvar degerine atifta bulunmaktadir. Referans degeri veya referans seviyesi bir mutlak deger; bir göreceli deger; bir üst ve/veya alt limiti olan bir deger; bir degerler araligi; bir ortalama deger; bir medyan deger; bir ortalama deger veya özel bir kontrole veya baslangiç degerine kiyasla bir deger olabilmektedir. Bir referans degeri, örnegin test edilen denekten alinan bir numuneden ancak daha önceki bir anda elde edilmis bir deger gibi bir bagimsiz numune degeri olabilmektedir. Referans degeri, kronolojik yas eslestirmeli grubun deneklerinin bir popülasyonu gibi çok sayida numuneyi veya test edilecek numuneyi içeren veya hariç tutan bir numuneler havuzunu temel alabilmektedir.
Burada kullanilan sekliyle “tedavi” terimi, burada açiklandigi gibi bir klinik duruma yatkinligi sonlandirmayi, önlemeyi, hafifletmeyi veya azaltmayi amaçlayan herhangi bir tedavi türüne atifta bulunmaktadir. Tercih edilen bir yönde tedavi terimi, burada tanimlandigi gibi bir bozuklugun veya durumun profilaktik tedavisiyle (yani bir klinik durumun yatkinligini azaltmaya yönelik bir terapiyle) ilgilidir. Bu nedenle “tedavi”, veya bozuklugun herhangi bir tedavisini kapsayan istenen farmakolojik veya fizyolojik etkiyi elde etmeye atifta bulunmaktadir. Bu etki, bir bozuklugun veya bunun semptomunun tamamen veya kismen önlenmesi bakimindan profilaktik olabilmekte ve/veya bir bozukluk için kismi veya tam tedavi ve/veya bozukluga atfedilebilir advers etki açisindan terapötik olabilmektedir. Yani “tedavi” (1) bozuklugun bir denekte ortaya çikmasini veya tekrarlamasini önlemeyi, (2) gelisiminin durdurulmasi gibi bozuklugun inhibe edilmesini, (3) örnegin kaybedilen, eksik olan veya kusurlu bir fonksiyonun restore edilmesi veya onarilmasi ya da verimsiz bir prosesin uyarilmasi yoluyla bozuklugun veya semptomlarin gerilemesinin saglanmasi gibi bozuklugun veya en azindan bozuklukla iliskilendirilmis semptomlarin durdurulmasini veya sona erdirilmesini, böylece konagin artik bu bozukluktan veya semptomlarindan muzdarip olmamasini ya da (4) bozuklugun veya bozuklukla iliskilendirilmis semptomlarin hafifletilmesini, kismen giderilmesini veya iyilestirilmesini kapsamaktadir, burada iyilestirme enflamasyon, agri veya bagisiklik yetersizligi gibi bir parametrenin siddetinde en azindan bir azalmaya atifta bulunmak için genis anlamda kullanilmaktadir.
Burada kullanilan sekliyle “numune” veya “biyolojik numune” bir denekten izole edilmis biyolojik malzeme anlamina gelmektedir. Biyolojik numune, c-MAF geninin ekspresyon seviyesini belirlemeye uygun olan herhangi bir biyolojik malzemeyi Içerebilmektedir.
Numune, örnegin tümör dokusu, kan, kan plazmasi, serum, idrar veya serebral spinal sivi (CSF) gibi herhangi bir uygun biyolojik dokudan veya sividan izole edilebilmektedir.
Burada kullanilan sekliyle, burada kullanildigi gibi bir genin “ekspresyon seviyesi” terimi, denegin bir numunesinde bu genle üretilen gen ürününün ölçülebilir miktarina atifta bulunmaktadir, burada gen ürünü bir transkripsiyonel ürün veya bir translasyonel ürün olabilmektedir. Bu dogrultuda ekspresyon seviyesi, mRNA veya cDNA gibi bir nükleik asit gen ürününe veya bir polipeptid gen ürününe ait olabilmektedir. Ekspresyon seviyesi, bir denegin numunesinden ve/veya bir referans numunesinden veya numunelerinden elde edilebilmektedir ve örnegin de novo saptanabilmekte veya bir önceki belirlemeye karsilik gelebilmektedir. Ekspresyon seviyesi, alanda uzmanlarin bildigi gibi örnegin mikro dizi yöntemleri, PCR yöntemleri (qPCR gibi) ve/veya antikor bazli yöntemler kullanilarak belirlenebilmekte veya ölçülebilmektedir.
Burada kullanilan sekliyle “gen kopya sayisi” terimi, bir hücredeki bir nükleik asit molekülünün kopya sayisina atifta bulunmaktadir. Gen kopya sayisi, bir hücrenin genomik (kromozomal) DNA'sindaki gen kopya sayisini içermektedir. Normal bir hücrede (tümörlü olmayan hücre) gen kopya sayisi normalde iki kopyadir (kromozom çiftinin her üyesinde bir kopya). Gen kopya sayisi bazen bir hücre popülasyonunun numunelerinden alinmis gen kopya sayisinin yarisini içermektedir. numunesindekilerden daha büyük c-MAF gen seviyelerine atifta bulundugundaki ekspresyon seviyesi olarak anlasilmaktadir. Bu artan seviyeler, bir genle veya 16q23 veya 16q22-24 kromozomal Iokus amplifikasyonu veya translokasyonuyla diger mekanizmalari hariç tutmadan saglanabilmektedir. Özellikle hastadan izole edilen numunedeki ekspresyon seviyesi referansa veya kontrole göre en az 1.1 kat, 1.2 kat, yüksek c-MAF ekspresyon seviyeleri oldugu düsünülebilmektedir.
Burada kullanilan sekliyle “prob” ilgili spesiûk nükleik asit sekansina komplementer olan bir oligonükleotid sekansina atifta bulunmaktadir. Bazi yönlerde problar, translokasyona ugradigi bilinen kromozom bölgelerine spesifik olabilmektedir. Bazi yönlerde problarin bir spesifik etiketi veya künyesi olmaktadir. Bazi yönlerde künye florofordur. Bazi yönlerde prob, etiketi platinin nükleik asitlere ve proteinlere kararli koordinatif baglamasini temel alan bir DNA In situ hibridizasyon probudur. Bazi yönlerde prob, Swennenhuis ve ark. "Construction of repeat-free fluorescence in situ hybridization probes" Nucleic Acids Research 40(3):e20 (2012) kaynaginda açiklanmaktadir.
Burada kullanilan sekliyle “künye” veya “etiket” bir probla dogrudan veya dolayli olarak iliskilendirilen, probun veya probun lokasyonunun görsellestirilmesine, isaretlenmesine veya yakalanmasina imkan veren herhangi bir fiziksel moleküle atifta bulunmaktadir.
Burada kullanilan sekliyle “translokasyon” kromozomlar arasindaki esit olmayan veya esit miktarlarda kromozomal malzeme alis-verisine atifta bulunmaktadir. Bazi durumlarda translokasyon ayni kromozomdadir. Bazi durumlarda translokasyon farkli kromozomlar arasindadir. Translokasyonlar, meme kanseri ve lösemi dahil olmak üzere pek çok kanser türünde yüksek siklikta meydana gelmektedir. Translokasyonlar, primer karsilikli translokasyonlar veya daha kompleks sekonder translokasyonlar olabilmektedir. Pek çok kanserde tetikleme olayini teskil ettigine inanilan immünoglobulin agir zincir (IgH) Iokusunu içeren birçok primer translokasyon vardir.
(Eychêne, A., Rocques, N., and Puoponnot, C., A new MAFia in cancer. 2008. Nature Reviews: Cancer. 8: 683-693).
Burada kullanilan sekliyle “poliploid” veya “poliploidi” hücrenin ilgili genin ikiden fazla kopyasini içerdigini göstermektedir. Bazi durumlarda ilgili gen MAF'tir. Bazi yönlerde poliploidi, ilgili genin eIGpresyon akümülasyonuyla iliskilendirilmektedir. Bazi yönlerde poliploidi genomik instabiliteyle iliskilendirilmektedir. Bazi yönlerde genomik instabilite kromozom translokasyonlarina yol açabilmektedir.
Burada kullanilan sekliyle “tam genom sekanslama” bir organizmanin tüm genomunun tek seferde sekanslandigi prosestir. Bkz. örn. Ng., P.C. and Kirkness, E.F., Whole Burada kullanilan sekliyle “eksom sekanslama” bir organizmanin DNA'sinin tüm kodlama bölgesinin sekanslandigi bir prosestir. Eksom sekanslamada mRNA sekanslanmaktadir. Genomun translate edilmemis bölgeleri, eksom sekanslamaya dahil edilmemektedir. Bkz. örn. Choi, M. ve ark., Genetic diagnosis by whole exome capture tümör DNA'si dahil ancak bunlarla sinirli olmamak üzere akciger kanseri tümöründen kaynaklanan doku numunesi olarak anlasilmaktadir. Söz konusu numune geleneksel yöntemlerle, örnegin biyopsiyle, ilgili tibbi tekniklerde uzman kisiler tarafindan iyi bilinen yöntemlerle elde edilebilmektedir. kaybi) tümör hücrelerinin osteoklast aktivitesinin simülasyonundan kaynaklanan metastazin proksimitesinde olustugu ve siddetli agri, patolojik fraktürler, hiperkalsemi, omurilik sikismasi ve sinir sikismasi kaynakli diger sendromlar ile karakterize edilen bir metastaz türüdür.
Akciger tümörlü hastalarda özellestirilmis tedavinin tasarlanmasina yönelik Teknigin bilinen durumunda, kanserden muzdarip bir denege uygulanacak tedavi, kanserin malign tümör olup olmadigina, yani metastaz yapma ihtimalinin yüksek olup olmadigina ya da kanserin benign tümör olup olmadigina bagli olmaktadir. Birinci varsayimda seçilen tedavi, kemoterapi gibi sistemik bir tedavidir ve ikinci varsayimda seçilen tedavi, radyoterapi gibi bölgesel bir tedavidir.
Bu nedenle mevcut açiklamada açiklandigi gibi, akciger kanseri hücrelerinde c-MAF geni asiri ekspresyonunun metastaz varligiyla ilgili oldugu düsünülürse, c-MAF geni ekspresyon seviyeleri, söz konusu kanserden muzdarip denek için en uygun tedaviyle ilgili kararlarin alinmasina imkan tanimaktadir.
Dolayisiyla bir yönde bulus, akciger kanserli bir denek için özellestirilmis bir tedavi tasarlanmasina yönelik bir in i/itroyöntem ile ilgili olup, söz konusu yöntem asagidakileri içermektedir: (i) söz konusu denege ait bir tümör numunesinde 16q22-24 kopya sayisinin ölçülmesi ve (il) önceden elde edilmis kopya sayisinin, söz konusu bölgenin bir kontrol numunesindeki kopya sayisiyla karsilastirilmasi, burada eger 16q22-24 kopya sayisi kontrol numunesine göre kazanilmissa, söz konusu denek metastazi önlemeyi ve/veya tedavi etmeyi amaçlayan bir tedavi almaya yatkindir.
Bir baska yönde, akciger kanserli bir denek için özellestirilmis bir tedavi tasarlanmasina yönelik bir in v/troyöntem açiklanmakta olup, söz konusu yöntem asagidakileri içermektedir: (i) söz konusu denege ait bir tümör numunesinde c-MAF geni ekspresyon seviyesinin ölçülmesi ve (ii) önceden elde edilmis ekspresyon seviyesinin, söz konusu genin bir kontrol numunesinde ekspresyon seviyesiyle karsilastirilmasi, burada eger ekspresyon seviyeleri söz konusu genin kontrol numunesindeki ekspresyon seviyelerine göre artmissa, söz konusu denek metastazi önlemeyi ve/veya tedavi etmeyi amaçlayan bir tedavi almaya yatkindir. Özel bir yönde denege, bu durumda, kemik metastazini önleyen, inhibe eden ve/veya tedavi eden en az bir tedavi uygulanmaktadir. burada eger c-MAF geni ekspresyon seviyesi söz konusu referans degere göre artmamissa, söz konusu denek kemik yikimini önlemeye yönelik bir tedavi almaya yatkin degildir. Bu yöntemin özel bir yönünde denege, bu durumda, kemik metastazini önleyen, inhibe eden ve/veya tedavi eden en az bir tedavi uygulanmamaktadir. Özel bir yönde metastaz kemik metastazidir. Daha çok tercih edilen bir uygulamada, kemik metastazi osteolitik metastazdir. belirlenmesi”, "c-MAF geni”, “artan ekspresyon seviyeleri” ve “kontrol numunesi" terimleri ve ifadeleri, açiklanan birinci yönteme iliskin olarak ayrintili sekilde tarif edilmistir ve bulusun ikinci yöntemine ve açiklanan üçüncü yönteme esit olarak uygulanabilmektedir.
Açiklanan üçüncü yöntem, birinci adimda akciger kanserinden muzdarip olan bir denekte bir tümör numunesinde c-MAF geni ekspresyon seviyesinin ölçülmesini içermektedir.
Tercih edilen bir yönde açiklanan üçüncü yöntem, tek marker olarak yalnizca c-MAF geni ekspresyon seviyesinin ölçülmesini içermektedir, yani yöntem herhangi bir ek markerin ekspresyon seviyesinin belirlenmesini içermemektedir.
Açiklanan üçüncü yöntem durumunda, numune denege ait bir primer tümör dokusudur.
Ikinci adimda denege ait tümör numunesinde elde edilen c-MAF geni ekspresyon seviyesi, söz konusu genin bir kontrol numunesindeki ekspresyon seviyesi ile karsilastirilmaktadir. c-MAF geni ekspresyon seviyelerinin belirlenmesi, bir kontrol numunesinin veya referans numunesinin degerleri ile iliskili olmak zorundadir. Analiz edilecek tümör türüne bagli olarak kontrol numunesinin tam yapisi farklilik gösterebilmektedir. Bu nedenle referans numune tercihen, metastaz yapmamis akciger kanserli bir denekten alinan bir tümör dokusu numunesi ya da metastaz yapmamis akciger kanserli deneklerden alinan biyopsi numunelerinde tümör dokusu koleksiyonunda ölçülen c-MAF geni ekspresyon seviyelerinin medyan degerine karsilik gelen bir tümör dokusu numunesidir.
Yine bir baska yönde c-MAF'in ortalamanin üzerinde olan ekspresyon seviyesi, yüksek bir kemik metastazi riskini göstermekte olup, bu risk c-MAF ekspresyon seviyelerine orantilidir. Bu nedenle, akciger kanserinden muzdarip olan bir denekte kemik metastazi riski doza baglidir.
Numunedeki c-MAF geni ekspresyon seviyeleri ölçülüp kontrol numunesi ile karsilastirildiktan sonra, eger söz konusu genin ekspresyon seviyeleri kontrol numunesindeki ekspresyon seviyelerine göre artmissa, söz konusu denegin metastazi önlemeyi (eger denek henüz metastaz yasamamissa) ve/veya tedavi etmeyi (eger denek halihazirda metastaz yasamissa) amaçlayan bir tedavi almaya yatkin oldugu sonucuna varilabilmektedir. Eger böyle bir artan ekspresyon gözlemlenmezse, denege kemik metastazini önleyen, inhibe eden ve/veya tedavi eden en az bir tedavi uygulanmamaktadir.
Kanser metastaz yaptiginda, kemoterapi, hormon tedavisi, immünoterapi veya bunlarin bir kombinasyonu dahil ancak bunlarla sinirli olmamak üzere sistemik tedaviler kullanilmaktadir. Ilaveten, radyoterapi ve/veya cerrahi kullanilabilmektedir. Tedavi seçimi genellikle primer kanserin türüne, büyüklügüne, metastaz yerine, yasa, hastanin genel saglik durumuna ve önceden kullanilmis tedavi türlerine baglidir.
Sistemik tedaviler, tüm vücuda ulasan tedavilerdir: . Kemoterapi, kanser hücrelerini imha etmek için ilaç kullanilmasidir. Bu ilaçlar genellikle oral veya intravenöz yoldan uygulanmaktadir. Bazi durumlarda kemoterapi radyasyon tedavisi ile birlikte kullanilmaktadir. Akciger kanseri için uygun kemoterapötik tedaviler arasinda sinirlama olmaksizin antrasiklinler (doksorubisin, epirubisin, pegile Iipozomal doksorubisin), Taksanlar (paklitaksel, dosetaksel, albumin nano parçacik bagli paklitaksel), 5-floroürasil (sürekli infüzyon 5-FU, kapesitabin), Vinca alkaloidleri (vinorelbin, vinblastin), Gemsîtabin, Platin tuzlari (sîsplatin, karboplatin), siklofosfamid, Etopozid ve yukaridakilerin birinin veya daha fazlasinin kombinasyonlari, mesela Siklofosfamid/antrasiklin +/- 5-fl0r0ürasil rejimleri (mesela doksorubisin/ siklofosfamid (AC), epirubisin/siklofosfamid, (EC) siklofosfamid/epirubisin/S- floroürasil (CEF), siklofosfamid/ doksorubisin/S-floroürasil (CAF), 5- floroürasil/epirubisin/siklofosfamid (FEC)), siklofosfamid/ metotreksat/S- floroürasil (CMF)i antrasiklinler/taksanlar (mesela doksorubisin/paklitaksel veya doksorubisin/dosetaksel), DosetakseI/kapesitabin, Gemsîtabin/paklitaksel, Taksan/platin rejimleri (mesela paklitaksel/karboplatin veya dosetaksel/ karboplatin) yer almaktadir.
. Hormon tedavisi, bazi hormonlarin kanser büyümesini destekledigi olgusuna dayanmaktadir. Örnegin, kadinlarda yumurtaliklarin ürettigi östrojen bazen meme kanseri büyümesini desteklemektedir. Bu hormonlarin üretimini durdurmanin birkaç yolu vardir. Bunun bir yolu bunlari üreten organlarin, yani kadinlarda yumurtaliklarin ve erkeklerde testislerin alinmasidir. Daha sik olarak, bu organlarin hormonlari üretmesini Önleyen veya hormonlarin kanser hücrelerine etki etmesini önleyen ilaçlar kullanilabilmektedir.
. Immünoterapi, hastanin kanserle mücadele etmesi için kendi bagisiklik sistemine yardim eden bir tedavidir. Metastazli hastalari tedavi etmek için kullanilan birkaç immünoterapi türü mevcuttur. Bunlar arasinda sitokinler, monoklonal antikorlar ve antitümör asilari yer almakla birlikte bunlarla sinirli degildir.
Bir baska yönde tedavi, Alpharadi (radyum-223 diklorür)'dür. Alpharadin, kanser hücrelerini öldürmek için radyum-223 çürümesinden alfa radyasyonunu kullanmaktadir.
Radyum-223, kalsiyum taklidi özellikleri sayesinde kemik metastazini dogal olarak kendiliginden hedef almaktadir. Alfa radyasyonunun (beta veya gamma radyasyonunu temel alan mevcut radyasyon terapisine kiyasla) 2-10 hücrelik çok kisa bir menzili vardir ve bu nedenle çevredeki saglikli dokulara (özellikle kemik iligine) daha az zarar vermektedir. Kalsiyuma benzer özellikleri olan radyum-223, kalsiyumun ileri, kastrasyona dirençli prostat kanseri olan erkeklerin iskeletsel metastazinda görüldügü gibi daha hizli ve anormal kemik büyümesi bölgesi dahil olmak üzere vücutta kemik olusumu için kullanildigi yerlere çekilmektedir. Radyum-223, enjeksiyondan sonra, kan dolasimiyla anormal kemik büyümesi bölgelerine tasinmaktadir. Bir kanserin vücutta basladigi yer, primer tümör olarak bilinmektedir. Bu hücrelerden bazilari kopabilmekte ve kan dolasimiyla vücudun farkli bir bölümüne tasinabilmektedir. Ardindan kanser hücreleri vücudun bu bölümüne yerleserek yeni bir tümör olusturabilmektedir. Bu durumun ortaya çikmasi, sekonder kanser veya metastaz olarak adlandirilmaktadir. Ileri evre prostat kanseri olan çogu hasta, hastaligin maksimum yükünü kemiklerinde yasamaktadirlar. Radyum-223 ile amaç, bu sekonder kanseri selektif olarak hedef almaktir. Kemiklerin almadigi herhangi bir radyum-223 hizla bagirsaklara yönlendirilip atilmaktadir.
Bir baska yönde tedavi, bir mTor inhibitörüdür. Bazi yönlerde mTor inhibitörü, bir çift mTor/PI3kinaz inhibitörüdür. Bazi yönlerde mTor inhibitörü metastazi önlemek veya inhibe etmek için kullanilmaktadir. Bazi yönlerde mTor inhibitörü asagidakilerden olusan gruptan seçilmektedir: ABIOO9 (sirolimus), rapamisin (sirolimus), Abraxane (paklitaksel), Absorb (everolimus), Afinitor (everolimus), Afinitor with Gleevec, (umirolimus), BioMatrix (umirolimus), BioMatrix flex (umirolimus), CC115, CC223, Combo Bio-engineered Sirolimus Kapli Stent ORBUSNEICH (sirolimus), Curaxin Endeavor Resolute (zotarolimus), Femara (Ietrozol), Hocena (antrokuinonol), INK128, SF, Taltorvic (ridaforolimus), Tarceva (erlotinib), Torisel (temsirolimus), Xience Prime (everolimus), Xience V (everolimus), Zomaxx (zotarolimus), Zortress (everolimus), Zotarolimus Kapli NV, 582602, Sirolimus PNP SAMYANG Advacan (everolimus), AZD8055, Cypher Select Plus Sirolimus kapli Koroner Stent (sirolimus), Cypher Sirolimus kapli koroner stent (sirolimus), Ilaç Kapli Balon (sirolimus), E-Magic Plus (sirolimus), Emtor (sirolimus), Esprit (everolimus), Evertor (everolimus), HBF, mTOR Inhibitor CELLZOME, Nevo Sirolimus kapli Koroner Stent (sirolimus), nPT-mTOR, Rapacan (sirolimus), Renacept (sirolimus), ReZoIve (sirolimus), Rocas (sirolimus), SF1126, Sirolim (sirolimus), Sirolimus NORTH CHINA (sirolimus), Sirolimus RANBAXY (sirolimus), Sirolimus WATSON (Sirolimus) Siropan (sirolimus), Sirova (sirolimus), Supralimus (sirolimus), Supralimus-Core (sirolimus), Tacrolimus WATSON (takrolimus), TAFA93, Temsirolimus ACCORD (temsirolimus), Temsirolimus SANDOZ (temsirolimus), TOP216, Xience Prime (everolimus), Xience V (everolimus). Spesifik bir yönde mTor inhibitörü Afinitor'dur (everolimus) inhibitörü ile kombine edilmektedir. (Bkz. örn. Baselga, J., el al., Everolimus in Postmenopausal Hormone-Receptor Positive Advanced Breast Cancer. 2012. N. Engl. J. tanimlanabilmektedir. (Bkz. örn. Zhou, H. ve ark. Updates of mTor inhibitors. 2010.
Anticancer Agents Med. Chem. 10(7): 571-81). Bazi yönlerde mTor inhibitörü, ileri akciger kanseri olan bir hastada metastazi tedavi etmek veya önlemek veya inhibe etmek Için kullanilmaktadir. Bazi yönlerde mTor inhibitörü, ikinci bir tedavi ile kombinasyon halinde kullanilmaktadir. Bazi yönlerde ikinci tedavi, burada açiklanan herhangi bir tedavidir.
Bir baska yönde tedavi, bir Src kinaz inhibitörüdür. Bazi yönlerde Src inhibitörü metastazi önlemek veya inhibe etmek Için kullanilmaktadir. Bazi yönlerde Src kinaz inhibitörü su gruptan seçilmektedir: AZD0530 (sarakatinib), Bosulif (bosutinib), Dasatinib VALEANT (dasatinib), Fontrax (dasatinib), Src Kinaz Inhibitörü KINEX, VX680,(tozasertib laktat), XL228 ve SUNK706. Baska yönlerde Src kinaz inhibitörü, dasatinibdir. Bir baska yönde Src kinaz inhibitörü alanda bilinen yöntemlerle tanimlanabilmektedir (Bkz. örn. Sen, B. and Johnson, F.M. Regulation of Src Family yönlerde Src kinaz inhibitörü, SRC responsif imza (SRS) için pozitif olan bir hastada metastazi tedavi etmek veya önlemek veya inhibe etmek için kullanilmaktadir. Bazi yönlerde hasta, SRS+ ve ER-'dir. (Bkz. örn.Zhang, CH.-F, ve ark. Latent Bone Metastasis in Breast Cancer Tied to Src-Dependent survival signals. 2009. Cancer Cell. 16: 67-78). Bazi yönlerde Src kinaz inhibitörü, ileri akciger kanseri olan bir hastada metastazi tedavi etmek veya önlemek veya inhibe etmek için kullanilmaktadir. Bazi yönlerde Src kinaz inhibitörü, ikinci bir tedavi ile kombinasyon halinde kullanilmaktadir.
Bazi yönlerde Ikinci tedavi, burada açiklanan herhangi bir tedavidir.
Bir baska yönde tedavi, bir COX-2 inhibitörüdür. Bazi yönlerde COX-2 inhibitörü, metastazi önlemek veya inhibe etmek için kullanilmaktadir. Bazi yönlerde COX-2 Inhibitörü su gruptan seçilmektedir: ABT963, Acetaminophen ER JOHNSON (difenhidramin, naproksen sodyum), BAYI, Capoxigem (aprikoksib), C, Diractin (ketoprofen), GW, Hyanalgese-D (diklofenak), HydrocoDex (asetaminofen, dekstrometorfan, hidrokodon), Ibuprofen Sodium PFIZER (ibuprofen sodyum), Acetaminophen PFIZER ile Ibuprofen (asetaminofen, ibuprofen), Impracor (ketoprofen), IP880 (diklofenak), IP940 (indometasin), ISV205 (diklofenak sodyum), JNSOl3 (asetaminofen, tramadol hidroklorür), Ketoprofen TDS (ketoprofen), LTNSOOl (naproksen etemesil), Mesalamine SALIX (mezalamin), Mesalamine SOFAR (mezalamin), Mesalazine (mezalamin), ML, NCX4016 (nitroaspirin), NCX, OMSlO3HP (amitriptilin hidroklorür, ketoprofen, oksimetazolin hidroklorür), Oralease (diklofenak), OxycoDex (dekstrometorfan, oksikodon), PS4, PercoDex (asetaminofen, dekstrometorfan, oksikodon), PL3100 (naproksen, fosfatidil kolin), PSD508, R- Ketoprofen (ketoprofen), Remura (bromfenak sodyum), ROX828 (ketorolak trometamin), RP, TDS943 (diklofenak sodyum), TDT, TI'063 (S- propranolol), XPZOB (asetaminofen, dekstropropoksifen), XPZIB (diklofenak potasyum), XP21L (diklofenak potasyum), Zoenasa (asetilsistein, mezalamin), Acephen, Actifed Plus, Actifed-P, Acular, Acular LS, Acular PF, Acular X, Acuvail, Advil, Advil Allergy Sinus, Advil Cold and Sinus, Advil Congestion Relief, Advil PM, Advil PM Kapsül, Air Salonpas, Airtal, Alcohol-Free NyQuil Cold & Flu Relief, Aleve, Aleve ABDI IBRAHIM, Aleve-D, AIka-Seltzer, AIka-Seltzer BAYER, AIka-Seltzer Extra Strength, AIka-Seltzer Lemon-Lime, AIka-Seltzer Original, AIka-Seltzer Plus, Alka-Seltzer plus Cold and Cough, AIka-Seltzer plus Cold and Cough Formula, AIka-Seltzer Plus Day and Night Cold Formula,, AIka-Seltzer Plus Day Non-Drowsy Cold Formula, Alka-Seltzer Plus FIu Formula, AIka-Seltzer Plus Night Cold Formula, AIka-Seltzer Plus Sinus Formula, Alka- Seltzer Plus Sparkling Original Cold Formula, AIka-Seltzer PM, AIka-Seltzer Wake-Up Call, Anacin, Anaprox, Anaprox MINERVA, Ansaid, Apitoxin, Apranax, Apranax abdi, Arcoxia, Arthritis Formula Bengay, Arthrotec, Asacol, Asacol HD, Asacol MEDUNA ARZNEIMITTEL, Asacol ORIFARM, Aspirin BAYER, Aspirin Complex, Aspirin Migran, Benadryl Allergy, Benadryl Day and Night, Benylin 4 Flu, Benylin Cold and Flu, Benylin Cold and Flu Day and Night, Benylin Cold and Sinus Day and Night, Benylin Cold and Sinus Plus, Benylin Day and Night Cold and Flu Relief, Benylinl AII-In-One, Brexin, Brexin ANGELINI, Bromday, Bufferin, Buscopan Plus, Caldolor, Calmatel, Cambia, Canasa, Capoxigem, Cataflam, Celebrex, Celebrex ORIFARM, Children's Advil Allergy Sinus, Children's Tylenol, Children's Tylenol Cough and Runny Nose, Children's Tylenol plus cold, Children's Tylenol plus Cold and Cough, Children's Tylenol plus cold and stuffy nose, Children's Tylenol plus Flu, Children's Tylenol plus cold & allergy, Children's Tylenol plus Cough & Runny Nose, Children's Tylenol plus Cough & Sore Throat, Children's Tylenol plus multi symptom cold, Clinoril, Codral Cold and Flu, Codral Day and Night Day Tablets, Codral Day and Night Night Tablets, Codral Nightime, Colazal, Combunox, Contac Cold plus FIu, Contac Cold plus Flu Non-Drowsy, Coricidin D, Coricidin HBP Cold and Flu, Coricidin HBP Day and Night Multi-Symptom Cold, Coricidin HBP Maximum Strength Flu, Coricidin HBP Nighttime Multi-Symptom Cold, Coricidin II Extra Strength Cold and Flu, CSSOZ, C5670, Daypro, Daypro Alta, DDSOöC, Demazin Cold and Flu, Demazin Cough, Cold and Flu, Demazin day/night Cold and Flu, Demazin PE Cold and Flu, Demazin PE day/night Cold and Flu, Diclofenac HPBCD, Dimetapp Day Relief, Dimetapp Multi-Symptom Cold and FIu, Dimetapp Night Relief, Dimetapp Pain and Fever Relief, Dimetapp PE Sinus Pain, Dimetapp PE Sinus Pain plus Allergy, Dipentum, Diractin, Disprin Cold 'n' Fever, Disprin Extra, Disprin Forte. Disprin Plus, Dristan Cold, Dristan Junior, Drixoral Plus, Duexis, Dynastat, Efferalgan, Efferalgan Plus Vitamin C, Efferalgan Vitamin C, Elixsure IB, Excedrin Back and Body, Excedrin Migraine, Excedrin PM, Excedrin Sinus Headache, Excedrin Tensîon Headache, Falcol, Fansamac, Feldene, FeverAIl, Fiorinal, Fiorinal with Codeine, Flanax, Flector Patch, Flucam, Fortagesic, Gerbin, Giazo, Gladio, Goody's Back and Body Pain, Goody's Cool Orange, Goody's Extra Strength, Goody's PM, Greaseless Bengay, GW406381, HCT1026, He Xing Yi, Hyanalgese-D, HydrocoDex, Ibuprofen Sodium PFIZER, Acetaminophen PFIZER ile Ibuprofen, Icy Hot SANOFI AVENTIS, Impracor, Indocin, Motrin, Ketoprofen TDS, Lemsip Max, Lemsip Max All in One, Lemsip Max All Night, Lemsip Max Cold and Flu, Lialda, Listerine Mouth Wash, Lloyds Cream, Lodine, Lorfit P, Loxonin, LTNSOOl, Mersyndol, Mesalamine SALIX, Mesalamine SOFAR, Mesalazine, Mesasal GLAXO, Mesasal SANOFI, Mesulid, Metsal Heat Rub, Midol Complete, Midol Extended Relief, Midol Liquid Gels, Midol PM, Midol Teen Formula, Migranin COATED TABLEI'S, ML3000, Mobic, Mohrus, Motrin, Motrin Cold and Sinus Pain, Motrin PM, Movalis ASPEN, MRX7EAT, Nalfon, Nalfon PEDINOL, Naprelan, Naprosyn, Naprosyn RPG LIFE SCIENCE, Naproxen IROKO, NCX4016, NCX701, NeoProfen LUNDBECK, Nevanac, Nexcede, Niflan, Norgesic MEDICIS, Novalgin, Nuprin SCOLR, Nurofen, Nurofen Cold and Flu, Nurofen Max Strength Migraine, Nurofen Plus, Nuromol, NyQuil with Vitamin C, Ocufen, OMSlO3HP, Oralease, Orudis ABBOTT JAPAN, Oruvail, Osteluc, OxycoDex, PS4, Panadol, Panadol Actifast, Paradine, Paramax, Parfenac, Pedea, Pennsaid, Pentasa, Pentasa ORIFARM, Peon, Percodan, Percodan-Demi, PercoDex, Ketoprofen, Rantudil, Relafen, Remura, Robaxisal, Rotec, Rowasa, ROX828, RP19583, RQOO317076, Rubor, Salofalk, Salonpas, Saridon, SDX101, Seltouch, szowasa, Shinbaro, Sinumax, Sinutab, Sinutab,, sinus, Spalt, Sprix, Strefen, Sudafed Cold and Cough, Sudafed Head Cold and Sinus, Sudafed PE Cold plus Cough, Sudafed PE Pressure plus Pain, Sudafed PE, Severe Cold, Sudafed PE Sinus Day plus Night Relief Day Tablets, Sudafed PE Sinus Day plus Night Relief Night Tablets, Sudafed PE Sinus plus Anti-inflammatory Pain Relief, Sudafed Sinus Advance, Surgam, Synalgos-DC, Synflex, Tavist allergy/sinus/headache, TDS943, TDTO70, Theraflu Cold and Sore Throat, Theraflu Daytime Severe Cold and Cough, Theraflu Daytime Warming Relief,Theraqu Warming Relief Caplets Daytime Multi-Symptom Cold, Theraflu Warming Relief Cold and Chest Congestion, Thomapyrin, Thomapyrin C, Thomapyrin Effervescent, Thomapyrin Medium, Tilcotil, Tîspol, Tolectin, Toradol, TPR100, TQ1011, Trauma-Salbe, Trauma-Salbe Kwizda, Treo, Treximet, Trovex, 'I'I'063, Tylenol, Tylenol Allergy Multi-Symptom, Tylenol Back Pain, Tylenol Cold & Cough Daytime, Tylenol Cold Tylenol Cold Head Congestion Severe, Tylenol Cold Multi Symptom Daytime, Tylenol Cold Multi Symptom Nighttime Liquid, Tylenol Cold Multi Symptom Severe, Tylenol Cold Non-Drowsiness Formula, Tylenol Cold Severe Congestion Daytime, Tylenol Complete Cold, Cough and Flu Night time, Tylenol Flu Nighttime, Tylenol Menstrual, Tylenol PM, Tylenol Sinus Congestion & Pain Daytime, Tylenol Sinus Congestion & Pain Nighttime, Tylenol Sinus Congestion & Pain Severe, Tylenol Sinus Severe Congestion Daytime, Tylenol Ultra Relief, Tylenol with Caffeine and Codeine phosphate, Tylenol with Vicks NyQuil Cold and Flu Relief, Vicoprofen, Vimovo, Voltaren Emulgel, Voltaren GEL, Voltaren NOVARTIS CONSUMER HEALTH GMBH, Voltaren XR, VT122, Xefo, Xefo Rapid, Xefocam, Xibrom, XL3, Xodol, XPZOB, XP21B, XP21L, Zipsor ve Zoenasa. Bir baska yönde COX-2 inhibitörleri alanda bilinen yöntemlerle tanimlanabilmektedir (Bkz. örn. Dannhardt, G. and Kiefer, W. Cyclooxygenase inhibitors- current status and future akciger kanseri olan bir hastada metastazi tedavi etmek veya önlemek veya inhibe etmek için kullanilmaktadir. Bazi yönlerde COX-2 inhibitörü, ikinci bir tedavi ile kombinasyon halinde kullanilmaktadir. Bazi yönlerde ikinci tedavi, burada açiklanan herhangi bir tedavidir. Bazi yönlerinde COX-2 inhibitörü, asagidakilerden olusan gruptan seçilen Ikinci bir tedavi ile kombinasyon halinde kullanilmaktadir: Denosumab, Zometa (http://www.us.zometa.com/index.jsp?usertrack.filter_applied=true&NovaId=2935376 veya peptid bloke edici PTHLH (paratiroid hormon benzeri hormon) veya PTHrP (paratiroid hormonu baglantili protein).
Bir baska yönde, kemik yikiminin önüne geçmek ve/veya bunu önlemek için kullanilan tedavi maddeleri arasinda sinirlama olmaksizin sunlar yer almaktadir: . Paratiroid hormon (PTH) ve Paratiroid benzeri hormon (PTHLH) inhibitörleri (bloke edici antikorlar dahil) veya bunlarin rekombinant formlari (PTH'ye ait amino asiler 7-34'e karsilik gelen teriparatid). Bu hormon, osteoklastlari stimüle ederek ve bunlarin aktivitesini artirarak hareket etmektedir.
Stronsiyum ranelat: bir alternatif oral tedavidir ve osteoblast proliferasyonunu stimüle ettiklerinden ve osteoklast proliferasyonunu inhibe ettiklerinden “çift etkili kemik maddeleri” (DABA'lar) olarak anilan ilaçlar grubunun bir parçasini olusturmaktadir. östrojenlerin reseptöre baglanmasina müdahale eden veya baglanmasini inhibe eden bilesiklere atifta bulunmaktadir. Östrojen reseptör modülatörlerinin örnekleri arasinda digerlerinin yani sira, östrojenler progestagen, estradiol, droloksifen, raloksifen, Iazofoksifen, TSE-424, tamoksifen, idoksifen, L Y353381, 4,4'dihidroksibenzofenon-2,4-dinItrofenil-hiclrazon ve SH646 yer almaktadir.
Kalsitonin: kalsitonin reseptörü ile osteoklast aktivitesini dogrudan inhibe etmektedir. Kalsitonin reseptörleri, osteoklastlarin yüzeyinde tanimlanmistir.
Bisfosfonatlar: osteoporoz ve kemik metastazli kanser gibi kemik resorpsiyonu ve reabsorpsiyonu olan hastaliklarin önlenmesi ve tedavisi için kullanilan bir tibbi ürün grubudur; kanser meme kanseri ve prostat kanseriyle iliskilendirilmis hiperkalsemili veya hiperkalsemisiz olmaktadir. Açiklanan üçüncü yöntemle tasarlanan tedavide kullanilabilecek bifosfonat örnekleri arasinda azotlu bisfosfonatlar (pamidronat, neridronat, olpadronat, alendronat, ibandronat, risedronat, inkadronat, zoledronat veya zoledronik asit vb.) ve azotsuz bisfosfonatlar (etidronat, klodronat, tiludronat vb.) yer almakla birlikte bunlarla sinirli degildir. bilesiklere atifta bulunmaktadir. Katepsin K inhibitörlerinin sinirlandirici olmayan örnekleri arasinda (Novartis Pharma GMBH adi altinda WO 03/020278 sayili uluslararasi patent basvurusunda açiklanan) 4-amino-pirimidin-Z-karbonitril türevleri, WO ve WO pirrolo-pirimidinler ve Axys Pharmaceuticals'a ait PCT WO 00/55126 ve Merck Frosst Canada & C0. ve Axys Pharmaceuticals'a ait WO 01/49288 sayili yayinlarda açiklanan inhibitörler yer almaktadir. azaltabilen herhangi bir bilesige atifta bulunmaktadir. DKK-1 agirlikli olarak yetiskin kemiginde eksprese edilen ve osteolitik Iezyonlari olan miyelom hastalarinda upregüle edilen, bir çözünür Wnt yolagi antagonistidir. DKK-1'i hedef alan maddeler, multipl miyelom hastalarinda osteolitik kemik hastaligini önlemede bir rol oynayabilmektedir. Novartis'ten BHQ880, birinci sinif, tamamen insan, anti-DDK-l nötrlestirici antikordur. Ön klinik çalismalar, BHQ880'in kemik formasyonunu destekledigi ve böylece tümöre bagli osteolitik hastaligi inhibe ettigi hipotezini desteklemektedir (Ettenberg S. ve ark., American Association for Cancer Research Annual Meeting. Nisan 12-16, 2008; San Diego, Calif. Özet). kaçisini bloke etmek için tasarlanmis MET ve VEGF yolaklarinin güçlü bir çift inhibitörü olan herhangi bir bilesige atifta bulunmaktadir. MET, yalnizca tümör hücrelerinde ve endotelyal hücrelerde degil, ayni zamanda osteoblastlarda (kemik yapici hücreler) ve osteoklastlarda (kemik çikarici hücreler) eksprese edilmektedir. HGF, tüm bu hücre tiplerinde MET'e baglanarak MET yolagina multipl otokrin ve parakrin döngülerinde önemli bir rol saglamaktadir. MET'in tümör hücrelerinde aktivasyonu, metastatik kemik Iezyonlarinin yerlesiminde önemli gözükmektedir. Ayni zamanda MET yolaginin osteoblastlarda ve osteoklastlarda aktivasyonu, anormal kemik büyümesi (yani blastik lezyonlar) veya yikimi (yani litik lezyon) dahil kemik metastazlarinin patolojik özelliklerine yol açabilmektedir. Bu nedenle MET yolaginin hedeflenmesi, metastatik kemik olabilmektedir. Önceden XL olarak bilinen Cabozantinib (Exelixis, Inc), MET' bagli tümör kaçisini bloke etmek için tasarlanmis MET ve VEGF yolaklarinin güçlü bir çift inhibitörüdür. Çok sayida ön klinik çalismada cabozantinib'in tümör hücrelerini öldürdügü, metastazi azalttigi ve anjiyogenezi (tümör büyümesini desteklemek için gereken yeni kan damarlarinin olusumu) inhibe ettigi gösterilmistir. Diger uygun çift inhibitörler E7050 (N-[2-FIOro-4-({2- bilinmektedir) seklindedir. herhangi bir bilesige atifta bulunmaktadir. RANKL stromanin ve T Ienfosit hücrelerin osteoblast membraninin yüzeyinde bulunmaktadir ve bu T lenfosit hücreler, onu salgilama kapasitesini göstermis olan tek hücrelerdir. Temel islevi, kemik resorpsiyonuna katilan hücreler olan osteoklastlarin aktivasyonudur.
RANKL inhibitörleri, RANKL'nin reseptörüne (RANK) baglanmasini bloke ederek, RANK aracili sinyali bloke ederek veya RANKL ekspresyonunu RANKL'nin transkripsiyonunu veya translasyonunu bloke etmek suretiyle azaltarak hareket edebilmektedir. Mevcut açiklamada kullanima uygun olan RANKL antagonistleri veya inhibitörleri arasinda sinirlama olmaksizin asagidakiler yer almaktadir: 0 RANKL'yi baglayabilen ve bir RANK proteininin ekstraselüler alaninin tamamini veya bir fragmanini içeren uygun bir RANK proteini. Çözünür RANK, murin veya insan RANK polipeptidlerinin sinyal peptidini ve ekstrasellüler alanini içerebilmekte veya alternatif olarak sinyal peptidi çikarilmis olan proteinin matür formu kullanilabilmektedir. o RANKL baglama kapasitesi olan osteoprotegerin veya bunun bir varyanti. o RANKL-spesifik antisens molekülleri o RANKL'nin transkribe ürünlerini isleyebilen ribozimler o Spesifik anti-RANKL antikorlari. “Anti-RANKL antikoru veya RANKL'ye karsi yönlendirilmis antikor” burada bir veya birden fazla RANKL islevini inhibe eden nükleer faktör KB (RANKL) için aktive edici reseptörün ligandina spesifik olarak baglanabilen tüm antikorlar olarak anlasilmaktadir. Antikorlar, alanda uzman olanlar tarafindan bilinen yöntemlerden herhangi biri kullanilarak hazirlanabilmektedir. Bu nedenle poliklonal antikorlar, bir hayvana inhibe edilecek proteinle bagisiklik kazandirilmasiyla hazirlanmaktadir. Monoklonal antikorlar Kohler, yöntem kullanilarak hazirlanmaktadir. Mevcut açiklamanin baglaminda uygun antikorlar arasinda bir degisken antijen baglama bölgesini ve bir sabit bölgeyi, "Fab", "F(ab')2" ve "Fab'" Fv, scFv fragmanlarini içeren dokunulmamis antikorlar, diabody'ler ve bispesifik antikorlar yer almaktadir. 0 Spesifik anti-RANKL nanobody'ler. Nanobody'ler, dogal olusumlu agir zincirli antikorlarin benzersiz yapisal ve fonksiyonel özelliklerini içeren antikor türevli terapötik proteinlerdir. Nanobody teknolojisi aslen devegillerin (develer ve lamalar) hafif zincirlerden yoksun olan tam fonksiyonel antikorlara sahip oldugu kesfini takiben gelistirilmistir.
Nanobody'lerin genel yapisi FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4 seklindedir, burada FR1 ila FR4, iskelet bölgeleridir (1-4); CDR1 ila CDR3, komplementarite belirleyici bölgelerdir (1-3). Bu agir zincirli antikorlar, bir tek degisken alan (VHH) ve iki sabit alan (CH2 ve CH3) içermektedir. Önemli bir sekilde klonlanmis ve izole edilmis VHH alani, orijinal agir zincirli antikorun tam antijen baglama kapasitesini barindiran mükemmel kararli bir polipeptiddir. Benzersiz yapisal ve fonksiyonel özellikleri olan bu yeni kesfedilmis VHH alanlari, Ablynx'in Nanobody'ler olarak adlandirdigi yeni nesil terapötik antikorlarin temelini olusturmaktadir.
Bir yönde RANKL inhibitörü, bir RANKL spesifik antikoru, bir RANKL spesiûk nanobody ve osteoprotegerinden olusan gruptan seçilmektedir. Spesifik bir yönde anti-RANKL antikoru bir monoklonal antikordur. Yine daha spesifik bir yönde anti-RANKL antikoru 615258-40-7). Denosumab, RANKL'ye baglanan ve bunun aktivasyonunu önleyen (RANK reseptörüne baglanmamaktadir) tamamen insan monoklonal antikordur. patentlerinde açiklanmaktadir. Bir baska yönde RANKL inhibitörü, Denosumab ile ayni epitopu baglayan bir antikor, antikor fragmani veya füzyon yapisidir. nanobody'lerden herhangi biridir. Yine daha çok tercih edilen bir yönde anti-RANKL antikoru ALX-0141'dir (Ablynx). ALX-0141, menopoz sonrasi osteoporoz, romatoid artrit, kanser ve belirli ilaçlarla iliskilendirilmis kemik kaybini inhibe etmek ve saglikli kemik metabolizmasi dengesini yeniden saglamak üzere tasarlanmistir.
Tercih edilen bir yönde kemik yikimini önleyen madde, bir bifosfonat, bir RANKL inhibitörü, PTH ve PTHLH inhibitörü veya bir PRG analogu, stronsiyum ranelat, bir DKK- 1 inhibitörü, bir çift MEI' ve VEGFR2 inhibitörü, Radyum-223 kalsitonin ve bir katepsin K inhibitöründen olusan gruptan seçilmektedir. Daha çok tercih edilen bir yönde, kemik yikimini önleyen madde bir bifosfonattir. Yine daha çok tercih edilen bir yönde bifosfonat, zoledronik asittir.
Bir uygulamada bir CCR5 antagonisti, primer akciger kanseri tümörünün kemige metastazini önlemek veya inhibe etmek üzere uygulanmaktadir. Bir uygulamada CCR5 antagonisti, büyük bir moleküldür. Bir baska uygulamada CCR5 antagonisti, küçük bir moleküldür. Bazi uygulamalarda CCR5 antagonisti, Maraviroc'tur (Velasco-Velaquez, M. ve ark. 2012. CCR5 Antagonist Blocks Metastasis of Basal Breast Cancer Cells. Cancer Velasco-Velâquez, M. ve ark. 2012. CCR5 Antagonist Blocks Metastasis of Basal Breast Aplaviroc'tur (Demarest J.F. ve ark. 2005. Update on Aplaviroc: An HIV Entry Inhibitor Targeting CCR5. Retrovirology 2(Suppl. 1): 513). Bazi yönlerde CCR5 antagonisti, bir spiropiperidin CCR5 antagonistidir. (Rotstein D.M. ve ark. 2009. Spiropiperidine CCR5 inhibitors: an overview. Curr. Opin. HIV AIDS. 4(2): 82-7).
Tercih edilen bir yönde çift MET ve VEGFR2 inhibitörü, Cabozantinib, Foretinib ve E7050'den olusan gruptan seçilmektedir.
Tercih edilen bir uygulamada Radyum 223 terapisi, alpharadin'dir.
Alternatif olarak yukarida bahsedilenler arasindan birden fazla maddenin metastazi tedavi etmek ve/veya önlemek için kombine edildigi ya da söz konusu maddelerin kalsiyum veya D vitamini gibi diger takviyelerle veya bir hormon tedavisiyle kombine edilebilecegi sekilde bir komine tedavi yürütülebilmektedir.
Kemik metastazi olan akciger kanserli hastalarda özellestirilmis tedavinin tasarlanmasina yönelik yöntem Kemige metastaz yapmis olan ve yükselmis c-MAF seviyeleri olan akciger kanserli hastalar, artan osteoklastik aktivitenin yol açtigi kemik yikimini önlemeyi amaçlayan terapilerden özellikle yararlanabilirler.
Bu nedenle bir baska yönde, akciger kanserli bir denek için özellestirilmis bir tedavi tasarlamaya yönelik bir in vitro yöntem (asagida dördüncü yöntem olarak anilacaktir) açiklanmakta olup, bu yöntem sunlari içermektedir: (i) söz konusu denegin kemiginden alinan bir metastatik tümör numunesinde c- MAF geni ekspresyon seviyesinin ölçülmesi ve (ii) önceden elde edilmis ekspresyon seviyesinin, söz konusu genin bir kontrol numunesindeki ekspresyon seviyesiyle karsilastirilmasi, burada eger ekspresyon seviyeleri, söz konusu genin kontrol numunesindeki ekspresyon seviyelerine göre artmissa, söz konusu denek kemik yikimini önlemeyi amaçlayan bir tedavi almaya yatkindir; burada eger ekspresyon seviyeleri, söz konusu referans degerine göre artmamissa, söz konusu denek kemik metastazini önlemeyi ve/veya tedavi etmeyi amaçlayan bir tedavi almaya yatkin degildir. belirlenmesi", "c-MAP geni”, “artan ekspresyon seviyeleri” ve "kontrol numunesi" terimleri ve ifadeleri, açiklanan birinci yönteme iliskin olarak ayrintili sekilde açiklanmistir ve açiklanan ikinci ve dördüncü yönteme esit olarak uygulanabilmektedir.
Tercih edilen bir uygulamada kemik metastazi osteolitik metastazdir.
Açiklanan dördüncü yöntem, birinci adimda akciger kanserinden muzdarip olan bir denekteki bir tümör numunesinde c-MAF geni ekspresyon seviyesinin ölçülmesini içermektedir.
Açiklanan dördüncü yöntem durumunda numune, kemik metastazindan bir doku numunesidir.
Tercih edilen bir yönde açiklanan dördüncü yöntem tek marker olarak yalnizca c-MAF geni ekspresyon seviyesinin ölçülmesini içermektedir, yani yöntem herhangi bir ek markerin ekspresyon seviyesinin belirlenmesini içermemektedir.
Ikinci adimda, denekten alinan tümör numunesinde elde edilen c-MAF geni ekspresyon seviyesi, bir söz konusu genin kontrol numunesindeki ekspresyon seviyesiyle karsilastirilmaktadir. c-MAF geni ekspresyon seviyelerinin belirlenmesi, bir kontrol numunesinin veya referans numunesinin degerleriyle iliskili olmak zorundadir. Analiz edilecek tümör türüne bagli olarak kontrol numunesinin tam yapisi farklilik gösterebilmektedir. Bu nedenle açiklanan dördüncü yöntemi içeren durumda referans numune, metastaz yapmamis akciger kanseri olan denekten alinan veya metastaz yapmamis akciger kanseri olan deneklerden alinan biyopsi numunelerindeki tümör dokusu koleksiyonunda ölçülen c-MAF geni ekspresyon seviyelerinin medyan degerine karsilik gelen bir tümör dokusu numunesidir.
Numunedeki c-MAF geni ekspresyon seviyesi ölçülüp kontrol numunesiyle karsilastirildiginda, eger söz konusu genin ekspresyon seviyeleri kontrol numunesindeki ekspresyon seviyelerine göre artmissa, söz konusu denegin kemik yikiminin önüne geçmeyi ve/veya bunu önlemeyi amaçlayan bir tedaviyi almaya yatkindir.
Burada kullanilan sekliyle “kemik yikiminin önüne geçmeye ve/veya bunu önlemeye yönelik madde” ya osteoblast proliferasyonu stimüle ederek ya da osteoklast proliferasyonu inhibe ederek kemik yikimini tedavi edebilen veya durdurabilen herhangi bir moleküle atifta bulunmaktadir.
Kemik yikiminin ve/veya kemik metastazinin önüne geçmek ve/veya bunlari önlemek için kullanilan maddelerin açiklayici örnekleri arasinda asagidakiler yer almakla birlikte bunlarla sinirli degildir: Paratiroid hormonu (PTH) veya bunun rekombinant formlari (PTH'ye ait amino asitler 1-34'e karsilik gelen teriparatid). Bu hormon osteoblastlari stimüle ederek ve aktivitelerini artirarak hareket etmektedir.
Stronsiyum ranelat: bir alternatif oral tedavidir ve osteoblast proliferasyonunu stimüle ettiklerinden ve osteoklast proliferasyonunu inhibe ettiklerinden "çift etkili kemik maddeleri” (DABA'lar) olarak anilan ilaçlar grubunun bir parçasini olusturmaktadir. östrojenlerin reseptöre baglanmasina müdahale eden veya baglanmasini inhibe eden bilesiklere atifta bulunmaktadir. Östrojen reseptör modülatörlerinin örnekleri arasinda digerlerinin yani sira, östrojenler progestagen, estradiol, droloksifen, raloksifen, Iazofoksifen, TSE-424, tamoksifen, idoksifen, L Y353381, 4,4'dihidroksibenzofenon-2,4-dinitrofeniI-hidrazon ve SH646 yer almaktadir.
Kalsitonin: kalsitonin reseptörü ile osteoklast aktivitesini dogrudan inhibe etmektedir. Kalsitonin reseptörleri, osteoklastlarin yüzeyinde tanimlanmistir.
Bisfosfonatlar: osteoporoz ve kemik metastazli kanser gibi kemik resorpsiyonu ve reabsorpsiyonu olan hastaliklarin önlenmesi ve tedavisi için kullanilan bir tibbi ürün grubudur; kanser meme kanseri ve prostat kanseriyle iliskilendirilmis hiperkalsemili veya hiperkalsemisiz olmaktadir. Açiklanan dördüncü yöntemle tasarlanan tedavide kullanilabilecek bifosfonat örnekleri arasinda azotlu bisfosfonatlar (pamidronat, neridronat, olpadronat, alendronat, ibandronat, risedronat, inkadronat, zoledronat veya zoledronik asit vb.) ve azotsuz bisfosfonatlar (etidronat, klodronat, tiludronat vb.) yer almakla birlikte bunlarla sinirli degildir. bilesiklere atifta bulunmaktadir. Katepsin K inhibitörlerinin sinirlandirici olmayan örnekleri arasinda (Novartis Pharma GMBH adi altinda WO 03/020278 sayili uluslararasi patent basvurusunda açiklanan) 4-amino-pirimidin-Z-karbonitril türevleri, WO ve WO pirrolo-pirimidinler ve Axys Pharmaceuticals'a ait PCT WO 00/55126 ve Merck Frosst Canada & C0. ve Axys Pharmaceuticals'a ait WO 01/49288 sayili yayinlarda açiklanan inhibitörler yer almaktadir. azaltabilen herhangi bir bilesige atifta bulunmaktadir. DKK-1 agirlikli olarak yetiskin kemiginde eksprese edilen ve osteolitik Iezyonlari olan miyelom hastalarinda upregüle edilen, bir çözünür Wnt yolagi antagonistidir. DKK-1'i hedef alan maddeler, multipl miyelom hastalarinda osteolitik kemik hastaligini önlemede bir rol oynayabilmektedir. Novartis'ten BHQ880, birinci sinif, tamamen insan, anti-DDK-l nötrlestirici antikordur. Ön klinik çalismalar, BHQ880'in kemik formasyonunu destekledigi ve böylece tümöre bagli osteolitik hastaligi inhibe ettigi hipotezini desteklemektedir (Ettenberg S. ve ark., American Association for Cancer Research Annual Meeting. April 12-16, 2008; San Diego, Calif. Özet). kaçisini bloke etmek için tasarlanmis MET ve VEGF yolaklarinin güçlü bir çift inhibitörü olan herhangi bir bilesige atifta bulunmaktadir. MET, yalnizca tümör hücrelerinde ve endotelyal hücrelerde degil, ayni zamanda osteoblastlarda (kemik yapici hücreler) ve osteoklastlarda (kemik çikarici hücreler) eksprese edilmektedir. HGF, tüm bu hücre tiplerinde MET'e baglanarak MET yolagina multipl otokrin ve parakrin döngülerinde önemli bir rol saglamaktadir. MET'in tümör hücrelerinde aktivasyonu, metastatik kemik Iezyonlarinin yerlesiminde önemli gözükmektedir. Ayni zamanda MET yolaginin osteoblastlarda ve osteoklastlarda aktivasyonu, anormal kemik büyümesi (yani blastik lezyonlar) veya yikimi (yani litik lezyon) dahil kemik metastazlarinin patolojik özelliklerine yol açabilmektedir. Bu nedenle MET yolaginin hedeflenmesi, metastatik kemik olabilmektedir. Önceden XL olarak bilinen Cabozantinib (Exelixis, Inc), MET' bagli tümör kaçisini bloke etmek için tasarlanmis MET ve VEGF yolaklarinin güçlü bir çift inhibitörüdür. Çok sayida ön klinik çalismada cabozantinib'in tümör hücrelerini öldürdügü, metastazi azalttigi ve anjiyogenezi (tümör büyümesini desteklemek için gereken yeni kan damarlarinin olusumu) inhibe ettigi gösterilmistir. Diger uygun çift inhibitörler E7050 (N-[2-Floro-4-({2- bilinmektedir) seklindedir. herhangi bir bilesige atifta bulunmaktadir. RANKL stromanin ve T Ienfosit hücrelerin osteoblast membraninin yüzeyinde bulunmaktadir ve bu T lenfosit hücreler, onu salgilama kapasitesini göstermis olan tek hücrelerdir. Temel islevi, kemik resorpsiyonuna katilan hücreler olan osteoklastlarin aktivasyonudur.
RANKL inhibitörleri, RANKL'nin reseptörüne (RANK) baglanmasini bloke ederek, RANK aracili sinyali bloke ederek veya RANKL ekspresyonunu RANKL'nin transkripsiyonunu veya translasyonunu bloke etmek suretiyle azaltarak hareket edebilmektedir. Mevcut açiklamada kullanima uygun olan RANKL antagonistleri veya inhibitörleri arasinda sinirlama olmaksizin asagidakiler yer almaktadir: 0 RANKL'yi baglayabilen ve bir RANK proteininin ekstrasellüler alaninin tamamini veya bir fragmanini içeren uygun bir RANK proteinidir. Çözünür RANK, murin veya insan RANK polipeptidlerinin sinyal peptidini ve ekstrasellüler alanini içerebilmekte veya alternatif olarak sinyal peptidi çikarilmis olan proteinin matür formu kullanilabilmektedir. o RANKL baglama kapasitesi olan osteoprotegerin veya bunun bir varyanti. o RANKL-spesifik antisens molekülleri o RANKL'nin transkribe ürünlerini isleyebilen ribozimler o Spesifik anti-RANKL antikorlari. "Anti-RANKL antikoru veya RANKL'ye karsi yönlendirilmis antikor” burada bir veya birden fazla RANKL islevini inhibe eden nükleer faktör KB (RANKL) için aktive edici reseptörün ligandina spesifik olarak baglanabilen tüm antikorlar olarak anlasilmaktadir. Antikorlar, alanda uzman olanlar tarafindan bilinen yöntemlerden herhangi biri kullanilarak hazirlanabilmektedir. Bu nedenle poliklonal antikorlar, bir hayvana inhibe edilecek proteinle bagisiklik kazandirilmasiyla hazirlanmaktadir. Monoklonal antikorlar, Kohler, yöntem kullanilarak hazirlanmaktadir. Mevcut açiklamanin baglaminda uygun antikorlar arasinda bir degisken antijen baglama bölgesini ve bir sabit bölgeyi içeren dokunulmamis antikorlar, "Fab", "F(ab')2" ve "Fab'" fragmanlari, Fv, scFv, diabody'ler ve bispesifik antikorlar yer almaktadir. 0 Spesifik anti-RANKL nanobody'ler. Nanobody'ler, dogal olusumiu agir zincirli antikorlarin benzersiz yapisal ve fonksiyonel özelliklerini içeren antikor türevli terapötik proteinlerdir. Nanobody teknolojisi aslen devegillerin (develer ve lamalar) hafif zincirlerden yoksun olan tam fonksiyonel antikorlara sahip oldugu kesfini takiben gelistirilmistir.
Nanobody'lerin genel yapisi, FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4 seklindedir, burada FR1 - FR4 iskelet bölgelerdir (. Bu agir zincirli antikorlar, bir tek degiskenli alan (VHH) ve iki sabit alan (CH2 ve CH3) içermektedir. Önemli bir sekilde klonlanmis ve izole edilmis VHH alani, orijinal agir zincirli antikorun tam antijen baglama kapasitesini barindiran mükemmel kararli bir polipeptiddir.
Benzersiz yapisal ve fonksiyonel özellikleri olan bu yeni kesfedilmis VHH alanlari, Ablynx'in Nanobody'ler olarak adlandirdigi yeni nesil terapötik antikorlarin temelini olusturmaktadir.
Bulusun bir yönünde RANKL inhibitörü, bir RANKL spesifik antikoru, bir RANKL spesifik nanobody ve osteoprotegerinden olusan gruptan seçilmektedir. Tercih edilen bir yönde anti-RANKL antikoru bir monoklonal antikordur. Yine daha çok tercih edilen bir yönde anti-RANKL antikoru Denosumab'dir (Pageau, Steven C. (2009). mAbs 1 (3): 210- . Mevcut açiklamanin baglaminda Denosumab, RANKL'ye baglanan ve bunun aktivasyonunu önleyen (RANK reseptörüne baglanmamaktadir) bir monoklonal antikordur. Denosumab'in çesitli yönleri Bir baska yönde RANKL inhibitörü, Denosumab ile ayni epitopu baglayan bir antikor, antikor fragmani veya füzyon yapisidir. nanobody'lerden herhangi biridir. Yine daha çok tercih edilen bir yönde anti-RANKL antikoru ALX-0141'dir (Ablynx). ALX-0141, menopoz sonrasi osteoporoz, romatoid artrit, kanser ve belirli ilaçlarla iliskilendirilmis kemik kaybini inhibe etmek ve saglikli kemik metabolizmasi dengesini yeniden saglamak üzere tasarlanmistir.
Tercih edilen bir yönde kemik yikimini önleyen madde, bir bifosfonat, bir RANKL inhibitörü, PTH ve PTHLH inhibitörü veya bir PRG analogu, stronsiyum ranelat, bir DKK- 1 inhibitörü, bir çift MET ve VEGFR2 inhibitörü, bir östrojen reseptör modülatörü, Radyum-223 kalsitonin ve bir katepsin K inhibitöründen olusan gruptan seçilmektedir.
Daha çok tercih edilen bir yönde, kemik yikimini önleyen madde bir bifosfonattir. Yine daha çok tercih edilen bir yönde bifosfonat, zoledronik asittir.
Bir yönde bir CCR5 antagonisti, primer akciger kanseri tümörünün kemige metastazini önlemek veya inhibe etmek üzere uygulanmaktadir. Bir yönde CCR5 antagonisti, büyük bir moleküldür. Bir baska yönde CCR5 antagonisti, küçük bir moleküldür. Bazi yönlerinde CCR5 antagonisti, Maraviroc'tur (Velasco-Velâquez, M. ve ark. 2012. CCR5 Antagonist Blocks Metastasis of Basal Breast Cancer Cells. Cancer Research. 72:3839- 3850). Bazi yönlerde CCR5 antagonisti, Vicriviroc'tur (Velasco-Veléquez, M. ve ark. 2012. CCR5 Antagonist Blocks Metastasis of Basal Breast Cancer Cells. Cancer ve ark. 2005. Update on Aplaviroc: An HIV Entry Inhibitor Targeting CCR5.
Retrovirology 2(Suppl. 1): 513). Bazi yönlerde CCR5 antagonisti, bir spiropiperidin CCR5 antagonistidir. (Rotstein D.M. ve ark. 2009. Spiropiperidine CCR5 antagonists. antagonisti, INCBOO9471'dir (Kuritzkes, D.R. 2009. HIV-1 entry inhibitors: an overview.
Curr. Opin. HIV AIDS. 4(2): 82-7).
Tercih edilen bir yönde çift MET ve VEGFR2 inhibitörü, Cabozantinib, Foretinib ve E7050'den olusan gruptan seçilmektedir.
Bir baska yönde tedavi bir mTor inhibitörüdür. Bazi yönlerde mTor inhibitörü, bir çift mTor/PI3kinaz inhibitörüdür. Bazi yönlerde mTor inhibitörü metastazi önlemek veya inhibe etmek için kullanilmaktadir. Bazi yönlerde mTor inhibitörü asagidakilerden olusan gruptan seçilmektedir: ABIOOQ (sirolimus), rapamisin (sirolimus), Abraxane (paklitaksel), Absorb (everolimus), Afinitor (everolimus), Afinitor with Gleevec, (umirolimus), BioMatrix (umirolimus), BioMatrix flex (umirolimus), CC115, CC223, Combo Bio-engineered Sirolimus Kapli Stent ORBUSNEICH (sirolimus), Curaxin Endeavor Resolute (zotarolimus), Femara (letrozol), Hocena (antrokuinonol), INK128, MGAO31 (teplizumab), MiStent SES (sirolimus), MKCl, Nobori (umirolimus), 051027, SF, Taltorvic (ridaforolimus), Tarceva (erlotinib), Torisel (temsirolimus), Xience Prime (everolimus), Xience V (everolimus), Zomaxx (zotarolimus), Zortress (everolimus), Zotarolimus Kapli NV, 582602, Sirolimus PNP SAMYANG Advacan (everolimus), AZD8055, Cypher Select Plus Sirolimus kapli Koroner Stent (sirolimus), Cypher Sirolimus kapli koroner stent (sirolimus), Ilaç Kapli Balon (sirolimus), E-Magic Plus (sirolimus), Emtor (sirolimus), Esprit (everolimus), Evertor (everolimus), HBF, mTOR Inhibitor CELLZOME, Nevo Sirolimus kapli Koroner Stent (sirolimus), nPT-mTOR, Rapacan (sirolimus), Renacept (sirolimus), ReZoIve (sirolimus), Rocas (sirolimus), SF1126, Sirolim (sirolimus), Sirolimus NORTH CHINA (sirolimus), Sirolimus RANBAXY (sirolimus), Sirolimus WATSON (Sirolimus) Siropan (sirolimus), Sirova (sirolimus), Supralimus (sirolimus), Supralimus-Core (sirolimus), Tacrolimus WATSON (takrolimus), TAFA93, Temsirolimus ACCORD (temsirolimus), Temsirolimus SANDOZ (temsirolimus), TOP216, Xience Prime (everolimus), Xience V (everolimus). Spesifik bir yönde mTor inhibitörü Afinitor'dur (everolimus) bilinen yöntemlerle tanimlanabilmektedir. (Bkz. örn. Zhou, H. ve ark. Updates of mTor inhibitörü, ileri akciger kanseri olan bir hastada metastazi tedavi etmek veya önlemek veya inhibe etmek için kullanilmaktadir. Bazi yönlerde mTor inhibitörü, ikinci bir tedavi ile kombinasyon halinde kullanilmaktadir. Bazi yönlerde ikinci tedavi, burada açiklanan herhangi bir tedavidir.
Bir baska yönde tedavi bir Src kinaz inhibitörüdür. Bazi yönlerde Src inhibitörü metastazi Önlemek veya inhibe etmek Için kullanilmaktadir. Bazi yönlerde Src kinaz inhibitörü su gruptan seçilmektedir: AZD0530 (sarakatinib), Bosulif (bosutinib), SRNOO4, SUNK, Dasatinib VALEANT (dasatinib), Fontrax (dasatinib), Src Kinaz Inhibitörü KINEX, VX680,(tozasertib laktat), XL228 ve SUNK706. Bazi yönlerde Src kinaz inhibitörü dasatinib'dir. Bir baska yönde Src kinaz inhibitörleri alanda bilinen yöntemlerle tanimlanabilmektedir (bkz. örn. Sen, B. and Johnson, F.M. Regulation of Src Family yönlerde Src kinaz inhibitörü, SRC responsif imza (SRS) için pozitif olan bir hastada metastazi tedavi etmek veya önlemek veya inhibe etmek için kullanilmaktadir. Bazi yönlerinde hasta SRS+'tir. (Bkz. örn. Zhang, CH.-F, ve ark. Latent Bone Metastasis in Bazi yönlerde Src kinaz inhibitörü, ileri akciger kanseri olan bir hastada metastazi tedavi etmek veya önlemek veya inhibe etmek için kullanilmaktadir. Bazi yönlerde Src kinaz inhibitörü, ikinci bir tedavi ile kombinasyon halinde kullanilmaktadir. Bazi yönlerde ikinci tedavi, burada açiklanan herhangi bir tedavidir.
Bir baska yönde tedavi bir COX-2 inhibitörüdür. Bazi yönlerde COX-2 inhibitörü, metastazi önlemek veya inhibe etmek için kullanilmaktadir. Bazi yönlerde COX-2 inhibitörü su gruptan seçilmektedir: ABT963, Acetaminophen ER JOHNSON (difenhidramin, naproksen sodyum), BAYI, Capoxigem (aprikoksib), CSSOZ, C, Diractin (ketoprofen), GW, Hyanalgese-D (diklofenak), HydrocoDex (asetaminofen, dekstrometorfan, hidrokodon), Ibuprofen Sodium PFIZER (ibuprofen sodyum), Acetaminophen PFIZER ile Ibuprofen (asetaminofen, ibuprofen), Impracor (ketoprofen), IP880 (diklofenak), IP940 (indometasin), ISV205 (diklofenak sodyum), JNSOl3 (asetaminofen, tramadol hidroklorür), Ketoprofen TDS (ketoprofen), LTNSOOl (naproksen etemesil), Mesalamine SALIX (mezalamin), Mesalamine SOFAR (mezalamin), Mesalazine (mezalamin), ML3000 (likofelon), MRX7EAT (etodolak), Naproxen IROKO (naproksen), NCX4016 (nitroaspirin), NCX, OM5103HP (amitriptilin hidroklorür, ketoprofen, oksimetazolin hidroklorür), Oralease (diklofenak), OxycoDex (dekstrometorfan, oksikodon), P54, PercoDex (asetaminofen, dekstrometorfan, oksikodon), PL3100 (naproksen, fosfatidil kolin), PSD508, R- Ketoprofen (ketoprofen), Remura (bromfenak sodyum), ROX828 (ketorolak trometamin), RP, TDS943 (diklofenak sodyum), TDT, 'I'I'063 (S- propranolol), XPZOB (asetaminofen, dekstropropoksifen), XPZIB (diklofenak potasyum), XP21L (diklofenak potasyum), Zoenasa (asetilsistein, mezalamin), Acephen, Actifed Plus, Actifed-P, Acular, Acular LS, Acular PF, Acular X, Acuvail, Advil, Advil Allergy Sinus, Advil Cold and Sinus, Advil Congestion Relief, Advil PM, Advil PM Kapsül, Air Salonpas, Airtal, AIcohol-Free NyQuil Cold & Flu Relief, Aleve, Aleve ABDI IBRAHIM, Aleve-D, AIka-Seltzer, AIka-Seltzer BAYER, AIka-Seltzer Extra Strength, AIka-Seltzer Lemon-Lime, Alka-Seltzer Original, AIka-Seltzer Plus, Alka-Seltzer plus Cold and Cough, Alka-Seltzer plus Cold and Cough Formula, Alka-Seltzer Plus Day and Night Cold Formula,, AIka-Seltzer Plus Day Non-Drowsy Cold Formula, Alka-Seltzer Plus FIu Formula, AIka-Seltzer Plus Night Cold Formula, AIka-Seltzer Plus Sinus Formula, Alka- Seltzer Plus Sparkling Original Cold Formula, AIka-Seltzer PM, AIka-Seltzer Wake-Up Call, Anacin, Anaprox, Anaprox MINERVA, Ansaid, Apitoxin, Apranax, Apranax abdi, Arcoxia, Arthritis Formula Bengay, Arthrotec, Asacol, Asacol HD, Asacol MEDUNA ARZNEIMI'I'I'EL, Asacol ORIFARM, Aspirin BAYER, Aspirin Complex, Aspirin Migran, Benadryl Allergy, Benadryl Day and Night, Benylin 4 Flu, Benylin Cold and Flu, Benylin Cold and Flu Day and Night, Benylin Cold and Sinus Day and Night, Benylin Cold and Sinus Plus, Benylin Day and Night Cold and Flu Relief, Benylinl AII-In-One, Brexin, Brexin ANGELINI, Bromday, Bufferin, Buscopan Plus, Caldolor, Calmatel, Cambia, Canasa, Capoxigem, Cataflam, Celebrex, Celebrex ORIFARM, Children's Advil Allergy Sinus, Children's Tylenol, Children's Tylenol Cough and Runny Nose, Children's Tylenol plus cold, Children's Tylenol plus Cold and Cough, Children's Tylenol plus cold and stuffy nose, Children's Tylenol plus Flu, Children's Tylenol plus cold & allergy, Children's Tylenol plus Cough & Runny Nose, Children's Tylenol plus Cough & Sore Throat, Children's Tylenol plus multi symptom cold, Clinoril, Codral Cold and Flu, Codral Day and Night Day Tablets, Codral Day and Night Night Tablets, Codral Nightime, Colazal, Combunox, Contac Cold plus Flu, Contac Cold plus Flu Non-Drowsy, Coricidin D, Coricidin HBP Cold and Flu, Coricidin HBP Day and Night Multi-Symptom Cold, Coricidin HBP Maximum Strength Flu, Coricidin HBP Nighttime Multi-Symptom Cold, Coricidin II Extra Strength Cold and Flu, CSSOZ, C5670, Daypro, Daypro Alta, DDSOGC, Demazin Cold and Flu, Demazin Cough, Cold and Flu, Demazin day/night Cold and Flu, Demazin PE Cold and Flu, Demazin PE day/night Cold and Flu, Diclofenac HPBCD, Dimetapp Day Relief, Dimetapp Multi-Symptom Cold and Flu, Dimetapp Night Relief, Dimetapp Pain and Fever Relief, Dimetapp PE Sinus Pain, Dimetapp PE Sinus Pain plus Allergy, Dipentum, Diractin, Disprin Cold 'n' Fever, Disprin Extra, Disprin Forte. Disprin Plus, Dristan Cold, Dristan Junior, Drixoral Plus, Duexis, Dynastat, Efferalgan, Efferalgan Plus Vitamin C, Efferalgan Vitamin C, Elixsure IB, Excedrin Back and Body, Excedrin Migraine, Excedrin PM, Excedrin Sinus Headache, Excedrin Tension Headache, Falcol, Fansamac, Feldene, FeverAll, Fiorinal, Fiorinal with Codeine, Flanax, Flector Patch, Flucam, Fortagesic, Gerbin, Giazo, Gladio, Goody's Back and Body Pain, Goody's Cool Orange, Goody's Extra Strength, Goody's PM, Greaseless Bengay, GW406381, HCT1026, He Xing Yi, Hyanalgese-D, HydrocoDex, Ibuprofen Sodium PFIZER, Acetaminophen PFIZER ile Ibuprofen, Icy Hot SANOFI AVENTIS, Impracor, Indocin, Motrin, Ketoprofen TDS, Lemsip Max, Lemsip Max All in One, Lemsip Max All Night, Lemsip Max Cold and Flu, Lialda, Listerine Mouth Wash, Lloyds Cream, Lodine, Lorfit P, Loxonin, LTNSOOl, Mersyndol, Mesalamine SALIX, Mesalamine SOFAR, Mesalazine, Mesasal GLAXO, Mesasal SANOFI, Mesulid, Metsal Heat Rub, Midol Complete, Midol Extended Relief, Midol Liquid Gels, Midol PM, Midol Teen Formula, Migranin COATED TABLETS, ML3000, Mobic, Mohrus, Motrin, Motrin Cold and Sinus Pain, Motrin PM, Movalis ASPEN, MRX7EAT, Nalfon, Nalfon PEDINOL, Naprelan, Naprosyn, Naprosyn RPG LIFE SCIENCE, Naproxen IROKO, NCX4016, NCX701, NeoProfen LUNDBECK, Nevanac, Nexcede, Niflan, Norgesic MEDICIS, Novalgin, Nuprin SCOLR, Nurofen, Nurofen Cold and Flu, Nurofen Max Strength Migraine, Nurofen Plus, Nuromol, NyQuil with Vitamin C, Ocufen, OMSlO3HP, Oralease, Orudis ABBOTI' JAPAN, Oruvail, Osteluc, OxycoDex, PS4, Panadol, Panadol Actifast, Paradine, Paramax, Parfenac, Pedea, Pennsaid, Pentasa, Pentasa ORIFARM, Peon, Percodan, Percodan-Demi, PercoDex, Ketoprofen, Rantudil, Relafen, Remura, Robaxisal, Rotec, Rowasa, ROX828, RP19583, RQOO317076, Rubor, Salofalk, Salonpas, Saridon, SDX101, Seltouch, szowasa, Shinbaro, Sinumax, Sinutab, Sinutab,, sinus, Spalt, Sprix, Strefen, Sudafed Cold and Cough, Sudafed Head Cold and Sinus, Sudafed PE Cold plus Cough, Sudafed PE Pressure plus Pain, Sudafed PE, Severe Cold, Sudafed PE Sinus Day plus Night Relief Day Tablets, Sudafed PE Sinus Day plus Night Relief Night Tablets, Sudafed PE Sinus plus Anti-inflammatory Pain Relief, Sudafed Sinus Advance, Surgam, Synalgos-DC, Synflex, Tavist allergy/sinus/headache, TD8943, TDT070, Theraflu Cold and Sore Throat, Theraflu Daytime Severe Cold and Cough, Theraflu Daytime Warming Relief,Theraflu Warming Relief Caplets Daytime Multi-Symptom Cold, Theraflu Warming Relief Cold and Chest Congestion, Thomapyrin, Thomapyrin C, Thomapyrin Effervescent, Thomapyrin Medium, Tilcotil, Tispol, Tolectin, Toradol, TPR100, TQ1011, Trauma-Salbe, Trauma-Salbe Kwizda, Treo, Treximet, Trovex, `IT063, Tylenol, Tylenol Allergy Multi-Symptom, Tylenol Back Pain, Tylenol Cold & Cough Daytime, Tylenol Cold Tylenol Cold Head Congestion Severe, Tylenol Cold Multi Symptom Daytime, Tylenol Cold Multi Symptom Nighttime Liquid, Tylenol Cold Multi Symptom Severe, Tylenol Cold Non-Drowsiness Formula, Tylenol Cold Severe Congestion Daytime, Tylenol Complete Cold, Cough and Flu Night time, Tylenol Flu Nighttime, Tylenol Menstrual, Tylenol PM, Tylenol Sinus Congestion & Pain Daytime, Tylenol Sinus Congestion & Pain Nighttime, Tylenol Sinus Congestion & Pain Severe, Tylenol Sinus Severe Congestion Daytime, Tylenol Ultra Relief, Tylenol with Caffeine and Codeine phosphate, Tylenol with Vicks NyQuil Cold and Flu Relief, Vicoprofen, Vimovo, Voltaren Emulgel, Voltaren GEL, Voltaren NOVARTIS CONSUMER HEALTH GMBH, Voltaren XR, VT122, Xefo, Xefo Rapid, Xefocam, Xibrom, XL3, Xodol, XPZOB, XPZIB, XP21L, Zipsor ve Zoenasa. Bir baska yönde COX-2 inhibitörleri, alanda bilinen yöntemlerle tanimlanabilmektedir (bkz. örn.
Dannhardt, G. and Kiefer, W. Cyclooxygenase inhibitors- current status and future akciger kanseri olan bir hastada metastazi tedavi etmek veya önlemek veya inhibe etmek için kullanilmaktadir. Bazi yönlerde COX-2 inhibitörü, ikinci bir tedavi ile kombinasyon halinde kullanilmaktadir. Bazi yönlerde ikinci tedavi, burada açiklanan herhangi bir tedavidir. Bazi yönlerinde COX-2 inhibitörü, asagidakilerden olusan gruptan seçilen ikinci bir tedavi ile kombinasyon halinde kullanilmaktadir: Denosumab, Zometa (http://www.us.zometa.com/index.jsp?usertrack.filter_applied=true&N0vaId=2935376 veya peptid bloke edici PTHLH (paratiroid hormon benzeri hormon) veya PTHrP (paratiroid hormonu baglantili protein).
Tercih edilen bir yönde Radium 223 terapisi Alpharadin'dir (yani Xofigo) (radyum-223 diklorür). Alpharadin, kanser hücrelerini öldürmek için radyum-223 çürümesinden alfa radyasyonunu kullanmaktadir. Radium-223, kalsiyum taklidi özellikleri sayesinde kemik metastazini dogal olarak kendiliginden hedef almaktadir. Alfa radyasyonunun (beta veya gamma radyasyonunu temel alan mevcut radyasyon terapisine kiyasla) 2-10 hücrelik çok kisa bir menzili vardir ve bu nedenle çevredeki saglikli dokulara (özellikle kemik iligine) daha az zarar vermektedir. Kalsiyuma benzer özellikleri olan radyum-223, kalsiyumun ileri, kastrasyona dirençli prostat kanseri olan erkeklerin iskeletsel metastazinda görüldügü gibi daha hizli ve anormal kemik büyümesi bölgesi dahil olmak üzere vücutta kemik olusumu için kullanildigi yerlere çekilmektedir. Radyum-223, enjeksiyondan sonra, kan dolasimiyla anormal kemik büyümesi bölgelerine tasinmaktadir. Bir kanserin vücutta basladigi yer, primer tümör olarak bilinmektedir. Bu hücrelerden bazilari kopabilmekte ve kan dolasimiyla vücudun farkli bir bölümüne tasinabilmektedir. Ardindan kanser hücreleri vücudun bu bölümüne yerleserek yeni bir tümör olusturabilmektedir. Bu durumun ortaya çikmasi, sekonder kanser veya metastaz olarak adlandirilmaktadir. Ileri evre prostat kanseri olan çogu hasta, hastaligin maksimum yükünü kemiklerinde yasamaktadirlar. Radyum-223 ile amaç, bu sekonder kanseri selektif olarak hedef almaktir. Kemiklerin almadigi herhangi bir radyum-223 hizla bagirsaklara yönlendirilip atilmaktadir. Tercih edilen bir yönde, kemik yikimini önleyen madde bir bifosfonattir. Yine daha çok tercih edilen bir yönde bifosfonat, zoledronik asittir.
Alternatif olarak yukarida bahsedilenler arasindan birden fazla maddenin metastazi tedavi etmek ve/veya önlemek için kombine edildigi ya da söz konusu maddelerin kalsiyum veya D vitamini gibi diger takviyelerle veya bir hormon tedavisiyle kombine edilebilecegi sekilde bir komine tedavi yürütülebilmektedir. c-MAF geninin amplifikasyonunu saptamava dayanan akcigg kanserinde metastaz tanisi veva prognozu vöntemi Bir yönünde bulus, c-MAF geninin söz konusu denegin bir tümör dokusu numunesinde amplifiye olup olmadiginin belirlenmesini içeren, akciger kanserli bir denekte metastaz tanisi ve/veya akciger kanserli bir denekte metastaz görülme egiliminin prognozu için bir in vitro yöntemle (asagida bulusun besinci tani yöntemi olarak anilacaktir) ilgilidir, burada, eger söz konusu gen bir kontrol numunesine göre amplifiye olmussa, söz konusu denegin pozitif bir metastaz tanisi veya daha büyük bir metastaz gelistirme egilimi vardir, burada c-MAF geninin amplifikasyonu, Iokus 16q22-q24'ün amplifikasyonunun belirlenmesi yoluyla belirlenmektedir. Özel bir uygulamada bulusun dördüncü yönteminde tanisi koyulan akciger kanseri NSCLC'dir. denekte metastaz tanisi”, “akciger kanserli bir denekte metastaz görülme egiliminin prognozu”, "denek", "hasta", “pozitif metastaz tanisi olan denek”, "daha büyük bir metastaz gelistirme egilimi olan denek” açiklanan birinci yöntem baglaminda ayrintili olarak açiklanmistir ve bulusun besinci yöntemine esit ölçüde uygulanabilirdir. c-MAF geninin amplifikasyon derecesi, söz konusu geni içeren bir kromozom bölgesinin amplifikasyonunun belirlenmesi yoluyla belirlenmektedir. Amplifikasyonunun, c-MAF geninin amplifikasyonunun varligina isaret ettigi kromozom bölgesi, c-MAF genini içeren uzun kolunda ve bant 22-bant 24 arasinda yer almaktadir. Bu bölge, NCBI tercih edilen uygulamada c-MAF geninin amplifikasyon derecesi, söz konusu gen için spesifik bir probun kullanilmasiyla belirlenebilmektedir.
Bulusun besinci tani/prognoz yöntemi, birinci adimda c-MAF geninin bir denegin tümör numunesinde amplifiye olup olmadiginin belirlenmesini içermektedir. Bu amaçla tümör numunesindeki c-MAF geninin amplifikasyonu, bir kontrol numunesiyle karsilastirilmaktadir. fragmaninin çesitli kopyalarinin bir bagimsiz hücrede veya hücre hattinda olusturuldugu bir sürece atifta bulunmaktadir. Gen kopyalarinin ayni kromozomda bulunmasi sart degildir. Kopyalanan bölge genellikle “amplikon” olarak anilmaktadir. Normalde üretilen mRNA miktari, yani gen ekspresyon seviyesi özel bir genin kopya sayisina orantili olarak artmaktadir. Özel bir uygulamada bulus, akciger kanserli bir denekte metastaz tanisi ve/veya akciger kanserli bir denekte metastaz görülme egiliminin prognozu için bir in vitro yöntemle ilgilidir ve yöntem söz konusu denege ait bir tümör numunesindeki c-MAF geni kopya sayisinin belirlenmesini ve söz konusu kopya sayisinin bir kontrol veya referans numunesinin kopya sayisiyla karsilastirilmasini içermektedir, burada eger c-MAF kopya sayisi bir kontrol numunesinin c-MAF kopya sayisina göre daha büyükse, denegin pozitif bir metastaz tanisi veya daha büyük bir metastaz görülme egilimi vardir.
Kontrol numunesi, metastaz yapmamis akciger kanserli bir denegin tümör numunesi ya da metastaz yapmamis akciger kanserli deneklerin biyopsi numunelerinde bir tümör dokusu koleksiyonunda ölçülmüs c-MAF geni kopya sayisinin medyan degerine karsilik gelen tümör numunesine atifta bulunmaktadir. Söz konusu referans numunesi tipik olarak bir denek popülasyonundan esit miktarda numunenin komine edilmesiyle elde edilmektedir. Eger c-MAF geni kopya sayisi, söz konusu genin kontrol numunesindeki kopya sayisina göre artmissa, denegin pozitif bir metastaz tanisi veya daha büyük bir metastaz görülme egilimi vardir.
Burada kullanilan sekliyle “gen kopya sayisi” terimi, bir hücredeki bir nükleik asit molekülünün kopya sayisina atifta bulunmaktadir. Gen kopya sayisi, bir hücrenin genomik (kromozomal) DNA'sindaki gen kopya sayisini içermektedir. Normal bir hücrede (tümörlü olmayan hücre) gen kopya sayisi normalde iki kopyadir (kromozom çiftinin her üyesinde bir kopya). Gen kopya sayisi bazen bir hücre popülasyonunun numunelerinden alinmis gen kopya sayisinin yarisini içermektedir.
Mevcut bulusta “artan gen kopya sayisi", c-MAF gen kopya sayisinin bir referans numunesinin veya kontrol numunesinin sahip oldugu kopya sayisindan daha fazla olmasi seklinde anlasilmaktadir. Özellikle kopya sayisi c-MAF geninin 2 kopyasindan oldugunda bir numunenin artmis c-MAF kopya sayisi oldugu düsünülebilir.
Bazi yönlerde amplifikasyon 16q23 Iokusundaki bölgededir. Bazi uygulamalarda (sentromerden telomere) arasindaki kromozomal bölgenin herhangi bir kismindadir.
Bazi yönlerde amplifikasyon, DNA tekrarlayan elemanlari hariç yaklasik Kr. 16 - yönlerde amplifikasyon, bu bölge için spesifik bir prob kullanilarak ölçülmektedir. Özel bir uygulamada amplifikasyon veya kopya sayisi in s/tu hibridizasyon veya PCR araciligiyla belirlenmektedir. c-MAF geninin veya kromozom bölgesi 16q22-q24'ün amplifiye olup olmadigini belirlemeye yönelik yöntemler alanda yaygin olarak bilinmektedir. Söz konusu yöntemler arasinda /n situ hibridizasyon (ISH) (mesela floresan in s/tu hibridizasyon (FISH)), kromojenik in s/tu hibridizasyon (CISH) veya gümüs in situ hibridizasyon (SISH), genomik karsilastirilmali hibridizasyon veya polimeraz zincir reaksiyonu (mesela gerçek zamanli kantitatif PCR) yer almakla birlikte bunlarla sinirli degildir. Herhangi bir floresan noktalarin, renkli noktalarin veya gümüslü noktalarin sayisinin sayilmasi yoluyla belirlenebilmektedir.
Floresan in s/tu hibridizasyon (FISH) kromozomlarda spesifik DNA sekanslarinin varligini veya yoklugunu saptamak ve yerini belirlemek için kullanilan bir sitogenetik tekniktir.
FISH, yalnizca yüksek derecede sekans benzerligi gösterdikleri belirli kromozom parçalarina baglanan floresan problari kullanmaktadir. Tipik bir FISH yönteminde DNA probu, çentik (nick) translasyonu veya PCR gibi enzimatik reaksiyonlari kullanarak DNA'ya dahil edilen genellikle flor-dUTP, digoksijenin-dUTP, biotin-dUTP veya hapten- dUTP formunda olan bir hapten veya floresan molekülüyle etiketlenmektedir. Genetik malzemeyi (kromozom) içeren numune, cam slaytlar üzerine yerlestirilmektedir ve bir formamid islemiyle denatüre edilmektedir. Bunun üzerine etiketlenmis prob, alanda uzman kisi tarafindan belirlenecek uygun kosullarda genetik malzemeyi Içeren numuneyle hibridize edilmektedir. Hibridizasyon Islemi sonrasinda numuneye ya dogrudan (florinle etiketlenmis prob durumunda) ya da dolayli olarak (hapteni saptamak için floresanla etiketlenmis antikorlari kullanarak) bakilmaktadir.
CISH durumunda prob, digoksijenin, biotin veya floresinle etiketlenmektedir ve genetik malzemeyi içeren numuneyle uygun kosullarda hibridize edilmektedir.
Bir DNA'ya baglanabilecek olan herhangi bir isaretleme veya etiketleme molekülü, bulusun besinci yönteminde kullanilan probu etiketlemek, böylece nükleik asit moleküllerinin saptanmasina imkan vermek için kullanilabilmektedir. Etiketlemeye yönelik etiketlerin örnekleri arasinda radyoaktif izotoplar, enzim substratlari, kofaktörler, ligandlar, kemilüminesans maddeleri, floroforlar, haptenler, enzimler ve bunlarin kombinasyonlari yer almakla birlikte bunlarla sinirli degildir. Etiketleme yöntemleri ve farkli amaçlara uygun etiketleri seçme kilavuzu örnegin Sambrook ve arkadaslari (Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, New York, 1989) ve Ausubel ve arkadaslari (In Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, New York, 1998) kaynaklarinda bulunabilmektedir.
Ya dogrudan c-MAF geninin amplifikasyonunun belirlenmesiyle ya da lokus 16q22- q24'ün amplifikasyonunun belirlenmesiyle amplifikasyon varligi belirlendikten sonra ve söz konusu genin kontrol numunesinde amplifikasyonuyla karsilastirilmasindan sonra eger c-MAF geninde amplifikasyon saptanirsa, denegin pozitif bir metastaz tanisinin veya daha büyük bir metastaz görülme egiliminin olduguna isaret etmektedir.
C-MAF geni amplifikasyonunun saptanmasinin, metastaz yapmamis akciger kanserli bir denegin bir tümör dokusu numunesinde ölçülmüs c-MAF geninin amplifikasyon seviyesine karsilik gelen ya da metastaz yapmamis akciger kanserli deneklerin biyopsi numunelerinde bir tümör dokusu koleksiyonunda ölçülmüs c-MAF geninin amplifikasyonunun medyan degerine karsilik gelen bir kontrol numunesinin veya referans numunesinin degerleriyle iliskilendirilmesi gerekmektedir. Söz konusu referans numunesi tipik olarak bir denek popülasyonundan esit miktarda numunenin komine edilmesiyle elde edilmektedir. Tipik referans numuneleri genel olarak klinik olarak iyi belgelendirilmis ve metastaz olmadigi iyi karakterize edilmis deneklerden elde edilecektir. Referans seviyesinin türetildigi numune koleksiyonu tercihen çalismanin (örn. NSCLC) hasta hedefi olarak ayni kanser türünden muzdarip deneklerden olusturulacaktir. Bu medyan deger saptandiktan sonra hastalarin tümör dokularindaki c-MAF amplifikasyon seviyesi, bu medyan degerle karsilastirilabilmektedir ve dolayisiyla eger amplifikasyon mevcutsa, denegin pozitif bir metastaz tanisi veya daha büyük bir metastaz gelistirme egilimi vardir.
Tercih edilen bir uygulamada metastaz, kemik metastazidir. Daha çok tercih edilen bir uygulamada, kemik metastazi osteolitik kemik metastazdir. Burada kullanilan sekliyle progresif kaybi) tümör hücrelerinin osteoklast aktivitesinin simülasyonundan ortaya çikan metastazin proksimitesinde olustugu ve sinir sikismasindan dolayi siddetli agri, patolojik fraktürler, hiperkalsemi, omurilik sikismasi ve sinir sikismasindan kaynaklanan diger sendromlar ile karakterize edilen bir metastaz türüne atifta bulunmaktadir. c-MAF geninin translokasyonunu sagtamaya dayanan akciger kanserinde metastaz prognozu yöntemi Bir baska yönde c-MAF geninin söz konusu denegin bir numunesinde transloke olup olmadiginin belirlenmesini içeren, burada c-MAF geninin translokasyonu yetersiz klinik sonuca isaret etmektedir, akciger kanserli bir hastanin klinik sonucunu kestirmek için bir in vitro yöntem açiklanmaktadir.
Bir baska yönde c-MAF geninin söz konusu denegin bir numunesinde transloke olup olmadiginin belirlenmesini içeren, burada c-MAF geninin translokasyonu yetersiz klinik sonuca isaret etmektedir, akciger kanserli bir hastanin klinik sonucunu kestirmek için bir in vitro yöntem açiklanmaktadir.
Bazi yönlerde transloke olmus gen 16q23 Iokusundaki bölgedendir. Bazi yönlerde bp (sentromerden telomere) arasindaki kromozomal bölgenin herhangi bir kismindandir. Bazi yönlerde transloke olmus gen, DNA tekrarlayan elemanlari hariç bölgedendir. Bazi yönlerde translokasyon bu bölge için spesifik bir prob kullanilarak ölçülmektedir. Özel bir yönde c-MAF geninin translokasyonu, söz konusu geni içeren bir kromozom bölgesinin translokasyonunun belirlenmesiyle saptanabilmektedir. Bir yönde translokasyon, t(14,16) translokasyonudur. Bir baska yönde transloke olan kromozom kromozomun uzun kolunda ve bant 22-bant 24 arasinda yer almaktadir. Bu bölge, Tercih edilen bir yönde c-MAF geni, Iokus 14q32'deki kromozom 14'e transloke olarak, translokasyon t(14,16)(q32,q23)'e yol açmaktadir. Bu translokasyon MAF genini IgH asiri ekspresyonuna yol açmaktadir (Eychéne, A., Rocques, N., and Puoponnot, C., A Tercih edilen bir yönde c-MAF geninin translokasyonu, söz konusu translokasyon için spesifik bir probun kullanilmasiyla belirlenebilmektedir. Bazi yönlerde translokasyon iki renkli bir prob kullanilarak ölçülmektedir. Bazi yönlerde translokasyon bir çift füzyon probu kullanilarak ölçülmektedir. Bazi yönlerde translokasyon iki renkli, çift füzyon probu kullanilarak ölçülmektedir. Bazi yönlerde translokasyon iki ayri prob kullanilarak ölçülmektedir.
Bir baska tercih edilen yönde c-MAF geninin translokasyonu, 14q32 ve 16q23'e karsi bir prob içeren Vysis LSI IGH/MAF Iki Renkli, çift füzyon probu (http://www.abbottmolecuIar.c0m/us/products/anaIyte-specific-reagent/fish/vysis-Isi- igh-maf-duaI-c0l0r-dual-fusion-probe.html; son erisim tarihi 11/5/2012) kullanilarak belirlenmektedir. Bir baska tercih edilen uygulamada c-MAF geninin translokasyonu, Kreatech diagnostics MAF/IGH gt(14;16) Füzyon probu (http://www.kreatech.c0m/products/repeat-freetm-poseidontm-ûsh- Abnova MAF FISH probu (http://www.abn0va.com/products/products_detaiI.asp?Catalog_id:FA0375; son erisim tarihi 11/5/2012), Cancer Genetics Italia IGH/MAF Iki Renkli, Iki Füzyonlu translokasyon probu (http://www.cancergeneticsitalia.com/dna-fish-probe/ighmaf/; son erisim tarihi FISH probu (http://www.creative-bioarray.com/products.asp?cid=35&page=10; son erisim tarihi 11/5/2012), FISH ile bir Arup Laboratories multipl miyelom paneli (http://www.aruplab.com/f`iles/technical- ou ntry; son erisim tarihi 11/5/2012), bir Cytocell IGH/MAF Translokasyon, Iki Füzyonlu (http://www.zentech.be/uploads/docs/products_inf0/prenatalogy/cytocelI%202012- international.com/index.php?opti0n:com_joodb&view:article&j00base=5&id=12%3Ad 100i.il, IGH /MAFB (https://www.micro- Genycell Biotech IGH/MAF Iki Füzyonlu Prob (http://www.google.com/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=1&ved=0CCQQ FjAA&urI=http%3A%2F%2Fwww.genycell.es%2Fimages%2Fpr0ductos%2Fbr0chures QGjJbi9riEf31VgoFTFQ&sigZ=VSIS8juEMVHBlBMvZXx_Ww; son erisim tarihi 11/5/2012) kullanilarak belirlenmektedir.
Bazi yönlerde prob üzerindeki etiket florofordur. Bazi yönlerde prob üzerindeki florofor turuncudur. Bazi yönlerde prob üzerindeki florofor yesildir. Bazi yönlerde prob üzerindeki florofor kirmizidir. Bazi durumlarda prob üzerindeki florofor saridir. Bazi yönlerde bir prob, bir kirmizi floroforla ve bir prob bir yesil floroforla etiketlenmektedir.
Bazi yönlerde bir prob, bir yesil floroforla ve bir prob bir turuncu floroforla etiketlenmektedir. Bazi durumlarda prob üzerindeki florofor saridir. Örnegin MAF spesifik prob bir kirmizi floroforla ve IGH spesifik prob bir yesil floroforla etiketlenmektedir; beyaz görülürse sinyallerin örtüstügüne ve translokasyonun gerçeklestigine isaret etmektedir.
Bazi yönlerde florofor SpectrumOrange'dir. Bazi yönlerde florofor SpectrumGreen'dir.
Bazi yönlerde florofor DAPI'dir. Bazi yönlerde florofor PIatinumBright405'tir. Bazi yönlerde florofor PlatinumBright415'tir. Bazi yönlerde florofor PlatinumBright495'tir.
Bazi yönlerde florofor PlatinumBrightSOS'tir. Bazi yönlerde florofor PIatinumBrightSSO'dir. Bazi yönlerde florofor PIatinumBright547'dir. Bazi yönlerde florofor PlatinumBright570'tir. Bazi yönlerde florofor PIatinumBright590'dir. Bazi yönlerde florofor PIatinumBright647'dir. Bazi yönlerde florofor yönlerde florofor DAPI/PlatinumBright495/550'dir. Bazi yönlerde florofor FITC'dir. Bazi yönlerde florofor Texas Red'dir. Bazi yönlerde florofor DEAC'tir. Bazi yönlerde florofor R6G'dir. Bazi yönlerde florofor Cy5'tir. Bazi yönlerde florofor FITC, Texas Red ve DAPI'dir. Bazi yönlerde bir DAPI karsi boyamasi, translokasyonu, amplifikasyonu veya kopya sayisi degisikligini görsellestirmek için kullanilmaktadir.
Açiklamanin bir yönü, birinci adimda c-MAF geninin bir denegin bir numunesinde transloke olup olmadiginin belirlendigi bir yöntemi içermektedir. Tercih edilen bir yönde numune bir tümör dokusu numunesidir. Özel bir yönde akciger kanserli bir denekte kemik metastazi görülme egiliminin prognozu için açiklamanin bir yöntemi, söz konusu denegin bir numunesinde c-MAF geni kopya sayisinin belirlenmesini içermektedir, burada c-MAF geni transloke olmaktadir ve söz konusu kopya sayisinin, bir kontrol veya referans numunesinin kopya sayisiyla karsilastirilmasini içermektedir, burada eger c-MAF kopya sayisi, bir kontrol numunesinin c-MAF kopya sayisina göre daha büyükse, denegin daha büyük bir metastaz görülme egilimi vardir. Tercih edilen bir yönde kemik metastazi çok erken kemik metastazidir. Daha çok tercih edilen bir yönde, kemik metastazi osteolitik metastazdir. özetleyen veya temsil eden, c-MAF ekspresyon seviyesinin tek bir degeriyle (ortalama, tepe deger veya medyan) ilgilidir. Tercih edilen bir yönde ortalama seviye, akciger kanseri tümörlerinin bir temsili kohortundan elde edilen ekspresyon seviyelerinin ortalamasina karsilik gelmektedir. Hasta kohortu, degerlendirilmeye çalisilan bagimsiz hastayi temsil eden yasla belirlenmektedir. ölçülmesiyle ilgilidir. Örnegin c-MAF'in ortalama normal seviyesi için standart sapma, akciger tümör numunelerinde bulunan c-MAF seviyelerinin bir koleksiyonunun dagilimidir. Veriler ne kadar yayilirsa sapma o kadar yüksek olur. Standart sapma, gözlemlenen degerlerin kare saplamalarinin ortalamasinin kare kökünün, siklik dagilimindaki ortalamalarindan çikarilmasiyla elde edilebilmektedir.
Akciger kanserli bir denekten alinan bir numunede c-MAF geni ekspresyon seviyesi ölçülüp ortalama seviyeyle karsilastirildiktan sonra, eger söz konusu genin ekspresyon seviyesi ortalamanin üstündeyse, arti ortalama seviyeye göre bir standart sapma varsa, söz konusu denegin daha büyük bir erken kemik metastazi görülme egilimi oldugu sonucuna varilabilmektedir.
C-MAF geninin veya kromozom bölgesi 16q22-q24'ün transloke olup olmadigini belirleme yöntemleri alanda yaygin olarak bilinmektedir ve önceden c-MAF amplifikasyonu için açiklanmis olanlari kapsamaktadir. Söz konusu yöntemler arasinda in situ hibridizasyon (ISH) (mesela floresan in situ hibridizasyon (FISH)), kromojenik in situ hibridizasyon (CISH) veya gümüs in situ hibridizasyon (SISH), genomik karsilastirilmali hibridizasyon veya polimeraz zincir reaksiyonu (mesela gerçek zamanli kantitatif PCR) yer almakla birlikte bunlarla sinirli degildir. Herhangi bir ISH yöntemi için amplifikasyon, kopya sayisi veya translokasyon, kromozomlardaki veya nükleustaki floresan noktalarin, renkli noktalarin veya gümüslü noktalarin sayisinin sayilmasiyla belirlenebilmektedir. Diger yönlerde kopya sayisi degisikliklerinin ve translokasyonlarin saptanmasi, tam genom sekanslama, eksom sekanslama yoluyla veya herhangi bir PCR türevli teknolojinin kullanilmasiyla saptanabilmektedir. Örnegin PCR, translokasyonun saptanmasi için genomik DNA'nin numunelerinde gerçeklestirilebilmektedir. Bir yönde kantitatif PCR kullanilmaktadir. Bir yönde PCR, c-MAF genine spesifik olan bir primerle ve IGH promotör bölgesine spesifik bir primerle gerçeklestirilmektedir; eger bir ürün üretilmisse, translokasyon meydana gelmistir.
Bazi yönlerde c-MAF geninin amplifikasyonu ve kopya sayisi, c-MAF geninin translokasyonu belirlendikten sonra belirlenmektedir. Bazi yönlerde prob, hücrenin c- MAF geni için poliploid olup olmadigini belirlemek için kullanilmaktadir. Bazi yönlerde poliploidin belirlenmesi, ilgili genden 2 sinyalden fazlasinin olup olmadiginin belirlenmesiyle yapilmaktadir. Bazi yönlerde poliploid ilgili gene spesifik olan probdan sinyalin ölçülmesiyle ve bunun bir sentromerik probla veya farkli bir probla karsilastirilmasiyla belirlenmektedir. c-MAF geninin amplifikasvonunu veva translokasyonunu santamava dayanan akciger kanserinde klinik sonucun prognoz yöntemi Bir baska yönde c-MAF geninin bir referans gen kopya sayisina göre amplifiye olup olmadigini veya söz konusu denegin bir numunesinde transloke olup olmadiginin belirlenmesini içeren, akciger kanserli bir hastanin klinik sonucunu kestirmeye yönelik bir in vitro yöntem (asagida açiklanan sekizinci yöntem olarak anilacaktir) açiklanmaktadir, burada c-MAF geninin söz konusu referans geni kopya sayisina göre bir amplifikasyonu zayif bir klinik sonucun göstergesidir.
Açiklanan sekizinci yöntem, birinci adimda c-MAF geninin bir denegin bir numunesinde amplifiye olup olmadiginin belirlenmesini içermektedir. C-MAF'in amplifikasyonunun belirlenmesi, esasen bulusun besinci yönteminde açiklandigi gibi yürütülmektedir.
Tercih edilen bir yönde numune bir tümör dokusu numunesidir. Tercih edilen bir yönde belirlenmesiyle saptanmaktadir. Bir baska tercih edilen yönde c-MAF geninin amplifikasyonu, bir c-MAF genine spesifik probun kullanilmasiyla belirlenmektedir.
Ikinci adimda açiklanan sekizinci yöntem, söz konusu kopya sayisini, bir kontrol veya referans numunesinin kopya sayisiyla karsilastirmayi içermektedir, burada c-MAF kopya sayisi bir kontrol numunesinin c-MAF kopya sayisina göre daha büyükse, bu durum zayif bir klinik sonucun göstergesidir.
Tercih edilen bir yönde c-MAF geni, c-MAF geni kopya sayisi bir referans numunesinin veya kontrol numunesinin kopya sayisindan daha fazla oldugunda bir referans gen kopya sayisina göre amplifiye olmustur. Bir örnekte c-MAF geninin genomik kopya sayisi, bir kontrol numunesine göre bir test numunesinde en az 2-(yani 6 kopya), 3- artmissa c-MAF geninin “amplifiye oldugu" söylenmektedir. Bir baska örnekte hücre geninin “amplifiye oldugu” söylenmektedir.
Bir baska yönde referans gen kopya sayisi, kemik metastazi yasamamis olan bir denekten alinan bir akciger kanseri numunesindeki gen kopya sayisidir.
Bir baska yönde amplifikasyon, in situ hibridizasyon veya PCR yoluyla belirlenmektedir.
Terapötik Yöntemler c-MAF inhibitör maddelerini kullanarak kemik metastazinin tedavi edilmesi Bir c-MAF geni ekspresyon inhibitör maddesi veya söz konusu gen tarafindan kodlanan proteinin bir inhibitör maddesi, akciger kanseri metastazinin tedavisinde ve/veya önlenmesinde kullanilabilmektedir.
Bir baska yönde bir c-MAF inhibitör maddesinin akciger kanserinde kemik metastazinin tedavisi veya önlenmesi amaciyla bir ilacin üretilmesine yönelik olarak kullanilmasi açiklanmaktadir.
Bir baska yönde bir c-MAF inhibitör maddesinin söz konusu denege uygulanmasini içeren, buna ihtiyaci olan bir denekte akciger kanserinden kemik metastazinin tedavi veya önlenme yöntemi açiklanmaktadir.
Bir baska yönde akciger kanserli bir denekte kemik metastazi riskini önlemeye veya azaltmaya yönelik bir yöntem açiklanmaktadir, söz konusu yöntem söz konusu denege kemik metastazini önleyen veya azaltan bir maddenin uygulanmasini içermektedir, burada söz konusu madde söz konusu denekteki c-MAF ekspresyon seviyesinin miktarinin ölçülmesiyle belirlenen bir tedavi rejimine göre uygulanmaktadir.
Bu nedenle bir baska yönde bir c-MAF geni ekspresyon inhibitör maddesinin veya söz konusu gen tarafindan kodlanan proteinin bir inhibitör maddesinin (asagida açiklanan inhibitör maddesi olarak anilacaktir), akciger kanseri metastazinin tedavisi ve/veya önlenmesi için bir tibbi ürünün hazirlanmasinda kullanilmasi açiklanmaktadir. Alternatif olarak bu açiklama, akciger kanseri metastazinin tedavisinde ve/veya önlenmesinde kullanilmak üzere bir c-MAF geni ekspresyon inhibitör maddesi veya söz konusu gen tarafindan kodlanan proteinin bir inhibitör maddesiyle ilgilidir. Alternatif olarak, söz konusu denege bir c-MAF inhibitörünün uygulanmasini içeren, bir denekte akciger kanseri metastazinin tedavi edilmesine yönelik bir yöntem açiklanmaktadir.
Burada kullanilan sekliyle bir "c-MAF inhibitör maddesi" hem söz konusu genin ekspresyon ürününün üretilmesini önleyerek (c-MAF geni transkripsiyonunu keserek ve/veya c-MAF geni ekspresyonundan gelen mRNA'nin translokasyonunu keserek) hem de c-MAF protein aktivitesini dogrudan inhibe ederek c-MAF geni ekspresyonunu tamamen veya kismen inhibe edebilen bir moleküle atifta bulunmaktadir. C-MAF geni ekspresyon inhibitörleri, in vitro hücre proliferasyonunu desteklemek için basvuruda açiklandigi gibi inhibitörün, siklin DZ promotörünün veya c-MAF'i eksprese eden hücrelerde c-MAF yanit bölgesini (MARE veya c-MAF yanit elemanini) içeren bir promotörün kontrolü altinda bir haberci genin transkripsiyon kapasitesini bloke etme ve c-MAF'i eksprese eden hücrelerde PMA/iyonomisinle stimülasyona yanit olarak inhibitörün, IL-4 promotörünün kontrolü altinda bir haberci genin ekspresyonunu bloke etme kapasitesini temel alan yöntemleri kullanarak belirlenebilmektedir.
Sinirlandirici olmayan örnekler olarak mevcut açiklamada kullanima uygun olan c-MAF inhibitör maddeleri arasinda antisens oligonükleotidler, interferans RNA'lar (siRNA'Iar), katalitik RNA'lar veya spesifik ribozimler ve inhibitör antikorlari yer almaktadir.
Antisens oligonükleotidler Ek bir yön, örnegin aktivitesi inhibe edilecek c-MAF'i kodlayan bir nükleik asidin transkripsiyonunu ve/veya translasyonunu inhibe etmek için ekspresyonu inhibe etmek üzere izole edilmis “antisens" nükleik asitlerinin kullanilmasiyla ilgilidir. Antisens nükleik asitleri, konvansiyonel baz komplementaritesiyle veya örnegin çift sarmalin büyük oyugundaki spesifik etkilesimle Çift iplikli DNA'ya baglanma durumunda ilacin hedef potansiyeline baglanabilmektedir. Genel olarak bu yöntemler, alanda genel olarak kullanilan bir dizi teknige atifta bulunmaktadir ve oligonükleotid sekanslarina spesifik baglanmayi temel alan herhangi bir yöntemi kapsamaktadirlar.
Mevcut açiklamanin antisens yapisi örnegin hücrede transkribe edildiginde c-MAF'i kodlayan hücresel mRNA'nin en azindan bir benzersiz parçasina RNA komplementaritesi üreten bir ekspresyon plazmidi olarak uygulanabilmektedir. Alternatif olarak antisens yapisi, hücreye verildiginde bir hedef nükleik asitin mRNA'siyIa ve/veya gen sekanslariyla hibridize olan gen ekspresyonunun inhibisyonunu üreten ex w'vo üretilen bir oligonükleotid probudur. Bu tür oligonükleotid problari tercihen örnegin ekzonükleazlar ve/veya endonükleazlar gibi endojen nükleazlara dirençli olan ve bu nedenle in i//i/o stabil olan, modifiye edilmis oligonükleotidlerdir. Bir antisens oligonükleotid olarak kullanimlarina yönelik nükleik asit molekülleri örnekleri, fosforamidat, fosfotiyonat ve metilfosfonatin DNA analoglaridir (bkz. ayrica . Ayrica antisens tedavisinde yararli olan oligomerlerin yapilandirilmasina yönelik genel yaklasimlar örnegin Van der 2668, 1988 kaynaginda gözden geçirilmistir.
Antisens oligonükleotid açisindan translasyonun baslangiç bölgesinden türetilen oligodeoksiribonükleotid bölgeleri, örnegin hedef genin -10 ve +10 bölgesi tercih edilmektedir. Antisens yaklasimlari, hedef polipeptidi kodlayan mRNA'ya komplementer olan oligonükleotid tasarimini (ya DNA ya da RNA) içermektedir. Antisens oligonükleotid, transkribe edilen mRNA'ya baglanacaktir ve translasyon önlenecektir.
Translasyonu önlemek için mRNA'nin 5' ucuna, örnegin translate edilmemis 5' sekansina komplementer olan oligonükleotidler, baslangiç kodonu AUG'ye kadar (dahil) en etkili sekilde islev göstermek zorundadir. Bununla birlikte mRNA'nin translate edilmemis 3' sekansina komplementer sekanslarin da mRNA translasyonunu inhibe komplementer oligonükleotidler, bir antisens yaklasiminin bir genin translate edilmemis ' veya 3' bölgelerinde, kodlamaya yapmayan bölgelerinde, bu mRNA'nin translasyonunu inhibe etmek Için kullanilabilmektedir. MRNA'nin translate edilmemis 5' bölgesine komplementer oligonükleotidler, baslangiç kodonu AUG'nin komplementini içermek zorundadir. MRNA'nin kodlama bölgesine komplementer oligonükleotidler, daha az verimli translasyon Inhibitörleridir ancak bu açiklamaya göre de kullanilabilmektedirler. Eger MRNA'nin 5' bölgesiyle, 3' bölgesiyle veya kodlama bölgesiyle hibridize olmak üzere tasarlanmislarsa, antisens nükleik asitlerin en az alti nükleotid uzunlugu olmalidir ve tercihen yaklasik 100'den az ve daha çok tercihen yaklasik 50, 25, 17 veya 10'dan az nükleotid uzunlugu olmalidir.
Tercihen in vitro çalismalar öncelikle gen ekspresyonunun inhibe edilmesi için antisens oligonükleotidlerin kapasitesinin ölçülmesi için yürütülmektedir. Tercihen bu çalismalar, antisens gen inhibisyonu ve oligonükleotidlerin spesifik olmayan biyolojik etkileri arasinda ayrim yapan kontrolleri kullanmaktadir. Ayrica tercihen bu çalismalar, hedef RNA veya protein seviyelerini, RNA'nin veya proteinin bir iç kontrolüyle karsilastirmistir.
Antisens oligonükleotidler kullanilarak elde edilen sonuçlar, bir kontrol oligonükleotidi kullanilarak elde edilenlerle karsilastirilabilmektedir. Tercihen kontrol oligonükleotidi, test edilecek oligonükleotidle asagi yukari ayni uzunluga sahiptir ve oligonükleotid sekansi, antisens sekansindan hedef sekansa spesifik hibridizasyonu önlemek için gerekli görülenden daha fazla farklilik göstermemektedir.
Antisens oligonükleotid, bir tek veya çift iplikli DNA veya RNA veya kimerik karisimlar veya bunlarin türevleri veya modifiye edilmis versiyonlari olabilmektedir. Oligonükleotid örnegin molekülün stabilitesini, hibridizasyon kapasitesini iyilestirmek vb. için baz grubunda, seker grubunda veya fosfat belkemiginde modifiye edilebilmektedir.
Oligonükleotid peptidler (örn. konak hücrelerin reseptörlerine yönlendirilmeleri için) veya hücre zariyla tasinmalarinin kolaylastirilmasi için (bkz. örn. Letsinger ve ark., Proc. 84: veya kan-beyin bariyeri (bkz. örn.
WC 89/ , araya giren maddeler (bkz. örn. Zon, Pharm. Res. 5: oligonükleotid, örnegin bir peptid, bir tasiyici madde, hibridizasyon tetikleyici klevaj maddesi gibi farkli bir moleküle konjuge edilebilmektedir.
Antisens oligonükleotidler, modifiye edilmis bazin en az bir grubunu içerebilmektedir.
Antisens oligonükleotid ayrica arabinoz, 2-floroarabinoz, ksiluloz ve heksozu içeren ancak bunlarla sinirli olmayan gruptan seçilen en az bir modifiye edilmis seker grubu içerebilmektedir. Antisens oligonükleotid ayrica bir nötr peptide benzer bir bel kemigi içerebilmektedir. Bu tür moleküller, peptid nükleik asit (PNA) oligomerler olarak bilinmektedirler ve örnegin Perry-O'Keefe ve ark., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93: Yine farkli bir yönde antisens oligonükleotid, en az bir modifiye edilmis fosfat belkemigi içermektedir. Yine farkli bir yönde antisens oligonükleotid bir alfa-anomerik oligonükleotiddir.
Hedef mRNA sekansinin kodlama bölgesine komplementer antisens oligonükleotidler kullanilabilmesine ragmen transkribe edilmis, translate edilmemis bölgeye komplementer olanlar da kullanilabilmektedir.
Bazi durumlarda endojen mRNA translasyonunu baskilamak için antisensin yeterli intrasellüler konsantrasyonlarina ulasilmasi güç olabilmektedir. Bu nedenle tercih edilen bir yaklasim, antisens oligonükleotidin bir güçlü pol III veya pol II promotörünün kontrolü altina yerlestirildigi bir rekombinant DNA yapisini kullanmaktadir.
Alternatif olarak hedef gen ekspresyonu, vücuttaki hedef hücrelerde gen transkripsiyonunu önlemek için üçlü sarmal yapilari olusturmak üzere gen regüle edici bölgeye (yani promotör ve/veya arttiricilar) komplementer olan deoksiribonükleotid sekanslarinin yönlendirilmesiyle azaltilabilmektedir (bkz. genel olarak Helene, antisens morfolinlerdir.
Küçük müdahaleci RNA veya siRNA'Iar, bir hedef genin ekspresyonunu RNA müdahalesi ile inhibe edebilen maddelerdir. Bir siRNA, kimyasal olarak sentezlenebilmekte, in vitro transkripsiyon yoluyla elde edilebilmekte veya hedef hücrede i'n V/VO sentezlenebilmektedir. Genellikle siRNA, 15-40 nükleotid uzunlugunda bir çift iplikli RNA'dan olusmaktadir ve 1-6 nükleotidden bir 3' ve/veya 5' çikintili bölge içerebilmektedir. Çikinti yapan bölgenin uzunlugu, siRNA molekülünün toplam uzunlugundan bagimsizdir. siRNA transkripsiyondan sonra hedef habercinin bozulmasiyla veya susturulmasiyla hareket etmektedir.
Açiklanan siRNA, c-MAF kodlayici genin mRNA'sina veya söz konusu proteini kodlayan gen sekansina büyük ölçüde homologtur. “Büyük ölçüde homolog” siRNA'nin hedef mRNA'yi RNA müdahalesi ile parçalara ayirabildigi sekilde hedef mRNA'ya yeterince komplementer veya benzer olan bir sekansa sahip olarak anlasilmaktadir. Söz konusu müdahaleye yol açmaya uygun olan siRNA, RNA'nin olusturdugu siRNA'yi ve asagidakiler gibi farkli kimyasal modifikasyonlari içeren siRNA'yi içermektedir: Fosforotiyonat baglari gibi nükleotidler arasindaki baglarin, dogada görünenlerden farkli oldugu siRNA. o Florofor gibi bir fonksiyonel reaktifle RNA ipligi konjugatlari. . 2' pozisyonundaki farkli hidroksil fonksiyonel gruplarla modifikasyon yoluyla özellikle 3' ucunun olmak Üzere RNA ipliklerinin uçlarinin modifikasyonlari. . 2'-O-metilriboz veya 2'-O-flor0riboz gibi 2' pozisyonundaki O-alkillenmis kalintilar gibi modifiye edilmis sekerlerle nükleotidler.
. Halojene bazlar (örnegin 5-bromoürasil ve 5-iyodoürasil) ve alkillenmis bazlar (örnegin 7-metilguanozin) gibi modifiye edilmis bazlarla nükleotidler.
SiRNA, oldugu haliyle, yani yukarida bahsedilen özellikleri tasiyan bir çift iplikli RNA seklinde kullanilabilmektedir. Alternatif olarak siRNA'nin sens ve antisens iplik sekansini içeren vektörlerin kullanilmasi, ilgili hücrede ekspresyonlari için uygun promotörlerin SiRNA'yi eksprese etmeye uygun vektörler, siRNA'nin iki ipligini kodlayan iki DNA bölgesinin, transkripsiyon üzerine bir döngü olusturdugu, bir ayirici bölge tarafindan ayrilmis tek ve ayni DNA ipliginde art arda düzenlenmis oldugu vektörlerdir ve burada tek bir promotör DNA molekülünün transkripsiyonunu yönlendirerek shRNA'ya yol açmaktadir.
Alternatif olarak siRNA'yi olusturan ipliklerin her birinin bir farkli transkripsiyonel birimin transkripsiyonundan olusturuldugu vektörlerin kullanilmasi mümkün olmaktadir. Bu vektörler ise iraksak ve yakinsak transkripsiyon vektörlerine ayrilmaktadir. Iraksak transkripsiyon vektörlerinde, siRNA'yi olusturan DNA ipliklerinin her birini kodlayan transkripsiyon birimler, her bir DNA ipliginin transkripsiyonunun ayni veya farkli olabilecek kendi promotörüne bagli olacagi sekilde bir vektörde art arda bulunmaktadir siRNA'ya yol açan DNA bölgeleri iki revers promotörle desteklenen bir DNA bölgesinin sens ve antisens ipliklerini olusturmaktadir. Sens ve antisens RNA ipliklerinin transkripsîyonundan sonra antisens RNA iplikleri bir fonksiyonel siRNA'nin olusturulmasi için hibrit olusturacaktir. 2 U6 promotörünün (Tran, N. ve ark., 2003, BMC Biotechnol., 3:21), bir fare U6 promotörünün ve bir insan HI promotörünün (Zheng, L., ve ark., ve bir insan U6 promotörünün ve bir fare HI promotörünün (Kaykas, A. and Moon, R., 2004, BMC Cell Biol., 5:16) kullanildigi revers promotör sistemleri olan vektörler açiklanmistir. kullanimlarina uygun olan promotörler arasinda siRNA'nin eksprese edilecegi hücrelerle uyumlu olan herhangi bir promotör veya promotör çifti yer almaktadir. Bu nedenle mevcut açiklamaya uygun promotörler arasinda polioma virüs, adenovirüs, SV40, CMV, avian sarkoma virüs, hepatit B virüsü, metallotiyonein gen promotörü, herpes simplex virüsünün timidin kinaz geni promotörü, retrovirüs LTR bölgeleri, Immunoglobülin gen promotörü, aktin gen promotörü, EF-lalfa gen promotörü gibi ökaryotik virüslerin genomlarindan elde edilenler gibi konstitüf promotörler ve protein ekspresyonunun tetrasiklin sistem, NFkappaB/UV isigi sistemi, Cre/Lox sistemi ve isi sok geni promotörü, promotörleri gibi bir molekülün veya bir eksojen sinyalinin adisyonuna bagli oldugu basvuruda açiklanan PSA promotörü) yer almakla birlikte bunlarla sinirli degildir. Tercih edilen bir yönde promotörler, konstitütif olarak hareket eden RNA polimeraz III promotörleridir. RNA polimeraz III promotörleri, SS RNA, tRNA, 7SL RNA ve U6 snRNA gibi sinirli sayida gende bulunmaktadir. Diger RNA polimeraz III promotörlerinden farkli olarak tip III promotörleri herhangi bir intrajenik sekansa ihtiyaç duymamaktadir ve pozisyon -34 ve -24'te bir TATA kutusu içeren 5 yönünde sekanslara, bir proksimal sekans elemanina veya -66 ve -47 arasinda PSE'ye ve bazi durumlarda bir distal sekans elemanina veya pozisyon -265 ve -149 arasinda DSE'ye ihtiyaç duymaktadir. Tercih edilen bir yönde tip III RNA polimeraz III promotörleri, insan veya murin H1 ve U6 gen promotörleridir. Yine daha çok tercih edilen bir yönde promotörler 2 insan veya murin U6 promotörü, bir fare U6 promotörü ve bir insan HI promotörü veya bir insan U6 promotörü ve bir fare HI promotörüdür. siRNA, siRNA'yi olusturan antiparalel ipliklerin bir ilmek veya firkete bölgesiyle baglanmasiyla karakterize edilen shRNA'dan (kisa firkete RNA) intrasellüler olarak üretilebilmektedir. ShRNA'Iar plazmidler veya virüslerle, özellikle retrovirüslerle kodlanabilmektedir ve bir promotörün kontrolü altindadir. shRNA'yi eksprese etmeye uygun promotörler, yukaridaki paragrafta siRNA ekspresyonu için belirtilmis olanlardir. siRNA ve shRNA ekspresyonuna uygun olan vektörler arasinda pUC18, pUC19, Bluescript ve türevleri, mp18, mp19, pBR322, pMB9, COIEI, pCRl, RP4, fajlar gibi prökaryotik ekspresyon vektörleri ve pSA3 ve pAT28 gibi mekik vektörleri, 2 mikron plazmid tipi vektörleri, entegrasyon plazmidleri, YEP vektörleri, sentromerik plazmidler ve benzerleri gibi küf ekspresyon vektörleri, pAC serisi vektörler ve pVL serisi vektörler gibi böcek hücre ekspresyonu, pIBI, pEarIeyGate, pAVA, pCAMBIA, pGSA, pGWB, pMDC, pMY, pORE serisi vektörler ve benzerleri gibi bitki ekspresyon vektörleri ve pcDNA3, pHCMV/Zeo, pCR3.1, pEFl/His, pIND/GS, pRc/HCMVZ, pSV40/Ze02, pTRACER-HCMV, pUBö/VS-His, pVAX1, pZeoSVZ, pCI, pSVL and pKSV-lO, pBPV-l, pML2d ve pTDT1 gibi viral vektör bazli (adenovirüs, adenovirüslerle iliskilendirilen virüsler ve retrovirüsler ve özellikle Ientivirüsler) daha yüksek ökaryotik hücre ekspresyon vektörleri veya viral olmayan vektörler yer almaktadir. Tercih edilen bir yönde vektörler, lentiviral vektörlerdir.
Açiklanan siRNA ve shRNA, alanda uzman kisiler tarafindan bilinen bir dizi teknigin kullanilmasiyla elde edilebilmektedir. SiRNA'nin tasarlanmasi için temel olarak alinan nükleotid sekansi bölgesi sinirlandirici degildir ve kodlama sekansinin bir bölgesini (baslangiç kodonu ve bitis kodonu arasinda) içerebilmektedir veya alternatif olarak translate edilmemis 5' veya 3' bölgesinin, tercihen 25-50 nükleotid uzunlugunda ve baslangiç kodonuna göre 3' yönü pozisyonunda herhangi bir pozisyondaki sekanslari içerebilmektedir. Bir siRNA'nin tasarlanmasinin yolu, AA(N19)TF motiflerinin tanimlanmasini içermektedir, burada N, c-MAF gen sekansindaki herhangi bir nükleotid olabilmektedir ve bir yüksek G/C içerigi olanlarin seçimini içermektedir. Söz konusu motif bulunmazsa, NA(N21) motifinin tanimlanmasi mümkün olmaktadir, burada N herhangi bir nükleotid olabilmektedir. içermektedir, ipliklerinden biri ACGGCUCGAGCAGCGACAA'dir (SEKANS TANIM NO: 6).
Diger C-MAF spesifik siRNA'Iar arasinda CUUACCAGUGUGUUCACAA (SEKANS TANIM NO: 7), UGGAAGACUACUACUGGAUG (SEKANS TANIM NO: 8), AUUUGCAGUCAUGGAGAACC (SEKANS TANIM NO: 9), CAAGGAGAAAUACGAGAAGU (SEKANS TANIM NO: 10), ACAAGGAGAAAUACGAGAAG (SEKANS TANIM NO: 11) ve ACCUGGAAGACUACUACUGG (SEKANS TANIM NO: 12) yer almakla birlikte bunlarla sinirli degildir.
DNA Enzimleri Diger yandan bu açiklama ayrica, açiklamanin c-MAF geninin ekspresyonunu inhibe etmek için DNA enzimlerinin kullanilmasini öngörmektedir. DNA enzimleri, hem antisens hem de ribozim teknolojilerinin mekanistik özelliklerinden bazilarina yer vermektedir.
DNA enzimleri, antisens oligonükleotide benzer özel bir hedef nükleik asit sekansini taniyacaklari sekilde tasarlanmaktadir ancak ribozim gibi katalitiktirler ve özellikle hedef nükleik aside baglanmaktadirlar.
Ribozimler Aktivitesi inhibe edilecek olan c-MAF'i kodlayan mRNA'nin dönüsümünü önlemek amaciyla bir hedef mRNA'nin transkripsiyon ürünlerinin katalitik olarak klevaji için tasarlanmis olan ribozim moleküller de kullanilabilmektedir. Ribozimler, spesifik RNA klevajinin katalizasyonunu gerçeklestirebilen enzimatik RNA molekülleridir (Gözden bir komplementer hedef RNA'nin bir ribozim molekül sekansinin spesifik hibridizasyonunu ve ardindan bir endonükleolitik klevaj olayini içermektedir. Ribozim moleküllerinin bilesimi tercihen hedef mRNA'ya komplementer olan bir veya birden fazla sekansi ve mRNA'nin klevajindan ve bir fonksiyonel olarak esdeger sekanstan sorumlu iyi bilinen sekansi içermektedir (bkz. örn. .
Mevcut açiklamada kullanilan ribozimler arasinda çekiç basli ribozimler, endoribonükleaz RNA (asagida "Cech tipi ribozimler") yer almaktadir (Zaug ve ark., Ribozimler, modifiye edilmis oligonükleotidler tarafindan (örnegin stabiliteyi, hedef almayi vb. iyilestirmek için) olusturulabilmektedir ve hedef geni in VIVO eksprese eden hücrelere dagitilmalidirlar. Tercih edilen bir dagitim yöntemi, transfekte hücrelerin endojen hedef habercileri imha etmek ve translasyonu inhibe etmek için yeterli ribozim miktarlarini üretecegi sekilde güçlü bir konstitütif pol III veya pol II promotörünün kontrolü altinda ribozimi "kodlayan" bir DNA yapisinin kullanilmasini içermektedir.
Ribozimler katalitik oldugundan diger antisens moleküllerinden farkli olarak, verimliligi için düsük bir intrasellüler konsantrasyon gerekmektedir.
Inhibitör antikorlar Mevcut açiklamanin baglaminda “inhibitör antikor” c-MAF proteinine spesifik olarak baglanabilen ve söz konusu proteinin fonksiyonlarindan birini veya birden fazlasini, tercihen transkripsiyonla ilgili olanlari inhibe edebilen bir antikor olarak anlasilmaktadir.
Antikorlar, bazilari yukarida bahsedilmis olan alanda uzman kisiler tarafindan bilinen yöntemlerden herhangi biri kullanilarak hazirlanabilmektedir. Bu nedenle poliklonal antikorlar, bir hayvana inhibe edilecek proteinle bagisiklik kazandirilmasiyla hazirlanmaktadir. Monoklonal antikorlar, Kohler, Milstein ve arkadaslari (Nature, 1975, 256: 495) tarafindan açiklanan yöntem kullanilarak hazirlanmaktadir. Mevcut açiklamanin baglaminda uygun antikorlar arasinda bir degisken antijen baglayici bölgeyi ve bir sabit bölgeyi içeren dokunulmamis antikorlar, "Fab", "F(ab')2" ve "Fab'", Fv, scFv fragmanlari, diaody'ler, bispesifik antikorlar, alfabody'ler, siklopeptidler ve zimbalanmis peptidler yer almaktadir. C-MAF protein baglama kapasitesi olan antikorlar belirlendikten sonra bu proteinin aktivitesini inhibe edebilenler, bir inhibitör maddesi tanimlama testi kullanilarak seçilecektir.
Inhibitör peptidler Burada kullanilan sekliyle “inhibitör peptidler” terimi, c-MAF proteinine baglanabilen ve yukarida açiklandigi gibi aktivitesini inhibe edebilen, yani c-MAF'in gen transkripsiyonunu aktive edebilmesini önleyebilen peptidlere atifta bulunmaktadir.
Negatif c-MAF dominantlari Maf ailesinden proteinler, Fos ve Jun gibi AP-1 ailesinin diger üyeleriyle homodimerize ve heterodimerize olabildiklerinden c-MAF aktivitesini inhibe etmenin yollarindan biri, c- MAF ile dimerizasyon kabiliyeti olan ancak transkripsiyonu aktive etme kabiliyeti olmayan negatif dominantlarin kullanilmasidir. Bu nedenle negatif c-MAF dominantlar, hücrede bulunan ve transaktivasyon alanini içeren amino terminal ucunun üçte ikisini içermeyen (örn. mafK, mafF, mafg ve pi 8) küçük maf proteinlerinden herhangi biri Alternatif olarak negatif c-MAF dominanti, diger proteinlerle dimerize olma kapasitesini koruyan ancak transkripsiyonu aktive etme kapasitesi olmayan c-MAF varyantlarini içermektedir. Bu varyantlar örnegin proteinin N terminal ucunda bulunan c-MAF transaktivasyonu bölgesini içermeyenlerdir. Bu nedenle negatif c-MAF dominant varyantlari, açiklayici sekilde en azindan amino asit 1-122'nin, en azindan amino asit 1- gibi insan c-MAF'in numaralandirmasi dikkate alinarak) çikarilmis oldugu varyantlari içermektedir.
Bu açiklama, hem negatif c-MAF dominant varyantlarinin hem de c-MAF'i kodlayan polinükleotidlerin hedef hücrede ekspresyon için uygun olan bir promotörün operatif kontrolü altinda kullanilmasini öngörmektedir. Açiklamanin polinükleotid transkripsiyonunu regüle etmek için kullanilabilecek promotörler, konstitütif promotörler, yani transkripsiyonu bazal seviyede yönlendiren promotörler veya transkripsiyonel aktivitenin bir harici sinyali gerektirdigi indüklenebilir promotörler olabilmektedîr. Transkripsiyonu regüle etmeye yönelik konstitütif promotörler, digerlerinin arasinda CMV promotörü, SV40 promotörü, DHFR promotörü, fare memeli tümör virüs (MMTV) promotörü, la elongasyon faktör (Efia) promotörü, albümin promotörü, ApoAl promotörü, keratin promotörü, CD3 promotörü, immünoglobülin agir veya hafif zincir promotörü, nörofilament promotörü, nöron spesifik enolaz promotörü, L7 promotörü, CD2 promotörü, miyozin hafif zincir kinaz promotörü, HOX geni promotörü, timidin kinaz promotörü, RNA polimeraz II promotörü, MyoD geni promotörü, fosfogliserat kinaz (PGK) gen promotörü, düsük yogunluklu lipoprotein (LDL) promotörü, aktin gen promotörüdür. Tercih edilen bir yönde transaktivatör ekspresyonunu regüle eden promotör, PGK gen promotörüdür. Tercih edilen bir yönde açiklamanin polinükleotid transkripsiyonunu regüle eden promotör, T7 fajinin RNA polimeraz promotörüdür.
Tercihen mevcut açiklamanin baglaminda kullanilabilecek indüklenebilir promotörler, bir indükleyici madde olmadiginda sifir veya göz ardi edilebilir bazal ekspresyon gösteren bir indükleyici maddeye yanit veren ve 3' pozisyonunda yer alan gen aktivasyonunu destekleyebilenlerdir. Indükleyici madde tipine bagli olarak indüklenebilir promotörler, Tet açik/kapali promotörler (Gossen, M. and H. Bujard (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. bagimli promotör (WO8604920) ve rapamisine bagimli promotörler (Rivera ve ark., Negatif c-MAF dominant varyantini kodlayan polinükleotidi eksprese etmeye uygun olan COIEI, pCRl, RP4, fajlar gibi prökaryotik ekspresyon vektörleri ve pSA3 ve pAT28 gibi mekik vektörleri, 2 mikron plazmid tipi vektörleri, entegrasyon plazmidleri, YEP vektörleri, sentromerik plazmidler ve benzerleri gibi küf ekspresyon vektörleri, pAC serisi vektörler ve pVL serisi vektörler gibi böcek hücre ekspresyonu, pIBI, pEarleyGate, pAVA, pCAMBIA, pGSA, pGWB, pMDC, pMY, pORE serisi vektörler ve benzerleri gibi bitki ekspresyon vektörleri ve pSilencer , pcDNA3, pcDNA3.1/hyg pHCMV/Zeo, pCR3.1, pEF1/His, pIND/GS, pRc/HCMV2, pSV40/Ze02, pTRACER-HCMV, pUBö/V5-His, pVAX1, pZeoSVZ, pCI, pSVL ancl pKSV-10, pBPV-l, pML2d ve pTDTlgibi viral vektör bazli (adenovirüs, adenovirüslerle iliskilendirilen virüsler ve retrovirüsler ve özellikle Ientivirüsler) daha yüksek Ökaryotik hücre ekspresyon vektörleri veya viral olmayan vektörlerden türetilen vektörler yer almaktadir. c-MAF protein aktivitesinin diger inhibitör bilesikleri Mevcut açiklamada kullanima uygun olan diger c-MAF inhibitör bilesikleri arasinda asagidakiler yer almaktadir: Tablo 1: c-MAF inhibisyon kapasitesi olan küçük moleküller endiandrik asit H türevleri R1 ve R2, birbirinden bagimsiz olarak, 1.0 H veya 2.0 bir O-Ci-Cs-alkil, -O-Cz-Cö-alkenil, -O-Cz-Ce-alkinil veya -O-Cs-Cio-aril grubudur, burada alkil, alkenil ve alkinil düz zincirlidir veya dallidir ve burada alkil, alkenil ve alkinil gruplari mono- veya disübstitüelidir: 2.1 -OH, 2.2 :0, 2.3 -0- Ci-Ce-alkildir, burada alkil düz zincirlidir veya dallidir, 2.4-O-C2-Ce-alkenildir, burada alkenil düz zincirlidir veya dallidir, 2.5 Ce-Cio-arildir, 2.6 -NH-Ci-Ce-alkildir, burada alkil düz zincirlidir veya dallidir, 2.7 -NH-Cz-Cö-alkenildir, burada alkenil düz zincirlidir veya dallidir, 2.8 -NH2 veya 2.9 halojendir ve burada aril grubu Istege bagli olarak sübstitüent 2.1 veya 2.3 veya 2.9 ile mono- veya disübstitüelidir, burada sübstitüentler 2.3, 2.4, 2.6 ve 2.7 ayrica - CN, -amid veya -oksim fonksiyonlariyla sübstitüe edilebilmektedir ve 2.5 ayrica -CN veya amid fonksiyonlariyla sübstitüe edilebilmektedir veya R1 ve R2 birlikte bir halka olusturmaktadir, burada R1 ve R2 bir - O-[(C1-C6)-alkilen]-O- grubu anlamina gelmektedir, 1.0 H veya 2.0 bir -O-Ci-Cs-alkil, -O-Cz-Cs-alkenil, -O-Cz-Ce-alkinil veya -O-Ce-Cio-aril grubudur, burada alkil, alkenil ve alkinil düz zincirlidir veya dallidir ve burada alkil, alkenil ve alkinil gruplari mono- veya disübstitüelidir: 2.1 -OH, 2.3 -O-Ci-Ce-alkildir, burada alkil düz zincirlidir veya dallidir, 2.4 -O-Cz-Cg-alkenildir, burada alkenil düz zincirlidir veya dallidir, 2.5 -Ce-Cio-aril, 2.6 -NH-Ci-Ca-alkildir, burada alkil düz zincirlidir veya dallidir, 2.7 -NH-Cz-Cs-alkenildir, burada alkenil düz zincirlidir veya dallidir, 2.8 -NH2 veya 2.9 halojendir ve burada aril grubu Istege bagli olarak sübstitüent 2.1 veya 2.3 veya 2.9 ile mono- veya disübstitüelidir, burada sübstitüentler 2.3, 2.4, 2.6 ve 2.7 ayrica - CN, -amid veya -oksim fonksiyonlariyla sübstitüe edilebilmektedir ve 2.5 ayrica -CN veya amid fonksiyonlariyla sübstitüe edilebilmektedir R4 C3, CHzBr, CH2CN'dir, burada Rsyukandatamnnandgigündn, ve özellikle bilesikler hidroksikuinolin türevleri gruptan seçilmektedir; R2 H, halojen, Ci-Cs alkil ve floro-sübstitüeli Ci'Cs alkil arasindan seçilmektedir R1 Cl'dir ve R2 Br veya H'dir ve tercihen bilesikler iyodokuinolin-8-0I) ==-:-:-: bir tek veya çift bagdir, R1 H, C1-C4 alkil, C(O)O Ci-C4 alkil, C(O) C1-C4 alkil ve C(O)NH Ci- C4 alkilden olusan gruptan seçilmektedir; R2 H ve Ci-C4 alkilden seçilmektedir; R3 H ve Ci-C4 alkilden seçilmektedir; veya R2 ve R3 bir piperidin halkasini olusturmak üzere baglandiklari karbon ve azot atomlariyla birlikte baglanmaktadir, R4 ve R5 bagimsiz olarak H, halojen, hidroksi, Ci-C4 alkil, floro-sübstitüeli C1-C4 alkil ve Ci-C4 alkoksi arasindan seçilmektedir ve X, C ve N'den seçilmektedir, ve asagidakiler gibi tercih edilen bilesikler Siproheptadin (4-(5H-dibenzo-[a,d]siklohepten-5-iliden)-1-metilpiperidin hidroklorür), Amitriptilin (3-(10,11-dihidr0-5H-dibenzo[[a,d]siklohepten-5-iliden)-N,N- dimetiI-l-propanamin), b]piridin-11-ilIden)-1-piperidinkarboksilat, Siklobenzrapin (3-(5H- dibenzo[a,d]siklohepten-5-iIiden)-N,N-dimetiI-l-propanamin). tetrahidroksitrikotek-9-en-8-on) sayili patent basvurusunda açiklanmaktadir.
Tablo 2: c-MAF inhibitörleri Antagonist Purin Analoglari Sigma-Aldrich'ten Purvalanol A ticari adiyla temin edilebilen CigstCINe-,O molekül formülüne sahip 2- (1R-IzopropiI-Z-hidroksietilamin0)-6-(3- kloroanilin)-9-izopr0pilpurin (#P4484, Sigma- Aldrich, St. Louis, M0), Purvalanol B, aminopurvalanol, bilesik 52 (burada purvalanol A'nin izopropili H ile yer degistirmektedir) gibi purvalanoller Sigma-Aldrich'ten Olomoucine (#00886) ticari adiyla temin edilebilen C15H18N60 molekül formülüne sahip 2-(HIdroksietilamino)-6- benziIamino-9-metilpurin, Sigma-Aldrich'ten N9- izopropilolomusin (#10763) ticari adiyla temin edilebilen C17H22N60 moleküler formülüne sahip 2- (2'-HidroksietiIamino)-6-benzilamino-9- izopropilpurin; CVT -3 13 cdk2 inhibitör aktivitesi için referans Gray, N.S. ve ark., Science, Chang, Y.T. ve ark., Chem.
Vesely, J., ve ark., (1994) Eur. J. Biochem., 224, 771- 86,11; Brooks, E.E., ve ark., (1997) Antagonist Purin Analoglari Sigma-Aldrich'ten Roscovitine (#R7772) ticari adiyla temin edilebilen C19H26N60 molekül formülüne sahip 6-(Benzilamin0)-2(R)-[[1- (hidroksimetil)propil]amin0]-9-izopr0pilpurin 2-(R)- il]amin0]-1-butanol, metoksiroskovitin Sigma-Aldrich'ten CGP74514 (#C3353) ticari adiyla temin edilebilen C19H14CIN7 molekül formülüne sahip N2-(cis-2-AminosiklohekziI)-N6-(3- klorofeniI)-9-etiI-9H-purin-2,6-diamin purin analogu (Yukaridaki) CGP74514'ün bir purin analogu olan CGP79807, burada CI CN ile yer degistirmektedir, OH çikarilmaktadir ve siklohekzan halkasinin orto pozisyonu NHz'dir.
Oö-siklohekzilmetil guanin NU2058 gibi purin analogu cdk2 inhibitör aktivitesi için referans Wang, D. ve ark., J. Virol., (2002); Meijer, L., ve ark., (1997) Eur. J. Biochem., 243, 527- Med. Chem. Lett., 9, 91-96 (1999); Dreyer, M.K. ve ark., J. Med.
Med. Chem. Lett., 9, 91-96 (1999); Dreyer, M.K. ve ark., J. Med.
Arris, C.E. ve ark., J. Med. (2000); Davies ve ark, Nature Structural Biology, 9:10, Antagonist Purin Analoglari NU6102 gibi purin analog izopenteniI-adenin Non-purin bazli maddeler Sigma-Aldrich'ten (#10404) ticari adiyla temin edilebilen CisHiiN302 molekül formülüne sahip indirubin-3'-m0noksim gibi indirubinler, indirubin -sulfonat, 5-kloro indirubin Bu tablonun 2. sütununda atifta bulunulan Fischer'e ait oksindol 1 (#IN118, JMAR Chemical, cdk2 inhibitör aktivitesi için referans Arris, C.E. ve ark., J. Med. (2000); Davies, T.G. ve ark., (2002).
Vesely, J., ve ark., (1994) Eur. J. Biochem., 224, 771- Davies, T.G. ve ark., Structure, 9, 389-397 (2001); Marko, D. ve ark., Br. J.
Hoessel, R., ve ark., (1999) Nat. Cell Biol., 1, 60-7; PCT/USOZ/30059 to Hellberg ve ark., WO 03/027275 olarak yayimlanmistir.
Porcs-Makkay, M., ve ark., Tetrahedron 2000, 56, 5893; Org. Process Res.
Non-purin bazli maddeler Indenopirazoller Pirid0(2,3-d)pirimidin-70nlar, Fischer'e ait bilesik 3 Anilinokuinazolin gibi kuinazolinler Sigma-Aldrich'ten GW8510 (#G7791) ticari adiyla temin edilebilen C21H15N503S2 molekül formülüne sahip kaynasik tiyazol, 4-{[(7-Okso-6,7-dihidr0-8H- (2-piridil)benzenesulfonamid gibi tiyazoller Cancer Institute, Bethesda, MD) gibi flavopiridoller ve bir dekloro türevi Nugiel, D.A. ve ark., J. Med. (2001); Nugiel, D.A. ve ark., J. Med. Chem., 45, 5224- 5232 (2002); Yue, E.W. ve ark., J. Med. Chem., 45, Barvian, M. ve ark., J. Med. (2000); Toogood, P.L., Med. (2001).
Sielecki, T.M. ve ark., Bioorg. Med. Chem. Lett., Mettey ve ark., J. Med.
Davis, S.T. ve ark., Science, PCT/U502/30059 to Hellberg ve ark., WO 03/027275 olarak yayimlanmistir.
Carlson, B.A., ve ark., (1996) Cancer Res., 56, 2973-8 Non-purin bazli maddeler Staurosporin (#51016, A.G. Scientific, San Diego, Rialet, V., ve ark., (1991) CA) veya UCN-01 (7-hidroksistaurosporin) National Anticancer Res., 11, 1581- Cancer Institute, Bethesda, MD gibi alkaloidler 90; Wang, Q., ve ark., (1995) Cell Growth Differ., 6, 927- 36, Akiyama, T., ve ark., (1997) Cancer Res., 57, 1495-501, Kawakami, K., ve ark., (1996) Biochem.
Biophys. Res.
Sigma-Aldrich'ten kenpaullone (#K3888) ticari Zaharevitz, D.W. ve ark., d][1]benzazepin-6(5H)-on veya Sigma-Aldrich'ten J. Med. Chem., 42,2909- edilebilen CisHii N303 molekül formülüne sahip 9- Zaharevitz, D.W., ve ark., PCT/U502/30059 to Hellberg ve ark., WO 03/027275 olarak yayimlanmistir.
Bir alkaloid olan CGP 41251 Begemann, M., ve ark., (1998) Anticancer Res., 18, 2275-82; Fabbro ve ark., Pharmacol Ther. 1999 May-Jun;82(2- 3):293-301 Non-purin bazli maddeler A.G. Scientific, Inc'nin bir bölümü olan Meijer, L., ve ark., (1999) Biochemicals.net'ten temin edilebilen Chemistry & Biology, 7, 51- CuHioBrNsOz moleküler formülüne sahip 102- 63; himenialdizin gibi himenialdizinler (San Diego, CA) PCT/U502/30059 to (H-1150) Hellberg ve ark., WO 03/0272 75 olarak yayimlanmistir.
Zimmermann ve ark., September 21, 1994 Tiyazolopirimidin 2 Attaby ve ark., Z.
Naturforsch. 54b, 788-798 ( 1999) Diarilüre Honma, T. ve ark., J. Med. (2001), Honma, T. ve ark., J. Med. Chem., 44, 4615- 4627 (2001).
Sigma-Aldrich'ten Butyrolactone-I (B7930) ticari Kitagawa, M. ve ark., (3-metil-2-butenil)fenil)metiI]-3-(4-hidroksifenil)-5- okso-2-furankarboksilik asit metil ester Aloizin A, Kat No. 128125 (Calbiochem, San Diego, Mettey ve ark., J. Med.
Tercih edilen bir yönde c-MAF inhibitör maddeleri, kemik metastazinin tedavisi ve/veya önlenmesi için kullanilmaktadir. Yine daha çok tercih edilen bir yönde, kemik metastazi osteolitik metastazdir.
C-MAF inhibitör maddeleri genellikle bir farmasötik olarak kabul edilebilir tasiyiciyla birlikte uygulanmaktadir. anlamindadir. Bu tür farmasötik tasiyicilar, bir petrol, hayvan, bitki veya sentetik kökenli olanlar dahil, yer fistigi yagi, soya yagi, mineral yagi, susam yagi ve benzerleri gibi su ve yag gibi steril sivilar olabilmektedir. Su veya sulu tuzlu çözeltiler ve sulu dekstroz ve gliserol çözeltileri, özellikle enjekte edilebilir çözeltiler için olanlar tercihen tasiyicilar olarak kullanilmaktadir. Uygun farmasötik tasiyicilar E.W. Martin, 1995 açiklamanin tasiyicilari, devlet veya federal hükümet düzenleyici teskilati tarafindan onaylananlar veya Amerikan Farmakopesinde veya hayvanlarda ve özellikle Insanlarda kullanimlari için genel olarak kabul edilmis diger farmakopelerde listelenmis olanlardir.
Bu açiklamanin farmasötik bilesiminin istenen farmasötik dozaj formunun üretilmesi için gerekli olan tasiyicilar ve yardimci maddeler, diger faktörlerin arasinda seçilen farmasötik dozaj formuna bagli olacaktir. Farmasötik bilesimin söz konusu farmasötik dozaj formlari, alanda uzman olanlar tarafindan bilinen konvansiyonel yöntemlere göre üretilecektir. Etken maddelerin uygulanmasina yönelik farkli yöntemlerin, kullanilacak eksipiyanlarin ve bunlari üretmeye yönelik proseslerin gözden geçirmesi "Tratado de Farmacia Galénica", C. Fauli' i Trillo, Luzân 5, S.A. 1993 Edition kaynaginda bulunabilmektedir. Farmasötik bilesimlerin örnekleri arasinda oral, topikal veya parenteral uygulama için herhangi bir kati bilesim (tabletler, haplar, kapsüller, granüller vb.) veya sivi bilesim (çözeltiler, süspansiyonlar veya emülsiyonlar) yer almaktadir.
Ayrica farmasötik bilesim, gerekli görülen sekilde dengeleyiciler, süspansiyonlar, koruyucu maddeler, yüzey etken maddeler ve benzerlerini içerebilmektedir.
Ilaçta kullanima yönelik olarak c-MAF inhibitör maddeleri, izole olarak ya da ek etken maddelerle birlikte bir ön ilaç, tuz, solvat veya klatrat formunda bulunabilmektedir ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir eksipiyanla birlikte formüle edilebilmektedir.
Mevcut açiklamada kullanima yönelik tercih edilen eksipiyanlar arasinda sekerler, nisastalar, selülozlar, kauçuklar ve proteinler yer almaktadir. Özel bir yönde açiklanan farmasötik bilesim, bir kati farmasötik dozaj formunda (örnegin tabletler, kapsüller, haplar, granüller, süpozituvarlar, steril kristal veya sivi formlar saglamak için yeniden olusturulabilen amorf katilar vb.), sivi farmasötik dozaj formunda (örnegin çözeltiler, süspansiyonlar, emülsiyonlar, iksirler, losyonlar, merhemler vb.) veya yari kati farmasötik dozaj formunda (jeller, merhemler, kremler ve benzerleri) formüle edilecektir. Açiklanan farmasötik bilesim, oral yol, intravenöz yol, intramüsküler yol, intraarteriyel yol, intramedüller yol, intratekal yol, intraventriküler yol, transdermal yol, subkütan yol, intraperitoneal yol, intranazal yol, enterik yol, topikal yol, sublingual yol veya rektal yol dahil ancak bunlarla sinirli olmamak üzere herhangi bir yolla uygulanabilmektedir. Etken maddelerin uygulanmasi için farkli yollarin, kullanilacak eksipiyanlarin ve imalat proseslerinin gözden geçirmesi Tratado de Farmacia Galénica, C. Fauli i Trillo, Luzân 5, S.A., 1993 Edition ve Remington's Pharmaceutical Sciences (A.R. Gennaro, Ed.), 20th edition, Williams & Wilkins PA, USA (2000) kaynaklarinda bulunabilmektedir. Farmasötik olarak kabul edilebilir tasiyicilarin örnekleri, teknigin bilinen durumunda bilinmektedir ve aralarinda fosfat tamponlu tuzlu su çözeltileri, su, yag/su emülsiyonlari gibi emülsiyonlar, farkli tipte islatma maddeleri, steril çözeltiler vb. yer almaktadir. Söz konusu tasiyicilari içeren bilesimler, teknigin bilinen durumunda bilinen konvansiyonel proseslerle formüle edilebilmektedir.
Nükleik asitlerin (siRNA, siRNA'yi veya shRNA'yi kodlayan polinükleotidler veya negatif c-MAF dominantlari kodlayan polinükleotidler) uygulanmasi halinde, açiklama özellikle söz konusu nükleik asitlerin uygulanmasi için hazirlanmis olan farmasötik bilesimleri öngörmektedir. Farmasötik bilesimler, söz konusu çiplak nükleik asitleri, yani nükleik asitleri vücudun nükleazlari tarafindan parçalara ayrilmaktan koruyan bilesikler olmadan, içerebilmektedir, bu da transfeksiyon için kullanilan reaktiflerle iliskilendirilen toksisitenin ortadan kalkmasi avantajini beraberinde getirmektedir. Çiplak bilesikler için uygun uygulama yollari arasinda intravasküler yol, intratümör yol, intrakraniyal yol, intraperitoneal yol, intrasplenik yol, intramüsküler yol, subretinal yol, subkütan yol, mukozal yol, topikal yol ve oral yol yer almaktadir (Templeton, 2002, DNA Cell Biol., gibi kolesterole konjuge edilmis lipozomlarin parçasini olusturarak veya HIV-1 TAT proteininden türetilen Tat peptidi, D. melanogasterantennapedia proteininin homeodomaininin üçüncü sarmali, herpes simplex virus VP22 proteini, arginin oligomerleri ve peptidleri gibi hücre zarlariyla translokasyonu destekleyebilen bilesiklere konjuge olarak uygulanabilmektedir (Lindgren, A. ve ark., 2000, Trends Pharmacol. Sci, Pharm. Res. 21:389-393). Alternatif olarak polinükloetid, bir plazmid vektörün veya viral vektörün, tercihen adenovirüs bazli vektörlerin parçasini olusturarak, adeno baglantili virüslerde veya murin lösemi virüsü (MLV) veya Ientivirüs (HIV, FIV, EIAV) bazli virüsler gibi retrovirüslerde uygulanabilmektedir.
C-MAF inhibitör maddeleri veya bunlari içeren farmasötik bilesimler, vücut agirligi kilo uygulanabilmektedir. Birim doz, enjeksiyonla, inhalasyonla veya topikal uygulamayla uygulanabilmektedir.
Doz, tedavi edilecek durumun siddetine ve yanitina baglidir ve birkaç gün ve ay ila durum düzelinceye kadar olan süre arasinda degisebilmektedir. Optimum dozaj, hastanin vücudundaki madde konsantrasyonlarinin periyodik olarak ölçülmesiyle belirlenebilmektedir. Optimum doz, hayvan modellerinde önceki in vitro veya 177 w'i/o testlerle elde edilen EC50 degerlerinden belirlenebilmektedir. Birim doz, günde bir kez veya günde bir kezden daha az, tercihen her 2, 4, 8 veya 30 günde birden daha az uygulanabilmektedir. Alternatif olarak genellikle baslangiç dozundan daha az bir miktarda olmak Üzere bir veya birkaç idame dozunun takip ettigi bir baslangiç dozu uygulanabilmektedir. Idame rejimi, hastanin vücut agirliginin kilosu basina günde 0.01 ug - 1.4 mg/kg arasinda degisen bir dozla, örnegin vücut agirliginin kilosu basina içerebilmektedir. Idame dozlari tercihen en fazla her 5, 10 veya 30 günde bir uygulanmaktadir. Tedavi, hastanin muzdarip oldugu rahatsizligin türüne, siddetine ve hastanin durumuna göre farklilik gösterecek olan bir süre kadar devam ettirilmek zorundadir. Tedaviden sonra hastanin seyri, hastaligin tedaviye cevap vermemesi halinde dozun artirilip artirilmayacagini belirlemek veya doz azaltilirsa hastalikta bir iyilesme görülüp görülmedigini veya istenmeyen yan etkilerin gözlemlenip gözlemlenmedigini belirlemek için izlenmek zorundadir.
Yükselmis c-MAF seviyeleri olan kemik metastazli akciger kanserli hastalarda kemik yikiminin tedavisi veya önlenmesi Mevcut bulus sahipleri, c-MAF seviyelerinin metastazda, tercih edilen bir yönde kemik metastazinda yükselmekte oldugunu tespit etmislerdir. Kemige metastaz yapmis ve söz konusu metastazda yükselmis c-MAF seviyeleri olan akciger kanserli hastalar, artan osteoklastik aktivitenin yol açtigi kemik yikimini önlemeyi amaçlayan tedavilerden özellikle yararlanabilmektedirler.
Bu nedenle bir baska yönde akciger kanseri olan ve bir kontrol numunesine göre metastatik tümör dokusu numunesinde yükselmis c-MAF seviyeleri olan bir denekte kemik metastazinin önlenmesi ve/veya tedavi edilmesine yönelik bir tibbi ürünün hazirlanmasinda kemik yikiminin önüne geçmek veya bunu önlemek Için bir maddenin kullanilmasi açiklanmaktadir.
Alternatif olarak akciger kanseri olan ve bir kontrol numunesine göre metastatik tümör dokusu numunesinde yükselmis c-MAF seviyeleri olan bir denekte kemik metastazinin önlenmesi ve/veya tedavi edilmesine yönelik kullanilmak üzere kemik yikiminin önüne geçmek veya bunu önlemek için bir maddenin kullanilmasi açiklanmaktadir.
Alternatif olarak akciger kanseri olan ve bir kontrol numunesine göre metastatik tümör dokusu numunesinde yükselmis c-MAF seviyeleri olan bir denekte yikimin önlenmesi ve/veya tedavi edilmesi yöntemi açiklanmaktadir; söz konusu yöntem, söz konusu denege kemik yikiminin önüne geçmek veya bunu önlemek için bir maddenin uygulanmasini içermektedir. Özel bir yönde kemik metastazi osteolitik metastazdir. Bir baska özel yönde akciger kanseri NSCLC'dir. yükselmis ekspresyon seviyeleri" ve “kontrol numunesi” terimleri ve ifadeleri, açiklanan birinci yönteme göre ayrintili olarak açiklanmistir ve kemik yikiminin önüne geçmeye veya yikimi önlemeye yönelik maddeye esit olarak uygulanabilmektedir.
Mevcut açiklamada açiklanan terapötik yönteme uygun olan kemik yikiminin önüne geçebilen veya yikimi önleyebilen maddeler özellestirilmis tedavi yöntemi baglaminda yukarida ayrintili olarak açiklanmistir.
Referans veya kontrol numunesi, metastaz yapmamis akciger kanserli bir denegin tümör numunesi ya da metastaz yapmamis akciger kanserli deneklerin biyopsi numunelerinde bir tümör dokusu koleksiyonunda ölçülmüs c-MAF geni ekspresyon seviyelerinin medyan degerine karsilik gelen bir tümör numunesidir.
C-MAF seviyelerinin bir kontrol numunesine göre yükselmis olup olmadigini belirleme veya miktarini ölçme yöntemleri, açiklanan birinci yönteme göre ayrintili olarak açiklanmistir ve kemik yikiminin önüne geçmeye veya yikimi önlemeye yönelik maddeye esit olarak uygulanabilmektedir.
Alternatif olarak yukarida bahsedilenler arasindan kemik yikiminin önüne geçmeye veya yikimi önlemeye yönelik birden fazla maddenin metastazi tedavi etmek ve/veya önlemek için kombine edildigi ya da söz konusu maddelerin kalsiyum veya D vitamini gibi diger takviyelerle veya bir hormonla kombine edilebilecegi sekilde bir kombine tedavi yürütülebilmektedir.
Kemik yikiminin önüne geçmeye veya yikimi önlemeye yönelik maddeler genellikle farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasiyiciyla birlikte uygulanmaktadir. “Tasiyici" terimi ve tasiyici türleri ve ayrica uygulanabilecekleri form ve doz yukarida c-MAF inhibitör maddesi için tanimlanmistir ve kemik yikiminin önüne geçmeye veya yikimi önlemeye yönelik maddeye esit olarak uygulanabilmektedir.
Kitler Bir baska yönde söz konusu kanserden muzdarip olan bir denekte akciger kanserinin kemik metastazini tahmin etmeye yönelik bir kit açiklanmaktadir; söz konusu kit asagidakileri içermektedir: a) söz konusu denegin bir numunesinde c-MAF ekspresyon seviyesinin ölçülmesine yönelik araçlar ve b) söz konusu numunedeki c-MAF'in ölçülmüs ekspresyon seviyesinin bir referans c-MAF ekspresyon seviyesiyle karsilastirilmasina yönelik araçlar.
Bir baska yönde akciger kanserinden kaynaklanan kemik metastazindan muzdarip bir denegin klinik sonucunu tahmin etmeye yönelik bir kit açiklanmaktadir; söz konusu kit asagidakileri içermektedir: a) söz konusu denegin bir numunesinde c-MAF ekspresyon seviyesinin ölçülmesine yönelik araçlar ve b) söz konusu numunedeki c-MAF'in ölçülmüs ekspresyon seviyesinin bir referans c-MAF ekspresyon seviyesiyle karsilastirilmasina yönelik araçlar.
Bir baska yönde akciger kanserinden muzdarip bir denege yönelik bir tedavinin belirlenmesine yönelik bir kit açiklanmaktadir; söz konusu kit asagidakileri içermektedir: a) söz konusu denegin bir numunesinde c-MAF ekspresyon seviyesinin ölçülmesine yönelik araçlar ve b) söz konusu numunedeki c-MAF'in ölçülmüs ekspresyon seviyesinin bir referans c-MAF ekspresyon seviyesiyle karsilastirilmasina yönelik araçlar ve c) ölçülmüs ekspresyon seviyesinin referans ekspresyon seviyesiyle karsilastirilmasina göre söz konusu denekte kemik metastazini önlemeye ve/veya azaltmaya yönelik bir tedavinin belirlenmesine yönelik araçlar ve d) ölçülmüs ekspresyon seviyesinin referans ekspresyon seviyesiyle karsilastirilmasina göre söz konusu denekte kemik metastazini önlemeye ve/veya azaltmaya yönelik bir tedaviyi hariç tutmaya yönelik araçlar.
Bir baska yönde asagidakileri içeren bir kit açiklanmaktadir: I) akciger kanserinden muzdarip bir denegin bir numunesindeki c-MAF ekspresyon seviyesinin ölçülmesine yönelik bir reaktif ve ii) önceden kemik metastazi riskiyle iliskili olduklari belirlenmis olan bir veya birden fazla c-MAF geni ekspresyon seviyesi endeksi.
Söz konusu denegin bir numunesinde c-MAF ekspresyon seviyesinin ölçülmesine önceden ayrintili olarak açiklanmistir.
Tercih edilen bir yönde ekspresyonun ölçülmesine yönelik araçlar, c-MAF genine spesifik olarak baglanan ve/veya c-MAF genini amplifiye eden bir dizi probu ve/veya primeri içermektedir. Özel bir yönde akciger kanseri SCLC veya NSCLC kanseridir. Özel bir yönde kit, bir akciger kanseri biyopsisine, dolasim halindeki akciger kanseri hücresine ve dolasim halindeki akciger tümörü DNA'sina uygulanmakla birlikte bunlarla Sinirli degildir.
Mevcut açiklamanin yöntemlerinin tüm özel uygulamalari ve yönleri, açiklanan kitlere ve kullanimlarina uygulanabilmektedir.
Akciger kanserinden muzdarip olan bir denegin bir numunesini tiplendirme Bir baska yönde bulus, akciger kanserinden muzdarip bir denegin bir numunesinin tiplendirilmesine yönelik bir in vitro yöntemle ilgili olup, söz konusu yöntem asagidakileri içermektedir: a) söz konusu denekten bir numune saglanmasi; b) söz konusu numunede c-MAF'in ekspresyon seviyesinin ölçülmesi; c) C-MAF'in ölçülmüs ekspresyon seviyesinin c-MAF ekspresyonunun önceden belirlenmis referans seviyesiyle karsilastirilmasi ile söz konusu numunenin tiplendirilmesi; burada söz konusu tiplendirme, söz konusu denekte kemik metastazi riskiyle ilgili prognostik bilgileri saglamaktadir, burada eger söz konusu genin ekspresyon seviyesi söz konusu genin kontrol numunesindeki ekspresyon seviyesine göre artmissa, söz konusu denegin pozitif bir metastaz tanisi veya daha büyük bir metastaz görülme egilimi vardir.
Söz konusu denegin bir numunesinde c-MAF ekspresyon seviyesinin ölçülmesine önceden ayrintili olarak açiklanmistir. Özel bir uygulamada akciger kanseri SCLC veya NSCLC'dir. Tercih edilen bir uygulamada numune bir tümör dokusu numunesi, bir dolasim halindeki tümör hücresi veya bir dolasim halindeki tümör DNA'sidir.
Akciger kanserinden muzdarip bir denegin siniflandirilmasi vöntemi Bir baska yönde akciger kanserinden muzdarip bir denegin bir kohorta siniflandirilmasi yöntemi açiklanmakta olup, söz konusu yöntem asagidakileri içermektedir: a) söz konusu denegin bir numunesinde c-MAF ekspresyon seviyesinin belirlenmesi; b) söz konusu numunedeki c-MAF ekspresyon seviyesinin c-MAF ekspresyonunun önceden belirlenmis bir referans seviyesiyle karsilastirilmasi ve c) söz konusu denegin numunedeki c-MAF'in söz konusu ekspresyon seviyesine göre bir kohorta siniflandirilmasi.
Söz konusu denegin bir numunesinde c-MAF ekspresyon seviyesinin ölçülmesine önceden ayrintili olarak açiklanmistir. Özel bir yönde akciger kanseri SCLC veya NSCLC'dir. Tercih edilen bir uygulamada numune bir tümör dokusu numunesi, bir dolasim halindeki tümör hücresi veya bir dolasim halindeki DNA'dir. Tercih edilen bir yönde söz konusu kohort, söz konusu referans ekspresyon seviyesine kiyasla c-MAF'in bir karsilastirilabilir ekspresyon seviyesi oldugu belirlenmis olan en az bir farkli kisiyi içermektedir. Bir baska tercih edilen yönde, söz konusu numunedeki c-MAF'in söz konusu ekspresyon seviyesi, söz konusu önceden belirlenmis referans seviyesine göre artmaktadir ve burada kohort üyeleri, artan kemik metastazi riski olanlar olarak siniflandirilmaktadir. Bir baska tercih edilen yönde, söz konusu kohort, bir klinik deneme yapilmasi içindir. Tercih edilen bir yönde numune bir tümör dokusu numunesidir.
Asagidaki örnekler bulusu açiklamaktadir ve kapsamini sinirlandirmamaktadir. Örnekler Metastaz riski, özellikle kemik metastazi riski olan hastalarin belirlenmesi igin c-MAF ve 16922-24'ün klinik önemi ve prognostik degeri c-MAF, farkli akciger kanserli hasta Örnek kohortlarinda test edilmistir. Birinci kohort, akciger kanseri primer tümörlerinin transkriptomunu içeren metastaza yönelik gen ekspresyon proûllerini ve klinik açiklamalari içermektedir ve ikinci kohort, bir doku mikro dizi formundaki akciger tümörü biyopsilerini ve kemik metastazina kadar olan süreyi ve genel sagkalim için klinik açiklamalari içermektedir. Bu tümörler, tüm akciger kanseri alt tiplerini ve evrelerini temsil etmektedir. Birinci kohortta c-MAF geninin ekspresyonu, metastaza kadar olan süre dahil klinik parametrelerle iliskilidir. Benzer sekilde, c-MAF protein ekspresyonu seviyelerini ve bir c-MAF spesifik antikoru ve bir c- MAF lokus spesifik FISH probu kullanilarak immünohistokimya ve floresan in situ hibridizasyonla 16q23 genomik kazanimi belirlemek için, primer tümör tanisi sonrasinda kemik relapsi ve genel sagkalim için klinik açiklamanin kullanilmis oldugu ve c-MAF ekspresyon seviyeleri ve 16q23 genomik kazanimi ve kemik relapsi riski arasindaki iliskinin tesis edildigi akciger primer tümör biyopsilerinin ikinci kümesi (n=74) söz konusudur.
Ayrintili açiklama: Hasta kohortu I Bu tümörlerdeki MAF ekspresyonunun metastazla iliskili olup olmadigini görmek için uygun istatistiksel analizi gerçeklestirdik. EGFR ve KRAS mutantlari ve SCLC ve NSCLC dahil olmak üzere akciger primer tümörlerinin bir kohortunu kullandik. Hastalarin bilgileri asagidaki kaynaktan alinmistir: Chitale D, Gong Y, Taylor BS, Broderick S, Brennan C, Somwar R, Golas B, Wang L, Motoi N, Szoke J, Reinersman JM, Major J, Sander C, Seshan VE, Zakowski MF, Rusch V, Pao W, Gerald W, Ladanyi M. "An integrated genomic analysis of lung cancer reveals Tüm istatiksel analizler, Bioconductor (Gentleman ve ark. (2004)) kullanilarak R'de yapilmistir.
MAF ekspresyonuyla metastaz fenotipini açiklayip açiklayamadigimizi görmek için (Paketli sagkalimdan R fonksiyonu coxph kullanilarak) Cox Orantili Tehlikeler Modellerini ayarladik. C-MAF'in (Affvmetrix dizilerinde c-MAF icin spesifik üc bagimsiz robu kullanarak istatistiksel olarak anlamli bir etkisi vardi. Akciver rimer tümörlerinde c-MAF qen ekspresyonu, Kaplan Meier qrafiGinde qözlemlendiGi ciibi metastazla anlamli sekilde iliskili olmustur ve elde edilen HR ve p-degerivle vurqulanmaktadir (Sekil 1). Hasta kohortu II Benzer sekilde primer tümör tanisi sonrasi kemik relapsi için klinik açiklamanin kullanildigi (74) akciger primer tümörü veri kümesi temin edilmektedir, c-MAF seviyeleri bir c-MAF spesifik antikoru kullanilarak immünohistokimya ile belirlenmekte ve c-MAF ekspresyon seviyeleri ve kemik relapsi riski arasindaki iliski belirlenmektedir. Akciger kanserli hastalardan ikinci parafin gömülü primer tümör dokusundan numuneler alinmistir. Bu numuneler gereken ilgili klinik verilerle ve klinik komitesinin onayiyla birlikte klinik uygulama sirasinda Vali d'Hebron Onkoloji Enstitüsü tarafindan alinmistir.
Bu numuneler asagidaki kriterlere göre seçilmistir: takip sirasinda herhangi bir anda dogrulanmis bir kemik relapsi oldugu tanisi koyulmus lokal hastalikli (M0) hastalara ait 9 numune, sonradan en az 5 yil metastazsiz kaldigi tanisi koyulmus hastalara ait 49 Geriye kalan 16 tümör, daha sonra kemik disinda bir yerde relapsi oldugu tanisi koyulmus hastalardandir (M0).
C-MAF geni ekspresyonuI akciger kanserinde metastaz riskiylei özellikle kemik metastazi riskivle iliskilendirilmektedir.
C-MAF kemik metastazi genlerinin ekspresyonu, yukarida açiklanan akciger kanseri ekspresyon veri kümesinin kullanilmasiyla metastaz dahil olmak üzere klinik parametrelerle iliskili olmustur. Sekil 1'de açiklandigi gibi c-MAF ekspresyonu yüksek metastaz riskiyle iliskilendirilmistir. Bir standart istatiksel analizi takiben bu tümörlerdeki MAF ekspresyonunun metastazla anlamli sekilde iliskili oldugunu gösterdik. EGFR ve KRAS mutantlari ve SCLC ve NSCLC dahil olmak üzere akciger primer tümörlerinin bir kohortu kullanilmistir. Tüm istatiksel analizler, Bioconductor (Gentleman ve ark. (2004)) kullanilarak yapilmistir.
MAF ekspresyonuyla metastaz fenotipini açiklayip açiklayamadigimizi görmek için (Paketli sagkalimdan R fonksiyonu coxph kullanilarak) Cox Orantili Tehlikeler Modellerini ayarlanmistir. C-MAF'in (affymetrix dizilerinde c-MAF için spesifik üç bagimsiz probu kullanarak) istatistiksel olarak anlamli bir etkisi vardi. Akciger primer tümörlerinde c-MAF gen ekspresyonu, Kaplan Meier grafiginde gözlemlendigi gibi metastazla anlamli sekilde iliskili olmustur ve elde edilen HR ve p-degeriyle vurgulanmaktadir (Sekil 1). Tümörler c-MAF ekspresyonunun üç grubuna göre siniflandirilmistir, yüksek (ortalamanin >+1 standart sapmasi), orta (ortalamanin <+1 standart sapmasi ve ortalamanin >-1 standart sapmasi) ve düsük (ortalamanin < -1 standart sapmasi).
Immünohistokimya analizi CMAF immünoboyama, bir Dako Link platformunda arti sarjli cam slaytlarda gerçeklestirilmistir. Parafinden arindirmadan sonra antijen geri kazanimi gerçeklestirilmistir. Endojen peroksidaz söndürülmüstür. Bir anti c-MAF antikor kullanilmistir, ardindan peroksidazla bagli sekonder antikorla inkübasyon gerçeklestirilmistir. C-MAF immünoboyama bir bilgisayarli ölçümle skorlanmaktadir.
Akciger kanserinde metastaz ve kemik metastazi icin c-MAF'in prognostik ve kestirimci degeri Akciger kanserinin metastazi için c-MAF ekspresyonunun prognostik ve kestirimci degeri degerlendirilmistir. C-MAF protein seviyeleri immünohistokimya (IHC) yoluyla degerlendirilmistir. MAF immünoboyama bir bilgisayarli ölçümle skorlanmistir. Her numuneden dokuz temsili görüntü, Nuance FX Multispectral Görüntüleme Sistemi (CRI dalga boyu uzunlugu araliklarda alinmistir. Bir görüntünün bir spektral veri kümesi alinmadan önce bir otomatik pozlandirma rutini gerçeklestirilmistir, bu sirada kaynak yogunlugundaki, filtre iletim verimliligindeki ve kamera hassasiyetindeki degisiklikleri telafi etmek için her dalga boyunca cihaz deliklerinin yaklasik %90'ini doldurmak için gereken maruziyet süresini belirlemek için slaytlarin bir bos alani görüntülenmektedir.
Saf DAB ve Hematoksilin boya renklerinin bir kitapligi olusturulup, Nuance 1.6.4 yazilimi kullanilarak renklerin ayrilmasi için kullanilmistir. Bunun üzerine her yeni vaka için bir referans küpü (farkli dalga boylarinda alinan görüntü yiginlari) elde edilmistir, ardindan ayni maruziyet süreleri kullanilarak üç temsili doku alaninin spektral görüntülemesi gerçeklestirilmistir. Görüntülerin ters evrisiminden sonra spektral veriler, aydinlatmadaki esitsizligin telafi edilmesi için yassi alanlastirilmistir ve arkaplan filtrelenmistir. Pozitif sinyaller, Beer yasasi dönüstürmesi kullanilarak referans küpüne bölünen numune oraninin negatif Iogunun alinmasiyla optik yogunluk ünitelerine iletimden dönüstürülmüstür. Tüm pozitif sinyalleri vurgulayan bir psödo renkli görüntü olusturan bir bilgisayar destekli esik olusturulmustur. Analiz, ilgili bölgelerin ortalama yogunlugundan c-MAF'in kantitatif verilerini saglamistir. Ayrim büyüklük esiginin ayarlanmasi ve bir patolog tarafindan dogrulanmasiyla stromal hücreler veya lenfositler degil, yalnizca epitel hücrelerin nükleuslari (normal ve malignant) otomatik olarak saptanmistir. Her vaka, istatistiksel analiz için ilgili tüm bölgelerin sinyal yogunlugunun ortalama degeri için hesaplanmistir. Bilgisayarli ölçümün çiktisi, c-MAF ekspresyonu için saglamistir. Yüksek ve düsük ekspresyon için kesim degeri (20000 O.D.) standart prosedürlere (AUC egrisi temelinde belirlenmistir. Sonuçlar Tablo 3'te özetlenmektedir.
Kemik metastazi HAYIR Evet <=20,000 0D 61 2 Bu degerler temelinde c-MAF yüksek grubunun düsük gruba göre kemik metastazindan muzdarip olma riskinin olasilik orani OR (herhangi bir zamanda kemik metastazi) = Ardindan çalismanin genel popülasyonunun kemik progresyonu dogrulanmistir (Sekil 2a) ve ardindan iki grubun sagkalimsiz herhangi bir zamanda kemik metastazi olasiligi degerlendirilmistir (Sekil 2b). Sasirtici sekilde çalisma kohortunda c-MAF'I yüksek seviyelerde eksprese eden tümörlerin, düsük seviyeleri eksprese edenlere göre daha az genel sagkalimi vardir.
Analiz edilen ikinci kohort temelinde tanilayici klinik özellikler çikarilmistir. C-MAF kestirimci degerle ve %96.8 negatif kestirimci degerle kemik metastazini tahmin etmektedir.
Akciger tümörlerinde c-MAF geni veya protein ekspresyonu, herhangi bir zamanda metastazla ve kemik metastaziyla anlamli sekilde iliskilidir. kromozom amplifikasyonu, akciger kanserinde metastaz, özellikle kemik metastazi riskini tahmin etmektedir ve bir prognostik göstergesidir.
Ardindan c-MAF geni Iokusunu içeren chr16q22-q24'de bir kazanimin akciger kanserli hastalarda kemik metastazi riskiyle iliskili olup olmadigini belirledik. Bu amaçla hibridizasyon (FISH) probu, 16q22-24 bölgesinin kopya sayisini ölçmek için kullanilmistir. 14q32 probu tümör poliploidi normallestirmek için de kullanilmistir.
Akciger kanserinde kemik metastaziyla Iliskili 16q22-24 CNA kazaniminin prognostik ve kestirimci degeri degerlendirilmistir. 16q23 ve 14q32 kopyalari FISH ile belirlenmistir.
Slaytlar, 16q23 MAF ve 14q321GH prob karisimiyla inkübe edilmistir. Bu SpectrumOrange probu, MAF gen bölgesini desteklemektedir ve yaklasik 2.2 Mb boslukla her biri yaklasik 350 kb olan iki segmentten olusmaktadir. Sentromerik UCSC Genome Browser) yer almaktadir. Bu prob, bes geni VAT1L, CLEC3A, WWOX, SsrRNA ve MAF (sentromerden telomere) desteklemektedir. Paralel olarak CAN'yi belirlemek Için bir CEP16 (sentromerik chr 16) probu (Abbot) kullanilmistir. CEP16 uygulanmis ve görüntüler bir floresan mikroskopla alinmistir.
Sonuçlar Tablo 4 ve 5'te özetlenmistir. kazanimi için pozitif olacaktir.
Kemik metastazi HAYIR Evet 16q23 < :2.5 13 9 Tablo 5: Bir tümör, kesim degeri >= 14q23'ün kopya sayisiyla normallestirilmis Kemik metastazi HAYIR Evet 16q23 <=1.5 4 9 Bu degerler temelinde 16q22-24 kazanim veya CNA kazanim pozitif grubunun negatif gruba göre kemik metastazindan muzdarip olma riskinin olasilik orani hesaplanmistir.
Belirleme için negatif skoru olan kemik metastazli hasta olmadigindan ve tahminle ilgili hatalari önlemek için standart istatistiksel prosedürlere (Glas, A.S. ve ark., 2003, ve parametre yeniden hesaplanmistir. Bu tahmine dayali olarak 16q22-24 kazanim pozitif hastalarin bir kemik metastazindan muzdarip olma OR'si 62.63 (%95 CI 3.42- Kohortun küçük olmasi, tahminleri kesin olmayan hale getirmektedir ancak her kosulda en az 3.42 ve 11.22'Iik klinik olarak ilgili OR dahilindedirler.
Veriler isiginda, 16q23 kazanimlarinin ölçülmesi için FISH kullanilarak tanilayici klinik kestirimci degerle yüksek kemik metastazi riski olan akciger kanserli hastalari tahmin etmektedir.
Tablo 6: Tanilayici klinik özellikler Veriler isiginda, 14q32 kopyalarina normallestirilmis 16q23 kazanimlarinin ölçülmesi için FISH kullanilarak tanilayici klinik özellikler çikarilmistir. 16q22-24 CNA kazanim spesifisiteyle, %692 pozitif kestirimci degerle ve %100.0 negatif kestirimci degerle kemik metastazi riski olan akciger kanserini tahmin etmektedir.
Tanilayici klinik özellikler C1 95 kazanimi herhangi bir zamanda kemik metastazi riskini güçlü sekilde tahmin etmektedir ve bu riskle iliskilendirilmektedir.

Claims (1)

  1. ISTEMLER . Akciger kanserli bir denekte metastaz tanisi ve/veya akciger kanserli bir denekte metastaz görülme egiliminin prognozu için bir in vitro yöntem olup, (i) söz konusu denege ait bir tümör numunesinde c-MAF kopya sayisinin ölçülmesi (ii) önceden elde edilmis kopya sayisinin, söz konusu genin bir kontrol numunesindeki kopya sayisiyla karsilastirilmasini içerir, burada eger söz konusu genin kopya sayisi, söz konusu genin kontrol numunesindeki kopya sayisina göre artmissa, söz konusu denegin pozitif bir metastaz tanisi veya daha büyük bir metastaz görülme egilimi vardir. . Akciger kanserli bir denek için özellestirilmis bir tedavinin tasarlanmasina yönelik bir in vitro yöntem olup, (i) söz konusu denege ait bir tümör numunesinde 16q22-24 kopya sayisinin ölçülmesi ve (ii) önceden elde edilmis kopya sayisinin, söz konusu bölgenin bir kontrol numunesindeki kopya sayisiyla karsilastirilmasini içerir, burada eger 16q22-24 kopya sayisi kontrol numunesine göre kazanilmissa, söz konusu denek metastazi önlemeyi ve/veya tedavi etmeyi amaçlayan bir tedavi almaya yatkindir. . Istem 2'ye göre yöntem olup, metastazi önlemeyi ve/veya tedavi etmeyi amaçlayan tedavi kemoterapi, hormon tedavisi ve immünoterapi; radyoterapi; ameliyat; bir mTor inhibitörü; bir Src kinaz inhibitörü; bir COX-2 inhibitörü; Alpharadin dahil ancak bunlarla sinirli olmamak üzere sistemik tedavilerden olusan gruptan seçilir veya kemik metastazini önlemeyi amaçlayan tedavi bir CCRS antagonistidir. . C-MAF geninin söz konusu denege ait bir tümör numunesinde ampliûye olup olmadiginin belirlenmesini içeren, akciger kanserli bir denekte metastaz tanisi ve/veya akciger kanserli bir denekte metastaz görülme egiliminin prognozu için bir in i//Iro yöntem olup, eger söz konusu gen amplifiye olmussa, söz konusu denegin pozitif bir metastaz tanisi veya daha büyük bir metastaz görülme egilimi vardir, burada c-MAF geninin amplifikasyonu, lokus 16q22-q24'ün amplifikasyonunun belirlenmesi yoluyla belirlenir. Istemler 1, 2 veya 4'ten herhangi birine göre yöntem olup, metastaz kemik metastazidir. Istem 5'e göre yöntem olup, kemik metastazi osteolitik metastazdir. Akciger kanserinden muzdarip bir denegin bir numunesinin tiplendirilmesine yönelik bir in vitro yöntem olup, söz konusu yöntem, a) söz konusu denekten bir tümör numunesi saglanmasi; b) söz konusu numunede c-MAF'in ekspresyon seviyesinin ölçülmesi; c) c-MAF'in ölçülmüs ekspresyon seviyesinin c-MAF ekspresyonunun önceden belirlenmis referans seviyesiyle karsilastirilmasi ile söz konusu numunenin tiplendirilmesini içerir; burada söz konusu tiplendirme, söz konusu denekte kemik metastazi riskiyle ilgili prognostik bilgileri saglar, eger söz konusu genin ekspresyon seviyesi söz konusu genin kontrol numunesindeki ekspresyon seviyesine göre artmissa, söz konusu denegin pozitif bir metastaz tanisi veya daha büyük bir metastaz görülme egilimi
TR2018/19859T 2012-06-06 2013-06-06 Akciğer kanseri metastazının tanısı ve prognozu için yöntem. TR201819859T4 (tr)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261656372P 2012-06-06 2012-06-06

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TR201819859T4 true TR201819859T4 (tr) 2019-01-21

Family

ID=49237517

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TR2018/19859T TR201819859T4 (tr) 2012-06-06 2013-06-06 Akciğer kanseri metastazının tanısı ve prognozu için yöntem.

Country Status (14)

Country Link
US (2) US10006091B2 (tr)
EP (2) EP2859120B1 (tr)
JP (1) JP6386450B2 (tr)
KR (1) KR102226219B1 (tr)
CN (1) CN104603288B (tr)
AU (2) AU2013273242B2 (tr)
BR (1) BR112014030750A2 (tr)
CA (1) CA2875918A1 (tr)
DK (1) DK2859120T3 (tr)
ES (1) ES2705237T3 (tr)
HK (1) HK1208501A1 (tr)
MX (1) MX368513B (tr)
TR (1) TR201819859T4 (tr)
WO (1) WO2013182912A2 (tr)

Families Citing this family (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10047398B2 (en) 2010-10-06 2018-08-14 Fundacio Institut De Recerca Biomedica (Irb Barcelona) Method for the diagnosis, prognosis and treatment of breast cancer metastasis
EP2650682A1 (en) 2012-04-09 2013-10-16 Fundació Privada Institut de Recerca Biomèdica Method for the prognosis and treatment of cancer metastasis
CA2875918A1 (en) 2012-06-06 2013-12-12 Fundacio Institut De Recerca Biomedica (Irb Barcelona) Method for the diagnosis, prognosis and treatment of lung cancer metastasis
US10119171B2 (en) 2012-10-12 2018-11-06 Inbiomotion S.L. Method for the diagnosis, prognosis and treatment of prostate cancer metastasis
KR101872965B1 (ko) * 2012-10-12 2018-06-29 인바이오모션 에스.엘. Ｃ―ｍａｆ를 이용하는 전립선암 전이의 진단, 예후 및 치료 방법
US20140314792A1 (en) 2013-03-15 2014-10-23 Institució Catalana De Recerca I Estudis Avançats Method for the diagnosis, prognosis and treatment of cancer metastasis
WO2014184679A2 (en) * 2013-03-15 2014-11-20 Inbiomotion S.L. Method for the prognosis and treatment of renal cell carcinoma metastasis
JP6577873B2 (ja) * 2013-03-15 2019-09-18 フンダシオ、インスティトゥト、デ、レセルカ、ビオメディカ（イエレベ、バルセロナ）Ｆｕｎｄａｃｉｏ Ｉｎｓｔｉｔｕｔ Ｄｅ Ｒｅｃｅｒｃａ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａ （Ｉｒｂ Ｂａｒｃｅｌｏｎａ） がんの転移の予後診断および処置のための方法
WO2015187612A1 (en) * 2014-06-02 2015-12-10 Valley Health System Method and systems for lung cancer diagnosis
CN104398506A (zh) * 2014-12-09 2015-03-11 厦门大学 雷奈酸锶在制备预防和治疗腺癌药物中的新用途
CA2967224C (en) * 2014-12-11 2023-08-22 Inbiomotion S.L. Binding members for human c-maf
MX2017011633A (es) 2015-03-12 2017-11-02 Moerae Matrix Inc Uso de composiciones que contienen peptido inhibidor de mk2 para tratar cancer de pulmon de celulas no pequeñas con las mismas.
CN105154542B (zh) * 2015-09-01 2018-04-17 杭州源清生物科技有限公司 一组用于肺癌分子分型的基因及其应用
US20190048085A1 (en) * 2016-02-25 2019-02-14 Cell Medica Switzerland Ag Modified cells for immunotherapy
WO2017201043A1 (en) * 2016-05-16 2017-11-23 Concert Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy for treating cancer
AU2017271385B2 (en) 2016-05-25 2023-10-05 Inbiomotion S.L. Therapeutic treatment of breast cancer based on c-MAF status
CN106055921A (zh) * 2016-05-27 2016-10-26 华中农业大学 基于基因表达和药物靶标的药物活性预测与筛选方法
CN106119405B (zh) * 2016-08-31 2019-11-12 广州万德基因医学科技有限公司 一种肺癌的预后标记物、使用该标记预测肺癌预后的方法及应用
CN107058480B (zh) * 2016-12-14 2018-07-13 河北医科大学第四医院（河北省肿瘤医院） 用于诊断肺腺癌的长链非编码rna标志物
CN106815486B (zh) * 2017-01-22 2021-06-04 华中农业大学 一种个性化用药的系统药理学方法
CN107058499B (zh) * 2017-01-25 2020-03-13 河北医科大学第四医院（河北省肿瘤医院） 一种用于肺腺癌诊治的分子标志物
US11654153B2 (en) 2017-11-22 2023-05-23 Inbiomotion S.L. Therapeutic treatment of breast cancer based on c-MAF status
WO2019152788A1 (en) * 2018-02-02 2019-08-08 Morgan And Mendel Genomics, Inc. Robust genomic predictor of breast and lung cancer metastasis
KR102218199B1 (ko) 2019-01-31 2021-02-22 중앙대학교 산학협력단 폐암 전이 예측용 바이오마커 조성물
CN110157792A (zh) * 2019-04-22 2019-08-23 中山大学孙逸仙纪念医院 血清外泌体has_circ_0004771在制备酒精依赖综合征诊断试剂中的应用
CN110093422A (zh) * 2019-05-24 2019-08-06 中国人民解放军西部战区总医院 Linc02159在肺腺癌诊疗中的应用
KR102260915B1 (ko) * 2020-02-19 2021-06-04 한국원자력의학원 폐암의 방사선 치료 예후 예측을 위한 생체 표지자

Family Cites Families (55)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0217822B1 (en) 1985-02-13 1993-05-12 Scios Nova Inc. Human metallothionein-ii promoter in mammalian expression system
US4902505A (en) 1986-07-30 1990-02-20 Alkermes Chimeric peptides for neuropeptide delivery through the blood-brain barrier
US4987071A (en) 1986-12-03 1991-01-22 University Patents, Inc. RNA ribozyme polymerases, dephosphorylases, restriction endoribonucleases and methods
US4904582A (en) 1987-06-11 1990-02-27 Synthetic Genetics Novel amphiphilic nucleic acid conjugates
US5176996A (en) 1988-12-20 1993-01-05 Baylor College Of Medicine Method for making synthetic oligonucleotides which bind specifically to target sites on duplex DNA molecules, by forming a colinear triplex, the synthetic oligonucleotides and methods of use
US5256775A (en) 1989-06-05 1993-10-26 Gilead Sciences, Inc. Exonuclease-resistant oligonucleotides
US5264564A (en) 1989-10-24 1993-11-23 Gilead Sciences Oligonucleotide analogs with novel linkages
EP0910652B1 (en) 1996-04-05 2014-10-08 The Salk Institute For Biological Studies Hormone-mediated methods for modulating expression of exogenous genes in mammalian systems, and products related thereto
EP2003203A1 (en) 1996-12-23 2008-12-17 Immunex Corporation Ligand for receptor activator of nf-kappa b, ligand is member of TNF superfamily
US6316408B1 (en) 1997-04-16 2001-11-13 Amgen Inc. Methods of use for osetoprotegerin binding protein receptors
US6274338B1 (en) 1998-02-24 2001-08-14 President And Fellows Of Harvard College Human c-Maf compositions and methods of use thereof
BR0009043A (pt) 1999-03-15 2002-01-08 Axys Pharm Inc Composto, composição farmacêutica, e, método de tratar uma doença em um animal em que a atividade da cisteìna protease contribui para a patologia e/ou sintomatologia da doença
TW404030B (en) 1999-04-12 2000-09-01 Siliconware Precision Industries Co Ltd Dual-chip semiconductor package device having malposition and the manufacture method thereof
US6287813B1 (en) 1999-04-23 2001-09-11 Cistronics Cell Technology Gmbh Antibiotic-based gene regulation system
ATE387199T1 (de) 2000-01-06 2008-03-15 Merck Frosst Canada Ltd Neue substanzen und verbindungen als protease- inhibitoren
JP4392163B2 (ja) 2000-06-21 2009-12-24 日立化成工業株式会社 肺癌用遺伝子マーカー
US6750015B2 (en) 2000-06-28 2004-06-15 Kathryn B. Horwitz Progesterone receptor-regulated gene expression and methods related thereto
PL222211B1 (pl) 2001-06-26 2016-07-29 Amgen Fremont Inc Przeciwciało przeciwko OPGL, kompozycja je zawierająca, jego zastosowanie i sposób jego wytwarzania, sposób wykrywania poziomu OPGL, kompozycja obejmująca polinukleotydy i komórka gosodarza
AR036375A1 (es) 2001-08-30 2004-09-01 Novartis Ag Compuestos pirrolo [2,3-d] pirimidina -2- carbonitrilo, un proceso para su preparacion, una composicion farmaceutica y el uso de dichos compuestos para la preparacion de medicamentos
GB0121033D0 (en) 2001-08-30 2001-10-24 Novartis Ag Organic compounds
KR100485271B1 (ko) 2002-01-16 2005-04-27 메타볼랩(주) 전사인자 ｃ－ｍａｆ의 전사 활성 억제제로서의 니발레놀및 그를 포함하는 약제학적 조성물
SE0201980D0 (sv) 2002-06-24 2002-06-24 Astrazeneca Ab Novel compounds
DE10235624A1 (de) 2002-08-02 2004-02-19 Aventis Pharma Deutschland Gmbh Endiandric acid H und ihre Derivate, Verfahren zu ihrer Herstellung und Verwendung derselben
WO2005026322A2 (en) 2003-09-11 2005-03-24 Clontech Laboratories, Inc. siRNA ENCODING CONSTRUCTS AND METHODS FOR USING THE SAME
WO2005046731A1 (en) 2003-10-17 2005-05-26 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Interference with c-maf function in multiple myeloma
WO2005060722A2 (en) 2003-12-18 2005-07-07 President And Fellows Of Hardvard College Modulation of immune system function by modulation of polypeptide arginine methyltransferases
TW200526224A (en) 2003-12-22 2005-08-16 Alcon Inc Short form c-Maf transcription factor antagonists for treatment of glaucoma
CA2558808A1 (en) 2004-03-05 2005-09-22 Rosetta Inpharmatics Llc Classification of breast cancer patients using a combination of clinical criteria and informative genesets
WO2006012221A2 (en) 2004-06-25 2006-02-02 The Regents Of The University Of California Target cell-specific short interfering rna and methods of use thereof
WO2006135436A2 (en) 2004-10-22 2006-12-21 University Of Florida Research Foundation, Inc. Inhibition of gene expression and therapeutic uses thereof
US9134237B2 (en) 2005-09-20 2015-09-15 Janssen Diagnotics, LLC High sensitivity multiparameter method for rare event analysis in a biological sample
CA2623405C (en) 2005-09-20 2014-11-25 Immunivest Corporation Methods and composition to generate unique sequence dna probes labeling of dna probes and the use of these probes
WO2007038397A2 (en) 2005-09-26 2007-04-05 Novartis Ag Molecular markers associated with bone metastasis
US8242081B2 (en) 2005-12-06 2012-08-14 Centre National De La Recherche Scientifique Cell penetrating peptides for intracellular delivery of molecules
WO2008098351A1 (en) 2007-02-14 2008-08-21 University Health Network Treatment of d-cyclin mediated proliferative diseases and hemotological malignancies
EP1961825A1 (en) * 2007-02-26 2008-08-27 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Medicale) Method for predicting the occurrence of metastasis in breast cancer patients
JP2010527914A (ja) * 2007-04-26 2010-08-19 クォーク ファーマシューティカルズ インコーポレーティッド 呼吸器系への抑制性核酸分子の治療的送達
CN104231082B (zh) 2007-05-24 2018-12-21 埃博灵克斯股份有限公司 用于治疗骨疾病和病症的针对rank-l的氨基酸序列以及包括其的多肽
US20110123617A1 (en) 2007-10-18 2011-05-26 University Health Network Clioquinol for the treatment of hematological malignancies
US20110144155A1 (en) 2008-06-06 2011-06-16 Schimmer Aaron D 8-hydroxyquinoline derivatives for the treatment of hematological malignancies
US8728738B2 (en) * 2008-07-02 2014-05-20 Assistance Publique-Hopitaux De Paris Method for predicting clinical outcome of patients with non-small cell lung carcinoma
US10047398B2 (en) 2010-10-06 2018-08-14 Fundacio Institut De Recerca Biomedica (Irb Barcelona) Method for the diagnosis, prognosis and treatment of breast cancer metastasis
EP2671076A4 (en) 2011-02-04 2016-11-16 Bioarray Genetics Inc METHODS OF USING GENE EXPRESSION SIGNATURES FOR SELECTING A TREATMENT METHOD, PREDICTING PROGNOSIS, SURVIVAL, AND / OR PREDICTING A RESPONSE TO TREATMENT
EP2650682A1 (en) 2012-04-09 2013-10-16 Fundació Privada Institut de Recerca Biomèdica Method for the prognosis and treatment of cancer metastasis
CA2875918A1 (en) 2012-06-06 2013-12-12 Fundacio Institut De Recerca Biomedica (Irb Barcelona) Method for the diagnosis, prognosis and treatment of lung cancer metastasis
US10119171B2 (en) 2012-10-12 2018-11-06 Inbiomotion S.L. Method for the diagnosis, prognosis and treatment of prostate cancer metastasis
KR101872965B1 (ko) 2012-10-12 2018-06-29 인바이오모션 에스.엘. Ｃ―ｍａｆ를 이용하는 전립선암 전이의 진단, 예후 및 치료 방법
WO2014184679A2 (en) 2013-03-15 2014-11-20 Inbiomotion S.L. Method for the prognosis and treatment of renal cell carcinoma metastasis
US20140314792A1 (en) 2013-03-15 2014-10-23 Institució Catalana De Recerca I Estudis Avançats Method for the diagnosis, prognosis and treatment of cancer metastasis
JP6577873B2 (ja) * 2013-03-15 2019-09-18 フンダシオ、インスティトゥト、デ、レセルカ、ビオメディカ（イエレベ、バルセロナ）Ｆｕｎｄａｃｉｏ Ｉｎｓｔｉｔｕｔ Ｄｅ Ｒｅｃｅｒｃａ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａ （Ｉｒｂ Ｂａｒｃｅｌｏｎａ） がんの転移の予後診断および処置のための方法
CN105980576B (zh) 2013-10-09 2021-07-16 生物医学研究机构基金会 用于源自乳腺癌的骨转移癌的预后和治疗的方法
MX2016016756A (es) 2014-06-17 2017-11-02 Igenomix S L Terapia con células madre en patologías endometriales.
CA2967224C (en) 2014-12-11 2023-08-22 Inbiomotion S.L. Binding members for human c-maf
AU2017271385B2 (en) 2016-05-25 2023-10-05 Inbiomotion S.L. Therapeutic treatment of breast cancer based on c-MAF status
US11654153B2 (en) 2017-11-22 2023-05-23 Inbiomotion S.L. Therapeutic treatment of breast cancer based on c-MAF status

Also Published As

Publication number Publication date
CN104603288B (zh) 2018-12-14
JP2015521050A (ja) 2015-07-27
JP6386450B2 (ja) 2018-09-05
US11352673B2 (en) 2022-06-07
EP2859120B1 (en) 2018-11-14
AU2019204269A1 (en) 2019-07-04
US20190119757A1 (en) 2019-04-25
CN104603288A (zh) 2015-05-06
KR102226219B1 (ko) 2021-03-10
BR112014030750A2 (pt) 2017-08-22
MX2014014802A (es) 2015-05-11
EP3467124A1 (en) 2019-04-10
HK1208501A1 (en) 2016-03-04
WO2013182912A3 (en) 2014-02-20
MX368513B (es) 2019-10-07
AU2013273242A1 (en) 2014-12-18
DK2859120T3 (en) 2019-01-14
US10006091B2 (en) 2018-06-26
US20150152506A1 (en) 2015-06-04
EP2859120A2 (en) 2015-04-15
KR20150028965A (ko) 2015-03-17
AU2013273242B2 (en) 2019-04-11
WO2013182912A2 (en) 2013-12-12
ES2705237T3 (es) 2019-03-22
CA2875918A1 (en) 2013-12-12
WO2013182912A4 (en) 2014-04-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11352673B2 (en) Method for the diagnosis, prognosis and treatment of lung cancer metastasis
US20210190784A1 (en) Method for the prognosis and treatment of cancer metastasis
US20210317534A1 (en) Method for the prognosis and treatment of cancer metastasis
US20210388452A1 (en) Method for the diagnosis, prognosis and treatment of prostate cancer metastasis
EP3553186B1 (en) Method for the diagnosis, prognosis and treatment of prostate cancer metastasis
US20170101683A1 (en) Method for the Prognosis and Treatment of Cancer Metastasis
US20160032399A1 (en) Method for the Prognosis and Treatment of Renal Cell Carcinoma Metastasis