TR201815856T4 - Bradikinin-aracılı rahatsızlıkların değerlendirilmesi ve tedavisi. - Google Patents

Bradikinin-aracılı rahatsızlıkların değerlendirilmesi ve tedavisi. Download PDF

Info

Publication number
TR201815856T4
TR201815856T4 TR2018/15856T TR201815856T TR201815856T4 TR 201815856 T4 TR201815856 T4 TR 201815856T4 TR 2018/15856 T TR2018/15856 T TR 2018/15856T TR 201815856 T TR201815856 T TR 201815856T TR 201815856 T4 TR201815856 T4 TR 201815856T4
Authority
TR
Turkey
Prior art keywords
hmwk
cleaved
subject
disease
kininogen
Prior art date
Application number
TR2018/15856T
Other languages
English (en)
Inventor
Daniel Sexton J
FAUCETTE Ryan
Jon Kenniston A
Conley Greg
Nixon Andrew
Tenhoor Christopher
Adelman Burt
Chyung Yung
Original Assignee
Dyax Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Dyax Corp filed Critical Dyax Corp
Publication of TR201815856T4 publication Critical patent/TR201815856T4/tr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/36—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against blood coagulation factors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/573—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for enzymes or isoenzymes
    • G01N33/5735—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for enzymes or isoenzymes co-enzymes or co-factors, e.g. NAD, ATP
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/10—Antioedematous agents; Diuretics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/56—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving blood clotting factors, e.g. involving thrombin, thromboplastin, fibrinogen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/745—Assays involving non-enzymic blood coagulation factors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/914—Hydrolases (3)
    • G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • G01N2333/95—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99)
    • G01N2333/964—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue
    • G01N2333/96425—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals
    • G01N2333/96427—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals in general
    • G01N2333/9643—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals in general with EC number
    • G01N2333/96433—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • G01N2333/96441—Serine endopeptidases (3.4.21) with definite EC number
    • G01N2333/96455—Kallikrein (3.4.21.34; 3.4.21.35)
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/06—Gastro-intestinal diseases
    • G01N2800/065—Bowel diseases, e.g. Crohn, ulcerative colitis, IBS
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/08—Hepato-biliairy disorders other than hepatitis
    • G01N2800/085—Liver diseases, e.g. portal hypertension, fibrosis, cirrhosis, bilirubin
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/10—Musculoskeletal or connective tissue disorders
    • G01N2800/101—Diffuse connective tissue disease, e.g. Sjögren, Wegener's granulomatosis
    • G01N2800/102—Arthritis; Rheumatoid arthritis, i.e. inflammation of peripheral joints
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/70—Mechanisms involved in disease identification

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Dermatology (AREA)

Abstract

Mevcut açıklama, bir süjenin, örneğin, bir pKal-aracılı veya bradikinin-aracılı rahatsızlık riskinde olan veya bundan muzdarip bir süjenin, süjenin bir numunesindeki bozulmamış ve/veya klevaj edilmiş kininojenin değerlerine (örneğin, yüzdelerine) dayalı olarak değerlendirilmesinin yöntemlerini sağlamaktadır. Sağlanan yöntemler, plazma kallikrein-aracılı anjiyoödemi (KMA) veya pKal'in aracılık ettiği diğer hastalıkları olan hastaların, değerlendirmede ve tedavide faydalı analizine izin verir. Bu tip yöntemler, klevaj edilmiş kininojeni veya bozulmamış kininojeni tercihli olarak bağlayan bir saptama ajanının kullanımını içerebilir.

Description

TARIFNAME BRADIKININ-ARACILI RAHATSIZLIKLARIN DEGERLENDIRILMESI VE TEDAVISI ILGILI BASVURULARA ÇAPRAZ BASVURU ALT YAPI Plazma kallikrein (pKal) dolasimdaki birincil bradikinin-üreten enzimdir. pKaI'in aktivasyonu, herediter anjiyoödem (HAE) ile iliskili hastalik patolojisine baglanmis olan temas sistemi vasitasiyla meydana gelir. Bradikinin, agrinin, enflamasyonun, ödemin ve anjiyojenezin kilit bir aracisidir.
Bradikinin ve kallikrein gibi kininojenler kininin öncülleridir. Uç birlestirici varyantlar olan iki tip insan kininojeni bulunmaktadir, yüksek moleküler-agirlikli kininojen (HMWK) ve düsük moleküler-agirlikli kininojen (LMWK). HMWK esas olarak koagülasyon ve enflamasyon üzerinde bir kofaktör görevi görür ve pKaI-aracili bradikinin üretimi için tercih edilen substrattir. Hem HMWK'Ier hem LMWKIIer sistein proteazi inhibitörleridir. tip 1 reseptör-uyarimli retinal vasküler geçirimlilige aracilik ettigini belirtmektedir. Zhang kisminin ayrica LMWK'de de sunuldugunu açiklamaktadir.
BULUSUN KISA AÇIKLAMASI Bulus, bir plazma kallikrein (pKal)-aracili rahatsizlik riskinde olan veya buna sahip olan bir süjenin tanimlanmasi için bir yöntem saglamakta olup, yöntem asagidakileri içermektedir: bir süjenin bir numunesinde bir klevaj edilmis yüksek moleküler agirlikli kininojenin (HMWK) bir seviyesinin ve opsiyonel olarak bozulmamis bir (HMWK) seviyesinin ölçülmesi; klevaj edilmis HMWK'nin bir degerinin belirlenmesi; ve klevaj edilmis HMWK degeri bir referans degerinin üzerindeyse, süjenin bir pKaI-aracili rahatsizlik riski altinda veya buna sahip olarak tanimlanmasi olup, burada referans degeri, saglikli bir süjedeki klevaj edilmis HMWK degerini ifade etmektedir; ve burada pKaI-aracili rahatsizlik herediter anjiyoödem (HAE), romatoid artirit, ülseratif kolit veya Crohn hastaligidir.
Bulus ayrica, bir süjedeki bir pKaI-aracili rahatsizligin bir tedavisinin degerlendirilmesi için bir yöntem saglamakta olup, yöntem asagidakileri içermektedir: süjeden, tedaviden önce ve sonra veya tedavi süresi esnasinda alinan numunelerdeki klevaj edilmis bir HMWK'nin seviyelerinin ve opsiyonel olarak bozulmamis bir HMWK'nin seviyelerinin ölçülmesi; her bir numunedeki klevaj edilmis HMWK”nin bir degerinin, ayni numunedeki klevaj edilmis ve opsiyonel olarak bozulmamis HMWK seviyelerine dayali olarak belirlenmesi; ve numunelerdeki klevaj edilmis bir HMWK'nin degerlerde, tedaviden önce ve sonra veya tedavi süresi boyunca degisikliklere dayali olarak tedavinin etkililiginin degerlendirilmesi, burada pKaI-aracili rahatsizlik herediter anjiyoödem (HAE), romatoid artirit, ülseratif kolit veya Crohn hastaligidir.
Bulus ayrica, bir süjedeki bir pKaI-aracili rahatsizligin tedavisinde kullanim için bir farmasötik bilesim saglamakta olup, burada bilesim bir pKaI inhibitörü ve farmasötik olarak kabul edilen bir tasiyici içerir, burada süje, saglikli bir süjedeki klevaj edilmis HMWK degerini ifade eden bir referans degerinin üzerinde olan, bir klevaj edilmis yüksek moleküler agirlikli kininojen (HMWK) degerine sahiptir; ve burada pKal-aracili hastalik herediter anjiyoödem (HAE), romatoid artirit, ülseratif kolit veya Crohn hastaligidir.
Plazma kallikrein (pKal), temas sisteminin bir serin proteaz bilesenidir ve dolasimdaki birincil bradikinin-üreten enzimdir. Temas sistemi, ya faktör Xlla tarafindan yabanci veya negatif yüklü yüzeylere maruz kalma üzerine veya endotelyal hücre yüzeyleri üzerinde prolilkarboksipeptidazlar tarafindan aktive edilir (Sainz LM. et al., Thromb aktivasyonu vasitasiyla intrinsik koagülasyonu güçlendirir ve proenflamatuar nonapeptit bradikinin üretimi vasitasiyla enflamasyonu arttirir. Dolasimdaki birincil kininojenaz olarak, pKaI büyük ölçüde vaskülatürdeki bradikinin üretiminden sorumludur. Plazma kallikreinin ana dogal inhibitörü olan C1-inhibitörü proteininde (Ci-INH) genetik bir yoksunluk, herediter anjiyoödeme (HAE) yol açar. HAE hastalari, siklikla bilinmeyen tetikler tarafindan hizlandirilan akut agrili ödem ataklarindan muzdariptir (Zuraw B.L. et veya genetik çalismalarin kullanimi yoluyla, plazma kallikrein-kinin sistemi (plazma KKS) çesitli hastaliklara dahil olmustur.
Burada tarif edildigi üzere, bozulmamis (1-zincirli) ve klevaj edilmis (2-zincirli) yüksek moleküler agirlikli kininojenin (HMWK), ya bozulmamis kininojeni veya klevaj edilmis kininojeni spesifik olarak (yani, tercihen) baglayan ve opsiyonel olarak LMWK”yi baglamayan bir saptama reaktifi (örnegin, bir antikor) kullanilarak saptanmasi için bir Western blot analizi gelistirilmistir. Bu tip bir saptama belirteci, hasta plazmasinda 1- zincirli ve 2-zincirli HMWK'kin nispi miktarlarini izlemek için kullanilabilir. Bu yöntemin uygulanmasiyla, bir hasta numunesindeki klevaj edilmis kininojen seviyesinin (örnegin, yüzde), ödemli HAE ataklari gibi asiri pKal aktivasyonunun aracilik ettigi bilinen hastalik durumlarinda yükseldigi bulunmustur. Diger hastaliklari olan hastalarin plazmasindaki klevaj edilmis kininojen yüzdesi müteakiben, aktif pKal'in hastalikla iliskili olup olmadiginin belirlenmesi için test edilebilir. Test edilmis ve saglikli plazmaya göre klevaj edilmis kininojen yükselmelerine sahip oldugu gösterilmis olan diger hastaliklara romatoid artirit (RA), ülseratif kolit (UC) ve Crohn hastaligi dahildir.
Dolayisiyla, mevcut açiklamanin bir yönü, bir pKaI-aracili rahatsizlik riskinde olan veya bu rahatsizliga sahip bir süjenin tanimlanmasi için bir yöntemle ilgili olup yöntem asagidakileri içermektedir: (a) bir süjenin bir numunesindeki (örnegin, bir kan numunesi veya bir plazma numunesi) bir klevaj edilmis kininojenin (örnegin, HMWK) bir seviyesinin ve bir bozulmamis kininojenin (örnegin, HMWK) bir seviyesinin, örnegin, bir Western blot analizi vasitasiyla ölçülmesi; (b) numunede klevaj edilmis kininojenin bir degerinin (örnegin, yüzde), bozulmamis kininojenin bir degerinin (örnegin, yüzde) veya her ikisinin belirlenmesi; ve (c) eger klevaj edilmis kininojenin degeri, bozulmamis kininojenin degeri veya her ikisi bir referans degerinden saparsa, süjenin bir pKal- aracili rahatsizlik riskinde olarak veya bu rahatsizliga sahip olarak tanimlanmasi. Bazi örneklerde, numunedeki klevaj edilmis kininojenin yüzdesi belirlenir ve klevaj edilmis kininojenin yüzdesi bir referans degerindeyse veya bu degerin üzerindeyse, süje hedef hastalik riskinde veya bu hastaliga sahip olarak tanimlanir.
Bazi uygulamalarda, klevaj edilmis kininojenin ve bozulmamis kininojenin seviyeleri, ya klevaj edilmis veya bozulmamis kininojeni spesifik olarak (örnegin, tercihen) baglayan bir saptama ajani (örnegin, bir antikor) tarafindan ölçülür. Bu tip bir saptama ajani (örnegin, bir antikor) hem bozulmamis hem klevaj edilmis kininojeni baglayabilir ama LMWK'yi baglamaz. Diger uygulamalarda, klevaj edilmis kininojenin ve bozulmamis kininojenin seviyeleri, bozulmamis kininojene kiyasla klevaj edilmis kininojeni spesifik olarak baglayan veya klevaj edilmis kininojene kiyasla bozulmamis kininojeni spesifik olarak baglayan bir saptama ajani (örnegin, bir antikor) tarafindan ölçülür. Bir örnekte, saptama ajani, bozulmamis kininojene kiyasla klevaj edilmis kininojeni spesifik olarak baglayan bir antikordur. Bir baska örnekte, saptama ajani, klevaj edilmis kininojenin, LMWKide mevcut olmayan hafif zincirinin C-ucuna baglanan bir antikordur. pKaI-aracili rahatsizlik herediter anjiyoödem (HAE), romatoid artirit, ülseratif kolit veya Crohn hastaligi olabilir. Süje bir pKal-aracili rahatsizlik riskinde veya buna sahip olarak tanimlanirsa, burada tarif edilen sekildeki yöntem ayrica, bir pKaI inhibitörünün etkili bir miktarinin süjeye verilisini içerebilir. Bazi örneklerde, pKaI inhibitörü DX-88, EPIKAL-2 veya DX-2930'dur.
Bazi uygulamalarda, numune, bir pKaI-aracili rahatsizligin, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, ödem, tekrarlayan sisme ataklari, burada söz konusu sismenin tamamen veya baskin olarak periferik oldugu sismeler, ürtiker, kizariklik, agri ve enfeksiyon kaniti yoklugunda sisme; veya histamin-araciIi-olmayan ödem dahil olmak üzere bir semptomuna sahip olan bir süjedendir. Diger uygulamalarda, numune, numunenin alindigi esnada bir pKaI-aracili rahatsizligin hiç semptomuna sahip olmayan, bir pKal- aracili rahatsizligin bir semptomunun hiç hikayesi olmayan veya bir pKaI-aracili rahatsizligin hiç hikayesi olmayan bir süjedendir. Alternatif veya ek olarak, süje bir anti- histamin terapisine, bir kortikosteroid terapisine veya her ikisine de dirençlidir.
Bir baska yönde, mevcut açiklama, bir rahatsizligin bir pKaI-inhibitörüyle tedaviye duyarli olup olmadiginin belirlenmesi için bir yöntem saglamakta olup yöntem asagidakileri içermektedir: (a) rahatsizligi olan bir süjenin bir numunesinde (örnegin, bir kan numunesi veya bir plazma numunesi) bir klevaj edilmis kininojenin (örnegin, HMWK) bir seviyesinin ve bir bozulmamis kininojenin (örnegin, HMWK) bir seviyesinin ölçülmesi; (b) numunede klevaj edilmis kininojenin bir degerinin (örnegin, yüzde), bozulmamis kininojenin bir degerinin (örnegin, yüzde) veya her ikisinin belirlenmesi; ve (c) klevaj edilmis kininojenin degeri, bozulmamis kininojenin degeri veya her ikisi bir referans degerinden saparsa, rahatsizligin bir pKaI inhibitörüyle tedaviye duyarli olarak tanimlanmasi. Bir örnekte, klevaj edilmis kininojenin yüzdesi belirlenir ve klevaj edilmis kininojenin yüzdesi bir referans degerindeyse veya üzerindeyse, hastalik tedaviye duyarli olarak tanimlanir.
Bazi uygulamalarda, klevaj edilmis kininojenin ve bozulmamis kininojenin seviyeleri, bozulmamis kininojene kiyasla klevaj edilmis kininojeni spesifik olarak baglayan veya klevaj edilmis kininojene kiyasla bozulmamis kininojeni spesifik olarak baglayan br saptama ajani (örnegin, bir antikor) tarafindan Ölçülür. Bazi örneklerde, saptama belirteci, bozulmamis kininojene kiyasla klevaj edilmis kininojeni spesifik olarak baglayan bir antikordur. Diger örneklerde, saptama belirteci, klevaj edilmis kininojenin hafif zincirinin C-ucuna baglanan bir antikordur. Burada tarif edilen yöntemlerin herhangi birinde, bozulmamis kininojen ve klevaj edilmis kininojen seviyeleri Western blot analizi ile ölçülebilir.
Rahatsizlik bir pKaI inhibitörünün tedavisine duyarli olarak tanimlanirsa, yöntem ayrica süjeye, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, DX-88, EPIKAL-2 veya DX-2930'u içeren bir pKaI inhibitörünün etkili bir miktarinin verilisini içerebilir.
Yine bir baska örnekte, mevcut açiklama, bir süjedeki bir pKaI-aracili rahatsizligin bir tedavisinin degerlendirilmesi için bir yöntem saglamakta olup yöntem asagidakileri içerir: (a) süjeden tedaviden önce ve sonra veya tedavi süreci esnasinda toplanan numunelerde (örnegin, kan numuneleri veya plazma numuneleri) bir klevaj edilmis kininojenin (örnegin, HMWK) ve bir bozulmamis kininojenin (örnegin, HMWK) seviyelerinin ölçülmesi; (b) her bir numunede klevaj edilmis kininojenin bir degerinin (örnegin, yüzde), bozulmamis kininojenin bir degerinin (örnegin, yüzde) veya her ikisinin, ayni numunedeki klevaj edilmis ve bozulmamis kininojen seviyelerine dayali olarak belirlenmesi; ve (c) tedaviden önce ve sonra veya tedavi süreci boyunca klevaj edilmis ve/veya bozulmamis kininojen degerindeki degisikliklere dayali olarak tedavinin etkililiginin degerlendirilmesi. Örnegin, tedaviden sonra veya tedavinin süreci boyunca klevaj edilmis kininojen yüzdesinde bir azalma, tedavinin süje üzerinde etkili oldugunu göstermektedir. Bazi uygulamalarda, tedavi süjeye, bir pKal inhibitörünün, örnegin, DX- 88, EPlKAL-2 veya DX-2930'un etkili bir miktarinin verilisini içerir.
Burada tarif edilen degerlendirme yöntemlerinin herhangi birinde, klevaj edilmis kininojen ve bozulmamis kininojen seviyeleri, bozulmamis kininojene kiyasla klevaj edilmis kininojeni spesifik olarak baglayan veya klevaj edilmis kininojene kiyasla bozulmamis kininojeni spesifik olarak baglayan bir saptama ajani (örnegin, bir antikor) tarafindan ölçülebilir. Bazi örneklerde, saptama belirteci, bozulmamis kininojene kiyasla klevaj edilmis kininojeni spesifik olarak baglayan bir antikordur. Diger örneklerde, saptama ajani, klevaj edilmis kininojenin hafif zincirinin C-ucuna baglanan bir antikordur. Burada tarif edilen yöntemlerin herhangi birinde, bozulmamis kininojen ve klevaj edilmis kininojen seviyeleri, Western blot analizi ile Ölçülebilir.
Bazi uygulamalarda, pKal-aracili rahatsizlik herediter anjiyoödem (HAE), romatoid artirit, ülseratif kolit veya Crohn hastaligidir.
Ayrica, mevcut açiklama, bir numunede klevaj edilmis kininojenin bir degerinin, bozulmamis kininojenin bir degerinin veya her ikisinin saptanmasi için, (a) bozulmamis ve klevaj edilmis kininojen ihtiva eden bir numunenin (örnegin, bir kan numunesi veya bir plazma numunesi), saptama ajaninin, bozulmamis kininojene kiyasla spesifik olarak klevaj edilmis kininojeni bagladigi veya bozulmamis kininojene kiyasla klevaj edilmis kininojeni spesifik olarak bagladigi saptama ajaniyla bozulmamis ve klevaj edilmis kininojen arasinda etkilesime olanak saglayan kosullar altinda bir saptama belirteciyle temas ettirilmesini; (b) numunedeki klevaj edilmis kininojen ve/veya bozulmamis kininojen seviyesinin, saptama belirteciyle etkilesimlerine dayali olarak ölçülmesini; ve (c) numunede klevaj edilmis kininojenin bir degerinin (örnegin, yüzde), bozulmamis kininojenin bir degerinin (örnegin, yüzde) veya her ikisinin, klevaj edilmis kininojen ve bozulmamis kininojen seviyelerine dayali olarak belirlenmesi. Bazi uygulamalarda, saptama belirteci, bozulmamis kininojene kiyasla klevaj edilmis kininojene spesifik olarak baglanan antikor gibi bir antikordur veya klevaj edilmis kininojenin hafif zincirinin C-ucuna baglanan bir antikordur. Bazi uygulamalarda, bozulmamis kininojenin ve klevaj edilmis kininojenin miktarlari Western blot analizi ile ölçülür.
Ayrica, mevcut açiklamanin kapsami dahilinde (i) bir pKal-aracili hastaligin tedavisi için, ihtiyaç duyan, süjenin bir referans degerinden sapan bir klevaj edilmis kininoejn degerine (örnegin, yüzde), bir bozulmamis kininojen degerine (örnegin, yüzde) veya her ikisine sahip olan bir süjeye burada tarif edilen sekildeki bir pKal inhibitörünün verilisini içeren bir yöntem, (ii) bir referans degere kiyasla, klevaj edilmis kininojenin ve/veya bozulmamis kininojenin sapmis bir degerine sahip bir süjenin bir pKal-aracili hastaligin tedavisinde kullanim için, bir pKal inhibitörü ve farmasötik olarak kabul edilen bir tasiyici içeren bir farmasötik bilesim ve (iii) bir pKal-aracili hastaligin, örnegin, HAE'nin tedavisinde kullanim için bir ilacin üretimi için farmasötik bilesimin kullanimi bulunmaktadir. Bazi uygulamalarda, klevaj edilmis ve/veya bozulmamis kininojenin degeri, numunedeki klevaj edilmis ve/veya bozulmamis kininojenin yüzdesidir.
Asagidaki uygulamalar da mevcut açiklamanin kapsami dahilindedir: Burada, br süjenin, örnegin, bir pKal-aracili veya bradikinin-aracili rahatsizlik riskinde olan veya bu rahatsizliktan muzdarip bir süjenin degerlendirilmesinin yöntemleri saglanmaktadir. Saglanan yöntemler, plazma kallikrein-aracili anjiyoödemi (KMA) veya pKal'in aracilik ettigi diger hastaliklari olan hastalarin, degerlendirme ve tedavide faydali olan analizine izin vermektedir.
Mevcut açiklamanin uygulamalari bir biyomarkör ve bunun hastalarin, örnegin, plazma kallikrein tarafindan üretilen bradikininin neden oldugu ödemden muzdarip hastalarin tanimlanmasinda ve tedavisinde kullanimini saglamaktadir. Burada açiklanan yöntemler, bilesimler ve cihazlar bir takim sekillerde faydalidir. Örnegin, bir pKal markörünün seviyeleri, yükselmis temas sistemi aktivasyonuyla iliskili rahatsizliklarin tanimlanmasi için kullanilabilir. Ilk taramayi, örnegin, hastaligin klinik öncesi modellerinde plazma kallikrein inhibitörleriyle (örnegin, DX-88, EPIKAL2 veya DX- 2930) in vitro veya in vivo testler takip edebilir. Burada açiklanan bir markör ayrica, bir farmakodinamik biyomarkör olarak veya baska durumlarda bir süjenin bir kallikrein inhibitörüne yanitinin izlenmesi için de kullanilabilir. Burada açiklanan bir markör, plazma kallikreinin aracilik ettigi hastaliklarin tedavisinin saglanmasi için bir refakatçi teshiste kullanilabilir, bir pKal-aracili veya bradikinin-aracili rahatsizligin, örnegin, asagidaki hastaliklarin profilaktik terapisi esnasinda dozlamayi yönetebilir; HAE, histamin-bagimli-olmayan idiopatik anjiyoödem, romatoid artirit, Crohn hastaligi, ülseratif kolit, Iupus, Alzheimer hastaligi, septik sok, yanik yaralanmasi, beyin iskemisi/reperfüzyon yaralanmasi, serebral ödem, diyabetik retinopati, diyabetik nefropati, maküler ödem, vaskülit, arteriyel veya venöz tromboz, ventriküler destek cihazlariyla veya stentlerle iliskili tromboz, trombozlu heparin-indüklü trombositopeni, tromboembolik hastalik ve stabil olmayan gögüs anjinli koroner kalp hastaligi, ödem, göz hastaligi, gut, bagirsak hastaligi, oral mukozit, nörpatik agri, enflamatuar agri, spinal stenoz-dejeneratif omurilik hastaligi, ameliyat sonrasi bagirsak tikanmasi, aortik anevrizma, osteoartirit, herediter anjiyoödem, akciger embolisi, felç, kafa travmasi veya peri-tümör beyin ödemi, sepsis, akut orta serebral arter (MCA) iskemik olayi (felç), restenoz (örnegin, anjiyoplastiden sonra), sistemik Iupus eritematoz nefrit, bir otoimmün hastaligi, bir enflamatuar hastalik, bir kardiyovasküler hastalik, bir nörolojik hastalik, yanlis protein katlanmasiyla iliskili bir hastalik, anjiyojenezle iliskili bir hasrtalik, hipertansif nefropati ve diyabetik nefropati, alerjik ve solunum hastaliklari (örnegin, anafilaksi, astim, Crohnik obstrüktif akciger hastaligi, akut solunum sikintisi sendromu, kistik fibroz, persistan rinit) ve doku yaralanmalari (örnegin, yanik veya kimyasal yaralanma).
Mevcut açiklama, bir süjenin degerlendirilmesinin veya tedavi edilmesinin, örnegin, bir pKaI-aracili rahatsizligin, örnegin, bradikinin-aracili anjiyoödemin bir histamin-aracili rahatsizliktan ayirt edilmesinin veya bir pKaI-aracili rahatsizligin ilerideki bir ataginin öngörülmesinin, örnegin burada açiklanan pKaI aktivasyonuyla iliskilendirilen bir veya daha fazla markörün (bir pKal markörü), örnegin, bozulmamis kininojenin ve klevaj edilmis kininojenin edinilmesini, böylelikle söz konusu hastanin degerlendirilmesini veya tedavi edilmesini içeren bir yöntem saglamaktadir. Bazi uygulamalarda, yöntem, bir histamin-aracili enflamatuar yanitla iliskilendirilen bir veya fazla markörün (bir H- markörü), örnegin, triptazin seviyesinin edinilmesini, örnegin, saptanmasini içerir.
Bazi uygulamalarda, söz konusu pKaI-aracili rahatsizlik HAE, IAE, lBD veya IBS'dir.
Bazi uygulamalarda, söz konusu pKaI-aracili rahatsizlik sunlardan seçilir; histamin- bagimli-olmayan idiopatik anjiyoödem, romatoid artirit, Crohn hastaligi, ülseratif kolit, yaralanmasi, serebral ödem, diyabetik retinopati, diyabetik nefropati, maküler ödem, vaskülit, arteriyel veya venöz tromboz, ventriküler destek cihazlariyla veya stentlerle iliskili tromboz, trombozlu heparin-indüklü trombositopeni, tromboembolik hastalik ve stabil olmayan gögüs anjinli koroner kalp hastaligi, ödem, göz hastaligi, gut, bagirsak hastaligi, oral mukozit, nöropatik agri, enflamatuar agri, spinal stenoz-dejeneratif omurilik hastaligi, ameliyat sonrasi bagirsak tikanmasi, aortik anevrizma, osteoartirit, herediter anjiyoödem, akciger embolisi, felç, kafa travmasi veya peri-tümör beyin ödemi, sepsis, akut orta serebral arter (MCA) iskemik olayi (felç), restenoz (örnegin, anjiyoplastiden sonra), sistemik Iupus eritematoz nefrit, bir otoimmün hastaligi, bir enflamatuar hastalik, bir kardiyovasküler hastalik, bir nörolojik hastalik, yanlis protein katlanmasiyla iliskili bir hastalik, anjiyojenezle iliskili bir hastalik, hipertansif nefropati ve diyabetik nefropati, alerjik ve solunum hastaliklari (örnegin, anafilaksi, astim, Crohnik obstrüktif akciger hastaligi, akut solunum sikintisi sendromu, kistik fibroz, persistan rinit) ve doku yaralanmalari (örnegin, yanik veya kimyasal yaralanma).
Mevcut açiklama ayrica, bir süjenin degerlendirilmesinin veya tedavi edilmesinin bir yöntemini de saglamakta olup söz konusu süje hem bir pKal-aracili rahatsizlikla, örnegin, bradikinin-aracili anjiyoödemle ve histaminle ilgili bir rahatsizlikla birbirini tutan bir semptoma sahiptir, yöntem a) opsiyonel olarak, söz konusu süjenin, bir pKaI-aracili rahatsizliktan ve bir histaminle ilgili rahatsizliktan biriyle veya her ikisiyle tutarli bir semptoma, örnegin, ödeme veya abdominal rahatsizlik hissine sahip olup olmadiginin belirlenmesini; b) söz konusu süje söz konusu semptom için bir anti-histamin terapisiyle tedavi edilmemisse, bu durumda söz konusu süjenin bir anti-histamin terapisiyle tedavi edilmesini; c) pKal aktivasnonuyla iliskilendirilen bir veya daha fazla markörün (bir pKal markörü), örnegin, bozulmamis kininojenin ve klevaj edilmis kininojenin seviyesinin edinilmesini, örnegin, saptanmasini; d) söz konusu seviye önceden belirlenmis bir kriteri karsiliyorsa, örnegin, bir referans seviyesindeyse veya bunun üzerindeyse: süjenin kallikrein inhibitör terapisi için seçilmesini; veya söz konusu süjeye bir kallikrein inhibitörünün verilisini, böylelikle söz konusu süjenin degerlendirilmesini veya tedavi edilmesini içerir. Bazi uygulamalarda, yöntem süjenin kallikrein inhibitör terapisi için seçilmesini içerir. Belirli uygulamalarda, yöntem söz konusu süjeye bir kallikrein inhibitörünün verilisini içerir. Belirli uygulamalarda, süjelerin kallikrein inhibitör terapisi için seçilmesi; veya söz konusu süjeye bir kallikrein inhibitörünün verilisi, süjenin söz konusu anti-histamin terapisine cevap vermediginin belirlenmesinden önce meydana gelir, örnegin, bir anti-histamin terapisiyle söz konusu tedavinin 1nci, 2nci, 3ncü, 4ncü, 5nci, 6nci, 7nci, 8nci, 9ncu veya 10ncu saati içerisinde meydana gelir. Bazi uygulamalarda, söz konusu süjenin hem bir pKaI-aracili rahatsizlikla hem bir histaminle ilgili rahatsizlikla birbirini tutan bir semptoma sahip oldugunun belirlenisi ve bir pKaI markörünün seviyesinin belirlenmesi için söz konusu hastadan bir numunenin alinisi: birbirinden 30 dakika, 1, 2 veya 3 saat içerisinde; veya bir saglik uzmanina yapilan ayni ziyarette meydana gelir.
Bazi uygulamalarda, söz konusu pKal inhibitörü DX-88, DX-293O veya EpiKal-Z'den seçilir.
Bazi uygulamalarda, yöntem, bir histamin-aracili enflamatuar yanitla iliskilendirilen bir veya daha fazla markörün (bir H-markörü) seviyesinin edinilmesini, örnegin, belirlenmesini içerir. Belirli uygulamalarda, söz konusu süje, bir pKaI-aracili rahatsizliga yatkinlik açisindan degerlendirilir. Belirli uygulamalarda, söz konusu süje, bir pKal- aracili rahatsizligin, örnegin, HAE'nin, örnegin, bu rahatsizlikla birbirini tutan bir semptomuna, örnegin, ödeme sahiptir. Belirli uygulamalarda, söz konusu süje, istenmeyen pKaI aktivasyonuyla karakterize bir rahatsizligin bir semptomuna sahiptir ve söz konusu süjeye bir anti-histamin terapisi verilmistir. Belirli uygulamalarda, söz konusu anti-histamin terapisi, burada açiklandigi sekilde bir belirleme adimindan önce yöntem ayrica, söz konusu süjeye, örnegin, burada açiklandigi sekilde degerlendirme veya belirlemelerden önce, sonra veya bunlar esnasinda bir anti-histamin terapisinin verilisini içerir.
Bazi uygulamalarda, söz konusu belirlemeye veya degerlendirmeye yanit olarak, söz konusu süjeye bir kallikrein inhibitörü verilir. Belirli uygulamalarda, söz konusu süje asagicaki semptomlarin veya özelliklerin birine veya daha fazlasina veya tamamina sahiptir: tekrarlayan sisme ataklari; söz konusu sismenin tamamen veya baskin olarak periferik oldugu sisme, örnegin, süje hiç kayda deger abdominal veya hava yolu sismesine sahip degildir; üitiker; enfeksiyon kanitinin yoklugunda kizariklik, agri ve sisme; antihistamin veya kortikosteroid terapisine yanit verememe; veya histamin- aracili olmayan ödeme sahip olma. Belirli uygulamalarda, söz konusu süje, kalici veya tekrar eden ödeme sahiptir ve anti-histamin ve steroid terapisinden biri veya ikisine yanit vermez. Belirli uygulamalarda, süjede bir pKaI-aracili rahatsizlik, örnegin, HAE, hikayesi vardir; süjede bir IAE hikayesi yoktur; süjede bir IAE hikayesi vardir; süjede bir lBD veya lBS hikayesi yoktur; süjede bir IBD veya IBS hikayesi vardir; süjede bir histamin aracili rahatsizlik, örnegin, bir gida alerjisi hikayesi yoktur; süjede bir histamin aracili rahatsizlik, örnegin, bir gida alerjisi hikayesi vardir; süjede bir pKal-aracili rahatsizlik, örnegin, HAE, IAE, IBD veya IBS hikayesi yoktur ve bir histamin-aracili rahatsizlik, örnegin, bir gida alerjisi hikayesi yoktur; veya süjede bir pKaI-aracili rahatsizlik, örnegin, HAE, IAE, IBD veya IBS hikayesi yoktur ve bir histamin-aracili rahatsizlik, örnegin, bir gida alerjisi hikayesi vardir; süjede bir pKaI-aracili rahatsizlik, örnegin, HAE, IAE, IBD veya IBS hikayesi vardir ve bir histamin-aracili rahatsizlik, örnegin, bir gida alerjisi hikayesi yoktur; veya süjede bir pKaI-aracili rahatsizlik, örnegin, HAE, IAE, IBD veya IBS hikayesi vardir ve bir histamin-aracili rahatsizlik, örnegin, bir gida alerjisi hikayesi vardir.
Bazi uygulamalarda, süje, örnegin, HAE için, örnegin, bir profilaktik terapide bir kallikrein inhibitörüyle tedavi edilmistir ve süjenin kallikrein inhibitörüne yaniti degerlendirilir veya izlenir ve opsiyonel olarak söz konusu izlemeye yanit olarak, bir terapi seçilir veya verilir, örnegin, belirlemeye yanit olarak, kallikrein inhibitörünün dozaji ayarlanir. Bazi uygulamalarda, bir pKaI markörünün belirlenisi, bir refakatçi tani baglaminda gerçeklestirilir ve opsiyonel olarak, bir terapötigin verilisi belirleyise dayanilarak verilir veya kisitlanir. Belirli uygulamalarda, söz konusu tedaviye yanit, yaklasan bir akut atagin, örnegin, bir HAE veya IEA ataginin tanimlanmasina dayalidir.
Belirli uygulamalarda, söz konusu süje, idiopatik anjiyoödeme yatkinlik açisindan degerlendirilir. Belirli uygulamalarda, söz konusu degerlendirme, söz konusu süjenin bir pKaI-aracili rahatsizliktan, örnegin, bir bradikinin-aracili rahatsizliktan, örnegin, bir pKal-aracili anjiyoödemden veya bir histamin-aracili rahatsizliktan, örnegin, bir alerjk gida reaksiyonundan muzdarip olup olmadiginin belirlenmesini içerir.
Bazi uygulamalarda, süjede bir pKaI-aracili rahatsizlik, örnegin, HAE veya IAE hikayesi yoktur. Bazi uygulamalarda, süjede bir pKaI-aracili rahatsizlik, örnegin, HAE veya IAE hikayesi vardir. Bazi uygulamalarda, süjede bir pKal-aracili rahatsizlik, örnegin, HAE, lAE, lBD veya IBS hikayesi yoktur; süjede bir pKal-aracili rahatsizlik, örnegin, HAE, hikayesi vardir; süjede bir IAE hikayesi yoktur; süjede bir IAE hikayesi vardir; süjede bir histamin aracili rahatsizlik, örnegin, bir gida alerjisi hikayesi yoktur; süjede bir histamin aracili rahatsizlik, örnegin, bir gida alerjisi hikayesi vardir; süjede bir pKaI-aracili rahatsizlik, örnegin, HAE, IAE, IBD veya IBS hikayesi yoktur ve bir histamin-aracili rahatsizlik, örnegin, bir gida alerjisi hikayesi yoktur; veya süjede bir pKaI-aracili rahatsizlik, örnegin, HAE, lAE, IBD veya IBS hikayesi yoktur ve bir histamin-aracili rahatsizlik, örnegin, bir gida alerjisi hikayesi vardir; süjede bir pKaI-aracili rahatsizlik, örnegin, HAE, IAE, IBD veya IBS hikayesi vardir ve bir histamin-aracili rahatsizlik, örnegin, bir gida alerjisi hikayesi yoktur; veya süjede bir pKaI-aracili rahatsizlik, örnegin, HAE, IAE, IBD veya IBS hikayesi vardir ve bir histamin-aracili rahatsizlik, örnegin, bir gida alerjisi hikayesi vardir.
Bazi uygulamalarda, bir pka markörü, örnegin, burada açiklanan bir pKaI markörü, bir antikor-tabanli belirteçle saptanir. Belirli uygulamalarda, bir pKaI markörü, sandviç bagisiklik-analizi ile saptanir. Belirli uygulamalarda, yöntem, kininojenin, örnegin, bozulmamis veya klevaj edilmis kininojenin birinin veya her ikisinin seviyesinin, örnegin, bir elektroforetik ayirma analizi ile, örnegin, bir Western blot edinilmesini, örnegin, saptanmasini içerir. Bazi uygulamalarda, bir pKaI markörü, örnegin, kininojen, analitin diger ürünlerden örnegin, Western blot ayrilmasina, örnegin, elektroforetik ayrilmasina dayali bir analizde saptanir.
Bazi uygulamalarda, bir pKaI markörü sandviç bagisiklik-analizi ile saptanir ve bir ikinci pKaI markörü, örnegin, kininojen, analitin diger ürünlerden örnegin, Western blot ayrilmasina, örnegin, elektroforetik ayrilmasina dayali bir analizde saptanir. Belirli uygulamalarda, bir pKaI markörünün saptanmasi niteldir. Belirli uygulamalarda, bir pKaI markörünün saptanmasi niceldir. Belirli uygulamalarda, bozulmamis kininojenin ve klevaj edilmis kininojenin her birinin bir seviyesi saptanir.
Bazi uygulamalarda, yöntem, bir pKal markörünün, örnegin, bozulmamis kininojenin veya klevaj edilmis kininojenin bir referans degeriyle karsilastirilmasini içerir. Belirli uygulamalarda, söz konusu referans deger, söz konusu pKaI markörünün bir HAE'deki, örnegin, bir veya daha fazla HAE süjesindeki seviyesinin bir fonksiyonudur. Belirli uygulamalarda, söz konusu referans degeri, söz konusu pKal markörünün bir atak esnasinda bir HAE'deki, örnegin, bir akut atak esnasinda bir veya daha fazla HAE süjesindeki seviyesinin bir fonksiyonudur. Belirli uygulamalarda, söz konusu referans deger, pKaI markörünün bir IAE'deki, örnegin, bir veya daha fazla IAE süjesindeki seviyesinin bir fonksiyonudur. Belirli uygulamalarda, söz konusu referans degeri, pKaI markörünün bir akut atak esnasinda bir lAE'deki, örnegin, bir akut atak esnasinda bir veya daha fazla IAE süjesindeki seviyesinin bir fonksiyonudur. Belirli uygulamalarda, söz konusu referans degeri, bir pKaI markörünün HAE veya IAE yoklugundaki, örnegin, hiç HAE veya IAE hikayesi olmayan bir veya daha fazla süjedeki seviyesinin bir fon ksiyonudur.
Belirli uygulamalarda, yöntem, örnegin, bir karsilastirmaya yanit olarak süjenin siniflandirilmasini, örnegin, süjenin bir pKaI-aracili rahatsizlik riski açisindan siniflandirilmasini veya söz konusu süjeye bir terapinin verilisini veya kisitlanmasini içerir. Belirli uygulamalarda, yöntem, örnegin, bir karsilastirmaya yanit olarak, söz konusu süje için bir tedavinin seçilmesini içerir. Bazi uygulamalarda, yöntem, örnegin, bir karsilastirmaya yanit olarak, söz konusu süjeye bir terapinin, örnegin, bir kallikrein baglayici ajanin, bir bradikinin 82 reseptörü antagonistinin; veya bir C1-INH replasman ajaninin verilisini veya ksiitlanmasini içerir. Belirli uygulamalarda, söz konusu tedavi, bir pKal inhibitörünün, örnegin, DX-88, EpiKaI2 ve DX-2930'dan sçeilen bir pKal inhibitörünün verilisidir.
Bazi uygulamalarda, söz konusu süjeden bir numune, iki veya daha fazla markör için, örnegin, bir pKal marköründen veya bir H marköründen bir yakalama ajanini, örnegin, bir anti-H markörü antikorunu içeren bir substratla temas ettirilmekte olup; opsiyonel olarak burada en az bir yakalama ajani bir pKal markörü için bir yakalama ajanidir.
Bazi uygulamalarda, yöntem, söz konusu süjeden bir numunenin, örnegin bir kan veya plazma numunesinin edinilmesini içerir.
Bazi uygulamalarda, (bir birinci markör için) bir birinci yakalama ajani ve (bir ikinci markör için) bir ikinci yakalama ajani, birinci markörün varligi için bir sinyalin, ikinci markörün varligi için bir sinyalden ayirt edilebilecegi sekilde bir substrat Üzerine birakilir. Belirli uygulamalarda, (bir birinci markör için) söz konusu birinci yakalama ajani bir birinci konumda veya adreste yer alir ve (bir ikinci markör için) söz konusu ikinci yakalama ajani bir ikinci konumda veya adreste yer alir. Belirli uygulamalarda, söz konusu birinci konum veya adres ve söz konusu ikinci konum veya adres söz konusu substrat üzerinde örtüsmez. Belirli uygulamalarda, söz konusu birinci yakalama ajani bir birinci pKal markörü içindir. Belirli uygulamalarda, söz konusu birinci yakalama ajani bir birinci pKal markörü içindir ve söz konusu ikinci yakalama ajani bir ikinci pKal markörü içindir. Belirli uygulamalarda, söz konusu birinci yakalama ajani bir pKal markörü içindir ve söz konusu ikinci yakalama ajani bir H-markörü içindir.
Belirli uygulamalarda, yöntem, bir pKal markörünün varliginin veya miktarinin belirlenmesi için bir substratin, örnegin, saptanabilir bir antikorla temas ettirilmesini içerir. Belirli uygulamalarda, söz konusu antikorlar, renkli bir ürün üreten, bir foton yayan, bir foton emen, bir substrati degistiren veya substratin iletkenligini degistiren bir bölütle etiketlenir. Belirli uygulamalarda, söz konusu antikorlar, elektrokemilüminesanstan faydalanan bir bölütle etiketlenir. Belirli uygulamalarda, söz konusu antikorlar rezinyum ile etiketlenir. Belirli uygulamalarda, söz konusu substrat, bir mezo ölçegi kesif cihazinda saglanir. Belirli uygulamalarda, söz konusu substrat, kan ve plazmanin biriyle veya her ikisiyle kullanim için uygun bir daldirma çubugu olarak saglanir. Belirli uygulamalarda, söz konusu birinci yakalama ajani ve söz konusu ikinci yakalama ajani bir ortak veya sivisal olarak baglantili bir hazne, örnegin, bir çok hazneli cihaz, örnegin, bir çok-gözlü plakadaki bir hazne, örnegin, bir göz veya girinti içinde yer alir. Belirli uygulamalarda, söz konusu birinci yakalama ajani ve söz konusu ikinci yakalama ajani bir substrat üzerine basilir.
Bazi uygulamalarda, bir birinci pKal markörü için söz konusu yakalama ajani söz konusu substrat üzerinde bir birinci konumdadir ve bir ikinci pKal markörü için söz konusu yakalama ajani söz konusu substrat üzerinde bir ikinci konumdadir ve söz konusu birinci ve ikinci konumlar söz konusu substrat üzerine, birinci pKal markörün varligi için bir sinyalin bir ikinci pKal markörü için bir sinyalden ayirt edilebilecegi sekilde birakilir. Belirli uygulamalarda, söz konusu substrat, bir üçüncü konumdaki bir üçüncü markör için bir yakalama ajani içerir ve üçüncü konum söz konusu substrat üzrine, üçüncü markörün varligi için bir sinyalin, söz konusu birinci ve ikinci markörden bir sinyalden ayirt edilebilecegi sekilde birakilir.
Bazi uygulamalarda, bir numunedeki bir pKal markörünün seviyesinin belirlenisi, substratin söz konusu numuneyle temasinin 1nci, 2nci, 3ncü, 4ncü veya 5nci saati içerisinde yapilabilir. Bazi uygulamalarda, bir numunedeki iki pKal markörünün seviyesinin belirlenisi, substratin söz konusu numuneyle temasinin 1nci, 2nci, 3ncü, 4ncü veya 5nci saati içerisinde yapilabilir. Bazi uygulamalarda, iki pKal markörünün seviyesinin belirlenisi, eszamanli olarak gerçeklestirilen analizlerde, örnegin, inkübasyon veya birbiriyle örtüsen testler için diger araliklarda yapilabilir.
Bir baska yönde, mevcut açiklama, örnegin, burada tarif edilen sekilde birden fazla pKal markörü için yakalama ajanlari içeren bir substrat saglamaktadir.
Bir diger yönde, mevcut açiklama, bir rahatsizligin bir pKal inhibitörüyle tedaviye duyarli olup olmadiginin belirlenmesi için sunlari içeren bir yöntem saglamaktadir: örnegin, söz konusu rahatsizliktan muzdarip bir süjede veya söz konusu rahatsizlik için bir hayvan modelinde, örnegin, burada tarif edildigi sekilde bir veya birden fazla pKal markörünün seviyelerinin degerlendirilmesi; belirlenen seviyenin bir referansla karsilastirilmasi olup, burada önceden belirlenen bir kriteri karsilayan bir seviye, örnegin, bir referans seviyesinde veya bunun üzerinde olup olmadigi, bir pKaI inhibitörüyle tedaviye duyarli bir rahatsizligin göstergesidir. Bazi uygulamalarda, yöntem, bir kallikrein inhibitörünün, söz konusu rahatsizligin bir hayvan modelinde in vitro veya in vivo etkisinin degerlendirilmesini içerir.
Bir baska yönde, mevcut açiklama, bir pKaI aracili rahatsizligi, örnegin, bir bradikinin aracili rahatsizligi olan bir süjenin tedavi edilmesinin, burada tarif edilen bir pKaI markörünün seviyesinin, örnegin, burada tarif edilen bir yöntemle degerlendirilmesini, belirlenmesini ve söz konusu degerlendirmeye yanit olarak, bir tedavinin seçilmesini, örnegin, bir kallikrein inhibitörünün bir dozaj miktarinin veya dozlama sikliginin birinin veya her ikisinin seçilmesini içeren bir yöntem saglamaktadir. Bazi uygulamalarda, yöntem, bir kallikrein inhibitörünün söz konusu süjeye verilisini içerir. Bazi uygulamalarda, söz konusu hastaya söz konusu degerlendirme öncesinde bir kallikrein inhibitörü verilmistir. Belirli uygulamalarda, yöntem, bir kallikrein inhibitörünün söz konusu seçilen dozajda veya siklikta verilisini içerir.
Bir diger uygulamada, mevcut açiklama, bir rahatsizligin bir pKal inhibitörüyle tedaviye duyarli olup olmadiginin belirlenmesinin sunlari içeren bir yöntemini saglamaktadir: örnegin, söz konusu rahatsizliktan muzdarip bir süjede veya söz konusu rahatsizlik Için bir hayvan modelinde, örnegin, burada tarif edildigi sekilde bir veya birden fazla pKaI markörünün seviyelerinin degerlendirilmesi; belirlenen seviyenin bir referansla karsilastirilmasi olup, burada önceden belirlenen bir kriteri karsilayan bir seviye, örnegin, bir referans seviyesinde veya bu seviyenin üzerinde olup olmadigi, bir pKaI inhibitörüyle tedaviye duyarli bir rahatsizligin göstergesidir. Bazi uygulamalarda, yöntem, bir kallikrein inhibitörünün, söz konusu rahatsizligin bir hayvan modelinde in vitro veya in vivo etkisinin degerlendirilmesini içerir.
Bir baska yönde açiklama, bir numunenin, örnegin, kanin, minimum temas aktivasyonuyla toplanmasi için yöntemler ve cihazlar içermektedir. Bir uygulamalada, açiklama, içine burada açiklanan bir yakalama belirtecinin, örnegin, bir kallikrein inhibitörünün, örnegin, DX-88'e dizi olarak benzer, örnegin, DX-88'den 1, 2 veya 5 amino asit kalintisindan fazla olmayacak sekilde farklilik gösteren bir polipeptidin, örnegin, EPIKAL-2'nin konuldugu bir konteynir içerir. Konteynir, bir süjeden bir numunenin, örnegin, kanin alinmasina ve numunedeki bir pKal-iliskili markörün, örnegin, pKal'in ayni konteynirda yakalama ajaniyla baglanmasina olanak saglamak amaciyla, örnegin, bir menfezle, açiklikla, septumla vb yapilandirilir. Baglanan türün, örnegin, pKal'in ölçümü ayni konteynirda gerçeklestirilebilir veya uygulamalarda, substrat ölçümden önce konteynirdan çikarilir, Örnegin, ölçün bir baska cihaz içinde 1-50, 1-25 mlldir. Bir uygulamada yakalama belirteci, örnegin, bir pKal yakalama belirteci, konteynirin iç yüzeyine birakilir. Yakalama belirteci yüzeye, yüzeye baglanan bir birinci spesifik baglayici partnerle ve yakalama belirtecine baglantili bir ikinci spesifik baglayici partnerle baglantilanabilir. Spesifik baglayici partnerlerin örnekleri biyotin ve avidindir. Bir uygulamada, biyotinlenmis yakalama belirteci, örnegin, bir pKal yakalama belirteci, örnegin, bir kallikrein inhibitörü, örnegin, DX-88'e dizi olarak benzer olan, örnegin, DX-88`den 1, 2 veya 5 amino asit kalintisindan fazla olmayacak sekilde farklilik gösteren bir polipeptit, örnegin, Epikal-2, avidinle kapli konteynirin bir yüzeyi üzerine birakilir.
Mevcut açiklama, plazma kallikrein-aracili anjiyoödemi (KMA) veya pKaI”in aracilik ettigi diger hastaliklari olan hastalari tanimlayabilen, degerlendirme ve tedavide faydali biyomarkörler saglamaktadir.
Bir biyomarkör vasitasiyla pKal aktivasyonu sergiledigi gösteren hastalar, pKaI'in, HAE ile iliskili akut ödemli ataklarin tedavisi için onaylanan bir küçük protein inhibitörü olan DX-88 gibi bir pKal inihibitörüyle tedavi için adaydir. Diger pKal inhibitörlerine, bir tamamen insan antikor inhibitörü olan DX-2930 dahildir. Bazi uygulamalarda, bir biyomarkör vasitasiyla pKal aktivasyonu sergiledigi gösterilen hastalar, bir bradikinin 82 reseptörü antagonisti, örnegin, lncatibant (Firazyr®) ile tedavi için adaydir. Bazi uygulamalarda, bir biyomarkör vasitasiyla pKal aktivasyonu sergiledigi gösterilen hastalar, bir C1-INH replasman ajaniyla, örnegin, bir saflastirilmis insan pastörüze nano-filtrelenmis C1-INH konsantratiyla (Berinert®) tedavi için adaydir.
Açiklamanin uygulamalari, hastalarin, örnegin, plazma kallikrein tarafindan üretilen bradikininin neden oldugu ödemden muzdarip hastalarin tanimlanmasinda ve tedavisinde faydali bir biyomarkör ve bunun kullanmini saglamaktadir. Burada açiklanan yöntemler, bilesimler ve cihazlar bir dizi sekilde faydalidir. Örnegin, bir pKal markörünün seviyeleri, yükselmis temas sistemi aktivasyonuyla iliskili rahatsizliklarin tanimlanmasi için kullanilabilir. Ilk taramayi, örnegin, hastaligin klinik öncesi modellerinde plazma kallikrein inhibitörleriyle (örnegin, DX-88, EPIKAL-2 veya DX- 2930) in vitro veya in vivo testler takip edebilir. Burada açiklanan bir markör ayrica, bir farmakodinamik biyomarkör olarak veya baska durumlarda bir süjenin bir kallikrein inhibitörüne yanitini izlemek için de kullanilabilir. Burada açiklanan bir markör, plazma kallikreinin aracilik ettigi hastaliklarin tedavisinin saglanmasi, HAE'nin profilaktik terapisi esnasinda dozlamanin yönetilmesi veya yaklasan bir akut HAE ataginin tanimlanmasini saglamak için bir refakatçi tanida kullanilabilir.
SEKILLERIN KISA AÇIKLAMASI SEKIL 1, plazma kallikreinin temas sistemi aktivasyonunda yer alan ögelerin bir tasviridir.
SEKIL 2, Western blot analiziyle kIevaj edilmis kininojen saptanmasini göstermektedir. Numuneler, indirgenmis kosullar altinda SDS-PAGE (%3-8 Tris-Asetat) kullanilarak, ardindan PVDF membranina aktarilarak ve immün- blotlama ile analiz edildi. Kulvar1 - 50 nM Bozulmamis Kininojen; Kulvar 2 - 50 nM kIevaj edilmis Kininojen; Kulvar 3 - 50 nM Düsük Moleküler Agirlikli Kininojen; Kulvar 4 - 1:20 Sodyum Sitratlanmis Insan Plazmasi (Cam Toplama Tüpü); Kulvar 5 - 1:20 Sodyum Sitratlanmis Insan Plazmasi (Plastik) Kallikrein Muameleli; Kulvar 6 - 1:20 Sodyum Sitratlanmis Insan Plazmasi (Plastik); Kulvar 7 - 1:20 Sodyum Sitratlanmis Insan Plazmasi (Plastik) 20nM 2 Zincir Kininojen Eklenmis.
SEKIL3, bir atak esnasinda elde edilen bir hasta numunesinde bozulmamis kininojenin (yani, 1-zincirli) saptanmasini göstermektedir. Hasta plazmasi numunesi, bir anti-proteaz kokteyli ihtiva eden sitratlanmis plazma tüplerinde toplandi.
SEKIL 4, pKaI ile kIevajin ve kIevaj edilmis kininojenin hafif zincirine baglanan bir antikor kullanilarak HMWK'nin zincir-1 ve zincir-2'sini saptayan bir Western blotlamanin ardindan 1-Zincirli HMWK'nin ve 2-Zincirli HMWK'nin alan yapisinin bir sematigini göstermektedir. C1: 1-zincirli HMWK, C2 = 2-zincirli HMWK, G = cam, P: plastik.
SEKIL 5, bir yari-kantitatif analiz olarak saflastirilmis HMWK`nin LICOR saptanmasini göstermektedir. Saflastirilmis insan HMWK ve kIevaj edilmis HMWK, HMWK-yetersiz insan plazmasinda 9,0 pg/mL ile 5.6 pg/mL arasinda titre edildi. Numuneler TBS ve (DTTIII) numune yükleme tamponuna 1:20 oraninda seyreltildi. Seyreltilmis numuneler bir %4-12 bis-tris jel üzerinde çalistirildi ve elektroforezin ardindan bir nitroselüloz membranina aktarildi.
Bloklamadan sonra, blot, HMWK'nin hafif zincirine spesifik bir fare anti-insan HMWK antikoru (klon #11H05) ve bir keçi anti-fare IR Boyasi 680 kullanilarak görsellestirildi. Jeller, IR Boyasi 680'in eksitasyon sinyalini saptayabilen Ll-COR Odyssey IR Tarayici kullanilarak tarandi.
SEKIL 6, HAE hastasi numunesinin bir Western blotlamasini ve LICOR analizini göstermektedir ve HAE hastasi numunelerinin, klevaj edilmis HMWKinin daha yüksek endojen seviyelerini sergiledigini ortaya koymaktadir.
Hem bazal hem atak HAE hastasi plazmasi, Licor analiziyle hasta-olmayan durumdaki plazmayla kiyaslandiginda daha yüksek klevaj-yüzdeli HMWK'ye sahip oldu. Analiz edilen plazma numuneleri, ayni hastadan ayni toplama zamaninda alinan sodyum sitratlanmis plazma numuneleriyle kiyaslandiginda HAE hastasi plazmasini daha fazla temas aktivasyonundan koruyan bir anti- proteaz solüsyonunda toplandi. Grafikteki hata çubuklari standart sapmayi temsil etmektedir.
SEKIL 7, FXlla aktivasyon kosullarinin degerlendirilmesini tasvir eden bir Western blotlamayi ve grafigini göstermektedir. SEKIL 7A: farkli sicakliklarda (buza karsilik 37°C) ve inkübasyon sürelerinde (10'a karsi 30 dakika) FXlla'nin farkli konsantrasyonlariyla aktive edilen normal Insan plazmasinin LICOR saptanmasiyla Western blotlama. Kulvar 1: moleküler agirlik markörleri; Kulvar 2: saflastirilmis 1-zincirli ve 2-zincirli HMWK; Kulvar 3: normal insan plazmasi; Kulvar 4: normal insan plazmasi + 2.5 nM FXlla 10 dakika süreyle 37 C'de; Kulvar 5: normal insan plazmasi + 2.5 nM FXlla 30 dakika süreyle 37 C'de; Kulvar 6: normal insan plazmasi + 2.5 nM FXlla 10 dakika süreyle buz üzerinde; Kulvar 7: normal insan plazmasi + 2.5 nM FXlla 30 dakika süreyle buz üzerinde; Kulvar 8: normal insan plazmasi + 5 nM FXlla 10 dakika süreyle 37 C'de; Kulvar 9: normal Insan plazmasi + 5 nM FXlla 30 dakika süreyle 37 C'de; Kulvar 10: normal insan plazmasi + 5 nM FXlla 10 dakika süreyle buz üzerinde; Kulvar 11: normal insan plazmasi + 5 nM FXlla 30 dakika süreyle buz üzerinde; Kulvar 12: normal insan plazmasi + 7.5 nM FXlla 10 dakika süreyle Cide; Kulvar 14: normal insan plazmasi + 7.5 nM FXlla 10 dakika süreyle buz üzerinde; Kulvar 15: normal insan plazmasi + 7.5 nM FXlla 30 dakika süreyle buz üzerinde. SEKIL 7B: Her bir kulvardaki iki-zincirli HMWK'nin, Licor sinyali yogunluklari [2-zincirli HMWK %'si = (46 kDa sinyal + 56 kDa sinyaI)/(46 kDa sinyal + 56 kDa sinyal + ] kullanilarak belirlenen yüzdesi.
SEKIL 8, DX-88 ve DX-2930iun, pKal aktivitesinin FXIIa aktivasyonu üzerindeki inhibitör etkilerini tasvir eden bir Western blot ve grafigi göstermektedir. SEKIL 8A: Ekalantid'in ve DX-2930'un, insan plazmasina ex w'vo eklendiginde pKAL tarafindan HMWK'nin klevajini önledigini gösteren Western blot analizi. SEKIL 8B: DX-88 ve DX-2930'un, FXIIa varliginda klevaj edilmis HMWK üretimi üzerindeki etkilerini gösteren bir sema. Havuzlanmis sodyum sitratlanmis insan veya ekalantid ile ön muamele edildi. (Muamele edilmemis bir numune dahil olmak üzere) tüm numuneler 2,5nM FXlIa eklenmesiyle aktive edildi. Enzimler daha sonra bir proteaz inhibitörü kokteyli eklenmesiyle inhibe edildi. Ekalantid ve DX-29307un esit molar konsantrasyonlari, muamele edilmemis plazma numunesiyle kiyaslandiginda havuzlanmis insan plazmasinda esdeger olarak klevaj edilmis HMWK miktarini indirger. C = 25 nM 1 ve 2 Zincirli HMWK; N = Normal plazma; + = Aktive edilmis insan plazmasi (ilaç yok).
SEKIL 9, ülseratif koliti (UC) ve romatoid artiriti (RA) olan hastalardaki temas sistemi aktivasyonunun bir Western blot analizini göstermektedir. Kulvar 1: moleküler agirlik markörleri; Kulvar 2: saflastirilmis 1-zincirli ve 2-zincirli HMWK; 3 ila 5 arasindaki Kulvarlar: normal insan plazmasi; 6 ila 10 arasindaki Kulvarlar: UC hastalarindan alinan plazma; 11 ila 15 arasindaki Kulvarlar: RA hastalarindan alinan plazma. Her bir kulvardaki numunelerle ilgili diger ayrintilar Tablo 3'de sunulmaktadir.
SEKIL 10, Crohn hastaligi (CD) olan hastalardaki temas sistemi aktivasyonunun bir Western blot analizini göstermektedir. Kulvar 1: moleküler agirlik isaretleri; Kulvar 2: saflastirilmis 1-zincirli ve 2-zincirli HMWK; 3 ila 5 arasindaki Kulvarlar: normal insan plazmasi; 6 ila 10 arasindaki Kulvarlar: CD hastalarindan alinan plazma. Her bir kulvardaki numunelerle ilgili diger ayrintilar Tablo 4'te sunulmaktadir.
DETAYLI AÇIKLAMA Tanimlar Kolaylik açisindan, mevcut açiklamanin ayrintili tarifnamesindenönce, spesifikasyonda, örneklerde ve ekli istemlerde kullanilan belirli terimler burada tanimlanmaktadir. Diger terimler, spesifikasyonda görüldükleri yerde tanimlanmaktadir.
Tekil biçim “bir”, “bir” ve “bu” metin aksini açik bir sekilde belirtmedigi sürece çogul referanslari içerir.
Burada kullanildigi sekilde, ”edinmek" veya “edinme”, bir fiziksel varligin veya bir degerin, örnegin, bir sayisal degerin, fiziksel varligin veya degerin “dogrudan edinilmesiyle” veya “dolayli olarak edinilmesiyle" sahipliginin elde edilmesini ifade etmektedir. “Dogrudan edinme”, fiziksel varligin veya degerin elde edilmesi için bir islemin gerçeklestirilmesi (örnegin, bir numune üzerinde bir analizin veya testin gerçeklestirilmesi veya 0 terimin burada tanimlandigi sekilde “bir numunenin analiz edilmesi”) anlamina gelmektedir. ”Dolayli olarak edinme”, fiziksel varligin veya degerin bir baska taraftan veya kaynaktan (örnegin, fiziksel varligi veya degeri dogrudan edinen bir üçüncü taraf laboratuar) alinmasini ifade etmektedir. Bir fiziksel varligin dogrudan edinilmesi, bir fiziksel maddede, örnegin, bir baslangiç materyalinde bir fiziksel degisikligi içeren bir islemin, örnegin, bir numunenin analiz edilmesinin gerçeklestirilmesini içerir. Emsal degisikliklere, bir fiziksel varligin iki veya daha fazla baslangiç materyalinden yapilmasi, bir maddenin kesilmesi veya bölüntülenmesi, bir maddenin ayristirilmasi veya saflastirilmasi, iki veya daha fazla ayri varligin bir karisima birlestirilmesi, bir esdegerli veya esdegerli-olmayan bagin koparilmasini veya olusturulmasini içeren bir kimyasal tepkimenin gerçeklestirilmesi dahildir. Bir degerin dogrudan edinilmesine, bir numunede veya bir baska maddede bir fiziksel degisikligi içeren bir islemin gerçeklestirilmesi, örnegin, bir maddede, örnegin, bir numunede, analitte veya belirteçte bir fiziksel degisikligi içeren (burada bazen “fiziksel analiz" olarak ifade edilen) bir analitik islemin gerçeklestirilmesi, bir analitik yöntemin, örnegin, asagidakilerin birini veya daha fazlasini içeren bir yöntemin gerçeklestirilmesi dahildir: bir maddenin, örnegin, bir analitin veya bunun bir fragmaninin veya diger türevinin bir baska maddeden ayristirilmasi veya saflastirilmasi; bir analitin veya bunun fragmaninin veya diger türevinin bir baska maddeyle, örnegin, bir tamponla, çözücüyle veya reaktan ile birlestirilmesi veya bir analitin veya bunun bir fragmaninin veya diger türevinin yapisinin, örnegin, analitin bir birinci ve bir ikinci atomu arasinda bir esdegerli veya esdegerli-olmayan bag kopararak veya olusturarak veya bir reaktanin veya bunun bir fragmaninin veya diger türevinin yapisinin, örnegin, reaktanin bir birinci ve bir ikinci atomu arasinda bir esdegerli veya esdegerli-olmayan bagi kopararak veya olusturarak degistirilmesiyle degistirilmesi.
Burada kullanildigi sekliyle, bir numunenin “analiz edilmesi", bir numunede veya bir baska maddede, örnegin, bir baslangiç materyalinde fizikseli bir degisikligi içeren bir islemin gerçeklestirilmesini içerir. Emsal degisikliklere, iki veya daha fazla baslangiç materyalinden fiziksel bir varligin yapilmasi, bir maddenin kesilmesi veya bölüntülenmesi, bir maddenin ayristirilmasi veya saflastirilmasi, iki veya daha fazla ayri varligin bir karisimda birlestirilmesi, bir esdegerli veya esdegerli-olmayan bir bagin koparilmasini veya olusturulmasini içeren bir kimyasal tepkimenin gerçeklestirilmesi dahildir. Bir numunenin analiz edilmesi, bir maddede, örnegin bir numunede, analitte veya belirteçte fiziksel bir degisikligi içeren (burada bazen “fiziksel analiz” olarak da ifade edilen) bir analitik islemin gerçeklestirilmesini, bir analitik yöntemin, örnegin, asagidakilerin birini veya daha fazlasini içeren bir yöntemin gerçeklestirilmesini içerebilir: bir maddenin, örnegin, bir analitin veya bunun bir fragmaninin veya diger türevinin bir baska maddeden ayristirilmasi veya saflastirilmasi; bir analitin veya bunun fragmaninin veya diger türevinin bir baska maddeyle, örnegin, bir tamponla, çözücüyle veya reaktan ile birlestirilmesi; veya bir analitin veya bunun bir fragmaninin veya diger türevinin yapisinin, örnegin, analitin bir birinci ve bir ikinci atomu arasinda bir esdegerli veya esdegerli-olmayan bag kopararak veya olusturarak; veya bir reaktanin veya bunun bir fragmaninin veya diger türevinin yapisinin, örnegin, reaktanin bir birinci ve bir ikinci atomu arasinda bir esdegerli veya esdegerli-olmayan bagi kopararak veya olusturarak degistirilmesiyle degistirilmesi.
Burada kullanildigi sekliyle “agonist” terimi, bir proteinin biyoaktivitesini taklit eden veya yukari regüle eden (örnegin, gücünü arttiran veya tamamlayan) bir ajani ifade etme amaçlidir. Bir agonist bir dogal-sus protein veya bunun, dogal-sus proteinin en az bir biyoaktivitesine sahip türevi olabilir. Bir agonist ayrica, bir proteinin en az bir biyoaktivitesini arttiran bir bilesik de olabilir. Bir agonist ayrica, bir polipeptidin bir baska molekül ile, örnegin, bir hedef peptit veya nükleik asitle etkilesimini artiran bir bilesik de olabilir.
Burada kullanildigi sekliyle “antagonist” terimi, bir proteinin en az bir biyoaktivitesini asagi regüle eden (örnegin, baskilayan veya önleyen) bir ajani ifade etme amaçlidir.
Bir antagonist, bir proteinle bir baska molekül, örnegin, bir hedef peptit veya enzim substrati arasindaki etkilesimi önleyen veya azaltan bir bilesik olabilir. Bir antagonist ayrica, mevcut olan eksprese edilmis protein miktarinin indirgeyen veya önleyen bir bilesik de olabilir. Tipik olarak, bir proteinin veya bir genin önlenmesi, burada tarif edilen veya teknikte taninan bir veya daha fazla yöntemle ölçüldügü üzere, proteinin veya genin ekspresyonunun veya ilgili bir aktivitesinin en az %10 veya daha fazla, indirgenmesini veya ekspresyonda veya ilgili aktivitede 1-kattan, 2-kattan, 3-kattan, 4- kattan, 5-kattan, 10-kattan, 50-kattan, 100-kattan veya daha fazlasindan daha fazla bir azalmayi ifade etmektedir.
Burada kullanildigi sekliyle, “baglanma afinitesi”, görünür iliski sabitini veya Ka”yi ifade etmektedir. Ka, ayrisma sabitinin (Kd) karsitidir. Bir baglayici protein, örnegin, belirli bir sahip olabilir. Bir baglayici proteinin bir ikinci hedefe göre bir birinci hedefe daha yüksek afinite baglanmasi, ikinci hedefe baglanma için, birinci hedef baglanma için olan Ka'dan (veya sayisal deger Kd) daha yüksek bir Ka (veya daha küçük bir sayisal deger Kd) ile gösterilebilir. Bu tip durumlarda, baglayici protein ikinci hedefe (örnegin, bir ikinci konfirmasyondaki veya bunun taklidindeki ayni protein; veya bir ikinci protein) göre birinci hedef (örnegin, bir birinci konfirmasyondaki veya bunun taklidindeki bir protein) için özgüllüge sahiptir. Baglanma afinitesindeki (örnegin, özgüllük veya diger Baglanma afinitesi, denge diyalizi, denge baglanma, jel filtrasyon, ELISA, yüzey plazmon rezonansi veya (örnegin, bir floresans analizi kullanilarak) spektroskopi dahil olmak üzere çesitli yöntemlerle belirlenebilir. Baglanma afinitesinin degerlendirilmesi için emsal kosullar TRIS-tamponundadir (pH7,5`ta 50mM TRIS, 150mM NaCI, 5mM CaClz). Bu teknikler, baglayici proteinin (veya hedefin) konsantrasyonunun bir fonksiyonu olarak baglanmis ve serbest baglayici proteinin konsantrasyonunun ölçülmesi için kullanilabilir. Bagli baglayici proteinin ([Bagli]) konsantrasyonu, asagidaki denklemle serbest baglayici proteinin ([Serbest]) konsantrasyonuyla ve hedefteki baglayici protein için baglayici alanlarin konsantrasyonuyla ilgili olup burada (N), hedef molekül basina baglayici alanlarin sayisidir: Ka'nin tam bir belirlenmesini yapmak her zaman gerekli degildir, yine de, bazen afinitenin, örnegin, ELISA veya FACS analizi gibi bir yöntem kullanilarak belirlenen bir nicel ölçümünü elde etmek yeterli oldugundan, Ka'ya orantilidir ve böylelikle, afinitenin nitel bir ölçümünün elde edilmesi için veya örnegin, bir fonksiyonel analizde, örnegin, bir in vitro veya in vivo analizde aktiviteyle afinitenin bir çikarimini elde etmek için daha yüksek bir afinitenin, örnegin, 2-kat daha yüksek olup olmadiginin belirlenmesi gibi karsilastirmalar için kullanilabilir.
Terim “ligand” ile degisimli olarak kullanilir. Bir “plazma kallikrein baglayici protein”, plazma kallikreinle etkilesebilen (örnegin, baglanabilen) bir proteini ifade etmektedir ve özellikle, tercihen veya spesifik olarak plazma kallikreinle etkilesebilen ve/veya önleyebilen proteinleri içerir. Bir protein plazma kallikreini, proteinin yoklugunda ve ayni kosullar altinda plazma kallikreinin aktivitesine kiyasla plazma kallikreinin aktivitesinde bir azalmaya neden olursa önler. Bazi uygulamalarda, plazma kalliklrein baglama proteini bir antikordur.
Burada kullanildigi sekliyle, ”kompleks” veya ”kompleks olusumu”, birbirleri için spesifik bir afiniteye sahip üyeler arasinda bir kompleksi ifade etmektedir.
Bir “konservatif amino asit süstitüsyonu”, amino asit kalintisinin, benzer bir yan zincire sahip bir amino asit kalintisiyla degistirildigi süstitüsyondur. Benzer yan zincirlere sahip amino asit kalintilari familyalari teknikte tanimlanmistir. Bu familyalara, bazik yan zincirlere (örnegin, Iisin, arjinin, histidin), asitli yari zincirlere (örnegin, aspartik asit, glutamik asit), yüksüz polar yari zincirlere (örnegin, glisin, asparajin, glutamin, serin, treonin, tirosin, sistein), polar-olmayan yan zincirlere (örnegin, alanin, valin, lösin, izolösin, prolin, fenilalanin, metionin, triptofan), beta-dalli yan zincirlere (örnegin, treonin, valin, izolösin) ve aromatik yan zincirlere (örnegin, tirosin, fenilalanin, triptofan, histidin) sahip amino asitler dahildir.
Biyopolimerler için motif dizileri, degisken amino asitler olabilen konumlar içerebilir. Örnegin, bu tip bir baglamdaki “X" sembolü genellikle, aksi belirtilmedigi sürece, örnegin, herhangi bir sistein-olmayan amino asidi ifade etmek için herhangi bir amino asidi (örnegin, yirmi dogal amino asidin herhangi birini) ifade etmektedir. Diger izin verilen amino asitler ayrica, örnegin, parantezler ve kesmeler kullanilarak gösterilebilir. Örnegin, “(ANV/F/N/Q)”, o konumda alanine, triptofana, fenilalanine, asparajine ve glutamine izin verildigi anlamina gelmektedir.
Burada kullanildigi sekliyle, bir “saptama belirteci”, saptanaoak bölüte baglanan bir bölütü ifade etmektedir. Tipik olarak bir sinyal, örnegin, floresans olusturur veya ölçülebilir bir bilesik üretir.
Bir “epitop”, bir hedef bilesik üzerindeki, bir baglayici protein (örnegin, bir Fab veya tam boy antikor gibi bir antikor) tarafindan baglanan alani ifade etmektedir. Hedef bilesigin bir protein oldugu durumda, alan tamamen amino asit bilesenlerinden olusabilir, tamamen protein amino asitlerinin kimyasal modifikasyonlarindan (örnegin, glikosil bölütleri) olusabilir veya bunlarin kombinasyonlarindan olusabilir. Örtüsen epitoplar en az bir ortak amino asit kalintisi, glikosil grubu, fosfat grubu, sülfat grubu veya diger moleküler özellik içerir.
Bir birinci baglayici protein (örnegin, antikor), birinci baglayici protein bir hedef bilesik Üzerinde ikinci baglayici proteinin baglandigi ayni alana baglanirsa veya ikinci baglayici proteinin baglandigi alanla örtüsen (örnegin, amino asit dizisi veya diger moleküler özellik (örnegin, glikosil grubu, fosfat grubu veya sülfat grubu) açisindan, baglayici protein (örnegin, antikor) olarak ”ayni epitopa baglanir”.
Bir birinci baglayici protein (örnegin, antikor) bir ikinci baglayici proteinle (örnegin, antikor), birinci baglayici proteinin epitopuna baglanmasi, epitopuna baglanan ikinci dogrudan (örnegin, birinci baglayici protein, ikinci baglayici protein tarafindan baglanan epitopla ayni veya bununla Örtüsen bir epitopa baglanirsa) veya dolayli (örnegin, birinci baglayici proteinin epitopuna baglanmasi hedef bilesikte, ikinci baglayici proteinin epitopuna baglanma yetisini azaltan sterik bir degisiklige neden olursa) olabilir.
Burada kullanildigi sekliyle, bir “fonksiyonel” biyolojik moleküli karakterize oldugu bir özellik ve/veya aktivite sergiledigi bir formda bir biyolojik moleküldür.
Iki dizi arasindaki ”homolojii' veya “dizi özdesligi” (terimler burada degisimli olarak kullanilmaktadir) hesaplamalari asagidaki sekilde gerçeklestirilir. Diziler optimal karsilastirma amaciyla hizalanir (örnegin, optimal hizalama için bir birinci ve bir ikinci amino asit veya nükleik asit dizisinin birine veya her ikisine bosluklar eklenebilir ve homolog-olmayan diziler karsilastirma amaciyla dikkate alinmayabilir). Optimal hizalama, 12'lik bir bosluk cezasi, 4ylük bir bosluk uzatma cezasi ve 5'Iik bir çerçeve kaymasi boslugu cezasi olan bir Blossum 62 puanlama matrisine sahip GCG yazilim paketindeki GAP programi kullanilarak en iyi skor olarak belirlenir. Daha sonra karsilik gelen amino asit konumlarindaki veya nükleotid konumlarindaki amino asit kalintilari veya nükleotidleri karsilastirilir. Birinci dizideki bir konum ikinci dizide karsilik gelen konumla ayni amino asit kalintisiyla veya nükleotidle isgal edilirse, bu durumda moleküller o konumda özdestir (burada kullanildigi sekliyle amino asit veya nükleik asit özdeslik yüzdesi, diziler tarafindan paylasilan özdes konumlarin sayisinin bir fon ksiyonudur.
Tercih edilen bir uygulamada, karsilastirma amaciyla hizalanan bir referans dizisinin uzunlugu, referans dizisinin uzunlugunun en az %30'u, tercihen en az %40'i, daha tercihen en az %50'si, daha da tercihen en az %60`i ve daha da tercihen en az %70, immünoglobülin degisken alan dizisinin uzunlugu olabilir.
Burada kullanildigi sekliyle, “düsük sertlik, orta sertlik, yüksek sertlik veya çok yüksek sertlik kosullari altinda melezlenir" terimi, melezleme ve yikama için kosullari tarif etmektedir. Melezleme tepkimelerinin gerçeklestirilmesi için rehber, Current Protocols ve susuz yöntemler o referansta tarif edilmektedir ve her ikisi de kullanilabilir. Burada anilan spesifik melezleme kosullari su sekildedir: (1) yaklasik 45°C'de 6X sodyum klorür/dosyum sitrat (SSC) içinde düsük sertlik melezleme kosullari, ardindan en az 50°C'de 0,2X SSC, %0,1 SDS içinde iki yikama (yikamalarin sicakligi düsük sertlik kosullari için 55°C'ye çikarilabilir); (2) yaklasik 45°C'de 6X SSC içinde orta sertlik melezleme kosullari, ardindan 60°C'de 0,2X SSC, %0,1 SDS içinde bir veya daha fazla yikama; (3) yaklasik 45°C'de 6X SSC içinde yüksek sertlik melezleme kosullari, ardindan 65°C”de 65°C`de 0,5M sodyum fosfat, %7 SBS çok yüksek sertlik melezleme kosullari, ardindan 65°C'de 0,2X SSC, %1 SDS içinde bir veya daha fazla yikama. Çok yüksek sertlik kosullari (4) tercih edilen kosullardir ve aksi belirtilmedigi sürece bu kosullar kullanilmalidir. Açiklama, burada tarif edilen bir nükleik aside veya bunun bir komplemanina, örnegin, burada tarif edilen bir baglayici proteini kodlayan nükleik asitlere düsük, orta, yüksek veya çok yüksek sertlikle melezlenen nükleik asitleri içermektedir. Nükleik asitler, referans nükleik asitle ayni uzunlukta veya bunun uzunlugunun %30, 20 veya 10'u içerisinde olabilir. Nükleik asit, burada tarif edilen bir immünoglobülin degisken alan dizisini kodlayan bir bölgeye karsilik gelebilir.
Bir “izole bilesim", izole bilesimin elde edilebildigi bir dogal numunenin en az bir bileseninin en az %90'indan çikarilan bir bilesimi ifade etmektedir. Yapay veya dogal olarak üretilen bilesimler, ilgi konusu tür veya tür popülasyonu bir agirlik-agirlik saflik derecesindeki bilesimler” olabilir.
Burada kullanildigi sekliyle, ”in vitro” terimi, bir çok-hücreli organizmanin içinden ziyade yapay bir ortamda, örnegin, bir test tüpünde veya tepkime kabinda, hücre kültüründe vb. meydana gelen olaylari ifade etmektedir.
Burada kullanildigi sekliyle, “in vivo” terimi, bir insan veya insan-olmayan hayvan gibi bir çok-hücreli organizmada meydana gelen olaylari ifade etmektedir.
Bir "izole bilesim”, izole bilesimin elde edilebildigi bir dogal numunenin en az bir bileseninin en az %90'indan çikarilan bir bilesimi ifade etmektedir. Yapay veya dogal olarak üretilen bilesimler, ilgi konusu tür veya tür popülasyonu bir agirlik-agirlik saflik derecesindeki bilesimler” olabilir.
Bir “izole” protein, izole proteinin elde edilebildigi bir dogal numunenin en az bir bileseninin en az %90'indan çikarilan bir proteini Ifade etmektedir. Proteinler, ilgi konusu tür veya tür popülasyonu bir agirlik-agirlik esasinda en az %5, 10, 25, 50, 75, olan peptidazlari (proteinlerde peptit baglarini klevaj eden enzimler) ifade etmektedir.
Plazma kallikrein, kininlerin, kuvvetli pro-enflamatuar peptitlerin üretilmesi için kininojeni klevaj eder. etmektedir. Örnegin, (burada ”PEP-1” olarak da ifade edilen) DX-88, plazma kallikreinin (NP_000883) kuvvetli (Ki < 1 nM) ve spesifik bir inhibitörüdür. (Bakiniz ayrica, örnegin, Burada kullanildigi sekliyle, “DX-2922” terimi, “X101-AO1” terimiyle degisimli olarak kullanilmaktadir. Bu antikorun diger varyantlari asagida tarif edilmektedir.
Antikor Tarif X63-GOG ROLIC kullanilarak kesfedilen germ hatli-olmayan Fab, M160- 012 ile ayni HC ancak farkli LC X81-BO1 HEK 293T hücrelerinde üretilen germ hatli lgG X101 -AO1 CHO hücrelerinde üretilen germ hatli IgG, ayni HC ve X81-BOl ile ayni HC ve LC DX-2922 X101-AO1 için alternatif isimlendirme kullanilmaktadir. Bu antikorun diger varyantlari asagida tarif edilmektedir.
Antikor Kimligi Tarif M162-A04 Faj görüntüleme kullanilarak kesfedilen germ hatli olmayan Fab M199-AO8 M162-A04iün afinite olgunlasmasiyla türetilen agir Zincirli CDR3 degismis Fab ayni degisken agir zincir Antikor Kimligi Tarif X124-GOt veya CHO hücrelerinde üretilen germ hatli IgG, HC'nin C-ucu çikarilmasi haricinde X115-F02 ile ayni LC ve HC dizisi. küçük molekülü, bilesigi, türü veya (dogal olusumlu veya dogal olusumlu olmayan) benzerlerini veya bakteriler, bitkiler, mantarlar veya hayvan hücreleri veya dokulari gibi biyolojik materyallerden yapilan, modülasyona neden olabilen bir ekstrakti ifade etmektedir. Modülatörler, analizlerde dahil edilerek bir fonksiyonel özelligin, biyolojik aktivitenin veya islemin veya bunlarin kombinasyonunun (dogrudan veya dolayli) inhibitörleri veya aktivatörleri (örnegin, agonist, kismi antagonist, kismi agonist, ters agonist, antagonist, anti-mikrobiyal ajanlar, mikrobiyal enfeksiyonun veya proliferasyonun inhibitörleri ve benzerleri) olarak potansiyel aktivite açisindan degerlendirilebilir. Bu tip analizlerde, birçok modülatör tek seferde taranabilir. Bir modülatörün aktivitesi bilinebilir, bilinmeyebilir veya kismen bilinebilir.
Bir “esansiyeI-olmayan” amino asit kalintisi, baglayici ajanin, örnegin, antikorun dogal- sus dizisinden, bir biyolojik aktiviteyi bozmadan veya daha tercihen büyük ölçüde degistirmeden degistirilebilen bir kalintiyken, bir “esansiyel” amino asit kalintisinin degistirilmesi aktivitenin büyük önemli bir kaybiyla sonuçlanir.
Konu yöntemle tedavi edilecek olan bir “hasta", “süje" veya “konak" (bu terimler degisimli olarak kullanilmaktadir), bir insan veya insan-olmayan hayvan anlamina gelebilir. Bazi uygulamalarda, bir süjenin bir kallikrein-aracili rahatsizlik, örnegin, bir bradikinin-aracili rahatsizlik, örnegin, herediter anjiyoödem (HAE) riskinde oldugundan veya bu hastaliklardan muzdarip oldugundan süphelenilir. Bazi uygulamalarda, bir süje histamin-bagimli-olmayan idiopatik anjiyoödem, romatoid artirit, Crohn hastaligi, ülseratif kolit, Iupus, Alzheimer hastaligi, septik sok, yanik yaralanmasi, beyin iskemisi/reperfüzyon yaralanmasi, serebral ödem, diyabetik retinopati, diyabetik nefropati, maküler ödem, vaskülit, arteriyel veya venöz tromboz, ventriküler destek cihazlariyla veya stentlerle iliskili tromboz, trombozlu heparin-indüklü trombositopeni, tromboembolik hastalik ve stabil olmayan gögüs anjinli koroner kalp hastaligi, ödem, göz hastaligi, gut, bagirsak hastaligi, oral mukozit, nörpatik agri, enflamatuar agri, spinal stenoz-dejeneratif omurilik hastaligi, ameliyat sonrasi bagirsak tikanmasi, aortik anevrizma, osteoartirit, herediter anjiyoödem, akciger embolisi, felç, kafa travmasi veya peri-tümör beyin ödemi, sepsis, akut orta serebral arter (MCA) iskemik olayi (felç), restenoz (örnegin, anjiyoplastiden sonra), sistemik Iupus eritematoz nefrit, bir otoimmün hastaligi, bir enflamatuar hastalik, bir kardiyovasküler hastalik, bir nörolojik hastalik, yanlis protein katlanmasiyla iliskili bir hastalik, anjiyojenezle iliskili bir hastalik, hipertansif nefropati ve diyabetik nefropati, alerjik ve solunum hastaliklari (örnegin, anafilaksi, astim, Crohnik obstrüktif akciger hastaligi, akut solunum sikintisi sendromu, kistik fibroz, persistan rinit) ve doku yaralanmalari (örnegin, yanik veya kimyasal yaralanma) riskindedir veya bunlardan muzdariptir. kullanilmaktadir ve aktif plazma kallikreinin, ön-kallikrein olarak da bilinen proenzim formunu ifade etmektedir.
Bir süjedeki bir hastaligin “engellenmesi” veya “engellemek" terimi, süjenin, hastaligin en az bir semptomunun engellendigi sekilde, yani, istenmeyen durumun (örnegin, hastalik veya konak hayvanin diger istenmeyen durumu) klinik belirtileri öncesinde verilen ve böylece konagi istenmeyen durumun gelismesine karsi koruyan bir farmasötik tedaviye, örnegin, bir ilacin verilisine tabi tutulmasini ifade etmektedir. Bir hastaligin “engellenmesi” ayrica, “profilaksi” veya “profilaktik tedavi" olarak da ifade edilebilir.
Burada kullanildigi sekliyle, "büyük ölçüde özdes” (veya “büyük ölçüde homolog") terimi burada, birinci ve ikinci amino asit veya nükleik asit dizilerinin benzer aktivitelere, örnegin, bir baglama aktivitesine, bir baglama tercihine veya bir biyolojik aktiviteye sahip oldugu (veya bunlara sahip proteinleri kodladigi) sekilde, bir ikinci amino asit veya nükleik asit dizisine yeterli sayida özdes veya esdeger (örnegin, bir benzer yan zincirine sahip, örnegin, korunmus amino asit süstitüsyonlari) amino asit kalintisi veya kullanilmaktadir. Antikorlar durumunda, ikinci antikor ayni özgüllüge sahiptir ve ayni antijene göre afinitenin en az %50'sine, en az %25`ine veya en az %1 O'una sahiptir.
Burada açiklanan dizilere benzer veya homolog (örnegin, en az yaklasik %85 dizi özdesligi) diziler de bu basvurunun parçasidir. Bazi uygulamalarda, dizi özdesligi yüksek olabilir.
Ek olarak, büyük ölçüde özdeslik, nükleik asit segmentleri sarmalin komplemanina seçimli melezleme kosullari (örnegin, oldukça sert melezleme kosullari) altinda melezlendiginde var olur. Nükleik asitler tam hücrelerde, bir hücre Iizatinda veya bir kismen saflastirilmis veya büyük ölçüde saf formda mevcut olabilir.
Biyopolimerler için motif dizileri, degisken amino asitler olabilen konumlar içerebilir. Örnegin, bu tip bir baglamdaki “X" sembolü genellikle, aksi belirtilmedigi sürece, örnegin, herhangi bir sistein-olmayan amino asidi ifade etmek için herhangi bir amino asidi (örnegin, yirmi dogal amino asidin herhangi birini) ifade etmektedir. Diger izin verilen amino asitler ayrica, örnegin, parantezler ve kesmeler kullanilarak gösterilebilir. Örnegin, ”(ANV/F/N/Q)”, bu konumda alanine, triptofana, fenilalanine, asparajine ve glutamine izin verildigi anlamina gelmektedir.
Istatistiksel anlamlilik teknikte bilinen herhangi bir yöntemle belirlenebilir. Emsal istatistiksel testlere sunlar dahildir: Ögrenciler T-testi, Mann Whitney U parametrik- olmayan test ve Wilcoxon parametrik-olmayan istatistiksel test. Bazi istatistiksel olarak anlamli iliskiler 0,05 veya 0,02'den az bir P degerine sahiptir. Örnegin, iki durum arasindaki ayirt edilebilir nitel veya nicel farkliliklari simgeleyen “indükleme , onleme", arasindaki bir farki, örnegin, istatistiksel olarak anlamli bir farki ifade edebilir.
Burada kullanildigi sekliyle, bir ”numune", bir süjeden doku, örnegin, kan, plazma veya protein içeren bir bilesimi ifade etmektedir. Bir numune bir süjeden alinan bir ilk islenmemis numunenin yani sira büyük ölçüde islenmis, örnegin, kismen saflastirilmis veya korunmus formlari da içerir. Emsal numunelere kan, plazma, gözyasi veya mukus dahildir. Bazi uygulamalarda, numune bir kan veya plazma numunesidir.
Bir “terapötik olarak etkili dozaj” tercihen ölçülebilen bir parametreyi, örnegin, plazma kallikrein aktivitesini tedavi edilmemis süjelere göre, istatistiksel olarak anlamli bir derecede veya en az yaklasik %20, daha tercihen en az yaklasik %40, daha da tercihen en az yaklasik %60 ve yine daha da tercihen en az yaklasik %80 oraninda modüle eder. Bir bilesiginin ölçülebilir bir parametreyi, örnegin, bir hastalikla-iliskili parametreyi modüle edebilme yetisi, insan rahatsizliklarindaki ve durumlarindaki etkinligin tahmini olan bir hayvan modeli sisteminde degerlendirilebilir. Alternatif olarak, bir bilesimin bu özelligi, bilesigin bir parametreyi in vitro modüle edebilme yetisinin incelenmesiyle degerlendirilebilir.
Bir süjedeki bir hastaligin (veya durumun) "tedavi edilmesi" veya bir hastaligi olan bir süjenin “tedavi edilmesi”, hastaligin en az bir semptomunun iyilestirildigi, hafifletildigi veya azaltildigi sekilde süjenin farmasötik bir tedaviye tabi tutulmasini, örnegin, bir ilacin verilisini ifade etmektedir.
Bir süjedeki bir hastaligin “engellenmesi" terimi, süjenin, hastaligin en az bir semptomunun engellendigi sekilde, yani, istenmeyen durumun (örnegin, hastalik veya konak hayvanin diger istenmeyen durumu) klinik belirtileri öncesinde verilen ve böylece konagi istenmeyen durumun gelismesine karsi koruyan bir farmasötik tedaviye, örnegin, bir ilacin verilisine tabi tutulmasini ifade etmektedir. Bir hastaligin Bir “profilaktik olarak etkili miktar”, arzu edilen profilatik sonucun elde edilmesi için gereken dozajlarda ve zaman periyotlarinda etkili olan bir miktari ifade etmektedir. Tipik olarak, bir profilaktik doz süjelerde hastaligin öncesinde veya erken bir asamasinda kullanildigindan, profilaktik olarak etkili miktar terapötik olarak etkili miktardan daha az olacaktir.
Alfabetik veya sayisal basliklar dahil olmak üzere, basliklar yalnizca anlama ve okuma kolayligi içindir ve aksi belirtilmedigi sürece tercihlerin zamansal siralamasini veya bir hiyerarsisini düzenlemez.
Klevai Edilmis ve Bozulmamis HMWK'nin Saptanmasi Plazma kallikrein, çogunlukla substrati olan yüksek moleküler agirlikli kininojene (HMWK) baglanan, ön-kallikrein denilen aktif olmayan bir proenzim olarak dolasimda bulunur. Bir uyariyiciya yanit olarak, FXII, FXIIa'ya aktive edilir. FXIIa, aktif plazma kallikreini olusturmak için ön-kallikrerini klevaj eder (Sekil 1). Dolasimdaki ön- kallikrerinin yaklasik %75-90'i HMWK'ye, HMWK'nin alan 6'siyla bir aktif-olmayan alan etkilesimi yoluyla baglanir. Serbest ve HMWK-bagli aktif pKal, klevaj edilmis HMWK ve bradikinin üretir. Plazma kallikrein aktivasyonunun biyomarkörleri Tablo 2'de gösterilmektedir. Bir biyomarkörün uygunlugu, HAE'nin bir akut ataginin varligindaki ve yoklugundaki seviyeleri takip edilerek ortaya konulabilir. Bu biyomarkörlerin seviyeleri ayrica, bradikinin aracili ödemin veya pKaI aktivitesinin aracilik ettigi diger hastaligin bir atagi esnasinda degisebilir. Bakiniz Tablo 2.
Tablo 2. KMA ile iliskili biyomarkörler Tablo 2, süjelerin pKal veya bradikinin aracili rahatsizliklar açisindan degerlendirilmesi için Tablo 2'de ve burada baska yerlerde tarif edilen yöntemlerle degerlendirilebilen markörleri saglamaktadir. Tablo 2, bir pKal veya bradikinin aracili rahatsizliklarla iliskili markörün seviyesindeki degisimdeki yönü göstermektedir.
Biyomark Analiz Normale Temas Yorumlar ör göre HAE aktivasyo hastasind nu aki Bazal nedeniyle Seviye A Bozulma ELISA, Degismemi azalma Kininojen yoksunu plazmaya sahip APTT mis Weste s Artmis veya immün-analizler kullanilarak HMWK rn blot Artmis bozulmamis kininojenin ölçülmesi için Klevaj ELISA, testler mevcuttur: edilmis Weste www.diapharma.com/downloads/6820102 HMWK rn blot 5811.9df Klevaj edilmis kininojen bir HAE atagi esnasinda ~%47 toplam kininojene artabilir. - Klevaj edilmis kininojen ayrica sepsis, siroz esnasinda da yükselir.
Analizler ya a) bozulmamis kininojenin aksine klevaj edilmis kininojene spesifik bir antikor; veya b) klevaj edilmis ve bozulmamis kininojeni ayirabilen ve miktarini belirleyebilen bir analiz formati (örnegin, Western blot) kullanabilir. Bu analiz dolasimdaki anti-pKal antikoruna duyarli olmayabilir ve hücre yüzeyine Tablo 2, süjelerin pKal veya bradikinin aracili rahatsizliklar açisindan degerlendirilmesi için Tablo 2'de ve burada baska yerlerde tarif edilen yöntemlerle degerlendirilebilen markörleri saglamaktadir. Tablo 2, bir pKal veya bradikinin aracili rahatsizliklarla iliskili markörün seviyesindeki degisimdeki yönü göstermektedir.
Biyomark Analiz Normale Temas Yorumlar ör göre HAE aktivasyo hastasind nu aki Bazal nedeniyle Seviye A bagli aktif pKal'in lokalize bradikinin-aracili anjiyoödeminde ana sorumlu olup olmadigina bagli degildir.
Mevcut açiklama, en azindan kismen, bir hasta numunesindeki NMWK'nin spesifik bir formunun bir degerinin (örnegin, klevaj edilmis HMWK yüzdesinin) belirli pKaI-aracili hastaliklarla (örnegin, HAE) ve otoimün hastaliklariyla (örnegin, RA, UC ve Crohn hastaligi) iliskili oldugunun kesfine dayalidir. Böylelikle, klevaj edilmis HMWK'nIn, bozulmamis HMWK'nin veya her ikisinin bir degeri (örnegin, yüzdesi), bu tip hastaliklari olan veya risk altinda olan süjelerin tanimlanmasi için, büyük olasilikla bir pKal inhibitörüyle tedaviye duyarli olan bir rahatsizligin tanimlanmasi için ve bir veya daha fazla pKaI inhibitörü içeren bir hastalik tedavisinin etkililiginin degerlendirilmesi için bir biyomarkör olarak kullanilabilir.
Sagtama Belirteci Bazi uygulamalarda, HMWK'nin diger formuna kiysla HMWKlnin bir formuna spesifik olarak (tercihen) baglanan bir saptama belirteci (örnegin, bir antikor), bir aday hastadan bir biyolojik numune (örnegin, bir kan numunesi veya bir plazma numunesi) olabilen bir numunedeki klevaj edilmis HMWK seviyesinin belirlenmesi için burada tarif edilen analiz yöntemlerinde kullanilabilir. Bir örnekte, saptama belirteci, bozulmamis HMWK'ye kiyasla klevaj edilmis HMWK'ye spesifik olarak baglanan bir antikordur. Bir baska örnekte, saptama belirteci, klevaj edilmis forma kiyasla bozulmamis HMWKSye spesifik olarak baglanan bir antikordur. Alternatif veya ek olarak, antikor spesifik olarak, klevaj edilmis HMWK'nin hafif zincirinin C-ucuna baglanir. Bu tip bir antikor HMWK'nin LMWK'den ayirt edilmesi için kullanilabilir, çünkü LMWK, alternatif uç birlestirme nedeniyle klevaj edilmis HMWK'nin hafif zincirinin C-terminal fragmanini ihtiva etmez.
Bir antijene veya bir epitopa “spesifik olarak baglanan” bir saptama belirteci teknikte iyi anlasilan bir terimdir ve bu tip spesifik baglanmayi belirlemek için yöntemler de teknikte iyi bilinmektedir. Bir antikoru gibi bir saptama belirtecinin, belirli bir hedef antijenle, alternatif hedeflerle yaptigindan daha sik, daha hizli, daha uzun sürelerle ve/veya daha yüksek afiniteyle tepkimeye girerse veya iliskili olursa “spesifik baglama" sergiledigi söylenebilir. Bir saptama belirteci bir hedef antijene (Örnegini klevaj edilmis HMWK) veya bunun epitopuna, diger maddelere (örnegin, bozulmamis HMWK) baglandigindan daha yüksek afiniteyle, aviditeyle, daha kolayca ve/veya daha uzun sürelerle baglanirsa “spesifik olarak baglanir". Örnegin, bir antijene (örnegin, klevaj edilmis HMWK veya klevaj edilmis HMWK'nin hafif zincirinin C-ucu) veya bunun bir antijenik epitopuna spesifik olarak (veya tercihli olarak) baglanan bir antikor, bu hedef antijene, diger anjenlere (örnegin, bozulmamis HMWK) veya ayni antijendeki diger epitoplara baglandigindan daha yüksek afiniteyle, aviditeylei daha kolayca ve/veya daha uzun sürelerle baglanan bir antikordur. Ayrica bu tanimlama okunarak, örnegin, bir birinci hedef antijene spesifik olarak baglananbir antikorun, bir ikinci hedef antijene spesifik olarak veya tercihli olarak baglanip baglanamayacagi da anlasilir. Bu itibarla, “spesifik baglanma” veya “tercihli baglanma”, (her ne kadar bunu Içerebilse de) münhasir baglanmayi gerektirmez. Genellikle, baglanma yapilan atif tercihli baglanmayi ifade etmektedir ancak bu sart degildir. Bazi örneklerde, bir hedef antijene veya bunun bir epitopuna "spesifik olarak baglanan” bir antikor diger antijenlere veya ayni antijendeki diger epitoplara baglanmayabilir.
Bazi uygulamalarda, burada tarif edilen analiz yöntemlerinde kullanim için bir antikor, bir hedef antijen veya antijenik epitop (örnegin, klevaj edilmis kininojen, bozulmamis HMWK veya klevaj edilmis kininojenin hafif zincirinin C-ucu) için uygun bir baglanma afinitesine sahiptir. Burada kullanildig sekliyle, ”baglanma afinitesi”, görünen iliski sabitini veya KA'yi ifade etmektedir. KA, ayrisma sabitinin (KD) karsitidir. Burada tarif afinitesine (KD) sahip olabilir. Artan bir baglanma afinitesi azalanbir KD'ye karsilik gelebilir. Bir antikorun bir ikinci antijene göre bir birinci antijene daha yüksek afinite baglanmasi, ikinci antijene baglanma için KA'dan (veya sayisal deger KD) daha yüksek bir KA (veya daha küçük bir sayisal deger KD) ile gösterilebilir. Bu tip durumlarda, antikor ikinci antijene göre birinci antijen için özgüllüge sahiptir. Baglanma afinitesindeki (örnegin, özgüllük veya diger karsilastirmalar için) farkliliklar, en az 1,5, 2, 3, 4, 5, 10, Burada kullanildigi sekliyle, “antikor” terimi, en az bir adet immünoglobülin degisken alani veya immünoglobülin degisken alan dizisi içeren bir proteini ifade etmektedir. Örnegin, bir antikor bir agir (H) zincir degisken bölgesi (burada VH olarak kisaltilmistir) ve bir hafif (L) zincir degisken bölgesi (burada VL olarak kisaltilmistir) içerebilir. Bir baska örnekte, bir antikor iki adet agir (H) zincir degisken bölgesi ve iki adet hafif (L) zincir degisken bölgesi içerir. “Antikor” terimi, anitkorlarin antijen-baglayici fragmanlarinin (örnegin, tek zincirli antikorlar, Fab ve sFab fragmanlari, F(ab')2, Fd fragmanlari, Fv fragmanlari, scFv ve alan antikorlari (dAb) fragmanlari (de Wildt et al., antikor, lgA, IgG, IgE, lgD, lgM'nin (ve yani sira bunlarin alt türlerinin) yapisal özelliklerine sahip olabilir. Antikorlar herhangi bir kaynaktan olabilir, ancak primat (insan ve insan-olmayan primat) ve primatlastirilmis olanlar tercih edilmektedir.
VH ve VL bölgeleri ayrica, hiperdegiskenlik, ”tamamlayicilik belirleme bölgeleri” (“CDR”) olarak isimlendirilen bölgeler ayrilabilir, “çerçeve bölgeleri” (“FR") olarak isimlendirilen daha korunmus olan bölgelere dagitilabilir. Çerçeve bölgesinin ve CDRilerin derecesi kesin olarak tanimlanmistir (bakiniz, Kabat, E.A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of J. Mol. Biol. 196:901-917, bakiniz ayrica www.hgmp.mrc.ac.uk). Burada Kabat tanimlamalari kullanilmaktadir. Her bir VH ve VL tipik olarak, amino-ucundan karboksi- ucuna asagidaki siralamada düzenlenen üç CDR'den ve dört FR'den olusur: FR1, Antikorun VH veya VL zinciri ayrica, sirasiyla, bir agir veya hafif immünoglobülin zinciri olusturmak için bir agir veya hafif zincir sabit bölgesinin tamamini veya bir parçasini içerebilir. Bir uygulamada, antikor, iki agir immünoglobülin zincirinin ve iki hafif immünoglobülin zincirinin bir tetrameri olup, burada agir ve hafif immünoglobülin zincirleri, örnegin, disülfit baglariyla birbirine baglidir. lgG'Ierde, agir zincir sabit bölgesi üç immünoglobülin alani, CH1, CH2 ve CH3 içerir. Hafif zincir sabit bölgesi bir CL alani içerir. Agir ve hafif zincirlerin degisken bölgesi, bir antijenle etkilesen bir baglanma alani ihtiva eder. Antikorlarin sabit bölgeleri tipik olarak antikorun, bagisiklik sisteminin çesitli hücreleri (örnegin, efektör hücreler) ve klasik kompleman sisteminin birinci bileseni (Clq) dahil olmak üzere konak dokulara veya faktörlere baglanmasina aracilik eder. Immünoglobülinin hafif zincirleri kappa veya Iambda tipinde olabilir. Bir uygulamada, antikor glikosilatlidir. Bir antikor, antikor-bagimli sitotoksisite ve/veya kompleman-aracili sitotoksisite için fonksiyonel olabilir.
Bir antikorun bir veya daha fazla bölgesi insan veya etkili olarak insan olabilir. Örnegin degisken bölgelerin biri veya daha fazlasi, insan veya etkili olarak insan olabilir. Örnegin, CDR'Ierin biri veya daha fazlasi insan, örnegin, HC CDR1, HC CDR2, HC CDR3, LC CDR1, LC CDR2 ve LC CDR3 olabilir. Hafif zincir CDR'lerinin her biri insan olabilir. HC CDRS insan olabilir. Çerçeve bölgelerinin biri veya daha fazlasi insan, örnegin, HC veya LC'nin FR1'i, FR2'si, FRS'ü ve FR4”ü olabilir. Örnegin, Fc bölgesi insan olabilir. Bir uygulamada, çerçeve bölgelerinin tamami insandir, örnegin, bir insan somatik hücresi, örnegin, immünoglobülinleri üreten bir hematopoietik hücre veya bir hematopoietik-olmayan hücre tarafindan üretilen bir antikorun bir çerçevesinin bir dizisine sahiptir. Bir uygulamada, insan dizileri, örnegin, bir germ hatti nükleik asit tarafindan kodlanan germ hatti dizileridir. Bir uygulamada, seçilen bir Fab'nin çerçeve (FR) kalintilari, en benzer primat germ hatti genindeki, özellikle insan germ hatti genindeki karsilik gelen kalintinin amino-asit tipine dönüstürülebilir. Sabit bölgelerin biri veya daha fazlasi insan veya etkili olarak insan olabilir. Örnegin, bir immünoglobülin degisken alaninin, sabit bölgenin, sabit alanlarin (CH1, CH2, CH3, CL1) en az %70, olabilir.
Bir antikorun tamami veya bir parçasi bir immünoglobülin geni veya bunun bir segmenti tarafindan kodlanabilir. Emsal insan immünoglobülin genlerine kappa, Iambda, alfa (IgA1 ve IgA2), gama (lgG1, IgGZ, lgG3, lgG4), delta, epsilon ve mu sabit bölge genlerinin yani sira, birçok immünoglobülin degisken bölge genleri dahildir. Tam-boy immünoglobülin “hafif zincirleri” (yaklasik 25 KDa veya yaklasik 214 amino asit), NH-2 ucunda (yaklasik 110 amino asit) bir degisken bölge geni ve COOH--ucunda bir kappa veya Iambda sabit bölge geni tarafindan kodlanir. Tam-boy immünoglobülin “agir zincirleri” (yaklasik 50 KDa veya yaklasik 446 amino asit), benzer sekilde bir degisken bölge geni (yaklasik 116 amino asit) ve yukarida belirtilen diger sabit bölge genlerinin biri, örnegin, gama (yaklasik 330 amino asidi kodlar) tarafindan kodlanir. Insan HC'sinin uzunlugu önemli ölçüde degiskenlik gösterir çünkü HC CDR3 yaklasik 3 amino-asit kalitisiyla 35'in üzerinde amino-asit kalintisi arasinda degisir.
Bir tam boy antikorun “antijen-baglayici fragmani” terimi, bir tam-boy antikorun, bir ilgi konusu hedefe spesifik olarak baglanma yetisini muhafaza eden bir veya daha fazla fragmanini ifade etmektedir. Bir tam boy antikorun "antijen-baglayici fragmani” terimi dahilinde kapsanan baglayici fragmanlarin örneklerine (i) bir Fab fragmani, VL, VH, CL ve CH1 alanlarindan olusan bir tek degerli fragman; (ii) bir F(ab')2 fragmani, destek bölgesinde bir disülfit köprüsüyle baglantili iki Fab fragmani içeren bir iki degerli fragman; (iii) VH ve CH1 alanlarindan olusan bir Fd fragmani; (iv) bir antikorun bir tek kolunun VL ve VH alanlarindan olusan bir Fv fragmani; (v) bir VH alanindan olusan bir muhafaza eden bir izole tamamlayicilik belirleme bölgesi (CDR) dahildir. Ayrica, her ne kadar Fv fragmaninin iki alani olan VL ve VH ayri genler tarafindan kodlansa da, rekombinan teknikler kullanilarak, bunlarin, VL ve VH bölgelerinin tek zincirli Fv (scFv) olarak bilinen tek degerli molekülleri olusturmak için eslestigi bir tek protein zincir haline getirilmelerini saglayan bir sentetik baglayici tarafindan birlestirilebilirler. Bakiniz Antikor fragmanlari, teknikte uzman kisilerce bilinen konvansiyonel teknikler dahil olmak üzere uygun herhangi bir teknik kullanilarak elde edilebilir. “Monospesifik antikor” terimi, belirli bir hedef, örnegin, epitop için tek bir baglanma özgüllügü ve afinitesi sergileyen bir antikoru ifade etmektedir. Bu terim, burada kullanildigi sekliyle antikorun nasil üretildigine bakilmaksizin tekli moleküler bilesimde olan antikorlarin veya bunlarin fragmanlarinin bir hazirlanmasini ifade eden bir “monoklonal antikor” veya “monoklonal antikor bilesimini” içerir.
Burada kullanildigi sekliyle, bir “hümanize” immünoglobülin degisken bölgesi, immünoglobülin degisken bölgesinin normal bir insanda immünojen bir yanit saglamadigi sekilde, yeterli sayida insan çerçeve amino asit konumu içermek için modifiye edilen bir immünoglobülin degisken bölgesini ifade etmektedir. “Hümanize” dahildir. Önleme sabiti (Ki) inhibitör kuvvetinin bir ölçümünü saglamaktadir; enzim aktivitesini yari yariya indirgemek için hereken inhibitör konsantrasyonudur ve enzim veya substrat konsantrasyonlarina bagli degildir. Görünür Ki (Krapp), inhibitörün (örnegin, inhibitör baglayici proteinin) farkli konsantrasyonlarinin, tepkimenin (örnegin, enzim aktivitesinin) derecesi üzerindeki inhibitör etkisi ölçülerek farkli substrat konsantrasyonlarinda elde edilir; degisikligin psödo-birinci siralama hizi sabitinde Morrison denklemine (Denklem 1) inhibitör konsantrasyonunun bir fonksiyonu olarak yerlestirilmesi, görünür Ki degerinin bir tahminini saglar. Ki, Ki,app,ye karsilik substrat konsantrasyonunun bir çiziminin bir dogrusal regresyon analizinden çikarilan y- kesismesinden elde edilir.
Denklem 1 Burada v = ölçülen velosite; v0 = inhibitör yoklugundaki velosite; Kivapp = görünür önleme sabiti; I = toplam inhibitör konsantrasyonu ve E = toplam enzim konsantrasyonu.
Bazi uygulamalarda, burada tarif edilen sekildeki saptama belirteci saptanabilir bir etikete konjuge edilebilir ve saptama belirtecinin ilgi konusu antijene (örnegin, klevaj edilmis HMWK ve bozulmamis HMWK) baglanmasi, saptanabilir etiketten yayilan sinyalin yogunluguna dayali olarak belirlenebilir. Alternatif olarak, saptama belirtecine spesifik bir ikincil antikor da kullanilabilir. Bir veya daha fazla antikor saptanabilir bir etikete baglanabilir. Burada tarif edilen analiz yöntemlerinde, teknikte bilinen herhangi bir uygun etiket kullanilabilir. Bazi uygulamalarda, saptanabilir bir etiken bir florofor içerir. Burada kullanildigi sekliyle, ("floresan etiket” veya “floresan boya" olarak da ifade edilen) “florofor” terimi, isik enerjisini tanimli bir eksitasyon dalga boyunca emen ve isik enerjisini farkli bir dalga boyunda yayan bölütleri ifade etmektedir. Bazi uygulamalarda, bir saptama bölütü bir enzimdir veya bunu içerir. Bazi uygulamalarda, bir enzim, renksiz bir substrattan renkli bir ürün üretendir (örnegin, ß-galaktosidaz).
Yüksek Moleküler-Agirlikli Kininojen Yüksek moleküler-agirlikli kininojen (HMWK) plazmada, yaklasik 110 kDa'lik bir moleküler agirliga sahip bir tekli polipeptit (1-zincirli) çok-alanli (1-6 alan) protein olarak mevcuttur (SEKIL 4). HMWK pKaI tarafindan alan 4 içerisinde 9 amino asit, pro- enflamatuar peptit bradikinin ve HMWK'nIn 2-zincirli bir formu (klevaj edilmis kininojen) salmak için klevaj edilir. HMWK'nin 2 zinciri, HMWK'nin 1-3 alanlarini ihtiva eden agir zincir ve HMWKinin 5 ve 6 alanlarini ihtiva eden hafif zincirdir. Agir ve hafif zincirler, sirasiyla, yaklasik 56 ve 46 kiloDalton'luk bir moleküler agirliga sahiptir. Sekil 4.
Bozulmamis HM WK Burada “bozulmamis kininojen" olarak da ifade edilen bozulmamis yüksek moleküler- agirlikli kininojen (HMWK), örnegin, koagülan veya immünolojik yöntemler, örnegin, radyoimmün-analizi kullanilarak analiz edilebilir (bakiniz, örnegin, Kerbiriou-Nabias, monoklonal bir antikor bilinmektedir. Bakiniz, örnegin, Reddigari, SR. & Kaplan, AP., HMWK'yI kodlayan insan geni kininojen 1'dir (KNG1). KNG1, ya HMWK'yI veya düsük moleküler agirlikli kininojeni (LMWK) kodlayan mRNA'larin olusturulmasi için transkribe edilir ve alternatif olarak uç birlestirilir. HMWK”nin emsal bir protein dizisi asagida gösterilmektedir: KIevaj Edilmis HMWK Burada “klevaj edilmis kininojen” olarak da ifade edilen klevaj edilmis yüksek moleküler agirlikli kininojen (HMWK), örnegin, Örnekler 1 ve 3 ila 7 arasinda tarif edilen yöntemler, örnegin, Western blot kullanilarak analiz edilebilir. Bazi uygulamalarda, klevaj edilmis HMWK'nin hafif zinciri analiz edilebilir. klevaj edilmis HMWK'nin hafif zincirine (örnegin, C-ucu kalintilari içeren bir epitop) baglanan antikorlar gibi, klevaj edilmis HMWK'yi baglayan antikorlar kullanilabilir. Bir örnek, fare mAb klonu 11H05'tir.
Ek olarak, klevaj edilmis HMWK, kütle spektrometri kullanilarak analiz edilebilir. klevaj edilmis HMWK*nin seviyelerinin analiz edilmesi için Immün-blotlama teknikleri teknikte bilinmektedir. Bakiniz, örnegin, Buhler R. et al. Blood Coagul Fibrinolysis, 1995, 6(3):223-232.
Klevaj edilmis kininojenin agir ve hafif zincirlerinin emsal dizileri asagida saglanmaktadir. > klevaj edilmis kininojen-1 agir zincir Analiz Formati Burada açiklanan biyomarkörlerin degerleri (örnegin, mutlak miktarlar veya seviyeler veya nispi miktarlar veya seviyeler, mesela yüzdeler) veya burada açiklanan biyomarkörlerin degerlerindeki degisiklikler, burada tarif edilen analizler ve/veya teknikte bilinen analizler kullanilarak analiz edilebilir. Bazi uygulamalarda, bir süjeden alinan bir numunedeki klevaj edilmis kininojen yüzdesi, burada tarif edilen yöntemlerin herhangi birinde kullanilir.
Biyomarkörlerin seviyelerinin analiz edilmesi için kullanilabilen analizlere, örnegin, immün-analizler, örnegin, Western blot, enzime bagli bagisiklik analizler (ELlSA“lar) (örnegin, sandviç ELISA'lar), radyoimmün-analizler, elektrokemilüminesans-tabanli saptama analizleri ve ilgili teknikler dahildir. Kütle spektrometri esasli yaklasimlar da kullanilabilir. Kromojenik bir substrata dayali analizler de kullanilabilir. Analizler, örnegin, Western blot analizleri ayrica, piyasada bulunan bir nicel görüntüleme sistemi, örnegin, LICOR görüntüleme teknolojisi kullanimini da içerebilir (bakiniz, örnegin, Ll- COR Biosciences firmasindan Odyssey® CLx kizilötesi görüntüleme sistemi). Bazi uygulamalarda, bir elektrokemilüminesans saptama analizi veya elektrokemilüminesans ve örüntülü siralama teknolojisinin bir kombinasyonuna dayali bir analiz kullanilir (örnegin, Meso Scale Discovery (MSD) firmasindan bir ECL veya MULTI-ARRAY teknolojisi analizi).
Burada kullanildigi sekliyle, “ölçme” veya “ölçüm" veya alternatif olarak “saptamak” veya “saptama” terimleri, bir numune içindeki bir maddenin, bu tip maddelerin nitel veya nicel konsantrasyon seviyelerinin türevleri dahil olmak üzere, varliginin, yoklugunun, niceliginin veya (etkili bir miktar olabilen) miktarinin analiz edilmesi veya baska sekillerde bir süjenin degerlerinin veya kategorizasyonunun degerlendirilmesi anlamina gelmektedir.
Bazi uygulamalarda, saglanan analizler yüksek hacimli platformlarda gerçeklestirilebilir.
Bazi uygulamalarda, yüksek hacimli analizler için çok-gözlü plakalar, örnegin, 24-, 48-, 96-, 384- veya daha çok gözlü plakalar kullanilabilir. Münferit analizler her bir gözde paralel olarak gerçeklestirilebilir. Bu nedenle, analiz hacmini arttirmak için birden fazla gözün paralel olarak ölçülmesi için genellikle bir plaka okuyucusunun kullanilmasi arzu göz) paralel olarak görüntüleyebilen plaka okuuycular bu platform için kullanilabilir. Örnegin, piyasada bulunan bir plaka okuyucu (örnegin, Perkin Elmer, Waltham, MA firmasindan temin edilebilen plaka::görüntü sistemi) kullanilabilir. Bu plaka okuyucu, kinetik-tabanli floresans analizini yapabilir. Plaka::görüntü sistemi yüksek toplama etkililigi optiklerine sahiptir ve 96 gözün paralel analizi için tasarlanan özel optiklere sahiptir. Ilave uygun paralel plaka okuyucularina, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, SAFIRE (Tecan, San Jose, CA), FLIPRTETRA® (Molecular Devices, Union City, CA), dahildir. Bazi uygulamalarda, bulusun yüksek hacimli tarama analizleri otomatiktir (örnegin, robotik analizlere uyarlanmistir).
Kitler Mevcut açiklama ayrica, örnegin, insan hastalardan biyolojik numuneler içerenler gibi numunelerdeki klevaj edilmis ve/veya bozulmamis kininojenin degerlendirilmesinde kullanim için kitler de saglamaktadir. Bu tip kitler, diger biçime kiyasla ya klevaj edilmis kininojene veya bozulmamis kininojen spesifik olarak baglanan bir saptama belirteci ve opsiyonel olarak, kontroller olarak klevaj edilmis kininojen ve/veya bozulmamis kininojen içerebilir. Bazi uygulamalarda, kitler ayrica, saptama belirtecinin klevaj edilmis ve/veya bozulmamis kininojene baglanmasinin saptanmasi için ikincil antikorlar ve/veya belirteçler içerir.
Bazi uygulamalarda, kit, burada tarif edilen yöntemlerin herhangi birine göre kullanim için talimatlar içerebilir. Içerilen talimatlar, bir insan hastadan alinan bir biyolojik numune olabilen bir numunedeki klevaj edilmis ve/veya bozulmamis kininojen seviyesinin ölçülmesi için kitte yer alan bilesenlerin nasil kullanilacaginin bir tarifini içerebilir.
Kitin kullanimiyla ilgili talimatlar genellikle, burada tarif edilen analiz yöntemlerinin gerçeklestirilmesi için her bir bilesenin miktariyla ve uygun kosullarla ilgili bilgi içerir.
Kitlerdeki bilesenler ünite dozlarinda, toplu paketlerde (örnegin, çoklu-dozlu paketler) veya alt-ünite dozlarinda olabilir. Açiklamanin kitlerinde tedarik edilen talimatlar tipik olarak, bir etiket vaye paket eki (örnegin, kitte yer alan bir kagit) üzerindeki yazili talimatlardir, ancak makinece-okunabilen talimatlar da (örnegin, bir manyetik veya optik saklama diski) kabul edilebilir.
Etiket veya paket eki, kitin, klevaj edilmis ve/veya bozulmamis kininojen seviyesinin degerlendirilmesi için kullanildigini göstermektedir. Talimatlar, burada tarif edilen yöntemlerin herhangi birinin uygulanmasi için saglanabilir.
Açiklamanin kitleri uygun ambalaj içindedir. Uygun ambalaja, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, flakonlar, siseler, kavanozlar, esnek ambalajlar (örnegin, sizdirmaz Mylar veya plastik torbalar) ve benzerleri dahildir. Ayrica, bir inhaler, nazal verilis cihazi (örnegin, bir atomizer) veya bir mini-pompa gibi bir infüzyon cihazi gibi spesifik bir cihazla kombinasyon halinde kullanim paketler de düsünülmüstür. Bir kit steril bir erisim portuna sahip olabilir (örnegin konteynir bir intravenöz solüsyon torbasi veya bir hipodermik enjeksiyon ignesiyle delinebilir bir tapaya sahip bir flakon olabilir). Konteynir da steril bir erisim portuna sahip olabilir (örnegin konteynir bir intravenöz solüsyon torbasi veya bir hipodermik enjeksiyon ignesiyle delinebilir bir tapaya sahip bir flakon olabilir).
Kitler opsiyonel olarak, tamponlar ve yorumsal bilgiler gibi ilave bilesenler içerebilir.
Normalde, kit bir konteynir ve konteynir üzerinde veya bununla iliskili bir etiket veya paket ek(ler)i içerir. Bazi uygulamalarda, mevcut açiklama, yukarida tarif edilen kitlerin muhtevasini içeren üretim kalemleri saglamaktadir.
Analiz Yöntemlerinin Hastalik Tanisind_a ve Prognozunda Uvgulanmag Burada tarif edilen analiz yöntemleri ve kitler, hastaligin, örnegin, bir hastaligin tanisinin veya prognozunun degerlendirilmesi için uygulanabilir. Degerlendirme, bir süjenin burada tarif edildigi üzere bir hastalik örnegin, HAE gibi bir pKal-aracili rahatsizlik ve RA, UC ve Crohn hastaligi gibi bir otoimmün hastaligi riskinde veya bu hastaliga sahip olarak tanimlanmasini içerebilir. Degerlendirme ayrica, HAE gibi bir pKaI-aracili rahatsizlik için bir tedavinin etkililiginin degerlendirilmesi gibi, bir hastaligin tedavisinin izlenmesini de içerebilir. Ayrica, degerlendirme, bir pKaI inhibitörüyle tedavi edilebilen bir hastaligin tanimlanmasini içerebilir.
Bazi uygulamalarda, analiz yöntemleri ve kitler, bir aday süjeden (örnegin, HAE gibi bir pKal-araoili rahatsizligi veya RA, UC ve Crohn hastaligi gibi bir otoimmün hastaligi oldugundan süphelenilen bir insan hastadan) alinan bir biyolojik numunedeki (örnegin, bir kan numunesi veya bir plazma numunesi) klevaj edilmis kininojen ve/veya bozulmamis kininojen seviyesini belirlemek için gerçeklestirilir. Klevaj edilmis kininojenin seviyesi daha sonra, numunedeki klevaj edilmis kininojenin bir degerinin (örnegin, yüzde), bozulmamis kininojenin bir degerinin veya her ikisinin belirlenmesi için ya bozulmamis kininojenle veya numunedeki kininojenin toplam miktariyla karsilastirilabilir. Klevaj edilmis kininojenin ve/veya bozulmamis kininojenin degeri, süjenin pKal-aracili rahatsizlik, örnegin, HAE veya RA, UC ve Crohn hastaligi gibi bir otoimmün hastaligina sahip veya risk altinda olup olmadiginin belirlenmesi için bir referans degerle karsilastirilabilir. Örnegin, klevaj edilmis kininojenin yüzdesi bir referans sayisindaysa veya daha yüksekse, süje, HAE, RA, UC ve Crohn hastaligi gibi bi pKaI-aracili rahatsizliga sahip veya risk altinda olarak tanimlanabilir. Alternatif olarak, bozulmamis kininojenin yüzdesi bir referans sayisindaysa veya daha düsükse, süje HAE, RA, US ve Crohn hastaligi gibi bir pKaI-aracili rahatsizliga sahip veya risk Referans degeri, klevaj edilmis kininojen yüzdesinin bir kontrol seviyesi olabilir. Bazi uygulamalarda, kontrol seviyesi, bir saglikli süjeden veya tercihen aday süjeyle ayni türden olan saglikli süje popülasyonundan elde edilen bir numune (örnegin, kan veya plazma numunesi) gibi bir kontrol numunesindeki klevaj edilmis kininojen yüzdesidir.
Burada kullanildigi sekliyle, saglikli bir süje, klevaj edilmis ve/veya bozulmamis kininojen seviyesinin ölçüldügü anda görünürde hedef hastaligi (örnegin, HAE gibi bir pKaI-aracili rahatsizlik veya RA, UC ve Crohn hastaligi gibi bir otoimmün hastaligi) olmayan veya hiç hastalik hikayesi olmayan bir süjedir.
Kontrol seviyesi ayrica, önceden belirlenmis bir seviye de olabilir. Bu tip bir önceden belirlenmis seviye, hedef hastaligi olmayan veya risk altinda olmayan süjelerin bir popülasyonundaki klevaj edilmis kininojen yüzdesini temsil edebilir. Ayrica, hedef hastaligi olan süjelerin bir popülasyonundaki klevaj edilmis kininojen yüzdesini de temsil edebilir. Önceden belirlenmis seviye çesitli biçimlerde olabilir. Örnegin, bir medyan veya ortalama gibi bir tekli kesme degeri olabilir. Bazi uygulamalarda, bu tip bir önceden belirlenmis seviye, bir tanimli grubun hedef bir hastaliga sahip oldugunun bilindigi ve bir baska tanimli grubun hedef hastaliga sahip olmadiginin bilindigi seklinde, karsilastirma gruplarina dayali olarak olusturulabilir. Alternatif olarak, önceden belirlenmis seviye bir aralik, örnegin, önceden belirlenmis bir yüzde dilimi içerisindeki bir kontrol popülasyonundaki klevaj edilmis kininojen yüzdesini temsil eden bir aralik olabilir.
Burada tarif edilen sekildeki kontrol seviyesi rutin teknolojiyle belirlenebilir. Bazi örneklerde, kontrol seviyesi, yine burada tarif edilen sekildeki bir kontrol numunesi üzerinde konvansiyonel bir yöntem (örnegin, burada tarif edildigi üzere bir test numunesindeki klevaj edilmis ve/veya bozulmamis kininojen seviyesinin elde edilmesi için olanla ayni analiz) gerçeklestirilerek elde edilebilir. Baska örneklerde, klevaj edilmis ve/veya bozulmamis kininojen seviyeleri bir kontrol popülasyonunun üyelerinden elde edilebilir ve sonuçlar, kontrol popülasyonundaki klevaj edilmis ve/veya bozulmamis kininojeni temsil eden kontrol seviyesinin (önceden belirlenmis bir seviye) elde edilmesi için, örnegin, bir bilgsayar programiyla elde edilebilir.
Bir aday süjeden elde edilen bir numunedek klevaj edilmis kininojen yüzdesinin burada tarif edilen sekilde referans degeriyle karsilastirilmasiyla, aday süjenin >PKaI-aracili hastaliga (örnegin, HAE veya RA, UC ve Crohn hastaligi gibi bir otoimmin hastaligi) sahip olup olmadigi veya risk altinda olup olmadigi belirlenebilir. Örnegin, aday süjenin bir numunesindeki klevaj edilmis kininojen yüzdesi referans degerden saparsa (örnegin, referans degere kiyasla artarsa), aday süje hastaliga sahip veya risk altinda olarak tanimlanabilir. Referans deger, hedef hastaligi olan süjelerin bir popülasyonundaki klevaj edilmis kininojenin yüzde araliklarini temsil ettiginde, bir adayin numunesindeki klevaj edilmis kininojenin araliga denk gelen yüzdesi, aday süjenin hedef hastaligi oldugunu veya risk altinda oldugunu gösterir.
Burada kullanildigi sekliyle, “bir yükselmis seviye veya bir referans degeri üzerindeki bir seviye”, klevaj edilmis kininojen seviyesinin/yüzdesinin, bir kontrol numunesindeki klevaj edilmis kininojenin bir seviyesinin/yüzdesinin önceden belirlenmis bir esigi gibi bir referans degerden daha yüksek oldugu anlamina gelmektedir. Kontrol seviyeleri burada ayrintili olarak tarif edilmektedir. Klevaj edilmis kininojenin yükselmis bir olan bir klevaj edilmis kininojen yüzdesini içerir. Klevaj edilmis kininojenin yükselmis bir yüzdesi ayrica, bir sifir durumundan (örnegin, bir numunede bir yakalama belirtecine baglanan sifir veya saptanamaz klevaj edilmis kininojen ve/veya bozulmamis kininojen) bir sifir-olmayan duruma (örnegin, bir miktar veya saptanabilir klevaj edilmis kininojen ve/veya bozulmamis kininojen) bir olgunun artmasini da içerir.
Burada kullanildigi sekliyle, “azalan bir yüzde/seviye veya bir referans degerinin altindaki bir yüzde/seviye”, klevaj edilmis kininojen yüzdesinin/seviyesinin, bir kontrol numunesindeki klevaj edilmis kininojenin önceden-belirlenmis bir esigi gibi bir referans degerinden daha düsük oldugu anlamina gelmektedir. Kontrol seviyeleri burada ayrintili olarak tarif edilmektedir. Klevaj edilmis kininojenin azalmis bir yüzdesi, örnegin, kininojen içerir. Klevaj edilmis kininojenin azalmis bir yüzdesi ayrica, bir sifir-olmayan durumdan (örnegin, bir miktar veya saptanabilir klevaj edilmis kininojen) ve/veya bir sifir durumuna (örnegin, bir numunede sifir veya saptanamaz klevaj edilmis kininojen) ve/veya bir numunede bir olgunun azalmasini da içerenbir yakalama belirtecine baglanir.
Bazi uygulamalarda, aday süje, örnegin, HAE gibi bir pKaI-aracili rahatsizligi veya RA, UC ve Crohn hastaligi gibi bir otoimmün hastaligi olan bir insan hastadir. Örnegin, süjede ödem, söz konusu sismenin tamamen veya baskin olarak periferik oldugu sisme; ürtiker; enfeksiyon kanitinin yoklugunda kizariklik, agri ve sisme; histamin- araciIi-olmayan ödem, tekrarlayan sisme ataklari veya bunlarin bir kombinasyonu vardir. Diger uygulamalarda, süje, numunenin alindigi esnada bir pKaI-aracili rahatsizligin hiç semptomuna sahip degildir, bir pKaI-aracili rahatsizligin bir semptomunun hikayesine sahip degildir veya HAE gibi bir pKaI-aracili rahatsizlik hikayesine sahip degildir. Yine baska uygulamalarda, süje bir anti-histamin terapisine, bir kortikosteroid terapisine veya her ikisine dirençlidir.
Bazi uygulamalarda, plazma kallikrein aktivitesi içeren hastalik veya durum, herediter anjiyoödemdir (HAE). Herediter anjiyoödem (HAE) ayrica “Quincke ödemi”, C1 esterazi inhibitörü yoksunlugu, C1 inhibitörü yoksunlugu ve herediter anjiyonörotik ödem (HANE) olarak da bilinmektedir. HAE, örnegin, bacaklari, yüzü, cinsel organlari, sindirim sistemini ve hava yolunu etkileyebilen, tekrarlayan siddetli sisme (anjiyoödem) epizotlariyla karakterizedir. HAE'nin semptomlarina, örnegin, kollarda, bacaklarda, dudaklarda, gözlerde, dilde ve/veya bogazda sisme; bogaz sismesini ve ani ses kisikligini içerebilen hava yolu tikanikligi; bariz neden olmadan tekrarlayan karin krampi epizotlari ve/veya siddetli olabilen ve karin krampina, kusmaya, dehidrasyona, ishale, agriya ve/veya soka yol açabilen bagirsaklarin sismesi dahildir. Bu HAE'si olan bireylerin yaklasik üçte biri, bir atak esnasinda eritema marjinatum olarak adlandirilan kasintili olmayan bir kurdesen gelistirir.
Hava yolunun sismesi hayati tehdit edebilir ve bazi hastalirda ölüme neden olur.
Mortalite oranlarinin %15-33 oldugu tahmin edilmektedir. HAE, yilda yaklasik 15.000- .000 acil servis ziyaretine yol açar.
Travma veya stres, örnegin, dental islemler, hastalik (örnegin, soguk alginligi ve nezle gibi viral hastaliklar), adet görme ve ameliyat, bir anjiyoödem atagini tetikleyebilir.
HAE'nin akut ataklarinin engellenmesi için, hastalar. önceden ataklara neden olmus olan spesifik uyaranlari görmezden gelmeye tesebbüs edebilir. Ancak, birçok durumda, bir atak bilinmeyen bir tetik olmadan meydana gelir. Tipik olarak, HAE semptomlari ilk olarak çocuklukta ortaya çikar ve ergenlikte kötülesir. Ortalama olarak, tedavi edilmemis hastalar her 1 ila 2 haftada bir bir atak geçirir ve birçok epizot yaklasik 3 ila 4 gün sürer (ghr.nlm.nih.gov/condition/hereditary-angioedema). Ataklarin sikligi ve süresi, herediter anjiyoödemi olan hastalar arasinda, ayni aileden olan insanlar arasinda bile büyük oranda degisiklik gösterir.
HAE'nin, tip I, II ve III olarak bilinen üç tipi vardir. HAE'nin 50.000ide 1 kisiyi etkiledigi, tip I'in vakalarin yaklasik yüzde 85'inden sorumlu oldugu, tip Il'nin vakalarin yaklasik yüzde 15'inden sorumlu oldugu ve tip III'ün çok ender oldugu tahmin edilmektedir. Tip düsünülmüstür, ancak etkilenen erkeklerin oldugu aileler tanimlanmistir.
HAE, etkilenen bir kisinin mutasyonu etkilenen bir ebeveynden miras alabildigi sekilde bir otozomal baskin örüntüde miras alinir. Gende yeni mutasyonlar da ortaya çikabilir ve böylelikle HAE ayrica, ailede hiç rahatsizlik hikayesi olmayan insanlarda da ortaya çikabilir. Vakalarin %20-25'inin yeni bir spontan mutasyondan kaynaklandigi tahmin edilmektedir.
SERPING1 genindeki mutasyonlar tip I ve tip II herediter anjiyoödeme neden olur.
SERPING1 geni, enflamasyonun kontrol edilmesi için önemli olan C1 inhibitörünün yapilmasi için komutlar saglar. Ct inhibitörü, enflamasyonu tesvik eden belirli proteinlerin aktivitesini bloke eder. Tip l herediter anjiyoödemine neden olan mutasyonlar, kanda indirgenmis C1 inhibitörü seviyelerine yol açar. Aksine, tip ll'ye neden olan mutasyonlar, anormal islev gören bir C1 inhibitörünün üretimiyle sonuçlanir.
Fonksiyonel C1 inhibitörünün uygunseviyeleri olmadan, asiri miktarlarda bradikinin üretilir. Bradikinin enflamasyonu, kan damarlarinin duvarlari üzerinden vücut dokularinin içine sivi sizintisini arttirarak tesvik eder. Vücut dokularinda sivilarin asiri birikmesi, tip I ve tip II herediter anjiyoödemi olan bireylerde görülen sisme epizotlarina neden olur.
F12 genindeki mutasyonlar, bazi tip I" herediter anjiyoödem vakalariyla iliskilidir. F12 geni, koagülasyon faktör XII yapilmasi için komutlar saglamaktadir. Kan pihtilasmasinda (koagülasyon) kritik bir rol oynamaya ek olarak, faktör XII ayrica enflamasyonun önemli bir uyarioisidir ve bradikinin üretiminde yer alir. F12 genindeki belirli mutasyonlar, artan aktiviteye sahip faktör XII üretimiyle sonuçlanir. Bunun bir sonucu olarak, daha fazla bradikinin üretilir ve kan damarlari daha sizintili hale gelir, bu da sisme epizotlarina yol açar. Tip III herediter anjiyoödemin diger vakalarinin nedeni halen bilinmemektedir. Henüz tanimlanmamis bir veya daha fazla gendeki mutasyonlar, bu vakalardaki rahatsizliktan sorumlu olabilir.
HAE, anjiyoödemin diger biçimlerine benzer sekilde alerjilerden veya diger tibbi durumlardan ortaya çikabilir ancak nedenve tedavi açisindan kayda deger ölçüde farklilik gösterir. Herediter anjiyoödem bir alerji olarak yanlis teshis edildiginde, en yaygin olarak, her ne kadar epinefrin hayati tehdit eden reaksiyonlarda kullanilabilse de, HAE'de tipik olarak etkisiz olan antihistaminiklerle, steroidlerle ve/veya epinefrinle tedavi edilir. Yanlis teshisler ayrica, karin sisligi olan hastalar için gereksiz inceleme ameliyatlariyla sonuçlanmistir ve bazi HAE hastalarinda karin agrisi, psikosomatik seklinde yanlis olarak teshis edilmistir.
HAE'nin semptomlari, örnegin, anketler, örnegin, hastalar, klinisyenler veya aile üyeleri tarafindan doldurulan anketler kullanilarak analiz edilebilir. Bu tip anketler teknikte bilinmektedir ve örnegin, görsel analog ölçekler içerir. Bakiniz, örnegin, McMiIIan, C.V. (ii) Romatoid Artirit Romatoid artirit (RA), eklem sismesine ve agriya neden olan ve normalde eklem tahribatiyla sonuçlanan bir otoimmün, Crohnik enflamatuar hastaliktir. RA genellikle, hastalik semptomlarinin yinelemeleri arasinda hastalik aktivitesinin “alevlenmeleriyle” tekrarlayan/yineleyen bir seyir izler. RA, Sjogren sendromu (gözyasi ve tükürük bezlerinin enflamasyonunun neden oldugu kuru gözler ve agiz), plörit (akciger zarinin, derin soluma ve öksürme üzerine agriya neden olan enflamasyonu), romatoid nodüller (akcigerler içerisinde gelisen enflamasyonun nodüler alanlari), perikardit (perikardiyumun, yatildiginda veya öne egilindiginde agriya neden olan enflamasyonu), Felty sendromu (süjeyi enfeksiyona yatkin hale getiren, RA ile birlikte gözlemlenen splenomegali ve lökopeni) ve vaskülit (kan damarlarinin, kan akisini bloke edebilen bir enflamasyonu) dahil olmak üzere bir dizi ilave enflamatuar rahatsizlikla iliskilidir.
Plazma kallikrein romatoid artirite dahil edilmistir.
Aktif RA semptomlarina yorgunluk, istah kaybi, düsük dereceli ates, kas ve eklem agrilari ve sertligi dahildir. Kas ve eklem sertligi çogunlukla sabahlari ve inaktivite periyotlarindan sonra daha fazla görülür. Alevlenmeler esnasinda, eklemler siklikla, genellikle sinovitin bir sonucu olarak kizarik, sismis, agrili ve hassas hale gelir.
Romatoid artiritin tedavisi ilaçlarin, istirahatin, eklem germe egzersizlerinin ve eklem korumasinin bir kombinasyonunu içerir. Romatoid artiritin tedavisinde iki ilaç sinifi kullanilmaktadir: anti-enflamatuar “birinci-sira ilaçlar" ve “Hastalik-Modifiye Edici Antiromatizmal Ilaçlar” (DMARD'Iar). Birinci-sira ilaçlara NSAID'Ier (örnegin, aspirin, naproksen, ibuprofen ve etodolak) ve kortizon (kortikosteroid) dahildir. Altin (örnegin, altin tuzlari, altin tiyoglukoz, altin tiyomalat, oral altin), metotreksat, sülfasalazin, D- penisilamin, azatioprin, siklofosfamit, klorambusil ve siklosporin, leflunomid, etanersept, infliksimab, anakinra ve adalimumab ve hidroksiklorokuin gibi DMARD'Iar hastalik gerilemesini tesvik eder ve ilerleyici eklem tahribatini engeller, ancak anti-enflamatuar ajanlar degillerdir.
RA ve RA semptomlarinin analiz edilmesi için faydali ölçeklere, örnegin, Romatoid Artirite Özcü Saglik Endeksi (ASHI: Ware et al., (1999) Med. Care. 37(5 Suppl):MS40- 50), Artirit Etki Ölçümü Ölçekleri veya Artirit Etki Ölçümü Ölçekleri 2 (AIMS veya Degerlendirmesi Anketi (HAQ), HAQII veya modifiye HAQ (bakiniz, örnegin, Pincus et (iii) Enflamatuar Bagirsak Hastaligi (IBD) - Crohn hastaligi ve ülseratif kolit Enflamatuar bagirsak hastaligi (IBD) kalin bagirsagin ve bazi vakalarda ince bagirsagin enflamatuar durumlarinin bir grubudur. IBD'nin ana formlari Crohn hastaligi ve ülseratif kolittir (UC). Çok daha az vakadan sorumlu olanlar IBD'nin diger biçimleridir: kolajenöz kolit, Ienfositik kolit, iskemik kolit, diversiyon kolit, Behçet hastaligi, enfektif kolit ve belirsiz kolit. Crohn hastaligiyla UC arasindaki temel fark, enflamatuar degisikliklerin yeri ve yapisidir. Crohn, her ne kadar vakalarin çogunlugu terminal ileumda baslasa da, agizdan anüse kadar sindirim sisteminin herhangi bir parçasini etkileyebilir (atlama Iezyonlari). Bunun aksine, ülseratif kolit, kolonla ve rektumla sinirlidir. Mikroskopik olarak, ülseratif kolit mukozayla (bagirsagin epitelyal astari) sinirliyken, Crohn hastaligi tüm bagirsak duvarini etkiler. Son olarak, Crohn hastaligi ve ülseratif kolit, farkli orantilarda bagirsak-disi belirtilerle (mesela karaciger problemleri, artirit, deri belirtileri ve göz problemleri) kendini gösterir. çesitli iliskili sikayetler veya hastaliklar (artirit, kangrenli piyodermi, primer sklerozan kolanjit) dahildir. Teshis genellikle patolojik lezyonlarin biyopsisiyle kolonoskopi ile konulur. immünosupresyon gerektirebilir. Azatioprin, metotreksat veya 6-merkaptopürin gibi immünosupresifler kullanilabilir. Daha yaygin olarak, IBD'nin tedavisi mezalaminin bir formunu gerektirir. Siklikla, hastalik alevlenmelerini kontrol etmek için steroidler kullanilir bir zamanlar bunlar bir idame ilaci olarak kabul edilmistir. Infliksimab gibi biyolojikler, Crohn hastaligi veya Ülseratif Koliti olan hastalarin tedavi edilmesi için kullanilmistir. Ciddi vakalar, bagirsak rezeksiyonu, striksiyon plasti veya geçici veya kalici bir kolostomi veya ileostomi gibi cerrahi gerektireblir. IBD için alternatif ilaç tedavileri çesitli formlarda mevcuttur ancak bu tip yöntemler, uzatilmis steroidal maruziyetin veya cerrahi eksizyonun önlenmesi amaciyla altta yatan patolojinin kontrol edilmesine odaklidir. Çogunlukla tedavi, yüksek anti-enflamatuar etkilere sahip, prednizon gibi ilaçlarin verilisiyle baslatilir. Enflamasyon basarili olarak kontrol edildiginde, hasta çogunlukla, hastaligin gerilemede tutulmasi için, - bir mezalamin olan - azakol gibi daha hafif bir ilaca geçirilir. Basarisiz olunursa, yukarida belirtilen immünosupresan ilaçlarin (bir anti-enflamatuar etkiye sahip olabilen) bir mezalaminle bir kombinasyonu, hastaya bagli olarak verilebilir veya verilmeyebilir. (iv) Qiger pKaI-aracili veya Bradikinin-aracili Rahatsizliklar Plazma kallikrein aktivitesiyle iliskili diger emsal hastaliklara veya durumlara histamin- bagimli-olmayan anjiyoödem, romatoid artirit, Crohn hastaligi, ülseratif kolit, Iupus, Alzheimer hastaligi, septik sok, yanik yaralanmasi, beyin iskemisi/reperfüzyon yaralanmasi, serebral ödem, diyabetik retinopati, diyabetik nefropati, maküler ödem, vaskülit, arteriyel veya venöz tromboz, ventriküler destek cihazlariyla veya stentlerle iliskili tromboz, trombozlu heparin-indüklü trombositopeni, tromboembolik hastalik ve stabil olmayan gögüs anjinli koroner kalp hastaligi, ödem, göz hastaligi, gut, bagirsak hastaligi, oral mukozit, nörpatik agri, enflamatuar agri, spinal stenoz-dejeneratif omurilik hastaligi, ameliyat sonrasi bagirsak tikanmasi, aortik anevrizma, osteoartirit, herediter anjiyoödem, akciger embolisi, felç, kafa travmasi veya peri-tümör beyin ödemi, sepsis, akut orta serebral arter (MCA) iskemik olayi (felç), restenoz (örnegin, anjiyoplastiden sonra), sistemik Iupus eritematoz nefrit, bir otoimmün hastaligi, bir enflamatuar hastalik, bir kardiyovasküler hastalik, bir nörolojik hastalik, yanlis protein katlanmasiyla iliskili bir hastalik, anjiyojenezle iliskili bir hasrtalik, hipertansif nefropati ve diyabetik nefropati, alerjik ve solunum hastaliklari (örnegin, anafilaksi, astim, Crohnik obstrüktif akciger hastaligi, akut solunum sikintisi sendromu, kistik fibroz, persistan, rinit) ve doku yaralanmalari (örnegin, yanik veya kimyasal yaralanma) dahildir.
Burada tarif edildigi sekilde bir pKaI-aracili rahatsizligi olan veya risk altinda olarak tanimlanan bir süje, burada tarif edilenler gibi uygun bir tedaviye tabi tutulabilir.
B. Mavi E_tkililiginin Merlengirilmesi Burada tarif edilen analiz yöntemleri ayrica, bir pKaI-aracili rahatsizlik (örnegin, HAE) için bir tedavinin etkililiginin degerlendirilmesi için de uygulanabilir. Örnegin, birden fazla biyolojik numune (örnegin, kan veya plazma numuneleri), bir tedavinin tedaviden ya önce veya sonra veya tedavi süresi esnasinda gerçeklestirildigi bir süjeden alinabilir. Klevaj edilmis ve/veya bozulmamis kininojen seviyeleri, burada tarif edildigi sekildeki analiz yöntemlerinin herhangi biriyle ölçülebilir ve klevaj edilmis ve/veya bozulmamis kininojenin degerleri (örnegin, yüzdeler) buna bagli olarak belirlenebilir.
Klevaj edilmis kininojenin yüzdesi tedaviden sonra veya tedavi süresi boyunca azalirsa (daha önce alinan bir numunekedine kiyasla daha sonra alinan bir numunedeki klevaj edilmis kininojen yüzdesi) veya bozulmamis kininojen yüzdesi tedaviden sonra veya tedavi süresi boyunca artarsa, bu durum, tedavinin etkili oldugunu gösterir. Bazi örneklerde, tedavi, burada tarif edildigi üzere bir kallikrein baglayici ajan gibi bir terapötik ajan, burada tarif edildigi üzere bir bradikinin B2 reseptörü antagonisti veya burada tarif edildigi üzere bir Ct-INH replasman ajani içerir. Terapötik ajanlarin örneklerine, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, DX-2930 veya DX88 dahildir.
Süje tedaviye yanit vermiyor olarak tanimlanirsa, terapötik ajanin daha yüksek bir dozu ve/veya dozaj sikligi tanimlanan süjeye verilir. Bazi uygulamalarda, terapötik ajanin dozaji veya dozaj sikligi, tedaviye yanit veriyor olarak tanimlanan veya Ileri tedaviye ihtiyaç duymayan bir süjede idame ettirilir, düsürülür veya durdurulur. Alternatif olarak, birinci tedaviye yanit vermiyor olarak bulunan süjeye farkli bir tedavi uygulanabilir. pKal Inhibitörlerivle Tedaviye Duyarli Rahatsizliklarin Tanimlanmasi Klevaj edilmis kininojenin ve/veya bozulmamis kininojenin degerlerine ayrica, bir pKal inhibitörüyle tedavi edilebilen bir rahatsizligin tanimlanmasi için dayanilabilir. Bu yöntemin uygulanmasi için, bir hedef hastaligi olan bir süjeden alinan bir numunedeki (örnegin, bir kan numunesi veya bir plazma numunesi) yarimli kininojen seviyesi ve/veya bozulmamis kininojen seviyesi uygun bir analiz ile, örnegin, bir Western blot analizi gibi burada tarif edilenlerle ölçülebilir. Klevaj edilmis ve/veya bozulmamis kininojen yüzdeleri gibi degerler burada tarif edildigi sekilde belirlenebilir. Klevaj edilmis kininojen ve/veya bozulmamis kininojen degerleri, burada tarif edildigi üzere bir referans degerle karsilastirilabilir. Klevaj edilmis kininojen/bozulmamis kininojenin degeri referans degerinden saparsa (örnegin, yükselirse veya azalirsa), bu durum, bir pKal inhibitörünün hastaligin tedavisinde etkili olabilecegini gösterir. Örnegin, klevaj edilmis kininojenin yüzdeleri tedaviden sonra veya tedavi süresi boyunca azaliyorsa, tedavi etkili oluyor olarak tanimlanabilir. Alternatif olarak, bozulmamis kininojenin yüzdeleri tedaviden sonra veya tedavi süresi boyunca artiyorsa, tedavi etkili oluyor olarak tanimlanabilir.
Bazi uygulamalarda, klevaj edilmis ve/veya bozulmamis kininojen seviyesi, kininojenin diger formuna kiyasla ya klevaj edilmis kininojene veya bozulmamis kininojene spesifik olarak baglanan bir saptama belirteci (örnegin, bir antikor) kullanilarak ölçülebilir. Bazi örneklerde, antikor, bozulmamis kininojene kiyasla klevaj edilmis kininojene spesifik olarak baglanir. Baska örneklerde, antikor, klevaj edilmis kininojenin hafif zincirinin C- ucuna spesifik olarak baglanir.
Hastalik bir pKal inhibitörüne duyarli olarak (bununla tedavi edilebilir olarak) tanimlanirsa, yöntem ayrica hastaligi olan süjeye, bir pKal inhibitörünün, örnegin, DX- 88, EPlKAL-2 veya X-29307un etkili bir miktarinin verilisini içerebilir.
Burada tarif edilen yöntemlerin herhangi biriyle tanimlandigi üzere, bir pKaI-aracili veya bradikinin-aracin rahatsizlik riskinde olan veya bundan muzdarip olan (örnegin, hastaliga sahip olan olan) bir süje, herhangi br uygun terapötik ajanla tedavi edilebilir.
Bazi uygulamalarda, saglanan yöntemler, saglanan bir analizin, örnegin, biyomarkör saptanmasinin çiktisina dayali olarak bir süje için bir tedavinin seçilmesini içerir.
Bazi uygulamalarda, yöntem, bir terapötik ajanin, örnegin, burada tarif edildigi sekilde bir kallikrein baglayici ajanin, örnegin, burada tarif edildigi üzere bir bradikinin B2 reseptörü antagonistinin, örnegin, burada tarif edildigi üzere bir Ci-INH replasman ajaninin, analizin, örnegin, biyomarkör saptanmasinin çiktisina dayali olarak süjeye verilis için seçilmesinin veya verilisinin birini veya her ikisini içerir.
Bazi uygulamalarda, bir plazma kallikrein baglayici protein veya polipeptit bir süjeye verilir. Bazi uygulamalarda, kallikrein baglayici ajan bir kallikrein inhibitörü, örnegin, peptit, bir küçük molekül inhibitörü, bir kallikrein antikoru veya bunun bir fragmanidir.
Bazi uygulamalarda, bradikinin 82 reseptörünün bir antagonisti bir süjeye verilir. Bazi uygulamalarda, bir C1-INH replasman terapötik ajan bir süjeye verilir.
Terapötik ajan, örnegin, kallikrein inhibitörü, örnegin, bradikinin 82 reseptörü antagonisti, örnegin, C1-INH replasman ajani, plazma kallikrein ve/veya bradikinin aktivitesi içeren hastaligin veya durumun tedavisi için bir kombinasyon terapisinin parçasi olarak bir baska terapiyle birlikte verilebilir. Örnegin, bir kallikrein inhibitörünün, bradikinin BZ reseptörü antagonistinin veya C1-INH replasman ajaninin biriyle veya daha fazlasiyla, örnegin, bir kallikrein inhibitörünün, bradikinin B2 reseptörü antagonistinin veya C1 -INH replasman ajaninin ve bir baska terapinin biriyle veya daha fazlasiyla kombinasyon terapisi, birden fazla farkli yapilandirmalarda saglanabilir.
Birinci ajan, diger terapinin verilisinden önce veya sonra verilebilir. Bazi durumlarda, birinci ajan ve bir baska terapi (örnegin, bir terapötik ajan) eszamanli olarak veya yakin zamansal yakinlikta (örnegin, ayni tedavi seansi esnasinda gibi, iki enjeksiyon arasindaki kisa bir zaman araliginda) verilir. Birinci ajan ve diger terapi ayrica daha büyük zamansal araliklarda da verilebilir.
Plazma kallikrein baglayici ajanlar Plazma kallikrein baglayici ajanlar (örnegin, baglayici proteinler, örnegin, polipeptitler, örnegin, inhibitör polipeptitler, örnegin, antikorlar, örnegin, inhibitör antikorlar veya diger baglayici ajanlar, örnegin, küçük moleküller) çesitli hastaliklar ve durumlar, örnegin, plazma kallikrein aktivitesini içeren hastaliklar ve durumlar için faydali terapötik ajanlardir. Örnegin, bazi uygulamalarda, plazma kallikrein aktivitesini içeren hastalik veya durum herediter anjiyoödemdir (HAE). Bazi uygulamalarda bir plazma kallikrein baglayici protein veya polipeptit, bir pKaI-aracili veya bradikinin-aracili rahatsizlik riskinde olan veya bundan muzdarip olan bir süjeye verilir.
Doku ve/veya plazma kallikrein olan kallikreinin bir dizi faydali protein inhibitörlerine bir Kunitz alani dahildir. Burada kullanildigi sekliyle, bir “Kunitz alani”, en az 51 amino aside sahip ve en az iki, tercihen üç disülfit ihtiva eden bir polipeptit alanidir. Alan, birinci altinci sisteinlerin, ikinci ve dördüncü ve üçüncüyle besinci sisteinlerin disülfit baglari olusturacagi sekilde katlanir (örnegin, 58 amino aside sahip bir Kunitz alaninda, sisteinler, asagida verilen BPTI homolog dizilerin numaralandirilmasina göre 5, 14, 30, 38, 51 ve 55 amino asitlere karsilik gelenkonumlarda mevcut olabilir ve disülfitler, 5 ve mevcutsa, bunlarin sisteinlerinin karsilik gelen bir alt kümesi arasinda olusabilirler. Ilgili sisteinler arasindaki aralik, sunlara karsilik gelen konumlar arasindaki asagidaki araliklarin 7, 5, 4, 3, 2, 1 veya 0 amino asitleri içerisinde olabilir: asagida verilen BPTI herhangi bir jenerik Kunitz alanindaki spesifik konumlarin ifade edilmesi için bir referans olarak kullanilabilir. Ilgi konusu bir Kunitz alaninin BPTI ile karsilastirilmasi, hizali sisteinlerin sayisinin maksimize edildigi en iyi oturma hizalamasinin tanimlanmasiyla gerçeklestirilebilir.
BPTIlnin Kunitz alaninin (yüksek çözünürlükte) 3D yapisi bilinmektedir. X-isini yapilarinin biri, Brookhaven Protein Data Bankta “6PTI” olarak bulunmaktadir. Bazi Kunitz alani dizisi bilinmektedir. Bilinen insan homologlarina, doku faktörü yolaki inhibitörü (TFPI) olarak da bilinen LACI'nin üç Kunitz alani (Wun et al., (1988) J. Biol. 3357), hepatosit büyüme faktörü aktivatörü inhibitörü tip 1'in Kunitz alanlari, Hepatosit büyüme faktörü aktivatörü inhibitörü tip 2'nin Kunitz alanlari, US Patenti Yayini No.: agirliga sahip (Tablo 1”deki amino asit dizisi), üç Kunitz alani ihtiva eden bir insan serumu fosfoglikoproteinidir.
Tablo 1: Emsal Dogal Kunitz Alanlari LACI: (SEO in NO. 4› ' 1:::: :' .::::çizi-:pgga ;:î::: ; _';.:__- Sinyal dizisi (1-28) büyük harftir ve alti çizilidir.
LACI-K2 (121-178) alti çizilidir BPTI (SEQ olarak ifade edilmektedir. LACl'nin CDNA dizisi, Wun et mutasyonal çalismalari bildirmektedir. LACI-K1, F.Vlla doku faktörüne komplekslendiginde ve LACI-K2 faktör Xa'yi önlediginde Faktör Vlla'yi (F.Vlla) önler.
Emsal Kunitz alanlarini ihtiva eden proteinlere, SWISS-PRO Erisim Numalarari parantez içinde yazili sekilde asagidakiler dahildir: A4_HUMAN (P, A4_MOUSE (P, AMBP_PLEPL (P, AXP1_ANTAF (P, BPT2_BOVIN (P, CA36_HUMAN (P, ELAC_TRIVU (Q, HTIB_MANSE (P, lVBI_DENPO (P, SBPI_SARBU (P, TKD1_SHEEP (Q, AMBP_BOVIN (P, AMBP_MESAU (Q, AMBP_RAT (Q, SPT1_HUMAN (, SPT2_MOUSE (Q9WU03), TFP2_HUMAN (P, TFPI_HUMAN (P, TFPI_RABIT (P Bir dizi veritabanindan bir Kunitz alaninin tanimlanmasi için çesitli yöntemler kullanilabilir. Örnegin, bir Kunitz alaninin bilinen bir amino asit dizisi, bir konsensüs dizisi veya bir motif (örnegin, ProSite Motifi), örnegin, BLAST kullanilarak GenBankasi dizi veritabaninda (National Center for Biotechnology Information, National Institutes of Health, Bethesda MD); örnegin, Pfam arastirmasi için varsayilan parametreler kullanilarak HMM'nin (Sakli Markov Modelleri) Pfam veritabaninda; SMART veritabaninda veya ProDom veritabaninda aranabilir. Örnegin, Pfam Yayin 9'un Pfam Erisim Numarasi PF00014, Kunitz alanlarinin tanimlanmasi için sayisiz Kunitz alani ve bir HMM saglar. Pfam veritabaninin bir tarifi Sonhammer et al. (1997) Proteins 28(3):405-420'de bulunabir ve HMM'lerin ayrintili bir tarifi, örnegin, Gribskov et al.
HMM'Ierin SMART veritabani (Basit Modüler Mimari Arastirma Araci, EMBL, Heidelberg, DE). SMART veritabani, HMMer2 arama programinin (R. Durbin et al. (1998) Biological sequence analysis: probabilistic models of proteins and nucleic acids.
Cambridge University Press) sakli Markov modelleriyle profillemeyle tanimlanan alanlar ihtiva eder. Veritabani da açimlanir ve izlenir. ProDom protein alani veritabani, homolog alanlarin otomatik bir derlemesinden olusur (Corpet et al. (1999), Nucl. Acids veritabanlarinin tekrarlamali PSl-BLAST arastirmalari kullanilarak olusturulur (Altschul Chemistry 23:333-340.). Veritabani otomatik olarak her bir alan için bir konsensüs dizisi üretir. Prosite, Kunitz alanini bir motif olarak listeler ve bir Kunitz alani içeren proteinleri Kunitz alanlari, birincil olarak, iki kivrim bölgesindeki (“baglayici kivrimlar”) amino asitleri kullanarak hedef proteazla etkilesir. Birinci kivrim bölgesi yaklasik olarak, BPTI'nin 13-20 amino asitlerine karsilik gelen kalintilar arasindadir. Ikinci kivrim bölgesi yaklasik olarak, BPTI'nin 31-39 amino asitlerine karsilik gelen kalintilar arasindadir. Kunitz alanlarinin emsal bir kitapligi, birinci ve/veya ikinci kivrim bölgelerindeki bir veya daha fazla amino asit konumlarini degistirir. Kallikreinle etkilesen Kunitz alanlari için tarama yapilirken veya gelismis afinite varyantlari için seçim yapilirken, degistirmek için özellikle faydali konumlara sunlar dahildir: BPTIlnin azindan bazilarinin, hedef proteazla yakin temasta olmasi beklenir. Ayrica, diger konumlari, örnegin, üç-boyutlu yapida yukarida belirtilen konumlara bitisik konumlari degistirmek de faydalidir.
Bir Kunitz alaninin ”çerçeve bölgesi”, Kunitz alaninin bir parçasi olan, ancak spesifik olarak birinci ve ikinci baglayici, yani, BPTI'nin 13-20 amino asitlerine ve BPTI'nin 31- 39 amino asitlerine karsilik gelen kivrim bölgelerindeki kalintilari hariç birakan kalintilar olarak tanimlanir. Aksine, baglayici kivrimda olmayan kalintilar daha genis çapli amino asit sübstitüsyonlarini (örnegin, konservatif ve/veya konservatif-olmayan sübstitüsyonlar) tolere edebilir.
Bir uygulamada, bu Kunitz alanlari, insan Iipoprotein-iliskili koagülasyon inhibitörü (LACI) proteininin Kunitz alani 1 dahil olmak üzere kivrimli yapinin varyant biçimleridir.
LACI, paradigma Kunitz alanlari olan üç adet dahili, iyi-tanimli, peptit kivrim yapisi Kunitz alani 1'in varyantlari taranmistir, izole edilmistir ve güçlendirilmis afinite ve Bu yöntemler ayrica, kallikreinle, örnegin, plazma kallikreinle etkilesen diger Kunitz alanlarinin elde edilmesi için diger Kunitz alani çerçevelerine de uygulanabilir.
Kallikrein fonksiyonunun faydali modülatörleri tipik olarak, kallikrein baglama ve önleme analizleri kullanilarak belirlendigi üzere, kallikreini baglar ve/veya önler.
Bazi yönlerde, bir kallikrein baglayici ajan (örnegin, baglayici protein, örnegin, polipeptit, örnegin, inhibitör polipeptit, örnegin, antikor, örnegin, inhibitör antikor veya diger baglayici ajan, örnegin, küçük molekül) plazma kallikreinin aktif formuna baglanir.
Bazi uygulamalarda, kallikrein baglayici ajan plazma kallikreine, örnegin, insan plazma kallikreine ve/veya murin kallikreine baglanir ve önler.
Plazma kallikrein baglayici proteinleri tam-boy olabilir (örnegin, bir IgG (örnegin, bir antijen-baglayici fragman (örnegin, Fab, F(ab')2 veya scFv fragmani) içerebilir.
Baglayici protein iki agir zincir immünoglobülin ve iki hafif zincir immünoglobülin içerebilir veya bir tek zincirli antikor olabilir. Plazma kallikrein baglayici proteinler, hümanize, CDR asili, kimerik, bagisikligi alinmis veya in vitro üretilmis antikorlar gibi rekombinan proteinler olabilir ve opsiyonel olarak insan germ hatti immünoglobülin dizilerinden türetilen sabit bölgeler içerebilir. Bir uygulamada, plazma kallikrein baglayici protein bir monoklonal antikordur.
Bazi uygulamalarda, kallikrein baglayici protein plazma kallikreine, örnegin, insan plazma kallikreine ve/veya murin kallikreine baglanir ve önler. Emsal plazma kallikrein uygulamalarda, kallikrein baglayici protein, sunlardan olusan gruptan seçilen antikorlarin hafif ve/veya agir zincirlerine sahip bir antikordur (örnegin, bir insan veya baglanir. Bazi uygulamalarda, plazma kallikrein baglayici protein DX-2930'dur.
DX-2930'un agir zincir ve hafif zincir degisken bölge dizileri asagida verilmektedir.
DX-2930 Agir zincir degisken bölgesi: Bazi yönlerde, bir kallikrein baglayici polipeptit (örnegin, inhibitör polipeptit) plazma kallikreinin aktif formuna baglanir. Emsal polipeptit plazma kallikrein ajanlari, U.S. açiklanmaktadir. Bazi uygulamalarda, kallikrein baglayici polipeptit DX-88'dir (KALBITOR® (ekalantid) olarak da bilinen bir dogal olusuqu-olmayan kallikrein inhibitörü, SEQ ID No:8). Bazi uygulamalarda, kallikrein inhibitörü SEO ID NO:8'in 3- 60 amino asitlerinin yaklasik 58-amin0 asitli bir dizisini veya SEQ ID NO:8'in 60-amino asitlik dizisine sahip DX-88 polipeptidini içerir veya bundan olusur. (ilii Alu Mal Hu Ser Ph»` (Sa i\l;i Pin` [ _xx Alu !hp (hp (ily Pm (5," .Mg .›'\|.^i Alu ”h (:11: (il) Asil (iln Am Ar:: Plic (ilii Sci' Lou (ilu Ulu( _h 1.5` l._\-~. NICI (`_u` llii' Ari; Asi" ISI-:Q IL) NLHH Bazi uygulamalarda, plazma kallikrein baglayici protein, EPlKAL-2'dir (SEQ lD No:9), burada dogal olarak olusmayan kallikrein inhibitörü, 58 kalinti amino asit dizisine (SEO 39lda Glu ila Gly'nin amino asit substitüsyonlarina sahiptir. EPIKAL-2'nin dizisi asagida gösterilir: HI.` Pi'i'› Ari; `l rp Plic l'hc ,~\\ii ll: l'hc `Ilii' .Mg (ilii (5.` (ilii (ilii l'hc Sci' lsr (ils- (il). ('_xx (jly (jljv r\.\l`l (jln Axii `^\r±.' PIR` (jlii S-:r Lcii Ulu (ilu (3" [5" lg› \'1c1(`_\-,x'l`hr Ari; Asp (Sl-.Q ll.) NOT!) Bazi uygulamalarda, bir plazma kallikrein baglayici proteini, burada tarif edilen bir kallikrein baglayici proteini, burada tarif edilen bir baglayici proteine, HC ve/veya LC olabilir. Bazi uygulamalarda, bir plazma kallikrein baglayici proteini, burada tarif edilen bir baglayici proteine, HC ve/veya LC CDRilerinde (örnegin, HC ve/veya LC CDR 1, 2 yüksek dizi özdesligine sahip olabilir. Bazi uygulamalarda, bir plazma kallikrein baglayici proteini, burada tarif edilen bir baglayici proteine, sabit bölgede (örnegin, Bazi yönlerde, bir küçük molekül plazma kallikreinin aktif formuna baglanir.
Bradikinin BZ Reseptörü Antagonistleri Bazi uygulamalarda, bir bradikinin 82 reseptörü antagonisti bir süjeye verilir. Emsal bradikinin BZ reseptörü antagonistlerine, natif bradikininin bradikinin 82 reseptörüne baglanmasini bloke eden 10 amino asit ihtiva eden bir peptidomimetik ilaç olan lncabitant (Firazyr®) dahildir.
C1 -INH Replasman Ajan/ari Bazi uygulamalarda, bir replasman C1-INH ajani bir süjeye verilir. Emsal C1-INH replaSman ajanlari kamuya açiktir ve örnegin, bir saflastirilmis insan pastörize nano- filtre edilmis C1-INH konsantrati olan Berinert® dahildir. ÖRNEKLER Örnek 1: Klevaj edilmis kininojen Temas sisteminin analizine dayali olarak, klevaj edilmis kininojen, temas sistemi aktivasyonunun ölçülmesi için uygun bir biyomarkördür. Daha önceden, klevaj edilmis kininojenin HAE ataklari esnasinda, sirozda ve temas sistemi aktivasyonunun bir sonucu olarak sepsis esnasinda yükseldigi gösterilmistir. Antikor faj görüntüleme kitapliklari, bozulmamis kininojen üzerindeki tüketmeyle kombinasyon halinde klevaj edilmis kininojene karsi çevrildi. Paralel olarak, fareler, klevaj edilmis kininojenle ve hibridom hücre çizgilerinden elde edilen monoklonal antikorlarla bagisiklandi. Her iki çaba da, hem klevaj edilmis hem bozulmamis kininojene baglanan bir dizi farkli monoklonal antikor saglamis ancak yalnizca klevaj edilmis kininojene baglanmis hiç antikor saglamamistir.
Bir dizi antikor bir Western blot analizinde uygunluk için taranmis ve fare mAb (klon 11H05) dahil olmak üzere iyi isleyen birçogu Sekil 2'de gösterilmistir. Bu analizin, insan plazma numunelerinde klevaj edilmis kininojeni saptayabildigi asikardir. Dahasi, Sekil 2'deki veriler, camda plazma toplanmasinin, temas aktivasyonunu ve kininojen klevaj edilmesini engellemek için yeterli oldugunu onaylamaktadir.
Hasta plazmasinda klevaj edilmis kininojen saptamak için kütle spektrometri esasli yaklasim da kulanilabilir. Bu yaklasimda, bir bagisiklik kininojeni hasta numunesinden adzorbe eder, ayristirilmis kininojeni proteolitik olarak sindirir ve peptit fragmanlarini LC-MC ile analiz eder. Örnek 2: Bozulmamis ve Klevaj edilmis kininojen Bir hastadan bir atak esnasinda elde edilen ve bir anti-proteaz kokteyli ihtiva eden sitratlanmis plazma tüplerinde toplanan plazmanin, bozulmamis kininojenin (yani, 1- zincirli) miktarinda bir azalma sergiledigini göstermek için Western blot kullanildi (Sekil 3). Klevaj edilmis kininojende (yani, 2-zincirli) bir artis gözlemlendi. Örnek 3: Klevaj edilmis Kininojen Seviyelerinin Ölçülmesi için Analiz Bozulmamis (1-zincirli) ve klevaj edilmis (2-zincirli) yüksek moleküler agirlikli kininojenin (HMWK) saptanmasi için bir Western blot analizi, Licor saptanmasi kullanilarak daha da optimize edildi. Burada tarif edilen bu analiz, hayvanlar 2-zincirli HMWK ile bagisiklanarak ve ELISA ile hem 1-zincirli hem 2-zincirli HMWK'ye karsi hibridom füzyonlarini tarayarak hibridom teknolojisiyle üretilmis olan bir fare monoklonal antikorunu (klon 11H05) kullanmaktadir. 11H05 mAb, bir Western blot analizindeki performansina ve HMWK'nin hafif zincirine spesifik olarak baglanabilme ve agir zincirine baglanmama yetisine dayali olarak seçildi. Hafif zincir baglayicilari tercih edildi çünkü bir pKal substrati olmayan diger plazma kininojeninde (düsük moleküler agirlikli kininojen, LMWK) hafif zincir mevcut degildir. analiz ayrica, cam tüplerde toplama temas sistemi aktivasyonuyla sonuçlandigi için plazmanin plastik tüplerde toplanmasinin önemini ortaya koymak için de kullanildi (Sekil 4).
Bazi örneklerde, burada tarif edilen Western blot analizinde asagidaki materyaller ve kosullar kullanildi.
Materyaller . XCeII SureLock® Mini-Cell, Life Technologies (lnvitrogen), Kat. # El0001 o Gel Box Power Supply . iBIot® Western Blotlama Aktarma Cihazi, Life Technologies (Invitrogen), Kat. # iBIot® Aktarma Yigini, nitroselüloz, mini, Life Technologies (Invitrogen), Kat. # Matrix Laboratories Impact 2 Çok kanalli Pipet veya muadili Rainin Pipetman, çesitli hacim araliklari, Rainin, Kat #: P-10, P-20, P-100, P- 200 ve P-1000 veya muadili Sema Çizelgeli 2-8°C Sogutucu Filtre Sistemleri, Coming, Kat # 431096 veya muadili Deiyonize ve saflastirilmis su (DI su), Ricca Chemical, Kat # 9150-5 veya muadili NuPAGE %7 Tris-Asetat Jelleri, 15-göz, Life Technologies (Invitrogen), Kat. # EAOSSSSBox Tris-Asetat SDS Çalistirma Tamponu (20X), Life Technologies (Invitrogen), Kat.
NuPAGE Numune Indirgeme Ajani (10X), Life Technologies (Invitrogen), Kat.
NuPAGE Numune Tamponu (4X), Life Technologies (Invitrogen), Kat. #NP0007 NuPAGE 4-12% Bis-Tris Jeller, 15-göz, Life Technologies (Invitrogen), Kat. # MES SDS Çalistirma Tamponu (20X), Life Technologies (Invitrogen), Kat.
Odyssey Bloklama Tamponu, LI-COR, Kat. #927-40000 Tween20, Sigma, Kat. #P1379 Fosfat tamponlu salin pH 7,4, Sigma, Kat# P-3813 veya muadili Tris, Fisher Scientific, Kat. # T393-5000 Sodyum Klorür, JT Baker, Kat. # 3824-19 6N Hidroklorik Asit, EMD, Kat. #HX0603M-6 SM Sodyum Asetat Tamponu pH 5,2, Teknova, Kat. #80296 Bovin Serum Albümini (BSA), IgG ve Proteaz Içermez, Jackson Fare monoklonal anti-LC HMWK antikor klonu, Klon 11H05 (#16), 1,4 mg/mL, Odyssey Tek-Renkli Moleküler Agirlik Isaretleri, LI-COR, Kat. # 928-40000 Anti-Proteaz Inhibitörü Kokteyli (10X), Dyax tarafindan Tedarik edilmistir Faktör Xlla, 1,47 mg/mL (, Enzyme Research Labs, Dyax tarafindan Tedarik edilmistir Kininojen Yetersiz Plazma, Hyphen-Biomed, Dyax tarafindan Tedarik edilmistir - Tek-Zincirli HMWK, 1,61 mg/mL, Enzyme Research Labs, Kat. #HK 2700 . Iki-Zincirli HMWK, 2,01 mg/mL, Enzyme Research Labs, Kat. # HK 2362 . Normal Insan Plazmasi Numuneleri, HAE Hasta Numuneleri ve Biyo-islah Numuneleri Dyax tarafindan tedarik edilmistir . DX2930, Dyax, Lot# PURDX1-LO1, 32,1 mg/mL Protokol Ana hatlari: indirgenmemis Test Numunesi Hazirlanmasi Jel Yükleme ve Çalistirma Jel Aktarilmasi indirgenmemis test numuneleri, 15 pL ~%5 test numunelerine 5 pL 4X numune tamponu eklenerek hazirlanir. Numuneler 5 dakika süreyle 95°C'ye isitilir.
Numuneler test numunesi mikro-santrifüj tüp kapagindan herhangi bir yogunlasmanin yok edilmesi için kisaca santrifüjlenir. indirgenmis numuneler %4-12 Bis-tris jeller kullanilarak çalistirilir ve indirgenmemis numuneler %7 Tris-Asetat jeller kullanilarak çalistirilir. Bir tek-renkli protein markörü, her birjelin kulvar1'inin içine yüklenir. Bir QC numunesi, her birjelin kulvar 2'sinin içine yüklenir. indirgenmis ve indirgenmemis test numuneleri, uygun jel tipinin 3-15 kulvarlarinin içine yüklenir. Jeller ~75 dakika süreyle 125Vtde çalistirilir.
Her birjel, iBlot aktarma yiginlari, mini ve iBlot kullanilarak bir nitroselüloz membranina aktarilir. Jelin ve aktarma yigininin iBIot'a eklenmesinden sonra PO programi seçilir ve ~7 dakika süreyle çalistirilir. Aktarma tamamlandiktan sonra, membran, 20 mL Odyssey bloklama tamponu ihtiva eden bir plastik tepsiye aktarilir.
Membranlar 20 mL Odyssey bloklama tamponuyla Membran Bloklama bloklanir. Membranlar 1 saat süreyle bir plaka çalkalayici üzerinde bloklama tamponuyla inkübe edilir.
Fare anti-HMWK LC mAb, %O,2 Tween-20 ihtiva eden Fare anti-HMWK Odyssey bloklama tamponu içinde 1 pg/mL'ye seyreltilir.
LC mAb Bloklama tamponu her bir membrandan atilir. 1 pg/mL Hazirlanmasi ve birincil antikor solüsyonunun 20 mL'lik bir hacmi her bir Eklenmesi membrana eklenir ve membranlar 1 saat süreyle oda sicakliginda bir plaka çalkalayici üzerinde inkübe edilir.
Keçi anti-fare IR Boyasi 680 1:15.00'Iik bir seyreltmede hazirlanir. Keçi anti-fare IR Boyasi 680 ilk olarak 1:10 seyreltmede, ardindan 1:15.000'Iik bir nihai seyreltme Keçi anti-Fare IR Boyasi 680 Hazirlanmasi ve için 1:1.500'Iük bir seyreltmede hazirlanir. Keçi anti-fare bloklama tamponu içinde hazirlanir. ikincil antikor Eklenmesi solüsyonu her bir membrana eklenir ve membranlar 1 saat süreyle oda sicakliginda bir plaka çalkalayici üzerinde inkübe edilir.
PBS ile bir durulamadan sonra, membranlar Li-Cor Membran Okuma .. _ _ __ Odyysey uzerine yerlestirilir ve membranlar okunur.
Membranlar, birincil antikor inkübasyonundan ve ikincil antikor inkübasyonundan sonra yikama basina 5 dakika Membran Yikama __ __ sureyle toplamda dort yikamayla %0,1 Tween-20 ihtiva eden PBS ile yikanir. mAb 11H05'ib 1-zincirli ve 2-zincirli HMWK'yi saptama yetisinin analiz edilmesi için, saflastirilmis proteinler, normal plazmada gözlemlenen seviyeleri içeren konsantrasyonlarda HMWK-yetersiz plazma içine saplandi (Sekil 5). Indirgeyici kosullar altinda, 11H05'in 1-zinciri 2-zincirli HMWK`den daha yüksek hassasiyetle saptadigi asikardi. mAbinin HMWK'nin iki biçimi için farkli hassasiyeti hesaba katilarak, bu analiz, hasta plazmasinda 1-zincirli ve 2-zincirli HMWK konsantrasyonunun miktarini dogru sekilde belirlemek için kullanilabilir. Alternatif olarak, 2-zincirli sinyal yüzdesi, temas aktivasyonu içerdiginden süphelenilen plazma numunelerinde belirlenebilir ve normal saglikli bireylerden alinan plazmaninkiyle karsilastirilabilir. Bu ikinci yaklasim kullanilarak, bu analiz farkli hastaliklardan gelen numunelerin taranmasi ve temas sistemi aktivasyonuyla iliskili hastaliklarin tanimlanmasi için kullanilabilir.
Analiz-arasi ve içi kesinlik ve dogruluk testleri de gerçeklestirirli. Indirgeyici-olmayan ve indirgeyici kosullar altinda, analiz, test edilen tüm parametler içerisinde 5%25'Iik CV degeri yüzdelerini kabul edilir sekilde gerçeklestirdi.
Donma-çözme stabilite testleri de normal insan plazmasi üzerinde gerçeklestirildi.
HMWKinin, O ile 3 donma-çözme döngüleri arasinda çözünüyor gibi görünmedigi belirlendi.
Western blot analizi, asiri temas sistemi aktivasyonunun ve pKaI aktivitesinin neden oldugu bilinen bir hastalik olan herediter anjiyoödemi (HAE) olan hastalardan alinan plazma numuneleri kullanilarak dogrulandi. Sekil 6'de gösterildigi üzere, HAE plazmasindaki klevaj edilmis HMWK yüzdesi, normal plazmaninkinden kayda deger sekilde daha yüksek olarak yaklasik %20'dir. Bir HAE atagi esnasinda, bu analiz kullanilarak saptanan klevaj edilmis HMWK yüzdesi daha da yükselir. Bu veri, sakin (bazal) hastalik durumu esnasinda HAE plazmasinda artan klevaj edilmis HMWK'yi bariz bir sekilde ortaya koymaktadir. Bu analiz bu nedenle, klevaj edilmis kininojenin normal seviyelerin geri dönme seviyelerinin bir analizi vasitasiyla terapötik pKaI inhibitörlerin etkililiginin izlenmesi için kullanilabilir.
Negatif yüklü yüzeylerin veya fosfolipitler veya polifosfatlar gibi partiküllerin temas sisteminin etkili aktivatörleri oldugu, bunun da aktif pKaI olusumuna ve 1-zinxcirli HMWK'nin proteolizinden bradikinin üretilmesine yol açtigi bilinmektedir. HAE ataklarinda temas sistemi aktivasyonuna yol açan fizyolojik yüzeyin tanimi bilinmemektedir. Ancak, HAE ataklari FXIIa üretimiyle iliskilidir. Dekstran sülfat veya kaolin gibi yüklü maddelerden ziyade FXIIa'nin bir temas sistemi baslaticisi olarak kullanilmasi, daha fazla çogaltilabilir temas sistemi aktivasyonunu ve optimize analiz performansini saglar. FXIIa konsantrasyonu ve tepkime kosullari, HAE hastalarinda gözlemlenen klevaj edilmis kininojen yüzdesini (~%2050) tahim etmek için belirlendi (Sekil 7, Tablo 1).
Tablo 1 - FXlla Muameleli Insan Plazma Numunelerinin Licor Sinyali Yogunluklari* Faktör Xlla Aktivasyon Kosullarinin indirgenmis Karsilastirmasi Konsantrasy Kulvardaki Iki-Zincir %: Iki-Zincirli Sinyal Toplami/Toplam Kulvar Sinyali Towami Inkübasy Inkübasy Tek- Sicakligi on Süresi Zinci Zinc Iki- Topla r(46 Sinyal 300 30002 2370 28280 2370 26110 1220 22567 3950 15490 2950 16040 3770 16320 2780 19350 9420 16860 6920 16730 7560 18400 2520 17130 Kulvarda Muamel Edilmem Sinyalde Faktör Xlla Aktivasyon Kosullarinin indirgenmis Karsilastirmasi FXlla Inkübasy Inkübasy Tek- Iki- Iki- Topla Kulvarda Muamel Konsantrasy on on Süresi Zinci Zinc Zinci m ki Iki- e on (nM) Sicakligi (dakika) r ir r(46 Sinyal Zincir% Edilmem (56 kDa) is kDa) Sinyalde Muamele Edilmemis Sinyalden Iki-Zincir %: 1 - (Muamele Edilmis Tek-Zincirli Sinyal/Muamele Edilmemis Tek-Zincirli Sinyal) * Sekil 5“teki Western Blot numunelerin sinyal analizi. 2,5 nM'lik bir FXIIa konsantrasyonu ve optimize tepkime kosullari kullanilarak, 15 erkekten ve 15 disiden alinan normal insan numuneleri 10 ug/mL (pKaI aktivitesinin kuvvetli bir antikor inhibitörü olan) DX-2930 varliginda veya yoklugunda incelendi ve 2- zincirli HMWK yüzdesi belirlendi (Tablo 2) Bu analizin, plazmada HMWK proteolizinin plazma kallikrein önlenmesini saptayabildigi asikardir. DX-2930'un, bu analizde, HAE ataklarinin tedavisi için onaylanmis bir pKaI inhibitörü olan ekalantide yaklasik olarak esdeger bir kuvvet sergiledigi gösterilmistir (Sekil 8). Bu in vitro analizde ekalantide esit kuvvet, esdeger ilaç seviyelerinin HAE'de esit sekilde etkili olabilecegini ortaya koymaktadir.
Tablo 2. Kulvardaki Iki-Zincirin Ortalama Yüzdesi, indirgenmis ve Indirgenmemis Kulvardaki Iki-Zincirin Ortalama Yüzdesi Numune Xlla (nM) DX2930(uglmL) indirgenmis Indirgenmemis Erkek Ortalamasi 2,5 0 %42,0 %61,2 Disi Ortalamasi 2,5 0 %43,8 %502 Kulvardaki Iki-Zincirin Ortalama Yüzdesi Numune Xlla (nM) DX2930 (pglmL) Indirgenmis Indirgenmemis * 15 erkek ve 15 disiden plazma ortalamasi. Ülseratif koliti (UC) ve romatoid artiriti (RA) olan hastalardan numuneler de bu western blot analizi kullanilarak test edildi. Hasta plazma numuneleri Bioreclamation kurulusundan temin edildi ve plastik tüplerde antikoagülanda toplandi. klevaj edilmis kininojen yüzdesinin, normal kontrol hastalarina kiyasla hem UC hem RA hastalarinda yükselmis oldugu bulundu (Sekil 9, Tablo 3).
Tablo 3. Ülseratif Kolit ve Romatoid Artirit Numunelerinin Western Blot Analizinin Kisa Açiklamasi Kulva K2EDTA ve Sodyum Sitrat, Ülseratif Kolitte ve Romatoid Artiritte r indirgenmis Hastalik Durumu Numuneleri Numune anti- Hastalik HMWK Sinyali Kulvardak Koagula Tek- Iki- Iki- Topla i lki-Zincir Zincir Zinci Zincir m (110 r (56 (46 Sinyal Moleküler Agirlik Standartlar 1-zincir ve 2-zincir Standartlar Kulva K2EDTA ve Sodyum Sitrat, Ülseratif Kolitte ve Romatoid Artiritte Indirgenmis Hastalik Durumu Numuneleri Koagüla Sodyum K2 EDTA Sodyum Sodyum Sodyum Sodyum K2 EDTA K2 EDTA K2 EDTA Sodyum Sodyum Hastalik Normal Ülseratif Ülseratif Ülseratif Ülseratif Ülseratif Romatoi Romatoi Romatoi Romatoi Romatoi HMWK Sinyali (110 r (56 O 3030 O 1220 0 1700 O 1 170 88 N/A 6600 1860 Sinyal 25875 21770 19314 1 2440 16396 16540 Kulvardak i Iki-Zincir Crohn hastaligi (CD) olan hastalardan numuneler de western blot analizi kullanilarak test edildi. Hasta plazma numuneleri Bioreclamation kurulusundan temin edildi ve plastik tüplerde antikoagülanda toplandi. Klevaj edilmis kininojen yüzdesinin, normal kontrol hastalarina kiyasla CD hastalarinda yükselmis oldugu bulundu (Sekil 10, Tablo Tablo 4. Crohn hastaligi Numunelerinin Western Blot Analizinin Kisa Açiklamasi Kulva Numune anti- Hastali HMWKSinyali Kulvarda r r r(56 r(46 Sinyal (150 ( Moleküler Agirlik Standartla 1-zincir ve 2-zincir Standartla A2992, Sodyum 1290 BRH74504 Sodyum BRH74507 Sodyum 1230 BRH71502 hastali 1210 Kulva Numune anti- Hastali HMWKSinyali Kulvarda r magma k Tek- Tek- Iki- Iki- Topla ki'ki' r r r(56 r(46 Sinyal (150 ( 7 hastali O BRH71502 hastali BRH71502 hastali 1410 BRH71503 hastali Örnek 4: FXlla'nin ve DX Numuneleri üzerindeki etkileri Bu deneyin amaci, DX-2930'un FXIIa temas sistemi aktivasyonu üzerindeki etkilerini belirlemekti. DX2930, iki-zincirin bir-zincire ölçülen oranini FXIIa ile tedaviye yanit olarak indirgeyerek, plazma kallikreini önleyebilir. Bes erkekten ve bes disiden sodyum sitratlanmis NHP numuneleri muamele edilmemis olarak, FXIIa aktivasyonundan sonra ve numuneler 10 ug/mL DX-2930 ile ön-muamele gördügünde FXIIa aktivasyonundan sonra test edildi. Her bir numune grubu indirgenmemis ve indirgenmis kosullar altinda analiz edildi.
Prosedür: Numune Hazirlanmasi 1. NHP numuneleri donmus depodan çikarildi ve oda sicakligina dengelenmeleri mg/mL) 496,65 uL 1X TBS'ye eklenmesiyle hazirlandi. uL 1:10 ara maddenin 195.55 uL TBS'ye eklenmesiyle hazirlandi. eklenmesiyle 10 pg/mL DX2930 ile hazirlandi.
. Her bir NHP numunesi, 2 uL 56,25 nM FXIIa solüsyonunun her bir numunenin 43 uL'sine eklenmesiyle 2,5 nM FXIIa ile, DX2930 ile veya olmadan hazirlandi. 6. Numuneler 37°C`de 10 dakika süreyle FXIIa ile inkübe edildi. Tepkime 5 uL 10X anti-proteaz inhibitörünün eklenmesiyle durduruldu. 7. FXIIa, DX2930 ve FXIIa içeren her bir NHP numunesi ve muamele edilmemis numune, 5 uL numunenin 95 iJL TBS'ye eklenmesiyle %5 plazmaya seyreltildi. 8. Indirgenmemis numuneler 5 uL 4X numune tamponunun 15 uL numuneye eklenmesiyle hazirlandi. 9. indirgenmis numuneler 5 uL 4X numune tamponunun ve 2 |JL 10X indirgeyici ajanin 13 uL numuneye eklenmesiyle hazirlandi.
. Numunelerin tamami bir isi bloku kullanilarak 5 dakika süreyle 95°C'de isitildi.
Jel Yüklemesi, Çalistirmasi ve Aktarilmasi 1. Bir hacim 1 L 1X Tris-Asetat SDS çalistirma tamponu, 50 mL 20X Tris-Asetat SDS çalistirma tamponunun 950 mL DI suya eklenmesiyle hazirlandi. 2. Bir hacim 1L 1X MES çalistirma tamponu, 50 mL 20X MES SDS çalistirma tamponunun 950 mL DI suya eklenmesiyle hazirlandi. 3. analiz tamponu (%02 Tween içeren Odyssey Bloklama tamponu), 1 mL Tween- 'nin 499 mL Odysset bloklama tamponuna eklenmesiyle hazirlandi. 4. Yikama tamponu (%. 1 paket PBS'nin ve 1 mL Tween- 201nin 900 mL DI suya eklenmesiyle hazirlandi. Solüsyon iyice karistirildi ve DI su kullanilarak 1 L'ye getirildi. Nihai solüsyon 0,22 uM'Iik bir PES filtrasyon sistemi üzerinden filtre edildi.
. Bir hacimlik 4 pL tek-renkli protein markörü, iki jelin kulvar 1'ine eklendi. 6. 13 uL indirgenmemis numunelerin hacimleri. %7 Tris-Asetat jelinin uygun kulvarlarina eklendi. 7. 13 uL indirgenmis numunelerin hacimleri, %4-12 Bis-Asetat jelinin uygun kulvarlarina eklendi. 8. Jeller 125 voltta ~75 dakika süreyle çalistirildi. 9. Her birjel münferit olarak, iBlot mini aktarma yiginlari ve iBlot aktarma sisteminin PO Programi kullanilarak bir membrana aktarildi.
. Her bir membran, 20 mL Odyssey blokleme tamponu ihtiva eden bir plastik tepsiye aktarildi. Membranlar oda sicakliginda 1 saat süreyle bir plaka çalkalayici üzerinde Odyssey bloklama tamponunda inkübe edildi. 11. 1 ug/mL'lik bir birincil antikor solüsyonu, 28,58 uL fare anti-HMWK mAb, klon# 12. Bloklama tamponu plastik tepsilerden çikarildi. Bir hacimlik 10 mL birincil antikor solüsyonu her bir tepsiye eklendi ve membranlar oda sicakliginda 1 saat süreyle bir plaka çalkalayici üzerinde inkübe edildi. 13. Bir 1:10 ara madde keçi anti-fare IgG IRDye 680, 5 uL keçi anti-fare IgG IR Boyasinin 45 uL analiz tamponuna eklenmesiyle hazirlandi. Ikincil antikor ara maddesinin 39.973,34 pL analiz tamponuna eklenmesiyle hazirlandi. 14. Birincil antikor solsüyonu tepsilerden çikarildi.
. Her bir membran bes dakika süreyle 20 mL yikama tamponuyla yikandi ve daha sonra yikama solüsyonu atildi. Yikama toplamda 4 yikama olarak tekrarlandi. 16. Bir hacimlik 20 mL ikincil antikor solüsyonu her bir tepsiye eklendi ve membranlar oda sicakligin 1 saat süreyle bir plaka çalkalayici üzerinde inkübe 17. Ikincil antikor solüsyonu tepsilerden çikarildi. 18. Her bir membran bes dakika süreyle 20 mL yikama tamponuyla yikandi ve daha sonra yikama solüsyonu atildi. Yikama toplamda 4 yikama olarak tekrarlandi. 19. Her bir membran PBS ile 5 dakika süreyle durulandi.
. Membranlar LiCor Odyssey CLX kullanilarak tarandi.
Sonuçlar: Tablolar 5 ve 6 indirgenmemis numune verisini ihtiva etmektedir. Tablolar 7 ve 8 indirgenmis numune verisini ihtiva etmektedir. Klevaj edilmis HMWK yüzdesi iki yöntem kullanilarak hesaplandi. Kulvardaki iki-zincirin yüzdesi, asagidaki denklem kullanilarak belirlendi: Iki-Zincirli Sinyalin Toplami/Toplam Sinyalin Toplami. Muamele edilmemis sinyalden iki-zincirin yüzdesi, asagidaki formül kullanilarak belirlendi: 1 - (Muamele Edilmis Tek-Zincir SinyaIi/Muamele Edilmemis Tek-Zincir Sinyali). Muamele edilmis ve edilmemis numuneler, ayni hazirlikta hafifçe daha yüksek plazma yüzdesine sahip uamele edilmemis sinyallerden hafifçe farkli olarak hazirlandi. Bu nedenle, muamele edilmemis numuneler, muamele edilmemis numunelerden hafifçe daha yüksek genel sinyal üretti. Kulvardaki iki-zincir yüzdesi degeri, muamele edilmis ve edilmemis numuneler arasindaki hafifçe farkli numune hazirlanmasi nedeniyle klevaj edilmis HMWK yüzdesinin belirlenmesi için kullanildi.
Tablo 16, aktivasyon ve önleme sonuçlarinin bir özetini ihtiva etmektedir. Indirgenmis kosullar altinda, muamele edilmemis erkek ve disi NHP numuneleri, sirasiyla, ortalama NHP numuneleri, sirasiyla, ortalama %42,0 ve %43,8 klevaj edilmis HMWK ihtiva etti.
DX-2930 ile ön-muamele edilen ardindan FXIIa ile muamele edilen erkek ve disi NHP numuneleri, sirasiyla, ortalama %29,5 ve %26,4 klevaj edilmis HMWK ihtiva etti.
Indirgenmemis kosullar altinda, muamele edilmemis erkek ve disi NHP numuneleri, sirasiyla, %320 ve %21,5 klevaj edilmis HMWK ihtiva etti. FXIIa ile muamele edilen erkek ve disi NHP numuneleri, sirasiyla, ortalama %612 ve %502 klevaj edilmis HMWK ihtiva etti. DX-2930 ile ön-muamele edilen ardindan FXIIa ile muamele edilen erkek ve disi NHP numuneleri, sirasiyla, ortalama %43,6 ve %30,3 klevaj edilmis HMWK ihtiva etti.
NHP numunelerinin FXIla ile muamele edilmesi, muamele edilmemis numunelere kiyasla klevaj edilmis HMWK yüzdesini arttirdi. DX-293O ile ön-muamele edilen ardindan FXIIa ile muamele edilen NHP numuneleri, yalnizca FXIIa ile muamele edilen numunelerden daha az klevaj edilmis HMWK ancak muamele edilmemis numunelere kiyasla hafifçe daha yüksek yüzdede klevaj edilmis HMWK üretti. indirgenmis muamele edilmemis NHP numuneleri, indirgenmemis mualeme edilmemis NHP numunelerinde daha az klevaj edilmis HMWK ihtiva etti. Ayrica, muamele edilmemis, FXIIa ile muamele edilmis ve DX2930 ile ön-muamele edilmis ve ardindan FXIIa ile muamele edilmis NHP numunelerinin, çogaltilabilir sonuçlar ürettigi de bulundu.
Tablo 5. FXIIa Aktivasyonunun Indirgenmemis DX2930 Inhibisyonu, Erkek Numuneleri, Tek/Iki-Zincirli HMWK Sinyalleri, Toplam Sinyal, Iki-Zincirli HMWK Yüzdesi Erkek NHP'sinin Faktör Xlla ile Indirgenmemis Aktivasyonu, Faktör Xlla'nin DX2930 ile Önlenmesi Erkek NHP Numunesi DX293 HMWK Signal (1 20k Da (1 00 17900 4670 8160 7750 12600 6620 19600 3450 10000 9430 15300 6480 22500 8570 11000 Sinyal 22570 17680 20032 23050 21570 22695 32170 24750 Kulvardak i Iki-Zincir Muamele Edilmemi Sinyalden Iki-Zincir Erkek NHP'sinin Faktör Xlla ile Indirgenmemis Aktivasyonu, Faktör Xlla°nin DX2930 ile Önlenmesi Erkek NHP Numunesi DX293 HMWK Signal (120kDa (100 (90 6370 0 7390 1710 8310 O Sinyal 26500 26860 20520 20160 33000 23650 22194 Kulvardak i Iki-Zincir Kulvardaki Iki-Zincir %'si: Iki-Zincir Sinyalinin Toplami/Toplam Kulvar Sinyalinin Toplami Muamele Edilmemis Sinyalden Iki-Zincir %'si: 1 - (Muamele Edilmis Tek-Zincir SinyalilMuameIe Edilmemis Tek-Zincir Sinyali) Muamele Edilmemi Sinyalden Iki-Zincir Tablo 6. FXIIa Aktivasyonunun Indirgenmemis DX2930 Önlenmesi, Disi Numuneleri, TeklIki-Zincirli HMWK Sinyalleri, Toplam Sinyal, Iki-Zincirli HMWK Yüzdesi Disi NHP'nin Faktör Xlla ile Indirgenmemis Aktivasyonu, Faktör Xlla'nin DX2930 ile Önlenmesi Disi NHP Numunesi DX293 HMWK Sinyali (120kDa O kDa) r (90 Sinyal 17361 13460 14223 27677 26580 21225 34910 24580 29475 34791 29310 Kulvarda (%255 Muamele Edilmemi Sinyalde Disi NHP'nin Faktör Xlla ile Indirgenmemis Aktivasyonu, Faktör Xlla'nin DX2930 ile Önlenmesi HMWK Sinyali Muamele Disi NHP FXII DX293 Tek- iki- iki- Topla Kulvarda Ed“memi Numunesi a 0 Zincir Zincir(10 Zinci m ki Iki- s . . . Sinyalde (nM) (ug/mL (120kDa OkDa) r(90 Sinyal Zincir _ Kulvardaki Iki-Zincir %'si: Iki-Zincir Sinyalinin Toplami/Toplam Kulvar Sinyalinin Toplami Muamele Edilmemis Sinyalden Iki-Zincir %'si: 1 - (Muamele Edilmis Tek-Zincir Sinyali/Muamele Edilmemis Tek-Zincir Sinyali) Tablo 7. FXIIa Aktivasyonunun indirgenmis DX2930 Önlenmesi, Erkek Numuneleri, Tek/Iki-Zincirli HMWK Sinyalleri, Toplam Sinyal, Iki-Zincirli HMWK,nin Yüzdesi Erkek NHP'sinin Faktör Xlla ile indirgenmis Aktivasyonu, Faktör Xlla'nin DX2930 ile Önlenmesi HMWK Sinyali Erkek NHP FXIIa DX2930 Tek- Iki- Iki- Toplam Kulvardaki Muamele Numunesi (nM) (pglmL) Zincir Zincir Zincir Sinyal Iki-Zincir Edilmemis (56 (46 %,Si Sinyalden kDa) kDa) Iki-Zincir Kulvardaki Iki-Zincir %'si: Iki-Zincir Sinyalinin Toplami/Toplam Kulvar Sinyalinin Toplami Muamele Edilmemis Sinyalden Iki-Zincir %'si: 1 - (Muamele Edilmis Tek-Zincir SinyaIi/Muamele Edilmemis Tek-Zincir Sinyali) Tablo 8. FXIIa Aktivasyonunun indirgenmis DX2930 Önlenmesi, Disi Numuneleri, Tek/Iki-Zincirli HMWK Sinyalleri, Toplam Sinyal, Iki-Zincirli HMWK Yüzdesi Disi NHP'nin Faktör Xlla ile indirgenmis Aktivasyonu, Faktör Xlla'nin DX2930 ile Önlenmesi Disi NHP Numunesi (nM) (ugImL) 2,5 10 2,5 10 2,5 10 2,5 10 2,5 10 HMWK Sinyali 17300 21300 13600 21900 11900 19000 29400 19600 25100 19900 12000 15000 (56 (46 2080 1240 4880 3450 3740 1960 1770 753 4280 2760 3990 1780 375 1850 5120 3430 3610 2440 525 966 5660 5130 4050 3260 500 688 2910 2560 1790 1350 Toplam Kulvardaki Muamele Sinyal 20620 12430 15470 23823 16750 19370 24125 20450 25050 30891 30390 32410 21088 17470 18140 Iki-Zincir 9616J Kulvardaki Iki-Zincir %'si: Iki-Zincir Sinyalinin Toplami/Toplam KuNarShyamünTomami Muamele Edilmemis Sinyalden Iki-Zincir %'si: 1 - (Muamele Edilmis Tek-Zincir Sinyali/Muamele Edilmemis Tek-Zincir Sinyali) Edilmemis Sinyalden Iki-Zincir 9639] Tablo 9. Kulvardaki Iki-Zincir Ortalama Yüzdesi, indirgenmis ve Indirgenmemis Kulvardaki Iki-Zincir Ortalama Yüzdesi Numune Xlla(nM) DX2930(pglmL) indirgenmis Indirgenmemis Örnek 6. FXIIa Aktivasyonunun DX-293O ve DX-88 Kullanilarak Önlenmesi Bu deneyin amaci, DX-2930 ve DX-88'in FXlIa aktivasyonunun önlenmesi üzerindeki 2930 ve DX-88 ile ön-muamele edilen numunelere FXIla ile muamele edildi. Ön- muamele edilmis numunelere ek olarak bir adet muamele edilmemis numune ve yalnizca FXIla ile muamele edilmis iki numune de test edildi. Numuneler indirgenmis kosullar altinda test edildi.
Prosedür: hazirlandi ve karistirildi. solüsyonu, 15 uL 4500 p/mL solüsyonunun 15 uL TBS'ye eklenmesiyle hazirlandi. solüsyonu, 10 uL 270 ug/mL solüsyonun 14 pL TBS'ye eklenmesiyle hazirlandi. 3. DX-2930 ile ön-muamele edilmis bes plazma numunesi her bir DX2930 solüsyonunun 2 uL'sinin 41 uL NHP havuzuna eklenmesiyle hazirlandi. solüsyonu, 15 uL 211,5 u/mL solüsyonunun 15 uL TBS”ye eklenmesiyle hazirlandi. solüsyonun 18 uL TBSiye eklenmesiyle hazirlandi. Bir 5,4 ug/mL DX88 solüsyonu, . DX-88 ile ön-muamele edilmis bes plazma numunesi her bir DX-88 solüsyonunun 2 uL'sinin 41 uL NHP havuzuna eklenmesiyle hazirlandi. 6. FXIIa”nin bir 1:10 ara maddesi, 5 uL stok solüsyonunun ( 45 uL maddenin 195,55 pL TBS'ye eklenmesiyle hazirlandi. nM FXIIa solüsyonunun her bir numuneye eklenmesiyle 2,5 nM FXlla ile muamele 8. Yalnizca FXIIa ihtiva eden iki numune, 2 uL TBS”nin ve 2 uL 56,25 nm FXIla solüsyonunun 41 uL NHP havzuna eklenmesiyle hazirlandi. 9. Bir adet muamele edilmemis numune, 4 uL TBS'nin 41 uL NHP havuzuna eklenmesiyle hazirlandi.
. FXIIa ihtiva eden numunelerin tümü 37°C'de 10 dakika süreyle inkübe edildi. 11. Bir hacimlik 5 uL anti-proteaz inhibitörü, muamele edilmemis numune dahil olmak üzere her bir numuneye eklendi. Her bir kopya için toplam numune hacmi 50 12. Her bir numune 5 uL numunenin 95 uL TBS'ye eklenmesiyle ~%5 plazmaya seyreltildi. 13. Numuneler 5 uL 4X numune tamponunun ve 2 uL 10X indirgeyici ajanin 13 uL numuneye eklenmesiyle hazirlandi. 14. Numunelerin tamami 95°C'de 5 dakika süreyle bir isi blogu kullanilarak isitildi.
. Bir hacimlik 1L 1X MES çalistirma tamponu, 50 mL 20X MES SDS çalistirma tamponunun 950 mL DI suya eklenmesiyle hazirlandi. 16. analiz tamponu (%0,2 Tween içeren Odyssey Bloklama tamponu), 1 mL Tween-20'nin 499 mL Odyssey bloklama tamponuna eklenmesiyle hazirlandi. 17. Yikama tamponu (%O,1 Tween içeren PBS), 1 paket PBS'nin ve 1 mL Tween- 'nin 900 mL DI suya eklenmesiyle hazirlandi. Solüsyon iyice karistirildi ve DI su kullanilarak 1 L'ye getirildi. Nihai solüsyon 0,22 uM'Iik bir PES filtrasyon sistemi üzerinden filtre edildi. 18. Bir hacimlik 4 uL tek-renkli protein markörü iki jelin kulvar1'ine eklendi. 19. 13 uL indirgenmis numunelerin hacimleri, bir %4-12 Bis-Tris jelinin uygun kulvarlarina eklendi.
. Jel 125 voltta ~75 dakika süreyle çalistirildi. 21. Jel, iBIot mini-aktarma yigini ve iBIot aktarma sisteminin PO Programi kullanilarak bir membrana aktarildi. 22. Membran, 20 mL Odyssey bloklama tamponu ihtiva eden bir plastik tepsiye aktarildi. Membran, Odyssey bloklama tamponu içinde oda sicakliginda 1 saat süreyle bir plaka çalkalayici üzerinde inkübe edildi. 23. Bir 1 ug/mL birincil antikor solüsyonu, 14,29 uL fare anti-HMWK mAb, klon# 24. Bloklama tamponu plastik tepsiden çikarildi. Bir hacimlik 20 mL birincil antikor solüsyonu membrana eklendi ve oda sicakliginda 1 saat süreyle bir plaka çalkalayici üzerinde inkübe edildi.
. Keçi anti-fare IgG IRDye 680'in bir 1:10 ara maddesi, 5 uL keçi anti-fare lgG ID Boyasi 680`in 45 uL analiz tamponuna eklenmesiyle hazirlandi. Ikincil antikor analiz tamponuna eklenmesiyle 1:15.000'Iik bir seyreltide hazirlandi. 26. Birincil antikor solüsyonu tepsiden çikarildi. 27. Membran bes dakika süreyle 20 mL yikama tamponuyla yikandi ve yikama solüsyonu atildi. Yikama toplamda 4 yikama olarak tekrarlandi. 28. Bir hacimlik 20 mL ikincil antikor solüsyonu membrana eklendi ve oda sicakliginda 1 saat süreyle bir plaka çalkalayici üzerinde inkübe edildi. 29. Ikincil antikor solüsyonu tepsiden çikarildi.
. Membran bes dakika süreyle 20 mL yikama tamponuyla yikandi ve yikama solüsyonu atildi. Yikama toplamda 4 yikama olarak tekrarlandi. 31. Membran PBS le 5 dakika süreyle durulandi. 32. Membran LiCor Odyssey CLx kullanilarak tarandi.
Sonuçlar: Tablo 10, DX-2930 ve DX-88 önleme deneyinin sonuçlarini ihtiva etmektedir. Iki- zinoirin yüzdesi her bir kulvar içinde hesaplandi ve muamele edilmis sinyalin muamele edilmemis sinyalle karsilastirilmasiyla hesaplandi. Bu karsilastirma için. kulvardaki iki- zincirin yüzdesi kullanildi. Muamele edilmemis NHP havuzu, %3,8`lik bir iki-zincir yüzde degeri üretti. NHP havuzu yalnizca FXIIa ile muamele edildiginde, iki kopya numune, numuneler, DX-88 ile hazirlanan numunelere kiyasla iki-zincir degerlerinin hafifçe daha numuneler, sirasiyla, %22,3 ve %23,9 iki-zincir degeri yüzdesi gösterdi. Bu degerler, yalnizca FXIIa ile muamele edilen numunedeki iki-zincir degeri yüzdesine çok yakindir.
DX-2930 ile ön-muamele edilen numuneler, DX-88 ile ön-muamele eidlen numunelerden hafifçe daha düsük iki-zincir deger yüzdesi olusturdu.
Tablo 10. FXlla'nin DX-2930 ve DX-88 kullanilarak Önlenmesi, HMWK Sinyalleri, Iki-Zincirli HMWK'nin Yüzdesi FXlla Temas Aktivasyonunun DX-88 ve DX-2930 kullanilarak önlenmesi HMWK Sinyali FXlla DX2930 DX88 Tek- Iki- Iki- Toplam Kulvardaki Muamele (nM) (pglmL) (pglmL) Zincir Zincir Zincir Sinyal Iki-Zincir Edilmemis (110 (56 (46 %'si Sinyalden kDa) kDa) kDa) Iki-Zincir FXlla Temas Aktivasyonunun DX-88 ve DX-2930 kullanilarak önlenmesi HMWK Sinyali (110 (56 (46 Toplam Sinyal 25870 23878 23441 24980 25930 25610 Kulvardaki Iki-Zincir Kulvardaki Iki-Zincir %'si: Iki-Zincir Sinyalinin Toplami/Toplam Kulvar Sinyalinin Toplami Muamele Edilmemis Sinyalden Iki-Zincir %'si: 1 - (Muamele Edilmis Tek-Zincir SinyaIiIMuameIe Edilmemis Tek-Zincir Sinyali) Muamele Edilmemis Sinyalden Iki-Zincir Örnek 7. HAE, RA, UC ve CD Hastasi Numunelerinde klevaj edilmis Kininojen Seviyelerinin Belirlenmesi Bu deneyin amaci, hereditet anjiyoödemi (HAE) olan hastalardan alinan anti-proteaz muameleli plazma numunelerinin degerlendirilmesiydi. Bir bazal numune ve bir atak numunesi olmak üzere iki HAE numunes her bir hastadan test edildi. Numuneler indirgenmis ve indirgenemis kosullar altinda test edildi. Ek olarak, Crohn hastaligi, romatoid artirit ve ülseratif kolit teshisi konmus hastalardan alinan numuneler de test edildi. Normal insan plazma numuneleri de test edildi. Ilave numuneler yalnizca indirgenmis kosullar altinda test edildi.
Prosedür: 1. Alti grup HAE hastasi numunesi test edildi. Her bir plazma numunesi 5 pL numunenin 95 pL TBS'ye eklenmesiyle hazirlandi. 2. Bes Crohn hastaligi plazma numunesi, bes romatoid artirit plazma numunesi ve bes ülseratif kolit numunesi test edildi. Her bir plazma numunesi 5 uL numunenin 95 pL TBS'ye eklenmesiyle hazirlandi. 3. Yedi normal insan plazma numunesi, kontrol olarak kullanim için 5 pL numunenin 95 uL TBS'ye eklenmesiyle hazirlandi. 4. Indirgenmemis numuneler 5 uL 4X numune tamponunun 15 uL numuneye eklenmesiyle hazirlandi. . indirgenmis numuneler 5 uL 4X numune tamponunun ve 2 pL 10X indirgeyici ajanin 13 uL numuneye eklenmesiyle hazirlandi. 6. Numunelerin tamami 95°C'de 5 dakika süreyle bir isi blogu kullanilarak isitildi. 7. Bir hacimlik 1 L 1X Tris-Asetat SDS çalistirma tamponu, 50 mL 20X Tris-Asetat SDS çalistirma tamponunun 950 mL DI suya eklenmesiyle hazirlandi. 8. Bir hacimlik 2L 1X MES çalistirma tamponu, 100 mL 20X MES SDS çalistirma tamponun 1900 mL DI suya eklenmesiyle hazirlandi. 9. analiz tamponu (%02 Tween içeren Odyssey Bloklama tamponu), 2 mL Tween- 'nin 998 mL Odyssey bloklama tamponuna eklenmesiyle hazirlandi.
. Yikama tamponu (%, 1 paket PBS'in ve 1 mL Tween- ,nin 900 mL DI suya eklenmesiyle hazirlandi. Solüsyon iyice karistirildi ve DI su kullanilarak 1 L'ye getirildi. Nihasi solüsyon, 0,22 uM”Iik bir PES filtrasyon sistemi üzerinden filtre edildi. 11. Bir hacimlik 4 pL tek-renkli protein markörü, dört jelin kulvar 1'ine eklendi. 12. 13 pL indirgenmemis numunelerin hacimleri, bir %7 Tris-Asetat jelinin uygun kulvarlarina eklendi. 13. 13 iJL indirgenmis numunelerin hacimleri, %4-12 Bis-Tris jellerinin uygun kulvarlarina eklendi. 14. Jeller 125 voltta ~75 dakika süreyle çalistirildi.
. Her bir jel münferit olarak, iBlot mini-aktarma yiginlari ve iBlot aktarma sisteminin PO Programi kullanilarak bir membrana aktarildi. 16. Her bir membran, 20 mL Odyssey bloklama tamponu ihtiva eden bir plastik tepsiye aktarildi. Membranlar Odyssey bloklama tamponunda oda sicakliginda 1 saat süreyle bir plaka çalkalayici üzerinde inkübe edildi. 17. Bir 1 pg/mL birincil antikor solüshonu, 57,14 pL fare anti-HMWK mAb, klon# 18. Bloklama tamponu plastik tepsilerden çikarildi. Bir hacimlik 20 mL birincil antikor solüsyonu her bir tepsiye eklendi ve membranlar oda sicakliginda 1 saat süreyle bir plaka çalkalayici üzerinde inkübe edildi.
. Birincil antikor solüsyonu tepsilerden çikarildi. 21. Her bir membran bes dakika süreyle 20 mL yikama tamponuyla yikandi ve daha sonra yikama solüsyonu atildi. Yikama toplamda 4 yikama olarak tekrarlandi. 22. Bir hacimlik 20 mL ikincil antikor solüsyonu her bir tepsiye eklendi ve membranlar oda sicakliginda 1 saat süreyle bir plaka çalkalayici üzerinde inkübe 23. Ikincil antikor solüsyonu tepsilerden çikarildi. 24. Her bir membran bes dakika süreyle 20 mL yikama tamponuyla yikandi ve daha sonra yikama solüsyonu atildi. Yikama toplamda 4 yikama olarak tekrarlandi.
. Her bir membran PBS ile 5 dakika süreyle durulandi. 26. Membranlar LiCor Odyssey CLX kullanilarak tarandi.
Sonuçlar: Beklendigi üzere, birçok hasta numunesi, bazal numunelerin aksine atak numunelerinde iki-Zincirli HMWK'nin yükselmis bir seviyesini sergiledi. Tablolar 11 ve 12, bu deney için HAE verisini ihtiva etmektedir. Tablo 13, ülseratif kolit ve romatoid artirit hasta numuneleri için veri gruplarini ihtiva etmektedir. Tablo 14, Crohn hastaligi hasta numuneleri için verileri ihtiva etmektedir.
Tablo 11. Indirgenmemis HAE Hasta Numuneleri, Bazal ve Atak, HMWK Sinyalleri, Kulvardaki Iki-Zincir Yüzdesi Indirgenmemis anti-Proteaz HAE Hasta Numuneleri, Bazal ve Atak HMWK Sinyali Hasta Kimligi Hasta HAE 120 100 90 Toplam Kulvardaki Bas kDa kDa kDa Sinyal Iki-Zincir%'si harfleri Kulvardaki Iki-Zincir %,si: Iki-Zincirli Sinyalin Toplami/Toplam Kulvar Sinyalinin Toplami Tablo 12. Indirgenmis HAE Hasta Numuneleri, Bazal ve Atak, HMWK Sinyalleri, Kulvardaki Iki-Zincirin Yüzdesi Indirgenmis anti-Proteaz HAE Hasta Numuneleri, Bazal ve Atak HMWK Sinyali Hasta Kimligi Hasta HAE 110 56 46 Toplam Kulvardaki Bas kDa kDa kDa Sinyal Iki-Zincir %'si harfleri Indirgenmis anti-Proteaz HAE Hasta Numuneleri, Bazal ve Atak Hasta Kimligi A4908 A5564 A5353 A4607 A4619 A5346 A5422 A4183 A4671 A5248 A2315 harfleri HMWK Sinyali 12400 10900 11200 13900 13500 19000 1 6400 Toplam Sinyal 14710 16940 15580 15010 12580 14309 11289 16322 16192 22280 21640 Kulvardaki Iki-Zincir %,si Kulvardaki Iki-Zincir %'si: Iki-Zincirli Sinyalin Toplami/Toplam Kulvar Sinyalinin Toplami Tablo 13. Ülseratif Koliti ve Romatoid Artiriti olan Bireylerden Plazma Numuneleri, HMWK Sinyalleri, Kulvardaki Iki-Zincir Yüzdesi K2EDTA ve Sodyum Sitratta indirgenmis Hastalikli Durum Numuneleri, Ülseratif Kolit ve Romatoid Artirit Numune anü- Hastalik Koagülan A3005, N17 anti- Normal HMWK Sinyali 20500 775 Zincir Sinyal (56kDa) (46 Toplam Kulvardaki 21641 Iki-Zincir K2EDTA ve Sodyum Sitratta indirgenmis Hastalikli Durum Numuneleri, Ülseratif Kolit ve Romatoid Artirit Koagülan proteaz Sodyum Sodyum K2EDTA Sodyum Sodyum Sodyum Sodyum K2EDTA K2EDTA K2EDTA Sodyum Hastalik Normal Normal Ülseratif Ü Iseratif Ü Iseratif Ü Iseratif Ü Iseratif Romatoid Romatoid Romatoid Romatoid HMWK Sinyali 18700 24200 17400 17400 14100 13300 (56kDa) 10300 Toplam Sinyal 20842 25875 21770 19314 12440 16396 16540 Kulvardaki Iki-Zincir K2EDTA ve Sodyum Sitratta indirgenmis Hastalikli Durum Numuneleri, Ülseratif Kolit ve Romatoid Artirit Numune anti- Koagülan Sodyum Romatoid BRH715045 Sitrat Hastalik HMWK Sinyali (110 (56kDa) (46 6600 1860 Toplam Kulvardaki Sinyal Iki-Zincir 9980 %33,9 Kulvardaki Iki-Zincir %'siz Iki-Zincirli Sinyalin Toplami/Toplam Kulvar Sinyalinin Toplami Tablo 14. Crohn Hastaligi olan Bireylerden Plazma Numuneleri, HMWK Sinyalleri, Kulvardaki Iki-Zincir Yüzdesi K2EDTA ve Sodyum Sitratta indirgenmis Hastalikli Durum Numuneleri, Crohn Hastaligi ve Sedef Hastaligi Numune anti- Koagülan Sodyum A2992, N14 Sitrat Sodyum BRH745047 Sitrat Sodyum BRH745076 Sitrat BRH715026 K2EDTA BRH715027 K2EDTA Hastalik Tek- HMWK Sinyali (150 (110 (56 Normal 1560 5820 N/A Hastaligi MA 12100 1230 Hastaligi N/A 16300 668 Zincir Zincir Sinyal Toplam Kulvardaki Iki-Zincir 14564 %6,6 7572 °/o2,5 18882 %4,6 15280 %20,8 18518 %12,0 K2EDTA ve Sodyum Sitratta indirgenmis Hastalikli Durum Numuneleri, Crohn Hastaligi ve Sedef Hastaligi HMWK Sinyali Numune anti- Hastalik Tek- Tek- Iki- Iki- Toplam Kulvardaki Koagülan Zincir Zincir Zincir Zincir Sinyal Iki-Zincir Kulvardaki Iki-Zincir %'si: Iki-Zincirli Sinyalin Toplami/Toplam Kulvar Sinyalinin Toplami DIGER UYGULAMALAR Bu spesifikasyonda açiklanan özelliklerin tamami, herhangi bir kombinasyonda birlestirilebilir. Bu spesifikasyonda açiklanan her bir özellik, ayni, esdeger veya benzer amaca hizmet eden alternatif bir özellikle degistirilebilir. Böylelikle, aksi açik sekilde ifade edilmedigi sürece, açiklanan her bir özellik, esdeger veya benzer özelliklerin kapsamli bir serisinin yalnizca bir örnegidir.
DIZI LISTESI <110> Dyax Corp.
Sexton, Daniel J.
Faucette, Ryan Kenniston, Jon A.
Conley, Greg Nixon, Andrew TenHoor, Christopher Adelman, Burt Chyung, Yung <120> BRADIKININ-ARACILI RAHATSIZLIKLARIN DEGERLENDIRILMESI VE TEDAVISI <140> TBD <160> 9 <170> Patentln versiyon 3.5 <210> 1 <211> 644 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Lya Leu Ile Thr Iie Leu ?ne Leu Cys Ser Arg Leu Leu Leu Ser 1 5 10 15 Leu Thr Gln Glu Ser Gln Ser Glu Glu Ile Asp Cys Asn Asp Lys Asp 25 30 Leu Phe Lya Ala Vai Asp Ala Ala Leu Lys Lys Ty: Asn Ser Gin &an 40 45 Gln Ser Asn Aan Gln Phe Val Leu Tyr Arg Ile Tht Glu Ala Thr Lys 50 55 60 Thr Val Gly Ser Asp Thr Phe Tyr Ser Phe Lys Tyr Glu Ile Lys Glu 65 70 75 80 Gly Asp Cys Pro Val Gln Ser Gly Lys Thr Trp Gln Asp Cya Glu Tyr B5 90 95 Lys Asp Ala Ala Lys Ala Ala Thr Gly Glu Cys ?hr &la Thr Va] Gly 100 105 110 Lys Arg Sir Sor Thr Lys Ph. S.: Val Ala Thr Gln Th: Cy: Gln Il. 115 120 125 01'.: 011.) Lys GLu Ser Tyr Tyr Phe Asp Leu Thr <210> 2 <211> 362 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Gin Giu Ser Gin Ser Giu Giu Ile Asp Lys Ala Val Asp Ala Ala Leu Lys Lya Asn Asn Gln Phe Val Leu Tyr Arg Ile Giy Sir Asp Thr Ph. Ty: Sir Ph. Ly: Cys Pro Vai Gin Ser Giy Lys Thr Trp Ala Ala Lys Ala Ala Thr Giy Giu Cys Ser Ser Thr Lys Phe Ser vai Ala Thr 100 105 Ala Glu Gly Pro Val Vai Thr Ala Gln 115 120 His Pro 110 Sir Thr Gln Sir Pro Asp 130 135 Gly Ile Gln Tyr Phe Aan Asn Asn Thr 145 150 Leu Asn Glu Val Lys Arg Ala G1n Arq Phe Arq Ile Thr Tyr Sar Ile Val Gln 180 185 <210> 3 <211> 255 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 <210>4 <211> 304 <212> PRT <213> Yapay Dizi <220> <223> Sentetik polipeptit <400> 4 (31)* Met Ile Tyr Thr Met Lys Lys Val His Ala Leu Trp Ala Ser Val Cys <210> 5 <211> 58 <212> PRT <213> Yapay Dizi <220> <223> Sentetik polipeptit <400> 5 <210> 6 <211> 122 <212> PRT <213> Yapay Dizi <220> <223> Sentetik polipeptit <400> 6 119 Her Met frp Val Arq <210> 7 <211> 105 <212> PRT <213> Yapay Dizi <220> <223> Sentetik polipeptit <400> 7 <210>8 <211> 60 <212> PRT <213> Yapay Dizi <220> <223> Sentetik polipeptit <400> 8 <210> 9 <211> 58 <212> PRT <213> Yapay Dizi <220> <223> Sentetik polipeptit <400> 9 + Eradiknm 3 4 5 6 7 HAE Hastasi ANTI-PROTEAZ Plazmasinda Western Blot ile Bozulmamis 1 Zincirli Kininojenin Kantitasyonu 0 Hasta DG

Claims (13)

    ISTEMLER
  1. Bir plazma kallikrein (pKaI)-aracili rahatsizlik riskinde olan veya buna sahip olan bir süjenin tanimlanmasi için bir yöntem olup, özelligi yöntemin asagidakileri içermesidir: bir süjenin bir numunesinde bir klevaj edilmis yüksek moleküler agirlikli kininojenin (HMWK) bir seviyesinin ve opsiyonel olarak bozulmamis bir klevaj edilmis HMWK'nin bir degerinin belirlenmesi ve klevaj edilmis HMWK degeri bir referans degerinin üzerindeyse, süjenin bir pKaI-aracili rahatsizlik riskinde veya buna sahip olarak tanimlanmasi, burada referans degeri, saglikli bir süjedeki klevaj edilmis HMWK degerini ifade etmektedir ve burada pKaI-aracili rahatsizlik herediter anjiyoödem (HAE), romatoid artirit, ülseratif kolit veya Crohn hastaligidir.
  2. Istem 1'e göre yöntem olup, özelligi klevaj edilmis HMWK degerin, numunedeki klevaj edilmis HMWK yüzdesi olmasidir.
  3. Istemler 1-2'nin herhangi birine göre yöntem olup, özelligi klevaj edilmis
  4. HMWK'nin ve opsiyonel olarak bozulmamis HMWK'nin seviyelerinin, bozulmamis HMWK”ye kiyasla spesifik olarak klevaj edilmis HMWK”yi baglayan veya klevaj edilmis HMWK'ye kiyasla spesifik olarak bozulmamis HMWK'yi baglayan bir saptama ajaniyla ölçülmesidir, burada opsiyonel olarak saptama ajani düsük moleküler agirlikli kininojene (LMWK) baglanmaz.
  5. Istem 3'e göre yöntem olup, özelligi saptama ajaninin bir antikor olmasidir; tercihen, burada antikor bozulmamis HMWKlye kiyasla spesifik olarak klevaj edilmis HMWK'yi baglar ve opsiyonel olarak LMWK'yi baglamaz, daha tercihen burada saptama ajani, klevaj edilmis HMWK`nin hafif zincirinin C-ucuna baglanan bir antikordur.
  6. Istemler 1 ila 4'ten herhangi birine göre yöntem olup, özelligi bozulmamis
  7. HMWK ve klevaj edilmis HMWK seviyelerinin Western blot analizi ile ölçülmesidir.
  8. Istemler 1 ila 5'ten herhangi birine göre yöntem olup, özelligi numunenin bir kan numunesi veya bir plazma numunesi olmasidir.
  9. Istemler 1 ila öldan herhangi birine göre yöntem olup, özelligi süjenin, pKaI- aracili rahatsizligin bir semptomuna sahip olmasidir; veya burada süje bir antihistamin terapisine, bir kortikosteroid terapisine veya her ikisine dirençlidir. istem 7'ye göre yöntem olup, özelligi semptomun ödem olmasidir.
  10. Istem 7'ye göre yöntem olup, özelligi semptomun asagidakiler olmasidir: tekrarlayan sisme ataklari; sisme, burada söz konusu sisme tamamen veya baskin olarak periferiktir; ürtiker; enfeksiyon kaniti yoklugunda kizariklik, agri ve sisme; veya
  11. Istemler 1 ila 9'dan herhangi birine göre yöntem olup, özelligi süjenin, numunenin alindigi esnada pKaI-aracili rahatsizligin hiç bir semptomuna sahip olmamasidir, pKaI-aracili rahatsizligin bir semptomunun bir hikayesine veya pKal-aracili rahatsizligin bir hikayesine sahip olmamasidir. .Önceki istemlerin herhangi birine göre yöntem olup, özelligi ayrica, rahatsizligin bir kPal inhibitörüyle tedavi edilmesine duyarli olup olmadigini belirlenmesini içermesidir, burada rahatsizlik, klevaj edilmis HMWK'nin degeri referans degerinin üzerindeyse bir pKal inhibitörüyle tedaviye duyarlidir.
  12. Bir süjedeki bir pKal-aracili rahatsizligin bir tedavisinin degerlendirilmesi için bir yöntem olup, özelligi yöntemin asagidakileri içermesidir: süjeden, tedaviden önce ve sonra veya tedavi süresi esnasinda alinan numunelerdeki klevaj edilmis bir HMWK`nin seviyelerinin ve opsiyonel olarak bozulmamis bir HMWK'nin seviyelerinin ölçülmesi; her bir numunedeki klevaj edilmis HMWK'nin bir degerinin, ayni numunedeki klevaj edilmis ve opsiyonel olarak bozulmamis HMWK seviyelerine dayali olarak belirlenmesi; ve numunelerdeki klevaj edilmis bir HMWK'nin degerlerinde, tedaviden önce ve sonra veya tedavi süresi boyunca degisikliklere dayali olarak tedavinin etkililiginin degerlendirilmesidir. burada pKal-aracili rahatsizlik herediter anjiyoödem (HAE)i romatoid artirit, ülseratif kolit veya Crohn hastaligidir.
  13. 13.Bir süjedeki bir pKal-aracili hastaligin tedavisinde kullanim için bir farmasötik bilesim olup, Özelligi bilesimin bir pKal inhibitörü ve farmasötik olarak kabul edilen bir tasiyici içermesidir, burada süje, saglikli bir süjedeki klevaj edilmis HMWK degerini ifade eden bir referans degerinin üzerinde olan, bir klevaj edilmis yüksek moleküler agirlikli kininojen (HMWK) degerine sahiptir; ve burada pKaI-aracili hastalik herediter anjiyoödem (HAE), romatoid artirit, ülseratif kolit veya Crohn hastaligidir.
TR2018/15856T 2013-01-20 2014-01-17 Bradikinin-aracılı rahatsızlıkların değerlendirilmesi ve tedavisi. TR201815856T4 (tr)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361754607P 2013-01-20 2013-01-20

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TR201815856T4 true TR201815856T4 (tr) 2018-11-21

Family

ID=51210106

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TR2018/15856T TR201815856T4 (tr) 2013-01-20 2014-01-17 Bradikinin-aracılı rahatsızlıkların değerlendirilmesi ve tedavisi.

Country Status (21)

Country Link
US (2) US11156612B2 (tr)
EP (3) EP4234583A3 (tr)
JP (4) JP6444315B2 (tr)
KR (3) KR102381478B1 (tr)
CN (2) CN105073778B (tr)
AU (3) AU2014207420B2 (tr)
CA (2) CA2897336C (tr)
CY (1) CY1122164T1 (tr)
DK (1) DK2948479T3 (tr)
ES (1) ES2692408T3 (tr)
HK (1) HK1215266A1 (tr)
HR (1) HRP20181734T1 (tr)
HU (1) HUE041332T2 (tr)
IL (2) IL239428B (tr)
LT (1) LT2948479T (tr)
PL (1) PL2948479T3 (tr)
PT (1) PT2948479T (tr)
RS (1) RS57890B1 (tr)
SI (1) SI2948479T1 (tr)
TR (1) TR201815856T4 (tr)
WO (1) WO2014113712A1 (tr)

Families Citing this family (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SI2521568T1 (sl) 2010-01-06 2019-01-31 Dyax Corp. Proteini, ki vežejo plazemski kalikrein
IL269565B2 (en) 2011-01-06 2024-06-01 Dyax Corp KALLIKREIN PLASMA BINDING PROTEINS
EP4234583A3 (en) 2013-01-20 2024-01-24 Takeda Pharmaceutical Company Limited Evaluation and treatment of bradykinin-mediated disorders
EP2970502A4 (en) 2013-03-15 2016-11-30 Dyax Corp ANTI-PLASMA KALLIKREIN ANTIBODY
TWI636047B (zh) 2013-08-14 2018-09-21 英商卡爾維斯塔製藥有限公司 雜環衍生物
CA2927824A1 (en) 2013-10-21 2015-04-30 Dyax Corp. Assays for determining plasma kallikrein system biomarkers
WO2015061182A1 (en) 2013-10-21 2015-04-30 Dyax Corp. Diagnosis and treatment of autoimmune diseases
KR20220107077A (ko) 2014-01-21 2022-08-01 다케다 파머수티컬 컴패니 리미티드 혈장 칼리크레인 결합 단백질 및 유전성 혈관부종을 치료하는 데 있어서의 이의 용도
BR112016022318A2 (pt) 2014-03-27 2017-10-31 Dyax Corp método, composição farmacêutica para uso no tratamento de doenças de retina e uso de um anticorpo
GB201421083D0 (en) 2014-11-27 2015-01-14 Kalvista Pharmaceuticals Ltd Enzyme inhibitors
MX2017012423A (es) * 2015-03-30 2018-01-26 Dyax Corp Inhibidores de calicreina plasmatica y uso de los mismos para prevenir el ataque del angioedema hereditario.
MX2018004763A (es) * 2015-10-19 2018-09-06 Dyax Corp Inmunoensayo para detectar quininogeno escindido de alto peso molecular.
JP7003354B2 (ja) 2015-12-11 2022-03-04 武田薬品工業株式会社 遺伝性血管性浮腫の発作を治療するための血漿カリクレイン阻害薬およびその用途
MX2018007493A (es) * 2015-12-15 2018-09-18 Dyax Corp Ensayo de cuantificacion de peptido para diferenciar quininogeno de alto peso molecular (hmwk) de longitud completa y hmwk escindido.
KR20220107319A (ko) 2016-05-31 2022-08-02 칼비스타 파마슈티컬즈 리미티드 혈장 칼리크레인 저해제로서 피라졸 유도체
GB201609607D0 (en) 2016-06-01 2016-07-13 Kalvista Pharmaceuticals Ltd Polymorphs of N-(3-Fluoro-4-methoxypyridin-2-yl)methyl)-3-(methoxymethyl)-1-({4-((2-oxopy ridin-1-yl)methyl)phenyl}methyl)pyrazole-4-carboxamide and salts
CN117192130A (zh) 2016-09-16 2023-12-08 武田药品工业株式会社 用于接触活化系统相关的疾病的蛋白生物标记
WO2018053247A1 (en) 2016-09-16 2018-03-22 Dyax Corp. Metabolite biomarkers for diseases associated with the contact activation system
GB201719881D0 (en) 2017-11-29 2018-01-10 Kalvista Pharmaceuticals Ltd Solid forms of plasma kallikrein inhibitor and salts thereof
HRP20220367T1 (hr) 2017-11-29 2022-05-27 Kalvista Pharmaceuticals Limited Oblici za doziranje koji sadrže plazmatski kalikrein inhibitor
US20200407771A1 (en) * 2018-02-22 2020-12-31 The Regents Of The University Of California Threshold-stimulated plasma kallikrein activity as a biomarker for diagnosis of bradykinin-mediated angioedema
EP4010333A1 (en) 2019-08-09 2022-06-15 Kalvista Pharmaceuticals Limited Plasma kallikrein inhibitors
US20230174674A1 (en) * 2020-04-04 2023-06-08 Takeda Pharmaceutical Company Limited Plasma kallikrein inhibitors and uses thereof for treating acute respiratory distress syndrome
CN113777331A (zh) * 2020-06-09 2021-12-10 张曼 尿液激肽原-1及其多肽片段在烧伤中的应用
WO2024003617A2 (en) * 2022-06-30 2024-01-04 Takeda Pharmaceutical Company Limited Protein biomarkers for lanadelumab treatment

Family Cites Families (54)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA1312564C (en) 1985-07-12 1993-01-12 Robert W. Colman Monoclonal antibodies to human plasma prekallikrein and methods of preparing and using same
US5047323A (en) 1986-01-22 1991-09-10 Temple University Of The Commonwealth System Of Higher Education Method for detecting human kininogen using monoclonal antibodies thereto
US4908431A (en) * 1986-01-22 1990-03-13 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education Monoclonal antibodies to human kininogen and methods of preparing same
US4881175A (en) 1986-09-02 1989-11-14 Genex Corporation Computer based system and method for determining and displaying possible chemical structures for converting double- or multiple-chain polypeptides to single-chain polypeptides
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
US5260203A (en) 1986-09-02 1993-11-09 Enzon, Inc. Single polypeptide chain binding molecules
JPS63185398A (ja) 1986-09-10 1988-07-30 Nippon Zoki Pharmaceut Co Ltd 生理活性物質測定法
US4882272A (en) 1986-10-01 1989-11-21 Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education High molecular weight kininogen assay
US5025796A (en) 1988-12-01 1991-06-25 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Apparatus and methods for determining in vivo response to thermal stimulation in in an unrestrained subject
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
DK0590058T3 (da) 1991-06-14 2004-03-29 Genentech Inc Humaniseret heregulin-antistof
US5472945A (en) * 1991-08-13 1995-12-05 Temple University- Of The Commonwealth System Of Higher Education Modulation of blood pressure and inhibition of platelet activation with kininogen fragment
US6057287A (en) 1994-01-11 2000-05-02 Dyax Corp. Kallikrein-binding "Kunitz domain" proteins and analogues thereof
ATE275583T1 (de) 1994-01-11 2004-09-15 Dyax Corp KALLIKREINHEMMENDE ßKUNITZ-DOMÄNEß-PROTEINE UND DERIVATEN DAVON
JPH1084995A (ja) 1996-09-12 1998-04-07 Nippon Zoki Pharmaceut Co Ltd 血液凝固第ｘｉｉ因子活性化法
US5789261A (en) 1996-10-30 1998-08-04 Temple University Of The Commonwealth System Of Higher Education Solid phase immunoassay
US6242210B1 (en) 1997-05-20 2001-06-05 Actinova Limited Treatment of bacterial infections
JP4346798B2 (ja) 1999-08-19 2009-10-21 協和メデックス株式会社 Ｈｃｖコア抗原の検出または定量方法およびそれに用いる検出または定量試薬。
US6994852B1 (en) * 1999-11-12 2006-02-07 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education Inhibition of angiogenesis by antibodies against high molecular weight kininogen domain 5
US7067713B2 (en) 2000-01-31 2006-06-27 Pharming Intellectual Property B.V. C1 Inhibitor produced in the milk of transgenic non-human mammals
US7678541B2 (en) 2000-11-21 2010-03-16 Hologic, Inc. Methods and compositions for the detection of a nucleic acid using a non-invasive cleavage reaction
JP2002221519A (ja) 2001-01-29 2002-08-09 Sysmex Corp 抗凝固剤およびそれを用いた抗凝固剤処理方法
US20040152633A1 (en) 2001-05-31 2004-08-05 Jorgensen Marianne Ulrich Kunitz-type sequences and polypeptides
US6913900B2 (en) 2001-08-29 2005-07-05 Nippon Zoki Pharmaceutical Co., Ltd. Plasma prekallikrein activation and kallikrein production assay
CA2488558C (en) 2002-06-07 2013-08-20 Dyax Corp. Prevention and reduction of blood loss
AU2003281287A1 (en) * 2002-07-04 2004-01-23 Oxford Glycosciences (Uk) Ltd Toxicity markers
US20070003552A1 (en) 2002-07-09 2007-01-04 Gebbink Martijn F B Cross-beta structure comprising amyloid binding proteins and methods for detection of the cross-beta structure, for modulating cross-beta structures fibril formation and for modulating cross-beta structure-mediated toxicity and method for interfering with blood coagulation
EP1598428A1 (en) 2004-05-18 2005-11-23 Georg Dewald Methods and kits to detect Hereditary angioedema type III
US7235530B2 (en) * 2004-09-27 2007-06-26 Dyax Corporation Kallikrein inhibitors and anti-thrombolytic agents and uses thereof
LT1981519T (lt) 2005-12-29 2018-04-25 Dyax Corp. Proteazės slopinimas
US7276480B1 (en) 2005-12-30 2007-10-02 Dyax Corp. Prevention and reduction of blood loss
CA2658523C (en) * 2006-07-31 2012-06-12 Activesite Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of plasma kallikrein
CA2696208A1 (en) 2007-08-21 2009-02-26 Genzyme Corporation Treatment with kallikrein inhibitors
JP2009051259A (ja) 2007-08-23 2009-03-12 Yanmar Co Ltd 作業車両用独立型サスペンションの制御機構
JP5424331B2 (ja) * 2007-10-18 2014-02-26 国立大学法人 鹿児島大学 肝疾患診断用バイオマーカー
AU2008315938B2 (en) 2007-10-22 2014-11-27 Georg Dewald Disorders of vasoregulation and methods of diagnosing them
WO2010062663A1 (en) 2008-11-03 2010-06-03 Schering Corporation Inflammatory bowel disease biomarkers and related methods of treatment
WO2010065656A1 (en) 2008-12-02 2010-06-10 Joslin Diabetes Center Method for reducing blood pressure using inhibitors of plasma kallikrein
AU2013205086A1 (en) * 2009-01-06 2013-05-16 Dyax Corp. Treatment of mucositis with kallikrein inhibitors
FR2942233B1 (fr) 2009-02-19 2015-03-13 Lfb Biotechnologies Moyens pour la purification d'une proteine du plasma sanguin, et procedes pour sa mise en oeuvre
US9206123B2 (en) 2009-12-18 2015-12-08 Activesite Pharmaceuticals, Inc. Prodrugs of inhibitors of plasma kallikrein
WO2011075684A1 (en) 2009-12-18 2011-06-23 Activesite Pharmaceuticals, Inc. Prodrugs of inhibitors of plasma kallikrein
SI2521568T1 (sl) * 2010-01-06 2019-01-31 Dyax Corp. Proteini, ki vežejo plazemski kalikrein
WO2012009447A2 (en) 2010-07-13 2012-01-19 University Of Rochester THE cAMP/PKA/HDAC5 PATHWAY AND USES THEREOF
US10299714B2 (en) 2010-12-02 2019-05-28 Becton, Dickinson And Company Blood collection devices containing blood stabilization agent including variegin or analog thereof and/or a polysulfated disaccharide
IL269565B2 (en) 2011-01-06 2024-06-01 Dyax Corp KALLIKREIN PLASMA BINDING PROTEINS
CA2838984A1 (en) 2011-06-10 2012-12-13 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for modulating kallikrein (klkb1) expression
WO2012170947A2 (en) 2011-06-10 2012-12-13 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for modulating factor 12 expression
EP4234583A3 (en) 2013-01-20 2024-01-24 Takeda Pharmaceutical Company Limited Evaluation and treatment of bradykinin-mediated disorders
MX2015009914A (es) 2013-02-01 2015-09-25 Becton Dickinson Co Dispositivos de recogida de sangre que contienen aditivos de inhibicion de la via de contacto.
CA2927824A1 (en) 2013-10-21 2015-04-30 Dyax Corp. Assays for determining plasma kallikrein system biomarkers
WO2015061182A1 (en) 2013-10-21 2015-04-30 Dyax Corp. Diagnosis and treatment of autoimmune diseases
KR20220107077A (ko) 2014-01-21 2022-08-01 다케다 파머수티컬 컴패니 리미티드 혈장 칼리크레인 결합 단백질 및 유전성 혈관부종을 치료하는 데 있어서의 이의 용도
MX2018004763A (es) 2015-10-19 2018-09-06 Dyax Corp Inmunoensayo para detectar quininogeno escindido de alto peso molecular.

Also Published As

Publication number Publication date
JP2016511823A (ja) 2016-04-21
CA3209608A1 (en) 2014-07-24
JP6444315B2 (ja) 2018-12-26
EP2948479A1 (en) 2015-12-02
CA2897336C (en) 2023-10-17
EP4234583A2 (en) 2023-08-30
KR20150106006A (ko) 2015-09-18
BR112015016231A2 (pt) 2017-07-11
EP3456744B1 (en) 2023-03-29
PL2948479T3 (pl) 2019-02-28
KR102523810B1 (ko) 2023-04-21
IL273688A (en) 2020-05-31
JP7496380B2 (ja) 2024-06-06
KR20210007044A (ko) 2021-01-19
PT2948479T (pt) 2018-11-14
EP2948479B1 (en) 2018-08-01
IL239428B (en) 2020-04-30
AU2014207420B2 (en) 2018-08-09
LT2948479T (lt) 2018-11-26
KR102381478B1 (ko) 2022-04-01
HK1215266A1 (zh) 2016-08-19
CN111044725A (zh) 2020-04-21
AU2018260845B2 (en) 2020-09-03
CA2897336A1 (en) 2014-07-24
US11156612B2 (en) 2021-10-26
DK2948479T3 (en) 2018-11-26
ES2692408T3 (es) 2018-12-03
CN105073778A (zh) 2015-11-18
JP2021008483A (ja) 2021-01-28
AU2014207420A1 (en) 2015-07-02
EP2948479A4 (en) 2016-07-20
BR112015016231A8 (pt) 2019-10-29
KR102203880B1 (ko) 2021-01-15
SI2948479T1 (sl) 2019-01-31
RS57890B1 (sr) 2019-01-31
CY1122164T1 (el) 2020-07-31
CN111044725B (zh) 2024-03-29
AU2020277178B2 (en) 2024-05-09
CN105073778B (zh) 2020-01-10
EP3456744A1 (en) 2019-03-20
HRP20181734T1 (hr) 2018-12-28
US20220170936A1 (en) 2022-06-02
HUE041332T2 (hu) 2019-05-28
JP2019055975A (ja) 2019-04-11
US20150362493A1 (en) 2015-12-17
EP4234583A3 (en) 2024-01-24
IL239428A0 (en) 2015-07-30
JP6772237B2 (ja) 2020-10-21
WO2014113712A1 (en) 2014-07-24
AU2020277178A1 (en) 2020-12-24
KR20220045992A (ko) 2022-04-13
JP2022084648A (ja) 2022-06-07
AU2018260845A1 (en) 2018-11-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2020277178B2 (en) Evaluation and treatment of bradykinin-mediated disorders
JP7441662B2 (ja) ｐＫａｌ関連疾病の評価、アッセイおよび治療
BR112015016231B1 (pt) Método para identificar um sujeito em risco de ou tendo um distúrbio mediado por pkal, método para avaliar um tratamento de um distúrbio mediado por pkal em um sujeito, método para tratar uma doença mediada por pkal, composição farmacêutica para uso notratamento de uma doença mediada por pkal de um sujeito e método para determinar um valor de cininogênio clivado, cininogênio intacto ou ambos, em uma amostra