TH55515A - ลำดับนิวคลีโอไทด์ที่มีรหัสสำหรับจีน citB - Google Patents

Abstract

DC60 (27/11/44) การประดิษฐ์นี้เกี่ยวข้องกับพอลินิวคลีโอไทด์ที่แยกได้ที่มีลำดับพอลินิวคลีโอไทด์ที่เลือกจาก กลุ่มที่ประกอบรวมด้วย a) พอลินิวคลีโอไทด์ที่มีความเหมือนในระดับอย่างน้อย 70% ต่อพอลินิวคลีโอไทด์ที่มีรหัสสำหรับ พอลิเพพไทด์ที่มีลำดับ กรดอะมิโนของ SEQ ID NO. 2 b) พอลินิวคลีโอไทด์ที่มีรหัสสำหรับพอลิเพพไทด์ที่มีลำดับกรดอะมิโนที่มีความเหมือนในระดับ อย่างน้อย 70% ต่อลำดับกรดอะมิโนของ SEQ ID NO. 2 c) พอลินิวคลีโอไทด์ที่เป็นคู่สมต่อพอลินิวคลีโอไทด์ของ a) หรือ b) และ d) พอลินิวคลีโอไทด์ที่มีนิวคลีโอไทด์ต่อเนื่อง กันอย่างน้อย 15 ตัวของลำดับพอลินิวคลีโอไทด์ของ a), b) หรือ c) และต่อกระบวนการสำหรับการสร้างกรดL-อะมิโน โดยการหมักโดย ใช้โครีนีฟอร์ม แบคทีเรียที่อย่างน้อยมีจีน citB อยู่ในรูป ที่ได้รับการหน่วงกำลัง และการใช้ลำดับพอลินิวคลีโอไทด์ที่ ประกอบด้วยลำดับตามการประดิษฐ์นี้เป็นโพรบสำหรับการไฮบริไดซ์ การประดิษฐ์นี้เกี่ยวข้องกับพอลินิวคลีโอไทด์ที่แยกได้ที่มีลำดับพอลินิวคลีโอไทดที่เลือกจาก กลุ่มที่ประกอบรวมด้วย a) พอลินิวคลีโอไทด์ที่มีความเหมือนในระดับอย่างน้อย 70% ต่อพอลินิวคลีโอไทด์ที่มีรหัสสำหรับ พอลิเพพไทด์ที่มีลำดับ กรดอะมิโนของ SEQ ID NO.2 b) พอลินิวคลีไทด์ที่มีรหัสสำหรับพอลิเพพไทด์ที่ประกอบรวม ด้วยลำดับกรดอะมิโนที่มีความเหมือนในระดับ อย่างน้อย 70% ต่อลำดับกรดอะมิโนของ SEQ ID NO. 2 c) พอลินิวคลีไทด์ที่เป็นคู่สมต่อพอลินิวคลีโอไทด์ของ a) หรือ b) และ d) พอลินิวคลีไทด์ที่ประกอบรวมด้วยนิวคลีโอไทด์ต่อเนื่อง กันอย่างน้อย 15 ตัวของลำดับพอลินิวคลีโอไทด์ของ a), b) หรือ c) และต่อกระบวนการสำหรับการสร้างกรดL-อะมิโน โดยการหมักโดย ใช้โครีนีฟอร์ม แบคทีเรียที่อย่างน้อยมีจีน citB อยู่ในรูป ที่ได้รับการหน่วงกำลัง และการใช้ลำดับพอลินิวคลีโอไทด์ที่ ประกอบด้วยลำดับตามการประดิษฐ์นี้เป็นโพรบสำหรับการไฮบริไดซ์

Claims (21)

1. พอลินิวคลีโอไทด์ที่แยกได้จากโครีนีฟอร์มแบคทีเรียที่ประกอบด้วยลำดับพอลิ นิวคลีโอไทด์ที่มีรหัสสำหรับจีน citB คัดเลือกจากกลุ่มของ a) พอลินิวคลีโอไทด์ที่มีความเหมือนในระดับอย่างน้อย 70% ต่อพอลินิวคลีโอไทด์ที่มีรหัส สำหรับพอลิเพพไทด์ที่มีลำดับ กรดอะมิโนของ SEQ ID NO. 2 b) พอลินิวคลีไทด์ที่มีรหัสสำหรับพอลิเพพไทด์ที่ประกอบรวม ด้วยลำดับกรดอะมิโนที่มี ความเหมือนในระดับอย่างน้อย 70% ต่อลำดับกรดอะมิโนของ SEQ ID NO. 2 c) พอลินิวคลีไทด์ที่เป็นคู่สมต่อพอลินิวคลีโอไทด์ของ a) หรือ b) และ d) พอลินิวคลีไทด์ที่มีเบสต่อเนื่อง กันอย่างน้อย 15 ตัวของลำดับพอลินิวคลีโอไทด์ของ a), b) หรือ c) พอลินิวคล๊โอไทด์นั้นควรมีแอคติวิตีของตัวควบคุมการถอดรหัส CitB

2. พอลินิวคลีโอไทด์ตามที่ขอถือสิทธิที่ 1 โดยที่พอลินิว คลีโอไทด์นั้นควรเป็นรีคอมบิแนนท์ ดีเอนเอที่ถอดแบบได้ในโค รีนีฟอร์มแบคทีเรีย

3. พอลินิวคลีโอไทด์ตามที่ขอถือสิทธิที่ 1 โดยที่พอลินิว คลีโอไทด์คือ อาร์เอนเอ

4. พอลินิวคลีโอไทด์ตามที่ขอถือสิทธิที่ 2 ประกอบรวมด้วย ลำดับกรดนิวคลีอิคอย่างที่แสดง ใน SEQ ID NO.1

5. ดีเอนเอตามข้อถือสิทธิที่ 2 ที่สามารถ ถอดแบบประกอบรวมด้วย (i) ลำดับนิวคลีโอไทด์ที่แสดงใน SEQ ID NO. 1 หรือ (ii) อย่างน้อยหนึ่งลำดับที่สมนัยกับลำดับ (i) ภายในช่วง ของดีเจเนอเรชันของรหัส พันธุกรรม หรือ (iii) อย่างน้อยหนึ่งลำดับที่ไฮบริไดซ์กับลำดับที่เป็นคู่ สมกับลำดับ (i) หรือ (ii) และอาจ เลือก (iv) การกลายพันธุ์แบบเซนส์ของการทำงานนิวทรัลใน (i)

6. ดีเอนเอตามข้อถือสิทธิที่ 5 โดยที่ไฮบริไดเซซันนั้นทำ ภายใต้ความเข้มงวดที่สมนัยให้เป็น อย่างมากที่สุด 2x SSC

7. ลำดับพอลินิวคลีโอไทด์ตามข้อถือสิทธิที่ 2 ที่มีรหัสสำหรับพอลิเพพไทด์ที่ประกอบรวม ด้วยลำดับกรดอะมิโนที่แสดงใน SEQ ID No. 2

8. เวกเตอร์ pCR2.1citBint ที่ 8.1 มีชิ้นส่วนภายในของจีน citB ขนาด 318 bp แสดงใน SEQ ID No. 3 8.2 แผนที่เรสตริกชันที่สามารถสร้างขึ้นมาใหม่ในรูปที่ 1 และ 8.3 ที่ฝากใน E.coli สายพันธุ์ TOP10/pCR2.1citBint ภายใต้เลขที่ DSM 13672 ที่ Deutsche Sammlung fur Mikroorganismen und Zellenkulturen [Gerrnan Colleclion of Microorganisms and Cell Cultres]

9. ชิ้นส่วนภายในของจีน citB ที่มีความยาว 318 bp แสดงใน SEQ ID No.3

10. โคลีนิฟอร์มแบคทีเรียที่จีน citB นั้นได้รับการหน่วงที่ควร คือ ขจัด

11. กระบวนการสำหรับการเตรียมกรด L-อะมิโนโดยเฉพาะ L-ไลซีนที่ ประกอบด้วยการ ดำเนินการขั้นตอนต่อไปนี้ a) หมักแบคทีเรียที่สร้างกรด L- อะมิโนที่ต้องการโดยที่ อย่างน้อยทำให้จีน citB อ่อน กำลัง b) ทำให้ผลิตภัณฑ์ที่ต้องการเข้มข้นในอาหารเลี้ยงเชื้อ หรือในเซลล์ของแบคทีเรีย และ c) ทำการแยกกรด L-อะมิโน

12. กระบวนการตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 11 โดยที่ ใช้แบคทีเรียที่วิถีการสังเคราะห์ ทางชีวภาพกรด L- อะมิโนที่ ต้องการได้รับการเสริมเพิ่ม

13. กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 11 โดยที่ใช้แบคทีเรียที่วิถีเมตาบอลิคที่ลดการสร้างของ กรด L- อะมิโนที่ต้องการนั้นมีการขจัดเป็นบางส่วน

14. กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 11 โดยที่การแสดงลักษณะ ของพอลินิวคลีโอไทด์ที่มีรหัส สำหรับจีน citB ได้รับการลดลงโดย เฉพาะขจัดออก

15. กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 11 โดยที่สมบัติการควบคุม หรือแคตาไลซ์ของพอลิ เพพไทด์ที่มีรหัสโดยพอลินิวคลีโอไทด์ citB ได้รับการลดลง

16. กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 11 โดยที่ในการเตรียมกรด L-อะมิโน โดยเฉพาะ L-ไลซีน แบคทีเรียที่ในเวลาเดียวกันจีนหนึ่ง ตัว หรือมากกว่าได้รับการเลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วย 16.1 จีน dapA ที่มีรหัสสำหรับไดไฮโดรพิโคลิเนทซินเทส 16.2 จีน gap ที่มีรหัสสำหรับกลีเซอรัลดีไฮด์ 3-ฟอสเฟตดีไฮโดรจีเนส 16.3 จีน zwf ที่มีรหัสสำหรับกลู โคส 6-ฟอสเฟตดีไฮโดรจีเนส 16.4 จีน pyc ที่มีรหัสสำหรับไพรูเวทคาร์บอกซิเลส 16.5 จีน lysE ที่มีรหัสสำหรับการขนส่งไลซีน 16.6 จีน lysC ที่มีรหัสสำหรับการต้านการย้อนกลับของแอสปาเตท ไคเนส 16.7 จีน zwal ที่มีรหัสสำหรับโปรตีน Zwal ได้รับการเพิ่มกำลังที่ควรคือ แสดงลักษณะเกินปกติได้รับ การหมัก

17. กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 11 ที่ในเวลาเดียวกันจีน หนึ่งตัว หรือมากกว่าได้รับการ เลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วย 17.1 จีน pck ที่มีรหัสสำหรับฟอสโฟอีนอลไพรูเวทคาร์บอกซี ไคเนส 17.2 จีน pgi ที่มีรหัสสำหรับกลูโคส 6-ฟอสเฟตไอโซเมอเลส 17.3 จีน poxB ที่มีรหัสสำหรับไพรูเวทออกซิเดส 17.4 จีน zwa2 ที่มีรหัสสำหรับโปรตีน zwa2 ได้รับการหน่วง

18. โครินีฟอร์มแบคทีเรียที่มีเวกเตอร์ ซึ่งมีส่วนของพอลินิวคลัโอ ไทด์แต่อย่างน้อยเป็น นิวคลีโอไทด์ที่ต่อกัน 15 ตัวของลำดับตามข้อถือสิทธิที่ 1

19. กระบวนการตามข้อถือสิทธิข้อใดข้อหนึ่งของข้อถือสิทธิข้างต้นโดยที่ใช้จุลินทรีย์ของ สกุล Corynebacterium

20. กระบวนการสำหรับการค้นพบอาร์เอนเอ cDNA และดีเอนเอ เพื่อการแยกกรดนิวคลีอิค หรือพอลินิวคลีโอไทด์ หรือจีนที่ มีรหัสสำหรับหน่วยควบคุมการถอดรหัส CitB หรือมีความเหมือนที่ สูงกับลำดับจีน citB ที่ประกอบรวมด้วยการใช้ลำดับพอลินิวคลีโอ ไทด์อย่างที่อ้างสิทธิในข้อถือสิทธิ ที่ 1 ถึง 4 เป็นโพรบสำหรับการไฮบริไดซ์

21. กระบวนการตามข้อถือสิทธิที่ 20 โดยที่ใช้อาร์เรย์ ไมโครอาร์เรย์ หรือดีแอนเอชิพ