TH55514A - ลำดับนิวคลีโอไทด์ที่มีรหัสสำหรับจีน ccpA1 - Google Patents

Abstract

DC60 (15/11/44) การประดิษฐ์นี้เกี่ยวข้องกับพอลินิวคลีโอไทด์ที่แยกได้ที่มีลำดับพอลินิวคลีโอไทด์ที่เลือกจาก กลุ่มที่ประกอบรวมด้วย a) พอลินิวคลีโอไทด์ที่มีความเหมือนอย่างน้อย 70% ต่อพอลินิวคลีโอไทด์ที่มีรหัสสำหรับพอลิ เพพไทด์ที่มีลำดับ กรดอะมิโนของ SEQ ID NO.2 b) พอลินิวคลีโอไทด์ที่มีรหัสสำหรับพอลิเพพไทด์ที่มีลำดับกรดอะมิโนที่มีความเหมือนอย่างน้อย 70% ต่อลำดับกรดอะมิโนของ SEQ ID NO. 2 c) พอลินิวคลีโอไทด์ที่เป็นคู่สมต่อพอลินิวคลีโอไทด์ของ a) หรือ b) และ d) พอลินิวคลีโอไทด์ที่มีเบสต่อเนื่อง กันอย่างน้อย 15 ตัวของลำดับพอลินิวคลีโอไทด์ของ a), b) หรือ c) และต่อกระบวนการสำหรับการสร้างกรดL-อะมิโนโดยการหมัก โดย ใช้โครีนีฟอร์ม แบคทีเรียที่อย่างน้อยมีจีน ccpA1 อยู่ในรูป ที่ได้รับการหน่วงกำลัง และการใช้ลำดับพอลินิวคลีโอไทด์ เป็นโพรบสำหรับการไฮบริไดซ์ การประดิษฐ์นี้เกี่ยวข้องกับพอลินิวคลีโอไทด์ที่แยกได้ที่มีลำดับพอลินิวคลีโอไทด์ที่เลือกจาก กลุ่มที่ประกอบรวมด้วย a) พอลินิวคลีโอไทด์ที่มีความเหมือนอย่างน้อย 70% ต่อพอลินิวคลีโอไทด์ที่มีรหัสสำหรับพอลิ เพพไทด์ที่มีลำดับ กรดอะมิโนของ SEQ ID NO.2 b) พอลินิวคลีไทด์ที่มีรหัสสำหรับพอลิเพพไทด์ที่มีลำดับกรดอะมิโนที่มีความเหมือนอย่างน้อย 70% ต่อลำดับกรดอะมิโนของ SEQ ID NO. 2 c) พอลินิวคลีไทด์ที่เป็นคู่สมต่อพอลินิวคลีโอไทด์ของ a) หรือ b) และ d) พอลินิวคลีโอไทด์ที่มีเบสต่อเนื่อง กันอย่างน้อย 15 ตัวของลำดับพอลินิวคลีโอไทด์ของ a), b) หรือ c) และต่อกระบวนการสำหรับการสร้างกรด L-อะมิโนโดยการหมัก โดย ใช้โครีนีฟอร์ม แบคทีเรียที่อย่างน้อยมีจีน ccpA1 อยู่ในรูป ที่ได้รับการหน่วงกำลัง และการใช้ลำดับพอลินิวคลีโอไทด์ เป็นโพรบสำหรับการไฮบริไดซ์

Claims (20)

1. พอลินิวคลีโอไทด์ที่แยกได้จากโครีนีฟอร์มแบคทีเรียที่ปะกอบด้วยลำดับ พอลินิวคลีโอไทด์ที่มีรหัสสำหรับจีน ccpA1 ที่คัดเลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วย a) พอลินิวคลีโอไทด์ที่มีความเหมือนในระดับอย่างน้อย 70% ต่อพอลินิวคลีโอไทด์ที่มีรหัสสำหรับ พอลิเพพไทด์ที่มีลำดับ กรดอะมิโนของ SEQ ID NO.2 b) พอลินิวคลีโอไทด์ที่มีรหัสสำหรับพอลิเพพไทด์ที่ประกอบรวม ด้วยลำดับกรดอะมิโนที่มีความ เหมือนในระดับอย่างน้อย 70% ต่อลำดับกรดอะมิโนของ SEQ ID NO .2 c) พอลินิวคลีโอไทด์ที่เป็นคู่สมต่อพอลินิวคลีโอไทด์ของ a) หรือ b) และ d) พอลินิวคลีโอไทด์ที่ประกอบรวมด้วยนิวคลีโอไทด์ต่อเนื่อง กันอย่างน้อย 15 ตัวของลำดับ พอลินิวคลีโอไทด์ของ a), b) หรือ c) พอลิเพพไทด์นั้นควรมีแอคติวิตีควบคุมแคตาบอไลท์ของโปรตีน CcpA1

2. พอลินิวคลีโอไทด์ตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่พอลินิว คลีโอไทด์นั้นควร เป็นรีคอมบิแนนท์ดีเอนเอที่ถอดแบบได้ในโค รีนีฟอร์มแบคทีเรีย

3. พอลินิวคลีโอไทด์ตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่พอลินิว คลีโอไทด์คือ อาร์เอนเอ

4. พอลินิวคลีโอไทด์ตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 2 ประกอบรวมด้วย ลำดับ กรดนิวคลีอิคอย่างที่แสดงใน SEQ ID No. 1

5. ดีเอนเอตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 2 ที่สามารถ ถอดแบบประกอบรวมด้วย (i) ลำดับนิวคลีโอไทด์ที่แสดงใน SEQ ID NO. 1 หรือ (ii) อย่างน้อยหนึ่งลำดับที่สมนัยกับลำดับ (i) ภายในช่วง ของดีเจเนอเรชันของรหัส พันธุกรรม หรือ (iii) อย่างน้อยหนึ่งลำดับที่ไฮบริไดซ์กับลำดับที่เป็นคู่ สมกับลำดับ (i) หรือ (ii) และ อาจเลือก (iv) การกลายพันธุ์แบบเซนส์ของการทำงานนิวทรัลใน (i)

6. ลำดับพอลินิวคลีโอไทด์ตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 2 ที่มีรหัสสำหรับพอลิเพพไทด์ ที่ประกอบรวมด้วยลำดับกรดอะมิใน SEQ ID No. 2

7. โครีนีฟอร์มแบคทีเรียที่จีน ccpa1 ได้รับการหน่วงที่ ควรคือ ขจัดออก

8. Escherichia coli สายพันธุ์ Top10F/pCR2.1ccpA1int ใน รูป DSM 13673 ฝากไว้ที่ the Deutsche Sannlung fur Mikroorganismen und Zellenkulturen [German Collection of Microorganisms and Cell Cultures]

9. เวกเตอร์ pCR2.1ccpA1int ที่ 9.1 มีชิ้นส่วนภายในของจีน ccpA1 ขนาด 632 bp 9.2 แผนที่เรสตริกชันที่สามารถสร้างขึ้นใหม่ในรูที่ 1 และ 9.3 ที่ฝากใน E.coli สายพันธุ์ TOP10/pCR2.1ccp A1int ภายใต้เลขที่ DSM 13673 ที่ the Deutsche Sannlung fur Mikroorganismen und Zellenkulturen [German Collection of Microorganisms and Cell Cultures]

10. กระบวนการสำหรับการผลิตกรด L - อะมิโน โดยเฉพาะ L - ไลซีนที่ประกอบด้วยการ ดำเนินการขั้นตอนต่อไปนี้ a) หมักแบคทีเรียที่สร้างกรด L-อะมิโนที่ต้องการ และโดย ที่อย่างน้อยทำให้จีน ccpA1 อ่อนกำลัง b) ทำให้ผลิตภัณฑ์ที่ต้องการเข้มข้นในอาหารเลี้ยงเชื้อ หรือในเซลล์ของแบคทีเรีย และ c) แยกกรด L- อะมิโน

11. กระบวนการตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 10 โดยที่ ใช้แบคทีเรียที่จีนของวิถีการ สังเคราะห์ทางชีวภาพของกรด L - อะมิโนที่ต้องการได้รับการเสริมกำลังเพิ่มเติม

12. กระบวนการตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 10 โดยที่ ใช้แบคทีเรียที่วิถีเมตาบอลิคที่ลด การสร้างของกรด L-อะมิโน ที่ต้องการนั้นได้รับการขจัดอย่างน้อยเป็นบางส่วน

13. กระบวนการตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 10 โดยที่ การแสดงลักษณะของ พอลินิวคลีโอไทด์ที่มีรหัสสำหรับจีน ccpA1 ได้รับการลดลงโดยเฉพาะขจัดออก

14. กระบวนการตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 10 แสดง ลักษณะโดยที่สมบัติการควบคุม ของพอลิเพพไทด์ที่มีรหัสโดยพอ ลินิวคลีโอไทด์ ccpA1 ได้รับการลดลง

15. กระบวนการตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 10 แสดง ลักษณโดยที่ในการเตรียมกรด L - อะมิโน โดยเฉพาะ L - ไลซีน แบคทีเรียที่ในเวลาเดียวกันจีนหนึ่งตัว หรือมากกว่าได้รับ การเลือกจาก กลุ่มที่ประกอบด้วย 15.1 จีน dapA ที่มีรหัสสำหรับไดไฮโดรพิโคลิเนทซินเทส 15.2 จีน eno ที่มีรหัสสำหรับอีโนเลส 15.3 จีน zwf ที่มีรหัสสำหรับผลิตภัณฑ์จีน zwf 15.4 จีน pyc ที่มีรหัสสำหรับไพรูเวทคาร์บอกซิเลส 15.5 จีน lysE ที่มีรหัสสำหรับการขนส่งไลซีน 15.6 ที่เวลาเดียวกันจีน dapD ที่มีรหัสสำหรับเททราได ไฮโดรไดพิโคลิเนทซัคซิไนเลส 15.7 ที่เวลาเดียวกันจีน dapE ที่มีรหัสสำหรับซัคซินิลไดอะมิ โน-ไพมีเลทดีซัคซิไนเลส 15.8 ที่เวลาเดียวกันจีน gap ที่มีรหัสสำหรับกลีเซอรัล ดีไฮต์ 3-ฟอสเฟตดีไฮโดรจีเนส 15.9 ที่เวลาเดียวกันจีน mqo ที่มีรหัสสำหรับ มาเลท:ควิ โนนออกซิโดรีดักเทส 15.10 จีน lysC ที่มีรหัสสำหรับการต้านการย้อนกลับของแอส ปาเตทไคเนส 15.11 จีน zwa1 ที่มีรหัสสำหรับโปรตีน Zwa1 ได้รับการเพิ่มกำลังที่ควรคือ แสดงลักษณะเกินปกติได้รับ การหมัก

16. กระบวนการตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 10 ที่ใน เวลาเดียวกันจีนหนึ่งตัว หรือมาก กว่าได้รับการเลือกจากกลุ่ม ที่ประกอบด้วย 16.1 จีน pck ที่มีรหัสสำหรับฟอสโฟอีนอลไพรูเวทคาร์บอกซี ไคเนส 16.2 จีน pgi ที่มีรหัสสำหรับกลูโคส 6-ฟอสเฟตไอโซเมอเลส 16.3 จีน poxB ที่มีรหัสสำหรับไพรูเวทออกซิเดส 16.4 จีน zwa2 ทีมีรหัสสำหรับโปรตีน zwa2 ได้รับการหน่วง ได้รับการหมัก

17. โครีนีฟอร์มแบคทีเรียที่มีเวกเตอร์ทีมีพอลินิวคลีโอ ไทด์ตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 1

18. กระบวนการตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิก่อนหน้านี้ ข้อใดข้อหนึ่ง แสดงลักษณะโดยที่ ใช้จุลินทรีย์ของสกุล Corynebacterium

19. กรรมวิธีสำหรับการค้นพบอาร์เอนเอ cDNA และดีเอนเอ เพื่อการแยกกรดนิวคลีอิค หรือ พอลินิวคลีโอไทด์ หรือจีนที่ มีรหัสสำหรับโปรตีนควบคุมแคตาบอไลท์ CcpA1 หรือที่มีความเหมือน ที่ สูงกับลำดับจีน CcpA1 ที่ประกอบรวมด้วยการใช้ลำดับพอลินิวคลีโอ ไทด์ตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือ สิทธิที่ 1 ถึง 4 ข้อใดข้อ หนึ่งเป็นโพรบสำหรับการไฮบริไดซ์

20. กรรมวิธีตามที่ขอถือสิทธิในข้อถือสิทธิที่ 19 โดย ที่ไฮบริไดเซชันนั้นทำภายใต้ภาวะเข้ม งวดที่สอดคล้องกับ อย่างมากที่สุด 2x SSC