TH24249Y - ชุดทดสอบตรวจไซบูทรามีนและกรรมวิธีการผลิต - Google Patents

Abstract

------21/01/2565------(OCR) ชุดทดสอบไซบูทรามีน ประกอบด้วยแผ่นทดสอบที่บรรจุในตลับพลาสติก นํ้ายาสกัดสำเร็จรูปซึ่งประกอบด้วย เอทานอลในนํ้า และสารละลายบัฟเฟอร์สำเร็จรูปที่ประกอบด้วยโพแทสเซียมคลอไรด์ (KCI),โพแทสเซียมไดไฮโดรเจนฟอสเฟต (KH2PO4), โซเดียมคลอไรด์ ไดโซเดียมไฮโดรเจนฟอสเฟต (Na2HPO4), และทวีน-20 (Tween-20) ในนํ้า และกรรมวิธีการผลิต มีขั้นตอนดังนี้ เตรียมไซบูทรามีนคอนจูเกตกับซีรัมอัลบูมินของวัวแล้วพ่นลงแผ่นไนโตรเซลลูโลสเมมเบรน รวมถึงเตรียมแอนติบอดีคอนจูเกตสามารถเตรียมโดยเจือจางโมโนโคลนอลแอนติบอดี (monoclonal antibody) และเตรียมคอลลอยดอลโกลด์เพื่อคอนจูเกตกับโมโนโคลนอลแอนติบอดี นำคอลลอยดอลโกลด์คอนจูเกตกับโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่ผสมแล้วมาหยดบนแผ่นกราสไฟเบอร์ (glass fiber membrane) นำแผ่นไนโตรเซลลูโลสเมมเบรนและแผ่นกราสไฟเบอร์ที่เตรียมไว้ดังได้กล่าวข้างต้นประกอบกันเข้ากับแผ่นรองและแผ่นซับสารละลายแล้วจึงตัดให้มีขนาดที่เหมาะสมเพื่อบรรจุในตลับพลาสติก ชุดทดสอบสามารถใช้ตรวจสารไซบูทรามีนในผลิตภัณฑ์ยา และอาหารเสริม ด้วยเทคนิคอิมมูโนโครมาโทรกราฟี โดยชุดทดสอบมีความไวกว่าชุดทดสอบเทคนิคโครมาโตกราฟีแบบผิวบางที่มีการใช้ในประเทศไทยชุดทดสอบเทคนิคอิมมูโนโครมาโทรกราฟฟียังแก้ไขปัญหาเรื่องความยุ่งยากในการตรวจซึ่งประชาชนทั่วไปสามารถใช้ตรวจได้ด้วยตนเอง มีความสะดวกในการใช้งาน เป็นประโยชน์ต่อสังคมทำให้ประชาชนปลอดภัยในการใช้ผลิตภัณฑ์ยาและอาหารเสริม ------------ หน้า 1 ของจำนวน 1 หน้า บทสรุปการประดิษฐ์ การประดิษฐ์นี้เกี่ยวข้องกับชุดทดสอบตรวจไซบูทรามีน โดยชุดทดสอบสามารถใช้ตรวจสารไซบูทรามีนใน ผลิตภัณฑ์ยา และอาหารเสริม ด้วยเทคนิคอิมมูโนโครมาโทรกราฟี โดยชุดทดสอบมีความไวกว่าชุดทดสอบ เทคนิคโครมาโตกราฟีแบบผิวบางที่มีการใช้ในประเทศไทย ชุดทดสอบเทคนิคอิมมูโนโครมาโทรกราฟฟียังแก้ไข ปัญหาเรื่องความยุ่งยากในการตรวจซึ่งประชาชนทั่วไปสามารถใช้ตรวจได้ด้วยตนเอง มีความสะดวกในการใช้งาน

Claims (2)

------21/01/2565------(OCR) 1. ชุดทดสอบไซบูทรามีน ประกอบด้วย 1.1 ตลับพลาสติกสำหรับบรรจุแผ่นทดสอบมีลักษณะคือชิ้นพลาสติกด้านล่างสำหรับวางแผ่นทดสอบ และชิ้นพลาสติกด้านบนซึ่งมีรูเปิดตำแหน่งต่างๆ คือซ่องเปิดปลายสุดลักษณะเป็นรูกลมรีเป็นหลุมสำหรับหยดตัวอย่างที่สกัดโดยนํ้ายาสกัดสำเร็จรูป ซึ่งประกอบด้วย 50 เปอร์เซนต์ (ปริมาตรต่อปริมาตร) เอทานอลในนํ้าบรรจุในขวดแก้ว ถัดไปเป็นรูเปิดสี่เหลี่ยมผืนผ้า เป็นหน้าต่างที่แสดงผลการทดสอบมีตัวอักษร ซี” และ ที”พิมพ์กำกับ ภายในบรรจุกระดาษทดสอบ 4 ส่วน ซึ่งกระดาษส่วนที่ 1 เป็นกระดาษไนโตรเซลลูโลสเมมเบรนมีขนาดกว้างคูณยาว 4 มิลลิเมตรคูณ 25 มิลลิเมตร ปิดทับตรงส่วนกลางของแผ่นโพลีสไตรีนมีขนาดของรูพรุน140 ไมโครเมตร ทำหน้าที่เป็นส่วนแสดงผลจะรองรับสารไซบูทรามีนคอนจูเกตกับซีรัมอัลบูมินของวัวตรงตำแหน่ง ที” และแอนติบอดีไอจีจีของแพะที่จำเพาะต่อหนูเมาส์ ตรงตำแหน่ง ซี” ตำแหน่งดังกล่าวเขียนไว้บนตกับทดสอบ กระดาษส่วนที่ 2 เป็นกระดาษใยแก้วมีขนาดกว้างคูณยาว 4 มิลลิเมตรคูณ 8มิลลิเมตร ปิดทับเหลื่อมซ้อนบนกระดาษไนโตรเซลลูโลสเมมเบรน 2-3 มิลลิเมตร ทำหน้าที่เป็นแผ่นที่เคลือบด้วยแอนติบอดีคอนจูเกต กระดาษส่วนที่ 3 เป็นกระดาษใยแก้ว มีขนาดกว้างคูณยาว 4 มิลลิเมตรคูณ 20มิลลิเมตรปิดทับเหลื่อมซ้อน 2-4 มิลลิเมตรกับกระดาษส่วนที่ 2 โดยติดขอบปลายล่างสุดของแผ่นทดสอบเป็นส่วนที่ซับตัวอย่าง และรองรับสารละลาย กระดาษส่วนที่ 4 เป็นกระดาษไนโตรเซลลูโลสเมมเบรนมีขนาดกว้างคูณยาว 4 มิลลิเมตรคูณ 20 มิลลิเมตร ปิดทับที่ส่วนปลายบนสุดของแผ่นทดสอบและเหลือมทับส่วนของกระดาษไนโตรเซลลูโลสเมมเบรน 2-3 มิลลิเมตร ทำหน้าที่ดูดซับตัวอย่างและสารละลายทั้งหมด 1.2 สารละลายบัฟเฟอร์สำเร็จรูป ประกอบด้วย 0.1 กรัม (g)โพแทสเซียมคลอไรด์ (KCI), 0.12 กรัม (g)โพแทสเซียมไดไฮโดรเจนฟอสเฟต (KH2PO4), 4 กรัม (g) โซเดียมคลอไรด์ (NaCl), 1.81 กรัม (g)ไดโซเดียมไฮโดรเจนฟอสเฟต (Na2HPO4), และ 250 ไมโครลิตร (มิวl) ทวีน-20 (Tween-20) ปรับปริมาตรด้วยนํ้าจนได้ปริมาตรที่ 500 มิลลิลิตร (ml) โดยสามารถปรับอัตราส่วนของสารต่างๆตามปริมาตรของสารละลายบัฟเฟอร์สำเร็จรูปที่ต้องการเตรียม2. กรรมวิธีการผลิตขุดทดสอบไซบูทรามีน ตามข้อถือสิทธิที่ 1 มีขั้นตอนดังต่อไปนี้ 2.1 เตรียมไซบูทรามีนคอนจูเกตกับซีรัมอัลบูมินของวัวที่ความเข้มข้น 0.05 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร และแอนติบอดีไอจีจีของแพะที่จำเพาะต่อหนูเมาส์ที่ความเข้มข้น 0.5 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร พ่นลงแผ่นไนโตรเซลลูโลสเมมเบรน 0.9 ไมโครลิตรต่อเซนติเมตร อบแห้ง 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส แล้วเก็บที่อุณหภูมิห้องในถุงอลูมิเนียมฟอยล์ใส่สารดูดความชิ้นและปิดสนิท 2.2 การเตรียมแอนติบอดีคอนจูเกตสามารถเตรียมโดยเจือจางโมโนโคลนอลแอนติบอดี (monoclonalantibody) ที่ 0.2 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร โดยทำการเจือจางด้วยสารละลายเฮปส์ (HEPES) จากนั้นเตรียมคอลลอยดอลโกลด์เพื่อคอนจูเกตลับโมโนโคลนอลแอนติบอดีโดยเติม 80 ไมโครลิตร ของ 0.1 โมลาร์โพแทสเซียมคาร์บอเนต (K2CO3) ผสมกับ 10 มิลลิลิตรสารละลายคอลลอยดอสโกลด์ (colloidal goldsolution) จากนั้นผสมโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่เจือจางแล้ว (diluted monoclonal antibody) 300 ไมโครลิตร และทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้อง 50 นาที และเติม 10% นํ้าหนักต่อปริมาตร (w/v) ซีรัมอัลบูมินของวัว (bovine serum albumin) 500 ไมโครลิตร และนำไปปั่นเหวี่ยง 45 นาที ที่ 8,000 รอบ/นาที (rpm) ที่ 4องศาเซลเซียส และหลังจากนั้นให้ทิ้งสารละลายส่วนบน และเติมบัฟเฟอร์แขวนตะกอน (resuspension buffer) ที่มีส่วนผสมประกอบด้วย 0.02 โมลาร์ (M) ทริสไฮโดรคลอไรด์ (Tris-HCl), 0.1% นํ้าหนักต่อนํ้าหนัก (w/w)ทวีน-20 (Tween-20), 0.1% นํ้าหนักต่อนํ้าหนัก (w/w) พีอีจื (PEG), 1% นํ้าหนักต่อนํ้าหนัก (w/w) พีวีพี (PVP), 5% นํ้าหนักต่อนํ้าหนัก (w/w) ซูโครส (sucrose), 4% นํ้าหนักต่อนํ้าหนัก (w/w) ทรีฮาโลส (trehalose), 2% น้ำหนักต่อน้ำหนัก (w/w) ซอร์บีทอล (sorbitol), 1% น้ำหนักต่อนํ้าหนัก (w/w) แมนนิทอล(mannitol), 0.04% นํ้าหนักต่อน้ำหนัก (w/w) โซเดียมเอไซด์ (NaN3), และ 0.2% นํ้าหนักต่อน้ำหนัก (w/w)บีเอสเอ (BSA) จากนั้นผสม 300 ไมโครลิตร (มิวl) คอลลอยดอลโกลด์เชื่อมต่อกับโมโนโคลนอลแอนติบอดี กับ900 ไมโครลิตร (มิวl) 5% น้ำหนักต่อน้ำหนัก (w/w) ทวีน-20 (Tween-20) ในบัฟเฟอร์สำหรับแขวนตะกอน(resuspension buffer) จากนั้นนำ คอลลอยดอลโกลด์คอนจูเกตกับโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่ผสมแล้วมาหยดบนแผ่นกราสไฟเบอร์ (glass fiber membrane) จากนั้นนำแผ่นกราสไฟเบอร์ไปอบแห้ง 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส แล้วเก็บที่อุณหภูมิห้องในถุงอลูมิเนียมฟอยล์ ใส่สารดูดความชื้น และปิดสนิท 2.3 การประกอบส่วนต่างๆ ของชุดทดสอบนำกระดาษที่ใช้ในการผลิตชุดทดสอบที่เตรียมไว้ข้างต้นปิดทับกันดังนี้ กระดาษส่วนที่ 4 กระดาษไนโตรเซลลูโลสเมมเบรน ปิดทับที่ส่วนปลายบนสุดของแผ่นโพลีสไตรีนที่มีไนโตรเซลลูโลสเมมเบรนเคลือบด้วยไซบูทรามีน คอนจูเกตกับซีรัมอัลบูมินของวัวและแอนติบอดีไอจีจีของแพะที่จำเพาะต่อหนูเมาส์แล้วโดยเหลื่อมทับส่วนของกระดาษไนโตรเซลลูโลสเมมเบรน 2-3 มิลลิเมตร จากนั้นนำกระดาษใยแก้วส่วนที่ 2 ที่เคลือบด้วยแอนติบอดีคอนจูเกต ปิดทับที่ส่วนปลายล่างโดยเหลือมช้อนบนกระดาษไนโตรเซลลูโลสเมมเบรน 2-3มิลลิเมตร หลังจากนั้นนำกระดาษใยแก้วส่วนที่ 3 ติดขอบล่างสุดของแผ่นโพลีสไตรีน โดยเหลื่อมทับส่วนของกระดาษใยแก้วส่วนที่ 2 จะได้แผ่นทดสอบที่มีขนาดกว้างคูณยาว 60 คูณ 300 มิลลิเมตร ตัดให้มีขนาดกว้างคูณยาว 4 มิลลิเมตรคูณ 60 มิลลิเมตร นำแผ่นทดสอบที่ตัดแล้วบรรจุในตลับทดสอบ เก็บรักษาในซอง อลูมิเนียมฟอยส์ใส่สารดูดความชื้นและปิดสนิท ------------ หน้า 1 ของจำนวน 2 หน้า ข้อถือสิทธิ

1. ชุดทดสอบตรวจไซบูทรามีนและกรรมวิธีการผลิต 1.1 ตลับพลาสติกสำหรับบรรจุแผ่นทดสอบมีลักษณะคือชิ้นพลาสติกด้านล่างสำหรับวางแผ่นทดสอบ และ ชิ้นพลาสติกด้านบนซึ่งมีรูเปิดตำแหน่งต่างๆ คือช่องเปิดปลายสุดลักษณะเป็นรูกลมรีเป็นหลุมสำหรับหยด ตัวอย่างที่สกัดโดยน้ำยาสกัดสำเร็จรูป ซึ่งประกอบด้วย 50 เปอร์เซนต์ (ปริมาตรต่อปริมาตร) เอทานอลในน้ำ บรรจุในขวดแก้ว ถัดไปเป็นรูเปิดสี่เหลี่ยมผืนผ้า เป็นหน้าต่างที่แสดงผลการทดสอบมีตัวอักษร ซี” และ ที” พิมพ์กำกับ ภายในบรรจุกระดาษทดสอบ 4 ส่วน ซึ่งกระดาษส่วนที่ 1 เป็นกระดาษไนโตรเซลลูโลสเมมเบรนมี ขนาดกว้างคูณยาว 4 มิลลิเมตรคูณ 25 มิลลิเมตร ปิดทับตรงส่วนกลางของแผ่นโพลีสไตรีนมีขนาดของรูพรุน 140 ไมโครเมตร ทำหน้าที่เป็นส่วนแสดงผลจะรองรับสารไซบูทรามีนคอนจูเกตกับซีรัมอัลบูมินของวัว ตรงตำแหน่ง ที” และแอนติบอดี้ไอจีจีของแพะที่จำเพาะต่อหนูเมาส์ ตรงตำแหน่ง ซี” ตำแหน่งดังกล่าว เขียนไว้บนตลับทดสอบ กระดาษส่วนที่ 2 เป็นกระดาษใยแก้วมีขนาดกว้างคูณยาว 4 มิลลิเมตรคูณ 8 มิลลิเมตร ปิดทับเหลือมซ้อนบนกระดาษไนโตรเซลลูโลสเมมเบรน 2-3 มิลลิเมตร ทำหน้าที่เป็นแผ่นที่เคลือบ ด้วยแอนติบอดีคอนจูเกต กระดาษส่วนที่ 3 เป็นกระดาษใยแก้ว มีขนาดกว้างคูณยาว 4 มิลลิเมตรคูณ 20 มิลลิเมตร ปิดทับเหลื่อมซ้อน 2-4 มิลลิเมตรกับกระดาษส่วนที่ 2 โดยติดขอบปลายล่างสุดของแผ่นทดสอบเป็น ส่วนที่ซับตัวอย่าง และรองรับสารละลาย กระดาษส่วนที่ 4 เป็นกระดาษไนโตรเซลลูโลสเมมเบรนมีขนาดกว้าง คูณยาว 4 มิลลิเมตรคูณ 20 มิลลิเมตร ปิดทับที่ส่วนปลายบนสุดของแผ่นทดสอบและเหลื่อมทับส่วนของ กระดาษไนโตรเซลลูโลสเมมเบรน 2-3 มิลลิเมตร ทำหน้าที่ดูดซับตัวอย่างและสารละลายทั้งหมด 1.2 สารละลายบัฟเฟอร์สำเร็จรูป ประกอบด้วย 0.1 กรัม (g) โพแทสเซียมคลอไรด์ (KCl), 0.12 กรัม (g) โพแทสเซียมไดไฮโดรเจนฟอสเฟต (KH2PO4), 4 กรัม (g)โซเดียมคลอไรด์ (NaCl), 1.81 กรัม (g) ไดโซเดียม ไฮโดรเจนฟอสเฟต (Na2HPO4), และ 250 ไมโครลิตร ((สัญลักษณ์)l) ทวีน-20 (Tween-20) ปรับปริมาตรด้วยน้ำจนได้ ปริมาตรที่ 500 มิลลิลิตร (ml) โดยสามารถปรับอัตราส่วนของสารต่างๆตามปริมาตรของสารละลายบัฟเฟอร์ สำเร็จรูปที่ต้องการเตรียม

2. กรรมวิธีการผลิตชุดทดสอบตรวจไซบูทรามีนและกรรมวิธีการผลิต ตามข้อถือสิทธิที่ 1 มีขั้นตอนดังต่อไปนี้ 2.1 เตรียมไซบูทรามีนคอนจูเกตกับซีรัมอัลบูมินของวัวที่ความเข้มข้น 0.05 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร และ แอนติบอดีไอจีจีของแพะที่จำเพาะต่อหนูเมาส์ที่ความเข้มข้น 0.5 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร พ่นลงแผ่นไนโตร เซลลูโลสเมมเบรน 0.9 ไมโครลิตรต่อเซนติเมตร อบแห้ง 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส แล้วเก็บที่ อุณหภูมิห้องในถุงอลูมิเนียมฟอยล์ใส่สารดูดความชื้นและปิดสนิท 2.2 การเตรียมแอนติบอดีคอนจูเกตสามารถเตรียมโดยเจือจางโมโนโคลนอลแอนติบอดี้ (monoclonal antibody) ที่ 0.2 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร โดยทำการเจือจางด้วยสารละลายเฮปส์ (HEPES) จากนั้นเตรียม คอลลอยดอลโกลด์เพื่อคอนจูเกตกับโมโนโคลนอลแอนติบอดี้โดยเติม 80 ไมโครลิตร ของ 0.1 โมลาร์ โพแทสเซียมคาร์บอเนต (K2CO3) ผสมกับ 10 มิลลิลิตรสารละลายคอลลอยดอลโกลด์ (colloidal gold solution) จากนั้นผสมโมโนโคลนอลแอนติบอดี้ที่เจือจางแล้ว (diluted monoclonal antibody) 300 ไมโครลิตร และทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้อง 50 นาที และเติม 10% น้ำหนักต่อปริมาตร (w/v) ซีรัมอัลบูมินของวัว (bovine serum albumin) 500 ไมโครลิตร และนำไปปั่นเหวี่ยง 45 นาที ที่ 8,000 รอบ/นาที (rpm) ที่ 4 องศาเซลเซียส และหลังจากนั้นให้ทิ้งสารละลายส่วนบน และเติมบัฟเฟอร์แขวนตะกอน (resuspension buffer) หน้า 2 ของจำนวน 2 หน้า ที่มีส่วนผสมประกอบด้วย 0.02 โมลาร์ (M) ทริสไฮโดรคลอไรด์ (Tris-HCl), 0.1% น้ำหนักต่อน้ำหนัก (w/w) ทวีน-20 (Tween-20), 0.1% น้ำหนักต่อน้ำหนัก (w/w) พีอีจี (PEG), 1% น้ำหนักต่อน้ำหนัก (w/w) พีวีพี (PVP), 5% น้ำหนักต่อน้ำหนัก (w/w) ซูโครส (sucrose), 4% น้ำหนักต่อน้ำหนัก (w/w) ทวีฮาโลส (trehalose), 2% น้ำหนักต่อน้ำหนัก (w/w) ซอร์บีทอล (sorbital), 1% น้ำหนักต่อน้ำหนัก (w/w) แมนนิทอล (mannitol), 0.04% น้ำหนักต่อน้ำหนัก (w/w) โซเดียมเอไซด์ (NaN3), และ 0.2% น้ำหนักต่อน้ำหนัก (w/w) บีเอสเอ (BSA) จากนั้นผสม 300 ไมโครลิตร ((สัญลักษณ์)l) คอลลอยดอสโกลด์เชื่อมต่อกับโมโนโคลนอลแอนติบอดี้ กับ 900 ไมโครลิตร ((สัญลักษณ์)l) 5% น้ำหนักต่อน้ำหนัก (w/w) ทวีน-20 (Tween-20) ในบัฟเฟอร์สำหรับแขวนตะกอน (resuspension buffer) จากนั้นนำ คอลลอยดอลโกลด์คอนจูเกตกับโมโนโคลนอลแอนติบอดี้ที่ผสมแล้วมา หยดบนแผ่นกราสไฟเบอร์ (glass fiber membrane) จากนั้นนำแผ่นกราสไฟเบอร์ไปอบแห้ง 24 ชั่วโมงที่ อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส แล้วเก็บที่อุณหภูมิห้องในถุงอลูมิเนียมฟอยล์ ใส่สารดูดความชื้น และปิดสนิท 2.3 การประกอบส่วนต่างๆ ของชุดทดสอบ นำกระดาษที่ใช้ในการผลิตชุดทดสอบที่เตรียมไว้ข้างต้นปิดทับกันดังนี้ กระดาษส่วนที่ 4 กระดาษไนโตร เซลลูโลสเมมเบรน ปิดทับที่ส่วนปลายบนสุดของแผ่นแผ่นโพลีสไตรีนที่มีไนโตรเซลลูโลสเมมเบรนเคลือบด้วย ไซบูทรามีน คอนจูเกตกับซีรัมอัลบูมีนของวัวและแอนติบอดีไอจีจีของแพะที่จำเพาะต่อหนูเมาส์แล้วโดยเหลื่อม ทับส่วนของกระดาษไนโตรเซลลูโลสเมมเบรน 2-3 มิลลิเมตร จากนั้นนำกระดาษใยแก้วส่วนที่ 2 ที่เคลือบด้วย แอนติบอดี้คอนจูเกต ปิดทับที่ส่วนปลายล่างโดยเหลือมซ้อนบนกระดาษไนโตรเซลลูโลสเมมเบรน 2-3 มิลลิเมตร หลังจากนั้นนำกระดาษใยแก้วส่วนที่ 3 ติดขอบล่างสุดของแผ่นโพลีสไตรีน โดยเหลื่อมทับส่วนของ กระดาษใยแก้วส่วนที่ 2 จะได้แผ่นทดสอบที่มีขนาดกว้างคูณยาว 60 คูณ 300 มิลลิเมตร ตัดให้มีขนาดกว้าง คูณยาว 4 มิลลิเมตรคูณ 60 มิลลิเมตร นำแผ่นทดสอบที่ตัดแล้วบรรจุในตลับทดสอบ เก็บรักษาในซอง อลูมิเนียมฟอยล์ใส่สารดูดความชื้นและปิดสนิท