CN104730237A - 试纸及其应用以及检测甲胎蛋白抗原、乙肝表面抗原或HIV的gp41抗体的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种试纸，所述试纸包括依次排列的加样区、结合物区、观测区和吸水区；其中，所述结合物区含有结合有酶的抗原或结合有酶的抗体，所述结合有酶的抗原和所述结合有酶的抗体能够被液体样品洗脱，所述酶为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶；其中，所述观测区包括按照结合物区到吸水区的方向依次排列的抗原或抗体线T线以及质控线C线；其中，所述T线固定有能够与待检测的抗体或抗原发生特异性结合的抗原或抗体，所述C线固定有能够与结合物区中的抗原或抗体结合的抗体。本发明的试纸条灵敏度可以达到500pg/ml，并且易于制备，使用方便快捷，免疫检测仅15分钟。可用于检测甲胎蛋白、乙肝表面抗原，HIV的抗体的检测等。

Description

试纸及其应用以及检测甲胎蛋白抗原、乙肝表面抗原或HIV的gp41抗体的方法

技术领域

本发明涉及一种试纸，该试纸在制备检测甲胎蛋白抗原、乙肝表面抗原或HIV的gp41抗体的试剂盒中的用途，以及一种检测甲胎蛋白抗原、乙肝表面抗原或HIV的gp41抗体的方法。 

背景技术

化学发光免疫分析是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术，是继放射免疫分析、酶联免疫分析、荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术。化学发光免疫分析技术具有灵敏度高、快速、准确、重复性好等优点。目前，已有商品化的化学发光免疫分析技术都通过96孔板试剂盒来实现的，其灵敏度可以达到皮克级，但其检测时间要长达3-4小时。免疫层析试纸条是一种快速诊断技术，具有携带方便、操作简便、成本低廉的特点，目前常见的是胶体金试纸条，可以在15分钟内读取检测结果。但是试纸条的灵敏度一般在纳克级，相对较低。 

有文献（Highly sensitive rapid test with chemiluminescent signal bands，Hyung-Seok Kim,Hyuk Ko,Min-Jung Kang，Jae-Chul Pyun，BioChip J.(2010)4(2):155-160）公开了一种化学发光层析试纸条的制备方法，将辣根过氧化酶标记的抗体固定在层析试纸条的结合垫上代替胶体金试纸条中胶体金标记的抗体，之后将发光液加入到试纸条上从而获得化学发光的信号带。这种试纸条被用于检测心脏疾病中肌红蛋白指标，检测范围为10-100ng/mL。但其检测范围仍然在纳克级，没有充分发挥化学发光检测灵敏度高的优势。 

发明内容

本发明的一个目的是为了克服现有化学发光免疫分析技术或者检测时间长，或者灵敏度低的缺陷，提供一种可短时高灵敏的进行化学发光免疫分析的试纸。 

所述试纸包括依次排列的加样区、结合物区、观测区和吸水区； 

其中，所述结合物区含有结合有酶的抗原或结合有酶的抗体，所述结合有酶的抗原和所述结合有酶的抗体能够被液体样品洗脱，所述酶为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶； 

其中，所述观测区包括按照结合物区到吸水区的方向依次排列的抗原或抗体线T线以及质控线C线； 

其中，所述T线固定有能够与待检测的抗体或抗原发生特异性结合的抗原或抗体，所述C线固定有能够与结合物区中的抗原或抗体结合的抗体。 

优选地，所述结合物区中还含有海藻糖和环糊精。 

本发明的另一个目的是提供一种如上的试纸在制备检测甲胎蛋白抗原、乙肝表面抗原或HIV的gp41抗体的试剂盒中的用途。 

本发明的再一个目的是提供一种检测甲胎蛋白抗原、乙肝表面抗原或HIV的gp41抗体的方法，该方法包括：将待测液体样品加入如上所述的试纸的加样区，5-10分钟后加入酶的发光液，检测T和C线的发光情况，并且按照以下标准得到检测结果： 

T线和C线处显示发光条带时，则认为样品中含有待检测的抗原或抗体； 

T线处未显示发光条带而C线处显示发光条带时，则认为样品中不含有待检测的抗原或抗体。 

本发明的试纸条是将化学发光和免疫层析技术结合起来，进行特异性抗原的检测，其灵敏度可以达到500pg/ml。该试纸条具有易于制备，使用方便快捷，将普通化学发光免疫检测由几小时缩短到15分钟，而灵敏度却要高 于一般胶体金试纸条的和现有技术公开的化学发光试纸条的特点。可用于检测甲胎蛋白、乙肝表面抗原，HIV的抗体的检测等。 

本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。 

附图说明

附图是用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本发明，但并不构成对本发明的限制。在附图中： 

图1是根据实施例1的方法制备的化学发光试纸条的示意图。 

图2是使用实施例1的方法制备的化学发光试纸条测定的AFP浓度与发光强度的曲线图。 

附图标记说明 

1、加样区；2、观测区；3、为T线；4、C线；5、卡壳 

具体实施方式

以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。 

一方面，本发明提供了一种试纸，所述试纸包括依次排列的加样区、结合物区、观测区和吸水区； 

其中，所述结合物区含有结合有酶的抗原或结合有酶的抗体，所述结合有酶的抗原和所述结合有酶的抗体能够被液体样品洗脱，所述酶为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶； 

其中，所述观测区包括按照结合物区到吸水区的方向依次排列的抗原或抗体线T线以及质控线C线； 

其中，所述T线固定有能够与待检测的抗体或抗原发生特异性结合的抗原或抗体，所述C线固定有能够与结合物区中的抗原或抗体结合的抗体。 

在本发明中，对所述观测区中T线和C线的排列顺序有一定的限制，所述排列顺序包括按照结合物区到吸水区的方向依次排列T线和C线。T线和C线的排列顺序能够使得当液体样品加入到加样区上时，液体样品在毛细管力的作用下会先到达T线，然后经过C线。所述T线和C线优选垂直于液体流动的方向。 

在本发明所述的试纸中，对所述T线和C线的长度和宽度没有特别的限制，优选情况下，所述T线和C线的长度均可以为3-4cm，每条线的宽度均可以为1-1.5mm。 

本发明所述的试纸中，对T线和C线之间的距离没有特别的限制，可以根据实际的情况进行调整，例如，所述距离可以为4-5mm。 

另外，本发明对所述T线和C线上包被的抗原或抗体的量没有特别的限制，只能能够实现与待检测的抗体或抗原的有效结合即可。优选的情况下，每平方厘米的所述T线和C线上所包被的抗原或抗体的量为0.003-0.004mg。 

根据本发明，对用于以上各区的基底的材料不受特别的限制，只要能够实现对抗原或抗体的检测即可。优选地，所述加样区的基底和结合物区的基底为玻璃纤维膜，所述观测区的基底为硝酸纤维素膜，所述吸水区的基底为吸水纸。 

所述加样区、结合物区、观测区和吸水区的基底可以依次相互搭接的排列，当将待测液体样品加到加样区时，待测液体样品能够在毛细管力的作用下依次经过结合物区和观测区，并到达吸水区。 

本发明的发明人发现，当所述结合物区中含有恢复液，所述恢复液含有海藻糖和环糊精的情况下，结合物区中含有的蛋白质，也即抗原或抗体能够得到很好的保护，从而能够增加试纸的稳定性。因此，在优选的情况下，所 述结合物区中还含有海藻糖和环糊精。另外，本发明对所述恢复液的用量也没有特别的限制，只要能够对结合物区中的蛋白进行有效地保护即可，例如，相对于100μg或100μL的所述抗原或抗体，所述恢复液的用量为45-55mL。 

尽管所述结合物区含有包括海藻糖和环糊精的恢复液即可进一步保证试纸的检测水平，但本发明的发明人发现，当相对于1mL的所述恢复液，所述海藻糖的含量为0.005-0.01mg，环糊精的含量为0.01-0.02mg时，能够进一步提高试纸的灵敏度和稳定性。 

本发明的发明人还发现，当所述恢复液中还含有牛血清白蛋白（BSA）和酪蛋白；相对于1mL的恢复液，BSA中的含量为0.005-0.01g，酪蛋白的含量为0.005-0.01g时，能够进一步提高试纸的灵敏度和稳定性。 

根据本发明，所述结合物区中结合有酶的抗原或结合有酶的抗体的用量没有特别的限制，优选地，每平方厘米的所述结合物区中结合有酶的抗原或结合有酶的抗体的量为0.005-0.01mg。 

根据本发明一种优选的实施方式，可以将以上用于结合物区的抗原或抗体按照上述的比例混合均匀后，再涂覆到结合物区的基底上。 

根据本发明，所述结合有酶的抗原为能够与待检测抗体结合的标记有辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶的抗原a；T线中固定的抗原为能够与待检测的抗体结合的抗原b；C线中固定的抗体为抗抗原a的抗体。 

其中，所述抗原a与抗原b可以相同。 

其中，所述结合物区上涂覆的酶标抗原没有特别的限制，其根据待检测的抗体而定，例如，当待检测的抗体为HIV的gp41抗体时，所述结合物区上涂覆的酶标抗原是辣根过氧化物酶（HRP）和/或碱性磷酸酶（AP）标记的HIV的gp41抗原；则相应的T线处为HIV的gp41抗原，C线处为抗HIV的gp41抗原的抗体。 

根据本发明，所述结合有酶的抗体为抗待检测抗原的标记有辣根过氧化 物酶或碱性磷酸酶的抗体1；T线中固定的抗体为抗待检测抗原的抗体2；C线中固定的抗体为抗所述抗体1的抗体3。 

其中，所述抗体1和抗体2不同。 

其中，所述结合物区上涂覆的酶标抗体没有特别的限制，其根据待检测的抗原而定，例如，当待检测的抗原为甲胎蛋白和/或乙肝表面抗原时，所述结合物区上涂覆的酶标抗体是HRP和/或AP标记的甲胎蛋白（AFP）检测抗体1，和/或，是HRP和/或AP标记的乙肝表面抗原的检测抗体1；则相应的，T线处相应为甲胎蛋白的捕获抗体2，和/或乙肝表面抗原的捕获抗体2；C线处相应为甲胎蛋白检测抗体1的二抗，和/或乙肝表面抗原检测抗体1的二抗。 

根据本发明，所述液体样品可以为尿液、组织液、血清和全血中的一种或多种。 

本发明的试纸可以通过如下的方法进行制备： 

在聚氯乙烯（PVC）胶板上一端顺次相互搭接贴上样品区（玻璃纤维膜）、结合物区（将结合有酶的抗原或结合有酶的抗体涂覆在玻璃纤维膜形成）、观测区（按照结合物区到吸水区的方向，包括将能够与待检测的抗体或抗原发生特异性结合的抗原或抗体涂覆在硝酸纤维素膜上游形成的T线，以及将能够与结合物区中的抗原或抗体结合的抗体涂覆在硝酸纤维素膜下游形成的C线，所述T线和C线的长度均为3-4cm，宽度均为1-1.5mm）、吸水纸。将PVC胶板及其贴附的材料切割成4mm宽度的层析试纸条。装入卡壳内，卡壳上开窗口分加样区和观测区。 

根据本发明试纸条所应用的检测范围不同，分为用于检测抗原和抗体的两类试纸条。 

1）对于用于检测抗原的试纸条，所述样品区可以为玻璃纤维膜；所述结合物区可以为涂覆有酶标抗体（酶-Ab1）的玻璃纤维膜；所述硝酸纤维素 膜上包被有两条线，分别为T线（含有所要检测特异性抗原的抗体（Ab2））和C线（含有抗Ab1的特异性抗体（Ab3））。 

其中，所述结合区上涂覆的酶标抗体，可以是HRP和/或AP标记的甲胎蛋白（AFP）检测抗体，和/或，HRP和/或AP标记的乙肝表面抗原的检测抗体；所述硝酸纤维素膜上T线处相应为甲胎蛋白的捕获抗体，和/或乙肝表面抗原的捕获抗体，所述C线处相应为甲胎蛋白检测抗体的二抗，和/或乙肝表面抗原检测抗体的二抗。其中，所述检测抗体与捕获抗体不同。 

2）对于用于检测抗体的试纸条，所述样品区可以为玻璃纤维膜；所述结合物区可以为涂覆有酶标抗原（酶-Ag）的玻璃纤维膜；所述硝酸纤维素膜上包被有两条线，分别为T线（含有所要待检抗体的抗原（Ag））和C线（含有Ag的抗体（Ab））。 

其中，所述结合物垫上涂覆酶标抗原可以是HRP标记的HIV的gp41抗原和/或AP标记的HIV的gp41抗原；所述T线处为HIV的gp41抗原，C线处为HIV的gp41抗原的抗体。 

如上所述的试纸在制备检测甲胎蛋白抗原、乙肝表面抗原或HIV的gp41抗体的试剂盒中的用途。 

本发明还提供了一种检测甲胎蛋白抗原、乙肝表面抗原或HIV的gp41抗体的方法，该方法包括：将待测液体样品加入到如上所述的试纸的加样区，5-10分钟后加入酶的发光液，检测T和C线的发光情况，并且按照以下标准得到检测结果： 

T线和C线处显示发光条带时，则认为样品中含有待检测的抗原或抗体； 

T线处未显示发光条带而C线处显示发光条带时，则认为样品中不含有待检测的抗原或抗体。 

根据本发明，对于检测抗原的试纸条，在加样区上加入被检测样品后，如果被检测物中含有所需检测的特异性抗原（Ag），通过层析作用，样品中 的抗原和结合物区中的抗待检测抗原的酶标抗体（酶-Ab1）结合，并向吸水纸方向移动，当抗原和酶标抗体（酶-Ab1）结合形成的结合物经过T线时，结合物中的抗原会和T线处的抗待检测抗原的抗体（Ab2）结合，从而形成Ab2-Ag-Ab1-酶的结合物，并被捕获在T线处，而未结合的其余的酶-抗体（酶-Ab1）继续移动至C线位置，与Ab1的抗体（Ab3）结合。5-10分钟之后，再加入酶的发光液，置于化学发光成像仪上读取结果时，会在T线和C线处看到两条发光条带。T线和C线处显示发光条带时，则认为样品中含有待检测的抗原或抗体；T线处未显示发光条带而C线处显示发光条带时，则认为样品中不含有待检测的抗原或抗体。在C线处出现发光条带，表明该检测系统的检测结果有效；若C线处没有发光条带，表明该检测系统失效，检测结果判定为无效。 

对于检测抗体的试纸条，在加样区上加入被检测样品后，如果被检测物中含有所需检测的特异性抗体（Ab），通过层析作用，样品中抗体和结合物垫中的酶标抗原（酶-Ag）结合，并向吸水纸方向移动，当抗体和酶标抗原（酶-Ag）结合形成的结合物经过T线时，结合物中的抗体会和T线处的抗原（Ag）结合，从而形成Ag-Ab-Ag-酶的结合物，并被捕获在T线处，而未结合的其余的酶标抗原（酶-Ag）继续移动C线位置，与Ag的抗体(Ab)结合。5-10分钟之后，再加入酶的发光液，置于发光仪器读取结果时，若样品中含有被待检抗体，会在T线和C线处看到两条发光条带。若T线处没有显示发光条带，证明没有被检测的特异性抗体；T线处未显示发光条带而C线处显示发光条带时，则认为样品中不含有待检测的抗原或抗体。在C线处出现发光条带，表明该检测系统的检测结果有效；若C线处没有发光条带，表明该检测系统失效，检测结果判定为无效。 

所述发光液为所述酶的发光液为A液和B液的1:1的混合液，其中，A液为：缓冲体系+鲁米诺+增强剂，B液为缓冲体系和双氧水。具体地，所述发 光液可以为购自北京久峰生物工程有限公司的Max-G HRP鲁米诺化学发光底物液。 

以下将通过实施例对本发明进行详细描述。以下实施例中， 

TBST中含有10mmol/L的Tris，0.9%的NaCl，1%的Tween20，用HC1调pH至7.4。 

发光液可以为购自北京久峰生物工程有限公司的Max-G HRP鲁米诺化学发光底物液。 

三维平面划膜仪，上海金标生物技术有限公司，HM3010。 

冷冻干燥机，北京博医康生物实验有限公司，FD-1A-50。 

实施例1 

本实施例用于说明本发明提供的HRP标记的用于检测AFP的试纸条。 

（1）将HRP-AFP检测抗体（Z111D1，购自北京科跃中凯生物技术有限公司）用含有1重量%BSA的TBST溶液稀释至500倍后，抗体终浓度为0.2μg/mL。另外再加入海藻糖、环糊精和酪蛋白，并使其终浓度分别为0.01mg/mL、0.015mg/mL和0.01g/mL，涂覆在玻璃纤维纤维上面，-40℃冷冻，并干燥，制得HRP-Ab1结合物垫，室温避光保存。 

（2）按照玻璃纤维样品垫，HRP-Ab1结合物垫，硝酸纤维素膜和吸水纸的顺序，依次相互搭接贴在PVC胶板上，分别形成加样区、结合物区、观测区和吸水区。 

（3）包被T线和C线：采用三维平面划膜仪（仪器参数设置为1微升/厘米，C和T线的长度均为4mm，宽度均为0.5mm，之间的距离为5毫米）包被所要包被的T和C线的抗体，抗体的浓度均为0.2mg/mL，每平方厘米的T和C线上所包被的抗原或抗体的量均为0.003mg，T线上的抗体为被待 检抗原的包被抗体Ab2（Z111C1，购自北京科跃中凯生物技术有限公司），C线上的抗体Ab3（二抗GaM20131023，购自北京诺特赖斯生物技术有限公司）。 

（4）将PVC胶板及其贴附的材料切成4mm宽度的层析试纸条。 

（5）试纸条的组装：将切割好的试纸条，装在卡壳内，卡壳上开有样区和观测区，样品垫对准加样区，T线和C线区域对准观测区，得到检测卡1。将组装好的试纸条装在铝箔袋中，内装一个干燥剂和滴管，进行密封常温保存。 

实施例2 

本实施例用于说明本发明提供的HRP标记的用于检测AFP的试纸条。 

按照实施例1的制备HRP标记的用于检测AFP的检测卡2。不同的是，所述恢复液中不含有酪蛋白和BSA。 

实施例3 

本实施例用于说明本发明提供的HRP标记的用于检测AFP的试纸条。 

按照实施例1的制备HRP标记的用于检测AFP的检测卡3。不同的是，所述恢复液中不含有海藻糖和环糊精。 

测试例1.1-1.3AFP抗原的检测 

分别将实施例1-3中装有试纸条的铝箔袋打开，取出检测卡，平放在检测台面上，然后滴加100μl待测样品（为临床诊断明确的含有AFP抗原的阳性血清和阴性血清）于加样孔中，10分钟之后，加入发光液，2分钟后，放置于发光仪器上进行观察。实施例1-3检测结果的阳性样品的符合率分别为99.5%、99.0%和98.1%；阴性样品的符合率分别为98.7%、98.1%和97.5%。 

其中，表1中显示了测试卡1的检测结果。 

结果判断： 

阴性结果：在C线处显示一条发光条带，在T线处未显示发光条带。 

阳性结果：在C线处显示一条发光条带，同时在T线处也显示显色发光条带。发光条带越强，说明抗原含量越多。 

无效：反应完成后，若在C线处未显示发光条带，证明该检测系统无效。 

表1 

测试例2.1-2.3半定量分析 

（1）将WTO国际标准的AFP抗原用1重量%的BSA溶液进行对倍稀释，稀释后的浓度分别为：500ng/ml，250ng/ml，125ng/ml，63ng/ml，32ng/ml，16ng/ml，8ng/ml，4ng/ml，2ng/ml，1ng/ml，0.5ng/ml。 

（2）按照测试例1的方法使用实施例1-3制备的检测AFP抗原的测试卡对上述样品进行检测。 

（3）对所读出的荧光强度进行数据分析。 

（4）用Origin软件绘图，实施例1制备的测试卡的结果见图2。对于图2中的结果，可以进行定量检测，在进行检测实际样品的检测完成时，对化学发光强度进行测量，即可以得知Y轴的数据，然后根据图2的表征曲线，对应的X轴的数据就可知道，这样可以定量检测到该实际样品中目标物的含量。从图2可以看出，采用本发明的方法制备的试纸条的灵敏度较高，可达到500pg/ml。 

实施例4 

本实施例用于说明本发明提供的HRP标记用于检测HBsAg抗原的试纸条。 

（1）将HRP-HBsAg检测抗体（251523116，购自北京科跃中凯生物技术有限公司）（HRP-Ab1）用含有1重量%BSA的TBST溶液稀释至500倍后，抗体终浓度为0.2μg/mL。另外再加入海藻糖、环糊精和酪蛋白，并使其终浓度分别为0.005mg/mL、0.01mg/mL和0.005g/mL，涂覆在玻璃纤维纤维上面，-40℃冷冻，并干燥，制得HRP-Ab1结合物垫，室温避光保存。 

（2）按照玻璃纤维样品垫，HRP-Ab1结合物垫，硝酸纤维素膜和吸水纸的顺序，依次相互搭接贴在PVC胶板上，分别形成加样区、结合物区、观测区和吸水区。 

（3）包被T线和C线：采用三维平面划膜仪（仪器参数设置为1微升/厘米，C和T线的长度均为4mm，宽度均为0.5mm，之间的距离为5毫米）包被所要包被的T和C线的抗体，抗体的浓度分别为0.3mg/mL和0.5mg/mL，每平方厘米的T和C线上所包被的抗原或抗体的量为0.003mg和0.004mg，T线上的抗体为被待检抗原的包被抗体Ab2（2515221916，购自北京科跃中凯生物技术有限公司)，C线上的抗体Ab3（二抗GaM20131023厂家：北京诺特赖斯生物技术有限公司）。 

（4）将PVC胶板及其贴附的材料切成4mm宽度的层析试纸条。 

（5）试纸条的组装：将切割好的试纸条，装在卡壳内，卡壳上开有样区和显色区，样品垫对准加样区，T线和C线区域对准观测区，得到测试卡4。将组装好的试纸条装在铝箔袋中，内装一个干燥剂和滴管，进行密封常温保存。 

测试例1.4HBsAg抗原的检测 

按照实施例1.1的方法对临床确诊的含有HBsAg的阳性血清和阴性血清进行检测，结果见表2。 

表2 

测试例2.4 

按照实施例2.1的方法对实施例4制备的测试卡进行半定量分析。结果类似。 

实施例5 

本实施例用于说明本发明提供的HRP标记的用于检测HIV抗体的试纸条。 

（1）将HRP-HIVgp41抗原（2515221916，购自北京科跃中凯生物技术有限公司）用含有1重量%BSA的TBST溶液稀释至400倍后，抗体终浓度为0.25μg/mL。另外再加入海藻糖、环糊精和酪蛋白，并使其终浓度分别为0.008mg/mL、0.02mg/mL和0.008g/mL，涂覆在玻璃纤维纤维上面，-40℃冷冻，并干燥，制得结合物垫，室温避光保存。 

（2）按照玻璃纤维样品垫，HRP-HIVgp41抗原的结合物垫，硝酸纤维素膜和吸水纸的顺序，依次相互搭接贴在PVC胶板上，分别形成加样区、结合物区、观测区和吸水区。 

（3）包被T线和C线：采用三维平面划膜仪（仪器参数设置为1微升/厘米，C和T线的长度均为4mm，宽度均为0.5mm，之间的距离为5毫米）包被所要包被的T和C线的抗体，抗体的浓度均为0.5mg/mL，每平方厘米 的T和C线上所包被的抗原或抗体的量为0.004mg和0.003mg，T线上的抗原为HIVgp41抗原（2515221916，购自北京科跃中凯生物技术有限公司），C线上为HIVgp41抗原的抗体（二抗000T3，购自上海信然生物技术有限公司）。 

（4）将PVC胶板及其贴附的材料切成4mm宽度的层析试纸条。 

（5）试纸条的组装：将切割好的试纸条，装在卡壳内，卡壳上开有样区和显色区，样品垫对准加样区，T线和C线区域对准观测区，得到测试卡5。将组装好的试纸条装在铝箔袋中，内装一个干燥剂和滴管，进行密封常温保存。 

测试例1.5HIV抗体的检测 

按照实施例1.1的方法对临床确诊的含有HIV抗体的阳性血清200份和阴性血清150进行检测，结果见表3。 

表3 

测试例2.5 

按照实施例2.1的方法对实施例4制备的测试卡进行半定量分析。结果类似。 

以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。 

另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特 征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合。为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。 

此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。 

Claims (10)

1.一种试纸，所述试纸包括依次排列的加样区、结合物区、观测区和吸水区；

其中，所述结合物区含有结合有酶的抗原或结合有酶的抗体，所述结合有酶的抗原和所述结合有酶的抗体能够被液体样品洗脱，所述酶为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶；

其中，所述观测区包括按照结合物区到吸水区的方向依次排列的抗原或抗体线T线以及质控线C线；

其中，所述T线固定有能够与待检测的抗体或抗原发生特异性结合的抗原或抗体，所述C线固定有能够与结合物区中的抗原或抗体结合的抗体。

2.根据权利要求1所示的试纸，其中，所述加样区的基底和结合物区的基底为玻璃纤维膜，所述观测区的基底为硝酸纤维素膜，所述吸水区的基底为吸水纸。

3.根据权利要求1所述的试纸，其中，所述T线和C线的长度均为3-4cm，宽度均为1-1.5mm，两条线之间的距离为4-5mm；每平方厘米的所述T线和C线上所包被的抗原或抗体的量为0.003-0.004mg。

4.根据权利要求1所述的试纸，其中，所述结合物区中还涂覆有恢复液，所述恢复液含有海藻糖和环糊精；

相对于100μg的所述抗原或抗体，所述恢复液的用量为45-55mL。

5.根据权利要求1或4所述的试纸，其中，每平方厘米的所述结合物区中结合有酶的抗原或结合有酶的抗体的量为0.005-0.01mg。

6.根据权利要求1所述的试纸，其中，所述结合有酶的抗原为能够与待检测抗体结合的标记有辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶的抗原a；T线中固定的抗原为能够与待检测的抗体结合的抗原b；C线中固定的抗体为抗抗原a的抗体。

7.根据权利要求1所述的试纸，其中，所述结合有酶的抗体为抗待检测抗原的标记有辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶的抗体1；T线中固定的抗体为抗待检测抗原的抗体2；C线中固定的抗体为抗所述抗体1的抗体3。

8.权利要求1-7中任意一项所述的试纸在制备检测甲胎蛋白抗原、乙肝表面抗原或HIV的gp41抗体的试剂盒中的用途。

9.一种检测甲胎蛋白抗原、乙肝表面抗原或HIV的gp41抗体的方法，该方法包括：将待测液体样品加入到权利要求1-7中任意一项所述的试纸的加样区，5-10分钟后加入酶的发光液，检测T和C线的发光情况，并且按照以下标准得到检测结果：

T线和C线处显示发光条带时，则认为样品中含有待检测的抗原或抗体；

T线处未显示发光条带而C线处显示发光条带时，则认为样品中不含有待检测的抗原或抗体。

10.根据权利要求9所述的方法，其中，C线未显示发光条带时，则指示试纸条的结果无效。