FI78361B - Anordning foer kemiska analyser och anvaendning daerav. - Google Patents

Description

1 78361

Laite kemiallisiin analyyseihin ja sen käyttö Tämä keksintö kohdistuu kemiallisiin analyyseihin ja tarkemmin sanottuna laitteeseen tällaisten suorittamiseksi sekä tämän laitteen käyttöön. Analyysit, joihin esillä oleva keksintö on sovellettavissa, ovat sellaisia, joissa tutkittava näyte saatetaan kosketukseen näytteen kanssa reagoivan reagenssin (reagenssien) kanssa muodostamaan havaittavan aineen, joka vuorostaan todetaan sen kvalitatiivista tai kvantitatiivista määrittämistä varten. Keksintö on erikoisen mielenkiintoinen lääketieteen alalla, esimerkiksi immuuni-kemiallisten analyysien suorittamisessa, mutta ei rajoitu siihen, sillä keksinnön perusidea on sovellettavissa mitä erilaisimpiin edellä mainitunlaisiin analyyseihin.

Immuuni-kemiallisissa analyyseissä, kuten entsyymi-immuunikokees-sa (EIA) tai fluoresenssi-immuunikokeessa (FIA) tulee useimmissa tapauksissa vapaa merkitty vasta-aine tai antigeeni erottaa merkitystä antigeeni-vasta-ainekompleksista. Tämä saadaan tavallisesti aikaan kiinteän faasin avulla, joka voi olla esimerkiksi partikkelin tai pinnan muodossa, jolloin joko kompleksin vapaa merkitty komponentti pidätetään kiinteään faasiin molekyylikoon, adsorption tai erityyppisten kemiallisten (mukaanluettuna immuuni-kemiallisten) sidontojen perusteella. Tyypillistä tällaisille analyyseille on tänä päivänä, että ne vaativat useita nestemäisiä prosessivaiheita reaktiotapahtuman suorittamiseksi. Tästä syystä useimmat immuuni-kemialliset analyysit rajoittuvat, nykyään käytetyllä tekniikalla, laboratorioihin, joilla on koulutettu henkilökunta.

On osoittautunut, että keksinnön mukaisella laitteella on mahdollista huomattavasti helpottaa ja yksinkertaistaa edellä mainitun tyyppisten analyysien suoritus- ja käsittelyvaiheita niin, että myös kouluttamaton henkilökunta, esimerkiksi toimistojen ja sairaaloiden lääkärit ja sairaanhoitajat voivat suorittaa 2 78361 ne. Laite on jopa riittävän yksinkertainen, jotta itse potilas voi monessa tapauksessa käyttää sitä. Tärkeä tekijä viimeksi mainitussa yhteydessä on lisäksi, että erittäin yksinkertaisen rakenteensa ansiosta laite voidaan myös tehdä hyvin halvaksi, mikä merkitsee sitä, että se voi saavuttaa laajan kaupallisen käytön, ainakin joitakin kvalitatiivisia ja puolikvantitatiivi-sia kokeita varten, joilla potilas itse voi todeta tietyt sairaustilat ennen kuin on tarve kääntyä lääkärin puoleen.

Kuten edellä mainittiin, laite ei kuitenkaan millään tavalla rajoitu käytettäväksi immuuni-kemiallisiin analyyseihin, mutta yksinkertaisuuden ja paremman ymmärtämisen vuoksi sitä selostetaan seuraavassa lähemmin niiden yhteydessä. Tässä yhteydessä voidaan myös lisätä, että selostetut analyysit ja niissä käytetyt reagenssit ovat hyvin tunnettuja ja ne on esitetty useissa julkaisuissa. Näin ollen ei ole tarpeen toistaa niihin liittyviä yksityiskohtia, koska nämä ovat löydettävissä alan sopivasta kirjallisuudesta. Esimerkiksi immuuni-kemiallisten analyysien alalla käytettyyn tekniikkaan nähden viitataan SE-patenttihake-muksessa 8205751-4 kuvattuun tekniikkaan. Tätä kirjallisuusviitettä ei kuitenkaan ole tarkoitettu millään tavalla tyhjentäväksi tällä alalla.

Tarkoituksella selventää keksintöä vielä enemmän samoin kuin sitä teknistä alaa, johon se kuuluu, on lisättävä, ettei se liity millään tavalla niihin lukuisiin yksinkertaisiin diffuusio-laitteisiin, jotka on selostettu kirjallisuudessa, esimerkiksi joissa näytteen annetaan joko passiivisesti tai kapillaarivoimien avulla diffundoida yhden tai useamman kemiallisesti aktiivisen kerroksen läpi. Esimerkkejä kirjallisuudesta, jossa esitetään tämän tapaisia laitteita, ovat US-A 3 511 608, GB 2 031 583, EP 64392, US-A 4 066 403 ja EP 51 183. Mitä näihin tulee, on huomattava, että US-A 3 511 608:ssa esitetyt limittäiset lohkot tai GB 2 031 583:ssa ja EP 64 392:ssa esitetyt taitettavat arkit kohdistuvat diffuusiolaitteiden mahdollisiin valmistusmenetelmiin, mutta niillä ei ole mitään toiminnallista tarkoitusta analyysin suorittamiseen nähden, jonka aikana nämä lohkot

II

3 78361 tai arkit ovat pysyvästi liitetyt toisiinsa yhdeksi ainoaksi kappaleeksi. Vaikkakin esimerkiksi GB 2 031 538:ssa ja EP 64 392:ssa on läppiä, jotka ovat käyttäjän toimesta taitettavissa, näitä läppiä käytetään vain suojakansina tai -peitteinä eivätkä ne osallistu kemialliseen tai analyyttiseen prosessiin.

Keksinnön mukainen laite eroaa olennaisesti edellä mainituista laitteista siinä, ettei se perustu mihinkään diffuusioperiaat-teeseen. Sen sijaan analyysi suoritetaan vaiheittain kuten laboratoriossa. Uutuutena on, ettei nestemäisiä näytteitä ja rea-gensseja tarvitse siirtää koeputkesta koeputkeen tai koekupista koekuppiin toistetuilla pipetoimistoimenpiteillä. Sen sijaan näytteet, reagenssit ja jopa pesuvaihe on sisällytetty laitteen pintoihin. Näytteiden tai reagenssien siirto pinnasta pintaan suoritetaan yksinkertaisella taittamistoiminnalla. Tämä tarjoaa huomattavia etuja verrattuna monikerroksisiin diffuusioelement-teihin, jotka ovat esimerkiksi US-A 4 066 403:ssa ja EP 51 183:ssa esitettyä tyyppiä. Käyttäjä säilyttää eri reaktiovaiheiden ajoituksen täyden hallinnan, kun taas monikerroksisissa diffuusiolaitteissa ajoitusta voidaan säädellä vain valmistajan toimesta valitsemalla materiaalit kerroksiin ja tämäkin vain : ' rajoitetusti. Lisäksi keksinnön mukaista laitetta voidaan käyt- V: tää useimpien aineiden analyysiin tarvitsematta suorittaa suurem pia perusrakenteen tai muotoilun muutoksia. Immuuni-kemiallisis-sa analyyseissä esiintyy kokonsa puolesta erittäin vaihtelevia aineita vaihdellen kemikaaleista, joiden molekyylipaino on vain 500, kokonaisiin soluihin ja bakteereihin, jotka ovat tuhat miljoonaa kertaa suurempia. Koska erikokoiset aineet diffundoi-tuvat eri nopeudella, diffuusiolaitteissa on vielä se epäkohta, että on pakko sopeuttaa kerrostyypit kutakin analyyttiä varten. Lopuksi on mainittava, että keksinnön mukaisen laitteen valmistustapa ja sen varastointiominaisuudet perustuvat koettuun tekniikkaan, kun taas nämä tekijät ovat osoittautuneet vaikeasti hallittaviksi käytännössä monikerroksisissa immuuni-kemiallisissa diffuusiolaitteissa.

4 78361

Keksinnön mukainen laite voidaan lyhyesti esittää täydellisenä koepakkauksena edellä mainitun tyyppisten analyysien suorittamiseksi, jolloin kaikki analyysin suorittamiseksi tarvittavat kemiallisesti aktiiviset osat on sisällytetty laitteeseen, joten siis ei tarvitse suorittaa analyysin yhtäkään vaihetta itse laitteen ulkopuolella. Nämä kemiallisesti aktiiviset osat on järjestetty tai asennettu siten, että ne saatetaan kosketukseen näytteen ja toistensa kanssa yksinkertaisella tait-tamisjärjestelmällä. Lisäksi tämä taittamisjärjestelmä voidaan tehdä täysin itseohjaavaksi, eli taittamisjärjestelmään voidaan sisällyttää ohjeet analyysin suorittamiseksi ja on myös mahdollista sisällyttää useita numeroituja tai värillä merkittyjä läppiä taittamisjärjestelmän osina, jotka läpät antavat vaiheittain ohjeet käsittelyjärjestyksestä. Lisäksi laite sisältää myös siihen kuuluvana osana tuloksen ilmoituksen, joka esimerkiksi värinä tai fluoresenssinä antaa positiivisen, negatiivisen tai mahdollisesti kvantitatiivisen vastauksen. Toisin sanoen voidaan kaikki tarvittavat reaktiokomponentit ja reaktiovaiheet sisällyttää hyvin yksinkertaiseen, tiivistettyyn ja halpaan rakenteeseen, joka tarjoaa tähän saakka saavuttamattomia mahdollisuuksia, etenkin lääketieteen alalla.

Tarkemmin sanottuna keksinnön mukainen laite on tunnettu siitä, että se käsittää jatkuvan arkin, jossa on kaksi tai useampia lohkoja, joista ensimmäinen sisältää kohdan, jossa näytteen ja reagenssin välinen kosketus voi tapahtua, ja toinen sisältää kohdan, jossa voidaan osoittaa halutun ilmaistavan aineen läsnäolo, jotka lohkot ovat taitettavissa siten, että ne voivat asettua päällekkäin halutussa järjestyksessä haluttujen reaktioiden aikaansaamiseksi. Ensimmäisessä lohkossa oleva kohta sisältää mieluimmin alusta alkaen tarkoitetun reagenssin, joka reagenssi siis on läsnä tai sisällytetty laitteeseen niin, ettei sitä tarvitse valmistaa ennen kuin kyseinen analyysi voidaan aloittaa. Tämä on sovellettavissa myös toisessa lohkossa olevaan ilmaisu-reagenssiin, siis myös tämä reagenssi voi tarvittaessa olla läsnä laitteessa alusta alkaen.

Il 5 78361

Keksinnölle on myös tunnusomaista, että laite myös sisältää ainakin yhden järjestelmän reagenssin ylimäärän erottamiseksi, siis reagenssin, joka ei reagoinut kosketuksen aikana esimerkiksi näytteen ja reagenssin (reagenssien) välillä, joka väline on sijoitettu siten, että se voi suorittaa tehtävänsä ennen kuin ilmaistavan aineen läsnäolo osoitetaan.

Keksinnön oleelliset tunnusmerkit on esitetty patenttivaatimuksessa 1.

Keksinnön perusideana on toisin sanoen useat lohkot niihin sisäl-lytettyine reagensseineen, jotka lohkot on liitetty toisiinsa yhdeksi jatkuvaksi rakenteeksi ja siten, että ne voidaan taittaa niin, että halutut reagenssit joutuvat kosketukseen toistensa kanssa. Vaikkakin yksinkertaisin ja näin ollen halvin rakenne on sellainen, jossa mainitun arkin muodostaa yksi ainoa kappale, esimerkiksi paperiarkki tai muoviarkki, jossa on taiteviivat, joita pitkin tietyt lohkot voidaan taittaa päällekkäin, sanonta "jatkuva arkki" tarkoittaa mitä tahansa rakennetta, jossa eri lohkot on yhdistetty toisiinsa. Näin ollen keksintö on tietenkin myös sovellettavissa valmistamalla erillisiä lohkoja, jotka sitten liitetään toisiinsa saranatyyppisellä liitäntämekanismilla tai sen tapaisella. Tällaiset monimutkaisemmat laitteet ovat tarkoitetut sovellettaviksi ensisijaisesti laitteisiin, joita on tarkoitus käyttää useita kertoja, esimerkiksi käyttämällä sellaisia kemiallisia reagensseja sisältäviä osia, jotka ovat helposti vaihdettavissa, mutta monessa tapauksessa laite on tarkoitettu hylättäväksi käytön jälkeen ja näissä tapauksissa yksinkertainen taitettava materiaali on edullisin taloudellisista syistä.

Kyseiset analyysit sisältävät usein vaiheen, jossa yksi tai useampi komponentti tai reagenssi on erotettava muista komponenteista tai reageneseista ennen kuin toteamista voidaan aloittaa.

: Tämä pätee esimerkiksi nesteen erottamiseen kiinteästä faasista (kiinteäfaasisesta reagenssista tai reaktiossa syntyneestä kiinteästä faasista). Etenkin tämän tyyppisiä analyysejä varten kek-- - sinnön mukainen laite on osoittautunut erityisen mielenkiin toiseksi, sillä myös tämä erottamistoiminta on sisällytetty 6 78361 erittäin tiiviiseen ja helposti käytettävään laitteeseen.

Ainoa reagenssi tai apuaine, jota mahdollisesti tarvitsee lisätä ulkoa on pesuneste, jota käytännöllisistä syistä mieluummin käsitellään erikseen, etenkin koska tämä pesuneste usein on kemiallisesti stabiili ja monessa tapauksessa se on tavallista vettä. Pesunesteen käyttö ei myöskään edellytä tarkkuutta päinvastoin kuin usein reagenssien ollessa kyseessä.

Erotusjärjestelmänä voi esimerkiksi olla kolmas lohko, joka on varustettu erotusvälineellä tai -väliaineella, joka segmentti on sovitettu tai asennettu taitettavaksi sisään edellä mainitun ensimmäisen ja toisen lohkon väliin halutun erottamisen aikaansaamiseksi. Mitä tällaiseen erotusjärjestelmään tulee, on huomattava, että kuten myös muiden käytettyjen lohkojen osalta se on valittu täysin sinänsä tunnetun tekniikan mukaisesti. Monessa tapauksessa on mahdollista yksinkertaisesti käyttää suodatinpaperia halutun vaikutuksen aikaansaamiseksi, mikä tietenkin pitää hinnan alhaisena.

Keksinnön erään toisen edullisen sovellutusmuodon mukaan järjestelmä reagenssin erottamiseksi muodostuu yhdestä tai useammasta erotus- tai absorptioväliaineesta, joka on sovitettu ensimmäisessä lohkossa olevan kohdan viereen. Toisin sanoen tässä tapauksessa ei käytetä lisälohkoa, vaan järjestelmä sisältyy lohkoon, jossa näytteen ja reagenssin välinen kosketus tapahtuu. Se seikka, että mainitut väliaineet on sovitettu ensimmäisessä lohkossa olevan kohdan viereen merkitsee periaatteessa sitä, että ne on aktivoitavissa vain lisäämällä nestettä, siis yleensä pesunestettä sellaisin määrin, joka ylittää näytteen lisäämiseen käytetyn tilavuuden. Toisin sanoen absorptioväli-aine imee automaattisesti nestettä. Tämä voidaan saada aikaan järjestämällä absorptioainetta ainakin yhteen ensimmäisessä lohkossa olevaan kohtaan tai säiliöön, jossa kohdassa tai säiliössä on aukko, josta nestettä voi virrata sisään ensimmäisessä lohkossa olevasta kohdasta.

7 78361

Eräissä tapauksissa analyysi käsittää reaktioita useissa vaiheissa ennen kuin toteaminen voidaan suorittaa. Yksinkertaisuudestaan huolimatta keksinnön mukainen laite on käyttökelpoinen myös tällaisissa tapauksissa, nimittäin yksinkertaisesti sisällyttämällä siihen lisälohkoja, jotka sisältävät halutun reagens-sin (reagenssit) ja jotka on sovitettu taitettaviksi sisään missä tahansa sopivassa järjestyksessä reaktion aikaansaamiseksi näytteen tai missä tahansa edellisessä vaiheessa syntyneen reaktiotuotteen kanssa.

Keksinnön mukaisen laitteen eräs toinen sovellutusmuoto on laite, joka sisältää lisälohkon, joka on tarkoitettu vain koenäytteen lisäämiseksi tai sen laimentamiseksi, ennen kuin se taitetaan lisälohkon avulla kosketukseen toisessa lohkossa olevan reagenssin kanssa.

Keksinnön mukaisen laitteen vielä eräs sovellutusmuoto on laite, jossa ilmaisureagenssi on väriä muodostava reagenssi ja jossa yksi lohkoista sisältää yhden tai useamman ikkunan vertailuvärei-neen, johon tai joihin syntynyt väri on suoraan verrattavissa analyysituloksen arvioimiseksi. Laite on toisin sanoen ennalta varustettu yhdellä tai useammalla värillä, joka antaa suoran kvalitatiivisen tai kvantitatiivisen mitan todettavissa olevasta aineesta ja johon analyysissä syntynyt väri on verrattavissa. Mainittu ikkuna(t) on tietenkin sopivimmin sovitettu samaan lohkoon, jossa analyysissä syntynyt väri kehittyy niin, että verrattavat värit tai vivahdukset sijaitsevat välittömästi vierekkäin.

Viimeksimainittu sovellutusmuoto mahdollistaa suoraan visuaalisen lukemisen ja vaikkakin tällainen visuaalinen lukeminen voidaan suorittaa suurella tarkkuudella, saattaa joskus olla toivottavaa todeta väri optisesti. Keksinnön mukainen laite voidaan tietenkin myös rakentaa tätä tarkoitusta varten niin, että se voidaan suoraan sijoittaa kojeeseen syntyneen värin optista toteamista varten. Voidaan myös käyttää muita ilmaisu- β 78361 reagensseja kuin sellaisia, jotka kehittävät värin, ja tällaisissa tapauksissa menetellään tunnetun tekniikan mukaisesti.

Näin ollen ei liene syytä mennä tässä tarkempiin yksityiskohtiin. Esimerkkeinä voidaan kuitenkin mainita fluoresenssi ja luminisenssi.

Eräissä tapauksissa saattaa olla toivottavaa pysäyttää analyysissä käytetty ilmaisureaktio, esimerkiksi ennalta määrätyn ajan kuluttua, jotta voidaan suorittaa tarkka vertailu syntyneen värin ja vertailuvärien välillä, ja tällaisessa tapauksessa on mahdollista varustaa laite lisälohkolla, joka on varustettu käytetyn ilmaisureaktion inhibiittoria sisältävällä kohdalla.

Tämä lohko on tällöin järjestetty siten, että se on taitettavissa kosketukseen sen lohkon kanssa, jossa ilmaisureaktio tapahtuu, ilmaisureaktion ehkäisemiseksi tai pysäyttämiseksi.

Keksinnön mukaisen laitteen mielenkiintoista sovitusta edustaa sellainen tapaus, että analyysi käsittää juoksevan faasin, tavallisesti nestefaasin erottamisen kiinteästä faasista ja aineen ilmaisun nestefaasissa. Tällaisessa tapauksessa edulliselle laitteelle on tunnusomaista, että ensimmäisessä lohkossa oleva kohta käsittää säiliön, johon näyte on tarkoitettu sovitettavaksi reagoimaan säiliössä olevan kiinteäfaasisen reagenssin kanssa tai vaihtoehtoisesti reagoimaan muodostaen kiinteän faasin, että toisessa lohkossa oleva kohta sisältää nestefaasin halutun aineen ilmaisureagenssin, ja että kolmas lohko, joka sisältää erotusvälineen, joka sallii nestefaasin läpäisyn mutta ei kiinteän faasin läpäisyä, on sijoitettu taitettavaksi ensimmäisessä lohkossa olevan säiliön ja toisessa lohkossa olevan ilmaisukohdan väliin. Kun tällaisessa tapauksessa laite käännetään ylösalaisin nestefaasi ja täten ilmaistava aine joutuvat kosketukseen ilmaisureagenssin kanssa ilman, että kiinteä faasi vaikeuttaa ilmaisureaktiota.

Ensimmäisen lohkon säiliössä olevan reagenssin säilyttämiseksi suojattuna ulkopuoliselta vaikutukselta ennen näytteen lisäämistä 9 78361 säiliön aukko on sopivimmin peitetty jonkinlaisella suojakerroksella, esimerkiksi kalvolla, joka pitää reagenssin paikoillaan ennen näytteen lisäämistä.

Keksinnön mukaisen laitteen eräs toinen mielenkiintoinen sovellutus on sen käyttö entsyymi-immuunikokeessa, joka perustuu antigeeni-vasta-ainereaktioihin ja jolloin laitteelle on tunnusomaista ensimmäinen lohko, jossa on läpinäkyvästä muovista tehty kohta näytteen lisäämistä varten ja sopivimmin myös toinen kohta vertailunäytettä varten, jolloin muovi on käsitelty reagens-silla siihen kiinnitettyjen antigeenien tai vasta-aineiden muodossa. Tällainen antigeenien tai vasta-aineiden kiinnitys muovipintoihin on hyvin tunnettua ja on esitetty kirjallisuudessa, ks. esimerkiksi IMMUNOENZΥΜΑΤIC TECHNIQUES (S. Avrameas, P. Druet, R. Massayeff ja G. Feldman) Elsevier Science Publishers, Amsterdam/New York/Oxford, 1983. Laitteelle on lisäksi tunnusomaista toinen lohko, jossa on kromogeenisen entsyymisubstraatin muodossa olevan ilmaisureagenssin sisältävä kohta, kolmas lohko, joka on varustettu kohdalla, jossa on absorptiopatja, joka sisältää liukoista, mahdollisesti lyofilisoitua entsyymillä merkittyä vasta-ainetta tai antigeeniä, joka kolmas lohko on sovitettu taitettavaksi ensimmäisen lohkon päälle ennen kuin toinen lohko taitetaan ensimmäisen lohkon päälle. Laite sisältää lisäksi erotusvälineen, jonka muodostaa ainakin yksi ensimmäiseen lohkoon siten järjestetty syvennys, että kun ensimmäisen lohkon läpinäkyvän muovin päälle lisätään pesunestettä reagoimattoman reagenssin pesemiseksi pois ennen kuin toinen lohko taitetaan ensimmäisen lohkon päälle, mainittu pesuneste imeytyy automaattisesti absorptioaineeseen.

Kuten on edellä mainittu, voidaan keksinnön mukaiseen laitteeseen sisällyttää monta toimintaa. Näin ollen se voidaan myös varustaa yhdellä tai useammalla lisälohkolla, jotka ovat erilaisia kuin edellä selostetut, kemiallisesti aktiiviset osat. Esimerkkejä tällaisista mielenkiintoisista keksinnön mukaisista laitteista on laite, jolle on tunnusomaista, että se sisältää 10 7 8 3 61 yhden tai useamman lisälohkon ohjeineen laitteen käytöstä ja/tai potilastietoineen tai sentapaisine, jotka lohkot ovat myös taitettavissa siten, että lohkot voivat asettua päällekkäin halutussa järjestyksessä, tai laite, joka on tunnettu lohkoista, jotka muodostavat sulkumekanismin, joka voidaan taittaa pakkauksen sulkemiseksi.

Ohjeita sisältävän taitettavan järjestelmän täydentämiseksi tai parantamiseksi edelleen, jotta erittäin suuressa määrin eliminoidaan vaara sen virheellisestä käytöstä, eräs toinen mielenkiintoinen keksinnön mukainen laite voi olla tunnettu numeroiduista tai värillä merkityistä läpistä, jotka vaihe vaiheelta antavat ohjeita lohkojen avaamisjärjestyksestä. Laite voidaan myös tehdä sellaiseksi, että sille on tunnusomaista tietty lohko (lohkot), joka on revittävissä irti niin, että se voidaan poistaa laitteesta käytön jälkeen. Voi esimerkiksi olla sopivaa säilyttää vain se tai ne lohkot, joista analyysin tulos on luettavissa ja jotka mahdollisesti myös sisältävät tai joihin on merkitty esimerkiksi potilaan tunnistusta, koetyyppiä, päivämäärää tai sarjanumeroa koskevat tiedot.

Mitä lohkojen taitettavuuteen ja eri lohkojen päällekkäin asettumiseen tulee, keksinnön mukainen laite tehdään sopivimmin siten, että lohkot ovat taitettavissa olennaisesti päällekkäisiksi, i Täten kaikki lohkot ovat alusta alkaen, siis laitteen ollessa : käyttövalmis, taitetut siten, että ne sijaitsevat päällekkäin missä tahansa sopivassa järjestyksessä yhtenä ainoana pinona.

Tällä tavalla valmiin pakkauksen muoto on hyvin tiivis, esimerkiksi taitettavalla kannella varustetun tulitikkurasian muotoinen.

Keksintö kohdistuu lisäksi edellä esitetyn laitteen käyttöön kemiallisiin analyyseihin yleensä ja etenkin lääketieteen ja " maatalouden alalla. Suositeltu käyttö tässä yhteydessä on immuuni-kemiallisiin analyyseihin esimerkiksi entsyymi-immuuni-kokeisiin, fluoresenssi-immuunikokeisiin ja luminisenssi-immuunikokeisiin, sekä analyyseihin, joissa käytetään nukleiinihappojen välisiä hybridisaatioreaktioita.

U 78361

Keksinnön mukainen laite esitetään seuraavassa lähemmin viittaamalla oheisiin piirustuksiin, jotka esittävät kahta edullista laitteen sovellutusmuotoa. Piirustuksissa kuva la esittää päältä katsottuna laitetta, joka sisältää kuusi lohkoa ja jossa erotusvälineenä on erityinen lohko, kuva Ib on sivukuva esittäen neljää lohkoa kuvasta la, kuva 2 esittää kuvan la mukaista laitetta kokoontaitettuna päältä ja alta katsottuna, kuvat 3-4 esittävät analyysijärjestystä käytettäessä kuvan la mukaista laitetta entsyymi-immuunianalyysiin, kuva 5a esittää päältä katsottuna toista laitetta, jossa on kolme lohkoa ja jossa erotusväline sisältyy ensimmäiseen lohkoon, kuva 5b esittää kuvan 5a mukaista laitetta alta katsottuna, kuva 5c esittää kuvan 5a mukaista laitetta sivulta katsottuna, kuva 6a esittää kuvan 5a mukaista laitetta kokoontaitettuna päältä katsottuna ja suurennettuna mittakaavassa 2:1, kuva 6b esittää sivulta katsottuna kuvan 5a mukaista laitetta kokoontaitettuna ajateltua poikkileikkausviivaa X-X pitkin ja suurennettuna mittakaavassa 2:1, kuva 6c esittää sivulta katsottuna kuvan 5a mukaista laitetta kokoontaitettavassa tilassa ajateltua osaleikkausviivaa XI-XI pitkin ja suurennettuna mittakaavassa 2:1, kuva 7 esittää analyysijärjestystä käytettäessä kuvan 5a mukaista laitetta entsyymi-iimnuunianalyysiin.

Kuvassa 1 esitetty laite käsittää jatkuvan arkin, jossa on kuusi lohkoa 6-11, joista lohkoissa 6-9 on kemiallisesti aktiiviset kohdat lohkojen 10 ja 11 ollessa opastusapulohkoja kemiallista käyttöä varten. Lisäksi muutamat lohkoista on varustettu läpillä, jotka on numeroitu 1-5 ja joiden tarkoituksena on osoittaa laitteen avaamisjärjestys. Lopuksi kuvassa on esitetty pienempi taitettava lohko 12, joka on tarkoitettu laitteen sulkemiseksi.

i2 7 8 3 61 Lähemmin sanottuna lohko 6 käsittää reaktiosäiliön 13, joka sisältää kiinteäfaasista reagenssia 14 ja joka on peitetty kalvolla 15. Lohko 7 on varustettu alueella 16, joka on suodatinpaperi, kun taas lohko 8 sisältää kemiallisesti aktiivisen pinnan 17 entsyymisubstraatin ja suojaavan, läpinäkyvän muovikalvon 18 muodossa. Lohkossa 9 vuorostaan on kemiallisesti aktiivinen pinta 19 entsyymi-inhibiittorin muodossa.

Kuten edellä on mainittu, kuva 2 esittää laitetta kokoontaitettuna ja alta ja päältä katsottuna, jolloin viitenumerot ovat samat kuin kuvassa 1. Kuva 2 esittää kuitenkin myös kaksi väri-reagenssi-ikkunaa 20, joihin analyysissä syntynyt pinnan 17 väri on verrattavissa.

Esitetyn laitteen käyttöön nähden viitataan kuviin 3-4, joissa esitetään numeroilla I-IX merkityt vaiheet, jotka vaiheet voidaan kuvata seuraavasti.

I. Väline tai pakkaus murretaan ja avataan läpällä 1. Potilaan nimi ja muut tiedot voidaan merkitä kynällä 21 osoitettuun kohtaan.

II. Läppä 2 avataan. Näyte lisätään reaktiosäiliöön 13 koepui-kolla 22, jolla kalvo 15 lävistetään. Näyte sekoitetaan reak-tioseokseen 14 koepuikolla. Sitten näyte saa inkuboitua sopivan ajan. Läppäni 2 voidaan sitten haluttaessa päästä^vapaaksi .

III. Inkuboinnin jälkeen läppä 2 avataan uudelleen jos se on suljettu.

IV. Läppä 3 avataan, jolloin suodatinpaperipinta 16 paljastuu, ja tämän pinnan alla on entsyymisubstraattipinta 17. Lohko suodatinpapereineen 16 taitetaan sitten reagenssisäiliön 13 päälle.

V. Laite käännetään hetkeksi ylösalaisin.

Il 13 78361 VI. Läppä 4 avataan, jolloin entsyymisubstraattipinta 17 ja entsyymi-inhibiittoripinta 19 paljastuvat.

VII. Pinta 19 taitetaan läpän 5 avulla peittämään pinnan 17 valinnaisen entsyymireaktion pysäyttämiseksi. Taittamisen jälkeen nämä pinnat pysyvät toisissaan kiinni, sillä ne on esitetyssä tapauksessa varustettu sideaineella, joka on sen laatuista, että se mahdollistaa avaamisen ja uudelleen sulkemisen.

VIII. Muut lohkot voidaan nyt repiä tai leikata irti. Kahdesta jäljelle jääneestä, toisiinsa tarttuvasta lohkosta löytyvät potilaan nimi ja muut tiedot.

IX. Jäljelle jääneiden lohkojen vastakkaisella puolella olevasta ikkunasta tapahtunut värireaktio on todettavissa vertaamalla ikkunassa 20 oleviin vertailuväreihin.

Esimerkkinä esitetyssä reaktiossa värireaktio on riippuvainen siitä entsyymin määrästä, jota reaktiosäiliössä 13 oleva kiinteä faasi 14 ei ole pidättänyt. Näin ollen reaktiosäiliössä 13 olevan reaktiojärjestelmän koostumus on sellainen, että kiinteän faasin 14 pidättämä entsyymin määrä on suoraan riippuvainen näytteeseen sisältyvästä antigeenistä tai vasta-aineesta. Kuvassa 3 esitetyssä ylösalaisin kääntämisessä, vaihe V, näyte suodattuu suodatinpaperin 16 läpi, joka estää kiinteän faasin 14 pääsemästä entsyymisubstraattipintaan 17.

Kuvissa 5 ja 6 esitetyssä laitteessa on kolme lohkoa 30-32, jotka kaikki osallistuvat aktiivisesti analyysiprosessiin. Lisäksi lohkot 31 ja 32 on varustettu värillä merkityillä läpillä 33 ja 34 osoittamaan laitteen avaamisjärjestyksen.

Lohko 30 sisältää läpinäkyvän muovipinnan 35, johon vasta-aine (tai antigeeni) on kemiallisesti tai fysikaalisesti kiinnitetty. Muovipinnassa 35 on täplä 36 merkitty näytettä varten ja täplä 37 merkitty vertailunäytettä tai standardia varten. Muovipinnan i4 78361 35 ympärille on muodostettu erotusväline, jonka muodostaa pohjalevyn 51 syvennyksissä sijaitseva absorptioväliaine 48.

Lohko 31 sisältää syvennyksen 50, jonka vastakkaiselle kuperalle puolelle on kiinnitetty absorptiopatja 39, joka sisältää kromo-geenisen entsyymisubstraatin. Vastaavalla tavalla lohkossa 32 on ulkonema, jonka kuperaan yläpuoleen 40 on kiinnitetty absorptiopatja 41, joka sisältää entsyymillä merkityn vasta-aineen (tai antigeenin). Patjat 39 ja 41 on kumpikin järjestetty asettumaan muovipintaa 35 vasten taitettaessa sopivasti lohkoa 31 tai 32. Patja, jota ei käytetä, asettuu toisen patjan vastakkaiselle puolelle muodostettuun koveraan syvennykseen (49 tai 50).

Lohkojen taittamista helpottavat taiteviivat 42. Kuvassa 6 esitetyssä kokoontaitetussa alkuasennossa lohko 31 on taitettu lohkon 32 pohjasivua vasten ja lukittu napsahduslukolla 43. Lohko 32 on vuorostaan taitettu lohkoa 30 vasten ja lukittu kahdella lukitusnastalla 44, jotka irrotettavasti kiinnittyvät lohkossa 30 oleviin syvennyksiin 45. Lohkon 32 leikkaukset 46 mahdollistavat tarttumisen läppään 34 kun lohko 31 on avattu, kun taas leikkaukset 47 myös mahdollistavat lohkon 31 taittamisen lohkon 32 yläsivua vasten ja silti on mahdollista taittaa lohko 32 lohkoa 30 vasten ja lukita se lukitusnastoilla 44.

Kuvissa 5-6 esitetyn laitteen käyttöön nähden viitataan kuvaan 7, jossa on esitetty numeroilla XX-XXVI merkityt vaiheet, jotka voidaan kuvata seuraavasti: XX. Pakkaus avataan läpällä 33. Haluttaessa voidaan potilaan nimi ja muut tiedot merkitä pakkauksen takasivuun.

XXI. Näyte lisätään pinnan 35 täplään 36. Näytteen ollessa neste tämä voidaan suorittaa esimerkiksi tiputtamalla näytepisa-ra pinnalle. Vastaavalla tavalla lisätään vertailu tai standardi täplään 37. Jos tutkittava aine sisältyy näytteeseen, vertailuun 1S 78361 tai standardiin, se reagoi muovipintaan 35 kiinnitetyn vasta-aineen (tai antigeenin) kanssa ja sitoutuu siihen.

XXII. Pakkaus suljetaan uudelleen. Tällöin käynnistyy toinen analyysivaihe. Jos tutkittavaa ainetta on läsnä, se reagoi nyt absorptiopatjaan 41 sisältyvän entsyymillä merkityn vasta-aineen (tai antigeenin) kanssa ja sitoutuu siihen. Tällöin tämä entsyymillä merkitty vasta-aine sitoutuu myös välillisesti muovipintaan 35 vaiheen XXI edellisen ja vielä jatkuvan reaktion vaikutuksesta.

XXIII. Sopivan reaktioajan jälkeen pakkaus avataan uudelleen läpällä 33. Nyt tiputetaan pesunestettä pinnalle 35, joka tällöin puhdistuu liukoisesta, entsyymillä merkitystä vasta-aineesta, joka ei ole reagoinut tutkittavan aineen kanssa.

XXIV. Läpällä 34 avataan nyt lohko 31 ja taitetaan lohkon 32 päälle.

XXV. Pakkaus suljetaan uudelleen. Tällöin käynnistyy toteamis-reaktio. Ensimmäisessä vaiheessa reagoinut entsyymillä merkitty vasta-aine muuttaa absorptiopatjassa 39 olevan kromogeenisen entsyymisubstraatin värilliseksi aineeksi.

XXVI. Sopivan reaktioajan kuluttua tulos luetaan pakkauksen takasivulta läpinäkyvän muovipinnan 35 läpi. Koetäplässä 36 syntynyttä väriä verrataan täplässä 37 tapahtuneen vertailureak-tion tulokseen tai vertailuväreihin.

Esimerkkinä esitetystä analyysijärjestyksestä voidaan vielä lisätä, että värireaktio on suoraan riippuvainen pinnassa 35 pesuvaiheen XXIII jälkeen läsnäolevan entsyymin määrästä. Tämä määrä on vuorostaan suoraan riippuvainen näytteeseen sisältyvän tutkittavan aineen läsnäolosta, joka aine kykenee sitomaan entsyymillä merkityn vasta-aineen (tai antigeenin) ja samalla sitoutuu pintaan 35 kiinnitettyyn vasta-aineeseen (tai antigeeniin).

78361 16

Esimerkit

Seuraavat sovellutusesimerkit on tarkoitettu havainnollistamaan keksinnön mukaista laitetta yksityiskohtaisemmin. Nämä esimerkit kuvaavat laitteen käyttöä pienen sekä hyvin suuren proteiinin ja viruksen määrittämiseksi.

Kaikkiin tarkoituksiin käytettiin kuvien 5-6 mukaista laitetta mittakaavassa 1:1. Lohkot 30-32 oli tehty polyvinyylikloridista (PVC). Läpinäkyvä muovipinta 35 muodostui suorakaiteen muotoisesta levystä, joka oli tehty immuunilaatupolystyreenistä (Nunc A/S, Roskilde, Tanska}, jonka pintaan oli merkitty ympyränmuotoiset täplät 36 ja 38. Vasta-ainetta oli kiinnitetty näihin täpliin, kuten tullaan esittämään kustakin käyttötarkoituksesta.

Erotusvälineen absorptioaine 38 oli valmistettu selluloosasie-nestä (Viettejä, Celloplast AB, Norrköping, Ruotsi) . Absorptio-patjoihin 39 ja 41 käytettiin Whatman^ 3MM suodatinpaperia (Whatman Ltd., Maidstone, Kent, U.K.). Nämä suodatinpaperipat-jat oli kyllästetty reagensseilla, kuten tullaan esittämään kustakin käyttötarkoituksesta.

Tyroglobuliinin määrittämiseksi laite oli varustettu lisäloh-kolla, jonka ainoana tarkoituksena oli muodostaa suojus pinnalle 35 näytteen haihtumisen ehkäisemiseksi.

Ihmisen korioni-gonadotropiinin määrittäminen

Ihmisen korioni-gonadotropiini (hCG) on hyvin pieni proteiini, jonka molekyylipaino on noin 46 000. Koetta voidaan käyttää raskauden toteamiseksi.

Laitteen valmistelu

Vasta-ainetta kiinnitettiin muovilevyyn 35 lisäämällä molempiin täpliin 36 ja 37 75 ^ul hCG:n vasta-aineen monokloonisen anti-alfan aliyksikköä (klooni 5503, Oy Medix Ab, Kauniainen, Suomi) väkevyyden ollessa 10 ^,ug/ml laimenninta. Laimentimena (lyhennys PBS) oli 0,05 mooli/1 natriumfosfaattia,0,15 mooli/1 NaCl, pH 7,2.

Il 78361 17

Levyt inkuboitiin kosteuskammiossa 18 h 4°C:ssa. Ne pestiin sitten noin 10 ml:11a pesuliuosta (lyhennys PBS-Tween), jona oli 0,05 % Tweer(^-20 (Merck, Hohenbrunn, Saksa) PBSrssa. Tämän jälkeen levyt upotettiin astiaan, jossa oli liuos (lyhennys PBS-BSA), jonka muodosti 1 % p/t naudan seerumialbumiini (Sigma Chemical Co., St. Louis, Missouri, USA) PBS:ssa, ja inkuboitiin 90 min huoneen lämmössä. Sen jälkeen levyt pestiin uudelleen noin 10 ml:11a PBS-Tween ja sen jälkeen 10 ml :11a tislattua vettä ja pantiin kuivumaan.

Absorptiopatja 41 kyllästettiin hCG-vasta-aineen peroksidaasi-

rpM

konjugoidun monokloonisen anti-beeta-aliyksikön (Sensi-Chrome Conjugate Reagent, Hoffman-La Roche Inc., Nutley, New Jersey, USA) liuoksella, joka oli laimentamaton. Absorptiopatja 39 kyllästettiin kromogeenisella substraattiliuoksella, jossa oli 0,42 mmooli/1 3,31,5,5'-tetrametyylibentsidiiniä (Miles Laboratories, Inc., Elkhart, Indiana, USA), 1,4 mmooli/1 ureaperoksidia 0,1 mooli/1 natriumasetaatti/sitruunahappopuskurissa, pH 6,0, joka oli valmistettu E.S. Bos et al:in (1981), J. Immunoassay 2, 187, kuvaamalla tavalla.

Kokeen suoritus

Koe suoritettiin olennaisesti kuvassa 7 esitetyllä tavalla vaiheina XX-XXVI. Voidaan kuitenkin lisätä seuraavat yksityiskohdat näytteistä, tilavuuksista, ajoista ja muista olosuhteista.

Näytteinä käytettiin Lyphoche)^ I ja II ihmiskontrollivirtsaa (Bio-Rad Laboratories, Inc., Anaheim, California,USA), joiden ilmoitetut hCG-väkevyydet olivat 3900 ja 550 kansainvälistä yksikköä litraa kohti. Näitä näytteitä laimennettiin vielä tunnetulla negatiivisella virtsanäytteellä 1:2, 1:4, 1:8 ja 1:16. Tunnettua negatiivista virtsanäytettä käytettiin vertailuna.

Laite avattiin ja pisara, joka oli noin 50 ^ul, kutakin näytettä lisättiin täplään 36 ja yhtä suuri tilavuus vertailunäytettä 18 78361 täplään 37. Laite suljettiin sitten taittamalla lohko 32 lohkon 30 päälle absorptiopatjassa 41 olevan konjugoidun vasta-aineen siirtämiseksi muovipintaan 35. Laite jätettiin suljetuksi ja inkuboitiin 15 min huoneen lämmössä.

Laite avattiin sitten uudelleen pinnan 35 paljastamiseksi, joka pestiin noin 1 ml:11a PBS-Tween:iä. Lohko 31 taitettiin sitten lohkon 30 päälle absorptiopatjän 39 kromogeenisen substraatin siirtämiseksi muovipinnalle 35. Laite jätettiin taas suljetuksi ja inkuboitiin 5 min huoneen lämmössä. Väri-reaktio luettiin sitten välittömästi laitteen takasivulta läpinäkyvien täplien 36 ja 37 läpi. Heikko sininen väri merkittiin " + selvä sininen väri "++" ja voimakas sininen väri "+++".

Kokeen tulokset verrattiin kaupan olevaan raskaustestiin TM

Sensi-Chrome (Hoffman-La Roche Inc., Nutley, New Jersey,USA), joka suoritettiin samanaikaisesti koeputkissa.

Tulokset

TM

Näyte Keksinnön mukainen Sensi-Chrome _laite_ -menetelmä_

Tunnettu negatiivinen virtsanäyte

Lyphoche]^ II 1:16 +

Lyphochel^ II 1:8 + +

Lyphochek® II 1:4 ++ ++

Lyphoche)^ II 1:2 +++ +++

Lyphoche)^ II +++ +++

Lyphochel^ I +++ ++ +

Kuten näkyy, menetelmien välillä oli hyvä yhtäläisyys.

Ihmistyroglobuliinin määrittely

Ihmistyroglobuliini on suhteellinen suuri proteiini, jonka mole-kyylipaino on noin 660 000. Koe on hyödyllinen kilpirauhas-syövän toteamiseksi.

78361 19

Laitteen valmistelu

Vasta-aine kiinnitettiin muovilevyyn 35 lisäämällä molempiin täpliin 36 ja 37 75 ^,ul monokloonista anti-ihmistyroglobuliinin vasta-ainetta (klooni TF-33, Novo Industri A/S, Bagsvaerd, Tanska) , jonka väkevyys oli 10 ^ug/ml laimenninta. Laimentimena (lyhennys PBS) oli 0/05 mooli/1 natriumfosfaatti, 0,15 mooli/1 NaCl, pH 7,2. Levyt inkuboitiin kosteuskammiossa 18 h 4°C:ssa.

Ne pestiin sitten noin 25 ml:11a pesuliuosta (lyhennys PBS-Tween) , jonka muodosti 0,05 % Tweeit§^-20 (Merck, Hohenbrunn,

Saksa) PBSsssa. Tämän jälkeen levyt upotettiin astiaan, joka sisälsi liuoksen (lynennys PBS-BSA), jonka muodosti 1 % p/t naudan seerumialbumiini (Sigma Chemical Co., St. Louis, Missouri, USA) PBS-Tween:ssa, ja inkuboitiin 45 min huoneen lämmössä.

Sitten levyt pestiin taas noin 25 ml:11a PBS-Tween:iä ja sen jälkeen 25 ml:11a tislattua vettä ja kuivattiin lopuksi paine-ilmavirrassa .

Absorptiopatja 41 kyllästettiin peroksidaasilla konjugoidun kanin anti-ihmistyroglobuliinin (Dakopatts A/S, Glostrup, Tanska) liuoksella, joka oli laimennettu 1:500 PBS-BSA:11a. Absorptio-patja 39 kyllästettiin kromogeenisella substraattiliuoksella, jossa oli 0,05 % p/t orto-fenyleenidiamiinia (Sigma Chemical Co., St. Louis, Missouri, USA), 0,01 % t/t 1^02 0,06 mooli/1 natrium-fosfaatissa, 0,03 % mooli/1 natriumsitraattia, pH 5,0.

Kokeen suoritus

Koe suoritettiin olennaisesti kuten kuvassa 7 on esitetty vaiheina XX-XXVI. Voidaan kuitenkin lisätä seuraavat yksityiskohdat näytteistä, tilavuuksista, ajoista ja muista olosuhteista.

Näytteinä tähän kokeeseen käytettiin liuoksia, joissa oli 500 ng/ml, 100 ng/ml ja 10 ng/ml puhdistettua ihmistyroglobuliini-standardia (Novo Industri A/S, Bagsvaerd, Tanska) PBS-BSA:ssa. Vertailuna käytettiin PBS-BSA ilman lisättyä tyroglobuliinia.

Laite avattiin ja 25 ^,ul kutakin näytettä lisättiin täplään 36 ja sama tilavuus vertailunäytettä täplään 37. Lisäkansi haihtu- 78361 20 misen ehkäisemiseksi suljettiin ja laite inkuboitiin 30 min huoneen lämmössä. Sitten pinta 35 pestiin noin 1 ml:11a PBS-Tween:ia.

Pesun jälkeen laite suljettiin taittamalla lohko 32 lohkon 30 päälle absorptiopatjän 41 konjugoidun vasta-aineen siirtämiseksi muovipinnalle 35. Laite jätettiin suljetuksi ja inkuboitiin 30 min huoneen lämmössä.

Sitten laite avattiin pinnan 35 paljastamiseksi, joka pestiin noin 1 ml:11a PBS-Tween:ia. Lohko 31 taitettiin sitten lohkon 30 päälle absorptiopatjän 39 kromogeenisen substraatin siirtämiseksi muovipinnalle 35. Laite jätettiin taas suljetuksi ja inkuboitiin 10 min huoneen lämmössä. Värireaktio luettiin sitten välittömästi laitteen takasivulta läpinäkyvän muovin läpi täplien 36 ja 37 kohdalta. Heikko keltainen väri merkittiin selvä keltainen väri "++" ja voimakas keltainen väri "+++".

Tulokset

Ihmistyroglobuliinistandardit (PBS-BSA:ssa) Väkevyys Reaktio 500 ng/1 760 pmol/1 +++ 100 ng/1 150 pmol/1 ++ 10 ng/1 15 pmol/1 +

Vertailu

Kuten näkyy, keksinnön mukainen laite kykeni antamaan puoli-kvantitatiiviset tiedot analysoitavan aineen hyvin pienistä väkevyyksistä.

Kissaleukemiaviruksen määrittely

Kissaleukemiaviruksen toteaminen on tärkeätä eläinlääkintä-praktiikassa kissojen leukemian diagnostoimiseksi.

78361 21

Laitteen valmistelu

Vasta-aine kiinnitettiin muovilevyyn 35 lisäämällä molempiin täpliin 36 ja 37 50 ^ul monokloonista anti-kissaleukemiaviruk- sen vasta-ainetta (klooni 1, Cambridge BioScience Corporation, Hopkinton, Massachusetts, USA) , jonka väkevyys oli 10 ^,ug/ml laimenninta. Laimentimena (lyhennys PBS) oli 0,05 mooli/1 natriumfosfaattia, 0,15 mooli/1 NaCl, pH 7,2. Levyt inkuboitiin kosteuskammiossa 3 h 37°C:ssa. Ne pestiin sitten noin 10 ml:11a pesunestettä (lyhennys PBS-Tween), jonka muodosti 0,05 %

Tween®-20 (Sigma Chemical Co., St. Louis, Missouri, USA) PBSsssa. Tämän jälkeen levyt upotettiin astiaan, jossa oli liuos (lyhennys PBS-BSA), jonka muodosti 1 % p/t naudan seerumialbumiini (Sigma Chemical Co., St. Louis, Missouri, USA) PBS:ssa, ja inkuboitiin 60 min 37°C:ssa. Tämän jälkeen levyt pestiin taas noin 10 ml:11a PBS-Tween:ia ja sen jälkeen 10 ml:11a tislattua vettä ja pantiin kuivumaan.

Absorptiopatja 41 kyllästettiin peroksidaasilla konjugoidun monokloonisen anti-kissaleukemiaviruksen vasta-aineen (klooni 2, Cambridge BioScience Corporation, Hopkinton, Massachusetts, USA) liuoksella, joka oli laimennettu 1:5. Absorptiopatja 39 kyllästettiin kromogeenisella substraattiliuoksella, jossa oli 0,1 % p/t 2,2'-atsino-di-3-etyylibentstiatsoliinisulfonaattia (Boehringer Mannheim GmbH, Mannheim, Saksa), 0,15 % H202 0,05 mooli/1 natriumfosfaattipuskurissa, pH 6,0.

Kokeen suoritus

Koe suoritettiin olennaisesti kuvassa 7 esitetyllä tavalla vaiheina XX-XXVI. Voidaan kuitenkin lisätä seuraavat yksityiskohdat näytteistä, tilavuuksista, ajoista ja muista olosuhteista.

Näytteinä tässä kokeessa käytettiin 10 oikeata seeruminäytettä epäillyistä kissoista. Vertailunäytteenä käytettiin PBS-BSA.

Laite avattiin ja 1 noin 50 ^ul:n pisara kutakin näytettä lisättiin täplään 36 ja sama tilavuus vertailunäytettä täplään 37.

22 7 8361

Sitten laite suljettiin taittamalla lohko 32 lohkon 30 päälle absorptiopatjän 41 konjugoidun vasta-aineen siirtämiseksi muovi-pinnalle 35. Laite jätettiin suljetuksi ja inkuboitiin 15 min huoneen lämmössä.

Laite avattiin sitten uudelleen pinnan 35 paljastamiseksi, joka pestiin noin 5 ml :11a PBS-Tween:.ia. Lohko 31 taitettiin sitten lohkon 30 päälle absorptiopatjän 39 kromogeenisen substraatin siirtämiseksi pinnalle 35. Laite jätettiin taas suljetuksi ja inkuboitiin 2 min huoneen lämmössä. Värireaktio luettiin sitten välittömästi laitteen takasivulta läpinäkyvän muovin läpi täplistä 36 ja 37. Heikko vihreä väri merkittiin " + ", selvä vihreä väri "++" ja voimakas vihreä väri "+++". Kokeen tulokset verrattiin kaupan olevaan kokeeseen kissaleukemia-viruksen toteamiseksi (Pitman-Moore, Inc., Philadelphia, Pennsylvania, USA), joka suoritettiin samanaikaisesti mikro-titrauskupeissa.

Tulokset Näytteen numero Keksinnön mukainen Pitman-Moore- _ _laite_ menetelmä 1 - negatiivinen 2 - negatiivinen 3 - negatiivinen 4 + negatiivinen 5 - negatiivinen 6 - positiivinen 7 + positiivinen 8 +++ positiivinen 9 +++ positiivinen 10 +++ positiivinen

Menetelmät olivat yhtäläisiä 8:11a 10:sta tutkitusta näytteestä. Näytteiden 4 ja 6 eroavat tulokset saattoivat johtua joko menet-telytekijöistä tai näytteiden kliinisestä tilasta.

Il

Claims (14)

1. 23 78361
2. 1. Laite kemiallisia analyysejä varten, etenkin lääketieteen alalla, esimerkiksi immuuni-kemiallisia analyysejä varten, jolloin tutkittava näyte saatetaan kosketukseen ainakin yhden reagenssin kanssa, joka reagoi näytteen kanssa muodostaen ilmaistavan aineen, joka vuorostaan ilmaistaan sen kvalitatiivista tai kvantitatiivista määrittelyä varten, tunnettu siitä, että laite käsittää jatkuvan arkin, jossa on ainakin kaksi lohkoa (6, 8 tai 30, 31), joista ensimmäisessä (6 tai 30) on kohta (13 tai 35), jossa ainakin yksi mainituista reagens-seista on läsnä alusta alkaen ja jossa mainitun näytteen ja reagenssin (reagenssien) välinen kosketus voi tapahtua, ja toinen (8 tai 31) sisältää kohdan (17 tai 39), jossa haluttu ilmaisu-reagenssi (reagenssit) on läsnä alusta alkaen ja jossa ilmaistavan aineen läsnäolo on osoitettavissa, jolloin ensimmäinen ja toinen lohko (6 ja 8 tai 30 ja 31) on taitettavissa siten, että reagenssin (reagenssit) sisältävä kohta on saatettavissa ilmaisu-kohdan (17 tai 39) päälle, että laite käsittää ainakin yhden välineen (7 tai 48) reagenssin (reagenssien) erottamiseksi, joka ei ole reagoinut näytteen ja reagenssin (reagenssien) välisen kosketuksen aikana, joka väline on sijoitettu siten, että se on aktivoitavissa ennen kuin ilmaistavan aineen läsnäolo osoitetaan, ja että lohkot ovat taitettavissa siten, että halutut lohkot ovat saatettavissa päällekkäin tarvittavien analyysivaiheiden suorittamiseksi.
3. 2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen laite,tunnettu siitä, että reagenssin (reagenssien) erotusvälineenä on kolmas lohko (7), joka sisältää erotuselementin tai -väliaineen (16), jolloin kolmas lohko (7) on sijoitettu taitettavaksi ensimmäisen (6) ja toisen (8) lohkon väliin. ··· 3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen laite, tunnettu siitä, että reagenssin (reagenssien) erotusvälineenä on yksi tai useampi erotusväliaine (48), joka on sijoitettu ensimmäisen lohkon (30) kohdan (35) viereen. 24 78361
4. 4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen laite, tunnettu siitä, että erotus- tai absorptioväliaine on sijoitettu ensimmäisessä lohkossa olevaan yhteen tai useampaan syvennykseen tai säiliöön (51) siten, että lisättäessä pesunestettä kohtaan (3*5) reagoimattoman reagenssin pois pesemiseksi, pesuneste automaattisesti erottuu tai absorboituu syvennyksiin.
5. 5. Jonkin edellisen patenttivaatimuksen mukainen laite, tunnettu siitä, että se käsittää lisälohkon (9), jossa on kohta (19), joka sisältää käytetyn ilmaisureaktion inhibiittoria, joka lohko (9) on sovitettu taitettavaksi kosketukseen toisen lohkon (8) kanssa ilmaisureaktion ehkäisemiseksi.
6. 6. Jonkin edellisen patenttivaatimuksen mukainen laite, tunnettu siitä, että se käsittää yhden tai useamman lisä-lohkon (32), joka sisältää reagenssia (reagensseja) (41) , joka lohko tai jotka lohkot on sovitettu taitettaviksi missä tahansa tarvittavassa järjestyksessä reagoimaan näytteen tai jossakin edellisessä vaiheessa syntyneen reaktiotuotteen kanssa.
7. 7. Jonkin edellisen patenttivaatimuksen mukainen laite, tunnettu siitä, että se käsittää lohkon näytteen lisäämistä tai laimentamista varten, joka lohko on sovitettu taitettavaksi näytteen saattamiseksi kosketukseen minkä tahansa halutun reagenssin tai toisen lohkon kanssa.
8. 8. Jonkin edellisen patenttivaatimuksen mukainen laite, tunnettu siitä, että havaintoreagenssinä on väriä kehittävä reagenssi ja että yhdessä lohkossa on yksi tai useampi ikkuna (20) vertailuväreineen, joihin syntynyt väri on suoraan verrattavissa analyysin arviointia varten.
9. 9. Jonkin edellisen patenttivaatimuksen mukainen laite, tunnettu siitä, että lohkot ovat taitettavissa siten, että ne sijaitsevat olennaisesti päällekkäin laitteen ollessa käyttövalmiin pakkauksen muodossa. 25 78361
10. 10. Jonkin edellisen patenttivaatimuksen mukainen laite, tunnettu siitä, että jatkuva arkki taitettavine lohkoi-neen on tehty yhdestä ainoasta kartonkia, muovia tai mitä tahansa muuta helposti taitettavaa ainetta olevasta kappaleesta.
11. 11. Jonkin edellisen patenttivaatimuksen mukainen laite, joka on tarkoitettu käytettäväksi analyyseihin käsittäen nestefaasin erottamisen kiinteästä faasista ja aineen ilmaisemisen nestefaasissa, tunnettu siitä, että ensimmäisessä lohkossa (6) oleva kohta käsittää säiliön (13), johon näyte on tarkoitettu lisättäväksi reagoimaan säiliössä olevan kiinteäfaasisen rea-genssin (14) kanssa tai vaihtoehtoisesti reagoimaan muodostaen kiinteän faasin, jolloin säiliön aukko sopivimmin on peitetty suojakerroksella (15), esimerkiksi kalvolla, joka pitää rea-genssin paikoillaan ennen näytteen lisäämistä, että toisessa lohkossa (8) oleva kohta (16) sisältää nestefaasin halutun aineen ilmaisureagenssin, ja että kolmas lohko (7), joka sisältää erotusvälineen tai -väliaineen (16), esimerkiksi suodatinpaperin, joka mahdollistaa nestefaasin läpäisyn mutta ei kiinteän faasin läpäisyä, on sovitettu taitettavaksi ensimmäisen lohkon (6) säiliön (13) ja toisen lohkon (8) kohdan (16) väliin niin, että laitetta käännettäessä ylösalaisin nestefaasi on saatettavissa kosketukseen ilmaisureagenssin kanssa.
12. 12. Jonkin edellisen patenttivaatimuksen mukainen laite, joka on tarkoitettu antigeeni-vasta-ainereaktioihin perustuvaan ent-syymi-immuunikokeeseen, tunnettu siitä, että ensimmäisessä lohkossa oleva kohta sisältää kiinteän faasin, johon entsyymiä pidättyy suhteessa näytteeseen sisältyvään antigeeniin tai vasta-aineeseen, ja että toinen lohko sisältää entsyymi-substraatin, joka reagoi entsyymin kanssa, joka ei ole pidättynyt ensimmäisen lohkon mainitun kohdan kiinteään faasiin tai on jäljellä ensimmäisen lohkon mainitun kohdan kiinteässä faasissa pesun jälkeen.
13. 13. Jonkin patenttivaatimuksista 1, 3-4, 6-10 ja 12 mukainen laite, joka on tarkoitettu käytettäväksi antigeeni-vasta-aine-reaktioihin perustuvaan entsyymi-immuunikokeeseen, tunnettu 78361 26 ensimmäisestä lohkosta, jossa on läpinäkyvästä muovista tehty kohta näytteen lisäämiseksi ja sopivimmin myös kohta vertailu-näytettä varten, joka muovi on varustettu reagenssilla siihen kiinnitetyn vasta-aineen ja antigeenin muodossa, toisesta lohkosta, jossa on kohta ilmaisureagensseineen kromogeenisen entsyymi-substraatin muodossa, kolmannesta lohkosta, jossa on kohta absorp-tiopatjan muodossa, joka sisältää liukoista, mahdollisesti lyo-filisoitua, entsyymillä merkittyä vasta-ainetta tai antigeeniä, joka kolmas lohko on sijoitettu taitettavaksi ensimmäisen lohkon päälle ennen kuin toinen lohko taitetaan ensimmäisen lohkon päälle, ja erotusvälineestä absorptioaineen muodossa, joka on sijoitettu ainakin yhteen ensimmäisessä lohkossa olevaan syvennykseen siten, että lisättäessä pesunestettä ensimmäisessä lohkossa olevalle läpinäkyvälle muoville reagoimattoman reagenssin pois pesemiseksi ennen kuin toinen lohko taitetaan ensimmäisen lohkon päälle, pesuliuos absorboituu automaattisesti absorptioaineeseen.
14. 14. Jonkin patenttivaatimuksista 1-13 mukaisen laitteen käyttö kemiallisiin analyyseihin, etenkin lääketieteen ja maatalouden alalla, esimerkiksi immuunikemiallisiin analyyseihin, kuten entsyymi-immuunikokeeseen, fluoresenssi-immuunikokeeseen ja lumi-nisenssi-immuunikokeeseen, sekä nukleiinihappojen välisiin hybri-disaatioreaktioihin perustuviin analyyseihin. 27 7 8 3 61