NO853050L - Anordning for kjemiske analyser og anvendelse derav - Google Patents

Description

Foreliggende oppfinnelse gjelder området kjemiske analyser og mere spesielt en anordning for utførelse av slike såvel som anvendelse av anordningen. Analyser som foreliggende oppfinnelse kan anvendes på, er slike hvor prøven som skal testes, bringes i kontakt med reagenser som reagerer med prøven for å danne en påvisbar substans som i sin tur påvises ved hjelp av en kvalitativ eller kvantitativ bestemmelse. Oppfinnelsen er spesielt interessant innenfor det medisinske område, f.eks. lmmuno-kjemiske analyser, men er ikke begrenset til dette da grunnidéen ved oppfinnelsen er anvendbar for forskjellige analyser av det slag som det er referert til ovenfor.

I immuno-kjemiske analyser som f.eks. enzym-immuno-forsøk (EIA) eller fluorescens-immunoforsøk (FIA), må fritt merket antistoff eller antigen i de fleste tilfeller skilles fra det merkede antigen-antistoffkompleks. Dette gjennom-føres vanligvis ved hjelp av en fast fase som kan være tilstede, f.eks. i form av en partikkel eller en overflate, idet enten den fritt merkede bestanddel eller komplekset tilbake-holdes av den faste fase på basis av molekylstørrelse, adsorp-sjon eller forskjellige typer av kjemisk (inkludert immuno-kjemisk) binding. Typisk for slike analyser er i dag at de krever flere behandlingstrinn i væskefase for utførelse av reaksjonssekvensen. Av denne grunn er de fleste immuno-kjemiske analyser, med den teknikk som anvendes i dag, begrenset til laboratorier som har trenet personale.

-Ved hjelp av anordningen Ifølge oppfinnelsen er det

vist å være mulig å lette og forenkle behandlings- og arbeids-trinnene ved analyser av den ovenfor nevnte type betydelig, slik at de også kan utføres av ikke trenet personale, f.eks. leger og sykepleiere i kontorer og sykehus. Anordningen er til og med enkel nok til i mange tilfeller å håndteres av pasienten selv.- En viktig faktor i den sist nevnte forbindelse er videre at på grunn av dens meget enkle konstruksjon kan også anordningen fremstilles meget billig, hvilket betyr at den kan oppnå en utbredt kommersiell anvendelse, i det minste for noen kvalitative og semi-kvantitative tester hvor

visse sykdomstilstander kan bekreftes av pasienten selv før det er et behov for en konsultasjon hos en lege.

Slik det ble nevnt ovenfor, er anordningen imidlertid på ingen måte begrenset til bruk i forbindelse med immuno-kjemiske analyser, men for enkelhets skyld og for en bedre forståelse skal den allikevel beskrives mere i detalj neden-for i forbindelse med disse. I denne sammenheng kan det også tilføyes at de beskrevne analyser og de reagenser som anvendes i forbindelse med disse, er vel kjente og er beskrevet i en rekke referanser. Således skulle det ikke være nødvendig å gjenta detaljer om dette her da disse kan finnes-i egnet litteratur på fagområdet. Når det gjelder eksempler på teknikker som anvendes innenfor fagområdet immuno-kjemiske analyser, refereres det her til de teknikker som er beskrevet i svensk patentsøknad nr. 8205751-4. Heller ikke nevnte litteraturhenvisning er imidlertid på noen måte ment å være uttømmende innenfor dette fagområde.

For å forklare oppfinnelsen enda mere såvel som det tekniske område som deri tilhører, skal det også tilføyes at den ikke har noen forbindelse med de mange enkle diffusjonsanordninger som er beskrevet i litteraturen, dvs. hvor en prøve enten passivt eller ved hjelp av kapillærkrefter til-lates å diffundere gjennom ett eller flere kjemisk aktive skikt. Eksempler på referanser som beskriver anordninger av dette slag, er US A 3 511 608, GB 2 031 583, EP 64 392,

US A 4 066 403 og EP 51 183. Når det gjelder disse, skal det påpekes at de overlappende segmenter som er beskrevet i US A 3 511 608 eller de foldbare ark som er beskrevet i

GB 2 031 583 og EP 64 392, gjelder mulige fremstillings-metoder for diffusjonsanordninger, men har ingen funksjonelle formål for utførelse av analysen, i løpet av hvilken tid de nevnte segmenter eller ark er permanent forbundet med hverandre . i ett enkelt stykke. Selv om det f.eks., i GB 2 031 538 og EP 64 392 er fliker som kan foldes av brukeren, anvendes disse flikene bare som beskyttelseslokk eller -dekke og tar ikke del i den kjemiske eller analytiske fremgangsmåte.

Anordningen ifølge oppfinnelsen skiller seg vesentlig fra de ovenfor nevnte anordninger ved det faktum at den ikke er basert på noe diffusjonsprinsipp. I stedet utføres analysen trinnvis som i laboratoriet. Nyheten ved ideen er at væskeprøver og reagenser ikke behøver å overføres mellom reagensglass eller reagensbegere ved gjentatte pipetterings-operasjoner. I stedet foreligger prøver, reagenser og til og med en vaskefunksjon på anordningens overflate. Overføring av prøver eller reagenser mellom overflatene gjennomføres ved hjelp av en enkel bretting. Dette byr på betydelige fordeler sammenlignet med flersklkts-diffusjonselementer av den type som er beskrevet f.eks. i US A 4 06 6 403 og EP 51 183. Brukeren har full kontroll med tiden for de forskjellige reaksjonstrinn, mens tiden for diffusjonsanordninger av flerskiktstypen bare kan varieres av fabrikanten ved valg av skiktmateriale og selv da bare i begrenset utstrekning. Dessuten kan anordningen ifølge oppfinnelsen anvendes for analyse av de fleste substanser uten behov for noen større modifika-sjoner av dens grunnstruktur eller konstruksjon. I immuno-kjemiske analyser forekommer det substanser med ekstremt varierende størrelse, fra medisiner med en molekylvekt på ikke mer enn 500 til hele celler og bakterier som er tusen millioner ganger større. Da substanser av forskjellig størr-else diffunderer med forskjellige hastigheter, har diffu-Sjonsanordninger derfor en ytterligere ulempe i at det er nødvendig å justere skikttypene for hver type analytt. Endelig skal det tilføyes at fremgangsmåten for fremstilling og lagringsegenskapene til anordningen ifølge oppfinnelsen er basert på etablert teknologi, mens disse faktorer har vist seg å være vanskelige å mestre i praksis for immuno-kjemiske diffusjonsanordninger av flerskiktstypen.

Anordningen ifølge oppfinnelsen kan i korthet beskrives som en fullstendig testutrustning for utførelse av en analyse av den ovenfor nevnte type hvor alle kjemisk aktive deler, som er nødvendige for utførelse av analysen, er innebygget-1 anordningen, dvs. det er ikke nødvendig å utføre noe trinn av analysen utenfor anordningen i og for seg. Disse kjemisk aktive deler er arrangert eller montert på en slik måte at de bringes i kontakt med prøven og hverandre ved hjelp av et enkelt brettesystem. Videre kan nevnte brette system gjøres fullstendig selv-instruerende, dvs. instruk-sjoner for utførelse av analysen kan være inkludert i brettesystemet, og det er også mulig å inkludere en rekke nummererte eller farvekodede tunger som en del av brettesystemet, hvilke tunger gir trinnvise anvisninger på operasjonsrekke-følgen. I tillegg dertil omfatter anordningen også som en integrert del en resultatanvlser som eksempelvis i form av en farve eller fluorescens gir en positiv, negativ eller eventuelt kvantitativ respons. Med andre ord kan alle nødven-dige reagenser og reaksjonstrinn innbygges i en meget enkel, kompakt og billig konstruksjon som byr på hittil ugjennom-førte muligheter, spesielt innenfor det medisinske område.

Mere spesielt er anordningen ifølge oppfinnelsenkarakterisert vedat den omfatter et kontinuerlig ark med to eller flere segmenter, av hvilke det første inneholder en stilling der kontakt mellom prøve og reagens kan finne sted, og det andre inneholder en stilling der nærvær av en ønsket påvisbar substans kan vises, idet segmentene kan brettes på en slik måte at de kan overlappe hverandre etter ønske for å utføre de krevede reaksjoner. Stillingen på det første segment inneholder fortrinnsvis først det påtenkte reagens,

dvs. dette reagens er tilstede eller inkludert i anordningen slik at den ikke behøver prepareres før den aktuelle analyse'; kan startes. Dette kan også gjelde påvisningsreagenset på det andre segment, dvs, også dette reagens kan, om ønsket, være tilstede 1 anordningen fra starten. -Karakteristisk for oppfinnelsen er også at anordningen også omfatter minst ett arrangement for separering av over-skudd av reagens, dvs. reagens som ikke har reagert under kontakten mellom f.eks. prøve og reagenser idet nevnte arrangement er plassert slik at det er i stand til å utøve sin funksjon før nærvær av påvisbar substans vises.

_Med andre ord er grunnidéen ved foreliggende oppfinnelse en rekke segmenter med påførte reagenserL, hvilke segmenter er forbundet med hverandre til'en kontinuerlig struk-tur og på en slik måte at de kan brettes slik at ønskede reagenser kommer i kontakt med hverandre. Mens den enkleste og derfor den billigste konstruksjon ville være en der nevnte

ark representeres av et enkelt stykke, f.eks. i form av et papirark eller plastark med brettelinjer, langs hvilke de gitte segmenter kan brettes over hverandre, skal uttrykket "kontinuerlig ark" bety en hvilken som helst konstruksjon der de forskjellige segmenter er forbundet med hverandre. Således kan oppfinnelsen naturligvis også anvendes ved å fremstille separate segmenter, hvilke segmenter så forbindes med hverandre ved hjelp av en forbindingsmekanisme av heng-seltypen eller lignende. Slike mere avanserte anordninger skal anordnes primært for anordninger som er ment å anvendes flere ganger, f.eks. ved bruk av slike stillinger som inneholder kjemiske reagenser som lett kan utbyttes, men i mange tilfeller er anordningen tenkt kastet etter bruk, og i disse tilfeller foretrekkes et enkelt brettbart materiale av økonomiske grunner.

Ofte omfatter analyser av den type som det er referert til, et trinn der én eller flere bestanddeler eller reak-tanter må være separert fra de andre bestanddelene eller reaktantene før påvisning kan eller skal startes. Dette er f.eks. tilfelle ved separering av en flytende fra en fast fase (reagens i fast fase eller en fast fase dannes ved reak-sjonen) , Spesielt for denne type av analyser har anordningen ifølge oppfinnelsen vist seg å være spesielt interessant, da-også denne separeringsoperasjon er innebygget i den meget kompakte og lett opererbare anordning. Det eneste reagens eller tilbehør som muligens behøver å tilsettes utenfra, er en vaskevæske som det kan være fordelaktig å håndtere separat av praktiske grunner, spesielt siden denne vaskevæsken ofte er kjemisk stabil og i mange tilfeller til og med består av ordinært vann. Heller ikke krever anvendelsen av en vaskevæske noen nøyaktighet, i motsetning til det som vanligvis er tilfelle med reagenser,

.Separeringsarrangementet kan eksempelvis være et tredje segment utstyrt med et separeringselement eller -medium, hvilket segment arrangeres eller monteres slik at det kan

brettes inn mellom de ovenfor nevnte hhv. første og andre segmenter, for å gjennomføre den ønskede separering. Når det gjelder et slikt separeringsarrangement, skal det bemerkes at, slik det også er tilfelle for de andre reagenser som anvendes, det velges fullstendig overensstemmende med det som er kjent på fagområdet. I mange tilfeller skal det være mulig ganske enkelt å anvende et filtrerpapir for å oppnå den ønskede funksjon, hvilket naturligvis også holder prisen nede.

Ifølge en annen foretrukken utførelsesform av oppfinnelsen er separeringsarrangementet for reagenset ett eller flere separerings- eller absorpsjons-medier som er anbragt i nærhet av stillingen på det første segment. Med andre ord anvendes intet ekstra segment i dette tilfelle, men nevnte arrangement er inkludert i det segment på hvilket kontakten mellom prøve og reagens finner sted. Det faktum at nevnte media er anbragt nær stillingen på det første segment, betyr i prinsippet at de kunne være i stand til å aktiveres bare ved påføring av væske, dvs, generelt vaskevæske i en mengde som overstiger det volum som anvendes for påføring av prøven. Med andre ord vil væske automatisk suges opp av det absorberende medium. Dette kan gjennomføres ved å anbringe et absorberende materiale i minst én brønn eller beholder i det første segment, hvilken brønn eller beholder har en åpning som tillater innstrømning av væske fra stillingen på det første segment,

I noen tilfeller består analysen i reaksjoner i flere trinn før påvisning kan utføres. På tross av dens enkelhet er anordningen ifølge oppfinnelsen også anvendbar i slike tilfeller, dvs. ved ganske enkelt å innføre ytterligere segmenter som inneholder de ønskede reagenser og som er montert slik at de kan brettes inn 1 en hvilken som helst ønsket rekkefølge for å gjennomføre en reaksjon med prøven eller med et reaksjonsprodukt som er dannet i et hvilket som helst foregående trinn,

_En annen .utførelsesform av anordningen ifølge oppfinnelsen er en anordning som inneholder et ekstra.segment som bare er beregnet for påføring av testprøven eller for en for-tynning derav før den brettes ved hjelp av nevnte ekstra segment i kontakt med et reagens og et annet segment.

Enda en utførelsesform av anordningen ifølge oppfinnelsen er en anordning der påvisningsreagenset er et farve-dannende reagens og der et av segmentene inneholder ett eller flere vinduer med referansefarve eller -farver, med hvilket den dannede farve direkte kan sammenlignes for en evaulering av analysen. Med andre ord har anordningen på forhånd blitt utstyrt med én eller flere farver som gir et direkte kvalitativt eller kvantitativt mål på den substans som skal påvises og med hvilken den farve som dannes ved analysen, kan sammenlignes. Fortrinnsvis er nevnte vindu(er) naturligvis arrangert på det samme segment der den farve som - dannes ved analysen utvikles/slik at de farver eller farve-toner som skal sammenlignes, er helt inntil hverandre.

Den sistnevnte utførelsesform muliggjør en direkte visuell avlesning, og selv om en slik visuell avlesning kan

utføres med stor nøyaktighet, kan det noen ganger være ønskelig å påvise farven optisk.Anordningen ifølge oppfinnelsen kan naturligvis også konstrueres for dette formål slik at det kan innføres direkte i eller på et instrument for en optisk

avlesning av den farve som utvikles. Også andre påvisnings-reagenser enn de som utvikler farver, kan anvendes, og i slike tilfeller anvendes kjent teknikk. Det skulle således ikke være nødvendig å gå i nærmere detalj her. Som eksempler på dette kan imidlertid fluorescens og luminescens nevnes.

I noen tilfeller kan det være ønskelig å stanse påvisningsreaksjonen som anvendes 1 analysen, f.eks. efter en viss forhåndsbestemt tid, for å gjøre en nøyaktig sammenligning mellom den dannede farve og referansefarvene, og i et slikt tilfelle er det mulig å utstyre anordningen med et ekstra segment med en stilling som inneholder en inhibitor for den anvendte påvisningsreaksjon. Dette segment arrangeres da Slik at det kan brettes i kontakt med. det segment på hvilket påvisningsreaksjonen finner sted, for å inhibere eller stanse påvisningsreaksjonen. v

En interessant anvendelse av anordningen.ifølge oppfinnelsen representeres ved det.tilfelle der analysen omfatter en separasjon.av en fluidumfase, vanligvis en væskefase, fra en fa.st fase og en påvisning av en substans i fluidumfasen. En foretrukken anordning i et slikt tilfelle erkarakterisertved at stillingen på det første segment består av en beholder hvori prøven er tenkt tilsatt for å reagere med et reagens i fast fase som er tilstede i beholderen eller alternativt å reagere til dannelse av en fast fase, at stillingen på det andre segment inneholder påvisningsreagens for den ønskede substans i fluidumfasen, og at et tredje segment som inneholder et separeringsarrangement som muliggjør en passasje av fluidumfasen, men ikke av den faste fase, plasseres slik at den kan brettes inn mellom beholderen på det første segment og påvisningsstillingen på det andre segment. Når således anordningen i dette tilfelle snus opp ned, vil fluidurafasen og derved den substans som skal påvises, komme i kontakt med påvisnlngsreagenset uten at det er noen påvirkning fra den faste fase på påvisningsreaksjonen.

For å lagre reagenset i beholderen i det første segment slik at det er beskyttet for ytre innvirkning før prøven påføres, dekkes åpningen av beholderen fortrinnsvis av en type av beskyttelsesskikt, f.eks. en folie, som holder reagenset på plass før påføringen av prøven.

En annen interessant anvendelse av anordningen ifølge oppfinnelsen er dens bruk i et enzym^immunoforsøk basert på antigen-antistof f--reaksjoner og hvor anordningen erkarakterisert vedet første segment som har en stilling laget av en gjennomskinnelig plast for påføring av prøven og fortrinnsvis også en andre stilling for en kontrollprøve, idet plasten er preparert med reagens i form av antistoff eller antigen som er festet til den. En slik fiksering av antigener eller antistoffer til plastoverflater er vel kjent og.beskrevet i litteraturen, se f.eks. Immunoenzymatic Techniques (utgitt av S, Avrameas/ P- Druet, R. Massayeff og G. Feldman) Elsevier Science Publishers/Amsterdam/New York/Oxford, 1983. Anordningen er viderekarakterisert vedet andre segment som har en stilling med påvisningsreagens i form av et kromogent enzymsubstrat, et tredje segment utstyrt med en stilling med en absorberende pute med løselig, eventuelt lyofilisert, enzym-merket antistoff eller antigen, idet nevnte tredje segment er arrangert slik at det kan brettes for å overlappe det første segment før det andre segment brettes for å overlappe nevnte første segment. Anordningen inneholder dessuten et separeringsarrangement i form av absorberende materiale plassert i minst én brønn på det første segment på en slik måte at når vaskevæske påføres på den gjennomskinnelige plast i det første segment for å vaske vekk uomsatt reagens før det andre segment brettes for å overlappe det første, absorberes nevnte vaskeløsning automatisk av nevnte absorberende materiale.

Slik det var nevnt ovenfor, kan tallfunksjoner innbygges i anordningen ifølge oppfinnelsen. Den kan således også utstyres med ett eller flere ytterligere segmenter som er av et annet slag enn de tidligere beskrevne, kjemisk aktive deler. Eksempler på slike interessante anordninger ifølge oppfinnelsen er en anordning som erkarakterisert vedat den omfatter ett eller flere ytterligere segmenter som gjelder håndtering av anordningen under drift og/eller pasi-entdata eller lignende, hvilke segmenter også kan brettes på en slik måte at segmentene kan overlappe hverandre i ønsket rekkefølge, eller en anordning som erkarakterisert vedsegmenter med en lukkemekanisme som kan brettes for å forsegle pakningen.

For ytterligere å bygge opp eller forbedre det selv-instruerende brettesystem, for i"en meget stor grad å eli-minere risikoen for en feilaktig operasjon av det, kan en annen interessant anordning ifølge oppfinnel-sen karakteriseres ved nummererte eller farve-kodede tunger, som trinnvis gir anvisninger på rekkefølgen for åpningen av segmentene. Anordningen kan også konstrueres slik at den erkarakterisertved visse segmenter som kan rives av slik at de kan fjernes fra anordningen etter å være brukt. F.eks. kan det være passende bare å bibeholde det eller de segmenter på hvilke resultatet av analysen avleses og på hvilke eventuelt også

data som gjelder f.eks. pasientidentifikasjon, type av test, tid eller serienummer er tilstede eller er notert.

Når det gjelder brettbarheten til segmentene og over-lappingene av de forskjellige segmenter, er anordningen ifølge oppfinnelsen fortrinnsvis konstruert på en slik måte at seg mentene kan brettes for i det vesentlige å overlappe hverandre. Dvs. alle segmenter er fra begynnelsen av, dvs. når anordningen er klar til bruk, brettet slik at de er over hverandre i en hvilken som helst egnet rekkefølge i én enkelt stabel.

På denne måte har den ferdige pakning en meget kompakt form, dvs. formen til en fyrstikkeske med et deksel som kan brettes.

Dessuten gjelder oppfinnelsen anvendelse av anordningen som er beskrevet ovenfor for kjemiske analyser generelt og spesielt innenfor områdene medisin og jordbruk. En foretrukken anvendelse i denne forbindelse er i immuno-kjemiske analyser, f.eks. for enzym-immunoforsøk, fluorescens-immuno--forsøk og luminescens-immunoforsøk, og analyser der hybridis-eringsreaksjoner mellom nucleinsyrer anvendes.

Anordningen ifølge oppfinnelsen skal nå beskrives mere

i detalj i forbindelse med de medfølgende tegninger som viser to foretrukne utførelsesformer av anordningen.

Fig. la viser en anordning Inneholdende 6 segmenter sett ovenfra og hvor separeringsutstyret representeres ved et spesielt segment,

fig. lb viser en 4 av segmentene fra fig. la fra siden, fig. 2 viser anordningen fra fig. la i brettet tilstand og sett hhv. ovenfra og nedenfra,

fig. 3-4 viser analysesekvensen når anordningen ifølge", fig. la anvendes for enzym-immunoanalyse,

fig. 5a viser en andre anordning inneholdende 3 segmenter sett ovenfra og hvor separeringsutstyret er tilstede på det første segment,

fig. 5b viser anordningen ifølge fig. 5a fra undersiden, fig. 5c viser anordningen ifølge fig. 5a sett fra siden langs en tenkt tverr snittslinje X - X,

fig, 6a viser anordningen fra fig. 5a i brettet tilstand sett ovenfra og i forstørret skala på 2:1, -fig. 6b viser anordningen fra fig. 5a i brettet tilstand sett fra siden langs en tenkt tverr snittslinje- X - X og i for-størret skala på 2:1,

fig, 6c viser anordningen fra fig. 5a i brettet tilstand sett fra siden langs en tenkt partiell tverrsnitts-

linje XI - XI og i forstørret skala på 2:1,

fig. 7 viser analysesekvensen når anordningen ifølge fig. 5a anvendes for enzym-immunoanalyse.

Anordningen som er vist i fig. 1, omfatter et kontinuerlig ark med 6 segmenter 6-11 av hvilke segmenter 6-9 viser kjemisk aktive stillinger, mens segmentene 10 og 11 represen-terer logistiske hjelpesegmenter for den kjemiske operasjon. Videre er noen av segmentene utstyrt med tunger som er nummerert 1-5 som skal vise rekkefølge for åpning av anordningen. Endelig viser figuren et mindre brettbart segment 12 som skal forsegle anordningen.

Mere spesielt omfatter segment 6 en reaksjonsbeholder 13 inneholdende et reagens 14 i fast fase og dekket av en folie 15. Segment 7 er utstyrt med et område 16 som er et filtrerpapir, mens segmentet 8 inneholder en kjemisk aktiv overflate 17 i form av et enzymsubstrat og en beskyttende, gjennomskinnelig plastfolie 18. Segmentet 9 i sin tur har en kjemisk aktiv overflate 19 i form av en enzyminhibitor.

Som det var nevnt ovenfor, viser fig. 2 anordningen i

brettet tilstand og sett hhv. nedenfra og ovenfra, idet referansetallene er de samme som i fig. 1. Fig. 2 viser imidlertid også to farvereagensvinduer 20 som farven på overflate 17 som dannes ved analyse- kan sammenlignes med.

Når det gjelder håndteringen av den viste anordning, henvises det til fig. 3-4 hvor sekvenser nummerert I-IX er Vist, hvilke sekvenser kan beskrives som følger. - I. Pakningen brytes og åpnes ved hjelp av tungen 1. Navn såvel som data for pasienten kan noteres der det er angitt ved hjelp av en penn 21. II. Tungen 2 åpnes. Prøven tilsettes til reaksjonsbeholderen 13 ved hjelp av en teststav 22 med hvilken folien 15 gjennomhulles. Prøven blandes inn i reaksjonsblandingen 14 med teststav.en. Prøven får så lov å inkubere i en passende tid. Flik 2 kan så, om ønsket, forsegles igjen. III. Etter inkuberingen gjenåpnes tungen 2 dersom den er forseglet. IV. Tungen 3 åpnes hvorved overflaten av filtrerpapiret 16 eksponeres, og under nevnte overflate er det en enzymsubstratoverflate 17. Segmentet med filtrerpapiret 16

brettes så over reagensbeholderen 13.

V. Anordningen snus øyeblikkelig på hodet.

VI. Tungen 4 åpnes så, hvilket eksponerer enzym-substratoverf laten 17 og enzyminhibitoroverflaten 19. VII. Overflaten 19 brettes slik at den dekker overflate 17 ved hjelp av tungen 5 for å stanse den eventuelle enzymreaksjon. Etter brettingen forblir disse overflater festet til hverandre da de i det viste tilfelle er utstyrt med et klebemiddel av den type som muliggjør en åpnings-

og gjenforseglingsoperasjon.

VIII. De andre segmenter kan nå rives av eller fjernes. På de to gjenværende segmenter som kleber til hverandre, kan navn og data for pasienten finnes.

IX. Gjennom vinduet på den motsatte side av de gjenværende segmenter avleses den oppnådde farvereaksjon ved hjelp av en sammenligning med referansefarvene i vindu 20.

Når det gjelder den eksemplifiserte reaksjon, er farvereaksjonen avhengig av mengden av enzym som ikke er opptatt av den faste fase 14 i reaksjonsbeholderen 13. Reaksjons-systemet i reaksjonsbeholderen 13 har således en slik sammen-setning at mengden av enzym som opptas av den faste fase 14, er direkte avhengig av nærvær av hhv. antigen eller antistoff i prøven. Ved snulngen i fig. 3, trinn V, filtreres prøven gjennom filtrerpapiret 16 som hindrer den faste fase 14 fra å nå enzymsubstratoverflaten 17;'" . Den anordning som er vist i fig. 5 og 6, viser tre segmenter 30-32 som alle tar aktiv del i analyseprosessen. Segmentene 31 og 32 er dessuten utstyrt med farvekodede tunger 33 og 34 som viser rekkefølgen for åpning av anordningen.

Segmentet 30 inneholder en gjennomskinnelig plastoverflate 35 til hvilken et antistoff (eller antigen) er festet kjemisk ..eller fysisk. På plastoverflaten 35 er det en flekk 36 som er markert for en prøve og en flekk 37 markert for en kontroll eller standard. Rundt plastoverflaten 35 er det et innebygget separasjonsarrangement i form av et absorberende medium 48 1 brønner på bunnplaten 51. Segmentet 31 inneholder en brønn 50 på hvis motsatte konvekse side 38 er festet en absorberende pute 3 9 som inneholder et kromogent enzymsubstrat. På tilsvarende måte er det en hevning i segmentet 32 på den øvre konvekse side 40 til hvilken er festet en absorberende pute 41 som inneholder et enzym-merket antistoff (eller antigen). Når det gjelder putene 39 og 41, er de plassert slik at begge overlapper plastoverflaten 35 ved en passende bretting av hhv. segmentet 31 eller 32. Den pute som ikke er i operasjon, hviler i den konkave fordypning (hhv. 49 eller 50) som er dannet på den motsatte side av den andre pute. Brettingen av segmentene lettes av brettelinjene 42. I den sammenbrettede startposisjon som er vist i fig. 6, er segmentet 31 brettet mot bunnsiden av segment 32 idet det låses ved hjelp av en smekklås 43. Segmentet 32 er i sin tur brettet mot segment 30 og låses av de to låsetapper 44 som er reversibelt låst i brønnene 45 i segment 30. Innsnittet 46 i segment 32 gjør det mulig å få tak i.tungen 34 når segment 31 åpnes, mens innsnittet 47 også muliggjør en bretting av segment 31 mot oversiden av segment 32 med en bibeholdt mulighet for å brette og låse segment 32 mot segment 30 med låsetappene 44.

Når det gjelder anvendelsen av anordningen som er vist i fig, 5-6, henvises det til fig. 7 i hvilken sekvenser som er nummerert XX - XXVI er markert, hvilke sekvenser kan beskrives som følger: XX. Pakningen åpnes ved hjelp av tungen 33. Om ønsket, kan pasientens navn og data noteres på baksiden av pakningen.

XXI. Prøven påføres på flekken 36 på overflaten 35. Dersom prøven er flytende, kan dette utføres f.eks. ved å påføre en dråpe av prøven på overflaten. På tilsvarende måte påføres en kontroll eller standard på flekken 37. Dersom den substans som skal testes er tilstede i prøven, kontrollen eller standarden, reagerer den med og bindes Mzil antistoffet (eller antigenet) som er festet på plastoverflaten 35.

XXIX. Pakningen forsegles igjen. Derved startes et andre analysetrinn. Dersom den substans som skal testes er tilstede, reagerer den nå også med og bindes til det løselige/enzym-merkede antistoff (eller antigen) som er tilstede i den absorberende pute 41. Derved vil dette enzym-merkede antistoff også bli indirekte bundet til plastoverflaten 35 ved den tidligere reaksjon i trinn XXi som stadig fortsetter.

XXIII. Etter en passende reaksjonstid gjenåpnes pakningen ved hjelp av tungen 33. Vaskevæske dryppes nå på overflaten 35 som derved vaskes fri fra løselig, enzym-merket antistoff som ikke har reagert med den testede sub-s tans.

XXIV. Ved hjelp av tungen 34 åpnes nå segment 31 og

brettes oppå segment 32.

XXV. Pakningen forsegles igjen. Derved startes på-visningsreaks jonen. Enzym-merket antistoff som har reagert i det første reaksjonstrinn, omdanner det kromogene enzymsubstrat på den absorberende pute 39 til en farvet substans.

XXVI. Etter den riktige reaksjonstid avleses resultatet på baksiden av pakningen gjennom den gjennomskinnelige plastoverflate 35. Den farve som dannes på testflekken 36, sammenlignes med resultatet av kontrollreaksjonen på flekken 37 eller med referansefarver.

Når det gjelder den eksemplifiserte analytiske sekvens,, kan det videre tilføyes at farvereaksjonen er direkte avhengig av mengden av enzym som er tilstede på overflaten 35 - etter vasketrinnet XXIII. Denne mengde er i sin tur direkte-avhengig av nærværet av den testede substans i prøven som er i stand til å binde enzym-merket antistoff (eller antigen) .og er på samme tid bundet til antistoff (antigen) som er festet på overflaten 35,

Eksempler

Følgende arbeidseksempler er ment å forklare anordningen, ifølge oppfinnelsen mere i detalj. Disse eksempler beskriver anvendelsen av anordningen for bestemmelse av et Ute såvel som et meget stort protein og et virus.

For alle anvendelsene ble det brukt en anordning ifølge fig. 5-6 i en skala 1:1. Segmentene 30-32 ble fremstilt av polyvinylklorid (PVC). Den gjennomskinnelige plastoverflate 35 besto av en rektangulær slide fremstilt av poly- styren av immunokvalitet (Nunc A/S, Roskilde, Danmark), med markerte, sirkulære flekker 36 og 38 på overflaten. Antistoff ble festet til disse flekkene slik det vil bli beskrevet for hver type av anvendelse.

Det absorberende materiale 38 i separeringsarrangementet Cr) AB,

ble fremstilt av cellulosesvamp (Wettex-', Celloplast AB, Norrkoping, Sverige). For de absorberende puter 39 og 41 ble det brukt Whatman® filtrerpapir (Whatman Ltd., Maidstone, Kent, England). Disse filtrerpapirputer ble impregnert med reagens slik det vil bli beskrevet for hver type av anvendelse.

For bestemmelsen av thyroglobulin ble anordningen utstyrt med et ekstra segment hvis eneste formål var å utgjøre et deksel for overflaten 35 for å hindre fordampning av prøven.

Bestemmelse av humant chorionisk gonadotropin

Humant chorionisk gonadotropin (hCG) er et lite protein med en molekylvekt på ca. 46.000. Bestemmelsen er anvendbar i diagnosen av graviditet.

Preparering av anordningen.

Antistoff ble festet til plastsliden 35 ved påføring av 75^,ul av monoklonal anti-a:-;underenhet av hCG-antistoff (clone 5503, Oy Medix Ab, Kauniainen, Finland) i en konsen- - trasjon på lOyUg/ml fortynningsmiddel, til hver av flekkene 36 og 37. Fortynningsmidlet (forkortet PBS) var 0,05 mol/l natriumfosfat, 0,15 mol/l NaCl, pTT 7,2. Slidene ble inkubert i et fuktighetskammer i 18 timer ved 4°C. De ble så skylt med ca. 10 ml vaskeløsning (forkortet PBS-Tweerr^ bestående av 0,05% Tween^-20 (Merck, Hohenbrunn, Vest-Tyskland) i PBS. Deretter ble slidene neddykket i et kar inneholdende en løsning (forkortet PBS-BSA) bestående av 1% vekt/volum okseserumalbumin (Sigma Chemical Co., St..Louis, Missouri, U.S.A.) i PBS og inkubert i 90 minutter ved romtemperatur. Deretter ble slidene igjen skylt med .ca, 10 ml PBS-Tween<®>fulgt av 10 ml destillert vann og fikk stå og tørke.

Den absorberende pute 41 ble impregnert med en løsning av peroxydase-konjugert monoklonal anti-f3 underenhet av hCG-antistoff ("Sensi-Chrome" Conjugate Reagent, Hoffman-La Roche Inc., Nutley, New Jersey, U.S.A.), ufortynnet. Den absorberende pute 39 ble impregnert med en kromogen substrat-løsning av 0,42 ramol/1 3,3<1>,5,5<1->tetramethylbenzidin,

(Miles Laboratories, Inc., Elkhart,- Indiana, U.S.A.),

1,4 mmol/1 urea-peroxyd i 0,1 mol/l natriumacetat/sitronsyre-buffer, pH 6,0, fremstilt som beskrevet av E. S. Bos et al.

(1981), J. Immunoassay 2, 187.

Utførelse av bestemmelsen

Bestemmelsen ble utført i hovedsak som illustrert i fig. 7 med sekvensene XX - XXVI. Følgende detaljer når det gjelder prøver, volumer, tider og andre betingelser, kan imidlertid tilføyes.

Som prøver for undersøkelsen ble det anvendt "Lyphocheck" I og II humane kontroll-uriner (Bio-Rad Laboratories, Inc., Anaheim, California, U.S.A) med konstaterte hCG-konsentrasjoner på hhv. 3.900 og 550 internasjonale enheter pr. 1. Disse prøver ble videre fortynnet med en kjent negativ urinprøve 1:2, 1:4, 1:8 .og 1:16. Den kjente negative urinprøve ble brukt som blindprøve.

Anordningen ble åpnet, og 1 dråpe på ca. 50^ul av hver prøve ble påført på flekk 36 og det samme volum av blindprøve på flekk 37. Anordningen ble så lukket ved å brette segment 3 2 på segment 30 for å overføre det konjugerte antistoff i den absorberende pute 41 til plastoverflaten 35. Anordningen fikk stå lukket og inkubert i 15 minutter ved romtemperatur.

Anordningen ble så åpnet igjen for å eksponere over-(r}

flaten 35 som ble vasket med ca. 1 ml PBS-Tweerr-% Segment 31 ble så brettet på segment 30 for å overføre det kromogene'substrat i den absorberende pute 39 til plastoverflaten 35. Anordningen fikk igjen stå lukket og ble inkubert i 5 minutter ved romtemperatur. Farvereaksjonen ble så straks avlest på baksiden av anordningen gjennom den gjennomskinnelige plasten på stedene 36 og 37. En svak blåfarve ble betegnet "+", en tydelig blåfarve "++" og en sterk blåfarve "+++", Forsøksresultatene ble sammenlignet med en kommersi-

elt tilgjengelig graviditetstest, "Sensi-Chrome" (Hoffman-La Roche Inc., Nutley, New Jersey, U.S.A.) som ble utført samtidig i reagensglass.

Resultater

Som det kan sees, var det en god korrelasjon mellom fremgangsmåtene.

Prøve på humant thyroglobulin

Humant thyroglobulin er et relativt stort protein med en molekylvekt på ca. 660.000. Prøven er anvendbar for å påvise kreft i skjoldbruskkjertelen.

Preparering av anordningen

Antistoff ble festet til plastsliden 35 ved påføring av 75^ul monoklonalt anti-humant thyroglobulin-antistoff (clone TF-33, Novo Industri A/S, Bagsværd, Danmark) i en konsentrasjon på 10yUg/ml fortynningsmiddel, til hver av flekkene 36 og 37, Fortynningsmidlet (forkortet PBS) var 0,05 mol/l natriumfosfat, 0,15 mol/l NaCl, pH 7,2. Slidene ble inkubert i et fuktighetskammer i 18 timer ved 4°C. De ble skylt med ca. 25 ml yaskeløsning (forkortet PBS-Tween^ , bestående av 0,05% Tween^-20 (Merck, Hohenbrunn, Vest-Tyskland) i PBS. Deretter ble slidene neddykket i et kar inneholdende en.løsning (forkortet PBS-BSA) bestående av 1% vekt/volum okseserumalbumin (Sigma Chemical Co-,, St. Louis,

(r)

Missouri, U.S,A.) i PBS-Tweeri^og inkubert i 45 minutter

ved romtemperatur. Deretter ble slidene igjen skylt med ca.

25 ml PBS-Tween<®>, fulgt av 25 ml destillert vann og til slutt

tørket under en strøm av komprimert luft.

Den absorberende pute 41 ble impregnert med en løsning av peroxydase-konjugert anti-humaht thyroglobulin fra kanin (Dakopatts A/S, Glostrup, Danmark), fortynnet 1:500 i PBS-BSA. Den absorberende pute 39 ble impregnert med en kromogen substratløsning av 0,05% vekt/volum ortho-fenylendiamin (Sigma Chemical Co., St. Louis, Missouri, U.S.A.), 0,01% volum/volum ^ 2^ 2 ^ 0,06 mol/l natriumfosfat, 0,03 mol/l natriumcitrat, pH 5,0.

Utførelse av prøven

Prøven ble utført i hovedsak som illustrert i fig. 7 med sekvensene XX - XXVI. Følgende detaljer når det gjelder prøver, volumer, tider og andre betingelser kan imidlertid tilføyes.

Som prøver for denne undersøkelse ble det brukt løs-ninger med 500 ng/ml, 100 ng/ml og 10 ng/ml av en renset human-thyroglobulin-standard (Novo Industri A/S, Bagsværd, Danmark) i PBS-BSA. PBS-BSA uten tilsatt thyroglobulin ble brukt som en blindprøve.

Anordningen ble åpnet, og 25^ul av hver prøve ble på-ført på flekk 36 og det samme volum blindprøve på flekk 37. Det ekstra lokket som ble brukt for å hindre fordampning,

ble lukket, og anordningen ble inkubert i 30 minutter ved romtemperatur. Overflaten 35 ble så vasket med ca. 1 ml PBS-Tween®.

Etter vasking ble anordningen lukket ved å brette segment -32 på segment 30 for å overføre det konjugerte antistoff i den absorberende pute 41 til plastoverflaten 35. Anordningen fikk stå lukket og ble inkubert i 30 minutter ved romtemperatur.

Anordningen ble så åpnet igjen for å eksponere over-PBS-Twee Segment 31 ble så brettet- på segment 30 for å overføre det kromogene substrat 1 den absorberende pute 39 til plastoverflaten 35. Anordningen fikk igjen stå lukket og ble inkubert i 10 minutter ved romtemperatur. Farvereaksjonen ble så straks avlest på baksiden av anordningen gjennom den gjennomskinnelige plast på stedene 36 og 37. En svak gulfarve ble betegnet "+", en tydelig gulfarve "++" og en sterk gulfarve "+++".

Resultater

Humane thyroglobulin-standarder (i PBS-BSA)

Som det kan sees, var anordningen ifølge oppfinnelsen ; i stand til å gi semikvantitativ analytisk informasjon ved meget lave konsentrasjoner av analytten.

Prøve på leukemivirus hos katter

Prøven på leukemivirus hos katter er viktig i veteri-nærpraksis for å diagnostisere leukemi hos katter.

Preparering av anordningen

Antistoff ble festet til plastsliden 35 ved å påføre 5Cyul av monoklonalt anti-felint leukemivirus-antistoff (clone 1, Cambridge BioScience Corporation, Hopkinton, Massachusetts, (U.S.A.), i en konsentrasjon av lCyug/ml fortynningsmiddel, til hver av flekkene 36 og 37. Fortynningsmidlet (forkortet PBS) var 0,05 mol/l natriumfosfat, 0,15 mol/l NaCl, pH .7,2. Slidene ble inkubert i et fuktig- .: hetskammer i 3 timer ved 37°C. De ble så skylt med ca. 10 ml vaskeløsning (forkortet PBS-Tweer® , bestående av 0,05% Tween®-20 (Sigma Chemical Co., St. Louis, Missouri, U.S.A.)

i PBS, Slidene ble deretter neddykket i et kar inneholdende en løsning (forkortet PBS-BSA) bestående av 1% vekt/volum okseserumalbumin (Sigma Chemical Co., St. Louis, Missouri, U.S.A.) i PBS og inkubert i 60 minutter ved 37°C. Deretter ble slidene igjen skylt med ca. 10 ml PBS-Tween^, fulgt av 10 ml destillert vann og fikk stå og tørke.

Den absorberende pute 41 ble impregnert med en løsning av peroxydase-konjugert monoklonalt anti-felint leukemivirus-antistoff (clone 2, Cambridge BioScience Corporation, Hopkinton, Massachusetts, U.S.A.), fortynnet 1:5. Den absorberende pute 39 ble impregnert med en kromogen substrat-løsning av 0,1% vekt/volum 2,2'-azino-di-3-ethylbenzthiazolin-sulfonat (Boehringer Mannheim GmbH, Mannheim, Vest-Tyskland), 0,15% H202i 0,05 mmol/1 natriumfosfatbuffer, pH 6,0.

Utførelse av undersøkelsen

Undersøkelsen ble utført i hovedsak som illustrert i fig. 7, med sekvensene XX - XXVI. Følgende detaljer når det gjelder prøver, volumer, tider og andre betingelser, kan imidlertid tilføyes.

Som prøver for denne undersøkelse ble det brukt

10 aktuelle serumprøver fra mistenkte katter. PBS-BSA ble brukt som blindprøve.

Anordningen ble åpnet, og 1 dråpe på ca. 50yUl av hver prøve ble påført på flekk 36, og det samme volum blindprøve til flekk 37. Anordningen ble så lukket ved å brette segment 32 på segment 30 for å overføre det konjugerte antistoff i den absorberende pute 41 til plastoverflaten 35. Anordningen fikk stå lukket og ble inkubert i 15 minutter

ved romtemperatur.

Anordningen ble så åpnet igjen for å eksponere overflaten 35 som ble vasket med ca. 5 ml PBS-Tween^ Segment 31 ble så brettet på segment 30 for å overføre det kromogene substrat 1 den absorberende pute 39 til plastoverflaten 35. - Anordningen fikk så igjen stå lukket og ble inkubert i

2 minutter ved romtemperatur. Farvereaksjonen ble så straks avlest på baksiden av anordningen gjennom den gjennomskinnelige -plasten på stedene 36 og 37. En svak grønnfarve ble betegnet en tydelig grønnfarve "++" og en sterk grønn-farve "+++". Resultatene av undersøkelsen ble sammenlignet med en kommersielt tilgjengelig test på katteleukemivirus (Pitman-Moore, Inc., Philadelphia, Pennsylvania, U.S.A) som ble utført sanvtidlg i mikrotitreringsbegere, Resultater

Fremgangsmåtene var i samsvar når det gjaldt 8 av de 10 testede prøver. De divergerende resultater for prøvene 4 og 6 kan enten ha vært forårsaket av faktorer ved fremgangsmåten eller prøvenes kliniske status.

Claims (13)

1. Anordning for kjemiske analyser, spesielt innen det medisinske område, f.eks. immuno-kjemiske analyser, hvor prøven som skal testes, bringes i kontakt med minst ett reagens som reagerer med prøven for å danne en påvisbar substans som så i sin tur påvises for en kvalitativ eller kvantitativ bestemmelse derav, karakterisert ved at den omfatter et kontinuerlig ark av minst to segmenter (6,8 eller 30,31), av hvilke det første (6 eller 30) inneholder en stilling (13 eller 35) på hvilken minst ett av de nevnte reagenser er tilstede fra begynnelsen og på hvilken kontakten mellom nevnte prøve og reagens kan finne sted, og det andre (8 eller 31) inneholder en stilling (17 eller 39), fortrinnsvis med det ønskede påvisningsreagens tilstede fra begynnelsen, på hvilken nærværet av en påvisbar substans kan vises, de første og andre segmenter (hhv. 6 og 8 eller hhv. 30 og 31) kan brettes på en slik måte at stillingen (13 eller 35) med reagenset kan bringes til å overlappe stillingen (17 eller 39) for påvisning, at det omfatter minst ett arrangement (7 eller 48) for separering av reagenser som ikke er omsatt under kontakten mellom prøve og reagens, hvilket arrangement er plassert slik at det aktiveres før nærværet av den påvis-? bare substans vises, og at tilstedeværende segmenter kan brettes på en slik måte at ønskede segmenter kan overlappe hverandre for utførelse av de nødvendige analysetrinn.

2. Anordning ifølge krav 1, karakterisert ved at arrangementet for separering av reagenser er et tredje segment (7) som inneholder et separeringselement eller -medium (16), idet segmentet (7) er plassert slik at det kan brettes inn mellom det første (6) og det andre (8) segment.

3. Anordning ifølge krav 1, karakterisert ved at arrangementet for separering av reagenser er ett eller flere separerings- eller absorpsjons-medier (48) som er plassert inntil stillingen (35) på det første segment (30).

4. Anordning ifølge krav 3, karakterisert ved at separerings- eller absorpsjons-mediene er plassert i én eller flere brønner eller beholdere (51) i det første segment på en slik måte at når vaskeløsning påføres på området (35) for å vaske vekk uomsatt reagens, separeres vaskeløsningen automatisk eller absorberes i brønnene.

5. Anordning ifølge et av de foregående krav, karakterisert ved at den omfatter et ytterligere segment (9) med en stilling (19) som inneholder en inhibitor for den påvisningsreaksjon som brukes, hvilket segment (9) er plassert slik at det kan brettes i kontakt med det andre segment (8) slik at det kan inhibere påvis-ningsreaks jonen.

6. Anordning ifølge et av de foregående krav, karakterisert ved at den omfatter ett eller flere ytterligere segmenter (32) som inneholder reagenser (41), hvilke segmenter er plasert slik at de kan brettes i en hvilken som helst ønsket rekkefølge for å reagere med prøven eller et reaksjonsprodukt som er dannet i et hvilket som helst tidligere trinn. f

7. Anordning ifølge et av de foregående krav, karakterisert ved at den omfatter et segment for påføringen eller fortynningen av prøven, hvilket segment er plassert slik at det kan brettes for å bringe prøven i kontakt med et hvilket som helst ønsket reagens på et annet segment.

8. Anordning ifølge et av de foregående krav, karakterisert ved at påvisningsreagenset er et farve-genererende reagens og at et av segmentene inneholder ett eller flere vinduer (20) med referansefarver, med hvilke den genererte farve direkte kan sammenlignes for å få et resultat av analysen.

9. Anordning ifølge et av de foregående krav, karakterisert ved at segmentene kan brettes på en slik måte at de i det vesentlige overlap <p> er hverandre når anordningen er tilstede i form av en pakning som er ferdig for bruk.

10. Anordning ifølge et av de foregående krav, karakterisert ved at det kontinuerlige ark' med dets brettbare segmenter er konstruert fra ett enkelt stykke papp, plast eller et annet lett brettbart materiale.

11. Anordning ifølge et av de foregående krav for anvendelse i analyser omfattende en separering av en fluidumfase fra en fast fase og påvisning av en substans i fluidumfasen, karakterisert ved at stillingen på det første segment (6) har en beholder (13) til hvilken prøven skal tilføres for å reagere med et reagens i fast fase (14) som er tilstede i beholderen eller alternativt å reagere for dannelse av en fast fase, idet beholderåpningen fortrinnsvis dekkes av et beskyttelsesskikt (15), f.eks. en folie, som holder reagenset på plass før prøven tilføres, at stillingen (16) på det andre segment (8). inneholder et påvisningsreagens for en ønsket substans i fluidumfasen, og at et tredje segment (7) som inneholder et separeringselement eller -medium (16), f.eks, et filtrerpapir, som mulig-gjør passasje av fluidumfasen, men ikke den faste fase, er plassert slik at det kan brettes inn mellom beholderen (13) på det første segment (6) slik at når anordningen snus opp ned, kan fluidumfasen bringes i kontakt med påvisningsreagenset,

12. Anordning ifølge et av de foregående krav for anvendelse ved enzym-immunoforsøk basert på antigen-antistoff-reaksjoner, karakterisert ved at stillingen på det første segment inneholder en fast fase til hvilken enzym opptas i forhold til nærværet av antigen eller antistoff i prøven, og at det andre segment inneholder et enzymsubstrat som reagerer med enzymet, som ikke er tatt opp av den faste fase i nevnte stilling på det første segment eller forblir på den faste fase i nevnte stilling på det første segment etter vasking,

13. Anordning ifølge et av kravene 1, 3-4, 6-10 og 12 for anvendelse i enzym-immunoforsøk basert på antigen-antistoff-reaksjoner, karakterisert ved et første segment med en stilling fremstilt av gjennomskinnelig plast ; for påføring av prøven og fortrinnsvis også en stilling for en kontrollprøve, idet plasten er utstyrt med reagens i form av antistoff eller antigen som er festet til den, et andre segment med en stilling med påvisningsreagens i form av et kromogent enzymsubstrat, et tredje segment med en stilling med en absorberende pute med løselig, eventuelt lyofilisert, enzym-merket antistoff eller antigen, idet det tredje segment er plassert slik at det kan brettes for å overlappe det første segment før det andre segment brettes for å overlappe det første segment, og et separeringsarrang <g> ment i form av absorberende materiale, plassert i minst én brønn på det første segment, på en slik måte at når vaskevæske påføres på; den gjennomskinnelige plasten på det første segment for å vaske vekk uomsatt reagens før det andre segment brettes for å overlappe det første, absorberes vaskeløshingen automatisk av absorberingsmaterialet.

14, Anvendelse av en anordning ifølge et hvilket som helst av kravene 1-13 for kjemiske analyser, spesielt innenfor medisin- og jordbruks-området, f.eks. immuno-kjemiske analyser, som f,eks. enzym-immunoforsøk, fluorescens-immuno-forsøk og luminescens-immunoforsøk, og analyser basert på hybridiserlngsreaksjoner mellom nucleinsyreri