SU927126A3 - Способ получени урокиназы - Google Patents

Способ получени урокиназы Download PDF

Info

Publication number
SU927126A3
SU927126A3 SU792767757A SU2767757A SU927126A3 SU 927126 A3 SU927126 A3 SU 927126A3 SU 792767757 A SU792767757 A SU 792767757A SU 2767757 A SU2767757 A SU 2767757A SU 927126 A3 SU927126 A3 SU 927126A3
Authority
SU
USSR - Soviet Union
Prior art keywords
urokinase
medium
cells
preservative
culture
Prior art date
Application number
SU792767757A
Other languages
English (en)
Inventor
Мау-Юнг-Куо
Джин Ринтс Маргрет
Фидер Джозеф
Original Assignee
Монсанто Компани(Фирма)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Монсанто Компани(Фирма) filed Critical Монсанто Компани(Фирма)
Application granted granted Critical
Publication of SU927126A3 publication Critical patent/SU927126A3/ru

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14Hydrolases (3)
    • C12N9/48Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/64Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
    • C12N9/6421Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
    • C12N9/6424Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12N9/6456Plasminogen activators
    • C12N9/6462Plasminogen activators u-Plasminogen activator (3.4.21.73), i.e. urokinase
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12YENZYMES
    • C12Y304/00Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/21Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12Y304/21073Serine endopeptidases (3.4.21) u-Plasminogen activator (3.4.21.73), i.e. urokinase

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Description

(5) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ УРОКИНАЗЫ
I
Изобретение относитс  к химикофармацевтической промышленности и касаетс  получени  лекарственных препаратов.
Известен способ получени  урокиназы путем культивировани  культуры почечной ткани в жидкой питательной среде в присутствии аминокислоты с последующим выделением целевого продукта 1.
Однако известный способ не обеспечивает высокого выхода целевого продукта .
Цель изобретени  - повышение выхода урокиназы.
Указанна  цель достигаетс  тем, что при осуществлении способа получени  урокиназы путем культивировани  культуры почечной ткани в жидкой питательной среде в присутствии аминокислоты с последующим выделением целевого продукта культивирование ведут в присутствии 0,3-0,5% фенилаланина.
Способ осуществл ют следующим образом .
Почечные клетки выращивают в соответствующей питательной среде в сосудах дл  тканевых культур при до сли ни  клеток. Среда 199  вл етс 
g типичной, подход щей средой роста. Можно также использовать модифицированную среду EagEe по DuEbeceo, среду 5 А по McCoy, среду MB 752/1 по Waymouth и другие о&цеприн тые среды
IQ дл  тканевых культур. Во врем  роста культуральную среду укрепл ют сывороткой млекопитающих, например сывороткой эмбриона крупного рогатого скота, в количестве 5-15% по объему.
15 среды.
После сли ни  клеток их промывают физиологическим раствором, например буферным рассолом, и затем промывную жидкость замен ют консервирующим веществом.
Можно использовать водную питательную среду, котора   вл етс  необходимой дл  сохранени  почечных клеток и дл  получени  урокиназы. Эта
25 среда содерххит гидролизат белка моло392 ka, альбумин человеческой сыворотки, глюкозу и бикарбонат натри . Кроме гидролизата белка молока, можно также использовать и другие белковые гидролизаты, такие как триптол, триптозу , пептон и другие материалы. П р и м е р 1. Нормальные первичные клетки почки человеческого эмбриона (ПЧЭ) центрифугируют и пересуспендируют в среду 199f содержащую 10% по объему сыворотки эмбриона круп ного рогатого скота. Клеточную суспензию примен ют дл  инокул ции пласт массовых колб Фалькона емкостью 75 см |;одержащих ту же среду в количествахi достаточных дл  того, чтобы конечный культуры составил 15-2J3 мл, а плотность клеток 1,,ОЧО клеток на мл. Колбы инкубируют при 37°С в инкубаторе с содержанием S% СОп в воздухе. Среду в колбах мен ют каждые 2-3 сут до сли ни  культур. Затем клетки в каждой колбе промывают 25 мл стерильного, физиологически нормального сол ного раствора. После удалени  промывного раствора 10 мл консервирующего вещества содержат 13,65 г/л среды гидролизата лактальбумина; 2,2 г/л NaHCO, 0,1 вес. сывороточного альбумина человека; (1,1 вес. Д-глюкозы и 0,5 вес.% фенилаланина. Из консервирующего вещества отбирают пробу дл  титров урокиназы и его пополн ют ежесуточно 10 мл того же свежего консервирующего вещества. По истечении четырехсуточного .культивировани  среДУ удал ют и клетки в каждой колбе промывают несколько раз 25 мл сол ного раствора и затем 1 н. раствором NaOH. Анализ показывает, что содержание ДШ в клетках почки человеческого эмбриона составл ет 9 мкг ДНК (10 эклеток ). . Анализ урокиназы производ т путем двухступенчатого метода с помощью йодированной фибрином плитки. В первой стадии урокиназа действует на плазминоген с образованием плазмина. Во второй стадии плазмин гидролизует радиоактивномеченый сгущенный фибриноген (фибрин) с выделением фибринопептидрв в раствор, измеренных гаммасчетчиком . Активность урокиназы затем относ т пропорционально к радиоактивности , выделенной в раствор. Единицу активности урокиназы определ ют как количество энзима, который гидролизует один мгк фибрина за час. П р им е Р2. Нормальные первичные клетки почки человеческого эмбриона культивируют до сли ни  в колбах Т-75, как описано в примере 1, также промывают в стерильном сол ном растворе и удал ют 90 мл консервирующего вещества, фенилаланин добавл ют в каждую колбу. Среду пополн ют свежей средой, которую добавл ют в колбу объемом 30 мл каждые трое суток. По истечение дев тисуточного культивировани  в фенилаланине среду удал ют, клетки промывают несколько раз и определ ют содержание ДНК и титры урокиназы как в примере 1. В данном примере консервирующее вещество состоит из 13,75 г/л среды гидролизата лактальбумина , 2,2 г/л NaHCOзи 0,1 вес. Д-Тлюкбзы. Аминокислоту и/или человемеский сывороточный альбумин (ЧСА) добавл ют в основное консервирующее вещество дл  получени  желательной конечной концентрации {в вес.%). Аналогично примеру 1 активность урокиназы определ ют в мл на день и мкг ДНК. Сравнительные, данные по выходу урокиназы представлены в таблице.
Без добавки
0,U ЧСА
0,1 ЧСА + 0,3 глицин
0,U ЧСА 0,5% глицин
Конечное содержание ДНК в клетках в каждой колбе по истечении дев тисуточного культивировани  в консервирующем веществе.
Выход урокиназы, полученный куль- ткани в жидкой питательной среде в
тивированием почечных клеток при ис- 5присутствии аминокислоты с последуюпользовании повышенных количеств фе-щим выделением целевого продукта,
нилаланина в консервирующем вещест-отличающийс  тем, что,
ве, в основном, выше, чем при ис-с целью повышени  выхода урокиназы,
пользовании других аминокислот гли-культивирование ведут в присутствии
цина, метионина, гистидина. Это улуч-ЗО0,3-0,5 0енилала «4на. шение достигаетс  и тогда, когда число клеток (т.е. содержание ДНК) по-Источники информации,
нижаетс ,прин тые во внимание при экспертизе

Claims (1)

  1. Формула изобретени 
    Способ получени  урокиназы путем Э51- Патент США If ЭЗЗОЭ
    культивировани  культуры почечнойкл. .7 опублик. 1976.
    Продолжение таблицы
SU792767757A 1978-05-24 1979-05-23 Способ получени урокиназы SU927126A3 (ru)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US05/909,137 US4190708A (en) 1978-05-24 1978-05-24 Production of urokinase

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SU927126A3 true SU927126A3 (ru) 1982-05-07

Family

ID=25426682

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SU792767757A SU927126A3 (ru) 1978-05-24 1979-05-23 Способ получени урокиназы

Country Status (10)

Country Link
US (1) US4190708A (ru)
EP (1) EP0005644B1 (ru)
JP (1) JPS54163887A (ru)
AU (1) AU522609B2 (ru)
CA (1) CA1114761A (ru)
DE (1) DE2965182D1 (ru)
DK (1) DK152138C (ru)
HU (1) HU179549B (ru)
MX (1) MX5901E (ru)
SU (1) SU927126A3 (ru)

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL8003402A (nl) * 1980-06-11 1982-01-04 Leuven Res & Dev Vzw Nieuwe plasminogeen-activator en farmaceutisch preparaat met trombolytische werking.
JPS5852634B2 (ja) * 1980-12-05 1983-11-24 株式会社林原生物化学研究所 ウロキナ−ゼの製造法
US4659655A (en) * 1981-11-25 1987-04-21 Bio-Response, Inc. Method for isolating product-producing cells
US5112755A (en) * 1982-04-15 1992-05-12 Genentech, Inc. Preparation of functional human urokinase proteins
GT198302091A (es) * 1982-05-05 1984-10-25 Activador de plasminogeno de tejido humano a),b),c).
US4853330A (en) * 1983-04-07 1989-08-01 Genentech, Inc. Human tissue plasminogen activator
US4766075A (en) * 1982-07-14 1988-08-23 Genentech, Inc. Human tissue plasminogen activator
US5185259A (en) * 1982-05-05 1993-02-09 Genentech, Inc. Truncated human tissue plasminogen activator
FI831484L (fi) 1982-05-05 1983-11-06 Genentech Inc Plasminogen aktivator foer maenskovaevnad
US5011795A (en) 1983-01-19 1991-04-30 Genentech, Inc. Human tPA production using vectors coding for DHFR protein
US4550080A (en) * 1984-06-05 1985-10-29 Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha Process for the preparation of a plasminogen activator
US5132214A (en) * 1986-04-09 1992-07-21 Monsanto Company Large scale production of plasminogen activator from normal human colon cells
US4927630A (en) * 1986-02-26 1990-05-22 Monsanto Company Tissue plasminogen activator from normal human colon cells
US4851517A (en) * 1986-02-26 1989-07-25 Monsanto Company Tissue plasminogen activator oligosaccharide from normal human colon cells
US4751084A (en) * 1986-02-26 1988-06-14 Monsanto Company Tissue plasminogen activator from normal human colon cells
US4920051A (en) * 1988-02-03 1990-04-24 Damon Biotech, Inc. Recovery of urokinase compounds
JP2548915Y2 (ja) * 1991-04-02 1997-09-24 カヤバ工業株式会社 重量物の支持装置
CN110607272B (zh) * 2019-09-23 2022-11-01 山东甲骨文生物科技有限公司 一种哺乳动物细胞培养液的添加剂及细胞培养液

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2930945A (en) * 1956-08-16 1960-03-29 Vickers Inc Power transmission
US3904480A (en) * 1972-10-24 1975-09-09 Lilly Co Eli Enhanced production of plasminogen activator
AR208001A1 (es) * 1975-03-31 1976-11-22 Abbott Lab Procedimiento mejorado para la produccion de uroquinasa
US3930944A (en) * 1975-03-31 1976-01-06 Abbott Laboratories Urokinase production

Also Published As

Publication number Publication date
JPS54163887A (en) 1979-12-26
EP0005644B1 (en) 1983-04-13
DE2965182D1 (en) 1983-05-19
US4190708A (en) 1980-02-26
DK152138B (da) 1988-02-01
DK212079A (da) 1979-11-25
AU4734379A (en) 1979-11-29
JPS629319B2 (ru) 1987-02-27
EP0005644A2 (en) 1979-11-28
HU179549B (en) 1982-11-29
EP0005644A3 (en) 1979-12-12
AU522609B2 (en) 1982-06-17
MX5901E (es) 1984-08-22
CA1114761A (en) 1981-12-22
DK152138C (da) 1988-08-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SU927126A3 (ru) Способ получени урокиназы
Barbour Isolation and cultivation of Lyme disease spirochetes.
Bowman et al. Primary culture of microvascular endothelial cells from bovine retina: selective growth using fibronectin coated substrate and plasma derived serum
US4352887A (en) Method and article for culturing differentiated cells
DK175366B1 (da) Fremgangsmåde til fremstilling af biologisk aktiv human vævstype-plasminogenaktivator
CN102517251A (zh) 一种间充质干细胞及其制备方法和应用
SE432778B (sv) Sett att adaptera normalt forankringsberoende etablerade cellinjer till suspensionskultur
CA1093995A (en) Rapid propagation of sv3t3 cells for production of mif and taf
Gilbert et al. Renal enzymes in kidney cells selected by D‐valine medium
CN115261302B (zh) 一种基质胶及其制备方法和应用
JP4233646B2 (ja) 種々の基質の安定性および/または貯蔵寿命を増加させる方法
Baker et al. ARTIFICIAL MAINTENANCE MEDIA FOR CELL AND ORGAN CULTIVATION: I. THE CULTIVATION OF FIBROBLASTS IN ARTIFICIAL AND SERUMLESS MEDIA
CN109430251A (zh) 一种脂肪组织的保存液及其制备方法与脂肪组织的保存方法
GILIN et al. Attachment and short‐term maintenance of motility and viability of Entamoeba histolytica in a defined medium
CA1054085A (en) Urokinase production
US4169761A (en) Process for the cultivation of viruses
CN117210399A (zh) 一种脐带血间充质干细胞的培养方法
CN107287158A (zh) 从小鼠致密骨中高效获取间充质干细胞的方法
Chan et al. Culture of erythropoietic cells from chick blastoderms.
CN109295136A (zh) 一种大规模生产胎儿干细胞分泌素的方法
US3930944A (en) Urokinase production
RU2039816C1 (ru) Препарат для открепления контактзависимых клеток от субстрата и дезагрегации их в культуре
Nishino et al. Sodium-dependent amino acid transport by cultured hamster cells: membrane vesicles retain transport changes due to glucose starvation and cycloheximide.
Petkus et al. Pure spherules of Coccidioides immitis in continuous culture
US4533636A (en) Medium for plant protoplast culture