SE432778B - Sett att adaptera normalt forankringsberoende etablerade cellinjer till suspensionskultur - Google Patents
Sett att adaptera normalt forankringsberoende etablerade cellinjer till suspensionskulturInfo
- Publication number
- SE432778B SE432778B SE7712376A SE7712376A SE432778B SE 432778 B SE432778 B SE 432778B SE 7712376 A SE7712376 A SE 7712376A SE 7712376 A SE7712376 A SE 7712376A SE 432778 B SE432778 B SE 432778B
- Authority
- SE
- Sweden
- Prior art keywords
- cells
- medium
- culture
- cell line
- cell
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2509/00—Methods for the dissociation of cells, e.g. specific use of enzymes
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Description
7712376-s
10
15
20
25
30
35
2 _
tillfredsställande ersätta kontakt mellan cell och substrat, varigenom det blir
möjligt med vätskesuspensionstillväxt av normalt förankringsberoende celler.
Cellerna fortsätter att delas med samma fördubblingstid som vid substratbundna
kulturer med föga eller ingen erforderlig adaptationsperiod.
Den långa adaptationsprocess, 'som tidigare vanligen erfordrats för
omvandling från substratförankringsberoende till encellsuspensionskultur , inbe-
griper selektering av celler med skilda egenskaper och potentiell förlust av den
önskade produkten. Den snabba omvandlingen till aggregatsuspension, enligt
definitionen häri kräver inte sådan selektion och undviker generellt förlust av
cellegenskaper. Celler kan förökas under långa perioder som aggregatsus-
pensioner eller kan ofta omvandlas från substratbundna kulturer, 'om fortsatt
suspensionsförökning innebär selektion mot några önskade egenskaper. Celler kan
även hållas frusna under långa tidsperioder, tinas upp och ympas i den
substratbundna kulturen och snabbt omvandlas till aggregatsuspension enligt
uppfinningen.
Den önskade cellinjen odlas först i en substratbunden kultur. Under den
substratbundna tillväxtpedrioden skall cellinjen adapteras för snabb tillväxt i
samma medium, som därefter skall användas i suspensionskulturen.
En mångfald normalt förankringsberoende etablerade däggdjurscellinjer
har snabbt adapterats till tillväxt i agiterad vätskesuspensionskultur medelst
sättet enligt uppfinningen. Dessa cellinjer, som är exempel och illustration av
uppfinningenmen inte utgör någon begränsning av denna, är följande:
Den SV-ll0 transformerade humana lungcellinjen betecknas Wi 38, VAl3:
ATCC nr CCL 75.1. ' _ '
Den SV-ll-O transformerade humana lungcellinjen betecknas 1V126, VA4:
ATCC nr CCL 95.1.
Den SV-llO transformerade musnjurcellinjen betecknad TCMK-1: ATCC
nr 139.
Den renala adenocoarcinoma muscellinjen betecknad RAG: ATCC nr
CCL M2.
Den Kirstenvirus-transformerade musembryoceliinjen betecknad KNlH.
Den SV-ßfitransformerade musembryocellinjen betecknad SV3T3.
Kulturer av sistnämnda tvâ cellinjer för användning vid uppfinningen har
erhållits från Dr. Judah Folkman vid Harvard Medical School, medan kulturer av
de andra erhölls från American TypeiCulture Collection, Rockland, Maryland.
KNll-l-cellinjen är härledd från NIH musembryofibroblaster, ursprungligen
odlade av Jainchill m.fl. J. Virology, 14-, 549-53 (1969), vilka transformerats genom
Kirstenvirus, ett murinsarkomvirus isolerat av Kirsten m.fl., J. Nat. . Cancer.
Inst. 39, 311-35 (1967).
10
15
-20
25
30
35
7712376-8
3
Andra lämpliga etablerade cellirxjer för adaptation till agiterad vätske-
suspensionskultur enligt sättet enligt uppfinningen är uppenbara för fackmannen.
För uppfinningens ändamål menas med uttrycket "etablerad" cellinje en cellinje,
som demonstrerar potentialen att obegränsat kunna subkultiveras in vitro. Detta
är i enlighet med den användning av djurvävnadskulturtermer som föreslagits, av
S. Federoff och accepterats av Tissue Culture Association vid dess årsmöte den 3
juni 1966 i San Francisco. _
Lämpliga odlingsmedier för cellväxten innehåller assimilerbara källor för
kväve, kol och oorganiska salter. Dessa kan vara något av de välkända
vävnadskulturmedierna, exempelvis Basal Medium Eagle's (BME), Eagle's Mini-
mum Essential Medium (MED), Dulbeccds Modified Eagle Medium, Medium 199
och balanserade saltlösningar (B55) såsom de från Earle och Hanks förstärkta
med olika näringsämnen. Dessa är kommersiellt tillgängliga vävnadskulturmedier
och beskrivs i detalj av HJ. Morton i ln Vitro, 6, 89-108 (1970). Dessa
kulturmedier innehåller kända essentiella aminosyror, mineralsalter, vitaminer
och kolhydrater. De är även ofta förstärkta med däggdjurssera såsom fetalt
kalvserum.
Före suspensionsodlingen skall den etablerade cellinjen odlas i det
önskade kulturmediet till ett stadium förbi det för vanlig enkelskikttillväxt i en
substratbunden kultur, varigenom flerskikt av celler bildas och cell-till-
cellkontakter upprättas i tre dimensioner. Detta kan genomföras genom att man
ofta återympar de substratbundna cellerna utan subkultivering. Denna tillväxt
kan genomföras i vanliga odlingsflaskor såsom Falconflaskor om 75 cmz.
Den behandling, som används för att frigöra cellerna från substratet, är
kritisk. Den måste vara sådan, att den ger aggregat eller klumpar av celler, som
går från cirka 20p till cirka 500 p i diameter. Inom detta omrâde är det
föredraget att cirka 75% av cellerna är i aggregat om cirka sex till cirka 100
celler per aggregat. Det inses att en liten andel enkelceller kan vara närvarande
på grund av att de misslyckats att klumpa samman eller som resultat av
separation från cellaggregaten under hanteringen av cellerna. Det är föredraget
att undvika överföring av ett otillbörligt antal sådana enkelceller till den
agiterade vätskesuspensionskulturen, eftersom de tenderar att dö. Då cellaggre-
gaten är alltför stora, t.ex. större än cirka 500 p i diameter, när otillräckligt med
näringsämnen de celler som befinner sig i mitten och toxiska material bildas,
vilka inhiberar tillväxten eller förstör livsdugligheten hos cellerna.
Den önskade frigöringen av cellerna från substratet underlättas genom
enzymatisk dissociation såsom trypsinisering och liknande vid rumstemperatur
(generellt cirka 20-2500, följt av noggrann observation under mikroskop.
Enzymbehandlingen kan resultera i tre olika fysikaliska arrangemang av celler,
7712376-8
10
15
20
25
30
35
4
nämligen som enkelceller, som aggregat eller klumpar av celler eller som stora
cellsjok. Då cellerna frigörs i aggregat av den önskade storleken, är ingen
ytterligare behandling nödvändig. Om cellerna emellertid frigörs övervägande en
och en eller i stora sjok måste ytterligare åtgärder vidtagas. Vid frigöring en och
en får kulturflaskorna stå vid rumstemperatur tills de önskade klumparna bildas.
De cellerna, som frigjorts genom den enzymatiska behandlingen, är klibbiga och
kommer att efter en tid bilda aggregat, om de inte agiteras. När stora cellsjok
bildas, skall dessa uppdelas eller sönderbrytas till den önskade aggregatstorleken
genom försiktig agitering såsom skakning eller genom passage genom en liten
öppning, t.ex. en pipettspets eller nål med den önskade diametern. _
Enzymer lämpliga för användning vid ovanstående frigöring av celler från
substratet är, som exempel men ingen begränsning trypsin, pronas, collagenas och
hyaluronidas. Trypsin är det föredragna enzymet, och det är lätt tillgängligt
kommersiellt från sådana enzymtillverkare som Miles Laboratories, lnc. och
Worthington Biochemical Corp. För bakgrundsinformation beträffande använd-
ningen av dessa enzymer i primär vävnadsdissociation hänvisas till Kruse och
Patterson, Tissue Culture Methods and Applications, Academic Press, 1973
sektion l, sid. 3-36. '
Efter lämplig frigöring från substratet överförs cellaggregaten till ett
snabbt omrört spinnerkärl, som innehåller färskt kulturmedium. Dessa kärl kan
- vara tillverkade exempelvis av glas, plast eller metall. En rostfri stålmantel-
fermentor av den typ, som tillverkas av New Brunswick Scientific Co. Inc., är i
allmänhet lämplig när den modifieras genom att bafflarna tas bort, och likaledes
är glasspinnflaskor av den typ, som tillverkas av Bellco Glass Inc. lämpliga.
Illustrativa exempel på sådana fermentorer är de anordningar, som beskrivs i US-
A-3.445.34l och 3. 445.342. Exempel på omrörda spinnflaskor är sådana, som
beskrivs i US-A-2.958.5l7 och 3.622.129. En annan sådan apparat för agiterad
vätskesuspensionsodling i stor skala beskrivs i US-A-3.039.932. Omrörningshas-
tigheten vid användning av dessa spinnkärl är företrädesvis från cirka 200 till
cirka 300 varv/min. _
För att säkerställa tillfredsställande förökning av cellerna i suspensions-
kulturen bör koncentrationen av celler som överförs från det vídhäftade
substratet till spinnkärlet vara minst 106 celler/ml av suspensionen.
Under suspensionskulturens tillväxtperiod bör pH hållas vid cirka 6,7 till
cirka 7,7 och företrädesvis vid cirka 7,0 till cirka 7,4. Detta pH kan lämpligen'
bibehâllas genom användning av en lämplig buffert som t.ex. fosfatbuffrad
koksaltlösning (PBS) eller andra välkända buffertar som har angivet pH.
Kulturtemperaturen skall gå från cirka 30°C till cirka 38°C och före-
trädesvis från cirka 35°C till cirka 37°C.
10
20
25
30
.40
7712376-8
5
Under suspensionskulturtillväxtperioden kan successiva överföringar av
de växande cellerna till färska media föras med .förutbestämda periodiska
intervall. Dessa överföringar kan göras till allt större odlingskärl innehållande
färska näringsmedier såsom förut för att underlätta snabb förökning av cellerna i
stor skala. _
Efter lämplig celltillväxt, exempelvis efter en tvåveckors cellodlings-
period vid 35-37°C, kan cellerna skördas från suspensionen, t.ex. genom
sedimentering eller centrifugering vid 200-1000 g. De packade cellerna tvättas
sedan omsorgsfullt, t.ex. i koksaltlösning, lakterad Ringers lösning, PBS eller
andra sådana vattenlösningar, som har ett pl-l från cirka 6,7 till cirka 7,7 och
företrädesvis från cirka 7,0 till cirka 7,l+. De tvättade cellerna kan behållas för
ytterligare användning efter behov eller extraheras med avseende på önskade
produkter, t.ex. enzymer, hormoner, antikroppar och cellmetaboliter.
Följande detaljerade Exempel illustrerar uppfinningen ytterligare, men
uppfinningen är inte begränsad till dessa specifika Exempel.
Exempel 1.
En kultur av den SV-ll0 transformerade humana lungcellinjen, betecknad
Wl26, VAÅL, erhölls från American Type Culture Collection under depositionsnum-
mer CCI. 95.1. Kulturen hölls under 60 dagar substratbunden i en 75 cmz
Falconkolv av plast. Under denna period adapterades cellerna till det medium,
som skulle användas för efterföljande suspensionskultur, nämligen Dulbecco's
Modified Minimum Essential Medium med 4,5 g/ml glukos och med tillsats av
10% fetalt kalvserum. Cellerna subkultiverades med veckointervall och mediet
tillfördes färskt medium varannan dag. Under de sista två veckorna subkultivera-
des inte cellerna, men underhölls med daglig mediumpåfyllning.
Efter de 60 dagarna skördades sex 75 cm kolvar med tätt packade
flerskiktceller enligt följande:
Det förbrukade mediet hälldes av. Fosfatbuffrad koksaltlösning (PBS) vid
pH 7,2 med 0,02% dinatrium-etylendiamintetraacetat (EDTA) användes för att
skölja de vidhäftade cellerna. Sköljningen upprepades. Därefter tillsattes 5 ml
0,296 trypsin i PBS med 0,02% EDTA och fick stå över cellerna i rumstemperatur.
Kolvarna observerades noggrant i ett omvänt mikroskop. Efter tre minuters
hâlltid gav lätt agitering av kolvarna cellaggregat i det önskade området av 20 p
till 50011 diameter. Denna agitering åstadkoms genom att man höll kolven
upprätt i en hand med cellerna fästa vid ytan under vätskan och sakta slog den i
den andra handflatan. Sålunda åstadkoms en rörelse, som gick från långsamma
vågor till turbulent tvättning av cellerna i vätskan. Cellerna utsattes därigenom
för en skjuvningskraft mellan den rörliga vätskan och den relativt stationära
kolven.
Den resulterande 5 ml cellaggregatsuspensionen överfördes till en 500 ml
7712576-8
l0
15
20
25
30
35
6
Bellco spinnerkolv innehållande 200 ml medium. Kulturen inkuberades i ett varmt
rum vid 37°C med en omrörningshastighet av cirka 250 varv/min. Cellerna
fortsatte att växa utan att minskad eller fördröjd hastighet observerades.
Medium tillfördes med periodiska intervall och kulturen överfördes tillfstörre
kärl enligt följande:
Efter 4-8 timmar tillsattes ytterligare medium för att bringa den totala
suspensionsvolymen till 500 ml.
Efter totalt 144 timmar användes 400 ml av suspensionen för att
inokulera en 3 liters Bellco spinnerbehâllare innehållande 21 medium. 400 rnl
färskt medium sattes till den ursprungliga 500 ml spinnerflaskan. 3 liters
i luft. Båda
flaskorna omrördes fortsättningsvis vid 250 varv/min i det 37°C varma rummet.
spinnerflaskan överskiktades med en liter per minut av 5% C02
Volymen av suspensionen i 3 liters spinnerflaskan ökades till 4 liter (en
liter över den nominella kapaciteten) med färskt medium efter totalt 240
timmars aggregatsuspensionsodling. 500 ml spinnerflaskan skördades sedan och
cellerna frystes i flytande kväve vid denna tidpunkt.
Efter 335 timmar överfördes 3 liter av suspensionen till en 12 liters
spinnerbehållare och färskt medium sattes till 3 liters- och l2-litersspinnerflas-
korna för att bringa deras volymer till 4 resp. 12 liter. Båda inkuberades med 5%
C02 i överstâende luft vid 37°C och 250 varv/min.
Efter totalt 480 timmar efter initieringen av aggregatsuspensionskultur-
en skördades 16 liters suspensionen genom centrifugering för att ge 30 ml
packade celler. DNA-bestämning (140 l' 2,5 mg DNA) indikerade ett utbyte av
cirka 1,0 t 0,03 x 1010 celler.
Exempel 2
En annan normalt förankringsberoende human cellinje, nämligen den SV-
40 transformerade humana lungcellinjen betecknad WI38, VA13 (ATCC nr CCL
75,1), adapterades snabbt till agiterad vätskesuspensionskultur under väsentligen
samma procedurer och förhållanden som användes vid Exempel 1. Efter totalt 38
dagar efter initieringen av aggregatsuspensionskulturen skördades 16 liter av
suspensionen och gav 1,84 f 0,3 x 1010 celler.
Exempel 3.
En tredje normalt förankringsberoende cellinje, nämligen den SV-40
transformerade musnjurcellinjen betecknad TCMK-l (ATCC nr CCL 139),
adapterades till agiterad vätskesuspensionskultur under väsentligen samma
procedurer och förhållanden som vid Exempel 1. Efter totalt 19 dagar efter
lnitieringen av aggregatsuspensionskulturen skördades 16 liter av suspensionen
och gav 2,57 i' 0,05 x 1010 ceuef.
l0
15
20
:s
7712376-8
7
Exempelfl _
En annan normalt förankringsberoende muscellinje, nämligen den SV-40
transformerade musembryocellinjen betecknad SV3T3, adapterades snabbt till
agiterad vätskesuspensionskultur under väsentligen samma procedurer och förhål-
landen som vid Exempel l. Efter totalt l-'L dagar efter initieringen av
aggregatsuspensionskulturen skördades 60 liter av suspensionen och gav 8,11'
0,22 x 1010 celler.
Exempel 5.
En annan normalt förankringsberoende musembryocellinje, nämligen den
Kirsten-virustransformerade cellinjen, betecknad KNIH, adapterades snabbt till
agiterad vätskesuspensionskultur under väsentligen samma procedurer och förhål-
landen som i Exempel 1. Efter totalt 15 dagar efter initieringen av aggregatsus-
pensionskulturen skördades 60 liter av suspensionen och gav en visuellt
observerad, betydande cellmängd, även om ingen faktisk cellräkning gjordes
såsom vid Exempel 1.
Exempel 6.
Ännu en normalt förankringsberoende muscellinje, nämligen den renala
adenocarcinomamuscellinjen betecknad RAG (ATCC nr CCL 142), adapterades
snabbt till agiterad vätskesuspensionskultur under väsentligen samma procedurer
och förhållanden som i Exempel l. Efter totalt l0 dagar efter initieringelt av
aggregatsuspensionskulturen skördades 4 liter av suspensionen och gav en visuellt
observerad betydande celimängd, även om ingen faktisk cellräkning genomfördes
som i Exempel l.
Många andra exempel är uppenbara för den fackman, som studerat
föreliggande beskrivning, och uppfinningen är avsedd .att omfatta alla sådana
exempel, som ligger inom ramen för de bifogade patentkraven.
Claims (6)
- l. Sätt att snabbt adaptera normalt förankringsberoende etablerade cell- linjer till agiterad vätskesuspensionskultur, k ä n n e t e c k n a t av att man på i och för sig känt sätt odlar ett inokulum av nämnda cellinje på en härför lämpad yta till ett stadium förbi det för vanlig enkelskikttillväxt, varigenom ílerskikt av celler bildas, frigör de ytförankrade 7 cellerna genom enzymatisk dissociation, såsom tryptinisering, följt av försiktig agitering, så att man får cellaggregat från 20 mikron till 500 mikron i diameter, överför dessa oellaggregat till en vätskesuspension av näringskulturmedium av kända essentiella aminosyror, mineralsalter, vitaminer och kolhydrater, inkuberar vid en temperatur från 30 till 38°C, under det att man väsentligen kontinuerligt upprätthåller agitering av mediet, periodiskt överför de växande cellerna till färskt näringsmedium och fortsätter den agiterade inkubationen, varigenom cellerna fortsätter att förökas i aggregat.
- 2. Sätt enligt krav 1, g k ä n n e t e c k n a t av att inkubationstemperaturen är från 35 till ca 37°C.
- 3. Sätt enligt krav l eller 2, k ä n n e t e c k n a t av att näringskulturmediet är förstärkt med däggdjurs- SeFUm.
- 4. Sätt enligt något av kraven i, 2 eller 3, k ä n n e t e c k n a t av att cellinjen är enSV-llfl-transformerad cellinje.
- 5. Sätt enligt något av kraven l-li, k ä n n e t e c k n at av att näringskulturmediet är Dulbecco's Modified Minimum Essential Medium.
- 6. Sätt enligt något av kraven 1-5, k ä n n e t e c k n a t av att frigöringen av cellerna från den substratfixerade kulturen dessutom åtföljs av omsorgsfull observation med hjälp av ett mikroskop för att säkerställa bildningen av cellaggregat inom nämnda diameteromrâde.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US05/738,515 US4059485A (en) | 1976-11-03 | 1976-11-03 | Adaptation of cell lines to suspension culture |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SE7712376L SE7712376L (sv) | 1978-05-04 |
SE432778B true SE432778B (sv) | 1984-04-16 |
Family
ID=24968344
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SE7712376A SE432778B (sv) | 1976-11-03 | 1977-11-02 | Sett att adaptera normalt forankringsberoende etablerade cellinjer till suspensionskultur |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4059485A (sv) |
JP (1) | JPS5359091A (sv) |
BE (1) | BE860413A (sv) |
CA (1) | CA1093994A (sv) |
DE (1) | DE2749022C2 (sv) |
FR (1) | FR2370095A1 (sv) |
GB (1) | GB1535490A (sv) |
IL (1) | IL53281A0 (sv) |
IT (1) | IT1088864B (sv) |
SE (1) | SE432778B (sv) |
Families Citing this family (21)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4184916A (en) * | 1977-11-14 | 1980-01-22 | Monsanto Company | Continuous cell culture system |
US4210718A (en) * | 1978-12-29 | 1980-07-01 | Monsanto Company | Production of tumor angiogenesis factor by cell culture |
US4210719A (en) * | 1978-12-29 | 1980-07-01 | Monsanto Company | Production of tumor angiogenesis factor by cell culture |
US4209587A (en) * | 1978-12-29 | 1980-06-24 | Monsanto Company | Production of tumor angiogenesis factor by cell culture |
US4229532A (en) * | 1978-12-29 | 1980-10-21 | Monsanto Company | Production of tumor angiogenesis factor by cell culture |
US4229531A (en) * | 1978-12-29 | 1980-10-21 | Monsanto Company | Production of tumor angiogenesis factor by cell culture |
US4225670A (en) * | 1978-12-29 | 1980-09-30 | Monsanto Company | Production of tumor angiogenesis factor by cell culture |
US4217412A (en) * | 1979-04-25 | 1980-08-12 | President And Fellows Of Harvard College | Production of tumor angiogenesis factor by cell culture |
US4335215A (en) * | 1980-08-27 | 1982-06-15 | Monsanto Company | Method of growing anchorage-dependent cells |
US5998200A (en) * | 1985-06-14 | 1999-12-07 | Duke University | Anti-fouling methods using enzyme coatings |
US5219752A (en) * | 1988-05-25 | 1993-06-15 | Teijin, Limited | Process for continuously culturing adherent animal cells |
AT393277B (de) * | 1990-01-04 | 1991-09-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung von fruehsommer- meningoenzephalitis-virus (fsme-virus)-antigen |
US20050266548A1 (en) * | 1995-03-28 | 2005-12-01 | Kbi Biopharma, Inc. | Biocatalyst chamber encapsulation system for bioremediation and fermentation with improved rotor |
US6916652B2 (en) * | 1995-03-28 | 2005-07-12 | Kinetic Biosystems, Inc. | Biocatalyst chamber encapsulation system for bioremediation and fermentation |
US6214617B1 (en) | 1995-03-28 | 2001-04-10 | Kinetic Biosystems, Inc. | Centrifugal fermentation process |
US6660509B1 (en) | 1995-03-28 | 2003-12-09 | Kinetic Biosystems, Inc. | Methods and devices for remediation and fermentation |
US5622819A (en) * | 1995-03-28 | 1997-04-22 | Kinetic Biosystems, Inc. | Centrifugal fermentation process |
US6133019A (en) * | 1995-03-28 | 2000-10-17 | Kinetic Biosystems, Inc. | Centrifugal fermentation process |
ES2248920T3 (es) * | 1997-10-25 | 2006-03-16 | Roche Diagnostics Gmbh | Lineas celulares de encapsidacion en suspension para vectores retrovirales. |
AU2001236601A1 (en) | 2000-01-31 | 2001-08-07 | Robert A. Cuneo | Methods and devices for remediation and fermentation |
CN114196634A (zh) * | 2021-12-15 | 2022-03-18 | 香港大学深圳医院 | 一种循环肿瘤细胞系的建立方法 |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3850748A (en) * | 1973-06-28 | 1974-11-26 | Lilly Co Eli | Method of producing animal cells in suspension culture |
-
1976
- 1976-11-03 US US05/738,515 patent/US4059485A/en not_active Expired - Lifetime
-
1977
- 1977-11-02 SE SE7712376A patent/SE432778B/sv not_active IP Right Cessation
- 1977-11-02 GB GB45501/77A patent/GB1535490A/en not_active Expired
- 1977-11-02 FR FR7732957A patent/FR2370095A1/fr active Granted
- 1977-11-02 JP JP13216577A patent/JPS5359091A/ja active Granted
- 1977-11-02 CA CA290,090A patent/CA1093994A/en not_active Expired
- 1977-11-02 IL IL53281A patent/IL53281A0/xx not_active IP Right Cessation
- 1977-11-02 DE DE2749022A patent/DE2749022C2/de not_active Expired
- 1977-11-02 IT IT29257/77A patent/IT1088864B/it active
- 1977-11-03 BE BE182290A patent/BE860413A/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
DE2749022C2 (de) | 1986-10-30 |
FR2370095B1 (sv) | 1980-06-06 |
JPS629318B2 (sv) | 1987-02-27 |
FR2370095A1 (fr) | 1978-06-02 |
IL53281A0 (en) | 1978-01-31 |
IT1088864B (it) | 1985-06-10 |
US4059485A (en) | 1977-11-22 |
CA1093994A (en) | 1981-01-20 |
GB1535490A (en) | 1978-12-13 |
DE2749022A1 (de) | 1978-05-18 |
JPS5359091A (en) | 1978-05-27 |
SE7712376L (sv) | 1978-05-04 |
BE860413A (fr) | 1978-05-03 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
SE432778B (sv) | Sett att adaptera normalt forankringsberoende etablerade cellinjer till suspensionskultur | |
Folkman et al. | Long-term culture of capillary endothelial cells. | |
Masters | Animal cell culture: a practical approach | |
US8741638B2 (en) | In vitro expansion of postpartum-derived cells in roller bottles | |
Iype | Cultures from adult rat liver cells I. Establishment of monolayer cell‐cultures from normal liver | |
CN106754668A (zh) | 一种干细胞培养液及注射液 | |
CN104630144A (zh) | 一种脐血间充质干细胞的分离及培养方法 | |
US4059486A (en) | Cell culture process | |
Wang et al. | Bead-to-bead transfer of Vero cells in microcarrier culture | |
CN103153318A (zh) | 用于细胞的生物反应器放大的细胞培养系统 | |
CN105543164A (zh) | 一种原代奶牛乳腺上皮细胞的分离培养方法 | |
SU927126A3 (ru) | Способ получени урокиназы | |
WO2018186419A1 (ja) | 間葉系幹細胞を含む細胞集団とその製造方法、及び医薬組成物 | |
JP2018537073A (ja) | 中空繊維バイオリアクターを用いた細胞の製造方法 | |
CN107208059A (zh) | 血管平滑肌细胞的培养方法 | |
CN101848718A (zh) | 用于组织再生的细胞组合物 | |
CN101831403B (zh) | 体外扩增人脐带胎盘间充质干细胞的方法 | |
CN104988112A (zh) | 一种sd大鼠胸主动脉平滑肌细胞的分离和培养方法 | |
Ziegler et al. | The propagation of mammalian cells in a 20-liter stainless steel fermentor | |
CN104726401A (zh) | 一种利用胎盘间充质干细胞提高脐血间充质干细胞培养成功率的方法 | |
CN103773733B (zh) | 一种哺乳动物肌内脂肪细胞和骨骼肌细胞分层共培养方法 | |
CN106754667A (zh) | 一种围产期间充质干细胞二次分离培养方法 | |
CN103710305B (zh) | 使用含有海藻糖的细胞洗涤溶液的贴壁细胞的洗涤方法 | |
CN114292804A (zh) | 一种血管化脂肪类器官培养方法 | |
CN104120106B (zh) | 利用猪去分化脂肪细胞诱导分化形成骨骼肌细胞的方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
NAL | Patent in force |
Ref document number: 7712376-8 Format of ref document f/p: F |
|
NUG | Patent has lapsed |
Ref document number: 7712376-8 Format of ref document f/p: F |