SU793408A3 - Способ получени азотсодержащего полисахарида, промотирующего чувствительность к лекарствам у бактерий, устойчивых к антибиотикам - Google Patents
Способ получени азотсодержащего полисахарида, промотирующего чувствительность к лекарствам у бактерий, устойчивых к антибиотикам Download PDFInfo
- Publication number
- SU793408A3 SU793408A3 SU782602548A SU2602548A SU793408A3 SU 793408 A3 SU793408 A3 SU 793408A3 SU 782602548 A SU782602548 A SU 782602548A SU 2602548 A SU2602548 A SU 2602548A SU 793408 A3 SU793408 A3 SU 793408A3
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- nitrogen
- containing polysaccharide
- mice
- resistant
- bacteria
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/37—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from fungi
- C07K14/375—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from fungi from Basidiomycetes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
Вещество представл ет собой поро кообразный к коричневый по цвету ма териал, который не имеет определенн температуры плавлени и карбонизует при сильном нагревании. Оно не раст вор етс в органических растворител х , таких как пиридин, хлороформ, |бензол, гексан и т.д., но раствор етс в воде. Инфракрасный спектр этого вещест ва характеризуетс наличием полос п глощени в области 3600-3200 см , 2920-2900 см 1660-1610 см 1460 1410 см , 1360 см-, 1230 cм- 1150 1080 см-, 1060-990 см 925 смЧ 890 см- 840 см 755 см и Таким -образом, в ИК-спектре азотсодержащего полисахарида имеетс полоса поглощени в области 890 см, характерна дл |Ь-св зей глюкана в . харидной части молекулы, и друга п лоса поглощени в области 840 см пот-лгнпрни и пйп г-ти ЙЛП г-м характерна дл ck-св зей глюкана. Элементарный анализ азотсодержащего полисахарида показывает -следую щий состав.вещества: содержание угл рода от 42 до 46%, содержание водорода от 5,3 до 7,0% и содержание аз та от 0,5 до 8,0%. Все остальное по балансу приходитс на долю кислорода . Оптическое вращение азотсодержащ го полисахарида, определенное стандартным методом и выраженное через величину удельного оптического вращени dv варьируетс от О до 50 . Азотсодержащий полисахарид дает положительную реакцию с фенолсерной кислотой, положительную реакцию - с антронсерной кислотой и положительную реакцию с нингидрином. Тот факт что это вещество дает положительные цветные реакции с указанными реаген тами, вл етс свидетельством того, что активное вещество включает в своем составе сахаридную и белковую часть, т.е. вл етс гликопротеином Дл определени углеводного состава азотсодержащего полисахарида образец вещества гнцролизуют метанольным раствором хлористоводородной (сол ной ) кислоты и, после триметилсилили ровани известным методом, анализируют гидролизат - методом газо-жидкостной хроматографии. Результаты анализа показали, что полисахарид состоит в основном из глюкозы, а так же содержит маннозу, галактозу, ксилозу и фукозу. Аминокислотный ана лиз белковой части азотсодержащего п лисахарида позволил определить, что белкова часть вещества включает в своем составе аспарагиновую кислоту треонин, серии, глутамйновую кислоту , пролин, глицин, аланин, цистин, валин, метионин, изолейцин, лейцин, тирозин, триптофан, фенилаланин, лизин, гистидин и аргинин.Основна дол среди этих аминокислот приходитс на аспарагиновую кислоту, треонин, глутамйновую кислоту, глицин, аланин, валин и лейцин. Суммарна дол этих аминокислот от общего аминокислотного состава составл ет более 70%. Исследование азотсодержащего полисахарида методом, дерного магнитного ,резонанса провод т с целью определе- ни отношени между углеводной (сахаридной ) и белковой част ми в указанном веществе, а также дл . уточнени типа св зей в углеводной части этого вещества . Спектр протонного магнитного резонанса (ИМР-спектр) образца азотсодержащего полисахарида снимают на ЯМР-спектрометре с напр женностью магнитного пол в 100 мегагерц, использу в качестве растворител т желую воду, а в качестве внутреннего стандарта 2,2-диметил-2-силанопентан-5-сульфонат . В спектре ЯМР исследуемого вещества имеютс полосы поглощени в области 0,9-0,2-1,,2 миллионных долей, 2,0±0,2 миллионных долей, 4,5tO,2 миллионных долей, 4,,2 миллионных долей, 5,,2 миллионных долей и 5,,2 миллионных долей соответственно, в спектре видна также широка полоса поглощени в области 3,4-4,4 миллионных долей . Белкова компонента вещества изучена , исход из допущени , что область от 0,5 до 2,5 миллионных долей ..св зана с интенсивностью сигналов : ротонов белковой части образца, а область от 2,5 до 6,0 миллионных долей св зана с интенсивностью сигналов протонов углеводной (сахаридной) части образца. При этом дол белковой части была оценена менее чем в 40%. Исход из того, что область. от 4,4 до 4,9 миллионных долей св зана с /Ь-св з ми в сахаридной части образца, а область от 4,9 до 5,4 миллионных долей св зана с ч-св з ми, удалось определить, что их отношение, т.е. отношение числа fc-св зей к числу d. -св зей в полисахаридной части гликопротеина варьируетс от 85/15 до 40/60. Молекул рный вес азотсодержащего полиса}сарида, измеренный методом ультрацентрифугировани , варьируют , дл различных образцов исслед емого вещества в диапащоне от до 300000 . Испытани азотсодержащего полисахарида на острую токсичность провод т на мышах линии ICR-ЗСЬ, имеющих возраст от 4 до 5 недель и вес щих от 21 до 24 граммов, и на крысах линии Донриу, имеющих возраст от 4 о 5 недель и вес щих от 100 до 150 граммов. Азотсодержащий полисахарид раствор ют в физиологическом солевом растворе и вйод т животным внутривенно , подкожно, внутрибрюшинно и иерорально. Общие симптомы воздейс ви вещества на подопытных животных гибель животных и изменение их вес наблюдают в течение 7 дней, после чего животных забивают и провод т аутопсию (вскрытие трупов). В резу тате проведенных испытаний не было зафиксировано ни одного случа гибе |ли животных, ни на крысах, ни на м ШАх, даже при введении им самой высокой дозы из тех, что показаны на приведенной ниже таблице 1. В табл. 1 представлены вводимые дозы азотсодержащего полисахарида. Таблица 1300 1300 Внутривенный 5000 5000 Подкожный Внутрибрюишнный 5000 5000 Пероральный 20000 2000 Внутривенный 600 600 Подкожный 5000 5000 Внутрибрюшинный 5000 5000 Пероральный 20000 2000 К числу антибиотиков, которые пр вл ют свое действие против резистентных к лекарственных препаратам бактерий в комбинации с азотсодержа щим полисахаридом, относ тс , антибиотики , вьщеленные из плесеней, пл невых грибов, бактерий, актиномицетов и других микроорганизмов. Типич ные примеры таких антибиотиков пере числены ниже: Пенициллин &(ниже он сокращенн обозначен как PG) Стрептомицин (SM) Канамицин (КМ) Хлорамфеникол (СР) Тетрациклин (,ТС) Эритромицин (ЕМ) Аминобензилпенициллин (АВРС) Цефалоридин (СЕ) колистин (CER) Эффект, вызываемый азотсодержащим полисахаридом, состоит в промотировании (стимулировании) чувствительности к лекарствам у следующих резистентных к лекарственным препаратам (антибиотикам) бактерий: Es che г i ch i а со 1 i Streptococcus faecalis Stcephy1ococcus aureus tnterobacter aerogenes Salmonella enteritides Shigella Sonnei Klebsiella Ptoreus mirabilis Pseu domona ч . r i no sa Действие азотсодержащего полисахарида по стимулированию чувствительности к лекарствам у резистентных к антибиотикам штаммов бактерий подтверждено следующим образом. Резистентные к антибиотикам штаммы бактерий получены с помощью метода , описанного ниже, при выращивании культуры в градиентной чашке (в чашке Петри с концентрационным градиентом -соответствующего антибиотика ). Чашки Петри с агаровой средой и с концентрационным градиентом лекарсвенного вещества в диапазоне от 10 до 100 микрограмм/мл подготавливают надлежащим образом и используют дл инокул ции бактерий каждого штамма методами штриховой разводки или мазка . Эти чашки инкубируют при 37°С в течение нескольких дней и колонии бактерий, сформировавшиес в области высокой концентрации антибиотика, отдел ют и снова инокулируют аналогичным образом в другие чашки. Подобную операцию повтор ют несколько раз с целью получени бактериальных штаммов , резистентных к cooтвeтcтвyJOщим лекарственным веществам (антибиотикам ). Лекарственную чувствительность штаммов, резистентных к антибиотикам , и первоначальных штаммов тех же бактерий (чувствительных штаммов) сравнивают путем нахождени минимальной ингибирующей концентрации, т.е. минимальной концентрации соответствующего лекарственного соединени , ингибирующей рост бактерий ( чиже эта величина сокращенно обозначена как МИК) . Были приготовлены двойные разбавленные системы каждого лекарства, которые смешивают с агаровой средой дл вливаний с целью подготовки чашек с агаровой средой. Затем отбирают петелькой образец каждого штамма, который культивируют при 37°С на Трипто-соевом бульоне в течение 18 ч, и нанос т мазком на каждую чашку. После культивировани в течение 18 ч при температуре 37°С в каждой чашке провер ют степень роста инокулированного бактериального штамма. Дл того, чтобы увидеть, насколько измен етс минимальна ингибирующа концентраци Смик) дл каждого резистентного штаг1ма при комбинированном использовании полисахарида и соответствующих антибиотиков (тех, которые перестали действовать на определенные бактериальные штаммы), провод т процедуру, аналогичную вышеописанной , с тем исключением, что в системы добавл ют, с целью получени соответствующих комбинаций, от 10 до 1000 микрограммов/мл азотсоержащего полисахарида, и величину ИК определ ют в соответствии с вышеупом нутым методом, основанном на использовании чашек с агаровой средой и концентрационным градиентом антибиотиков.
При этом наблюдаетс отчетливо выраженный эффект - величина минимальной ингибирующей концентрации СМИК) уменьшалась в результате прибавлени азотсодержащего полисахарида по крайней мере на половину по сравнению с уровнем, который фиксировалс до прибавлени , или даже еще ниже. Количество прибавл емого азотсодержащего полисахарида состав л ет более 10 микрограммов/мл, а в предпочтительном варианте - более 100 микрограммов/мл. Величину рН среды поддерживают при этом на уровне 7,2-0,1 с тем, чтобы на определ емую величину МИК не оказывало вли ние рН среды. Кроме того, использу метод культивировани в услови х разбавлени агаровой среды, азотсодержащий полисахарид сам по себе не обладает антибактериальной активностью против бактериальных штаммов, отобранных дл проведени испытаний Терапевтический тест по воздействию на инфекционные заболевани провод т следующим образом. Подопытной мыши ввод т внутрибрюшинно, с целью заражени , 1x10 клеток лекарственнорезистентных бактерий. Через 1-3 ч после этого мьошам ввод т либо внутрибрюшинно , либо перорально от 10 до 1000 миллиграммов на килограмм веса тела мыши соответствующего лекарства и от 1 до 10 миллиграммов/кг азотсодержащего полисахарида Наблюдение за подопытными животными продолжают в течение 7 дней после введени с целью изучени их выживаемости и оценки эффективности действи азотсодержащего полисахарида. Было обнаружено, что эффективна доза вещества насто щего изобретени в предпочтительном варианте составл ет более 1о мг/кг при внутрибрюшинном введении, и более 100 мг на килограм при пероральном введении. Это было выше, чем 40%.
Азотсодержащий полисахарид способен усиливать терапевтический (лечебный ) эффект лекарственных препаратов не толькр в опытах in vitrojHO также и в химиотерапии инфекционных заболеваний, т.е. в опытах in vivo с р дом резистентных штаммов болезнетворных бактерий.
Азотсодержащий полисахарид про вл ет также чрезвычайно низкую острую токсичность и может вводитьс в организм различными пут ми, в частности посредством внутрибрюшинных инъекций, путем подкожного введени , пероральным путем и ректальным путем (через пр мую кишку). Таким образом, азотсодержащий полисахарид может быть смешан с антибиотиком пр
проведении курса лечени этим лекарственным препаратом или же может вводитьс в организм отдельно.
Когда азотсодержащий полисахарид предполагаетс вводить пероральным путем и его оформл ют в виде таблеток гранул, порошков, капсул и других лекарственных форм дл перорального введени , рецептура любого такого препарата может содержать различные добаки того типа, которые обычно используютс при получении лекарственных препаратов и, в частности св зующий агент, эксципиент С воспринимающее средство), смазывающее вещество ( замасливатель ), дезинтегрирующий агент, смачивающий агент и т.д. Когда азотсодержащий полисахарид используетс в виде жидкости дл перорального введени , он может быть приготовлен в виде жидкого лекарственного средства дл внутреннего применени , такого , например, как взбалтываема микстура , суспензи , эмульси , сироп и т.д., или же может быть получен в виде сухого продукта,.который подвергаетс растворению непосредственно перед использованием. Такие жидкие препараты могут также содержать в своем составе различные добавки и/или консерванты того типа, который обь1чно используетс при получении лекарственных препаратов. Растворы дл инъекций могут содержать в качестве добавок вещества-стабилизаторы, буферные (забуферивающие) вещества, консерванты , вещества дл создани изотоничности раствора и т.п. Такие растворы дл инъекций могут быть расфасованы в ампулы однократного использова ни , рассчитанные на введение определенной дозы активного ингредиента за один раз или во флаконы содержащие не -одну, а несколько доз препарата. Кроме того, вышеупом нутые композиции (рецептуры) могут выпускатьс в виде водного раствора и или суспензии, а также в виде раствора или эмульсии в масл ном или водном разбавителе при условии, что активный компонент может быть в виде порошка, который раствор етс в таком разбавителе, например, в стерилизованной непирогенной воде, непосредственно перед использованием. В случае , когда полисахарид используетс в виде мази или средства дл втирани , он может содержать соответствующую масл ную или жировую основу, эмульсивную основу, водорастворимую основу,, консервант и другие подобные вещества и/или добавки.
Пример. Приготавливают жидкую питательную среду следующего состава, г:
Пептон 5
Дрожжевой экстракт 3
,3
К2.НРО/4.0,3 . SO,0,3 Глюкоза50 ВодаДо 1 литра рН:б , О Аликвоту этой среды объемом 150 миллилитров ввод т в каждую из 100 конических колб емкостью 1 литр, и после закупорки каждой колбы ватной пробкой жидкую среду подвергают сте рилизации в течение 30 мин при 120 и затем внос т в каждую колбу (инок лируют )посевной материал - отдельн культивированнный на скошенном агар мицелий базодиомицета Coriolus versicolor (Фр.), штамм Quel СМ-105, после.чего осуществл ют стационарну культивацию инокул та в течение 20-дневного периода при температуре диапазоне от 25 до . Полученный таким образом культуральный шламм (бульон высушивают в барабанной су шилке, в результате чего получают 451 грамм сухого продукта. 150 грамм этого сухого продукта измельчают и экстрагируют 0,1 н раствором гидро окиси натри при температуре 95-98°С при обычном давлении, в течение 3ч использу дл этой цели экстрактор из нержавеющей стали. Полученный та ким образом щелочный экстракт нейтрализуют , подвергают фильтрации и п лученный фильтрат концентрируют затем до остаточного объема, равного 500 миллилитрам. Этот концентрирова ный раствор помещают затем в целлофановый мешочек и подвергают диализу против проточной воды в течение 90 ч Полученный диализат концентрирую при пониженном давлении и концентри рованный раствор подвергают затем, распылительной сушке, в результате, которой получают 19,5 г порошкообра ного продукта. Дл изучени свойств этого порошк образного продукта небольшую его порцию подвергают элементарному анализу с использованием С, Н, N-анализатора (CHN-COCORDER), в результате чего найдено, что в состав вещества входит 42,1% углерода, 6,0% водорода и 5,8% азота. Определение удельного оптического вращени образца получен ного продукта производ т дл О,25%ного водного раствора этого вещества с использованием пол риметра VANAKO -OR-50. Измерени показали, что удельное оптическое вращение этого продукта равн етс +12. Дл того, чтобы узнать углеводный ( сахаридный) состав этого продукта, образец весом 10 миллиграммов прибавл ют к 3%-ному метанольному раствору хлористоводородной кислоты и метанолиз провод т в течение 16 ч пр температуре . После нейтрализации сол ной кислоты карбонатом серебра реакционную смесь профильтровывают при комнаткой температуре и полученный фильтрат сначала концентрируют , а затем упаривают досуха. Полученный при этом твердый продукт раствор ют в 0,5 миллилитрах пиридина , к раствору прибавл ют 0,2 милли;питра гексаметилдисилазана и 0,3 милг лилитра триметилхлорсилана и реакционную смесь оставл ют сто ть при комнатной температуре в течение 30 мин дл завершени реакции триметилсилилировани . Продукт раствор ют затем в хлороформе, и после отмывки избытка реагента и дегидратации фильтрат упаривают досуха. Затем этот прюдукт раствор ют в четыреххлористом углероде и подвергают анализу методом газо-жидкостной хроматографии . ГЖХ-анализ показал, что продукт состоит из 70,5% глюкозы, 3,8% галактозы, 10,3% маннозы, 5,4% ксилозы и 10,0% фукозы. Дл определени аминокислотного состава белковой части порошкообразного продукта его образец подвергают аминокислотному анализу в соответствии со стандартным методом Мура и Штейна. В результате аминокислотного анализа получают следующий состав: 15% аспарагиновой кислоты, 8% треонина, 6% серина, 14% глутаминовой кислоты, 4% пролина, 8% глицина, 10% аланина, 4% изолейцина, 6% лейцина , 1% тирозина, 4% фанилаланина, 2% триптофана, 2% лизина, 3% аргинина , 4% аммиака и 1% N-глюкозамина, а также следы гистидина. Дл исследовани продукта методом ЯМР-спектроскопии в качестве растворител используют т жел17ю воду, а в качестве внутреннего стандарта 2,2-диметил-2-силанопентан-5-сульфонат , причем дл устранени любого возможного вли ни на результаты анализа остаточного количества легкой воды , содержащегос в т желой воде, используют величины, которые подверглись коррекции, проделанной на основе предполагаемой кривой Лоренца. В этих услови х отношение доли углеводной части вещества к его белковой части было.определено, исход из допущени , что поглощение в области 0,5-2,5 миллионных долей обусловлено протонами белковой части продукта, тогда как поглощение в области от 2,5 до 6,0 миллионных долей относитс к протонам углеводной (сахаридной) части продукта. Полученное отношение углеводной части к белковой равно 89:11. Кроме того, полоса поглощени 4,14 ,9 миллионных долей св зана с -св з ми сахаридной части, а полоса поглощени в области 4,9-6,0 миллионных долей св зана с ч-св з ми сахарида , анализиру ЯМР-спектр продукта , определ ют также отношение долиfe-св зей к доле д -свчзей в полисахаридной части продукта. Это отношение (5/г/.) равно 65:35. Молекул рный вес исследуемого продукта определ ют посредством ультрацентрифугировани его раствора, причем измерение провод т с использованием седиментационно-равновесного мерода и синтетической граничной модепи картинки). Дл этой цели используют интерференционную оптическую сис тему, причем измерени провод т в следующих услови х: концентраци образца в растворе 0,3%; растворитель М/10 KCti температура 25°С; столбик жидкости высотой 1,7 миллиметра; скорость вращени ротора 22000 об./ми продолжительность измерени 5 ч. Полученное значение среднего молекул рного веса вещества равно 100000. Испытани продукта на эффективность стимулировани лекарственной чувствительности у резистентных к лекарственным препаратам бактерий, которые , в частности, приобретают резистентность к антибиотикам, провод т следующим образом. Образцы резистентных к лекарственным препаратам бактерий получают согласно вышеупом нутой методике культивировани бактерий в чашках с концентрационным градиентом антибиотиков в агаровой среде при использовании бактерий Staphy1OCOCCUS aureus. Strep tococcus faecaiis, Escherichia coli, Salmonella enteritidis, Klebsiella pneumonia), Pseudomonas aeruginosa. Минимальные ингибирующие концентрации {МИК) антибиотиков дл исходных бактерий и тех бактерий, которые приобрели резистентность (устойчивость) к лекарствам, приведены в, табл. 2. Таблица 2 Бактерии Продолжение табл. 2 En te robacte r aerogenes Sa1moneI 1 a enteritidis Shigella sonnei Klebs i el 1 a pneumon i ae Proteus mirabi 1 i S Pseudomonas aeru-CL g i nosa
coll PC12,5100
SM3,1lOOC
KM6,3200
CP1,650
TC3,125
CER3,125
EM100
Величины минимальной ингибирующей концентрации (МИК) пенициллина (РС) вычислены, исход из допущени , что 1,667 Е (единицы ) 1 мг.
Величины МИК цефалоридина CCL) вычислены , исход из допущени , что 30000 Е (единиц) 1 мг.
Дл того, чтобы увидеть изменение величины минимальной ингибирующей концентрации (МИК) дл соответствующих , резистентных к лекарственным препаратам штаммов бактерий при совместном использовании предлагаемого вещества и различных антибиотиков (те которые использовались дл выработки резистентности у бактерий), азотсодержащий полисахарид прибавл ют в культуральную среду в количествах от 10 до 1000 микрограммов/мл и величины МИК получают в соответствии с методом культивировани в чашках с агаровой средой. Полученные результаты представлены в табл. 3.
Staphy1ococcus
aureus
PC-resistant
CP- t reptococcus faeca1i s TC-resistant
Escherlchia co
KM 1000 100
CP 100 12,5
TC 100 . 12,5
Klebsiel la pneumon i a 1 SM-res i stant
CP 1000 50
двРС 10 25
CL 1000 200
. Вещество насто щего изобретени
прибавл ли в культуральную среду. Вещество насто щего изобретени не прибавл ли в культуральную .
Таблица
1,6
г/мл 12,5 25 6,3 3,2 25 12,5 3,2
6,3
25
12,5
3,2 6,3
12,5
12,5
100
Пример 2. Испытани по вы в 1ению терапевтического (лечебного) воздействи на инфекционные эаболева ни провод т на п ти группах самцов
мьоией линии ICR-ICL (каждый из которых весил 22il грамм), причем кажда группа состоит из 10 мышей, при использовании резистентного к пенициллину G штамма бактерий Streptococcus , полученного в примере 1.Этот резистентный к пенициллину G-штамм aureus, который культивировалс на Трипто-соевой агаровой среде при температуре 37°С в течение 18 ч, суспендируют в Трипто-соевом бульоне, содержащем 5% муцина, и 0,25 миллилитра такой суспензии ввод т fинокулируют ) внутрибрюшинно каждой подопытной мыши. Заражение регулируют таким образом, чтобы кажда мышь получала в инокул те 5x10 клеток бактерий. Через два часа после заражени (инокул ции ) мышам ввод т внутрибрюшинно пенициллин Q- в дозе 2,5 X 10 единиц/кг веса тела мышей и 5 X 10 Е/кг соответственно. Одновременно мышам ввод т внутрибрюшинно азотсодержащий полисахарид, полученный в соответствии с методикой примера 1, в дозе, равной 100 мг/кг веса тела. Обработанные таким образом мыши наход тс под посто нным наблюдением каждый день в течение 7 дней после введени с целью определени выживаемости зараженных мышей . Комбинированное использование антибиотика и азотсодержащего полисахарида (NP/) может существенно улуч1иить лечебное действие пенициллина G- за счет повышени чувствительности к пенициллину С} резистентных к нему in vivo бактерий.
Пример 3. Аналогичный тест на терапевтическую эффективность в лечении инфекционных заболеваний проведен на, п ти группах самцов мышей линии ICR-ICL (кажда мышка весит грамм, причем кажда групп подопытных животных состоит из 10 мшей ) при использовании резистентного к тетрациклину штамма Е.соП и азотсодержащего полисахарида, полученных в соответствии с методикой, описанной в примере 1. Дл заражени каждой мышки ввод т внутрибрюшинно 0,25 мл Трипто-соевой бульонной суспензии, включающей 5% муцина резистентных к тетрациклину бактери приготовленной как описано в примере 1. Инокулирование регулируют таким образом, чтобы кажда мъаика полчила внутрибрюшинно 5 к 10 клеток бактерий. Через 2 ч после инокул ции мышам ввод т перорально тетрациклин в дозах 80 мг/кг веса тела и 160 мг/кг соответственно. Одновремено мышам ввод т пероральным путем азотсодержащий полисахарид в дозе 100 миллиграмм/кг. Комбинированное
использование азотсодержащего полисахарида и тетрациклина способно вызывать значительно более .высокий лечебный эффект, чем использование одного тетрациклина. Кроме того, поскольку практически один и тот же эффект может быть достигнут как при пероральном введении вещества, так и при внутрибрюшинном его введении, вещество может найти самое широкое применение вследствие его высокой эффективности.
Пример 4. Резистентный к пенициллину G штам Staphy1OCOCCUS aureus инокулируют п ти группам (по 10 мышей в группе) мышей-самцов линии ICR-ICL, каждый из которых и 1eeт вес 2211 грамм, с нагрузкой 5 х 10® клеток на каждую подопытную мьплку, следу методике примера 2. После этого четырем группам мышей ввод т внутрибрюшинно 2,5 X Ю Е/кг пенициллина G и соответственно 1, 10, 100 и 1000 мг/кг азотсодержащего полисахарида (того же, что используют в примере 1). Ежедневные наблюдени за подопытными мышами велись в течение 7 дней после введени указанных препаратов .
Пример 5. Осуществл ют аналогичный опыт по лечению инфекционных заболеваний с использованием б групп из самцов-мышей ICR-ICL.причем кажда группа, состо ща из 10 мышей , инокулированных клетками устойчивых к тетрациклину бактерий E.Coli в количестве 5x100000000 клеток на мьппь, с использованием процедуры примера 3.
Через два часа после инокул ции ввод т тетрациклин в дозе 80 мг на .кг веса тела 1«1ыши с одновременным оральным введением азотсодержащего полисахарида , используемого в примере 1, в соответствуюодих дозах О, 10,100, 1000 и 10000 мг/кг, при этом шеста группа была контрольной. Обследование мышей проводилось ежедневно до 7-го дн .
Пример 6. Штамм СМ-151 базидиомицета Coriolus hirsutus (Фр.) (Juel (Perm . Res . I ns t . Depos i t N-FERM-P 2711) культивирутот, как в примере 1, и затем экстрагируют и очищают в соответствии с аналогичной методикой, в результате чего получают 17,5 грамма порошкообразного вещества. Свойства этого вещества следующие:
Элементарный анализ: 43,7% углерода; 6,4% водорода и 5,5% азота. 2
Удельное оптическое вращение :о(/. +30°.°
Углеводный состав: 79% глюкозы, 15% маннозы, 2% ксилозы, 4% галактозы и следы фукозы.
Содержание белка в веществе: .
Отношение сахаридных СБЯзги.Д ) : : 71/29. 5 Средний молекул рный -с : К-ГИн: .
Аминокислотный состав белковой части: 15% аспарагиновой кислоты; 9% треонина, 5% серина, 14% глутаминово кислоты, 6% пролина, 9% глицина, 9% аланина, 7% валина, 1% метионина, 5% изолейцина, 6% лейцина, 2% триптофана , 4% фенилаланина, 2% лизина, 3% аргинина, 2% аммиака, 1% глюкозамина и следовые количества цистина, тирозина и гистидина.
Полученное таким образом вещество имеющее вышеупом нутые характеристики , используют дл проведени следующего эксперимента.
По аналогии с примером 1 получают резистентный к хлорамфениколу штамм Salmonella enteritidis. Затем 0,25 миллилитра суспензии вьдиеупом нутых хлорамфеникол-резистентных бактерий в Трипто-соевом бульоне (см. пример включающем 5% муцина, инокулируют внутрибрюшинно п ти группам мы1ией (каждой мышке-), причем кажда из эти групп состоит из 10.животных. Каждой подопытной МЕЛШке ввод т 1 X 10° клеток . Через 25 ч после инокул ции мышам ввод т внутрибрюшинно по 50 миллиграмм/кг хлорамфеникола. Мышам другой группы помимо этого ввод т перорально азотсодержащий полисахарид в дозе 500 мг/кг. В группе, где мышкам вводили один хлорамфеникол , выживаемость через 5 дней после введени составила 40%, тогда как в группе, где антибиотик давали в комбинации с азотсодержащим полисахаридом , выживаемость оказалась на Уровн 80%.
Пример 7. По методике примера 1 получают резистентный к стрептомицину штс1ММ Klebsiella pneumonial 0,25 миллилитра Трипто-соевого бульона (см. пример 2), содержащего 5% муцина и указанные резистентные бактерии , инокулируют внутрибрюшинно подопытным мышам, образующим 2 группы по 10 мышей в каждой, выдержива норму пор дка 1 х 10 клеток на каждую мышку. Через 3 ч после этой инокул ции 1иышам ввод т внутрибрюшинно по 100 мг/кг стрептомицина. Мышам одной группы ввод т кроме того по 120 мг/кг азотсодержащего полисахарида , полученного в соответствии с методикой, описанной в примере 6, использу внутрибрюшинный путь введеНИН . Через 6 дней после введени выживаемость мышей в группе, где животным вводили один стрептомицин, составила 50%, тогда как в группе, где мышам вводили стрептомицин в комбинации с полисахаридом, выживаемость оказалась намного выше (около 80%),
Пример 8. О,25 мл суспензии колистин-резистентных бактерий Pseudomonas aeruginesa,культивированных в соответствии с методикой, аналогичной описанной в примере 1, в Трип0 то-соевом бульоне (см. пример 2), содержащем 5% муцина, инокулируют внутЬибрюшинно подопытным мышам-самцам линии ICR - ICR, кажда весом 22tl грамм, распределенным в 2 груп5 пы по 10 мышей в каждой, вьщержива норму введени 1 х 10 клеток на каждую мышку. Через 2 ч после инокул ции мышам ввод т внутрибрюшинно антибиотик колистин 190 мг/кг (1 микрограмм 30 единицам). Помимо
0 этого мышам одной группы ввод т также перорально азотсодержащий полисахарид, полученный по методике, аналогичной описанной в примере 6, в дозе 1500 мг/ /кг. Через 6 дней после введени вы5 живаемость мьпиой в группе, где им вводили один Kt.vnистин, составила 40%, тогда как в группе, где колистин примен лс в комбинации с предлагаемым веществом, выживаемость мьлией оказа0 лась равной 70%.
Предлагаемый способ позвол ет получить азотсодержащий полисахарид, промотирующий чувствительность к лекарствам у бактерий, устойчивых к ан5 тиьиотикам.
Форрлула изобретени
Claims (2)
1.Способ получени азотсодержащего полисахарида, прюмотирующего
0 чувствительность к лекарствам у бактерий ,, устойчивых к антибиотикам, отличающийс том, что штамм СМ-105 Coriolus versi color (Fr) .Quel или штамм СМ-151 Coriolus
5 hirsutus (Fr) Quel выращивают в питательной среде, отдел ют мицелий, высушивают его и измельчают и экстрагируют гор чим водным растворителем .
0
2.Способ по п. 1, отличаю щ и и с тем, что в качестве водного растворител используют 0,1 н раствор гидроокиси натри .
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP4151377A JPS53127813A (en) | 1977-04-13 | 1977-04-13 | Agent for increasing drug sensitivity of antibiotic-resistant bacteria |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU793408A3 true SU793408A3 (ru) | 1980-12-30 |
Family
ID=12610447
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU782602548A SU793408A3 (ru) | 1977-04-13 | 1978-04-12 | Способ получени азотсодержащего полисахарида, промотирующего чувствительность к лекарствам у бактерий, устойчивых к антибиотикам |
Country Status (16)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS53127813A (ru) |
AU (1) | AU519028B2 (ru) |
CA (1) | CA1100876A (ru) |
CH (1) | CH638983A5 (ru) |
CS (1) | CS226174B2 (ru) |
DD (1) | DD138276A5 (ru) |
DE (1) | DE2816087A1 (ru) |
DK (1) | DK155916C (ru) |
FR (1) | FR2387037A1 (ru) |
GB (1) | GB1572387A (ru) |
HU (1) | HU179217B (ru) |
IT (1) | IT1095587B (ru) |
MX (1) | MX5409E (ru) |
NL (1) | NL170593C (ru) |
SE (1) | SE446818B (ru) |
SU (1) | SU793408A3 (ru) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0026746B1 (de) * | 1979-10-02 | 1985-04-10 | Ciba-Geigy Ag | Kombinationspräparate zur Anwendung in einem Verfahren zur Steigerung der Wirkung von Antibiotika, antibiotische Präparate mit gesteigerter Wirksamkeit und Verfahren zu deren Herstellung |
JPS5712999A (en) * | 1980-06-25 | 1982-01-22 | Chiyokichi Iizuka | Antibiral agent and its preparation |
US4512972A (en) * | 1980-06-30 | 1985-04-23 | Kureha Chemical Industry Co., Ltd. | Nasal preparation and processes for their production |
EP0056560A1 (de) * | 1981-01-19 | 1982-07-28 | Ciba-Geigy Ag | Antibiotische Präparate mit gesteigerter Wirksamkeit, Verfahren zu deren Herstellung und Verfahren zur Steigerung der antibiotischen Wirkung von Antibiotika |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5136359A (ja) * | 1974-09-18 | 1976-03-27 | Saburokichi Tanimoto | Kukimatsuto |
-
1977
- 1977-04-13 JP JP4151377A patent/JPS53127813A/ja active Granted
-
1978
- 1978-04-11 CA CA300,886A patent/CA1100876A/en not_active Expired
- 1978-04-12 SU SU782602548A patent/SU793408A3/ru active
- 1978-04-12 SE SE7804110A patent/SE446818B/sv not_active IP Right Cessation
- 1978-04-12 HU HU78KU530A patent/HU179217B/hu not_active IP Right Cessation
- 1978-04-12 AU AU35010/78A patent/AU519028B2/en not_active Expired
- 1978-04-12 NL NLAANVRAGE7803875,A patent/NL170593C/xx not_active IP Right Cessation
- 1978-04-12 DD DD78204748A patent/DD138276A5/xx unknown
- 1978-04-12 GB GB14447/78A patent/GB1572387A/en not_active Expired
- 1978-04-13 CH CH394978A patent/CH638983A5/de not_active IP Right Cessation
- 1978-04-13 FR FR7810976A patent/FR2387037A1/fr active Granted
- 1978-04-13 IT IT22280/78A patent/IT1095587B/it active
- 1978-04-13 MX MX787019U patent/MX5409E/es unknown
- 1978-04-13 CS CS782410A patent/CS226174B2/cs unknown
- 1978-04-13 DK DK162678A patent/DK155916C/da not_active IP Right Cessation
- 1978-04-13 DE DE19782816087 patent/DE2816087A1/de not_active Withdrawn
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
SE7804110L (sv) | 1978-10-14 |
HU179217B (en) | 1982-09-28 |
JPS53127813A (en) | 1978-11-08 |
GB1572387A (en) | 1980-07-30 |
CS226174B2 (en) | 1984-03-19 |
AU519028B2 (en) | 1981-11-05 |
IT7822280A0 (it) | 1978-04-13 |
FR2387037A1 (fr) | 1978-11-10 |
DE2816087A1 (de) | 1978-11-02 |
NL7803875A (nl) | 1978-10-17 |
DD138276A5 (de) | 1979-10-24 |
NL170593C (nl) | 1982-12-01 |
SE446818B (sv) | 1986-10-13 |
CA1100876A (en) | 1981-05-12 |
MX5409E (es) | 1983-07-18 |
FR2387037B1 (ru) | 1981-10-02 |
AU3501078A (en) | 1979-10-18 |
NL170593B (nl) | 1982-07-01 |
DK162678A (da) | 1978-10-14 |
DK155916B (da) | 1989-06-05 |
DK155916C (da) | 1989-10-23 |
JPS5639288B2 (ru) | 1981-09-11 |
IT1095587B (it) | 1985-08-10 |
CH638983A5 (de) | 1983-10-31 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
FRANKMÖLLE et al. | Antifungal cyclic peptides from the terrestrial blue-green alga Anabaena laxa I. Isolation and biological properties | |
KR101663234B1 (ko) | 노노무라에아 종으로부터의 고리형 펩티드, 그에 대한 생산 프로세스 및 이를 포함하는 마이코박테리아 관련 질병의 치료 혹은 예방을 위한 약학적 조성물 | |
US4163780A (en) | Ks-2-a | |
US4268505A (en) | Pharmaceutical composition comprising a nitrogen-containing polysaccharide and an antibiotic agent, and a method of treating an infectious disease therewith | |
EP0001945A1 (fr) | Nouveaux polysaccharides extraits de corps microbiens d'Haemophilus Influenzae, leur procédé de préparation et les compositions pharmaceutiques les renfermant | |
SU793408A3 (ru) | Способ получени азотсодержащего полисахарида, промотирующего чувствительность к лекарствам у бактерий, устойчивых к антибиотикам | |
CN103214547B (zh) | 一种化合物及其在制备抗菌药物中的应用 | |
CA2063721C (fr) | Medicament immunostimulant a base de glycopeptidolipides polaires de mycobacterium chelonae | |
WO1998056755A1 (fr) | Substances physiologiquement actives tkr2449, leur procede de preparation et micro-organisme | |
US4233291A (en) | Novel biological substance from a fungus and the process for producing the same | |
CH657989A5 (de) | Biologisch aktive substanz, verfahren zur herstellung der substanz, sowie die substanz enthaltende, immunoaktive zusammensetzung. | |
KR100487703B1 (ko) | 생리활성물질tkr1785류,제조방법및미생물 | |
JPH0721003B2 (ja) | 多糖体およびその製造方法 | |
CH663033A5 (fr) | Substance-melange dite ''spf-100'' et procede pour sa preparation. | |
KR101776696B1 (ko) | 항균 활성을 나타내는 이소소르비드 유도체 및 이를 유효성분으로 포함하는 항균용 조성물 | |
JP3341773B2 (ja) | 抗生物質tkr1912−i、tkr1912−ii及びそれらの製造方法 | |
KR810001102B1 (ko) | 항생물질에 내성을 갖는 박테리아의 약품에 대한 민감도를 증진 시키는 질소함유 폴리사카라이드의 제조방법 | |
FR2550707A1 (fr) | Medicament immunomodulateur d'origine biologique et son procede de preparation | |
KR100512098B1 (ko) | 레불린산 및 그의 유도체를 함유한 항생제, 화장품 및 식품 | |
Moonmangmee | Antioxidant Capacities and Total Phenolic Contents of Selected Actinomycetes sp. | |
EP0026485B1 (de) | Herbicolin, Verfahren zu seiner Herstellung und es enthaltende Mittel | |
CN117402051A (zh) | 一种具有共轭结构含α,β-不饱和醛的化合物及其应用 | |
KR900003303B1 (ko) | 스트레팍스 및 이를 생성하는 균주 | |
JPS6048929A (ja) | 抗腫瘍剤 | |
JPH01240196A (ja) | 新規グリコペプチド系抗生物質pa−45052 |