KR810001102B1 - 항생물질에 내성을 갖는 박테리아의 약품에 대한 민감도를 증진 시키는 질소함유 폴리사카라이드의 제조방법 - Google Patents

Abstract

내용 없음.

Description

항생물질에 내성을 갖는 박테리아의 약품에 대한 민감도를 증진시키는 질소함유 폴리사카라이드의 제조방법

제1도 : 본 발명에 의한 질소함유 폴리사카라이드(NP)의 적외선 흡수 스펙트럼.

제2도 : 위 물질의 양성자 핵자기 공명 스펙트럼(N.M.R).

제3도부터 6까지는 본 발명의 결과를 보여주는 그래프이다.

본 발명은 항생물질에 내성을 갖게 되는 박테리아의 약품에 대한 민감도를 증진시키는 질소함유 폴리사카라이드의 제조방법에 관한 것이다.

본 발명에 의해 시약의 활성성분으로 쓰이는 질소함유 폴리사카라이드는 코리오루스 속(Coriolus 屬)의 폴리포라세아에(Polyporceae)에 속하는 담자균의 균사체를 수성용매로 추출하여 얻을 수 있다. 상기의 ＂코리오루스 속의 폴리포라세아에에 속하는 담자균의 균자체＂란 로쿠다 이다제키와 츄기오 홍고(Hoikusha.Pub Co.)에 의한＂ ＂Coloured Illustration of Fungi of Japan＂에서의 분류에 따른 것이다.

본 발명에서 활성물질로 쓰인 질소함유 폴리사카라이드의 제법은 다음과 같다.

코리오루스 속에 속하는 담자균 균사체는 추출과정의 출발물질로 쓰이는데 이것은 자연적으로, 또는 인공 배양에 의해 얻을 수 있다. 배양액내에서 균류를 인공 배양할때는 균사체 뿐만아니라 배양후에 배양액내에 용출된 용출물도 모두 출발물질로 쓸 수 있다. 이렇게 얻어진 출발물질은 수성 용매로 추출하고 추출물은 여과, 중화, 농축, 투석, 염출 등의 필요한 처리를 하여 분자량이 낮은 물질(분자량 5,000이하)을 추출물에서 제거하고 건조시켜 분말상의 물질을 수득한다. 이 분말상의 물질은 질소함유의 폴리사카라이드로 구성되어 있고 이것은 본 발명에서 활성물질로 쓰인다.

이 방법에 의해 얻어진 질소함유 폴리사카라이드는 다음과 같은 성질을 가진다.

물리학적 성질 :

(1) 일반적 성질

본 물질을 분말상의 갈색물질이며, 뚜렷한 융점을 가지지 않고 강하게 가열하면 탄화한다. 본 물질은 피리딘, 클로로포름, 벤젠, 헥산등의 유기용매에는 불용성이고, 물에는 가용성이다.

(2) 적외선 흡수 스펙트럼.

본 물질의 적외선 흡수 스펙트럼은 3,600-3, 200cm^-1, 2,920-2, 900cm^-1, 1,660-1, 610cm^-1, 1,460cm^-1, 1,410cm^-1, 1,360cm^-1, 1,230cm^-1, 1,150cm^-1, 1,080cm^-1, 1,060-990cm^-1, 925cm^-1, 890cm^-1, 840cm^-1, 755cm^-1및 705cm^-1근방에서 나타난다. 따라서 890cm^-1에서의 글루칸의 β-결합에 의한 흡수띠와 840cm^-1에서의 글루칸의

-결합에 의한 흡수띠가 나타남을 발견할 수 있다.

(3) 원소분석,

본 물질을 원소분석 해보면 42내지 46%의 탄소, 5.3 내지 7.0%의 수소 및 0.5 내지 8.0의 질소로 구성되어 있다. 나머지는 산소로 되어있다.

(4) 선광도.

본 물질의 선광도는 비선광도

는 0 내지 50이다.

(5) 비색반응.

본 물질은 페놀-황산반응, 안트론-황산 반응 및 닌하이드린 반응에 양성이다. 이 반응들에 양성인 것은 본 발명에서 쓰인 활성물질이 사카라이드와 단백질로 구성되어 있음을 말해준다. 질소함유 폴리사카라이드에서의 사카라이드의 구조를 알기 위해 시료를 메탄올성 염산으로 가수분해하고 공지된 방법에 의해 트리메틸실릴화 시키고 가스 크로마토그라피를 한다. 그결과는 본 물질의 주로글루코즈로 구성되어 있고, 만노즈, 갈락토즈, 크실로즈 및 푸코즈를 포함함을 알려준다.

질소함유 폴리사카라이드중 단백질성분의 아미노산 분해는 단백질 성분이 아스파틴산, 트레오닌, 세린, 글루타민산, 프롤린, 글리신, 알라닌, 시스틴, 발린, 메티오닌, 이소로이신, 로이신, 티로신, 트립토판, 페닐알라닌, 리신, 히스티딘 및 알기닌으로 구성되어 있음을 보여준다. 이중에서도 아스파틴산, 트레오닌, 글루타민산, 글리신, 알라닌, 발린 및 로이신이 특히 많은데 이들이 전 아미노산의 70% 이상을 차지한다.

(6) 양성자 핵자기 공명 스펙트럼(NMR).

스펙트럼은 질소함유 폴리사카라이드 내의 사카라이드와 단백질 성분의 비율 및 사카라이드 결합을 결정하기 위해 수행한다.

본 시료의 NMR 흡수 스펙트럼은 중수(heavy water)를 용매로 하고 나트륨 2,2-디메틸-2-실라노펜탄-5-설포네이트(D.S.S)를 내부표준 물질로 사용하여 100MHz에서 측정한다. 제2도에서 보는 바와 같이 흡수띠는 0.9±2-1.2±0.2ppm, 2.0±0.2ppm, 4.5±0.2ppm, 4.7±0.2ppm 5.0±0.2ppm, 및 5.4±0.2ppm에서 각각 나타났으며 3.0-4.4ppm에서 넓은 흡수띠(broad band)가 나타난다. 0.5-0.25ppm은 단백질 성분의 양성자 강도(intensity)로 구성되고 2.5-6.0ppm은 사카라이드의 양성자강도로 구성되어 있음을 미루어 보아 단백질 성분의 있음을 알 수 있다. 단백질 성분은 40% 이하로 평가된다. 또한 4.4-4.9ppm은 사카라이드의 β-결합으로 구성되고 4.9-5.4ppm은

-결합으로 구성됨을 미루어 보아 그 비율(β/

)는 85/15 내지 40/60으로 결정된다.

(7) 분자량

본 발명의 질소함유 폴리사카라이드의 분자량은 한외 원심분리기에 의하여 5,000 내지 300,000의 범위에 속함을 알 수 있다.

급성독성

이 실험은 ICR-JCL 균주를 접종한 생후 4 내지 5주된체중 21 내지 24g의 생쥐와 돈류(Donryu) 균주를 접종한 생후 4 내지 5주된 체중 100 내지 150g의 쥐를 사용하였다. 본 물질은 생리식 염수에 녹인 용액을 정맥투여, 피하투여, 복강내투며 및 경구투여의 방법의 4가지 방법으로 하여 치료에 사용하였다.

실험한 동물의 일반적 증상으로서 사망이나 체중변화는 7일 후에 관찰되고 그후에 이들을 죽여 검사한다. 결과적으로는 아래의 1표에서 보는 바와 같이 생쥐와 쥐 모두 최고용량 사용에도 죽지않았다. 본 실험에서는 동물들이 모두 죽지 않았으므로 LD₅₀의 결정은 사실상 불가능하다.

[표 1]

항생물질에 내성을 가지게 되는 약물내성 박테리아의 약물에 대한 민감도를 증진시키는 질소함유 폴리사카라이드(이후부터는 단순히 본물질로 쓰기로 한다)에 관하여 여기에 기술하기로 한다.

본 물질과 합하여 쓰던 약물내성 박테리아에 대해 약효를 나타내는 항생물질은 곰팡이, 박테리아, 방선균등에서 유도된 것들인데 대표적인 것으로는 다음과 같은 것들이 있다.

페니실린 G (이후로는 약자 PG 사용)

스트렙토마이신 (이후로는 약자 SM 사용)

카나마이신 (이후로는 약자 KM 사용)

클로람페니콜 (이후로는 약자 CP 사용)

테트라사이클린 (이후로는 약자 TC 사용)

에리트로마이신 (이후로는 약자 EM 사용)

아미노벤질페니실린 (이후로는 약자 ABPC 사용)

세팔로리딘 (이후로는 약자 CER 사용)

콜리스틴 (이후로는 약자 CL 사용)

본 물질은 항생제에 내성을 갖는 다음의 약물내성 박테리아에 대하여 약물에 대한 민감도를 증진시키는 효과를 갖는다.

약물 내성 박테리아의 약물에 대한 민감도를 증진시키는 본 물질의 효과는 다음의 방법으로 확인 되었다.

약물 내성 박테리아는 하기의 방법으로 동도 경사판상 배양기(참조 : 치카라 와다나베 아사쿠라 쇼텐에 의한 ＂Chemotherapeutics and Resistant Bacteria＂, 1970)에서 수득할 수 있다.

약물 농도 경사범위가 10에서 100ug'ml인 한천판을 만들고 시험할 각 박테리아 균주를 조혼 또는 도말의 방법으로 접종한다. 이 판을 며칠동안 37℃를 유지하여 주면 높은 농도 지역에서 집락의 형태가 유리되고 이 판에 다시 비슷한 방법으로 접종한다. 위와 같은 과정을 몇번 반복하여 각 약물에 내성을 가지는 박테리아 균주를 수득한다.

약물 내성 균주 및 원래의 균주 (민감한 균주)의 약물에 대한 민감도는 Japanese Chemotherapeutical Association의 표준 방법(참조 MIC Determination Method Reform Committee에 의한 ＂Chemotherapy＂ Vol.22, NO6,1126(1974)에 의하여 최소 성장억제 농도(이후로는 약자 MIC로 사용)로 비교할 수 있다. 특히 각 약품에 대하여 이중의 희석계를 만들고 이것을 한천판으로 만들기 위해 한천배지(Nippon Eiyo Kagaku Co., Ltd.)와 혼합한다. 그리고 트립토-소이(Trypto soy) 육즙(Nippon Eiyo Kagaku Co., Ltd.)에서 18시간동안 배양된 각 균주 한 루프(loop) 씩을 각 판에 도말하여 37℃에서 18시간동안 배양한 후 각 균주의 성장을 조사한다.

본 물질에 항생제(박테리아 균주에 대하여 약효를 잃은 것들)와 합하여 사용했을 때의 MIC 값의 변화를 알아보기 위해 혼합하는 것 외에는 위의 방법과 같은 과정을 실시한다. 본 물질을 10 내지 1000ug/ml를 위 과정에 넣고 MIC 값을 상기에 언급된 한천판 방법에 의하여 측정한다.

본 물질에 첨가에 의해 MIC 값의 첨가 이전의 값의 반 이하로 확실히 감소한다. 본 물질의 첨가량은 10ug/ml 이상인데 바림직하기로는 100ug/ml 이상이다. 배지의 pH 값은 7.2±0.1로 유지하여 MIC가 배지의 pH에 의해 영향 받지 않도록 한다. 또한 본 물질이 스스로가 박테리아 균주 실험에 대하여 항균적 활성을 가지지 않는다는 것은 한천 희석 배양 방법에 의해 미리 확인되었다. 전염병에 대한 치료 실험 :

전염병에 대한 치료 실험은 다음의 방법으로 실시한다.

생쥐에게 약물내성 박테리아 1×10⁸세포를 복강내투여하고 1 내지 3시간 후 약물 10 내지 1,000mg/kg(생쥐의 체중) 및 본 물질 1 내지 10⁴mg/kg를 복강내투여 또는 경구 투여한다. 투여후 7일동안 매일 관찰하여 생존율 및 본 물질의 효과의 상승을 조사한다. 이 경우에 본 물질의 효과적 투약량 판정은 바람직하기로는 복강내투여로는 10mg/kg 이상, 경구투여로는 100mg/kg 이상이 좋다. 이것은 40% 이상이다.

따라서 본 물질은 시험관 내의 응용 뿐아니라 전염병의 치료 실험에서도 치료 효과를 높일 수 있다는 것이 확인되었다.

본 물질은 또한 급성 독성이 극히 낮으므로 복강내 주입피하투여, 경구투여 및 직장내 투여 등의 여러 치료 방법을 사용할 수 있다. 따라서 본 물질은 약품 제조과정에서 항생제와 혼합할 수 있고, 단독으로 투여할 수도 있다.

본 물질을 정제, 과립, 분말, 캅셀등의 경구투여용으로 제조 할 때는 일반적 약품제에 쓰이는 첨가제 즉 결합제, 봉입제, 부형제, 윤활제, 팽화제, 습윤제 등을 모두 사용할 수 있다. 본 물질이 경구투여용의 물약으로 사용될 때는 진탕 혼합물, 현탁액, 유탁액, 시럽등의 내복액으로 만들거나, 사용직전에 재용해시켜 사용하는 건조 생성물로 만들 수 있다.

이러한 약제 제조는 약품제조에 일반적으로 쓰이는 형태의 첨가제 및 또는 보존제를 함유할 수 있다.

주사약은 안정화제, 완충제, 보존제, 등장화제등의 첨가제를 함유할 수 있으며 1회용 앰플 또는 수회용 용기에 담은 형태로 공급할 수 있다. 또한 상기의 조성물은 수성용액, 현탁액, 오일이나 수성 부형제의 용액 또는 유탁액의 형태로서, 또는 활성성분이 적당한 부형제, 예를들면 피로겐, 유리수에 사용직전에 재용해될 수 있는 분말의 형태로 공급할 수 있다. 본 물질이 연고나 도고의 형태로 사용될 때는 오일 또는 지방염기, 유화염기, 수용성염기, 보존제 등을 함유 할 수 있다.

본 발명의 중요한 점을 더욱 명백히 하기 위해 여기에 구체적인 기술을 하기로 한다.

실시예 1

이 배양액의 부분표본 150ml를 100개의 용량 1ℓ의 삼각 플라스크에 각각 넣고 면전을 한다음 120℃에서 30분동안 조용히 둔다. 그리고 따로따로 사면 배양된코리로루 스 베르시클로(Coriolus versicolor)(Fr.) Quel CM-150균주(저장번호 FERM-P-2416)를 일반적 방법으로 접종하여 25°내지 27℃에서 20일간 조용히 배양한다. 이렇게 수득된 배양액(육즙)은 이중 드럼식 드럼건조기에서 건조하여 451g의 건조 생성물을 수득한다. 백오십 그램의 이 건조생성물은 분쇄하여 0.1N 수산나트륨 용액으로 95 내지 98℃, 보통의 기압에서 3시간 동안 스테인레스 추출기를 사용하여 추출한다. 이렇게 수득된 알칼리성 추출 용액은 중화 및 여과하고 여과액은 500ml 까지 농축한다. 이 농축용액은 셀로판 필림으로 피낭하고 흐르는 물에 90시간동안 투석시킨다.

수득된 투석물은 더 농축시키고 감소된 압력하에서 분산 건조시켜 19.5g의 분말상 생성물을 수득한다.

이 분말상 생성물의 성질을 조사하기 위해 시료를 CHN-CORDER MT-2. 분석기(Yanagimoto Seisakujo Co., Ltd)로 원소분석을 한 결과는 42.1, 의 탄소, 6.9%의 수소 및 5.8%의 질소로 되어 있음을 보여 주었다. 비 선광도 측정은 시료의 0.25%의 수성용액을 YANACO-OR-50모형(Yanagimoto Seisakujo Co., Ltd)을 사용하여 측정하였다. 그 결과 이 생성물의 비선광도는 +12°였다.

이 생성물의 사카라이드 구조를 알기 위하여 10mg의 시료를 3%의 메탄올성 염산을 가하여 100℃에서 16시간동안가 메탄올분해를 한다. 실온에서 탄산은을 사용하여 반응물의 염산을 중화시키고 여과한후 수득된 여과액은 농축 및 증발 건조시킨다. 고체상 생성물을 0.5ml의 피리딘에 용해시키고 0.2ml의 헥시메틸디실라잔 및 0.3ml의 트리메털클로로실란을 가한 혼합물을 실온에서 30분동안 세워두어 트리메털실릴화시킨다. 이 생성물을 클로로포름에 녹이고 과량의 시약을 세척하고 탈수한 후 여과액을 증발건조한다. 생성물을 사염화탄소에 녹이고 가스 크로마토그라피를 한다. 결과는 70.5%의 글루코즈, 3.8%의 갈락토즈, 10.3%의 만노즈, 5.4%의 크실로즈, 및 10.0%의 푸코즈 임을 보여준다.

분말상 생성물은 단백질 구성을 결정하기 위해 시료를 공지된 방법에 의해 아미노산 분석한다. 다음으로 구성되어 있음을 보여준다 : 15% 아스파틴산, 8%트레오닌, 6%세린, 14%글루타민산, 4%피롤린, 8%의 글리신, 10%알라신, 4%이소로이신, 6%로이신, 1% 티로신, 4%페닐알라닌, 2%트립토판, 2%리신, 3%알기닌, 4%암모니아 및 1% N-글루코사민 그리고 약간의 히스티딘.

NMR 흡수에는 중수가 용매로 쓰이고 DSS가 내부 표준물질로 쓰이는데 중수 내의 잔여 경수의 가능한 모든영향을 제거하기 위해 로랜쯔 곡선(Lorenz's curve)에 기준을 두어보 정을 한 값을 사용한다. 이러한 조건에서 단백질 성분에 대한 사카라이드의 성분 비율은 단백질 성분에 의한 0.5-2.5ppm에서의 흡수 및 사카라이드 성분에 의한 2.5-6.0ppm에서의 흡수로써 추정하여 결정할 수 있다. 얻어진 단백질에 대한 사카라이드의 비율은 89/11이다. 또한 β결합에 의한 4.4-4.9ppm에서의 흡수 및

결합에 의한 4.9-6.0ppm에서의 흡수띠로 추정하여 측정한 β/

의 비율은 65/35이다.

분자량은 한외원심분리에 의하여 측정하는데 침강 평형 및 다음의 조건에서의 간섭 광학계를 사용한 합성 한계 양식을 사용함으로 수행된다. 0.3%의 시료농도, 용매는 M/10 KCℓ, 온도는 25℃, 액체 칼럼 1.7mm, 회절도는 22,000 r.p.m 측정시간 5시간.

얻어진 평균 분자량은 100,000이다. 항생제에 내성을 가지게 되는 약물저항성 박테리아의 약물에 대한 민감도를 증진시키는 효과에 대한 실험 :

(1) 약물 내성 박테리아의 제조.

약물 내성 박테리아의 표본은 상기에 언급된 농도 경사판 배양법에 의하여 스타필코커스 아우레우스, 에스케리치아콜리, 스트렙토코커스 페칼리스, 살모넬라 엔테리티디스, 크레브실라 뉴모니아 및 수도모나스 에루기노자를 사용하여 얻는다. 원래의 박테리아 및 약물에 대한 내성을 가지게된 박테리아의 MIC를 다음의 표 2에 요약 하였다.

[표 2]

PC의 MIC 값은 1,667U(단위)=1mg으로 하여 계산하였다.

CL의 MIC 값은 30,000U(단위)=1mg으로 하여 계산하였다.

(2) 약물내성 박테리아의 약물에 대한 민감도 증진효과.

본 물질과 여러가지 항생제(박테리아에 내성을 부여하기 위해 사용된 것)을 합하여 사용함에 따른 각 약물내성 균주의 MIC 값의 변화를 알아보기 위해 본 물질 10내지 100㎍/ml를 배지에 가하여 한천판 방법에 의하여 MIC 값을 얻는다. 그 결과는 다음의 표 3에 요약하였다.

[표 3]

주 : * 본 물질을 배지에 첨가했을 때.

** 본 물질을 배지에 첨가하지 않았을 때.

실시예 2

전염병 치료에 관한 실험은 ICR-JCL 균주를 접종한 수컷 생쥐 10마리씩으로 구성된 5그룹에 실시예1에서 수득된 스타필로코커스 아우레우스의 페니실린 G-내성 균주를 사용하여 실시한다. 트립토-소이(Trypto-Soy), 한천배지(Nippon Eiyo Kagaku Co., Ltd)에서 37℃, 18시간동안 배양된 스타필로코커스 아우레스의 페니실린 G-내성 균주를 5%의 뮤신을 함유한 트립토-소이육즙(Nippon Eiyo Kagaku Co., Ltd)에 현탁 시키고 이 현탁액 0.25ml를 각 생쥐들에게 복강내 투여한다. 접종량은 각 생쥐당 5×10⁸세포가 되도록 조절한다.

2시간후 페니실린 G를 복강내투여로 2.5×10⁴U/kg(생쥐의 체중) 및 5×10⁴U/kg씩 접종하고 각각 실시예 1의 과정으로 수득한 본 물질을 역시 복강 내투여로 100mg/kg(생쥐의 체중)접종한다. 이렇게 처치한 생쥐를 접종후 7일 동안 매일 관찰하여 접종한 생쥐의 생존율을 측정한다. 그 결과는 제3도에 표시 하였다. 이 결과는 생체 실험에서의 본물질, 즉 질소함유 폴리사카라이드(NP)의 병용은 내성 박테리아의 페니실린 G 에 대한 민감도를 높여 페니실린 G의 치료 효과를 높여줌을 증명하였다.

실시예 3

전염병 치료에 대한 위와 유사한 실험을 ICR-JCL 균주를 접종한 수컷 생쥐(각 체중은 22±1g) 10마리씩으로 구성된 5그룹에 실시하는데 테트라사이클린-내성 에스케리치아 콜리 및 실시예 1에서 생성된 본 물질을 사용한다. 5%의 뮤신을 함유하는 1/4ml의 트립토-소이 육즙(참조 실시예 2)과 실시예 1의 과정으로 제조된 테트라사이클린-내성 박테리아의 현탁액을 각 생쥐에게 접종한다. 접종량은 각 생쥐당 5×10⁸세포있다. 접종 2시간후 테트라사이클린을 80mg/kg(생쥐체중) 및 160mg/kg씩 경구 투여하고 동시에 본 물질을 100/kg씩 각각 경구투여 한다. 결과는 제 4도에 표시했다. 제4도의 결과는 접종후 7일 동안의 생존율을 보여준다. 본 물질을 병용 했을때의 치료효과가 테트라-사이클린을 단독으로 사용했을 때 보다 훨씬 높다는 것이 확실하다. 또한 경구투여의 치료방법에서도 복강투여방법과 같은 효과를 나타내므로 본 물질은 여러 방법으로 투여해도 높은 치료효과를 나타냄을 특정지을 수 있다.

실시예 4

스타필로코커스 아우레스의 페니실린 G-내성체를 실시예 2의 과정에서와 같이 ICR-JCL 균주를 접종한 수컷 생쥐 (22±1) 10마리 씩으로 구성된 5그룹에 5×10⁸세포/생쥐의 비유로 투여하고 뒤이어 2.5×10⁴U/kg의 페니실린 G과 1, 10 1000 및 1000mg/kg의 본 물질을 4그룹에 각각 투여한다(실시예 1과 같은 방법). 이 생쥐들을 접종후 7일동안 매일 관찰하여 그 결과를 제5도에 표시했다.

실시예 5

유사한 전염병의 실험을 ICR-JCL 균주를 접종한 수컷 생쥐 10마리 씩으로 구성된 6그룹의 생쥐들에세 테트라사이클린-내성 에스케리치아 콜리 5×10⁸세포/생쥐를 실시예 3의 방법으로 접종하여 실시한다.

접종 2시간후 테트라사이클린 80mg/kg(생쥐의 체중)과 실시예 1에서 쓰인 본 물질을 0, 10, 100, 1000 및 10,000mg/kg 6그룹에 각각 동시에 경구투여 한다. 투여후 7일동안 매일 생쥐를 관찰하여 얻어진 결과를 제6도에 표시하였다.

실시예 6

코리오루스 히르수투스의 CM-151균주(Fr.) Quel(저장번호 FERM-P 2711)를 실시예 1의 과정으로 배양하고 추출 및 정제하여 17.5g의 분말상 물질을 수득한다. 이 물질의 성질은 실시예 1의 방법에 따라 정의하면 다음과 같다.

(1) 원소분석 : 43.7%의 탄소, 6.4%의 수소, 및 5.5%의 질소.

(2) 비선광도 :

(3) 사카린 구조 : 79%글루코즈, 15%만노즈, 2%크실로즈, 4% 갈락토즈 및 약간의 푸코즈.

(4) 단백질 함량 : 33%

(5) 사카라이드의 결합비율(β/

) : 71/29

(6) 평균 분자량 : 95,000

(7) 단백질 성분 구성 : 15%아스파틴산, 9%트레오닌, 5%세린, 14%글루타민산, 6%피롤린, 9%글리신, 9%알라닌, 7%발린, 1%메티오닌, 5%이소로이신, 6%로이신, 2%트립토판, 4%페닐알라닌, 2%리신, 3%알기닌, 2%암모니아, 1% N-글루코사민 및 시스틴 티로신, 히스티딘 각각 약간씩.

다음의 실험은 상기 언급한 성질을 가진 본 물질을 사용하여 실시된다.

클로람페니콜-내성 살모넬라 엔테리티디스는 실시예 1에서와 같이 수득한다.

상기 언급한 클로람페니콜-내성 박테리아의 5%뮤신을 함유한 트립토-소이-육즙(참조 실시예 2)에서의 현탁액 1/4ml를 10마리 씩으로 구성된 5그룹의 생쥐에게 접종한다. 접종량은 1×10⁸세포/생쥐이다. 접종 25시간후 50mg/kg의 클로람페니콜을 복강내 투여한다. 500mg/kg의 본물질을 다른 그룹에 다시 경구 투여한다. 5일후의 생존율은 클로람 페닐만을 투여한 그룹에서는 40%였고 본 물질과 항생제를 합하여 투여한 그룹에서는 80%였다.

실시예 7

실시예 1의 방법으로 얻은 스트렙토마이신내성 크레브실라뉴모니아를 5%의 뮤신을 함유한 트립은 -소이 육즙(참조 실시예 2)에 현탁시키고 이 현탁액 0.25ml를 10마리씩으로 구성된 2 그룹의 생쥐에게 1마리당 1×10⁸세포의 비율로 복강내 투여한다. 접종 3시간후 100mg/kg의 스트렙토 마이신을 복강내 투여한다 다른 한 그룹에는 실시예 6에서 수득한 본 물질 120mg/kg을 다시 복강내투여한다. 투여 6일후의 생존율은 스트렙토마이신만을 투여한 그룹에서는 50%였고, 본 물질을 스트렙토마이신과 병용한 그룹에서는 80%였다.

실시예 8

실시예 1의 방법으로 배양한 콜리스틴-내성 수도모나스 아루 기노자를 5%의 뮤신을 함유한 트립토-소이 육즙(참조 실시예 2)에 넣은 것을 2그룹의 ICR-JCL 균주를 접종한 수컷 생쥐(체중 : 22±1g, 10마리씩 1그룹) 2그룹에 1×10⁸세포/생쥐의 비율로 접종한다. 접종 2시간후 190mg/kg (1㎍=30U)의 콜리스틴을 복강내투여한다. 실시예 6에서 수득된 본 물질 1,500mg/kg를 또한 경구투여한다. 투여 6일후의 생존율은 콜리스틴 만을 투여한 그룹은 40%이고 본 물질과 병용한 그룹은 70%이다.

Claims (1)

1. 한외 원심분리에 의해 측정된 분자량이 5,000 내지 300,000이고 42.0 내지 46.0%의 탄소, 5.3 내지 7.0%의 수소 및 0.5 내지 8.0%의 질소를 함유하며, 비선광도는 0 내지 +50.0°, 수용성이고, 아세톤 피리딘 클로로포름 및 헥산에는 불용성, 적외선 스펙트럼은 840cm^-1및 890cm^-1에서 특유의 흡수를 나타내며, 핵자기 공명 스펙트럼에 의한 사카라이드 성분의 단백질성분에 대한 비율은 62/38내지 97/3인 물질을 코리오루스 속(Coriolus 屬)에 속하는 담자균 균사체를 수성 용매에서 추출하여 여과, 중화, 농축, 투석, 염출 시킴을 특징으로 하여 무수분 말상의, 항생제에 대하여 내성을 가지게 되는 약물-내성박테리아의 약물에 대한 민감도를 증진시키는 질소함유 폴리사카라이드의 제조방법.

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