JPS61241301A - 抗腫瘍剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は抗腫瘍剤に関する。

本発明の目的は容易に大量生産でき、しかもほとんど毒
性のない抗腫瘍剤を提供するにある。

アルカリ土類金属もしくはアグロバクテリウム属に属す
る微生物の株がβ−１，８−結合を主な結合様式として
有する水不溶性、加熱凝固性（ｔｈｅｒｍｏ−ｇｅｌａ
ｂｌｅ　）のグルカン（以下’Ｉ’ＡＫ−Ｎと略称する
）を生産することは、日本特許出願公告昭４３−７００
０号、同４８−８２６７８号、同４８−３２６７４号お
よび英国特許第１８５２９（８号によってすでに知られ
ている。しかしながら、その医薬的用途は未だ全く知ら
れていない。

本発明者らは、’Ｉ’ＡＫ−Ｎ、それを部分的に加水分
解した低重合体（以下ＴＡＫ−Ｄと略称する）のカルボ
キシメチル化誘導体（以下ＯＭＴＡＫと略称する）につ
いて種々研究を重ねた結果、これらが強力な抗腫瘍作用
を有することならびにそれらの示す腫瘍阻止率ならびに
腫瘍消失効果が著しく高いことを見出し、鋭意研究を続
行して遂に本発明を完成するに至った。

本発明は、水不溶性、平均重合度的１７０において加熱
凝固性のβ−１，３−グルカンもしくはその部分氷解低
重合体のカルボキシメチル化誘導体を含有する抗腫瘍剤
である。

本発明に用いられる水不溶性、加熱凝固性のβ−１，３
−グルカン（ＴＡＫ−Ｎ）は、上記の特許公報類に詳述
されている通り、アグロバクテリウム“ラジオバクター
（ＩＦＯ１８１２７，ＡＴＯＯ６４６６）、アグロバク
テリウム・ラジオバクター・Ｕ−１９（ＩＦＯ１８１２
６，ＡＴＯＯ２１６７９゜微工研菌寄第１１６６号）、
アルカリゲネス・フェカリス・パル・ミクソゲネス・Ｎ
ＴＫ−ｕ　（Ｉ　Ｆｏ　１８１４０、ＡＴＯＯ２１６８
０，微工研菌寄第１１６８号）あるいはアルカリゲネス
・フェカリス・パル・ミクソゲネス・Ｋなどの培養によ
って生産されるもので、β−１，３−結合を主な結合様
式として有し、水に不溶性で、多くのものは水分と共に
加熱するとゲル化して凝固するという、他のβ−１，３
−グルカンには見られない特性を有している。

ＴＡＫ−Ｎの重合度は製造法の違いによって変動しうる
。たとえば、マナーズらの方法（カーボハイドレート・
リサーチ、第１７巻、１０９頁、１９７１年）で測定し
た場合、その平均重合度は約７０−１，０００を示すが
、３００−５００の場合が多い。そして、これらは一般
に加熱凝固性であるが、平均重合度が低下すると凝固性
を失う。たとえば平均重合度１１３においては非凝固性
であるが、約１７０においては凝固性を有する。

本発明者らは、ＯＭＴＡＫが強い抗腫瘍作用を有するこ
とを見出した。

ＴＡＫ−Ｄは’ｒＡＫ−Ｎの加水分解によって製造され
る。その加水分解手段としては、従来からよく知られて
いる酸加水分解、アルカリ加水分解もしくはβ−１，３
−グルカナーゼによる酵素加水分解などがある。

反応混合物からＴＡＫ−Ｄを分離するには、多糖類、寡
糖類の精製や分画に用いられる厘々の手段、たとえば、
酸性における沈澱、エタノール添加による沈澱、ゲル濾
過などを用いうる。このように手段により所望の平均重
合度を持つ各種の低重合体を分離することができる。

本発明にいうＴ　Ａ　Ｋ−ＤはＴＡＫ−Ｎの部分加水分
解によって生成するあらゆる種類の低重合体を包含して
いる。

前記のように、微生物の培養物から得られるＴＡＫ−Ｎ
の平均重合度は広い範囲にわたっている。

そして、培養物中に生成したβ−１，３−グルカンは培
養時間の延長と共に加水分解される傾向があるので、前
記の範囲よりもさらに低重合度のＴＡＫ−Ｎを製造する
こともできる。

一方、ＴＡＫ−ＤはＴＡＫ−Ｎの加水分解によって製造
されるから、その平均重合度は原料ＴＡＫ−Ｎのそれよ
りも当然小さいが、一般的に言えば、大部分のＴ　Ａ　
Ｋ−Ｄに相当する重合度の’ｒＡＫ−Ｎが微生物の培養
によっても生成されうる。

そして’Ｉ’ＡＫ−ＮとＴＡＫ−Ｄとは、平均重合度が
同じである限り、両者の間に実質的な相違がない。

以下’Ｉ’ＡＫ−ＮからＴＡＫ−Ｄを製造する態様を実
験例によって説明する。

実験例１（硫酸による加水分解） ＴＡＫ−Ｎ（平均重合度５４０．マナーズらの方法によ
り測定した。以下特に記載しない限り同方法により測定
）６０ｙを４Ｎ硫酸６ｅに懸濁し、６０’Ｃの恒温水槽
中で攪拌しながら加水分解反応を行った。３０分後およ
び１時間後ｉこ、それぞれ２１宛反応液を採取しく各反
応液を順に５１ｓＳ２とする）、残りをさらに１時間反
応させて反応液Ｓ８を得た。Ｓｌｅ　Ｓ２＊　ｓａから
それぞれ以下の操作により分解物標品を調製した。

先ず遠心分離により沈澱を集め、１．６４の蒸溜水によ
る洗滌と遠心分離を２回くり返してからふたたび１．２
４の蒸溜水に懸濁し、８Ｎ水酸化ナトリウム溶液を加え
て中和したのち、凍結乾燥して粉末２２９．２０ｇおよ
び１９ｇを得た。次いでこれらの粉末それぞれ７ノを蒸
溜水７００ｔｘｌに懸濁し、８Ｎ水酸化ナトリウム溶液
でｐＨ１２，５に調整し、溶液Ｓｌ’ｓ　Ｓ２’ｓ　８
８’を得た。Ｓｌ’ｔ　８２’にエタノールを終濃度６
０％となるように加え、生ずる沈澱を除いたあとエタノ
ールをさらに７０％まで加え稀塩酸で中和して沈澱を生
成させ、これらの沈澱を蒸溜水２５０　ｍｌでくり返し
４回洗浄したのち凍結乾燥したところ、Ｓｌ′からは１
．８　ｆ　、　Ｓ２’からは１．５ｇの白色粉末（それ
ぞれｓ−１，ｓ−■とする）が得られた。Ｓａ′にはエ
タノールを終濃度７０％となるように加え、遠心分離に
より沈澱を集めたのちふたたび蒸溜水約５００　ｙｘｌ
に懸濁し、エタノールを７０％となるように加えて少量
の塩酸で中和することにより沈澱を生成させた。

この沈澱を遠心分離により集め、蒸溜水２５０　ｍｌに
よる洗浄を４回くり返したのち凍結乾燥したところ、白
色粉末−（ｓ−１）ｓ、ｓｙが得られた。ＳＬｓ　　Ｉ
ＩおよびＳ−１の物理化学的特性値は第１表に示す通り
であった。

第　　１　　表 平均重合度”　　　１２５　　　８２　　　６８元素分
析値 ０　　　　４０．１３　　４０．６５　　４０．９４Ｈ
６，７４６，７７６，７６ 純　　　　　度（％）′″　　９１．１　　　　９１．
１　　　　９３．８☆　上記マナーズらの方法により測
定 顛　フェノール硫酸法により求めたグルコース量から換
算 嫡ガス・クロマトグラフィーにより測定実験例２（ギ酸
による加水分解） （１）　　ＴＡＫ−Ｎ（平均重合度５４０）６ｇを８５
％ギ酸１５０ｇ／に溶解し、８８°Ｃで２０分間加水分
解反応を行なった。冷却後反応液を濃縮乾固し濃縮物を
水に懸濁したのち５Ｎ水酸化ナトリウム溶液でｐＨ１２
，５として溶解し、ふたたび５Ｎ塩酸でｐＨを７．０に
補正したのち遠心分離により沈澱を採取した。沈澱を蒸
溜水で充分洗浄したのち凍結乾燥して白色粉末（Ｆ−１
）５．ｔｆを得た。

（ｉｉ）　　（１）で用いたＴＡＫ−Ｎ１２ｆｌを９０
％ギ酸８００　ｙｓｌ中９５°Ｃで２０分間加水分解し
た反応液から、（１）と同様の操作により白色粉末（Ｆ
−１）１０．３Ｎを得た。

（ｌｉｉ）　　（１）で用いたＴＡＫ−Ｎ１２ｆを９０
％ギ酸４００、ｗｌ中９５°Ｃで４０分間加水分解した
反応液から、（１）と同様の操作により白色粉末５．４
ｇを得た。この粉末を０．０５　Ｎ水酸化ナトリウム溶
液に終濃度１．０％となるように溶解し、エタノールを
５７．５％まで加えて沈澱を生成させた。この沈澱を遠
心分離により集め、蒸溜水に懸濁して稀塩酸で中和し、
７０％エタノール水で充分洗浄したのち凍結乾燥して白
色粉末（Ｆ−Ｖ）２．２ｆを得た。

また、エタノール沈澱を採取したあとの上清液にさらに
エタノールを７０％になるように加え塩酸で中和して沈
澱を生成させ、遠心分離、７０％エタノール水洗浄、凍
結乾燥の操作を経て白色粉末（Ｆ−Ｍ）２．８ｆを得た
。さらに、加水分解反応液から最初の沈澱５．４ｇを採
取した残りの上清液中にはかなりの量の部分氷解物が溶
解した状態で存在していたので、この上清液を濃縮し、
遠心分離により沈澱と上清部とに分け、前者を凍結乾燥
して白色粉末（Ｆ−■）２．９ｆを、また後者をセファ
デックスＧ−２５カラムを用いたゲル濾過（溶媒０．１
　Ｍ重炭酸アンモニウム）により分画後凍結乾燥して白
色粉末（Ｆ−■）ｏ、’ｔｙを得た。

（ＩＶ）　　（１）テ用イ？＝Ｔ　ＡＫ　　Ｎ　１８　
ｆ　ヲ９０　％ギ酸４５０　ｍ１９９５°Ｃで４０分間
加水分解した反応液に（ｉｉＤと同様の濃縮、アルコー
ル沈澱、ゲル瀘過などの操作を適用し、４種の白色粉末
（Ｉｔ’−Ｎ２１ｆ、Ｆ−Ｖ［２，８ｇなど）を得た。

ここで得られたＦ−１，Ｆ−１，Ｆ−１，Ｆ　−Ｎ、Ｆ
−Ｖ＊　Ｆ−ＩＴ、ｒ−ＶＩおよびＦ−■の物理化学的
特性値は第２表に示す通りであった。また、これらのう
ちの重合度の小さいＦ−１以下の６種品を０．０２　Ｎ
水酸化ナトリウム溶液に溶解し、あらかじめ同一溶液で
処理しておいたセファデックスＧ−２００カラムを用い
て同一条件でそれぞれゲル濾過したところ、平均重合度
の大きい標品から大きさの順（Ｆ−１からＦ−■へ）に
それぞれ対称性を持った溶出像を形成して溶出し、各標
品ともに平均重合度を中心として重合度が正規分布して
いることを示した。

以下余白 第　　２　　表 ＯＨ Ｆ−１２９９４０，７８６，４６９２Ｊ　＜０．０３Ｆ
−１１１８４１，７１６，９１９８，４＜０．０８Ｆ−
１５０４１，９８６，７７９１５＜０．０３Ｆ−ｆｆ　
４４４２．８５６．５０９０．８　＜０．０８Ｆ−Ｖ３
９４１．４４６．７１　！ｌＪ８．３　＜０．０１Ｆ−
■２４　　４２．６２　　６．９９　　９２．５　　　
＜０．０３Ｆ−■１６４２．４６６．９９９１．８　＜
０．０８Ｆ−■　　７　　３９．８４　　６．３７　　
９４．１　　　＜０．０３☆、飴、奮涜第１表脚註参照 本発明者らは、ＴＡＫ−ＮおよびＴＡＫ−Ｄをカルボキ
シメチル化することによりそれらの水酸基がカルボキシ
メチル化された新規な誘導体（ＣＭＴＡＫ）の生成する
ことを発見した。

本発明はこの発見に基くもので、一般式（式中Ｒの少な
くとも１ケは一０ｆｆ２０００Ｈ基、残余があればＨを
示し、ｎは整数を示す。該化合物の平均重合度は２ない
し１０００である）のβ−１，３−グルカン誘導体およ
びその塩である。

ＣＭ’Ｉ’ＡＫはＴＡＫ−ＮおよびＴＡＫ−Ｄを公知の
方法でカルボキシメチル化することによって得られる。

そのカルボキシメチル化は、たとえば、アルカリの存在
下にＴＡＫ−ＮまたはＴＡＫ−Ｄをモノクロル酢酸と反
応させることによって行いうる。

そのほか、通常糖類をカルボキシメチル化するために用
いる方法がすべて用いられうる。

その反応混合物からＯＭＴＡＫを採取するには、有機溶
媒の添加による沈澱など、糖類の精製に用いられる一般
的手法を用いうるのみならず、ＣＩＭＴＡＫ中のカルボ
キシメチル基の含量もしくはＣＭＴＡＫの水溶性の程度
に応じて、イオン交換クロマトグラフィーもしくはゲル
濾過などの手法を適宜使用することができる。

このようにして得られるＣ！Ｍ’Ｉ’ＡＫはその分子中
にカルボキシメチル基を含んでいるが、その基の含量は
カルボキシメチル化反応の条件によって大巾に変動する
。中和滴定によって定量した場合、通常のカルボキシメ
チル化反応で得られるＣＭ’ｌ’ＡＫ中のカルボキシメ
チル基含量は一般にＯＭＴＡＫの分子中のグルコース残
基１個当り３個以内である。本発明にいうＣＭ’ｒＡＫ
とは’ｌ’ＡＫ−ＮもしくはＴＡＫ−Ｄをカルボキシメ
チル化して得られる分子中にカルボキシメチル基を検出
しうるちの全てを含んでおり、カルボキシメチル化の程
度にかかわりない。

なお、Ｃ！ＭＴＡＫは遊離酸として示された前記一般式
からも明らかなように、容易に各種の塩基と反応してそ
れらの塩、たとえばナトリウム、カリウム、カルシウム
、アルミニウム、マグネシウム、アミン塩などを形成す
る。本発明のＣ！ＭＴＡＫは遊離酸の形態のほかその塩
、殊に無毒性塩を包含する。

第３表に、本発明者らがＴＡＫ−ＮおよびＴＡＫ−Ｄか
ら上記の手法で調製したＣＭ’ｌ’ＡＫのうちの代表的
なものについてその物性値を示す。これらの物性の測定
は全て、試料をあらかじめ微量検体乾燥装置を用いて五
酸化リン上減圧下に６０°Ｃで１０時間乾燥したのち行
なった。同表中ＣＭ’ｆ’ＡＫＮｃｉｌ−１１はそれぞ
れ順に実施例１２−２２で得られる製品に対応している
。

以下余白 第　　３　　表 ＯＭＴＡＫ　出発材料　−０Ｈ２０００（３山　元素分
析値　　　粘度７１　　ＴＡＫ−Ｎ　　５４０　　０．
５４　　４０．９７．　６．５７　　２．７　　２．５
７２　　　　／／　　　５４０　　０．７５　　８８．
５１　　５．４５　　５．７　　２．７１８　　　　／
／　　　５４０　　１．０７　　８７．８９　　４．７
７　　１０．０　　２．６０４　　　　／／　　　２５
５　　０．３０　　４０．８２　　６．０５　　２．７
　　２．１０５、　　　／／　　　２５５　　０．８６
　　８９．８２　　６．０６　　８．９　　２．２７６
　　Ｔａ−Ｄ　　２９９　　０．５９　　８８．８４　
　５．７１　　４．８　　２．２５７　　　　／／　　
　２９９　　１．１５　　８７．９Ｂ　　　４．８６　
　９．０　　２．２９８　　　　／／　　　　１１８　
　０．５１　　４０．２２　　５．７４　　４．７　　
１．９６９　　　　／／　　　　１１Ｂ　　　１．２２
　　　Ｂ７．０１　　４．７８　　９．９　　１．４９
１０　　　　／／　　　　６８　　０Ｊ６　　４０．４
６　　５．９６　　　Ｂ、５　　１．６８☆　マナーズ
らの方法により測定 顛　１グルコース残基当りのカルボキシメチル基数を示
す。中和滴定により測定 轍同軸二重円筒型回転粘度計により、下記条件下で測定 （溶媒）　０．　Ｉ　Ｎ水酸化ナトリウム溶液（濃度）
０．２％、（温度）３０’Ｃ。

（すり速度）１０４６．７（秒　） また、第１図、第２図はそれぞれ上表Ｎ１２、隆１１の
ＯＭＴＡＫの赤外部吸収スペクトルを示す。

上記のようにして得られるＣ！Ｍ’ｌ’ＡＫはすべての
平均重合度たとえば５６５以上のものから約７のものに
至るまでいずれもが温血動物、たとえば人、家畜、家禽
、犬、猫、ウサギ、ラット、マウスなどの各種の腫瘍特
に治療の困難性が指摘されている固型腫瘍に対してすぐ
れた抑制作用を示す。

ＯＭＴＡＫの投与量は、対象腫瘍を有効に阻止しうる量
であればよく、たとえば、投与剤の種類、対象動物、腫
瘍の症状、投与経路、剤型などにより変動しうる。

一般に、−回の投与量は約０．２−２，０００ダ／ｋｑ
体重で、その上限は好ましくは約５００Ｗ／ｋＶ、さら
に好ましくは約２００１１１９／ｋＱ程度の場合が多く
、注射剤の場合、その上限は約１００＃／＃程度の場合
が多い。投与回数は、１日１回−６回の範囲で適宜選択
されうる。

マウスに移植したザルコーマ１８０腫瘍、５Ｎ−３６腫
瘍、ＭＭ−４６腫瘍、００Ｍ腺癌、ＮＴＦ細網肉腫、エ
ールリッヒ腫瘍などの発育は、ＣＭＴＡＫを腫瘍細胞移
植前、移植後あるいは移植と同時に腹腔内、静脈内も、
シ＜は皮下に、あるいは経口的に１回もしくはくり返し
て、１回当りの投与量が約ｔ−ｉ、ｏｏｏη／ｋｔｉと
なるように投与することにより顕著に抑制された。

ＯＭＴＡＫの毒性はきわめて低く、たとえば急性毒性試
験においてマウスあるいはラットに経口投与および腹腔
内投与した時のＬＤ５．値はそれぞれ５ｇ／ｋｇ以上、
２９／に９以上であり、人に対しても安全に反復投与す
ることができる。

投与方法としては腫瘍治療における一般的な方法を適用
できる。それは皮下、筋肉内もしくは必要に応じて静脈
内への注射、経口投与、直腸内への投与および外用剤と
して塗布、点滴などが可能である。投与量および投与ス
ケジュールは患者および腫瘍の種類、症状などを勘案し
て適宜選択できる。たとえば、注射剤の場合、１日当り
ｌ−２、０００’ｆ／ｋＱ程度、好ましくは、３−５０
０１ｑ／ｋｑ程度がよい。

ＣＭＴＡＫは他の抗腫瘍剤と併用することもできる。免
疫学的効果の増強を肩らすような併用は特に効果的であ
る。

次に本発明の実施例を示す。これらの例の幾つかは、動
物をモデルとして本発明の抗腫瘍剤の効果を示している
。そしてこれらの動物における効果が他の温血動物にお
いても再現することはよく知られている。また他の例に
おいてはＣＭ’ｒＡＫの製造法とその物性、ならびに本
発明の抗腫瘍剤の投与形態の一部が示される。

もちろん、本発明はこれらの例によって制限されるもの
ではない。

実施例１ 平均体重２８９のｌ０Ｒ−ＪＯＬマウスの右鼠径部皮下
に６×１０個のザルコーマ１８０腫瘍細胞を移植し、移
植後２４時間目から実施例１２で製造したＯＭ’Ｉ’Ａ
Ｋの種々の量を１日１回すつ１０日間連続して腹腔内に
投与した。

移植後３５日口の腫瘍を摘出しその重量を測定し、無投
与対照群のそれと比較して腫瘍阻止率を算出した。

なお、試料は乳鉢ですりつぶしたのち注射用蒸溜水に溶
解し、オート・クレープ（１２０’Ｃ。

２５分）で完全に滅菌して投与した。第４表に示す通り
、ＯＭＴＡＫ１回投与量１−４０１１１９／ｋＱで腫瘍
発育は抑制され、原体のＴＡＫ−Ｎよりも低投与量で抑
制効果が顕著であることが認められた。

以下余白 第　　４　　表 （ダＡり）　　（ｆ）　　（％） 実験１ ０Ｍ’Ｉ’ＡＫ　　　ｌＸｌ０　　（Ｌ７７　　７８．
９　　１／６／／　　　　８Ｘ１０　０．０８　　９９
．２　　５／６／／　　　　５Ｘ１０　０．２：Ｉｍ　
　　９８．７　　４／６実験２ −　　２．１７　　　　　０／６ ０ＭＴＡＫ　　　５Ｘ１０　０　　１００　　６／６／
／　　　ｌ０ＸＩＯＯ，０７９６，８５／６／ｌ　　　
１５Ｘ１０　０．０８　　９６．８　　５／６／／　　
　２０Ｘ１０　０．２１　　９０．３　　８／６／Ｉ　
　　４０Ｘ１０　０．１８　　９１．７　　１／６実施
例２ 実施例１２で得たＣＭ’Ｉ’ＡＫを注射用蒸溜水に溶解
して試料としたものと、これをオート・クレープを用い
て、１２０　’Ｃで２５分間加圧加熱して完全滅菌した
ものとを実施例１の方法により試験した結果、第５表に
示す通りいずれの試料においでも著明な抗腫瘍効果が認
められた。

第　　５　　表 実験１ −７．２　　　　　　０／２ ＊ ＣＭ’ｆ’ＡＫ　　１０　Ｘ　１０　０．０５　　９９
　　２／８／／　　＊＊１０ｘｌＯＯ，１８９８２／８
実験２ −５．４４　　　　　０／６ ＊ ＯＭＴＡＫ　　ｌ０ＸＩＯＯ，５９８９，２８／７〃　
＊＊ｌ０Ｘ１０　０．７１　　８６．９　　８７７＊　
注射用蒸溜水に溶解 ＊＊注射用蒸溜水に溶解後オート・クレープ中で１２０
°Ｃ９２５分間加熱 実施例３ 実施例１２で得たＯＭＴＡＫを注射用蒸溜水に溶解し、
オート・クレープ中で完全滅菌したのち１日１回８ＩＩ
ｇ、　５ダ、ＩＯｑ、２０ｑ、４０ｍｇまたは８０１１
９７に’ｊずつ連続５日間平均体重２８９のｌ０Ｒ−Ｊ
ＯＬマウスの腹腔内に投与した。最終投与時から数えて
２４時時間区６ＸＩＯ個のザルコーマ１８０腫瘍細胞を
右鼠径部皮下に移植して移植後３５日口の腫瘍重量を測
定した結果、第６表に示す通り、いずれの場合にも腫瘍
発育が顕著に抑制された。

第　　６　　表 （Ｍｆ／／に９）　（ｆ）　　（％） 実験１ −　　６．４１　　　　　０／６ ０ＭＴＡＫ　　　８Ｘ５　１．４４　　７７．６　　８
７５　　’／／　　　　５Ｘ５　　Ｂ、５５　　４４．
８　　１／６／／　　　　１０Ｘ５　０．１９　　９７
．１　　８／６／／　　　　２０Ｘ５　０．０５　　９
９．２　　４／６実験２ −　　５．０８　　　　　０１５ Ｃ！ＭＴＡＫ　　４０Ｘ５　０．１１　　９７．８　　
４／６／／　　　　８０Ｘ５　０．１５　　９７．０　
　４／６実施例４ 体重２０−２４９のＩＣ几−ＪＯＬマウスの腋窩部皮下
に４×１０個のザルコーマ１８０腫瘍細胞を移植し、腫
瘍が完全に生着した移植後７日目からＯＭＴＡＫを１日
おきに９回、１回１０ｑ／ｋＱずつ腹腔内に投与した。

移植後２６日目の腫瘍重量を測定し、無投与対照群のそ
れと比較して腫瘍阻止率を算出した。

なお、Ｃ！Ｍ’Ｉ’ＡＫとしては実施例１２，１５゜１
６で得たものを用い、それぞれ生理食塩水に溶解して投
与した。第７表に示す通り、いずれの試料も顕著な腫瘍
発育抑制効果を示した。

第　　７　　表 （Ｉｌｌｌｋｇ）　（ｆ）　　（％） −２，８７０／７ ＊ ＯＭ’Ｉ’ＡＫ　１０Ｘ９０　１００　７／７／／　　
＃１０Ｘ９　　０．２８　　９０．２　　４／７／／　
　”’　１０Ｘ９　　０．０１　　９９．７　　６／７
＊、＊＊、林＊はそれぞれ実施例１２，１５．１６で製
造したＯＭＴＡＫ 実施例５ 平均体重２８ｆのｌ０Ｒ−ＪＯＬマウスの右鼠径部皮下
に８．　Ｉ　Ｘ　１０個のエールリッヒ・カルシノーマ
腫瘍細胞を移植し、実施例１２で得たＣＭＴＡＫを注射
用蒸溜水に溶解してオート・クレープ中で完全に滅菌し
たのち、移植後２４時間目から１日１回２０８９／ｋｑ
または４０１１ｆ／／ｋＱずつ連続ｌＯ日間腹腔内に投
与した。移植後３５日目の腫瘍を摘出してその重量を測
定し、腫瘍阻止率を算出した。その結果は第８表の通り
で、ＣＭ’ｌ’ＡＫ１回投与量２０−４１１ｆ／ｋＩｊ
で腫瘍発育は抑制された。

第　　８　　表 ＣＷｇ／に９）　ＣＩ＞　　（％） −１，９８１／６ ＣＭＴＡＫ　２０Ｘ１００．８０５８．５３／６／／　
　４０Ｘ１００．６０６８．９２／６実施例６ 平均体重２３ｇのｌ０Ｒ−ＪＯＬマウスの右鼠径部皮下
にｌ。Ｉ×１０個の００Ｍ腺癌細胞を移植し、実施例１
２で得たＣ！ＭＴＡＫを注射用蒸溜水に溶解してオート
・クレープ中で滅菌したのち、移植後２４時間目から１
日１回ずつ１０日間、毎回２ｏｗｙｌｋｙとなるように
腹腔内に投与した。移植後３５日目の腫瘍を摘出してそ
の重量を測定し、腫瘍阻止率を算出した結果、第９表に
示す通り、腫瘍発育が顕著に抑制された。

第　　９　　表 （’Ｒｆｌｌｋｌｊ）　（１）　　（％）−８，４２１
／６ ＣＭＴＡＫ　２０Ｘ１０１．０８６９．９　１／６実施
例７ 実施例１４，１８．２０および２２で得た４種のＯＭＴ
ＡＫをそれぞれ生理食塩水に溶解し、実施例１の方法に
したがってザルコーマ１８０腫瘍に対する作用を試験し
た結果、いずれも１回投与量５ｑ／＃、ｔｏ日日間連続
投与で顕著な発育抑制効果を示した。

実施例８ ＣＭ’Ｌ’ＡＫ　　　　　　　　　　　　　　１５０１
ｑ乳　　　　糖　　　　　　　　　　　　　　　　　　
４８■ステアリン酸マグネシウム　　　　　　　２■計
２００ｑ 以上を１カプセル当りの量とする。

上記の割合で、ＯＭＴＡＫと乳糖とを混合し打錠したの
ち粉砕し、ステアリン酸マグネシウムを混ぜる。混合物
を各２号カプセルに充填する。

実施例９ ＣＭ’ｌ’ＡＫ　　　　　　　　　　　　　４００’Ｉ
ｇ乳　　　　糖　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　９５ダＨＰＯ−Ｌ（オキシプロピルセルローズ）　　
　５ダ計５００ｍｇ 以上を１用量単位とする。

上記の割合で、王者を混合したのち少量の水を加えて練
合機で練合、整粒し、乾燥して再び整粒し、篩過し、上
記の単位毎に分包する。

実施例１０ ＯＭＴＡＫ　（実施例２０の製品）２Ｆを注射用蒸溜水
（もしくは生理食塩水）１００ｇ／に溶解、濾過し、ｐ
液を２０ｇＺずつアンプルに分注、溶閉後常法により加
熱滅菌する。

実施例１１ ＣＭ’ｌ’ＡＫ　　　　　　　　　　　　　１６０ｗ！
ｇソルビット　　　　　　　　　　　　２００１１ＩＩ
カルボキシメチルセルローズ・ナトリウム　　　１０ｇ
Ｉｇポリソルベート８０　　　　　　　　　　８．２ダ
パラオキシ安息香酸メチル　　　　　　　４ｑパラオキ
シ安息香酸プロピル　　　　　０．４　ｑ以上を注射用
蒸溜水に混合しくＯＭＴＡＫを用いた場合は、要すれば
Ｎ／１０水酸化ナトリウム溶液で中和する）全量を４　
ｍｌとする。

実施例１２ ＴＡＫ−Ｎ（平均重合度５４０　＞８１をイソプロパツ
ール８０　ｔｉｔに懸濁し、室温で８０分間攪拌したの
ち、攪拌しながら３０％水酸化ナトリウム溶液８ＩＩＩ
／を約６０分にわたってゆっくりと添加し、さらにゲル
状物質の形成を妨げる目的で約９０分間室温で強く攪拌
した。次いでモノクロロ酢酸３．６ｆを加え、６０−７
０℃で５時間攪拌してカルボキシル化反応を行なった。

生成物を枦取し、メタノール−酢酸混液（７：３（Ｖ／
Ｖ））で充分洗浄してから沈澱物を濾過して集め、８０
％メタノール水、メタノール、アセトンの順にそれぞれ
でくり返し充分洗浄したのち減圧下に乾燥してＯＭＴＡ
Ｋ２．９Ｆを得た。カルボキシメチル基含量（グルコー
ス１残基当たりのカルボキシメチル基の数、以下同じ）
０．５４゜ 実施例１３ ＴＡＫ−Ｎ（平均重合度５４０）１．１Ｍをイソプロパ
ツール４０ｍ１に懸濁し、室温で３０分間攪拌したのち
攪拌しながら３０％水酸化ナトリウム溶液２　ｍｌを１
５分おきに１回に０．５　ｙｘｌずつ４回に分けて添加
し、さらに９０分間室温で攪拌した。

次いでモノクロロ酢酸０．９りを１０分おきに０．３ｆ
ずつ３回に分けて加え、５０℃で１５０分間撹拌してカ
ルボキシメチル化反応を行なった。生成物を遠心分離に
より集め、水５０耐に溶解して酢酸で中和した。この中
和液にメタノールＬ２０ｍｌを加えて、生じた沈澱物を
遠心分離により集め、まず８０％メタノール水８００＋
ｗｊ！とエタノール１００　ｗｔｌにより、次いで８０
％エタノール水３０ＯＮ／とエーテル２００　ｔｅｌの
混液によりそれぞれ充分洗浄したのち凍結乾燥してＯＭ
ＴＡＫｌ、７Ｆを得た。カルボキシメチル基含量０．７
５゜実施例１４ ＴＡＫ−Ｎ（平均重合度５４０）１．５Ｆをイソプロパ
ツール４０ｍ１に懸濁し、室温で３０分間攪拌したのち
攪拌しながら３０％水酸化ナトリウム溶液４　ｍｌを１
５分おきに１回に１　ｍｌずつ４回に分けて添加し、さ
らに９０分間室温で攪拌した。次いでモノクロロ酢酸１
．８Ｆを１０分おきに０．６ｆずつ３回に分けて加え、
５０°Ｃで１５０分間攪拌してカルボキシメチル化反応
を行なった。生成物を遠心分離により集め、水４０ｍ１
に溶解して酢酸で中和した。この中和液にメタノール９
０ｍ１を加えて、生じた沈澱物を遠心分離により集め、
まず８０％メタノール水２００　ｍｌとエタノール１０
０Ｍ／の混液により、次いで８０％エタノール水２００
ｍ１とエーテル２００ｇ／の混液によりそれぞれ充分洗
浄したのち凍結乾燥してＣＭ’ｌ’ＡＫ２．Ｏｆを得た
。カルボキシメチル基含量１．０７゜実施例１５ ＴＡＫ−Ｎ（平均重合度２５５）８．２ｇを水３３耐に
懸濁し、室温で攪拌しながら水酸化ナトリウムｔｙを加
えたのち、モノクロロ酢酸ナトリウム２．４ｆを添加し
、室温で２時間攪拌してカルボキシメチル化反応を行な
った。その後ふたたび水酸化ナトリウム１ｆとモノクロ
ロ酢酸ナトリウム２．４１を添加し、室温で３時間攪拌
して反応を行なったのち、さらに水酸化ナトリウム１ダ
とモノクロロ酢酸ナトリウム２．４１を添加し、室温で
２時間攪拌して反応を継続した。反応液にエタノール１
１を加え、生じた沈澱物をグラスフィルター上でエタノ
ールを用いてＰ液がフェノールフタレンで赤色を呈しな
くなるまで充分洗浄したのち、減圧下に５０°Ｃで乾燥
した。得られた粉末８．７ｇを水９０耐に溶解し、酢酸
で中和したのちエタノール２１０ｇ／を加えた。生じた
沈澱物を遠心分離により集め、さらに８０％エタノール
水で洗浄後凍結乾燥してＯＭＴＡＫ２．６１を得た。カ
ルボキシメチル基含量０．８０゜ 実施例１６ ＴＡＫ−Ｎ（平均重合度２５５）６．４ｇを水６６ｙｘ
ｌに懸濁し、水冷下で攪拌しながら水酸化ナトリウム４
ｇを加えたのち、モノクロロ酢酸ナトリウム９．６ｇを
添加し、水冷下で２時間攪拌してカルボキシメチル化反
応を行なった。その後ふたたび水酸化ナトリウム４ｆと
モノクロロ酢酸ナトリウム９．６ｇを添加し、水冷下で
３時間攪拌して反応を行なったのち、さらに水酸化ナト
リウム４ｆとモノクロロ酢酸ナトリウム９．６１を添加
し、水冷下で３時間攪拌して反応を継続した。反応液に
エタノール１ｇを加え、生じた沈澱物をグラスフィルタ
ー上でエタノールを用いて炉液がフェノールフタレンで
赤色を呈しなくなるまで充分洗浄したのち、減圧下５０
°Ｃで乾燥した。得られた粉末８．６ｆ！を水１７２ｇ
／に溶解し、酢酸で中和したのち、エタノール４８０ｍ
１を加えた。生じた沈澱物を遠心分離により集め、さら
に８０％エタノール水で洗浄後凍結乾燥してＯＭＴＡＫ
５．６Ｆを得た。

カルボキシメチル基含量０．３６゜ 実施例１７ ＴＡＫ−Ｉ）（Ｆ−１，平均重合度２９９）１．５ｆを
イソプロパツール４０耐に懸濁し、実施例１３の場合と
同様にしてカルボキシメチル化反応を行なったのち、実
施例１３′の場合と同様に反応生成物を洗浄してＯＭＴ
ＡＫｌ、９１を得た。カルボキシメチル基含量０．５９
゜ 実施例１８ ’Ｉ”ＡＫ−Ｄ（Ｆ−Ｉ、平均重合度２９９）１．５１
をイソプロパツール４０ｇ／に懸濁し、実施例１４の場
合と同様にしてカルボキシメチル化反応を行なったのち
、実施例１４の場合と同様に反応生成物を洗浄してＯＭ
ＴＡＫ２．２ｆを得た。カルボキシメチル基含量１．１
５゜ 実施例１９ ’Ｉ’ＡＫ−Ｄ（Ｆ−ＩＩ、平均重合度１１ｇ）１．５
ｆをイソプロパツール４０ｍ１に懸濁し、実施例１３の
場合と同様にしてカルボキシメチル化反応を行なった。

生成物を遠心分離により集め、水４０ｇ／に溶解して、
酢酸で中和した。この中和液にメタノール９０ｔｔｔｌ
を加え、生じた沈澱物を遠心分離により集め、まず８０
％メタノール水２００　ｍｌにより、次いで８０％エタ
ノール水２００　ｍｌによりそれぞれ充分洗浄したのち
凍結乾燥してＯＭＴＡＫｌ、４りを得た。カルボキシメ
チル基含量０．５１゜実施例２０ ＴＡＫ−Ｄ（Ｆ−１，平均重合度１１３）１．５１をイ
ソプロパツール４０ｘｌに懸濁し、実施例１４の場合と
同様にしてカルボキシメチル化反応を行なった。反応生
成物を実施例１９の場合と同様に洗浄してＯＭＴＡＫ２
．３ｆを得た。カルボキシメチル基含量１．２２゜ 実施例２１ ’Ｉ”ＡＫ　−Ｄ　（Ｓ　−１、平均重合度６８）１．
５ｆをイソプロパツール４０ｍ１に懸濁し、実施例１３
の場合と同様にしてカルボキシメチル化反応を行なった
。反応生成物を実施例１９の場合と同様に洗浄してＯＭ
ＴＡＫｌ、４ｇを得た。カルボキシメチル基含量０．３
６゜ 実施例２２ ’Ｉ’ＡＫ−Ｄ（Ｓ−１，平均重合度６８）１．５Ｆを
イソプロパツール４０ｔｓｔに懸濁し、実施例１４の場
合と同様にしてカルボキシメチル化反応を行なった。反
応生成物を実施例１９の場合と同様に洗浄してＣ！ＭＴ
ＡＫ１．４Ｆを得た。カルボキシメチル基含量０．４５
゜

【図面の簡単な説明】

第１図、第２図はそれぞれ第３表中ＣＭ’ｌ’ＡＫ１’
ｌ＆１２．Ｎａ１ｌの赤外部吸収スペクトル曲線を示す
。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中Ｒの少くとも１ケは−ＯＨ＿２ＣＯＯＨ基、残余
   があればＨを示し、ｎは整数を示す。該化合物の平均重
   合度は２ないし１０００である）のβ−１，３−グルカ
   ン誘導体およびその塩。