SU1632973A1 - Способ получени антигена аденовирусов крупного рогатого скота - Google Patents
Способ получени антигена аденовирусов крупного рогатого скота Download PDFInfo
- Publication number
- SU1632973A1 SU1632973A1 SU894637897A SU4637897A SU1632973A1 SU 1632973 A1 SU1632973 A1 SU 1632973A1 SU 894637897 A SU894637897 A SU 894637897A SU 4637897 A SU4637897 A SU 4637897A SU 1632973 A1 SU1632973 A1 SU 1632973A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- taurus
- virus
- adenovirus
- carried out
- cells
- Prior art date
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к биотехнологии и ветеринарной вирусологии и касаетс получени антигенов аденовирусов крупного рогатого скота, необходимых дл создани вакцин, диаг- ностикумов и других биологических препаратов , а также дл проведени научно-исследовательских работ. Целью изобретени вл етс увеличение выхода целевого продукта. Указанна цель достигаетс использованием перевиваемых линий клеток почек теленка, выбранных из группы: Таурус-1, Тау- рус-2 ВСКК (ДП) № 007 и Таурус-4 ВСКК (ДП) № 010, при этом выращивание культуры клеток осуществл ют в течение 3-4 дн„, а заражение вирусом осуществл ют с множественностью О, 1- 0,2 Т1Щ5о на клетку. &
Description
Изобретение относитс к биотехнологии и ветеринарной вирусологии и касаетс получени антигенов аденовирусов крупного рогатого скота, необходимых дл создани вакцин, диаг- ностикумов и других биологических препаратов , а также дл проведени научно-исследовательских работ.
Цель изобретени - увеличение выхода целевого продукта.
Пример 1. Получение антиге- на аденовируса КРС II подгруппы (7-й серотип) провод т на линии перевиваемых клеток почек теленка Тау- рус-1, выращенных в стационарных матрасных колбах.
В 1,5-литровую матрасную колбу с клетками линии Таурус-1 на уровне 110 пассажа ввод т 0,25%-ный раствор трипсина, подогретого до 37°С, Через 10-15 с раствор удал ют, а сосуд с клетками помещают в термостат при 37°С на 2-3 мин. Затем внос т небольшое количество питательной среды и энергичным встр хиванием заканчивают процесс отделени клеток от стекла После этого в клеточную взвесь добавл ют среду роста - Игла MEM с 10% сыворотки крупного рогато- то скота (СКРС) и разливают на две 1,5-литровые матрасные колбы,
Эти культуры III пассажа инкубируют при 37°С в течение 3 сут до момен« 1
СО
15
20
25
та формировани плотного моносло . При заражении вирусом среду из куль- туральных сосудов сливают, клетки однократно промывают питательной ере- с дои и ввод т 0,1 ТЦЦ5о/клетку. Используют штамм вируса Русь 18/81 на уровне 10 пассажа на культуре клеток тестикул бычка после проведени его через организм теленка. Адсорбцию ви- Q руса провод т в термостате при 36°С в течение 90 мин. Затем добавл ют 200 мл поддерживающей среды - Игла MEM без СКПС с добавками 0,03% глю- тамина и 0,04% аргинина. Культуры ежедневно просматривают под малым . увеличением микроскопа На вторые сутки примерно 40-50% клеток подвергаютс специфической дегенерации, на третьи сутки в процесс вовлекаютс практически все клетки. Титр аденовируса равен 7,0 lg ТЦД50/мп. В параллельных опытах на первичной культуре клеток тестикул бычка титр вируса равен 4 lg ТЦЦ5о/мл.
П р и м е р 2. Получение антигена аденовируса КРС II подгруппы (7-й серотип) провод т на линии перевиваемых клеток почек теленка Тау- рус-1, выращенных в роллерах.
В 1-литровый роллерный флакон с клетками линии Таурус-1 ввод т взвесь клеток III пассажа, полученную из 1,5-литровой матрасной колбы в объеме 100 мл. Далее культуры готов т по примеру 1. Флакон с клетками помещают в роллерную установку с режимом вращени 20 об./ч. Заражение культур провод т во примеру 1 с множественностью 0,2 Т1Щ50/клетку, а сбор вируса осуществл ют через 48 ч после заражени . Титр вируса 7,75 lg , В параллельных опытах на первичной культуре клеток тестикул бычка титр 5,5 lg ТЦЦ50/мл.
П р и м е р 3. Получение антигена аденовируса КРС II подгруппы (7-й серотип) провод т по линии перевиваемых клеток почек теленка Таурус-1 , выращенных на микроносител х.
В 1-литровую колбу внос т 100х 10Й клеток 115 пассажа, взвешенных в 250 мл среды Игла MEM с 10% СКРС и 5 мл микроносител Цитолар-1, содержание примерно 40 тыс, частиц диаметром 230-250 мк.
Адсорбцию клеток на МН провод т в течение 24 ч при 35°С, затем включают магнитную мешалку со скоростью
вируса провод т в течение 1 ч 37°С. После этого внос т до
16329734
22 об./мин. На следующие сутки добавл ют 250 мл свежей питательной среды того же состава. Через 72 ч после формировани моносло на МН, среду роста удал ют, а на клетки внос т 10 мл вирусосодержащей суспензии с титром 4,75 lg . Адсорбцию при
500 мл поддерживающей среды, указанного в примере 1 состава. Перед заражением определ ют количество клеток в колбе, В данном случае оно было 300-10б.
Полна дегенераци клеток на МН зарегистрирована на третьи сутки, когда и производ т сбор вируса. Титр вируса равен 7 lg ,
П р и м е р 4. Получение антигена аденовируса КРС I подгруппы (1-й серотип) провод т на линии перевиваемых клеток почек Таурус-2, выращенных в стационарных матрасных колбах.
Культуру на уровне 100 пассажа готов т по примеру 1, но используют на четвертые сутки после экспланта- ции, когда формируетс монослой. При заражении ввод т аденовирус 1-го серотипа, штамм Bovine-10 с множественностью 0,1 ТЦД50/клетку, адсорбцию провод т в течение 90 мин при 37°С. Все последующие процедуры осуществл ют по примеру 1. Сбор вируса провод т через 96 ч. Титр аденовируса равен 4,5 lg , что не ниже титра вируса, полученного в параллельных опытах на первичной культуре клеток почек эмбриона коровы .
30
35
40
П р и м е р 5. Получение антигена аденовируса КРС I подгруппы (1-й се- 45 ротип) провод т на линии перевиваемых клеток почек теленка Таурус-2, выращенных в роллерах. Культуру на уровне 100 пассажа готов т по примеру 2, но монослой формируетс и четвертые сутки. При заражении ввод т аденовирус 1-го серотипа, штамм Bovine-10 с множественностью 0,2 ТЦЦ50/клетку. Все последующие процедуры осуществл ют по примеру 1. Сбор вируса провод т через 96 ч.
50
55
Титр аденовируса равен 5,5 1ЈТЦЦи/мл. В параллельных опытах на первичной культуре клеток почек эмбриона коровы титр вируса составил 5 1§ТЦЦи/мп,,
вируса провод т в течение 1 ч 37°С. После этого внос т до
б./мин. На следующие сутки до ют 250 мл свежей питательной ы того же состава. Через 72 ч е формировани моносло на МН, у роста удал ют, а на клетки в 10 мл вирусосодержащей суспенс титром 4,75 lg . Адс
П р и м е р 5. Получение антигена аденовируса КРС I подгруппы (1-й се- ротип) провод т на линии перевиваемых клеток почек теленка Таурус-2, выращенных в роллерах. Культуру на уровне 100 пассажа готов т по примеру 2, но монослой формируетс и четвертые сутки. При заражении ввод т аденовирус 1-го серотипа, штамм Bovine-10 с множественностью 0,2 ТЦЦ50/клетку. Все последующие процедуры осуществл ют по примеру 1. Сбор вируса провод т через 96 ч.
Титр аденовируса равен 5,5 1ЈТЦЦи/мл. В параллельных опытах на первичной культуре клеток почек эмбриона коровы титр вируса составил 5 1§ТЦЦи/мп,,
516329
П р и м е р 6. Получение антигена аденовафуса КРС II подгпуппы (7-й серотип) провод т на линии перевиваемых клеток почек теленка Таурус-4, выращенных в стационарных матрасных колбах. Культуру на уровне 145 пассажа готов т по примеру 1, ее ис- пользуют на четвертые сутки после формировани моносло . При заражении jg ввод т аденовирус 7-го серотипа, тамм Русь 18/81 - 0,1 ТЦЦ50/клетку. Все последующие процедуры осуществл т по примеру 1. Сбор вируса прово т через 112 ч. Титр аденовируса ра- 15 вен 5,5 lg ТЦЦдо/мл- в параллельных опытах на первичной культуре клеток тестикул бычка титр равен 4S5 lg
ТЦД5о/мл.
Пример 7. Получение антигена 20 аденовируса КРС II подгруппы (7-й серотип) провод т на линии перевиваемых клеток почек теленка Т урус-4, выращенных в роллерах. Культуру на уровне 145 пассажа готов т по приме- 25 ру 1, ее используют на третьи сутки, когда сформировалс монослой. При заражении ввод т аденовирус 7-го сероти- па, штамм Русь 18/81 - 0,2 ТЦЦщ/клетку . Все последующие процедуры осу- 30 ществл ют по примеру 1. Сбор вируса провод т через 96 ч. Титр аденовируса
73&
равен 6,25 lg . В параллельных опытах на первичной культуре клеток тестикул бычка составил 5,5 lg ТЦЦёо/мл.
Т г. ким образом, предлагаемый способ размножени аденовирусов КРС разных на предлагаемых лини х перевиваемых клеток почек теленка, имеющихс в большом количестве в жидком азоте, вл етс перспективным и высокоэкономичным.
Claims (1)
- Формула изобретениСпособ получени антигена аденовирусов крупного рогатого скота, включающий выращивание культуры клеток и заражение вирусом с последующей инкубацией, отличающий- с тем, что, с целью увеличени вькода целевого продукта, в качестве культуры клеток используют перепиваемые линии клеток почек теленка, выбранные из группы: Таурус-1, Таурус-2 ВСКК (ДП) № 007 и Таурус-4 ВСКК (ДП) № 010, при этом выращивание культуры клеток осуществл ют в течение 3- 4 дн., а заражение вирусом осуществл ют с множественностью 0,1-0,2 ТЦД на клетку.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU894637897A SU1632973A1 (ru) | 1989-01-18 | 1989-01-18 | Способ получени антигена аденовирусов крупного рогатого скота |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU894637897A SU1632973A1 (ru) | 1989-01-18 | 1989-01-18 | Способ получени антигена аденовирусов крупного рогатого скота |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU1632973A1 true SU1632973A1 (ru) | 1991-03-07 |
Family
ID=21422998
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU894637897A SU1632973A1 (ru) | 1989-01-18 | 1989-01-18 | Способ получени антигена аденовирусов крупного рогатого скота |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU1632973A1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2772751C1 (ru) * | 2020-12-08 | 2022-05-25 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Центральная научно-методическая ветеринарная лаборатория" | Способ получения гипериммунной сыворотки к аденовирусу bovine-10 крупного рогатого скота |
-
1989
- 1989-01-18 SU SU894637897A patent/SU1632973A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Сюрин В.Н., Фомина Н.В. Частна ветеринарна вирусологи „ - М.: Колос, 1979, с. 108. Авторское свидетельство СССР № 1347448, кл. С 12 N 5/00, С 12 N 5/02, 1987. * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2772751C1 (ru) * | 2020-12-08 | 2022-05-25 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Центральная научно-методическая ветеринарная лаборатория" | Способ получения гипериммунной сыворотки к аденовирусу bovine-10 крупного рогатого скота |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2012005502A (ja) | インフルエンザウイルスの複製のための動物細胞および方法 | |
CN107142249B (zh) | 一种全悬浮细胞培养生产猪伪狂犬病毒抗原的方法 | |
CN1970080A (zh) | 用悬浮的Vero细胞生产病毒疫苗的方法 | |
CN110373379A (zh) | 一种Marc-145全悬浮细胞直接培养猪蓝耳病病毒疫苗的方法 | |
US4059486A (en) | Cell culture process | |
CN108004202A (zh) | 一种用于无血清悬浮培养293t细胞的培养液 | |
CN101044237B (zh) | 制备病毒材料的方法 | |
CN109913404A (zh) | 鸡传染性法氏囊病毒活疫苗的制备方法 | |
US3887430A (en) | Culture medium for tissue culture techniques | |
CN103160458A (zh) | 一种适合Vero细胞生长的低血清培养基 | |
US4169761A (en) | Process for the cultivation of viruses | |
CN116836944A (zh) | 轮状病毒疫苗和生产轮状病毒疫苗的方法 | |
SU1632973A1 (ru) | Способ получени антигена аденовирусов крупного рогатого скота | |
US20140106403A1 (en) | Drain down and re-feed of microcarrier bioreactor | |
KR20120027381A (ko) | 일본뇌염 백신 및 그것의 제조 방법 | |
CN106367399B (zh) | 一种使用全悬浮技术生产猪细小病毒病疫苗的方法 | |
CN110241090B (zh) | 一种全悬浮细胞培养生产猪伪狂犬病毒抗原的方法 | |
CN107137705B (zh) | 猪伪狂犬gE基因缺失病毒灭活疫苗的生产方法 | |
CN110227153A (zh) | 一种猪轮状病毒亚单位疫苗的制备方法及其应用 | |
CN117070476B (zh) | 一株牛疱疹病毒4型毒株及其在灭活疫苗制备中的应用 | |
RU2751664C1 (ru) | Способ получения иммуногенных компонентов культурального вируса ящура типов А, О, Азия-1 с применением бессывороточной среды "Cellventoтм ВНК-200" для изготовления противоящурных вакцин | |
CN110862972B (zh) | 一种犬腺病毒ⅰ型无血清培养方法 | |
CN107523534B (zh) | 重组cho细胞的贴壁微载体悬浮培养方法 | |
RU2142816C1 (ru) | Способ получения антигерпетической вакцины и лекарственная форма на ее основе | |
CN116966290B (zh) | 猪流行性腹泻灭活疫苗制备方法及其应用 |