SU1518367A1 - Способ получени биомассы бактерий PRoVIDeNcIa SтUаRтII, обогащенной рестриктазой Р Sт 1 - Google Patents
Способ получени биомассы бактерий PRoVIDeNcIa SтUаRтII, обогащенной рестриктазой Р Sт 1 Download PDFInfo
- Publication number
- SU1518367A1 SU1518367A1 SU874324974A SU4324974A SU1518367A1 SU 1518367 A1 SU1518367 A1 SU 1518367A1 SU 874324974 A SU874324974 A SU 874324974A SU 4324974 A SU4324974 A SU 4324974A SU 1518367 A1 SU1518367 A1 SU 1518367A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- biomass
- units
- opt
- optical density
- pst
- Prior art date
Links
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к микробиологической и химической промышленности, а именно касаетс способа получени биомассы бактерий PROVIDENCIA STUARTII с высоким содержанием рестриктазы P ST 1. Целью изобретени вл етс повышение выхода биомассы и фермента. Дл этого в качестве источника азота и витаминов используют рыбный гидролизат, в процессе выращивани на стадии достижени оптической плотности бактериальной суспензии 1,25-1,75 опт.ед. в среду ввод т лактозу и свежую питательную среду, причем лактозу ввод т в количестве 0,6-1,6 г/л (в виде 40%-ного раствора), а свежую питательную среду - в концентрации 10-20% по отношению к объему ферментера и процесс ведут до достижени оптической плотности бактериальной суспензии 2,5-3,5 опт.ед. В результате использовани предложенного способа выход биомассы возрастает до 12,5-13,0 г/л культуральной жидкости, а выход рестриктазы повышаетс с 400-600 ед/г биомассы до 61000-66000 ед/г биомассы или с 3000-4800 ед/л культуральной жидкости до 762500-858000 ед/л культуральной жидкости.
Description
Изобретение относитс к микробио- логической и химической промышленности, а именно касаетс способа получени биомассы бактерий Providencia stuartii V, высоким содержанием рестриктазы
Pst 1 .
Цель изобретени - повышение выхода биомассы и фермента.
Способ осуществл ют следующим образом .
В процессе культивировани ввод т свежую питательную среду и лактозу, чго позвол ет культивировать клетки Providencia stuartii до достижени оптической плотности бактериальной суспензии 2,5-3,5 опт.ед. (ФЭК, фипьтр № 6, кювета 0,5 см).
При введении лактозы в количествах менее 0,6 г/л (в виде 40%-ного раствора ), например 0,1 г/л, снижаетс выход биомассы и фермента. Введение лактозы в количествах более 1,6 г/л (в виде 40%-ного раствора), например 2,1 г/л, приводит к снижению выхода биомассы и фермента. При зтом происходит сильное закисление среды, в ко- торой развитие бактерий Providencia scuartii происходит слабо.
При введении свежей питательной среды в концентрации менее 10% по отношению к объему ферментера (напри- мер, 5%) снижаетс выход биомассы и фермента.
При культивировании бактерий Providencia sCuarcii до оптической плотности бактериальной суспензии менее 2,5 опт. ед. (ФЭК, фильтр № 6, кювета 0,5 см), например 2,0 опт. ед., происходит снижение выхода биомассы и фермента, так как незавершен процесс постепенной ассимил ции лактозы и рыбного гидролизата. При культивировании бактерий Providencia stuartii до оптической плотности бактериальной суспензии более 3,5 опт. ед. (например, 4,0 опт. ед.) происходит снижение вы- хода биомассы и фермента, так как происходит старение культуры и наступает фаза отмирани клеток.
Пример 1. Оживление штамма Providencia stuartii 17 ВКПМ В-4076 осуществл ют на сухом питательном агаре , содержащем 35 г/л сухого питательного агара и 1,0л воды, в чашках Петри. Инкубируют в термокамере при 35-37 С в течение 16-18 ч.
С поверхности агара в чашках Петри культуру перенос т бактериологической петлей в качалочные колбы с питательной средой, содержащей 50 г/л рыб ного гидролизата и до 1,0 л воды. В каждой колбе находитс 200 мл среды. Культуру в колбах выращивают на качалке при 35-37 0 в течение 16-18 ч. Посевной материал готов т из расчета 8%
5 0
5
Q ..
з
0
5
по отношению к объему питательной среды, загруженной в ферменте.
Ферментацию культуры провод т в ферментере Electrolux рабочей емкостью 50 л на питательной среде, содержащей 50 г/л рыбного гидролизата и до 1,0 л воды, при:
РН72,-7,4;
подаче воздуха 100 л/мин;
перемешивании 300 об/минj
добавлении лактозы (в виде 40%-ного раствора) при достижении оптической плотности бактериальной суспензии 1,75 опт. ед. (ФЭК, фильтр К« 6, кювета 0,5 см) в количестве 1,6 г/л (75 г лактозы и 187,5 мл воды)
добавлении 20% свежей среды при достижении оптической плотности бактериальной суспензии 1,75 опт.ед. (ФЭК, фильтр № 6, кювета 0,5 см) в количестве 10 л.
Процесс выращивани ведут до достижени оптической плотности бактериальной суспензии 3,5 опт. ед. (ФЭК, фильтр № 6, кювета 0,5 см).
Выход биомассы 13,0 г/л культураль- ной жидкости.
Выход рестриктазы Pst 1: 66000 ед/г биомассы; 858000 ед/л культуральной жидкости.
Дл определени активности использован метод злектрофореза в геле. Активность определ ют в конце вьщеле- ни (после хроматографии на колонке с фосфоцеллюлозой).
За единицу активности рестриктазы Pst 1 принимают количество фермента, которое требуетс дл полного расщеплени 1 мкг ДНК фага в течение 1 ч при .
Выделение фермента провод т следующим образом.
50 г биомассы бактерий суспендируют в 100 МП 10 мМ трис-НС1 буфера (рН 7,2), содержащего 10 i 2-меркап- тоэтанола, 1 i азида натри , 1 кд1 трилона Б (буфер А), и довод т этим же буфером до объема 150 мл. К суспензии добавл ют 1,5 мл 10%-ного тритона Х-100 и 150 мг лиэоцима. Лизис провод т 1 ч при посто нном перемешивании . Дальнейшее фракционирование ли- зата провод т в системе двухфазного разделени .
Полученный лизат добавл ют к смеси, состо щей из 37,0 мл 15%-ного водного раствора декстрана Т-500, 56 мл 30%- ного водного раствора полизгиленглико5 15
л (ПЭГ) и 35 МП 4,0 М хлористого натри (рН смеси 6,5). Тщательно перемешивают в течение 15 мин и центрифугируют на центрифуге High speed (20000 X g, 20 мин). Верхнюю ПЭГ-фазу объемом 120 мл, содержащую фермент, отбирают, разбавл ют двухкратным объёмом буфера А, добавл ют тритон X- 100 (0,1%) и нанос т на колонку с
фосфоцеллюпозой, уравновешенную буфером А, содержащим 0,1% тритона Х-100 (буфер Б). Фермент элюируют 0-1,0 М линейным градиентом концентрации натри хлористого в буфере Б. Фракции, содержащие рертриктазу Psc 1 концентрируют диализом против буфера Б, содержащего 55% глицерина.
Получают очищенный фермент Pst 1 в виде прозрачной бесцветной жидкое- ти.
Рестриктаза Pst 1 расщепл ет ДНК фага Л на 18 сайгов.
Содержание нуклеаз - после выделени отсутствую .
Хран т рестриктазу Pst 1 при -10 С в т,ечение 1г.
Пример 2. Оживление культуры и выраЕцивание посевного материала
провод т подобно примеру 1.
Ферментацию культуры провод т в ферментере Electrolux рабочей емкостью 50 л на питательной среде, содержащей 50 г/л рыбного гидролизата и до 1,0 л воды, при:
рН7,2-7,4,
подаче воздуха 100 л/мин;
перемешивании 300 об/мин}
добавлении лактозы (в виде 40%-но- го раствора) при достижении оптическо плотности бактериальной суспензии 1,5 опт. ед. (ФЭК, фильтр № 6, кювета 0,5 см) в количестве 1,1 г/л (50 г лактозы и 125 мл воды)
добавлении 15% свежей среды при достижении оптической плотности бактериальной суспензии 1,5 опт.ед. (ФЭК Фильтр № 6, кювета 0,5 см) 7,5 л.
Процесс выращивани ведут до достижени оптической плотности бактериальной суспензии 3,0 опт. ед. (ФЭК, фильтр № 6, кювета 0,5 см).
Выход биомассы 12,75 г/л ку; ьту- ральной лсидкости.
Выход рестриктазы Pst 1: 63500 ед/г биомассы; 809625 ед/л культуральной жидкости.
о
5
0
5
Определение активности, вь1деление фермента Pst i н хранение провод т подобно примеру 1.
Пример 3. Оживление культуры и выращивание посевного материала провод ч подобно примеру 1 .
Ферментацию культуры провод т в ферменте Electrolux с рабочей ем- кос1 ью 50 л на питательной среде, содержащей 50 г/л рыбного гидролизата и до 1,0 л воды, при:
рН
7,2-7,4; 100 л/мин; 300 об/мин
5
0
0
5
0
5
подаче воздуха
перемешивании
I добавлении лактозы (в виде 40%- иого раствора) при достижении опти- ческой плотности бактериальной сус- ;пензии 1,25 опт. ед. (ФЭК, фильтр № 6, кювета 0,5 см) в количестве 0,6 г/л (25 г лактозы и 62,5 мл воды)
добавлении 10% свежей среды при достижении оптической плотности бактериальной суспензии 1,25 опт. ед. (ФЭК, фильтр № 6, кювета 0,5 см) в количестве 5,0 л.
Процесс выращивани ведут до достижени оптической плотности бактериальной суспензии 2,5 опт. ед. (ФЭК, фильтр М 6, кювета 0,5 см).
Выход биомассы 12,5 г/л культуральной жидкости.
Выход рестрикгазы Pst 1: 61000 ед/г биомассы, 762500 ед/л культуральной жидкости.
Определение активности, вьщеление фермента Pst 1 и хранение провод т подобно примеру 1.
Пример 4. Оживление культуры и вьц ащивание посевного материала провод т подобно примеру 1.
Ферментацию культуры провод т в ферментере Electrolux рабочей емкостью 50 л на питательной среде, содержащей 50 г/л рыбного гидролизата и до 1,0 л воды, при:
рН7,2-7,4,
подаче воздуха100 л/мин|
перемешивании300 об/мин{
добавлении лактозы (в виде 40%-но- го раствора) при достижении оптической плотности бактериальной суспензии клеток 0,75 опт.ед. (ФЭК, фильтр № 6, кювета 0,5 см) в количестве 1,6 г/л (75 г лактозы и 187,5 мл вод;- .
добавлении 20% свежей среды при достижении оптической плотности бактериальной суспензии 1,75 опт. ед.
(ФЭК, фильтр № 6, кювета 0,5 см) в количестве 10 л.
Процесс выращивани ведут до достижени оптической плотности бактериальной суспензии 3,5 опт. ед. (ФЭК, фш1ьтр К 6, кювета 0,5 см).
Выход биомассы 5,6 г/л культураль- ной жидкости.
Выход рестриктазы Pst 1: 31250 ед/ биомассы; 175000 ед/л культуральной жидкости.
Пример 5. Оживление культуры и выращивание посевного материала провод т подобно примеру 1.
Ферментацию культуры провод т в ферментере Electrolux рабочей емкостью 50 л на питательной среде, содержащей 50 г/л рыбного гидролизата и до 10 л воды, при:
РН7,2-7,4;
подаче воздуха 100 л/минt
перемешивании 300 об/мин
добавлении 20% свежей среды при достижении оптической плотности бакте риальной суспензии 1,75 опт. ед. (ФЭК, фильтр К 6, кювета 0,5 см) в количестве 10 л
добавлении лактозы (в виде 40%-но- го раствора) при достижении оптичес- кой плотности бактериальной суспензии 2,25 опт. ед. (ФЭК, фильтр № 6, кювета 0,5 см) в количестве 1,6 г/л (75 г лактозы и 187,5 мл воды).
Процесс выращивани ведут до достижени оптической плотности бактериальной суспензии 3,5 опт. ед. (ФЭК, филы р № 6, кювета 0,5 см).
Выход биомассы 6,6 г/л культуральной жидкости.
Выход рестриктазы Pst 1: 34200 ед/ биомассы; 225720 ед/л культуральной жидкости.
5
0
0
5
та 0,5 см) в количестве 1,6 г/л (75 г лактозы и 187,5 мл воды).
Процесс вьфащивани ведут до достижени оптической плотности бактериальной суспензии 3,5 опт. ед. (ФЭК, фильтр № 6, кювета 0,5 см).
Выход биомассы 7,6 ед/л культуральной жидкости.
Выход рестриктазы Pst 1: 40500 ед/г биомассы, 307800 ед/л культуральной жидкости.
Пример 7. Оживление культуры и выращивание посевного материала провод т подобно примеру 1.
Ферментацию культуры провод т в ферментаторе Electrolux рабочей емкостью 50 л на питательной среде, содержащей 50 г/л рыбного гидролиёа- та и до 1 л воды, при:
,2-7,4;
подаче воздуха100 л/мин;
перемепмвании300 об/мин;
добавлении 20% свежей среды при достижении оптической плотности бактериальной суспензии 1,75 опт. ед. (ФЭК, фильтр К 6, кювета 0,5 см) в количестве 10 л.
Процесс выращивани ведут до достижени оптической плотности бактериальной суспензии 3,5 опт. ед. (ФЭК, фильтр К 6, кювета 0,5 см).
Выход биомассы 8,2 ед/л культуральной жидкости.
Выход рестриктазы Pst 1: 37000 ед/г биомассы; 303400 ед/л культуральной жидкости.
Таким образом в результате использовани предлагаемого способа выход биомассы возрастает с 7,5-8,0 до 12,5-13,0 г/л культуральной жидкости, а выход рестриктазы Pst 1 повьшаетс с 400-600 до 61000-66000 ед/г био
6. Оживление культуры . массы или с 3000-4800 До 762500858000 ед/л культуральной жидкости.
Пример
и выращивание посевного материала провод т подобно примеру 1.
Ферментацию культуры провод т в ферментере Electrolux рабочей емкостью 50 л на питательной среде, содержащей 50 г/л рыбного гидролизата и до 1 л воды, при:
рН7,2-7,4)
подаче воздуха 100 л/мин;
50
Claims (1)
- Формула изобретениСпособ получени биомассы бактери Providencia stuartii, обогащенной рестриктазой Pst 1, включающий культ вирование продуцента на питательной среде, содержащей источники аминногоперемешивании300 об/мин; азота и витаминов при аэрации и пеЬЗ) ремешивании, отличающийсдобавлении лактозы (в виде 40%-но- го раствора) при достижении оптической плотности бактериальной суспензии 1,75 опт. ед. (ФЭК, фильтр № 6, кювеФормула изобретениСпособ получени биомассы бактерий Providencia stuartii, обогащенной рестриктазой Pst 1, включающий культивирование продуцента на питательной среде, содержащей источники аминногоазота и витаминов при аэрации и пе) ремешивании, отличающийстем, что, с целью повышени выхода биомассы и фермента, в качестве источника аминного азота и витаминов ис9151836710пользуют рыбный гидролизаг, в процес-чесгве 0,6-1,5-г/л, а свежую пигагельсё вьфащива(ш на стадии достижени ную среду - в концентрации 10-20% пооптической плотности бактериальнойотношению к объему ферментера и просуспензии 1,25-1,75 опт. ед. в средуцесс ведут до достижени оптическойввод т лактозу и свежую питательнуюплотное;и бактериальной суспензии 2,5среду , причем лактозу ввод т в коли-3,5 oirr. ед.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU874324974A SU1518367A1 (ru) | 1987-11-04 | 1987-11-04 | Способ получени биомассы бактерий PRoVIDeNcIa SтUаRтII, обогащенной рестриктазой Р Sт 1 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU874324974A SU1518367A1 (ru) | 1987-11-04 | 1987-11-04 | Способ получени биомассы бактерий PRoVIDeNcIa SтUаRтII, обогащенной рестриктазой Р Sт 1 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU1518367A1 true SU1518367A1 (ru) | 1989-10-30 |
Family
ID=21334994
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU874324974A SU1518367A1 (ru) | 1987-11-04 | 1987-11-04 | Способ получени биомассы бактерий PRoVIDeNcIa SтUаRтII, обогащенной рестриктазой Р Sт 1 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU1518367A1 (ru) |
-
1987
- 1987-11-04 SU SU874324974A patent/SU1518367A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Smith D.I., Blattner F.R., Davies J. The isolation and partial characterization of a new restriction endonuclease from Providencia stuartii. - J. Nuc leic Ac. Res., 1976, V. 3, N 2 p. 343-353. Sreen P.J., Heyneker H.L., Bolivar F., Rodriguez R.L., Betlach M.C., Covarrubias A.A., Backman K., Rus- sel D.J., Tait R., Boyer H.W. A general method vor the purification of restriction enzymes. - Nucleic Acids Res., 1978, v. 5, fr 7, p.2373-2380. Лабораторна методика производства биомассы Providencia stuartii, утв. 03.10.81. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
AU615304B2 (en) | A new transaminase, the preparation thereof and the use thereof | |
US5468625A (en) | α-L-Rhamnosidase for obtaining rhamnose, a process for its preparation and its use | |
SU1518367A1 (ru) | Способ получени биомассы бактерий PRoVIDeNcIa SтUаRтII, обогащенной рестриктазой Р Sт 1 | |
SU676177A3 (ru) | Способ получени биомассы микроорганизмов | |
SU1502616A1 (ru) | Питательна среда дл культивировани бактерий PRoVIDeNcIa SтUаRтII - продуцента рестриктазы РSт 1 | |
SU1698286A1 (ru) | Питательна среда дл культивировани штамма РSеUDомоNаS SтUтZеRI ВКПМ В-4724 - продуцента рестриктазы PS и 1 | |
RU2085212C1 (ru) | Способ изготовления единого бруцеллезного антигена для ра, рск и рдск | |
Tzeng et al. | High productivity tank fermentation for gramicidin S synthetases | |
Rasheva et al. | Taxonomic investigation of Monascus purpureus 94-25 strain | |
Schuster et al. | A synthetic medium for continuous culture of the S‐layer carrying Bacillus stearothermophilus PV 72 and studies on the influence of growth conditions on cell wall properties | |
Fossati et al. | Large scale preparation of purified exocellular dd‐carboxypeptidase–transpeptidase of Streptomyces strain R61 | |
RU2115728C1 (ru) | Штамм бактерии bacillus stearothermophilus - продуцент эндонуклеазы рестрикции, узнающей и расщепляющей последовательность нуклеотидов 5'-ggtnacc-3' | |
SU904325A1 (ru) | Способ получени L-треонина | |
JP2001517429A (ja) | 繊毛虫(原生動物)の連続大量培養を用いた生物由来の貴重物質を生産する発酵法 | |
SU1576565A1 (ru) | Способ получени эндонуклеазы-рестриктазы, расщепл ющей последовательность нуклеотидов 5 @ =G @ CGC=3 @ | |
RU2158302C2 (ru) | Питательная среда для роста бифидо- и лактобактерий | |
JPS6243671B2 (ru) | ||
SU1449579A1 (ru) | Питательна среда дл выращивани АRтнRовастеR LUтеUS - продуцента рестриктазы AI и I | |
RU2083481C1 (ru) | Способ получения молекулярного водорода из сине-зеленых водорослей | |
SU1659480A1 (ru) | Штамм бактерий КLевSIеLLа рNеUмоNIае-продуцент рестриктазы Кр @ 378 1 | |
RU1549227C (ru) | Способ получения комплекса литических ферментов | |
RU2021373C1 (ru) | Штамм бактерий bacillus pumilus, продуцирующий эндонуклеазу рестрикции, узнающую и расщепляющую последовательность нуклеотидов 5` = cctnagc-3` | |
SU1832129A1 (ru) | Шtamm бaktepий bacillus brevis-пpoдуцeht pectpиktaзы b b i | |
RU2103356C1 (ru) | Консорциум бактерий pseudomonas sp., pseudomonas fluorescens, pseudomonas putida, thiobacillus sp., используемый для очистки сточных вод от алкилсульфонатов | |
SU621724A1 (ru) | Способ получени липазы |